KR102237517B1

KR102237517B1 - 상승효과를 갖는 장미 추출물 및 황금 추출물을 포함하는 항진균용 조성물, 및 칸디다증 예방 또는 치료용 조성물

Info

Publication number: KR102237517B1
Application number: KR1020190118414A
Authority: KR
Inventors: 김태종; 윤지민; 나현정
Original assignee: 주식회사 케이바이오랩
Priority date: 2019-09-25
Filing date: 2019-09-25
Publication date: 2021-04-07
Also published as: KR20210036214A

Abstract

본 발명은 상승효과를 갖는 장미 추출물 및 황금 추출물을 포함하는 항진균용 조성물, 및 칸디다증 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것으로, 칸디다 알비칸스에 대한 항진균 활성이 우수하므로, 칸디다 알비칸스에 의해 발생하는 다양한 질환의 예방, 개선 또는 치료에 유용하게 활용될 수 있다.

Description

상승효과를 갖는 장미 추출물 및 황금 추출물을 포함하는 항진균용 조성물, 및 칸디다증 예방 또는 치료용 조성물{Antifungal Composition Comprising Rose Extract and Scutellariae Radix Extract Having Synergistic Effect, and Composition for Preventing or Treating Candidasis}

본 발명은 상승효과를 갖는 장미 추출물 및 황금 추출물을 포함하는 항진균용 조성물, 및 칸디다증 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.

일상 생활 속에서 가장 흔한 형태로 발병하는 피부 질환인 피부 진균증은 수영장, 목욕탕, 군대, 집 등 여러 사람이 모여 있는 곳에서 감염된 피부에서 떨어진 각질에 의해 다른 사람에게 옮겨 갈 수 있고, 면역력 저하, 당뇨 등의 질환 또는 불량한 위생상태에 의하여 발생할 수 있다. 적절한 치료가 이루어지지 않을 경우, 신체의 다른 부위에도 옮겨가거나 손톱, 발톱의 기형을 유발하기도 한다. 대부분의 진균증은 한번 감염되면 잘 치료되지 않고 만성으로 진행함에도 불구하고, 중증도는 높지 않은 질환으로 인식되고 있다. 그러나, 면역이 저하된 환자들의 경우 칸디다, 아스퍼질러스 및 크립토코쿠스와 같은 기회감염성 진균에 의한 감염 및 사망률이 전세계적으로 꾸준히 증가하고 있다.

다양한 진균 중, 칸디다 알비칸스(Candida albicans)는 인체 내의 상피세포에서 주로 번식한다. 칸디다 알비칸스는 정상적인 피부, 점막, 분변, 객담, 소변 등에 존재하며 인체에는 해가 없지만, 항생물질이나 부신피질 호르몬을 사용한 경우나, 인체의 면역력이 저하된 경우에는 이상증식을 하여 병을 일으킨다. 또한, 구내염 및 질염과 같은 국소 점막염을 일으키거나 전신성 감염으로 진행될 수 있다. 칸디다 알비칸스에 의해 발생하는 칸디다증의 종류로는 구각, 혀, 외음부, 질 등이 짓무르고 통증이 발생하는 점막 칸디다증, 피부의 주름 사이나 손가락 사이, 항문 부근이나 유방 등이 붉게 짓무르는 피부 칸디다증, 설사, 복통, 황달 등을 일으키는 소화관 칸디다증, 패혈증과 같은 증세를 나타내며 수막염이나 심내막염을 수반하는 전신성 칸디다증이 있다.

현재 진균의 성장을 억제하기 위한 항진균성 물질로써, Azole 계, Polyene 계 및 Allyamines 계 등 다양한 종류의 항진균제가 개발되었다. 그러나 이러한 항진균제는 간독성을 포함한 다양한 종류의 부작용을 나타내며, 가장 많이 사용되는 Azole 계 약물의 경우 내성 발생이 급격히 증가하는 부작용을 나타낸다. 따라서, 항진균 효과가 우수하면서 부작용이 적고 독성이 적은 새로운 항진균 대체 물질에 대한 필요성이 증가하고 있다.

이에, 본 발명자들은 안전한 천연 식물 추출물을 이용하여 항진균용 조성물을 개발하기 위한 연구를 수행하여 본 발명을 완성하였다.

대한민국 특허등록 제10-1398426호

본 발명의 하나의 목적은 장미 추출물 및 황금 추출물을 포함하는 항진균용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 상기 조성물을 포함하는 여성청결제용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 장미 추출물 및 황금 추출물을 포함하는 칸디다증 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 일 양상은 장미 추출물 및 황금 추출물을 포함하는 항진균용 조성물을 제공한다.

장미는 맛이 달고, 성질은 따뜻하며, 독이 없으며, 혈액순환을 촉진시키고 부기를 가라앉히는 효능이 있다. 또한 장미꽃은 향기가 아주 진하고 맑으며, 온화하여 우수한 방향성을 가지고 있으며, 각종 비타민, 유기산, 탄닌 등 다양한 성분을 함유하여 강장효과, 혈압조절효과 등을 나타내는 것으로 알려져 있다. 그러나, 항진균 효능에 대해서는 알려진 바가 없다.

본 발명의 장미 추출물 및 황금 추출물을 포함하는 항진균용 조성물은 칸디다 알비칸스에 대한 항진균 활성이 우수하여, 칸디다 알비칸스에 의해 발생하는 다양한 질환의 예방, 개선 또는 치료에 유용하게 활용될 수 있으므로, 본 발명의 항진균용 조성물은 여성청결제용 조성물 및 칸디다증의 예방 또는 치료를 위한 약학적 조성물로 유용하게 활용될 수 있다.

황금(Scutellaria Radix)은 꿀풀과의 여러해살이풀인 속썩은풀(Scutellaria baicalensis Georgi)의 뿌리를 의미하며, 뿌리의 주피를 제거한 것을 의미하기도 한다. 한방에서 생리활성 및 약리작용으로 해열, 소열, 항알레르기 작용을 나타내고, 혈관을 확장시키고 혈압을 강하시키는 작용을 하며 죽상 동맥경화를 억제하며, 지혈작용 및 항알러지 작용을 하는 것으로 알려져 있다. 그러나, 항진균 효능에 대해서는 알려진 바가 없다.

본 발명에 따른 조성물에 포함되는 추출물은 하기와 같이 수득될 수 있다. 장미 또는 황금을 물로 세척하여 이물질을 제거한 후 그늘에서 건조하고, 장미 또는 황금에 적당한 양의 용매를 첨가하여 완전히 침지되도록 하며, 이때, 장미 또는 황금은 건조된 상태 그대로 사용하거나 분쇄하여 분말 형태로 사용할 수 있다. 장미 또는 황금은 통상의 추출용매를 이용하여 추출할 수 있으며, 바람직하게는, (a) 탄소수 1~4의 무수 또는 함수 저급 알코올(예: 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 노말-프로판올, 이소-프로판올 및 노말-부탄올 등), (b) 상기 저급 알코올과 물과의 혼합용매, (c) 아세톤, (d) 에틸 아세테이트, (e) 클로로포름, (f) 1,3-부틸렌글리콜, (g) 헥산, (h) 디에틸에테르, (i) 부틸아세테이트 (j) 클로로포름-메탄올 또는 (k) 증류수를 이용하여 추출할 수 있다. 추출시 실온에서 함침하거나 가온할 수 있다

본 발명의 일 구체예에 따르면, 상기 추출물은 탄소수 1 내지 4의 알코올 및 이들의 혼합 용매로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 용매로 추출한 것일 수 있다.

본 발명의 일 구체예에 따르면, 상기 진균은 칸디다 알비칸스(Candida albicans)일 수 있다.

칸디다 알비칸스는 정상 세균총의 일부로, 인간의 구강, 음부 및 위장관의 점막 표면에 군집하고 있는 효모균과 같은 이상성 진균인 모닐리아증이라고도 하는 칸디다증(candidiasis)의 원인균이다. 칸디다 알비칸스는 진균(곰팡이)의 일종으로서 인체 내의 상피세포에서 주로 번식한다.

본 발명의 일 구체예에 따르면, 상기 장미 추출물 및 상기 황금 추출물의 부피 기준 농도비는 0.2 내지 0.3 : 2.125 내지 2.5일 수 있다.

본 발명의 조성물에 포함되는 장미 추출물 및 황금 추출물의 조합은 칸디다 알비칸스의 생장 억제에 상승효과를 나타낸다. 0.2 내지 0.3%(v/v) 농도의 장미 추출물 및 2.125 내지 2.5%(v/v) 농도의 황금 추출물의 조합에서 칸디다 알비칸스의 생장 억제에 상승효과가 나타나고, 칸디다 알비칸의 생장 억제에 상승효과를 나타내는 장미 추출물 및 황금 추출물의 조합은 0.2 내지 0.275%(v/v) : 2.125 내지 2.5%(v/v)의 농도비인 것이 바람직하며, 0.2%(v/v) : 2.5%(v/v)의 농도비인 것이 가장 바람직하다.

본 발명의 다른 양상은 상기 조성물을 포함하는 여성청결제용 조성물을 제공한다.

본 발명의 장미 추출물 및 황금 추출물은 칸디다 알비칸스에 대한 항진균 활성이 우수하므로, 칸디다 알비칸스를 원인으로하는 질염 등 여성 비뇨생식기계 관련 질병을 예방 또는 개선하기 위한 여성청결제용 조성물로써 유용하게 활용될 수 있다.

본 발명에서 사용되는 용어, "여성청결제"는 질 내 유해세균의 증식 억제, 악취 감소 및/또는 질 내의 적정 pH의 유지를 위한 목적으로 여성의 외음부 및 그 주위에 사용되는 전용 클렌저를 말한다.

본 발명의 여성청결제용 조성물은 여성청결제에 허용되는 부형제, 붕해제 및/또는 활택제를 포함할 수 있다. 본 발명의 여성청결제용 조성물에 포함되는 부형제, 붕해제 및 활택제는 여성청결제의 제조에 통상적으로 이용되는 것으로써, 부형제는 프로솔브, 전분, 미결정 셀룰로오스, 만니톨, 유당, 저치환하이드록시프로필셀룰로오스 및/또는 슈크랄로스일 수 있으며, 구체적으로, 프로솔브(프로솔브 SMCC90), 전분(Starch 1500), 미결정 셀룰로오스(미결정 셀룰로오스 PH102) 및/또는 만니톨(만니톨 160C)일 수 있고, 붕해제는 크로스포비돈, 전분글로콘산 나트륨, 크로스카멜로오스나트륨, 폴리소르베이트 및/또는 라이릴황산나트륨일 수 있으며, 구체적으로, 크로스포비돈(크로스포비돈CL-SF)일 수 있고, 활택제는 스테아르산 마그네슘, 경질무수규산, 탈크 및/또는 글리세릴베헤네이트일 수 있으며, 구체적으로, 스타아르산마그네슘일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 여성청결제용 조성물은 질과 관련된 질환의 예방 또는 개선을 위한 것으로, 질과 관련된 질환은 질이완증, 질건조증 및/또는 질염일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 일 구체예에 따르면, 상기 조성물은 액제, 겔제, 세정 조성물 및 질내 삽입용 정제로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형일 수 있다.

본 발명은 여성 청결제용 조성물로, 상기 제형은 비경구 투여를 위한 제제일 수 있고, 예를 들어, 액제, 겔(gel)제, 세정 조성물, 질내 삽입용 정제, 좌제 형태, 크림, 연고, 드레싱 용액, 분무제, 기타 도포제등의 국소 투여제, 용액형, 현탁형, 유제형 등의 액상 제형일 수 있으며, 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결 건조제제, 좌제, 크림, 연고, 젤리, 거품, 세척제 또는 질 삽입물일 수 있고, 바람직하게는 액제, 겔(gel)제, 세정 조성물, 질내 삽입용 정제 등의 피부 외용제일 수 있다.

상기 제형은 예를 들어, 멸균수에 용해보조제, 유화제, pH 조절을 위한 완충제 등을 첨가하여 제조할 수 있다. 상기 비수성용제 또는 현탁용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌글리콜(polyethylene glycol), 올리브 오일과 같은 식물성 기름 및/또는 에틸올레이트 등이 사용될 수 있다. 한편, 좌제 제형은 예를 들어, 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈 61(tween 61), 카카오지, 라우린지, 글리세로 젤라틴 등이 첨가되어 제조될 수 있고, 이를 제형화하기 위한 담체를 포함할 수 있으며, 상기 담체로써 결합제, 활탁제, 현탁용제, 가용화제, 완충제, 보존제, 윤활제, 등장제, 안정화제, 분산제, 현탁화제, 색소, 향료 등이 포함될 수 있다.

본 발명의 여성청결제용 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다.

본 발명의 여성청결제용 조성물의 투여량은 투여방법, 복용자의 연령, 성별 및 체중, 및 질환의 중증도 등을 고려하여 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 여성청결제용 조성물의 투여량은 성인 기준으로 0.001~1000㎎/kg일 수 있다. 하루에 1회 또는 수 회 나누어 투여될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 여성청결제용 조성물은 하나 이상의 여성 비뇨생식기계 관련 질병병 예방 또는 치료 활성을 나타내는 물질과 함께 투여될 수 있다.

본 발명의 또 다른 양상은 장미 추출물 및 황금 추출물을 포함하는 칸디다증 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 칸디다증 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 있어서, 전술한 내용과 중복되는 부분은 전술한 의미와 동일한 의미로 사용될 수 있다.

본 발명에서 사용되는 용어, "칸디다증(candidasis)"은 칸디다 알비칸스를 원인으로 하는 다양한 감염 질환을 말한다. 칸디다증은 침범 부위에 따라 피부점막 칸디다증과 심부 칸디다증으로 구분되고, 피부점막 칸디다증에는 아구창, 식도 칸디다증, 질 칸디다증 등이 포함되며, 심부 칸디다증에는 칸디다 진균혈증, 칸디다 내안구염, 칸디다 복막염, 칸디다 골관절염, 칸디다 척추염, 간비장 칸디다증 등이 포함된다.

본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물에 포함되는 약학적으로 허용되는 담체는 약제의 제조에 통상적으로 이용되는 것으로써, 락토오스, 덱스트로스, 수크로오스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산칼슘, 미세결정성 셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로오스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로오스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 약학적으로 허용되는 담체 및 제제는 Remington's Pharmaceutical Sciences (22th ed., 2013)에 상세히 기재되어 있다.

본 발명의 일 구체예에 따른 약학적 조성물은 하나 이상의 칸디다증의 예방 또는 치료에 활성을 나타내는 물질과 함께 투여될 수 있다.

또한, 본 발명의 일 구체예에 따른 약학적 조성물은 칸디다증의 치료를 위하여 단독으로, 또는 시술, 호르몬 치료, 약물치료 및/또는 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 그 제형의 제제화에 필요하고 적절한 각종 기제 및/또는 첨가물을 포함할 수 있으며, 그 효과를 떨어트리지 않는 범위 내에서 비이온 계면활성제, 실리콘 폴리머, 체질안료, 향료, 방부제, 살균제, 산화 안정화제, 유기 용매, 이온성 또는 비이온성 증점제, 유연화제, 산화방지제, 자유 라디칼 파괴제, 불투명화제, 안정화제, 에몰리언트(emollient), 실리콘, α-히드록시산, 소포제, 보습제, 비타민, 곤충 기피제, 향료, 보존제, 계면활성제, 소염제, 물질 P 길항제, 충전제, 중합체, 추진제, 염기성화 또는 산성화제, 또는 착색제 등 공지의 화합물을 더 포함하여 제조될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물의 투여량은 성인 기준으로 0.001~1000㎎/kg일 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 비경구 투여할 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 비경구 투여시 다양한 제형으로 투여될 수 있는데, 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드, 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들어, 습윤제 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 구체적으로, 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제 및 동결건조제제가 포함될 수 있다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(Propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 또한, 치료제의 효능 증진을 위해 칼슘이나 비타민 D3를 첨가할 수 있다.

이러한 조성물은 단위-용량(1회분) 또는 다중-용량(수 회분) 용기, 예를 들어, 밀봉된 앰풀 및 바이알에 제시될 수 있고, 사용 직전에 멸균성 액상 담체, 예를 들어, 주사용 수의 부가만을 요구하는 동결-건조 조건하에 저장할 수 있다. 즉석의 사용제 및 현탁제는 멸균성 산제, 과립제 및 정제로부터 제조할 수 있다.

상승효과를 갖는 장미 추출물 및 황금 추출물을 포함하는 항진균용 조성물, 및 칸디다증 예방 또는 치료용 조성물에 따르면, 칸디다 알비칸스에 대한 항진균 활성이 우수하므로, 칸디다 알비칸스에 의해 발생하는 다양한 질환의 예방, 개선 또는 치료에 유용하게 활용될 수 있다.

도 1은 장미 추출물의 농도에 따른 칸디다 알비칸스에 대한 생장 억제 효과를 나타낸 그래프이다.
도 2는 황금 추출물의 농도에 따른 칸디다 알비칸스에 대한 생장 억제 효과를 나타낸 그래프이다.
도 3은 장미 추출물 및 황금 추출물의 처리 방법을 나타낸 그림이다.
도 4는 장미 추출물 및 황금 추출물의 혼합 처리에 따른 대조군 대비 칸디다 알비칸스의 생장 억제율(GI)을 나타낸 그림이다.
도 5는 장미 추출물 및 황금 추출물을 혼합하여 처리하였을 때의 GI 계산값 장미 추출물만을 처리한 GI 계산값으로 나눈 값을 나타낸 그림이다.
도 6은 장미 추출물 및 황금 추출물을 혼합하여 처리하였을 때의 GI 계산값을 황금 추출물만을 처리한 GI 계산값으로 나눈 값을 나타낸 그림이다.

이하 본 발명을 하나 이상의 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 장미 추출물 및 황금 추출물의 준비

역삼투압 필터로 정제된 물 40리터를 추출기 탱크에 투입하고 분쇄된 장미 또는 분쇄된 황금을 부직포에 담아 탱크에 침지한 다음, 100℃에서 3시간 30분간 추출하였으며, 추출 후 12시간 침지하고 자연 냉각한 후, 40℃에서 여과하여 장미 추출물 및 황금 추출물을 각각 제조하였다.

실시예 2. 균주 및 배양 배지 준비

항진균 효과를 측정하기 위하여 칸디다 알비칸스(Candida albicans, 이하 C.albicans)를 KCTC 7965를 생물자원센터(Korean Collection for Type Cultures, 대한민국)로부터 분양받았다. 실험에 사용된 배지의 조성은 표 1과 같다.

배지	구성성분	함량
SDA	Sabouraud Broth (BD Difco, catalog number: 238230)	30.0g
	한천	15.0g
	증류수	총 부피를 1,000㎖로 보충
RPMI 1640	RPMI-1640 Medium (Merck KGaA, product number: R6504)	10.4g
	MOPS [3-(N-morpholino)propanesulfonic acid]	34.53g
	1M Sodium hydroxide	pH 7.0으로 적정량을 사용
	증류수	총 부피를 1,000㎖로 보충

-80℃에서 보관된 C. albicans를 활발한 생육 상태로 만들기 위하여 SDA 배지를 사용하였고, 활발한 생육 상태가 된 C. albicans을 배양하기 위하여 RPMI 1640 배지를 사용하였으며, 완성된 배지는 4℃에서 보관하며 사용하였다.

생육 억제 평가에 사용하기 위하여, C. albicans KCTC 7965 균주 스톡을 SDA 한천 플레이트에 획선도말(streaking)하여 35℃에서 1일간 배양하였다. 새로운 SDA 한천 플레이트에 배양된 단일 군집을 취하여 다시 획선도말하고 35℃에서 1일간 배양하였다. 이후 단일 군집을 취하여 0.145mol/L 식염수에 현탁하고 15초 동안 볼텍싱하였다. Optizen 2120uv spectrophotometer(Mecasys Co., 대한민국)를 사용하여 530nm에서 현탁액의 흡광도를 측정하여 세포 밀도(cell density)가 0.5의 맥팔란드 탁도(McFarland standard)가 되는지 확인하고, 필요에 따라 식염수를 첨가하여 0.5의 맥팔란드 탁도가 되도록 조정하여 C. albicans 현탁액을 제조하였다.

실시예 3. C. albicans 에 대한 장미 추출물 및 황금 추출물의 생장 억제 효과 확인과 장미 추출물과 황금 추출물의 혼합에 따른 C. albicans 에 대한 상승적인 항균 효과 확인

3-1. 추출물의 생장 억제 효과 확인 및 상승효과 확인을 위한 장미 추출물과 황금 추출물의 분주

C. albicans에 대한 항균 효과를 측정하기 위하여, CLSI M27-A2 시험방법을 사용하였다. 두가지 추출물의 농도별 혼합에 따른 상승적인 항균효과를 확인하기 위하여 Checkerboard assay를 적용하였다.

구체적으로, 실시예 2에서 준비한 0.5의 맥팔란드 탁도를 갖는 C. albicans 현탁액을 RPMI 1640 배지로 50배 희석하고, 다시 20배 희석하여 마이크로플레이트에 각각 100㎕씩 분주하여, 이후 추출물 희석액(추출물을 RPMI 1640 배지로 희석한 용액) 100㎕와 혼합될 때, C. albicans의 농도가 1×10³내지 5×10³CFU/㎖이 되도록 하였다.

한편, 실시예 1-1에서 준비한 장미 추출물을 RPMI 1640 배지로 희석하여 10%(w/v) 농도의 스톡을 제조하였고, 이 스톡으로부터 0.6%, 0.7%, 0.8%, 0.9%, 1.0%, 1.1%, 1.2%가 되도록 4배 농도 스톡을 각각 제조하였다. 이 스톡들을 저농도부터 마이크로플레이트의 3 내지 10열에 각각 50㎕씩 분주하여, 이후 배지나 황금 추출물 희석액 50㎕ 및 C. albicans 접종액 100㎕와 혼합되었을 때, 총 200㎕에 포함된 장미 추출물의 최종처리 농도가 0.15%, 0.175%, 0.2%, 0.225%, 0.25%, 0.275%, 0.3%가 되도록 하였다.

마찬가지로 실시예 1-1에서 준비한 황금 추출물을 RPMI 1640 배지로 희석하여 10%(w/v) 농도의 스톡을 제조하였고, 이 스톡으로부터 8%, 8.5%, 9%, 9.5%, 10%가 되도록 4배 농도 스톡을 각각 제조하였다. 이 스톡들을 저농도부터 마이크로플레이트의 C 내지 F행에 각각 50㎕씩 분주하여, 이후 배지나 장미 추출물 희석액 50㎕ 및 C. albicans 접종액 100㎕와 혼합되었을 때, 총 200㎕에 포함된 황금 추출물의 최종처리 농도가 2%, 2.125%, 2.25%, 2.375%, 2.5%가 되도록 하였다.

장미 추출물과 황금 추출물만의 농도별 균의 생장 억제 효과를 평가하기 위하여, 2열의 C~G행과 B행의 3~10열은 장미 추출물과 황금 추출물을 혼합하지 않고, 추출물 희석액 50㎕ 및 RPMI 1640 배지 50㎕를 분주하고 C. albicans 접종액 100㎕를 넣어 배양하였다(도 1 및 도 2). 대조군은 추출물 희석액 대신 RPMI 1640 배지 100㎕를 분주하였다(도 3).

마이크로플레이트에 장미 추출물 희석액, 황금 추출물 희석액 및 C. albicans 접종액을 분주한 다음, 마이크로플레이트를 35℃에서 48시간 배양한 후, 가라앉는 균을 피펫팅하여 현탁시키고, 마이크로플레이트 리더(BioTek Microplate Reader)로 530nm에서 흡광도를 측정하여 C. albicans의 세포 밀도(cell density)를 계산하였으며, 세포 밀도 값을 통하여 C. albicans의 증식 또는 생장 결과를 평가하였다.

3-2. 상승효과를 나타내는 장미 추출물과 황금 추출물의 조건 확인

실시예 3-1에서 측정한 C. albicans의 세포 밀도 값을 다음 식으로 계산하여 GI(Growth inhibition) 값을 계산하였다. GI_A는 장미 추출물만 처리하였을 때의 GI 값이고, GI_B는 황금 추출물만 처리하였을 때의 GI 값이며, GI_combination은 장미 추출물 및 황금 추출물을 혼합하여 처리하였을 때의 값이다.

GI_A(%) = (OD_control - OD_A)/OD_control×100

GI_B(%) = (OD_control - ODB)/OD_control×100

GI_combination(%) = (OD_control - OD_combination)/OD_control×100

계산한 GI_A, GI_B 및 GI_combination 값을 바탕으로, 다음의 식을 사용하여 C. albicans에 대한 장미 추출물 및 황금 추출물의 상승효과 여부를 '상승효과, 부분 상승효과, 효과없음'으로 나타내었다.

2 < GI_combination/GI_A and GI_combination/GI_B : 상승효과

1.5 < GI_combination/GI_A or GI_combination/GI_B ≤ 2 : 부분상승효과

GI_combination/GI_A or GI_combination/GI_B ≤ 1.5 : 효과없음

장미 추출물 및 황금 추출물을 혼합하여 처리하였을 때의 GI 계산값(도 4)을, 장미 추출물만을 처리한 GI 계산값으로 나눈 값(도 5) 및 황금 추출물만을 처리한 GI 계산값으로 나눈 값(도 6)이 모두 2보다 클 경우 상승효과가 있다고 판단하였다. 두 값이 1.5 초과 2 이하일 경우 부분상승효과가 있다고 판단였으며, 이 두 값 중에서 하나라도 1.5 이하일 경우 상승효과가 없는 것으로 판단하였다.

그 결과, 장미 추출물 0.2 내지 0.275%(v/v) 및 황금 추출물 2.125 내지 2.5%(v/v)를 혼합한 구간에서 GI_combination/GI_A 값과 GI_combination/GI_B 값이 모두 2 초과로 나타나, C. albicans에 대한 항진균 효과에 있어서, 해당 범위에서 장미 추출물 및 황금 추출물이 상승효과를 나타내는 것으로 확인되었다. 한편, 장미 추출물 0.3%(v/v) 및 황금 추출물 2.125 내지 2.5%(v/v)를 혼합한 구간에서 GI_combination/GI_A 값과 GI_combination/GI_B 값이 모두 1.5 초과 2 이하로 나타나, C. albicans에 대한 항진균 효과에 있어서, 해당 범위에서 장미 추출물 및 황금 추출물이 부분상승효과를 나타내는 것으로 확인되었다.

이제까지 본 발명에 대하여 그 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.

Claims

장미 물 추출물 및 황금 추출물을 포함하는 항진균용 조성물로서;
상기 진균은 칸디다 알비칸스(Candida albicans)이고,
상기 장미 추출물 및 상기 황금 추출물의 부피 기준 농도비는 0.2 내지 0.3 : 2.125 내지 2.5인 항진균용 조성물.
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제 1 항의 조성물을 포함하는 여성청결제용 조성물.
제 4 항에 있어서, 상기 조성물은 액제, 겔제, 세정 조성물 및 질내 삽입용 정제로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형인 것인 여성청결제용 조성물.
장미 물 추출물 및 황금 추출물을 포함하는 칸디다증 예방 또는 치료용 약학적 조성물로서;
상기 장미 추출물 및 상기 황금 추출물의 부피 기준 농도비는 0.2 내지 0.3 : 2.125 내지 2.5인 것인 칸디다증 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
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