KR102167811B1 - 전립선비대증 질환의 예방 또는 치료용 생약조성물 - Google Patents

전립선비대증 질환의 예방 또는 치료용 생약조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 유효성분으로서 토사자, 연자육 및 포공영 추출물을 포함하는 전립선비대증 질환의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다. 본 발명을 이용하는 경우, 전립선비대증을 부작용 없이 효과적으로 예방 또는 치료할 수 있다.

Description

전립선비대증 질환의 예방 또는 치료용 생약조성물{Herbal Compositions for Treating and Preventing Benign Prostatic Hyperplasia}
본 발명은 전립선비대증 질환의 예방 또는 치료를 위한 생약 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 과도한 전립선 증식을 억제하고 방광 배출 장애를 개선시키기 위해 토사자, 연자육 및 포공영 복합 추출물을 포함하는 전립선 비대증 질환의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
전립선비대증(Benign prostatic hyperplasia, BPH)은 전립선 질환의 하나로 다양한 원인으로 인해 요도 주위의 전립선의 부피가 증가하여 요도를 압박하고 이로 인해 소변의 배출 감소 등의 증세가 발생하는 질환이다. 최근에는 남성에서 빈뇨(8회 이상/일), 야간뇨, 긴박뇨(강하고 갑작스런 요의), 절박뇨(소변을 참기 어려움), 지연뇨(소변의 배출이 지연됨), 단절뇨(소변의 흐름이 끊김), 배뇨시 힘을 주어야 하는 현상 등의 방광 배출 장애를 나타내는 증상을 통칭한 하부 요로증상의 호소로 정의되고 있다. 전립선 비대의 원인으로 남성호르몬인 테스토스테론(testosterone)과 디하이드로테스토스테론(dihydrotestosterone, DHT)이 관련되어 있다고 알려져 있다.
전립선비대증의 약물 치료제는 크게 알파차단제와 안드로겐억제제(5알파-환원효소 억제제)로 분류된다. 알파차단제는 전립선요도의 압력과 긴장을 낮추어주는 약물로, 테라조신(terazosin), 독사조신(doxazosin), 탐스로신(tamsulosin), 알푸조신(alfuzosin) 등이 있는데, 어지럼증, 무기력증, 두통, 시야 장애 등의 부작용이 보고된 바 있다. 안드로겐억제제는 5알파-환원효소를 억제하여 전립선의 비대를 막아주는 약물로, 피나스테라이드(finasteride)와 두타스테리드(dutasteride) 등이 있는데, 성기능 관련 부작용이 보고된 바 있다.
토사자(Cuscutae Semen)는 메꽃과(Convolvulaceae)에 속하는 한해살이 덩굴성 식물인 새삼(Cuscuta japonica), 갯실새삼(Cuscuta chienesis), 실새삼(Cuscuta australis), 미국실새삼(Cuscuta pentagona)의 씨앗으로, 새삼씨라고도 한다. 토사자는 주로 간과 신장을 보호하며 눈을 밝게 해주고, 양기를 도우며 신장 기능을 튼튼하게 해주는 약재로 알려져 있다.
연자육(Nelumbinis Semen)은 수련과(Nymphaceae)의 연꽃(Nelumbo nucifera Gaertner, Nelumbo nymphaea)의 씨로서 일본에서는 연육이라 부른다. 중국에서는 같은 식물의 씨앗을 연자, 성숙한 씨앗 안의 건조된 어린잎과 어린뿌리를 연자심이라 부른다. 주로 비장이 허약한 증상에 많이 사용하여 설사를 멈추게 하며, 가슴이 마구 뛰는 불면증의 증상을 치료하는 약재로 알려져 있다.
포공영(Taraxaci Herba)은 국화과(Asteraceae/Compositae)의 민들레(Taraxacum platycarpum H. Dahlsi) 또는 동속 식물의 전초로, 중국에서는 털민들레(Taraxacum monogolicum Hand.-Mazz), 염지포공영(Taraxacum sinicum Kitag)을 사용한다. 동속 식물로는 흰민들레(Taraxacum coreanum Nakai), 좀민들레(Taraxacum hallaisanensis Nakai), 서양민들레(Taraxacum officinale Weber), 산민들레(Taraxacum ohwianum Kitam)이 있다. 포공영은 열을 내리고 종창, 유방염, 인후염 등에 쓰인다.
대한민국 등록특허공보 제10-0832404호 (2008.05.26. 공고) 대한민국 공개특허공보 제10-2013-0081131호 (2013.07.16. 공개)
본 발명자들은 부작용이 없으면서 효과가 탁월한 천연물 유래의 전립선비대증 질환의 예방 또는 치료제를 개발하고자 노력하였다. 그 결과, 본 발명자들은 토사자, 연자육 및 포공영 복합 추출물을 포함하는 조성물이 전립선비대증 질환을 예방 또는 치료하는데 탁월한 효능이 있음을 규명함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서 본 발명의 목적은 전립선비대증 질환의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물을 제공하는데 있다.
본 발명의 다른 목적은 전립선비대증 질환의 개선용 식품 조성물을 제공하는데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 전립선비대증 질환의 예방 또는 치료방법을 제공하는데 있다.
본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다.
본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 (a) 유효성분으로서의 토사자, 연자육 및 포공영의 복합 추출물; 및 (b) 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 전립선비대증 질환의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물을 제공한다.
본 발명에서의 토사자(Cuscutae Semen)는 메꽃과(Convolvulaceae)에 속하는 한해살이 덩굴성 식물인 새삼(Cuscuta japonica), 갯실새삼(Cuscuta chienesis) 또는 실새삼(Cuscuta australis), 미국실새삼(Cuscuta pentagona)의 씨앗을 포함한다.
본 발명에서의 연자육(Nelumbinis Semen)은 수련과(Nymphaceae)의 연꽃(Nelumbo nucifera Gaertner, Nelumbo nymphaea)의 씨로서 일본에서는 연육이라 부른다. 중국에서는 같은 식물의 씨앗을 연자, 성숙한 씨앗 안의 건조된 어린잎과 어린뿌리를 연자심이라 부른다.
본 발명에서의 포공영(Taraxaci Herba)은 국화과(Asteraceae/Compositae)의 민들레(Taraxacum platycarpum H. Dahlsi) 또는 동속 식물의 전초로, 털민들레(Taraxacum monogolicum Hand.-Mazz), 염지포공영(Taraxacum sinicum Kitag), 흰민들레(Taraxacum coreanum Nakai), 좀민들레(Taraxacum hallaisanensis Nakai), 서양민들레(Taraxacum officinale Weber) 또는 산민들레(Taraxacum ohwianum Kitam)를 포함한다.
본 발명의 조성물은 유효성분으로서 토사자, 연자육 및 포공영 복합 추출물을 포함한다. 본 발명의 토사자, 연자육 및 포공영 복합 추출물은 (i) 토사자, 연자육 및 포공영의 혼합물을 추출 용매로 추출하는 단일 추출공정을 통해 제조되거나, (ii) 토사자, 연자육, 또는 포공영 단일 성분의 추출물을 각각 제조한 후 세 성분의 추출물을 혼합하는 방식으로 제조될 수 있다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 본 발명의 추출물의 토사자, 연자육 및 포공영의 배합 중량비(w/w)는 추출 공정을 거치기 전 각각의 성분들의 중량을 기준으로 1 내지 4 : 1 내지 4 : 1 내지 4이다. 보다 구체적으로 예를 들면, 토사자 : 연자육 : 포공영의 배합 중량비는 1 내지 4 : 1 : 1, 1 : 1 내지 4 : 1, 또는 1 : 1 : 1 내지 4일 수 있다. 상술한 배합 중량비의 더욱 구체적인 일례로서 토사자 : 연자육 : 포공영의 배합 중량비는 4 : 1 : 1, 1 : 4 : 1, 또는 1 : 1 : 4일 수 있다. 다른 일 구체예에 있어서, 토사자 : 연자육 : 포공영의 배합 중량비는 추출 공정을 거치기 전 각각의 성분들의 중량을 기준으로 1 내지 2 : 1 내지 2 : 1 내지 2이고, 더욱 구체적으로 예를 들면, 1 내지 2 : 1 : 1, 1 : 1 내지 2 : 1, 또는 1 : 1 : 1 내지 2일 수 있다. 상술한 배합 중량비의 더욱 구체적인 일례로서 토사자 : 연자육 : 포공영의 배합 중량비는 2 : 1 : 1, 1 : 2 : 1, 또는 1 : 1 : 2 일 수 있다.
본 명세서 상의 용어 "배합 중량비(w/w)"는 추출 공정을 거치기 전 각각의 성분들의 중량비를 나타낸다. 예를 들어, 본 발명의 복합 추출물이 토사자, 연자육 및 포공영의 혼합물을 추출 용매로 추출하는 단일 추출공정을 통해 제조되는 경우, 상기 혼합물에 포함된 토사자, 연자육 및 포공영 각각의 단일 성분들의 중량비를 나타낸다. 또한, 본 발명의 복합 추출물이 토사자, 연자육, 또는 포공영 단일 성분의 추출물을 각각 제조한 후 세 성분의 추출물을 혼합하는 방식으로 제조되는 경우, 다음 계산식에 의해 계산되는 '단일 성분 기준 중량'들 간의 중량비를 나타낸다:
[계산식]
단일 성분 기준 중량 = 단일 추출물 제조에 이용된 단일 성분의 중량 × (최종 복합 추출물 제조를 위해 사용된 단일 추출물의 중량/제조한 단일 추출물의 중량).
본 발명에 이용되는 추출물은 당업계에 공지된 통상적인 추출용매를 이용하여 얻을 수 있다. 추출용매로는 극성 용매 또는 비극성 용매를 이용할 수 있다. 극성 용매로는 (a) 물, (b) 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올 (예: 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 노말-프로판올, 이소-프로판올 및 노말-부탄올 등), (c) 아세트산, 또는 상기 극성 용매들의 혼합물을 포함한다. 비극성 용매로는 아세톤, 아세토나이트릴, 에틸아세테이트, 메틸아세테이트, 부틸아세테이트, 플루오로알칸, 헥산, 에테르, 클로로포름, 디클로로메탄 또는 상기 비극성 용매들의 혼합물을 포함한다.
본 발명의 일 구체예에 따르면, 본 발명의 추출물은 물 또는 에탄올을 추출용매로 사용하여 수득한 것이다. 본 발명의 추출용매로서의 에탄올은 순수 에탄올 용액 뿐만 아니라 에탄올 수용액을 포함하는 광의적인 의미의 에탄올 용액을 의미한다. 본 발명의 추출용매로서의 에탄올은, 일 구체예에서 0 초과 100% 이하의 에탄올을 의미하고, 다른 일 구체예에서 0 초과 95% 이하의 에탄올을 의미하며, 또 다른 일 구체예에서 0 초과 75% 이하의 에탄올을 의미하고, 또 다른 일 구체예에서 0 초과 50% 이하의 에탄올을 의미하며, 또 다른 일 구체예에서 5 내지 30% 에탄올을 의미하고, 또 다른 일 구체예에서 10 내지 30% 에탄올을 의미하며, 또 다른 일 구체예에서 15 내지 30% 에탄올을 의미한다. 보다 구체적으로 25% 에탄올이 이용될 수 있다.
본 발명에 이용되는 추출물은 열수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출, 초음파 추출 또는 당업계에 알려진 통상적인 추출방법을 통해 추출한 것이다. 본 발명의 일 구체예에서 본 발명의 추출물은 냉침 추출 방법을 통해 제조될 수 있으며, 냉침 추출 방법을 이용하는 경우, 1시간 내지 72시간 동안 냉침 추출하는 과정을 통해 제조될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 명세서에서 사용되는 용어 '추출물'은 상술한 바와 같이 당업계에서 조추출물(crude extract)로 통용되는 의미를 갖지만, 광의적으로는 추출물을 추가적으로 분획(fractionation)한 분획물도 포함한다. 즉, 토사자, 연자육 및 포공영 복합 추출물은 상술한 용매를 이용하여 얻은 것뿐만 아니라, 여기에 정제 과정을 추가적으로 적용하여 얻은 것을 포함한다. 예컨대, 상기 추출물을 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외여과막을 통과시켜 얻은 분획, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 다른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 분획도 본 발명의 토사자, 연자육 및 포공영 복합 추출물에 포함된다.
본 발명의 토사자, 연자육 및 포공영 복합 추출물은 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 약제학적 유효량의 토사자, 연자육 및 포공영 복합 추출물을 포함한다. 본 명세서에서 용어 '약제학적 유효량'은 상술한 토사자, 연자육 및 포공영 복합 추출물의 효능 또는 활성을 달성하는데 충분한 양을 의미하며, 본 발명의 목적을 달성하는 한 특별히 제한되지 않는다.
본 발명에서 용어 ‘예방’이란 본 발명에 따른 토사자, 연자육 및 포공영 복합추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물의 투여로 전립선비대증 질환의 발병을 저해 또는 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서 용어 ‘치료’란 본 발명에 따른 토사자, 연자육 및 포공영 복합추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물의 투여로 전립선비대증 질환의 증세가 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.
본 발명의 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 본 발명의 약제학적 조성물에 포함되는 약제학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 물, 시럽 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약제학적 조성물은 상기 성분들 외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 약제학적으로 허용되는 담체 및 제제는 Remignton's Pharmaceutical Sciences(19th ed., 1995)에 상세히 기재되어 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여(예컨대, 정맥 내 투여, 복강 내 투여, 근육 내 투여, 피하 투여 또는 국부 투여)할 수 있으며, 바람직하게는 경구 투여 방식으로 적용된다.
본 발명의 약제학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여시간, 투여경로, 배설속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물의 일반적인 투여량은 성인 기준으로 0.001-1000 mg/kg 범위 내이다. 또한 인체 내 투여량은 동물실험을 근거로 환산할 수 있다(Shin et al., J Korean Oriental Medicine 31(3):1-7, 2010).
본 발명의 약제학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화 함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질 중의 용액, 현탁액, 시럽제 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 산제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.
본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 토사자, 연자육 및 포공영의 복합 추출물을 유효성분으로 포함하는 전립선비대증 질환의 개선용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명에서 용어 ‘개선’이란 본 발명에 따른 토사자, 연자육 및 포공영 복합추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물의 투여로 전립선비대증 질환의 정도를 적어도 감소시키는 모든 행위를 말한다.
본 발명의 조성물이 식품 조성물로 제조되는 경우, 식품 제조시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함하며, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소, 조미제 및 향미제를 포함한다. 상술한 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스, 올리고당 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 사이클로텍스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 향미제로서 천연 향미제 및 합성 향미제를 사용할 수 있다. 예컨대, 본 발명의 식품 조성물이 드링크제로 제조되는 경우에는 본 발명의 유효성분 외에 구연산, 액상과당, 설탕, 포도당, 초산, 사과산, 과즙 등을 추가로 포함시킬 수 있다.
본 발명의 식품 조성물의 경우, 상술한 본 발명의 일 양태인 약제학적 조성물에 포함된 토사자, 연자육 및 포공영의 복합 추출물을 그대로 이용가능하며, 본 명세서 기재의 과도한 복잡성을 피하기 위해 중복되는 내용의 기재는 생략하도록 한다.
본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 본 발명은 토사자, 연자육 및 포공영의 복합 추출물을 유효성분으로 포함하는 약제학적 조성물의 약제학적 유효량을 이를 필요로 하는 대상(subject)에게 투여하는 단계를 포함하는 전립선 비대증의 치료 방법을 제공한다.
본 발명의 치료 방법을 적용하기 위한 대상(subject)은 전립선 비대증 발병이 의심되거나, 진단을 받은 환자를 의미한다.
본 발명에서 용어 ‘대상(subject)'이란 인간, 마우스, 랫트, 기니아 피그, 개, 고양이, 말, 소, 돼지, 원숭이, 침팬지, 비비(baboon) 및 붉은털 원숭이 등을 포함하는 포유류이다. 가장 구체적으로는, 본 발명의 대상(subject)은 인간이다.
본 발명인 전립선 비대증의 치료 방법에 있어서 전립선 비대증의 치료는, 상술한 본 발명의 다른 일 양태인 약제학적 조성물을 대상(subject)에 투여하는 방식으로 실시되는 바, 상술한 약제학적 조성물에 대한 발명의 상세한 설명의 내용을 본 발명인 치료 방법의 상세한 설명을 위해 그대로 원용하며, 중복되는 내용에 대해서는 본 명세서 기재의 과도한 복잡성을 피하기 위해 생략하도록 한다.
본 발명의 특징 및 이점을 요약하면 다음과 같다:
(a) 본 발명은 전립선비대증 질환의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물을 제공한다.
(b) 본 발명은 전립선비대증 질환의 개선용 식품 조성물을 제공한다.
(c) 본 발명은 전립선비대증 질환의 예방 또는 치료방법을 제공한다.
(d) 본 발명의 약제학적 조성물을 이용하는 경우, 전립선비대증을 부작용 없이 효과적으로 예방 또는 치료할 수 있다.
도 1은 테스토스테론에 의한 전립선 상피세포주(LNCaP)의 증식에 대한 복합생약추출물들의 억제 효과를 나타내는 그래프이다.
도 2는 테스토스테론에 의한 전립선 상피세포주(LNCaP)의 증식에 대한 다양한 농도의 에탄올 수용액으로 추출한 복합 생약 추출물의 억제효과를 나타내는 그래프이다.
도 3은 테스토스테론에 의한 전립선 상피세포주(LNCaP)의 증식에 대한 복합생약추출물과 단일생약추출물의 억제 효과를 나타내는 그래프이다.
도 4는 테스토스테론으로 유도한 전립선 비대증 랫드 모델에서 복합생약추출물과 단일생약추출물 처리에 따른 몸무게 변화를 나타내는 그래프이다.
도 5는 테스토스테론으로 유도한 전립선 비대증 랫드 모델에서 복합생약추출물과 단일생약추출물 처리에 따른 전립선 증식 억제 효과를 나타내는 그래프이다.
도 6은 테스토스테론으로 유도한 전립선 비대증 랫드 모델에서 복합생약추출물과 단일생약추출물 처리에 따른 전립선 증식 억제 효과에 관한 실험 결과로서, 적출한 전립선 조직 내의 샘꽈리(acinus) 넓이를 측정한 결과를 나타낸다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.
실시예
제조예 1 : 다양한 혼합비율별 복합 생약 추출물의 제조
한국의 한약재 유통 전문 업체인 ㈜휴먼허브에서 구입한 세척 및 건조된 토사자(Cuscutae Semen), 연자육(Nelumbinis Semen) 및 포공영(Taraxaci Herba)을 실험에 사용하였다. 상기 토사자, 연자육 및 포공영 생약을 표 1에 기재된 중량비(w/w)로 총 240 g이 되게 혼합한 뒤 10배의 25% 에탄올 수용액을 가해 상온에서 72시간 동안 잘 교반시키며 추출한 후 여과하여 이를 50-65℃에서 감압농축한 뒤, 동결건조시켜서 총 7가지 종류의 복합 생약 추출물 분말을 수득하였고, 이들의 수율은 표 1과 같았다.
토사자 연자육 포공영 수율(%)
제조예1-1 1 1 1 11.35
제조예1-2 2 1 1 11.22
제조예1-3 4 1 1 10.17
제조예1-4 1 2 1 12.08
제조예1-5 1 4 1 12.39
제조예1-6 1 1 2 11.71
제조예1-7 1 1 4 10.85
제조예 2 : 다양한 추출시간별 복합 생약 추출물의 제조
한국의 한약재 유통 전문 업체인 ㈜휴먼허브에서 구입한 세척 및 건조된 토사자(Cuscutae Semen), 연자육(Nelumbinis Semen) 및 포공영(Taraxaci Herba)을 실험에 사용하였다. 상기 토사자, 연자육 및 포공영 생약을 제조예1-6의 중량비(w/w)로 총 240 g이 되게 혼합한 뒤 10배의 25% 에탄올 수용액을 가해 상온에서 0.5, 3, 8, 24 및 72시간 동안 잘 교반시키며 추출한 후 여과하여 이를 50-65℃에서 감압농축한 뒤, 동결건조시켜서 총 5가지 종류의 복합 생약 추출물 분말을 수득하였고, 이들의 수율은 표 2와 같았다.
추출시간(hr) 수율(%) 비고
제조예2-1 0.5 9.04
제조예2-2 3 10.87
제조예2-3 8 10.01
제조예2-4 24 11.17
제조예2-5 72 11.71 제조예1-6과 동일
제조예 3 : 다양한 에탄올수용액 농도별 복합 생약 추출물의 제조
한국의 한약재 유통 전문 업체인 ㈜휴먼허브에서 구입한 세척 및 건조된 토사자(Cuscutae Semen), 연자육(Nelumbinis Semen) 및 포공영(Taraxaci Herba)을 실험에 사용하였다. 상기 토사자, 연자육 및 포공영 생약을 제조예1-6의 중량비(w/w)로 총 240 g이 되게 혼합한 뒤 10배의 0, 10, 25, 50, 75 및 95% 에탄올 수용액을 가해 상온에서 72시간 동안 잘 교반시키며 추출한 후 여과하여 이를 50-65℃에서 감압농축한 뒤, 동결건조시켜서 총 6가지 종류의 복합 생약 추출물 분말을 수득하였고, 이들의 수율은 표 3과 같았다.
에탄올수용액의 농도(%) 수율(%) 비고
제조예3-1 0 10.32
제조예3-2 10 10.63
제조예3-3 25 11.71 제조예1-6과 동일
제조예2-5와 동일
제조예3-4 50 12.28
제조예3-5 75 8.81
제조예3-6 95 5.16
제조예 4 : 열수 추출을 통한 복합 생약 추출물의 제조
한국의 한약재 유통 전문 업체인 ㈜휴먼허브에서 구입한 세척 및 건조된 토사자(Cuscutae Semen), 연자육(Nelumbinis Semen) 및 포공영(Taraxaci Herba)을 실험에 사용하였다. 상기 토사자, 연자육 및 포공영 생약을 제조예1-6의 중량비(w/w)로 각 30 g, 30 g 및 60 g을 혼합한 뒤 10배의 증류수를 가해 95-100℃의 온도에서 3시간 동안 환류추출한 후 여과하여 이를 50-65℃에서 감압농축한 뒤, 동결건조시켜서 복합 생약 추출물 분말을 수득하였고, 이의 수율은 약 11.90%였다.
비교예 1 : 단일 생약 추출물의 제조
세척 및 건조된 토사자(Cuscutae Semen), 연자육(Nelumbinis Semen) 및 포공영(Taraxaci Herba)을 구입하여 실험에 사용하였다. 각 생약의 180 g에 10배의 25% 에탄올 수용액을 가해 상온에서 72시간 동안 잘 교반시키며 추출한 후 여과하여 이를 50-65℃에서 감압농축한 뒤, 동결건조시켜서 총 3가지 단일 생약 추출물 분말을 수득하였고, 이들의 수율은 표 4와 같았다.
생약의 종류 수율(%)
비교예1-1 토사자 5.49
비교예1-2 연자육 16.35
비교예1-3 포공영 15.00
실험예 1: 테스토스테론에 의한 전립선 상피세포주의 증식에 대한 복합 생약 추출물들의 유효성 확인
(실험방법)
사람의 전립선암으로부터 유래한 전립선 상피세포주인 LNCaP 세포를 RPMI 배지(Gibco.USA)를 이용하여 웰당 1x105 세포수로 24웰-플레이트에 준비하고 하루 동안 안정화시켰다. 이후 무혈청(serum-free) 배지에서 24시간 동안 배양한 뒤, 배양액 제거 후 테스토스테론(Tes) 2 μM과 제조예 1-6의 복합 생약 추출물, 제조예 4에서 제조한 복합 생약 추출물을 각 50, 100 및 200 ㎍/㎖의 농도로 처리하였다. 72시간 후 세포의 증식 변화를 MTT 검사법을 통해 확인하였다. 세포 증식 비율은 Tes 처리군에 대비한 비율로서 나타내었다.
(결과)
열수 복합 생약 추출물(제조예 4)과 25% 에탄올수용액의 복합 생약 추출물(제조예 1-6)의 효과를 비교한 결과, 두 추출물 모두 농도 의존적으로 전립선 세포 증식 억제 효과가 나타났다(도 1).
실험예 2: 테스토스테론에 의한 전립선 상피세포주의 증식에 대한 다양한 에탄올 수용액 농도별 복합 생약 추출물의 유효성 확인
(실험방법)
사람의 전립선암으로부터 유래한 전립선 상피세포주인 LNCaP 세포를 RPMI 배지(Gibco, USA)를 이용하여 웰당 1x105 세포수로 24웰-플레이트에 준비하고 하루 동안 안정화시켰다. 이후 무혈청(serum-free) 배지에서 24시간 동안 배양한 뒤, 배양액 제거 후 테스토스테론(Tes) 2 μM과 제조예3에서 제조한 6가지 복합 생약 추출물을 200 ㎍/㎖의 농도로 처리하였다. 72시간 후 세포의 증식 변화를 MTT 검사법을 통해 확인하였다. 세포 증식 비율은 Tes 처리군에 대비한 비율로서 나타내었다.
(결과)
테스토스테론에 의한 전립선 상피세포주의 증식에 대한 다양한 에탄올 수용액 농도별 복합 생약 추출물이 미치는 영향은 하기 표 5에 나타내었다.
투여물질 세포 증식 (% of control) 세포 증식 억제율(%)
NC(무처리) - -
Tes(테스토스테론) 100 -
테스토스테론 + 제조예3-1 45.91 54.09
테스토스테론 + 제조예3-2 41.16 58.84
테스토스테론 + 제조예3-3 34.59 65.41
테스토스테론 + 제조예3-4 58.43 41.57
테스토스테론 + 제조예3-5 74.00 26.00
테스토스테론 + 제조예3-6 83.54 16.46
에탄올 수용액 농도에 따른 복합 생약 추출물의 효과를 비교한 결과, 제조예3-1에서 제조예3-6 모두 Tes 처리군에 대비하여 낮은 세포 증식 비율을 나타내어, 다양한 에탄올 수용액 농도별 복합 생약 추출물의 우수한 전립선 세포 증식 억제 효과를 확인할 수 있었다(도 2).
실험예 3: 테스토스테론에 의한 전립선 상피세포주의 증식에 대한 단일 생약 추출물과 복합 생약 추출물의 유효성 비교
(실험방법)
사람의 전립선암으로부터 유래한 전립선 상피세포주인 LNCaP 세포를 RPMI 배지(Gibco.USA)를 이용하여 웰당 1x105 세포수로 24웰-플레이트에 준비하고 하루 동안 안정화시켰다. 이후 무혈청(serum-free) 배지에서 24시간 동안 배양한 뒤, 배양액 제거 후 테스토스테론 2 μM과 제조예 1-6의 복합 생약 추출물 또는 비교예 1에서 제조한 3가지 단일 생약 추출물을 200 ㎍/㎖의 농도로 처리하였다. 72시간 후 세포의 증식 변화를 MTT 검사법을 통해 확인하였다. 세포 증식 비율은 Tes 처리군에 대비한 비율로서 나타내었다.
(결과)
테스토스테론에 의한 전립선 상피세포주 증식에 단일 생약 추출물과 복합 생약 추출물이 미치는 영향은 하기 표 6에 나타내었다.
200 ㎍/㎖ 처리
세포증식비율(%) 세포증식억제율(%)
NC ㅡ ㅡ
테스토스테론 100.0 ㅡ
제조예1-6 44.9 55.1
비교예1-1
(토사자)		 66.7 33.3
비교예1-2
(연자육)		 78.0 22.0
비교예1-3
(포공영)		 88.1 11.9
전립선 상피세포주에 테스토스테론 처리시 세포 증식이 약 62.5% 증가하였다. 테스토스테론 처리와 함께 복합 생약 추출물인 제조예1-6을 처리한 결과 약 55.1%의 세포 증식 억제 효과를 보였다. 반면, 각 단일 생약 추출물인 비교예1-1(토사자), 비교예1-2(연자육) 및 비교예1-3(포공영)을 처리시 각각 약 33.3%, 22.0% 및 11.9%의 세포 증식 억제 효과를 보여, 동일 농도에서 복합 생약 추출물의 효과가 단일 생약 추출물에 비해 현저함을 확인할 수 있었다(도 3).
실험예 4 : 테스토스테론으로 유도한 전립선 비대증 랫드 모델에서의 단일 생약 추출물과 복합 생약 추출물의 전립선 증식 억제 효과 비교
(실험방법)
9주령(몸무게 350 g이하)의 웅성 SD 쥐를 일주일 이상 순화사육한 후, 체중을 기준으로 (1) 정상군, (2) 전립선 비대증 유도 및 증류수 투여군 (음성대조군), (3) 전립선 비대증 유도 및 복합 생약 추출물(제조예1-6) 투여군, (4) 전립선 비대증 유도 및 토사자 단일 생약 추출물(비교예1-1) 투여군, (5) 전립선 비대증 유도 및 연자육 단일 생약 추출물(비교예1-2) 투여군, (6) 전립선 비대증 유도 및 포공영 단일 생약 추출물(비교예1-3) 투여군, (7) 전립선 비대증 유도 및 피나스테라이드(Finasteride) 투여군 (양성대조군) 으로 분리하였다. 전립선 비대증을 유도하기 위해 테스토스테론(Testosterone, 목화씨 오일에 녹여서 사용)을 3 mg/kg의 용량으로 1회/3일, 총 10회 피하주사(subcutaneous injection)하였다. 정상군의 경우, 동량의 목화씨 오일을 피하주사하였다. 제조예 1-6의 복합 생약 추출물 및 비교예 1의 단일 생약 추출물들은 증류수에 녹여 300 mg/kg의 용량으로 1회/일, 30일 간 경구 투여하였다. 피나스테라이드 투여군(시그마, 0.2% tween 80에 녹여서 사용)은 10 mg/kg의 용량으로 1회/1일, 30일 간 경구 투여하였다. 음성대조군은 증류수만을 경구 투여하였다. 실험 시작일로부터 일주일 간격으로 총 5회 몸무게를 측정하였으며, 마지막 투약 및 처리가 끝난 다음 날 랫드를 이산화탄소 가스로 희생시킨 뒤, 전립선 조직을 적출하고 무게를 측정하였다. 이 측정값으로부터 아래 수학식을 이용하여 전립선 증식 억제 효과(%)를 나타내었다.
수학식
전립선증식억제효과(%) = 100 - {(복합생약추출물군/단일추출물 또는 양성대조군 전립선 무게 - 정상군 전립선 무게) * 100 / (음성대조군 전립선 무게 - 정상군 전립선 무게)}
또한, 적출한 전립선 조직을 10% 중성 포르말린에 고정하여 H&E 염색 (hematoxylin and eosin staining)을 수행하였다. 염색한 조직의 슬라이드를 광학 현미경을 이용하여 관찰, 촬영하여 전립선 내의 샘꽈리(acinus)의 넓이를 측정하였다. 그 후 각 실험군의 샘꽈리 넓이 감소 정도를 정상군의 샘꽈리 넓이에 대비한 비율로 나타내었다.
(결과)
테스토스테론으로 전립선 비대증을 유도한 결과, 정상군의 경우 지속적으로 몸무게가 증가하는데 반해, 테스토스테론을 처리한 군에서는 몸무게 증가가 억제 되었다. 그러나, 음성대조군, 복합 생약 추출물군 (제조예1-6), 단일 생약 추출물군 (비교예1-1, 비교예1-2 및 비교예1-3) 및 양성대조군들 간에는 유의미한 몸무게 차이는 관찰되지 않았다(도 4). 테스토스테론에 의한 전립선 증식에 미치는 복합 생약 추출물군 (제조예1-6), 단일 생약 추출물군 (비교예1-1, 비교예1-2 및 비교예1-3) 및 양성대조군의 효과는 하기 표 7에 나타내었다.
실험군 전립선무게/몸무게 (g/kg) 전립선 증식 억제 효과 (%)
정상군 0.08 ± 0.01 ㅡ
음성대조군 2.26 ± 0.21 ㅡ
복합 생약 추출물 1.49 ± 0.26 35
토사자 단일추출물 1.82 ± 0.09 20
연자육 단일추출물 1.79 ± 0.20 21
포공영 단일추출물 2.14 ± 0.17 5
양성대조군(피나스테라이드) 1.31 ± 0.10 43
테스토스테론으로 전립선 비대증을 유도한 결과, 랫드의 전립선 무게는 정상군 대비 약 30배 증가하였다. 그러나 복합 생약 추출물군의 경우, 테스토스테론 유도군 (음성대조군)에 비해 35%의 전립선 무게 감소 효과를 나타내어 통계적으로 유의한 차이가 있음을 알 수 있었다. 반면, 각 단일 생약 추출물인 비교예1-1(토사자), 비교예1-2(연자육) 및 비교예1-3(포공영) 투여군의 경우, 테스토스테론 유도군 (음성대조군)에 비해 각각 약 20%, 21% 및 5%의 전립선 증식 억제 효과를 보였지만 통계적으로 유의한 차이는 확인되지 않았다(도 5). 이로부터 복합 생약 추출물의 효과가 단일 생약 추출물에 비해 현저히 뛰어남을 확인할 수 있었다.
전립선 꽈리 넓이(size of acini)에 미치는 복합 생약 추출물군(제조예1-6), 단일 생약 추출물군(비교예1-1, 비교예1-2 및 비교예1-3) 및 양성대조군의 효과는 하기 표 8에 나타내었다.
실험군 전립샘 꽈리 크기 (%) 샘꽈리 크기 감소 효과 (%)
정상군 100 ± 30 -
음성대조군 481 ± 52 -
복합 생약 추출물 270 ± 48 44
토사자 단일추출물 375 ± 25 22
연자육 단일추출물 334 ± 18 30
포공영 단일추출물 482 ± 65 0
양성대조군(피나스테라이드) 279 ± 10 42
음성대조군의 샘꽈리의 넓이는 정상군 대비 4.8배 증가하였고, 복합 생약 추출물의 경우 이러한 샘꽈리 넓이를 44% 감소 시키는 효과를 나타내었으며, 이는 통계적으로 유의미한 수치임을 확인하였다. 또한 단일 생약 추출물(비교예1-1, 비교예1-2 및 비교예1-3)의 경우, 각각 22, 30, 0%로 복합 생약 추출물의 뛰어난 효과에 미치지 못하는 것으로 확인되었다. 이로부터 복합 생약 추출물의 효과가 단일 생약 추출물에 비해 현저히 뛰어남을 확인할 수 있었다(도 6).

Claims (7)

  1. (a) 유효성분으로서의 토사자, 연자육 및 포공영의 복합 추출물; 및
    (b) 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 전립선비대증 질환의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물.
  2. 제 1 항에 있어서, 상기 토사자, 연자육 및 포공영의 배합 중량비(w/w)는 1 내지 4 : 1 내지 4 : 1 내지 4인 조성물.
  3. 제 1 항에 있어서, 상기 추출물은 물 또는 에탄올 추출물인 조성물.
  4. 제 3 항에 있어서, 상기 에탄올은 0% 초과 50% 이하 에탄올인 조성물.
  5. 제 3 항에 있어서, 상기 에탄올은 25% 에탄올인 조성물.
  6. 토사자, 연자육 및 포공영의 복합 추출물을 유효 성분으로 포함하는 전립선비대증 질환의 개선용 식품 조성물.
  7. 제 6 항에 있어서, 상기 토사자, 연자육 및 포공영의 배합 중량비(w/w)는 1 내지 4 : 1 내지 4 : 1 내지 4인 조성물.
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