JP2021505628A

JP2021505628A - 前立腺肥大症疾患の予防または治療用生薬組成物

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Publication number: JP2021505628A
Application number: JP2020531526A
Authority: JP
Inventors: ウォンソン、ミ; ソクイ、トゥ; ウイ、ウォン; ジョンナム、イン; ファンソン、ソン
Original assignee: ヘリックスミスカンパニー，リミテッド
Priority date: 2017-12-06
Filing date: 2018-12-06
Publication date: 2021-02-18
Anticipated expiration: 2038-12-06
Also published as: JP7035294B2; US20200297790A1; WO2019112348A1; EP3721891A1; KR102167811B1; US20220133827A1; EP3721891A4; KR20190067126A; CN111465403A

Abstract

本発明は、有効成分として兎糸子、蓮子肉、及び蒲公英の抽出物を含む前立腺肥大症疾患の予防または治療用組成物に関するものである。本発明を用いる場合、前立腺肥大症を副作用無しで効果的に予防または治療することができる。

Description

本特許出願は２０１７年１２月６日付で大韓民国特許庁に提出された大韓民国特許出願自分の１０−２０１７−０１６６８６０号に対して優先権を主張し、前記特許出願の開示事項は本明細書に参照として挿入される。

本発明は前立腺肥大症疾患の予防または治療のための生薬組成物に関し、より詳しくは、過度な前立腺増殖を抑制し、膀胱排出障害を改善させるために兎糸子、蓮子肉、及び蒲公英の複合抽出物を含む前立腺肥大症疾患の予防または治療用組成物に関する。

前立腺肥大症（Benign prostatic hyperplasia、ＢＰＨ）は前立腺疾患の１つで、多様な原因により尿道の周囲の前立腺の体積が増加して尿道を圧迫し、これによって小便の排出減少などの症状が発生する疾患である。最近には、男性で頻尿（８回以上／日）、夜間尿、緊迫尿（強くて突然の尿意）、切迫尿（小便を我慢できない）、遅延尿（小便の排出が遅れる）、断絶尿（小便の流れが切れる）、排尿時に力を入れなければならない現象などの膀胱排出障害を示す症状を通称した下部尿路症状の訴えと定義されている。前立腺肥大の原因に男性ホルモンであるテストステロン（testosterone）とジヒドロテストステロン（dihydrotestosterone、ＤＨＴ）が関連していると知られている。

前立腺肥大症の薬物治療剤は大別してα遮断剤とアンドロゲン抑制剤（５α−還元酵素抑制剤）とに分類される。α遮断剤は前立腺尿道の圧力と緊張を低める薬物で、テラゾシン（terazosin）、ドキサゾシン（doxazosin）、タムスロシン（tamsulosin）、アルフゾシン（alfuzosin）などがあるが、めまい症、無気力症、頭痛、視野障害などの副作用が報告されたことがある。アンドロゲン抑制剤は５α−還元酵素を抑制して前立腺の肥大を止める薬物で、フィナステライド（finasteride）とデュタステライド（dutasteride）などがあるが、性機能関連副作用が報告されたことがある。

兎糸子（Cuscutae Semen）はヒルガオ科（Convolvulaceae）に属する一年生つる性植物であるネナシカズラ（Cuscuta japonica）、ハマネナシカズラ（Cuscuta chienesis）、マメダオシ（Cuscuta australis）、米国マメダオシ（Cuscuta pentagona）の種物で、ネナシカズラ種ともいう。兎糸子は主に肝と腎臓を保護し、目を明るくし、陽気を助けて、腎臓機能を丈夫にする薬剤として知られている。

蓮子肉（Nelumbinis Semen）は睡蓮科（Nymphaceae）の蓮（Nelumbo nucifera Gaertner、Nelumbo nymphaea）の種であって、日本では蓮肉という。中国では同じ植物の種物を蓮子、成熟した種物の中の乾燥された若葉と幼根を蓮子心という。主として腓腸が虚弱な症状に多く使用して下痢を止めるようにし、胸がやけに躍る不眠症の症状を治療する薬剤として知られている。

蒲公英（Taraxaci Herba）は、キク科（Asteraceae／Compositae）のタンポポ（Taraxacum platycarpum H. Dahlsi）または同属植物の全草で、中国ではモウコタンポポ（Taraxacum monogolicum Hand. -Mazz）、鹸地蒲公英（Taraxacum sinicum Kitag）を使用する。同属植物には、白タンポポ（Taraxacum coreanum Nakai）、イワタンポポ（Taraxacum hallaisanensis Nakai）、西洋タンポポ（Taraxacum officinale Weber）、キバナコウライタンポポ（Taraxacum ohwianum Kitam）がある。蒲公英は熱を下げて、腫脹、乳房炎、咽喉炎などに使われる。

本発明者らは副作用がない、かつ効果が卓越した天産物由来の前立腺肥大症疾患の予防または治療剤を開発しようと努力した。その結果、本発明者らは兎糸子、蓮子肉、及び蒲公英の複合抽出物を含む組成物が前立腺肥大症疾患を予防または治療することに卓越した効能があることを糾明することによって本発明を完成するに至った。

したがって、本発明の目的は前立腺肥大症疾患の予防または治療用薬剤学的組成物を提供することにある。

本発明の他の目的は、前立腺肥大症疾患の改善用食品組成物を提供することにある。

本発明の更に他の目的は、前立腺肥大症疾患の予防または治療方法を提供することにある。

本発明の他の目的及び利点は下記の発明の詳細な説明、請求範囲、及び図面により、さらに明確になる。

本発明の一態様によれば、本発明は（ａ）有効成分としての兎糸子、蓮子肉、及び蒲公英の複合抽出物；及び（ｂ）薬剤学的に許容される担体を含む前立腺肥大症疾患の予防または治療用薬剤学的組成物を提供する。

本発明での兎糸子（Cuscutae Semen）は、ヒルガオ科（Convolvulaceae）に属する一年生つる性植物であるネナシカズラ（Cuscuta japonica）、ハマネナシカズラ（Cuscuta chienesis）、またはマメダオシ（Cuscuta australis）、米国マメダオシ（Cuscuta pentagona）の種を含む。

本発明での蓮子肉（Nelumbinis Semen）は、睡蓮科（Nymphaceae）の蓮（Nelumbo nucifera Gaertner、Nelumbo nymphaea）の種であって、日本では蓮肉という。中国では同じ植物の種を蓮子、成熟した種物の中の乾燥された若葉と幼根を蓮子心という。

本発明での蒲公英（TaraxaciHerba）はキク科（Asteraceae／Compositae）のタンポポ（Taraxacum platycarpum H. Dahlsi）または同属植物の全草で、モウコタンポポ（Taraxacum monogolicum Hand.-Mazz）、鹸地蒲公英（Taraxacum sinicum Kitag）、白タンポポ（Taraxacum coreanum Nakai）、シワタンポポ（Taraxacum hallaisanensis Nakai）、西洋タンポポ（Taraxacum officinale Weber）、またはキバナコウライタンポポ（Taraxacum ohwianum Kitam）を含む。

本発明の組成物は有効成分として兎糸子、蓮子肉、及び蒲公英の複合抽出物を含む。本発明の兎糸子、蓮子肉、及び蒲公英の複合抽出物は、（i）兎糸子、蓮子肉、及び蒲公英の混合物を抽出溶媒として抽出する単一抽出工程を通じて製造されるか、（ii）兎糸子、蓮子肉、または蒲公英の単一成分の抽出物を各々製造した後、３成分の抽出物を混合する方式により製造できる。

本発明の一具現例において、本発明の抽出物の兎糸子、蓮子肉、及び蒲公英の配合重量比（ｗ／ｗ）は抽出工程を経る前、各々の成分の重量を基準に１〜４：１〜４：１〜４である。より具体的に例を挙げれば、兎糸子：蓮子肉：蒲公英の配合重量比は１〜４：１：１、１：１〜４：１、または１：１：１〜４でありうる。前述した配合重量比のより具体的な一例として、兎糸子：蓮子肉：蒲公英の配合重量比は４：１：１、１：４：１、または１：１：４でありうる。他の一具現例において、兎糸子：蓮子肉：蒲公英の配合重量比は抽出工程を経る前、各々の成分の重量を基準に１〜２：１〜２：１〜２であり、より具体的に例を挙げれば、１〜２：１：１、１：１〜２：１、または１：１：１〜２でありうる。前述した配合重量比のより具体的な一例として、兎糸子：蓮子肉：蒲公英の配合重量比は２：１：１、１：２：１、または１：１：２でありうる。

本明細書上の用語“配合重量比（ｗ／ｗ）”は抽出工程を経る前、各々の成分の重量比を示す。例えば、本発明の複合抽出物が兎糸子、蓮子肉、及び蒲公英の混合物を抽出溶媒として抽出する単一抽出工程を通じて製造される場合、前記混合物に含まれた兎糸子、蓮子肉、及び蒲公英の各々の単一成分の重量比を示す。また、本発明の複合抽出物が兎糸子、蓮子肉、または蒲公英の単一成分の抽出物を各々製造した後、３成分の抽出物を混合する方式により製造される場合、次の計算式により計算される‘単一成分基準重量’の間の重量比を示す：

［計算式］
単一成分基準重量＝単一抽出物製造に用いられた単一成分の重量×（最終複合抽出物製造のために使われた単一抽出物の重量／製造した単一抽出物の重量）。

本発明に用いられる抽出物は当業界に公知されている通常的な抽出溶媒を用いて得ることができる。抽出溶媒には、極性溶媒または非極性溶媒を用いることができる。極性溶媒には、（ａ）水、（ｂ）炭素数１−４の無水または含水低級アルコール（例：メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール、ノーマル−プロパノール、イソ−プロパノール、及びノーマル−ブタノールなど）、（ｃ）アセト酸、または前記極性溶媒の混合物を含む。非極性溶媒には、アセトン、アセトニトリル、エチルアセテート、メチルアセテート、ブチルアセテート、フルオロアルカン、ヘキサン、エーテル、クロロホルム、ジクロロメタン、または前記非極性溶媒の混合物を含む。

本発明の一具現例によれば、本発明の抽出物は水またはエタノールを抽出溶媒として使用して収得したものである。本発明の抽出溶媒としてのエタノールは純粋エタノール溶液だけでなく、エタノール水溶液を含む広義的な意味のエタノール溶液を意味する。本発明の抽出溶媒としてのエタノールは、一具体例で０超過１００％以下のエタノールを意味し、他の一具体例で０超過９５％以下のエタノールを意味し、更に他の一具体例で０超過７５％以下のエタノールを意味し、更に他の一具体例で０超過５０％以下のエタノールを意味し、更に他の一具体例で５〜３０％エタノールを意味し、更に他の一具体例で１０〜３０％エタノールを意味し、更に他の一具体例で１５〜３０％エタノールを意味する。より具体的に、２５％エタノールが利用できる。

本発明に用いられる抽出物は、熱水抽出、冷浸抽出、還流冷却抽出、超音波抽出、または当業界に知られた通常的な抽出方法により抽出したものである。本発明の一具体例で、本発明の抽出物は冷浸抽出方法により製造されることができ、冷浸抽出方法を用いる場合、１時間〜７２時間の間冷浸抽出する過程を通じて製造できるが、これに限定されるのではない。

本明細書で使われる用語‘抽出物’は前述したように当業界で粗抽出物（crude extract）に通用される意味を有するが、広義的には抽出物を追加的に分画（fractionation）した分画物も含む。即ち、兎糸子、蓮子肉、及び蒲公英の複合抽出物は前述した溶媒を用いて得たものだけでなく、ここに精製過程を追加的に適用して得たものを含む。例えば、前記抽出物を一定の分子量カット−オフ値を有する限外濾過膜を通過させて得た分画、多様なクロマトグラフィー（サイズ、電荷、疏水性、または親和性に異なる分離のために製作されたもの）による分離など、追加的に実施された多様な精製方法を通じて得られた分画も本発明の兎糸子、蓮子肉、及び蒲公英複合抽出物に含まれる。

本発明の兎糸子、蓮子肉、及び蒲公英の複合抽出物は、減圧蒸留及び凍結乾燥または噴霧乾燥などの追加的な過程により粉末状態に製造できる。

本発明の薬剤学的組成物は、薬剤学的有効量の兎糸子、蓮子肉、及び蒲公英の複合抽出物を含む。本明細書で、用語‘薬剤学的有効量’は前述した兎糸子、蓮子肉、及び蒲公英の複合抽出物の効能または活性を達成することに十分な量を意味し、本発明の目的を達成する限り、特別に制限されるのではない。

本発明で、用語‘予防’とは、本発明に従う兎糸子、蓮子肉、及び蒲公英の複合抽出物を有効成分に含む組成物の投与により前立腺肥大症疾患の発病を阻害または遅延させる全ての行為を意味する。

本発明で、用語‘治療’とは、本発明に従う兎糸子、蓮子肉、及び蒲公英の複合抽出物を有効成分に含む組成物の投与により前立腺肥大症疾患の症状が好転されるか、または有益に変更される全ての行為を意味する。

本発明の薬剤学的組成物は、薬剤学的に許容される担体を含む。本発明の薬剤学的組成物に含まれる薬剤学的に許容される担体は、製剤時に通常的に用いられるものであって、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、澱粉、アカシアゴム、燐酸カルシウム、アルギネート、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微細結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、水、シロップ、及びミネラルオイルなどを含むガ、これに限定されるのではない。本発明の薬剤学的組成物は、前記成分の他に、潤滑剤、湿潤剤、甘味剤、香味剤、乳化剤、懸濁剤、保存剤などを追加で含むことができる。適合した薬剤学的に許容される担体及び製剤はRemignton's Pharmaceutical Sciences（19th ed., 1995）に詳細に記載されている。

本発明の薬剤学的組成物は、経口または非経口投与（例えば、静脈内投与、腹腔内投与、筋肉内投与、皮下投与、または局部投与）することができ、好ましくは経口投与方式により適用される。

本発明の薬剤学的組成物の適合した投与量は、製剤化方法、投与方式、患者の年齢、体重、性、病的状態、飲食、投与時間、投与経路、排泄速度、及び反応感応性のような要因により多様に処方できる。本発明の薬剤学的組成物の一般的な投与量は、成人基準に０．００１−１０００ｍｇ／ｋｇ範囲内である。また、人体内投与量は動物実験に基づいて換算することができる（Shin et al., J Korean Oriental Medicine 31(3)：1-7, 2010）。

本発明の薬剤学的組成物は、当該発明が属する技術分野で通常の知識を有する者が容易に実施することができる方法により薬剤学的に許容される担体及び／又は賦形剤を用いて製剤化することによって、単位容量形態に製造されるか、または多容量容器内に内入させて製造できる。この際、剤形はオイルまたは水性媒質の中の溶液、懸濁液、シロップ剤、または乳化液形態でありえ、またはエキス剤、散剤、粉末剤、顆粒剤、錠剤、またはカプセル剤形態であることもあり、分散剤または安定化剤を追加的に含むことができる。

本発明の他の態様によれば、本発明は兎糸子、蓮子肉、及び蒲公英の複合抽出物を有効成分に含む前立腺肥大症疾患の改善用食品組成物を提供する。

本発明で、用語‘改善’とは、本発明に従う兎糸子、蓮子肉、及び蒲公英の複合抽出物を有効成分に含む組成物の投与により前立腺肥大症疾患の程度を少なくとも減少させる全ての行為をいう。

本発明の組成物が食品組成物に製造される場合、食品製造時に通常的に添加される成分を含み、例えば、蛋白質、炭水化物、脂肪、営養素、調味剤、及び香味剤を含む。前述した炭水化物の例は、モノサッカライド、例えば葡萄糖、果糖など；ジサッカライド、例えばマルトース、スクロース、オリゴ糖など；及びポリサッカライド、例えばデキストリン、サイクロテキストリンなどの通常的な糖及びキシリトール、ソルビトール、エリスリトールなどの糖アルコールである。香味剤として天然香味剤及び合成香味剤を使用することができる。例えば、本発明の食品組成物がドリンク剤に製造される場合には、本発明の有効成分の他にクエン酸、液状果糖、砂糖、葡萄糖、酢酸、リンゴ酸、果汁などを追加で含めることができる。

本発明の食品組成物の場合、前述した本発明の一態様である薬剤学的組成物に含まれた兎糸子、蓮子肉、及び蒲公英の複合抽出物をそのまま利用可能であり、本明細書記載の過度な複雑性を避けるために重複する内容の記載は省略する。

本発明の更に他の態様によれば、本発明は兎糸子、蓮子肉、及び蒲公英の複合抽出物を有効成分に含む薬剤学的組成物の薬剤学的有効量をこれを必要とする対象（subject）に投与する段階を含む前立腺肥大症の治療方法を提供する。

本発明の治療方法を適用するための対象（subject）は、前立腺肥大症発病が疑われるか、または診断を受けた患者を意味する。

本発明で、用語‘対象（subject）’とは、ヒト、マウス、ラット、ギニアピッグ、犬、猫、馬、牛、豚、猿、チンパンジー、ヒヒ（baboon）、及び赤毛猿などを含む哺乳類である。最も具体的には、本発明の対象（subject）はヒトである。

本発明の前立腺肥大症の治療方法において、前立腺肥大症の治療は、前述した本発明の他の一態様である薬剤学的組成物を対象（subject）に投与する方式により実施されるところ、前述した薬剤学的組成物に対する発明の詳細な説明の内容を本発明の治療方法の詳細な説明のためにそのまま援用し、重複する内容に対しては本明細書記載の過度な複雑性を避けるために省略する。

本発明の特徴及び利点を要約すると、次の通りである：
（ａ）本発明は、前立腺肥大症疾患の予防または治療用薬剤学的組成物を提供する。
（ｂ）本発明は、前立腺肥大症疾患の改善用食品組成物を提供する。
（ｃ）本発明は、前立腺肥大症疾患の予防または治療方法を提供する。
（ｄ）本発明の薬剤学的組成物を用いる場合、前立腺肥大症を副作用無しで効果的に予防または治療することができる。

テストステロンによる前立腺上皮細胞株（ＬＮＣａＰ）の増殖に対する複合生薬抽出物の抑制効果を示すグラフである。テストステロンによる前立腺上皮細胞株（ＬＮＣａＰ）の増殖に対する多様な濃度のエタノール水溶液で抽出した複合生薬抽出物の抑制効果を示すグラフである。テストステロンによる前立腺上皮細胞株（ＬＮＣａＰ）の増殖に対する複合生薬抽出物と単一生薬抽出物の抑制効果を示すグラフである。テストステロンで誘導した前立腺肥大症のラットモデルで複合生薬抽出物と単一生薬抽出物処理に従う体重変化を示すグラフである。テストステロンで誘導した前立腺肥大症のラットモデルで複合生薬抽出物と単一生薬抽出物処理に従う前立腺増殖抑制効果を示すグラフである。テストステロンで誘導した前立腺肥大症のラットモデルで複合生薬抽出物と単一生薬抽出物処理に従う前立腺増殖抑制効果に関する実験結果であって、摘出した前立腺組織内の腺胞（acinus）のサイズを測定した結果を示す。

以下、実施例を通じて本発明をより詳細に説明する。これら実施例は本発明をより具体的に説明するためのものであって、本発明の要旨に従って本発明の範囲がこれら実施例により制限されないということは当業界で通常の知識を有する者において自明である。

製造例１：多様な混合割合別複合生薬抽出物の製造
韓国の漢方薬流通専門業体である（株）ヒューマンハブから購入した洗浄及び乾燥された兎糸子（Cuscutae Semen）、蓮子肉（Nelumbinis Semen）、及び蒲公英（Taraxaci Herba）を実験に使用した。前記兎糸子、蓮子肉、及び蒲公英の生薬を表１に記載された重量比（ｗ／ｗ）で総２４０ｇになるように混合した後、１０倍の２５％エタノール水溶液を加えて常温で７２時間の間よく撹拌んさせて抽出した後、濾過して、これを５０−６５℃で減圧濃縮した後、凍結乾燥させて総７種類の複合生薬抽出物の粉末を収得しており、これらの歩留まりは表１の通りである。

製造例２：多様な抽出時間別複合生薬抽出物の製造
韓国の漢方薬流通専門業体である（株）ヒューマンハブから購入した洗浄及び乾燥された兎糸子（Cuscutae Semen）、蓮子肉（Nelumbinis Semen）、及び蒲公英（Taraxaci Herba）を実験に使用した。前記兎糸子、蓮子肉、及び蒲公英の生薬を製造例１−６の重量比（ｗ／ｗ）で総２４０ｇになるように混合した後、１０倍の２５％エタノール水溶液を加えて常温で０．５、３、８、２４、及び７２時間の間よく撹拌させて抽出した後、濾過して、これを５０−６５℃で減圧濃縮した後、凍結乾燥させて総５種類の複合生薬抽出物の粉末を収得しており、これらの歩留まりは表２の通りである。

製造例３：多様なエタノール水溶液濃度別複合生薬抽出物の製造
韓国の漢方薬流通専門業者である（株）ヒューマンハブから購入した洗浄及び乾燥された兎糸子（Cuscutae Semen）、蓮子肉（Nelumbinis Semen）及び蒲公英（Taraxaci Herba）を実験に使用した。前記兎糸子、蓮子肉、及び蒲公英の生薬を製造例１−６の重量比（ｗ／ｗ）で総２４０ｇになるように混合した後、１０倍の０、１０、２５、５０、７５、及び９５％エタノール水溶液を加えて常温で７２時間の間よく撹拌させて抽出した後、濾過して、これを５０−６５℃で減圧濃縮した後、凍結乾燥させて総６種類の複合生薬抽出物粉末を収得しており、これらの歩留まりは表３の通りである。

製造例４：熱水抽出を通じての複合生薬抽出物の製造
韓国の漢方薬流通専門業者である（株）ヒューマンハブから購入した洗浄及び乾燥された兎糸子（Cuscutae Semen）、蓮子肉（Nelumbinis Semen）、及び蒲公英（Taraxaci Herba）を実験に使用した。前記兎糸子、蓮子肉、及び蒲公英の生薬を製造例１−６の重量比（ｗ／ｗ）で各３０ｇ、３０ｇ、及び６０ｇを混合した後、１０倍の蒸溜水を加えて９５−１００℃の温度で３時間の間還流抽出した後、濾過して、これを５０−６５℃で減圧濃縮した後、凍結乾燥させて複合生薬抽出物の粉末を収得しており、その歩留まりは約１１．９０％であった。

比較例１：単一生薬抽出物の製造
洗浄及び乾燥された兎糸子（Cuscutae Semen）、蓮子肉（Nelumbinis Semen）、及び蒲公英（Taraxaci Herba）を購入して実験に使用した。各生薬の１８０ｇに１０倍の２５％エタノール水溶液を加えて、常温で７２時間の間よく撹拌させて抽出した後、濾過して、これを５０−６５℃で減圧濃縮した後、凍結乾燥させて総３種類の単一生薬抽出物の粉末を収得しており、これらの歩留まりは表４の通りである。

実験例１：テストステロンによる前立腺上皮細胞株の増殖に対する複合生薬抽出物の有効性確認
（実験方法）
人の前立腺癌から由来した前立腺上皮細胞株であるＬＮＣａＰ細胞をＲＰＭＩ培地（Ｇｉｂｃｏ、ＵＳＡ）を用いてウェル当たり１x１０^５細胞数で２４ウェル−プレートに準備し、一日間安定化させた。以後、無血清（serum−free）培地で２４時間の間培養した後、培養液除去後、テストステロン（Ｔｅｓ）２μＭと製造例１−６の複合生薬抽出物、製造例４で製造した複合生薬抽出物を各５０、１００、及び２００μｇ／ｍｌの濃度で処理した。７２時間後、細胞の増殖変化をＭＴＴ検査法により確認した。細胞増殖割合はＴｅｓ処理群に対比した割合で示した。

（結果）
熱水複合生薬抽出物（製造例４）と２５％エタノール水溶液の複合生薬抽出物（製造例１−６）の効果を比較した結果、２つ抽出物全て濃度依存的に前立腺細胞増殖抑制効果が表れた（図１）。

実験例２：テストステロンによる前立腺上皮細胞株の増殖に対する多様なエタノール水溶液濃度別複合生薬抽出物の有効性確認
（実験方法）
人の前立腺癌から由来した前立腺上皮細胞株であるＬＮＣａＰ細胞をＲＰＭＩ培地（Ｇｉｂｃｏ、ＵＳＡ）を用いてウェル当たり１x１０^５細胞数で２４ウェル−プレートに準備し、一日間安定化させた。以後、無血清（serum−free）培地で２４時間の間培養した後、培養液除去後、テストステロン（Ｔｅｓ）２μＭと製造例３で製造した６種類の複合生薬抽出物を２００μｇ／ｍｌの濃度で処理した。７２時間後、細胞の増殖変化をＭＴＴ検査法により確認した。細胞増殖割合はＴｅｓ処理群に対比した割合で示した。

（結果）
テストステロンによる前立腺上皮細胞株の増殖に対する多様なエタノール水溶液濃度別複合生薬抽出物が及ぼす影響は下記の表５に示した。

エタノール水溶液濃度に従う複合生薬抽出物の効果を比較した結果、製造例３−１で製造例３−６全てＴｅｓ処理群に対比して低い細胞増殖割合を示して、多様なエタノール水溶液濃度別複合生薬抽出物の優れる前立腺細胞増殖抑制効果を確認することができた（図２）。

実験例３：テストステロンによる前立腺上皮細胞株の増殖に対する単一生薬抽出物と複合生薬抽出物の有効性比較
（実験方法）
人の前立腺癌から由来した前立腺上皮細胞株のＬＮＣａＰ細胞をＲＰＭＩ培地（Ｇｉｂｃｏ、ＵＳＡ）を用いてウェル当たり１x１０^５細胞数で２４ウェル−プレートに準備し、一日間安定化させた。以後、無血清（serum−free）培地で２４時間の間培養した後、培養液除去後、テストステロン２μＭと製造例１−６の複合生薬抽出物または比較例１で製造した３種類の単一生薬抽出物を２００μｇ／ｍｌの濃度で処理した。７２時間後、細胞の増殖変化をＭＴＴ検査法により確認した。細胞増殖割合はＴｅｓ処理群に対比した割合で示した。

（結果）
テストステロンによる前立腺上皮細胞株の増殖に単一生薬抽出物と複合生薬抽出物が及ぼす影響は下記の表６に示した。

前立腺上皮細胞株にテストステロン処理時の細胞増殖が約６２．５％増加した。テストステロン処理と共に複合生薬抽出物である製造例１−６を処理した結果、約５５．１％の細胞増殖抑制効果を示した。一方、各単一生薬抽出物である比較例１−１（兎糸子）、比較例１−２（蓮子肉）、及び比較例１−３（蒲公英）を処理時、各々約３３．３％、２２．０％、及び１１．９％の細胞増殖抑制効果を示して、同一濃度で複合生薬抽出物の効果が単一生薬抽出物に比べて顕著であることを確認することができた（図３）。

実験例４：テストステロンで誘導した前立腺肥大症のラットモデルでの単一生薬抽出物と複合生薬抽出物の前立腺増殖抑制効果の比較
（実験方法）
９週齢（体重３５０ｇ以下）の雄性ＳＤネズミを一週間以上純化飼育した後、体重を基準に、（１）正常群、（２）前立腺肥大症誘導及び蒸溜水投与群（陰性対照群）、（３）前立腺肥大症誘導及び複合生薬抽出物（製造例１−６）投与群、（４）前立腺肥大症誘導及び兎糸子単一生薬抽出物（比較例１−１）投与群、（５）前立腺肥大症誘導及び蓮子肉単一生薬抽出物（比較例１−２）投与群、（６）前立腺肥大症誘導及び蒲公英単一生薬抽出物（比較例１−３）投与群、（７）前立腺肥大症誘導及びフィナステライド（Finasteride）投与群（陽性対照群）に分離した。前立腺肥大症を誘導するためにテストステロン（Testosterone、綿種オイルに溶かして使用）を３ｍｇ／ｋｇの容量で１回／３日、総１０回皮下注射（subcutaneous injection）した。正常群の場合、同量の綿種オイルを皮下注射した。製造例１−６の複合生薬抽出物及び比較例１の単一生薬抽出物は蒸溜水に溶かして３００ｍｇ／ｋｇの容量で１回／日、３０日間経口投与した。フィナステライド投与群（シグマ、０．２％ tween ８０に溶かして使用）は１０ｍｇ／ｋｇの容量で１回／１日、３０日間経口投与した。陰性対照群は蒸溜水のみを経口投与した。実験開始日から一週間間隔で総５回体重を測定し、最後の投薬及び処理が終わった翌日にラットを二酸化炭素ガスで犠牲させた後、前立腺組織を摘出して重さを測定した。この測定値から以下の数学式を用いて前立腺増殖抑制効果（％）を示した。

［数式］
前立腺増殖抑制効果（％）＝１００−｛（複合生薬抽出物群／単一抽出物または陽性対照群前立腺重さ−正常群前立腺重さ）＊１００／（陰性対照群前立腺重さ−正常群前立腺重さ）｝

また、摘出した前立腺組織を１０％中性ホルマリンに固定してＨ＆Ｅ染色（hematoxylin and eosin staining）を遂行した。染色した組織のスライドを光学顕微鏡を用いて観察、撮影して前立腺内の腺胞（acinus）のサイズを測定した。その後、各実験群の腺胞のサイズ減少程度を正常群の腺胞のサイズに対比した割合で示した。

（結果）
テストステロンで前立腺肥大症を誘導した結果、正常群の場合、持続的に体重が増加するに反して、テストステロンを処理した群では体重増加が抑制された。しかしながら、陰性対照群、複合生薬抽出物群（製造例１−６）、単一生薬抽出物群（比較例１−１、比較例１−２、及び比較例１−３）、及び陽性対照群の間には有意味な体重の差は観察できなかった（図４）。テストステロンによる前立腺増殖に及ぼす複合生薬抽出物群（製造例１−６）、単一生薬抽出物群（比較例１−１、比較例１−２、及び比較例１−３）、及び陽性対照群の効果は下記の表７に示した。

テストステロンで前立腺肥大症を誘導した結果、ラットの前立腺重さは正常群対比約３０倍増加した。しかしながら、複合生薬抽出物群の場合、テストステロン誘導群（陰性対照群）に比べて３５％の前立腺重さ減少効果を示して統計的に有意な差があることが分かった。一方、各単一生薬抽出物である比較例１−１（兎糸子）、比較例１−２（蓮子肉）、及び比較例１−３（蒲公英）投与群の場合、テストステロン誘導群（陰性対照群）に比べて各々約２０％、２１％、及び５％の前立腺増殖抑制効果を示したが、統計的に有意な差は確認できなかった（図５）。これから複合生薬抽出物の効果が単一生薬抽出物に比べて顕著に優れることを確認することができた。

前立腺胞サイズ（size of acini）に及ぼす複合生薬抽出物群（製造例１−６）、単一生薬抽出物群（比較例１−１、比較例１−２、及び比較例１−３）及び陽性対照群の効果は、下記の表８に示した。

陰性対照群の腺胞のサイズは正常群対比４．８倍増加しており、複合生薬抽出物の場合、このような腺胞サイズを４４％減少させる効果を示しており、これは統計的に有意味な数値であることを確認した。また、単一生薬抽出物（比較例１−１、比較例１−２、及び比較例１−３）の場合、各々２２、３０、０％で、複合生薬抽出物の優れる効果に及ぼさないことと確認された。これから複合生薬抽出物の効果が単一生薬抽出物に比べて顕著に優れることを確認することができた（図６）。

Claims

（ａ）有効成分としての兎糸子、蓮子肉、及び蒲公英の複合抽出物；及び
（ｂ）薬剤学的に許容される担体を含む前立腺肥大症疾患の予防または治療用薬剤学的組成物。
前記兎糸子、蓮子肉、及び蒲公英の配合重量比（ｗ／ｗ）は１〜４：１〜４：１〜４である、請求項１に記載の組成物。
前記抽出物は、水またはエタノール抽出物である、請求項１に記載の組成物。
前記エタノールは、０％超過５０％以下のエタノールである、請求項３に記載の組成物。
前記エタノールは、２５％エタノールである、請求項３に記載の組成物。
兎糸子、蓮子肉、及び蒲公英の複合抽出物を有効成分に含む前立腺肥大症疾患の改善用食品組成物。
前記兎糸子、蓮子肉、及び蒲公英の配合重量比（ｗ／ｗ）は１〜４：１〜４：１〜４である、請求項６に記載の組成物。