KR102148413B1 - 이종 폴리펩티드를 포함하는 ＣｙａＡ에 기초한 키메라 단백질 및 면역 반응의 유도에 있어서의 그의 용도 - Google Patents

이종 폴리펩티드를 포함하는 ＣｙａＡ에 기초한 키메라 단백질 및 면역 반응의 유도에 있어서의 그의 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR102148413B1
KR102148413B1 KR1020157004541A KR20157004541A KR102148413B1 KR 102148413 B1 KR102148413 B1 KR 102148413B1 KR 1020157004541 A KR1020157004541 A KR 1020157004541A KR 20157004541 A KR20157004541 A KR 20157004541A KR 102148413 B1 KR102148413 B1 KR 102148413B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
seq
protein
fragment
residues
polynucleotide
Prior art date
Application number
KR1020157004541A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20150032341A (ko
Inventor
욜랑드 미세리
마이클 에스퀘르
에틴느 졸리
Original Assignee
장띠셀
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 장띠셀 filed Critical 장띠셀
Publication of KR20150032341A publication Critical patent/KR20150032341A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102148413B1 publication Critical patent/KR102148413B1/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/88—Lyases (4.)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/235—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Bordetella (G)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y406/00—Phosphorus-oxygen lyases (4.6)
    • C12Y406/01—Phosphorus-oxygen lyases (4.6.1)
    • C12Y406/01001—Aodenylate cyclase (4.6.1.1)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
    • A61K2039/572—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2 cytotoxic response
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/58—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation
    • A61K2039/585—Medicinal preparations containing antigens or antibodies raising an immune response against a target which is not the antigen used for immunisation wherein the target is cancer
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/40—Fusion polypeptide containing a tag for immunodetection, or an epitope for immunisation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/20011—Papillomaviridae
    • C12N2710/20022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/20011—Papillomaviridae
    • C12N2710/20034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

본 발명은 N-말단에서 C-말단으로 (a) 보르데텔라(Bordetella) CyaA 단백질의 N-말단 부분, (b) 이종 폴리펩티드, 및 (c) 보르데텔라 CyaA 단백질의 C-말단 부분을 포함하거나, 이들로 이루어지는 키메라 단백질에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 상기 키메라 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 보르데텔라 CyaA의 결실된 형태를 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 관한 것이다. 본 발명의 하나 이상의 키메라 단백질(들)을 포함하는 조성물 및 상기 조성물의 예방 및/또는 치료 용도 또한 본 발명의 일부분이다.

Description

이종 폴리펩티드를 포함하는 ＣｙａＡ에 기초한 키메라 단백질 및 면역 반응의 유도에 있어서의 그의 용도{CYAA-BASED CHIMERIC PROTEINS COMPRISING A HETEROLOGOUS POLYPEPTIDE AND THEIR USES IN THE INDUCTION OF IMMUNE RESPONSES}
본 발명은 N-말단에서 C-말단으로 (a) 보르데텔라(Bordetella) CyaA 단백질의 N-말단 부분, (b) 이종 폴리펩티드, 및 (c) 보르데텔라 CyaA 단백질의 C-말단 부분을 포함하거나, 이들로 이루어지는 키메라 단백질에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 상기 키메라 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 보르데텔라 CyaA의 결실된 형태를 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 관한 것이다. 본 발명의 하나 이상의 키메라 단백질(들)을 포함하는 조성물 및 상기 조성물의 예방 및/또는 치료 용도 또한 본 발명의 일부분이다.
보르데텔라 형, 특히 보르데텔라 페르투시스(Bordetella pertussis)의 아데닐레이트 사이클라아제(CyaA)는 항원과 같은 폴리펩티드를 항원 제시 세포(APC)의 세포 기질(cytosol)로 효율적으로 전달할 수 있는 재조합 벡터로서 광범위하게 개시되어 왔다([1], [2], [3]). 또한, 재조합 CyaA는 종양을 가진 마우스를 효과적으로 치료하는데 사용되었다([4], [5], [6]).
여러 저자는 CyaA(벡터로 사용된)에 의한 폴리펩티드 전달, 특히 항원 전달 효율이 삽입된 폴리펩티드(항원)의 정전하 및 그의 형태에 따라 양성적으로 음성적으로 영향을 받을 수 있다는 것을 강조하였다. 1998년에, 카리모바 등(Karimova & al)은 CyaA에 삽입된 CD8+ T-세포 폴리펩티드 에피토프의 항원 제시 세포까지 및 세포 안으로의 전달이 삽입된 에피토프의 정전하에 의존적이라는 것[7]; OVA 에피토프를 포함하는 재조합 CyaA는 APC 내로 이동하여 생체 내 CTL 반응을 유도할 수 있었던 반면, 4개의 글루타민 잔기가 융합된 OVA 에피토프를 갖는 동일한 구조물은 이동할 수 없었고, 생체 내 세포독성 T-세포 림프구(CTL) 반응을 검출할 수 있을 정도로 유도하지 않았다는 것을 개시하였다. 2012년에, 홀루보바 등(Holubova et al.)은 CyaA에 기초한의 여러 가지 구조물인 OVA 에피토프 SIINFEKL을 포함하는 N-말단 내 결실된 CyaA 단백질, 또는 N-말단 도메인이 절단되고(truncated) 상이한 부위들에 삽입된 여러 에피토프를 포함하는 CyaA 단백질을 개시하였다[25]. 홀루보바 등은 그들의 실험이 합성의 큰 CTL 폴리에피토프로 대체된 전체 AC 도메인을 갖는 CyaA에 기초한 항원 전달체를 제작하기 위한 개념을 증명한다고 결론내렸다.
2001년에, 그미로 등(Gmira & al.)은 CyaA 촉매 도메인 내에 삽입된 외인성 폴리펩티드 또는 항원을 갖는 재조합 CyaA의 제작을 용이하게 하는 새로운 벡터 CyaA를 개발하였다[8]. 이들 변형은 다음과 같다.
- 새로운 고유 제한 부위를 갖는 다중클로닝 부위 서열을 코돈 224 하류에 삽입;
- 코돈 225 내지 234의 결실; 및
- 코돈 236, 238 및 239의 변경; 이들 변형이 도입되어 국소 정전하(산성 감소)를 증가시켰으며, 이것은 제자리(in situ) APC의 세포막을 가로질러 CyaA 항원 혼성 단백질을 이동시키는 데 중요한 것으로 앞서 밝혀졌다.
변형된 CyaA는 야생형 CyaA와 유사한 침습성을 갖는다.
저자들은 87 내지 206개 잔기 크기를 가지며, -4 내지 +14의 정전하를 갖는 5가지 항원을 시험하여, 산성 값을 갖는 항원들이 이동 효율을 잃는다는 것을 보였으며, 이는 카리모바 등의 앞선 결과를 뒷받침해준다. 또한, 그들은 내부 디설파이드 브리지 또는 복잡한 구조의 항원을 갖는 CyaA를 시험하였다. 이들은 모두 표적 세포로 이동할 수 없었으며, 이는 CyaA의 촉매 도메인에 삽입된 폴리펩티드가 이동되기 위해서는 풀려(unfolding)야만 한다는 이론을 지지해준다.
참고 rCyaA 항원 이름/기원 항원 크기
(aa) 		항원
정전하
(R/K-D/E) 		활성
(+ 또는 -)
그미로 등
( Gmira et al., 2001) 		CyaA 없음 NA NA +
CyaA-Neuro 소 뉴로칼신 δ 192 -6 -
CyaA-Rest 아스퍼질러스 레스트릭투스
( Aspergillus restrictus)
리스트릭토신 		148 5 +
CyaA-DHFR 마우스 디히드로폴레이트
리덕타아제		 187 7 +
CyaA-Tat Tat HIV 87 14 +
CyaA-Nef Nef HIV 206 -4 -
카리모바 등
( Karimova et al., 1998) 		CyaA-Ova21 Ova I형 에피토프 8 0 +
CyaA-Ova21-4E Ova I형 에피토프 +
4 글루타민산		 12 -4 -
문헌 [7] 및 [8]에서 발췌. 산성 전하를 갖는 삽입물은 APC의 세포 기질로 이동되지 않는다. 산성 전하는 Lys 및 Arg 잔기 개수에서 Asp 및 Glu 잔기 개수를 빼서 계산한다.
종양 퇴행 분석(tumor regression assay)의 경우에 사용되는 항원은 짧은 크기(OVA는 8개 잔기 길이)이거나[4] 그들의 2차 구조가 항원 세그먼트의 내부 재배열에 의해 파괴되며 최대 크기 103개 잔기를 갖는다[5].
상기 연구들로부터, CyaA 벡터에 의한 벡터 작용 효율을 향상시키기 위한 하기 결론을 내렸다:
- CyaA에 삽입되는 폴리펩티드 내에 산성 영역이 포함되어 것은 피해야 한다; 그리고
- 상기 삽입물에 2차 및 3차 구조가 포함되는 것은 피해야 한다. 왜냐하면, 이러한 구조는 폴리펩티드가 삽입되는 효소 아데닐레이트 사이클라아제(AC) 도메인의 적합한 내재화를 방해하기 때문이다.
상기 결론을 고려하여, 두 가지 재조합 CyaA, 즉 HPV16 E7 항원을 포함하는 것과 HPV18 E7 항원을 포함하는 것을 제작하였다. 또한, HPV16 및 HPV18 E7 항원이 함께 삽입된 2가 재조합 CyaA도 제작하였다(특허 EP1576967; 프레빌 등(Preville et al.)). 그러나, 2개보다 많은 HPV E7 단백질이 동일한 CyaA 벡터에 삽입된 재조합 CyaA를 이용한 분석은 보고되지 않았다.
따라서, 프레빌 등은 HPV16 형의 E7 폴리펩티드 또는 그의 변이체가 삽입되어진 세가지 재조합 CyaA 벡터를 개시한다.
- 전장의 E7 단백질을 포함하는 CyaA-E7full 벡터
- aa 30 내지 42의 산성 도메인이 결실된 E7 단편을 포함하는 CyaA-E7△30-42 벡터,
- E7에 존재하는 마우스 H-2Db-제한된 T 세포 에피토프를 포함하는 CyaA-E749-57 벡터.
상기 재조합 CyaA 벡터는 마우스를 면역화하고 E7-특이적 CTL 반응을 검출하는 데 사용하였다. 마우스 면역화 후 면역 반응을 측정하기 위하여, CTL 크롬 방출 분석법을 실시하였다. 생체 내 동물 실험에서, CyaA-E7△30-42 및 CyaA-E7full는 CyaA-E749-57 와 비교하여 가장 효율적인 CTL 면역 반응을 나타냈다.
또한, 상기 재조합 CyaA 벡터가 종양 퇴행을 유도하는 능력을 평가하였다. CyaA- E749-57 및 CyaA-E7full 에 의해 부여된 종양 퇴행률이 현저하게 구별될 수는 없지만, CyaA-E7△30-42는 종양 퇴행 및 성장 억제 면에서 확실히 우수하였다. 따라서, C57BL/6 마우스에서 인식되는 것으로 밝혀진 단일 CTL 에피토프가 효율적이라는 것이 입증되었으나 가장 최적의 면역 반응을 주지는 못하였다.
이어서, 면역 반응의 지속성을 검사하였다. 3개월 후에 생존한 일부 마우스의 비장세포는 E7 항원을 발현하는 TC-1 세포를 용해시키는 능력에 대해 검사하였고, 생존한 나머지 동물은 백신접종 후 100일에 TC-1 세포로 재접종하였다. CyaA-E7△30-42 로 백신접종된 동물은 높은 수준의 방어를 나타내었다. CyaA-E749- 57 로 백신접종된 동물의 40% 미만이 방어되었지만, CyaA-E7△30- 42 및 CyaA-E7full 로 백신접종된 동물의 90 내지 100%가 생존하였다.
상기 연구로부터 다음 교시를 얻을 수 있다:
- HPV16 및/또는 HPV18 E7 단백질을 운반하는 CyaA 벡터는 C57BL/6 마우스에서 면역 반응을 유도한다;
- CD8+ T 세포 에피토프만을 갖는 E749-57 에피토프와 비교하여, CD8+ 및 CD4+ T 세포 에피토프 모두를 갖는 항원으로 완전한 반응을 얻는다;
- CyaA-E7full 또는 CyaA-E749-57로 처리된 마우스와 비교하여, E7 단백질에서 잔기 30 내지 42의 산성 영역이 결실된 CyaA-E7△30-42 벡터로 처리된 마우스에서 우수한 효율을 얻는다;
- 상기 벡터로 얻어진 면역 반응은 종양 병변의 퇴행을 유도할 수 있다;
- 처리된 무종양 마우스에서 TC-1 세포로 새로운 접종이 거부되었기 때문에 오래 지속적인 반응이 얻어진다; 그리고
- 2가 치료법을 개발하기 위해 두 가지 재조합 CyaA의 동시 주입이 가능하며, 각 항원은 그의 에피토프 각각에 반응을 유지한다.
따라서, 선행 기술에서, 산성 아미노산 스트레치가 포함된 특정 폴리펩티드 또는 항원, 및 전체적으로 음의 정전하를 띠는 폴리펩티드 또는 항원은 백신접종된 동물에서 이들 폴리펩티드를 APC 세포막을 가로질러 이동시키는 CyaA 벡터의 효율을 변화시킨다는 것을 보였다. 이로 인해 상기 항원에 대해 약한 세포 면역 반응을 일으키거나 방어 세포 면역 반응을 일으키지 못한다.
발명자들은 이러한 산성 아미노산 서열이 방어 세포 면역을 위해 요구되는 중요한 CD4+ 에피토프 및/또는 CD8+ 에피토프를 포함할 수 있기 때문에, 이것이 약물 후보 설계를 위한 문제점으로 간주될 수 있다고 생각한다.
따라서, 산성 아미노산 스트레치를 갖는 폴리펩티드 및 항원 및 전체적으로 음의 정전하를 띠는 폴리펩티드 또는 항원에 대하여, 특히 종양 퇴행 및 종양 예방에 있어, 강력하고 오래 지속되는 세포의 방어 면역 반응을 유발하기 위해 사용될 수 있는 면역원성 구조를 갖는 향상된 벡터가 여전히 요구되고 있다.
도 1: (A) CyaA-HPV16E7△30-42에 적절한 제한 부위 및 삽입된 서열이 나타내어진 pKTRACE5-HPV16E7△30-42의 개략적인 지도; (B) CyaA-HPV18E7△32-42에 적절한 제한 부위 및 삽입된 서열이 나타내어진 pKTRACE5-HPV18E7△32-42의 개략적인 지도
도 2: gtCyaA 단백질 및 gtCyaA 변이체의 설계. aa(잔기) 1 내지 400, 촉매 도메인(AC); aa 401 내지 1706, 용혈 도메인. 촉매 도메인 내에 세 개의 투명한 박스는 CyaA 활성에 필수적인 세 개의 영역을 나타낸다([15], [16], [1]): ATP와의 상호작용에 관련된 도메인 I(aa 54-77), Mg2+-ATP와의 상호작용에 관련된 도메인 II(aa 184-198) 및 칼모듈린(CaM)과의 상호작용에 관련된 도메인 III(aa 287-318). gtCyaAd93은 93개 aa(228-320)가 결실된 gtCyaA 서열에 대응한다. gtCyaAd203은 203개 aa(184 내지 386)가 결실된 gtCyaA 서열에 대응한다.
도 3: (A) IPTG 유도성 프로모터 하에 gtCyaAd93-pep216 폴리뉴클레오티드 및 cyaC 최적화 유전자를 포함하는 pGTPc608 벡터의 개략적인 지도; (B) IPTG 유도성 프로모터 하에 gtCyaAd203-pep216 폴리뉴클레오티드 및 cyaC 최적화 유전자를 포함하는 pGTPc608 벡터의 개략적인 지도.
도 4: CyaAd203-pep105 플라스미드 그래픽 지도. Pep105는 EcoRI과 XmaI 제한 부위 사이에 클로닝되었다.
도 5: 플라시보, 프로서빅스(Procervix) 또는 CyaAd203-PEP105로 면역화 후 7일에 측정된 HPV16 E749-57, HPV18 E7AS43 -49 및 OVA257 -264의 빈도 및 특이적 CD8+ T 림프구의 빈도, 및 HPV16 E7(#116-2/3) 및 HPV18 E7(#171-1/2/3) 특이적 T 림프구의 빈도. 전체 비장세포 백 만개 당 사건의 수를 나타낸다. 전체 비장세포는 왼쪽에서 오른쪽으로 배지(대조군), MHC I형 제한된 펩티드 HPV16 E749-57, HPV18 E7AS43 -49, OVA257-264, #116-2/3 펩티드 뱅크 및 　#171-1/2/3 펩티드 뱅크로 37℃, 5% CO2에서 20 시간 동안 재자극하였다.
도 6: 플라시보, 프로서빅스 또는 CyaAd203-PEP105로 면역화 후 7일에 측정된 LCMV GP33-41, OVA323 -339, MOG35 -55 및 MAGEA3 특이적 T 림프구의 빈도; 전체 비장세포 백 만개 당 사건의 수를 나타낸다. 전체 비장세포는 왼쪽에서 오른쪽으로 배지(대조군), LCMV GP33-41, OVA323 - 339 , MOG35 -55 　펩티드, His태그 MAGE-A3 단백질로 재자극하거나, B16 종양 세포주 B16-GFP 이어서 APC로서 사용된 B16-MAGEA3-GFP로 재자극하였다. 모두 37℃, 5% CO2에서 20시간 동안 재자극하였다.
도 7: (A) HPV16, 18 및 45 E7 단백질 서열의 정렬; 검정 박스: pRB 결합 모티프; 회색 박스: 아연 핑거 루프(finger loop)와 관련된 시스테인; 검정 화살표는 산성 영역을 강조 표시한다 (B) HPV31, 33, 52 및 58 단백질 서열의 정렬; 검정 박스: LXCXE 모티프; 초록 박스: 아연 핑거 루프와 관련된 시스테인; 점선 박스: HPV52 E7 서열의 경우, 자가 면역 에피토프의 위치.
도 8: (A) 3가 후보 백신 항원 (B) 4가 후보 백신의 재배열된(reshuffled) 항원 서열(N-ter: E7 단백질의 N-말단 부분　; C-ter: E7 단백질의 C-말단 부분).
도 9: IPTG로 3시간 유도 후 단백질 발현 프로파일(I0: 유도 전; I3: 유도 후)
도 10: 면역화 후 7일에 측정된 HPV16 E749-57 및 HPV18 E7AS43 -49 특이적 CD8+ T 림프구의 빈도; 전체 비장세포는 MHC I형-제한된 펩티드로 재자극하였다. 결과는 전체 비장세포 백 만개 당 IFN-γ를 분비한 세포 수로 나타낸다.
도 11: 면역화 후 7일에 측정된 HPV45 E7 특이적 IFN-γ 분비 T 림프구의 빈도; 전체 비장세포는 HPV45 E7 전체 펩티드 서열을 포함시키는 15-mers 오버랩핑 펩티드(서브풀 1: #218-1, 서브풀 2: #218-2, 서브풀 3: #218-3)로 재자극하였다. 결과는 전체 비장세포 백 만개 당 IFN-γ를 분비한 세포 수로 나타낸다.
도 12: 3가 후보를 이용한 생체 내 살해 분석(Btpr_114, Btpr115 & BTpr_117); 왼쪽 패널: HPV18 E7 펩티드 라이브러리 #171-1 및 #171-2로 로딩된(loaded) 비장세포의 생체 내 살해율; 오른쪽 패널: HPV45 E7 펩티드 라이브러리 #218-3로 로딩된 비장세포의 생체 내 살해율.
도 13: HPV16 E7 항원을 포함하는 폴리-ICLC-애쥬번티드(adjuvanted) CyaA-후보 백신에 의한 치료 백신접종은 TC-1 유도된 고형성 종양 제거를 유발하였다; (A) 백신접종 계획: 0일에 모든 마우스 오른쪽 옆구리에 TC-1 종양 세포를 접종하였다; 이들은 11일에 백신 처리하였다. (B) 60일까지 종양 성장의 모니터링.
도 14: TC-1 종양 세포주를 제거한 마우스의 LL2-HPV18 E7 세포주 또는 LL2-GFP 세포주의 성장에 대한 예방적 방어 (A) 백신 접종 계획: 65일에 TC-1 종양을 제거한 마우스를 2개의 서브군으로 나누고 LL2-HPV18 E7 세포주 또는 대조군 LLP-GFP 세포주로 접종하였다. (B) 110일까지 종양 성장의 모니터링.
도 15: 면역화 후 7일에 측정된 HPV16 E7, HPV18 E7 및 HPV52 E7 특이적 T 림프구의 빈도. 전체 비장세포는 HPV16, HPV18 및 HPV52 E7 단백질 서열을 포함시키는 15-mers 오버랩핑 펩티드로 재자극하였다. 펩티드의 서브풀은 정사각형으로 표시하였다. 결과는 전체 비장세포 백 만개 당 IFN-γ 스폿 형성 세포(sfc)의 수로 나타내었다. HPV18 E7 sfc는 너무 많아 셀 수 없었다(TNTC).
도 16 (A, B, C 및 D): 면역화 후 7일에 측정된 IFN-γ 분비 HPV16 E7, HPV18 E7, HPV33 E7 및 HPV52 E7 특이적 T 림프구의 빈도. 전체 비장세포는 HPV16, HPV18, HPV33 및 HPV52 E7 전체 펩티드 서열을 포함시키는 15-mers 오버랩핑 펩티드(각 펩티드 뱅크는 E7 단백질의 N-말단에서 C-말단까지 서브풀로 세분된다(히스토그램 범례에 표시된 바와 같이))로 재자극하였다. 결과는 전체 비장세포 백만 개 당 IFN-γ 스폿 형성 세포(sfc)의 수로 나타내었다.
도 17 (A 및 B): 7가 후보 백신으로 유도된, HPV16 E7 펩티드 라이브러리(도 17-A) 또는 HPV18 E7 펩티드 라이브러리(도 17-B)로 각각 로딩된 세포의 E7 특이적 살해.
본 발명자들은 새로운 CyaA 벡터로서, 야생형 CyaA의 아데닐레이트 사이클라아제(AC) 도메인 내에 결실되고, 거대한 크기(441개까지의 아미노산 잔기로 예시되나 이에 제한되지는 않음) 및/또는 산성 전하(-46까지)를 나타내는 매우 높은 음전하를 띠는 항원이 삽입된 CyaA 벡터를 개발하였다. 상기 구조물의 특이적 CD8+ 및 CD4+ T-세포 반응 및 세포독성을 유도하는 능력뿐 아니라 종양 거부를 유도하는 능력을 시험하였다. 놀랍게도, 상기 새로운 CyaA 벡터는 높은 음전하를 갖는 항원을 표적 세포로 운반을 가능하게 한다는 것을 보여 주었다. 게다가, 산성 도메인을 갖는 항원은 상기 새로운 벡터에 삽입되어 질 때, 엄격한 조건하에서 수행되는 세포독성 분석에서 상기 산성 도메인이 제거된 동일한 항원에 비해 더 효율적이었다.
본 발명은 CyaA 유래 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드로서, 상기 CyaA 유래 단백질은 1) 서열 번호 2에 개시된 보르데텔라 페르투시스 CyaA 단백질 단편으로서, 상기 단편 서열이 서열 번호 2의 첫 번째 잔기로 시작하여 서열 번호 2의 위치 183 내지 위치 227에 위치한 잔기로 끝나는(즉, 위치 182 와 228 사이) 것인 단편과 융합된 2) 서열 번호 2에 개시된 보르데텔라 페르투시스 CyaA 단백질 단편으로서, 상기 단편 서열이 서열 번호 2의 위치 321 내지 위치 387에 위치한 잔기로 시작하고(즉, 위치 320과 388 사이) 서열 번호 2의 마지막 잔기로 끝나는 것인 단편을 포함하거나 이들로 이루어지는 것인 폴리뉴클레오티드에 관한 것이다.
서열 번호 2는 보르데텔라 페르투시스의 야생형 CyaA 단백질의 아미노산 서열을 나타낸다. 서열 번호 2에 개시된 CyaA를 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 특정 실시양태는 서열 번호 1에 개시되어 있다. 서열 번호 2에 개시된 CyaA를 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 또 다른 특정 실시양태는 사일런트 뉴클레오티드 돌연변이에 의해, 즉, 서열 번호 2의 아미노산에 변화를 가져오지 않는 변형에 의해, 서열 번호 1의 변형된 형태이다. 서열 번호 1의 변형된 특정 형태는 서열 번호 69에 개시된 이. 콜라이(E. coli) 발현에 최적화된 서열이다. 서열 번호 69는 본 발명의 일부분이다. 본 발명 내에, 본 발명의 CyaA 유래 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 서열 번호 2를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 코딩하거나 포함하지 않는다. 게다가, 본 발명의 CyaA 유래 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 서열 번호 1을 포함하거나, 이로 이루어지지 않는다.
본 발명의 상기 폴리뉴클레오티드로부터 얻을 수 있는 결과로 생성된 본 발명의 CyaA 유래 단백질은 서로 융합되거나 재조합된 동일한 보르데텔라 CyaA 단백질의 두 개의 단편을 포함하거나 이들로 이루어진다. "단편"은 야생형 보르데텔라 CyaA 단백질의 서열에서 발견되는 연속된 아미노산 잔기의 스트레치 또는 연쇄(concatenation)를 의미한다.
첫 번째 단편(CyaA 유래 폴리펩티드의 N-말단 부분)은 서열 번호 2의 첫 번째 잔기로 시작하여 서열 번호 2의 위치 183 내지 위치 227에 위치한 잔기로 끝난다.
상기 첫 번째 단편은 183 내지 227개 잔기 범위의 크기, 즉, 183개 잔기 이상 227개 잔기 이하의 길이이다. 특정 실시양태에서, 상기 단편은 183개 이상, 190개 이상, 200개 이상, 210개 이상, 또는 220개 이상이다. 특정 실시양태에서, 상기 첫 번째 단편의 크기는 183개 잔기 또는 227개 잔기이다.
따라서, 상기 단편은 서열 번호 2의 첫 번째 잔기로 시작하여 서열 번호 2의 잔기 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226 및 227로 이루어지는 군으로부터 선택된 잔기로 끝난다.
다시 말해서, 상기 첫 번째 단편은 서열 번호 2의 잔기 1-183, 1-184, 1-185, 1-186, 1-187, 1-188, 1-189, 1-190, 1-191, 1-192, 1-193, 1-194, 1-195, 1-196, 1-197, 1-198, 1-199, 1-200, 1-201, 1-202, 1-203, 1-204, 1-205, 1-206, 1-207, 1-208, 1-209, 1-210, 1-211, 1-212, 1-213, 1-214, 1-215, 1-216, 1-217, 1-218, 1-219, 1-220, 1-221, 1-222, 1-223, 1-224, 1-225, 1-226 및 1-227로 이루어지는 군으로부터 선택된 서열을 포함하거나 이로 이루어진다.
특정 실시양태에서, 상기 첫 번째 단편은 서열 번호 2의 잔기 1 내지 227 또는 서열 번호 2의 잔기 1 내지 183을 포함하거나 이들로 이루어진다.
특정 실시양태에서, 상기 첫 번째 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드는, 상기 뉴클레오티드 단편이 3의 배수라서, 서열 번호 1 또는 서열 번호 69의 첫 번째 뉴클레오티드로 시작하고, 서열 번호 1 또는 서열 번호 69의 위치 549에서 위치 681에 위치하는 뉴클레오티드로 끝난다. 따라서, 상기 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 서열 번호 1 또는 서열 번호 69의 잔기 1-549, 1-552, 1-555, 1-558, 1-561, 1-564, 1-567, 1-570, 1-573, 1-576, 1-579, 1-582, 1-585, 1-588, 1-591, 1-594, 1-597, 1-600, 1-603, 1-606, 1-609, 1-612, 1-615, 1-618, 1-621, 1-624, 1-627, 1-630, 1-633, 1-636, 1-639, 1-642, 1-645, 1-648, 1-651, 1-654, 1-657, 1-660, 1-663, 1- 666, 1-669, 1-672, 1-675, 1-678 및 1-681로 이루어지는 군으로부터 선택된 서열을 포함하거나 이로 이루어진다.
두 번째 단편(CyaA 유래 폴리펩티드의 C-말단 부분)은 서열 번호 2의 위치 321 내지 위치 387에 위치한 잔기로 시작하여 서열 번호 2의 마지막 잔기로 끝난다.
상기 두 번째 단편은 1320 내지 1386개 잔기 범위의 크기, 즉, 1320개 잔기 이상 1386개 잔기 이하의 길이이다. 특정 실시양태에서, 상기 단편은 1320개 이상, 1330개 이상, 1340개 이상, 1350개 이상, 1360개 이상, 1370개 이상, 또는 1380개 이상이다. 특정 실시양태에서, 상기 두 번째 단편의 크기는 1320개 잔기 또는 1386개 잔기이다.
따라서, 상기 두 번째 단편은 서열 번호 2의 잔기 321, 322, 323, 324, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 335, 336, 337, 338, 339, 340, 341, 342, 343, 344, 345, 346, 347, 348, 349, 350, 351, 352, 353, 354, 355, 356, 357, 358, 359, 360, 361, 362, 363, 364, 365, 366, 367, 368, 369, 370, 371, 372, 373, 374, 375, 376, 377, 378, 379, 380, 381, 382, 383, 384, 385, 386 및 387로 이루어지는 군으로부터 선택된 잔기로 시작하여 서열 번호 2의 마지막 잔기(즉, 잔기 1706)로 끝난다.
다시 말해서, 두 번째 단편은 서열 번호 2의 잔기 321-1706, 322-1706, 323-1706, 324-1706, 325-1706, 326-1706, 327-1706, 328-1706, 329-1706, 330-1706, 331-1706, 332-1706, 333-1706, 334-1706, 335-1706, 336-1706, 337-1706, 338-1706, 339-1706, 340-1706, 341-1706, 342-1706, 343-1706, 344-1706, 345-1706, 346-1706, 347-1706, 348-1706, 349-1706, 350-1706, 351-1706, 352-1706, 353-1706, 354-1706, 355-1706, 356-1706, 357-1706, 358-1706, 359-1706, 360-1706, 361-1706, 362-1706, 363-1706, 364-1706, 365-1706, 366-1706, 367-1706, 368-1706, 369-1706, 370-1706, 371-1706, 372-1706, 373-1706, 374-1706, 375-1706, 376-1706, 377-1706, 378-1706, 379-1706, 380-1706, 381-1706, 382-1706, 383-1706, 384-1706, 385-1706, 386-1706 및 387-1706으로 이루어지는 군으로부터 선택된 서열을 포함하거나 이로 이루어진다.
특정 실시양태에서, 상기 두 번째 단편은 서열 번호 2의 잔기 321 내지 1706 또는 서열 번호 2의 잔기 387 내지 1076을 포함하거나 이들로 이루어진다.
특정 실시양태에서, 상기 두 번째 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드는, 상기 단편의 길이가 3의 배수라서, 서열 번호 1 또는 서열 번호 69의 위치 961 내지 위치 1159에 위치하는 뉴클레오티드로 시작하고, 서열 번호 1 또는 서열 번호 69의 마지막 뉴클레오티드로 끝난다(즉, 뉴클레오티드 5118). 따라서, 상기 두 번째 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 서열 번호 1 또는 서열 번호 69의 잔기 961-5118, 964-5118, 967-5118, 970-5118, 973-5118, 976-5118, 979-5118, 982-5118, 985-5118, 988-5118, 991-5118, 994-5118, 997-5118, 1000-5118, 1003-5118, 1006-5118, 1009-5118, 1012-5118, 1015-5118, 1018-5118, 1021-5118, 1024-5118, 1027-5118, 1030-5118, 1033-5118, 1036-5118, 1039-5118, 1042-5118, 1045-5118, 1048-5118, 1051-5118, 1054-5118, 1057-5118, 1060-5118, 1063-5118, 1066-5118, 1069-5118, 1072-5118, 1075-5118, 1078-5118, 1081-5118, 1084-5118, 1087-5118, 1090-5118, 1093-5118, 1096-5118, 1099-5118, 1102-5118, 1105-5118, 1108-5118, 1111-5118, 1114-5118, 1117-5118, 1120-5118, 1123-5118, 1126-5118, 1129-5118, 1132-5118, 1135-5118, 1138-5118, 1141-5118, 1144-5118, 1147-5118, 1150-5118, 1153-5118, 1156-5118 및 1159-5118로 이루어지는 군으로부터 선택된 서열을 포함하거나 이로 이루어진다.
특정 실시양태에서, CyaA 유래 단백질은 서열 번호 10에 개시된 서열의 폴리펩티드를 포함하거나 이로 이루어진다; 서열 번호 10은 서열 번호 2의 잔기 1 내지 227로 이루어지는 단편과 융합된 서열 번호 2의 잔기 321 내지 1706으로 이루어지는 단편으로 이루어진다.
또 다른 특정 실시양태에서, CyaA 유래 단백질은 서열 번호 12에 개시된 서열의 폴리펩티드를 포함하거나 이로 이루어진다; 서열 번호 12는 서열 번호 2의 잔기 1 내지 183으로 이루어지는 단편과 융합된 서열 번호 2의 잔기 387 내지 1706으로 이루어지는 단편으로 이루어진다.
또한, 다른 특정 실시양태는 하기를 개시한다:
- CyaA 유래 단백질은 서열 번호 19에 개시된 서열의 폴리펩티드를 포함하거나 이로 이루어진다. 즉, 서열 번호 2의 잔기 1 내지 227로 이루어지는 단편과 융합된 서열 번호 2의 잔기 387 내지 1706으로 이루어지는 단편으로 이루어진다.
- CyaA 유래 단백질은 서열 번호 20에 개시된 서열의 폴리펩티드를 포함하거나 이로 이루어진다. 즉, 서열 번호 2의 잔기 1 내지 183으로 이루어지는 단편과 융합된 서열 번호 2의 잔기 321 내지 1706으로 이루어지는 단편으로 이루어진다.
단백질 또는 폴리펩티드를 나타낼 때, 표현 "∼에 융합된"은 각 펩티드 부분(예를 들어, 여러 CyaA 단편, 및 경우에 따라 이종 폴리펩티드)이 서로 펩티드 결합으로 공유적으로 연결된다는 것을 의미한다. 상기 상이한 펩티드 부분들의 순서는 본원에서 N-말단에서 C-말단으로, 즉 한 부분의 마지막 C-말단 잔기가 다른 부분의 첫 번째 N-말단 잔기에 펩티드 결합으로 연결되는 것으로 기재된다. 폴리뉴클레오티드를 나타낼 때, 표현 "융합된"은 두 개 이상의 폴리뉴클레오티드 부분(예를 들어, 여러 뉴클레오티드 CyaA 단편, 및 경우에 따라 이종 폴리펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드)이 서로 포스포디에스터 결합으로 공유적으로 연결된다는 것을 의미한다. 상기 상이한 폴리뉴클레오티드 부분들의 순서는 본원에서 5'에서 3'으로, 즉 한 부분의 마지막 3' 뉴클레오티드가 다른 부분의 첫 번째 5' 뉴클레오티드에 포스포디에스터 결합으로 연결되는 것으로 기재된다. 뉴클레오티드 서열의 융합으로 이루어지는 폴리뉴클레오티드는, 예를 들어 CyaA의 천연 코딩 서열 내 서열 단편의 결실에 의하여, 특히 재조합 폴리뉴클레오티드가 얻어진다.
본 발명은 또한 변이형 CyaA 유래 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 관한 것으로, 상기 첫 번째 단편이 서열 번호 2에 개시된 보르데텔라 페르투시스 CyaA 단백질의 단편으로서 서열 번호 2의 첫 번째 잔기로 시작하여 서열 번호 2의 위치 183 내지 위치 227에 위치한 잔기로 끝나는 서열의 단편과 95% 이상의 유사성을 갖는 변이체이고/이거나, 상기 두 번째 단편이 서열 번호 2의 321 내지 위치 387에 위치한 잔기로 시작하여 서열 번호 2의 마지막 잔기로 끝나는 단편과 95% 이상의 유사성을 갖는 변이체이다.
단백질 또는 폴리펩티드를 나타낼 때, "95% 이상의 유사성을 갖는 변이체"는 아미노산 동일성이 변이되기 전의 폴리펩티드와 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 또는 99% 이상인 단백질 서열을 의미한다. 유사성의 백분율은 상기 변이체와 변이되기 전의 상기 폴리펩티드의 전장 서열을 비교하여, 특히 두 서열 중 더 짧은 것에 대해 계산된다. 따라서, 하나 이상의 첨가(들) 및/또는 하나 이상의 결실(들) 및/또는 하나 이상의 치환(들)에 의해 폴리펩티드의 잔기와 변이체의 잔기의 5%가 상이할 때, 변이체는 상기 폴리펩티드와 95%의 유사성을 갖는다. 특정 실시양태에서, 상기 변이체가 상기 폴리펩티드와 치환, 바람직하게는 보존적 치환에 의해서만 상이하여 변이되기 전의 서열과 동일한 길이를 유지한다. 또 다른 실시양태에서, 상기 변이체가 상기 폴리펩티드와 하나 이상의 단일 아미노산 결실, 바람직하게는 1, 2, 3, 4, 5, 또는 5개의 단일 아미노산 결실(들), 및 치환, 바람직하게는 보존적 치환에 의해 상이하다.
본 발명은 또한 서열 번호 1의 부분(또는 단편)을 코딩하는 폴리뉴클레오티드와 75% 이상의 유사성을 갖는 폴리뉴클레오티드 변이체에 관한 것이다. 특정 실시양태에서, 상기 첫 번째 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드는, 상기 뉴클레오티드 단편의 길이가 3의 배수라서, 서열 번호 1의 첫 번째 뉴클레오티드로 시작하여 서열 번호 1의 위치 549 내지 위치 681에 위치하는 뉴클레오티드로 끝나는 폴리뉴클레오티드와 75%의 유사성을 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 독립적으로 또는 상기 기재 내용과 조합하여, 상기 두 번째 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드는, 상기 뉴클레오티드 단편의 길이가 3의 배수라서, 서열 번호 1의 위치 961 내지 위치 1159에 위치하는 뉴클레오티드로 시작하여 서열 번호 1의 마지막 뉴클레오티드(즉, 뉴클레오티드 5118)로 끝나는 폴리뉴클레오티드와 75%의 유사성을 갖는다. 특정 실시양태에서, 상기 첫 번째 단편 및 두 번째 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 서열 번호 1과 75% 이상의 유사성을 갖는 전장 서열의 폴리뉴클레오티드로부터 유래한다. 상기 변이체의 한 예가 서열 번호 69이다. 특정 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드 변이체는 상기에 개시된 서열 번호 1 또는 서열 번호 69의 폴리뉴클레오티드에서 얻어진 폴리뉴클레오티드에 적용된 유전자 코드의 퇴보(degenracy)의 결과이다. 특정 실시양태에서, 이렇게 얻어진 폴리뉴클레오티드 변이체는 워블(wobble) 위치에 퇴보된(degenrated) 염기를 갖는다.
폴리뉴클레오티드를 나타낼 때, "75% 이상의 유사성을 갖는 변이체"는 뉴클레오티드 동일성이 변이되기 전의 폴리뉴클레오티드와 75% 이상, 79% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상인 뉴클레오티드 서열을 의미한다. 유사성의 백분율은 상기 변이체와 변이되기 전의 상기 폴리뉴클레오티드의 전장 서열을 비교하여, 특히 두 서열 중 더 짧은 것에 대해 계산된다. 따라서, 하나 이상의 뉴클레오티드 첨가(들) 및/또는 하나 이상의 뉴클레오티드 결실(들) 및/또는 하나 이상의 뉴클레오티드 치환(들)에 의해 변이체 뉴클레오티드의 25%가 폴리뉴클레오티드의 뉴클레오티드와 상이할 때, 변이체는 상기 폴리뉴클레오티드와 75%의 유사성을 갖는다. 특정 실시양태에서, 상기 변이체가 뉴클레오티드 치환에 의해서만 상이하여 변이되기 전의 서열과 동일한 길이를 유지한다. 특정 실시양태에서, 상기 변이체가 사일런트 돌연변이에 의해서만 상이하면 변이되기 전의 서열에 의해 코딩된 단백질과 동일한 단백질을 코딩한다. 특정 실시양태에서, 상기 변이체는 일부가 사이런트 돌연변이인 뉴클레오티드 치환에 의해서만 상이하여 상기 폴리뉴클레오티드 변이체에 의해 코딩되는 단백질 서열이 본 발명의 단백질 또는 폴리펩티드와 95% 이상 유사성을 가지거나 100% 동일성을 갖는다.
본원에서 나타낸 뉴클레오티드 및 단백질 유사성 백분율은 니들레만 및 분쉬(Needleman and Wunsch) 알고리즘에 기초한 널리 공지된 프로그램, 예를 들어 MeAlign으로 계산될 수 있다[18].
특정 실시양태에서, 본원에서 정의된 변이형 CyaA 유래 단백질은 표적 세포에 결합하고/거나 그의 아데닐레이트 사이클라아제(AC) 도메인을 표적 세포의 세포 기질로 이동시킬 수 있는 능력을 유지한다. 특정 실시양태에서, 표적 세포는 CD11b-발현 세포 즉, 표면에 CD11b/CD18 수용체를 발현하는 세포(CD11b+)이다. 특히, 상기 세포들은 과립구/호중구, 대식세포, NK 세포, T CD8+ 서브셋, B 세포 서브셋, 랑게르한스 세포와 같은 수지상 세포, 또는 골수계 수지상 세포이다.
본 발명의 변이체들이 표적 세포에 결합하는 능력은 특히 EP03291486 또는 WO02/22169 출원에 개시된 방법에 따라 분석할 수 있다. 또는, 변이체가 그의 N-말단 도메인을 표적 세포의 세포 기질로 이동시키는 능력은 WO02/22169 출원에 기재된 방법 또는 p105 펩티드를 이용한 실시예 A에 기술된 방법을 적용하여 분석할 수 있다.
보르데텔라 페르투시스 CyaA 단백질의 야생형 전장 서열의 변이체가 공지되어 있다; 상기 변이체의 예시는 서열 번호 4(보르데텔라 힌지아이(hinzii)의 CyaA 단백질, 서열 번호 6(보르데텔라 파라페르투시스(parapertussis)의 CyaA 단백질) 및 서열 번호 8(보르데텔라 브론치셉티카(bronchiseptica)의 CyaA 단백질)에 개시된 서열을 참고로 제공한다. 서열 번호 4, 6 및 8을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 서열 번호 3, 5 및 7에 각각 개시된 바와 같거나, 사일런트 돌연변이에 의한 서열 번호 3, 5 및 7의 변이체이다. 본 발명 내에는, CyaA 유래 단백질이 서열 2, 4, 6 및 8을 포함하거나 이들로 이루어지지 않는다. 또한, 본 발명의 변이형 CyaA 유래 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 서열 번호 3, 5 또는 7을 포함하거나 이들로 이루어지지 않는다.
본 발명의 특정 실시양태에서, 변이형 CyaA 유래 단백질, 바람직하게는 본원에서 정의된 비. 페르투시스(B. pertussis) CyaA 유래 단백질의 변이체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 (a) 서열 번호 4, 6 또는 8에 개시된 보르데텔라 CyaA 단백질의 단편으로서, 상기 단편의 서열은 서열 번호 4, 6 또는 8의 첫 번째 잔기로 시작하여 서열 번호 4, 6 또는 8의 위치 183 내지 위치 227에 위치한 잔기로 끝나는 것인 단편과 융합된 (b) 서열 번호 4, 6 또는 8에 개시된 보르데텔라 CyaA 단백질의 단편으로서, 상기 단편의 서열은 서열 번호 4, 6 또는 8의 위치 321 내지 위치 387에 위치한 잔기로 시작하여 서열 번호 4, 6 또는 8의 마지막 잔기로 끝나는 것인 단편을 포함하거나 이들로 이루어지는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드이다.
서열 번호 2의 단편을 포함하는 특정 CyaA 유래 단백질에 대한 상기 정의는 서열 번호 4 및 6의 단편을 포함하는 변이형 CyaA 유래 단백질에 동일하게 적용한다.
서열 8의 단편을 포함하는 변이형 CyaA 유래 단백질과 관련하여, 서열 번호 8의 마지막 잔기가 잔기 1706 대신에 잔기 1705인 경우를 제외한 모든 정의는 동일하게 적용한다. 따라서, 서열 번호 8의 단편을 포함하는 변이형 CyaA 유래 단백질의 경우, 잔기 1706을 언급하는 모든 측면은 잔기 1705로 대체되어야만 한다. 특히, 두 번째 단편은 1319 내지 1385개 잔기 범위의 크기를 가지며, 바람직하게는 1319 잔기 또는 1385개 잔기 길이이다. 서열 8의 단편을 포함하는 변이형 CyaA 유래 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드와 관련하여, 뉴클레오티드 5118을 언급하는 모든 정의 및 실시양태는 뉴클레오티드 5115로 대체되어야만 한다.
본 발명의 변이형 CyaA 유래 단백질을 코딩하는 특정 폴리뉴클레오티드는 하기의 폴리뉴클레오티드를 포함하거나 이들로 이루어지는 폴리뉴클레오티드 중에서 선택된다:
1) 서열 번호 13에 개시된 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드; 서열 번호 13은 서열 번호 4의 잔기 1 내지 227로 이루어지는 단편과 융합된 서열 번호 4의 잔기 321 내지 1706으로 이루어지는 단편으로 이루어진다;
2) 서열 번호 14에 개시된 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드; 서열 번호 14는 서열 번호 4의 잔기 1 내지 183으로 이루어지는 단편과 융합된 서열 번호 4의 잔기 387 내지 1706으로 이루어지는 단편으로 이루어진다;
3) 서열 번호 15에 개시된 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드; 서열 번호 15는 서열 번호 6의 잔기 1 내지 227로 이루어지는 단편과 융합된 서열 번호 6의 잔기 321 내지 1706으로 이루어지는 단편으로 이루어진다;
4) 서열 번호 16에 개시된 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드; 서열 번호 16은 서열 번호 6의 잔기 1 내지 183으로 이루어지는 단편과 융합된 서열 번호 6의 잔기 387 내지 1706으로 이루어지는 단편으로 이루어진다;
5) 서열 번호 17에 개시된 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드; 서열 번호 17은 서열 번호 8의 잔기 1 내지 227로 이루어지는 단편과 융합된 서열 번호 8의 잔기 321 내지 1705로 이루어지는 단편으로 이루어진다; 그리고
6) 서열 번호 18에 개시된 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드; 서열 번호 18은 서열 번호 8의 잔기 1 내지 183으로 이루어지는 단편과 융합된 서열 번호 8의 잔기 387 내지 1705로 이루어지는 단편으로 이루어진다.
또한, 본 발명의 CyaA 유래 단백질 또는 변이형 CyaA 유래 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 전장의 보르데텔라 CyaA 코딩 뉴클레오티드 서열의 결실된 형태, 즉, 서열 번호 2, 4, 6 또는 8을 포함하거나 이로 이루어지는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드로, 첫 번째 아미노산 잔기가 서열 번호 2, 4, 6 또는 8 각각의 잔기 184 내지 잔기 228에 위치하고, 마지막 아미노산 잔기가 서열 번호 2, 4, 6 또는 8 각각의 잔기 320 내지 잔기 386에 위치하는 폴리펩티드 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드까지 결실된 형태로 정의될 수 있다. 특정 실시양태에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호 2, 4, 6 또는 8을 포함하거나 이들로 이루어지는 폴리펩티드를 코딩하며, 이것은 첫 번째 아미노산 잔기가 서열 번호 2, 4, 6 또는 8 각각의 잔기 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227 및 228로 이루어지는 군으로부터 선택되고, 마지막 아미노산 잔기가 서열 번호 2, 4, 6 또는 8 각각의 잔기 320, 321, 322, 323, 324, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 335, 336, 337, 338, 339, 340, 341, 342, 343, 344, 345, 346, 347, 348, 349, 350, 351, 352, 353, 354, 355, 356, 357, 358, 359, 360, 361, 362, 363, 364, 365, 366, 367, 368, 369, 370, 371, 372, 373, 374, 375, 376, 377, 378, 379, 380, 381, 382, 383, 384, 385 또는 386으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 폴리펩티드 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드로 결실된다.
본 발명의 CyaA 유래 단백질, 특히 본원에서 기재된 변이형 CyaA 유래 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 제조하는 방법 또한 본 발명의 일부분이다. 본 방법은 (a) 서열 번호 2, 4, 6 또는 8에 개시된 보르데텔라 CyaA를 코딩하는 폴리뉴클레오티드로부터, 상기 서열 내 연속적인 뉴클레오티드 잔기의 뉴클레오티드 단편으로서, 단편의 처음 3개 뉴클레오티드가 서열 번호 2, 4, 6 또는 8의 잔기 184 내지 잔기 228에 위치한 아미노산 잔기를 코딩하고 단편의 마지막 3개의 뉴클레오티드가 서열 번호 2, 4, 6 또는 8의 잔기 320 내지 잔기 386에 위치한 아미노산 잔기를 코딩하는 것인 단편을 결실시키는 단계, 및 (b) 상기 폴리뉴클레오티드를 회수하는 단계를 포함한다.
대안적으로, CyaA 유래 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 통상의 방법을 이용하여, 원하는 CyaA 유래 단백질 서열에 따라, 경우에 따라 유전자 코드의 퇴보 및/또는 발현의 최적화를 고려하여 화학적으로 합성된다.
또한, 본 발명은 본원에서 기재된 본 발명의 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩되는 CyaA 유래 단백질에 관한 것이다. 특정 CyaA 유래 단백질은 서열 번호 10, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 및 20에서 개시된 서열로 이루어진다.
본 발명의 범위 내에는, 변이형 CyaA 유래 단백질을 포함하여 CyaA 유래 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 상기 CyaA 유래 단백질 또는 변이형 CyaA 유래 단백질, 및 이종 폴리펩티드를 포함하거나 이들로 이루어지는 키메라 단백질을 코딩하는 본 발명의 키메라 폴리뉴클레오티드를 제조하는 데 사용된다. 여기서, 상기 이종 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 CyaA의 결실된 뉴클레오티드 단편을 치환한다.
따라서, 본 발명은 키메라 폴리뉴클레오티드, 즉 본원에서 정의된 키메라 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 관한 것이며, CyaA 유래 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드와 관련하여 본원에서 개시된 각각의 모든 실시양태에서 적용된다.
따라서, 본 발명은 또한 키메라 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 제조 방법에 관한 것으로,
(a) 서열 번호 2, 4, 6 또는 8에 개시된 보르데텔라 CyaA를 코딩하거나 서열 번호 2와 95% 이상의 유사성을 갖는 변이체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드로부터, 처음 3개의 뉴클레오티드가 서열 번호 2, 4, 6 또는 8의 잔기 184 내지 잔기 228에 위치한 아미노산 잔기를 코딩하고 마지막 3개의 뉴클레오티드가 서열 번호 2, 4, 6 또는 8의 잔기 320 내지 잔기 386에 위치한 아미노산 잔기를 코딩하는 것인 뉴클레오티드 단편을 결실시키는 단계;
(b) (a)에서 얻어진 폴리뉴클레오티드 내 결실된 뉴클레오티드 단편 부위에 이종 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 삽입하는 단계로서, 단계 (a) 및 (b)는 임의의 순서로 또는 동시에 수행될 수 있는 것인 단계; 및
(c) 키메라 단백질을 코딩하는 상기 폴리뉴클레오티드 회수하는 단계를 포함한다.
본 발명은 또한 키메라 단백질을 제조하는 방법에 관한 것으로,
(a) 서열 번호 2, 4, 6 또는 8에 개시된 보르데텔라 CyaA를 코딩하거나 서열 번호 2와 95% 이상의 유사성을 갖는 변이체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드로부터, 처음 3개의 뉴클레오티드가 서열 번호 2, 4, 6 또는 8의 잔기 184 내지 잔기 228에 위치한 아미노산 잔기를 코딩하고 마지막 3개의 뉴클레오티드가 서열 번호 2, 4, 6 또는 8의 잔기 320 내지 잔기 386에 위치한 아미노산 잔기를 코딩하는 것인 뉴클레오티드 단편을 결실시키는 단계;
(b) (a)에서 얻어진 폴리뉴클레오티드 내 결실된 뉴클레오티드 단편 부위에 이종 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 삽입하는 단계로서, 단계 (a) 및 (b)는 임의의 순서로 또는 동시에 수행될 수 있는 것인 단계;
(c) (b)에서 얻어진 폴리뉴클레오티드를 세포에서 발현시키는 단계; 및
(d) 상기 발현된 키메라 단백질을 회수하는 단계를 포함한다.
본 발명의 키메라 단백질을 제조하는 방법은 키메라 폴리뉴클레오티드 구조물 내에 단계 (b)에서 얻어진 폴리뉴클레오티드 및 CyaC 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 통합시키는 단계를 더 포함할 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 단계 (b)에서 얻어진 폴리뉴클레오티드와 CyaC 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드는, 상기 통합 후에 얻어진 키메라 폴리뉴클레오티드가 5' 말단에서 3' 말단으로 단계 (b)의 폴리뉴클레오티드 구조물에 이어진 보르데텔라 균주, 특히 보르데텔라 페르투시스 균주의 CyaC 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 구조물을 포함하거나 함유하도록, 구조물 내에 통합된다.
본 발명 내에서 "처음 3개의 뉴클레오티드" 또는 "마지막 3개의 뉴클레오티드"를 나타낼 때, 상기 3개의 뉴클레오티드는 유전 암호에 따라 서열 번호 2, 4, 6 또는 8의 그의 위치에 확인되는 아미노산 잔기에 대응하는 코돈을 나타내는 것으로 이해된다. 따라서, 폴리뉴클레오티드 뉴클레오티드 결실의 크기는 3의 배수이다. 게다가, 크기가 3의 배수인 것 외에도, 폴리뉴클레오티드 뉴클레오티드 결실은 프레임 내에 있다. 즉 결실은 리딩 프레임을 변경하거나 결실 주위(상류 및 하류)를 변경하지 않으면서 원하는 아미노산 잔기를 제거한다.
결실 단계와 삽입 단계의 순서는 중요하지 않으며 두 단계를 동시에 수행할 수 있다.
방법의 첫 번째 실시양태에서, 결실 단계는 삽입 단계에 앞서 시행된다. 따라서, 단편의 결실이 수행되면, 이종 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 결실된 뉴클레오티드 부위에 삽입된다. "결실된 뉴클레오티드 단편의 부위에서"는 이종 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 CyaA의 N-말단부(첫 번째 CyaA 단편에 대응)과 CyaA의 C-말단부(두 번째 CyaA 단편에 대응) 사이에 삽입된다는 것을 의미한다. CyaA의 N-말단부 및 C-말단부 모두의 서열이 서열 번호 2, 4, 6 또는 8 또는 본 발명에 따른 변이체의 N-말단 부분 및 C-말단 부분과 동일하기 때문에, 삽입 부위는 쉽게 확인될 수 있다.
두 번째 실시양태에서, 삽입 단계는 결실 단계에 앞서 시행된다. 결실될 단편이 확인되면, 이종 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 결실될 단편의 첫 번째 잔기를 코딩하는 세 개의 뉴클레오티드(코돈)의 상류(5') 또는 결실될 단편의 마지막 잔기를 코딩하는 마지막 세 개의 뉴클레오티드(코돈) 하류(3')에 삽입된다. 이종 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 삽입되면, 결실될 단편은 CyaA/이종 폴리펩티드 분자를 코딩하는 폴리뉴클레오티드로부터 절제(excise)된다.
세 번째 실시양태에서, 결실 및 삽입 단계는 적합한 제한 효소를 사용하여 동시에, 즉 단일 반응 단계로 실시된다.
방법의 특정 실시양태에서, 결실 단계는 서열 번호 2, 4, 6 또는 8에 개시된 보르데텔라 CyaA를 코딩하는 폴리뉴클레오티드로부터, 서열 번호 2, 4, 6 또는 8의 잔기 228 내지 320을 코딩하는 뉴클레오티드 단편, 또는 서열 번호 2, 4, 6 또는 8의 잔기 184 내지 386을 코딩하는 뉴클레오티드 단편, 또는 서열 번호 2, 4, 6 또는 8의 잔기 228 내지 386을 코딩하는 뉴클레오티드 단편, 또는 서열 번호 2, 4, 6 또는 8의 잔기 184 내지 320을 코딩하는 뉴클레오티드 단편 또는 본 발명에 따른 변이체를 제거하는 단계를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 결실 단계는 서열 번호 1, 3, 5 또는 7 또는 서열 번호 69에 개시된 폴리뉴클레오티드로부터, 서열 번호 1, 3, 5 또는 7 또는 서열 번호 69의 뉴클레오티드 682 내지 960으로 이루어지는 뉴클레오티드 단편, 또는 서열 번호 1, 3, 5 또는 7 또는 서열 번호 69의 뉴클레오티드 550 내지 1158로 이루어지는 뉴클레오티드 단편, 또는 서열 번호 1, 3, 5 또는 7 또는 서열 번호 69에 개시된 폴리뉴클레오티드, 또는 서열 번호 1, 3, 5 또는 7 또는 서열 번호 69의 잔기 682 내지 1158로 이루어지는 뉴클레오티드 단편, 또는 서열 번호 1, 3, 5 또는 7 또는 서열 번호 69의 뉴클레오티드 550 내지 960으로 이루어지는 뉴클레오티드 단편을 제거하는 단계를 포함한다.
단편의 결실을 얻기 위해서, 당업자는 가능한 한 CyaA 코딩 폴리뉴클레오티드 내 더 큰 결실을 얻어야 하며, 그리고 나서 클로닝할 때 보충하여 최종 결과물로서 상기에 개시된 결실을 얻을 수 있다.
대안적으로, 본 발명의 키메라 단백질을 코딩하는 키메라 폴리뉴클레오티드는 통상의 방법을 이용하여, 원하는 키메라 단백질 서열에 따라, 경우에 따라 유전 암호의 퇴보성을 및/또는 발현의 최적화를 고려하여 화학적으로 합성된다. 따라서, 상기 화학적으로 합성된 폴리뉴클레오티드는 세포에서 발현되고, 발현된 키메라 단백질은 회수된다.
본 발명은 또한 키메라 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 관한 것으로, 상기 폴리뉴클레오티드는 5'에서 3'으로 (a) 서열 번호 2에 개시된 보르데텔라 페르투시스 CyaA 단백질의 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드로서, 상기 단편의 서열은 서열 번호 2의 첫 번째 잔기로 시작하여 서열 번호 2의 위치 183 내지 위치 227에 위치한 잔기로 끝나는 것인 단편 또는 상기 단편과 95% 이상의 유사성을 갖는 변이체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드, (b) 이종 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 (c) 서열 번호 2에 개시된 보르데텔라 페르투시스 CyaA 단백질의 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드로서, 상기 단편의 서열은 서열 번호 2의 위치 321 내지 위치 387로 시작하여 서열 번호 2의 마지막 잔기로 끝나는 것인 단편 또는 상기 단편과 95% 이상의 유사성을 갖는 변이체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하거나 이들로 이루어진다.
서열 번호 2에 개시된 보르데텔라 페르투시스 CyaA 단백질의 단편으로서, 상기 단편의 서열은 서열 번호 2의 첫 번째 잔기로 시작하여 서열 번호 2의 위치 183 내지 위치 227에 위치한 잔기로 끝나는 것인 단편과 관련하여, 그리고 서열 번호 2에 개시된 보르데텔라 페르투시스 CyaA 단백질의 단편으로서, 상기 단편의 서열은 서열 번호 2의 위치 321 내지 위치 387에 위치한 잔기로 시작하여 서열 번호 2의 마지막 잔기로 끝나는 것인 단편과 관련하여, CyaA 유래 단백질에 대해 상기에 기재된 정의는 키메라 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 맥락에서 상기 단편에 동일하게 적용된다.
95% 이상의 유사성을 갖는 변이체와 관련하여 상기에 기재된 정의는 키메라 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 맥락에서 기재된 단편의 변이체에 동일하게 적용된다.
특정 실시양태에서, 키메라 단백질을 코딩하는 상기 폴리뉴클레오티드는
1) 5'에서 3'으로 (a) 서열 번호 2, 4 또는 6의 잔기 1 내지 227로 이루어지는 폴리펩티드 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드, (b) 이종 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 및 (c) 서열 번호 2, 4 또는 6의 잔기 321 내지 1706으로 이루어지는 폴리펩티드 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하거나 이들로 이루어지는 폴리뉴클레오티드;
2) 5'에서 3'으로 (a) 서열 번호 8의 잔기 1 내지 227로 이루어지는 폴리펩티드 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드, (b) 이종 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 및 (c) 서열 번호 8의 잔기 321 내지 1705로 이루어지는 폴리펩티드 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하거나 이들로 이루어지는 폴리뉴클레오티드;
3) 5'에서 3'으로 (a) 서열 번호 2, 4 또는 6의 잔기 1 내지 183으로 이루어지는 폴리펩티드 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드, (b) 이종 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 및 (c) 서열 번호 2, 4 또는 6의 잔기 387 내지 1706으로 이루어지는 폴리펩티드 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하거나 이들로 이루어지는 폴리뉴클레오티드;
4) 5'에서 3'으로 (a) 서열 번호 8의 잔기 1 내지 183으로 이루어지는 폴리펩티드 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드, (b) 이종 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 및 (c) 서열 번호 8의 잔기 387 내지 1705로 이루어지는 폴리펩티드 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하거나 이들로 이루어지는 폴리뉴클레오티드;
5) 5'에서 3'으로 (a) 서열 번호 2, 4 또는 6의 잔기 1 내지 227로 이루어지는 폴리펩티드 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드, (b) 이종 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 및 (c) 서열 번호 2, 4 또는 6의 잔기 387 내지 1706으로 이루어지는 폴리펩티드 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하거나 이들로 이루어지는 폴리뉴클레오티드;
6) 5'에서 3'으로 (a) 서열 번호 8의 잔기 1 내지 227로 이루어지는 폴리펩티드 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드, (b) 이종 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 및 (c) 서열 번호 8의 잔기 387 내지 1705로 이루어지는 폴리펩티드 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하거나 이들로 이루어지는 폴리뉴클레오티드;
7) 5'에서 3'으로 (a) 서열 번호 2, 4 또는 6의 잔기 1 내지 183으로 이루어지는 폴리펩티드 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드, (b) 이종 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 및 (c) 서열 번호 2, 4 또는 6의 잔기 321 내지 1706으로 이루어지는 폴리펩티드 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하거나 이들로 이루어지는 폴리뉴클레오티드; 및
8) 5'에서 3'으로 (a) 서열 번호 8의 잔기 1 내지 183으로 이루어지는 폴리펩티드 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드, (b) 이종 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 및 (c) 서열 번호 8의 잔기 321 내지 1705로 이루어지는 폴리펩티드 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하거나 이들로 이루어지는 폴리뉴클레오티드; 로 이루어지는 군으로부터 선택된다.
본원에 정의된 키메라 단백질을 코딩하는 임의의 폴리뉴클레오티드의 특정 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드 (a)는 폴리뉴클레오티드 (c)와 융합된 폴리뉴클레오티드 (b)에 융합된다.
본 발명 내에는, 이종 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 폴리뉴클레오티드 (c)의 리딩 프레임(예를 들어, 서열 번호 2에 개시된 보르데텔라 페르투시스 CyaA 단백질 단편으로서, 상기 단편의 서열은 서열 번호 2의 위치 321 내지 387에 위치한 잔기로 시작하여 서열 번호 2의 마지막 잔기로 끝나는 것인 단편의 리딩프레임)을 유지하기 위하여 3의 배수인 크기를 갖는다.
본 발명의 특정 실시양태에서, 키메라 폴리뉴클레오티드는 3' 말단에 보르데텔라 균주, 특히 보르데텔라 페르투시스 균주의 CyaC 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 더 포함한다.
키메라 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 본원에 기재된 방법에 의해 얻을 수 있다.
본 발명은 또한 본원에서 정의된 폴리뉴클레오티드, 즉, 변이형 CyaA 유래 단백질을 포함하여 CyaA 유래 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 또는 키메라 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 핵산 벡터, 예를 들어 플라스미드에 관한 것이다. 특정 실시양태에서, 벡터는 발현 벡터, 즉, 분명하게 언급된 요소 외에도 본 발명의 폴리뉴클레오티드의 발현을 유도하는데 필수적인 요소(발현 조절 서열), 및 특히 전사 조절 요소를 포함하는 벡터이다. "전사 조절 요소"는 폴리뉴클레오티드의 전사 조절에 관련된 임의의 DNA 영역을 나타내며, 프로모터, 예를 들어 IPTG에 의한 유도성 프로모터, 예를 들어 lac, tac 또는 T7 프로모터, 또는 온도 변화에 의한 유도성 프로모터, 예를 들어 파아지 람다 pR 또는 pL 프로모터, 인핸서 또는 시스-작용 조절 요소를 포함한다. 상기 요소들, 및 특히 프로모터는 핵산 벡터로 형질감염 되는 세포의 특성에 따라 선택된다. 원하는 발현 수준 또는 형질 감염되는 세포에 따라 적합한 프로모터를 결정하는 것은 당업자들에게 공지되어있다. 특정 실시양태에서, 상기 벡터는 플라스미드이다. 본 발명의 벡터 제조에 적합한 통상적인 플라스미드의 예는 pUC 또는 pBR322이다.
특정 실시양태에서, 상기 핵산 벡터는 또한 서열 번호 21에 개시된 비. 페르투시스와 같은 보르데텔라 균주의 CyaC 코딩 서열을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 상기 핵산 벡터는 또한 특정 세포 유형에서, 특히 이. 콜라이에서 더 우수한 발현을 위해 최적화된 보르데텔라 균주의 CyaC 코딩 서열 형태를 포함한다. 이.콜라이에 최적화된 CyaC 서열의 형태는 서열 번호 22에 개시되어 있다.
본 발명에 정의된 키메라를 제조하는 데 사용될 수 있는 특정 플라스미드는 재료 및 방법에 기재된 것이며, 그 서열은 서열 번호 59, 62, 65 및 68에 개시되어 있다. 상기 4가지 플라스미드에 포함된 이종 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 제거되고, 본원에서 기재된 이종 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 의해 대체될 수 있다. 따라서, 서열 번호 59의 플라스미드로부터 시작하여, 뉴클레오티드 904와 1731 사이에 포함된 서열은 제거되고, 본원에 기재된 이종 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 의해 대체된다. 대안적으로, 서열 번호 62의 플라스미드로부터 시작하여, 뉴클레오티드 772와 1599 사이에 포함된 서열은 제거되고, 본원에 기재된 이종 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 의해 대체된다. 대안적으로, 서열 번호 65의 플라스미드로부터 시작하여, 뉴클레오티드 904와 1836 사이에 포함된 서열은 제거되고, 본원에서 기재된 이종 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티에 의해 대체된다. 대안적으로, 서열 번호 68의 플라스미드로부터 시작하여, 뉴클레오티드 772와 1704 사이에 포함된 서열은 제거되고, 본원에 기재된 이종 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 의해 대체된다.
핵산 벡터가 여러 폴리뉴클레오티드를 포함할 때, 전사 조절 요소(들)은 모든 폴리뉴클레오티드에 고유하거나 그들의 일부에 의해서 공유될 수 있거나, 반대로 각 폴리뉴클레오티드는 하나 이상의 특정 전사 조절 요소(들)과 연관될 수 있다는 것에 주의해야 한다. 후자의 경우, 여러 전사 조절 요소는 유사하거나 상이할 수 있다.
또한, 본 발명은 본원에서 정의된 폴리뉴클레오티드, 즉, 변이형 CyaA 유래 단백질을 포함하여 CyaA 유래 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 또는 키메라 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하거나 본원에서 정의된 벡터를 포함하는 세포(바람직하게는 단리된) 또는 세포 배양물에 관한 것이다. 특정 실시양태에서, 상기 세포 또는 세포 배양물은 본 발명의 벡터로 형질감염된다.
상기 세포는 원핵생물 또는 원핵 세포로 만든 세포 배양물일 수 있다. 특정 실시양태에서, 상기 세포는 재조합 단백질(들)을 발현하고/거나 생산하는 데 적합하다. 특정 실시양태에서, 상기 세포 또는 세포 배양물은 박테리아 또는 박테리아 배양물이다. 바람직한 실시양태에서, 상기 세포 또는 세포 배양물은 이. 콜라이 균주 배양물, 예를 들어 BL21, BLR, TG1 또는 HMS174 균주일 수 있다.
따라서, 본 발명의 세포 또는 세포 배양물은 본 발명의 폴리뉴클레오티드, 즉, 변이형 CyaA 유래 단백질을 포함하여 CyaA 유래 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 또는 키메라 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 및, 적합한 경우, 동시에 CyaC 유전자 또는 CyaC 유전자의 최적화된 형태를 발현한다.
용어 "CyaA" 또는 "CyaA 유래 단백질" 또는 "키메라 단백질"은 보르데텔라 CyaA 단백질의 번역 후 변형된 형태를 포함하고, 바람직하게는 상기 형태이다. 따라서, 특정 실시양태에서, 본 발명의 상기 "CyaA 유래 단백질" 또는 "키메라 단백질"은 그의 잔기 중 한 개 이상, 특히 비. 페르투시스, 비. 힌지아이 또는 비. 파라페르투시스 CyaA의 전장 서열의 위치 860 및 983에 위치한 잔기에 대응하거나 비. 브론치셉티카 CyaA의 전장 서열의 위치 859 및 982에 위치한 잔기에 대응하는 두 개의 리신 잔기 중 한 개 이상, 바람직하게는 두 개가 번역 후 아실화에 의해 변형된다. "아실화"는 본원에서 팔미토일화, 즉, CyaA, CyaA 유래 단백질 또는 본 발명의 키메라 단백질에 팔미테이트 및/또는 팔미톨리에이트 기(들)의 첨가를 의미한다. 따라서, 상기 "CyaA 유래 단백질" 또는 "키메라 단백질"은 잔기 중 일부, 바람직하게는 특히 비. 페르투시스, 비. 힌지아이 또는 비. 파라페르투시스 CyaA의 전장 서열의 잔기 860 및 983에 대응하거나 비. 브론치셉티카 CyaA의 전장 서열의 위치 859 및 982에 위치한 잔기에 대응하는 두 개의 리신 잔기 중 한 개 또는 두 개에 팔미토일기를 갖는다. "에 대응한다"는 본 발명의 CyaA 유래 단백질 또는 키메라 단백질의 번역 후 변형되는 잔기가 비. 페르투시스, B. 힌지아이 또는 비. 파라페르투시스 CyaA(각각, 서열 번호 2, 4 및 6)의 CyaA 서열 내 리신 860 및 983 또는 비. 브론치셉티카 CyaA(서열 번호 8)의 서열 내 리신 859 및 982에 일치하는 위치에 있다는 것을 의미한다. 본 발명의 단백질 내 상기 리신 잔기는 본 발명의 단백질 서열을 서열 번호 2, 4, 6 또는 8의 서열과 정렬하고 비교함으로써 당업자에 의해 확인될 수 있다.
팔미토일화 과정은 보르데텔라 종의 CyaC 유전자, 바람직하게는 보르데텔라 페르투시스 CyaC 코딩 서열에 의해 매개되며 그 천연 서열은 서열 번호 21에 개시되어 있다. 이. 콜라이에서의 생산에 최적화된 CyaC 코딩 서열 형태는 서열 번호 22에 개시되어 있다. 이러한 번역 후 변형은 CyaA 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 본 발명의 CyaA 유래 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 또는 본 발명의 키메라 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드와 CyaC 유전자의 동시 발현에 의해 얻을 수 있다.
특정 실시양태에서, CyaA 및 CyaC 단백질을 발현하는 본 발명의 폴리뉴클레오티드 구조물은 5' 말단에서 3' 말단으로, CyaA 폴리뉴클레오티드 또는 유전자, 유리하게는 결정된 숙주 세포, 예를 들어 이.콜라이에서의 발현을 위해 최적화된 서열로 이루어지는 CyaA 폴리뉴클레오티드 또는 유전자, 및 CyaC 폴리뉴클레오티드 또는 유전자, 유리하게는 결정된 숙주 세포, 예를 들어 이.콜라이에서의 발현을 위해 최적화된 서열로 이루어지는 CyaC 폴리뉴클레오티드 또는 유전자를 포함한다. 구조물 내 폴리뉴클레오티드의 상기 삽입 순서는 CyaA의 번역 후 변형된 형태의 발현 효율을 증가시키기에 적합한 각각의 양과 구조로 CyaA 및 CyaC 단백질의 발현을 유리하게 한다.
본 발명의 특정 실시양태에서, 본원에 개시된 야생형 보르데텔라 CyaA 단백질에 실시된 단편[첫 번째 아미노 잔기는 서열 번호 2, 4, 6 또는 8 각각의 잔기 184 내지 잔기 228에 위치하고, 마지막 아미노산 잔기는 서열 번호 2, 4, 6 또는 8 각각의 잔기 320 내지 잔기 386에 위치함]의 결실을 제외하고, 본 발명의 CyaA 유래 단백질 또는 키메라 단백질의 CyaA 부분은 서열 번호 2, 4, 6 또는 8과 비교할 때 다르게 변이(부가, 결실 및/또는 치환)되지 않는다.
흥미롭게도, 본 발명의 키메라 단백질뿐 아니라 CyaA 유래 단백질도 세포독성을 갖지 않는다. 즉, 그들의 효소 활성은, 첫 번째 아미노 잔기가 서열 번호 2, 4, 6 또는 8 각각의 잔기 184 내지 잔기 228에 위치하고, 마지막 아미노산 잔기가 서열 번호 2, 4, 6 또는 8 각각의 잔기 320 내지 잔기 386에 위치하는 단편의 결실 후에 불활성화되었다. 그래서, 특정 실시양태에서 삽입, 결실 또는 치환은 수행되지 않았다. 특히, CyaA의 잔기 188 및 189가 본 발명의 단백질에 여전히 존재할 때, 잔기 188 및 189 사이에는 어떤 디펩티드(예를 들어, 디펩티드 LQ 또는 GS)도 삽입되지 않는다.
또한, 본 발명은 본 발명의 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩되고, 본 발명의 벡터로부터 발현되거나 본 발명의 세포 배양물에 의해 생산되는 키메라 단백질에 관한 것이다.
본 발명의 키메라 단백질은 N-말단에서 C-말단으로, (a) 서열 번호 2에 개시된 보르데텔라 페르투시스 CyaA 단백질의 단편으로서, 상기 단편의 서열은 서열 번호 2의 첫 번째 잔기로 시작하여 서열 번호 2의 위치 183 내지 위치 227에 위치한 잔기로 끝나는 것인 단편 또는 상기 단편과 95% 이상 유사성을 가지는 변이체, (b) 이종 폴리펩티드, 및 (c) 서열 번호 2에 개시된 보르데텔라 페르투시스 CyaA 단백질의 단편으로서, 상기 단편의 서열은 서열 번호 2의 위치 321 내지 위치 387에 위치한 잔기로 시작하여 서열 번호 2의 마지막 잔기로 끝나는 것인 단편 또는 상기 단편과 95% 이상 유사성을 가지는 변이체를 포함하거나 이들로 이루어진다.
서열 번호 2에 개시된 보르데텔라 페르투시스 CyaA 단백질의 단편으로서, 상기 단편의 서열은 서열 번호 2의 첫 번째 잔기로 시작하여 서열 번호 2의 위치 183 내지 위치 227에 위치한 잔기로 끝나는 것인 단편과 관련하여, 그리고 서열 번호 2에 개시된 보르데텔라 페르투시스 CyaA 단백질의 단편으로서, 상기 단편의 서열은 서열 번호 2의 위치 321 내지 위치 387에 위치한 잔기로 시작하여 서열 번호 2의 마지막 잔기로 끝나는 것인 단편과 관련하여, CyaA 유래 단백질에 대한 상기 기재된 정의는 키메라 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 맥락에 있는 상기 단편에 동일하게 적용된다.
95% 이상의 유사성을 갖는 변이체와 관련하여 상기에 기재된 정의는 키메라 단백질의 맥락에 기재되는 단편에 동일하게 적용된다.
따라서, 본 발명은 또한
1) N-말단에서 C-말단으로, (a) 서열 번호 2, 4 또는 6의 잔기 1 내지 227로 이루어지는 단편, (b) 이종 폴리펩티드 및 (c) 서열 번호 2, 4 또는 6의 잔기 321 내지 1706으로 이루어지는 단편;
2) N-말단에서 C-말단으로, (a) 서열 번호 8의 잔기 1 내지 227로 이루어지는 단편, (b) 이종 폴리펩티드 및 (c) 서열 번호 8의 잔기 321 내지 1705로 이루어지는 단편;
3) N-말단에서 C-말단으로, (a) 서열 번호 2, 4 또는 6의 잔기 1 내지 183으로 이루어지는 단편, (b) 이종 폴리펩티드 및 (c) 서열 번호 2, 4 또는 6의 잔기 387 내지 1706으로 이루어지는 단편; 및
4) N-말단에서 C-말단으로, (a) 서열 번호 8의 잔기 1 내지 183으로 이루어지는 단편, (b) 이종 폴리펩티드 및 (c) 서열 번호 8의 잔기 387 내지 1705로 이루어지는 단편;을 포함하거나 이들로 이루어지는 키메라 단백질에 관한 것이다.
본원에서 정의된 키메라 단백질의 특정 실시양태에서, 단편 (a)는 단편 (c)와 융합된 이종 폴리펩티드(b)에 융합된다.
"키메라"는, 단백질이 본원에서 정의된 바와 같이 보르데텔라 CyaA로부터 유래한 단편 및 보르데텔라 CyaA로부터 유래하지 않은 폴리펩티드를 포함하거나 이들로 이루어진다는 것을 의미한다. 따라서, 상기 폴리펩티드는 이종이라고 말한다. 즉, 그의 전체 서열은 보르데텔라 CyaA의 부분, 특히 서열 번호 2, 4, 6 또는 8에 개시된 CyaA의 부분과 동일하지 않다; 특정 실시양태에서, 상기 이종 폴리펩티드의 전체 서열은 보르데텔라 CyaA의 부분, 특히 서열 번호 2, 4, 6 또는 8에 개시된 CyaA의 부분과 유사하지 않다. 즉, 그 서열은 보르데텔라 CyaA의 부분, 특히 서열 번호 2, 4, 6 또는 8에 개시된 CyaA의 부분과 80% 미만, 70% 미만, 60% 미만, 50% 미만, 40% 미만, 30% 미만 또는 20% 미만의 유사성을 갖는다. 상기 유사성은 이종 폴리펩티드의 서열과 동일한 크기의 보르데텔라 CyaA의 한 부분(동일 크기를 갖는 이종 폴리펩티드 및 보르데텔라 CyaA의 부분)을 비교하여 상기 정의에 따라 계산된다. 특정 실시양태에서, 이종 펩티드의 서열과 본원에서 정의된 보르데텔라 CyaA로부터 유래하는 부분(또는 단편)의 서열은 7개 초과의 연속적인 아미노산 잔기에 대해 동일성(100% 유사성)을 공유하지 않는다.
특정 실시양태에서, 이종 폴리펩티드는 9 내지 500개 아미노산 잔기, 특히 9 내지 400개 잔기, 9 내지 300개 잔기, 9 내지 200개 잔기, 9 내지 100개 잔기, 20 내지 500개 잔기, 20 내지 400개 잔기, 20 내지 300개 잔기, 20 내지 200개 잔기, 20 내지 100개 잔기, 50 내지 500개 잔기, 50 내지 400개 잔기, 50 내지 300개 잔기, 50 내지 200개 잔기, 50 내지 100개 잔기, 100 내지 500개 잔기, 100 내지 400개 잔기, 100 내지 300개 잔기 또는 100 내지 200개 잔기 범위의 크기를 갖는다. 이종 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 크기는 27 내지 1500개 뉴클레오티드, 특히 27 내지 1200개 뉴클레오티드, 27 내지 900개 뉴클레오티드, 27 내지 600개 뉴클레오티드, 27 내지 300개 뉴클레오티드, 60 내지 1500개 뉴클레오티드, 60 내지 1200개 뉴클레오티드, 60 내지 900개 뉴클레오티드, 60 내지 600개 뉴클레오티드, 60 내지 300개 뉴클레오티드, 150 내지 1500개 뉴클레오티드, 150 내지 1200개 뉴클레오티드, 150 내지 900개 뉴클레오티드, 150 내지 600개 뉴클레오티드, 150 내지 300개 뉴클레오티드, 300 내지 1500개 뉴클레오티드, 300 내지 1200개 뉴클레오티드, 300 내지 900개 뉴클레오티드 또는 300 내지 600개 뉴클레오티드 범위에 있다. 단, 폴리뉴클레오티드의 크기(뉴클레오티드 수)가 3의 배수이다.
특정 실시양태에서, 이종 폴리펩티드는, 바람직하게는 상기에 정의된 크기 범위와 함께, 음전하를 갖는다. 즉, 이종 폴리펩티드는 산성이다. 또 다른 실시양태에서, 이종 폴리펩티드 단편은 음전하를 갖는다. 즉, 상기 이종 폴리펩티드 단편은 산성이다. 이종 폴리펩티드 단편은 전체 이종 폴리펩티드 크기의 10% 내지 40%, 바람직하게는 15% 내지 30% 크기의 연속된 아미노산 잔기의 연쇄를 갖는 것으로 정의된다.
특히, 정전하는 이종 폴리펩티드 내에 포함된 리신 및 아르기닌의 개수에서 아스파르트산 및 글루타민산의 개수를 뺀 것으로 정의된다. 한 실시양태에서, 이종 폴리펩티드의 정전하는 -1 이하, 특히 -2, -3, -4, -5, -10, -15, -20, -30, -40, -45 또는 -50 이하이다. 특정 실시양태에서, 바람직하게는 상기의 정전하 값 중 하나와 조합하여, 이종 폴리펩티드의 정전하는 -55, -60, -70 또는 -80 이상이다. 다시 말해서, 이종 폴리펩티드의 정전하는 -55 내지 -1, -50 내지 -2 또는 -40 내지 -3 범위에 있다. 비교로서, 전형적인 OVA 에피토프(SIINFEKL)는 0의 정전하를 갖는다.
본 발명의 키메라 단백질 내에 시험된 여러 이종 폴리펩티드의 예를 본원에서 보고한다:
- 키메라 단백질 Btpr_114 및 Btpr_116 내에 시험된 펩티드 216(서열 번호 34)은 -16의 정전하를 갖는다;
- 키메라 단백질 Btpr_115 및 Btpr_117 내에 시험된 펩티드 217(서열 번호 36)은 -37의 정전하를 갖는다;
- 키메라 단백질 Btpr_143 및 Btpr_144 내에 시험된 펩티드 233(서열 번호 38)은 -13의 정전하를 갖는다;
- 키메라 단백질 Btpr_145 및 Btpr-146 내에 시험된 펩티드 234(서열 번호 40)는 -38의 정전하를 갖는다;
- 키메라 단백질 Btpr_161 및 Btpr_169 내에 시험된 펩티드 326(서열 번호 42)은 -11의 정전하를 갖는다;
- 키메라 단백질 Btpr_162 및 Btpr_170 내에 시험된 펩티드 327(서열 번호 46)은 -10의 정전하를 갖는다;
- 키메라 단백질 Btpr_163 및 Btpr_171 내에 시험된 펩티드 328(서열 번호 50)은 -18의 정전하를 갖는다;
- 키메라 단백질 Btpr_164 및 Btpr_172 내에 시험된 펩티드 329(서열 번호 54)는 -19의 정전하를 갖는다;
- 키메라 단백질 Btpr_165 및 Btpr_173 내에 시험된 펩티드 330(서열 번호 44)은 -30의 정전하를 갖는다;
- 키메라 단백질 Btpr_166 및 Btpr_174 내에 시험된 펩티드 331(서열 번호 48)은 -30의 정전하를 갖는다;
- 키메라 단백질 Btpr_167 및 Btpr_175 내에 시험된 펩티드 332(서열 번호 52)는 -45의 정전하를 갖는다; 그리고
- 키메라 단백질 Btpr_168 및 Btpr_176 내에 시험된 펩티드 333(서열 번호 56)은 -46의 정전하를 갖는다.
특정 실시양태에서, 상기 이종 폴리펩티드는 하나 또는 여러 항원(들)을 포함하거나 이들로 이루어지며, 각 항원은 본원에서 정의된 하나 또는 여러 에피토프(들)을 포함한다. 본 발명 내에서, 항원은 상기 폴리펩티드(면역원성 폴리펩티드) 내 포함된 하나 또는 여러 에피토프에 대한 면역 반응, 특히 T 세포 면역 반응을 유발할 수 있는 폴리펩티드로 정의된다. 항원은 세포 또는 바이러스 기원의 전장의 항원성 폴리펩티드, 전장의 항원성 폴리펩티드의 단편으로서 상기 단편 내 포함된 항원성 결정 인자에 대한 면역 반응, 특히 T 세포 면역 반응을 유발할 수 있는 단편, 또는 합성의 비천연 폴리펩티드로서, 단, 합성 폴리펩티드가 상기 합성 폴리펩티드에 포함된 항원성 결정인자에 대한 T 세포 면역 반응을 유발할 수 있다면, 서로 융합된 여러 항원성 폴리펩티드의 하나 또는 여러 부분(들)로 이루어지는 폴리펩티드이다.
따라서, 상기 이종 폴리펩티드는 하나 이상의 에피토프(들), 바람직하게는 하나 이상의 CD8+ 에피토프(들) 및/또는 하나 이상의 CD4+ 에피토프(들)을 가지고 있거나, 포함하거나 이들로 이루어진다. "이상(at least)"은 에피토프 하나 또는 다수를 의미한다. 본원에서 에피토프는 세포 매개 면역 반응, 특히 T 세포 면역 반응의 유발 또는 유도에 관련된 임의의 아미노산 서열로서 정의되며, 선형 또는 입체형태이다. 따라서, 본원에 기재된 에피토프는 숙주 세포의 APC(항원 제시 세포)에 의해 프로세스되는 것, 특히 MHC I형(주조직 적합 복합체) 분자와 관련하여 인식되는 T 에피토프, 예를 들어 표적 세포가 CD8+ T 림프구인 에피토프, 또는 MHC II형 분자와 관련하여 인식되는 T 에피토프, 예를 들어 표적 세포가 CD4+ T 림프구인 에피토프를 포함한다. 본 발명에서 에피토프는 바람직하게는 9 내지 17개, 바람직하게는 9 내지 12개 잔기 범위의 크기를 갖는다. 본원에 기재된 에피토프는 또한 체액성 반응과 관련된 B 에피토프(들)을 포함한다.
본 발명자들은 다양한 기원의 여러 항원을 포함하는 특정 이종 폴리펩티드를 설계하였다. 본 이종 폴리펩티드는 마우스 및 인간 MHC I형(CD8 반응) 및 MHC II형(CD4 반응) 제한된 T-세포 에피토프: GFP11, MOG35 -55, OVA257 -264, IE191-110, CLA4, HA512-520, OVA323 -339, MELAN-A26-35, HA307-319, LCMV GP33-41, MAGEA3111 -180, MAGEA3244 -285, HPV16E7의 단편 및 HPV18E7의 단편을 포함하는 항원을 갖는다. 상기 항원의 아미노산 서열은 서열 번호 24에 개시되어 있으며 본 발명의 일부분이다.
특정 실시양태에서, 상기 이종 폴리펩티드는 하나 이상의 항원(들) 또는 하나 이상의 에피토프(들), 바이러스 기원의 상기 하나 이상의 항원(들) 또는 하나 이상의 에피토프(들)을 포함하거나 이들로 이루어진다. 따라서, 상기 하나 이상의 항원(들) 또는 하나 이상의 에피토프(들)은 HIV, HBV, HCV, 아데노바이러스, EBV, 헤르페스 바이러스, HTLV.1 바이러스 및 CMV에서 유래한다. 특정 실시양태에서, 상기 하나 이상의 항원(들) 또는 하나 이상의 에피토프(들)은 HPV에서 유래한다. 특정 실시양태에서, 상기 이종 폴리펩티드, 하나 이상의 항원(들) 또는 하나 이상의 에피토프(들)은 HPV로부터 유래하지 않는다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드가 1개 초과의 에피토프 또는 1개 초과의 항원을 포함하거나 이들로 이루어질 때, 상기 에피토프 또는 항원은 동일한 목(Order), 동일한 군(Group), 동일한 과(Family), 동일한 아과(Subfamily), 동일한 속(Genus) 또는 동일한 종(Spcies)에서 유래하고/거나 상이한 목, 상이한 군, 상이한 아, 상이한 아과, 상이한 속 또는 상이한 종에서 유래한다.
특정 실시양태에서, 상기 이종 폴리펩티드는 세포 유래의 하나 이상의 항원(들) 또는 하나 이상의 에피토프(들)을 포함하거나 이들로 이루어진다. 따라서 상기 하나 이상의 항원(들) 또는 하나 이상의 에피토프(들)은 원핵 또는 진핵 세포에서 유래한다.
한 실시양태에서, 상기 하나 이상의 항원(들) 또는 하나 이상의 에피토프(들)은 박테리아, 진균 또는 기생충, 예를 들어 클라미디아(Chlamydia ), 플라스모디윰(Plasmodium), 캔디다(Candida ), 레이슈마니아(Leishmania ) 또는 마이코박테리움 튜베큘로시스(Mycobacterium tuberculosis)로부터 유래되나 이에 제한되지는 않는다. 특정 실시양태에서, 상기 하나 이상의 항원(들) 또는 하나 이상의 에피토프(들)은 보르데텔라 균주로부터 유래하지 않는다. 또 다른 실시양태에서, 상기 하나 이상의 항원(들) 또는 하나 이상의 에피토프(들)은 CyaA가 아닌 보르데텔라 균주의 항원으로부터 유래한다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드가 1개 초과의 에피토프 또는 1개 초과의 항원을 포함하거나 이들을 이루어질 때, 상기 에피토프들 또는 항원들은 동일한 박테리아, 동일한 진균 또는 동일한 기생충로부터 유래한다. 또 다른 실시양태에서, 폴리펩티드가 1개 초과의 에피토프 또는 1개 초과의 항원을 포함하거나 이들을 이루어질 때, 상기 에피토프들 또는 항원들은 상이한 박테리아, 상이한 진균 또는 상이한 기생충로부터 유래한다.
또 다른 실시양태에서, 상기 하나 이상의 항원(들) 또는 하나 이상의 에피토프(들)은 포유동물 세포로부터 유래한다. 특정 실시양태에서, 상기 하나 이상의 항원(들) 또는 하나 이상의 에피토프(들)은 종양 항원, 즉, 종양 또는 암세포에 의해 발현되는 펩티드로부터 유래되며, 종양은 자기이거나 또는 병원체에 의해 유도된다; 특정 실시양태에서, 종양 항원은 자기, 특히 인간 기원이다. 용어 "종양 항원"은 종양 항원의 하기 군을 포함하고, 본 발명의 키메라 단백질에 포함된 이종 폴리펩티드는 하기 군에서 하나 이상 선택될 수 있다: (a) 종양태아성 종양 항원, (b) 종양바이러스 종양 항원, (c) 매우 다양한 정상 조직에서 발현되거나 종양에서 과발현되는 과발현/축적된 종양 항원, (d) 많은 종양에서 발현되나 정상 조직에서 발현되지 않는 공유 종양-특이적 항원 또는 고환암 항원(BAGE 과, GAGE 과, MAGE 과, SAGE 과 및 XAGE 과 포함), (e) 계통-제한된 종양 항원, (f) 흔하게 발현되는 유전자 내 점 돌연변이 결과로 생성되는 변이된 종양 항원; 및 (g) 종양 기원이나 종양 특이적이지 않은 정상 조직에서 발현되는 분화 종양 항원.
본 발명의 이종 폴리펩티드가 여러 항원을 포함할 때, 상기 항원들은 융합되고, 펩티드 링커에 의해 분리되거나, 또는 두 개 이상의 상기 항원들은 융합되지만 두 개 이상의 항원이 하나의 링커에 의해 분리된다. 특정 실시양태에서, 상기 펩티드 링커는 2 내지 10개 잔기 범위의 크기를 갖는다. 링커는 항원을 분리시키고/거나 면역 반응을 향상시키기 위해 첨가될 수 있다.
특정 실시양태에서, 상기 이종 폴리펩티드는 하나 이상의 항원(들) 또는 하나 이상의 에피토프(들)을 포함하거나 이들로 이루어지고, 상기 하나 이상의 항원(들) 또는 하나 이상의 에피토프(들)은 HPV로부터 유래한다. 특정 실시양태에서, 상기 이종 폴리펩티드는 HPV로부터 유래하는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 항원들을 포함하거나 이들로 이루어진다. 바람직한 실시양태에서, 상기 이종 폴리펩티드는 각각 상이한 HPV 형으로부터 유래하는 3개 이상의 HPV 항원을 포함한다. 특정 실시양태에서, 상기 HPV 항원(들)은 하나 이상의 에피토프(들), 바람직하게는 하나 이상의 CD8+ 에피토프(들) 및/또는 하나 이상의 CD4+ 에피토프(들)을 포함하거나 이들로 이루어진다.
따라서, 본 발명은 N-말단에서 C-말단으로:
(a) 서열 번호 2에 개시된 보르데텔라 페르투시스 CyaA 단백질의 단편으로서, 상기 단편의 서열은 서열 번호 2의 첫 번째 잔기로 시작하여 서열 번호 2의 위치 183 내지 위치 227에 위치한 잔기로 끝나는 것인 단편 또는 상기 단편과 95% 이상의 유사성을 갖는 변이체;
(b) 상이한 HPV 형으로부터 유래하는 3개 이상의 HPV 항원을 포함하는 이종 폴리펩티드; 및
(c) 서열 번호 2에 개시된 보르데텔라 페르투시스 CyaA 단백질의 단편으로서, 상기 단편의 서열은 서열 번호 2의 위치 321 내지 위치 387에 위치한 잔기로 시작하여 서열 번호 2의 마지막 잔기로 끝나는 것인 단편 또는 상기 단편과 95% 이상의 유사성을 갖는 변이체를 포함하거나 이들로 이루어지는 키메라 단백질에 관한 것이다.
서열 번호 2의 보르데텔라 페르투시스 CyaA 단백질의 단편으로서, 상기 단편의 서열은 서열 번호 2의 첫 번째 잔기로 시작하여 서열 번호 2의 위치 183 내지 위치 227에 위치한 잔기로 끝나는 것인 단편과 관련하여, 그리고 서열 번호 2에 개시된 보르데텔라 페르투시스 CyaA 단백질의 단편으로서, 상기 단편의 서열은 서열 번호 2의 위치 321 내지 위치 387에 위치한 잔기로 시작하여 서열 번호 2의 마지막 잔기로 끝나는 것인 단편과 관련하여, CyaA 유래 단백질에 관한 상기에 기재된 정의는 키메라 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 맥락 내의 상기 단편에 동일하게 적용한다.
95% 이상의 유사성을 갖는 변이체에 관한 상기에 기재된 정의는 키메라 단백질의 맥락에서 기재된 단편에 동일하게 적용한다. 유사하게, 이종 폴리펩티드와 관련한 정의는 상기 이종 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 정의하는 데 적용한다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 키메라 단백질은
1) N-말단에서 C-말단으로, (a) 서열 번호 2, 4 또는 6의 잔기 1 내지 227로 이루어지는 단편, (b) 각각 상이한 HPV 형으로부터 유래하는 3개 이상의 HPV 항원을 포함하는 이종 폴리펩티드; 및 (c) 서열 번호 2, 4 또는 6의 잔기 321 내지 1706으로 이루어지는 단편;
2) N-말단에서 C-말단으로, (a) 서열 번호 8의 잔기 1 내지 227로 이루어지는 단편, (b) 각각 상이한 HPV 형으로부터 유래하는 3개 이상의 HPV 항원을 포함하는 이종 폴리펩티드; 및 (c) 서열 번호 8의 잔기 321 내지 1705로 이루어지는 단편;
3) N-말단에서 C-말단으로, (a) 서열 번호 2, 4 또는 6의 잔기 1 내지 183으로 이루어지는 단편, (b) 각각 상이한 HPV 형으로부터 유래하는 3개 이상의 HPV 항원을 포함하는 이종 폴리펩티드; 및 (c) 서열 번호 2, 4 또는 6의 잔기 387 내지 1706으로 이루어지는 단편;
4) N-말단에서 C-말단으로, (a) 서열 번호 8의 잔기 1 내지 183으로 이루어지는 단편, (b) 각각 상이한 HPV 형으로부터 유래하는 3개 이상의 HPV 항원을 포함하는 이종 폴리펩티드; 및 (c) 서열 번호 8의 잔기 387 내지 1705로 이루어지는 단편;
5) N-말단에서 C-말단으로, (a) 서열 번호 2, 4 또는 6의 잔기 1 내지 227 로 이루어지는 단편, (b) 상이한 HPV 형으로부터 유래하는 3개 이상의 HPV 항원을 포함하는 이종 폴리펩티드; 및 (c) 서열 번호 2, 4 또는 6의 잔기 387 내지 1706으로 이루어지는 단편;
6) N-말단에서 C-말단으로, (a) 서열 번호 8의 잔기 1 내지 227로 이루어지는 단편, (b) 각각 상이한 HPV 형으로부터 유래하는 3개 이상의 HPV 항원을 포함하는 이종 폴리펩티드; 및 (c) 서열 번호 8의 잔기 387 내지 1705로 이루어지는 단편;
7) N-말단에서 C-말단으로, (a) 서열 번호 2, 4 또는 6의 잔기 1 내지 183으로 이루어지는 단편, (b) 각각 상이한 HPV 형으로부터 유래하는 3개 이상의 HPV 항원을 포함하는 이종 폴리펩티드; 및 (c) 서열 번호 2, 4 또는 6의 잔기 321 내지 1706으로 이루어지는 단편; 및
8) N-말단에서 C-말단으로, (a) 서열 번호 8의 잔기 1 내지 183으로 이루어지는 단편, (b) 각각 상이한 HPV 형으로부터 유래하는 3개 이상의 HPV 항원을 포함하는 이종 폴리펩티드; 및 (c) 서열 번호 8의 잔기 321 내지 1705로 이루어지는 단편;을 포함하거나 이들로 이루어진다.
표현 "HPV 형"은 임의의 HPV 형, 특히 알파-파필로마바이러스, 베타-파필로마바이러스, 감마-파필로마바이러스, 델타-파필로마바이러스, 엡실론-파필로마바이러스, 제타-파필로마바이러스, 에타-파필로마바이러스, 쎄타-파필로마바이러스, 이오타-파필로마바이러스, 카파-파필로마바이러스, 람다-파필로마바이러스, 뮤-파필로마바이러스, 뉴-파필로마바이러스, 자이-파필로마바이러스, 오미크론-파필로마바이러스 및 파이-파필로마바이러스 속 중에서 선택된 HPV 형을 포함한다. 특정 실시양태에서, 인간 친화성을 갖는 파필로마바이러스, 예를 들어 알파-파필로마바이러스, 베타-파필로마바이러스, 감마-파필로마바이러스, 뮤-파필로마바이러스 또는 뉴-파필로마바이러스 속에 속하는 유형이 바람직하다. 특정 실시양태에서, 이종 폴리펩티드는 알파-파필로마바이러스 속의 HPV 형, 특히 알파-파필로마바이러스 속의 HPV 종 7 및 9에 속하는 유형으로부터의 항원을 포함하거나 이들로 이루어진다[17]. 따라서, 이종 폴리펩티드는 높은 발암성(oncogenic) HPV 표준 균종(type species), 예를 들어 HPV16, HPV18, HPV31, HPV33, HPV35, HPV45, HPV52 또는 HPV58로부터의 항원을 포함하거나 이들로 구성된다.
HPV 항원(들) 또는 에피토프(들)을 포함하는 키메라 단백질의 특정 실시양태에서, 이종 폴립펩티드에 포함된 상기 항원(들)은 HPV의 E1, E2, E4, E5, E6 및 E7 단백질 또는 그의 임의의 항원성 단편이거나 이들로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 이종 폴리펩티드에 포함된 상기 항원은 HPV 형의 E7 단백질이거나, 이종 폴리펩티드에 포함된 상기 항원들은 상이한 HPV 형의 E7 단백질 또는 상기 E7 단백질의 임의의 항원성 단편(E7 단편으로도 불림)이다. 바람직한 실시양태에서, E7 단백질 또는 그의 단편은 HPV16 형(서열 번호 25), HPV18 형(서열 번호 26), HPV31 형(서열 번호 27), HPV33 형(서열 번호 28), HPV45 형(서열 번호 29), HPV52 형(서열 번호 30) 또는 HPV58 형(서열 번호 32)으로부터 유래된다. 본 발명자들에 의해 확인된 HPV52 형의 E7 단백질 내에서 천연의 인간 자가 면역 에피토프(서열 번호 30에 개시됨)를 제거하기 위하여, 위치 84 및 86의 아미노산 잔기를 치환하였다(위치 84에서 M->L 및 위치 86에서 L->M); HPV52 형의 E7 단백질 내 상기 변형된 서열은 서열 번호 31에 개시된 바와 같으며 본 발명의 일부분이다.
특정 실시양태에서, 상기 이종 폴리펩티드는 HPV 형 E7 단백질의 3개 이상의 단편(항원성 단편)을 포함하거나 이들로 구성되며, 상기 단편 중 3개 이상은 상이한 HPV 형의 E7 단백질로부터 유래한다. 본 실시양태에서, "3개 이상의 단편"은 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개 단편을 의미하며, 단, 상기의 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개 단편 중에, 3개 이상이 상이한 HPV 형으로부터 유래한다. 바람직한 실시양태에서, 상기 이종 폴리펩티드는 6개의 E7 단편을 포함하거나 이들로 이루어지며, 그 중 3개는 3가지 상이한 HPV 형으로부터 유래한다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 이종 폴리펩티드는 8개의 E7 단편을 포함하거나 이들로 이루어지며, 그 중 4개가 4가지 상이한 HPV 형으로부터 유래한다.
특정 실시양태에서, 모든 E7 단편들은 상이한 HPV 형으로부터 유래한다. 또 다른 실시양태에서, 일부 E7 단편(3개 이상)만이 상이한 HPV 형으로부터 유래하고, 나머지 E7 단편 모두가 상기의 상이한 유형 중 하나로부터 유래하거나, 상이한 HPV 형 중 두 가지로부터 유래하거나, 상기 상이한 HPV 형 중 세 가지로부터 유래하거나, 상기 상이한 HPV 형 중 네 가지로부터 유래하거나, 상기 상이한 HPV 형 중 다섯 가지로부터 유래한다. 특정 실시양태에서, 이종 폴리펩티드가 4개 이상의 E7 단백질의 단편을 포함하거나 이들로 이루어지며, 상기 E7 단백질 중 3개 이상은 상이한 HPV 형의 E7 단백질로부터 유래하고, 상기 E7 단편 중 2개 이상은 하나의 HPV 형의 동일한 E7 단백질로부터 유래한다(한 E7 단편은 상이한 HPV 형의 E7 단편의 군 및 동일한 HPV 형의 E7 단편의 군 모두에 속한다). 비제한적인 예로서, HPV 형의 6개의 E7 단편을 갖는 이종 폴리펩티드의 경우 하기와 같은 조합이 발견될 수 있다: a) 제1 HPV 형 E7 단편 1개, 제2 HPV 형의 E7 단편 1개, 및 제3 HPV 형의 E7 단편 4개; b) 제1 HPV 형의 E7 단편 1개, 제2 HPV 형의 E7 단편 2개, 및 제3 HPV 형의 E7 단편 3개; 및 c) 제1 HPV 형의 E7 단편 2개, 제2 HPV 형의 E7 단편 2개, 및 제3 HPV 형의 E7 단편 2개.
특정 실시양태에서, HPV 형의 상기 E7 단편은 E7 단백질의 N-말단 부분 또는 E7 단백질의 C-말단 부분으로 이루어진다.
"E7의 N-말단 부분"은 E7 단백질의 처음 25%, 처음 30%, 처음 35%, 처음 40% 이상 이상이고, 처음 N-말단 아미노산 잔기로 시작하여 E7 단백질의 아미노산 잔기 길이의 최대 50%인 서열의 단편을 의미한다. 따라서, "처음 25%"는 E7 단백질의 잔기 1에서 시작하여 전장의 E7 단백질 크기의 25%에 대응하는 잔기에서 끝나는 서열의 폴리펩티드를 의미한다. 특정 실시양태에서, E7 단백질의 N-말단 부분으로 이루어지는 단편은 E7 단백질의 처음 28% 내지 처음 31% 범위에 있는 서열로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, E7 단백질의 N-말단 부분으로 이루어지는 단편은 E7 단백질의 처음 31% 내지 처음 41% 범위에 있는 서열로 이루어진다. 특정 실시양태는 서열 번호 25의 잔기 1 내지 29로 이루어지는 단편, 서열 번호 26의 잔기 1 내지 31로 이루어지는 단편, 서열 번호 27의 잔기 1 내지 28로 이루어지는 단편, 서열 번호 28의 잔기 1 내지 29로 이루어지는 단편, 서열 번호 29의 잔기 1 내지 32로 이루어지는 단편, 서열 번호 31의 잔기 1 내지 29로 이루어지는 단편 또는 서열 번호 32의 잔기 1 내지 29로 이루어지는 단편이다. 다른 실시양태는 서열 번호 25의 잔기 1 내지 34로 이루어지는 단편, 서열 번호 26의 잔기 1 내지 42로 이루어지는 단편, 서열 번호 27의 잔기 1 내지 32로 이루어지는 단편, 서열 번호 28의 잔기 1 내지 31로 이루어지는 단편, 서열 번호 29의 잔기 1 내지 37로 이루어지는 단편, 서열 번호 31의 잔기 1 내지 31로 이루어지는 단편 또는 서열 번호 32의 잔기 1 내지 31로 이루어지는 단편이다.
"E7의 C-말단 부분"은 마지막 아미노산 잔기로 시작하여 E7 단백질의 아미노산 잔기 길이의 마지막 25%, 마지막 30%, 마지막 40%, 마지막 50%, 마지막 60% 이상이고, E7 단백질의 최대 마지막 70% 또는 마지막 80%인 서열의 단편을 의미한다. 따라서, "마지막 25%"는 E7 단백질의 마지막 잔기로 끝나고 전장의 E7 단백질 크기의 25%에 대응하는 잔기에서 시작하는 서열의 폴리펩티드를 의미한다. 특정 실시양태에서, E7 단백질의 C-말단 부분으로 이루어지는 단편은 E7 단백질의 마지막 55% 내지 마지막 61% 범위에 있는 서열로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, E7 단백질의 C-말단 부분으로 이루어지는 단편은 E7 단백질의 마지막 60% 내지 마지막 70% 범위에 있는 서열로 이루어진다. 특정 실시양태는 서열 번호 25의 잔기 43 내지 98로 이루어지는 단편, 서열 번호 26의 잔기 43 내지 105로 이루어지는 단편, 서열 번호 27의 잔기 42 내지 98로 이루어지는 단편, 서열 번호 28의 잔기 43 내지 97로 이루어지는 단편, 서열 번호 29의 잔기 44 내지 106으로 이루어지는 단편, 서열 번호 31의 잔기 45 내지 99로 이루어지는 단편 또는 서열 번호 32의 잔기 44 내지 98로 이루어지는 단편이다. 다른 실시양태는 서열 번호 25의 잔기 35 내지 98로 이루어지는 단편, 서열 번호 26의 잔기 43 내지 105로 이루어지는 단편, 서열 번호 27의 잔기 33 내지 98로 이루어지는 단편, 서열 번호 28의 잔기 32 내지 97로 이루어지는 단편, 서열 번호 29의 잔기 38 내지 106으로 이루어지는 단편, 서열 번호 31의 잔기 32 내지 99로 이루어지는 단편 또는 서열 번호 32의 잔기 32 내지 98로 이루어지는 단편이다.
특정 실시양태에서, 상기 이종 폴리펩티드는 동일한 HPV 형의 E7 단백질의 본원에서 정의된 N-말단 단편 및 C-말단 단편을 포함한다. 특정 실시양태에서, 상기 이종 폴리펩티드가 동일한 HPV 형의 E7 단백질의 N-말단 단편 및 C-말단을 포함할 때(융합되지 않음), N-말단 부분과 C-말단 부분의 크기의 합은 전장의 E7 단백질의 크기를 초과하지 않는다.
또 다른 실시양태에서, 상기 이종 폴리펩티드가 제1 HPV 형의 E7 단백질의 본원에서 정의된 N-말단 단편 및 C-말단 단편, 제2 HPV 형의 E7 단백질의 본원에서 정의된 N-말단 단편 및 C-말단 단편, 제3 HPV 형의 E7 단백질의 본원에서 정의된 N-말단 단편 및 C-말단 단편 및, 경우에 따라, 제4 HPV 형의 E7 단백질의 본원에서 정의된 N-말단 단편 및 C-말단 단편을 포함한다. 상기 N-말단 및 C-말단 단편들은 폴리펩티드에서 각각 군을 이룰 수 있다. 또한, 이들은 천연 E7 단백질 내 위치에 대해 C-말단 단편이 N-말단 단편의 상류에 위치하도록 역위될 수 있다.
따라서, 본 발명의 키메라 단백질은 N-말단에서 C-말단으로, (i) 제1 HPV 형의 E7 단백질의 C-말단 부분, 제2 HPV 형의 E7 단백질의 C-말단 부분, 제3 HPV 형의 E7 단백질의 C-말단 부분, 또는 경우에 따라 제4 HPV 형의 E7 단백질의 C-말단 부분, 및 (ii) 상기 제1 HPV 형의 E7 단백질의 N-말단 부분, 상기 제2 HPV 형의 E7 단백질의 N-말단 부분, 상기 제3 HPV 형의 E7 단백질의 N-말단 부분, 및 경우에 따라 상기 제4 HPV 형의 E7 단백질의 N-말단 부분을 포함하거나 이들로 이루어지는 이종 폴리펩티드를 포함한다.
상기 정의에서 용어 "경우에 따라"는 HPV의 4가의 존재를 나타낸다. 따라서, 키메라 단백질은 상기에 정의된 바와 같이 제1, 제3, 제3 HPV의 E7 단백질의 C-말단 부분 및 N-말단 부분 모두, 및, 경우에 따라, 상이한 HPV의 제4 E7 단백질의 C-말단 부분 및 N-말단 부분을 포함한다.
특정 실시양태에서, 상이한 E7 단편이 융합되거나 펩티드 링커에 의해서 분리되거나, 또는 두 개 이상의 E7 단편이 융합되지만 두 개 이상의 E7 단편이 펩티드 링커에 의해 분리된다. 특정 실시양태에서, 상기 펩티드 링커는 2 내지 10 개 잔기 범위의 크기를 갖는다. 특정 실시양태에서, 상기 링커는 디펩티드 AS이다. 링커는 각 단편 또는 일부 단편을 분리시키고/거나 면역 반응을 향상시키기 위해 첨가될 수 있다. 특정 실시양태에서, 디펩티드 AS는 HPV의 E7 단편의 C-말단 부분의 바로 상류에첨가된다. 특정 실시양태에서, 디펩티드 AS는 HPV 18형의 E7 단편의 C-말단 부분의 바로 상류에, 특히 상기 단편의 상류에만 첨가된다.
본 발명의 특정 키메라 단백질은 N-말단에서 C-말단으로, 제1 HPV 형의 E7 단백질의 C-말단 부분, 제2 HPV 형의 E7 단백질의 C-말단 부분, 제3 HPV 형의 E7 단백질의 C-말단 부분, 상기 제1 HPV 형의 E7 단백질의 N-말단 부분, 상기 제2 HPV 형의 E7 단백질의 N-말단 부분, 상기 제3 HPV 형의 E7 단백질의 N-말단 부분이 융합되어 이루어지는 이종 폴리펩티드를 포함하거나 이들로 이루어진다.
본 발명의 또 다른 특정 키메라 단백질은 N-말단에서 C-말단으로, 제1 HPV 형의 E7 단백질의 C-말단 부분, 제2 HPV 형의 E7 단백질의 C-말단 부분, 제3 HPV 형의 E7 단백질의 C-말단 부분, 제4 HPV 형의 E7 단백질의 C-말단 부분, 상기 제1 HPV 형의 E7 단백질의 N-말단 부분, 상기 제2 HPV 형의 E7 단백질의 N-말단 부분, 상기 제3 HPV 형의 E7 단백질의 N-말단 부분, 상기 제4 HPV 형의 E7 단백질의 N-말단 부분이 융합되어 이루어지는 이종 폴리펩티드를 포함하거나 이들로 이루어진다.
본원에서 기재된 키메라 단백질의 특정 실시양태에서, 상기 제1, 제2 및 제3 HPV 형은 HPV16, HVP18 및 HPV45 형이다. 특정 실시양태에서, 상기 제1, 제2 및 제3 HPV 형은 HPV16, HVP18 및 HPV45 형이고, AS 디펩티드가 HPV18형의 E7 단백질의 C-말단 부분의 바로 상류에 첨가된다. 또 다른 실시양태에서, 상기 제1, 제2 및 제3 HPV 형은 HPV31, HPV52 및 HPV58 형이다. 또 다른 실시양태에서, 상기 제1, 제2 및 제3 HPV 형은 HPV31, HVP33 및 HPV52 형이다. 또 다른 실시양태에서, 상기 제1, 제2, 제3 및 제4 HPV 형은 HPV31, HPV33, HPV52 및 HPV58 형이다. 또 다른 실시양태에서, 상기 제1, 제2, 제3 및 제4 HPV 형은 HPV16, HVP18, HPV33 및 HPV45 형이다. 또 다른 실시양태에서, 상기 제1, 제2, 제3 및 제4 HPV 형은 HPV16, HVP18, HPV45 및 HPV58 형이다. 또 다른 실시양태에서, 상기 제1, 제2, 제3 및 제4 HPV 형은 HPV16, HVP18, HPV33 및 HPV45 형이고, AS 디펩티드는 HPV18형의 E7 단백질의 C-말단 부분의 바로 상류에 첨가된다. 또 다른 실시양태에서, 상기 제1, 제2, 제3 및 제4 HPV 형은 HPV16, HVP18, HPV45 및 HPV58 형이고, AS 디펩티드는 HPV18형의 E7 단백질의 C-말단 부분의 바로 상류에 첨가된다.
특정 실시양태에서, HPV 형의 E7 단백질의 N-말단 부분은 E7 단백질의 처음 28% 내지 처음 31% 범위에 있는 서열로 이루어지고 상기 동일한 HPV 형의 E7 단백질의 C-말단 부분은 E7 단백질의 마지막 55% 내지 마지막 61% 범위에 있는 서열로 이루어진다. 동일한 HPV 형의 E7 단백질의 N-말단 부분/C-말단 부분 쌍의 예시는 상기 이종 폴리펩티드 내에 그들의 배열과 상관없으며, 특히 본원에 기재된 배열에 따라 하기와 같다:
- 서열 번호 25의 잔기 1 내지 29 / 서열 번호 25의 잔기 43 내지 98;
- 서열 번호 26의 잔기 1 내지 31 / 서열 번호 26의 잔기 43 내지 105;
- 서열 번호 27의 잔기 1 내지 28 / 서열 번호 27의 잔기 42 내지 98;
- 서열 번호 28의 잔기 1 내지 29 / 서열 번호 28의 잔기 43 내지 97;
- 서열 번호 29의 잔기 1 내지 32 / 서열 번호 29의 잔기 44 내지 106;
- 서열 번호 31의 잔기 1 내지 29 / 서열 번호 31의 잔기 45 내지 99; 및
- 서열 번호 32의 잔기 1 내지 29 / 서열 번호 32의 잔기 44 내지 98.
또 다른 실시양태에서, HPV 형의 E7 단백질의 N-말단 부분은 E7 단백질의 처음 31% 내지 처음 41% 범위에 있는 서열로 이루어지고 E7 단백질의 C-말단 부분은 E7 단백질의 마지막 60% 내지 마지막 70% 범위에 있는 서열로 이루어진다. 특정 실시양태에서, E7 단백질의 N-말단 부분의 크기와 C-말단 부분의 크기의 합은 최대 E7 단백질 크기의 100%이다. 이 경우에, 전체 E7 단백질(두 개의 단편으로)은 이종 폴리펩티드 내에 포함될 수 있다. 동일한 HPV 형의 E7 단백질의 N-말단 부분/C-말단 부분 쌍의 예시는 상기 이종 폴리펩티드 내에 그들의 배열과 상관없으며, 특히 본원에 기재된 배열에 따르면 하기와 같다:
- 서열 번호 25의 잔기 1 내지 34 / 서열 번호 25의 잔기 35 내지 98;
- 서열 번호 26의 잔기 1 내지 42 / 서열 번호 26의 잔기 43 내지 105;
- 서열 번호 27의 잔기 1 내지 32 / 서열 번호 27의 잔기 33 내지 98;
- 서열 번호 28의 잔기 1 내지 31 / 서열 번호 28의 잔기 32 내지 97;
- 서열 번호 29의 잔기 1 내지 37 / 서열 번호 29의 잔기 38 내지 106;
- 서열 번호 31의 잔기 1 내지 31 / 서열 번호 31의 잔기 32 내지 99; 및
- 서열 번호 32의 잔기 1 내지 31 / 서열 번호 32의 잔기 32 내지 98.
키메라 단백질의 특정 실시양태에서, 상기 제1, 제2, 및 제3 HPV 형이 HPV16, HVP18 및 HPV45 형일 때, 이종 폴리펩티드는 서열 번호 34에 개시된 서열(서열 번호 33에 개시된 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩됨) 또는 서열 번호 36에 개시된 서열(서열 번호 35에 개시된 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩됨)로 이루어진다.
키메라 단백질의 특정 실시양태에서, 상기 제1, 제2, 및 제3 HPV 형이 HPV31, HVP52 및 HPV58 형일 때, 이종 폴리펩티드는 서열 번호 42에 개시된 서열(서열 번호 41에 개시된 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩됨) 또는 서열 번호 44에 개시된 서열(서열 번호 43에 개시된 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩됨)로 이루어진다.
키메라 단백질의 특정 실시양태에서, 상기 제1, 제2, 및 제3 HPV 형이 HPV31, HVP33 및 HPV52 형일 때, 이종 폴리펩티드는 서열 번호 46에 개시된 서열(서열 번호 45에 개시된 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩됨) 또는 서열 번호 48에 개시된 서열(서열 번호 47에 개시된 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩됨)로 이루어진다.
키메라 단백질의 특정 실시양태에서, 상기 제1, 제2, 제3 및 제4 HPV 형이 HPV31, HPV33, HPV52 및 HPV58 형일 때, 이종 폴리펩티드는 서열 번호 38에 개시된 서열(서열 번호 37에 개시된 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩됨) 또는 서열 번호 40에 개시된 서열(서열 번호 39에 개시된 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩됨)로 이루어진다.
키메라 단백질의 특정 실시양태에서, 상기 제1, 제2, 제3 및 제4 HPV 형이 HPV16, HVP18, HPV33 및 HPV45 형일 때, 이종 폴리펩티드는 서열 번호 50에 개시된 서열(서열 번호 49에 개시된 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩됨) 또는 서열 번호 52에 개시된 서열(서열 번호 51에 개시된 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩됨)로 이루어진다.
키메라 단백질의 특정 실시양태에서, 상기 제1, 제2, 제3 및 제4 HPV 형이 HPV16, HVP18, HPV45 및 HPV58 형일 때, 이종 폴리펩티드는 서열 번호 54에 개시된 서열(서열 번호 53에 개시된 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩됨) 또는 서열 번호 56에 개시된 서열(서열 번호 55에 개시된 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩됨)로 이루어진다.
본 발명은 또한 N-말단에서 C-말단으로, 제1 HPV 형의 E7 단백질의 C-말단 부분, 제2 HPV 형의 E7 단백질의 C-말단 부분, 제3 HPV 형의 E7 단백질의 C-말단 부분, 경우에 따라, 제4 HPV 형의 E7 단백질의 C-말단 부분, 상기 제1 HPV 형의 E7 단백질의 N-말단 부분, 상기 제2 HPV 형의 E7 단백질의 N-말단 부분, 상기 제3 HPV 형의 E7 단백질의 N-말단 부분, 경우에 따라 상기 제4 HPV 형의 E7 단백질의 N-말단 부분을 포함하거나 이들로 이루어지는 폴리펩티드에 관한 것이다. 특히, HPV 형의 E7 단백질의 N-말단 부분, HPV 형의 E7 단백질의 C-말단 부분, 경우에 따라 링커, 특히 AS 디펩티드의 존재, HPV 형의 특성, 서열 번호 25, 26, 27, 28, 29, 31 및 32로부터의 E7 단백질의 특정 단편의 정의와 관련하여, 본 발명의 키메라 단백질에 포함된 이종 폴리펩티드에 대해 본원에서 제공된 정의는 이와 같은 폴리펩티드에 동일하게 적용된다. 특히 상기 제1, 제2, 제3, 제4, 제5 및 제6 HPV 형 및, 적용가능한 경우, 상기 제7 HPV 형의 일반적 또는 특이적 조합과 관련하여, 본 발명의 키메라 단백질(들)을 포함하는 조성물에 대해 본원에서 제공된 정의는 이와 같은 폴리펩티드에 동일하게 적용된다.
특정 실시양태에서, 상기 폴리펩티드는 서열 번호 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54 또는 56에 개시된 서열로 이루어진다. 본 발명은 또한 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 특히 서열 번호 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53 및 55에 개시된 폴리뉴클레오티드 및 상기 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 및 상기 폴리뉴클레오티드 또는 상기 폴리뉴클레오티드 포함 벡터를 포함하는 세포 또는 세포 배양물에 관한 것이다; 모두는 본원에서 정의된 바와 같다.
크기(200개 초과 잔기), 복합도(여러 시스테인 잔기의 존재) 및 음전하에도 불구하고, 상기 폴리펩티드는 놀랍게도 항원 제시 세포의 세포 기질로 효율적으로 이동되어 강력하고 큰 T-세포 면역 반응을 얻을 수 있다.
특정 실시양태에서, 본 발명은 서열 번호 58 또는 서열 번호 61에 개시된 서열을 포함하거나 이들로 이루어지는 본 발명의 키메라 단백질에 관한 것이다. 상기 키메라 단백질은 각각 서열 번호 57 또는 서열 번호 60에 개시되어 있는 서열의 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩된다. 특정 실시양태에서, 서열 번호 58 또는 서열 번호 61의 키메라 단백질은 각각 서열 번호 59 또는 서열 번호 62 서열의 플라스미드로부터 발현된다.
특정 실시양태에서, 본 발명은 또한 서열 번호 64 또는 서열 번호 67에 개시된 서열을 포함하거나 이들로 이루어지는 본 발명의 키메라 단백질에 관한 것이다. 상기 키메라 단백질은 각각 서열 번호 63 또는 서열 번호 66에 개시된 서열의 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩된다. 특정 실시양태에서, 서열 번호 64 또는 서열 번호 67의 키메라 단백질은 각각 서열 번호 65 및 서열 번호 68 서열의 플라스미드로부터 발현된다.
따라서, 본원에서 기재된 바와 같이, HPV로부터 유래하는 하나 이상의 항원(들) 또는 하나 이상의 에피토프(들)을 포함하거나 이들로 이루어지는 이종 폴리펩티드를 포함하는 본 발명의 임의의 키메라 단백질은 서열 번호 59, 서열 번호 62, 서열 번호 65 및 서열 번호 68의 플라스미드를 발현 벡터로 사용하여 발현될 수 있다. 다음 순서로, 서열 번호 59의 뉴클레오티드 904와 1731 사이에 포함된 폴리뉴클레오티드를 제거하고, 본 발명의 이종 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드로 대체하여, 상기 이종 폴리펩티드를 포함하는 본 발명의 키메라 단백질을 발현할 수 있다. 유사하게, 서열 번호 62의 뉴클레오티드 772와 1599 사이에 포함된 폴리뉴클레오티드를 제거하고, 본 발명의 이종 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드로 대체하여, 상기 이종 폴리펩티드를 포함하는 본 발명의 키메라 단백질을 발현할 수 있다. 유사하게, 서열 번호 65의 뉴클레오티드 904와 1836 사이에 포함된 폴리뉴클레오티드를 제거하고, 본 발명의 이종 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드로 대체하여, 상기 이종 폴리펩티드를 포함하는 본 발명의 키메라 단백질을 발현할 수 있다. 유사하게, 서열 번호 68의 뉴클레오티드 772와 1704 사이에 포함된 폴리뉴클레오티드를 제거하고, 본 발명의 이종 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드로 대체하여, 상기 이종 폴리펩티드를 포함하는 본 발명의 키메라 단백질을 발현할 수 있다.
본 발명의 특정 실시양태에서, 서열 번호 59의 뉴클레오티드 904와 1731 사이에 포함된 폴리뉴클레오티드를 제거하고, 고유한 HPV E7 단백질로부터 유래된 본 발명의 이종 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드로 대체한다. 여기서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호 70, 서열 번호 71, 서열 번호 74, 서열 번호 73 및 서열 번호 72의 서열을 각각 갖는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 중에서 선택된다. 상기 구조물은 서열 번호 70, 서열 번호 71, 서열 번호 74, 서열 번호 73 또는 서열 번호 72를 갖는 이종 폴리펩티드를 포함하는 본 발명의 1가 키메라 단백질을 발현할 수 있다. 여기서, 상기 이종 폴리펩티드들은 각각 산성 영역이 결실된 HPV31 E7, 산성 영역이 결실된 HPV33 E7, 산성 영역이 결실된 HPV58 E7, 산성 영역이 결실된 HPV52 E7 및 산성 영역이 결실된 HPV45 E7을 각각 나타낸다.
본 발명의 특정 실시양태에서, 서열 번호 59의 뉴클레오티드 904와 1731 사이에 포함된 폴리뉴클레오티드를 제거하고, 고유한 HPV E7 단백질로부터 유래된 본 발명의 이종 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드로 대체한다. 여기서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호 75, 서열 번호 76, 서열 번호 79, 서열 번호 78 및 서열 번호 77의 서열을 각각 갖는 폴리뉴클레오티드 중에서 선택된다.
본 발명은 또한 하나 이상, 바람직하게 하나 또는 두 개의 본 발명의 키메라 단백질(들), 특히 두 개 이상, 바람직하게는 두 개의 상이한 본 발명의 키메라 단백질을 포함하는 조성물에 관한 것이다.
특정 실시양태에서, 조성물이 1개 초과의 상이한, 바람직하게는 2개의 상이한 키메라 단백질을 포함할 때, 상기 키메라 단백질의 CyaA 부분(또는 단편)의 서열은 동일하거나 상이하지만, 이종 폴리펩티드의 서열은 상이하다. 특정 실시양태에서, 상이한, 바람직하게는 2개의 상이한 키메라 단백질은 본원에서 기재된 상이한 키메라 단백질로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 2개의 상이한 키메라 단백질은:
1) N-말단에서 C-말단으로, (a) 서열 번호 2의 잔기 1 내지 227로 이루어지는 단편 (b) 각각 상이한 HPV 형으로부터 유래한 3개 이상의 HPV 항원을 포함하는 이종 폴리펩티드; 및 (c) 서열 번호 2의 잔기 321 내지 1706으로 이루어지는 단편을 포함하거나 이들로 이루어지는 2개의 키메라 단백질(단, 상기 2개의 키메라 단백질의 이종 폴리펩티드는 서열 및 HPV 형이 상이하다); 또는
2) N-말단에서 C-말단으로, (a) 서열 번호 2의 잔기 1 내지 183으로 이루어지는 단편 (b) 각각 상이한 HPV 형으로부터 유래한 3개 이상의 HPV 항원을 포함하는 이종 폴리펩티드; 및 (c) 서열 번호 2의 잔기 387 내지 1706으로 이루어지는 단편을 포함하거나 이들로 이루어지는 2개의 키메라 단백질(단, 상기 2개의 키메라 단백질의 이종 폴리펩티드는 서열 및 HPV 형이 상이하다)이다.
또 다른 실시양태에서, 상기 상이한, 바람직하게는 2개의 상이한 키메라 단백질의 CyaA 부분의 서열이 상이하고, 이종 폴리펩티드의 서열이 상이하다. 특정 실시양태에서, 키메라 단백질의 상이한, 바람직하게는 2개의 상이한 형태는 본원에 기재된 상이한 키메라 단백질로부터 선택된다. 특정 실시양태에서, 상이한, 바람직하게는 2개의 상이한 키메라 단백질 중 하나 이상, 바람직하게는 하나는 N-말단에서 C-말단으로, (a) 서열 번호 2의 잔기 1 내지 227로 이루어지는 단편 (b) 각각 상이한 HPV 형으로부터 유래한 3개 이상의 HPV 항원을 포함하는 이종 폴리펩티드; 및 (c) 서열 번호 2의 잔기 321 내지 1706으로 이루어지는 단편을 포함하거나 이들로 이루어지고, 상이한, 바람직하게는 2개의 상이한 키메라 단백질 중 하나 이상, 바람직하게는 하나는 N-말단에서 C-말단으로, (a) 서열 번호 2의 잔기 1 내지 183으로 이루어지는 단편 (b) 각각 상이한 HPV 형으로부터 유래한 3개 이상의 HPV 항원을 포함하는 이종 폴리펩티드(여기서 상기 이종 폴리펩티드는 다른 하나 이상의 키메라 단백질의 이종 폴리펩티드와 서열 및 HPV 형이 상이하다); 및 (c) 서열 번호 2의 잔기 387 내지 1706으로 이루어지는 단편을 포함하거나 이들로 이루어진다.
1개 초과의 상이한, 바람직하게는 2개의 상이한 형태의 키메라 단백질을 포함하는 조성물의 특정 실시양태에서, 이종 폴리펩티드는 본원에 정의된 바와 같다. 특정 실시양태에서, 각각의 이종 폴리펩티드는 제1 HPV 형의 E7 단백질의 본원에서 정의된 N-말단 단편 및 C-말단 단편, 제2 HPV 형의 E7 단백질의 본원에서 정의된 N-말단 단편 및 C-말단 단편, 제3 HPV 형의 E7 단백질의 본원에서 정의된 N-말단 단편 및 C-말단 단편, 및 경우에 따라 제4 HPV 형의 E7 단백질의 본원에서 정의된 N-말단 단편 및 C-말단 단편을 포함하며, 여기서 각각의 이종 폴리펩티드(들)과 다른 이종 폴리펩티드(들)과 상이한 서열을 갖는다.
특정 실시양태에서, 조성물은 2개의 상이한 유형의 키메라 단백질을 포함하며, 제1 유형의 키메라 단백질의 이종 폴리펩티드는 제1 HPV 형의 E7 단백질의 본원에서 정의된 N-말단 단편 및 C-말단 단편, 제2 HPV 형의 E7 단백질의 본원에서 정의된 N-말단 단편 및 C-말단 단편 및 제3 HPV 형의 E7 단백질의 본원에서 정의된 N-말단 단편 및 C-말단 단편을 포함하고, 제2 유형의 키메라 단백질의 이종 폴리펩티드는 제4 HPV 형의 E7 단백질의 본원에서 정의된 N-말단 단편 및 C-말단 단편, 제5 HPV 형의 E7 단백질의 본원에서 정의된 N-말단 단편 및 C-말단 단편 및 제6 HPV 형의 E7 단백질의 본원에서 정의된 N-말단 단편 및 C-말단 단편을 포함하며, 여기서 제1, 제2, 제3, 제4, 제5 및 제6 HPV 형은 상이한 HPV 형이다.
특정 실시양태에서, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5 및 제6 HPV 형은 (a) HPV16, HPV18, HPV45, HPV31, HPV52 및 HPV58 중에서 선택되거나 (b) HPV16, HPV18 및 HPV45, HPV31, HPV33 및 HPV52 중에서 선택된다.
특정 실시양태에서, 제1, 제2 및 제3 HPV 형은 HPV16, HPV18 및 HPV45이다. 특정 실시양태에서, 이종 폴리펩티드는 서열 번호 34 또는 36에 개시된 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 특정 실시양태에서, 상기 키메라 단백질은 서열 번호 58, 61, 64 또는 67에 개시된 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 상기 특정 실시양태에, HPV33 또는 HPV58 중에서 선택된 제4 HPV 서브형을 결합시킬 수 있다.
특정 실시양태에서, 제1, 제2 및 제3 HPV 형에 관한 실시양태와 독립적으로, 또는 조합하여, 제4, 제5 및 제6 HPV 형은 HPV31, HPV52 및 HPV58이다. 특정 실시양태에서, 이종 폴리펩티드는 서열 번호 42 또는 44에 개시된 서열을 포함하거나 이로 이루어진다.
특정 실시양태에서, 제1, 제2 및 제3 HPV 형에 관한 실시양태와 독립적으로, 또는 조합하여, 제4, 제5 및 제6 HPV 형이 HPV31, HPV33 및 HPV52이다. 특정 실시양태에서, 이종 폴리펩티드는 서열 번호 46 또는 48에 개시된 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 특정 실시양태에서, 상기 키메라 단백질은 서열 번호 34 또는 36에 개시된 서열은 서열 번호 42, 44, 46 또는 48에 개시된 서열에 의해 대체되어진, 서열 번호 58, 61, 64 또는 67 에 개시된 서열을 포함하거나 이로 이루어진다.
특정 실시양태에서, HPV 서브형을 열거하는 상기 명시된 순서에 대응하는 순서로, 또는 대안적으로 열거된 것들 중, 특히 HPV16, HPV18 및 HPV45 또는 HPV31, HPV52 및 HPV58 또는 HPV31, HPV33 및 HPV52의 군 중에서 제1, 제2, 제3 및 경우에 따라 제4의 임의의 조합에 대응하는 키메라 단백질 내 항원을 제시하는 임의의 순서로 상기 항원들이 키메라 단백질에 제공될 때 본 발명은 명시된 HPV 서브형의 상기에 열거된 항원들의 조합에 관한 것이다.
특정 실시양태에서, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5 및 제6 HPV 형은 (a) 각각 HPV16, HPV18, HPV45, HPV31, HPV52 및 HPV58 또는 (b) 각각 HPV16, HPV18 및 HPV45, HPV31, HPV33 및 HPV52이다.
특정 실시양태에서, 두 개의 상이한 키메라 단백질은 본원에서 개시한 바와 같이 제1 키메라 단백질의 경우 HPV16, HPV18, HPV45, 제2 키메라 단백질의 경우 HPV31, HPV52, HPV58의 항원을 포함한다. 또 다른 특정 실시양태에서, 두 개의 상이한 키메라 단백질은 본원에서 개시한 바와 같이 제1 키메라 단백질의 경우 HPV16, HPV18, HPV45, 제2 키메라 단백질의 경우 HPV31, HPV33, HPV52의 항원을 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 이렇게 정의된 HPV 항원들은 명시된 순서로 키메라 단백질에 삽입되나, 반드시 그렇지는 않다.
특정 실시양태에서, 조성물은 2개의 상이한 유형의 키메라 단백질을 포함하며, 제1 유형의 키메라 단백질의 이종 폴리펩티드는 제1 HPV 형의 E7 단백질의 본원에서 정의된 N-말단 단편 및 C-말단 단편, 제2 HPV 형의 E7 단백질의 본원에서 정의된 N-말단 단편 및 C-말단 단편, 제3 HPV 형의 E7 단백질의 본원에서 정의된 N-말단 단편 및 C-말단 단편, 제4 HPV 형의 E7 단백질의 본원에서 정의된 N-말단 단편 및 C-말단 단편을 포함하고, 제2 유형의 키메라 단백질의 이종 폴리펩티드는 제5 HPV 형의 E7 단백질의 본원에서 정의된 N-말단 단편 및 C-말단 단편, 제6 HPV 형의 E7 단백질의 본원에서 정의된 N-말단 단편 및 C-말단 단편 및 제7 HPV 형의 E7 단백질의 본원에서 정의된 N-말단 단편 및 C-말단 단편을 포함하며, 여기서 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6 및 제7 HPV 형은 상이한 HPV 형이다.
특정 실시양태에서, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6 및 제7 HPV 형은 (a) HPV31, HPV33, HPV52, HPV58, HPV16, HPV18 및 HPV45, (b) HPV16, HPV18, HPV33, HPV45, HPV31, HPV52 및 HPV58, (c) HPV16, HPV18, HPV45, HPV58, HPV31, HPV52 및 HPV33, (d) HPV16, HPV18, HPV33, HPV45, HPV31, HPV58 및 HPV52 (e) HPV16, HPV18, HPV45, HPV58, HPV31, HPV33 및 HPV52 및 (f) HPV16, HPV18, HPV45, HPV33, HPV31, HPV52 및 HPV58로 이루어지는 군으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 제1, 제2, 제3 및 제4 HPV 형은 HPV16, HPV18, HPV33 및 HPV45이다. 특정 실시양태에서, 이종 폴리펩티드는 서열 번호 50 또는 52에 개시된 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 특정 실시양태에서, 제1, 제2, 제3 및 제4 HPV 형은 HPV16, HPV18, HPV45 및 HPV58이다. 특정 실시양태에서, 이종 폴리펩티드는 서열 번호 54 또는 56에 개시된 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 특정 실시양태에서, 제1, 제2, 제3 및 제4 HPV 형은 HPV31, HPV33, HPV52 및 HPV58이다. 특정 실시양태에서, 이종 폴리펩티드는 서열 번호 40 또는 42에 개시된 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 특정 실시양태에서, 상기 제1 키메라 단백질은 서열 번호 34 또는 36에 개시된 서열이 서열 번호 40, 42, 50, 52, 54 또는 56에 개시된 서열로 대체된, 서열 번호 58, 61, 64 또는 67에 개시된 서열을 포함하거나 이로 이루어진다.
특정 실시양태에서, 제1, 제2, 제3 및 제4 HPV 형으로서 HPV31, HPV33, HPV52 및 HPV58에 관한 실시양태와 독립적으로, 또는 조합하여, 제5, 제6 및 제7 HPV 형은 HPV16, HPV18 및 HPV45이다. 특정 실시양태에서, 이종 폴리펩티드는 서열 번호 34 또는 36에 개시된 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 특정 실시양태에서, 상기 제2 키메라 단백질은 서열 번호 58, 61, 64 또는 67에 개시된 서열을 포함하거나 이로 이루어진다.
특정 실시양태에서, 제1, 제2, 제3 및 제4 HPV 형으로서 각각 HPV16, HPV18, HPV33 및 HPV45 또는 HPV16, HPV18, HPV45 및 HPV58 에 관한 실시양태와 독립적으로, 또는 조합하여, 제5, 제6 및 제7 HPV 형은 각각 HPV31, HPV52 및 HPV58 또는 HPV31, HPV33, HPV52이다. 특정 실시양태에서, 이종 폴리펩티드는 서열 번호 42 또는 44에 개시된 서열을 포함하거나 이들로 이루어진다. 특정 실시양태에서, 제1, 제2, 제3 및 제4 HPV 형으로서 각각 HPV16, HPV18, HPV33 및 HPV45 또는 HPV16, HPV18, HPV45 및 HPV58에 관한 실시양태와 독립적으로, 또는 조합하여, 제5, 제6 및 제7 HPV 형은 각각 HPV31, HPV52 및 HPV58 또는 HPV31, HPV33 및 HPV52이다. 특정 실시양태에서, 이종 폴리펩티드는 서열 번호 46 또는 48에 개시된 서열을 포함하거나 이로 이루어진다. 특정 실시양태에서, 상기 제2 키메라 단백질은 서열 번호 34 또는 36에 개시된 서열이 서열 번호 42, 44, 46 또는 48에 개시된 서열로 대체된, 서열 번호 58, 61, 64 또는 67에 개시된 서열을 포함하거나 이로 이루어진다.
특정 실시양태에서, 제1, 제2, 제3, 제4, 제5, 제6 및 제7 HPV 형은 (a) 각각 HPV31, HPV33, HPV52, HPV58, HPV16, HPV18 및 HPV45, (b) 각각 HPV16, HPV18, HPV33, HPV45, HPV31, HPV52 및 HPV58, (c) 각각 HPV16, HPV18, HPV45, HPV58, HPV31, HPV52 및 HPV33, (d) 각각 HPV16, HPV18, HPV33, HPV45, HPV31, HPV58 및 HPV52 및 (e) 각각 HPV16, HPV18, HPV45, HPV58, HPV31, HPV33 및 HPV52로 이루어지는 군으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, HPV 서브형을 열거하는 상기 명시된 순서에 대응하는 순서로, 또는 대안적으로 열거된 것들 중, 특히 HPV16, HPV18, HPV33 및 HPV45의 군 또는 HPV16, HPV18, HPV45 및 HPV58의 군 또는 HPV31, HPV52 및 HPV58의 군 또는 HPV31, HPV33 및 HPV52의 군 중에서 제1, 제2, 제3 및 존재하는 경우 제4의 임의의 조합에 대응하는 키메라 단백질 내 항원을 제시하는 임의의 순서로 상기 항원들이 키메라 단백질에 제공될 때 본 발명은 명시된 HPV 서브형의 상기에 열거된 항원들의 조합에 관한 것이다.
특정 실시양태에서, 두 개의 상이한 키메라 단백질은 본원에서 개시한 바와 같이 제1 키메라 단백질의 경우 HPV16, HPV18, HPV45, HPV58, 제2 키메라 단백질의 경우 HPV31, HPV33, HPV52의 항원을 포함한다. 또 다른 특정 실시양태에서, 두 개의 상이한 키메라 단백질은 본원에서 개시한 바와 같이 제1 키메라 단백질의 경우 HPV16, HPV18, HPV45, HPV33, 제2 키메라 단백질의 경우 HPV31, HPV52, HPV58의 항원을 포함한다. 또 다른 특정 실시양태에서, 두 개의 상이한 키메라 단백질은 본원에서 개시한 바와 같이 제1 키메라 단백질의 경우 HPV31, HPV33, HPV52, HPV58, 제2 키메라 단백질의 경우 HPV16, HPV18, HPV45의 항원을 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 이렇게 정의된 HPV 항원들은 명시된 순서로 키메라 단백질에 삽입되나, 반드시 그렇지는 않다.
특정 실시양태에서, 조성물은 또한 적합한 약학적 비이클을 포함하며, 이는 예를 들어 완충제, 식염수, 인산염완충식염수, 덱스트로스, 글리세롤, 물, 에탄올 등 및 이들의 조합으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 조성물은 또한 적합한 약학적 비이클과 함께 또는 없이 하나 이상의 애쥬번트, 바람직하게는 하나의 애쥬번트, 및/또는 표면활성제 및/또는 면역조절 물질(예를 들어, 사이토카인 또는 케모카인) 및/또는 성장 인자, 예를 들어 GM-CSF을 포함한다. 다양한 애쥬번트가 당업계에 공지되어 있으며, 완전 프로인트 애쥬번트(CFA), 불완전 프로인트 애쥬번트(IFA), 몬타니드 ISA(불완전 세픽(seppic) 애쥬번트), 무라밀 펩티드, 예를 들어 무라밀 디펩티드(MDP) MDP-Lys(L18)(Nα아세틸레무라밀-L-알라닐-D-이소글루타미닐-Ne스테오로일-L-리신, 황산아연, 콜로이드 수산화철, 인산칼슘 또는 염화칼슘, CpG 올리고데옥시뉴클레오티드(CPG ODN) 예를 들어 CPG ODN 1826 및 CPG ODN 2007, 물에 5% 스쿠알렌(w/v), 0.5% Tween® 80(w/v) 및 0.5% Span(w/v)을 포함하는 계면활성제 안정화된 수중유형 에멀젼 MF59, TLR4 리간드(예를 들어, MPL, GLA), TLR3 리간드(예를 들어, 폴리 IC, 힐토놀(Hiltonol®)로 불리는 폴리-ICLC), 다당류(예를 들어 인슐린) 및 리포솜(예를 들어, 양이온 리포솜, ISCOM)을 포함한다.
특정 실시양태에서, 하나 이상의 애쥬번트는 T-세포 면역 반응을 활성화시키는 능력을 갖는 분자 중에서 선택된다. 바람직한 애쥬번트는 면역 세포(예를 들어 APC)에 TLR(톨(Toll) 유사 수용체) 3, 4, 7, 8 및/또는 9에 결합하는 것, 또는 이들에 대한 아고니스트이다. 특정 실시양태에서, 애쥬번트는 TLR 리간드, 특히 3형의 TLR 리간드, 예를 들어 폴리-ICLC, 4형의 TLR 리간드, 예를 들어 MPL, 9형의 TLR 리간드, 예를 들어 CpG, 및 7/8형의 TLR 리간드, 예를 들어 이미퀴모드(Imiquimod)로 이루어지는 군으로부터 선택된 TLR 리간드이다. 애쥬번트의 예는 이미퀴모드 및 폴리-ICLC이다. 상업적으로 이용가능한 이미퀴모드 기재 약물은 알다라(Aldara™)(5% 이미퀴모드를 포함하는 크림형태로 판매됨)이고, 폴리-ICLC는 온코비르 사(Oncovir Inc, (WA, US))로부터 힐토놀로 구입할 수 있다..
특정 실시양태에서, 본원에서 정의된 키메라 단백질(들) 또는 조성물은 상이한 경로를 통해 환자에게 주입될 수 있다: 피하(s.c.), 진피내(i.d.), 근육내(i.m.) 또는 정맥내(i.v.) 주사, 경구 투여 및 점막 투여, 특히 비강내 투여 또는 흡입. 특정 실시양태에서, 본원에서 정의된 키메라 단백질(들) 또는 조성물은 진피내 투여된다.
또한, 본원에서 정의된 키메라 단백질(들) 또는 조성물은 하나 이상의 면역강화제, 예를 들어 하나 이상의 애쥬번트, 바람직하게는 하나의 애쥬번트, 및/또는 표면활성제 및/또는 면역조절 물질과 조합되거나 혼합될 수 있다. "조합된"은 본원에서 정의된 키메라 단백질(들) 또는 조성물 및 면역강화제 모두를 동시 또는 상이한 시간 및/또는 동일하거나 상이한 투여 형태, 바람직하게는 동일한 접촉 부위에서 숙주와 접촉시키는 것을 의미한다. 반면, "혼합된"은 본원에서 정의된 키메라 단백질(들) 또는 조성물 및 면역강화제가 투여 시 동일한 제제에 있는 것을 의미한다.
본원에서 정의된 키메라 단백질(들) 또는 조성물은 고체 형태(캡슐, 분말, 정제, 환제, 좌약, 속방성 정제, 위 내성 정제, 서방성 정제), 주사 전에 예를 들어 희석제(들)로 재구성될 필요가 있는, 바람직하게는 동결건조 후, 분말 형태(동결건조된 형태 또는 동결건조된 분말 형태), 또는 액체 형태, 예를 들어 주사가능한 용액 또는 주사가능한 현탁액일 수 있다.
투여되는 키메라 단백질(들)의 양(투여량)은 환자의 상태, 개인의 면역계의 상태, 투여 경로 및 숙주의 체중을 고려하는 것을 포함하여 치료받을 피험체에 따른다. 통상적인 투여량은 1 내지 2400㎍, 100 내지 2000㎍, 200 내지 1000㎍, 500 내지 1000㎍ 범위이다. 특정 투여량은 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1500, 2000 또는 2400㎍±10%로 이루어지는 군으로부터 선택된다. 또 다른 실시양태에서, 통상적인 투여량은 벡터에 포함된 폴리펩티드(들) 1 내지 100 ㎍, 1 내지 50㎍ 및 1 내지 10㎍ 범위이다. 본 발명의 활성 성분으로 전체 치료를 위한 총 투여량은 200 내지 2400㎍, 300 내지 2000㎍, 400 내지 1000㎍, 500 내지 800㎍ 범위이다. 상기 예들은 상황에 따라 당업자에 의해 변경될 수 있다.
본 발명은 또한 약제로서 사용하기 위한 본 발명의 키메라 단백질 또는 본 발명의 조성물에 관한 것이다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 키메라 단백질 또는 본 발명의 조성물은 병원체 감염의 예방용 또는 치료용이다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명의 키메라 단백질 또는 본 발명의 조성물은 발암성의, 바람직하게는 발암성의 종양 기반 질환, 예를 들어 종양성 질환, 악성 종양 질환 또는 악성 신생물의 예방용 또는 치료용이다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 키메라 단백질 또는 본 발명의 조성물은 예방 면역 반응 또는 치료 면역 반응의 유도용이다.
특정 실시양태에서, 본 발명은 또한 병원체 감염을 나타내거나 병원체 감염된 것으로 의심되는 동물 또는 인간 환자를 치료하기 위한 방법으로서, (a) 가능하게는 다회 투여 용량으로서 상기 동물 또는 인간 환자에게 본 발명의 키메라 단백질 또는 조성물을 투여하는 단계, 및 (b) 상기 동물 또는 인간 환자의 상태를 추적 조사하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 또한 종양 질환을 나타내는 동물 또는 인간 환자을 치료하기 위한 방법으로서, (a) 가능하게는 다회 투여 용량으로서 상기 동물 또는 인간 환자에게 본 발명의 키메라 단백질 또는 조성물을 투여하는 단계, 및 (b) 상기 동물 또는 인간 환자의 상태를 추적 조사하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.
본 발명은 또한 동물 또는 인간 환자의 병원체 감염을 예방하기 위한 방법으로서, (a) 가능하게는 다회 투여 용량으로서 상기 동물 또는 인간 환자에게 본 발명의 키메라 단백질 또는 조성물을 투여하는 단계, 및 (b) 상기 동물 또는 인간 환자의 상태를 추적 조사하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.
본 발명은 또한 동물 또는 인간 환자에서 종양 질환의 발현 및 발달을 예방하기 위한 방법으로서, (a) 가능하게는 다회 투여 용량으로서 상기 동물 또는 인간 환자에게 본 발명의 키메라 단백질 또는 조성물을 투여하는 단계, 및 (b) 상기 동물 또는 인간 환자의 상태를 추적 조사하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.
본 발명에 따른 치료법은 이를 필요로 하는, 병원체에 감염되거나 감염된 것으로, 또는 병리학적 상태로 나타내는 것으로 진단받은 동물 또는 인간 환자의 임상 조건을 향상시키는 것을 목표로 한다. 특정 실시양태에서, 상기 치료는 질병의 원인 물질 또는 생물을 제거하거나, 상기 물질 또는 생물의 양을 낮추는 것을 목표로 한다. 바이러스 감염 상황에서, 치료는 숙주의 표적화된 조직에서 측정 시 검출될 수 있는 것보다 더 적은 수준으로 바이러스 양(load)을 유의하게 감소시킬 수 있다. 종양성 질환의 경우, 치료는 종양(들)의 크기 또는 발달을 낮추거나 종양세포를 없애거나 측정시 검출될 수 있는 것보나 낮은 수준으로 종양 세포 수를 감소시킬 수 있다. 또한 치료법은 병원체 감염 또는 종양 질환과 관련된 증상을 제거하거나 낮춤으로써 동물 또는 인간 환자의 임상 상태를 향상시키는 것을 목적으로 하고, 바람직하게는 건강을 회복시키는 것을 목표로 한다.
동물 또는 인간 환자의 예방 요법(prophylactic treatment)은 상기 동물 또는 인간 환자의 병원체 감염을 예방하는 것 또는 신생물의 종양성 질환의 발현 또는 발달을 예방하는 것, 상기 동물 또는 인간 환자의 병리 상태의 발생을 예방하는 것을 목적으로 한다. 예방 요법은 백신접종을 포함한다.
본 발명의 키메라 단백질 또는 조성물을 이용한 치료 요법(therapeutic treatment) 및 예방 요법은 숙주에서 이종 폴리펩티드 내에 포함된 에피토프(들)에 대한 효율적인 면역 반응, 바람직하게는 세포 면역 반응의 유발에 기초한다.
따라서, 본 발명은 또한 본 발명의 키메라 단백질 또는 조성물이 투여되는 숙주에서 이종 폴리펩티드 내에 포함된 에피토프(들)에 대한 면역 반응, 바람직하게는 세포 면역 반응(예를 들어 CTL 반응)을 유도하거나 유발하기 위한 본 발명의 키메라 단백질 또는 조성물의 용도에 관한 것이다.
특정 실시양태에서, 본 발명은 또한 (i) 이종 폴리펩티드 내에 포함된 제1 에피토프 군에 대한 T 세포 면역 반응을 유발함으로써 포유동물 숙주에서 진단받은 제1의 결정된 병리 상태의 면역 치료 요법에, 그리고 (ii) 상기 이종 폴리펩티드 내에 포함된 제2 에피토프 군에 대한 T 세포 기억 면역 반응을 유발함으로써 동일한 포유동물 숙주에서 제2의 결정된 병리 상태(들)에 대한 예방법에 사용하기 위한 본 발명의 키메라 단백질 또는 조성물에 관한 것으로, 상기 면역 반응은 상기 키메라 단백질 또는 상기 조성물을 상기 숙주에 투여 후에 얻어지며, 제2의 결정된 병리 상태(들)에 대한 상기 예방법은 상기 제2 에피토프 군이 상기 이종 폴리펩티드 내에 포함되지 않을 때 관찰되지 않는다.
실제로, 본 발명자들은 본 발명의 키메라 단백질이 APC에 접근, APC에 의한 프로세싱 및 제시, 및 사이토카인의 이용가능성과 관련하여 상이한 에피토프들 사이에 존재하는 경쟁을 우회할 수 있다는 것을 보여주었다. 따라서, 본 발명의 키메라 단백질을 이용하여, 치료 요법에서 제1 군의 에피토프에 대한 면역 반응을 유도할 수 있으며 예방 요법에서 제2 군의 에피토프에 대해 유도된 면역 반응 또한 유도할 수 있다. 따라서, 본 발명의 키메라 단백질은 숙주에서 진단받은 제1의 결정된 병리 상태(들)의 면역 치료 요법 내에서 T 세포 면역 반응을 유발하기에, 그리고 동일한 숙주에서 제2의 결정된 병리 상태(들)의 위험에 대한 예방 요법 내에서 T 세포 기억 면역 반응을 유발하기에 효율적이라는 것을 확인하였다.
실시예
I. 재료 및 방법
마우스
6주령 암컷 C57BL/6 마우스 (H-2b)는 장비에 래보러토리즈(Janvier Laboratories)로부터 구입하였다. 마우스는 물과 먹이를 무제한 공급하면서 무병원체 조건에서 수용하였다. 동물 및 동물 캐어와 관련한 과정은 국내 및 국제법 및 정책을 따르며 지역 윤리 위원회에 의해 검토된 젠티셀(Genticel) 가이드라인을 따랐다.
본 발명에 사용된 일부 HPV 형에는, 상이한 유전적 배경을 갖는 다른 마우스가 유리하게 사용될 수 있다. 이러한 마우스는 장비에 래보러토리즈로부터 구입할 수 있으며, DBA/2JRi (H2Kd/H2Dd), 또는 CBA/JRi (H2Kk/H2Dk) SJL/JRi (H2Ks/H2Ds) 및 FVB/NRi (H2Kq/H2Dq)를 포함한다.
또한, 다른 마우스, 예를 들어 HLA, 특히 HLA-A2 단상형(haplotype)을 갖는 인간화 마우스도 본 발명의 구조물에 의해 유발되는 면역 반응을 결정하는 데에 유리하다. 형질도입 HLA-A2.1 마우스를 타코닉 사(TACONIC, USA)로부터 구입하여, 인간 HLA-A2.1 단상형을 발현하는 마우스에서, 선택된 HPV 형으로부터의 각 E7에 대한 기재된 백신 후보의 면역원성을 시험할 수 있다.
상기 마우스들을 사용하여 선택된 HPV 형으로부터의 각 E7에 대한 기재된 후보 백신의 면역원성을 시험한다.
종양 세포주
TC-1(조직 배양 번호 1) 종양 세포 [19]는 C57BL/6 1차 마우스 폐 세포를 HPV16 E6 및 E7 종양유전자 및 활성화된 인간 c-Ha-Ras 종양유전자로 형질전환 시켜 준비하였다. 본 연구에 사용된 세포는 ATCC로부터 얻었다. TC-1 세포는 각 실험전에 해동시킨 후 주사 전 최소 10일 동안 시험관 내에서 배양하고 증식하였다.
루이스 폐 암종(Lewis lung carcinoma)(LL2)은 1차 루이스 폐 암종 이식으로 생성된 종양을 갖는 C57BL/6 마우스의 폐로부터 확립된 세포주이다(13). 상기 세포주는 암 전이 모델로 널리 사용되며, 암 치료 기전을 연구하는 데 유용하다(14). LL2 종양 세포주는 ATCC(CRL-1642)로부터 구입하였다.
상기 세포는 HPV18 E7 및 GFP 유전자 또는 GFP 유전자만을 포함하는 렌티바이러스 벡터(Vectalys, Labege, France)로 제조사의 프로토콜에 따라 형질도입하였다. MHC I형, GFP, 및 E7 발현을 기본으로 하여 3개의 클론을 선별하였다. 성장 프로파일 및 HPV18 E7-특이적 세포 독성 T CD8+ 림프구에 의해 표적화되는 능력에 따라 생체 내 예방 선별 후 한 클론을 선별하였다; 접종을 위한 최적의 세포 수를 위해 테이크 레이트(take rate) 실험을 수행하였다. 생체 내 선별에서, 치료 연구의 테이크 레이트 및 이상적인 시간은 온코디자인(Oncodesign(Dijon, France))으로 수행하였다. LL2 세포는 각 실험 전에 해동시킨 후 주사 전 최소 10일 동안 시험관 내 배양하고 증식하였다.
B16-IRES-GFP-OVA (B16-GFP) 및 B16-MAGEA3-IRES-GFP-OVA (B16-MAGEA3-GFP) 세포를 사용하여, 처리된 마우스로부터 얻어진 생체 외 비장세포를 재자극하였다. B16-MAGEA3 세포는 MAGE-A3 단백질을 발현하는 벡터라이스(Vectalys)에 의해 형질도입된 B16-F10 유전적동계(syngeneic)의 종양 세포이다. GFP 발현은 정상적으로 MAGE-A3 단백질 발현과 연관되어 있다.
종양 세포 접종
0일에, C57BL/6 마우스에게 100㎕ PBS 1X에 희석된 TC-1 세포(마우스 당 1x106 세포)를 오른쪽 옆구리 피하 경로를 통해 주사하였다. 일부 실험에서, 65일에 마우스에게 100㎕ PBS 1X에 희석된 LL2-GFP 또는 LL2-HPV18 E7-GFP 세포를 왼쪽 옆구리 피하 경로를 통해 주사하였다.
백신
재조합 CyaA - HPV16 E7 △30-42 (C16-1) 및 CyaA - HPV18 E7 △ 32-42 (C18- 1)의 제작 및 정제.
제작 및 정제는 EP1 576 967 B1에 이미 기재되어 있다. 프로서빅스라는 2가 조성물을 제조하기 위해 젠티셀에서 두 가지 대량의 최종 CyaA-HPV16 E7△30-42 (C16-1)(도 1A) 및 CyaA-HPV18 E7△32-42(C18-1)(도 1B)를 1:1 비율로 혼합한 후 앨리쿼트(aliquot)로 -80℃에 보관하였다.
gtCyaAd93 - 및 gtCyaAd203 -기재 백신의 제작 및 정제:
야생형 CyaA의 DNA 서열(CyaAwt: GeneBank: CAE41066.1)은 이.콜라이에서의 발현을 위해 최적화하여 합성하였다(GeneCust). 최적화된 DNA 서열은 gtCyaA으로 명명하였다. 상기 서열은 CyaA 촉매 도메인으로 항원성 서열을 삽입하기 용이하게 하기 위해 첨가된 하기의 고유한 제한 부위를 포함한다: NdeI(CATATG), BamHI(GGATCC), EcoRI(GAATTC), EcoRV(GATATC), PciI(ACATGT), BclI(TGATCA), AgeI(ACCGGT), XmaI(CCCGGG), NcoI(CCATGG).
이어서, gtCyaA는 pTAC 유도성 프로모터를 포함하는 pGTPc608 플라스미드(GTP 테크놀로지(Labege, France)로부터 제공받은 플라스미드)에 삽입하였다.
두 가지 결실 변이체를 시험하였다: 비. 페르투시스 CyaA의 아미노산 위치 228 내지 위치 320 사이의 93개 아미노산의 결실 및 비. 페르투시스 CyaA의 아미노산 위치 184 내지 위치 386 사이의 203개 아미노산의 결실. 첫 번째 93개 잔기의 결실은 칼모듈린 상호작용 도메인(도메인 III)을 제거한다. 두 번째 203개 잔기의 결실은 도메인 II 및 III을 제거한다.
gtCyaA에서 93개 및 203개 aa의 결실은 항원을 삽입하는 동안 생성되었다.
발현된 각 단백질은 크로마토그래피 과정에 의해 정제하였다.; 특히 이온 교환 친화도 크로마토그래피 및 소수성 교환 크로마토그래피 기술을 실시하였다.
gtCyaAd93 - pep216 - CyaCopt 및 gtCyaAd203 - pep216 - CyaCopt의 제작 및 정제
모든 항원은 DNA 2.0.(USA) 또는 진커스트(Genecust)(Germany)로 합성하고 클로닝은 솔비아스(Solvias, Switzerland)로 수행하였다. gtCyaAd93-pep216-CyaACopt 및 gtCyaAd203-pep216-CyaACopt는 도 3A 및 3B에 개략적으로 나타낸다.
BLR 박테리아 균주는 각 플라스미드로 각각 전기천공하였다. 형질감염된 박테리아는 전형적인 배지에서 배양하고 IPTG를 첨가하여 생산을 유도하였다.
발현된 각 단백질은 크로마토그래피 과정에 의해 정제하였다; 특히 이온 교환 친화도 크로마토그래피 및 소수성 교환 크로마토그래피 기술을 실시하였다.
CyaAd203 - pep105의 제작:
CyaAd203-PEP105opt 단백질은 203개 aa가 결실된 아데닐레이트 사이클라아제 서열로 이루어지며, 항원성 삽입물로서 폴리펩티드 105(PEP105)를 포함한다. CyaA의 최적화된 서열은 pKTRACE 플라스미드 NdeI 및 BamHI 제한 부위에 앞서 기재된 바와 같이 클로닝하였다. Pep105 항원을 합성하여 EcoRI과 XmaI 제한 부위에 클로닝하였다. 정제 프로토콜은 EP1 576 967 B1에 이미 기재되어 있다. pKTRACE CyaAd203-pep105opt은 도 4에 개략적으로 나타낸다.
폴리펩티드 pep105(서열 번호 24)는 N-말단에서 C-말단으로 하기의 항원들을 포함한다. 일부 항원은 융합되지만 나머지는 링커에 의해 분리된다. 특정 링커(AS 디펩티드)는 GVNHQHL 서열 앞에 도입되어 면역 반응 검정을 위한 강한 마우스 MHC I형 제한된 에피토프(H-2b 제한된) 이온을 생성한다(굵은 글씨체):
Figure 112015017845353-pct00001
Figure 112015017845353-pct00002
백신 투여
11일에, 종양 측정 후, 검출가능한 고형성 종양을 갖는 마우스를 진피 내(i.d.) 주사로 귀 진피(양쪽 귀 모두에 주사)에 백신접종하였다.
애쥬번트 분자
폴리-ICLC(TLR3 아고니스트)는 1 mL의 2 mg/mL 유백색 멸균액를 포함하는 바이알로 온비르(Oncovir)사(Inc, WA, US)에서 제공받았다. 폴리-ICLC는 본래 용기에 두어 +4℃에 보관하였다. 주사용 폴리-ICLC는 0.9% 염화나트륨 용액 내 1.5 mg/mL 폴리-L-리신 및 5 mg/mL 카복시메틸셀룰로스 나트륨으로 안정화되고 수산화나트륨으로 pH 7.6 내지 7.8로 조정된 폴리-IC 2mg/mL를 포함한다.
종양 측정
각각 다른 지표를 고려하여 마우스에서 종양 발달을 평가하였다:
o 종양 크기 : 종양은 종양 세포 접종 후 5일부터 시작하여 60일까지 1주일에 2회 캘리퍼를 사용하여 수동으로 측정하였다. 이어서, 종양 부피를 다음과 같이 계산하였다: 부피 = (길이 x 넓이2)/2.
o 마우스 생존: 윤리적인 이유로, 비정상적으로 현저하고/거나(제한 크기: 2000 mm3) 괴사성 종양으로 발달한 마우스 또는 종양 유도되어 운동성이 손상된 마우스는 안락사시켰다.
o 무종양 마우스의 수: 본 정보는 치료 백신접종이 완전한 종양 퇴행(촉지성 종양이 없음)을 유도하였을 때를 나타낸다.
T 세포 기억 세포독성 반응의 측정
CD8+ T 세포의 세포 독성을 생체 내에서 측정하는 방법은 광범위하게 기재되어 있다[22, 23]. 간략하게, 무접촉(naive) 마우스의 유전적동계 비장세포를 상이한 농도의 CFSE(카복시플루오레신 숙시니미딜 에스테르, Molecular Probes Invitrogen)로 표지하고 적절한 펩티드로 시험관 내 펄스하거나 펄스하지 않았다. 펩티드 펄스된 표적 세포 집단과 펄스되지 않은 표적 세포 집단 모두를 유전적동계 백신접종된 숙주로 정맥 내로 입양적으로(adoptively) 전달하고, 펩티드 펄스된 표적의 손실을 비장 내로 유세포 분석기(BD FACSCanto II)로 측정하였다. 살해율은 초기 비율로 보정된, 펄스되지 않은 세포에 대한 펄스된 표적 세포 퍼센트 비율에서의 감소로 평가하였다(하기 참조). 세포 제조물을 주사 전 유세포 분석법으로 분석하여 상이한 표적 세포의 CFSE 표지를 모니터하고 생체 내 살해율을 계산하기 위한 기준값(각 세포 집단의 실제 퍼센트)을 얻었다. 이어서, 세 가지 세포 집단을 각 백신접종된 마우스에 1:1:1로 정맥 내 주사하였다. 생체 내 살해율은 다음 식으로 다른 곳에서 기재된 바와 같이 계산한다[24]:
Figure 112015017845353-pct00003
IFN -γ ELISpot(효소 결합된 면역스폿) 분석법
IFN-γ를 생산하는 특이적 CD8+ T 세포의 빈도는 H-2b-제한된 펩티드(HPV16 E749-57 및 HPV18 E7AS43 -49) 또는 HPV45 E7 단백질의 펩티드 뱅크로 비장세포의 생체 외 재자극에 의해 평가하였다. 상기는 IFN-g ELISpot 분석을 실시하여 달성하였다:
o 마우스의 혼주(pooled) 비장세포를 ELISpot 분석하였다.
간략하게, 백신접종된 마우스로부터 얻은 전체 비장세포를 자극시키지 않거나, 하기에 기재된 바와 같이 1 ㎍/mL의 각 펩티드로 37℃, 5% CO2에서 20시간 동안 재자극하였다:
o HPV16 E749-57 펩티드(H-2b 제한된 관련 에피토프)로 1x106 세포/웰
o OVA257 -264(H-2b 제한된 관련없는 에피토프)로 1x106 세포/웰.
o HPV18 E7AS43 -49(H-2b 제한된 관련없는 에피토프)로 0.25x106 세포/웰.
o HPV45 E7 펩티드 뱅크로 1x106 세포/웰
CyaAd203-PEP105opt을 이용한 실험을 위하여, 추가적인 항원성 자극을 사용하였다:
o #116-2/3 펩티드 뱅크(5㎍/ml) : #116-2 및 #116-3의 풀(pool)(1x106 세포/웰)
o #171 펩티드 뱅크(3 ㎍/ml) :#171-1, #171-2 및 #171-3의 풀(1x106 세포/웰)
o OVA323 -339, MHC-II형 제한된 펩티드, 10㎍/ml로 사용(1x106 세포/웰)
o LCMV GP33-41, MHC-I형 제한된 펩티드, 1㎍/ml로 사용(1x106 세포/웰)
o MOG35 -55, MHC-II형 제한된 펩티드, 10㎍/ml로 사용(1x106 세포/웰)
o 젠티셀에서 생산된 His-태그된 MAGEA3(TAA_002_MAGE-3) 단백질, 10㎍/ml로 사용.
o 비장세포:B16-GFP 세포(MAGEA3을 발현하거나 발현하지 않음)는 19:1 비율(950000개 비장세포:50000개 B16 세포)로 함께 배양하였다.
IFN-γ 분비는 스트렙타비딘-AKP를 이용하여 BCIP/NBT으로 확인되는 샌드위치 기반 ELISpot으로 모니터하였다. 자료는 바이로리더 5000-프로 S(Bioreader_ 5000-Pro S (Biosys))로 분석하였다.
II. 결과
A. 본 발명의 새로운 벡터의 모델 항원에 대한 면역 반응을 유도하는 능력의 확인
크고 다중 에피토프 항원을 운반하는 능력에 있어 본 발명의 새로운 벡터의 효율을 확인하기 위하여, 441개 아미노산을 갖는 모델 항원을 설계하였다(서열 번호 24).
0일에, 마우스는 CyaAd203-pep105opt 단백질로 백신접종하고 7일에 안락사시켜, 비장을 회수하여 비장세포를 단리하였다. 상기 세포를 사용하여, T-세포 매개 반응은 IFN-γ 및 IL-2 ELISpot 분석법을 이용하여 측정하였다. 프로서빅스로 백신접종된 마우스는 HPV16 E7 및 HPV18 E7 특이적 T 세포 반응의 유도에 대한 양성 대조군 및 CyaAd203-PEP105opt에 의해서만 운반되는 다른 항원에 대한 음성 대조군으로서 사용하였다. 모든 백신접종은 폴리-ICLC의 동시 주사로 애쥬번티드된다.
A.1. HPV16 E7, HPV18 E7 및 OVA 257 -264 특이적 IFN -γ 반응의 유도
도 5는 HPV16 E749-57, HPV18 E7AS43 -49 및 OVA257 - 264 I형 제한된 펩티드 및 HPV16 E7(#116-2/3) 및 HPV18 E7(#171-1/2/3) 15-mers 펩티드 뱅크 재자극 후에 얻어진 결과를 나타낸다. 다음 결론을 얻을 수 있다:
- 폴리-ICLC 애쥬번티드-플라시보에 의해 백신접종된 마우스 군에서는 어떤 항원 특이적 면역 반응이 발견되지 않았다.
- 폴리-ICLC-애쥬번티드 프로서빅스 백신접종된 마우스 군과 관련하여, 재자극에 상관없이 기대된 결과를 얻었다:
- HPV16E749 -57 및 HPV18E7AS43 -49 I형 제한된 펩티드로 시험관 내 재자극은 명백한 HPV16 E7 및 HPV18 E7-특이적 IFN-γ 반응을 유도하였다;
- OVA257 -264 재자극으로 얻어진 특이적 반응은 없었다;
- 펩티드 뱅크(#116-2/3 및 #171-1/2/3)로 얻어진 HPV16 E7 및 HPV18 E7-특이적 IFN-γ 반응 세기는 MHC I형 제한된 펩티드(HPV16E749 -57, HPV18 E7AS43 - 49)로 얻어진 반응 수준에 근접했다.
- 폴리-ICLC-애쥬번티드 CyaAd203-PEP105opt로 백신접종된 마우스에 관련하여, HPV16 E7 및 HPV18 E7 펩티드 뱅크(#116-2/3 및 #171-1/2/3) 및 프로서빅스에 대해 시험된 모든 MHC I형 제한된 펩티드 HPV16E749 -57, HPV18E7AS43 -49 및 OVA257 -264 펩티드로 HPV16 E7 및 HPV18 E7-특이적 IFN-γ 반응을 확인하였다.
상기 결과는 상기 상이한 모든 펩티드로 생체 외 재자극이 CyaAd203-PEP105opt 진피 내 백신접종에 의해 유발된 HPV18 E7, HPV16 E7 및 OVA257 -264 항원 특이적 T-세포를 재자극 할 수 있다는 것을 보여주었다.
A.2. 항원 OVA 323 -339 , LCMV GP 33-41 , MOG 35 -55 및 MAGEA3에 특이적인 T-세포 매개된 IFN -γ 반응의 유도
도 6은 상이한 형태의 생체 외 재자극 후 얻어진 결과를 도식화한 것이다.
- OVA323 -339, MHC-II형 제한된 펩티드
- LCMV GP33-41, MHC-I형 제한된 펩티드
- MOG35 -55, MHC-II형 제한된 펩티드
- His-태그된 MAGEA3 단백질.
- APC로서 B16-MAGEA3-GFP 종양 세포를 사용하여 MAGE-A3 단백질의 내재 프로세싱의 결과로 생성되는 MHC I 형 제한된 에피토프를 제시함으로써 항원-특이적 CD8+ T 세포를 자극하였다. 또한, MAGE-A3 단백질을 발현하지 않은 B16-GFP 세포는 MAGEA3 면역 반응 특이성을 위한 음성 대조군으로서 시험하였다.
본 발명자들은 모든 군에서, 단백질 His-태그 MAGE-3은 동일한 비특이적 반응을 유도하였다는 것을 관찰할 수 있었다.
폴리-ICLC-애쥬번티드 플라시보 또는 폴리-ICLC-애쥬번티드 프로서빅스로 백신접종된 마우스의 경우, 상기 항원에 대한 면역반응이 확인되지 않았다.
폴리-ICLC-애쥬번티드 CyaAd203-PEP105opt로 백신접종된 마우스의 경우, 항원 특이적 IFN-γ 분비 T 세포는 OVA323 -339, GP33-41 및 MOG35 -55 펩티드 재자극 후뿐 아니라 B16-GFP 및 B16-MAGEA3-GFP 세포 재자극 후에도 확인되었다.
상기 결과는 CyaAd203-PEP105opt 백신접종이 I-Ab-제한된 OVA323 -339, H-2Db-제한된 LCMV GP33-41 및 MOG35 -55 및 GFP11 항원-특이적 T-세포를 유발하였다는 것을 보여 주었다.
종합해 보면, 상기 결과는 다중 에피토프 방식으로 강한 Ag-특이적 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포 모두를 증가시킬 수 있는 CyaA-기반 백신 벡터의 뛰어난 효율을 강조한다.
불행하게도, IFN-γ 분비 T 세포의 유사한 빈도가 두 세포주 B16-GFP 또는 B16-MAGEA3-GFP로 생체 외 재자극 후 얻어졌기 때문에, MAGEA3-특이적 반응은 정확하게 측정될 수 없었다. CyaAd203-PEP105opt는 GFP11 항원을 포함하기 때문에, 상기 백신 벡터를 이용한 면역화는 MAGEA3-특이적 T 세포 반응을 방해하는 GFP-특이적 T-세포반응을 유도하였다.
본 연구는 203개 잔기가 결실된 CyaA 백신 벡터가 동일한 백신접종된 마우스에서 여러 관련없는 T-세포 에피토프에 대한 항원 특이적 T 세포 반응을 유도할 수 있는 능력을 처음으로 강조하고 있다. 또한, 상기 결과는 203개 잔기가 결실된 CyaA 벡신 벡터가 CD4 + 및 CD8 + T 세포 반응 모두( MHC I 및 MHCII 제한된 펩티드 모두에 대해 확인된 특이적 반응)를 유도할 수 있는 뛰어난 능력을 강조한다.
B. HPV 항원의 설계
침습 세포 암종(ICC)를 갖는 여성, HPV에 감염되었으나 정상의 세포진(細胞診, cytology)을 갖는 여성에서의 유병률에 기초하여 위험도가 최고인 7가지 HPV 형(16, 18, 45, 31, 33, 52 및 58)으로부터 7개의 E7 서열을 선택하였다[9][10]: HPV16 E7 변이체(gi_30172006; 서열 번호 25), HPV18 E7 변이체(gi_167996747; 서열 번호 26), HPV31 E7 변이체(gi_148727610; 서열 번호 27), HPV33 E7 변이체(gi_257472286; 서열 번호 28), HPV45 E7 변이체(gi_549287; 서열 번호 29), HPV52 E7 변이체(gi_237861305; 서열 번호 30) 및 HPV58 변이체(gi_19111001; 서열 번호 32).
E7은 산성 영역에 의해 분리되는 두 개의 기능성 도메인으로 이루어진다. 이들 도메인은 광범위하게 개시되어 있다 [11-13]. 단백질의 N-말단 부분은 pRB 결합 모티프(LXCXE)를 포함하고 단백질의 C-말단 부분은 아연 핑거 루프를 포함한다. HPV16, 18 및 45의 E7 단백질은 도 7A에 정렬되어 있으며, HPV 31, 33, 52 및 58의 E7 단백질은 도 7B에 정렬되어 있다.
두 개의 재조합 항원은 HPV16, 18 및 45 각각의 3개의 E7 서열의 융합에 의해 이루어져 있다(산성 영역의 존재 또는 비존재). 또한, 두 개의 재조합 항원은 HPV31, 33, 52 및 58 각각의 4개의 E7 서열의 융합에 의해 이루어져 있다(산성 영역의 존재 또는 비존재). 각 E7의 산성 영역의 존재 또는 비존재는 문헌에 지시된 규칙을 따르는 WO 2005089792에 개시된 원리를 따른다. 실제로, CyaA 내 산성 서열은 CyaA의 촉매 도메인이 세포 기질로 정상적으로 이동하는데 유해한 것으로 개시되었다[8]. 따라서, 상기 영역의 존재 및 비존재 서열은 본 발명의 새로운 벡터(gtCyaAd93 및 gtCyaAd203)가 상기 항원을 APC의 세포 기질로 전달하는 능력을 시험하게 하였다.
HPV16, 18 및 45 E7 서열로 이루어지는 항원을 설계하여 후보의 3가 CyaA-벡터 백신을 생성하였다. 상기 서열은 산성 영역이 결실되거나 결실되지 않았고(전장) E7 서열을 분할하고 역위시켜 도 8A에 나타낸 배열을 얻었다. 2가지 3가 후보 항원의 서열은 WO 2005089792에 기재된 강한 마우스 T-세포 에피토프를 도입하도록 추가로 변형시켰다. 상기 에피토프는 산성 영역 측면에 단백질 C-말단 부분에 있는 HPV18 E7 서열 GVNHQHL의 시작부위에 디펩티드 알라닌-세린(AS)를 삽입하여 생성한다.
HPV31, 33, 52 및 58 E7 서열로 이루어지는 항원을 설계하여 후보의 4가 CyaA-벡터 백신을 생성하였다. 후보 3가 항원의 경우와 같이, 상기 서열은 산성 영역이 결실되거나 결실되지 않았고 E7 서열을 분할하고 역위시켜 도 8B에 나타낸 배열을 얻었다.
각 후보에 대해, 인간 단백질에 대한 반응을 유도할 수 있는 에피토프(들)의 존재를 검색하였다. 놀랍게도, 야생형 서열의 HPV52 E7은 자가 면역 에피토프 B*2705 에피토프(9-mer, MHC I)일 수 있는 서열을 자연적으로 포함한다. 상기 에피토프의 서열은 인간 ITPR3(이노시톨 1,4,5-트리-포스페이트 수용체, 3형)의 서열과 100% 동일하다. 상기 에피토프를 피하기 위해, HPV31, 33 및 58 형의 E7 단백질과의 서열 상동성을 기초로 하여 서열 번호 30의 위치 84 메티오닌을 류신으로 위치 86 류신을 메티오닌으로 대체하도록 변형하였다(변형된 서열은 LRTLQQLLM). HPV52의 변형된 전장 E7 단백질의 서열은 서열 번호 31에 개시되어 있다. 따라서, 4가 항원의 서열 신기성(novelty)은 E7 단백질 C- 및 N-말단의 배열 및 HPV52 E7 서열에 수행된 2가지 변형의 존재로부터 유래 된다.
상기 특정 항원의 정전하는 상기에 설명된 바와 같이 계산하였다. 상기 항원은 -6보다 낮은 산성 전하를 가지며 3가 항원에 21개의 시스테인 및 4가 항원에 28개 시스테인을 각각 포함한다. 상기 항원들의 특징은 표 2에 요약한다.
다양한 HPV 항원의 특징
이름 및
서열 번호 		HPV 결합가 크기
( 잔기 ) 		정전하
Pep216
(서열 번호 34)		 산성 도메인 결실된
HPV16, 18 및 45 E7 단백질 (3가)
 276 -16
Pep217
(서열 번호 36)		 전장의 HPV16, 18 및 45 E7 단백질
(3가)		 311 -37
Pep233
(서열 번호 38)		 산성 도메인 결실된
HPV31, 33, 52 및 58 E7 단백질,(4가)		 337 -13
Pep234
(서열 번호 40)		 전장의 HPV31, 33, 52 및 58 E7 단백질(4가), 392 -38
C. CyaA의 촉매 도메인 내의 큰 결실은 크고 복잡한 항원의 삽입을 가능하게 한다
3가 Pep216 및 Pep217 항원의 DNA 및 4가 Pep233 및 Pep234 항원의 DNA를 합성하여 새로운 gtCyaAd93 및 gtCyaAd203 벡터에 클로닝하였다. 대조군으로서, 각 E7 단백질을 gtCyaAd93에 개별적으로 삽입하고, HPV31, 33, 45, 52 및 58의 E7 서열이 이전에 CyaA 단백질 내에 삽입된 적이 없었기 때문에 이들이 문제가 되는 지를 확인하였다.
본 발명의 키메라 단백질의 특징
후보의 결합가 단백질 코드 gtCyaA 결실
(벡터) 		항원 특이성
3가 BTpr _114 93 산성 도메인이 결실된 HPV16 , 18, 45 E7 단백질
BTpr _116 203 산성 도메인이 결실된 HPV16 , 18, 45 E7 단백질
BTpr _115 93 전장의 HPV16 , 18, 45 E7 단백질
BTpr _117 203 전장의 HPV16 , 18, 45 E7 단백질
4가 BTpr _143 93 산성 도메인이 결실된
HPV31 , 33, 52 및 58 E7 단백질
BTpr _144 203 산성 도메인이 결실된
HPV31 , 33, 52 및 58 E7 단백질
BTpr _145 93 전장의 HPV31 , 33, 52 및 58 E7 단백질
BTpr _146 203 전장의 HPV31 , 33, 52 및 58 E7 단백질
1가 BTpr _131 93 산성 도메인이 결실된 HPV31 E7
BTpr _132 93 산성 도메인이 결실된 HPV33 E7
BTpr _133 93 산성 도메인이 결실된 HPV52 E7
BTpr _134 93 산성 도메인이 결실된 HPV58 E7
BTpr _120 93 산성 도메인이 결실된 HPV45 E7
(BTpr_114 서열은 서열 번호 58에 개시되어 있다　; BTpr_116 서열은 서열 번호 61　에 개시되어 있다; BTpr_115 서열은 서열 번호 64에 개시되어 있다; BTpr_117 서열은 서열 번호 67에 개시되어 있다; BTpr_131의 E7 삽입물의 서열은 서열 번호 70에 개시되어 있다; BTpr_132의 E7 삽입물의 서열은 서열 번호 71에 개시되어 있다; BTpr_133의 E7 삽입물의 서열은 서열 번호 73에 개시되어 있다; BTpr_134의 E7 삽입물의 서열은 서열 번호 74에 개시되어 있다; BTpr_120의 E7 삽입물의 서열은 서열 번호 72에 개시되어 있다).
상기 1가, 3가 및 4가 항원의 생산 및 분석적 특징을 평가하였다.
따라서, 프리-마스터(Pre-Master) 세포 뱅크(프리-MCB)를 각 제작물에 대해 실시하고 IPTG로 관심 단백질의 유도에 대해 시험하였다(도 9). 1가 및 3가 후보는 SDS-page 겔 분석에서 유도 후 정상적인 프로파일을 보였으나 4가 후보는 기대했던 크기에서 약한 밴드를 보였다.
상기 프로파일은 5리터 배양기에서 배양된 각 분자에 대해 확인하였다. 생산된 키메라 단백질의 특징은 표 4에 요약한다.
1가, 3가 및 4가 키메라 단백질의 생산 및 분석적 특징
단백질 코드 순도 % LPS 함량 EU/mg HCP 함량
% 		효소 활성
( cAMP 시험)
BTpr _114 93 <100 <2 효소 활성 확인되지 않음
BTpr _116 91 <100 <2 효소 활성 확인되지 않음
BTpr _115 93 >100 및 <500 <2 효소 활성 확인되지 않음
BTpr _117 90 <100 <2 효소 활성 확인되지 않음
BTpr _143 11 <100 <2 효소 활성 확인되지 않음
BTpr _144 11 <100 <2 효소 활성 확인되지 않음
BTpr _131 96 <100 <2 효소 활성 확인되지 않음
BTpr _132 96 <100 <2 효소 활성 확인되지 않음
BTpr _133 96 <100 <2 효소 활성 확인되지 않음
Btpr _134 96 <100 <2 효소 활성 확인되지 않음
Btpr _120 97 <100 <2 효소 활성 확인되지 않음
생산의 관점에서, 결실에 상관없이, 1가 및 3가의 항원을 갖는 재조합 gtCyaA는 허용가능한 생산량 및 순도를 가져왔지만(>90%) 4가 후보는 감소된 순도를 보였다(관심 단백질의 11%).
93개 잔기가 결실된 후보 vs 203개 잔기가 결실된 후보를 비교할 때 전체 순도를 고려하면, 후자가 gtCyaAd93(Btpr114 & Btpr_115) 구조물보다 낮은 생산량을 갖는 것으로 보인다. 더 짧은 재조합 gtCyaA이 생산하기 더 쉬울 것으로 예상하고 있었기 때문에 이러한 차이는 상당히 놀라운 것이다.
이들 항원을 갖는 벡터 모두 효소 활성을 가지지 않으며 이것은 결실이 벡터의 독성을 없애기에 충분하다는 것을 강조한다.
D. 4개 이상의 E7을 갖는 GtCyaAs를 생산은 서열 의존적이다.
또한, 본 발명자들은 4가 후보에서 얻어진 결과가 CyaA 내 E7 폴리펩티드 서열의 개수, 또는 CyaA 내 E7 폴리펩티드 서열의 특정 조합(assembly)으로 인한 것인 지를 조사하였다. 이 목적으로 여러 가지 구조물을 시험하였다(표 5).
3가 및 4가 HPV 항원을 갖는 키메라 단백질
단백질 코드 gtCyaA 결실 삽입물 내의 HPV 형 삽입물크기
Btpr _161 93 산성 영역이 결실된
31, 52, 58 E7 단백질 		253 aa
Btpr _162 93 산성 영역이 결실된
31, 33, 52 E7 단백질 		253 aa
Btpr _163 93 산성 영역이 결실된
16, 18, 45, 33 E7 단백질 		360 aa
Btpr _164 93 산성 영역이 결실된
16, 18, 45, 58 E7 단백질 		360 aa
Btpr _165 93 전장의 31, 52, 58 E7 단백질 295 aa
Btpr _166 93 전장의 31, 33, 52 E7 단백질 294 aa
Btpr _167 93 전장의 16, 18, 45, 33 E7 단백질 408 aa
Btpr _168 93 전장의 16, 18, 45, 58 E7 단백질 409 aa
Btpr _169 203 산성 영역이 결실된
31, 52, 58 E7 단백질 		253 aa
Btpr _170 203 산성 영역이 결실된
31, 33, 52 E7 단백질 		253 aa
Btpr _171 203 산성 영역이 결실된
16, 18, 45, 33 E7 단백질 		360 aa
Btpr _172 203 산성 영역이 결실된
16, 18, 45, 58 E7 단백질 		360 aa
Btpr _173 203 전장의 31, 52, 58 E7 단백질 295 aa
Btpr _174 203 전장의 31, 33, 52 E7 단백질 294 aa
Btpr _175 203 전장의 16, 18, 45, 33 E7 단백질 408 aa
Btpr _176 203 전장의 16, 18, 45, 58 E7 단백질 409 aa
프리-MCB 유도 시험을 실시하였으며, 그 결과 놀랍게도 CyaA 내 E7 서열의 개수가 제한이 되지 않았다. 오히려 제한이 되는 것은 항원의 전체 서열의 성질이었다. 게다가, Btpr_161, 162, 169 및 170은 전장의 항원(BTpr_165, 166, 173 및 174)과 비교하였을 때 관심 단백질의 생산량이 낮았다(표 6).
프리-MCB 유도 결과의 요약
단백질 코드 삽입물 내 HPV 형 gtCyaA 결실 유도능 ( Inductibility ) 결과
Btpr _161 산성 영역이 결실된
31, 52, 58 E7 단백질 		93 Btpr _165보다 약한 단백질 발현
Btpr _162 산성 영역이 결실된
31, 33, 52 E7 단백질 		93 BTpr _166보다 약한 단백질 발현
Btpr _163 산성 영역이 결실된
16, 18, 45, 33 E7 단백질 		93 BTpr _143보다 상당히 우수한 프로파일 발현
Btpr _164 산성 영역이 결실된
16, 18, 45, 58 E7 단백질 		93 BTpr _143보다 상당히 우수한 프로파일 발현
Btpr _165 전장의
31, 52, 58 E7 단백질 		93 BTpr _114와 유사한 단백질 발현 프로파일
Btpr _166 전장의
31, 33, 52 E7 단백질 		93 BTpr _114와 유사한 단백질 발현 프로파일
Btpr _167 전장의
16, 18, 45, 33 E7 단백질 		93 /
Btpr _168 전장의
16, 18, 45, 58 E7 단백질 		93 /
Btpr _169 산성 영역이 결실된
31, 52, 58 E7 단백질 		203 Btpr _173보다 약한 단백질 발현
Btpr _170 산성 영역이 결실된
31, 33, 52 E7 단백질 		203 Btpr _174보다 약한 단백질 발현
Btpr _171 산성 영역이 결실된
16, 18, 45, 33 E7 단백질 		203 /
Btpr _172 산성 영역이 결실된
16, 18, 45, 58 E7 단백질 		203 /
Btpr _173 전장의
31, 52, 58 E7 단백질 		203 BTpr _114와 유사한 단백질 발현 프로파일
Btpr _174 전장의
31, 33, 52 E7 단백질 		203 BTpr _114와 유사한 단백질 발현 프로파일
Btpr _175 전장의
16, 18, 45, 33 E7 단백질 		203 /
Btpr _176 전장의
16, 18, 45, 58 E7 단백질 		203 /
상기 실험으로부터, 본 발명자들은 gtCyaAd93 및 gtCyaAd203은 4개 이상의 E7 단백질에 대응하는 등가의 폴리펩티드 서열을 수용한다는 결론을 얻었다 . 그러나, 선택된 E7 단편의 서열 및 배열은 생산량 및 순도에 영향을 줄 수 있으며, 따라서 다소 바람직한 산업화 가능성을 갖는다.
프리 - MCB로 관찰된 결과의 확인
본 발명자들은 또한 프리-MCB 수준에서 얻어진 결과가 확인되는가를 gtCyaAd93 벡터 내 4가 구조물에 특별히 중점을 두어 조사하였다. BTpr_143보다 더 우수하거나 BTpr_115와 등가인 발현 프로파일을 갖는 단백질을 5L 규모로 시험하였다. 다음 표는 얻어진 결과를 요약한다.
프리 - MCB 유도 및 5L 생산 결과의 요약
단백질 코드 삽입물 내 HPV 형 gtCyaA 결실 유도능 결과
( 프리 - MCB ) 		5리터 규모 결과
Btpr _163 산성 영역이 결실된
16, 18, 45, 33 E7 단백질 		93 BTpr _143보다 상당히 우수한 프로파일 발현 BTpr _143보다 3배이상 우수한생산성 및 6배 이상 우수한 순도
Btpr _164 산성 영역이 결실된
16, 18, 45, 58 E7 단백질 		93 BTpr _143보다 상당히 우수한 프로파일 발현 BTpr _143보다 4배이상 우수한 생산성 및 6배 이상 우수한 순도
Btpr _165 전장의
31, 52, 58 E7 단백질 		93 BTpr _115와 유사한 단백질 발현 프로파일 PBTpr _115보다 1.5배이 상 우수한 생산성 및 동등한 순도
Btpr _166 전장의
31, 33, 52 E7 단백질 		93 BTpr _115와 유사한 단백질 발현 프로파일 PBTpr _115보다 1.5배이상 우수한 생산성 및 동등한 순도
Btpr _167 전장의
16, 18, 45, 33 E7 단백질 		93 BTpr _143보다 우수한 프로파일 발현 BTpr _143보다 2배이상 우수한생산성 및 5배 이상 우수한 순도
Btpr _168 전장의
16, 18, 45, 58 E7 단백질 		93 BTpr _143보다 우수한 프로파일 발현 BTpr _143보다 3배이상 우수한 생산성 및 5배 이상 우수한 순도
Btpr _173 전장의
31, 52, 58 E7 단백질 		203 BTpr _ 117와 유사한 단백질 발현 프로파일 BTpr _117보다 2배이상 우수한 생산성 및 동등한 순도
Btpr _175 전장의
16, 18, 45, 33 E7 단백질 		203 Btpr _143보다 우수한 단백질 발현 프로파일 BTpr _143보다 낮은 생산성인 반면 상당히 우수한 순도(6배이상)
상기 실험으로부터 다음과 같은 결론을 내렸다:
1. 전체 생산성 및 순도는 Btpr_175를 제외하고 시험된 모든 구조물에서 향상되었다.
2. 생산성 및 발현 프로파일은 gtCyaAd93를 갖는 재조합 단백질보다 gtCyaAd203을 갖는 재조합 단백질에서 항상 낮았다.
3. gtCyaAd93 벡터는 gtCyaAd203 벡터보다 우수한 생산량과 순도로 4개의 HPV 항원을 포함하는 재조합 단백질 생산을 가능하게 한다.
4. 상기 결과는 프리-MCB에서의 관찰을 확인해준다.
E. 큰 항원을 포함하는 gtCyaAd93 및 gtCyaAd203는 면역원성을 갖는다.
E.1. BTpr _114, BTpr _115, BTpr _116 및 BTpr _117의 면역원성
BTpr_114, BTpr_115, BTpr_116 및 BTpr_117 키메라 단백질의 면역원성을 또한 조사하였다. 마우스는 플라시보, 또는 프로서빅스(CyaA-HPV16 E7 + CyaA-HPV18 E7로 이루어지는 양성 대조군), 또는 Btpr_114(gtCyaAd93-PEP216-CyaCopt), BTpr_115(gtCyaAd93-pep217-CyaCopt), BTpr_116(gtCyaAd203-pep216-CyaCopt) 및 BTpr_117(gtCyaAd203-pep217-CyaCopt) 각각으로 진피 내 백신접종하였다. 모든 군은 폴리 IC-LC로 애쥬번티드되었다. 백신접종 후 7일에 마우스를 안락사시키고 비장세포는 앞서 확인된 MHC I형 제한된 펩티드로 재자극하였다. 결과는 도 10에 나타내었다.
도 10은 다음을 나타내었다.
- 10 ㎍의 프로서빅스로 면역화는 예상했던 수준의 HPV16 E749-57 및 HPV18 E7AS43-49-특이적 IFN-γ 반응을 유도하였다.
- 3가 후보 백신으로 얻어진 항원-특이적 반응은 프로서빅스로 얻어진 것과 등가였다.
- 특이적 T 세포 반응 빈도에 있어서, 3가 후보들 사이에서 차이는 발견되지 않았다.
- HPV16 항원에 대한 더 낮은 반응은 HPV16 에피토프가 C56LB/6 마우스가 매우 민감한 HPV 18 에피토프보다 더 약하다는 사실에 기인한다.
상기 관찰로 진피 내 면역화 후 마우스 내 HPV16 E749-57 및 HPV18 E7AS43 -49-특이적 IFN -γ 반응을 유도하는데 있어, 폴리 - ICLC - 애쥬번티드 gtCyaAd93 -PEP216-CyaCopt, gtCyaAd203 - PEP216 - CyaCopt , gtCyaAd93 - PEP217 - CyaCopt 및 gtCyaAd203-PEP217-CyaCopt는 폴리 - ICLC - 애쥬번티드 프로서빅스만큼 효율적이라는 결론을 내릴 수 있었다.
실험 당시, HPV45 E7의 경우 MHC-I-제한된 펩티드가 확인되지 않았기 때문에, 비장세포를 3개의 서브풀(#218-1, #218-2 및 #218-3)로 나누어 HPV45 E7 펩티드 라이브러리로 재자극하였다. 본 실험은 공지된 에피토프에 대응하는 펩티드보다는 펩티드 라이브러리로 만들어진, 발명자들에게 공지된 첫 번째 재자극이다.
도 11은 #218-3 펩티드 서브풀로 시험관 내 재자극은 gtCyaAd93-PEP216-CyaCopt, gtCyaAd203-PEP216-CyaCopt, gtCyaAd93-PEP217-CyaCopt 및 gtCyaAd203-PEP217-CyaCopt 백신접종에 의해 유발된 T-세포를 재자극시킬 수 있었으나 #218-1 및 #218-2 서브풀은 재자극시킬 수 없었다는 것을 보여주었다. 상기 면역 반응의 원인이 되는 펩티드 서열은 IELTVESSAEDLRTL이다.
놀랍게도, 유사한 반응이 HPV45 E7 서열을 포함하고 있지 않은 프로서빅스로 백신접종된 군으로 확인되었다. 상기 결과는 #218-3 풀 및 프로서빅스 백신 내 포함된 HPV16 E7 또는 HPV18 E7 서열에 존재하는 에피토프 사이의 교차 반응성에 의해 설명될 수 있다.
종합해 보면, 상기 결과는 복잡한 구조(21개 시스테인) 및 산성 전하를 갖는 항원이 gtCyaAd93 및 gtCyaAd203에 의해 정확하게 운반되고 항원 제시 세포(APC)에 의해 프로세스된다는 것을 보여준다. 이것은 프레빌 등 [5], 카리모바 등 [7] 및 그미로 등[8]에서 교시하는 결과를 고려해볼 때 예상하지 못한 것이다.
게다가, CyaA의 촉매 도메인 내 생성된 결실은 CyaA -특이적 T-세포 및 CyaA -특이적 B-세포 반응의 수준을 감소시킴으로써 운반되는 이종 폴리펩티드와 관련하여 이점을 제공할 수 있었다(상기 결실은 CyaA의 MHC I형 및 II형 제한된 에피토프 의 수를 감소시키는 결과를 가져온다).
E.2. Btpr _163, BTpr _164, BTpr _165, BTpr _166, BTpr _167, BTpr _168, BTpr_173 및 BTpr_175에 존재하는 새로운 리드(lead)의 면역원성
또한, Btpr_163, BTpr_164, BTpr_165, BTpr_166, BTpr_167, BTpr_168, BTpr_173 및 BTpr_175에 존재하는 새로운 리드의 면역원성을 C57BL/6 마우스에서 조사하였다.
마우스는 플라시보 또는 각 리드로 각각 진피 내 백신접종하였다. 모든 군은 폴리-ICLC로 애쥬번티드되었다.
백신접종 후 7일에 마우스를 안락사시키고 비장 세포를 시험되는 각 E7 항원의 펩티드 라이브러리로 재자극하였다. 시험된 모든 리드는 면역원성이었다.
HPV31, 45 및 58에 대한 면역원성은, 도구가 적합하지 않았기 때문에(유전적 백그라운드가 적합하지 않음), C57BL/6 마우스에서 시험하지 않았다. 이들 E7 단백질의 면역원성은 재료 및 방법에 기재된 바와 같이 다른 마우스 품종에서 시험된다.
C57BL/6 마우스에서 시험된 리드의 면역원성
단백질 코드 삽입물의 HPV 형 gtCyaA 결실 면역원성 Yes /No (IFN-γ ELISpot 분석법) 측정된 E7 특이적 T-세포 반응을 갖는 HPV 형
Btpr _163 산성영역이 결실된
16, 18, 45, 33 E7 단백질 		93 Yes 16, 18, 33
Btpr _164 산성영역이 결실된
16, 18, 45, 58 E7 단백질 		93 Yes 16, 18
Btpr _165 전장의 31, 52, 58 E7 단백질 93 Yes 52
Btpr _166 전장의 31, 33, 52 E7 단백질 93 Yes 33, 52
Btpr _167 전장의 16, 18, 45, 33 E7 단백질 93 Yes 16, 18, 33
Btpr _168 전장의 16, 18, 45, 58 E7 단백질 93 Yes 16, 18
Btpr _173 전장의 31, 52, 58 E7 단백질 203 Yes 52
Btpr _175 전장의 16, 18, 45, 33 E7 단백질 203 Yes 16, 18, 33
상기 결과는 다음을 나타내었다.
- 10㎍의 각 리드로 면역화는 특이적 IFN-γ 반응을 유도하였다.
- gtCyaAd93 및 gtCyaAd203는 항원을 항원 제시 세포로 정확하게 운반하였다.
- HPV16, 18, 33 및 52 E7 단백질에 대한 특이적 면역 반응이 측정되었다.
상기 결과로 6가 및 7가 혼합물에 대한 면역 반응을 추가적으로 조사하게 되었다.
E. 3: 7가 후보 백신의 면역원성
두 가지 3가 리드의 6가 혼합물의 면역 반응은 C57BL/6 마우스에서 평가하였다. 본 리드는 HPV 16-18-45 E7 단백질 및 HPV 31-52-58 E7 단백질을 각각 포함하는 BTpr_114 및 BTpr_165이다. 앞서 기재된 바와 같은 동일한 프로토콜을 이용하였다. 실험 당시 마우스에서 HPV52 E7에 대해 확인된 공지된 MHC I 제한된 펩티드가 없었기 때문에, 비장세포를 세 가지 서브풀(221-1, 221-2 및 221-3)로 나누어 HPV52 E7-펩티드 라이브러리로 재자극하였다. HPV16 E7 및 HPV18 E7의 재자극에, 3가지 서브풀(각각 116-1, 116-II, 116-III 및 171-I, 171-II 및 171-3)로 나누어진 펩티드 라이브러리를 또한 사용하였다.
결과는 도 15에 나타낸다.
상기 결과는 다음을 확인해 준다:
- 10 ㎍의 6가 혼합물로 면역화는 IFN-γ ELISPot에 의해 측정된 바와 같이 HPV16 E7, HPV18 E7 및 HPV52 T 세포 반응을 유도하였다.
- 각각의 항원을 갖는 gtCyaAd93 각각은 항원을 항원 제시 세포(APC)로 전달하고 측정가능한 HPV 형에 대한 항원-특이적 T 세포 반응을 촉진할 수 있었다.
- E7-특이적 T 세포 반응의 빈도에 있어서 3가 구성성분 단독과 6가 후보 백신 사이에 차이가 관찰되지 않았다(자료 제시하지 않음)
상기 관찰로 폴리 - ICLC - 애쥬번티드 Btpr _114 및 Btpr _165는 C57BL /6 마우스에서 진피 내 면역화후 HPV16 E7, HPV18 E7 및 HPV52 E7-특이적 T 세포 반응을 유도하는데 효율적이라는 결론을 내릴 수 있었다.
E.4. 2가지 7가 후보 백신의 면역원성
생산성 및 순도 결과를 기초로 하여, 2가지 7가 조합물을 C57BL/6 마우스에서 시험하였다: Btpr_165+Btpr_163 및 Btpr_166 + Btpr_164. 마우스는 각 7가 후보 백신 10 ㎍으로 각각 진피 내 면역시켰다.
도 16에 나타낸 바와 같이, 본 결과는 다음을 나타낸다:
HPV16 E7: #116-2j (c+d) 펩티드 서브풀로 시험관 내 재자극은 HPV16 E7을 포함하는 7가 후보 백신 또는 그의 구성성분 단독으로 백신접종에 의해 유발되는 T- 세포를 재자극할 수 있었다.
HPV18 E7: #171-I 및 #171-II 펩티드 서브풀로 시험관 내 재자극은 HPV18 E7을 포함하는 7가 후보 백신 또는 그의 구성성분 단독으로 백신접종에 의해 유발되는 T- 세포를 재자극할 수 있었다.
HPV33 E7:
o Btpr_166 및 Btpr_164로 이루어지는 7가 후보 백신의 경우, #220-2 펩티드 서브풀로 시험관 내 재자극은 백신접종에 의해 유발되는 T- 세포를 재자극할 수 있었다.
o Btpr_165 및 Btpr_163을 포함하는 7가 후보 백신의 경우, #220-1, #220-2 및 #220-3 펩티드 서브풀로 시험관 내 재자극은 백신접종에 의해 유발되는 T- 세포를 재자극할 수 있었다.
- HPV52 E7: #221-2 및 #221-3 펩티드 서브풀로 시험관 내 재자극은 HPV52 E7을 포함하는 7가 후보 백신 또는 그의 구성성분 단독으로 백신접종에 의해 유발되는 T- 세포를 재자극할 수 있었다.
종합해 보면, 생산성 및 면역원성의 상기 결과는 다음을 나타낸다:
- 3 및 4개의 HPV E7 단백질을 갖는 재조합 gtCyaAd93은 우수한 생산성으로 생산되고 정제될 수 있다;
- 재조합 gtCyaAd203 단백질은 또한 동일한 항원을 포함하는 gtCyaAd93 벡터에 비해 낮은 생산성이긴 하지만 생산되고 정제될 수 있다.
- 3 및 4개 HPV E7 단백질을 갖는 두 가지의 재조합 gtCyaAd93은 그들의 항원을 APC에 정확하게 전달할 수 있다.
- 특이적 면역 반응은 C57BL/6 마우스에서 각각의 면역원성 HPV 형에 대해 측정된다.
재조합 gtCyaAd93과 함께 E7 단백질의 설계는, 예를 들어 HPV33 E7에서 예시된 바와 같이, E7 항원에 대한 면역 반응에 영향을 줄 수 있다.
- 복잡한 구조(21개의 시스테인) 및 산성 전하를 갖는 항원은 gtCyaAd93에 의해 정확하게 전달되어 항원 제시 세포(APC)에 의해 프로세스된다. 이것은 그미라 등(2001) 및 페이욜 등(Fayolle et al. 1998)의 결과를 고려해 볼 때 예상하지 못한 것이다.
F. 후보의 세포독성 효율
F.1. 3가 후보 백신의 CD8- 매개된 세포독성 효율
세포독성 유도에 있어 3가 후보의 효율을 비교하기 위하여, 생체 내 살해 분석을 애쥬번트 존재 및 비존재 하에서 수행하였다. 무접촉 마우스의 비장세포를 회수하여 HPV16, HPV18 및 HPV45 E7 단백질 각각으로부터의 펩티드 라이브러리로 로딩하였다.
4개 군의 마우스를 플라시보, gtCyaAd93-pep216-CyaCopt, gtCyaAd93-pep217- CyaCopt 및 gtCyaAd203-pep217-CyaCopt 각각으로 폴리-ICLC 존재 또는 비존재 하에 백신접종하였다.
애쥬번트가 존재하는 경우, 후보 사이에 차이가 관찰되지 않았다(자료 미제시). 도 12의 왼쪽 패널(라이브러리 #171-1 및 #171-2로 로딩)에서, 결실된 항원 pep216을 포함하는 키메라 단백질로 백신접종된 마우스와 비교하여 전장의 항원(pep217)을 포함하는 키메라 단백질로 백신접종된 마우스에서 살해율이 높았다. 유사하게, 도 12의 오른쪽 패널에서(펩티드 라이브러리 #218-3으로 로딩), 플라시보와 비교할 때 pep217을 포함하는 키메라 단백질로 백신접종된 마우스에서 살해율이 높지만 pep216을 포함하는 키메라 단백질로 백신접종된 마우스에서는 살해가 확인되지 않는다. 폴리-LCLC 애쥬번트가 존재하지 않는 경우, 전장의 항원을 포함하는 gtCyaA는 산성 도메인이 결실된 항원과 비교하여 표적 세포를 살해하는데 더 효율적이었다. 전장의 항원은 E7 산성 도메인을 포함하고 있고 문헌의 교시에 따르면 산성 도메인이 결실된 항원보다 더 낮은 효율을 보여야 하기 때문에, 상기는 예상하지 못한 것이다.
상기 결과는 다음을 나타낸다
- 전장의 항원은 아마도 CD8 + T 림프구에 의한 살해 반응에 유리한 에피토프(보조 T-세포 에피토프)를 갖는다; 그리고
- gtCyaA 벡터는 산성 영역을 갖는 항원의 전달을 가능하게 한다.
F.2. 7가 후보 백신의 CD8- 매개된 세포독성 효율
E7-특이적 세포독성 T 림프구(CTL)를 유도하는 능력에 있어 7가 후보의 효율을 비교하기 위하여, 생체 내 살해 분석을 애쥬번트 존재하에 실시하였다. 무접촉 마우스의 비장세포를 회수하여 HPV16 및 HPV18 E7 단백질 각각으로부터의 펩티드 라이브러리로 로딩하였다.
3개 마우스 군을 플라시보, BTpr165 + BTpr163 및 BTpr166 + BTpr164로 폴리-ICLC 존재하에 각각 백신접종하였다.
플라시보군에서는 E7-특이적 살해가 관찰되지 않았다. 7가 후보 백신 모두는 HPV16 E7 펩티드 라이브러리(도 17-A) 또는 HPV18 E7 펩티드 라이브러리(도 17-B)로 각각 로딩된 세포의 E7-특이적 살해를 유도하였다.
상기 결과는 7가 후보 모두가 기능적 HPV16 및 HPV18 E7-특이적 CTL을 유도하였다는 것을 나타낸다.
G. TC -1 종양을 갖는 마우스에서 종양 퇴행 분석
본 발명자들은 또한 TC-1 종양 세포 모델을 이용하여 4가지 3가 후보 Btpr_114(gtCyaAd93-PEP216-CyaCopt), BTpr_115(gtCyaAd93-pep217-CyaCopt), BTpr_116(gtCyaAd203-pep216-CyaCopt) 및 BTpr_117(gtCyaAd203-pep217-CyaCopt)의 치료 효율을 조사하였다.
마우스는 0일에 모두 TC-1 세포(HPV16 E7 항원을 발현하는)로 접종하였다. 1군은 처리하지 않았다. 2군은 PBS 및 폴리-ICLC로 처리하고, 3군은 폴리-ICLC 애쥬번티드 프로서빅스로 처리하고, 4군은 폴리-ICLC 애쥬번티드 gtCyaAd93-pep216으로 처리하고, 5군은 폴리-ICLC 애쥬번티드 gtCyaAd203-pep216, 6군은 폴리-ICLC 애쥬번티드 gtCyaAd93-pep217로, 7군은 폴리-ICLC 애쥬번티드 gtCyaAd203-pep217로 처리하였다. 각 군은 10마리 마우스로 이루어졌다.
도 13은 모든 마우스가 종양을 발달시켰다는 것을 나타낸다. 그러나, HPV16 E7 항원을 포함하는 CyaA 후보 백신으로 백신접종되고 폴리-ICLC 애쥬번티드 마우스는 65일에 강한 종양 제거율을 나타냈다; 프로서빅스+ 폴리-ICLC로 처리된 마우스 10마리 중 9마리가 종양을 제거하였다(3군); gtCyaAd93-pep216 + 폴리-ICLC 처리된 마우스 10마리 중 9마리가 종양을 퇴행시켰다(4군); gtCyaAd203-pep216 + 폴리-ICLC로 백신접종된 마우스 10마리 중 8마리가 종양을 퇴행시켰다(5군); gtCyaAd93-pep217 + 폴리-ICLC로 처리된 마우스 10마리 중 9마리가 종양을 퇴행시켰다(6군); gtCyaAd203-pep217 + 폴리-ICLC로 백신접종된 마우스 10마리 중 9마리가 종양을 퇴행시켰다(7군). 미처리 마우스 10마리 중 0마리, 플라시보 + 폴리-ICLC 처리된 마우스 10마리 중 1마리가 각각 종양을 퇴행시켰다.(1군 및 2군). 따라서, HPV16 E7 항원을 포함하는 후보 백신으로 백신접종된 마우스만이 유의하게 종양을 퇴행시켰다. 4가지 후보 가운데, 종양을 퇴행시키는 능력에서는 차이가 발견되지 않았다.
상기 결과는 본 발명의 키메라 단백질, 예를 들어 Btpr _114( gtCyaAd93 -PEP216-CyaCopt), BTpr _115( gtCyaAd93 - pep217 - CyaCopt ), BTpr _116( gtCyaAd203 -pep216-CyaCopt) 및 BTpr _117( gtCyaAd203 - pep217 - CyaCopt )의 투여는 발암성 질환을 일으키는 종양을 효율적으로 퇴행시킬 수 있다는 것을 보여준다.
H. 3가 후보의 치료 및 예방 효과
백신접종된 마우스가 상이한 항원을 발현하는 첫 번째 종양을 제거한 후 종양의 발달 및 성장에 대해 예방되어질 수 있는 지를 또한 평가하였다. HPV18 E7 항원을 발현하는 LL2 종양 세포 및 대조군 세포주 LL2-GFP를 앞서 TC-1 이식된 종양(HPV16 E7 항원을 발현하는)을 완전히 퇴행시킨 백신접종된 생존 마우스의 옆구리에 접종하였다.
각 군의 생존 마우스를 두 개의 서브군으로 나누고 LL2-HPV18 E7 세포 또는 LL2-GFP 세포로 접종하였다. 결과는 도 14에 나타낸다.
HPV18 E7 항원을 포함하는 gtCyaA 후보 백신으로 백신접종되고 폴리-ICLC로 애쥬번티드 마우스는 LL2-HPV18 E7 세포주의 성장에 대한 강한 예방 효과를 나타내었으나(3b, 4b, 5b, 6b 및 7b군에서 마우스는 종양을 발달시키지 못하였다), LL2-GFP 세포주의 성장에 대한 예방 효과는 나타내지 못하였다(3a, 4a, 5a, 6a 및 7a군에서 모든 마우스가 종양을 발달시켰다).
종합해 보면, 상기 결과는 TC -1 종양을 제거한 3가 후보로 백신처리된 마우스는 LL2- HPV18 E7 종양에 대해 또한 예방되었다는 것을 강조하며, HPV16 E7 항원에 대한 치유력 있는 항원-특이적 T 세포 반응을 발달시킨 상기 백신접종된 마우스는 또한 HPV18 E7 항원에 대한 예방적인 항원 특이적 T- 세포 반응을 발달시켰다는 것을 나타낸다.
참고문헌
[1] Ladant D, Glaser P, Ullmann A. Insertional mutagenesis of Bordetella pertussis adenylate cyclase. J Biol Chem 1992;267: 2244-50.
[2] Sebo P, Fayolle C, d'Andria O, Ladant D, Leclerc C, Ullmann A. Cell-invasive activity of epitope-tagged adenylate cyclase of Bordetella pertussis allows in vitro presentation of a foreign epitope to CD8+ cytotoxic T cells. Infect Immun 1995;63: 3851-7.
[3] Dadaglio G, Moukrim Z, Lo-Man R, Sheshko V, Sebo P, Leclerc C. Induction of a polarized Th1 response by insertion of multiple copies of a viral T-cell epitope into adenylate cyclase of Bordetella pertussis. Infect Immun 2000;68: 3867-72.
[4] Fayolle C, Ladant D, Karimova G, Ullmann A, Leclerc C. Therapy of murine tumours with recombinant Bordetella pertussis adenylate cyclase carrying a cytotoxic T cell epitope. J Immunol 1999;162: 4157-62.
[5] Preville X, Ladant D, Timmerman B, Leclerc C. Eradication of established tumours by vaccination with recombinant Bordetella pertussis adenylate cyclase carrying the human papillomavirus 16 E7 oncoprotein. Cancer Res 2005;65: 641-9.
[6] Berraondo P, Nouze C, Preville X, Ladant D, Leclerc C. Eradication of large tumours in mice by a tritherapy targeting the innate, adaptive, and regulatory components of the immune system. Cancer Res 2007;67: 8847-55.
[7] Karimova G, Fayolle C, Gmira S, Ullmann A, Leclerc C, Ladant D. Charge-dependent translocation of Bordetella pertussis adenylate cyclase toxin into eukaryotic cells: implication for the in vivo delivery of CD8(+) T cell epitopes into antigen-presenting cells. Proc Natl Acad Sci USA 1998;95: 12532-7.
[8] Gmira S, Karimova G, Ladant D. Characterization of recombinant Bordetella pertussis adenylate cyclase toxins carrying passenger proteins. Res Microbiol 2001;152: 889-900.
[9] de Sanjose S et al. Human papillomavirus genotype attribution in invasive cervical cancer: a retrospective cross-sectional worldwide study. Lancet Oncol 201011: 1048-56.
[10] Bruni L, Diaz M, Castellsague X, Ferrer E, Bosch FX, de Sanjose S. Cervical human papillomavirus prevalence in 5 continents: meta-analysis of 1 million women with normal cytological findings. J Infect Dis 2010 202: 1789-99.
[11] Morandell D, Rostek U, Bouvard V, Campo-Fernandez B, Fiedler M, Jansen-Durr P, Zwerschke W. Human papillomavirus type 45 E7 is a transforming protein inducing retinoblastoma protein degradation and anchorage-independent cell cycle progression. Virology 2008;379: 20-9.
[12] Liu X, Clements A, Zhao K, Marmorstein R. Structure of the human Papillomavirus E7 oncoprotein and its mechanism for inactivation of the retinoblastoma tumour suppressor. J Biol Chem 2006;281: 578-86.
[13] Liu S, Tian Y, Greenaway FT, Sun MZ. A C-terminal hydrophobic, solvent-protected core and a flexible N-terminus are potentially required for human papillomavirus 18 E7 protein functionality. Biochimie 2010 92: 901-8.
[14] El-Azami-El-Idrissi M, Bauche C, Loucka J, Osicka R, Sebo P, Ladant D, Leclerc C. Interaction of Bordetella pertussis adenylate cyclase with CD11b/CD18: Role of toxin acylation and identification of the main integrin interaction domain. J Biol Chem 2003;278: 38514-21.
[15] Glaser P, Elmaoglou-Lazaridou A, Krin E, Ladant D, Barzu O, Danchin A. Identification of residues essential for catalysis and binding of calmodulin in Bordetella pertussis adenylate cyclase by site-directed mutagenesis. EMBO J 1989;8: 967-72.
[16] Glaser P, Munier H, Gilles AM, Krin E, Porumb T, Barzu O, Sarfati R, Pellecuer C, Danchin A. Functional consequences of single amino acid substitutions in calmodulin-activated adenylate cyclase of Bordetella pertussis. EMBO J 1991;10: 1683-8.
[17] De Villiers EM, Fauquet C, Broker TR, Bernard HU, & zur Hausen H (2004) Virology 324, 17-27
[18] Khafizov et al. A study of the evolution of inverted-topology repeats from LeuT-fold transporters using AlignMe. Biochemistry,　2010,　49　; 10702-10713
[19] Lin KY, Guarnieri FG, Staveley-O'Carroll KF, Levitsky HI, August JT, Pardoll DM, Wu TC. Treatment of established tumors with a novel vaccine that enhances major histocompatibility class II presentation of tumor antigen. Cancer Res 1996;56: 21-6.
[20] Bertram JS, Janik P. Establishment of a cloned line of Lewis Lung Carcinoma cells adapted to cell culture. Cancer Lett 1980;11: 63-73.
[21] Savai R, Schermuly RT, Pullamsetti SS, Schneider M, Greschus S, Ghofrani HA, Traupe H, Grimminger F, Banat GA. A combination hybrid-based vaccination/adoptive cellular therapy to prevent tumor growth by involvement of T cells. Cancer Res 2007;67: 5443-53.
[22] Barchet W, Oehen S, Klenerman P, Wodarz D, Bocharov G, Lloyd AL, Nowak MA, Hengartner H, Zinkernagel RM, Ehl S. Direct quantitation of rapid elimination of viral antigen-positive lymphocytes by antiviral CD8(+) T cells in vivo. Eur J Immunol 2000;30: 1356-63.
[23] Ingulli E. Tracing tolerance and immunity in vivo by CFSE-labeling of administered cells. Methods Mol Biol 2007;380: 365-76.
[24] Barber DL, Wherry EJ, Ahmed R. Cutting edge: rapid in vivo killing by memory CD8 T cells. J Immunol 2003;171: 27-31.
[25] Holubova et al. Delivery of large heterologous polypeptides across the cytoplasmic membrane of antigen-presenting cells by the Bordetella RTX hemolysin moiety lacking the adenylyl cyclase domain. Infect Immun.　2012 Mar;80(3):1181-92.
SEQUENCE LISTING <110> GENTICEL <120> CYAA-BASED CHIMERIC PROTEINS COMPRISING A HETEROLOGOUS POLYPEPTIDE AND THEIR USES IN THE INDUCTION OF IMMUNE RESPONSES <130> B09985A - PCT - AD/KN <140> PCT/EP2013/065546 <141> 2013-07-23 <150> EP12305897.6 <151> 2012-07-23 <160> 79 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 5121 <212> DNA <213> Bordetella pertussis (wild type CyaA) <220> <221> CDS <222> (1)..(5121) <400> 1 atg cag caa tcg cat cag gct ggt tac gca aac gcc gcc gac cgg gag 48 Met Gln Gln Ser His Gln Ala Gly Tyr Ala Asn Ala Ala Asp Arg Glu 1 5 10 15 tct ggc atc ccc gca gcc gta ctc gat ggc atc aag gcc gtg gcg aag 96 Ser Gly Ile Pro Ala Ala Val Leu Asp Gly Ile Lys Ala Val Ala Lys 20 25 30 gaa aaa aac gcc aca ttg atg ttc cgc ctg gtc aac ccc cat tcc acc 144 Glu Lys Asn Ala Thr Leu Met Phe Arg Leu Val Asn Pro His Ser Thr 35 40 45 agc ctg att gcc gaa ggg gtg gcc acc aaa gga ttg ggc gtg cac gcc 192 Ser Leu Ile Ala Glu Gly Val Ala Thr Lys Gly Leu Gly Val His Ala 50 55 60 aag tcg tcc gat tgg ggg ttg cag gcg ggc tac att ccc gtc aac ccg 240 Lys Ser Ser Asp Trp Gly Leu Gln Ala Gly Tyr Ile Pro Val Asn Pro 65 70 75 80 aat ctt tcc aaa ctg ttc ggc cgt gcg ccc gag gtg atc gcg cgg gcc 288 Asn Leu Ser Lys Leu Phe Gly Arg Ala Pro Glu Val Ile Ala Arg Ala 85 90 95 gac aac gac gtc aac agc agc ctg gcg cat ggc cat acc gcg gtc gac 336 Asp Asn Asp Val Asn Ser Ser Leu Ala His Gly His Thr Ala Val Asp 100 105 110 ctg acg ctg tcg aaa gag cgg ctt gac tat ctg cgg caa gcg ggc ctg 384 Leu Thr Leu Ser Lys Glu Arg Leu Asp Tyr Leu Arg Gln Ala Gly Leu 115 120 125 gtc acc ggc atg gcc gat ggc gtg gtc gcg agc aac cac gca ggc tac 432 Val Thr Gly Met Ala Asp Gly Val Val Ala Ser Asn His Ala Gly Tyr 130 135 140 gag cag ttc gag ttt cgc gtg aag gaa acc tcg gac ggg cgc tat gcc 480 Glu Gln Phe Glu Phe Arg Val Lys Glu Thr Ser Asp Gly Arg Tyr Ala 145 150 155 160 gtg cag tat cgc cgc aag ggc ggc gac gat ttc gag gcg gtc aag gtg 528 Val Gln Tyr Arg Arg Lys Gly Gly Asp Asp Phe Glu Ala Val Lys Val 165 170 175 atc ggc aat gcc gcc ggt att cca ctg acg gcg gat atc gac atg ttc 576 Ile Gly Asn Ala Ala Gly Ile Pro Leu Thr Ala Asp Ile Asp Met Phe 180 185 190 gcc att atg ccg cat ctg tcc aac ttc cgc gac tcg gcg cgc agt tcg 624 Ala Ile Met Pro His Leu Ser Asn Phe Arg Asp Ser Ala Arg Ser Ser 195 200 205 gtg acc agc ggc gat tcg gtg acc gat tac ctg gcg cgc acg cgg cgg 672 Val Thr Ser Gly Asp Ser Val Thr Asp Tyr Leu Ala Arg Thr Arg Arg 210 215 220 gcc gcc agc gag gcc acg ggc ggc ctg gat cgc gaa cgc atc gac ttg 720 Ala Ala Ser Glu Ala Thr Gly Gly Leu Asp Arg Glu Arg Ile Asp Leu 225 230 235 240 ttg tgg aaa atc gct cgc gcc ggc gcc cgt tcc gca gtg ggc acc gag 768 Leu Trp Lys Ile Ala Arg Ala Gly Ala Arg Ser Ala Val Gly Thr Glu 245 250 255 gcg cgt cgc cag ttc cgc tac gac ggc gac atg aat atc ggc gtg atc 816 Ala Arg Arg Gln Phe Arg Tyr Asp Gly Asp Met Asn Ile Gly Val Ile 260 265 270 acc gat ttc gag ctg gaa gtg cgc aat gcg ctg aac agg cgg gcg cac 864 Thr Asp Phe Glu Leu Glu Val Arg Asn Ala Leu Asn Arg Arg Ala His 275 280 285 gcc gtc ggc gcg cag gac gtg gtc cag cat ggc act gag cag aac aat 912 Ala Val Gly Ala Gln Asp Val Val Gln His Gly Thr Glu Gln Asn Asn 290 295 300 cct ttc ccg gag gca gat gag aag att ttc gtc gta tcg gcc acc ggt 960 Pro Phe Pro Glu Ala Asp Glu Lys Ile Phe Val Val Ser Ala Thr Gly 305 310 315 320 gaa agc cag atg ctc acg cgc ggg caa ctg aag gaa tac att ggc cag 1008 Glu Ser Gln Met Leu Thr Arg Gly Gln Leu Lys Glu Tyr Ile Gly Gln 325 330 335 cag cgc ggc gag ggc tat gtc ttc tac gag aac cgt gca tac ggc gtg 1056 Gln Arg Gly Glu Gly Tyr Val Phe Tyr Glu Asn Arg Ala Tyr Gly Val 340 345 350 gcg ggg aaa agc ctg ttc gac gat ggg ctg gga gcc gcg ccc ggc gtg 1104 Ala Gly Lys Ser Leu Phe Asp Asp Gly Leu Gly Ala Ala Pro Gly Val 355 360 365 ccg agc gga cgt tcg aag ttc tcg ccg gat gta ctg gaa acg gtg ccg 1152 Pro Ser Gly Arg Ser Lys Phe Ser Pro Asp Val Leu Glu Thr Val Pro 370 375 380 gcg tca ccc gga ttg cgg cgg ccg tcg ctg ggc gca gtg gaa cgc cag 1200 Ala Ser Pro Gly Leu Arg Arg Pro Ser Leu Gly Ala Val Glu Arg Gln 385 390 395 400 gat tcc ggc tat gac agc ctt gat ggg gtg gga tcg cga tcg ttc tcg 1248 Asp Ser Gly Tyr Asp Ser Leu Asp Gly Val Gly Ser Arg Ser Phe Ser 405 410 415 ttg ggc gag gtg tcc gac atg gcc gcc gtg gaa gcg gcg gaa ctg gaa 1296 Leu Gly Glu Val Ser Asp Met Ala Ala Val Glu Ala Ala Glu Leu Glu 420 425 430 atg acc cgg caa gtc ttg cac gcc ggg gcg cgg cag gac gat gcc gag 1344 Met Thr Arg Gln Val Leu His Ala Gly Ala Arg Gln Asp Asp Ala Glu 435 440 445 ccg ggc gtg agc ggt gcg tcg gcg cac tgg ggg cag cgg gcg ctg cag 1392 Pro Gly Val Ser Gly Ala Ser Ala His Trp Gly Gln Arg Ala Leu Gln 450 455 460 ggc gcc cag gcg gtg gcg gcg gcg cag cgg ctg gtt cat gcc att gcc 1440 Gly Ala Gln Ala Val Ala Ala Ala Gln Arg Leu Val His Ala Ile Ala 465 470 475 480 ctg atg acg caa ttc ggc cgg gcc ggt tcc acc aac acg ccg cag gaa 1488 Leu Met Thr Gln Phe Gly Arg Ala Gly Ser Thr Asn Thr Pro Gln Glu 485 490 495 gcg gcc tcg ttg tcg gcg gcc gtg ttc ggc ttg ggc gag gcc agc agc 1536 Ala Ala Ser Leu Ser Ala Ala Val Phe Gly Leu Gly Glu Ala Ser Ser 500 505 510 gcc gtg gcc gaa acc gtg agc ggt ttt ttc cgc ggg tct tcg cgc tgg 1584 Ala Val Ala Glu Thr Val Ser Gly Phe Phe Arg Gly Ser Ser Arg Trp 515 520 525 gcc ggc ggt ttc ggc gtg gct ggc ggc gcg atg gcg ctg gga ggc ggc 1632 Ala Gly Gly Phe Gly Val Ala Gly Gly Ala Met Ala Leu Gly Gly Gly 530 535 540 atc gcc gcg gcc gtt ggc gcc ggg atg tcg ttg acc gat gac gcg ccg 1680 Ile Ala Ala Ala Val Gly Ala Gly Met Ser Leu Thr Asp Asp Ala Pro 545 550 555 560 gcc gga cag aag gcc gcc gcc ggc gcc gag atc gcg ctg cag ttg aca 1728 Ala Gly Gln Lys Ala Ala Ala Gly Ala Glu Ile Ala Leu Gln Leu Thr 565 570 575 ggt gga acg gtc gag ctg gct tct tcc atc gcg ttg gcg ctg gcc gcg 1776 Gly Gly Thr Val Glu Leu Ala Ser Ser Ile Ala Leu Ala Leu Ala Ala 580 585 590 gcg cgc ggc gtg acc agc ggc ttg cag gtg gcc ggg gcg tcg gcc ggg 1824 Ala Arg Gly Val Thr Ser Gly Leu Gln Val Ala Gly Ala Ser Ala Gly 595 600 605 gcg gct gcc ggc gca ttg gcc gcg gcg ctc agt ccc atg gag atc tac 1872 Ala Ala Ala Gly Ala Leu Ala Ala Ala Leu Ser Pro Met Glu Ile Tyr 610 615 620 ggc ctg gtg cag caa tcg cac tat gcg gat cag ctg gac aag ctg gcg 1920 Gly Leu Val Gln Gln Ser His Tyr Ala Asp Gln Leu Asp Lys Leu Ala 625 630 635 640 cag gaa tcg agc gca tac ggt tac gag ggc gac gcc ttg ctg gcc cag 1968 Gln Glu Ser Ser Ala Tyr Gly Tyr Glu Gly Asp Ala Leu Leu Ala Gln 645 650 655 ctg tat cgc gac aag acg gcc gcc gag ggc gcc gtc gcc ggc gtc tcc 2016 Leu Tyr Arg Asp Lys Thr Ala Ala Glu Gly Ala Val Ala Gly Val Ser 660 665 670 gcc gtc ctg agc acg gtg ggg gcg gcg gtg tcg atc gcc gcg gcg gcc 2064 Ala Val Leu Ser Thr Val Gly Ala Ala Val Ser Ile Ala Ala Ala Ala 675 680 685 agc gtg gta ggg gcc ccg gtg gcg gtg gtc act tcc ttg ctg acc ggg 2112 Ser Val Val Gly Ala Pro Val Ala Val Val Thr Ser Leu Leu Thr Gly 690 695 700 gct ctc aac ggc atc ctg cgc ggc gtg cag cag ccc atc atc gaa aag 2160 Ala Leu Asn Gly Ile Leu Arg Gly Val Gln Gln Pro Ile Ile Glu Lys 705 710 715 720 ctg gcc aac gat tac gct cgc aag atc gac gag ctg ggc ggg ccg caa 2208 Leu Ala Asn Asp Tyr Ala Arg Lys Ile Asp Glu Leu Gly Gly Pro Gln 725 730 735 gcg tac ttc gag aaa aac ctg cag gcg cgt cac gaa caa ctg gcc aat 2256 Ala Tyr Phe Glu Lys Asn Leu Gln Ala Arg His Glu Gln Leu Ala Asn 740 745 750 tcg gac ggc cta cgg aaa atg ctg gcc gac ctg cag gcc ggt tgg aac 2304 Ser Asp Gly Leu Arg Lys Met Leu Ala Asp Leu Gln Ala Gly Trp Asn 755 760 765 gcc agc agc gtg atc ggg gtg cag acg aca gag atc tcc aag tcg gcg 2352 Ala Ser Ser Val Ile Gly Val Gln Thr Thr Glu Ile Ser Lys Ser Ala 770 775 780 ctc gaa ctg gcc gcc att acc ggc aac gcg gac aac ctg aaa tcc gtc 2400 Leu Glu Leu Ala Ala Ile Thr Gly Asn Ala Asp Asn Leu Lys Ser Val 785 790 795 800 gac gtg ttc gtg gac cgc ttc gtc cag ggc gag cgg gtg gcc ggc cag 2448 Asp Val Phe Val Asp Arg Phe Val Gln Gly Glu Arg Val Ala Gly Gln 805 810 815 ccg gtg gtc ctc gac gtc gcc gcc ggc ggc atc gat atc gcc agc cgc 2496 Pro Val Val Leu Asp Val Ala Ala Gly Gly Ile Asp Ile Ala Ser Arg 820 825 830 aag ggc gag cgg ccg gcg ctg acg ttc atc acg ccg ctg gcc gcg cca 2544 Lys Gly Glu Arg Pro Ala Leu Thr Phe Ile Thr Pro Leu Ala Ala Pro 835 840 845 gga gaa gag cag cgc cgg cgc acg aaa acg ggc aag agc gaa ttc acc 2592 Gly Glu Glu Gln Arg Arg Arg Thr Lys Thr Gly Lys Ser Glu Phe Thr 850 855 860 aca ttc gtc gag atc gtg ggc aag cag gac cgc tgg cgc atc cgg gac 2640 Thr Phe Val Glu Ile Val Gly Lys Gln Asp Arg Trp Arg Ile Arg Asp 865 870 875 880 ggc gcg gcc gac acc acc atc gat ctg gcc aag gtg gtg tcg caa ctg 2688 Gly Ala Ala Asp Thr Thr Ile Asp Leu Ala Lys Val Val Ser Gln Leu 885 890 895 gtc gac gcc aat ggc gtg ctc aag cac agc atc aaa ctg gat gtg atc 2736 Val Asp Ala Asn Gly Val Leu Lys His Ser Ile Lys Leu Asp Val Ile 900 905 910 ggc gga gat ggc gat gac gtc gtg ctt gcc aat gct tcg cgc atc cat 2784 Gly Gly Asp Gly Asp Asp Val Val Leu Ala Asn Ala Ser Arg Ile His 915 920 925 tat gac ggc ggc gcg ggc acc aac acg gtc agc tat gcc gcc ctg ggt 2832 Tyr Asp Gly Gly Ala Gly Thr Asn Thr Val Ser Tyr Ala Ala Leu Gly 930 935 940 cga cag gat tcc att acc gtg tcc gcc gac ggg gaa cgt ttc aac gtg 2880 Arg Gln Asp Ser Ile Thr Val Ser Ala Asp Gly Glu Arg Phe Asn Val 945 950 955 960 cgc aag cag ttg aac aac gcc aac gtg tat cgc gaa ggc gtg gct acc 2928 Arg Lys Gln Leu Asn Asn Ala Asn Val Tyr Arg Glu Gly Val Ala Thr 965 970 975 cag aca acc gcc tac ggc aag cgc acg gag aat gtc caa tac cgc cat 2976 Gln Thr Thr Ala Tyr Gly Lys Arg Thr Glu Asn Val Gln Tyr Arg His 980 985 990 gtc gag ctg gcc cgt gtc ggg caa ctg gtg gag gtc gac acg ctc gag 3024 Val Glu Leu Ala Arg Val Gly Gln Leu Val Glu Val Asp Thr Leu Glu 995 1000 1005 cat gtg cag cac atc atc ggc ggg gcc ggc aac gat tcg atc acc 3069 His Val Gln His Ile Ile Gly Gly Ala Gly Asn Asp Ser Ile Thr 1010 1015 1020 ggc aat gcg cac gac aac ttc cta gcc ggc ggg tcg ggc gac gac 3114 Gly Asn Ala His Asp Asn Phe Leu Ala Gly Gly Ser Gly Asp Asp 1025 1030 1035 agg ctg gat ggc ggc gcc ggc aac gac acc ctg gtt ggc ggc gag 3159 Arg Leu Asp Gly Gly Ala Gly Asn Asp Thr Leu Val Gly Gly Glu 1040 1045 1050 ggc caa aac acg gtc atc ggc ggc gcc ggc gac gac gta ttc ctg 3204 Gly Gln Asn Thr Val Ile Gly Gly Ala Gly Asp Asp Val Phe Leu 1055 1060 1065 cag gac ctg ggg gta tgg agc aac cag ctc gat ggc ggc gcg ggc 3249 Gln Asp Leu Gly Val Trp Ser Asn Gln Leu Asp Gly Gly Ala Gly 1070 1075 1080 gtc gat acc gtg aag tac aac gtg cac cag cct tcc gag gag cgc 3294 Val Asp Thr Val Lys Tyr Asn Val His Gln Pro Ser Glu Glu Arg 1085 1090 1095 ctc gaa cgc atg ggc gac acg ggc atc cat gcc gat ctt caa aag 3339 Leu Glu Arg Met Gly Asp Thr Gly Ile His Ala Asp Leu Gln Lys 1100 1105 1110 ggc acg gtc gag aag tgg ccg gcc ctg aac ctg ttc agc gtc gac 3384 Gly Thr Val Glu Lys Trp Pro Ala Leu Asn Leu Phe Ser Val Asp 1115 1120 1125 cat gtc aag aat atc gag aat ctg cac ggc tcc cgc ctg aac gac 3429 His Val Lys Asn Ile Glu Asn Leu His Gly Ser Arg Leu Asn Asp 1130 1135 1140 cgc atc gcc ggc gac gac cag gac aac gag ctc tgg ggc cac gat 3474 Arg Ile Ala Gly Asp Asp Gln Asp Asn Glu Leu Trp Gly His Asp 1145 1150 1155 ggc aac gac acg ata cgc ggc cgg ggc ggc gac gac atc ctg cgc 3519 Gly Asn Asp Thr Ile Arg Gly Arg Gly Gly Asp Asp Ile Leu Arg 1160 1165 1170 ggc ggc ctg ggc ctg gac acg ctg tat ggc gag gac ggc aac gac 3564 Gly Gly Leu Gly Leu Asp Thr Leu Tyr Gly Glu Asp Gly Asn Asp 1175 1180 1185 atc ttc ctg cag gac gac gag acc gtc agc gat gac atc gac ggc 3609 Ile Phe Leu Gln Asp Asp Glu Thr Val Ser Asp Asp Ile Asp Gly 1190 1195 1200 ggc gcg ggg ctg gac acc gtc gac tac tcc gcc atg atc cat cca 3654 Gly Ala Gly Leu Asp Thr Val Asp Tyr Ser Ala Met Ile His Pro 1205 1210 1215 ggc agg atc gtt gcg ccg cat gaa tac ggc ttc ggg atc gag gcg 3699 Gly Arg Ile Val Ala Pro His Glu Tyr Gly Phe Gly Ile Glu Ala 1220 1225 1230 gac ctg tcc agg gaa tgg gtg cgc aag gcg tcc gcg ctg ggc gtg 3744 Asp Leu Ser Arg Glu Trp Val Arg Lys Ala Ser Ala Leu Gly Val 1235 1240 1245 gac tat tac gat aat gtc cgc aat gtc gaa aac gtc atc ggt acg 3789 Asp Tyr Tyr Asp Asn Val Arg Asn Val Glu Asn Val Ile Gly Thr 1250 1255 1260 agc atg aag gat gtg ctc atc ggc gac gcg caa gcc aat acc ctg 3834 Ser Met Lys Asp Val Leu Ile Gly Asp Ala Gln Ala Asn Thr Leu 1265 1270 1275 atg ggc cag ggc ggc gac gat acc gtg cgc ggc ggc gac ggc gat 3879 Met Gly Gln Gly Gly Asp Asp Thr Val Arg Gly Gly Asp Gly Asp 1280 1285 1290 gat ctg ctg ttc ggc ggc gac ggc aac gac atg ctg tat ggc gac 3924 Asp Leu Leu Phe Gly Gly Asp Gly Asn Asp Met Leu Tyr Gly Asp 1295 1300 1305 gcc ggc aac gac acc ctc tac ggg ggg ctg ggc gac gat acc ctt 3969 Ala Gly Asn Asp Thr Leu Tyr Gly Gly Leu Gly Asp Asp Thr Leu 1310 1315 1320 gaa ggc ggc gcg ggc aac gat tgg ttc ggc cag acg cag gcg cgc 4014 Glu Gly Gly Ala Gly Asn Asp Trp Phe Gly Gln Thr Gln Ala Arg 1325 1330 1335 gag cat gac gtg ctg cgc ggc gga gat ggg gtg gat acc gtc gat 4059 Glu His Asp Val Leu Arg Gly Gly Asp Gly Val Asp Thr Val Asp 1340 1345 1350 tac agc cag acc ggc gcg cat gcc ggc att gcc gcg ggt cgc atc 4104 Tyr Ser Gln Thr Gly Ala His Ala Gly Ile Ala Ala Gly Arg Ile 1355 1360 1365 ggg ctg ggc atc ctg gct gac ctg ggc gcc ggc cgc gtc gac aag 4149 Gly Leu Gly Ile Leu Ala Asp Leu Gly Ala Gly Arg Val Asp Lys 1370 1375 1380 ctg ggc gag gcc ggc agc agc gcc tac gat acg gtt tcc ggt atc 4194 Leu Gly Glu Ala Gly Ser Ser Ala Tyr Asp Thr Val Ser Gly Ile 1385 1390 1395 gag aac gtg gtg ggc acg gaa ctg gcc gac cgc atc acg ggc gat 4239 Glu Asn Val Val Gly Thr Glu Leu Ala Asp Arg Ile Thr Gly Asp 1400 1405 1410 gcg cag gcc aac gtg ctg cgc ggc gcg ggt ggc gcc gac gtg ctt 4284 Ala Gln Ala Asn Val Leu Arg Gly Ala Gly Gly Ala Asp Val Leu 1415 1420 1425 gcg ggc ggc gag ggc gac gat gtg ctg ctg ggc ggc gac ggc gac 4329 Ala Gly Gly Glu Gly Asp Asp Val Leu Leu Gly Gly Asp Gly Asp 1430 1435 1440 gac cag ctg tcg ggc gac gcc gga cgc gat cgc ttg tac ggc gaa 4374 Asp Gln Leu Ser Gly Asp Ala Gly Arg Asp Arg Leu Tyr Gly Glu 1445 1450 1455 gcc ggt gac gac tgg ttc ttc cag gat gcc gcc aat gcc ggc aat 4419 Ala Gly Asp Asp Trp Phe Phe Gln Asp Ala Ala Asn Ala Gly Asn 1460 1465 1470 ctg ctc gac ggc ggc gac ggc cgc gat acc gtg gat ttc agc ggc 4464 Leu Leu Asp Gly Gly Asp Gly Arg Asp Thr Val Asp Phe Ser Gly 1475 1480 1485 ccg ggc cgg ggc ctc gac gcc ggc gca aag ggc gta ttc ctg agc 4509 Pro Gly Arg Gly Leu Asp Ala Gly Ala Lys Gly Val Phe Leu Ser 1490 1495 1500 ttg ggc aag ggg ttc gcc agc ctg atg gac gaa ccc gaa acc agc 4554 Leu Gly Lys Gly Phe Ala Ser Leu Met Asp Glu Pro Glu Thr Ser 1505 1510 1515 aac gtg ttg cgc aat atc gag aac gcc gtg ggc agc gcg cgt gat 4599 Asn Val Leu Arg Asn Ile Glu Asn Ala Val Gly Ser Ala Arg Asp 1520 1525 1530 gac gtg ctg atc ggc gac gca ggc gcc aac gtc ctc aat ggc ctg 4644 Asp Val Leu Ile Gly Asp Ala Gly Ala Asn Val Leu Asn Gly Leu 1535 1540 1545 gcg ggc aac gac gtg ctg tcc ggc ggc gct ggc gac gat gtg ctg 4689 Ala Gly Asn Asp Val Leu Ser Gly Gly Ala Gly Asp Asp Val Leu 1550 1555 1560 ctg ggc gac gag ggc tcg gac ctg ctc agc ggc gat gcg ggc aac 4734 Leu Gly Asp Glu Gly Ser Asp Leu Leu Ser Gly Asp Ala Gly Asn 1565 1570 1575 gac gat ctg ttc ggc ggg cag ggc gat gat act tat ctg ttc ggg 4779 Asp Asp Leu Phe Gly Gly Gln Gly Asp Asp Thr Tyr Leu Phe Gly 1580 1585 1590 gtc ggg tac ggg cac gac acg atc tac gaa tcg ggc ggc ggc cat 4824 Val Gly Tyr Gly His Asp Thr Ile Tyr Glu Ser Gly Gly Gly His 1595 1600 1605 gac acc atc cgc atc aac gcg ggg gcg gac cag ctg tgg ttc gcg 4869 Asp Thr Ile Arg Ile Asn Ala Gly Ala Asp Gln Leu Trp Phe Ala 1610 1615 1620 cgc cag ggc aac gac ctg gag atc cgc att ctc ggc acc gac gat 4914 Arg Gln Gly Asn Asp Leu Glu Ile Arg Ile Leu Gly Thr Asp Asp 1625 1630 1635 gca ctt acc gtg cac gac tgg tat cgc gac gcc gat cac cgg gtg 4959 Ala Leu Thr Val His Asp Trp Tyr Arg Asp Ala Asp His Arg Val 1640 1645 1650 gaa atc atc cat gcc gcc aac cag gcg gta gac cag gca ggc atc 5004 Glu Ile Ile His Ala Ala Asn Gln Ala Val Asp Gln Ala Gly Ile 1655 1660 1665 gaa aag ctg gtc gag gca atg gcg cag tat ccg gac ccc ggc gcg 5049 Glu Lys Leu Val Glu Ala Met Ala Gln Tyr Pro Asp Pro Gly Ala 1670 1675 1680 gcg gcg gct gcc ccg ccg gcg gcg cgc gtg ccg gac acg ctg atg 5094 Ala Ala Ala Ala Pro Pro Ala Ala Arg Val Pro Asp Thr Leu Met 1685 1690 1695 cag tcc ctg gct gtc aac tgg cgc tga 5121 Gln Ser Leu Ala Val Asn Trp Arg 1700 1705 <210> 2 <211> 1706 <212> PRT <213> Bordetella pertussis (wild type CyaA) <400> 2 Met Gln Gln Ser His Gln Ala Gly Tyr Ala Asn Ala Ala Asp Arg Glu 1 5 10 15 Ser Gly Ile Pro Ala Ala Val Leu Asp Gly Ile Lys Ala Val Ala Lys 20 25 30 Glu Lys Asn Ala Thr Leu Met Phe Arg Leu Val Asn Pro His Ser Thr 35 40 45 Ser Leu Ile Ala Glu Gly Val Ala Thr Lys Gly Leu Gly Val His Ala 50 55 60 Lys Ser Ser Asp Trp Gly Leu Gln Ala Gly Tyr Ile Pro Val Asn Pro 65 70 75 80 Asn Leu Ser Lys Leu Phe Gly Arg Ala Pro Glu Val Ile Ala Arg Ala 85 90 95 Asp Asn Asp Val Asn Ser Ser Leu Ala His Gly His Thr Ala Val Asp 100 105 110 Leu Thr Leu Ser Lys Glu Arg Leu Asp Tyr Leu Arg Gln Ala Gly Leu 115 120 125 Val Thr Gly Met Ala Asp Gly Val Val Ala Ser Asn His Ala Gly Tyr 130 135 140 Glu Gln Phe Glu Phe Arg Val Lys Glu Thr Ser Asp Gly Arg Tyr Ala 145 150 155 160 Val Gln Tyr Arg Arg Lys Gly Gly Asp Asp Phe Glu Ala Val Lys Val 165 170 175 Ile Gly Asn Ala Ala Gly Ile Pro Leu Thr Ala Asp Ile Asp Met Phe 180 185 190 Ala Ile Met Pro His Leu Ser Asn Phe Arg Asp Ser Ala Arg Ser Ser 195 200 205 Val Thr Ser Gly Asp Ser Val Thr Asp Tyr Leu Ala Arg Thr Arg Arg 210 215 220 Ala Ala Ser Glu Ala Thr Gly Gly Leu Asp Arg Glu Arg Ile Asp Leu 225 230 235 240 Leu Trp Lys Ile Ala Arg Ala Gly Ala Arg Ser Ala Val Gly Thr Glu 245 250 255 Ala Arg Arg Gln Phe Arg Tyr Asp Gly Asp Met Asn Ile Gly Val Ile 260 265 270 Thr Asp Phe Glu Leu Glu Val Arg Asn Ala Leu Asn Arg Arg Ala His 275 280 285 Ala Val Gly Ala Gln Asp Val Val Gln His Gly Thr Glu Gln Asn Asn 290 295 300 Pro Phe Pro Glu Ala Asp Glu Lys Ile Phe Val Val Ser Ala Thr Gly 305 310 315 320 Glu Ser Gln Met Leu Thr Arg Gly Gln Leu Lys Glu Tyr Ile Gly Gln 325 330 335 Gln Arg Gly Glu Gly Tyr Val Phe Tyr Glu Asn Arg Ala Tyr Gly Val 340 345 350 Ala Gly Lys Ser Leu Phe Asp Asp Gly Leu Gly Ala Ala Pro Gly Val 355 360 365 Pro Ser Gly Arg Ser Lys Phe Ser Pro Asp Val Leu Glu Thr Val Pro 370 375 380 Ala Ser Pro Gly Leu Arg Arg Pro Ser Leu Gly Ala Val Glu Arg Gln 385 390 395 400 Asp Ser Gly Tyr Asp Ser Leu Asp Gly Val Gly Ser Arg Ser Phe Ser 405 410 415 Leu Gly Glu Val Ser Asp Met Ala Ala Val Glu Ala Ala Glu Leu Glu 420 425 430 Met Thr Arg Gln Val Leu His Ala Gly Ala Arg Gln Asp Asp Ala Glu 435 440 445 Pro Gly Val Ser Gly Ala Ser Ala His Trp Gly Gln Arg Ala Leu Gln 450 455 460 Gly Ala Gln Ala Val Ala Ala Ala Gln Arg Leu Val His Ala Ile Ala 465 470 475 480 Leu Met Thr Gln Phe Gly Arg Ala Gly Ser Thr Asn Thr Pro Gln Glu 485 490 495 Ala Ala Ser Leu Ser Ala Ala Val Phe Gly Leu Gly Glu Ala Ser Ser 500 505 510 Ala Val Ala Glu Thr Val Ser Gly Phe Phe Arg Gly Ser Ser Arg Trp 515 520 525 Ala Gly Gly Phe Gly Val Ala Gly Gly Ala Met Ala Leu Gly Gly Gly 530 535 540 Ile Ala Ala Ala Val Gly Ala Gly Met Ser Leu Thr Asp Asp Ala Pro 545 550 555 560 Ala Gly Gln Lys Ala Ala Ala Gly Ala Glu Ile Ala Leu Gln Leu Thr 565 570 575 Gly Gly Thr Val Glu Leu Ala Ser Ser Ile Ala Leu Ala Leu Ala Ala 580 585 590 Ala Arg Gly Val Thr Ser Gly Leu Gln Val Ala Gly Ala Ser Ala Gly 595 600 605 Ala Ala Ala Gly Ala Leu Ala Ala Ala Leu Ser Pro Met Glu Ile Tyr 610 615 620 Gly Leu Val Gln Gln Ser His Tyr Ala Asp Gln Leu Asp Lys Leu Ala 625 630 635 640 Gln Glu Ser Ser Ala Tyr Gly Tyr Glu Gly Asp Ala Leu Leu Ala Gln 645 650 655 Leu Tyr Arg Asp Lys Thr Ala Ala Glu Gly Ala Val Ala Gly Val Ser 660 665 670 Ala Val Leu Ser Thr Val Gly Ala Ala Val Ser Ile Ala Ala Ala Ala 675 680 685 Ser Val Val Gly Ala Pro Val Ala Val Val Thr Ser Leu Leu Thr Gly 690 695 700 Ala Leu Asn Gly Ile Leu Arg Gly Val Gln Gln Pro Ile Ile Glu Lys 705 710 715 720 Leu Ala Asn Asp Tyr Ala Arg Lys Ile Asp Glu Leu Gly Gly Pro Gln 725 730 735 Ala Tyr Phe Glu Lys Asn Leu Gln Ala Arg His Glu Gln Leu Ala Asn 740 745 750 Ser Asp Gly Leu Arg Lys Met Leu Ala Asp Leu Gln Ala Gly Trp Asn 755 760 765 Ala Ser Ser Val Ile Gly Val Gln Thr Thr Glu Ile Ser Lys Ser Ala 770 775 780 Leu Glu Leu Ala Ala Ile Thr Gly Asn Ala Asp Asn Leu Lys Ser Val 785 790 795 800 Asp Val Phe Val Asp Arg Phe Val Gln Gly Glu Arg Val Ala Gly Gln 805 810 815 Pro Val Val Leu Asp Val Ala Ala Gly Gly Ile Asp Ile Ala Ser Arg 820 825 830 Lys Gly Glu Arg Pro Ala Leu Thr Phe Ile Thr Pro Leu Ala Ala Pro 835 840 845 Gly Glu Glu Gln Arg Arg Arg Thr Lys Thr Gly Lys Ser Glu Phe Thr 850 855 860 Thr Phe Val Glu Ile Val Gly Lys Gln Asp Arg Trp Arg Ile Arg Asp 865 870 875 880 Gly Ala Ala Asp Thr Thr Ile Asp Leu Ala Lys Val Val Ser Gln Leu 885 890 895 Val Asp Ala Asn Gly Val Leu Lys His Ser Ile Lys Leu Asp Val Ile 900 905 910 Gly Gly Asp Gly Asp Asp Val Val Leu Ala Asn Ala Ser Arg Ile His 915 920 925 Tyr Asp Gly Gly Ala Gly Thr Asn Thr Val Ser Tyr Ala Ala Leu Gly 930 935 940 Arg Gln Asp Ser Ile Thr Val Ser Ala Asp Gly Glu Arg Phe Asn Val 945 950 955 960 Arg Lys Gln Leu Asn Asn Ala Asn Val Tyr Arg Glu Gly Val Ala Thr 965 970 975 Gln Thr Thr Ala Tyr Gly Lys Arg Thr Glu Asn Val Gln Tyr Arg His 980 985 990 Val Glu Leu Ala Arg Val Gly Gln Leu Val Glu Val Asp Thr Leu Glu 995 1000 1005 His Val Gln His Ile Ile Gly Gly Ala Gly Asn Asp Ser Ile Thr 1010 1015 1020 Gly Asn Ala His Asp Asn Phe Leu Ala Gly Gly Ser Gly Asp Asp 1025 1030 1035 Arg Leu Asp Gly Gly Ala Gly Asn Asp Thr Leu Val Gly Gly Glu 1040 1045 1050 Gly Gln Asn Thr Val Ile Gly Gly Ala Gly Asp Asp Val Phe Leu 1055 1060 1065 Gln Asp Leu Gly Val Trp Ser Asn Gln Leu Asp Gly Gly Ala Gly 1070 1075 1080 Val Asp Thr Val Lys Tyr Asn Val His Gln Pro Ser Glu Glu Arg 1085 1090 1095 Leu Glu Arg Met Gly Asp Thr Gly Ile His Ala Asp Leu Gln Lys 1100 1105 1110 Gly Thr Val Glu Lys Trp Pro Ala Leu Asn Leu Phe Ser Val Asp 1115 1120 1125 His Val Lys Asn Ile Glu Asn Leu His Gly Ser Arg Leu Asn Asp 1130 1135 1140 Arg Ile Ala Gly Asp Asp Gln Asp Asn Glu Leu Trp Gly His Asp 1145 1150 1155 Gly Asn Asp Thr Ile Arg Gly Arg Gly Gly Asp Asp Ile Leu Arg 1160 1165 1170 Gly Gly Leu Gly Leu Asp Thr Leu Tyr Gly Glu Asp Gly Asn Asp 1175 1180 1185 Ile Phe Leu Gln Asp Asp Glu Thr Val Ser Asp Asp Ile Asp Gly 1190 1195 1200 Gly Ala Gly Leu Asp Thr Val Asp Tyr Ser Ala Met Ile His Pro 1205 1210 1215 Gly Arg Ile Val Ala Pro His Glu Tyr Gly Phe Gly Ile Glu Ala 1220 1225 1230 Asp Leu Ser Arg Glu Trp Val Arg Lys Ala Ser Ala Leu Gly Val 1235 1240 1245 Asp Tyr Tyr Asp Asn Val Arg Asn Val Glu Asn Val Ile Gly Thr 1250 1255 1260 Ser Met Lys Asp Val Leu Ile Gly Asp Ala Gln Ala Asn Thr Leu 1265 1270 1275 Met Gly Gln Gly Gly Asp Asp Thr Val Arg Gly Gly Asp Gly Asp 1280 1285 1290 Asp Leu Leu Phe Gly Gly Asp Gly Asn Asp Met Leu Tyr Gly Asp 1295 1300 1305 Ala Gly Asn Asp Thr Leu Tyr Gly Gly Leu Gly Asp Asp Thr Leu 1310 1315 1320 Glu Gly Gly Ala Gly Asn Asp Trp Phe Gly Gln Thr Gln Ala Arg 1325 1330 1335 Glu His Asp Val Leu Arg Gly Gly Asp Gly Val Asp Thr Val Asp 1340 1345 1350 Tyr Ser Gln Thr Gly Ala His Ala Gly Ile Ala Ala Gly Arg Ile 1355 1360 1365 Gly Leu Gly Ile Leu Ala Asp Leu Gly Ala Gly Arg Val Asp Lys 1370 1375 1380 Leu Gly Glu Ala Gly Ser Ser Ala Tyr Asp Thr Val Ser Gly Ile 1385 1390 1395 Glu Asn Val Val Gly Thr Glu Leu Ala Asp Arg Ile Thr Gly Asp 1400 1405 1410 Ala Gln Ala Asn Val Leu Arg Gly Ala Gly Gly Ala Asp Val Leu 1415 1420 1425 Ala Gly Gly Glu Gly Asp Asp Val Leu Leu Gly Gly Asp Gly Asp 1430 1435 1440 Asp Gln Leu Ser Gly Asp Ala Gly Arg Asp Arg Leu Tyr Gly Glu 1445 1450 1455 Ala Gly Asp Asp Trp Phe Phe Gln Asp Ala Ala Asn Ala Gly Asn 1460 1465 1470 Leu Leu Asp Gly Gly Asp Gly Arg Asp Thr Val Asp Phe Ser Gly 1475 1480 1485 Pro Gly Arg Gly Leu Asp Ala Gly Ala Lys Gly Val Phe Leu Ser 1490 1495 1500 Leu Gly Lys Gly Phe Ala Ser Leu Met Asp Glu Pro Glu Thr Ser 1505 1510 1515 Asn Val Leu Arg Asn Ile Glu Asn Ala Val Gly Ser Ala Arg Asp 1520 1525 1530 Asp Val Leu Ile Gly Asp Ala Gly Ala Asn Val Leu Asn Gly Leu 1535 1540 1545 Ala Gly Asn Asp Val Leu Ser Gly Gly Ala Gly Asp Asp Val Leu 1550 1555 1560 Leu Gly Asp Glu Gly Ser Asp Leu Leu Ser Gly Asp Ala Gly Asn 1565 1570 1575 Asp Asp Leu Phe Gly Gly Gln Gly Asp Asp Thr Tyr Leu Phe Gly 1580 1585 1590 Val Gly Tyr Gly His Asp Thr Ile Tyr Glu Ser Gly Gly Gly His 1595 1600 1605 Asp Thr Ile Arg Ile Asn Ala Gly Ala Asp Gln Leu Trp Phe Ala 1610 1615 1620 Arg Gln Gly Asn Asp Leu Glu Ile Arg Ile Leu Gly Thr Asp Asp 1625 1630 1635 Ala Leu Thr Val His Asp Trp Tyr Arg Asp Ala Asp His Arg Val 1640 1645 1650 Glu Ile Ile His Ala Ala Asn Gln Ala Val Asp Gln Ala Gly Ile 1655 1660 1665 Glu Lys Leu Val Glu Ala Met Ala Gln Tyr Pro Asp Pro Gly Ala 1670 1675 1680 Ala Ala Ala Ala Pro Pro Ala Ala Arg Val Pro Asp Thr Leu Met 1685 1690 1695 Gln Ser Leu Ala Val Asn Trp Arg 1700 1705 <210> 3 <211> 5121 <212> DNA <213> Bordetella hinzii (wild type CyaA) <220> <221> CDS <222> (1)..(5121) <400> 3 atg cag caa tcg cat cag gct ggt tac gca aac gcc gcc gac cgg gag 48 Met Gln Gln Ser His Gln Ala Gly Tyr Ala Asn Ala Ala Asp Arg Glu 1 5 10 15 tct ggc atc ccc gca gcc gta ctc gat ggc atc aag gcc gtg gcg aag 96 Ser Gly Ile Pro Ala Ala Val Leu Asp Gly Ile Lys Ala Val Ala Lys 20 25 30 gaa aaa aac gcc aca ttg atg ttc cgc ctg gtc aac ccc cat tcc acc 144 Glu Lys Asn Ala Thr Leu Met Phe Arg Leu Val Asn Pro His Ser Thr 35 40 45 agc ctg att gcc gaa ggg gtg gcc acc aaa gga ttg ggc gtg cac gcc 192 Ser Leu Ile Ala Glu Gly Val Ala Thr Lys Gly Leu Gly Val His Ala 50 55 60 aag tcg tcc gat tgg ggg ttg cag gcg ggc tac att ccc gtc aac ccg 240 Lys Ser Ser Asp Trp Gly Leu Gln Ala Gly Tyr Ile Pro Val Asn Pro 65 70 75 80 aat ctt tcc aaa ctg ttc ggc cgt gcg ccc gag gtg atc gcg cgg gcc 288 Asn Leu Ser Lys Leu Phe Gly Arg Ala Pro Glu Val Ile Ala Arg Ala 85 90 95 gac aac gac gtc aac agc agc ctg gcg cat ggc cat acc gcg gtc gac 336 Asp Asn Asp Val Asn Ser Ser Leu Ala His Gly His Thr Ala Val Asp 100 105 110 ctg acg ctg tcg aaa gag cgg ctt gac tat ctg cgg caa gcg ggc ctg 384 Leu Thr Leu Ser Lys Glu Arg Leu Asp Tyr Leu Arg Gln Ala Gly Leu 115 120 125 gtc acc ggc atg gcc gat ggc gtg gtc gcg agc aac cac gca ggc tac 432 Val Thr Gly Met Ala Asp Gly Val Val Ala Ser Asn His Ala Gly Tyr 130 135 140 gag cag ttc gag ttt cgc gtg aag gaa acc tcg gac ggg cgc tat gcc 480 Glu Gln Phe Glu Phe Arg Val Lys Glu Thr Ser Asp Gly Arg Tyr Ala 145 150 155 160 gtg cag tat cgc cgc aag ggc ggc gac gat ttc gag gcg gtc aag gtg 528 Val Gln Tyr Arg Arg Lys Gly Gly Asp Asp Phe Glu Ala Val Lys Val 165 170 175 atc ggc aat gcc gcc ggt att cca ctg acg gcg gat atc gac atg ttc 576 Ile Gly Asn Ala Ala Gly Ile Pro Leu Thr Ala Asp Ile Asp Met Phe 180 185 190 gcc att atg ccg cat ctg tcc aac ttc cgc gac tcg gcg cgc agt tcg 624 Ala Ile Met Pro His Leu Ser Asn Phe Arg Asp Ser Ala Arg Ser Ser 195 200 205 gtg acc agc ggc gat tcg gtg acc gat tac ctg gcg cgc acg cgg cgg 672 Val Thr Ser Gly Asp Ser Val Thr Asp Tyr Leu Ala Arg Thr Arg Arg 210 215 220 gcc gcc agc gag gcc acg ggc ggc ctg gat cgc gaa cgc atc gac ttg 720 Ala Ala Ser Glu Ala Thr Gly Gly Leu Asp Arg Glu Arg Ile Asp Leu 225 230 235 240 ttg tgg aaa atc gct cgc gcc ggc gcc cgt tcc gca gtg ggc acc gag 768 Leu Trp Lys Ile Ala Arg Ala Gly Ala Arg Ser Ala Val Gly Thr Glu 245 250 255 gcg cgt cgc cag ttc cgc tac gac ggc gac atg aat atc ggc gtg atc 816 Ala Arg Arg Gln Phe Arg Tyr Asp Gly Asp Met Asn Ile Gly Val Ile 260 265 270 acc gat ttc gag ctg gaa gtg cgc aat gcg ctg aac agg cgg gcg cac 864 Thr Asp Phe Glu Leu Glu Val Arg Asn Ala Leu Asn Arg Arg Ala His 275 280 285 gcc gtc ggc gcg cag gac gtg gtc cag cat ggc act gag cag aac aat 912 Ala Val Gly Ala Gln Asp Val Val Gln His Gly Thr Glu Gln Asn Asn 290 295 300 cct ttc ccg gag gca gat gag aag att ttc gtc gta tcg gcc acc ggt 960 Pro Phe Pro Glu Ala Asp Glu Lys Ile Phe Val Val Ser Ala Thr Gly 305 310 315 320 gaa agc cag atg ctc acg cgc ggg caa ctg aag gaa tac att ggc cag 1008 Glu Ser Gln Met Leu Thr Arg Gly Gln Leu Lys Glu Tyr Ile Gly Gln 325 330 335 cag cgc ggc gag ggc tat gtc ttc tac gag aac cgt gca tac ggc gtg 1056 Gln Arg Gly Glu Gly Tyr Val Phe Tyr Glu Asn Arg Ala Tyr Gly Val 340 345 350 gcg ggg aaa agc ctg ttc gac gat ggg ctg gga gcc gcg ccc ggc gtg 1104 Ala Gly Lys Ser Leu Phe Asp Asp Gly Leu Gly Ala Ala Pro Gly Val 355 360 365 ccg agc gga cgt tcg aag ttc tcg ccg gat gta ctg gaa acg gtg ccg 1152 Pro Ser Gly Arg Ser Lys Phe Ser Pro Asp Val Leu Glu Thr Val Pro 370 375 380 gcg tca ccc gga ttg cgg cgg ccg tcg ctg ggc gca gtg gaa cgc cag 1200 Ala Ser Pro Gly Leu Arg Arg Pro Ser Leu Gly Ala Val Glu Arg Gln 385 390 395 400 gat tcc ggc tat gac agc ctt gat ggg gtg gga tcg cga tcg ttc tcg 1248 Asp Ser Gly Tyr Asp Ser Leu Asp Gly Val Gly Ser Arg Ser Phe Ser 405 410 415 ttg ggc gag gtg tcc gac atg gcc gcc gtg gaa gcg gcg gaa ctg gaa 1296 Leu Gly Glu Val Ser Asp Met Ala Ala Val Glu Ala Ala Glu Leu Glu 420 425 430 atg acc cgg caa gtc ttg cac gcc ggg gcg cgg cag gac gat gcc gag 1344 Met Thr Arg Gln Val Leu His Ala Gly Ala Arg Gln Asp Asp Ala Glu 435 440 445 ccg ggc gtg agc ggt gcg tcg gcg cac tgg ggg cag cgg gcg ctg cag 1392 Pro Gly Val Ser Gly Ala Ser Ala His Trp Gly Gln Arg Ala Leu Gln 450 455 460 ggc gcc cag gcg gtg gcg gcg gcg cag cgg ctg gtt cat gcc att gcc 1440 Gly Ala Gln Ala Val Ala Ala Ala Gln Arg Leu Val His Ala Ile Ala 465 470 475 480 ctg atg acg caa ttc ggc cgg gcc ggt tcc acc aac acg ccg cag gaa 1488 Leu Met Thr Gln Phe Gly Arg Ala Gly Ser Thr Asn Thr Pro Gln Glu 485 490 495 gcg gcc tcg ttg tcg gcg gcc gtg ttc ggc ttg ggc gag gcc agc agc 1536 Ala Ala Ser Leu Ser Ala Ala Val Phe Gly Leu Gly Glu Ala Ser Ser 500 505 510 gcc gtg gcc gaa acc gtg agc ggt ttt ttc cgc ggg tct tcg cgc tgg 1584 Ala Val Ala Glu Thr Val Ser Gly Phe Phe Arg Gly Ser Ser Arg Trp 515 520 525 gcc ggc ggt ttc ggc gtg gct ggc ggc gcg atg gcg ctg gga ggc ggc 1632 Ala Gly Gly Phe Gly Val Ala Gly Gly Ala Met Ala Leu Gly Gly Gly 530 535 540 atc gcc gcg gcc gtt ggc gcc ggg atg tcg ttg acc gat gac gcg ccg 1680 Ile Ala Ala Ala Val Gly Ala Gly Met Ser Leu Thr Asp Asp Ala Pro 545 550 555 560 gcc gga cag aag gcc gcc gcc ggc gcc gag atc gcg ctg cag ttg aca 1728 Ala Gly Gln Lys Ala Ala Ala Gly Ala Glu Ile Ala Leu Gln Leu Thr 565 570 575 ggt gga acg gtc gag ctg gct tct tcc atc gcg ttg gcg ctg gcc gcg 1776 Gly Gly Thr Val Glu Leu Ala Ser Ser Ile Ala Leu Ala Leu Ala Ala 580 585 590 gcg cgc ggc gtg acc agc ggc ttg cag gtg gcc ggg gcg tcg gcc ggg 1824 Ala Arg Gly Val Thr Ser Gly Leu Gln Val Ala Gly Ala Ser Ala Gly 595 600 605 gcg gct gcc ggc gca ttg gcc gcg gcg ctc agt ccc atg gag atc tac 1872 Ala Ala Ala Gly Ala Leu Ala Ala Ala Leu Ser Pro Met Glu Ile Tyr 610 615 620 ggc ctg gtg cag caa tcg cac tat gcg gat cag ctg gac aag ctg gcg 1920 Gly Leu Val Gln Gln Ser His Tyr Ala Asp Gln Leu Asp Lys Leu Ala 625 630 635 640 cag gaa tcg agc gca tac ggt tac gag ggc gac gcc ttg ctg gcc cag 1968 Gln Glu Ser Ser Ala Tyr Gly Tyr Glu Gly Asp Ala Leu Leu Ala Gln 645 650 655 ctg tat cgc gac aag acg gcc gcc gag ggc gcc gtc gcc ggc gtc tcc 2016 Leu Tyr Arg Asp Lys Thr Ala Ala Glu Gly Ala Val Ala Gly Val Ser 660 665 670 gcc gtc ctg agc acg gtg ggg gcg gcg gtg tcg atc gcc gcg gcg gcc 2064 Ala Val Leu Ser Thr Val Gly Ala Ala Val Ser Ile Ala Ala Ala Ala 675 680 685 agc gtg gta ggg gcc ccg gtg gcg gtg gtc act tcc ttg ctg acc ggg 2112 Ser Val Val Gly Ala Pro Val Ala Val Val Thr Ser Leu Leu Thr Gly 690 695 700 gct ctc aac ggc atc ctg cgc ggc gtg cag cag ccc atc atc gaa aag 2160 Ala Leu Asn Gly Ile Leu Arg Gly Val Gln Gln Pro Ile Ile Glu Lys 705 710 715 720 ctg gcc aac gat tac gct cgc aag atc gac gag ctg ggc ggg ccg caa 2208 Leu Ala Asn Asp Tyr Ala Arg Lys Ile Asp Glu Leu Gly Gly Pro Gln 725 730 735 gcg tac ttc gag aaa aac ctg cag gcg cgt cac gaa caa ctg gcc aat 2256 Ala Tyr Phe Glu Lys Asn Leu Gln Ala Arg His Glu Gln Leu Ala Asn 740 745 750 tcg gac ggc cta cgg aaa atg ctg gcc gac ctg cag gcc ggt tgg aac 2304 Ser Asp Gly Leu Arg Lys Met Leu Ala Asp Leu Gln Ala Gly Trp Asn 755 760 765 gcc agc agc gtg atc ggg gtg cag acg aca gag atc tcc aag tcg gcg 2352 Ala Ser Ser Val Ile Gly Val Gln Thr Thr Glu Ile Ser Lys Ser Ala 770 775 780 ctc gaa ctg gcc gcc att acc ggc aac gcg gac aac ctg aaa tcc gtc 2400 Leu Glu Leu Ala Ala Ile Thr Gly Asn Ala Asp Asn Leu Lys Ser Val 785 790 795 800 gac gtg ttc gtg gac cgc ttc gtc cag ggc gag cgg gtg gcc ggc cag 2448 Asp Val Phe Val Asp Arg Phe Val Gln Gly Glu Arg Val Ala Gly Gln 805 810 815 ccg gtg gtc ctc gac gtc gcc gcc ggc ggc atc gat atc gcc agc cgc 2496 Pro Val Val Leu Asp Val Ala Ala Gly Gly Ile Asp Ile Ala Ser Arg 820 825 830 aag ggc gag cgg ccg gcg ctg acg ttc atc acg ccg ctg gcc gcg cca 2544 Lys Gly Glu Arg Pro Ala Leu Thr Phe Ile Thr Pro Leu Ala Ala Pro 835 840 845 gga gaa gag cag cgc cgg cgc acg aaa acg ggc aag agc gaa ttc acc 2592 Gly Glu Glu Gln Arg Arg Arg Thr Lys Thr Gly Lys Ser Glu Phe Thr 850 855 860 aca ttc gtc gag atc gtg ggc aag cag gac cgc tgg cgc atc cgg gac 2640 Thr Phe Val Glu Ile Val Gly Lys Gln Asp Arg Trp Arg Ile Arg Asp 865 870 875 880 ggc gcg gcc gac acc acc atc gat ctg gcc aag gtg gtg tcg caa ctg 2688 Gly Ala Ala Asp Thr Thr Ile Asp Leu Ala Lys Val Val Ser Gln Leu 885 890 895 gtc gac gcc aat ggc gtg ctc aag cac agc atc aaa ctg gat gtg atc 2736 Val Asp Ala Asn Gly Val Leu Lys His Ser Ile Lys Leu Asp Val Ile 900 905 910 ggc gga gat ggc gat gac gtc gtg ctt gcc aat gct tcg cgc atc cat 2784 Gly Gly Asp Gly Asp Asp Val Val Leu Ala Asn Ala Ser Arg Ile His 915 920 925 tat gac ggc ggc gcg ggc acc aac acg gtc agc tat gcc gcc ctg ggt 2832 Tyr Asp Gly Gly Ala Gly Thr Asn Thr Val Ser Tyr Ala Ala Leu Gly 930 935 940 cga cag gat tcc att acc gtg tcc gcc gac ggg gaa cgt ttc aac gtg 2880 Arg Gln Asp Ser Ile Thr Val Ser Ala Asp Gly Glu Arg Phe Asn Val 945 950 955 960 cgc aag cag ttg aac aac gcc aac gtg tat cgc gaa ggc gtg gct acc 2928 Arg Lys Gln Leu Asn Asn Ala Asn Val Tyr Arg Glu Gly Val Ala Thr 965 970 975 cag aca acc gcc tac ggc aag cgc acg gag aat gtc caa tac cgc cat 2976 Gln Thr Thr Ala Tyr Gly Lys Arg Thr Glu Asn Val Gln Tyr Arg His 980 985 990 gtc gag ctg gcc cgt gtc ggg caa ctg gtg gag gtc gac acg ctc gag 3024 Val Glu Leu Ala Arg Val Gly Gln Leu Val Glu Val Asp Thr Leu Glu 995 1000 1005 cat gtg cag cac atc atc ggc ggg gcc ggc aac gat tcg atc acc 3069 His Val Gln His Ile Ile Gly Gly Ala Gly Asn Asp Ser Ile Thr 1010 1015 1020 ggc aat gcg cac gac aac ttc cta gcc ggc ggg tcg ggc gac gac 3114 Gly Asn Ala His Asp Asn Phe Leu Ala Gly Gly Ser Gly Asp Asp 1025 1030 1035 agg ctg gat ggc ggc gcc ggc aac gac acc ctg gtt ggc ggc gag 3159 Arg Leu Asp Gly Gly Ala Gly Asn Asp Thr Leu Val Gly Gly Glu 1040 1045 1050 ggc caa aac acg gtc atc ggc ggc gcc ggc gac gac gta ttc ctg 3204 Gly Gln Asn Thr Val Ile Gly Gly Ala Gly Asp Asp Val Phe Leu 1055 1060 1065 cag gac ctg ggg gta tgg agc aac cag ctc gat ggc ggc gcg ggc 3249 Gln Asp Leu Gly Val Trp Ser Asn Gln Leu Asp Gly Gly Ala Gly 1070 1075 1080 gtc gat acc gtg aag tac aac gtg cac cag cct tcc gag gag cgc 3294 Val Asp Thr Val Lys Tyr Asn Val His Gln Pro Ser Glu Glu Arg 1085 1090 1095 ctc gaa cgc atg ggc gac acg ggc atc cat gcc gat ctt caa aag 3339 Leu Glu Arg Met Gly Asp Thr Gly Ile His Ala Asp Leu Gln Lys 1100 1105 1110 ggc acg gtc gag aag tgg ccg gcc ctg aac ctg ttc agc gtc gac 3384 Gly Thr Val Glu Lys Trp Pro Ala Leu Asn Leu Phe Ser Val Asp 1115 1120 1125 cat gtc aag aat atc gag aat ctg cac ggc tcc cgc ctg aac gac 3429 His Val Lys Asn Ile Glu Asn Leu His Gly Ser Arg Leu Asn Asp 1130 1135 1140 cgc atc gcc ggc gac gac cag gac aac gag ctc tgg ggc cac gat 3474 Arg Ile Ala Gly Asp Asp Gln Asp Asn Glu Leu Trp Gly His Asp 1145 1150 1155 ggc aac gac acg ata cgc ggc cgg ggc ggc gac gac atc ctg cgc 3519 Gly Asn Asp Thr Ile Arg Gly Arg Gly Gly Asp Asp Ile Leu Arg 1160 1165 1170 ggc ggc ctg ggc ctg gac acg ctg tat ggc gag gac ggc aac gac 3564 Gly Gly Leu Gly Leu Asp Thr Leu Tyr Gly Glu Asp Gly Asn Asp 1175 1180 1185 atc ttc ctg cag gac gac gag acc gtc agc gat gac atc gac ggc 3609 Ile Phe Leu Gln Asp Asp Glu Thr Val Ser Asp Asp Ile Asp Gly 1190 1195 1200 ggc gcg ggg ctg gac acc gtc gac tac tcc gcc atg atc cat cca 3654 Gly Ala Gly Leu Asp Thr Val Asp Tyr Ser Ala Met Ile His Pro 1205 1210 1215 ggc agg atc gtt gcg ccg cat gaa tac ggc ttc ggg atc gag gcg 3699 Gly Arg Ile Val Ala Pro His Glu Tyr Gly Phe Gly Ile Glu Ala 1220 1225 1230 gac ctg tcc agg gaa tgg gtg cgc aag gcg tcc gcg ctg ggc gtg 3744 Asp Leu Ser Arg Glu Trp Val Arg Lys Ala Ser Ala Leu Gly Val 1235 1240 1245 gac tat tac gat aat gtc cgc aat gtc gaa aac gtc atc ggt acg 3789 Asp Tyr Tyr Asp Asn Val Arg Asn Val Glu Asn Val Ile Gly Thr 1250 1255 1260 agc atg aag gat gtg ctc atc ggc gac gcg caa gcc aat acc ctg 3834 Ser Met Lys Asp Val Leu Ile Gly Asp Ala Gln Ala Asn Thr Leu 1265 1270 1275 atg ggc cag ggc ggc gac gat acc gtg cgc ggc ggc gac ggc gat 3879 Met Gly Gln Gly Gly Asp Asp Thr Val Arg Gly Gly Asp Gly Asp 1280 1285 1290 gat ctg ctg ttc ggc ggc gac ggc aac gac atg ctg tat ggc gac 3924 Asp Leu Leu Phe Gly Gly Asp Gly Asn Asp Met Leu Tyr Gly Asp 1295 1300 1305 gcc ggc aac gac acc ctc tac ggg ggg ctg ggc gac gat acc ctt 3969 Ala Gly Asn Asp Thr Leu Tyr Gly Gly Leu Gly Asp Asp Thr Leu 1310 1315 1320 gaa ggc ggc gcg ggc aac gat tgg ttc ggc cag acg cag gcg cgc 4014 Glu Gly Gly Ala Gly Asn Asp Trp Phe Gly Gln Thr Gln Ala Arg 1325 1330 1335 gag cat gac gtg ctg cgc ggc gga gat ggg gtg gat acc gtc gat 4059 Glu His Asp Val Leu Arg Gly Gly Asp Gly Val Asp Thr Val Asp 1340 1345 1350 tac agc cag acc ggc gcg cat gcc ggc att gcc gcg ggt cgc atc 4104 Tyr Ser Gln Thr Gly Ala His Ala Gly Ile Ala Ala Gly Arg Ile 1355 1360 1365 ggg ctg ggc atc ctg gct gac ctg ggc gcc ggc cgc gtc gac aag 4149 Gly Leu Gly Ile Leu Ala Asp Leu Gly Ala Gly Arg Val Asp Lys 1370 1375 1380 ctg ggc gag gcc ggc agc agc gcc tac gat acg gtt tcc ggt atc 4194 Leu Gly Glu Ala Gly Ser Ser Ala Tyr Asp Thr Val Ser Gly Ile 1385 1390 1395 gag aac gtg gtg ggc acg gaa ctg gcc gac cgc atc acg ggc gat 4239 Glu Asn Val Val Gly Thr Glu Leu Ala Asp Arg Ile Thr Gly Asp 1400 1405 1410 gcg cag gcc aac gtg ctg cgc ggc gcg ggt ggc gcc gac gtg ctt 4284 Ala Gln Ala Asn Val Leu Arg Gly Ala Gly Gly Ala Asp Val Leu 1415 1420 1425 gcg ggc ggc gag ggc gac gat gtg ctg ctg ggc ggc gac ggc gac 4329 Ala Gly Gly Glu Gly Asp Asp Val Leu Leu Gly Gly Asp Gly Asp 1430 1435 1440 gac cag ctg tcg ggc gac gcc gga cgc gat cgc ttg tac ggc gaa 4374 Asp Gln Leu Ser Gly Asp Ala Gly Arg Asp Arg Leu Tyr Gly Glu 1445 1450 1455 gcc ggt gac gac tgg ttc ttc cag gat gcc gcc aat gcc ggc aat 4419 Ala Gly Asp Asp Trp Phe Phe Gln Asp Ala Ala Asn Ala Gly Asn 1460 1465 1470 ctg ctc gac ggc ggc gac ggc cgc gat acc gtg gat ttc agc ggc 4464 Leu Leu Asp Gly Gly Asp Gly Arg Asp Thr Val Asp Phe Ser Gly 1475 1480 1485 ccg ggc cgg ggc ctc gac gcc ggc gca aag ggc gta ttc ctg agc 4509 Pro Gly Arg Gly Leu Asp Ala Gly Ala Lys Gly Val Phe Leu Ser 1490 1495 1500 ttg ggc aag ggg ttc gcc agc ctg atg gac gaa ccc gaa acc agc 4554 Leu Gly Lys Gly Phe Ala Ser Leu Met Asp Glu Pro Glu Thr Ser 1505 1510 1515 aac gtg ttg cgc aat atc gag aac gcc gtg ggc agc gcg cgt gat 4599 Asn Val Leu Arg Asn Ile Glu Asn Ala Val Gly Ser Ala Arg Asp 1520 1525 1530 gac gtg ctg atc ggc gac gca ggc gcc aac gtc ctc aat ggc ctg 4644 Asp Val Leu Ile Gly Asp Ala Gly Ala Asn Val Leu Asn Gly Leu 1535 1540 1545 gcg ggc aac gac gtg ctg tcc ggc ggc gct ggc gac gat gtg ctg 4689 Ala Gly Asn Asp Val Leu Ser Gly Gly Ala Gly Asp Asp Val Leu 1550 1555 1560 ctg ggc gac gag ggc tcg gac ctg ctc agc ggc gat gcg ggc aac 4734 Leu Gly Asp Glu Gly Ser Asp Leu Leu Ser Gly Asp Ala Gly Asn 1565 1570 1575 gac gat ctg ttc ggc ggg cag ggc gat gat act tat ctg ttc ggg 4779 Asp Asp Leu Phe Gly Gly Gln Gly Asp Asp Thr Tyr Leu Phe Gly 1580 1585 1590 gtc ggg tac ggg cac gac acg atc tac gaa tcg ggc ggc ggc cat 4824 Val Gly Tyr Gly His Asp Thr Ile Tyr Glu Ser Gly Gly Gly His 1595 1600 1605 gac acc atc cgc atc aac gcg ggg gcg gac cag ctg tgg ttc gcg 4869 Asp Thr Ile Arg Ile Asn Ala Gly Ala Asp Gln Leu Trp Phe Ala 1610 1615 1620 cgc cag ggc aac gac ctg gag atc cgc att ctc ggc acc gac gat 4914 Arg Gln Gly Asn Asp Leu Glu Ile Arg Ile Leu Gly Thr Asp Asp 1625 1630 1635 gca ctt acc gtg cac gac tgg tat cgc gac gcc gat cac cgg gtg 4959 Ala Leu Thr Val His Asp Trp Tyr Arg Asp Ala Asp His Arg Val 1640 1645 1650 gaa atc atc cat gcc gcc aac cag gcg gta gac cag gca ggc atc 5004 Glu Ile Ile His Ala Ala Asn Gln Ala Val Asp Gln Ala Gly Ile 1655 1660 1665 gaa aag ctg gtc gag gca atg gcg cag tat ccg gac ccc ggc gcg 5049 Glu Lys Leu Val Glu Ala Met Ala Gln Tyr Pro Asp Pro Gly Ala 1670 1675 1680 gcg gcg gct gcc ccg ccg gcg gcg cgc gtg ccg gac acg ctg atg 5094 Ala Ala Ala Ala Pro Pro Ala Ala Arg Val Pro Asp Thr Leu Met 1685 1690 1695 cag tcc ctg gct gtc aac tgg cgc tga 5121 Gln Ser Leu Ala Val Asn Trp Arg 1700 1705 <210> 4 <211> 1706 <212> PRT <213> Bordetella hinzii (wild type CyaA) <400> 4 Met Gln Gln Ser His Gln Ala Gly Tyr Ala Asn Ala Ala Asp Arg Glu 1 5 10 15 Ser Gly Ile Pro Ala Ala Val Leu Asp Gly Ile Lys Ala Val Ala Lys 20 25 30 Glu Lys Asn Ala Thr Leu Met Phe Arg Leu Val Asn Pro His Ser Thr 35 40 45 Ser Leu Ile Ala Glu Gly Val Ala Thr Lys Gly Leu Gly Val His Ala 50 55 60 Lys Ser Ser Asp Trp Gly Leu Gln Ala Gly Tyr Ile Pro Val Asn Pro 65 70 75 80 Asn Leu Ser Lys Leu Phe Gly Arg Ala Pro Glu Val Ile Ala Arg Ala 85 90 95 Asp Asn Asp Val Asn Ser Ser Leu Ala His Gly His Thr Ala Val Asp 100 105 110 Leu Thr Leu Ser Lys Glu Arg Leu Asp Tyr Leu Arg Gln Ala Gly Leu 115 120 125 Val Thr Gly Met Ala Asp Gly Val Val Ala Ser Asn His Ala Gly Tyr 130 135 140 Glu Gln Phe Glu Phe Arg Val Lys Glu Thr Ser Asp Gly Arg Tyr Ala 145 150 155 160 Val Gln Tyr Arg Arg Lys Gly Gly Asp Asp Phe Glu Ala Val Lys Val 165 170 175 Ile Gly Asn Ala Ala Gly Ile Pro Leu Thr Ala Asp Ile Asp Met Phe 180 185 190 Ala Ile Met Pro His Leu Ser Asn Phe Arg Asp Ser Ala Arg Ser Ser 195 200 205 Val Thr Ser Gly Asp Ser Val Thr Asp Tyr Leu Ala Arg Thr Arg Arg 210 215 220 Ala Ala Ser Glu Ala Thr Gly Gly Leu Asp Arg Glu Arg Ile Asp Leu 225 230 235 240 Leu Trp Lys Ile Ala Arg Ala Gly Ala Arg Ser Ala Val Gly Thr Glu 245 250 255 Ala Arg Arg Gln Phe Arg Tyr Asp Gly Asp Met Asn Ile Gly Val Ile 260 265 270 Thr Asp Phe Glu Leu Glu Val Arg Asn Ala Leu Asn Arg Arg Ala His 275 280 285 Ala Val Gly Ala Gln Asp Val Val Gln His Gly Thr Glu Gln Asn Asn 290 295 300 Pro Phe Pro Glu Ala Asp Glu Lys Ile Phe Val Val Ser Ala Thr Gly 305 310 315 320 Glu Ser Gln Met Leu Thr Arg Gly Gln Leu Lys Glu Tyr Ile Gly Gln 325 330 335 Gln Arg Gly Glu Gly Tyr Val Phe Tyr Glu Asn Arg Ala Tyr Gly Val 340 345 350 Ala Gly Lys Ser Leu Phe Asp Asp Gly Leu Gly Ala Ala Pro Gly Val 355 360 365 Pro Ser Gly Arg Ser Lys Phe Ser Pro Asp Val Leu Glu Thr Val Pro 370 375 380 Ala Ser Pro Gly Leu Arg Arg Pro Ser Leu Gly Ala Val Glu Arg Gln 385 390 395 400 Asp Ser Gly Tyr Asp Ser Leu Asp Gly Val Gly Ser Arg Ser Phe Ser 405 410 415 Leu Gly Glu Val Ser Asp Met Ala Ala Val Glu Ala Ala Glu Leu Glu 420 425 430 Met Thr Arg Gln Val Leu His Ala Gly Ala Arg Gln Asp Asp Ala Glu 435 440 445 Pro Gly Val Ser Gly Ala Ser Ala His Trp Gly Gln Arg Ala Leu Gln 450 455 460 Gly Ala Gln Ala Val Ala Ala Ala Gln Arg Leu Val His Ala Ile Ala 465 470 475 480 Leu Met Thr Gln Phe Gly Arg Ala Gly Ser Thr Asn Thr Pro Gln Glu 485 490 495 Ala Ala Ser Leu Ser Ala Ala Val Phe Gly Leu Gly Glu Ala Ser Ser 500 505 510 Ala Val Ala Glu Thr Val Ser Gly Phe Phe Arg Gly Ser Ser Arg Trp 515 520 525 Ala Gly Gly Phe Gly Val Ala Gly Gly Ala Met Ala Leu Gly Gly Gly 530 535 540 Ile Ala Ala Ala Val Gly Ala Gly Met Ser Leu Thr Asp Asp Ala Pro 545 550 555 560 Ala Gly Gln Lys Ala Ala Ala Gly Ala Glu Ile Ala Leu Gln Leu Thr 565 570 575 Gly Gly Thr Val Glu Leu Ala Ser Ser Ile Ala Leu Ala Leu Ala Ala 580 585 590 Ala Arg Gly Val Thr Ser Gly Leu Gln Val Ala Gly Ala Ser Ala Gly 595 600 605 Ala Ala Ala Gly Ala Leu Ala Ala Ala Leu Ser Pro Met Glu Ile Tyr 610 615 620 Gly Leu Val Gln Gln Ser His Tyr Ala Asp Gln Leu Asp Lys Leu Ala 625 630 635 640 Gln Glu Ser Ser Ala Tyr Gly Tyr Glu Gly Asp Ala Leu Leu Ala Gln 645 650 655 Leu Tyr Arg Asp Lys Thr Ala Ala Glu Gly Ala Val Ala Gly Val Ser 660 665 670 Ala Val Leu Ser Thr Val Gly Ala Ala Val Ser Ile Ala Ala Ala Ala 675 680 685 Ser Val Val Gly Ala Pro Val Ala Val Val Thr Ser Leu Leu Thr Gly 690 695 700 Ala Leu Asn Gly Ile Leu Arg Gly Val Gln Gln Pro Ile Ile Glu Lys 705 710 715 720 Leu Ala Asn Asp Tyr Ala Arg Lys Ile Asp Glu Leu Gly Gly Pro Gln 725 730 735 Ala Tyr Phe Glu Lys Asn Leu Gln Ala Arg His Glu Gln Leu Ala Asn 740 745 750 Ser Asp Gly Leu Arg Lys Met Leu Ala Asp Leu Gln Ala Gly Trp Asn 755 760 765 Ala Ser Ser Val Ile Gly Val Gln Thr Thr Glu Ile Ser Lys Ser Ala 770 775 780 Leu Glu Leu Ala Ala Ile Thr Gly Asn Ala Asp Asn Leu Lys Ser Val 785 790 795 800 Asp Val Phe Val Asp Arg Phe Val Gln Gly Glu Arg Val Ala Gly Gln 805 810 815 Pro Val Val Leu Asp Val Ala Ala Gly Gly Ile Asp Ile Ala Ser Arg 820 825 830 Lys Gly Glu Arg Pro Ala Leu Thr Phe Ile Thr Pro Leu Ala Ala Pro 835 840 845 Gly Glu Glu Gln Arg Arg Arg Thr Lys Thr Gly Lys Ser Glu Phe Thr 850 855 860 Thr Phe Val Glu Ile Val Gly Lys Gln Asp Arg Trp Arg Ile Arg Asp 865 870 875 880 Gly Ala Ala Asp Thr Thr Ile Asp Leu Ala Lys Val Val Ser Gln Leu 885 890 895 Val Asp Ala Asn Gly Val Leu Lys His Ser Ile Lys Leu Asp Val Ile 900 905 910 Gly Gly Asp Gly Asp Asp Val Val Leu Ala Asn Ala Ser Arg Ile His 915 920 925 Tyr Asp Gly Gly Ala Gly Thr Asn Thr Val Ser Tyr Ala Ala Leu Gly 930 935 940 Arg Gln Asp Ser Ile Thr Val Ser Ala Asp Gly Glu Arg Phe Asn Val 945 950 955 960 Arg Lys Gln Leu Asn Asn Ala Asn Val Tyr Arg Glu Gly Val Ala Thr 965 970 975 Gln Thr Thr Ala Tyr Gly Lys Arg Thr Glu Asn Val Gln Tyr Arg His 980 985 990 Val Glu Leu Ala Arg Val Gly Gln Leu Val Glu Val Asp Thr Leu Glu 995 1000 1005 His Val Gln His Ile Ile Gly Gly Ala Gly Asn Asp Ser Ile Thr 1010 1015 1020 Gly Asn Ala His Asp Asn Phe Leu Ala Gly Gly Ser Gly Asp Asp 1025 1030 1035 Arg Leu Asp Gly Gly Ala Gly Asn Asp Thr Leu Val Gly Gly Glu 1040 1045 1050 Gly Gln Asn Thr Val Ile Gly Gly Ala Gly Asp Asp Val Phe Leu 1055 1060 1065 Gln Asp Leu Gly Val Trp Ser Asn Gln Leu Asp Gly Gly Ala Gly 1070 1075 1080 Val Asp Thr Val Lys Tyr Asn Val His Gln Pro Ser Glu Glu Arg 1085 1090 1095 Leu Glu Arg Met Gly Asp Thr Gly Ile His Ala Asp Leu Gln Lys 1100 1105 1110 Gly Thr Val Glu Lys Trp Pro Ala Leu Asn Leu Phe Ser Val Asp 1115 1120 1125 His Val Lys Asn Ile Glu Asn Leu His Gly Ser Arg Leu Asn Asp 1130 1135 1140 Arg Ile Ala Gly Asp Asp Gln Asp Asn Glu Leu Trp Gly His Asp 1145 1150 1155 Gly Asn Asp Thr Ile Arg Gly Arg Gly Gly Asp Asp Ile Leu Arg 1160 1165 1170 Gly Gly Leu Gly Leu Asp Thr Leu Tyr Gly Glu Asp Gly Asn Asp 1175 1180 1185 Ile Phe Leu Gln Asp Asp Glu Thr Val Ser Asp Asp Ile Asp Gly 1190 1195 1200 Gly Ala Gly Leu Asp Thr Val Asp Tyr Ser Ala Met Ile His Pro 1205 1210 1215 Gly Arg Ile Val Ala Pro His Glu Tyr Gly Phe Gly Ile Glu Ala 1220 1225 1230 Asp Leu Ser Arg Glu Trp Val Arg Lys Ala Ser Ala Leu Gly Val 1235 1240 1245 Asp Tyr Tyr Asp Asn Val Arg Asn Val Glu Asn Val Ile Gly Thr 1250 1255 1260 Ser Met Lys Asp Val Leu Ile Gly Asp Ala Gln Ala Asn Thr Leu 1265 1270 1275 Met Gly Gln Gly Gly Asp Asp Thr Val Arg Gly Gly Asp Gly Asp 1280 1285 1290 Asp Leu Leu Phe Gly Gly Asp Gly Asn Asp Met Leu Tyr Gly Asp 1295 1300 1305 Ala Gly Asn Asp Thr Leu Tyr Gly Gly Leu Gly Asp Asp Thr Leu 1310 1315 1320 Glu Gly Gly Ala Gly Asn Asp Trp Phe Gly Gln Thr Gln Ala Arg 1325 1330 1335 Glu His Asp Val Leu Arg Gly Gly Asp Gly Val Asp Thr Val Asp 1340 1345 1350 Tyr Ser Gln Thr Gly Ala His Ala Gly Ile Ala Ala Gly Arg Ile 1355 1360 1365 Gly Leu Gly Ile Leu Ala Asp Leu Gly Ala Gly Arg Val Asp Lys 1370 1375 1380 Leu Gly Glu Ala Gly Ser Ser Ala Tyr Asp Thr Val Ser Gly Ile 1385 1390 1395 Glu Asn Val Val Gly Thr Glu Leu Ala Asp Arg Ile Thr Gly Asp 1400 1405 1410 Ala Gln Ala Asn Val Leu Arg Gly Ala Gly Gly Ala Asp Val Leu 1415 1420 1425 Ala Gly Gly Glu Gly Asp Asp Val Leu Leu Gly Gly Asp Gly Asp 1430 1435 1440 Asp Gln Leu Ser Gly Asp Ala Gly Arg Asp Arg Leu Tyr Gly Glu 1445 1450 1455 Ala Gly Asp Asp Trp Phe Phe Gln Asp Ala Ala Asn Ala Gly Asn 1460 1465 1470 Leu Leu Asp Gly Gly Asp Gly Arg Asp Thr Val Asp Phe Ser Gly 1475 1480 1485 Pro Gly Arg Gly Leu Asp Ala Gly Ala Lys Gly Val Phe Leu Ser 1490 1495 1500 Leu Gly Lys Gly Phe Ala Ser Leu Met Asp Glu Pro Glu Thr Ser 1505 1510 1515 Asn Val Leu Arg Asn Ile Glu Asn Ala Val Gly Ser Ala Arg Asp 1520 1525 1530 Asp Val Leu Ile Gly Asp Ala Gly Ala Asn Val Leu Asn Gly Leu 1535 1540 1545 Ala Gly Asn Asp Val Leu Ser Gly Gly Ala Gly Asp Asp Val Leu 1550 1555 1560 Leu Gly Asp Glu Gly Ser Asp Leu Leu Ser Gly Asp Ala Gly Asn 1565 1570 1575 Asp Asp Leu Phe Gly Gly Gln Gly Asp Asp Thr Tyr Leu Phe Gly 1580 1585 1590 Val Gly Tyr Gly His Asp Thr Ile Tyr Glu Ser Gly Gly Gly His 1595 1600 1605 Asp Thr Ile Arg Ile Asn Ala Gly Ala Asp Gln Leu Trp Phe Ala 1610 1615 1620 Arg Gln Gly Asn Asp Leu Glu Ile Arg Ile Leu Gly Thr Asp Asp 1625 1630 1635 Ala Leu Thr Val His Asp Trp Tyr Arg Asp Ala Asp His Arg Val 1640 1645 1650 Glu Ile Ile His Ala Ala Asn Gln Ala Val Asp Gln Ala Gly Ile 1655 1660 1665 Glu Lys Leu Val Glu Ala Met Ala Gln Tyr Pro Asp Pro Gly Ala 1670 1675 1680 Ala Ala Ala Ala Pro Pro Ala Ala Arg Val Pro Asp Thr Leu Met 1685 1690 1695 Gln Ser Leu Ala Val Asn Trp Arg 1700 1705 <210> 5 <211> 5121 <212> DNA <213> Bordetella parapertussis (wild type CyaA) <220> <221> CDS <222> (1)..(5121) <400> 5 atg cag caa tcg cat cag gct ggt tac gca aac gcc gcc gac cgg gag 48 Met Gln Gln Ser His Gln Ala Gly Tyr Ala Asn Ala Ala Asp Arg Glu 1 5 10 15 tct ggc atc ccc gca gcc gta ctc gat ggc atc aag gcc gtg gcg aag 96 Ser Gly Ile Pro Ala Ala Val Leu Asp Gly Ile Lys Ala Val Ala Lys 20 25 30 gaa aaa aac gcc aca ttg atg ttc cgc ctg gtc aac ccc cat tcc acc 144 Glu Lys Asn Ala Thr Leu Met Phe Arg Leu Val Asn Pro His Ser Thr 35 40 45 agc ctg att gcc gaa ggg gtg gcc acc aaa gga ttg ggc gtg cac gcc 192 Ser Leu Ile Ala Glu Gly Val Ala Thr Lys Gly Leu Gly Val His Ala 50 55 60 aag tcg tcc gat tgg ggg ttg cag gcg ggc tac att ccc gtc aac ccg 240 Lys Ser Ser Asp Trp Gly Leu Gln Ala Gly Tyr Ile Pro Val Asn Pro 65 70 75 80 aat ctt tcc aaa ctg ttc ggc cgt gcg ccc gag gtg atc gcg cgg gcc 288 Asn Leu Ser Lys Leu Phe Gly Arg Ala Pro Glu Val Ile Ala Arg Ala 85 90 95 gac aac gac gtc aac agc agc ctg gcg cat ggc cat acc gcg gtc gac 336 Asp Asn Asp Val Asn Ser Ser Leu Ala His Gly His Thr Ala Val Asp 100 105 110 ctg acg ctg tcg aaa gag cgg ctt gac tat ctg cgg caa gcg ggc ctg 384 Leu Thr Leu Ser Lys Glu Arg Leu Asp Tyr Leu Arg Gln Ala Gly Leu 115 120 125 gtc acc ggc atg gcc gat ggc gtg gtc gcg agc aac cac gca ggc tac 432 Val Thr Gly Met Ala Asp Gly Val Val Ala Ser Asn His Ala Gly Tyr 130 135 140 gag cag ttc gag ttt cgc gtg aag gaa acc tcg gac ggg cgc tat gcc 480 Glu Gln Phe Glu Phe Arg Val Lys Glu Thr Ser Asp Gly Arg Tyr Ala 145 150 155 160 gtg cag tat cgc cgc aag ggc ggc gac gat ttc gag gcg gtc aag gtg 528 Val Gln Tyr Arg Arg Lys Gly Gly Asp Asp Phe Glu Ala Val Lys Val 165 170 175 atc ggc aat gcc gcc ggt att cca ctg acg gcg gat atc gac atg ttc 576 Ile Gly Asn Ala Ala Gly Ile Pro Leu Thr Ala Asp Ile Asp Met Phe 180 185 190 gcc atc atg ccg cat ctg tcc aac ttc cgc gac tcg gcg cgc agt tcg 624 Ala Ile Met Pro His Leu Ser Asn Phe Arg Asp Ser Ala Arg Ser Ser 195 200 205 gtg acc agc ggc gat tcg gtg acc gat tac ctg gcg cgc acg cgg cgg 672 Val Thr Ser Gly Asp Ser Val Thr Asp Tyr Leu Ala Arg Thr Arg Arg 210 215 220 gcc gcc agc gag gcc acg ggc ggc ctg gat cgc gaa cgc atc gac ttg 720 Ala Ala Ser Glu Ala Thr Gly Gly Leu Asp Arg Glu Arg Ile Asp Leu 225 230 235 240 ttg tgg aaa atc gct cgc gcc ggc gcc cgt tcc gca gtg ggc acc gag 768 Leu Trp Lys Ile Ala Arg Ala Gly Ala Arg Ser Ala Val Gly Thr Glu 245 250 255 gcg cgt cgc cag ttc cgc tac gac ggc gac atg aat atc ggc gtg atc 816 Ala Arg Arg Gln Phe Arg Tyr Asp Gly Asp Met Asn Ile Gly Val Ile 260 265 270 acc gat ttc gag ctg gaa gtg cgc aat gcg ctg aac agg cgg gcg cac 864 Thr Asp Phe Glu Leu Glu Val Arg Asn Ala Leu Asn Arg Arg Ala His 275 280 285 gcc gtc ggc gcg cag gac gtg gtc cag cat ggc act gag cag aac aat 912 Ala Val Gly Ala Gln Asp Val Val Gln His Gly Thr Glu Gln Asn Asn 290 295 300 cct ttc ccg gag gca gat gag aag att ttc gtc gta tcg gcc acc ggt 960 Pro Phe Pro Glu Ala Asp Glu Lys Ile Phe Val Val Ser Ala Thr Gly 305 310 315 320 gaa agc cag atg ctc acg cgc ggg caa ctg aag gaa tac att ggc cag 1008 Glu Ser Gln Met Leu Thr Arg Gly Gln Leu Lys Glu Tyr Ile Gly Gln 325 330 335 cag cgc ggc gag ggc tat gtc ttc tac gag aac cgt gca tac ggc gtg 1056 Gln Arg Gly Glu Gly Tyr Val Phe Tyr Glu Asn Arg Ala Tyr Gly Val 340 345 350 gcg ggg aaa agc ctg ttc gac gat ggg ctg gga gcc gcg ccc ggc gtg 1104 Ala Gly Lys Ser Leu Phe Asp Asp Gly Leu Gly Ala Ala Pro Gly Val 355 360 365 ccg ggc gga cgt tcg aag tcc tcg ccg gat gta ctg gaa acg gtg ccg 1152 Pro Gly Gly Arg Ser Lys Ser Ser Pro Asp Val Leu Glu Thr Val Pro 370 375 380 gcg tca ccc gga ttg cgg cgg ccg tcg ctg ggc gca gtg gaa cgc cag 1200 Ala Ser Pro Gly Leu Arg Arg Pro Ser Leu Gly Ala Val Glu Arg Gln 385 390 395 400 gat tcc ggc tat gac agc ctt gat ggg gtg gga tcg cga tcg ttc tcg 1248 Asp Ser Gly Tyr Asp Ser Leu Asp Gly Val Gly Ser Arg Ser Phe Ser 405 410 415 ttg ggc gag gtg tcc gac atg gcc gcc gtg gaa gcg gcg gaa ctg gaa 1296 Leu Gly Glu Val Ser Asp Met Ala Ala Val Glu Ala Ala Glu Leu Glu 420 425 430 atg acc cgg caa gtc ttg cac gcc ggg gcg cgg cag gac gat gcc gag 1344 Met Thr Arg Gln Val Leu His Ala Gly Ala Arg Gln Asp Asp Ala Glu 435 440 445 ccg ggc gtg agc ggt gcg tcg gcg cac tgg ggg cag cgg gcg ctg cag 1392 Pro Gly Val Ser Gly Ala Ser Ala His Trp Gly Gln Arg Ala Leu Gln 450 455 460 ggc gcc cag gcg gtg gcg gcg gcg cag cgg ctg gtt cat gcc att gcc 1440 Gly Ala Gln Ala Val Ala Ala Ala Gln Arg Leu Val His Ala Ile Ala 465 470 475 480 ctg atg acg caa ttc ggc cgg gcc ggt tcc acc aac acg ccg cag gaa 1488 Leu Met Thr Gln Phe Gly Arg Ala Gly Ser Thr Asn Thr Pro Gln Glu 485 490 495 gcg gcc tcg ttg tcg gcg gcc gtg ttc ggc ttg ggc gag gcc agc agc 1536 Ala Ala Ser Leu Ser Ala Ala Val Phe Gly Leu Gly Glu Ala Ser Ser 500 505 510 gcc gtg gcc gaa acc gtg agc ggt ttt ttc cgc ggg tct tcg cgc tgg 1584 Ala Val Ala Glu Thr Val Ser Gly Phe Phe Arg Gly Ser Ser Arg Trp 515 520 525 gcc ggc ggt ttc ggc gtg gct ggc ggc gcg atg gcg ctg gga ggc ggc 1632 Ala Gly Gly Phe Gly Val Ala Gly Gly Ala Met Ala Leu Gly Gly Gly 530 535 540 atc gcc gcg gcc gtt ggc gcc ggg atg tcg ttg acc gat gac gcg ccg 1680 Ile Ala Ala Ala Val Gly Ala Gly Met Ser Leu Thr Asp Asp Ala Pro 545 550 555 560 gcc gga cag aag gcc gcc gtc ggc gcc gag atc gcg ctg cag ttg aca 1728 Ala Gly Gln Lys Ala Ala Val Gly Ala Glu Ile Ala Leu Gln Leu Thr 565 570 575 ggt gga acg gtc gag ctg gct tct tcc atc gcg ttg gcg ctg gcc gcg 1776 Gly Gly Thr Val Glu Leu Ala Ser Ser Ile Ala Leu Ala Leu Ala Ala 580 585 590 gcg cgc ggc gtg acc agc ggc ttg cag gtg gcg ggg gcg tcg gcc ggg 1824 Ala Arg Gly Val Thr Ser Gly Leu Gln Val Ala Gly Ala Ser Ala Gly 595 600 605 gcg gct gcc ggc gca ttg gcc gcg gcg ctc agt ccc atg gag atc tac 1872 Ala Ala Ala Gly Ala Leu Ala Ala Ala Leu Ser Pro Met Glu Ile Tyr 610 615 620 ggc ctg gtg cag caa tcg cac tat gcg gat cag ctg gac aag ctg gcg 1920 Gly Leu Val Gln Gln Ser His Tyr Ala Asp Gln Leu Asp Lys Leu Ala 625 630 635 640 cag gaa tcg agc gca tac ggt tac gag ggc gac gcc ttg ctg gcc cag 1968 Gln Glu Ser Ser Ala Tyr Gly Tyr Glu Gly Asp Ala Leu Leu Ala Gln 645 650 655 ctg tat cgc gac aag acg gcc gcc gag ggc gcc gtc gcc ggc gtc tcc 2016 Leu Tyr Arg Asp Lys Thr Ala Ala Glu Gly Ala Val Ala Gly Val Ser 660 665 670 gcc gtc ctg agc acg gtg ggg gcg gcg gtg tcg atc gcc gcg gcg gcc 2064 Ala Val Leu Ser Thr Val Gly Ala Ala Val Ser Ile Ala Ala Ala Ala 675 680 685 agc gtg gta ggc gcc ccg gtg gcg gtg gtc act tcc ttg ttg acc ggg 2112 Ser Val Val Gly Ala Pro Val Ala Val Val Thr Ser Leu Leu Thr Gly 690 695 700 gct ctc aac ggc atc ctg cgc ggc gtg cag cag ccc atc atc gaa aag 2160 Ala Leu Asn Gly Ile Leu Arg Gly Val Gln Gln Pro Ile Ile Glu Lys 705 710 715 720 ctg gcc aat gat tac gct cgc aag atc gac gag ctg ggc ggg ccg caa 2208 Leu Ala Asn Asp Tyr Ala Arg Lys Ile Asp Glu Leu Gly Gly Pro Gln 725 730 735 gcg tac ttc gag aaa aac ctg cag gcg cgt cac gaa caa ctg gcc aat 2256 Ala Tyr Phe Glu Lys Asn Leu Gln Ala Arg His Glu Gln Leu Ala Asn 740 745 750 tcg gac ggc cta cgg aaa atg ctg gct gac ctg cag gcc ggg tgg aac 2304 Ser Asp Gly Leu Arg Lys Met Leu Ala Asp Leu Gln Ala Gly Trp Asn 755 760 765 gcc agc agc gtg atc ggg gtg cag acg aca gag att tcc aag tcg gcg 2352 Ala Ser Ser Val Ile Gly Val Gln Thr Thr Glu Ile Ser Lys Ser Ala 770 775 780 ctc gaa ctg gcc gcc att acc ggc aac gcg gac aac ctg aaa tcc gcc 2400 Leu Glu Leu Ala Ala Ile Thr Gly Asn Ala Asp Asn Leu Lys Ser Ala 785 790 795 800 gac gtg ttc gtg gac cgc ttc atc cag ggc gag cgg gtg gcc ggc cag 2448 Asp Val Phe Val Asp Arg Phe Ile Gln Gly Glu Arg Val Ala Gly Gln 805 810 815 ccg gtg gta ctc gac gtc gcc gcc ggc ggc atc gat atc gcc agc cgc 2496 Pro Val Val Leu Asp Val Ala Ala Gly Gly Ile Asp Ile Ala Ser Arg 820 825 830 aag ggc gag cgg ccg gcg ctg acg ttc atc acg ccg ctg gcc gcg cca 2544 Lys Gly Glu Arg Pro Ala Leu Thr Phe Ile Thr Pro Leu Ala Ala Pro 835 840 845 gga gaa gag cag cgc cgg cgc acg aag acg ggc aag agc gaa ttc acc 2592 Gly Glu Glu Gln Arg Arg Arg Thr Lys Thr Gly Lys Ser Glu Phe Thr 850 855 860 aca ttc gtc gag atc gtg ggc aag cag gac cgc tgg cgc atc cgg gac 2640 Thr Phe Val Glu Ile Val Gly Lys Gln Asp Arg Trp Arg Ile Arg Asp 865 870 875 880 ggc gcg gcc gac acc acc atc gat ctg gcc aag gtg gtg tcg caa ctg 2688 Gly Ala Ala Asp Thr Thr Ile Asp Leu Ala Lys Val Val Ser Gln Leu 885 890 895 gtc gac gcc aat ggc gtg ctc aag cac agc atc aaa ctg gag gtg atc 2736 Val Asp Ala Asn Gly Val Leu Lys His Ser Ile Lys Leu Glu Val Ile 900 905 910 ggc gga gat ggc gat gat gtc gtg ctt gcc aat gct tcg cgc atc cat 2784 Gly Gly Asp Gly Asp Asp Val Val Leu Ala Asn Ala Ser Arg Ile His 915 920 925 tac gac ggc ggc gcg gga acc aac acg gtc agc tat gcc gcc ctg ggc 2832 Tyr Asp Gly Gly Ala Gly Thr Asn Thr Val Ser Tyr Ala Ala Leu Gly 930 935 940 cga cag gat tcc att acc gtg tcc gcc gac ggg gaa cgt ttc aac gtg 2880 Arg Gln Asp Ser Ile Thr Val Ser Ala Asp Gly Glu Arg Phe Asn Val 945 950 955 960 cgc aag cag ttg aac aac gcc aac gtg tat cgc gaa ggc gtg gct acc 2928 Arg Lys Gln Leu Asn Asn Ala Asn Val Tyr Arg Glu Gly Val Ala Thr 965 970 975 cag aaa acc gcc tac ggc aag cgc acg gag aat gtc caa tac cgc cat 2976 Gln Lys Thr Ala Tyr Gly Lys Arg Thr Glu Asn Val Gln Tyr Arg His 980 985 990 gtc gag ctg gcc cgt gtc ggg caa ctg gtg gag gtc gac acg ctc gag 3024 Val Glu Leu Ala Arg Val Gly Gln Leu Val Glu Val Asp Thr Leu Glu 995 1000 1005 cat gtg cag cac atc atc ggc ggg gcc ggc aac gat tcg atc acc 3069 His Val Gln His Ile Ile Gly Gly Ala Gly Asn Asp Ser Ile Thr 1010 1015 1020 ggc aat gcg cac gac aac ttc ctg gcc ggc ggg gcg ggc gac gac 3114 Gly Asn Ala His Asp Asn Phe Leu Ala Gly Gly Ala Gly Asp Asp 1025 1030 1035 agg ctg gat ggc ggc gcc ggc aac gac aca ctg gtc ggc ggc gag 3159 Arg Leu Asp Gly Gly Ala Gly Asn Asp Thr Leu Val Gly Gly Glu 1040 1045 1050 ggc cac aac acg gtc gtc ggc ggc gct ggc gac gac gta ttc ctg 3204 Gly His Asn Thr Val Val Gly Gly Ala Gly Asp Asp Val Phe Leu 1055 1060 1065 cag gac ctg ggg gta tgg agc aac cag ctc gat ggc ggc gcg ggc 3249 Gln Asp Leu Gly Val Trp Ser Asn Gln Leu Asp Gly Gly Ala Gly 1070 1075 1080 gtc gat acc gtg aag tac aac gtg cac cag cct tcc gag gaa cgc 3294 Val Asp Thr Val Lys Tyr Asn Val His Gln Pro Ser Glu Glu Arg 1085 1090 1095 ctc gaa cgc atg ggc gac acg ggc atc cat gcc gat ctt caa aag 3339 Leu Glu Arg Met Gly Asp Thr Gly Ile His Ala Asp Leu Gln Lys 1100 1105 1110 ggc acg gtc gag aag tgg ccg gcc ctg aac ctg ttc agc gtc gac 3384 Gly Thr Val Glu Lys Trp Pro Ala Leu Asn Leu Phe Ser Val Asp 1115 1120 1125 cat gtc aag aat atc gag aat ctg cac ggc tcc agc ctg aac gac 3429 His Val Lys Asn Ile Glu Asn Leu His Gly Ser Ser Leu Asn Asp 1130 1135 1140 agc atc gcc ggc gac gac cgg gac aac gag ctc tgg ggc gac gat 3474 Ser Ile Ala Gly Asp Asp Arg Asp Asn Glu Leu Trp Gly Asp Asp 1145 1150 1155 ggc aac gac acg ata cac ggc cgg ggc ggc gac gat atc ctg cgc 3519 Gly Asn Asp Thr Ile His Gly Arg Gly Gly Asp Asp Ile Leu Arg 1160 1165 1170 ggc ggc ctg ggc ctg gac acg ctg tat ggc gag gac ggc aac gac 3564 Gly Gly Leu Gly Leu Asp Thr Leu Tyr Gly Glu Asp Gly Asn Asp 1175 1180 1185 atc ttc ctg cag gac gac gag acc gtc agc gat gac atc gac ggc 3609 Ile Phe Leu Gln Asp Asp Glu Thr Val Ser Asp Asp Ile Asp Gly 1190 1195 1200 ggc gcg ggg ctg gac acc gtc gac tat tcc gcc atg atc cat gca 3654 Gly Ala Gly Leu Asp Thr Val Asp Tyr Ser Ala Met Ile His Ala 1205 1210 1215 ggc aag atc gtt gcg ccg cat gaa tac ggc ttc ggg atc gag gcg 3699 Gly Lys Ile Val Ala Pro His Glu Tyr Gly Phe Gly Ile Glu Ala 1220 1225 1230 gac ctg tcc gaa ggg tgg gtg cgc aag gcg gcc cgg cgc ggc atg 3744 Asp Leu Ser Glu Gly Trp Val Arg Lys Ala Ala Arg Arg Gly Met 1235 1240 1245 ggc tac tac gac agt gtc cgc agt gtc gaa aac gtc atc ggc acg 3789 Gly Tyr Tyr Asp Ser Val Arg Ser Val Glu Asn Val Ile Gly Thr 1250 1255 1260 agc atg aag gat gtg ctc atc ggc gac gcg caa gcc aat acc ctg 3834 Ser Met Lys Asp Val Leu Ile Gly Asp Ala Gln Ala Asn Thr Leu 1265 1270 1275 atg ggc cag ggc ggc gac gat acc gtg cgc ggc ggc gac ggc gat 3879 Met Gly Gln Gly Gly Asp Asp Thr Val Arg Gly Gly Asp Gly Asp 1280 1285 1290 gat ctg ctg ttc ggc ggc gac ggc aac gac atg ctg tat gga gac 3924 Asp Leu Leu Phe Gly Gly Asp Gly Asn Asp Met Leu Tyr Gly Asp 1295 1300 1305 gcc ggc aac gac acc ctc tac gga ggg ctg ggc gac gat acc ctt 3969 Ala Gly Asn Asp Thr Leu Tyr Gly Gly Leu Gly Asp Asp Thr Leu 1310 1315 1320 gaa ggc ggc gcg ggc aac gat tgg ttc ggc cag acg ccg gcg cgc 4014 Glu Gly Gly Ala Gly Asn Asp Trp Phe Gly Gln Thr Pro Ala Arg 1325 1330 1335 gag cat gac gtg ctg cgc ggc ggg gct ggg gtg gat acc gtg gat 4059 Glu His Asp Val Leu Arg Gly Gly Ala Gly Val Asp Thr Val Asp 1340 1345 1350 tac agc cag gcg ggc gcg cat gcc ggc gtt gcc acg ggt cgc atc 4104 Tyr Ser Gln Ala Gly Ala His Ala Gly Val Ala Thr Gly Arg Ile 1355 1360 1365 ggg ctg ggt att ctg gcg gac ctg ggc gcc ggc cgc gtc gac aag 4149 Gly Leu Gly Ile Leu Ala Asp Leu Gly Ala Gly Arg Val Asp Lys 1370 1375 1380 ctg ggc gag gcc ggc agc agc gcc tac gat acg gtt tcc ggc atc 4194 Leu Gly Glu Ala Gly Ser Ser Ala Tyr Asp Thr Val Ser Gly Ile 1385 1390 1395 gaa aat gtg gtg ggc acg gaa ctg gcc gac cgc atc acg ggc gat 4239 Glu Asn Val Val Gly Thr Glu Leu Ala Asp Arg Ile Thr Gly Asp 1400 1405 1410 gcg cag gcc aac gta ctg cgc ggc gcg ggt ggt gcc gac gtg ctt 4284 Ala Gln Ala Asn Val Leu Arg Gly Ala Gly Gly Ala Asp Val Leu 1415 1420 1425 gcg ggc ggc gag ggc gac gat gtg ctg ctg ggc ggc gag ggc gat 4329 Ala Gly Gly Glu Gly Asp Asp Val Leu Leu Gly Gly Glu Gly Asp 1430 1435 1440 gac cag ctg tcg ggc gac gcc gga cgc gac cgc ttg tac ggc gaa 4374 Asp Gln Leu Ser Gly Asp Ala Gly Arg Asp Arg Leu Tyr Gly Glu 1445 1450 1455 gcc ggt gac gac tgg ttc ttc cag gat gcc gcc aat gcc ggc aat 4419 Ala Gly Asp Asp Trp Phe Phe Gln Asp Ala Ala Asn Ala Gly Asn 1460 1465 1470 ctg ctc gac ggt ggt gac ggc aac gat acc gtg gat ttc agc ggc 4464 Leu Leu Asp Gly Gly Asp Gly Asn Asp Thr Val Asp Phe Ser Gly 1475 1480 1485 ccg ggc cgg ggc ctc gac gcc ggc gca aag ggc gta ttc ctg agc 4509 Pro Gly Arg Gly Leu Asp Ala Gly Ala Lys Gly Val Phe Leu Ser 1490 1495 1500 ctg ggc aag ggg ttc gcc agc ctg atg gac gaa ccc gaa acc agc 4554 Leu Gly Lys Gly Phe Ala Ser Leu Met Asp Glu Pro Glu Thr Ser 1505 1510 1515 aac gtg ttg cgc cat atc gag aac gcc gtg ggc agc gtg cgt gat 4599 Asn Val Leu Arg His Ile Glu Asn Ala Val Gly Ser Val Arg Asp 1520 1525 1530 gac gtg ctg atc ggc gac gca ggc gcc aac gtc ctc aat ggc ctg 4644 Asp Val Leu Ile Gly Asp Ala Gly Ala Asn Val Leu Asn Gly Leu 1535 1540 1545 gcg ggc aac gac gtg ttg tcc ggc ggc gcc ggc gac gat gtg ctg 4689 Ala Gly Asn Asp Val Leu Ser Gly Gly Ala Gly Asp Asp Val Leu 1550 1555 1560 ctg ggc gac gag ggc tcg gac ctg ctc agc ggc gat gcg ggc aac 4734 Leu Gly Asp Glu Gly Ser Asp Leu Leu Ser Gly Asp Ala Gly Asn 1565 1570 1575 gac gat ctg ttc ggc ggg cag ggc gat gat acc tat ctg ttc ggg 4779 Asp Asp Leu Phe Gly Gly Gln Gly Asp Asp Thr Tyr Leu Phe Gly 1580 1585 1590 gcc ggg tac gga cat gac acg atc tac gaa tcg ggc ggc ggc cat 4824 Ala Gly Tyr Gly His Asp Thr Ile Tyr Glu Ser Gly Gly Gly His 1595 1600 1605 gac acc atc cgt atc aac gcg ggg gcg gac cag ctg tgg ttt gcg 4869 Asp Thr Ile Arg Ile Asn Ala Gly Ala Asp Gln Leu Trp Phe Ala 1610 1615 1620 cgc cag ggc aac gac ctg gag atc cgc att ctt ggc acc gac gat 4914 Arg Gln Gly Asn Asp Leu Glu Ile Arg Ile Leu Gly Thr Asp Asp 1625 1630 1635 gca ctt acc gtg cac gac tgg tat cgc gac gcc gat cac cgg gtg 4959 Ala Leu Thr Val His Asp Trp Tyr Arg Asp Ala Asp His Arg Val 1640 1645 1650 gaa gcc atc cat gcc gcc aac cag gcc ata gac ccg gcc ggc atc 5004 Glu Ala Ile His Ala Ala Asn Gln Ala Ile Asp Pro Ala Gly Ile 1655 1660 1665 gaa aag ctg gtc gag gca atg gcg cag tac ccg gac ccc ggc gcg 5049 Glu Lys Leu Val Glu Ala Met Ala Gln Tyr Pro Asp Pro Gly Ala 1670 1675 1680 gcg gcg gct gcc ccg ccg gcg gcg cgc gtg ccg gac acg ctg atg 5094 Ala Ala Ala Ala Pro Pro Ala Ala Arg Val Pro Asp Thr Leu Met 1685 1690 1695 cag tcc ctg gct gtc aac tgg cgc tga 5121 Gln Ser Leu Ala Val Asn Trp Arg 1700 1705 <210> 6 <211> 1706 <212> PRT <213> Bordetella parapertussis (wild type CyaA) <400> 6 Met Gln Gln Ser His Gln Ala Gly Tyr Ala Asn Ala Ala Asp Arg Glu 1 5 10 15 Ser Gly Ile Pro Ala Ala Val Leu Asp Gly Ile Lys Ala Val Ala Lys 20 25 30 Glu Lys Asn Ala Thr Leu Met Phe Arg Leu Val Asn Pro His Ser Thr 35 40 45 Ser Leu Ile Ala Glu Gly Val Ala Thr Lys Gly Leu Gly Val His Ala 50 55 60 Lys Ser Ser Asp Trp Gly Leu Gln Ala Gly Tyr Ile Pro Val Asn Pro 65 70 75 80 Asn Leu Ser Lys Leu Phe Gly Arg Ala Pro Glu Val Ile Ala Arg Ala 85 90 95 Asp Asn Asp Val Asn Ser Ser Leu Ala His Gly His Thr Ala Val Asp 100 105 110 Leu Thr Leu Ser Lys Glu Arg Leu Asp Tyr Leu Arg Gln Ala Gly Leu 115 120 125 Val Thr Gly Met Ala Asp Gly Val Val Ala Ser Asn His Ala Gly Tyr 130 135 140 Glu Gln Phe Glu Phe Arg Val Lys Glu Thr Ser Asp Gly Arg Tyr Ala 145 150 155 160 Val Gln Tyr Arg Arg Lys Gly Gly Asp Asp Phe Glu Ala Val Lys Val 165 170 175 Ile Gly Asn Ala Ala Gly Ile Pro Leu Thr Ala Asp Ile Asp Met Phe 180 185 190 Ala Ile Met Pro His Leu Ser Asn Phe Arg Asp Ser Ala Arg Ser Ser 195 200 205 Val Thr Ser Gly Asp Ser Val Thr Asp Tyr Leu Ala Arg Thr Arg Arg 210 215 220 Ala Ala Ser Glu Ala Thr Gly Gly Leu Asp Arg Glu Arg Ile Asp Leu 225 230 235 240 Leu Trp Lys Ile Ala Arg Ala Gly Ala Arg Ser Ala Val Gly Thr Glu 245 250 255 Ala Arg Arg Gln Phe Arg Tyr Asp Gly Asp Met Asn Ile Gly Val Ile 260 265 270 Thr Asp Phe Glu Leu Glu Val Arg Asn Ala Leu Asn Arg Arg Ala His 275 280 285 Ala Val Gly Ala Gln Asp Val Val Gln His Gly Thr Glu Gln Asn Asn 290 295 300 Pro Phe Pro Glu Ala Asp Glu Lys Ile Phe Val Val Ser Ala Thr Gly 305 310 315 320 Glu Ser Gln Met Leu Thr Arg Gly Gln Leu Lys Glu Tyr Ile Gly Gln 325 330 335 Gln Arg Gly Glu Gly Tyr Val Phe Tyr Glu Asn Arg Ala Tyr Gly Val 340 345 350 Ala Gly Lys Ser Leu Phe Asp Asp Gly Leu Gly Ala Ala Pro Gly Val 355 360 365 Pro Gly Gly Arg Ser Lys Ser Ser Pro Asp Val Leu Glu Thr Val Pro 370 375 380 Ala Ser Pro Gly Leu Arg Arg Pro Ser Leu Gly Ala Val Glu Arg Gln 385 390 395 400 Asp Ser Gly Tyr Asp Ser Leu Asp Gly Val Gly Ser Arg Ser Phe Ser 405 410 415 Leu Gly Glu Val Ser Asp Met Ala Ala Val Glu Ala Ala Glu Leu Glu 420 425 430 Met Thr Arg Gln Val Leu His Ala Gly Ala Arg Gln Asp Asp Ala Glu 435 440 445 Pro Gly Val Ser Gly Ala Ser Ala His Trp Gly Gln Arg Ala Leu Gln 450 455 460 Gly Ala Gln Ala Val Ala Ala Ala Gln Arg Leu Val His Ala Ile Ala 465 470 475 480 Leu Met Thr Gln Phe Gly Arg Ala Gly Ser Thr Asn Thr Pro Gln Glu 485 490 495 Ala Ala Ser Leu Ser Ala Ala Val Phe Gly Leu Gly Glu Ala Ser Ser 500 505 510 Ala Val Ala Glu Thr Val Ser Gly Phe Phe Arg Gly Ser Ser Arg Trp 515 520 525 Ala Gly Gly Phe Gly Val Ala Gly Gly Ala Met Ala Leu Gly Gly Gly 530 535 540 Ile Ala Ala Ala Val Gly Ala Gly Met Ser Leu Thr Asp Asp Ala Pro 545 550 555 560 Ala Gly Gln Lys Ala Ala Val Gly Ala Glu Ile Ala Leu Gln Leu Thr 565 570 575 Gly Gly Thr Val Glu Leu Ala Ser Ser Ile Ala Leu Ala Leu Ala Ala 580 585 590 Ala Arg Gly Val Thr Ser Gly Leu Gln Val Ala Gly Ala Ser Ala Gly 595 600 605 Ala Ala Ala Gly Ala Leu Ala Ala Ala Leu Ser Pro Met Glu Ile Tyr 610 615 620 Gly Leu Val Gln Gln Ser His Tyr Ala Asp Gln Leu Asp Lys Leu Ala 625 630 635 640 Gln Glu Ser Ser Ala Tyr Gly Tyr Glu Gly Asp Ala Leu Leu Ala Gln 645 650 655 Leu Tyr Arg Asp Lys Thr Ala Ala Glu Gly Ala Val Ala Gly Val Ser 660 665 670 Ala Val Leu Ser Thr Val Gly Ala Ala Val Ser Ile Ala Ala Ala Ala 675 680 685 Ser Val Val Gly Ala Pro Val Ala Val Val Thr Ser Leu Leu Thr Gly 690 695 700 Ala Leu Asn Gly Ile Leu Arg Gly Val Gln Gln Pro Ile Ile Glu Lys 705 710 715 720 Leu Ala Asn Asp Tyr Ala Arg Lys Ile Asp Glu Leu Gly Gly Pro Gln 725 730 735 Ala Tyr Phe Glu Lys Asn Leu Gln Ala Arg His Glu Gln Leu Ala Asn 740 745 750 Ser Asp Gly Leu Arg Lys Met Leu Ala Asp Leu Gln Ala Gly Trp Asn 755 760 765 Ala Ser Ser Val Ile Gly Val Gln Thr Thr Glu Ile Ser Lys Ser Ala 770 775 780 Leu Glu Leu Ala Ala Ile Thr Gly Asn Ala Asp Asn Leu Lys Ser Ala 785 790 795 800 Asp Val Phe Val Asp Arg Phe Ile Gln Gly Glu Arg Val Ala Gly Gln 805 810 815 Pro Val Val Leu Asp Val Ala Ala Gly Gly Ile Asp Ile Ala Ser Arg 820 825 830 Lys Gly Glu Arg Pro Ala Leu Thr Phe Ile Thr Pro Leu Ala Ala Pro 835 840 845 Gly Glu Glu Gln Arg Arg Arg Thr Lys Thr Gly Lys Ser Glu Phe Thr 850 855 860 Thr Phe Val Glu Ile Val Gly Lys Gln Asp Arg Trp Arg Ile Arg Asp 865 870 875 880 Gly Ala Ala Asp Thr Thr Ile Asp Leu Ala Lys Val Val Ser Gln Leu 885 890 895 Val Asp Ala Asn Gly Val Leu Lys His Ser Ile Lys Leu Glu Val Ile 900 905 910 Gly Gly Asp Gly Asp Asp Val Val Leu Ala Asn Ala Ser Arg Ile His 915 920 925 Tyr Asp Gly Gly Ala Gly Thr Asn Thr Val Ser Tyr Ala Ala Leu Gly 930 935 940 Arg Gln Asp Ser Ile Thr Val Ser Ala Asp Gly Glu Arg Phe Asn Val 945 950 955 960 Arg Lys Gln Leu Asn Asn Ala Asn Val Tyr Arg Glu Gly Val Ala Thr 965 970 975 Gln Lys Thr Ala Tyr Gly Lys Arg Thr Glu Asn Val Gln Tyr Arg His 980 985 990 Val Glu Leu Ala Arg Val Gly Gln Leu Val Glu Val Asp Thr Leu Glu 995 1000 1005 His Val Gln His Ile Ile Gly Gly Ala Gly Asn Asp Ser Ile Thr 1010 1015 1020 Gly Asn Ala His Asp Asn Phe Leu Ala Gly Gly Ala Gly Asp Asp 1025 1030 1035 Arg Leu Asp Gly Gly Ala Gly Asn Asp Thr Leu Val Gly Gly Glu 1040 1045 1050 Gly His Asn Thr Val Val Gly Gly Ala Gly Asp Asp Val Phe Leu 1055 1060 1065 Gln Asp Leu Gly Val Trp Ser Asn Gln Leu Asp Gly Gly Ala Gly 1070 1075 1080 Val Asp Thr Val Lys Tyr Asn Val His Gln Pro Ser Glu Glu Arg 1085 1090 1095 Leu Glu Arg Met Gly Asp Thr Gly Ile His Ala Asp Leu Gln Lys 1100 1105 1110 Gly Thr Val Glu Lys Trp Pro Ala Leu Asn Leu Phe Ser Val Asp 1115 1120 1125 His Val Lys Asn Ile Glu Asn Leu His Gly Ser Ser Leu Asn Asp 1130 1135 1140 Ser Ile Ala Gly Asp Asp Arg Asp Asn Glu Leu Trp Gly Asp Asp 1145 1150 1155 Gly Asn Asp Thr Ile His Gly Arg Gly Gly Asp Asp Ile Leu Arg 1160 1165 1170 Gly Gly Leu Gly Leu Asp Thr Leu Tyr Gly Glu Asp Gly Asn Asp 1175 1180 1185 Ile Phe Leu Gln Asp Asp Glu Thr Val Ser Asp Asp Ile Asp Gly 1190 1195 1200 Gly Ala Gly Leu Asp Thr Val Asp Tyr Ser Ala Met Ile His Ala 1205 1210 1215 Gly Lys Ile Val Ala Pro His Glu Tyr Gly Phe Gly Ile Glu Ala 1220 1225 1230 Asp Leu Ser Glu Gly Trp Val Arg Lys Ala Ala Arg Arg Gly Met 1235 1240 1245 Gly Tyr Tyr Asp Ser Val Arg Ser Val Glu Asn Val Ile Gly Thr 1250 1255 1260 Ser Met Lys Asp Val Leu Ile Gly Asp Ala Gln Ala Asn Thr Leu 1265 1270 1275 Met Gly Gln Gly Gly Asp Asp Thr Val Arg Gly Gly Asp Gly Asp 1280 1285 1290 Asp Leu Leu Phe Gly Gly Asp Gly Asn Asp Met Leu Tyr Gly Asp 1295 1300 1305 Ala Gly Asn Asp Thr Leu Tyr Gly Gly Leu Gly Asp Asp Thr Leu 1310 1315 1320 Glu Gly Gly Ala Gly Asn Asp Trp Phe Gly Gln Thr Pro Ala Arg 1325 1330 1335 Glu His Asp Val Leu Arg Gly Gly Ala Gly Val Asp Thr Val Asp 1340 1345 1350 Tyr Ser Gln Ala Gly Ala His Ala Gly Val Ala Thr Gly Arg Ile 1355 1360 1365 Gly Leu Gly Ile Leu Ala Asp Leu Gly Ala Gly Arg Val Asp Lys 1370 1375 1380 Leu Gly Glu Ala Gly Ser Ser Ala Tyr Asp Thr Val Ser Gly Ile 1385 1390 1395 Glu Asn Val Val Gly Thr Glu Leu Ala Asp Arg Ile Thr Gly Asp 1400 1405 1410 Ala Gln Ala Asn Val Leu Arg Gly Ala Gly Gly Ala Asp Val Leu 1415 1420 1425 Ala Gly Gly Glu Gly Asp Asp Val Leu Leu Gly Gly Glu Gly Asp 1430 1435 1440 Asp Gln Leu Ser Gly Asp Ala Gly Arg Asp Arg Leu Tyr Gly Glu 1445 1450 1455 Ala Gly Asp Asp Trp Phe Phe Gln Asp Ala Ala Asn Ala Gly Asn 1460 1465 1470 Leu Leu Asp Gly Gly Asp Gly Asn Asp Thr Val Asp Phe Ser Gly 1475 1480 1485 Pro Gly Arg Gly Leu Asp Ala Gly Ala Lys Gly Val Phe Leu Ser 1490 1495 1500 Leu Gly Lys Gly Phe Ala Ser Leu Met Asp Glu Pro Glu Thr Ser 1505 1510 1515 Asn Val Leu Arg His Ile Glu Asn Ala Val Gly Ser Val Arg Asp 1520 1525 1530 Asp Val Leu Ile Gly Asp Ala Gly Ala Asn Val Leu Asn Gly Leu 1535 1540 1545 Ala Gly Asn Asp Val Leu Ser Gly Gly Ala Gly Asp Asp Val Leu 1550 1555 1560 Leu Gly Asp Glu Gly Ser Asp Leu Leu Ser Gly Asp Ala Gly Asn 1565 1570 1575 Asp Asp Leu Phe Gly Gly Gln Gly Asp Asp Thr Tyr Leu Phe Gly 1580 1585 1590 Ala Gly Tyr Gly His Asp Thr Ile Tyr Glu Ser Gly Gly Gly His 1595 1600 1605 Asp Thr Ile Arg Ile Asn Ala Gly Ala Asp Gln Leu Trp Phe Ala 1610 1615 1620 Arg Gln Gly Asn Asp Leu Glu Ile Arg Ile Leu Gly Thr Asp Asp 1625 1630 1635 Ala Leu Thr Val His Asp Trp Tyr Arg Asp Ala Asp His Arg Val 1640 1645 1650 Glu Ala Ile His Ala Ala Asn Gln Ala Ile Asp Pro Ala Gly Ile 1655 1660 1665 Glu Lys Leu Val Glu Ala Met Ala Gln Tyr Pro Asp Pro Gly Ala 1670 1675 1680 Ala Ala Ala Ala Pro Pro Ala Ala Arg Val Pro Asp Thr Leu Met 1685 1690 1695 Gln Ser Leu Ala Val Asn Trp Arg 1700 1705 <210> 7 <211> 5118 <212> DNA <213> Bordetella bronchiseptica (wild type CyaA) <220> <221> CDS <222> (1)..(5118) <400> 7 atg cag caa tcg cat cag gct ggt tac gca aac gcc gcc gac cgg gag 48 Met Gln Gln Ser His Gln Ala Gly Tyr Ala Asn Ala Ala Asp Arg Glu 1 5 10 15 tct ggc atc ccc gca gcc gta ctc gat ggc atc aag gcc gtg gcg aag 96 Ser Gly Ile Pro Ala Ala Val Leu Asp Gly Ile Lys Ala Val Ala Lys 20 25 30 gaa aaa aac gcc aca ttg atg ttc cgc ctg gtc aac ccc cat tcc acc 144 Glu Lys Asn Ala Thr Leu Met Phe Arg Leu Val Asn Pro His Ser Thr 35 40 45 agc ctg att gcc gaa ggg gtg gcc acc aaa gga ttg ggc gtg cac gcc 192 Ser Leu Ile Ala Glu Gly Val Ala Thr Lys Gly Leu Gly Val His Ala 50 55 60 aag tcg tcc gat tgg ggg ttg cag gcg ggc tac att ccc gtc aac ccg 240 Lys Ser Ser Asp Trp Gly Leu Gln Ala Gly Tyr Ile Pro Val Asn Pro 65 70 75 80 aat ctt tcc aaa ctg ttc ggc cgt gcg ccc gag gtg atc gcg cgg gcc 288 Asn Leu Ser Lys Leu Phe Gly Arg Ala Pro Glu Val Ile Ala Arg Ala 85 90 95 gac aac gac gtc aac agc agc ctg gcg cat ggc cat acc gcg gtc gac 336 Asp Asn Asp Val Asn Ser Ser Leu Ala His Gly His Thr Ala Val Asp 100 105 110 ctg acg ctg tcg aaa gag cgg ctt gac tat ctg cgg caa gcg ggc ctg 384 Leu Thr Leu Ser Lys Glu Arg Leu Asp Tyr Leu Arg Gln Ala Gly Leu 115 120 125 gtc acc ggc atg gcc gat ggc gtg gtc gcg agc aac cac gca ggc tac 432 Val Thr Gly Met Ala Asp Gly Val Val Ala Ser Asn His Ala Gly Tyr 130 135 140 gag cag ttc gag ttt cgc gtg aag gaa acc tcg gac ggg cgc tat gcc 480 Glu Gln Phe Glu Phe Arg Val Lys Glu Thr Ser Asp Gly Arg Tyr Ala 145 150 155 160 gtg cag tat cgc cgc aag ggc ggc gac gat ttc gag gcg gtc aag gtg 528 Val Gln Tyr Arg Arg Lys Gly Gly Asp Asp Phe Glu Ala Val Lys Val 165 170 175 atc ggc aat gcc gcc ggt att cca ctg acg gcg gat atc gac atg ttc 576 Ile Gly Asn Ala Ala Gly Ile Pro Leu Thr Ala Asp Ile Asp Met Phe 180 185 190 gcc atc atg ccg cat ctg tcc aac ttc cgc gac tcg gcg cgc agt tcg 624 Ala Ile Met Pro His Leu Ser Asn Phe Arg Asp Ser Ala Arg Ser Ser 195 200 205 gtg acc agc ggc gat tcg gtg acc gat tac ctg gcg cgc acg cgg cgg 672 Val Thr Ser Gly Asp Ser Val Thr Asp Tyr Leu Ala Arg Thr Arg Arg 210 215 220 gcc gcc agc gag gcc acg ggc ggc ctg gat cgc gaa cgc atc gac ttg 720 Ala Ala Ser Glu Ala Thr Gly Gly Leu Asp Arg Glu Arg Ile Asp Leu 225 230 235 240 ttg tgg aaa atc gct cgc gcc ggc gcc cgt tcc gca gtg ggc acc gag 768 Leu Trp Lys Ile Ala Arg Ala Gly Ala Arg Ser Ala Val Gly Thr Glu 245 250 255 gcg cgt cgc cag ttc cgc tac gac ggc gac atg aat atc ggc gtg atc 816 Ala Arg Arg Gln Phe Arg Tyr Asp Gly Asp Met Asn Ile Gly Val Ile 260 265 270 acc gat ttc gag ctg gaa gtg cgc aat gcg ctg aac agg cgg gcg cac 864 Thr Asp Phe Glu Leu Glu Val Arg Asn Ala Leu Asn Arg Arg Ala His 275 280 285 gcg gtc ggc agg cag gac gtg gtc cag cat ggc act gag cag aac aat 912 Ala Val Gly Arg Gln Asp Val Val Gln His Gly Thr Glu Gln Asn Asn 290 295 300 cct ttc ccg gag gca gat gag aag att ttc gtc gta tcg gcc acc ggt 960 Pro Phe Pro Glu Ala Asp Glu Lys Ile Phe Val Val Ser Ala Thr Gly 305 310 315 320 gaa agc cag atg ctc acg cgc ggg caa ctg aag gaa tac att ggc cag 1008 Glu Ser Gln Met Leu Thr Arg Gly Gln Leu Lys Glu Tyr Ile Gly Gln 325 330 335 cag cgc ggc gag ggc tat gtc ttc tac gag aac cgt gcg tac ggc gtg 1056 Gln Arg Gly Glu Gly Tyr Val Phe Tyr Glu Asn Arg Ala Tyr Gly Val 340 345 350 gcg ggg aaa agc ctg ttc gac gat ggg ctg gga gcc gcg ccc ggc gtg 1104 Ala Gly Lys Ser Leu Phe Asp Asp Gly Leu Gly Ala Ala Pro Gly Val 355 360 365 ccg ggg cga cgt tcg aag tcc tcg ccg gat gta ctg gaa acg gtg ccg 1152 Pro Gly Arg Arg Ser Lys Ser Ser Pro Asp Val Leu Glu Thr Val Pro 370 375 380 gcg tca ccc gga ttg cgg cgg ccg tcg ctg ggc gca gtg gaa cgc cag 1200 Ala Ser Pro Gly Leu Arg Arg Pro Ser Leu Gly Ala Val Glu Arg Gln 385 390 395 400 gat tcc ggc tat gac agc ctt gat ggg gtg gga tcg cga tcg ttc tcg 1248 Asp Ser Gly Tyr Asp Ser Leu Asp Gly Val Gly Ser Arg Ser Phe Ser 405 410 415 ttg ggc gag gtg tcc gac atg gcc gcc gtg gaa gcg gcg gaa ctg gaa 1296 Leu Gly Glu Val Ser Asp Met Ala Ala Val Glu Ala Ala Glu Leu Glu 420 425 430 atg acc cgg caa gtc ttg cac gcc ggg gcg cgg cag gac gat gcc gag 1344 Met Thr Arg Gln Val Leu His Ala Gly Ala Arg Gln Asp Asp Ala Glu 435 440 445 ccg ggc gtg agc ggt gcg tcg gcg cac tgg ggg cag cgg gcg ctg cag 1392 Pro Gly Val Ser Gly Ala Ser Ala His Trp Gly Gln Arg Ala Leu Gln 450 455 460 ggc gcc cag gcg gtg gcg gcg gcg cag cgg ctg gtt cat gcc att gcc 1440 Gly Ala Gln Ala Val Ala Ala Ala Gln Arg Leu Val His Ala Ile Ala 465 470 475 480 ctg atg acg caa ttc ggc cgg gcc ggt tcc acc aac acg ccg cag gaa 1488 Leu Met Thr Gln Phe Gly Arg Ala Gly Ser Thr Asn Thr Pro Gln Glu 485 490 495 gcg gcc tcg ttg tcg gcg gcc gtg ttc ggc ttg ggc gag gcc agc agc 1536 Ala Ala Ser Leu Ser Ala Ala Val Phe Gly Leu Gly Glu Ala Ser Ser 500 505 510 gcc gtg gcc gaa acc gtg agc ggt ttt ttc cgc ggg tct tcg cgc tgg 1584 Ala Val Ala Glu Thr Val Ser Gly Phe Phe Arg Gly Ser Ser Arg Trp 515 520 525 gcc ggc ggt ttc ggc gtg gct ggc ggc gcg atg gcg ctg gga ggc ggc 1632 Ala Gly Gly Phe Gly Val Ala Gly Gly Ala Met Ala Leu Gly Gly Gly 530 535 540 atc ggc gcc gtt ggc gcc ggg atg tcg ttg acc gat gac gcg ccg gcc 1680 Ile Gly Ala Val Gly Ala Gly Met Ser Leu Thr Asp Asp Ala Pro Ala 545 550 555 560 gga cag aag gcc gcc gcc ggc gcc gag atc gcg ctg cag ttg aca ggt 1728 Gly Gln Lys Ala Ala Ala Gly Ala Glu Ile Ala Leu Gln Leu Thr Gly 565 570 575 gga acg gtc gag ctg gct tct tcc atc gcg ttg gcg ctg gcc gcg gcg 1776 Gly Thr Val Glu Leu Ala Ser Ser Ile Ala Leu Ala Leu Ala Ala Ala 580 585 590 cgc ggc gtg acc agc ggc ttg cag gtg gcg ggg gcg tcg gcc ggg gcg 1824 Arg Gly Val Thr Ser Gly Leu Gln Val Ala Gly Ala Ser Ala Gly Ala 595 600 605 gct gcc ggc gca ttg gcc gcg gcg ctc agt ccc atg gag atc tac ggc 1872 Ala Ala Gly Ala Leu Ala Ala Ala Leu Ser Pro Met Glu Ile Tyr Gly 610 615 620 ctg gtg cag caa tcg cac tat gcg gat cag ctg gac aag ctg gcg cag 1920 Leu Val Gln Gln Ser His Tyr Ala Asp Gln Leu Asp Lys Leu Ala Gln 625 630 635 640 gaa tcg agc gca tac ggt tac gag ggc gac gcc ttg ctg gcc cag ctg 1968 Glu Ser Ser Ala Tyr Gly Tyr Glu Gly Asp Ala Leu Leu Ala Gln Leu 645 650 655 tat cgc gac aag acg gcc gcc gag ggc gcc gtc gcc ggc gtc tcc gcc 2016 Tyr Arg Asp Lys Thr Ala Ala Glu Gly Ala Val Ala Gly Val Ser Ala 660 665 670 gtc ctg agc acg gtg ggg gct gcg gtg tcg atc gcc gcg gcg gcc agc 2064 Val Leu Ser Thr Val Gly Ala Ala Val Ser Ile Ala Ala Ala Ala Ser 675 680 685 gtg gta ggc gcc ccg gtg gcg gtg gtc act tcc ttg ttg acc ggg gct 2112 Val Val Gly Ala Pro Val Ala Val Val Thr Ser Leu Leu Thr Gly Ala 690 695 700 ctc aac ggc atc ctg cgc ggc gtg cag cag ccc atc atc gaa aag ctg 2160 Leu Asn Gly Ile Leu Arg Gly Val Gln Gln Pro Ile Ile Glu Lys Leu 705 710 715 720 gcc aat gat tac gct cgc aag atc gac gag ctg ggc ggg ccg caa gcg 2208 Ala Asn Asp Tyr Ala Arg Lys Ile Asp Glu Leu Gly Gly Pro Gln Ala 725 730 735 tac ttc gag aaa aac ctg cag gcg cgt cac gaa caa ctg gcc aat tcg 2256 Tyr Phe Glu Lys Asn Leu Gln Ala Arg His Glu Gln Leu Ala Asn Ser 740 745 750 gac ggc cta cgg aaa atg ctg gcc gac ctg cag gcc ggg tgg aac gcc 2304 Asp Gly Leu Arg Lys Met Leu Ala Asp Leu Gln Ala Gly Trp Asn Ala 755 760 765 agc agc gtg atc ggg gtg cag acg aca gag att tcc aag tcg gcg ctc 2352 Ser Ser Val Ile Gly Val Gln Thr Thr Glu Ile Ser Lys Ser Ala Leu 770 775 780 gaa ctg gcc gcc att acc ggc aac gcg gac aac ctg aaa tcc gcc gac 2400 Glu Leu Ala Ala Ile Thr Gly Asn Ala Asp Asn Leu Lys Ser Ala Asp 785 790 795 800 gtg ttc gtg gac cgc ttc atc cag ggc gag cgg gtg gcc ggc cag ccg 2448 Val Phe Val Asp Arg Phe Ile Gln Gly Glu Arg Val Ala Gly Gln Pro 805 810 815 gtg gta ctc gac gtc gcc gcc ggc ggc atc gat atc gcc agc cgc aag 2496 Val Val Leu Asp Val Ala Ala Gly Gly Ile Asp Ile Ala Ser Arg Lys 820 825 830 ggc gag cgg ccg gcg ctg acg ttc atc acg ccg ctg gcc gcg cca gga 2544 Gly Glu Arg Pro Ala Leu Thr Phe Ile Thr Pro Leu Ala Ala Pro Gly 835 840 845 gaa gag cag cgc cgg cgc acg aaa acg ggc aag agc gaa ttc acc aca 2592 Glu Glu Gln Arg Arg Arg Thr Lys Thr Gly Lys Ser Glu Phe Thr Thr 850 855 860 ttc gtc gag atc gtg ggc aag cag gac cgc tgg cgc atc cgg gac ggc 2640 Phe Val Glu Ile Val Gly Lys Gln Asp Arg Trp Arg Ile Arg Asp Gly 865 870 875 880 gcg gcc gac acc acc atc gat ctg gcc aag gtg gtg tcg caa ctg gtc 2688 Ala Ala Asp Thr Thr Ile Asp Leu Ala Lys Val Val Ser Gln Leu Val 885 890 895 gac gcc aat ggc gtg ctc aag cac agc atc aaa ctg gag gtg atc ggc 2736 Asp Ala Asn Gly Val Leu Lys His Ser Ile Lys Leu Glu Val Ile Gly 900 905 910 gga gat ggc gat gat gtc gtg ctt gcc aat gct tcg cgc atc cat tac 2784 Gly Asp Gly Asp Asp Val Val Leu Ala Asn Ala Ser Arg Ile His Tyr 915 920 925 gac ggc ggc gcg gga acc aac acg gtc agc tat gcc gcc ctg ggc cga 2832 Asp Gly Gly Ala Gly Thr Asn Thr Val Ser Tyr Ala Ala Leu Gly Arg 930 935 940 cag gat tcc att acc gtg tcc gcc gac ggg gaa cgt ttc aac gtg cgc 2880 Gln Asp Ser Ile Thr Val Ser Ala Asp Gly Glu Arg Phe Asn Val Arg 945 950 955 960 aag cag ttg aac aac gcc aac gtg tat cgc gaa ggc gtg gct acc cag 2928 Lys Gln Leu Asn Asn Ala Asn Val Tyr Arg Glu Gly Val Ala Thr Gln 965 970 975 aaa acc gcc tac ggc aag cgc acg gag aat gtc caa tac cgc cat gtc 2976 Lys Thr Ala Tyr Gly Lys Arg Thr Glu Asn Val Gln Tyr Arg His Val 980 985 990 gag ctg gcc cgt gtc ggg caa ctg gtg gag gtc gac acg ctc gag cat 3024 Glu Leu Ala Arg Val Gly Gln Leu Val Glu Val Asp Thr Leu Glu His 995 1000 1005 gtg cag cac atc atc ggc ggg gcc ggc aac gat tcg atc acc ggc 3069 Val Gln His Ile Ile Gly Gly Ala Gly Asn Asp Ser Ile Thr Gly 1010 1015 1020 aat gcg cac gac aac ttc ctg gcc ggc ggg gcg ggc gac gac agg 3114 Asn Ala His Asp Asn Phe Leu Ala Gly Gly Ala Gly Asp Asp Arg 1025 1030 1035 ctg gat ggc ggc gcc ggc aac gac aca ctg gtc ggc ggc gag ggc 3159 Leu Asp Gly Gly Ala Gly Asn Asp Thr Leu Val Gly Gly Glu Gly 1040 1045 1050 cac aac acg gtc gtc ggc ggc gct ggc gac gac gta ttc ctg cag 3204 His Asn Thr Val Val Gly Gly Ala Gly Asp Asp Val Phe Leu Gln 1055 1060 1065 gac ctg ggg gta tgg agc aac cag ctc gat ggc ggc gcg ggc gtc 3249 Asp Leu Gly Val Trp Ser Asn Gln Leu Asp Gly Gly Ala Gly Val 1070 1075 1080 gat acc gtg aag tac aac gtg cac cag cct tcc gag gaa cgc ctc 3294 Asp Thr Val Lys Tyr Asn Val His Gln Pro Ser Glu Glu Arg Leu 1085 1090 1095 gaa cgc atg ggc gac acg ggc atc cat gcc gat ctt caa aag ggc 3339 Glu Arg Met Gly Asp Thr Gly Ile His Ala Asp Leu Gln Lys Gly 1100 1105 1110 acg gtc gag aag tgg ccg gcc ctg aac ctg ttc agc gtc gac cat 3384 Thr Val Glu Lys Trp Pro Ala Leu Asn Leu Phe Ser Val Asp His 1115 1120 1125 gtc aag aat atc gag aat ctg cac ggc tcc agc ctg aac gac agc 3429 Val Lys Asn Ile Glu Asn Leu His Gly Ser Ser Leu Asn Asp Ser 1130 1135 1140 atc gcc ggc gac gac cgg gac aac gag ctc tgg ggc gac gat ggc 3474 Ile Ala Gly Asp Asp Arg Asp Asn Glu Leu Trp Gly Asp Asp Gly 1145 1150 1155 aac gac acg ata cac ggc cgg ggc ggc gac gat atc ctg cgc ggc 3519 Asn Asp Thr Ile His Gly Arg Gly Gly Asp Asp Ile Leu Arg Gly 1160 1165 1170 ggc ctg ggc ctg gac acg ctg tat ggc gag gac ggc aac gac atc 3564 Gly Leu Gly Leu Asp Thr Leu Tyr Gly Glu Asp Gly Asn Asp Ile 1175 1180 1185 ttc ctg cag gac gac gag acc gtc agc gat gac atc gac ggt ggc 3609 Phe Leu Gln Asp Asp Glu Thr Val Ser Asp Asp Ile Asp Gly Gly 1190 1195 1200 gcg gga ctg gac acc gtc gac tat tcc gcc atg atc cat gca ggc 3654 Ala Gly Leu Asp Thr Val Asp Tyr Ser Ala Met Ile His Ala Gly 1205 1210 1215 aag atc gtt gcg ccg cat gaa tac ggc ttc ggg atc gag gcg gac 3699 Lys Ile Val Ala Pro His Glu Tyr Gly Phe Gly Ile Glu Ala Asp 1220 1225 1230 ctg tcc gaa ggg tgg gtg cgc aag gcg gcc cgg cgc ggc atg gac 3744 Leu Ser Glu Gly Trp Val Arg Lys Ala Ala Arg Arg Gly Met Asp 1235 1240 1245 tac tac gac agt gtc cgc agt gtc gaa aac gtc atc ggc acg agc 3789 Tyr Tyr Asp Ser Val Arg Ser Val Glu Asn Val Ile Gly Thr Ser 1250 1255 1260 atg aag gat gtg ctc atc ggc gac gcg caa gcc aat acc ctg atg 3834 Met Lys Asp Val Leu Ile Gly Asp Ala Gln Ala Asn Thr Leu Met 1265 1270 1275 ggc cag ggc ggc gac gat acc gtg cgc ggc ggc gac ggc gat gat 3879 Gly Gln Gly Gly Asp Asp Thr Val Arg Gly Gly Asp Gly Asp Asp 1280 1285 1290 ctg ctg ttc ggc ggc gac ggc aac gac atg ctg tat gga gac gcc 3924 Leu Leu Phe Gly Gly Asp Gly Asn Asp Met Leu Tyr Gly Asp Ala 1295 1300 1305 ggc aac gac acc ctc tac gga ggg ctg ggc gac gat acc ctt gaa 3969 Gly Asn Asp Thr Leu Tyr Gly Gly Leu Gly Asp Asp Thr Leu Glu 1310 1315 1320 ggc ggc gcg ggc aac gat tgg ttc ggc cag acg ccg gcg cgc gag 4014 Gly Gly Ala Gly Asn Asp Trp Phe Gly Gln Thr Pro Ala Arg Glu 1325 1330 1335 cat gac gtg ctg cgc ggc ggg gct ggg gtg gat acc gtg gat tac 4059 His Asp Val Leu Arg Gly Gly Ala Gly Val Asp Thr Val Asp Tyr 1340 1345 1350 agc cag gcg ggc gcg cat gcc ggc gtt gcc acg ggt cgc atc ggg 4104 Ser Gln Ala Gly Ala His Ala Gly Val Ala Thr Gly Arg Ile Gly 1355 1360 1365 ctg ggt att ctg gcg gac ctg ggc gcc ggc cgc gtc gac aag ctg 4149 Leu Gly Ile Leu Ala Asp Leu Gly Ala Gly Arg Val Asp Lys Leu 1370 1375 1380 ggc gag gcc ggc agc agc gcc tac gat acg gtt tcc ggc atc gaa 4194 Gly Glu Ala Gly Ser Ser Ala Tyr Asp Thr Val Ser Gly Ile Glu 1385 1390 1395 aat gtg gtg ggc acg gaa ctg gcc gac cgc atc acg ggc gat gcg 4239 Asn Val Val Gly Thr Glu Leu Ala Asp Arg Ile Thr Gly Asp Ala 1400 1405 1410 cag gcc aac gta ctg cgc ggc gcg ggt ggc gcc gac gtg ctt gcg 4284 Gln Ala Asn Val Leu Arg Gly Ala Gly Gly Ala Asp Val Leu Ala 1415 1420 1425 ggc ggc gag ggc gac gat gtg ctg ctg ggc ggc gac ggc gac gac 4329 Gly Gly Glu Gly Asp Asp Val Leu Leu Gly Gly Asp Gly Asp Asp 1430 1435 1440 cag ctg tcg ggc gac gcc gga cgc gac cgc ttg tac ggc gaa gcc 4374 Gln Leu Ser Gly Asp Ala Gly Arg Asp Arg Leu Tyr Gly Glu Ala 1445 1450 1455 ggt gac gac tgg ttc ttc cag gat gcc gcc aat gcc ggc aat ctg 4419 Gly Asp Asp Trp Phe Phe Gln Asp Ala Ala Asn Ala Gly Asn Leu 1460 1465 1470 ctc gac ggt ggt gac ggc aac gat acc gtg gat ttc agc ggc ccg 4464 Leu Asp Gly Gly Asp Gly Asn Asp Thr Val Asp Phe Ser Gly Pro 1475 1480 1485 ggc cgg ggc ctc gac gcc ggc gca aag ggc gta ttc ctg agc ctg 4509 Gly Arg Gly Leu Asp Ala Gly Ala Lys Gly Val Phe Leu Ser Leu 1490 1495 1500 ggc aag ggg ttc gcc agc ctg atg gac gaa ccc gaa acc agc aac 4554 Gly Lys Gly Phe Ala Ser Leu Met Asp Glu Pro Glu Thr Ser Asn 1505 1510 1515 gtg ttg cgc cat atc gag aac gcc gtg ggc agc gtg cgt gat gac 4599 Val Leu Arg His Ile Glu Asn Ala Val Gly Ser Val Arg Asp Asp 1520 1525 1530 gtg ctg atc ggc gac gca ggc gcc aac gtc ctc aat ggc ctg gcg 4644 Val Leu Ile Gly Asp Ala Gly Ala Asn Val Leu Asn Gly Leu Ala 1535 1540 1545 ggc aac gac gtg ctg tcc ggc ggc gcc ggc gac gat gtg ctg ctg 4689 Gly Asn Asp Val Leu Ser Gly Gly Ala Gly Asp Asp Val Leu Leu 1550 1555 1560 ggc gac gag ggc tcg gac ctg ctc agc ggc gat gcg ggc aac gac 4734 Gly Asp Glu Gly Ser Asp Leu Leu Ser Gly Asp Ala Gly Asn Asp 1565 1570 1575 gat ctg ttc ggc ggg cag ggc gat gat acc tat ctg ttc ggg gcc 4779 Asp Leu Phe Gly Gly Gln Gly Asp Asp Thr Tyr Leu Phe Gly Ala 1580 1585 1590 ggg tac gga cat gac acg atc tac gaa tcg ggc ggc ggc cat gac 4824 Gly Tyr Gly His Asp Thr Ile Tyr Glu Ser Gly Gly Gly His Asp 1595 1600 1605 acc atc cgt atc aac gcg ggg gcg gac cag ctg tgg ttt gcg cgc 4869 Thr Ile Arg Ile Asn Ala Gly Ala Asp Gln Leu Trp Phe Ala Arg 1610 1615 1620 cag ggc aac gac ctg gag atc cgc att ctt ggc acc gac gat gca 4914 Gln Gly Asn Asp Leu Glu Ile Arg Ile Leu Gly Thr Asp Asp Ala 1625 1630 1635 ctt acc gtg cac gac tgg tat cgc gac gcc gat cac cgg gtg gaa 4959 Leu Thr Val His Asp Trp Tyr Arg Asp Ala Asp His Arg Val Glu 1640 1645 1650 gcc atc cat gcc gcc aac cag gcc ata gac ccg gcc ggc atc gaa 5004 Ala Ile His Ala Ala Asn Gln Ala Ile Asp Pro Ala Gly Ile Glu 1655 1660 1665 aag ctg gtc gag gca atg gcg cag tac ccg gac ccc ggc gcg gcg 5049 Lys Leu Val Glu Ala Met Ala Gln Tyr Pro Asp Pro Gly Ala Ala 1670 1675 1680 gcg gct gcc ccg ccg gcg gcg cgc gtg ccg gac acg ctg atg cag 5094 Ala Ala Ala Pro Pro Ala Ala Arg Val Pro Asp Thr Leu Met Gln 1685 1690 1695 tcc ctg gct gtc aac tgg cgc tga 5118 Ser Leu Ala Val Asn Trp Arg 1700 1705 <210> 8 <211> 1705 <212> PRT <213> Bordetella bronchiseptica (wild type CyaA) <400> 8 Met Gln Gln Ser His Gln Ala Gly Tyr Ala Asn Ala Ala Asp Arg Glu 1 5 10 15 Ser Gly Ile Pro Ala Ala Val Leu Asp Gly Ile Lys Ala Val Ala Lys 20 25 30 Glu Lys Asn Ala Thr Leu Met Phe Arg Leu Val Asn Pro His Ser Thr 35 40 45 Ser Leu Ile Ala Glu Gly Val Ala Thr Lys Gly Leu Gly Val His Ala 50 55 60 Lys Ser Ser Asp Trp Gly Leu Gln Ala Gly Tyr Ile Pro Val Asn Pro 65 70 75 80 Asn Leu Ser Lys Leu Phe Gly Arg Ala Pro Glu Val Ile Ala Arg Ala 85 90 95 Asp Asn Asp Val Asn Ser Ser Leu Ala His Gly His Thr Ala Val Asp 100 105 110 Leu Thr Leu Ser Lys Glu Arg Leu Asp Tyr Leu Arg Gln Ala Gly Leu 115 120 125 Val Thr Gly Met Ala Asp Gly Val Val Ala Ser Asn His Ala Gly Tyr 130 135 140 Glu Gln Phe Glu Phe Arg Val Lys Glu Thr Ser Asp Gly Arg Tyr Ala 145 150 155 160 Val Gln Tyr Arg Arg Lys Gly Gly Asp Asp Phe Glu Ala Val Lys Val 165 170 175 Ile Gly Asn Ala Ala Gly Ile Pro Leu Thr Ala Asp Ile Asp Met Phe 180 185 190 Ala Ile Met Pro His Leu Ser Asn Phe Arg Asp Ser Ala Arg Ser Ser 195 200 205 Val Thr Ser Gly Asp Ser Val Thr Asp Tyr Leu Ala Arg Thr Arg Arg 210 215 220 Ala Ala Ser Glu Ala Thr Gly Gly Leu Asp Arg Glu Arg Ile Asp Leu 225 230 235 240 Leu Trp Lys Ile Ala Arg Ala Gly Ala Arg Ser Ala Val Gly Thr Glu 245 250 255 Ala Arg Arg Gln Phe Arg Tyr Asp Gly Asp Met Asn Ile Gly Val Ile 260 265 270 Thr Asp Phe Glu Leu Glu Val Arg Asn Ala Leu Asn Arg Arg Ala His 275 280 285 Ala Val Gly Arg Gln Asp Val Val Gln His Gly Thr Glu Gln Asn Asn 290 295 300 Pro Phe Pro Glu Ala Asp Glu Lys Ile Phe Val Val Ser Ala Thr Gly 305 310 315 320 Glu Ser Gln Met Leu Thr Arg Gly Gln Leu Lys Glu Tyr Ile Gly Gln 325 330 335 Gln Arg Gly Glu Gly Tyr Val Phe Tyr Glu Asn Arg Ala Tyr Gly Val 340 345 350 Ala Gly Lys Ser Leu Phe Asp Asp Gly Leu Gly Ala Ala Pro Gly Val 355 360 365 Pro Gly Arg Arg Ser Lys Ser Ser Pro Asp Val Leu Glu Thr Val Pro 370 375 380 Ala Ser Pro Gly Leu Arg Arg Pro Ser Leu Gly Ala Val Glu Arg Gln 385 390 395 400 Asp Ser Gly Tyr Asp Ser Leu Asp Gly Val Gly Ser Arg Ser Phe Ser 405 410 415 Leu Gly Glu Val Ser Asp Met Ala Ala Val Glu Ala Ala Glu Leu Glu 420 425 430 Met Thr Arg Gln Val Leu His Ala Gly Ala Arg Gln Asp Asp Ala Glu 435 440 445 Pro Gly Val Ser Gly Ala Ser Ala His Trp Gly Gln Arg Ala Leu Gln 450 455 460 Gly Ala Gln Ala Val Ala Ala Ala Gln Arg Leu Val His Ala Ile Ala 465 470 475 480 Leu Met Thr Gln Phe Gly Arg Ala Gly Ser Thr Asn Thr Pro Gln Glu 485 490 495 Ala Ala Ser Leu Ser Ala Ala Val Phe Gly Leu Gly Glu Ala Ser Ser 500 505 510 Ala Val Ala Glu Thr Val Ser Gly Phe Phe Arg Gly Ser Ser Arg Trp 515 520 525 Ala Gly Gly Phe Gly Val Ala Gly Gly Ala Met Ala Leu Gly Gly Gly 530 535 540 Ile Gly Ala Val Gly Ala Gly Met Ser Leu Thr Asp Asp Ala Pro Ala 545 550 555 560 Gly Gln Lys Ala Ala Ala Gly Ala Glu Ile Ala Leu Gln Leu Thr Gly 565 570 575 Gly Thr Val Glu Leu Ala Ser Ser Ile Ala Leu Ala Leu Ala Ala Ala 580 585 590 Arg Gly Val Thr Ser Gly Leu Gln Val Ala Gly Ala Ser Ala Gly Ala 595 600 605 Ala Ala Gly Ala Leu Ala Ala Ala Leu Ser Pro Met Glu Ile Tyr Gly 610 615 620 Leu Val Gln Gln Ser His Tyr Ala Asp Gln Leu Asp Lys Leu Ala Gln 625 630 635 640 Glu Ser Ser Ala Tyr Gly Tyr Glu Gly Asp Ala Leu Leu Ala Gln Leu 645 650 655 Tyr Arg Asp Lys Thr Ala Ala Glu Gly Ala Val Ala Gly Val Ser Ala 660 665 670 Val Leu Ser Thr Val Gly Ala Ala Val Ser Ile Ala Ala Ala Ala Ser 675 680 685 Val Val Gly Ala Pro Val Ala Val Val Thr Ser Leu Leu Thr Gly Ala 690 695 700 Leu Asn Gly Ile Leu Arg Gly Val Gln Gln Pro Ile Ile Glu Lys Leu 705 710 715 720 Ala Asn Asp Tyr Ala Arg Lys Ile Asp Glu Leu Gly Gly Pro Gln Ala 725 730 735 Tyr Phe Glu Lys Asn Leu Gln Ala Arg His Glu Gln Leu Ala Asn Ser 740 745 750 Asp Gly Leu Arg Lys Met Leu Ala Asp Leu Gln Ala Gly Trp Asn Ala 755 760 765 Ser Ser Val Ile Gly Val Gln Thr Thr Glu Ile Ser Lys Ser Ala Leu 770 775 780 Glu Leu Ala Ala Ile Thr Gly Asn Ala Asp Asn Leu Lys Ser Ala Asp 785 790 795 800 Val Phe Val Asp Arg Phe Ile Gln Gly Glu Arg Val Ala Gly Gln Pro 805 810 815 Val Val Leu Asp Val Ala Ala Gly Gly Ile Asp Ile Ala Ser Arg Lys 820 825 830 Gly Glu Arg Pro Ala Leu Thr Phe Ile Thr Pro Leu Ala Ala Pro Gly 835 840 845 Glu Glu Gln Arg Arg Arg Thr Lys Thr Gly Lys Ser Glu Phe Thr Thr 850 855 860 Phe Val Glu Ile Val Gly Lys Gln Asp Arg Trp Arg Ile Arg Asp Gly 865 870 875 880 Ala Ala Asp Thr Thr Ile Asp Leu Ala Lys Val Val Ser Gln Leu Val 885 890 895 Asp Ala Asn Gly Val Leu Lys His Ser Ile Lys Leu Glu Val Ile Gly 900 905 910 Gly Asp Gly Asp Asp Val Val Leu Ala Asn Ala Ser Arg Ile His Tyr 915 920 925 Asp Gly Gly Ala Gly Thr Asn Thr Val Ser Tyr Ala Ala Leu Gly Arg 930 935 940 Gln Asp Ser Ile Thr Val Ser Ala Asp Gly Glu Arg Phe Asn Val Arg 945 950 955 960 Lys Gln Leu Asn Asn Ala Asn Val Tyr Arg Glu Gly Val Ala Thr Gln 965 970 975 Lys Thr Ala Tyr Gly Lys Arg Thr Glu Asn Val Gln Tyr Arg His Val 980 985 990 Glu Leu Ala Arg Val Gly Gln Leu Val Glu Val Asp Thr Leu Glu His 995 1000 1005 Val Gln His Ile Ile Gly Gly Ala Gly Asn Asp Ser Ile Thr Gly 1010 1015 1020 Asn Ala His Asp Asn Phe Leu Ala Gly Gly Ala Gly Asp Asp Arg 1025 1030 1035 Leu Asp Gly Gly Ala Gly Asn Asp Thr Leu Val Gly Gly Glu Gly 1040 1045 1050 His Asn Thr Val Val Gly Gly Ala Gly Asp Asp Val Phe Leu Gln 1055 1060 1065 Asp Leu Gly Val Trp Ser Asn Gln Leu Asp Gly Gly Ala Gly Val 1070 1075 1080 Asp Thr Val Lys Tyr Asn Val His Gln Pro Ser Glu Glu Arg Leu 1085 1090 1095 Glu Arg Met Gly Asp Thr Gly Ile His Ala Asp Leu Gln Lys Gly 1100 1105 1110 Thr Val Glu Lys Trp Pro Ala Leu Asn Leu Phe Ser Val Asp His 1115 1120 1125 Val Lys Asn Ile Glu Asn Leu His Gly Ser Ser Leu Asn Asp Ser 1130 1135 1140 Ile Ala Gly Asp Asp Arg Asp Asn Glu Leu Trp Gly Asp Asp Gly 1145 1150 1155 Asn Asp Thr Ile His Gly Arg Gly Gly Asp Asp Ile Leu Arg Gly 1160 1165 1170 Gly Leu Gly Leu Asp Thr Leu Tyr Gly Glu Asp Gly Asn Asp Ile 1175 1180 1185 Phe Leu Gln Asp Asp Glu Thr Val Ser Asp Asp Ile Asp Gly Gly 1190 1195 1200 Ala Gly Leu Asp Thr Val Asp Tyr Ser Ala Met Ile His Ala Gly 1205 1210 1215 Lys Ile Val Ala Pro His Glu Tyr Gly Phe Gly Ile Glu Ala Asp 1220 1225 1230 Leu Ser Glu Gly Trp Val Arg Lys Ala Ala Arg Arg Gly Met Asp 1235 1240 1245 Tyr Tyr Asp Ser Val Arg Ser Val Glu Asn Val Ile Gly Thr Ser 1250 1255 1260 Met Lys Asp Val Leu Ile Gly Asp Ala Gln Ala Asn Thr Leu Met 1265 1270 1275 Gly Gln Gly Gly Asp Asp Thr Val Arg Gly Gly Asp Gly Asp Asp 1280 1285 1290 Leu Leu Phe Gly Gly Asp Gly Asn Asp Met Leu Tyr Gly Asp Ala 1295 1300 1305 Gly Asn Asp Thr Leu Tyr Gly Gly Leu Gly Asp Asp Thr Leu Glu 1310 1315 1320 Gly Gly Ala Gly Asn Asp Trp Phe Gly Gln Thr Pro Ala Arg Glu 1325 1330 1335 His Asp Val Leu Arg Gly Gly Ala Gly Val Asp Thr Val Asp Tyr 1340 1345 1350 Ser Gln Ala Gly Ala His Ala Gly Val Ala Thr Gly Arg Ile Gly 1355 1360 1365 Leu Gly Ile Leu Ala Asp Leu Gly Ala Gly Arg Val Asp Lys Leu 1370 1375 1380 Gly Glu Ala Gly Ser Ser Ala Tyr Asp Thr Val Ser Gly Ile Glu 1385 1390 1395 Asn Val Val Gly Thr Glu Leu Ala Asp Arg Ile Thr Gly Asp Ala 1400 1405 1410 Gln Ala Asn Val Leu Arg Gly Ala Gly Gly Ala Asp Val Leu Ala 1415 1420 1425 Gly Gly Glu Gly Asp Asp Val Leu Leu Gly Gly Asp Gly Asp Asp 1430 1435 1440 Gln Leu Ser Gly Asp Ala Gly Arg Asp Arg Leu Tyr Gly Glu Ala 1445 1450 1455 Gly Asp Asp Trp Phe Phe Gln Asp Ala Ala Asn Ala Gly Asn Leu 1460 1465 1470 Leu Asp Gly Gly Asp Gly Asn Asp Thr Val Asp Phe Ser Gly Pro 1475 1480 1485 Gly Arg Gly Leu Asp Ala Gly Ala Lys Gly Val Phe Leu Ser Leu 1490 1495 1500 Gly Lys Gly Phe Ala Ser Leu Met Asp Glu Pro Glu Thr Ser Asn 1505 1510 1515 Val Leu Arg His Ile Glu Asn Ala Val Gly Ser Val Arg Asp Asp 1520 1525 1530 Val Leu Ile Gly Asp Ala Gly Ala Asn Val Leu Asn Gly Leu Ala 1535 1540 1545 Gly Asn Asp Val Leu Ser Gly Gly Ala Gly Asp Asp Val Leu Leu 1550 1555 1560 Gly Asp Glu Gly Ser Asp Leu Leu Ser Gly Asp Ala Gly Asn Asp 1565 1570 1575 Asp Leu Phe Gly Gly Gln Gly Asp Asp Thr Tyr Leu Phe Gly Ala 1580 1585 1590 Gly Tyr Gly His Asp Thr Ile Tyr Glu Ser Gly Gly Gly His Asp 1595 1600 1605 Thr Ile Arg Ile Asn Ala Gly Ala Asp Gln Leu Trp Phe Ala Arg 1610 1615 1620 Gln Gly Asn Asp Leu Glu Ile Arg Ile Leu Gly Thr Asp Asp Ala 1625 1630 1635 Leu Thr Val His Asp Trp Tyr Arg Asp Ala Asp His Arg Val Glu 1640 1645 1650 Ala Ile His Ala Ala Asn Gln Ala Ile Asp Pro Ala Gly Ile Glu 1655 1660 1665 Lys Leu Val Glu Ala Met Ala Gln Tyr Pro Asp Pro Gly Ala Ala 1670 1675 1680 Ala Ala Ala Pro Pro Ala Ala Arg Val Pro Asp Thr Leu Met Gln 1685 1690 1695 Ser Leu Ala Val Asn Trp Arg 1700 1705 <210> 9 <211> 4842 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleotide sequence encoding polypeptide 1-227 + 321-1706 of SEQ ID NO:2 <220> <221> CDS <222> (1)..(4842) <400> 9 atg cag cag tcc cat cag gcc ggt tac gca aac gca gcc gat cgt gaa 48 Met Gln Gln Ser His Gln Ala Gly Tyr Ala Asn Ala Ala Asp Arg Glu 1 5 10 15 tct ggt atc ccg gca gcg gtt ctg gat ggt att aag gca gtt gcc aaa 96 Ser Gly Ile Pro Ala Ala Val Leu Asp Gly Ile Lys Ala Val Ala Lys 20 25 30 gag aag aac gct acc ctg atg ttc cgt ctg gtc aac cca cac tct act 144 Glu Lys Asn Ala Thr Leu Met Phe Arg Leu Val Asn Pro His Ser Thr 35 40 45 tcc ctg atc gcg gaa ggt gtg gcg acc aaa ggc ctg ggt gtg cac gcc 192 Ser Leu Ile Ala Glu Gly Val Ala Thr Lys Gly Leu Gly Val His Ala 50 55 60 aaa agc agc gac tgg ggt ctg cag gca ggt tat att ccg gtg aac ccg 240 Lys Ser Ser Asp Trp Gly Leu Gln Ala Gly Tyr Ile Pro Val Asn Pro 65 70 75 80 aat ctg tct aaa ctg ttc ggt cgt gcc ccg gag gtg atc gca cgt gca 288 Asn Leu Ser Lys Leu Phe Gly Arg Ala Pro Glu Val Ile Ala Arg Ala 85 90 95 gac aac gat gtc aac tct tct ctg gcg cat ggt cac acc gcg gtt gat 336 Asp Asn Asp Val Asn Ser Ser Leu Ala His Gly His Thr Ala Val Asp 100 105 110 ctg acc ctg tcc aaa gaa cgc ctg gat tac ctg cgt cag gcg ggc ctg 384 Leu Thr Leu Ser Lys Glu Arg Leu Asp Tyr Leu Arg Gln Ala Gly Leu 115 120 125 gtg acg ggc atg gcc gac ggt gtt gta gcg agc aac cac gcg ggt tat 432 Val Thr Gly Met Ala Asp Gly Val Val Ala Ser Asn His Ala Gly Tyr 130 135 140 gaa caa ttt gag ttt cgc gtt aaa gag acc tct gac ggt cgt tac gcg 480 Glu Gln Phe Glu Phe Arg Val Lys Glu Thr Ser Asp Gly Arg Tyr Ala 145 150 155 160 gtg cag tac cgc cgc aaa ggt ggc gat gac ttt gaa gct gtc aaa gtg 528 Val Gln Tyr Arg Arg Lys Gly Gly Asp Asp Phe Glu Ala Val Lys Val 165 170 175 atc ggt aac gct gct gga att ccg ctg acc gcg gat atc gac atg ttt 576 Ile Gly Asn Ala Ala Gly Ile Pro Leu Thr Ala Asp Ile Asp Met Phe 180 185 190 gcc atc atg cct cac ctg tcc aac ttt cgc gat tcc gca cgc agc tct 624 Ala Ile Met Pro His Leu Ser Asn Phe Arg Asp Ser Ala Arg Ser Ser 195 200 205 gtg acg tct ggt gat tcc gtc act gac tac ctg gct cgt acc cgt cgt 672 Val Thr Ser Gly Asp Ser Val Thr Asp Tyr Leu Ala Arg Thr Arg Arg 210 215 220 gcg gcc tct gaa tcc cag atg ctg act cgt ggc cag ctg aaa gaa tac 720 Ala Ala Ser Glu Ser Gln Met Leu Thr Arg Gly Gln Leu Lys Glu Tyr 225 230 235 240 atc ggc caa cag cgt ggc gaa ggc tac gtt ttc tac gag aat cgt gct 768 Ile Gly Gln Gln Arg Gly Glu Gly Tyr Val Phe Tyr Glu Asn Arg Ala 245 250 255 tac ggc gtt gcg ggc aaa tcc ctg ttc gac gat ggt ctg ggc gct gca 816 Tyr Gly Val Ala Gly Lys Ser Leu Phe Asp Asp Gly Leu Gly Ala Ala 260 265 270 ccg ggc gtt ccg agc ggc cgt tct aaa ttc agc ccg gac gta ctg gaa 864 Pro Gly Val Pro Ser Gly Arg Ser Lys Phe Ser Pro Asp Val Leu Glu 275 280 285 act gtg ccg gct tcc ccg ggc ctg cgc cgt ccg tcc ctg ggc gca gtc 912 Thr Val Pro Ala Ser Pro Gly Leu Arg Arg Pro Ser Leu Gly Ala Val 290 295 300 gaa cgt cag gac tcc ggc tac gat tcc ctg gat ggc gtt ggc tcc cgc 960 Glu Arg Gln Asp Ser Gly Tyr Asp Ser Leu Asp Gly Val Gly Ser Arg 305 310 315 320 tcc ttc tcc ctg ggc gag gtt tct gac atg gct gcg gtg gaa gcg gca 1008 Ser Phe Ser Leu Gly Glu Val Ser Asp Met Ala Ala Val Glu Ala Ala 325 330 335 gag ctg gaa atg acc cgt caa gtg ctg cac gcg ggc gca cgt cag gac 1056 Glu Leu Glu Met Thr Arg Gln Val Leu His Ala Gly Ala Arg Gln Asp 340 345 350 gat gct gag ccg ggc gtg tcc ggt gcg tct gca cac tgg ggt caa cgt 1104 Asp Ala Glu Pro Gly Val Ser Gly Ala Ser Ala His Trp Gly Gln Arg 355 360 365 gcc ctg cag ggt gct caa gct gtc gcg gca gcg cag cgt ctg gta cat 1152 Ala Leu Gln Gly Ala Gln Ala Val Ala Ala Ala Gln Arg Leu Val His 370 375 380 gcg atc gca ctg atg acc cag ttc ggt cgc gca ggt tct acc aac act 1200 Ala Ile Ala Leu Met Thr Gln Phe Gly Arg Ala Gly Ser Thr Asn Thr 385 390 395 400 cct cag gaa gca gct agc ctg tct gct gct gtt ttc ggt ctg ggc gaa 1248 Pro Gln Glu Ala Ala Ser Leu Ser Ala Ala Val Phe Gly Leu Gly Glu 405 410 415 gcg tct tct gcg gtt gca gaa acc gtg agc ggt ttc ttc cgt ggt tct 1296 Ala Ser Ser Ala Val Ala Glu Thr Val Ser Gly Phe Phe Arg Gly Ser 420 425 430 agc cgc tgg gcg ggt ggt ttt ggt gta gca ggt ggc gct atg gcc ctg 1344 Ser Arg Trp Ala Gly Gly Phe Gly Val Ala Gly Gly Ala Met Ala Leu 435 440 445 ggt ggc ggt atc gcg gct gct gtc ggc gca ggt atg agc ctg acc gac 1392 Gly Gly Gly Ile Ala Ala Ala Val Gly Ala Gly Met Ser Leu Thr Asp 450 455 460 gat gct cct gcg ggc cag aaa gcc gca gct ggc gct gaa atc gcg ctg 1440 Asp Ala Pro Ala Gly Gln Lys Ala Ala Ala Gly Ala Glu Ile Ala Leu 465 470 475 480 cag ctg act ggt ggt acc gtt gaa ctg gct agc tct atc gcg ctg gct 1488 Gln Leu Thr Gly Gly Thr Val Glu Leu Ala Ser Ser Ile Ala Leu Ala 485 490 495 ctg gca gcg gca cgt ggc gtg act tct ggc ctg caa gtc gcc ggt gcc 1536 Leu Ala Ala Ala Arg Gly Val Thr Ser Gly Leu Gln Val Ala Gly Ala 500 505 510 tct gcg ggc gct gct gcg ggc gct ctg gca gct gca ctg tcc ccc atg 1584 Ser Ala Gly Ala Ala Ala Gly Ala Leu Ala Ala Ala Leu Ser Pro Met 515 520 525 gaa atc tac ggt ctg gta cag cag tct cac tac gca gac cag ctg gat 1632 Glu Ile Tyr Gly Leu Val Gln Gln Ser His Tyr Ala Asp Gln Leu Asp 530 535 540 aaa ctg gcg cag gag tct tct gca tac ggt tac gaa ggc gac gca ctg 1680 Lys Leu Ala Gln Glu Ser Ser Ala Tyr Gly Tyr Glu Gly Asp Ala Leu 545 550 555 560 ctg gcg cag ctg tat cgt gac aaa act gct gct gaa ggt gct gtg gca 1728 Leu Ala Gln Leu Tyr Arg Asp Lys Thr Ala Ala Glu Gly Ala Val Ala 565 570 575 ggc gtt tct gcg gta ctg tct acc gtt ggc gct gcg gtt tct att gcg 1776 Gly Val Ser Ala Val Leu Ser Thr Val Gly Ala Ala Val Ser Ile Ala 580 585 590 gct gcc gca tcc gtt gta ggt gcg ccg gtt gct gta gtt acc tct ctg 1824 Ala Ala Ala Ser Val Val Gly Ala Pro Val Ala Val Val Thr Ser Leu 595 600 605 ctg act ggt gca ctg aac ggt atc ctg cgt ggt gtt cag cag cct att 1872 Leu Thr Gly Ala Leu Asn Gly Ile Leu Arg Gly Val Gln Gln Pro Ile 610 615 620 atc gaa aaa ctg gcg aat gat tat gcc cgt aaa atc gac gaa ctg ggc 1920 Ile Glu Lys Leu Ala Asn Asp Tyr Ala Arg Lys Ile Asp Glu Leu Gly 625 630 635 640 ggt ccg cag gct tat ttt gaa aaa aac ctg cag gcg cgc cac gaa cag 1968 Gly Pro Gln Ala Tyr Phe Glu Lys Asn Leu Gln Ala Arg His Glu Gln 645 650 655 ctg gca aac agc gac ggc ctg cgc aaa atg ctg gca gac ctg caa gct 2016 Leu Ala Asn Ser Asp Gly Leu Arg Lys Met Leu Ala Asp Leu Gln Ala 660 665 670 ggt tgg aac gcg tct tct gtg atc ggc gtg cag acc acc gaa att agc 2064 Gly Trp Asn Ala Ser Ser Val Ile Gly Val Gln Thr Thr Glu Ile Ser 675 680 685 aaa tct gcg ctg gaa ctg gct gca att act ggc aac gcg gat aac ctg 2112 Lys Ser Ala Leu Glu Leu Ala Ala Ile Thr Gly Asn Ala Asp Asn Leu 690 695 700 aaa agc gtt gat gtt ttt gtc gat cgc ttc gtt cag ggc gag cgc gtt 2160 Lys Ser Val Asp Val Phe Val Asp Arg Phe Val Gln Gly Glu Arg Val 705 710 715 720 gct ggt cag ccg gtt gtt ctg gac gtt gcg gca ggc ggc atc gac atc 2208 Ala Gly Gln Pro Val Val Leu Asp Val Ala Ala Gly Gly Ile Asp Ile 725 730 735 gct agc cgc aag ggc gag cgt ccg gct ctg act ttc att acc ccg ctg 2256 Ala Ser Arg Lys Gly Glu Arg Pro Ala Leu Thr Phe Ile Thr Pro Leu 740 745 750 gca gct ccg ggt gaa gaa cag cgt cgc cgt acc aag act ggt aaa agc 2304 Ala Ala Pro Gly Glu Glu Gln Arg Arg Arg Thr Lys Thr Gly Lys Ser 755 760 765 gag ttc acc acc ttc gtg gaa atc gta ggt aaa cag gac cgc tgg cgt 2352 Glu Phe Thr Thr Phe Val Glu Ile Val Gly Lys Gln Asp Arg Trp Arg 770 775 780 att cgc gac ggt gcg gcg gac acc acc atc gac ctg gca aaa gtt gtt 2400 Ile Arg Asp Gly Ala Ala Asp Thr Thr Ile Asp Leu Ala Lys Val Val 785 790 795 800 tcc caa ctg gta gat gct aac ggc gtg ctg aaa cat tct att aaa ctg 2448 Ser Gln Leu Val Asp Ala Asn Gly Val Leu Lys His Ser Ile Lys Leu 805 810 815 gat gta atc ggc ggt gac ggc gat gac gtt gta ctg gcg aac gcg tct 2496 Asp Val Ile Gly Gly Asp Gly Asp Asp Val Val Leu Ala Asn Ala Ser 820 825 830 cgt atc cac tat gac ggc ggc gca ggt acc aac acg gtt tcc tac gca 2544 Arg Ile His Tyr Asp Gly Gly Ala Gly Thr Asn Thr Val Ser Tyr Ala 835 840 845 gcg ctg ggc cgc cag gat tcc atc act gtt agc gcc gat ggc gaa cgt 2592 Ala Leu Gly Arg Gln Asp Ser Ile Thr Val Ser Ala Asp Gly Glu Arg 850 855 860 ttc aac gtg cgt aaa cag ctg aat aac gca aac gtc tat cgt gag ggt 2640 Phe Asn Val Arg Lys Gln Leu Asn Asn Ala Asn Val Tyr Arg Glu Gly 865 870 875 880 gta gct acc cag acc acc gcg tac ggt aag cgt acc gaa aac gtt cag 2688 Val Ala Thr Gln Thr Thr Ala Tyr Gly Lys Arg Thr Glu Asn Val Gln 885 890 895 tat cgt cac gtg gaa ctg gca cgt gtg ggt cag ctg gta gag gtg gat 2736 Tyr Arg His Val Glu Leu Ala Arg Val Gly Gln Leu Val Glu Val Asp 900 905 910 acg ctg gaa cac gtg cag cac atc atc ggt ggc gcc ggt aac gat tcc 2784 Thr Leu Glu His Val Gln His Ile Ile Gly Gly Ala Gly Asn Asp Ser 915 920 925 att act ggt aac gct cac gac aac ttc ctg gca ggt ggt tct ggt gat 2832 Ile Thr Gly Asn Ala His Asp Asn Phe Leu Ala Gly Gly Ser Gly Asp 930 935 940 gat cgt ctg gac ggt ggt gcg ggt aac gat acg ctg gta ggc ggc gaa 2880 Asp Arg Leu Asp Gly Gly Ala Gly Asn Asp Thr Leu Val Gly Gly Glu 945 950 955 960 ggt cag aac acc gta att ggt ggt gcc ggt gac gac gtt ttc ctg cag 2928 Gly Gln Asn Thr Val Ile Gly Gly Ala Gly Asp Asp Val Phe Leu Gln 965 970 975 gat ctg ggc gtt tgg agc aac cag ctg gat ggc ggt gcc ggt gtt gac 2976 Asp Leu Gly Val Trp Ser Asn Gln Leu Asp Gly Gly Ala Gly Val Asp 980 985 990 acg gtt aag tat aac gtt cac cag ccg tct gaa gag cgc ctg gaa cgt 3024 Thr Val Lys Tyr Asn Val His Gln Pro Ser Glu Glu Arg Leu Glu Arg 995 1000 1005 atg ggt gac act ggt att cat gcc gat ctg cag aaa ggc act gtt 3069 Met Gly Asp Thr Gly Ile His Ala Asp Leu Gln Lys Gly Thr Val 1010 1015 1020 gaa aaa tgg cct gcg ctg aac ctg ttc tct gtg gac cat gtt aag 3114 Glu Lys Trp Pro Ala Leu Asn Leu Phe Ser Val Asp His Val Lys 1025 1030 1035 aac att gaa aac ctg cat ggc tct cgc ctg aac gac cgt atc gct 3159 Asn Ile Glu Asn Leu His Gly Ser Arg Leu Asn Asp Arg Ile Ala 1040 1045 1050 ggt gac gac cag gat aac gaa ctg tgg ggt cat gac ggc aat gat 3204 Gly Asp Asp Gln Asp Asn Glu Leu Trp Gly His Asp Gly Asn Asp 1055 1060 1065 acc att cgc ggt cgt ggc ggc gac gat att ctg cgt ggc ggt ctg 3249 Thr Ile Arg Gly Arg Gly Gly Asp Asp Ile Leu Arg Gly Gly Leu 1070 1075 1080 ggc ctg gat acc ctg tat ggt gaa gat ggt aac gat att ttc ctg 3294 Gly Leu Asp Thr Leu Tyr Gly Glu Asp Gly Asn Asp Ile Phe Leu 1085 1090 1095 caa gac gat gaa acg gta tct gat gac atc gac ggt ggt gca ggc 3339 Gln Asp Asp Glu Thr Val Ser Asp Asp Ile Asp Gly Gly Ala Gly 1100 1105 1110 ctg gac acc gta gat tac agc gct atg atc cat ccg ggt cgt atc 3384 Leu Asp Thr Val Asp Tyr Ser Ala Met Ile His Pro Gly Arg Ile 1115 1120 1125 gta gct ccg cac gag tac ggc ttc ggt atc gag gcg gac ctg tct 3429 Val Ala Pro His Glu Tyr Gly Phe Gly Ile Glu Ala Asp Leu Ser 1130 1135 1140 cgt gaa tgg gtt cgt aaa gcg tcc gcg ctg ggt gtg gac tac tac 3474 Arg Glu Trp Val Arg Lys Ala Ser Ala Leu Gly Val Asp Tyr Tyr 1145 1150 1155 gat aac gtt cgt aac gtg gaa aac gtg atc ggt acc tcc atg aaa 3519 Asp Asn Val Arg Asn Val Glu Asn Val Ile Gly Thr Ser Met Lys 1160 1165 1170 gac gtg ctg att ggc gac gca cag gcc aac act ctg atg ggc cag 3564 Asp Val Leu Ile Gly Asp Ala Gln Ala Asn Thr Leu Met Gly Gln 1175 1180 1185 ggc ggt gat gac acg gtt cgc ggc ggc gac ggt gat gac ctg ctg 3609 Gly Gly Asp Asp Thr Val Arg Gly Gly Asp Gly Asp Asp Leu Leu 1190 1195 1200 ttc ggt ggt gac ggc aac gac atg ctg tac ggc gac gcg ggc aac 3654 Phe Gly Gly Asp Gly Asn Asp Met Leu Tyr Gly Asp Ala Gly Asn 1205 1210 1215 gac acc ctg tac ggc ggt ctg ggt gac gac act ctg gaa ggt ggt 3699 Asp Thr Leu Tyr Gly Gly Leu Gly Asp Asp Thr Leu Glu Gly Gly 1220 1225 1230 gca ggt aac gac tgg ttc ggc caa acc cag gca cgc gaa cac gac 3744 Ala Gly Asn Asp Trp Phe Gly Gln Thr Gln Ala Arg Glu His Asp 1235 1240 1245 gtg ctg cgt ggt ggc gac ggc gta gac acc gtg gat tac tcc caa 3789 Val Leu Arg Gly Gly Asp Gly Val Asp Thr Val Asp Tyr Ser Gln 1250 1255 1260 act ggc gct cac gcg ggt atc gcg gcc ggt cgt atc ggt ctg ggc 3834 Thr Gly Ala His Ala Gly Ile Ala Ala Gly Arg Ile Gly Leu Gly 1265 1270 1275 att ctg gcc gat ctg ggt gcc ggc cgt gtc gac aaa ctg ggt gag 3879 Ile Leu Ala Asp Leu Gly Ala Gly Arg Val Asp Lys Leu Gly Glu 1280 1285 1290 gct ggc tct agc gcc tat gat act gtt tcc ggc atc gaa aac gtg 3924 Ala Gly Ser Ser Ala Tyr Asp Thr Val Ser Gly Ile Glu Asn Val 1295 1300 1305 gta ggc act gaa ctg gca gat cgt atc acg ggt gac gcg caa gcg 3969 Val Gly Thr Glu Leu Ala Asp Arg Ile Thr Gly Asp Ala Gln Ala 1310 1315 1320 aac gtt ctg cgt ggt gct ggc ggt gca gac gtg ctg gcg ggt ggt 4014 Asn Val Leu Arg Gly Ala Gly Gly Ala Asp Val Leu Ala Gly Gly 1325 1330 1335 gaa ggc gac gac gta ctg ctg ggc ggt gac ggt gac gat cag ctg 4059 Glu Gly Asp Asp Val Leu Leu Gly Gly Asp Gly Asp Asp Gln Leu 1340 1345 1350 agc ggt gat gcg ggt cgt gac cgt ctg tac ggt gaa gca ggt gac 4104 Ser Gly Asp Ala Gly Arg Asp Arg Leu Tyr Gly Glu Ala Gly Asp 1355 1360 1365 gat tgg ttc ttc cag gac gct gct aac gct ggc aac ctg ctg gac 4149 Asp Trp Phe Phe Gln Asp Ala Ala Asn Ala Gly Asn Leu Leu Asp 1370 1375 1380 ggc ggc gat ggc cgt gac act gtt gac ttc agc ggt ccg ggt cgc 4194 Gly Gly Asp Gly Arg Asp Thr Val Asp Phe Ser Gly Pro Gly Arg 1385 1390 1395 ggt ctg gac gca ggc gcg aaa ggc gtt ttc ctg agc ctg ggt aag 4239 Gly Leu Asp Ala Gly Ala Lys Gly Val Phe Leu Ser Leu Gly Lys 1400 1405 1410 ggt ttc gca tct ctg atg gac gaa cca gaa acc agc aat gtc ctg 4284 Gly Phe Ala Ser Leu Met Asp Glu Pro Glu Thr Ser Asn Val Leu 1415 1420 1425 cgt aac atc gaa aac gct gtc ggt tcc gca cgc gat gat gtt ctg 4329 Arg Asn Ile Glu Asn Ala Val Gly Ser Ala Arg Asp Asp Val Leu 1430 1435 1440 att ggc gat gct ggt gcc aat gtt ctg aac ggt ctg gcg ggt aat 4374 Ile Gly Asp Ala Gly Ala Asn Val Leu Asn Gly Leu Ala Gly Asn 1445 1450 1455 gat gta ctg tct ggt ggc gct ggt gat gat gtc ctg ctg ggt gat 4419 Asp Val Leu Ser Gly Gly Ala Gly Asp Asp Val Leu Leu Gly Asp 1460 1465 1470 gag ggc agc gat ctg ctg tcc ggc gat gcc ggc aac gac gat ctg 4464 Glu Gly Ser Asp Leu Leu Ser Gly Asp Ala Gly Asn Asp Asp Leu 1475 1480 1485 ttc ggt ggc caa ggt gat gat act tac ctg ttc ggc gtt ggc tat 4509 Phe Gly Gly Gln Gly Asp Asp Thr Tyr Leu Phe Gly Val Gly Tyr 1490 1495 1500 ggt cat gac acc atc tat gag tct ggt ggc ggc cac gat acg att 4554 Gly His Asp Thr Ile Tyr Glu Ser Gly Gly Gly His Asp Thr Ile 1505 1510 1515 cgt att aat gca ggt gct gac caa ctg tgg ttt gca cgt cag ggt 4599 Arg Ile Asn Ala Gly Ala Asp Gln Leu Trp Phe Ala Arg Gln Gly 1520 1525 1530 aac gat ctg gaa att cgc atc ctg ggt act gat gac gct ctg acc 4644 Asn Asp Leu Glu Ile Arg Ile Leu Gly Thr Asp Asp Ala Leu Thr 1535 1540 1545 gta cac gac tgg tac cgc gat gcg gat cac cgc gta gaa atc atc 4689 Val His Asp Trp Tyr Arg Asp Ala Asp His Arg Val Glu Ile Ile 1550 1555 1560 cat gcg gct aac caa gct gta gac cag gct ggt att gaa aaa ctg 4734 His Ala Ala Asn Gln Ala Val Asp Gln Ala Gly Ile Glu Lys Leu 1565 1570 1575 gta gaa gcg atg gca cag tat ccg gac cca ggt gcg gct gct gca 4779 Val Glu Ala Met Ala Gln Tyr Pro Asp Pro Gly Ala Ala Ala Ala 1580 1585 1590 gca cct cca gcg gct cgt gtg ccg gat acc ctg atg cag agc ctg 4824 Ala Pro Pro Ala Ala Arg Val Pro Asp Thr Leu Met Gln Ser Leu 1595 1600 1605 gcc gtc aat tgg cgt taa 4842 Ala Val Asn Trp Arg 1610 <210> 10 <211> 1613 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 10 Met Gln Gln Ser His Gln Ala Gly Tyr Ala Asn Ala Ala Asp Arg Glu 1 5 10 15 Ser Gly Ile Pro Ala Ala Val Leu Asp Gly Ile Lys Ala Val Ala Lys 20 25 30 Glu Lys Asn Ala Thr Leu Met Phe Arg Leu Val Asn Pro His Ser Thr 35 40 45 Ser Leu Ile Ala Glu Gly Val Ala Thr Lys Gly Leu Gly Val His Ala 50 55 60 Lys Ser Ser Asp Trp Gly Leu Gln Ala Gly Tyr Ile Pro Val Asn Pro 65 70 75 80 Asn Leu Ser Lys Leu Phe Gly Arg Ala Pro Glu Val Ile Ala Arg Ala 85 90 95 Asp Asn Asp Val Asn Ser Ser Leu Ala His Gly His Thr Ala Val Asp 100 105 110 Leu Thr Leu Ser Lys Glu Arg Leu Asp Tyr Leu Arg Gln Ala Gly Leu 115 120 125 Val Thr Gly Met Ala Asp Gly Val Val Ala Ser Asn His Ala Gly Tyr 130 135 140 Glu Gln Phe Glu Phe Arg Val Lys Glu Thr Ser Asp Gly Arg Tyr Ala 145 150 155 160 Val Gln Tyr Arg Arg Lys Gly Gly Asp Asp Phe Glu Ala Val Lys Val 165 170 175 Ile Gly Asn Ala Ala Gly Ile Pro Leu Thr Ala Asp Ile Asp Met Phe 180 185 190 Ala Ile Met Pro His Leu Ser Asn Phe Arg Asp Ser Ala Arg Ser Ser 195 200 205 Val Thr Ser Gly Asp Ser Val Thr Asp Tyr Leu Ala Arg Thr Arg Arg 210 215 220 Ala Ala Ser Glu Ser Gln Met Leu Thr Arg Gly Gln Leu Lys Glu Tyr 225 230 235 240 Ile Gly Gln Gln Arg Gly Glu Gly Tyr Val Phe Tyr Glu Asn Arg Ala 245 250 255 Tyr Gly Val Ala Gly Lys Ser Leu Phe Asp Asp Gly Leu Gly Ala Ala 260 265 270 Pro Gly Val Pro Ser Gly Arg Ser Lys Phe Ser Pro Asp Val Leu Glu 275 280 285 Thr Val Pro Ala Ser Pro Gly Leu Arg Arg Pro Ser Leu Gly Ala Val 290 295 300 Glu Arg Gln Asp Ser Gly Tyr Asp Ser Leu Asp Gly Val Gly Ser Arg 305 310 315 320 Ser Phe Ser Leu Gly Glu Val Ser Asp Met Ala Ala Val Glu Ala Ala 325 330 335 Glu Leu Glu Met Thr Arg Gln Val Leu His Ala Gly Ala Arg Gln Asp 340 345 350 Asp Ala Glu Pro Gly Val Ser Gly Ala Ser Ala His Trp Gly Gln Arg 355 360 365 Ala Leu Gln Gly Ala Gln Ala Val Ala Ala Ala Gln Arg Leu Val His 370 375 380 Ala Ile Ala Leu Met Thr Gln Phe Gly Arg Ala Gly Ser Thr Asn Thr 385 390 395 400 Pro Gln Glu Ala Ala Ser Leu Ser Ala Ala Val Phe Gly Leu Gly Glu 405 410 415 Ala Ser Ser Ala Val Ala Glu Thr Val Ser Gly Phe Phe Arg Gly Ser 420 425 430 Ser Arg Trp Ala Gly Gly Phe Gly Val Ala Gly Gly Ala Met Ala Leu 435 440 445 Gly Gly Gly Ile Ala Ala Ala Val Gly Ala Gly Met Ser Leu Thr Asp 450 455 460 Asp Ala Pro Ala Gly Gln Lys Ala Ala Ala Gly Ala Glu Ile Ala Leu 465 470 475 480 Gln Leu Thr Gly Gly Thr Val Glu Leu Ala Ser Ser Ile Ala Leu Ala 485 490 495 Leu Ala Ala Ala Arg Gly Val Thr Ser Gly Leu Gln Val Ala Gly Ala 500 505 510 Ser Ala Gly Ala Ala Ala Gly Ala Leu Ala Ala Ala Leu Ser Pro Met 515 520 525 Glu Ile Tyr Gly Leu Val Gln Gln Ser His Tyr Ala Asp Gln Leu Asp 530 535 540 Lys Leu Ala Gln Glu Ser Ser Ala Tyr Gly Tyr Glu Gly Asp Ala Leu 545 550 555 560 Leu Ala Gln Leu Tyr Arg Asp Lys Thr Ala Ala Glu Gly Ala Val Ala 565 570 575 Gly Val Ser Ala Val Leu Ser Thr Val Gly Ala Ala Val Ser Ile Ala 580 585 590 Ala Ala Ala Ser Val Val Gly Ala Pro Val Ala Val Val Thr Ser Leu 595 600 605 Leu Thr Gly Ala Leu Asn Gly Ile Leu Arg Gly Val Gln Gln Pro Ile 610 615 620 Ile Glu Lys Leu Ala Asn Asp Tyr Ala Arg Lys Ile Asp Glu Leu Gly 625 630 635 640 Gly Pro Gln Ala Tyr Phe Glu Lys Asn Leu Gln Ala Arg His Glu Gln 645 650 655 Leu Ala Asn Ser Asp Gly Leu Arg Lys Met Leu Ala Asp Leu Gln Ala 660 665 670 Gly Trp Asn Ala Ser Ser Val Ile Gly Val Gln Thr Thr Glu Ile Ser 675 680 685 Lys Ser Ala Leu Glu Leu Ala Ala Ile Thr Gly Asn Ala Asp Asn Leu 690 695 700 Lys Ser Val Asp Val Phe Val Asp Arg Phe Val Gln Gly Glu Arg Val 705 710 715 720 Ala Gly Gln Pro Val Val Leu Asp Val Ala Ala Gly Gly Ile Asp Ile 725 730 735 Ala Ser Arg Lys Gly Glu Arg Pro Ala Leu Thr Phe Ile Thr Pro Leu 740 745 750 Ala Ala Pro Gly Glu Glu Gln Arg Arg Arg Thr Lys Thr Gly Lys Ser 755 760 765 Glu Phe Thr Thr Phe Val Glu Ile Val Gly Lys Gln Asp Arg Trp Arg 770 775 780 Ile Arg Asp Gly Ala Ala Asp Thr Thr Ile Asp Leu Ala Lys Val Val 785 790 795 800 Ser Gln Leu Val Asp Ala Asn Gly Val Leu Lys His Ser Ile Lys Leu 805 810 815 Asp Val Ile Gly Gly Asp Gly Asp Asp Val Val Leu Ala Asn Ala Ser 820 825 830 Arg Ile His Tyr Asp Gly Gly Ala Gly Thr Asn Thr Val Ser Tyr Ala 835 840 845 Ala Leu Gly Arg Gln Asp Ser Ile Thr Val Ser Ala Asp Gly Glu Arg 850 855 860 Phe Asn Val Arg Lys Gln Leu Asn Asn Ala Asn Val Tyr Arg Glu Gly 865 870 875 880 Val Ala Thr Gln Thr Thr Ala Tyr Gly Lys Arg Thr Glu Asn Val Gln 885 890 895 Tyr Arg His Val Glu Leu Ala Arg Val Gly Gln Leu Val Glu Val Asp 900 905 910 Thr Leu Glu His Val Gln His Ile Ile Gly Gly Ala Gly Asn Asp Ser 915 920 925 Ile Thr Gly Asn Ala His Asp Asn Phe Leu Ala Gly Gly Ser Gly Asp 930 935 940 Asp Arg Leu Asp Gly Gly Ala Gly Asn Asp Thr Leu Val Gly Gly Glu 945 950 955 960 Gly Gln Asn Thr Val Ile Gly Gly Ala Gly Asp Asp Val Phe Leu Gln 965 970 975 Asp Leu Gly Val Trp Ser Asn Gln Leu Asp Gly Gly Ala Gly Val Asp 980 985 990 Thr Val Lys Tyr Asn Val His Gln Pro Ser Glu Glu Arg Leu Glu Arg 995 1000 1005 Met Gly Asp Thr Gly Ile His Ala Asp Leu Gln Lys Gly Thr Val 1010 1015 1020 Glu Lys Trp Pro Ala Leu Asn Leu Phe Ser Val Asp His Val Lys 1025 1030 1035 Asn Ile Glu Asn Leu His Gly Ser Arg Leu Asn Asp Arg Ile Ala 1040 1045 1050 Gly Asp Asp Gln Asp Asn Glu Leu Trp Gly His Asp Gly Asn Asp 1055 1060 1065 Thr Ile Arg Gly Arg Gly Gly Asp Asp Ile Leu Arg Gly Gly Leu 1070 1075 1080 Gly Leu Asp Thr Leu Tyr Gly Glu Asp Gly Asn Asp Ile Phe Leu 1085 1090 1095 Gln Asp Asp Glu Thr Val Ser Asp Asp Ile Asp Gly Gly Ala Gly 1100 1105 1110 Leu Asp Thr Val Asp Tyr Ser Ala Met Ile His Pro Gly Arg Ile 1115 1120 1125 Val Ala Pro His Glu Tyr Gly Phe Gly Ile Glu Ala Asp Leu Ser 1130 1135 1140 Arg Glu Trp Val Arg Lys Ala Ser Ala Leu Gly Val Asp Tyr Tyr 1145 1150 1155 Asp Asn Val Arg Asn Val Glu Asn Val Ile Gly Thr Ser Met Lys 1160 1165 1170 Asp Val Leu Ile Gly Asp Ala Gln Ala Asn Thr Leu Met Gly Gln 1175 1180 1185 Gly Gly Asp Asp Thr Val Arg Gly Gly Asp Gly Asp Asp Leu Leu 1190 1195 1200 Phe Gly Gly Asp Gly Asn Asp Met Leu Tyr Gly Asp Ala Gly Asn 1205 1210 1215 Asp Thr Leu Tyr Gly Gly Leu Gly Asp Asp Thr Leu Glu Gly Gly 1220 1225 1230 Ala Gly Asn Asp Trp Phe Gly Gln Thr Gln Ala Arg Glu His Asp 1235 1240 1245 Val Leu Arg Gly Gly Asp Gly Val Asp Thr Val Asp Tyr Ser Gln 1250 1255 1260 Thr Gly Ala His Ala Gly Ile Ala Ala Gly Arg Ile Gly Leu Gly 1265 1270 1275 Ile Leu Ala Asp Leu Gly Ala Gly Arg Val Asp Lys Leu Gly Glu 1280 1285 1290 Ala Gly Ser Ser Ala Tyr Asp Thr Val Ser Gly Ile Glu Asn Val 1295 1300 1305 Val Gly Thr Glu Leu Ala Asp Arg Ile Thr Gly Asp Ala Gln Ala 1310 1315 1320 Asn Val Leu Arg Gly Ala Gly Gly Ala Asp Val Leu Ala Gly Gly 1325 1330 1335 Glu Gly Asp Asp Val Leu Leu Gly Gly Asp Gly Asp Asp Gln Leu 1340 1345 1350 Ser Gly Asp Ala Gly Arg Asp Arg Leu Tyr Gly Glu Ala Gly Asp 1355 1360 1365 Asp Trp Phe Phe Gln Asp Ala Ala Asn Ala Gly Asn Leu Leu Asp 1370 1375 1380 Gly Gly Asp Gly Arg Asp Thr Val Asp Phe Ser Gly Pro Gly Arg 1385 1390 1395 Gly Leu Asp Ala Gly Ala Lys Gly Val Phe Leu Ser Leu Gly Lys 1400 1405 1410 Gly Phe Ala Ser Leu Met Asp Glu Pro Glu Thr Ser Asn Val Leu 1415 1420 1425 Arg Asn Ile Glu Asn Ala Val Gly Ser Ala Arg Asp Asp Val Leu 1430 1435 1440 Ile Gly Asp Ala Gly Ala Asn Val Leu Asn Gly Leu Ala Gly Asn 1445 1450 1455 Asp Val Leu Ser Gly Gly Ala Gly Asp Asp Val Leu Leu Gly Asp 1460 1465 1470 Glu Gly Ser Asp Leu Leu Ser Gly Asp Ala Gly Asn Asp Asp Leu 1475 1480 1485 Phe Gly Gly Gln Gly Asp Asp Thr Tyr Leu Phe Gly Val Gly Tyr 1490 1495 1500 Gly His Asp Thr Ile Tyr Glu Ser Gly Gly Gly His Asp Thr Ile 1505 1510 1515 Arg Ile Asn Ala Gly Ala Asp Gln Leu Trp Phe Ala Arg Gln Gly 1520 1525 1530 Asn Asp Leu Glu Ile Arg Ile Leu Gly Thr Asp Asp Ala Leu Thr 1535 1540 1545 Val His Asp Trp Tyr Arg Asp Ala Asp His Arg Val Glu Ile Ile 1550 1555 1560 His Ala Ala Asn Gln Ala Val Asp Gln Ala Gly Ile Glu Lys Leu 1565 1570 1575 Val Glu Ala Met Ala Gln Tyr Pro Asp Pro Gly Ala Ala Ala Ala 1580 1585 1590 Ala Pro Pro Ala Ala Arg Val Pro Asp Thr Leu Met Gln Ser Leu 1595 1600 1605 Ala Val Asn Trp Arg 1610 <210> 11 <211> 4512 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleotide sequence encoding polypeptide 1-183 + 387-1706 of SEQ ID NO:2 <220> <221> CDS <222> (1)..(4512) <400> 11 atg cag cag tcc cat cag gcc ggt tac gca aac gca gcc gat cgt gaa 48 Met Gln Gln Ser His Gln Ala Gly Tyr Ala Asn Ala Ala Asp Arg Glu 1 5 10 15 tct ggt atc ccg gca gcg gtt ctg gat ggt att aag gca gtt gcc aaa 96 Ser Gly Ile Pro Ala Ala Val Leu Asp Gly Ile Lys Ala Val Ala Lys 20 25 30 gag aag aac gct acc ctg atg ttc cgt ctg gtc aac cca cac tct act 144 Glu Lys Asn Ala Thr Leu Met Phe Arg Leu Val Asn Pro His Ser Thr 35 40 45 tcc ctg atc gcg gaa ggt gtg gcg acc aaa ggc ctg ggt gtg cac gcc 192 Ser Leu Ile Ala Glu Gly Val Ala Thr Lys Gly Leu Gly Val His Ala 50 55 60 aaa agc agc gac tgg ggt ctg cag gca ggt tat att ccg gtg aac ccg 240 Lys Ser Ser Asp Trp Gly Leu Gln Ala Gly Tyr Ile Pro Val Asn Pro 65 70 75 80 aat ctg tct aaa ctg ttc ggt cgt gcc ccg gag gtg atc gca cgt gca 288 Asn Leu Ser Lys Leu Phe Gly Arg Ala Pro Glu Val Ile Ala Arg Ala 85 90 95 gac aac gat gtc aac tct tct ctg gcg cat ggt cac acc gcg gtt gat 336 Asp Asn Asp Val Asn Ser Ser Leu Ala His Gly His Thr Ala Val Asp 100 105 110 ctg acc ctg tcc aaa gaa cgc ctg gat tac ctg cgt cag gcg ggc ctg 384 Leu Thr Leu Ser Lys Glu Arg Leu Asp Tyr Leu Arg Gln Ala Gly Leu 115 120 125 gtg acg ggc atg gcc gac ggt gtt gta gcg agc aac cac gcg ggt tat 432 Val Thr Gly Met Ala Asp Gly Val Val Ala Ser Asn His Ala Gly Tyr 130 135 140 gaa caa ttt gag ttt cgc gtt aaa gag acc tct gac ggt cgt tac gcg 480 Glu Gln Phe Glu Phe Arg Val Lys Glu Thr Ser Asp Gly Arg Tyr Ala 145 150 155 160 gtg cag tac cgc cgc aaa ggt ggc gat gac ttt gaa gct gtc aaa gtg 528 Val Gln Tyr Arg Arg Lys Gly Gly Asp Asp Phe Glu Ala Val Lys Val 165 170 175 atc ggt aac gct gct gga att ccg ggc ctg cgc cgt ccg tcc ctg ggc 576 Ile Gly Asn Ala Ala Gly Ile Pro Gly Leu Arg Arg Pro Ser Leu Gly 180 185 190 gca gtc gaa cgt cag gac tcc ggc tac gat tcc ctg gat ggc gtt ggc 624 Ala Val Glu Arg Gln Asp Ser Gly Tyr Asp Ser Leu Asp Gly Val Gly 195 200 205 tcc cgc tcc ttc tcc ctg ggc gag gtt tct gac atg gct gcg gtg gaa 672 Ser Arg Ser Phe Ser Leu Gly Glu Val Ser Asp Met Ala Ala Val Glu 210 215 220 gcg gca gag ctg gaa atg acc cgt caa gtg ctg cac gcg ggc gca cgt 720 Ala Ala Glu Leu Glu Met Thr Arg Gln Val Leu His Ala Gly Ala Arg 225 230 235 240 cag gac gat gct gag ccg ggc gtg tcc ggt gcg tct gca cac tgg ggt 768 Gln Asp Asp Ala Glu Pro Gly Val Ser Gly Ala Ser Ala His Trp Gly 245 250 255 caa cgt gcc ctg cag ggt gct caa gct gtc gcg gca gcg cag cgt ctg 816 Gln Arg Ala Leu Gln Gly Ala Gln Ala Val Ala Ala Ala Gln Arg Leu 260 265 270 gta cat gcg atc gca ctg atg acc cag ttc ggt cgc gca ggt tct acc 864 Val His Ala Ile Ala Leu Met Thr Gln Phe Gly Arg Ala Gly Ser Thr 275 280 285 aac act cct cag gaa gca gct agc ctg tct gct gct gtt ttc ggt ctg 912 Asn Thr Pro Gln Glu Ala Ala Ser Leu Ser Ala Ala Val Phe Gly Leu 290 295 300 ggc gaa gcg tct tct gcg gtt gca gaa acc gtg agc ggt ttc ttc cgt 960 Gly Glu Ala Ser Ser Ala Val Ala Glu Thr Val Ser Gly Phe Phe Arg 305 310 315 320 ggt tct agc cgc tgg gcg ggt ggt ttt ggt gta gca ggt ggc gct atg 1008 Gly Ser Ser Arg Trp Ala Gly Gly Phe Gly Val Ala Gly Gly Ala Met 325 330 335 gcc ctg ggt ggc ggt atc gcg gct gct gtc ggc gca ggt atg agc ctg 1056 Ala Leu Gly Gly Gly Ile Ala Ala Ala Val Gly Ala Gly Met Ser Leu 340 345 350 acc gac gat gct cct gcg ggc cag aaa gcc gca gct ggc gct gaa atc 1104 Thr Asp Asp Ala Pro Ala Gly Gln Lys Ala Ala Ala Gly Ala Glu Ile 355 360 365 gcg ctg cag ctg act ggt ggt acc gtt gaa ctg gct agc tct atc gcg 1152 Ala Leu Gln Leu Thr Gly Gly Thr Val Glu Leu Ala Ser Ser Ile Ala 370 375 380 ctg gct ctg gca gcg gca cgt ggc gtg act tct ggc ctg caa gtc gcc 1200 Leu Ala Leu Ala Ala Ala Arg Gly Val Thr Ser Gly Leu Gln Val Ala 385 390 395 400 ggt gcc tct gcg ggc gct gct gcg ggc gct ctg gca gct gca ctg tcc 1248 Gly Ala Ser Ala Gly Ala Ala Ala Gly Ala Leu Ala Ala Ala Leu Ser 405 410 415 ccc atg gaa atc tac ggt ctg gta cag cag tct cac tac gca gac cag 1296 Pro Met Glu Ile Tyr Gly Leu Val Gln Gln Ser His Tyr Ala Asp Gln 420 425 430 ctg gat aaa ctg gcg cag gag tct tct gca tac ggt tac gaa ggc gac 1344 Leu Asp Lys Leu Ala Gln Glu Ser Ser Ala Tyr Gly Tyr Glu Gly Asp 435 440 445 gca ctg ctg gcg cag ctg tat cgt gac aaa act gct gct gaa ggt gct 1392 Ala Leu Leu Ala Gln Leu Tyr Arg Asp Lys Thr Ala Ala Glu Gly Ala 450 455 460 gtg gca ggc gtt tct gcg gta ctg tct acc gtt ggc gct gcg gtt tct 1440 Val Ala Gly Val Ser Ala Val Leu Ser Thr Val Gly Ala Ala Val Ser 465 470 475 480 att gcg gct gcc gca tcc gtt gta ggt gcg ccg gtt gct gta gtt acc 1488 Ile Ala Ala Ala Ala Ser Val Val Gly Ala Pro Val Ala Val Val Thr 485 490 495 tct ctg ctg act ggt gca ctg aac ggt atc ctg cgt ggt gtt cag cag 1536 Ser Leu Leu Thr Gly Ala Leu Asn Gly Ile Leu Arg Gly Val Gln Gln 500 505 510 cct att atc gaa aaa ctg gcg aat gat tat gcc cgt aaa atc gac gaa 1584 Pro Ile Ile Glu Lys Leu Ala Asn Asp Tyr Ala Arg Lys Ile Asp Glu 515 520 525 ctg ggc ggt ccg cag gct tat ttt gaa aaa aac ctg cag gcg cgc cac 1632 Leu Gly Gly Pro Gln Ala Tyr Phe Glu Lys Asn Leu Gln Ala Arg His 530 535 540 gaa cag ctg gca aac agc gac ggc ctg cgc aaa atg ctg gca gac ctg 1680 Glu Gln Leu Ala Asn Ser Asp Gly Leu Arg Lys Met Leu Ala Asp Leu 545 550 555 560 caa gct ggt tgg aac gcg tct tct gtg atc ggc gtg cag acc acc gaa 1728 Gln Ala Gly Trp Asn Ala Ser Ser Val Ile Gly Val Gln Thr Thr Glu 565 570 575 att agc aaa tct gcg ctg gaa ctg gct gca att act ggc aac gcg gat 1776 Ile Ser Lys Ser Ala Leu Glu Leu Ala Ala Ile Thr Gly Asn Ala Asp 580 585 590 aac ctg aaa agc gtt gat gtt ttt gtc gat cgc ttc gtt cag ggc gag 1824 Asn Leu Lys Ser Val Asp Val Phe Val Asp Arg Phe Val Gln Gly Glu 595 600 605 cgc gtt gct ggt cag ccg gtt gtt ctg gac gtt gcg gca ggc ggc atc 1872 Arg Val Ala Gly Gln Pro Val Val Leu Asp Val Ala Ala Gly Gly Ile 610 615 620 gac atc gct agc cgc aag ggc gag cgt ccg gct ctg act ttc att acc 1920 Asp Ile Ala Ser Arg Lys Gly Glu Arg Pro Ala Leu Thr Phe Ile Thr 625 630 635 640 ccg ctg gca gct ccg ggt gaa gaa cag cgt cgc cgt acc aag act ggt 1968 Pro Leu Ala Ala Pro Gly Glu Glu Gln Arg Arg Arg Thr Lys Thr Gly 645 650 655 aaa agc gag ttc acc acc ttc gtg gaa atc gta ggt aaa cag gac cgc 2016 Lys Ser Glu Phe Thr Thr Phe Val Glu Ile Val Gly Lys Gln Asp Arg 660 665 670 tgg cgt att cgc gac ggt gcg gcg gac acc acc atc gac ctg gca aaa 2064 Trp Arg Ile Arg Asp Gly Ala Ala Asp Thr Thr Ile Asp Leu Ala Lys 675 680 685 gtt gtt tcc caa ctg gta gat gct aac ggc gtg ctg aaa cat tct att 2112 Val Val Ser Gln Leu Val Asp Ala Asn Gly Val Leu Lys His Ser Ile 690 695 700 aaa ctg gat gta atc ggc ggt gac ggc gat gac gtt gta ctg gcg aac 2160 Lys Leu Asp Val Ile Gly Gly Asp Gly Asp Asp Val Val Leu Ala Asn 705 710 715 720 gcg tct cgt atc cac tat gac ggc ggc gca ggt acc aac acg gtt tcc 2208 Ala Ser Arg Ile His Tyr Asp Gly Gly Ala Gly Thr Asn Thr Val Ser 725 730 735 tac gca gcg ctg ggc cgc cag gat tcc atc act gtt agc gcc gat ggc 2256 Tyr Ala Ala Leu Gly Arg Gln Asp Ser Ile Thr Val Ser Ala Asp Gly 740 745 750 gaa cgt ttc aac gtg cgt aaa cag ctg aat aac gca aac gtc tat cgt 2304 Glu Arg Phe Asn Val Arg Lys Gln Leu Asn Asn Ala Asn Val Tyr Arg 755 760 765 gag ggt gta gct acc cag acc acc gcg tac ggt aag cgt acc gaa aac 2352 Glu Gly Val Ala Thr Gln Thr Thr Ala Tyr Gly Lys Arg Thr Glu Asn 770 775 780 gtt cag tat cgt cac gtg gaa ctg gca cgt gtg ggt cag ctg gta gag 2400 Val Gln Tyr Arg His Val Glu Leu Ala Arg Val Gly Gln Leu Val Glu 785 790 795 800 gtg gat acg ctg gaa cac gtg cag cac atc atc ggt ggc gcc ggt aac 2448 Val Asp Thr Leu Glu His Val Gln His Ile Ile Gly Gly Ala Gly Asn 805 810 815 gat tcc att act ggt aac gct cac gac aac ttc ctg gca ggt ggt tct 2496 Asp Ser Ile Thr Gly Asn Ala His Asp Asn Phe Leu Ala Gly Gly Ser 820 825 830 ggt gat gat cgt ctg gac ggt ggt gcg ggt aac gat acg ctg gta ggc 2544 Gly Asp Asp Arg Leu Asp Gly Gly Ala Gly Asn Asp Thr Leu Val Gly 835 840 845 ggc gaa ggt cag aac acc gta att ggt ggt gcc ggt gac gac gtt ttc 2592 Gly Glu Gly Gln Asn Thr Val Ile Gly Gly Ala Gly Asp Asp Val Phe 850 855 860 ctg cag gat ctg ggc gtt tgg agc aac cag ctg gat ggc ggt gcc ggt 2640 Leu Gln Asp Leu Gly Val Trp Ser Asn Gln Leu Asp Gly Gly Ala Gly 865 870 875 880 gtt gac acg gtt aag tat aac gtt cac cag ccg tct gaa gag cgc ctg 2688 Val Asp Thr Val Lys Tyr Asn Val His Gln Pro Ser Glu Glu Arg Leu 885 890 895 gaa cgt atg ggt gac act ggt att cat gcc gat ctg cag aaa ggc act 2736 Glu Arg Met Gly Asp Thr Gly Ile His Ala Asp Leu Gln Lys Gly Thr 900 905 910 gtt gaa aaa tgg cct gcg ctg aac ctg ttc tct gtg gac cat gtt aag 2784 Val Glu Lys Trp Pro Ala Leu Asn Leu Phe Ser Val Asp His Val Lys 915 920 925 aac att gaa aac ctg cat ggc tct cgc ctg aac gac cgt atc gct ggt 2832 Asn Ile Glu Asn Leu His Gly Ser Arg Leu Asn Asp Arg Ile Ala Gly 930 935 940 gac gac cag gat aac gaa ctg tgg ggt cat gac ggc aat gat acc att 2880 Asp Asp Gln Asp Asn Glu Leu Trp Gly His Asp Gly Asn Asp Thr Ile 945 950 955 960 cgc ggt cgt ggc ggc gac gat att ctg cgt ggc ggt ctg ggc ctg gat 2928 Arg Gly Arg Gly Gly Asp Asp Ile Leu Arg Gly Gly Leu Gly Leu Asp 965 970 975 acc ctg tat ggt gaa gat ggt aac gat att ttc ctg caa gac gat gaa 2976 Thr Leu Tyr Gly Glu Asp Gly Asn Asp Ile Phe Leu Gln Asp Asp Glu 980 985 990 acg gta tct gat gac atc gac ggt ggt gca ggc ctg gac acc gta gat 3024 Thr Val Ser Asp Asp Ile Asp Gly Gly Ala Gly Leu Asp Thr Val Asp 995 1000 1005 tac agc gct atg atc cat ccg ggt cgt atc gta gct ccg cac gag 3069 Tyr Ser Ala Met Ile His Pro Gly Arg Ile Val Ala Pro His Glu 1010 1015 1020 tac ggc ttc ggt atc gag gcg gac ctg tct cgt gaa tgg gtt cgt 3114 Tyr Gly Phe Gly Ile Glu Ala Asp Leu Ser Arg Glu Trp Val Arg 1025 1030 1035 aaa gcg tcc gcg ctg ggt gtg gac tac tac gat aac gtt cgt aac 3159 Lys Ala Ser Ala Leu Gly Val Asp Tyr Tyr Asp Asn Val Arg Asn 1040 1045 1050 gtg gaa aac gtg atc ggt acc tcc atg aaa gac gtg ctg att ggc 3204 Val Glu Asn Val Ile Gly Thr Ser Met Lys Asp Val Leu Ile Gly 1055 1060 1065 gac gca cag gcc aac act ctg atg ggc cag ggc ggt gat gac acg 3249 Asp Ala Gln Ala Asn Thr Leu Met Gly Gln Gly Gly Asp Asp Thr 1070 1075 1080 gtt cgc ggc ggc gac ggt gat gac ctg ctg ttc ggt ggt gac ggc 3294 Val Arg Gly Gly Asp Gly Asp Asp Leu Leu Phe Gly Gly Asp Gly 1085 1090 1095 aac gac atg ctg tac ggc gac gcg ggc aac gac acc ctg tac ggc 3339 Asn Asp Met Leu Tyr Gly Asp Ala Gly Asn Asp Thr Leu Tyr Gly 1100 1105 1110 ggt ctg ggt gac gac act ctg gaa ggt ggt gca ggt aac gac tgg 3384 Gly Leu Gly Asp Asp Thr Leu Glu Gly Gly Ala Gly Asn Asp Trp 1115 1120 1125 ttc ggc caa acc cag gca cgc gaa cac gac gtg ctg cgt ggt ggc 3429 Phe Gly Gln Thr Gln Ala Arg Glu His Asp Val Leu Arg Gly Gly 1130 1135 1140 gac ggc gta gac acc gtg gat tac tcc caa act ggc gct cac gcg 3474 Asp Gly Val Asp Thr Val Asp Tyr Ser Gln Thr Gly Ala His Ala 1145 1150 1155 ggt atc gcg gcc ggt cgt atc ggt ctg ggc att ctg gcc gat ctg 3519 Gly Ile Ala Ala Gly Arg Ile Gly Leu Gly Ile Leu Ala Asp Leu 1160 1165 1170 ggt gcc ggc cgt gtc gac aaa ctg ggt gag gct ggc tct agc gcc 3564 Gly Ala Gly Arg Val Asp Lys Leu Gly Glu Ala Gly Ser Ser Ala 1175 1180 1185 tat gat act gtt tcc ggc atc gaa aac gtg gta ggc act gaa ctg 3609 Tyr Asp Thr Val Ser Gly Ile Glu Asn Val Val Gly Thr Glu Leu 1190 1195 1200 gca gat cgt atc acg ggt gac gcg caa gcg aac gtt ctg cgt ggt 3654 Ala Asp Arg Ile Thr Gly Asp Ala Gln Ala Asn Val Leu Arg Gly 1205 1210 1215 gct ggc ggt gca gac gtg ctg gcg ggt ggt gaa ggc gac gac gta 3699 Ala Gly Gly Ala Asp Val Leu Ala Gly Gly Glu Gly Asp Asp Val 1220 1225 1230 ctg ctg ggc ggt gac ggt gac gat cag ctg agc ggt gat gcg ggt 3744 Leu Leu Gly Gly Asp Gly Asp Asp Gln Leu Ser Gly Asp Ala Gly 1235 1240 1245 cgt gac cgt ctg tac ggt gaa gca ggt gac gat tgg ttc ttc cag 3789 Arg Asp Arg Leu Tyr Gly Glu Ala Gly Asp Asp Trp Phe Phe Gln 1250 1255 1260 gac gct gct aac gct ggc aac ctg ctg gac ggc ggc gat ggc cgt 3834 Asp Ala Ala Asn Ala Gly Asn Leu Leu Asp Gly Gly Asp Gly Arg 1265 1270 1275 gac act gtt gac ttc agc ggt ccg ggt cgc ggt ctg gac gca ggc 3879 Asp Thr Val Asp Phe Ser Gly Pro Gly Arg Gly Leu Asp Ala Gly 1280 1285 1290 gcg aaa ggc gtt ttc ctg agc ctg ggt aag ggt ttc gca tct ctg 3924 Ala Lys Gly Val Phe Leu Ser Leu Gly Lys Gly Phe Ala Ser Leu 1295 1300 1305 atg gac gaa cca gaa acc agc aat gtc ctg cgt aac atc gaa aac 3969 Met Asp Glu Pro Glu Thr Ser Asn Val Leu Arg Asn Ile Glu Asn 1310 1315 1320 gct gtc ggt tcc gca cgc gat gat gtt ctg att ggc gat gct ggt 4014 Ala Val Gly Ser Ala Arg Asp Asp Val Leu Ile Gly Asp Ala Gly 1325 1330 1335 gcc aat gtt ctg aac ggt ctg gcg ggt aat gat gta ctg tct ggt 4059 Ala Asn Val Leu Asn Gly Leu Ala Gly Asn Asp Val Leu Ser Gly 1340 1345 1350 ggc gct ggt gat gat gtc ctg ctg ggt gat gag ggc agc gat ctg 4104 Gly Ala Gly Asp Asp Val Leu Leu Gly Asp Glu Gly Ser Asp Leu 1355 1360 1365 ctg tcc ggc gat gcc ggc aac gac gat ctg ttc ggt ggc caa ggt 4149 Leu Ser Gly Asp Ala Gly Asn Asp Asp Leu Phe Gly Gly Gln Gly 1370 1375 1380 gat gat act tac ctg ttc ggc gtt ggc tat ggt cat gac acc atc 4194 Asp Asp Thr Tyr Leu Phe Gly Val Gly Tyr Gly His Asp Thr Ile 1385 1390 1395 tat gag tct ggt ggc ggc cac gat acg att cgt att aat gca ggt 4239 Tyr Glu Ser Gly Gly Gly His Asp Thr Ile Arg Ile Asn Ala Gly 1400 1405 1410 gct gac caa ctg tgg ttt gca cgt cag ggt aac gat ctg gaa att 4284 Ala Asp Gln Leu Trp Phe Ala Arg Gln Gly Asn Asp Leu Glu Ile 1415 1420 1425 cgc atc ctg ggt act gat gac gct ctg acc gta cac gac tgg tac 4329 Arg Ile Leu Gly Thr Asp Asp Ala Leu Thr Val His Asp Trp Tyr 1430 1435 1440 cgc gat gcg gat cac cgc gta gaa atc atc cat gcg gct aac caa 4374 Arg Asp Ala Asp His Arg Val Glu Ile Ile His Ala Ala Asn Gln 1445 1450 1455 gct gta gac cag gct ggt att gaa aaa ctg gta gaa gcg atg gca 4419 Ala Val Asp Gln Ala Gly Ile Glu Lys Leu Val Glu Ala Met Ala 1460 1465 1470 cag tat ccg gac cca ggt gcg gct gct gca gca cct cca gcg gct 4464 Gln Tyr Pro Asp Pro Gly Ala Ala Ala Ala Ala Pro Pro Ala Ala 1475 1480 1485 cgt gtg ccg gat acc ctg atg cag agc ctg gcc gtc aat tgg cgt 4509 Arg Val Pro Asp Thr Leu Met Gln Ser Leu Ala Val Asn Trp Arg 1490 1495 1500 taa 4512 <210> 12 <211> 1503 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 12 Met Gln Gln Ser His Gln Ala Gly Tyr Ala Asn Ala Ala Asp Arg Glu 1 5 10 15 Ser Gly Ile Pro Ala Ala Val Leu Asp Gly Ile Lys Ala Val Ala Lys 20 25 30 Glu Lys Asn Ala Thr Leu Met Phe Arg Leu Val Asn Pro His Ser Thr 35 40 45 Ser Leu Ile Ala Glu Gly Val Ala Thr Lys Gly Leu Gly Val His Ala 50 55 60 Lys Ser Ser Asp Trp Gly Leu Gln Ala Gly Tyr Ile Pro Val Asn Pro 65 70 75 80 Asn Leu Ser Lys Leu Phe Gly Arg Ala Pro Glu Val Ile Ala Arg Ala 85 90 95 Asp Asn Asp Val Asn Ser Ser Leu Ala His Gly His Thr Ala Val Asp 100 105 110 Leu Thr Leu Ser Lys Glu Arg Leu Asp Tyr Leu Arg Gln Ala Gly Leu 115 120 125 Val Thr Gly Met Ala Asp Gly Val Val Ala Ser Asn His Ala Gly Tyr 130 135 140 Glu Gln Phe Glu Phe Arg Val Lys Glu Thr Ser Asp Gly Arg Tyr Ala 145 150 155 160 Val Gln Tyr Arg Arg Lys Gly Gly Asp Asp Phe Glu Ala Val Lys Val 165 170 175 Ile Gly Asn Ala Ala Gly Ile Pro Gly Leu Arg Arg Pro Ser Leu Gly 180 185 190 Ala Val Glu Arg Gln Asp Ser Gly Tyr Asp Ser Leu Asp Gly Val Gly 195 200 205 Ser Arg Ser Phe Ser Leu Gly Glu Val Ser Asp Met Ala Ala Val Glu 210 215 220 Ala Ala Glu Leu Glu Met Thr Arg Gln Val Leu His Ala Gly Ala Arg 225 230 235 240 Gln Asp Asp Ala Glu Pro Gly Val Ser Gly Ala Ser Ala His Trp Gly 245 250 255 Gln Arg Ala Leu Gln Gly Ala Gln Ala Val Ala Ala Ala Gln Arg Leu 260 265 270 Val His Ala Ile Ala Leu Met Thr Gln Phe Gly Arg Ala Gly Ser Thr 275 280 285 Asn Thr Pro Gln Glu Ala Ala Ser Leu Ser Ala Ala Val Phe Gly Leu 290 295 300 Gly Glu Ala Ser Ser Ala Val Ala Glu Thr Val Ser Gly Phe Phe Arg 305 310 315 320 Gly Ser Ser Arg Trp Ala Gly Gly Phe Gly Val Ala Gly Gly Ala Met 325 330 335 Ala Leu Gly Gly Gly Ile Ala Ala Ala Val Gly Ala Gly Met Ser Leu 340 345 350 Thr Asp Asp Ala Pro Ala Gly Gln Lys Ala Ala Ala Gly Ala Glu Ile 355 360 365 Ala Leu Gln Leu Thr Gly Gly Thr Val Glu Leu Ala Ser Ser Ile Ala 370 375 380 Leu Ala Leu Ala Ala Ala Arg Gly Val Thr Ser Gly Leu Gln Val Ala 385 390 395 400 Gly Ala Ser Ala Gly Ala Ala Ala Gly Ala Leu Ala Ala Ala Leu Ser 405 410 415 Pro Met Glu Ile Tyr Gly Leu Val Gln Gln Ser His Tyr Ala Asp Gln 420 425 430 Leu Asp Lys Leu Ala Gln Glu Ser Ser Ala Tyr Gly Tyr Glu Gly Asp 435 440 445 Ala Leu Leu Ala Gln Leu Tyr Arg Asp Lys Thr Ala Ala Glu Gly Ala 450 455 460 Val Ala Gly Val Ser Ala Val Leu Ser Thr Val Gly Ala Ala Val Ser 465 470 475 480 Ile Ala Ala Ala Ala Ser Val Val Gly Ala Pro Val Ala Val Val Thr 485 490 495 Ser Leu Leu Thr Gly Ala Leu Asn Gly Ile Leu Arg Gly Val Gln Gln 500 505 510 Pro Ile Ile Glu Lys Leu Ala Asn Asp Tyr Ala Arg Lys Ile Asp Glu 515 520 525 Leu Gly Gly Pro Gln Ala Tyr Phe Glu Lys Asn Leu Gln Ala Arg His 530 535 540 Glu Gln Leu Ala Asn Ser Asp Gly Leu Arg Lys Met Leu Ala Asp Leu 545 550 555 560 Gln Ala Gly Trp Asn Ala Ser Ser Val Ile Gly Val Gln Thr Thr Glu 565 570 575 Ile Ser Lys Ser Ala Leu Glu Leu Ala Ala Ile Thr Gly Asn Ala Asp 580 585 590 Asn Leu Lys Ser Val Asp Val Phe Val Asp Arg Phe Val Gln Gly Glu 595 600 605 Arg Val Ala Gly Gln Pro Val Val Leu Asp Val Ala Ala Gly Gly Ile 610 615 620 Asp Ile Ala Ser Arg Lys Gly Glu Arg Pro Ala Leu Thr Phe Ile Thr 625 630 635 640 Pro Leu Ala Ala Pro Gly Glu Glu Gln Arg Arg Arg Thr Lys Thr Gly 645 650 655 Lys Ser Glu Phe Thr Thr Phe Val Glu Ile Val Gly Lys Gln Asp Arg 660 665 670 Trp Arg Ile Arg Asp Gly Ala Ala Asp Thr Thr Ile Asp Leu Ala Lys 675 680 685 Val Val Ser Gln Leu Val Asp Ala Asn Gly Val Leu Lys His Ser Ile 690 695 700 Lys Leu Asp Val Ile Gly Gly Asp Gly Asp Asp Val Val Leu Ala Asn 705 710 715 720 Ala Ser Arg Ile His Tyr Asp Gly Gly Ala Gly Thr Asn Thr Val Ser 725 730 735 Tyr Ala Ala Leu Gly Arg Gln Asp Ser Ile Thr Val Ser Ala Asp Gly 740 745 750 Glu Arg Phe Asn Val Arg Lys Gln Leu Asn Asn Ala Asn Val Tyr Arg 755 760 765 Glu Gly Val Ala Thr Gln Thr Thr Ala Tyr Gly Lys Arg Thr Glu Asn 770 775 780 Val Gln Tyr Arg His Val Glu Leu Ala Arg Val Gly Gln Leu Val Glu 785 790 795 800 Val Asp Thr Leu Glu His Val Gln His Ile Ile Gly Gly Ala Gly Asn 805 810 815 Asp Ser Ile Thr Gly Asn Ala His Asp Asn Phe Leu Ala Gly Gly Ser 820 825 830 Gly Asp Asp Arg Leu Asp Gly Gly Ala Gly Asn Asp Thr Leu Val Gly 835 840 845 Gly Glu Gly Gln Asn Thr Val Ile Gly Gly Ala Gly Asp Asp Val Phe 850 855 860 Leu Gln Asp Leu Gly Val Trp Ser Asn Gln Leu Asp Gly Gly Ala Gly 865 870 875 880 Val Asp Thr Val Lys Tyr Asn Val His Gln Pro Ser Glu Glu Arg Leu 885 890 895 Glu Arg Met Gly Asp Thr Gly Ile His Ala Asp Leu Gln Lys Gly Thr 900 905 910 Val Glu Lys Trp Pro Ala Leu Asn Leu Phe Ser Val Asp His Val Lys 915 920 925 Asn Ile Glu Asn Leu His Gly Ser Arg Leu Asn Asp Arg Ile Ala Gly 930 935 940 Asp Asp Gln Asp Asn Glu Leu Trp Gly His Asp Gly Asn Asp Thr Ile 945 950 955 960 Arg Gly Arg Gly Gly Asp Asp Ile Leu Arg Gly Gly Leu Gly Leu Asp 965 970 975 Thr Leu Tyr Gly Glu Asp Gly Asn Asp Ile Phe Leu Gln Asp Asp Glu 980 985 990 Thr Val Ser Asp Asp Ile Asp Gly Gly Ala Gly Leu Asp Thr Val Asp 995 1000 1005 Tyr Ser Ala Met Ile His Pro Gly Arg Ile Val Ala Pro His Glu 1010 1015 1020 Tyr Gly Phe Gly Ile Glu Ala Asp Leu Ser Arg Glu Trp Val Arg 1025 1030 1035 Lys Ala Ser Ala Leu Gly Val Asp Tyr Tyr Asp Asn Val Arg Asn 1040 1045 1050 Val Glu Asn Val Ile Gly Thr Ser Met Lys Asp Val Leu Ile Gly 1055 1060 1065 Asp Ala Gln Ala Asn Thr Leu Met Gly Gln Gly Gly Asp Asp Thr 1070 1075 1080 Val Arg Gly Gly Asp Gly Asp Asp Leu Leu Phe Gly Gly Asp Gly 1085 1090 1095 Asn Asp Met Leu Tyr Gly Asp Ala Gly Asn Asp Thr Leu Tyr Gly 1100 1105 1110 Gly Leu Gly Asp Asp Thr Leu Glu Gly Gly Ala Gly Asn Asp Trp 1115 1120 1125 Phe Gly Gln Thr Gln Ala Arg Glu His Asp Val Leu Arg Gly Gly 1130 1135 1140 Asp Gly Val Asp Thr Val Asp Tyr Ser Gln Thr Gly Ala His Ala 1145 1150 1155 Gly Ile Ala Ala Gly Arg Ile Gly Leu Gly Ile Leu Ala Asp Leu 1160 1165 1170 Gly Ala Gly Arg Val Asp Lys Leu Gly Glu Ala Gly Ser Ser Ala 1175 1180 1185 Tyr Asp Thr Val Ser Gly Ile Glu Asn Val Val Gly Thr Glu Leu 1190 1195 1200 Ala Asp Arg Ile Thr Gly Asp Ala Gln Ala Asn Val Leu Arg Gly 1205 1210 1215 Ala Gly Gly Ala Asp Val Leu Ala Gly Gly Glu Gly Asp Asp Val 1220 1225 1230 Leu Leu Gly Gly Asp Gly Asp Asp Gln Leu Ser Gly Asp Ala Gly 1235 1240 1245 Arg Asp Arg Leu Tyr Gly Glu Ala Gly Asp Asp Trp Phe Phe Gln 1250 1255 1260 Asp Ala Ala Asn Ala Gly Asn Leu Leu Asp Gly Gly Asp Gly Arg 1265 1270 1275 Asp Thr Val Asp Phe Ser Gly Pro Gly Arg Gly Leu Asp Ala Gly 1280 1285 1290 Ala Lys Gly Val Phe Leu Ser Leu Gly Lys Gly Phe Ala Ser Leu 1295 1300 1305 Met Asp Glu Pro Glu Thr Ser Asn Val Leu Arg Asn Ile Glu Asn 1310 1315 1320 Ala Val Gly Ser Ala Arg Asp Asp Val Leu Ile Gly Asp Ala Gly 1325 1330 1335 Ala Asn Val Leu Asn Gly Leu Ala Gly Asn Asp Val Leu Ser Gly 1340 1345 1350 Gly Ala Gly Asp Asp Val Leu Leu Gly Asp Glu Gly Ser Asp Leu 1355 1360 1365 Leu Ser Gly Asp Ala Gly Asn Asp Asp Leu Phe Gly Gly Gln Gly 1370 1375 1380 Asp Asp Thr Tyr Leu Phe Gly Val Gly Tyr Gly His Asp Thr Ile 1385 1390 1395 Tyr Glu Ser Gly Gly Gly His Asp Thr Ile Arg Ile Asn Ala Gly 1400 1405 1410 Ala Asp Gln Leu Trp Phe Ala Arg Gln Gly Asn Asp Leu Glu Ile 1415 1420 1425 Arg Ile Leu Gly Thr Asp Asp Ala Leu Thr Val His Asp Trp Tyr 1430 1435 1440 Arg Asp Ala Asp His Arg Val Glu Ile Ile His Ala Ala Asn Gln 1445 1450 1455 Ala Val Asp Gln Ala Gly Ile Glu Lys Leu Val Glu Ala Met Ala 1460 1465 1470 Gln Tyr Pro Asp Pro Gly Ala Ala Ala Ala Ala Pro Pro Ala Ala 1475 1480 1485 Arg Val Pro Asp Thr Leu Met Gln Ser Leu Ala Val Asn Trp Arg 1490 1495 1500 <210> 13 <211> 1613 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Polypeptide 1-227 + 321-1706 of SEQ ID NO: 4 <400> 13 Met Gln Gln Ser His Gln Ala Gly Tyr Ala Asn Ala Ala Asp Arg Glu 1 5 10 15 Ser Gly Ile Pro Ala Ala Val Leu Asp Gly Ile Lys Ala Val Ala Lys 20 25 30 Glu Lys Asn Ala Thr Leu Met Phe Arg Leu Val Asn Pro His Ser Thr 35 40 45 Ser Leu Ile Ala Glu Gly Val Ala Thr Lys Gly Leu Gly Val His Ala 50 55 60 Lys Ser Ser Asp Trp Gly Leu Gln Ala Gly Tyr Ile Pro Val Asn Pro 65 70 75 80 Asn Leu Ser Lys Leu Phe Gly Arg Ala Pro Glu Val Ile Ala Arg Ala 85 90 95 Asp Asn Asp Val Asn Ser Ser Leu Ala His Gly His Thr Ala Val Asp 100 105 110 Leu Thr Leu Ser Lys Glu Arg Leu Asp Tyr Leu Arg Gln Ala Gly Leu 115 120 125 Val Thr Gly Met Ala Asp Gly Val Val Ala Ser Asn His Ala Gly Tyr 130 135 140 Glu Gln Phe Glu Phe Arg Val Lys Glu Thr Ser Asp Gly Arg Tyr Ala 145 150 155 160 Val Gln Tyr Arg Arg Lys Gly Gly Asp Asp Phe Glu Ala Val Lys Val 165 170 175 Ile Gly Asn Ala Ala Gly Ile Pro Leu Thr Ala Asp Ile Asp Met Phe 180 185 190 Ala Ile Met Pro His Leu Ser Asn Phe Arg Asp Ser Ala Arg Ser Ser 195 200 205 Val Thr Ser Gly Asp Ser Val Thr Asp Tyr Leu Ala Arg Thr Arg Arg 210 215 220 Ala Ala Ser Glu Ser Gln Met Leu Thr Arg Gly Gln Leu Lys Glu Tyr 225 230 235 240 Ile Gly Gln Gln Arg Gly Glu Gly Tyr Val Phe Tyr Glu Asn Arg Ala 245 250 255 Tyr Gly Val Ala Gly Lys Ser Leu Phe Asp Asp Gly Leu Gly Ala Ala 260 265 270 Pro Gly Val Pro Ser Gly Arg Ser Lys Phe Ser Pro Asp Val Leu Glu 275 280 285 Thr Val Pro Ala Ser Pro Gly Leu Arg Arg Pro Ser Leu Gly Ala Val 290 295 300 Glu Arg Gln Asp Ser Gly Tyr Asp Ser Leu Asp Gly Val Gly Ser Arg 305 310 315 320 Ser Phe Ser Leu Gly Glu Val Ser Asp Met Ala Ala Val Glu Ala Ala 325 330 335 Glu Leu Glu Met Thr Arg Gln Val Leu His Ala Gly Ala Arg Gln Asp 340 345 350 Asp Ala Glu Pro Gly Val Ser Gly Ala Ser Ala His Trp Gly Gln Arg 355 360 365 Ala Leu Gln Gly Ala Gln Ala Val Ala Ala Ala Gln Arg Leu Val His 370 375 380 Ala Ile Ala Leu Met Thr Gln Phe Gly Arg Ala Gly Ser Thr Asn Thr 385 390 395 400 Pro Gln Glu Ala Ala Ser Leu Ser Ala Ala Val Phe Gly Leu Gly Glu 405 410 415 Ala Ser Ser Ala Val Ala Glu Thr Val Ser Gly Phe Phe Arg Gly Ser 420 425 430 Ser Arg Trp Ala Gly Gly Phe Gly Val Ala Gly Gly Ala Met Ala Leu 435 440 445 Gly Gly Gly Ile Ala Ala Ala Val Gly Ala Gly Met Ser Leu Thr Asp 450 455 460 Asp Ala Pro Ala Gly Gln Lys Ala Ala Ala Gly Ala Glu Ile Ala Leu 465 470 475 480 Gln Leu Thr Gly Gly Thr Val Glu Leu Ala Ser Ser Ile Ala Leu Ala 485 490 495 Leu Ala Ala Ala Arg Gly Val Thr Ser Gly Leu Gln Val Ala Gly Ala 500 505 510 Ser Ala Gly Ala Ala Ala Gly Ala Leu Ala Ala Ala Leu Ser Pro Met 515 520 525 Glu Ile Tyr Gly Leu Val Gln Gln Ser His Tyr Ala Asp Gln Leu Asp 530 535 540 Lys Leu Ala Gln Glu Ser Ser Ala Tyr Gly Tyr Glu Gly Asp Ala Leu 545 550 555 560 Leu Ala Gln Leu Tyr Arg Asp Lys Thr Ala Ala Glu Gly Ala Val Ala 565 570 575 Gly Val Ser Ala Val Leu Ser Thr Val Gly Ala Ala Val Ser Ile Ala 580 585 590 Ala Ala Ala Ser Val Val Gly Ala Pro Val Ala Val Val Thr Ser Leu 595 600 605 Leu Thr Gly Ala Leu Asn Gly Ile Leu Arg Gly Val Gln Gln Pro Ile 610 615 620 Ile Glu Lys Leu Ala Asn Asp Tyr Ala Arg Lys Ile Asp Glu Leu Gly 625 630 635 640 Gly Pro Gln Ala Tyr Phe Glu Lys Asn Leu Gln Ala Arg His Glu Gln 645 650 655 Leu Ala Asn Ser Asp Gly Leu Arg Lys Met Leu Ala Asp Leu Gln Ala 660 665 670 Gly Trp Asn Ala Ser Ser Val Ile Gly Val Gln Thr Thr Glu Ile Ser 675 680 685 Lys Ser Ala Leu Glu Leu Ala Ala Ile Thr Gly Asn Ala Asp Asn Leu 690 695 700 Lys Ser Val Asp Val Phe Val Asp Arg Phe Val Gln Gly Glu Arg Val 705 710 715 720 Ala Gly Gln Pro Val Val Leu Asp Val Ala Ala Gly Gly Ile Asp Ile 725 730 735 Ala Ser Arg Lys Gly Glu Arg Pro Ala Leu Thr Phe Ile Thr Pro Leu 740 745 750 Ala Ala Pro Gly Glu Glu Gln Arg Arg Arg Thr Lys Thr Gly Lys Ser 755 760 765 Glu Phe Thr Thr Phe Val Glu Ile Val Gly Lys Gln Asp Arg Trp Arg 770 775 780 Ile Arg Asp Gly Ala Ala Asp Thr Thr Ile Asp Leu Ala Lys Val Val 785 790 795 800 Ser Gln Leu Val Asp Ala Asn Gly Val Leu Lys His Ser Ile Lys Leu 805 810 815 Asp Val Ile Gly Gly Asp Gly Asp Asp Val Val Leu Ala Asn Ala Ser 820 825 830 Arg Ile His Tyr Asp Gly Gly Ala Gly Thr Asn Thr Val Ser Tyr Ala 835 840 845 Ala Leu Gly Arg Gln Asp Ser Ile Thr Val Ser Ala Asp Gly Glu Arg 850 855 860 Phe Asn Val Arg Lys Gln Leu Asn Asn Ala Asn Val Tyr Arg Glu Gly 865 870 875 880 Val Ala Thr Gln Thr Thr Ala Tyr Gly Lys Arg Thr Glu Asn Val Gln 885 890 895 Tyr Arg His Val Glu Leu Ala Arg Val Gly Gln Leu Val Glu Val Asp 900 905 910 Thr Leu Glu His Val Gln His Ile Ile Gly Gly Ala Gly Asn Asp Ser 915 920 925 Ile Thr Gly Asn Ala His Asp Asn Phe Leu Ala Gly Gly Ser Gly Asp 930 935 940 Asp Arg Leu Asp Gly Gly Ala Gly Asn Asp Thr Leu Val Gly Gly Glu 945 950 955 960 Gly Gln Asn Thr Val Ile Gly Gly Ala Gly Asp Asp Val Phe Leu Gln 965 970 975 Asp Leu Gly Val Trp Ser Asn Gln Leu Asp Gly Gly Ala Gly Val Asp 980 985 990 Thr Val Lys Tyr Asn Val His Gln Pro Ser Glu Glu Arg Leu Glu Arg 995 1000 1005 Met Gly Asp Thr Gly Ile His Ala Asp Leu Gln Lys Gly Thr Val 1010 1015 1020 Glu Lys Trp Pro Ala Leu Asn Leu Phe Ser Val Asp His Val Lys 1025 1030 1035 Asn Ile Glu Asn Leu His Gly Ser Arg Leu Asn Asp Arg Ile Ala 1040 1045 1050 Gly Asp Asp Gln Asp Asn Glu Leu Trp Gly His Asp Gly Asn Asp 1055 1060 1065 Thr Ile Arg Gly Arg Gly Gly Asp Asp Ile Leu Arg Gly Gly Leu 1070 1075 1080 Gly Leu Asp Thr Leu Tyr Gly Glu Asp Gly Asn Asp Ile Phe Leu 1085 1090 1095 Gln Asp Asp Glu Thr Val Ser Asp Asp Ile Asp Gly Gly Ala Gly 1100 1105 1110 Leu Asp Thr Val Asp Tyr Ser Ala Met Ile His Pro Gly Arg Ile 1115 1120 1125 Val Ala Pro His Glu Tyr Gly Phe Gly Ile Glu Ala Asp Leu Ser 1130 1135 1140 Arg Glu Trp Val Arg Lys Ala Ser Ala Leu Gly Val Asp Tyr Tyr 1145 1150 1155 Asp Asn Val Arg Asn Val Glu Asn Val Ile Gly Thr Ser Met Lys 1160 1165 1170 Asp Val Leu Ile Gly Asp Ala Gln Ala Asn Thr Leu Met Gly Gln 1175 1180 1185 Gly Gly Asp Asp Thr Val Arg Gly Gly Asp Gly Asp Asp Leu Leu 1190 1195 1200 Phe Gly Gly Asp Gly Asn Asp Met Leu Tyr Gly Asp Ala Gly Asn 1205 1210 1215 Asp Thr Leu Tyr Gly Gly Leu Gly Asp Asp Thr Leu Glu Gly Gly 1220 1225 1230 Ala Gly Asn Asp Trp Phe Gly Gln Thr Gln Ala Arg Glu His Asp 1235 1240 1245 Val Leu Arg Gly Gly Asp Gly Val Asp Thr Val Asp Tyr Ser Gln 1250 1255 1260 Thr Gly Ala His Ala Gly Ile Ala Ala Gly Arg Ile Gly Leu Gly 1265 1270 1275 Ile Leu Ala Asp Leu Gly Ala Gly Arg Val Asp Lys Leu Gly Glu 1280 1285 1290 Ala Gly Ser Ser Ala Tyr Asp Thr Val Ser Gly Ile Glu Asn Val 1295 1300 1305 Val Gly Thr Glu Leu Ala Asp Arg Ile Thr Gly Asp Ala Gln Ala 1310 1315 1320 Asn Val Leu Arg Gly Ala Gly Gly Ala Asp Val Leu Ala Gly Gly 1325 1330 1335 Glu Gly Asp Asp Val Leu Leu Gly Gly Asp Gly Asp Asp Gln Leu 1340 1345 1350 Ser Gly Asp Ala Gly Arg Asp Arg Leu Tyr Gly Glu Ala Gly Asp 1355 1360 1365 Asp Trp Phe Phe Gln Asp Ala Ala Asn Ala Gly Asn Leu Leu Asp 1370 1375 1380 Gly Gly Asp Gly Arg Asp Thr Val Asp Phe Ser Gly Pro Gly Arg 1385 1390 1395 Gly Leu Asp Ala Gly Ala Lys Gly Val Phe Leu Ser Leu Gly Lys 1400 1405 1410 Gly Phe Ala Ser Leu Met Asp Glu Pro Glu Thr Ser Asn Val Leu 1415 1420 1425 Arg Asn Ile Glu Asn Ala Val Gly Ser Ala Arg Asp Asp Val Leu 1430 1435 1440 Ile Gly Asp Ala Gly Ala Asn Val Leu Asn Gly Leu Ala Gly Asn 1445 1450 1455 Asp Val Leu Ser Gly Gly Ala Gly Asp Asp Val Leu Leu Gly Asp 1460 1465 1470 Glu Gly Ser Asp Leu Leu Ser Gly Asp Ala Gly Asn Asp Asp Leu 1475 1480 1485 Phe Gly Gly Gln Gly Asp Asp Thr Tyr Leu Phe Gly Val Gly Tyr 1490 1495 1500 Gly His Asp Thr Ile Tyr Glu Ser Gly Gly Gly His Asp Thr Ile 1505 1510 1515 Arg Ile Asn Ala Gly Ala Asp Gln Leu Trp Phe Ala Arg Gln Gly 1520 1525 1530 Asn Asp Leu Glu Ile Arg Ile Leu Gly Thr Asp Asp Ala Leu Thr 1535 1540 1545 Val His Asp Trp Tyr Arg Asp Ala Asp His Arg Val Glu Ile Ile 1550 1555 1560 His Ala Ala Asn Gln Ala Val Asp Gln Ala Gly Ile Glu Lys Leu 1565 1570 1575 Val Glu Ala Met Ala Gln Tyr Pro Asp Pro Gly Ala Ala Ala Ala 1580 1585 1590 Ala Pro Pro Ala Ala Arg Val Pro Asp Thr Leu Met Gln Ser Leu 1595 1600 1605 Ala Val Asn Trp Arg 1610 <210> 14 <211> 1503 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Polypeptide 1-183 + 387-1706 of SEQ ID NO:4 <400> 14 Met Gln Gln Ser His Gln Ala Gly Tyr Ala Asn Ala Ala Asp Arg Glu 1 5 10 15 Ser Gly Ile Pro Ala Ala Val Leu Asp Gly Ile Lys Ala Val Ala Lys 20 25 30 Glu Lys Asn Ala Thr Leu Met Phe Arg Leu Val Asn Pro His Ser Thr 35 40 45 Ser Leu Ile Ala Glu Gly Val Ala Thr Lys Gly Leu Gly Val His Ala 50 55 60 Lys Ser Ser Asp Trp Gly Leu Gln Ala Gly Tyr Ile Pro Val Asn Pro 65 70 75 80 Asn Leu Ser Lys Leu Phe Gly Arg Ala Pro Glu Val Ile Ala Arg Ala 85 90 95 Asp Asn Asp Val Asn Ser Ser Leu Ala His Gly His Thr Ala Val Asp 100 105 110 Leu Thr Leu Ser Lys Glu Arg Leu Asp Tyr Leu Arg Gln Ala Gly Leu 115 120 125 Val Thr Gly Met Ala Asp Gly Val Val Ala Ser Asn His Ala Gly Tyr 130 135 140 Glu Gln Phe Glu Phe Arg Val Lys Glu Thr Ser Asp Gly Arg Tyr Ala 145 150 155 160 Val Gln Tyr Arg Arg Lys Gly Gly Asp Asp Phe Glu Ala Val Lys Val 165 170 175 Ile Gly Asn Ala Ala Gly Ile Pro Gly Leu Arg Arg Pro Ser Leu Gly 180 185 190 Ala Val Glu Arg Gln Asp Ser Gly Tyr Asp Ser Leu Asp Gly Val Gly 195 200 205 Ser Arg Ser Phe Ser Leu Gly Glu Val Ser Asp Met Ala Ala Val Glu 210 215 220 Ala Ala Glu Leu Glu Met Thr Arg Gln Val Leu His Ala Gly Ala Arg 225 230 235 240 Gln Asp Asp Ala Glu Pro Gly Val Ser Gly Ala Ser Ala His Trp Gly 245 250 255 Gln Arg Ala Leu Gln Gly Ala Gln Ala Val Ala Ala Ala Gln Arg Leu 260 265 270 Val His Ala Ile Ala Leu Met Thr Gln Phe Gly Arg Ala Gly Ser Thr 275 280 285 Asn Thr Pro Gln Glu Ala Ala Ser Leu Ser Ala Ala Val Phe Gly Leu 290 295 300 Gly Glu Ala Ser Ser Ala Val Ala Glu Thr Val Ser Gly Phe Phe Arg 305 310 315 320 Gly Ser Ser Arg Trp Ala Gly Gly Phe Gly Val Ala Gly Gly Ala Met 325 330 335 Ala Leu Gly Gly Gly Ile Ala Ala Ala Val Gly Ala Gly Met Ser Leu 340 345 350 Thr Asp Asp Ala Pro Ala Gly Gln Lys Ala Ala Ala Gly Ala Glu Ile 355 360 365 Ala Leu Gln Leu Thr Gly Gly Thr Val Glu Leu Ala Ser Ser Ile Ala 370 375 380 Leu Ala Leu Ala Ala Ala Arg Gly Val Thr Ser Gly Leu Gln Val Ala 385 390 395 400 Gly Ala Ser Ala Gly Ala Ala Ala Gly Ala Leu Ala Ala Ala Leu Ser 405 410 415 Pro Met Glu Ile Tyr Gly Leu Val Gln Gln Ser His Tyr Ala Asp Gln 420 425 430 Leu Asp Lys Leu Ala Gln Glu Ser Ser Ala Tyr Gly Tyr Glu Gly Asp 435 440 445 Ala Leu Leu Ala Gln Leu Tyr Arg Asp Lys Thr Ala Ala Glu Gly Ala 450 455 460 Val Ala Gly Val Ser Ala Val Leu Ser Thr Val Gly Ala Ala Val Ser 465 470 475 480 Ile Ala Ala Ala Ala Ser Val Val Gly Ala Pro Val Ala Val Val Thr 485 490 495 Ser Leu Leu Thr Gly Ala Leu Asn Gly Ile Leu Arg Gly Val Gln Gln 500 505 510 Pro Ile Ile Glu Lys Leu Ala Asn Asp Tyr Ala Arg Lys Ile Asp Glu 515 520 525 Leu Gly Gly Pro Gln Ala Tyr Phe Glu Lys Asn Leu Gln Ala Arg His 530 535 540 Glu Gln Leu Ala Asn Ser Asp Gly Leu Arg Lys Met Leu Ala Asp Leu 545 550 555 560 Gln Ala Gly Trp Asn Ala Ser Ser Val Ile Gly Val Gln Thr Thr Glu 565 570 575 Ile Ser Lys Ser Ala Leu Glu Leu Ala Ala Ile Thr Gly Asn Ala Asp 580 585 590 Asn Leu Lys Ser Val Asp Val Phe Val Asp Arg Phe Val Gln Gly Glu 595 600 605 Arg Val Ala Gly Gln Pro Val Val Leu Asp Val Ala Ala Gly Gly Ile 610 615 620 Asp Ile Ala Ser Arg Lys Gly Glu Arg Pro Ala Leu Thr Phe Ile Thr 625 630 635 640 Pro Leu Ala Ala Pro Gly Glu Glu Gln Arg Arg Arg Thr Lys Thr Gly 645 650 655 Lys Ser Glu Phe Thr Thr Phe Val Glu Ile Val Gly Lys Gln Asp Arg 660 665 670 Trp Arg Ile Arg Asp Gly Ala Ala Asp Thr Thr Ile Asp Leu Ala Lys 675 680 685 Val Val Ser Gln Leu Val Asp Ala Asn Gly Val Leu Lys His Ser Ile 690 695 700 Lys Leu Asp Val Ile Gly Gly Asp Gly Asp Asp Val Val Leu Ala Asn 705 710 715 720 Ala Ser Arg Ile His Tyr Asp Gly Gly Ala Gly Thr Asn Thr Val Ser 725 730 735 Tyr Ala Ala Leu Gly Arg Gln Asp Ser Ile Thr Val Ser Ala Asp Gly 740 745 750 Glu Arg Phe Asn Val Arg Lys Gln Leu Asn Asn Ala Asn Val Tyr Arg 755 760 765 Glu Gly Val Ala Thr Gln Thr Thr Ala Tyr Gly Lys Arg Thr Glu Asn 770 775 780 Val Gln Tyr Arg His Val Glu Leu Ala Arg Val Gly Gln Leu Val Glu 785 790 795 800 Val Asp Thr Leu Glu His Val Gln His Ile Ile Gly Gly Ala Gly Asn 805 810 815 Asp Ser Ile Thr Gly Asn Ala His Asp Asn Phe Leu Ala Gly Gly Ser 820 825 830 Gly Asp Asp Arg Leu Asp Gly Gly Ala Gly Asn Asp Thr Leu Val Gly 835 840 845 Gly Glu Gly Gln Asn Thr Val Ile Gly Gly Ala Gly Asp Asp Val Phe 850 855 860 Leu Gln Asp Leu Gly Val Trp Ser Asn Gln Leu Asp Gly Gly Ala Gly 865 870 875 880 Val Asp Thr Val Lys Tyr Asn Val His Gln Pro Ser Glu Glu Arg Leu 885 890 895 Glu Arg Met Gly Asp Thr Gly Ile His Ala Asp Leu Gln Lys Gly Thr 900 905 910 Val Glu Lys Trp Pro Ala Leu Asn Leu Phe Ser Val Asp His Val Lys 915 920 925 Asn Ile Glu Asn Leu His Gly Ser Arg Leu Asn Asp Arg Ile Ala Gly 930 935 940 Asp Asp Gln Asp Asn Glu Leu Trp Gly His Asp Gly Asn Asp Thr Ile 945 950 955 960 Arg Gly Arg Gly Gly Asp Asp Ile Leu Arg Gly Gly Leu Gly Leu Asp 965 970 975 Thr Leu Tyr Gly Glu Asp Gly Asn Asp Ile Phe Leu Gln Asp Asp Glu 980 985 990 Thr Val Ser Asp Asp Ile Asp Gly Gly Ala Gly Leu Asp Thr Val Asp 995 1000 1005 Tyr Ser Ala Met Ile His Pro Gly Arg Ile Val Ala Pro His Glu 1010 1015 1020 Tyr Gly Phe Gly Ile Glu Ala Asp Leu Ser Arg Glu Trp Val Arg 1025 1030 1035 Lys Ala Ser Ala Leu Gly Val Asp Tyr Tyr Asp Asn Val Arg Asn 1040 1045 1050 Val Glu Asn Val Ile Gly Thr Ser Met Lys Asp Val Leu Ile Gly 1055 1060 1065 Asp Ala Gln Ala Asn Thr Leu Met Gly Gln Gly Gly Asp Asp Thr 1070 1075 1080 Val Arg Gly Gly Asp Gly Asp Asp Leu Leu Phe Gly Gly Asp Gly 1085 1090 1095 Asn Asp Met Leu Tyr Gly Asp Ala Gly Asn Asp Thr Leu Tyr Gly 1100 1105 1110 Gly Leu Gly Asp Asp Thr Leu Glu Gly Gly Ala Gly Asn Asp Trp 1115 1120 1125 Phe Gly Gln Thr Gln Ala Arg Glu His Asp Val Leu Arg Gly Gly 1130 1135 1140 Asp Gly Val Asp Thr Val Asp Tyr Ser Gln Thr Gly Ala His Ala 1145 1150 1155 Gly Ile Ala Ala Gly Arg Ile Gly Leu Gly Ile Leu Ala Asp Leu 1160 1165 1170 Gly Ala Gly Arg Val Asp Lys Leu Gly Glu Ala Gly Ser Ser Ala 1175 1180 1185 Tyr Asp Thr Val Ser Gly Ile Glu Asn Val Val Gly Thr Glu Leu 1190 1195 1200 Ala Asp Arg Ile Thr Gly Asp Ala Gln Ala Asn Val Leu Arg Gly 1205 1210 1215 Ala Gly Gly Ala Asp Val Leu Ala Gly Gly Glu Gly Asp Asp Val 1220 1225 1230 Leu Leu Gly Gly Asp Gly Asp Asp Gln Leu Ser Gly Asp Ala Gly 1235 1240 1245 Arg Asp Arg Leu Tyr Gly Glu Ala Gly Asp Asp Trp Phe Phe Gln 1250 1255 1260 Asp Ala Ala Asn Ala Gly Asn Leu Leu Asp Gly Gly Asp Gly Arg 1265 1270 1275 Asp Thr Val Asp Phe Ser Gly Pro Gly Arg Gly Leu Asp Ala Gly 1280 1285 1290 Ala Lys Gly Val Phe Leu Ser Leu Gly Lys Gly Phe Ala Ser Leu 1295 1300 1305 Met Asp Glu Pro Glu Thr Ser Asn Val Leu Arg Asn Ile Glu Asn 1310 1315 1320 Ala Val Gly Ser Ala Arg Asp Asp Val Leu Ile Gly Asp Ala Gly 1325 1330 1335 Ala Asn Val Leu Asn Gly Leu Ala Gly Asn Asp Val Leu Ser Gly 1340 1345 1350 Gly Ala Gly Asp Asp Val Leu Leu Gly Asp Glu Gly Ser Asp Leu 1355 1360 1365 Leu Ser Gly Asp Ala Gly Asn Asp Asp Leu Phe Gly Gly Gln Gly 1370 1375 1380 Asp Asp Thr Tyr Leu Phe Gly Val Gly Tyr Gly His Asp Thr Ile 1385 1390 1395 Tyr Glu Ser Gly Gly Gly His Asp Thr Ile Arg Ile Asn Ala Gly 1400 1405 1410 Ala Asp Gln Leu Trp Phe Ala Arg Gln Gly Asn Asp Leu Glu Ile 1415 1420 1425 Arg Ile Leu Gly Thr Asp Asp Ala Leu Thr Val His Asp Trp Tyr 1430 1435 1440 Arg Asp Ala Asp His Arg Val Glu Ile Ile His Ala Ala Asn Gln 1445 1450 1455 Ala Val Asp Gln Ala Gly Ile Glu Lys Leu Val Glu Ala Met Ala 1460 1465 1470 Gln Tyr Pro Asp Pro Gly Ala Ala Ala Ala Ala Pro Pro Ala Ala 1475 1480 1485 Arg Val Pro Asp Thr Leu Met Gln Ser Leu Ala Val Asn Trp Arg 1490 1495 1500 <210> 15 <211> 1613 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Polypeptide 1-227 + 321-1706 of SEQ ID NO:6 <400> 15 Met Gln Gln Ser His Gln Ala Gly Tyr Ala Asn Ala Ala Asp Arg Glu 1 5 10 15 Ser Gly Ile Pro Ala Ala Val Leu Asp Gly Ile Lys Ala Val Ala Lys 20 25 30 Glu Lys Asn Ala Thr Leu Met Phe Arg Leu Val Asn Pro His Ser Thr 35 40 45 Ser Leu Ile Ala Glu Gly Val Ala Thr Lys Gly Leu Gly Val His Ala 50 55 60 Lys Ser Ser Asp Trp Gly Leu Gln Ala Gly Tyr Ile Pro Val Asn Pro 65 70 75 80 Asn Leu Ser Lys Leu Phe Gly Arg Ala Pro Glu Val Ile Ala Arg Ala 85 90 95 Asp Asn Asp Val Asn Ser Ser Leu Ala His Gly His Thr Ala Val Asp 100 105 110 Leu Thr Leu Ser Lys Glu Arg Leu Asp Tyr Leu Arg Gln Ala Gly Leu 115 120 125 Val Thr Gly Met Ala Asp Gly Val Val Ala Ser Asn His Ala Gly Tyr 130 135 140 Glu Gln Phe Glu Phe Arg Val Lys Glu Thr Ser Asp Gly Arg Tyr Ala 145 150 155 160 Val Gln Tyr Arg Arg Lys Gly Gly Asp Asp Phe Glu Ala Val Lys Val 165 170 175 Ile Gly Asn Ala Ala Gly Ile Pro Leu Thr Ala Asp Ile Asp Met Phe 180 185 190 Ala Ile Met Pro His Leu Ser Asn Phe Arg Asp Ser Ala Arg Ser Ser 195 200 205 Val Thr Ser Gly Asp Ser Val Thr Asp Tyr Leu Ala Arg Thr Arg Arg 210 215 220 Ala Ala Ser Glu Ser Gln Met Leu Thr Arg Gly Gln Leu Lys Glu Tyr 225 230 235 240 Ile Gly Gln Gln Arg Gly Glu Gly Tyr Val Phe Tyr Glu Asn Arg Ala 245 250 255 Tyr Gly Val Ala Gly Lys Ser Leu Phe Asp Asp Gly Leu Gly Ala Ala 260 265 270 Pro Gly Val Pro Gly Gly Arg Ser Lys Ser Ser Pro Asp Val Leu Glu 275 280 285 Thr Val Pro Ala Ser Pro Gly Leu Arg Arg Pro Ser Leu Gly Ala Val 290 295 300 Glu Arg Gln Asp Ser Gly Tyr Asp Ser Leu Asp Gly Val Gly Ser Arg 305 310 315 320 Ser Phe Ser Leu Gly Glu Val Ser Asp Met Ala Ala Val Glu Ala Ala 325 330 335 Glu Leu Glu Met Thr Arg Gln Val Leu His Ala Gly Ala Arg Gln Asp 340 345 350 Asp Ala Glu Pro Gly Val Ser Gly Ala Ser Ala His Trp Gly Gln Arg 355 360 365 Ala Leu Gln Gly Ala Gln Ala Val Ala Ala Ala Gln Arg Leu Val His 370 375 380 Ala Ile Ala Leu Met Thr Gln Phe Gly Arg Ala Gly Ser Thr Asn Thr 385 390 395 400 Pro Gln Glu Ala Ala Ser Leu Ser Ala Ala Val Phe Gly Leu Gly Glu 405 410 415 Ala Ser Ser Ala Val Ala Glu Thr Val Ser Gly Phe Phe Arg Gly Ser 420 425 430 Ser Arg Trp Ala Gly Gly Phe Gly Val Ala Gly Gly Ala Met Ala Leu 435 440 445 Gly Gly Gly Ile Ala Ala Ala Val Gly Ala Gly Met Ser Leu Thr Asp 450 455 460 Asp Ala Pro Ala Gly Gln Lys Ala Ala Val Gly Ala Glu Ile Ala Leu 465 470 475 480 Gln Leu Thr Gly Gly Thr Val Glu Leu Ala Ser Ser Ile Ala Leu Ala 485 490 495 Leu Ala Ala Ala Arg Gly Val Thr Ser Gly Leu Gln Val Ala Gly Ala 500 505 510 Ser Ala Gly Ala Ala Ala Gly Ala Leu Ala Ala Ala Leu Ser Pro Met 515 520 525 Glu Ile Tyr Gly Leu Val Gln Gln Ser His Tyr Ala Asp Gln Leu Asp 530 535 540 Lys Leu Ala Gln Glu Ser Ser Ala Tyr Gly Tyr Glu Gly Asp Ala Leu 545 550 555 560 Leu Ala Gln Leu Tyr Arg Asp Lys Thr Ala Ala Glu Gly Ala Val Ala 565 570 575 Gly Val Ser Ala Val Leu Ser Thr Val Gly Ala Ala Val Ser Ile Ala 580 585 590 Ala Ala Ala Ser Val Val Gly Ala Pro Val Ala Val Val Thr Ser Leu 595 600 605 Leu Thr Gly Ala Leu Asn Gly Ile Leu Arg Gly Val Gln Gln Pro Ile 610 615 620 Ile Glu Lys Leu Ala Asn Asp Tyr Ala Arg Lys Ile Asp Glu Leu Gly 625 630 635 640 Gly Pro Gln Ala Tyr Phe Glu Lys Asn Leu Gln Ala Arg His Glu Gln 645 650 655 Leu Ala Asn Ser Asp Gly Leu Arg Lys Met Leu Ala Asp Leu Gln Ala 660 665 670 Gly Trp Asn Ala Ser Ser Val Ile Gly Val Gln Thr Thr Glu Ile Ser 675 680 685 Lys Ser Ala Leu Glu Leu Ala Ala Ile Thr Gly Asn Ala Asp Asn Leu 690 695 700 Lys Ser Ala Asp Val Phe Val Asp Arg Phe Ile Gln Gly Glu Arg Val 705 710 715 720 Ala Gly Gln Pro Val Val Leu Asp Val Ala Ala Gly Gly Ile Asp Ile 725 730 735 Ala Ser Arg Lys Gly Glu Arg Pro Ala Leu Thr Phe Ile Thr Pro Leu 740 745 750 Ala Ala Pro Gly Glu Glu Gln Arg Arg Arg Thr Lys Thr Gly Lys Ser 755 760 765 Glu Phe Thr Thr Phe Val Glu Ile Val Gly Lys Gln Asp Arg Trp Arg 770 775 780 Ile Arg Asp Gly Ala Ala Asp Thr Thr Ile Asp Leu Ala Lys Val Val 785 790 795 800 Ser Gln Leu Val Asp Ala Asn Gly Val Leu Lys His Ser Ile Lys Leu 805 810 815 Glu Val Ile Gly Gly Asp Gly Asp Asp Val Val Leu Ala Asn Ala Ser 820 825 830 Arg Ile His Tyr Asp Gly Gly Ala Gly Thr Asn Thr Val Ser Tyr Ala 835 840 845 Ala Leu Gly Arg Gln Asp Ser Ile Thr Val Ser Ala Asp Gly Glu Arg 850 855 860 Phe Asn Val Arg Lys Gln Leu Asn Asn Ala Asn Val Tyr Arg Glu Gly 865 870 875 880 Val Ala Thr Gln Lys Thr Ala Tyr Gly Lys Arg Thr Glu Asn Val Gln 885 890 895 Tyr Arg His Val Glu Leu Ala Arg Val Gly Gln Leu Val Glu Val Asp 900 905 910 Thr Leu Glu His Val Gln His Ile Ile Gly Gly Ala Gly Asn Asp Ser 915 920 925 Ile Thr Gly Asn Ala His Asp Asn Phe Leu Ala Gly Gly Ala Gly Asp 930 935 940 Asp Arg Leu Asp Gly Gly Ala Gly Asn Asp Thr Leu Val Gly Gly Glu 945 950 955 960 Gly His Asn Thr Val Val Gly Gly Ala Gly Asp Asp Val Phe Leu Gln 965 970 975 Asp Leu Gly Val Trp Ser Asn Gln Leu Asp Gly Gly Ala Gly Val Asp 980 985 990 Thr Val Lys Tyr Asn Val His Gln Pro Ser Glu Glu Arg Leu Glu Arg 995 1000 1005 Met Gly Asp Thr Gly Ile His Ala Asp Leu Gln Lys Gly Thr Val 1010 1015 1020 Glu Lys Trp Pro Ala Leu Asn Leu Phe Ser Val Asp His Val Lys 1025 1030 1035 Asn Ile Glu Asn Leu His Gly Ser Ser Leu Asn Asp Ser Ile Ala 1040 1045 1050 Gly Asp Asp Arg Asp Asn Glu Leu Trp Gly Asp Asp Gly Asn Asp 1055 1060 1065 Thr Ile His Gly Arg Gly Gly Asp Asp Ile Leu Arg Gly Gly Leu 1070 1075 1080 Gly Leu Asp Thr Leu Tyr Gly Glu Asp Gly Asn Asp Ile Phe Leu 1085 1090 1095 Gln Asp Asp Glu Thr Val Ser Asp Asp Ile Asp Gly Gly Ala Gly 1100 1105 1110 Leu Asp Thr Val Asp Tyr Ser Ala Met Ile His Ala Gly Lys Ile 1115 1120 1125 Val Ala Pro His Glu Tyr Gly Phe Gly Ile Glu Ala Asp Leu Ser 1130 1135 1140 Glu Gly Trp Val Arg Lys Ala Ala Arg Arg Gly Met Gly Tyr Tyr 1145 1150 1155 Asp Ser Val Arg Ser Val Glu Asn Val Ile Gly Thr Ser Met Lys 1160 1165 1170 Asp Val Leu Ile Gly Asp Ala Gln Ala Asn Thr Leu Met Gly Gln 1175 1180 1185 Gly Gly Asp Asp Thr Val Arg Gly Gly Asp Gly Asp Asp Leu Leu 1190 1195 1200 Phe Gly Gly Asp Gly Asn Asp Met Leu Tyr Gly Asp Ala Gly Asn 1205 1210 1215 Asp Thr Leu Tyr Gly Gly Leu Gly Asp Asp Thr Leu Glu Gly Gly 1220 1225 1230 Ala Gly Asn Asp Trp Phe Gly Gln Thr Pro Ala Arg Glu His Asp 1235 1240 1245 Val Leu Arg Gly Gly Ala Gly Val Asp Thr Val Asp Tyr Ser Gln 1250 1255 1260 Ala Gly Ala His Ala Gly Val Ala Thr Gly Arg Ile Gly Leu Gly 1265 1270 1275 Ile Leu Ala Asp Leu Gly Ala Gly Arg Val Asp Lys Leu Gly Glu 1280 1285 1290 Ala Gly Ser Ser Ala Tyr Asp Thr Val Ser Gly Ile Glu Asn Val 1295 1300 1305 Val Gly Thr Glu Leu Ala Asp Arg Ile Thr Gly Asp Ala Gln Ala 1310 1315 1320 Asn Val Leu Arg Gly Ala Gly Gly Ala Asp Val Leu Ala Gly Gly 1325 1330 1335 Glu Gly Asp Asp Val Leu Leu Gly Gly Glu Gly Asp Asp Gln Leu 1340 1345 1350 Ser Gly Asp Ala Gly Arg Asp Arg Leu Tyr Gly Glu Ala Gly Asp 1355 1360 1365 Asp Trp Phe Phe Gln Asp Ala Ala Asn Ala Gly Asn Leu Leu Asp 1370 1375 1380 Gly Gly Asp Gly Asn Asp Thr Val Asp Phe Ser Gly Pro Gly Arg 1385 1390 1395 Gly Leu Asp Ala Gly Ala Lys Gly Val Phe Leu Ser Leu Gly Lys 1400 1405 1410 Gly Phe Ala Ser Leu Met Asp Glu Pro Glu Thr Ser Asn Val Leu 1415 1420 1425 Arg His Ile Glu Asn Ala Val Gly Ser Val Arg Asp Asp Val Leu 1430 1435 1440 Ile Gly Asp Ala Gly Ala Asn Val Leu Asn Gly Leu Ala Gly Asn 1445 1450 1455 Asp Val Leu Ser Gly Gly Ala Gly Asp Asp Val Leu Leu Gly Asp 1460 1465 1470 Glu Gly Ser Asp Leu Leu Ser Gly Asp Ala Gly Asn Asp Asp Leu 1475 1480 1485 Phe Gly Gly Gln Gly Asp Asp Thr Tyr Leu Phe Gly Ala Gly Tyr 1490 1495 1500 Gly His Asp Thr Ile Tyr Glu Ser Gly Gly Gly His Asp Thr Ile 1505 1510 1515 Arg Ile Asn Ala Gly Ala Asp Gln Leu Trp Phe Ala Arg Gln Gly 1520 1525 1530 Asn Asp Leu Glu Ile Arg Ile Leu Gly Thr Asp Asp Ala Leu Thr 1535 1540 1545 Val His Asp Trp Tyr Arg Asp Ala Asp His Arg Val Glu Ala Ile 1550 1555 1560 His Ala Ala Asn Gln Ala Ile Asp Pro Ala Gly Ile Glu Lys Leu 1565 1570 1575 Val Glu Ala Met Ala Gln Tyr Pro Asp Pro Gly Ala Ala Ala Ala 1580 1585 1590 Ala Pro Pro Ala Ala Arg Val Pro Asp Thr Leu Met Gln Ser Leu 1595 1600 1605 Ala Val Asn Trp Arg 1610 <210> 16 <211> 1503 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Polypeptide 1-183 + 387-1706 of SEQ ID NO:6 <400> 16 Met Gln Gln Ser His Gln Ala Gly Tyr Ala Asn Ala Ala Asp Arg Glu 1 5 10 15 Ser Gly Ile Pro Ala Ala Val Leu Asp Gly Ile Lys Ala Val Ala Lys 20 25 30 Glu Lys Asn Ala Thr Leu Met Phe Arg Leu Val Asn Pro His Ser Thr 35 40 45 Ser Leu Ile Ala Glu Gly Val Ala Thr Lys Gly Leu Gly Val His Ala 50 55 60 Lys Ser Ser Asp Trp Gly Leu Gln Ala Gly Tyr Ile Pro Val Asn Pro 65 70 75 80 Asn Leu Ser Lys Leu Phe Gly Arg Ala Pro Glu Val Ile Ala Arg Ala 85 90 95 Asp Asn Asp Val Asn Ser Ser Leu Ala His Gly His Thr Ala Val Asp 100 105 110 Leu Thr Leu Ser Lys Glu Arg Leu Asp Tyr Leu Arg Gln Ala Gly Leu 115 120 125 Val Thr Gly Met Ala Asp Gly Val Val Ala Ser Asn His Ala Gly Tyr 130 135 140 Glu Gln Phe Glu Phe Arg Val Lys Glu Thr Ser Asp Gly Arg Tyr Ala 145 150 155 160 Val Gln Tyr Arg Arg Lys Gly Gly Asp Asp Phe Glu Ala Val Lys Val 165 170 175 Ile Gly Asn Ala Ala Gly Ile Pro Gly Leu Arg Arg Pro Ser Leu Gly 180 185 190 Ala Val Glu Arg Gln Asp Ser Gly Tyr Asp Ser Leu Asp Gly Val Gly 195 200 205 Ser Arg Ser Phe Ser Leu Gly Glu Val Ser Asp Met Ala Ala Val Glu 210 215 220 Ala Ala Glu Leu Glu Met Thr Arg Gln Val Leu His Ala Gly Ala Arg 225 230 235 240 Gln Asp Asp Ala Glu Pro Gly Val Ser Gly Ala Ser Ala His Trp Gly 245 250 255 Gln Arg Ala Leu Gln Gly Ala Gln Ala Val Ala Ala Ala Gln Arg Leu 260 265 270 Val His Ala Ile Ala Leu Met Thr Gln Phe Gly Arg Ala Gly Ser Thr 275 280 285 Asn Thr Pro Gln Glu Ala Ala Ser Leu Ser Ala Ala Val Phe Gly Leu 290 295 300 Gly Glu Ala Ser Ser Ala Val Ala Glu Thr Val Ser Gly Phe Phe Arg 305 310 315 320 Gly Ser Ser Arg Trp Ala Gly Gly Phe Gly Val Ala Gly Gly Ala Met 325 330 335 Ala Leu Gly Gly Gly Ile Ala Ala Ala Val Gly Ala Gly Met Ser Leu 340 345 350 Thr Asp Asp Ala Pro Ala Gly Gln Lys Ala Ala Val Gly Ala Glu Ile 355 360 365 Ala Leu Gln Leu Thr Gly Gly Thr Val Glu Leu Ala Ser Ser Ile Ala 370 375 380 Leu Ala Leu Ala Ala Ala Arg Gly Val Thr Ser Gly Leu Gln Val Ala 385 390 395 400 Gly Ala Ser Ala Gly Ala Ala Ala Gly Ala Leu Ala Ala Ala Leu Ser 405 410 415 Pro Met Glu Ile Tyr Gly Leu Val Gln Gln Ser His Tyr Ala Asp Gln 420 425 430 Leu Asp Lys Leu Ala Gln Glu Ser Ser Ala Tyr Gly Tyr Glu Gly Asp 435 440 445 Ala Leu Leu Ala Gln Leu Tyr Arg Asp Lys Thr Ala Ala Glu Gly Ala 450 455 460 Val Ala Gly Val Ser Ala Val Leu Ser Thr Val Gly Ala Ala Val Ser 465 470 475 480 Ile Ala Ala Ala Ala Ser Val Val Gly Ala Pro Val Ala Val Val Thr 485 490 495 Ser Leu Leu Thr Gly Ala Leu Asn Gly Ile Leu Arg Gly Val Gln Gln 500 505 510 Pro Ile Ile Glu Lys Leu Ala Asn Asp Tyr Ala Arg Lys Ile Asp Glu 515 520 525 Leu Gly Gly Pro Gln Ala Tyr Phe Glu Lys Asn Leu Gln Ala Arg His 530 535 540 Glu Gln Leu Ala Asn Ser Asp Gly Leu Arg Lys Met Leu Ala Asp Leu 545 550 555 560 Gln Ala Gly Trp Asn Ala Ser Ser Val Ile Gly Val Gln Thr Thr Glu 565 570 575 Ile Ser Lys Ser Ala Leu Glu Leu Ala Ala Ile Thr Gly Asn Ala Asp 580 585 590 Asn Leu Lys Ser Ala Asp Val Phe Val Asp Arg Phe Ile Gln Gly Glu 595 600 605 Arg Val Ala Gly Gln Pro Val Val Leu Asp Val Ala Ala Gly Gly Ile 610 615 620 Asp Ile Ala Ser Arg Lys Gly Glu Arg Pro Ala Leu Thr Phe Ile Thr 625 630 635 640 Pro Leu Ala Ala Pro Gly Glu Glu Gln Arg Arg Arg Thr Lys Thr Gly 645 650 655 Lys Ser Glu Phe Thr Thr Phe Val Glu Ile Val Gly Lys Gln Asp Arg 660 665 670 Trp Arg Ile Arg Asp Gly Ala Ala Asp Thr Thr Ile Asp Leu Ala Lys 675 680 685 Val Val Ser Gln Leu Val Asp Ala Asn Gly Val Leu Lys His Ser Ile 690 695 700 Lys Leu Glu Val Ile Gly Gly Asp Gly Asp Asp Val Val Leu Ala Asn 705 710 715 720 Ala Ser Arg Ile His Tyr Asp Gly Gly Ala Gly Thr Asn Thr Val Ser 725 730 735 Tyr Ala Ala Leu Gly Arg Gln Asp Ser Ile Thr Val Ser Ala Asp Gly 740 745 750 Glu Arg Phe Asn Val Arg Lys Gln Leu Asn Asn Ala Asn Val Tyr Arg 755 760 765 Glu Gly Val Ala Thr Gln Lys Thr Ala Tyr Gly Lys Arg Thr Glu Asn 770 775 780 Val Gln Tyr Arg His Val Glu Leu Ala Arg Val Gly Gln Leu Val Glu 785 790 795 800 Val Asp Thr Leu Glu His Val Gln His Ile Ile Gly Gly Ala Gly Asn 805 810 815 Asp Ser Ile Thr Gly Asn Ala His Asp Asn Phe Leu Ala Gly Gly Ala 820 825 830 Gly Asp Asp Arg Leu Asp Gly Gly Ala Gly Asn Asp Thr Leu Val Gly 835 840 845 Gly Glu Gly His Asn Thr Val Val Gly Gly Ala Gly Asp Asp Val Phe 850 855 860 Leu Gln Asp Leu Gly Val Trp Ser Asn Gln Leu Asp Gly Gly Ala Gly 865 870 875 880 Val Asp Thr Val Lys Tyr Asn Val His Gln Pro Ser Glu Glu Arg Leu 885 890 895 Glu Arg Met Gly Asp Thr Gly Ile His Ala Asp Leu Gln Lys Gly Thr 900 905 910 Val Glu Lys Trp Pro Ala Leu Asn Leu Phe Ser Val Asp His Val Lys 915 920 925 Asn Ile Glu Asn Leu His Gly Ser Ser Leu Asn Asp Ser Ile Ala Gly 930 935 940 Asp Asp Arg Asp Asn Glu Leu Trp Gly Asp Asp Gly Asn Asp Thr Ile 945 950 955 960 His Gly Arg Gly Gly Asp Asp Ile Leu Arg Gly Gly Leu Gly Leu Asp 965 970 975 Thr Leu Tyr Gly Glu Asp Gly Asn Asp Ile Phe Leu Gln Asp Asp Glu 980 985 990 Thr Val Ser Asp Asp Ile Asp Gly Gly Ala Gly Leu Asp Thr Val Asp 995 1000 1005 Tyr Ser Ala Met Ile His Ala Gly Lys Ile Val Ala Pro His Glu 1010 1015 1020 Tyr Gly Phe Gly Ile Glu Ala Asp Leu Ser Glu Gly Trp Val Arg 1025 1030 1035 Lys Ala Ala Arg Arg Gly Met Gly Tyr Tyr Asp Ser Val Arg Ser 1040 1045 1050 Val Glu Asn Val Ile Gly Thr Ser Met Lys Asp Val Leu Ile Gly 1055 1060 1065 Asp Ala Gln Ala Asn Thr Leu Met Gly Gln Gly Gly Asp Asp Thr 1070 1075 1080 Val Arg Gly Gly Asp Gly Asp Asp Leu Leu Phe Gly Gly Asp Gly 1085 1090 1095 Asn Asp Met Leu Tyr Gly Asp Ala Gly Asn Asp Thr Leu Tyr Gly 1100 1105 1110 Gly Leu Gly Asp Asp Thr Leu Glu Gly Gly Ala Gly Asn Asp Trp 1115 1120 1125 Phe Gly Gln Thr Pro Ala Arg Glu His Asp Val Leu Arg Gly Gly 1130 1135 1140 Ala Gly Val Asp Thr Val Asp Tyr Ser Gln Ala Gly Ala His Ala 1145 1150 1155 Gly Val Ala Thr Gly Arg Ile Gly Leu Gly Ile Leu Ala Asp Leu 1160 1165 1170 Gly Ala Gly Arg Val Asp Lys Leu Gly Glu Ala Gly Ser Ser Ala 1175 1180 1185 Tyr Asp Thr Val Ser Gly Ile Glu Asn Val Val Gly Thr Glu Leu 1190 1195 1200 Ala Asp Arg Ile Thr Gly Asp Ala Gln Ala Asn Val Leu Arg Gly 1205 1210 1215 Ala Gly Gly Ala Asp Val Leu Ala Gly Gly Glu Gly Asp Asp Val 1220 1225 1230 Leu Leu Gly Gly Glu Gly Asp Asp Gln Leu Ser Gly Asp Ala Gly 1235 1240 1245 Arg Asp Arg Leu Tyr Gly Glu Ala Gly Asp Asp Trp Phe Phe Gln 1250 1255 1260 Asp Ala Ala Asn Ala Gly Asn Leu Leu Asp Gly Gly Asp Gly Asn 1265 1270 1275 Asp Thr Val Asp Phe Ser Gly Pro Gly Arg Gly Leu Asp Ala Gly 1280 1285 1290 Ala Lys Gly Val Phe Leu Ser Leu Gly Lys Gly Phe Ala Ser Leu 1295 1300 1305 Met Asp Glu Pro Glu Thr Ser Asn Val Leu Arg His Ile Glu Asn 1310 1315 1320 Ala Val Gly Ser Val Arg Asp Asp Val Leu Ile Gly Asp Ala Gly 1325 1330 1335 Ala Asn Val Leu Asn Gly Leu Ala Gly Asn Asp Val Leu Ser Gly 1340 1345 1350 Gly Ala Gly Asp Asp Val Leu Leu Gly Asp Glu Gly Ser Asp Leu 1355 1360 1365 Leu Ser Gly Asp Ala Gly Asn Asp Asp Leu Phe Gly Gly Gln Gly 1370 1375 1380 Asp Asp Thr Tyr Leu Phe Gly Ala Gly Tyr Gly His Asp Thr Ile 1385 1390 1395 Tyr Glu Ser Gly Gly Gly His Asp Thr Ile Arg Ile Asn Ala Gly 1400 1405 1410 Ala Asp Gln Leu Trp Phe Ala Arg Gln Gly Asn Asp Leu Glu Ile 1415 1420 1425 Arg Ile Leu Gly Thr Asp Asp Ala Leu Thr Val His Asp Trp Tyr 1430 1435 1440 Arg Asp Ala Asp His Arg Val Glu Ala Ile His Ala Ala Asn Gln 1445 1450 1455 Ala Ile Asp Pro Ala Gly Ile Glu Lys Leu Val Glu Ala Met Ala 1460 1465 1470 Gln Tyr Pro Asp Pro Gly Ala Ala Ala Ala Ala Pro Pro Ala Ala 1475 1480 1485 Arg Val Pro Asp Thr Leu Met Gln Ser Leu Ala Val Asn Trp Arg 1490 1495 1500 <210> 17 <211> 1612 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Polypeptide 1-227 + 321-1705 of SEQ ID NO:8 <400> 17 Met Gln Gln Ser His Gln Ala Gly Tyr Ala Asn Ala Ala Asp Arg Glu 1 5 10 15 Ser Gly Ile Pro Ala Ala Val Leu Asp Gly Ile Lys Ala Val Ala Lys 20 25 30 Glu Lys Asn Ala Thr Leu Met Phe Arg Leu Val Asn Pro His Ser Thr 35 40 45 Ser Leu Ile Ala Glu Gly Val Ala Thr Lys Gly Leu Gly Val His Ala 50 55 60 Lys Ser Ser Asp Trp Gly Leu Gln Ala Gly Tyr Ile Pro Val Asn Pro 65 70 75 80 Asn Leu Ser Lys Leu Phe Gly Arg Ala Pro Glu Val Ile Ala Arg Ala 85 90 95 Asp Asn Asp Val Asn Ser Ser Leu Ala His Gly His Thr Ala Val Asp 100 105 110 Leu Thr Leu Ser Lys Glu Arg Leu Asp Tyr Leu Arg Gln Ala Gly Leu 115 120 125 Val Thr Gly Met Ala Asp Gly Val Val Ala Ser Asn His Ala Gly Tyr 130 135 140 Glu Gln Phe Glu Phe Arg Val Lys Glu Thr Ser Asp Gly Arg Tyr Ala 145 150 155 160 Val Gln Tyr Arg Arg Lys Gly Gly Asp Asp Phe Glu Ala Val Lys Val 165 170 175 Ile Gly Asn Ala Ala Gly Ile Pro Leu Thr Ala Asp Ile Asp Met Phe 180 185 190 Ala Ile Met Pro His Leu Ser Asn Phe Arg Asp Ser Ala Arg Ser Ser 195 200 205 Val Thr Ser Gly Asp Ser Val Thr Asp Tyr Leu Ala Arg Thr Arg Arg 210 215 220 Ala Ala Ser Glu Ser Gln Met Leu Thr Arg Gly Gln Leu Lys Glu Tyr 225 230 235 240 Ile Gly Gln Gln Arg Gly Glu Gly Tyr Val Phe Tyr Glu Asn Arg Ala 245 250 255 Tyr Gly Val Ala Gly Lys Ser Leu Phe Asp Asp Gly Leu Gly Ala Ala 260 265 270 Pro Gly Val Pro Gly Arg Arg Ser Lys Ser Ser Pro Asp Val Leu Glu 275 280 285 Thr Val Pro Ala Ser Pro Gly Leu Arg Arg Pro Ser Leu Gly Ala Val 290 295 300 Glu Arg Gln Asp Ser Gly Tyr Asp Ser Leu Asp Gly Val Gly Ser Arg 305 310 315 320 Ser Phe Ser Leu Gly Glu Val Ser Asp Met Ala Ala Val Glu Ala Ala 325 330 335 Glu Leu Glu Met Thr Arg Gln Val Leu His Ala Gly Ala Arg Gln Asp 340 345 350 Asp Ala Glu Pro Gly Val Ser Gly Ala Ser Ala His Trp Gly Gln Arg 355 360 365 Ala Leu Gln Gly Ala Gln Ala Val Ala Ala Ala Gln Arg Leu Val His 370 375 380 Ala Ile Ala Leu Met Thr Gln Phe Gly Arg Ala Gly Ser Thr Asn Thr 385 390 395 400 Pro Gln Glu Ala Ala Ser Leu Ser Ala Ala Val Phe Gly Leu Gly Glu 405 410 415 Ala Ser Ser Ala Val Ala Glu Thr Val Ser Gly Phe Phe Arg Gly Ser 420 425 430 Ser Arg Trp Ala Gly Gly Phe Gly Val Ala Gly Gly Ala Met Ala Leu 435 440 445 Gly Gly Gly Ile Gly Ala Val Gly Ala Gly Met Ser Leu Thr Asp Asp 450 455 460 Ala Pro Ala Gly Gln Lys Ala Ala Ala Gly Ala Glu Ile Ala Leu Gln 465 470 475 480 Leu Thr Gly Gly Thr Val Glu Leu Ala Ser Ser Ile Ala Leu Ala Leu 485 490 495 Ala Ala Ala Arg Gly Val Thr Ser Gly Leu Gln Val Ala Gly Ala Ser 500 505 510 Ala Gly Ala Ala Ala Gly Ala Leu Ala Ala Ala Leu Ser Pro Met Glu 515 520 525 Ile Tyr Gly Leu Val Gln Gln Ser His Tyr Ala Asp Gln Leu Asp Lys 530 535 540 Leu Ala Gln Glu Ser Ser Ala Tyr Gly Tyr Glu Gly Asp Ala Leu Leu 545 550 555 560 Ala Gln Leu Tyr Arg Asp Lys Thr Ala Ala Glu Gly Ala Val Ala Gly 565 570 575 Val Ser Ala Val Leu Ser Thr Val Gly Ala Ala Val Ser Ile Ala Ala 580 585 590 Ala Ala Ser Val Val Gly Ala Pro Val Ala Val Val Thr Ser Leu Leu 595 600 605 Thr Gly Ala Leu Asn Gly Ile Leu Arg Gly Val Gln Gln Pro Ile Ile 610 615 620 Glu Lys Leu Ala Asn Asp Tyr Ala Arg Lys Ile Asp Glu Leu Gly Gly 625 630 635 640 Pro Gln Ala Tyr Phe Glu Lys Asn Leu Gln Ala Arg His Glu Gln Leu 645 650 655 Ala Asn Ser Asp Gly Leu Arg Lys Met Leu Ala Asp Leu Gln Ala Gly 660 665 670 Trp Asn Ala Ser Ser Val Ile Gly Val Gln Thr Thr Glu Ile Ser Lys 675 680 685 Ser Ala Leu Glu Leu Ala Ala Ile Thr Gly Asn Ala Asp Asn Leu Lys 690 695 700 Ser Ala Asp Val Phe Val Asp Arg Phe Ile Gln Gly Glu Arg Val Ala 705 710 715 720 Gly Gln Pro Val Val Leu Asp Val Ala Ala Gly Gly Ile Asp Ile Ala 725 730 735 Ser Arg Lys Gly Glu Arg Pro Ala Leu Thr Phe Ile Thr Pro Leu Ala 740 745 750 Ala Pro Gly Glu Glu Gln Arg Arg Arg Thr Lys Thr Gly Lys Ser Glu 755 760 765 Phe Thr Thr Phe Val Glu Ile Val Gly Lys Gln Asp Arg Trp Arg Ile 770 775 780 Arg Asp Gly Ala Ala Asp Thr Thr Ile Asp Leu Ala Lys Val Val Ser 785 790 795 800 Gln Leu Val Asp Ala Asn Gly Val Leu Lys His Ser Ile Lys Leu Glu 805 810 815 Val Ile Gly Gly Asp Gly Asp Asp Val Val Leu Ala Asn Ala Ser Arg 820 825 830 Ile His Tyr Asp Gly Gly Ala Gly Thr Asn Thr Val Ser Tyr Ala Ala 835 840 845 Leu Gly Arg Gln Asp Ser Ile Thr Val Ser Ala Asp Gly Glu Arg Phe 850 855 860 Asn Val Arg Lys Gln Leu Asn Asn Ala Asn Val Tyr Arg Glu Gly Val 865 870 875 880 Ala Thr Gln Lys Thr Ala Tyr Gly Lys Arg Thr Glu Asn Val Gln Tyr 885 890 895 Arg His Val Glu Leu Ala Arg Val Gly Gln Leu Val Glu Val Asp Thr 900 905 910 Leu Glu His Val Gln His Ile Ile Gly Gly Ala Gly Asn Asp Ser Ile 915 920 925 Thr Gly Asn Ala His Asp Asn Phe Leu Ala Gly Gly Ala Gly Asp Asp 930 935 940 Arg Leu Asp Gly Gly Ala Gly Asn Asp Thr Leu Val Gly Gly Glu Gly 945 950 955 960 His Asn Thr Val Val Gly Gly Ala Gly Asp Asp Val Phe Leu Gln Asp 965 970 975 Leu Gly Val Trp Ser Asn Gln Leu Asp Gly Gly Ala Gly Val Asp Thr 980 985 990 Val Lys Tyr Asn Val His Gln Pro Ser Glu Glu Arg Leu Glu Arg Met 995 1000 1005 Gly Asp Thr Gly Ile His Ala Asp Leu Gln Lys Gly Thr Val Glu 1010 1015 1020 Lys Trp Pro Ala Leu Asn Leu Phe Ser Val Asp His Val Lys Asn 1025 1030 1035 Ile Glu Asn Leu His Gly Ser Ser Leu Asn Asp Ser Ile Ala Gly 1040 1045 1050 Asp Asp Arg Asp Asn Glu Leu Trp Gly Asp Asp Gly Asn Asp Thr 1055 1060 1065 Ile His Gly Arg Gly Gly Asp Asp Ile Leu Arg Gly Gly Leu Gly 1070 1075 1080 Leu Asp Thr Leu Tyr Gly Glu Asp Gly Asn Asp Ile Phe Leu Gln 1085 1090 1095 Asp Asp Glu Thr Val Ser Asp Asp Ile Asp Gly Gly Ala Gly Leu 1100 1105 1110 Asp Thr Val Asp Tyr Ser Ala Met Ile His Ala Gly Lys Ile Val 1115 1120 1125 Ala Pro His Glu Tyr Gly Phe Gly Ile Glu Ala Asp Leu Ser Glu 1130 1135 1140 Gly Trp Val Arg Lys Ala Ala Arg Arg Gly Met Asp Tyr Tyr Asp 1145 1150 1155 Ser Val Arg Ser Val Glu Asn Val Ile Gly Thr Ser Met Lys Asp 1160 1165 1170 Val Leu Ile Gly Asp Ala Gln Ala Asn Thr Leu Met Gly Gln Gly 1175 1180 1185 Gly Asp Asp Thr Val Arg Gly Gly Asp Gly Asp Asp Leu Leu Phe 1190 1195 1200 Gly Gly Asp Gly Asn Asp Met Leu Tyr Gly Asp Ala Gly Asn Asp 1205 1210 1215 Thr Leu Tyr Gly Gly Leu Gly Asp Asp Thr Leu Glu Gly Gly Ala 1220 1225 1230 Gly Asn Asp Trp Phe Gly Gln Thr Pro Ala Arg Glu His Asp Val 1235 1240 1245 Leu Arg Gly Gly Ala Gly Val Asp Thr Val Asp Tyr Ser Gln Ala 1250 1255 1260 Gly Ala His Ala Gly Val Ala Thr Gly Arg Ile Gly Leu Gly Ile 1265 1270 1275 Leu Ala Asp Leu Gly Ala Gly Arg Val Asp Lys Leu Gly Glu Ala 1280 1285 1290 Gly Ser Ser Ala Tyr Asp Thr Val Ser Gly Ile Glu Asn Val Val 1295 1300 1305 Gly Thr Glu Leu Ala Asp Arg Ile Thr Gly Asp Ala Gln Ala Asn 1310 1315 1320 Val Leu Arg Gly Ala Gly Gly Ala Asp Val Leu Ala Gly Gly Glu 1325 1330 1335 Gly Asp Asp Val Leu Leu Gly Gly Asp Gly Asp Asp Gln Leu Ser 1340 1345 1350 Gly Asp Ala Gly Arg Asp Arg Leu Tyr Gly Glu Ala Gly Asp Asp 1355 1360 1365 Trp Phe Phe Gln Asp Ala Ala Asn Ala Gly Asn Leu Leu Asp Gly 1370 1375 1380 Gly Asp Gly Asn Asp Thr Val Asp Phe Ser Gly Pro Gly Arg Gly 1385 1390 1395 Leu Asp Ala Gly Ala Lys Gly Val Phe Leu Ser Leu Gly Lys Gly 1400 1405 1410 Phe Ala Ser Leu Met Asp Glu Pro Glu Thr Ser Asn Val Leu Arg 1415 1420 1425 His Ile Glu Asn Ala Val Gly Ser Val Arg Asp Asp Val Leu Ile 1430 1435 1440 Gly Asp Ala Gly Ala Asn Val Leu Asn Gly Leu Ala Gly Asn Asp 1445 1450 1455 Val Leu Ser Gly Gly Ala Gly Asp Asp Val Leu Leu Gly Asp Glu 1460 1465 1470 Gly Ser Asp Leu Leu Ser Gly Asp Ala Gly Asn Asp Asp Leu Phe 1475 1480 1485 Gly Gly Gln Gly Asp Asp Thr Tyr Leu Phe Gly Ala Gly Tyr Gly 1490 1495 1500 His Asp Thr Ile Tyr Glu Ser Gly Gly Gly His Asp Thr Ile Arg 1505 1510 1515 Ile Asn Ala Gly Ala Asp Gln Leu Trp Phe Ala Arg Gln Gly Asn 1520 1525 1530 Asp Leu Glu Ile Arg Ile Leu Gly Thr Asp Asp Ala Leu Thr Val 1535 1540 1545 His Asp Trp Tyr Arg Asp Ala Asp His Arg Val Glu Ala Ile His 1550 1555 1560 Ala Ala Asn Gln Ala Ile Asp Pro Ala Gly Ile Glu Lys Leu Val 1565 1570 1575 Glu Ala Met Ala Gln Tyr Pro Asp Pro Gly Ala Ala Ala Ala Ala 1580 1585 1590 Pro Pro Ala Ala Arg Val Pro Asp Thr Leu Met Gln Ser Leu Ala 1595 1600 1605 Val Asn Trp Arg 1610 <210> 18 <211> 1502 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Polypeptide 1-183 + 387-1705 of SEQ ID NO:8 <400> 18 Met Gln Gln Ser His Gln Ala Gly Tyr Ala Asn Ala Ala Asp Arg Glu 1 5 10 15 Ser Gly Ile Pro Ala Ala Val Leu Asp Gly Ile Lys Ala Val Ala Lys 20 25 30 Glu Lys Asn Ala Thr Leu Met Phe Arg Leu Val Asn Pro His Ser Thr 35 40 45 Ser Leu Ile Ala Glu Gly Val Ala Thr Lys Gly Leu Gly Val His Ala 50 55 60 Lys Ser Ser Asp Trp Gly Leu Gln Ala Gly Tyr Ile Pro Val Asn Pro 65 70 75 80 Asn Leu Ser Lys Leu Phe Gly Arg Ala Pro Glu Val Ile Ala Arg Ala 85 90 95 Asp Asn Asp Val Asn Ser Ser Leu Ala His Gly His Thr Ala Val Asp 100 105 110 Leu Thr Leu Ser Lys Glu Arg Leu Asp Tyr Leu Arg Gln Ala Gly Leu 115 120 125 Val Thr Gly Met Ala Asp Gly Val Val Ala Ser Asn His Ala Gly Tyr 130 135 140 Glu Gln Phe Glu Phe Arg Val Lys Glu Thr Ser Asp Gly Arg Tyr Ala 145 150 155 160 Val Gln Tyr Arg Arg Lys Gly Gly Asp Asp Phe Glu Ala Val Lys Val 165 170 175 Ile Gly Asn Ala Ala Gly Ile Pro Gly Leu Arg Arg Pro Ser Leu Gly 180 185 190 Ala Val Glu Arg Gln Asp Ser Gly Tyr Asp Ser Leu Asp Gly Val Gly 195 200 205 Ser Arg Ser Phe Ser Leu Gly Glu Val Ser Asp Met Ala Ala Val Glu 210 215 220 Ala Ala Glu Leu Glu Met Thr Arg Gln Val Leu His Ala Gly Ala Arg 225 230 235 240 Gln Asp Asp Ala Glu Pro Gly Val Ser Gly Ala Ser Ala His Trp Gly 245 250 255 Gln Arg Ala Leu Gln Gly Ala Gln Ala Val Ala Ala Ala Gln Arg Leu 260 265 270 Val His Ala Ile Ala Leu Met Thr Gln Phe Gly Arg Ala Gly Ser Thr 275 280 285 Asn Thr Pro Gln Glu Ala Ala Ser Leu Ser Ala Ala Val Phe Gly Leu 290 295 300 Gly Glu Ala Ser Ser Ala Val Ala Glu Thr Val Ser Gly Phe Phe Arg 305 310 315 320 Gly Ser Ser Arg Trp Ala Gly Gly Phe Gly Val Ala Gly Gly Ala Met 325 330 335 Ala Leu Gly Gly Gly Ile Gly Ala Val Gly Ala Gly Met Ser Leu Thr 340 345 350 Asp Asp Ala Pro Ala Gly Gln Lys Ala Ala Ala Gly Ala Glu Ile Ala 355 360 365 Leu Gln Leu Thr Gly Gly Thr Val Glu Leu Ala Ser Ser Ile Ala Leu 370 375 380 Ala Leu Ala Ala Ala Arg Gly Val Thr Ser Gly Leu Gln Val Ala Gly 385 390 395 400 Ala Ser Ala Gly Ala Ala Ala Gly Ala Leu Ala Ala Ala Leu Ser Pro 405 410 415 Met Glu Ile Tyr Gly Leu Val Gln Gln Ser His Tyr Ala Asp Gln Leu 420 425 430 Asp Lys Leu Ala Gln Glu Ser Ser Ala Tyr Gly Tyr Glu Gly Asp Ala 435 440 445 Leu Leu Ala Gln Leu Tyr Arg Asp Lys Thr Ala Ala Glu Gly Ala Val 450 455 460 Ala Gly Val Ser Ala Val Leu Ser Thr Val Gly Ala Ala Val Ser Ile 465 470 475 480 Ala Ala Ala Ala Ser Val Val Gly Ala Pro Val Ala Val Val Thr Ser 485 490 495 Leu Leu Thr Gly Ala Leu Asn Gly Ile Leu Arg Gly Val Gln Gln Pro 500 505 510 Ile Ile Glu Lys Leu Ala Asn Asp Tyr Ala Arg Lys Ile Asp Glu Leu 515 520 525 Gly Gly Pro Gln Ala Tyr Phe Glu Lys Asn Leu Gln Ala Arg His Glu 530 535 540 Gln Leu Ala Asn Ser Asp Gly Leu Arg Lys Met Leu Ala Asp Leu Gln 545 550 555 560 Ala Gly Trp Asn Ala Ser Ser Val Ile Gly Val Gln Thr Thr Glu Ile 565 570 575 Ser Lys Ser Ala Leu Glu Leu Ala Ala Ile Thr Gly Asn Ala Asp Asn 580 585 590 Leu Lys Ser Ala Asp Val Phe Val Asp Arg Phe Ile Gln Gly Glu Arg 595 600 605 Val Ala Gly Gln Pro Val Val Leu Asp Val Ala Ala Gly Gly Ile Asp 610 615 620 Ile Ala Ser Arg Lys Gly Glu Arg Pro Ala Leu Thr Phe Ile Thr Pro 625 630 635 640 Leu Ala Ala Pro Gly Glu Glu Gln Arg Arg Arg Thr Lys Thr Gly Lys 645 650 655 Ser Glu Phe Thr Thr Phe Val Glu Ile Val Gly Lys Gln Asp Arg Trp 660 665 670 Arg Ile Arg Asp Gly Ala Ala Asp Thr Thr Ile Asp Leu Ala Lys Val 675 680 685 Val Ser Gln Leu Val Asp Ala Asn Gly Val Leu Lys His Ser Ile Lys 690 695 700 Leu Glu Val Ile Gly Gly Asp Gly Asp Asp Val Val Leu Ala Asn Ala 705 710 715 720 Ser Arg Ile His Tyr Asp Gly Gly Ala Gly Thr Asn Thr Val Ser Tyr 725 730 735 Ala Ala Leu Gly Arg Gln Asp Ser Ile Thr Val Ser Ala Asp Gly Glu 740 745 750 Arg Phe Asn Val Arg Lys Gln Leu Asn Asn Ala Asn Val Tyr Arg Glu 755 760 765 Gly Val Ala Thr Gln Lys Thr Ala Tyr Gly Lys Arg Thr Glu Asn Val 770 775 780 Gln Tyr Arg His Val Glu Leu Ala Arg Val Gly Gln Leu Val Glu Val 785 790 795 800 Asp Thr Leu Glu His Val Gln His Ile Ile Gly Gly Ala Gly Asn Asp 805 810 815 Ser Ile Thr Gly Asn Ala His Asp Asn Phe Leu Ala Gly Gly Ala Gly 820 825 830 Asp Asp Arg Leu Asp Gly Gly Ala Gly Asn Asp Thr Leu Val Gly Gly 835 840 845 Glu Gly His Asn Thr Val Val Gly Gly Ala Gly Asp Asp Val Phe Leu 850 855 860 Gln Asp Leu Gly Val Trp Ser Asn Gln Leu Asp Gly Gly Ala Gly Val 865 870 875 880 Asp Thr Val Lys Tyr Asn Val His Gln Pro Ser Glu Glu Arg Leu Glu 885 890 895 Arg Met Gly Asp Thr Gly Ile His Ala Asp Leu Gln Lys Gly Thr Val 900 905 910 Glu Lys Trp Pro Ala Leu Asn Leu Phe Ser Val Asp His Val Lys Asn 915 920 925 Ile Glu Asn Leu His Gly Ser Ser Leu Asn Asp Ser Ile Ala Gly Asp 930 935 940 Asp Arg Asp Asn Glu Leu Trp Gly Asp Asp Gly Asn Asp Thr Ile His 945 950 955 960 Gly Arg Gly Gly Asp Asp Ile Leu Arg Gly Gly Leu Gly Leu Asp Thr 965 970 975 Leu Tyr Gly Glu Asp Gly Asn Asp Ile Phe Leu Gln Asp Asp Glu Thr 980 985 990 Val Ser Asp Asp Ile Asp Gly Gly Ala Gly Leu Asp Thr Val Asp Tyr 995 1000 1005 Ser Ala Met Ile His Ala Gly Lys Ile Val Ala Pro His Glu Tyr 1010 1015 1020 Gly Phe Gly Ile Glu Ala Asp Leu Ser Glu Gly Trp Val Arg Lys 1025 1030 1035 Ala Ala Arg Arg Gly Met Asp Tyr Tyr Asp Ser Val Arg Ser Val 1040 1045 1050 Glu Asn Val Ile Gly Thr Ser Met Lys Asp Val Leu Ile Gly Asp 1055 1060 1065 Ala Gln Ala Asn Thr Leu Met Gly Gln Gly Gly Asp Asp Thr Val 1070 1075 1080 Arg Gly Gly Asp Gly Asp Asp Leu Leu Phe Gly Gly Asp Gly Asn 1085 1090 1095 Asp Met Leu Tyr Gly Asp Ala Gly Asn Asp Thr Leu Tyr Gly Gly 1100 1105 1110 Leu Gly Asp Asp Thr Leu Glu Gly Gly Ala Gly Asn Asp Trp Phe 1115 1120 1125 Gly Gln Thr Pro Ala Arg Glu His Asp Val Leu Arg Gly Gly Ala 1130 1135 1140 Gly Val Asp Thr Val Asp Tyr Ser Gln Ala Gly Ala His Ala Gly 1145 1150 1155 Val Ala Thr Gly Arg Ile Gly Leu Gly Ile Leu Ala Asp Leu Gly 1160 1165 1170 Ala Gly Arg Val Asp Lys Leu Gly Glu Ala Gly Ser Ser Ala Tyr 1175 1180 1185 Asp Thr Val Ser Gly Ile Glu Asn Val Val Gly Thr Glu Leu Ala 1190 1195 1200 Asp Arg Ile Thr Gly Asp Ala Gln Ala Asn Val Leu Arg Gly Ala 1205 1210 1215 Gly Gly Ala Asp Val Leu Ala Gly Gly Glu Gly Asp Asp Val Leu 1220 1225 1230 Leu Gly Gly Asp Gly Asp Asp Gln Leu Ser Gly Asp Ala Gly Arg 1235 1240 1245 Asp Arg Leu Tyr Gly Glu Ala Gly Asp Asp Trp Phe Phe Gln Asp 1250 1255 1260 Ala Ala Asn Ala Gly Asn Leu Leu Asp Gly Gly Asp Gly Asn Asp 1265 1270 1275 Thr Val Asp Phe Ser Gly Pro Gly Arg Gly Leu Asp Ala Gly Ala 1280 1285 1290 Lys Gly Val Phe Leu Ser Leu Gly Lys Gly Phe Ala Ser Leu Met 1295 1300 1305 Asp Glu Pro Glu Thr Ser Asn Val Leu Arg His Ile Glu Asn Ala 1310 1315 1320 Val Gly Ser Val Arg Asp Asp Val Leu Ile Gly Asp Ala Gly Ala 1325 1330 1335 Asn Val Leu Asn Gly Leu Ala Gly Asn Asp Val Leu Ser Gly Gly 1340 1345 1350 Ala Gly Asp Asp Val Leu Leu Gly Asp Glu Gly Ser Asp Leu Leu 1355 1360 1365 Ser Gly Asp Ala Gly Asn Asp Asp Leu Phe Gly Gly Gln Gly Asp 1370 1375 1380 Asp Thr Tyr Leu Phe Gly Ala Gly Tyr Gly His Asp Thr Ile Tyr 1385 1390 1395 Glu Ser Gly Gly Gly His Asp Thr Ile Arg Ile Asn Ala Gly Ala 1400 1405 1410 Asp Gln Leu Trp Phe Ala Arg Gln Gly Asn Asp Leu Glu Ile Arg 1415 1420 1425 Ile Leu Gly Thr Asp Asp Ala Leu Thr Val His Asp Trp Tyr Arg 1430 1435 1440 Asp Ala Asp His Arg Val Glu Ala Ile His Ala Ala Asn Gln Ala 1445 1450 1455 Ile Asp Pro Ala Gly Ile Glu Lys Leu Val Glu Ala Met Ala Gln 1460 1465 1470 Tyr Pro Asp Pro Gly Ala Ala Ala Ala Ala Pro Pro Ala Ala Arg 1475 1480 1485 Val Pro Asp Thr Leu Met Gln Ser Leu Ala Val Asn Trp Arg 1490 1495 1500 <210> 19 <211> 1547 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Polypeptide 1-227 + 387-1706 of SEQ ID NO:2 <400> 19 Met Gln Gln Ser His Gln Ala Gly Tyr Ala Asn Ala Ala Asp Arg Glu 1 5 10 15 Ser Gly Ile Pro Ala Ala Val Leu Asp Gly Ile Lys Ala Val Ala Lys 20 25 30 Glu Lys Asn Ala Thr Leu Met Phe Arg Leu Val Asn Pro His Ser Thr 35 40 45 Ser Leu Ile Ala Glu Gly Val Ala Thr Lys Gly Leu Gly Val His Ala 50 55 60 Lys Ser Ser Asp Trp Gly Leu Gln Ala Gly Tyr Ile Pro Val Asn Pro 65 70 75 80 Asn Leu Ser Lys Leu Phe Gly Arg Ala Pro Glu Val Ile Ala Arg Ala 85 90 95 Asp Asn Asp Val Asn Ser Ser Leu Ala His Gly His Thr Ala Val Asp 100 105 110 Leu Thr Leu Ser Lys Glu Arg Leu Asp Tyr Leu Arg Gln Ala Gly Leu 115 120 125 Val Thr Gly Met Ala Asp Gly Val Val Ala Ser Asn His Ala Gly Tyr 130 135 140 Glu Gln Phe Glu Phe Arg Val Lys Glu Thr Ser Asp Gly Arg Tyr Ala 145 150 155 160 Val Gln Tyr Arg Arg Lys Gly Gly Asp Asp Phe Glu Ala Val Lys Val 165 170 175 Ile Gly Asn Ala Ala Gly Ile Pro Leu Thr Ala Asp Ile Asp Met Phe 180 185 190 Ala Ile Met Pro His Leu Ser Asn Phe Arg Asp Ser Ala Arg Ser Ser 195 200 205 Val Thr Ser Gly Asp Ser Val Thr Asp Tyr Leu Ala Arg Thr Arg Arg 210 215 220 Ala Ala Ser Pro Gly Leu Arg Arg Pro Ser Leu Gly Ala Val Glu Arg 225 230 235 240 Gln Asp Ser Gly Tyr Asp Ser Leu Asp Gly Val Gly Ser Arg Ser Phe 245 250 255 Ser Leu Gly Glu Val Ser Asp Met Ala Ala Val Glu Ala Ala Glu Leu 260 265 270 Glu Met Thr Arg Gln Val Leu His Ala Gly Ala Arg Gln Asp Asp Ala 275 280 285 Glu Pro Gly Val Ser Gly Ala Ser Ala His Trp Gly Gln Arg Ala Leu 290 295 300 Gln Gly Ala Gln Ala Val Ala Ala Ala Gln Arg Leu Val His Ala Ile 305 310 315 320 Ala Leu Met Thr Gln Phe Gly Arg Ala Gly Ser Thr Asn Thr Pro Gln 325 330 335 Glu Ala Ala Ser Leu Ser Ala Ala Val Phe Gly Leu Gly Glu Ala Ser 340 345 350 Ser Ala Val Ala Glu Thr Val Ser Gly Phe Phe Arg Gly Ser Ser Arg 355 360 365 Trp Ala Gly Gly Phe Gly Val Ala Gly Gly Ala Met Ala Leu Gly Gly 370 375 380 Gly Ile Ala Ala Ala Val Gly Ala Gly Met Ser Leu Thr Asp Asp Ala 385 390 395 400 Pro Ala Gly Gln Lys Ala Ala Ala Gly Ala Glu Ile Ala Leu Gln Leu 405 410 415 Thr Gly Gly Thr Val Glu Leu Ala Ser Ser Ile Ala Leu Ala Leu Ala 420 425 430 Ala Ala Arg Gly Val Thr Ser Gly Leu Gln Val Ala Gly Ala Ser Ala 435 440 445 Gly Ala Ala Ala Gly Ala Leu Ala Ala Ala Leu Ser Pro Met Glu Ile 450 455 460 Tyr Gly Leu Val Gln Gln Ser His Tyr Ala Asp Gln Leu Asp Lys Leu 465 470 475 480 Ala Gln Glu Ser Ser Ala Tyr Gly Tyr Glu Gly Asp Ala Leu Leu Ala 485 490 495 Gln Leu Tyr Arg Asp Lys Thr Ala Ala Glu Gly Ala Val Ala Gly Val 500 505 510 Ser Ala Val Leu Ser Thr Val Gly Ala Ala Val Ser Ile Ala Ala Ala 515 520 525 Ala Ser Val Val Gly Ala Pro Val Ala Val Val Thr Ser Leu Leu Thr 530 535 540 Gly Ala Leu Asn Gly Ile Leu Arg Gly Val Gln Gln Pro Ile Ile Glu 545 550 555 560 Lys Leu Ala Asn Asp Tyr Ala Arg Lys Ile Asp Glu Leu Gly Gly Pro 565 570 575 Gln Ala Tyr Phe Glu Lys Asn Leu Gln Ala Arg His Glu Gln Leu Ala 580 585 590 Asn Ser Asp Gly Leu Arg Lys Met Leu Ala Asp Leu Gln Ala Gly Trp 595 600 605 Asn Ala Ser Ser Val Ile Gly Val Gln Thr Thr Glu Ile Ser Lys Ser 610 615 620 Ala Leu Glu Leu Ala Ala Ile Thr Gly Asn Ala Asp Asn Leu Lys Ser 625 630 635 640 Val Asp Val Phe Val Asp Arg Phe Val Gln Gly Glu Arg Val Ala Gly 645 650 655 Gln Pro Val Val Leu Asp Val Ala Ala Gly Gly Ile Asp Ile Ala Ser 660 665 670 Arg Lys Gly Glu Arg Pro Ala Leu Thr Phe Ile Thr Pro Leu Ala Ala 675 680 685 Pro Gly Glu Glu Gln Arg Arg Arg Thr Lys Thr Gly Lys Ser Glu Phe 690 695 700 Thr Thr Phe Val Glu Ile Val Gly Lys Gln Asp Arg Trp Arg Ile Arg 705 710 715 720 Asp Gly Ala Ala Asp Thr Thr Ile Asp Leu Ala Lys Val Val Ser Gln 725 730 735 Leu Val Asp Ala Asn Gly Val Leu Lys His Ser Ile Lys Leu Asp Val 740 745 750 Ile Gly Gly Asp Gly Asp Asp Val Val Leu Ala Asn Ala Ser Arg Ile 755 760 765 His Tyr Asp Gly Gly Ala Gly Thr Asn Thr Val Ser Tyr Ala Ala Leu 770 775 780 Gly Arg Gln Asp Ser Ile Thr Val Ser Ala Asp Gly Glu Arg Phe Asn 785 790 795 800 Val Arg Lys Gln Leu Asn Asn Ala Asn Val Tyr Arg Glu Gly Val Ala 805 810 815 Thr Gln Thr Thr Ala Tyr Gly Lys Arg Thr Glu Asn Val Gln Tyr Arg 820 825 830 His Val Glu Leu Ala Arg Val Gly Gln Leu Val Glu Val Asp Thr Leu 835 840 845 Glu His Val Gln His Ile Ile Gly Gly Ala Gly Asn Asp Ser Ile Thr 850 855 860 Gly Asn Ala His Asp Asn Phe Leu Ala Gly Gly Ser Gly Asp Asp Arg 865 870 875 880 Leu Asp Gly Gly Ala Gly Asn Asp Thr Leu Val Gly Gly Glu Gly Gln 885 890 895 Asn Thr Val Ile Gly Gly Ala Gly Asp Asp Val Phe Leu Gln Asp Leu 900 905 910 Gly Val Trp Ser Asn Gln Leu Asp Gly Gly Ala Gly Val Asp Thr Val 915 920 925 Lys Tyr Asn Val His Gln Pro Ser Glu Glu Arg Leu Glu Arg Met Gly 930 935 940 Asp Thr Gly Ile His Ala Asp Leu Gln Lys Gly Thr Val Glu Lys Trp 945 950 955 960 Pro Ala Leu Asn Leu Phe Ser Val Asp His Val Lys Asn Ile Glu Asn 965 970 975 Leu His Gly Ser Arg Leu Asn Asp Arg Ile Ala Gly Asp Asp Gln Asp 980 985 990 Asn Glu Leu Trp Gly His Asp Gly Asn Asp Thr Ile Arg Gly Arg Gly 995 1000 1005 Gly Asp Asp Ile Leu Arg Gly Gly Leu Gly Leu Asp Thr Leu Tyr 1010 1015 1020 Gly Glu Asp Gly Asn Asp Ile Phe Leu Gln Asp Asp Glu Thr Val 1025 1030 1035 Ser Asp Asp Ile Asp Gly Gly Ala Gly Leu Asp Thr Val Asp Tyr 1040 1045 1050 Ser Ala Met Ile His Pro Gly Arg Ile Val Ala Pro His Glu Tyr 1055 1060 1065 Gly Phe Gly Ile Glu Ala Asp Leu Ser Arg Glu Trp Val Arg Lys 1070 1075 1080 Ala Ser Ala Leu Gly Val Asp Tyr Tyr Asp Asn Val Arg Asn Val 1085 1090 1095 Glu Asn Val Ile Gly Thr Ser Met Lys Asp Val Leu Ile Gly Asp 1100 1105 1110 Ala Gln Ala Asn Thr Leu Met Gly Gln Gly Gly Asp Asp Thr Val 1115 1120 1125 Arg Gly Gly Asp Gly Asp Asp Leu Leu Phe Gly Gly Asp Gly Asn 1130 1135 1140 Asp Met Leu Tyr Gly Asp Ala Gly Asn Asp Thr Leu Tyr Gly Gly 1145 1150 1155 Leu Gly Asp Asp Thr Leu Glu Gly Gly Ala Gly Asn Asp Trp Phe 1160 1165 1170 Gly Gln Thr Gln Ala Arg Glu His Asp Val Leu Arg Gly Gly Asp 1175 1180 1185 Gly Val Asp Thr Val Asp Tyr Ser Gln Thr Gly Ala His Ala Gly 1190 1195 1200 Ile Ala Ala Gly Arg Ile Gly Leu Gly Ile Leu Ala Asp Leu Gly 1205 1210 1215 Ala Gly Arg Val Asp Lys Leu Gly Glu Ala Gly Ser Ser Ala Tyr 1220 1225 1230 Asp Thr Val Ser Gly Ile Glu Asn Val Val Gly Thr Glu Leu Ala 1235 1240 1245 Asp Arg Ile Thr Gly Asp Ala Gln Ala Asn Val Leu Arg Gly Ala 1250 1255 1260 Gly Gly Ala Asp Val Leu Ala Gly Gly Glu Gly Asp Asp Val Leu 1265 1270 1275 Leu Gly Gly Asp Gly Asp Asp Gln Leu Ser Gly Asp Ala Gly Arg 1280 1285 1290 Asp Arg Leu Tyr Gly Glu Ala Gly Asp Asp Trp Phe Phe Gln Asp 1295 1300 1305 Ala Ala Asn Ala Gly Asn Leu Leu Asp Gly Gly Asp Gly Arg Asp 1310 1315 1320 Thr Val Asp Phe Ser Gly Pro Gly Arg Gly Leu Asp Ala Gly Ala 1325 1330 1335 Lys Gly Val Phe Leu Ser Leu Gly Lys Gly Phe Ala Ser Leu Met 1340 1345 1350 Asp Glu Pro Glu Thr Ser Asn Val Leu Arg Asn Ile Glu Asn Ala 1355 1360 1365 Val Gly Ser Ala Arg Asp Asp Val Leu Ile Gly Asp Ala Gly Ala 1370 1375 1380 Asn Val Leu Asn Gly Leu Ala Gly Asn Asp Val Leu Ser Gly Gly 1385 1390 1395 Ala Gly Asp Asp Val Leu Leu Gly Asp Glu Gly Ser Asp Leu Leu 1400 1405 1410 Ser Gly Asp Ala Gly Asn Asp Asp Leu Phe Gly Gly Gln Gly Asp 1415 1420 1425 Asp Thr Tyr Leu Phe Gly Val Gly Tyr Gly His Asp Thr Ile Tyr 1430 1435 1440 Glu Ser Gly Gly Gly His Asp Thr Ile Arg Ile Asn Ala Gly Ala 1445 1450 1455 Asp Gln Leu Trp Phe Ala Arg Gln Gly Asn Asp Leu Glu Ile Arg 1460 1465 1470 Ile Leu Gly Thr Asp Asp Ala Leu Thr Val His Asp Trp Tyr Arg 1475 1480 1485 Asp Ala Asp His Arg Val Glu Ile Ile His Ala Ala Asn Gln Ala 1490 1495 1500 Val Asp Gln Ala Gly Ile Glu Lys Leu Val Glu Ala Met Ala Gln 1505 1510 1515 Tyr Pro Asp Pro Gly Ala Ala Ala Ala Ala Pro Pro Ala Ala Arg 1520 1525 1530 Val Pro Asp Thr Leu Met Gln Ser Leu Ala Val Asn Trp Arg 1535 1540 1545 <210> 20 <211> 1569 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> polypeptide 1-183 + 321-1706 of SEQ ID NO:2 <400> 20 Met Gln Gln Ser His Gln Ala Gly Tyr Ala Asn Ala Ala Asp Arg Glu 1 5 10 15 Ser Gly Ile Pro Ala Ala Val Leu Asp Gly Ile Lys Ala Val Ala Lys 20 25 30 Glu Lys Asn Ala Thr Leu Met Phe Arg Leu Val Asn Pro His Ser Thr 35 40 45 Ser Leu Ile Ala Glu Gly Val Ala Thr Lys Gly Leu Gly Val His Ala 50 55 60 Lys Ser Ser Asp Trp Gly Leu Gln Ala Gly Tyr Ile Pro Val Asn Pro 65 70 75 80 Asn Leu Ser Lys Leu Phe Gly Arg Ala Pro Glu Val Ile Ala Arg Ala 85 90 95 Asp Asn Asp Val Asn Ser Ser Leu Ala His Gly His Thr Ala Val Asp 100 105 110 Leu Thr Leu Ser Lys Glu Arg Leu Asp Tyr Leu Arg Gln Ala Gly Leu 115 120 125 Val Thr Gly Met Ala Asp Gly Val Val Ala Ser Asn His Ala Gly Tyr 130 135 140 Glu Gln Phe Glu Phe Arg Val Lys Glu Thr Ser Asp Gly Arg Tyr Ala 145 150 155 160 Val Gln Tyr Arg Arg Lys Gly Gly Asp Asp Phe Glu Ala Val Lys Val 165 170 175 Ile Gly Asn Ala Ala Gly Ile Glu Ser Gln Met Leu Thr Arg Gly Gln 180 185 190 Leu Lys Glu Tyr Ile Gly Gln Gln Arg Gly Glu Gly Tyr Val Phe Tyr 195 200 205 Glu Asn Arg Ala Tyr Gly Val Ala Gly Lys Ser Leu Phe Asp Asp Gly 210 215 220 Leu Gly Ala Ala Pro Gly Val Pro Ser Gly Arg Ser Lys Phe Ser Pro 225 230 235 240 Asp Val Leu Glu Thr Val Pro Ala Ser Pro Gly Leu Arg Arg Pro Ser 245 250 255 Leu Gly Ala Val Glu Arg Gln Asp Ser Gly Tyr Asp Ser Leu Asp Gly 260 265 270 Val Gly Ser Arg Ser Phe Ser Leu Gly Glu Val Ser Asp Met Ala Ala 275 280 285 Val Glu Ala Ala Glu Leu Glu Met Thr Arg Gln Val Leu His Ala Gly 290 295 300 Ala Arg Gln Asp Asp Ala Glu Pro Gly Val Ser Gly Ala Ser Ala His 305 310 315 320 Trp Gly Gln Arg Ala Leu Gln Gly Ala Gln Ala Val Ala Ala Ala Gln 325 330 335 Arg Leu Val His Ala Ile Ala Leu Met Thr Gln Phe Gly Arg Ala Gly 340 345 350 Ser Thr Asn Thr Pro Gln Glu Ala Ala Ser Leu Ser Ala Ala Val Phe 355 360 365 Gly Leu Gly Glu Ala Ser Ser Ala Val Ala Glu Thr Val Ser Gly Phe 370 375 380 Phe Arg Gly Ser Ser Arg Trp Ala Gly Gly Phe Gly Val Ala Gly Gly 385 390 395 400 Ala Met Ala Leu Gly Gly Gly Ile Ala Ala Ala Val Gly Ala Gly Met 405 410 415 Ser Leu Thr Asp Asp Ala Pro Ala Gly Gln Lys Ala Ala Ala Gly Ala 420 425 430 Glu Ile Ala Leu Gln Leu Thr Gly Gly Thr Val Glu Leu Ala Ser Ser 435 440 445 Ile Ala Leu Ala Leu Ala Ala Ala Arg Gly Val Thr Ser Gly Leu Gln 450 455 460 Val Ala Gly Ala Ser Ala Gly Ala Ala Ala Gly Ala Leu Ala Ala Ala 465 470 475 480 Leu Ser Pro Met Glu Ile Tyr Gly Leu Val Gln Gln Ser His Tyr Ala 485 490 495 Asp Gln Leu Asp Lys Leu Ala Gln Glu Ser Ser Ala Tyr Gly Tyr Glu 500 505 510 Gly Asp Ala Leu Leu Ala Gln Leu Tyr Arg Asp Lys Thr Ala Ala Glu 515 520 525 Gly Ala Val Ala Gly Val Ser Ala Val Leu Ser Thr Val Gly Ala Ala 530 535 540 Val Ser Ile Ala Ala Ala Ala Ser Val Val Gly Ala Pro Val Ala Val 545 550 555 560 Val Thr Ser Leu Leu Thr Gly Ala Leu Asn Gly Ile Leu Arg Gly Val 565 570 575 Gln Gln Pro Ile Ile Glu Lys Leu Ala Asn Asp Tyr Ala Arg Lys Ile 580 585 590 Asp Glu Leu Gly Gly Pro Gln Ala Tyr Phe Glu Lys Asn Leu Gln Ala 595 600 605 Arg His Glu Gln Leu Ala Asn Ser Asp Gly Leu Arg Lys Met Leu Ala 610 615 620 Asp Leu Gln Ala Gly Trp Asn Ala Ser Ser Val Ile Gly Val Gln Thr 625 630 635 640 Thr Glu Ile Ser Lys Ser Ala Leu Glu Leu Ala Ala Ile Thr Gly Asn 645 650 655 Ala Asp Asn Leu Lys Ser Val Asp Val Phe Val Asp Arg Phe Val Gln 660 665 670 Gly Glu Arg Val Ala Gly Gln Pro Val Val Leu Asp Val Ala Ala Gly 675 680 685 Gly Ile Asp Ile Ala Ser Arg Lys Gly Glu Arg Pro Ala Leu Thr Phe 690 695 700 Ile Thr Pro Leu Ala Ala Pro Gly Glu Glu Gln Arg Arg Arg Thr Lys 705 710 715 720 Thr Gly Lys Ser Glu Phe Thr Thr Phe Val Glu Ile Val Gly Lys Gln 725 730 735 Asp Arg Trp Arg Ile Arg Asp Gly Ala Ala Asp Thr Thr Ile Asp Leu 740 745 750 Ala Lys Val Val Ser Gln Leu Val Asp Ala Asn Gly Val Leu Lys His 755 760 765 Ser Ile Lys Leu Asp Val Ile Gly Gly Asp Gly Asp Asp Val Val Leu 770 775 780 Ala Asn Ala Ser Arg Ile His Tyr Asp Gly Gly Ala Gly Thr Asn Thr 785 790 795 800 Val Ser Tyr Ala Ala Leu Gly Arg Gln Asp Ser Ile Thr Val Ser Ala 805 810 815 Asp Gly Glu Arg Phe Asn Val Arg Lys Gln Leu Asn Asn Ala Asn Val 820 825 830 Tyr Arg Glu Gly Val Ala Thr Gln Thr Thr Ala Tyr Gly Lys Arg Thr 835 840 845 Glu Asn Val Gln Tyr Arg His Val Glu Leu Ala Arg Val Gly Gln Leu 850 855 860 Val Glu Val Asp Thr Leu Glu His Val Gln His Ile Ile Gly Gly Ala 865 870 875 880 Gly Asn Asp Ser Ile Thr Gly Asn Ala His Asp Asn Phe Leu Ala Gly 885 890 895 Gly Ser Gly Asp Asp Arg Leu Asp Gly Gly Ala Gly Asn Asp Thr Leu 900 905 910 Val Gly Gly Glu Gly Gln Asn Thr Val Ile Gly Gly Ala Gly Asp Asp 915 920 925 Val Phe Leu Gln Asp Leu Gly Val Trp Ser Asn Gln Leu Asp Gly Gly 930 935 940 Ala Gly Val Asp Thr Val Lys Tyr Asn Val His Gln Pro Ser Glu Glu 945 950 955 960 Arg Leu Glu Arg Met Gly Asp Thr Gly Ile His Ala Asp Leu Gln Lys 965 970 975 Gly Thr Val Glu Lys Trp Pro Ala Leu Asn Leu Phe Ser Val Asp His 980 985 990 Val Lys Asn Ile Glu Asn Leu His Gly Ser Arg Leu Asn Asp Arg Ile 995 1000 1005 Ala Gly Asp Asp Gln Asp Asn Glu Leu Trp Gly His Asp Gly Asn 1010 1015 1020 Asp Thr Ile Arg Gly Arg Gly Gly Asp Asp Ile Leu Arg Gly Gly 1025 1030 1035 Leu Gly Leu Asp Thr Leu Tyr Gly Glu Asp Gly Asn Asp Ile Phe 1040 1045 1050 Leu Gln Asp Asp Glu Thr Val Ser Asp Asp Ile Asp Gly Gly Ala 1055 1060 1065 Gly Leu Asp Thr Val Asp Tyr Ser Ala Met Ile His Pro Gly Arg 1070 1075 1080 Ile Val Ala Pro His Glu Tyr Gly Phe Gly Ile Glu Ala Asp Leu 1085 1090 1095 Ser Arg Glu Trp Val Arg Lys Ala Ser Ala Leu Gly Val Asp Tyr 1100 1105 1110 Tyr Asp Asn Val Arg Asn Val Glu Asn Val Ile Gly Thr Ser Met 1115 1120 1125 Lys Asp Val Leu Ile Gly Asp Ala Gln Ala Asn Thr Leu Met Gly 1130 1135 1140 Gln Gly Gly Asp Asp Thr Val Arg Gly Gly Asp Gly Asp Asp Leu 1145 1150 1155 Leu Phe Gly Gly Asp Gly Asn Asp Met Leu Tyr Gly Asp Ala Gly 1160 1165 1170 Asn Asp Thr Leu Tyr Gly Gly Leu Gly Asp Asp Thr Leu Glu Gly 1175 1180 1185 Gly Ala Gly Asn Asp Trp Phe Gly Gln Thr Gln Ala Arg Glu His 1190 1195 1200 Asp Val Leu Arg Gly Gly Asp Gly Val Asp Thr Val Asp Tyr Ser 1205 1210 1215 Gln Thr Gly Ala His Ala Gly Ile Ala Ala Gly Arg Ile Gly Leu 1220 1225 1230 Gly Ile Leu Ala Asp Leu Gly Ala Gly Arg Val Asp Lys Leu Gly 1235 1240 1245 Glu Ala Gly Ser Ser Ala Tyr Asp Thr Val Ser Gly Ile Glu Asn 1250 1255 1260 Val Val Gly Thr Glu Leu Ala Asp Arg Ile Thr Gly Asp Ala Gln 1265 1270 1275 Ala Asn Val Leu Arg Gly Ala Gly Gly Ala Asp Val Leu Ala Gly 1280 1285 1290 Gly Glu Gly Asp Asp Val Leu Leu Gly Gly Asp Gly Asp Asp Gln 1295 1300 1305 Leu Ser Gly Asp Ala Gly Arg Asp Arg Leu Tyr Gly Glu Ala Gly 1310 1315 1320 Asp Asp Trp Phe Phe Gln Asp Ala Ala Asn Ala Gly Asn Leu Leu 1325 1330 1335 Asp Gly Gly Asp Gly Arg Asp Thr Val Asp Phe Ser Gly Pro Gly 1340 1345 1350 Arg Gly Leu Asp Ala Gly Ala Lys Gly Val Phe Leu Ser Leu Gly 1355 1360 1365 Lys Gly Phe Ala Ser Leu Met Asp Glu Pro Glu Thr Ser Asn Val 1370 1375 1380 Leu Arg Asn Ile Glu Asn Ala Val Gly Ser Ala Arg Asp Asp Val 1385 1390 1395 Leu Ile Gly Asp Ala Gly Ala Asn Val Leu Asn Gly Leu Ala Gly 1400 1405 1410 Asn Asp Val Leu Ser Gly Gly Ala Gly Asp Asp Val Leu Leu Gly 1415 1420 1425 Asp Glu Gly Ser Asp Leu Leu Ser Gly Asp Ala Gly Asn Asp Asp 1430 1435 1440 Leu Phe Gly Gly Gln Gly Asp Asp Thr Tyr Leu Phe Gly Val Gly 1445 1450 1455 Tyr Gly His Asp Thr Ile Tyr Glu Ser Gly Gly Gly His Asp Thr 1460 1465 1470 Ile Arg Ile Asn Ala Gly Ala Asp Gln Leu Trp Phe Ala Arg Gln 1475 1480 1485 Gly Asn Asp Leu Glu Ile Arg Ile Leu Gly Thr Asp Asp Ala Leu 1490 1495 1500 Thr Val His Asp Trp Tyr Arg Asp Ala Asp His Arg Val Glu Ile 1505 1510 1515 Ile His Ala Ala Asn Gln Ala Val Asp Gln Ala Gly Ile Glu Lys 1520 1525 1530 Leu Val Glu Ala Met Ala Gln Tyr Pro Asp Pro Gly Ala Ala Ala 1535 1540 1545 Ala Ala Pro Pro Ala Ala Arg Val Pro Asp Thr Leu Met Gln Ser 1550 1555 1560 Leu Ala Val Asn Trp Arg 1565 <210> 21 <211> 558 <212> DNA <213> Bordetella pertussis <400> 21 atgcttccgt ccgcccaagc gccctccctc ctcaatccca ccgacgactt cgcggcactg 60 ggcaatattg cctggctgtg gatgaactct cccatgcacc gcgactggcc ggtgcatctg 120 ctcgcacgca acacgctcgc gccgattcaa ctgggccaat acattctgct gcgatgcaat 180 gacgtgccgg ttgcatactg cagctgggcc ctaatggacg ccgacaccga actctcctat 240 gtcatggcgc cctcgtcgct gggcgggaat gcctggaact gcggcgaccg actgtggatc 300 atcgactgga tcgcgccatt ctcgcgcgac gacaatcgtg cgctgcgccg cgcgctggcc 360 gaacggcacc ccgacagcgt gggccgttcg ctgcgcgttc ggcgcggcgg cgacaccgcg 420 cgcgtcaagg agtaccgagg ccgcgcgctg gacgcggccg ccgctcgcgc gcagctggac 480 cgctaccatg ccgaactgat cgcaggactg cgcgcgagca acggcggata cgcgccgcga 540 ggccggggca ccgcctga 558 <210> 22 <211> 558 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Optimized version of CyaC nucleotide coding sequence <220> <221> CDS <222> (1)..(558) <400> 22 atg ctg ccg tct gca cag gcg ccg tct ctg ctg aat cca act gat gac 48 Met Leu Pro Ser Ala Gln Ala Pro Ser Leu Leu Asn Pro Thr Asp Asp 1 5 10 15 ttc gct gcg ctg ggt aac atc gcg tgg ctg tgg atg aac agc ccg atg 96 Phe Ala Ala Leu Gly Asn Ile Ala Trp Leu Trp Met Asn Ser Pro Met 20 25 30 cac cgt gac tgg ccg gtt cac ctg ctg gca cgt aac acg ctg gcg ccg 144 His Arg Asp Trp Pro Val His Leu Leu Ala Arg Asn Thr Leu Ala Pro 35 40 45 atc cag ctg ggt caa tac atc ctg ctg cgt tgt aac gac gtg cct gtg 192 Ile Gln Leu Gly Gln Tyr Ile Leu Leu Arg Cys Asn Asp Val Pro Val 50 55 60 gcg tat tgc tcc tgg gca ctg atg gat gcg gat acc gag ctg tcc tac 240 Ala Tyr Cys Ser Trp Ala Leu Met Asp Ala Asp Thr Glu Leu Ser Tyr 65 70 75 80 gtt atg gcc cca tct agc ctg ggc ggt aac gct tgg aac tgc ggc gat 288 Val Met Ala Pro Ser Ser Leu Gly Gly Asn Ala Trp Asn Cys Gly Asp 85 90 95 cgt ctg tgg atc att gat tgg att gct ccg ttt agc cgt gac gac aac 336 Arg Leu Trp Ile Ile Asp Trp Ile Ala Pro Phe Ser Arg Asp Asp Asn 100 105 110 cgt gct ctg cgt cgc gcg ctg gcc gaa cgt cat ccg gat tct gtt ggc 384 Arg Ala Leu Arg Arg Ala Leu Ala Glu Arg His Pro Asp Ser Val Gly 115 120 125 cgt tcc ctg cgc gta cgt cgc ggt ggc gac acc gct cgc gtc aaa gaa 432 Arg Ser Leu Arg Val Arg Arg Gly Gly Asp Thr Ala Arg Val Lys Glu 130 135 140 tac cgt ggt cgt gct ctg gac gca gcg gcg gcc cgc gct cag ctg gac 480 Tyr Arg Gly Arg Ala Leu Asp Ala Ala Ala Ala Arg Ala Gln Leu Asp 145 150 155 160 cgc tac cac gca gaa ctg att gcc ggt ctg cgt gca tcc aat ggc ggt 528 Arg Tyr His Ala Glu Leu Ile Ala Gly Leu Arg Ala Ser Asn Gly Gly 165 170 175 tat gct ccg cgt ggc cgt ggc acc gca taa 558 Tyr Ala Pro Arg Gly Arg Gly Thr Ala 180 185 <210> 23 <211> 185 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 23 Met Leu Pro Ser Ala Gln Ala Pro Ser Leu Leu Asn Pro Thr Asp Asp 1 5 10 15 Phe Ala Ala Leu Gly Asn Ile Ala Trp Leu Trp Met Asn Ser Pro Met 20 25 30 His Arg Asp Trp Pro Val His Leu Leu Ala Arg Asn Thr Leu Ala Pro 35 40 45 Ile Gln Leu Gly Gln Tyr Ile Leu Leu Arg Cys Asn Asp Val Pro Val 50 55 60 Ala Tyr Cys Ser Trp Ala Leu Met Asp Ala Asp Thr Glu Leu Ser Tyr 65 70 75 80 Val Met Ala Pro Ser Ser Leu Gly Gly Asn Ala Trp Asn Cys Gly Asp 85 90 95 Arg Leu Trp Ile Ile Asp Trp Ile Ala Pro Phe Ser Arg Asp Asp Asn 100 105 110 Arg Ala Leu Arg Arg Ala Leu Ala Glu Arg His Pro Asp Ser Val Gly 115 120 125 Arg Ser Leu Arg Val Arg Arg Gly Gly Asp Thr Ala Arg Val Lys Glu 130 135 140 Tyr Arg Gly Arg Ala Leu Asp Ala Ala Ala Ala Arg Ala Gln Leu Asp 145 150 155 160 Arg Tyr His Ala Glu Leu Ile Ala Gly Leu Arg Ala Ser Asn Gly Gly 165 170 175 Tyr Ala Pro Arg Gly Arg Gly Thr Ala 180 185 <210> 24 <211> 441 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Model antigen (peptide 105) <400> 24 Met Gly Ile Arg Ser Arg Asp His Met Val Leu His Glu Tyr Val Asn 1 5 10 15 Ala Ala Gly Ile Thr Gly Ser Asp Arg Met Glu Val Gly Trp Tyr Arg 20 25 30 Ser Pro Phe Ser Arg Val Val His Leu Tyr Arg Asn Gly Lys Ser Ile 35 40 45 Ile Asn Phe Glu Lys Leu Val Arg Val Asp Met Val Arg His Arg Ile 50 55 60 Lys Glu His Met Leu Lys Lys Tyr Thr Gln Ile Tyr Ser Thr Val Ala 65 70 75 80 Ser Ser Leu Ser Gly Glu Lys Ile Ser Gln Ala Val His Ala Ala His 85 90 95 Ala Glu Ile Asn Glu Ala Gly Arg Glu Leu Ala Gly Ile Gly Ile Leu 100 105 110 Thr Val Pro Lys Tyr Val Lys Gln Asn Thr Leu Lys Leu Ala Thr Lys 115 120 125 Ala Val Tyr Asn Phe Ala Thr Cys Ser Gly Arg Lys Val Ala Glu Leu 130 135 140 Val His Phe Leu Leu Leu Lys Tyr Arg Ala Arg Glu Pro Val Thr Lys 145 150 155 160 Ala Glu Met Leu Gly Ser Val Val Gly Asn Trp Gln Tyr Phe Phe Pro 165 170 175 Val Ile Phe Ser Lys Ala Ser Ser Ser Leu Gln Leu Val Phe Gly Ile 180 185 190 Glu Leu Met Glu Val Asp Pro Ile Gly His Leu Tyr Ile Phe Ala Thr 195 200 205 Lys Leu Leu Thr Gln His Phe Val Gln Glu Asn Tyr Leu Glu Tyr Arg 210 215 220 Gln Val Pro Gly Ser Asp Pro Ala Cys Tyr Glu Phe Leu Trp Gly Pro 225 230 235 240 Arg Ala Leu Val Glu Thr Ser Tyr Val Lys Thr Gly Met His Gly Asp 245 250 255 Thr Pro Thr Leu His Glu Tyr Met Leu Asp Leu Gln Pro Glu Thr Thr 260 265 270 Asp Leu Tyr Cys Tyr Glu Gln Leu Asn Gly Pro Ala Gly Gln Ala Glu 275 280 285 Pro Asp Arg Ala His Tyr Asn Ile Val Thr Phe Cys Cys Lys Cys Asp 290 295 300 Ser Thr Leu Arg Leu Cys Val Gln Ser Thr His Val Asp Ile Arg Thr 305 310 315 320 Leu Glu Asp Leu Leu Met Gly Thr Leu Gly Ile Val Cys Pro Ile Cys 325 330 335 Ser Gln Lys Pro Met His Gly Pro Lys Ala Thr Leu Gln Asp Ile Val 340 345 350 Leu His Leu Glu Pro Gln Asn Glu Ile Pro Val Asp Leu Leu Cys His 355 360 365 Glu Gln Leu Ser Ala Ser Gly Val Asn His Gln His Leu Pro Ala Arg 370 375 380 Arg Ala Glu Pro Gln Arg His Thr Met Leu Cys Met Cys Cys Lys Cys 385 390 395 400 Glu Ala Arg Ile Glu Leu Val Val Glu Ser Ser Ala Asp Asp Leu Arg 405 410 415 Ala Phe Gln Gln Leu Phe Leu Asn Thr Leu Ser Phe Val Cys Pro Trp 420 425 430 Cys Ala Ser Gln Gln Leu Lys Gly Pro 435 440 <210> 25 <211> 98 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Protein sequence of E7 of HPV16 <400> 25 Met His Gly Asp Thr Pro Thr Leu His Glu Tyr Met Leu Asp Leu Gln 1 5 10 15 Pro Glu Thr Thr Asp Leu Tyr Cys Tyr Glu Gln Leu Asn Asp Ser Ser 20 25 30 Glu Glu Glu Asp Glu Ile Asp Gly Pro Ala Gly Gln Ala Glu Pro Asp 35 40 45 Arg Ala His Tyr Asn Ile Val Thr Phe Cys Cys Lys Cys Asp Ser Thr 50 55 60 Leu Arg Leu Cys Val Gln Ser Thr His Val Asp Ile Arg Thr Leu Glu 65 70 75 80 Asp Leu Leu Met Gly Thr Leu Gly Ile Val Cys Pro Ile Cys Ser Gln 85 90 95 Lys Pro <210> 26 <211> 105 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Protein sequence of E7 of HPV18 <400> 26 Met His Gly Pro Lys Ala Thr Leu Gln Asp Ile Val Leu His Leu Glu 1 5 10 15 Pro Gln Asn Glu Ile Pro Val Asp Leu Leu Cys His Glu Gln Leu Ser 20 25 30 Asp Ser Glu Glu Glu Asn Asp Glu Ile Asp Gly Val Asn His Gln His 35 40 45 Leu Pro Ala Arg Arg Ala Glu Pro Gln Arg His Thr Met Leu Cys Met 50 55 60 Cys Cys Lys Cys Glu Ala Arg Ile Glu Leu Val Val Glu Ser Ser Ala 65 70 75 80 Asp Asp Leu Arg Ala Phe Gln Gln Leu Phe Leu Asn Thr Leu Ser Phe 85 90 95 Val Cys Pro Trp Cys Ala Ser Gln Gln 100 105 <210> 27 <211> 98 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Protein sequence of E7 of HPV31 <400> 27 Met Arg Gly Glu Thr Pro Thr Leu Gln Asp Tyr Val Leu Asp Leu Gln 1 5 10 15 Pro Glu Ala Thr Asp Leu Tyr Cys Tyr Glu Gln Leu Pro Asp Ser Ser 20 25 30 Asp Glu Glu Asp Val Ile Asp Ser Pro Ala Gly Gln Ala Lys Pro Asp 35 40 45 Thr Ser Asn Tyr Asn Ile Val Thr Phe Cys Cys Gln Cys Glu Ser Thr 50 55 60 Leu Arg Leu Cys Val Gln Ser Thr Gln Val Asp Ile Arg Ile Leu Gln 65 70 75 80 Glu Leu Leu Met Gly Ser Phe Gly Ile Val Cys Pro Asn Cys Ser Thr 85 90 95 Arg Leu <210> 28 <211> 97 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Protein sequence of E7 of HPV33 <400> 28 Met Arg Gly His Lys Pro Thr Leu Lys Glu Tyr Ile Leu Asp Leu Tyr 1 5 10 15 Pro Glu Pro Thr Asp Leu Tyr Cys Tyr Glu Gln Leu Ser Asp Ser Ser 20 25 30 Asp Glu Asp Glu Gly Leu Asp Arg Pro Asp Gly Gln Ala Gln Pro Ala 35 40 45 Thr Ala Asp Tyr Tyr Ile Val Thr Cys Cys His Thr Cys Asn Thr Thr 50 55 60 Val Arg Leu Cys Val Asn Ser Thr Ala Ser Asp Leu Arg Thr Ile Gln 65 70 75 80 Gln Leu Leu Met Gly Thr Val Asn Ile Val Cys Pro Ser Cys Ala Gln 85 90 95 Leu <210> 29 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Protein sequence of E7 of HPV45 <400> 29 Met His Gly Pro Arg Glu Thr Leu Gln Glu Ile Val Leu His Leu Glu 1 5 10 15 Pro Gln Asn Glu Leu Asp Pro Val Asp Leu Leu Cys Tyr Glu Gln Leu 20 25 30 Ser Glu Ser Glu Glu Glu Asn Asp Glu Ala Asp Gly Val Ser His Ala 35 40 45 Gln Leu Pro Ala Arg Arg Ala Glu Pro Gln Arg His Lys Ile Leu Cys 50 55 60 Val Cys Cys Lys Cys Asp Gly Arg Ile Glu Leu Thr Val Glu Ser Ser 65 70 75 80 Ala Glu Asp Leu Arg Thr Leu Gln Gln Leu Phe Leu Ser Thr Leu Ser 85 90 95 Phe Val Cys Pro Trp Cys Ala Thr Asn Gln 100 105 <210> 30 <211> 99 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Protein sequence of E7 of HPV52 <400> 30 Met Arg Gly Asp Lys Ala Thr Ile Lys Asp Tyr Ile Leu Asp Leu Gln 1 5 10 15 Pro Glu Thr Thr Asp Leu His Cys Tyr Glu Gln Leu Gly Asp Ser Ser 20 25 30 Asp Glu Glu Asp Thr Asp Gly Val Asp Arg Pro Asp Gly Gln Ala Glu 35 40 45 Gln Ala Thr Ser Asn Tyr Tyr Ile Val Thr Tyr Cys His Ser Cys Asp 50 55 60 Ser Thr Leu Arg Leu Cys Ile His Ser Thr Ala Thr Asp Leu Arg Thr 65 70 75 80 Leu Gln Gln Met Leu Leu Gly Thr Leu Gln Val Val Cys Pro Gly Cys 85 90 95 Ala Arg Leu <210> 31 <211> 99 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Modified version of protein sequence of E7 of HPV52 <400> 31 Met Arg Gly Asp Lys Ala Thr Ile Lys Asp Tyr Ile Leu Asp Leu Gln 1 5 10 15 Pro Glu Thr Thr Asp Leu His Cys Tyr Glu Gln Leu Gly Asp Ser Ser 20 25 30 Asp Glu Glu Asp Thr Asp Gly Val Asp Arg Pro Asp Gly Gln Ala Glu 35 40 45 Gln Ala Thr Ser Asn Tyr Tyr Ile Val Thr Tyr Cys His Ser Cys Asp 50 55 60 Ser Thr Leu Arg Leu Cys Ile His Ser Thr Ala Thr Asp Leu Arg Thr 65 70 75 80 Leu Gln Gln Leu Leu Met Gly Thr Leu Gln Val Val Cys Pro Gly Cys 85 90 95 Ala Arg Leu <210> 32 <211> 98 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Protein sequence of E7 of HPV 58 <400> 32 Met Arg Gly Asn Asn Pro Thr Leu Arg Glu Tyr Ile Leu Asp Leu His 1 5 10 15 Pro Glu Pro Thr Asp Leu Phe Cys Tyr Glu Gln Leu Cys Asp Ser Ser 20 25 30 Asp Glu Asp Glu Ile Gly Leu Asp Arg Pro Asp Gly Gln Ala Gln Pro 35 40 45 Ala Thr Ala Asn Tyr Tyr Ile Val Thr Cys Cys Tyr Thr Cys Asp Thr 50 55 60 Thr Val Arg Leu Cys Ile Asn Ser Thr Thr Thr Asp Val Arg Thr Leu 65 70 75 80 Gln Gln Leu Leu Met Gly Thr Cys Thr Ile Val Cys Pro Ser Cys Ala 85 90 95 Gln Gln <210> 33 <211> 828 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> polynucleotide for antigen E7 of HPV16, HVP18 and HPV45 acidic-deleted <220> <221> CDS <222> (1)..(828) <400> 33 ggt cag gcg gaa ccg gat cgc gcg cac tac aac atc gtt act ttt tgt 48 Gly Gln Ala Glu Pro Asp Arg Ala His Tyr Asn Ile Val Thr Phe Cys 1 5 10 15 tgc aaa tgt gat tcc act ctg cgc ctg tgt gtg caa tcc acc cac gta 96 Cys Lys Cys Asp Ser Thr Leu Arg Leu Cys Val Gln Ser Thr His Val 20 25 30 gac att cgc act ctg gaa gac ctg ctg atg ggt acc ctt ggt att gtt 144 Asp Ile Arg Thr Leu Glu Asp Leu Leu Met Gly Thr Leu Gly Ile Val 35 40 45 tgt ccg att tgc tcc cag aag ccg gcg tct ggc gtt aac cac caa cac 192 Cys Pro Ile Cys Ser Gln Lys Pro Ala Ser Gly Val Asn His Gln His 50 55 60 ctg ccg gcg cgt cgc gca gag ccg cag cgt cac acc atg ctg tgc atg 240 Leu Pro Ala Arg Arg Ala Glu Pro Gln Arg His Thr Met Leu Cys Met 65 70 75 80 tgc tgt aaa tgt gag gcc cgt atc gag ctg gtc gtt gag tct agc gcc 288 Cys Cys Lys Cys Glu Ala Arg Ile Glu Leu Val Val Glu Ser Ser Ala 85 90 95 gac gat ctg cgt gcg ttt cag cag ctg ttc ctg aac acg ctg agc ttc 336 Asp Asp Leu Arg Ala Phe Gln Gln Leu Phe Leu Asn Thr Leu Ser Phe 100 105 110 gtt tgc ccg tgg tgt gct agc cag cag ggc gtg tct cac gct cag ctg 384 Val Cys Pro Trp Cys Ala Ser Gln Gln Gly Val Ser His Ala Gln Leu 115 120 125 ccg gca cgt cgt gct gag cct cag cgt cac aaa atc ctg tgc gtg tgc 432 Pro Ala Arg Arg Ala Glu Pro Gln Arg His Lys Ile Leu Cys Val Cys 130 135 140 tgc aaa tgc gat ggc cgc atc gaa ctg acc gtg gaa tct agc gca gaa 480 Cys Lys Cys Asp Gly Arg Ile Glu Leu Thr Val Glu Ser Ser Ala Glu 145 150 155 160 gac ctg cgt acg ctg cag caa ctg ttc ctg agc acg ctg tcc ttc gta 528 Asp Leu Arg Thr Leu Gln Gln Leu Phe Leu Ser Thr Leu Ser Phe Val 165 170 175 tgc cct tgg tgc gca act aat cag atg cac ggt gac acc ccg acc ctg 576 Cys Pro Trp Cys Ala Thr Asn Gln Met His Gly Asp Thr Pro Thr Leu 180 185 190 cac gaa tac atg ctg gac ctg cag cca gaa acc acc gat ctg tac tgt 624 His Glu Tyr Met Leu Asp Leu Gln Pro Glu Thr Thr Asp Leu Tyr Cys 195 200 205 tac gaa cag ctg aac atg cat ggc cca aaa gct act ctg cag gat atc 672 Tyr Glu Gln Leu Asn Met His Gly Pro Lys Ala Thr Leu Gln Asp Ile 210 215 220 gtc ctg cat ctg gaa cca cag aac gaa atc ccg gta gat ctg ctg tgc 720 Val Leu His Leu Glu Pro Gln Asn Glu Ile Pro Val Asp Leu Leu Cys 225 230 235 240 cat gag cag ctg atg cat ggt ccg cgt gaa acc ctg cag gaa atc gtt 768 His Glu Gln Leu Met His Gly Pro Arg Glu Thr Leu Gln Glu Ile Val 245 250 255 ctg cac ctg gaa ccg caa aac gaa ctg gac ccg gtt gac ctg ctg tgc 816 Leu His Leu Glu Pro Gln Asn Glu Leu Asp Pro Val Asp Leu Leu Cys 260 265 270 tat gaa cag ctg 828 Tyr Glu Gln Leu 275 <210> 34 <211> 276 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 34 Gly Gln Ala Glu Pro Asp Arg Ala His Tyr Asn Ile Val Thr Phe Cys 1 5 10 15 Cys Lys Cys Asp Ser Thr Leu Arg Leu Cys Val Gln Ser Thr His Val 20 25 30 Asp Ile Arg Thr Leu Glu Asp Leu Leu Met Gly Thr Leu Gly Ile Val 35 40 45 Cys Pro Ile Cys Ser Gln Lys Pro Ala Ser Gly Val Asn His Gln His 50 55 60 Leu Pro Ala Arg Arg Ala Glu Pro Gln Arg His Thr Met Leu Cys Met 65 70 75 80 Cys Cys Lys Cys Glu Ala Arg Ile Glu Leu Val Val Glu Ser Ser Ala 85 90 95 Asp Asp Leu Arg Ala Phe Gln Gln Leu Phe Leu Asn Thr Leu Ser Phe 100 105 110 Val Cys Pro Trp Cys Ala Ser Gln Gln Gly Val Ser His Ala Gln Leu 115 120 125 Pro Ala Arg Arg Ala Glu Pro Gln Arg His Lys Ile Leu Cys Val Cys 130 135 140 Cys Lys Cys Asp Gly Arg Ile Glu Leu Thr Val Glu Ser Ser Ala Glu 145 150 155 160 Asp Leu Arg Thr Leu Gln Gln Leu Phe Leu Ser Thr Leu Ser Phe Val 165 170 175 Cys Pro Trp Cys Ala Thr Asn Gln Met His Gly Asp Thr Pro Thr Leu 180 185 190 His Glu Tyr Met Leu Asp Leu Gln Pro Glu Thr Thr Asp Leu Tyr Cys 195 200 205 Tyr Glu Gln Leu Asn Met His Gly Pro Lys Ala Thr Leu Gln Asp Ile 210 215 220 Val Leu His Leu Glu Pro Gln Asn Glu Ile Pro Val Asp Leu Leu Cys 225 230 235 240 His Glu Gln Leu Met His Gly Pro Arg Glu Thr Leu Gln Glu Ile Val 245 250 255 Leu His Leu Glu Pro Gln Asn Glu Leu Asp Pro Val Asp Leu Leu Cys 260 265 270 Tyr Glu Gln Leu 275 <210> 35 <211> 933 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Polynucleotide for antigen E7 of HPV16, HPV18 and HPV45 full <220> <221> CDS <222> (1)..(933) <400> 35 gaa gac gaa atc gac ggc cct gcg ggc cag gct gaa cca gat cgt gct 48 Glu Asp Glu Ile Asp Gly Pro Ala Gly Gln Ala Glu Pro Asp Arg Ala 1 5 10 15 cac tac aac atc gta act ttt tgc tgt aag tgc gat agc act ctg cgt 96 His Tyr Asn Ile Val Thr Phe Cys Cys Lys Cys Asp Ser Thr Leu Arg 20 25 30 ctg tgc gta cag tct act cac gtt gat atc cgc act ctg gaa gat ctg 144 Leu Cys Val Gln Ser Thr His Val Asp Ile Arg Thr Leu Glu Asp Leu 35 40 45 ctg atg ggt acc ctg ggt atc gtc tgc cca atc tgc tct caa aag cct 192 Leu Met Gly Thr Leu Gly Ile Val Cys Pro Ile Cys Ser Gln Lys Pro 50 55 60 gct tct ggt gtt aac cat cag cac ctg ccg gct cgt cgc gct gaa cca 240 Ala Ser Gly Val Asn His Gln His Leu Pro Ala Arg Arg Ala Glu Pro 65 70 75 80 cag cgt cat acc atg ctg tgc atg tgt tgc aaa tgc gag gct cgc atc 288 Gln Arg His Thr Met Leu Cys Met Cys Cys Lys Cys Glu Ala Arg Ile 85 90 95 gaa ctg gtt gtt gaa tcc agc gct gac gac ctg cgt gcg ttt cag caa 336 Glu Leu Val Val Glu Ser Ser Ala Asp Asp Leu Arg Ala Phe Gln Gln 100 105 110 ctg ttc ctg aac acg ctg tct ttt gtt tgt ccg tgg tgt gcc tcc cag 384 Leu Phe Leu Asn Thr Leu Ser Phe Val Cys Pro Trp Cys Ala Ser Gln 115 120 125 cag gag aac gat gaa gcg gat ggc gtg tcc cac gcg cag ctg ccg gca 432 Gln Glu Asn Asp Glu Ala Asp Gly Val Ser His Ala Gln Leu Pro Ala 130 135 140 cgt cgt gca gaa ccg cag cgc cac aag att ctg tgc gtt tgc tgt aaa 480 Arg Arg Ala Glu Pro Gln Arg His Lys Ile Leu Cys Val Cys Cys Lys 145 150 155 160 tgt gat ggc cgt atc gaa ctg act gtg gaa tcc tcc gcg gaa gat ctg 528 Cys Asp Gly Arg Ile Glu Leu Thr Val Glu Ser Ser Ala Glu Asp Leu 165 170 175 cgt acg ctg cag cag ctg ttc ctg tct acc ctg tct ttc gtg tgc ccg 576 Arg Thr Leu Gln Gln Leu Phe Leu Ser Thr Leu Ser Phe Val Cys Pro 180 185 190 tgg tgc gcc acc aat caa atg cac ggc gac acc ccg acc ctg cac gaa 624 Trp Cys Ala Thr Asn Gln Met His Gly Asp Thr Pro Thr Leu His Glu 195 200 205 tac atg ctg gac ctg cag ccg gaa acc acg gat ctg tat tgt tat gaa 672 Tyr Met Leu Asp Leu Gln Pro Glu Thr Thr Asp Leu Tyr Cys Tyr Glu 210 215 220 cag ctg aac gat agc agc gag gaa atg cac ggt ccg aaa gca act ctg 720 Gln Leu Asn Asp Ser Ser Glu Glu Met His Gly Pro Lys Ala Thr Leu 225 230 235 240 cag gac att gtg ctg cat ctg gag cca cag aac gaa atc ccg gtt gat 768 Gln Asp Ile Val Leu His Leu Glu Pro Gln Asn Glu Ile Pro Val Asp 245 250 255 ctg ctg tgc cac gag caa ctg agc gat tcc gaa gag gaa aac gac gaa 816 Leu Leu Cys His Glu Gln Leu Ser Asp Ser Glu Glu Glu Asn Asp Glu 260 265 270 att gat atg cat ggt ccg cgc gag acc ctg caa gaa atc gtc ctg cac 864 Ile Asp Met His Gly Pro Arg Glu Thr Leu Gln Glu Ile Val Leu His 275 280 285 ctg gaa ccg caa aac gaa ctg gac cct gta gac ctg ctg tgc tac gaa 912 Leu Glu Pro Gln Asn Glu Leu Asp Pro Val Asp Leu Leu Cys Tyr Glu 290 295 300 cag ctg tcc gaa tct gaa gaa 933 Gln Leu Ser Glu Ser Glu Glu 305 310 <210> 36 <211> 311 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 36 Glu Asp Glu Ile Asp Gly Pro Ala Gly Gln Ala Glu Pro Asp Arg Ala 1 5 10 15 His Tyr Asn Ile Val Thr Phe Cys Cys Lys Cys Asp Ser Thr Leu Arg 20 25 30 Leu Cys Val Gln Ser Thr His Val Asp Ile Arg Thr Leu Glu Asp Leu 35 40 45 Leu Met Gly Thr Leu Gly Ile Val Cys Pro Ile Cys Ser Gln Lys Pro 50 55 60 Ala Ser Gly Val Asn His Gln His Leu Pro Ala Arg Arg Ala Glu Pro 65 70 75 80 Gln Arg His Thr Met Leu Cys Met Cys Cys Lys Cys Glu Ala Arg Ile 85 90 95 Glu Leu Val Val Glu Ser Ser Ala Asp Asp Leu Arg Ala Phe Gln Gln 100 105 110 Leu Phe Leu Asn Thr Leu Ser Phe Val Cys Pro Trp Cys Ala Ser Gln 115 120 125 Gln Glu Asn Asp Glu Ala Asp Gly Val Ser His Ala Gln Leu Pro Ala 130 135 140 Arg Arg Ala Glu Pro Gln Arg His Lys Ile Leu Cys Val Cys Cys Lys 145 150 155 160 Cys Asp Gly Arg Ile Glu Leu Thr Val Glu Ser Ser Ala Glu Asp Leu 165 170 175 Arg Thr Leu Gln Gln Leu Phe Leu Ser Thr Leu Ser Phe Val Cys Pro 180 185 190 Trp Cys Ala Thr Asn Gln Met His Gly Asp Thr Pro Thr Leu His Glu 195 200 205 Tyr Met Leu Asp Leu Gln Pro Glu Thr Thr Asp Leu Tyr Cys Tyr Glu 210 215 220 Gln Leu Asn Asp Ser Ser Glu Glu Met His Gly Pro Lys Ala Thr Leu 225 230 235 240 Gln Asp Ile Val Leu His Leu Glu Pro Gln Asn Glu Ile Pro Val Asp 245 250 255 Leu Leu Cys His Glu Gln Leu Ser Asp Ser Glu Glu Glu Asn Asp Glu 260 265 270 Ile Asp Met His Gly Pro Arg Glu Thr Leu Gln Glu Ile Val Leu His 275 280 285 Leu Glu Pro Gln Asn Glu Leu Asp Pro Val Asp Leu Leu Cys Tyr Glu 290 295 300 Gln Leu Ser Glu Ser Glu Glu 305 310 <210> 37 <211> 1011 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> polynucleotide for antigen E7 of HPV31, 33, 52 and 58 acidic-deleted <220> <221> CDS <222> (1)..(1011) <400> 37 gcg ggt caa gcg aag ccg gat acg agc aac tat aac att gtc acg ttc 48 Ala Gly Gln Ala Lys Pro Asp Thr Ser Asn Tyr Asn Ile Val Thr Phe 1 5 10 15 tgc tgc cag tgt gaa agc acc ttg cgt ctg tgt gtc cag agc acc caa 96 Cys Cys Gln Cys Glu Ser Thr Leu Arg Leu Cys Val Gln Ser Thr Gln 20 25 30 gtt gac atc cgt att ctg cag gag ttg ctg atg ggc agc ttt ggc atc 144 Val Asp Ile Arg Ile Leu Gln Glu Leu Leu Met Gly Ser Phe Gly Ile 35 40 45 gtg tgc ccg aat tgc agc act cgc ctg ggt cag gca cag ccg gcc acc 192 Val Cys Pro Asn Cys Ser Thr Arg Leu Gly Gln Ala Gln Pro Ala Thr 50 55 60 gct gac tac tac att gtt act tgt tgc cat acc tgc aat acc acg gtc 240 Ala Asp Tyr Tyr Ile Val Thr Cys Cys His Thr Cys Asn Thr Thr Val 65 70 75 80 cgc ctg tgc gtc aat tcc acc gct tcc gac ttg cgt acc att cag caa 288 Arg Leu Cys Val Asn Ser Thr Ala Ser Asp Leu Arg Thr Ile Gln Gln 85 90 95 ctg ctg atg ggc acg gtt aac atc gtt tgc ccg tct tgt gcg cag ctg 336 Leu Leu Met Gly Thr Val Asn Ile Val Cys Pro Ser Cys Ala Gln Leu 100 105 110 ggc caa gcg gaa cag gcg acg agc aat tac tac atc gtg act tac tgt 384 Gly Gln Ala Glu Gln Ala Thr Ser Asn Tyr Tyr Ile Val Thr Tyr Cys 115 120 125 cac tcg tgt gac agc acg ctg cgt ttg tgc att cac agc acc gcg acc 432 His Ser Cys Asp Ser Thr Leu Arg Leu Cys Ile His Ser Thr Ala Thr 130 135 140 gat ctg cgt acg ctg caa caa ttg ctg atg ggt acc ctg cag gtg gtg 480 Asp Leu Arg Thr Leu Gln Gln Leu Leu Met Gly Thr Leu Gln Val Val 145 150 155 160 tgc cct ggt tgc gca cgt ctg ggt caa gct caa ccg gca acc gcg aac 528 Cys Pro Gly Cys Ala Arg Leu Gly Gln Ala Gln Pro Ala Thr Ala Asn 165 170 175 tac tat atc gtt acg tgt tgt tat acg tgt gat acc acc gtt cgt ctg 576 Tyr Tyr Ile Val Thr Cys Cys Tyr Thr Cys Asp Thr Thr Val Arg Leu 180 185 190 tgc atc aac agc acc acc acc gat gtc cgc acg ctg caa caa ctg ctg 624 Cys Ile Asn Ser Thr Thr Thr Asp Val Arg Thr Leu Gln Gln Leu Leu 195 200 205 atg ggt acg tgt acg att gtt tgc ccg agc tgt gcc cag caa atg cgt 672 Met Gly Thr Cys Thr Ile Val Cys Pro Ser Cys Ala Gln Gln Met Arg 210 215 220 ggt gaa acc cca acg ctg cag gac tac gtg ctg gat ttg cag ccg gaa 720 Gly Glu Thr Pro Thr Leu Gln Asp Tyr Val Leu Asp Leu Gln Pro Glu 225 230 235 240 gca acc gac ctg tac tgc tac gag cag ctg atg cgt ggt cac aag ccg 768 Ala Thr Asp Leu Tyr Cys Tyr Glu Gln Leu Met Arg Gly His Lys Pro 245 250 255 acg ctg aaa gag tat atc ttg gac ctg tat ccg gag cct acc gat ctg 816 Thr Leu Lys Glu Tyr Ile Leu Asp Leu Tyr Pro Glu Pro Thr Asp Leu 260 265 270 tat tgc tat gaa cag ctg agc atg cgt ggc gat aag gcg acc atc aaa 864 Tyr Cys Tyr Glu Gln Leu Ser Met Arg Gly Asp Lys Ala Thr Ile Lys 275 280 285 gac tac att ctg gac ttg cag ccg gaa acc acg gat ctg cat tgc tac 912 Asp Tyr Ile Leu Asp Leu Gln Pro Glu Thr Thr Asp Leu His Cys Tyr 290 295 300 gaa caa ctg ggc atg cgc ggt aac aat ccg acc ctg cgc gag tat atc 960 Glu Gln Leu Gly Met Arg Gly Asn Asn Pro Thr Leu Arg Glu Tyr Ile 305 310 315 320 ctg gat ctg cac cca gag ccg act gac ctg ttc tgc tat gag cag ttg 1008 Leu Asp Leu His Pro Glu Pro Thr Asp Leu Phe Cys Tyr Glu Gln Leu 325 330 335 tgc 1011 Cys <210> 38 <211> 337 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 38 Ala Gly Gln Ala Lys Pro Asp Thr Ser Asn Tyr Asn Ile Val Thr Phe 1 5 10 15 Cys Cys Gln Cys Glu Ser Thr Leu Arg Leu Cys Val Gln Ser Thr Gln 20 25 30 Val Asp Ile Arg Ile Leu Gln Glu Leu Leu Met Gly Ser Phe Gly Ile 35 40 45 Val Cys Pro Asn Cys Ser Thr Arg Leu Gly Gln Ala Gln Pro Ala Thr 50 55 60 Ala Asp Tyr Tyr Ile Val Thr Cys Cys His Thr Cys Asn Thr Thr Val 65 70 75 80 Arg Leu Cys Val Asn Ser Thr Ala Ser Asp Leu Arg Thr Ile Gln Gln 85 90 95 Leu Leu Met Gly Thr Val Asn Ile Val Cys Pro Ser Cys Ala Gln Leu 100 105 110 Gly Gln Ala Glu Gln Ala Thr Ser Asn Tyr Tyr Ile Val Thr Tyr Cys 115 120 125 His Ser Cys Asp Ser Thr Leu Arg Leu Cys Ile His Ser Thr Ala Thr 130 135 140 Asp Leu Arg Thr Leu Gln Gln Leu Leu Met Gly Thr Leu Gln Val Val 145 150 155 160 Cys Pro Gly Cys Ala Arg Leu Gly Gln Ala Gln Pro Ala Thr Ala Asn 165 170 175 Tyr Tyr Ile Val Thr Cys Cys Tyr Thr Cys Asp Thr Thr Val Arg Leu 180 185 190 Cys Ile Asn Ser Thr Thr Thr Asp Val Arg Thr Leu Gln Gln Leu Leu 195 200 205 Met Gly Thr Cys Thr Ile Val Cys Pro Ser Cys Ala Gln Gln Met Arg 210 215 220 Gly Glu Thr Pro Thr Leu Gln Asp Tyr Val Leu Asp Leu Gln Pro Glu 225 230 235 240 Ala Thr Asp Leu Tyr Cys Tyr Glu Gln Leu Met Arg Gly His Lys Pro 245 250 255 Thr Leu Lys Glu Tyr Ile Leu Asp Leu Tyr Pro Glu Pro Thr Asp Leu 260 265 270 Tyr Cys Tyr Glu Gln Leu Ser Met Arg Gly Asp Lys Ala Thr Ile Lys 275 280 285 Asp Tyr Ile Leu Asp Leu Gln Pro Glu Thr Thr Asp Leu His Cys Tyr 290 295 300 Glu Gln Leu Gly Met Arg Gly Asn Asn Pro Thr Leu Arg Glu Tyr Ile 305 310 315 320 Leu Asp Leu His Pro Glu Pro Thr Asp Leu Phe Cys Tyr Glu Gln Leu 325 330 335 Cys <210> 39 <211> 1176 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> polynucleotide for antigen E7 of HPV31, 33, 52 and 58 full <220> <221> CDS <222> (1)..(1176) <400> 39 gat gaa gag gat gtc atc gat tcc cca gca ggc caa gca aag ccg gac 48 Asp Glu Glu Asp Val Ile Asp Ser Pro Ala Gly Gln Ala Lys Pro Asp 1 5 10 15 acc agc aat tac aat atc gtg acc ttc tgc tgc caa tgt gag tcc act 96 Thr Ser Asn Tyr Asn Ile Val Thr Phe Cys Cys Gln Cys Glu Ser Thr 20 25 30 ctg cgt ctg tgc gtt cag agc acc cag gtt gac att cgt att ctg caa 144 Leu Arg Leu Cys Val Gln Ser Thr Gln Val Asp Ile Arg Ile Leu Gln 35 40 45 gaa ttg ttg atg ggt agc ttt ggc att gtg tgt ccg aac tgc agc acc 192 Glu Leu Leu Met Gly Ser Phe Gly Ile Val Cys Pro Asn Cys Ser Thr 50 55 60 cgt ctg tcg gat gaa gat gaa ggt ctg gat cgt ccg gat ggt caa gcg 240 Arg Leu Ser Asp Glu Asp Glu Gly Leu Asp Arg Pro Asp Gly Gln Ala 65 70 75 80 cag ccg gcg act gca gat tac tat atc gtc act tgt tgc cac acc tgc 288 Gln Pro Ala Thr Ala Asp Tyr Tyr Ile Val Thr Cys Cys His Thr Cys 85 90 95 aat acc acc gtg cgt ctg tgt gtg aac agc acg gcg agc gac ctg cgc 336 Asn Thr Thr Val Arg Leu Cys Val Asn Ser Thr Ala Ser Asp Leu Arg 100 105 110 acg atc caa cag ttg ttg atg ggc acc gtg aat atc gtc tgc cca agc 384 Thr Ile Gln Gln Leu Leu Met Gly Thr Val Asn Ile Val Cys Pro Ser 115 120 125 tgt gct cag ttg agc gat gaa gag gac acc gac ggt gtc gac cgt ccg 432 Cys Ala Gln Leu Ser Asp Glu Glu Asp Thr Asp Gly Val Asp Arg Pro 130 135 140 gac ggc caa gct gag cag gcg acc agc aac tac tat atc gtt acg tac 480 Asp Gly Gln Ala Glu Gln Ala Thr Ser Asn Tyr Tyr Ile Val Thr Tyr 145 150 155 160 tgt cac agc tgc gat agc act ctg cgc ctg tgt att cat agc acg gcc 528 Cys His Ser Cys Asp Ser Thr Leu Arg Leu Cys Ile His Ser Thr Ala 165 170 175 acc gat ctg cgt acc ctg caa caa ctg ctg atg ggt act ctg cag gtt 576 Thr Asp Leu Arg Thr Leu Gln Gln Leu Leu Met Gly Thr Leu Gln Val 180 185 190 gtg tgc cca ggt tgt gct cgt ctg tcc gac gag gac gaa atc ggc ctg 624 Val Cys Pro Gly Cys Ala Arg Leu Ser Asp Glu Asp Glu Ile Gly Leu 195 200 205 gac cgt cct gat ggc cag gcc cag ccg gca acg gcg aac tat tac att 672 Asp Arg Pro Asp Gly Gln Ala Gln Pro Ala Thr Ala Asn Tyr Tyr Ile 210 215 220 gtg acc tgc tgc tat acg tgc gat acc acg gtc cgt ctg tgc att aac 720 Val Thr Cys Cys Tyr Thr Cys Asp Thr Thr Val Arg Leu Cys Ile Asn 225 230 235 240 tct acc acc acg gat gtt cgc acg ctg cag caa ctg ctg atg ggt acc 768 Ser Thr Thr Thr Asp Val Arg Thr Leu Gln Gln Leu Leu Met Gly Thr 245 250 255 tgt acc att gtt tgc ccg tct tgt gcc cag cag atg cgc ggt gaa acg 816 Cys Thr Ile Val Cys Pro Ser Cys Ala Gln Gln Met Arg Gly Glu Thr 260 265 270 ccg acc ctg cag gat tat gtt ctg gac ctg caa ccg gag gcg acc gat 864 Pro Thr Leu Gln Asp Tyr Val Leu Asp Leu Gln Pro Glu Ala Thr Asp 275 280 285 ctg tat tgc tac gag caa ctg ccg gac agc tcg atg cgt ggt cac aaa 912 Leu Tyr Cys Tyr Glu Gln Leu Pro Asp Ser Ser Met Arg Gly His Lys 290 295 300 ccg acg ctg aaa gag tac atc ctg gac ctg tac ccg gaa cct acg gat 960 Pro Thr Leu Lys Glu Tyr Ile Leu Asp Leu Tyr Pro Glu Pro Thr Asp 305 310 315 320 ctg tac tgt tat gaa caa ctg agc gat agc atg cgt ggt gac aag gcg 1008 Leu Tyr Cys Tyr Glu Gln Leu Ser Asp Ser Met Arg Gly Asp Lys Ala 325 330 335 acg att aag gac tac atc ttg gat ctg cag ccg gaa acc acc gac ctg 1056 Thr Ile Lys Asp Tyr Ile Leu Asp Leu Gln Pro Glu Thr Thr Asp Leu 340 345 350 cac tgc tat gag cag ctg ggt gat tct atg cgc ggt aac aat ccg acc 1104 His Cys Tyr Glu Gln Leu Gly Asp Ser Met Arg Gly Asn Asn Pro Thr 355 360 365 ctg cgc gag tac att ctg gac ttg cat ccg gaa ccg acg gac ctg ttc 1152 Leu Arg Glu Tyr Ile Leu Asp Leu His Pro Glu Pro Thr Asp Leu Phe 370 375 380 tgt tac gag cag ctg tgt gac agc 1176 Cys Tyr Glu Gln Leu Cys Asp Ser 385 390 <210> 40 <211> 392 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 40 Asp Glu Glu Asp Val Ile Asp Ser Pro Ala Gly Gln Ala Lys Pro Asp 1 5 10 15 Thr Ser Asn Tyr Asn Ile Val Thr Phe Cys Cys Gln Cys Glu Ser Thr 20 25 30 Leu Arg Leu Cys Val Gln Ser Thr Gln Val Asp Ile Arg Ile Leu Gln 35 40 45 Glu Leu Leu Met Gly Ser Phe Gly Ile Val Cys Pro Asn Cys Ser Thr 50 55 60 Arg Leu Ser Asp Glu Asp Glu Gly Leu Asp Arg Pro Asp Gly Gln Ala 65 70 75 80 Gln Pro Ala Thr Ala Asp Tyr Tyr Ile Val Thr Cys Cys His Thr Cys 85 90 95 Asn Thr Thr Val Arg Leu Cys Val Asn Ser Thr Ala Ser Asp Leu Arg 100 105 110 Thr Ile Gln Gln Leu Leu Met Gly Thr Val Asn Ile Val Cys Pro Ser 115 120 125 Cys Ala Gln Leu Ser Asp Glu Glu Asp Thr Asp Gly Val Asp Arg Pro 130 135 140 Asp Gly Gln Ala Glu Gln Ala Thr Ser Asn Tyr Tyr Ile Val Thr Tyr 145 150 155 160 Cys His Ser Cys Asp Ser Thr Leu Arg Leu Cys Ile His Ser Thr Ala 165 170 175 Thr Asp Leu Arg Thr Leu Gln Gln Leu Leu Met Gly Thr Leu Gln Val 180 185 190 Val Cys Pro Gly Cys Ala Arg Leu Ser Asp Glu Asp Glu Ile Gly Leu 195 200 205 Asp Arg Pro Asp Gly Gln Ala Gln Pro Ala Thr Ala Asn Tyr Tyr Ile 210 215 220 Val Thr Cys Cys Tyr Thr Cys Asp Thr Thr Val Arg Leu Cys Ile Asn 225 230 235 240 Ser Thr Thr Thr Asp Val Arg Thr Leu Gln Gln Leu Leu Met Gly Thr 245 250 255 Cys Thr Ile Val Cys Pro Ser Cys Ala Gln Gln Met Arg Gly Glu Thr 260 265 270 Pro Thr Leu Gln Asp Tyr Val Leu Asp Leu Gln Pro Glu Ala Thr Asp 275 280 285 Leu Tyr Cys Tyr Glu Gln Leu Pro Asp Ser Ser Met Arg Gly His Lys 290 295 300 Pro Thr Leu Lys Glu Tyr Ile Leu Asp Leu Tyr Pro Glu Pro Thr Asp 305 310 315 320 Leu Tyr Cys Tyr Glu Gln Leu Ser Asp Ser Met Arg Gly Asp Lys Ala 325 330 335 Thr Ile Lys Asp Tyr Ile Leu Asp Leu Gln Pro Glu Thr Thr Asp Leu 340 345 350 His Cys Tyr Glu Gln Leu Gly Asp Ser Met Arg Gly Asn Asn Pro Thr 355 360 365 Leu Arg Glu Tyr Ile Leu Asp Leu His Pro Glu Pro Thr Asp Leu Phe 370 375 380 Cys Tyr Glu Gln Leu Cys Asp Ser 385 390 <210> 41 <211> 759 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> polynucleotide for antigen E7 of HPV31, 52 and 58 acidic-deleted <220> <221> CDS <222> (1)..(759) <400> 41 gcg ggt caa gcc aaa ccg gat acc tcc aac tac aac att gtg acc ttc 48 Ala Gly Gln Ala Lys Pro Asp Thr Ser Asn Tyr Asn Ile Val Thr Phe 1 5 10 15 tgt tgt caa tgc gag agc acg ctg cgt ctg tgt gtt caa agc acc cag 96 Cys Cys Gln Cys Glu Ser Thr Leu Arg Leu Cys Val Gln Ser Thr Gln 20 25 30 gtt gac att cgt atc ctg caa gaa ctg ctg atg ggc tct ttt ggc atc 144 Val Asp Ile Arg Ile Leu Gln Glu Leu Leu Met Gly Ser Phe Gly Ile 35 40 45 gtc tgc cca aat tgc agc act cgc ctg ggc cag gcg gag cag gcg acg 192 Val Cys Pro Asn Cys Ser Thr Arg Leu Gly Gln Ala Glu Gln Ala Thr 50 55 60 agc aac tac tac att gtc acg tat tgc cat tcc tgt gat agc act ctg 240 Ser Asn Tyr Tyr Ile Val Thr Tyr Cys His Ser Cys Asp Ser Thr Leu 65 70 75 80 cgt ctg tgt atc cac agc acg gca acc gat ctg cgt acc ttg caa caa 288 Arg Leu Cys Ile His Ser Thr Ala Thr Asp Leu Arg Thr Leu Gln Gln 85 90 95 ctg ctg atg ggc acc ctg cag gtg gtt tgt ccg ggt tgc gct cgc ctg 336 Leu Leu Met Gly Thr Leu Gln Val Val Cys Pro Gly Cys Ala Arg Leu 100 105 110 ggc cag gcg cag cca gcg acg gcc aat tac tac atc gtt acc tgt tgc 384 Gly Gln Ala Gln Pro Ala Thr Ala Asn Tyr Tyr Ile Val Thr Cys Cys 115 120 125 tat acg tgc gat act acc gtc cgt ctg tgc att aac agc acc acc acg 432 Tyr Thr Cys Asp Thr Thr Val Arg Leu Cys Ile Asn Ser Thr Thr Thr 130 135 140 gac gtg cgt acc ctg caa cag ctg ctg atg ggt acc tgc acg att gtt 480 Asp Val Arg Thr Leu Gln Gln Leu Leu Met Gly Thr Cys Thr Ile Val 145 150 155 160 tgt ccg agc tgt gca caa caa atg cgt ggt gaa acg ccg acc ctg cag 528 Cys Pro Ser Cys Ala Gln Gln Met Arg Gly Glu Thr Pro Thr Leu Gln 165 170 175 gat tat gtg ttg gac ttg cag ccg gag gca acg gac ctg tac tgc tat 576 Asp Tyr Val Leu Asp Leu Gln Pro Glu Ala Thr Asp Leu Tyr Cys Tyr 180 185 190 gag cag ctg atg cgt ggt gac aag gcc acc att aaa gat tac atc ctg 624 Glu Gln Leu Met Arg Gly Asp Lys Ala Thr Ile Lys Asp Tyr Ile Leu 195 200 205 gac ttg caa ccg gaa acc acc gac ctg cac tgc tat gag cag ctg ggt 672 Asp Leu Gln Pro Glu Thr Thr Asp Leu His Cys Tyr Glu Gln Leu Gly 210 215 220 atg cgc ggt aat aac ccg acc ttg cgt gag tat atc ttg gac ctg cac 720 Met Arg Gly Asn Asn Pro Thr Leu Arg Glu Tyr Ile Leu Asp Leu His 225 230 235 240 ccg gag ccg acc gat ctg ttc tgt tac gaa cag ctg tgc 759 Pro Glu Pro Thr Asp Leu Phe Cys Tyr Glu Gln Leu Cys 245 250 <210> 42 <211> 253 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 42 Ala Gly Gln Ala Lys Pro Asp Thr Ser Asn Tyr Asn Ile Val Thr Phe 1 5 10 15 Cys Cys Gln Cys Glu Ser Thr Leu Arg Leu Cys Val Gln Ser Thr Gln 20 25 30 Val Asp Ile Arg Ile Leu Gln Glu Leu Leu Met Gly Ser Phe Gly Ile 35 40 45 Val Cys Pro Asn Cys Ser Thr Arg Leu Gly Gln Ala Glu Gln Ala Thr 50 55 60 Ser Asn Tyr Tyr Ile Val Thr Tyr Cys His Ser Cys Asp Ser Thr Leu 65 70 75 80 Arg Leu Cys Ile His Ser Thr Ala Thr Asp Leu Arg Thr Leu Gln Gln 85 90 95 Leu Leu Met Gly Thr Leu Gln Val Val Cys Pro Gly Cys Ala Arg Leu 100 105 110 Gly Gln Ala Gln Pro Ala Thr Ala Asn Tyr Tyr Ile Val Thr Cys Cys 115 120 125 Tyr Thr Cys Asp Thr Thr Val Arg Leu Cys Ile Asn Ser Thr Thr Thr 130 135 140 Asp Val Arg Thr Leu Gln Gln Leu Leu Met Gly Thr Cys Thr Ile Val 145 150 155 160 Cys Pro Ser Cys Ala Gln Gln Met Arg Gly Glu Thr Pro Thr Leu Gln 165 170 175 Asp Tyr Val Leu Asp Leu Gln Pro Glu Ala Thr Asp Leu Tyr Cys Tyr 180 185 190 Glu Gln Leu Met Arg Gly Asp Lys Ala Thr Ile Lys Asp Tyr Ile Leu 195 200 205 Asp Leu Gln Pro Glu Thr Thr Asp Leu His Cys Tyr Glu Gln Leu Gly 210 215 220 Met Arg Gly Asn Asn Pro Thr Leu Arg Glu Tyr Ile Leu Asp Leu His 225 230 235 240 Pro Glu Pro Thr Asp Leu Phe Cys Tyr Glu Gln Leu Cys 245 250 <210> 43 <211> 885 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> polynucleotide for antigen E7 of HPV31, 52 and 58 full <220> <221> CDS <222> (1)..(885) <400> 43 gat gaa gag gat gtc atc gat tcc cca gca ggc caa gca aag ccg gac 48 Asp Glu Glu Asp Val Ile Asp Ser Pro Ala Gly Gln Ala Lys Pro Asp 1 5 10 15 acc agc aat tac aat atc gtg acc ttc tgc tgc caa tgt gag tcc act 96 Thr Ser Asn Tyr Asn Ile Val Thr Phe Cys Cys Gln Cys Glu Ser Thr 20 25 30 ctg cgt ctg tgc gtt cag agc acc cag gtt gac att cgt att ctg caa 144 Leu Arg Leu Cys Val Gln Ser Thr Gln Val Asp Ile Arg Ile Leu Gln 35 40 45 gaa ttg ttg atg ggt agc ttt ggc att gtg tgt ccg aac tgc agc acc 192 Glu Leu Leu Met Gly Ser Phe Gly Ile Val Cys Pro Asn Cys Ser Thr 50 55 60 cgt ctg agc gat gaa gag gac acc gac ggt gtc gac cgt ccg gac ggc 240 Arg Leu Ser Asp Glu Glu Asp Thr Asp Gly Val Asp Arg Pro Asp Gly 65 70 75 80 caa gct gag cag gcg acc agc aac tac tat atc gtt acg tac tgt cac 288 Gln Ala Glu Gln Ala Thr Ser Asn Tyr Tyr Ile Val Thr Tyr Cys His 85 90 95 agc tgc gat agc act ctg cgc ctg tgt att cat agc acg gcc acc gat 336 Ser Cys Asp Ser Thr Leu Arg Leu Cys Ile His Ser Thr Ala Thr Asp 100 105 110 ctg cgt acc ctg caa caa ctg ctg atg ggt act ctg cag gtt gtg tgc 384 Leu Arg Thr Leu Gln Gln Leu Leu Met Gly Thr Leu Gln Val Val Cys 115 120 125 cca ggt tgt gct cgt ctg tcc gac gag gac gaa atc ggc ctg gac cgt 432 Pro Gly Cys Ala Arg Leu Ser Asp Glu Asp Glu Ile Gly Leu Asp Arg 130 135 140 cct gat ggc cag gcc cag ccg gca acg gcg aac tat tac att gtg acc 480 Pro Asp Gly Gln Ala Gln Pro Ala Thr Ala Asn Tyr Tyr Ile Val Thr 145 150 155 160 tgc tgc tat acg tgc gat acc acg gtc cgt ctg tgc att aac tct acc 528 Cys Cys Tyr Thr Cys Asp Thr Thr Val Arg Leu Cys Ile Asn Ser Thr 165 170 175 acc acg gat gtt cgc acg ctg cag caa ctg ctg atg ggt acc tgt acc 576 Thr Thr Asp Val Arg Thr Leu Gln Gln Leu Leu Met Gly Thr Cys Thr 180 185 190 att gtt tgc ccg tct tgt gcc cag cag atg cgc ggt gaa acg ccg acc 624 Ile Val Cys Pro Ser Cys Ala Gln Gln Met Arg Gly Glu Thr Pro Thr 195 200 205 ctg cag gat tat gtt ctg gac ctg caa ccg gag gcg acc gat ctg tat 672 Leu Gln Asp Tyr Val Leu Asp Leu Gln Pro Glu Ala Thr Asp Leu Tyr 210 215 220 tgc tac gag caa ctg ccg gac agc tcg atg cgt ggt gac aag gcg acg 720 Cys Tyr Glu Gln Leu Pro Asp Ser Ser Met Arg Gly Asp Lys Ala Thr 225 230 235 240 att aag gac tac atc ttg gat ctg cag ccg gaa acc acc gac ctg cac 768 Ile Lys Asp Tyr Ile Leu Asp Leu Gln Pro Glu Thr Thr Asp Leu His 245 250 255 tgc tat gag cag ctg ggt gat tct atg cgc ggt aac aat ccg acc ctg 816 Cys Tyr Glu Gln Leu Gly Asp Ser Met Arg Gly Asn Asn Pro Thr Leu 260 265 270 cgc gag tac att ctg gac ttg cat ccg gaa ccg acg gac ctg ttc tgt 864 Arg Glu Tyr Ile Leu Asp Leu His Pro Glu Pro Thr Asp Leu Phe Cys 275 280 285 tac gag cag ctg tgt gac agc 885 Tyr Glu Gln Leu Cys Asp Ser 290 295 <210> 44 <211> 295 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 44 Asp Glu Glu Asp Val Ile Asp Ser Pro Ala Gly Gln Ala Lys Pro Asp 1 5 10 15 Thr Ser Asn Tyr Asn Ile Val Thr Phe Cys Cys Gln Cys Glu Ser Thr 20 25 30 Leu Arg Leu Cys Val Gln Ser Thr Gln Val Asp Ile Arg Ile Leu Gln 35 40 45 Glu Leu Leu Met Gly Ser Phe Gly Ile Val Cys Pro Asn Cys Ser Thr 50 55 60 Arg Leu Ser Asp Glu Glu Asp Thr Asp Gly Val Asp Arg Pro Asp Gly 65 70 75 80 Gln Ala Glu Gln Ala Thr Ser Asn Tyr Tyr Ile Val Thr Tyr Cys His 85 90 95 Ser Cys Asp Ser Thr Leu Arg Leu Cys Ile His Ser Thr Ala Thr Asp 100 105 110 Leu Arg Thr Leu Gln Gln Leu Leu Met Gly Thr Leu Gln Val Val Cys 115 120 125 Pro Gly Cys Ala Arg Leu Ser Asp Glu Asp Glu Ile Gly Leu Asp Arg 130 135 140 Pro Asp Gly Gln Ala Gln Pro Ala Thr Ala Asn Tyr Tyr Ile Val Thr 145 150 155 160 Cys Cys Tyr Thr Cys Asp Thr Thr Val Arg Leu Cys Ile Asn Ser Thr 165 170 175 Thr Thr Asp Val Arg Thr Leu Gln Gln Leu Leu Met Gly Thr Cys Thr 180 185 190 Ile Val Cys Pro Ser Cys Ala Gln Gln Met Arg Gly Glu Thr Pro Thr 195 200 205 Leu Gln Asp Tyr Val Leu Asp Leu Gln Pro Glu Ala Thr Asp Leu Tyr 210 215 220 Cys Tyr Glu Gln Leu Pro Asp Ser Ser Met Arg Gly Asp Lys Ala Thr 225 230 235 240 Ile Lys Asp Tyr Ile Leu Asp Leu Gln Pro Glu Thr Thr Asp Leu His 245 250 255 Cys Tyr Glu Gln Leu Gly Asp Ser Met Arg Gly Asn Asn Pro Thr Leu 260 265 270 Arg Glu Tyr Ile Leu Asp Leu His Pro Glu Pro Thr Asp Leu Phe Cys 275 280 285 Tyr Glu Gln Leu Cys Asp Ser 290 295 <210> 45 <211> 759 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> polynucleotide for antigen E7 of HPV31, 33 and 52 acidic-deleted <220> <221> CDS <222> (1)..(759) <400> 45 gcg ggt caa gcc aaa ccg gat acc tcc aac tac aac att gtg acc ttc 48 Ala Gly Gln Ala Lys Pro Asp Thr Ser Asn Tyr Asn Ile Val Thr Phe 1 5 10 15 tgt tgt caa tgc gag agc acg ctg cgt ctg tgt gtt caa agc acc cag 96 Cys Cys Gln Cys Glu Ser Thr Leu Arg Leu Cys Val Gln Ser Thr Gln 20 25 30 gtt gac att cgt atc ctg caa gaa ctg ctg atg ggc tct ttt ggc atc 144 Val Asp Ile Arg Ile Leu Gln Glu Leu Leu Met Gly Ser Phe Gly Ile 35 40 45 gtc tgc cca aat tgc agc act cgc ctg ggt cag gcg caa ccg gcc acg 192 Val Cys Pro Asn Cys Ser Thr Arg Leu Gly Gln Ala Gln Pro Ala Thr 50 55 60 gcg gac tac tat atc gtg acc tgt tgc cac acc tgc aac act acc gtt 240 Ala Asp Tyr Tyr Ile Val Thr Cys Cys His Thr Cys Asn Thr Thr Val 65 70 75 80 cgc ttg tgt gtc aat agc acc gct tcc gat ctg cgt acc att caa caa 288 Arg Leu Cys Val Asn Ser Thr Ala Ser Asp Leu Arg Thr Ile Gln Gln 85 90 95 ctg ctg atg ggt acc gtt aac atc gtg tgc ccg agc tgc gca cag ctg 336 Leu Leu Met Gly Thr Val Asn Ile Val Cys Pro Ser Cys Ala Gln Leu 100 105 110 ggc cag gcg gag cag gcg acg agc aac tac tac att gtc acg tat tgc 384 Gly Gln Ala Glu Gln Ala Thr Ser Asn Tyr Tyr Ile Val Thr Tyr Cys 115 120 125 cat tcc tgt gat agc act ctg cgt ctg tgt atc cac agc acg gca acc 432 His Ser Cys Asp Ser Thr Leu Arg Leu Cys Ile His Ser Thr Ala Thr 130 135 140 gat ctg cgt acc ttg caa caa ctg ctg atg ggc acc ctg cag gtg gtt 480 Asp Leu Arg Thr Leu Gln Gln Leu Leu Met Gly Thr Leu Gln Val Val 145 150 155 160 tgt ccg ggt tgc gct cgc ctg atg cgt ggt gaa acg ccg acc ctg cag 528 Cys Pro Gly Cys Ala Arg Leu Met Arg Gly Glu Thr Pro Thr Leu Gln 165 170 175 gat tat gtg ttg gac ttg cag ccg gag gca acg gac ctg tac tgc tat 576 Asp Tyr Val Leu Asp Leu Gln Pro Glu Ala Thr Asp Leu Tyr Cys Tyr 180 185 190 gag cag ctg atg cgt ggc cat aag ccg acg ctg aaa gag tat att ctg 624 Glu Gln Leu Met Arg Gly His Lys Pro Thr Leu Lys Glu Tyr Ile Leu 195 200 205 gac ctg tac cca gag ccg acg gat ttg tac tgt tat gaa cag ctg agc 672 Asp Leu Tyr Pro Glu Pro Thr Asp Leu Tyr Cys Tyr Glu Gln Leu Ser 210 215 220 atg cgt ggt gac aag gcc acc att aaa gat tac atc ctg gac ttg caa 720 Met Arg Gly Asp Lys Ala Thr Ile Lys Asp Tyr Ile Leu Asp Leu Gln 225 230 235 240 ccg gaa acc acc gac ctg cac tgc tat gag cag ctg ggt 759 Pro Glu Thr Thr Asp Leu His Cys Tyr Glu Gln Leu Gly 245 250 <210> 46 <211> 253 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 46 Ala Gly Gln Ala Lys Pro Asp Thr Ser Asn Tyr Asn Ile Val Thr Phe 1 5 10 15 Cys Cys Gln Cys Glu Ser Thr Leu Arg Leu Cys Val Gln Ser Thr Gln 20 25 30 Val Asp Ile Arg Ile Leu Gln Glu Leu Leu Met Gly Ser Phe Gly Ile 35 40 45 Val Cys Pro Asn Cys Ser Thr Arg Leu Gly Gln Ala Gln Pro Ala Thr 50 55 60 Ala Asp Tyr Tyr Ile Val Thr Cys Cys His Thr Cys Asn Thr Thr Val 65 70 75 80 Arg Leu Cys Val Asn Ser Thr Ala Ser Asp Leu Arg Thr Ile Gln Gln 85 90 95 Leu Leu Met Gly Thr Val Asn Ile Val Cys Pro Ser Cys Ala Gln Leu 100 105 110 Gly Gln Ala Glu Gln Ala Thr Ser Asn Tyr Tyr Ile Val Thr Tyr Cys 115 120 125 His Ser Cys Asp Ser Thr Leu Arg Leu Cys Ile His Ser Thr Ala Thr 130 135 140 Asp Leu Arg Thr Leu Gln Gln Leu Leu Met Gly Thr Leu Gln Val Val 145 150 155 160 Cys Pro Gly Cys Ala Arg Leu Met Arg Gly Glu Thr Pro Thr Leu Gln 165 170 175 Asp Tyr Val Leu Asp Leu Gln Pro Glu Ala Thr Asp Leu Tyr Cys Tyr 180 185 190 Glu Gln Leu Met Arg Gly His Lys Pro Thr Leu Lys Glu Tyr Ile Leu 195 200 205 Asp Leu Tyr Pro Glu Pro Thr Asp Leu Tyr Cys Tyr Glu Gln Leu Ser 210 215 220 Met Arg Gly Asp Lys Ala Thr Ile Lys Asp Tyr Ile Leu Asp Leu Gln 225 230 235 240 Pro Glu Thr Thr Asp Leu His Cys Tyr Glu Gln Leu Gly 245 250 <210> 47 <211> 882 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> polynucleotide for antigen E7 of HPV31, 33 and 52 full <220> <221> CDS <222> (1)..(882) <400> 47 gat gaa gag gat gtc atc gat tcc cca gca ggc caa gca aag ccg gac 48 Asp Glu Glu Asp Val Ile Asp Ser Pro Ala Gly Gln Ala Lys Pro Asp 1 5 10 15 acc agc aat tac aat atc gtg acc ttc tgc tgc caa tgt gag tcc act 96 Thr Ser Asn Tyr Asn Ile Val Thr Phe Cys Cys Gln Cys Glu Ser Thr 20 25 30 ctg cgt ctg tgc gtt cag agc acc cag gtt gac att cgt att ctg caa 144 Leu Arg Leu Cys Val Gln Ser Thr Gln Val Asp Ile Arg Ile Leu Gln 35 40 45 gaa ttg ttg atg ggt agc ttt ggc att gtg tgt ccg aac tgc agc acc 192 Glu Leu Leu Met Gly Ser Phe Gly Ile Val Cys Pro Asn Cys Ser Thr 50 55 60 cgt ctg tcg gat gaa gat gaa ggt ctg gat cgt ccg gat ggt caa gcg 240 Arg Leu Ser Asp Glu Asp Glu Gly Leu Asp Arg Pro Asp Gly Gln Ala 65 70 75 80 cag ccg gcg act gca gat tac tat atc gtc act tgt tgc cac acc tgc 288 Gln Pro Ala Thr Ala Asp Tyr Tyr Ile Val Thr Cys Cys His Thr Cys 85 90 95 aat acc acc gtg cgt ctg tgt gtg aac agc acg gcg agc gac ctg cgc 336 Asn Thr Thr Val Arg Leu Cys Val Asn Ser Thr Ala Ser Asp Leu Arg 100 105 110 acg atc caa cag ttg ttg atg ggc acc gtg aat atc gtc tgc cca agc 384 Thr Ile Gln Gln Leu Leu Met Gly Thr Val Asn Ile Val Cys Pro Ser 115 120 125 tgt gct cag ttg agc gat gaa gag gac acc gac ggt gtc gac cgt ccg 432 Cys Ala Gln Leu Ser Asp Glu Glu Asp Thr Asp Gly Val Asp Arg Pro 130 135 140 gac ggc caa gct gag cag gcg acc agc aac tac tat atc gtt acg tac 480 Asp Gly Gln Ala Glu Gln Ala Thr Ser Asn Tyr Tyr Ile Val Thr Tyr 145 150 155 160 tgt cac agc tgc gat agc act ctg cgc ctg tgt att cat agc acg gcc 528 Cys His Ser Cys Asp Ser Thr Leu Arg Leu Cys Ile His Ser Thr Ala 165 170 175 acc gat ctg cgt acc ctg caa caa ctg ctg atg ggt act ctg cag gtt 576 Thr Asp Leu Arg Thr Leu Gln Gln Leu Leu Met Gly Thr Leu Gln Val 180 185 190 gtg tgc cca ggt tgt gct cgt ctg atg cgc ggt gaa acg ccg acc ctg 624 Val Cys Pro Gly Cys Ala Arg Leu Met Arg Gly Glu Thr Pro Thr Leu 195 200 205 cag gat tat gtt ctg gac ctg caa ccg gag gcg acc gat ctg tat tgc 672 Gln Asp Tyr Val Leu Asp Leu Gln Pro Glu Ala Thr Asp Leu Tyr Cys 210 215 220 tac gag caa ctg ccg gac agc tcg atg cgt ggt cac aaa ccg acg ctg 720 Tyr Glu Gln Leu Pro Asp Ser Ser Met Arg Gly His Lys Pro Thr Leu 225 230 235 240 aaa gag tac atc ctg gac ctg tac ccg gaa cct acg gat ctg tac tgt 768 Lys Glu Tyr Ile Leu Asp Leu Tyr Pro Glu Pro Thr Asp Leu Tyr Cys 245 250 255 tat gaa caa ctg agc gat agc atg cgt ggt gac aag gcg acg att aag 816 Tyr Glu Gln Leu Ser Asp Ser Met Arg Gly Asp Lys Ala Thr Ile Lys 260 265 270 gac tac atc ttg gat ctg cag ccg gaa acc acc gac ctg cac tgc tat 864 Asp Tyr Ile Leu Asp Leu Gln Pro Glu Thr Thr Asp Leu His Cys Tyr 275 280 285 gag cag ctg ggt gat tct 882 Glu Gln Leu Gly Asp Ser 290 <210> 48 <211> 294 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 48 Asp Glu Glu Asp Val Ile Asp Ser Pro Ala Gly Gln Ala Lys Pro Asp 1 5 10 15 Thr Ser Asn Tyr Asn Ile Val Thr Phe Cys Cys Gln Cys Glu Ser Thr 20 25 30 Leu Arg Leu Cys Val Gln Ser Thr Gln Val Asp Ile Arg Ile Leu Gln 35 40 45 Glu Leu Leu Met Gly Ser Phe Gly Ile Val Cys Pro Asn Cys Ser Thr 50 55 60 Arg Leu Ser Asp Glu Asp Glu Gly Leu Asp Arg Pro Asp Gly Gln Ala 65 70 75 80 Gln Pro Ala Thr Ala Asp Tyr Tyr Ile Val Thr Cys Cys His Thr Cys 85 90 95 Asn Thr Thr Val Arg Leu Cys Val Asn Ser Thr Ala Ser Asp Leu Arg 100 105 110 Thr Ile Gln Gln Leu Leu Met Gly Thr Val Asn Ile Val Cys Pro Ser 115 120 125 Cys Ala Gln Leu Ser Asp Glu Glu Asp Thr Asp Gly Val Asp Arg Pro 130 135 140 Asp Gly Gln Ala Glu Gln Ala Thr Ser Asn Tyr Tyr Ile Val Thr Tyr 145 150 155 160 Cys His Ser Cys Asp Ser Thr Leu Arg Leu Cys Ile His Ser Thr Ala 165 170 175 Thr Asp Leu Arg Thr Leu Gln Gln Leu Leu Met Gly Thr Leu Gln Val 180 185 190 Val Cys Pro Gly Cys Ala Arg Leu Met Arg Gly Glu Thr Pro Thr Leu 195 200 205 Gln Asp Tyr Val Leu Asp Leu Gln Pro Glu Ala Thr Asp Leu Tyr Cys 210 215 220 Tyr Glu Gln Leu Pro Asp Ser Ser Met Arg Gly His Lys Pro Thr Leu 225 230 235 240 Lys Glu Tyr Ile Leu Asp Leu Tyr Pro Glu Pro Thr Asp Leu Tyr Cys 245 250 255 Tyr Glu Gln Leu Ser Asp Ser Met Arg Gly Asp Lys Ala Thr Ile Lys 260 265 270 Asp Tyr Ile Leu Asp Leu Gln Pro Glu Thr Thr Asp Leu His Cys Tyr 275 280 285 Glu Gln Leu Gly Asp Ser 290 <210> 49 <211> 1080 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> polynucleotide for antigen E7 of HPV16, 18, 33 and 45 acidic-deleted <220> <221> CDS <222> (1)..(1080) <400> 49 ggt cag gcg gaa ccg gat cgc gcg cac tac aac atc gtt act ttt tgt 48 Gly Gln Ala Glu Pro Asp Arg Ala His Tyr Asn Ile Val Thr Phe Cys 1 5 10 15 tgc aaa tgt gat tcc act ctg cgc ctg tgt gtg caa tcc acc cac gta 96 Cys Lys Cys Asp Ser Thr Leu Arg Leu Cys Val Gln Ser Thr His Val 20 25 30 gac atc cgc act ctg gaa gac ctg ctg atg ggt acc ctg ggt att gtt 144 Asp Ile Arg Thr Leu Glu Asp Leu Leu Met Gly Thr Leu Gly Ile Val 35 40 45 tgt ccg att tgc tcc cag aag ccg gcg tct ggc gtt aac cac caa cac 192 Cys Pro Ile Cys Ser Gln Lys Pro Ala Ser Gly Val Asn His Gln His 50 55 60 ctg ccg gcg cgt cgc gca gag ccg cag cgt cac acc atg ctg tgc atg 240 Leu Pro Ala Arg Arg Ala Glu Pro Gln Arg His Thr Met Leu Cys Met 65 70 75 80 tgc tgt aaa tgt gag gcc cgt att gaa ctg gtc gtt gag tct agc gcc 288 Cys Cys Lys Cys Glu Ala Arg Ile Glu Leu Val Val Glu Ser Ser Ala 85 90 95 gac gat ctg cgt gcg ttt cag cag ctg ttc ctg aac acg ctg agc ttc 336 Asp Asp Leu Arg Ala Phe Gln Gln Leu Phe Leu Asn Thr Leu Ser Phe 100 105 110 gtt tgc ccg tgg tgt gct agc cag cag ggc gtg tct cac gct cag ctg 384 Val Cys Pro Trp Cys Ala Ser Gln Gln Gly Val Ser His Ala Gln Leu 115 120 125 ccg gca cgt cgt gct gag cct cag cgt cac aaa atc ctg tgc gtg tgc 432 Pro Ala Arg Arg Ala Glu Pro Gln Arg His Lys Ile Leu Cys Val Cys 130 135 140 tgc aaa tgc gat ggc cgc atc gaa ctg acc gtg gaa tct agc gca gaa 480 Cys Lys Cys Asp Gly Arg Ile Glu Leu Thr Val Glu Ser Ser Ala Glu 145 150 155 160 gac ctg cgt acg ctg cag caa ctg ttc ctg agc acg ctg tcc ttc gta 528 Asp Leu Arg Thr Leu Gln Gln Leu Phe Leu Ser Thr Leu Ser Phe Val 165 170 175 tgc cct tgg tgc gca act aat cag ggt cag gcg caa ccg gcc acg gcg 576 Cys Pro Trp Cys Ala Thr Asn Gln Gly Gln Ala Gln Pro Ala Thr Ala 180 185 190 gac tac tat atc gtg acc tgt tgc cac acc tgc aac act acc gtt cgc 624 Asp Tyr Tyr Ile Val Thr Cys Cys His Thr Cys Asn Thr Thr Val Arg 195 200 205 ttg tgt gtc aat agc acc gct tcc gat ctg cgt acc att caa caa ctg 672 Leu Cys Val Asn Ser Thr Ala Ser Asp Leu Arg Thr Ile Gln Gln Leu 210 215 220 ctg atg ggt acc gtt aac atc gtg tgc ccg agc tgc gca cag ctg atg 720 Leu Met Gly Thr Val Asn Ile Val Cys Pro Ser Cys Ala Gln Leu Met 225 230 235 240 cac ggt gac acc ccg acc ctg cac gaa tac atg ctg gac ctg cag cca 768 His Gly Asp Thr Pro Thr Leu His Glu Tyr Met Leu Asp Leu Gln Pro 245 250 255 gaa acc acc gat ctg tac tgt tac gaa cag ctg aac atg cat ggc cca 816 Glu Thr Thr Asp Leu Tyr Cys Tyr Glu Gln Leu Asn Met His Gly Pro 260 265 270 aaa gct act ctg cag gat atc gtc ctg cat ctg gaa cca cag aac gaa 864 Lys Ala Thr Leu Gln Asp Ile Val Leu His Leu Glu Pro Gln Asn Glu 275 280 285 atc ccg gta gat ctg ctg tgc cat gag cag ctg atg cat ggt ccg cgt 912 Ile Pro Val Asp Leu Leu Cys His Glu Gln Leu Met His Gly Pro Arg 290 295 300 gaa acc ctg cag gaa atc gtt ctg cac ctg gaa ccg caa aac gaa ctg 960 Glu Thr Leu Gln Glu Ile Val Leu His Leu Glu Pro Gln Asn Glu Leu 305 310 315 320 gac ccg gtt gac ctg ctg tgc tat gaa cag ctg atg cgt ggc cat aag 1008 Asp Pro Val Asp Leu Leu Cys Tyr Glu Gln Leu Met Arg Gly His Lys 325 330 335 ccg acg ctg aaa gag tat att ctg gac ctg tac cca gag ccg acg gat 1056 Pro Thr Leu Lys Glu Tyr Ile Leu Asp Leu Tyr Pro Glu Pro Thr Asp 340 345 350 ttg tac tgt tat gaa cag ctg agc 1080 Leu Tyr Cys Tyr Glu Gln Leu Ser 355 360 <210> 50 <211> 360 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 50 Gly Gln Ala Glu Pro Asp Arg Ala His Tyr Asn Ile Val Thr Phe Cys 1 5 10 15 Cys Lys Cys Asp Ser Thr Leu Arg Leu Cys Val Gln Ser Thr His Val 20 25 30 Asp Ile Arg Thr Leu Glu Asp Leu Leu Met Gly Thr Leu Gly Ile Val 35 40 45 Cys Pro Ile Cys Ser Gln Lys Pro Ala Ser Gly Val Asn His Gln His 50 55 60 Leu Pro Ala Arg Arg Ala Glu Pro Gln Arg His Thr Met Leu Cys Met 65 70 75 80 Cys Cys Lys Cys Glu Ala Arg Ile Glu Leu Val Val Glu Ser Ser Ala 85 90 95 Asp Asp Leu Arg Ala Phe Gln Gln Leu Phe Leu Asn Thr Leu Ser Phe 100 105 110 Val Cys Pro Trp Cys Ala Ser Gln Gln Gly Val Ser His Ala Gln Leu 115 120 125 Pro Ala Arg Arg Ala Glu Pro Gln Arg His Lys Ile Leu Cys Val Cys 130 135 140 Cys Lys Cys Asp Gly Arg Ile Glu Leu Thr Val Glu Ser Ser Ala Glu 145 150 155 160 Asp Leu Arg Thr Leu Gln Gln Leu Phe Leu Ser Thr Leu Ser Phe Val 165 170 175 Cys Pro Trp Cys Ala Thr Asn Gln Gly Gln Ala Gln Pro Ala Thr Ala 180 185 190 Asp Tyr Tyr Ile Val Thr Cys Cys His Thr Cys Asn Thr Thr Val Arg 195 200 205 Leu Cys Val Asn Ser Thr Ala Ser Asp Leu Arg Thr Ile Gln Gln Leu 210 215 220 Leu Met Gly Thr Val Asn Ile Val Cys Pro Ser Cys Ala Gln Leu Met 225 230 235 240 His Gly Asp Thr Pro Thr Leu His Glu Tyr Met Leu Asp Leu Gln Pro 245 250 255 Glu Thr Thr Asp Leu Tyr Cys Tyr Glu Gln Leu Asn Met His Gly Pro 260 265 270 Lys Ala Thr Leu Gln Asp Ile Val Leu His Leu Glu Pro Gln Asn Glu 275 280 285 Ile Pro Val Asp Leu Leu Cys His Glu Gln Leu Met His Gly Pro Arg 290 295 300 Glu Thr Leu Gln Glu Ile Val Leu His Leu Glu Pro Gln Asn Glu Leu 305 310 315 320 Asp Pro Val Asp Leu Leu Cys Tyr Glu Gln Leu Met Arg Gly His Lys 325 330 335 Pro Thr Leu Lys Glu Tyr Ile Leu Asp Leu Tyr Pro Glu Pro Thr Asp 340 345 350 Leu Tyr Cys Tyr Glu Gln Leu Ser 355 360 <210> 51 <211> 1224 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> polynucleotide for antigen E7 of HPV16, 18, 33 and 45 full <220> <221> CDS <222> (1)..(1224) <400> 51 gaa gac gaa atc gac ggc cct gcg ggc cag gct gaa cca gat cgt gct 48 Glu Asp Glu Ile Asp Gly Pro Ala Gly Gln Ala Glu Pro Asp Arg Ala 1 5 10 15 cac tac aac atc gta act ttt tgc tgt aag tgc gat agc act ctg cgt 96 His Tyr Asn Ile Val Thr Phe Cys Cys Lys Cys Asp Ser Thr Leu Arg 20 25 30 ctg tgc gta cag tct act cac gtt gat atc cgc act ctg gaa gat ctg 144 Leu Cys Val Gln Ser Thr His Val Asp Ile Arg Thr Leu Glu Asp Leu 35 40 45 ctg atg ggt acc ctg ggt atc gtc tgc cca atc tgc tct caa aag cct 192 Leu Met Gly Thr Leu Gly Ile Val Cys Pro Ile Cys Ser Gln Lys Pro 50 55 60 gct tct ggt gtt aac cat cag cac ctg ccg gct cgt cgc gct gaa cca 240 Ala Ser Gly Val Asn His Gln His Leu Pro Ala Arg Arg Ala Glu Pro 65 70 75 80 cag cgt cat acc atg ctg tgc atg tgt tgc aaa tgc gag gct cgc atc 288 Gln Arg His Thr Met Leu Cys Met Cys Cys Lys Cys Glu Ala Arg Ile 85 90 95 gaa ctg gtt gtt gaa tcc agc gct gac gac ctg cgt gcg ttt cag caa 336 Glu Leu Val Val Glu Ser Ser Ala Asp Asp Leu Arg Ala Phe Gln Gln 100 105 110 ctg ttc ctg aac acg ctg tct ttt gtt tgt ccg tgg tgt gcc tcc cag 384 Leu Phe Leu Asn Thr Leu Ser Phe Val Cys Pro Trp Cys Ala Ser Gln 115 120 125 cag gag aac gat gaa gcg gat ggc gtg tcc cac gcg cag ctg ccg gca 432 Gln Glu Asn Asp Glu Ala Asp Gly Val Ser His Ala Gln Leu Pro Ala 130 135 140 cgt cgt gca gaa ccg cag cgc cac aag att ctg tgc gtt tgc tgt aaa 480 Arg Arg Ala Glu Pro Gln Arg His Lys Ile Leu Cys Val Cys Cys Lys 145 150 155 160 tgt gat ggc cgt atc gaa ctg act gtg gaa tcc tcc gcg gaa gat ctg 528 Cys Asp Gly Arg Ile Glu Leu Thr Val Glu Ser Ser Ala Glu Asp Leu 165 170 175 cgt acg ctg cag cag ctg ttc ctg tct acc ctg tct ttc gtg tgc ccg 576 Arg Thr Leu Gln Gln Leu Phe Leu Ser Thr Leu Ser Phe Val Cys Pro 180 185 190 tgg tgc gcc acc aat caa tcg gat gaa gat gaa ggt ctg gat cgt ccg 624 Trp Cys Ala Thr Asn Gln Ser Asp Glu Asp Glu Gly Leu Asp Arg Pro 195 200 205 gat ggt caa gcg cag ccg gcg act gca gat tac tat atc gtc act tgt 672 Asp Gly Gln Ala Gln Pro Ala Thr Ala Asp Tyr Tyr Ile Val Thr Cys 210 215 220 tgc cac acc tgc aat acc acc gtg cgt ctg tgt gtg aac agc acg gcg 720 Cys His Thr Cys Asn Thr Thr Val Arg Leu Cys Val Asn Ser Thr Ala 225 230 235 240 agc gac ctg cgc acg atc caa cag ttg ttg atg ggc acc gtg aat atc 768 Ser Asp Leu Arg Thr Ile Gln Gln Leu Leu Met Gly Thr Val Asn Ile 245 250 255 gtc tgc cca agc tgt gct cag ttg atg cac ggc gac acc ccg acc ctg 816 Val Cys Pro Ser Cys Ala Gln Leu Met His Gly Asp Thr Pro Thr Leu 260 265 270 cac gaa tac atg ctg gac ctg cag ccg gaa acc acg gat ctg tat tgt 864 His Glu Tyr Met Leu Asp Leu Gln Pro Glu Thr Thr Asp Leu Tyr Cys 275 280 285 tat gaa cag ctg aac gat agc agc gag gaa atg cac ggt ccg aaa gca 912 Tyr Glu Gln Leu Asn Asp Ser Ser Glu Glu Met His Gly Pro Lys Ala 290 295 300 act ctg cag gac att gtg ctg cat ctg gag cca cag aac gaa atc ccg 960 Thr Leu Gln Asp Ile Val Leu His Leu Glu Pro Gln Asn Glu Ile Pro 305 310 315 320 gtt gat ctg ctg tgc cac gag caa ctg agc gat tcc gaa gag gaa aac 1008 Val Asp Leu Leu Cys His Glu Gln Leu Ser Asp Ser Glu Glu Glu Asn 325 330 335 gac gaa att gat atg cat ggt ccg cgc gag acc ctg caa gaa atc gtc 1056 Asp Glu Ile Asp Met His Gly Pro Arg Glu Thr Leu Gln Glu Ile Val 340 345 350 ctg cac ctg gaa ccg caa aac gaa ctg gac cct gta gac ctg ctg tgc 1104 Leu His Leu Glu Pro Gln Asn Glu Leu Asp Pro Val Asp Leu Leu Cys 355 360 365 tac gaa cag ctg tcc gaa tct gaa gaa atg cgt ggt cac aaa ccg acg 1152 Tyr Glu Gln Leu Ser Glu Ser Glu Glu Met Arg Gly His Lys Pro Thr 370 375 380 ctg aaa gag tac atc ctg gac ctg tac ccg gaa cct acg gat ctg tac 1200 Leu Lys Glu Tyr Ile Leu Asp Leu Tyr Pro Glu Pro Thr Asp Leu Tyr 385 390 395 400 tgt tat gaa caa ctg agc gat agc 1224 Cys Tyr Glu Gln Leu Ser Asp Ser 405 <210> 52 <211> 408 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 52 Glu Asp Glu Ile Asp Gly Pro Ala Gly Gln Ala Glu Pro Asp Arg Ala 1 5 10 15 His Tyr Asn Ile Val Thr Phe Cys Cys Lys Cys Asp Ser Thr Leu Arg 20 25 30 Leu Cys Val Gln Ser Thr His Val Asp Ile Arg Thr Leu Glu Asp Leu 35 40 45 Leu Met Gly Thr Leu Gly Ile Val Cys Pro Ile Cys Ser Gln Lys Pro 50 55 60 Ala Ser Gly Val Asn His Gln His Leu Pro Ala Arg Arg Ala Glu Pro 65 70 75 80 Gln Arg His Thr Met Leu Cys Met Cys Cys Lys Cys Glu Ala Arg Ile 85 90 95 Glu Leu Val Val Glu Ser Ser Ala Asp Asp Leu Arg Ala Phe Gln Gln 100 105 110 Leu Phe Leu Asn Thr Leu Ser Phe Val Cys Pro Trp Cys Ala Ser Gln 115 120 125 Gln Glu Asn Asp Glu Ala Asp Gly Val Ser His Ala Gln Leu Pro Ala 130 135 140 Arg Arg Ala Glu Pro Gln Arg His Lys Ile Leu Cys Val Cys Cys Lys 145 150 155 160 Cys Asp Gly Arg Ile Glu Leu Thr Val Glu Ser Ser Ala Glu Asp Leu 165 170 175 Arg Thr Leu Gln Gln Leu Phe Leu Ser Thr Leu Ser Phe Val Cys Pro 180 185 190 Trp Cys Ala Thr Asn Gln Ser Asp Glu Asp Glu Gly Leu Asp Arg Pro 195 200 205 Asp Gly Gln Ala Gln Pro Ala Thr Ala Asp Tyr Tyr Ile Val Thr Cys 210 215 220 Cys His Thr Cys Asn Thr Thr Val Arg Leu Cys Val Asn Ser Thr Ala 225 230 235 240 Ser Asp Leu Arg Thr Ile Gln Gln Leu Leu Met Gly Thr Val Asn Ile 245 250 255 Val Cys Pro Ser Cys Ala Gln Leu Met His Gly Asp Thr Pro Thr Leu 260 265 270 His Glu Tyr Met Leu Asp Leu Gln Pro Glu Thr Thr Asp Leu Tyr Cys 275 280 285 Tyr Glu Gln Leu Asn Asp Ser Ser Glu Glu Met His Gly Pro Lys Ala 290 295 300 Thr Leu Gln Asp Ile Val Leu His Leu Glu Pro Gln Asn Glu Ile Pro 305 310 315 320 Val Asp Leu Leu Cys His Glu Gln Leu Ser Asp Ser Glu Glu Glu Asn 325 330 335 Asp Glu Ile Asp Met His Gly Pro Arg Glu Thr Leu Gln Glu Ile Val 340 345 350 Leu His Leu Glu Pro Gln Asn Glu Leu Asp Pro Val Asp Leu Leu Cys 355 360 365 Tyr Glu Gln Leu Ser Glu Ser Glu Glu Met Arg Gly His Lys Pro Thr 370 375 380 Leu Lys Glu Tyr Ile Leu Asp Leu Tyr Pro Glu Pro Thr Asp Leu Tyr 385 390 395 400 Cys Tyr Glu Gln Leu Ser Asp Ser 405 <210> 53 <211> 1080 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> polynucleotide for antigen E7 of HPV16, 18, 45 and 58 acidic-deleted <220> <221> CDS <222> (1)..(1080) <400> 53 ggt cag gcg gaa ccg gat cgc gcg cac tac aac atc gtt act ttt tgt 48 Gly Gln Ala Glu Pro Asp Arg Ala His Tyr Asn Ile Val Thr Phe Cys 1 5 10 15 tgc aaa tgt gat tcc act ctg cgc ctg tgt gtg caa tcc acc cac gta 96 Cys Lys Cys Asp Ser Thr Leu Arg Leu Cys Val Gln Ser Thr His Val 20 25 30 gac atc cgc act ctg gaa gac ctg ctg atg ggt acc ctg ggt att gtt 144 Asp Ile Arg Thr Leu Glu Asp Leu Leu Met Gly Thr Leu Gly Ile Val 35 40 45 tgt ccg att tgc tcc cag aag ccg gcg tct ggc gtt aac cac caa cac 192 Cys Pro Ile Cys Ser Gln Lys Pro Ala Ser Gly Val Asn His Gln His 50 55 60 ctg ccg gcg cgt cgc gca gag ccg cag cgt cac acc atg ctg tgc atg 240 Leu Pro Ala Arg Arg Ala Glu Pro Gln Arg His Thr Met Leu Cys Met 65 70 75 80 tgc tgt aaa tgt gag gcc cgt att gaa ctg gtc gtt gag tct agc gcc 288 Cys Cys Lys Cys Glu Ala Arg Ile Glu Leu Val Val Glu Ser Ser Ala 85 90 95 gac gat ctg cgt gcg ttt cag cag ctg ttc ctg aac acg ctg agc ttc 336 Asp Asp Leu Arg Ala Phe Gln Gln Leu Phe Leu Asn Thr Leu Ser Phe 100 105 110 gtt tgc ccg tgg tgt gct agc cag cag ggc gtg tct cac gct cag ctg 384 Val Cys Pro Trp Cys Ala Ser Gln Gln Gly Val Ser His Ala Gln Leu 115 120 125 ccg gca cgt cgt gct gag cct cag cgt cac aaa atc ctg tgc gtg tgc 432 Pro Ala Arg Arg Ala Glu Pro Gln Arg His Lys Ile Leu Cys Val Cys 130 135 140 tgc aaa tgc gat ggc cgc atc gaa ctg acc gtg gaa tct agc gca gaa 480 Cys Lys Cys Asp Gly Arg Ile Glu Leu Thr Val Glu Ser Ser Ala Glu 145 150 155 160 gac ctg cgt acg ctg cag caa ctg ttc ctg agc acg ctg tcc ttc gta 528 Asp Leu Arg Thr Leu Gln Gln Leu Phe Leu Ser Thr Leu Ser Phe Val 165 170 175 tgc cct tgg tgc gca act aat cag ggc cag gcg cag cca gcg acg gcc 576 Cys Pro Trp Cys Ala Thr Asn Gln Gly Gln Ala Gln Pro Ala Thr Ala 180 185 190 aat tac tac atc gtt acc tgt tgc tat acg tgc gat act acc gtc cgt 624 Asn Tyr Tyr Ile Val Thr Cys Cys Tyr Thr Cys Asp Thr Thr Val Arg 195 200 205 ctg tgc att aac agc acc acc acg gac gtg cgt acc ctg caa cag ctg 672 Leu Cys Ile Asn Ser Thr Thr Thr Asp Val Arg Thr Leu Gln Gln Leu 210 215 220 ctg atg ggt acc tgc acg att gtt tgt ccg agc tgt gca caa caa atg 720 Leu Met Gly Thr Cys Thr Ile Val Cys Pro Ser Cys Ala Gln Gln Met 225 230 235 240 cac ggt gac acc ccg acc ctg cac gaa tac atg ctg gac ctg cag cca 768 His Gly Asp Thr Pro Thr Leu His Glu Tyr Met Leu Asp Leu Gln Pro 245 250 255 gaa acc acc gat ctg tac tgt tac gaa cag ctg aac atg cat ggc cca 816 Glu Thr Thr Asp Leu Tyr Cys Tyr Glu Gln Leu Asn Met His Gly Pro 260 265 270 aaa gct act ctg cag gat atc gtc ctg cat ctg gaa cca cag aac gaa 864 Lys Ala Thr Leu Gln Asp Ile Val Leu His Leu Glu Pro Gln Asn Glu 275 280 285 atc ccg gta gat ctg ctg tgc cat gag cag ctg atg cat ggt ccg cgt 912 Ile Pro Val Asp Leu Leu Cys His Glu Gln Leu Met His Gly Pro Arg 290 295 300 gaa acc ctg cag gaa atc gtt ctg cac ctg gaa ccg caa aac gaa ctg 960 Glu Thr Leu Gln Glu Ile Val Leu His Leu Glu Pro Gln Asn Glu Leu 305 310 315 320 gac ccg gtt gac ctg ctg tgc tat gaa cag ctg atg cgc ggt aat aac 1008 Asp Pro Val Asp Leu Leu Cys Tyr Glu Gln Leu Met Arg Gly Asn Asn 325 330 335 ccg acc ttg cgt gag tat atc ttg gac ctg cac ccg gag ccg acc gat 1056 Pro Thr Leu Arg Glu Tyr Ile Leu Asp Leu His Pro Glu Pro Thr Asp 340 345 350 ctg ttc tgt tac gaa cag ctg tgc 1080 Leu Phe Cys Tyr Glu Gln Leu Cys 355 360 <210> 54 <211> 360 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 54 Gly Gln Ala Glu Pro Asp Arg Ala His Tyr Asn Ile Val Thr Phe Cys 1 5 10 15 Cys Lys Cys Asp Ser Thr Leu Arg Leu Cys Val Gln Ser Thr His Val 20 25 30 Asp Ile Arg Thr Leu Glu Asp Leu Leu Met Gly Thr Leu Gly Ile Val 35 40 45 Cys Pro Ile Cys Ser Gln Lys Pro Ala Ser Gly Val Asn His Gln His 50 55 60 Leu Pro Ala Arg Arg Ala Glu Pro Gln Arg His Thr Met Leu Cys Met 65 70 75 80 Cys Cys Lys Cys Glu Ala Arg Ile Glu Leu Val Val Glu Ser Ser Ala 85 90 95 Asp Asp Leu Arg Ala Phe Gln Gln Leu Phe Leu Asn Thr Leu Ser Phe 100 105 110 Val Cys Pro Trp Cys Ala Ser Gln Gln Gly Val Ser His Ala Gln Leu 115 120 125 Pro Ala Arg Arg Ala Glu Pro Gln Arg His Lys Ile Leu Cys Val Cys 130 135 140 Cys Lys Cys Asp Gly Arg Ile Glu Leu Thr Val Glu Ser Ser Ala Glu 145 150 155 160 Asp Leu Arg Thr Leu Gln Gln Leu Phe Leu Ser Thr Leu Ser Phe Val 165 170 175 Cys Pro Trp Cys Ala Thr Asn Gln Gly Gln Ala Gln Pro Ala Thr Ala 180 185 190 Asn Tyr Tyr Ile Val Thr Cys Cys Tyr Thr Cys Asp Thr Thr Val Arg 195 200 205 Leu Cys Ile Asn Ser Thr Thr Thr Asp Val Arg Thr Leu Gln Gln Leu 210 215 220 Leu Met Gly Thr Cys Thr Ile Val Cys Pro Ser Cys Ala Gln Gln Met 225 230 235 240 His Gly Asp Thr Pro Thr Leu His Glu Tyr Met Leu Asp Leu Gln Pro 245 250 255 Glu Thr Thr Asp Leu Tyr Cys Tyr Glu Gln Leu Asn Met His Gly Pro 260 265 270 Lys Ala Thr Leu Gln Asp Ile Val Leu His Leu Glu Pro Gln Asn Glu 275 280 285 Ile Pro Val Asp Leu Leu Cys His Glu Gln Leu Met His Gly Pro Arg 290 295 300 Glu Thr Leu Gln Glu Ile Val Leu His Leu Glu Pro Gln Asn Glu Leu 305 310 315 320 Asp Pro Val Asp Leu Leu Cys Tyr Glu Gln Leu Met Arg Gly Asn Asn 325 330 335 Pro Thr Leu Arg Glu Tyr Ile Leu Asp Leu His Pro Glu Pro Thr Asp 340 345 350 Leu Phe Cys Tyr Glu Gln Leu Cys 355 360 <210> 55 <211> 1227 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> polynucleotide for antigen E7 of HPV16, 18, 45 and 58 full <220> <221> CDS <222> (1)..(1227) <400> 55 gaa gac gaa atc gac ggc cct gcg ggc cag gct gaa cca gat cgt gct 48 Glu Asp Glu Ile Asp Gly Pro Ala Gly Gln Ala Glu Pro Asp Arg Ala 1 5 10 15 cac tac aac atc gta act ttt tgc tgt aag tgc gat agc act ctg cgt 96 His Tyr Asn Ile Val Thr Phe Cys Cys Lys Cys Asp Ser Thr Leu Arg 20 25 30 ctg tgc gta cag tct act cac gtt gat atc cgc act ctg gaa gat ctg 144 Leu Cys Val Gln Ser Thr His Val Asp Ile Arg Thr Leu Glu Asp Leu 35 40 45 ctg atg ggt acc ctg ggt atc gtc tgc cca atc tgc tct caa aag cct 192 Leu Met Gly Thr Leu Gly Ile Val Cys Pro Ile Cys Ser Gln Lys Pro 50 55 60 gct tct ggt gtt aac cat cag cac ctg ccg gct cgt cgc gct gaa cca 240 Ala Ser Gly Val Asn His Gln His Leu Pro Ala Arg Arg Ala Glu Pro 65 70 75 80 cag cgt cat acc atg ctg tgc atg tgt tgc aaa tgc gag gct cgc atc 288 Gln Arg His Thr Met Leu Cys Met Cys Cys Lys Cys Glu Ala Arg Ile 85 90 95 gaa ctg gtt gtt gaa tcc agc gct gac gac ctg cgt gcg ttt cag caa 336 Glu Leu Val Val Glu Ser Ser Ala Asp Asp Leu Arg Ala Phe Gln Gln 100 105 110 ctg ttc ctg aac acg ctg tct ttt gtt tgt ccg tgg tgt gcc tcc cag 384 Leu Phe Leu Asn Thr Leu Ser Phe Val Cys Pro Trp Cys Ala Ser Gln 115 120 125 cag gag aac gat gaa gcg gat ggc gtg tcc cac gcg cag ctg ccg gca 432 Gln Glu Asn Asp Glu Ala Asp Gly Val Ser His Ala Gln Leu Pro Ala 130 135 140 cgt cgt gca gaa ccg cag cgc cac aag att ctg tgc gtt tgc tgt aaa 480 Arg Arg Ala Glu Pro Gln Arg His Lys Ile Leu Cys Val Cys Cys Lys 145 150 155 160 tgt gat ggc cgt atc gaa ctg act gtg gaa tcc tcc gcg gaa gat ctg 528 Cys Asp Gly Arg Ile Glu Leu Thr Val Glu Ser Ser Ala Glu Asp Leu 165 170 175 cgt acg ctg cag cag ctg ttc ctg tct acc ctg tct ttc gtg tgc ccg 576 Arg Thr Leu Gln Gln Leu Phe Leu Ser Thr Leu Ser Phe Val Cys Pro 180 185 190 tgg tgc gcc acc aat caa tcc gac gag gac gaa atc ggc ctg gac cgt 624 Trp Cys Ala Thr Asn Gln Ser Asp Glu Asp Glu Ile Gly Leu Asp Arg 195 200 205 cct gat ggc cag gcc cag ccg gca acg gcg aac tat tac att gtg acc 672 Pro Asp Gly Gln Ala Gln Pro Ala Thr Ala Asn Tyr Tyr Ile Val Thr 210 215 220 tgc tgc tat acg tgc gat acc acg gtc cgt ctg tgc att aac tct acc 720 Cys Cys Tyr Thr Cys Asp Thr Thr Val Arg Leu Cys Ile Asn Ser Thr 225 230 235 240 acc acg gat gtt cgc acg ctg cag caa ctg ctg atg ggt acc tgt acc 768 Thr Thr Asp Val Arg Thr Leu Gln Gln Leu Leu Met Gly Thr Cys Thr 245 250 255 att gtt tgc ccg tct tgt gcc cag cag atg cac ggc gac acc ccg acc 816 Ile Val Cys Pro Ser Cys Ala Gln Gln Met His Gly Asp Thr Pro Thr 260 265 270 ctg cac gaa tac atg ctg gac ctg cag ccg gaa acc acg gat ctg tat 864 Leu His Glu Tyr Met Leu Asp Leu Gln Pro Glu Thr Thr Asp Leu Tyr 275 280 285 tgt tat gaa cag ctg aac gat agc agc gag gaa atg cac ggt ccg aaa 912 Cys Tyr Glu Gln Leu Asn Asp Ser Ser Glu Glu Met His Gly Pro Lys 290 295 300 gca act ctg cag gac att gtg ctg cat ctg gag cca cag aac gaa atc 960 Ala Thr Leu Gln Asp Ile Val Leu His Leu Glu Pro Gln Asn Glu Ile 305 310 315 320 ccg gtt gat ctg ctg tgc cac gag caa ctg agc gat tcc gaa gag gaa 1008 Pro Val Asp Leu Leu Cys His Glu Gln Leu Ser Asp Ser Glu Glu Glu 325 330 335 aac gac gaa att gat atg cat ggt ccg cgc gag acc ctg caa gaa atc 1056 Asn Asp Glu Ile Asp Met His Gly Pro Arg Glu Thr Leu Gln Glu Ile 340 345 350 gtc ctg cac ctg gaa ccg caa aac gaa ctg gac cct gta gac ctg ctg 1104 Val Leu His Leu Glu Pro Gln Asn Glu Leu Asp Pro Val Asp Leu Leu 355 360 365 tgc tac gaa cag ctg tcc gaa tct gaa gaa atg cgc ggt aac aat ccg 1152 Cys Tyr Glu Gln Leu Ser Glu Ser Glu Glu Met Arg Gly Asn Asn Pro 370 375 380 acc ctg cgc gag tac att ctg gac ttg cat ccg gaa ccg acg gac ctg 1200 Thr Leu Arg Glu Tyr Ile Leu Asp Leu His Pro Glu Pro Thr Asp Leu 385 390 395 400 ttc tgt tac gag cag ctg tgt gac agc 1227 Phe Cys Tyr Glu Gln Leu Cys Asp Ser 405 <210> 56 <211> 409 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 56 Glu Asp Glu Ile Asp Gly Pro Ala Gly Gln Ala Glu Pro Asp Arg Ala 1 5 10 15 His Tyr Asn Ile Val Thr Phe Cys Cys Lys Cys Asp Ser Thr Leu Arg 20 25 30 Leu Cys Val Gln Ser Thr His Val Asp Ile Arg Thr Leu Glu Asp Leu 35 40 45 Leu Met Gly Thr Leu Gly Ile Val Cys Pro Ile Cys Ser Gln Lys Pro 50 55 60 Ala Ser Gly Val Asn His Gln His Leu Pro Ala Arg Arg Ala Glu Pro 65 70 75 80 Gln Arg His Thr Met Leu Cys Met Cys Cys Lys Cys Glu Ala Arg Ile 85 90 95 Glu Leu Val Val Glu Ser Ser Ala Asp Asp Leu Arg Ala Phe Gln Gln 100 105 110 Leu Phe Leu Asn Thr Leu Ser Phe Val Cys Pro Trp Cys Ala Ser Gln 115 120 125 Gln Glu Asn Asp Glu Ala Asp Gly Val Ser His Ala Gln Leu Pro Ala 130 135 140 Arg Arg Ala Glu Pro Gln Arg His Lys Ile Leu Cys Val Cys Cys Lys 145 150 155 160 Cys Asp Gly Arg Ile Glu Leu Thr Val Glu Ser Ser Ala Glu Asp Leu 165 170 175 Arg Thr Leu Gln Gln Leu Phe Leu Ser Thr Leu Ser Phe Val Cys Pro 180 185 190 Trp Cys Ala Thr Asn Gln Ser Asp Glu Asp Glu Ile Gly Leu Asp Arg 195 200 205 Pro Asp Gly Gln Ala Gln Pro Ala Thr Ala Asn Tyr Tyr Ile Val Thr 210 215 220 Cys Cys Tyr Thr Cys Asp Thr Thr Val Arg Leu Cys Ile Asn Ser Thr 225 230 235 240 Thr Thr Asp Val Arg Thr Leu Gln Gln Leu Leu Met Gly Thr Cys Thr 245 250 255 Ile Val Cys Pro Ser Cys Ala Gln Gln Met His Gly Asp Thr Pro Thr 260 265 270 Leu His Glu Tyr Met Leu Asp Leu Gln Pro Glu Thr Thr Asp Leu Tyr 275 280 285 Cys Tyr Glu Gln Leu Asn Asp Ser Ser Glu Glu Met His Gly Pro Lys 290 295 300 Ala Thr Leu Gln Asp Ile Val Leu His Leu Glu Pro Gln Asn Glu Ile 305 310 315 320 Pro Val Asp Leu Leu Cys His Glu Gln Leu Ser Asp Ser Glu Glu Glu 325 330 335 Asn Asp Glu Ile Asp Met His Gly Pro Arg Glu Thr Leu Gln Glu Ile 340 345 350 Val Leu His Leu Glu Pro Gln Asn Glu Leu Asp Pro Val Asp Leu Leu 355 360 365 Cys Tyr Glu Gln Leu Ser Glu Ser Glu Glu Met Arg Gly Asn Asn Pro 370 375 380 Thr Leu Arg Glu Tyr Ile Leu Asp Leu His Pro Glu Pro Thr Asp Leu 385 390 395 400 Phe Cys Tyr Glu Gln Leu Cys Asp Ser 405 <210> 57 <211> 5670 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide encoding chimeric CyaA delta 93+ antigen HPV16, HPV18 and HPV45 acidic-deleted <220> <221> CDS <222> (1)..(5670) <400> 57 atg cag cag tcc cat cag gcc ggt tac gca aac gca gcc gat cgt gaa 48 Met Gln Gln Ser His Gln Ala Gly Tyr Ala Asn Ala Ala Asp Arg Glu 1 5 10 15 tct ggt atc ccg gca gcg gtt ctg gat ggt att aag gca gtt gcc aaa 96 Ser Gly Ile Pro Ala Ala Val Leu Asp Gly Ile Lys Ala Val Ala Lys 20 25 30 gag aag aac gct acc ctg atg ttc cgt ctg gtc aac cca cac tct act 144 Glu Lys Asn Ala Thr Leu Met Phe Arg Leu Val Asn Pro His Ser Thr 35 40 45 tcc ctg atc gcg gaa ggt gtg gcg acc aaa ggc ctg ggt gtg cac gcc 192 Ser Leu Ile Ala Glu Gly Val Ala Thr Lys Gly Leu Gly Val His Ala 50 55 60 aaa agc agc gac tgg ggt ctg cag gca ggt tat att ccg gtg aac ccg 240 Lys Ser Ser Asp Trp Gly Leu Gln Ala Gly Tyr Ile Pro Val Asn Pro 65 70 75 80 aat ctg tct aaa ctg ttc ggt cgt gcc ccg gag gtg atc gca cgt gca 288 Asn Leu Ser Lys Leu Phe Gly Arg Ala Pro Glu Val Ile Ala Arg Ala 85 90 95 gac aac gat gtc aac tct tct ctg gcg cat ggt cac acc gcg gtt gat 336 Asp Asn Asp Val Asn Ser Ser Leu Ala His Gly His Thr Ala Val Asp 100 105 110 ctg acc ctg tcc aaa gaa cgc ctg gat tac ctg cgt cag gcg ggc ctg 384 Leu Thr Leu Ser Lys Glu Arg Leu Asp Tyr Leu Arg Gln Ala Gly Leu 115 120 125 gtg acg ggc atg gcc gac ggt gtt gta gcg agc aac cac gcg ggt tat 432 Val Thr Gly Met Ala Asp Gly Val Val Ala Ser Asn His Ala Gly Tyr 130 135 140 gaa caa ttt gag ttt cgc gtt aaa gag acc tct gac ggt cgt tac gcg 480 Glu Gln Phe Glu Phe Arg Val Lys Glu Thr Ser Asp Gly Arg Tyr Ala 145 150 155 160 gtg cag tac cgc cgc aaa ggt ggc gat gac ttt gaa gct gtc aaa gtg 528 Val Gln Tyr Arg Arg Lys Gly Gly Asp Asp Phe Glu Ala Val Lys Val 165 170 175 atc ggt aac gct gct gga att ccg ctg acc gcg gat atc gac atg ttt 576 Ile Gly Asn Ala Ala Gly Ile Pro Leu Thr Ala Asp Ile Asp Met Phe 180 185 190 gcc atc atg cct cac ctg tcc aac ttt cgc gat tcc gca cgc agc tct 624 Ala Ile Met Pro His Leu Ser Asn Phe Arg Asp Ser Ala Arg Ser Ser 195 200 205 gtg acg tct ggt gat tcc gtc act gac tac ctg gct cgt acc cgt cgt 672 Val Thr Ser Gly Asp Ser Val Thr Asp Tyr Leu Ala Arg Thr Arg Arg 210 215 220 gcg gcc tct ggt cag gcg gaa ccg gat cgc gcg cac tac aac atc gtt 720 Ala Ala Ser Gly Gln Ala Glu Pro Asp Arg Ala His Tyr Asn Ile Val 225 230 235 240 act ttt tgt tgc aaa tgt gat tcc act ctg cgc ctg tgt gtg caa tcc 768 Thr Phe Cys Cys Lys Cys Asp Ser Thr Leu Arg Leu Cys Val Gln Ser 245 250 255 acc cac gta gac att cgc act ctg gaa gac ctg ctg atg ggt acc ctt 816 Thr His Val Asp Ile Arg Thr Leu Glu Asp Leu Leu Met Gly Thr Leu 260 265 270 ggt att gtt tgt ccg att tgc tcc cag aag ccg gcg tct ggc gtt aac 864 Gly Ile Val Cys Pro Ile Cys Ser Gln Lys Pro Ala Ser Gly Val Asn 275 280 285 cac caa cac ctg ccg gcg cgt cgc gca gag ccg cag cgt cac acc atg 912 His Gln His Leu Pro Ala Arg Arg Ala Glu Pro Gln Arg His Thr Met 290 295 300 ctg tgc atg tgc tgt aaa tgt gag gcc cgt atc gag ctg gtc gtt gag 960 Leu Cys Met Cys Cys Lys Cys Glu Ala Arg Ile Glu Leu Val Val Glu 305 310 315 320 tct agc gcc gac gat ctg cgt gcg ttt cag cag ctg ttc ctg aac acg 1008 Ser Ser Ala Asp Asp Leu Arg Ala Phe Gln Gln Leu Phe Leu Asn Thr 325 330 335 ctg agc ttc gtt tgc ccg tgg tgt gct agc cag cag ggc gtg tct cac 1056 Leu Ser Phe Val Cys Pro Trp Cys Ala Ser Gln Gln Gly Val Ser His 340 345 350 gct cag ctg ccg gca cgt cgt gct gag cct cag cgt cac aaa atc ctg 1104 Ala Gln Leu Pro Ala Arg Arg Ala Glu Pro Gln Arg His Lys Ile Leu 355 360 365 tgc gtg tgc tgc aaa tgc gat ggc cgc atc gaa ctg acc gtg gaa tct 1152 Cys Val Cys Cys Lys Cys Asp Gly Arg Ile Glu Leu Thr Val Glu Ser 370 375 380 agc gca gaa gac ctg cgt acg ctg cag caa ctg ttc ctg agc acg ctg 1200 Ser Ala Glu Asp Leu Arg Thr Leu Gln Gln Leu Phe Leu Ser Thr Leu 385 390 395 400 tcc ttc gta tgc cct tgg tgc gca act aat cag atg cac ggt gac acc 1248 Ser Phe Val Cys Pro Trp Cys Ala Thr Asn Gln Met His Gly Asp Thr 405 410 415 ccg acc ctg cac gaa tac atg ctg gac ctg cag cca gaa acc acc gat 1296 Pro Thr Leu His Glu Tyr Met Leu Asp Leu Gln Pro Glu Thr Thr Asp 420 425 430 ctg tac tgt tac gaa cag ctg aac atg cat ggc cca aaa gct act ctg 1344 Leu Tyr Cys Tyr Glu Gln Leu Asn Met His Gly Pro Lys Ala Thr Leu 435 440 445 cag gat atc gtc ctg cat ctg gaa cca cag aac gaa atc ccg gta gat 1392 Gln Asp Ile Val Leu His Leu Glu Pro Gln Asn Glu Ile Pro Val Asp 450 455 460 ctg ctg tgc cat gag cag ctg atg cat ggt ccg cgt gaa acc ctg cag 1440 Leu Leu Cys His Glu Gln Leu Met His Gly Pro Arg Glu Thr Leu Gln 465 470 475 480 gaa atc gtt ctg cac ctg gaa ccg caa aac gaa ctg gac ccg gtt gac 1488 Glu Ile Val Leu His Leu Glu Pro Gln Asn Glu Leu Asp Pro Val Asp 485 490 495 ctg ctg tgc tat gaa cag ctg gaa tcc cag atg ctg act cgt ggc cag 1536 Leu Leu Cys Tyr Glu Gln Leu Glu Ser Gln Met Leu Thr Arg Gly Gln 500 505 510 ctg aaa gaa tac atc ggc caa cag cgt ggc gaa ggc tac gtt ttc tac 1584 Leu Lys Glu Tyr Ile Gly Gln Gln Arg Gly Glu Gly Tyr Val Phe Tyr 515 520 525 gag aat cgt gct tac ggc gtt gcg ggc aaa tcc ctg ttc gac gat ggt 1632 Glu Asn Arg Ala Tyr Gly Val Ala Gly Lys Ser Leu Phe Asp Asp Gly 530 535 540 ctg ggc gct gca ccg ggc gtt ccg agc ggc cgt tct aaa ttc agc ccg 1680 Leu Gly Ala Ala Pro Gly Val Pro Ser Gly Arg Ser Lys Phe Ser Pro 545 550 555 560 gac gta ctg gaa act gtg ccg gct tcc ccg ggc ctg cgc cgt ccg tcc 1728 Asp Val Leu Glu Thr Val Pro Ala Ser Pro Gly Leu Arg Arg Pro Ser 565 570 575 ctg ggc gca gtc gaa cgt cag gac tcc ggc tac gat tcc ctg gat ggc 1776 Leu Gly Ala Val Glu Arg Gln Asp Ser Gly Tyr Asp Ser Leu Asp Gly 580 585 590 gtt ggc tcc cgc tcc ttc tcc ctg ggc gag gtt tct gac atg gct gcg 1824 Val Gly Ser Arg Ser Phe Ser Leu Gly Glu Val Ser Asp Met Ala Ala 595 600 605 gtg gaa gcg gca gag ctg gaa atg acc cgt caa gtg ctg cac gcg ggc 1872 Val Glu Ala Ala Glu Leu Glu Met Thr Arg Gln Val Leu His Ala Gly 610 615 620 gca cgt cag gac gat gct gag ccg ggc gtg tcc ggt gcg tct gca cac 1920 Ala Arg Gln Asp Asp Ala Glu Pro Gly Val Ser Gly Ala Ser Ala His 625 630 635 640 tgg ggt caa cgt gcc ctg cag ggt gct caa gct gtc gcg gca gcg cag 1968 Trp Gly Gln Arg Ala Leu Gln Gly Ala Gln Ala Val Ala Ala Ala Gln 645 650 655 cgt ctg gta cat gcg atc gca ctg atg acc cag ttc ggt cgc gca ggt 2016 Arg Leu Val His Ala Ile Ala Leu Met Thr Gln Phe Gly Arg Ala Gly 660 665 670 tct acc aac act cct cag gaa gca gct agc ctg tct gct gct gtt ttc 2064 Ser Thr Asn Thr Pro Gln Glu Ala Ala Ser Leu Ser Ala Ala Val Phe 675 680 685 ggt ctg ggc gaa gcg tct tct gcg gtt gca gaa acc gtg agc ggt ttc 2112 Gly Leu Gly Glu Ala Ser Ser Ala Val Ala Glu Thr Val Ser Gly Phe 690 695 700 ttc cgt ggt tct agc cgc tgg gcg ggt ggt ttt ggt gta gca ggt ggc 2160 Phe Arg Gly Ser Ser Arg Trp Ala Gly Gly Phe Gly Val Ala Gly Gly 705 710 715 720 gct atg gcc ctg ggt ggc ggt atc gcg gct gct gtc ggc gca ggt atg 2208 Ala Met Ala Leu Gly Gly Gly Ile Ala Ala Ala Val Gly Ala Gly Met 725 730 735 agc ctg acc gac gat gct cct gcg ggc cag aaa gcc gca gct ggc gct 2256 Ser Leu Thr Asp Asp Ala Pro Ala Gly Gln Lys Ala Ala Ala Gly Ala 740 745 750 gaa atc gcg ctg cag ctg act ggt ggt acc gtt gaa ctg gct agc tct 2304 Glu Ile Ala Leu Gln Leu Thr Gly Gly Thr Val Glu Leu Ala Ser Ser 755 760 765 atc gcg ctg gct ctg gca gcg gca cgt ggc gtg act tct ggc ctg caa 2352 Ile Ala Leu Ala Leu Ala Ala Ala Arg Gly Val Thr Ser Gly Leu Gln 770 775 780 gtc gcc ggt gcc tct gcg ggc gct gct gcg ggc gct ctg gca gct gca 2400 Val Ala Gly Ala Ser Ala Gly Ala Ala Ala Gly Ala Leu Ala Ala Ala 785 790 795 800 ctg tcc ccc atg gaa atc tac ggt ctg gta cag cag tct cac tac gca 2448 Leu Ser Pro Met Glu Ile Tyr Gly Leu Val Gln Gln Ser His Tyr Ala 805 810 815 gac cag ctg gat aaa ctg gcg cag gag tct tct gca tac ggt tac gaa 2496 Asp Gln Leu Asp Lys Leu Ala Gln Glu Ser Ser Ala Tyr Gly Tyr Glu 820 825 830 ggc gac gca ctg ctg gcg cag ctg tat cgt gac aaa act gct gct gaa 2544 Gly Asp Ala Leu Leu Ala Gln Leu Tyr Arg Asp Lys Thr Ala Ala Glu 835 840 845 ggt gct gtg gca ggc gtt tct gcg gta ctg tct acc gtt ggc gct gcg 2592 Gly Ala Val Ala Gly Val Ser Ala Val Leu Ser Thr Val Gly Ala Ala 850 855 860 gtt tct att gcg gct gcc gca tcc gtt gta ggt gcg ccg gtt gct gta 2640 Val Ser Ile Ala Ala Ala Ala Ser Val Val Gly Ala Pro Val Ala Val 865 870 875 880 gtt acc tct ctg ctg act ggt gca ctg aac ggt atc ctg cgt ggt gtt 2688 Val Thr Ser Leu Leu Thr Gly Ala Leu Asn Gly Ile Leu Arg Gly Val 885 890 895 cag cag cct att atc gaa aaa ctg gcg aat gat tat gcc cgt aaa atc 2736 Gln Gln Pro Ile Ile Glu Lys Leu Ala Asn Asp Tyr Ala Arg Lys Ile 900 905 910 gac gaa ctg ggc ggt ccg cag gct tat ttt gaa aaa aac ctg cag gcg 2784 Asp Glu Leu Gly Gly Pro Gln Ala Tyr Phe Glu Lys Asn Leu Gln Ala 915 920 925 cgc cac gaa cag ctg gca aac agc gac ggc ctg cgc aaa atg ctg gca 2832 Arg His Glu Gln Leu Ala Asn Ser Asp Gly Leu Arg Lys Met Leu Ala 930 935 940 gac ctg caa gct ggt tgg aac gcg tct tct gtg atc ggc gtg cag acc 2880 Asp Leu Gln Ala Gly Trp Asn Ala Ser Ser Val Ile Gly Val Gln Thr 945 950 955 960 acc gaa att agc aaa tct gcg ctg gaa ctg gct gca att act ggc aac 2928 Thr Glu Ile Ser Lys Ser Ala Leu Glu Leu Ala Ala Ile Thr Gly Asn 965 970 975 gcg gat aac ctg aaa agc gtt gat gtt ttt gtc gat cgc ttc gtt cag 2976 Ala Asp Asn Leu Lys Ser Val Asp Val Phe Val Asp Arg Phe Val Gln 980 985 990 ggc gag cgc gtt gct ggt cag ccg gtt gtt ctg gac gtt gcg gca ggc 3024 Gly Glu Arg Val Ala Gly Gln Pro Val Val Leu Asp Val Ala Ala Gly 995 1000 1005 ggc atc gac atc gct agc cgc aag ggc gag cgt ccg gct ctg act 3069 Gly Ile Asp Ile Ala Ser Arg Lys Gly Glu Arg Pro Ala Leu Thr 1010 1015 1020 ttc att acc ccg ctg gca gct ccg ggt gaa gaa cag cgt cgc cgt 3114 Phe Ile Thr Pro Leu Ala Ala Pro Gly Glu Glu Gln Arg Arg Arg 1025 1030 1035 acc aag act ggt aaa agc gag ttc acc acc ttc gtg gaa atc gta 3159 Thr Lys Thr Gly Lys Ser Glu Phe Thr Thr Phe Val Glu Ile Val 1040 1045 1050 ggt aaa cag gac cgc tgg cgt att cgc gac ggt gcg gcg gac acc 3204 Gly Lys Gln Asp Arg Trp Arg Ile Arg Asp Gly Ala Ala Asp Thr 1055 1060 1065 acc atc gac ctg gca aaa gtt gtt tcc caa ctg gta gat gct aac 3249 Thr Ile Asp Leu Ala Lys Val Val Ser Gln Leu Val Asp Ala Asn 1070 1075 1080 ggc gtg ctg aaa cat tct att aaa ctg gat gta atc ggc ggt gac 3294 Gly Val Leu Lys His Ser Ile Lys Leu Asp Val Ile Gly Gly Asp 1085 1090 1095 ggc gat gac gtt gta ctg gcg aac gcg tct cgt atc cac tat gac 3339 Gly Asp Asp Val Val Leu Ala Asn Ala Ser Arg Ile His Tyr Asp 1100 1105 1110 ggc ggc gca ggt acc aac acg gtt tcc tac gca gcg ctg ggc cgc 3384 Gly Gly Ala Gly Thr Asn Thr Val Ser Tyr Ala Ala Leu Gly Arg 1115 1120 1125 cag gat tcc atc act gtt agc gcc gat ggc gaa cgt ttc aac gtg 3429 Gln Asp Ser Ile Thr Val Ser Ala Asp Gly Glu Arg Phe Asn Val 1130 1135 1140 cgt aaa cag ctg aat aac gca aac gtc tat cgt gag ggt gta gct 3474 Arg Lys Gln Leu Asn Asn Ala Asn Val Tyr Arg Glu Gly Val Ala 1145 1150 1155 acc cag acc acc gcg tac ggt aag cgt acc gaa aac gtt cag tat 3519 Thr Gln Thr Thr Ala Tyr Gly Lys Arg Thr Glu Asn Val Gln Tyr 1160 1165 1170 cgt cac gtg gaa ctg gca cgt gtg ggt cag ctg gta gag gtg gat 3564 Arg His Val Glu Leu Ala Arg Val Gly Gln Leu Val Glu Val Asp 1175 1180 1185 acg ctg gaa cac gtg cag cac atc atc ggt ggc gcc ggt aac gat 3609 Thr Leu Glu His Val Gln His Ile Ile Gly Gly Ala Gly Asn Asp 1190 1195 1200 tcc att act ggt aac gct cac gac aac ttc ctg gca ggt ggt tct 3654 Ser Ile Thr Gly Asn Ala His Asp Asn Phe Leu Ala Gly Gly Ser 1205 1210 1215 ggt gat gat cgt ctg gac ggt ggt gcg ggt aac gat acg ctg gta 3699 Gly Asp Asp Arg Leu Asp Gly Gly Ala Gly Asn Asp Thr Leu Val 1220 1225 1230 ggc ggc gaa ggt cag aac acc gta att ggt ggt gcc ggt gac gac 3744 Gly Gly Glu Gly Gln Asn Thr Val Ile Gly Gly Ala Gly Asp Asp 1235 1240 1245 gtt ttc ctg cag gat ctg ggc gtt tgg agc aac cag ctg gat ggc 3789 Val Phe Leu Gln Asp Leu Gly Val Trp Ser Asn Gln Leu Asp Gly 1250 1255 1260 ggt gcc ggt gtt gac acg gtt aag tat aac gtt cac cag ccg tct 3834 Gly Ala Gly Val Asp Thr Val Lys Tyr Asn Val His Gln Pro Ser 1265 1270 1275 gaa gag cgc ctg gaa cgt atg ggt gac act ggt att cat gcc gat 3879 Glu Glu Arg Leu Glu Arg Met Gly Asp Thr Gly Ile His Ala Asp 1280 1285 1290 ctg cag aaa ggc act gtt gaa aaa tgg cct gcg ctg aac ctg ttc 3924 Leu Gln Lys Gly Thr Val Glu Lys Trp Pro Ala Leu Asn Leu Phe 1295 1300 1305 tct gtg gac cat gtt aag aac att gaa aac ctg cat ggc tct cgc 3969 Ser Val Asp His Val Lys Asn Ile Glu Asn Leu His Gly Ser Arg 1310 1315 1320 ctg aac gac cgt atc gct ggt gac gac cag gat aac gaa ctg tgg 4014 Leu Asn Asp Arg Ile Ala Gly Asp Asp Gln Asp Asn Glu Leu Trp 1325 1330 1335 ggt cat gac ggc aat gat acc att cgc ggt cgt ggc ggc gac gat 4059 Gly His Asp Gly Asn Asp Thr Ile Arg Gly Arg Gly Gly Asp Asp 1340 1345 1350 att ctg cgt ggc ggt ctg ggc ctg gat acc ctg tat ggt gaa gat 4104 Ile Leu Arg Gly Gly Leu Gly Leu Asp Thr Leu Tyr Gly Glu Asp 1355 1360 1365 ggt aac gat att ttc ctg caa gac gat gaa acg gta tct gat gac 4149 Gly Asn Asp Ile Phe Leu Gln Asp Asp Glu Thr Val Ser Asp Asp 1370 1375 1380 atc gac ggt ggt gca ggc ctg gac acc gta gat tac agc gct atg 4194 Ile Asp Gly Gly Ala Gly Leu Asp Thr Val Asp Tyr Ser Ala Met 1385 1390 1395 atc cat ccg ggt cgt atc gta gct ccg cac gag tac ggc ttc ggt 4239 Ile His Pro Gly Arg Ile Val Ala Pro His Glu Tyr Gly Phe Gly 1400 1405 1410 atc gag gcg gac ctg tct cgt gaa tgg gtt cgt aaa gcg tcc gcg 4284 Ile Glu Ala Asp Leu Ser Arg Glu Trp Val Arg Lys Ala Ser Ala 1415 1420 1425 ctg ggt gtg gac tac tac gat aac gtt cgt aac gtg gaa aac gtg 4329 Leu Gly Val Asp Tyr Tyr Asp Asn Val Arg Asn Val Glu Asn Val 1430 1435 1440 atc ggt acc tcc atg aaa gac gtg ctg att ggc gac gca cag gcc 4374 Ile Gly Thr Ser Met Lys Asp Val Leu Ile Gly Asp Ala Gln Ala 1445 1450 1455 aac act ctg atg ggc cag ggc ggt gat gac acg gtt cgc ggc ggc 4419 Asn Thr Leu Met Gly Gln Gly Gly Asp Asp Thr Val Arg Gly Gly 1460 1465 1470 gac ggt gat gac ctg ctg ttc ggt ggt gac ggc aac gac atg ctg 4464 Asp Gly Asp Asp Leu Leu Phe Gly Gly Asp Gly Asn Asp Met Leu 1475 1480 1485 tac ggc gac gcg ggc aac gac acc ctg tac ggc ggt ctg ggt gac 4509 Tyr Gly Asp Ala Gly Asn Asp Thr Leu Tyr Gly Gly Leu Gly Asp 1490 1495 1500 gac act ctg gaa ggt ggt gca ggt aac gac tgg ttc ggc caa acc 4554 Asp Thr Leu Glu Gly Gly Ala Gly Asn Asp Trp Phe Gly Gln Thr 1505 1510 1515 cag gca cgc gaa cac gac gtg ctg cgt ggt ggc gac ggc gta gac 4599 Gln Ala Arg Glu His Asp Val Leu Arg Gly Gly Asp Gly Val Asp 1520 1525 1530 acc gtg gat tac tcc caa act ggc gct cac gcg ggt atc gcg gcc 4644 Thr Val Asp Tyr Ser Gln Thr Gly Ala His Ala Gly Ile Ala Ala 1535 1540 1545 ggt cgt atc ggt ctg ggc att ctg gcc gat ctg ggt gcc ggc cgt 4689 Gly Arg Ile Gly Leu Gly Ile Leu Ala Asp Leu Gly Ala Gly Arg 1550 1555 1560 gtc gac aaa ctg ggt gag gct ggc tct agc gcc tat gat act gtt 4734 Val Asp Lys Leu Gly Glu Ala Gly Ser Ser Ala Tyr Asp Thr Val 1565 1570 1575 tcc ggc atc gaa aac gtg gta ggc act gaa ctg gca gat cgt atc 4779 Ser Gly Ile Glu Asn Val Val Gly Thr Glu Leu Ala Asp Arg Ile 1580 1585 1590 acg ggt gac gcg caa gcg aac gtt ctg cgt ggt gct ggc ggt gca 4824 Thr Gly Asp Ala Gln Ala Asn Val Leu Arg Gly Ala Gly Gly Ala 1595 1600 1605 gac gtg ctg gcg ggt ggt gaa ggc gac gac gta ctg ctg ggc ggt 4869 Asp Val Leu Ala Gly Gly Glu Gly Asp Asp Val Leu Leu Gly Gly 1610 1615 1620 gac ggt gac gat cag ctg agc ggt gat gcg ggt cgt gac cgt ctg 4914 Asp Gly Asp Asp Gln Leu Ser Gly Asp Ala Gly Arg Asp Arg Leu 1625 1630 1635 tac ggt gaa gca ggt gac gat tgg ttc ttc cag gac gct gct aac 4959 Tyr Gly Glu Ala Gly Asp Asp Trp Phe Phe Gln Asp Ala Ala Asn 1640 1645 1650 gct ggc aac ctg ctg gac ggc ggc gat ggc cgt gac act gtt gac 5004 Ala Gly Asn Leu Leu Asp Gly Gly Asp Gly Arg Asp Thr Val Asp 1655 1660 1665 ttc agc ggt ccg ggt cgc ggt ctg gac gca ggc gcg aaa ggc gtt 5049 Phe Ser Gly Pro Gly Arg Gly Leu Asp Ala Gly Ala Lys Gly Val 1670 1675 1680 ttc ctg agc ctg ggt aag ggt ttc gca tct ctg atg gac gaa cca 5094 Phe Leu Ser Leu Gly Lys Gly Phe Ala Ser Leu Met Asp Glu Pro 1685 1690 1695 gaa acc agc aat gtc ctg cgt aac atc gaa aac gct gtc ggt tcc 5139 Glu Thr Ser Asn Val Leu Arg Asn Ile Glu Asn Ala Val Gly Ser 1700 1705 1710 gca cgc gat gat gtt ctg att ggc gat gct ggt gcc aat gtt ctg 5184 Ala Arg Asp Asp Val Leu Ile Gly Asp Ala Gly Ala Asn Val Leu 1715 1720 1725 aac ggt ctg gcg ggt aat gat gta ctg tct ggt ggc gct ggt gat 5229 Asn Gly Leu Ala Gly Asn Asp Val Leu Ser Gly Gly Ala Gly Asp 1730 1735 1740 gat gtc ctg ctg ggt gat gag ggc agc gat ctg ctg tcc ggc gat 5274 Asp Val Leu Leu Gly Asp Glu Gly Ser Asp Leu Leu Ser Gly Asp 1745 1750 1755 gcc ggc aac gac gat ctg ttc ggt ggc caa ggt gat gat act tac 5319 Ala Gly Asn Asp Asp Leu Phe Gly Gly Gln Gly Asp Asp Thr Tyr 1760 1765 1770 ctg ttc ggc gtt ggc tat ggt cat gac acc atc tat gag tct ggt 5364 Leu Phe Gly Val Gly Tyr Gly His Asp Thr Ile Tyr Glu Ser Gly 1775 1780 1785 ggc ggc cac gat acg att cgt att aat gca ggt gct gac caa ctg 5409 Gly Gly His Asp Thr Ile Arg Ile Asn Ala Gly Ala Asp Gln Leu 1790 1795 1800 tgg ttt gca cgt cag ggt aac gat ctg gaa att cgc atc ctg ggt 5454 Trp Phe Ala Arg Gln Gly Asn Asp Leu Glu Ile Arg Ile Leu Gly 1805 1810 1815 act gat gac gct ctg acc gta cac gac tgg tac cgc gat gcg gat 5499 Thr Asp Asp Ala Leu Thr Val His Asp Trp Tyr Arg Asp Ala Asp 1820 1825 1830 cac cgc gta gaa atc atc cat gcg gct aac caa gct gta gac cag 5544 His Arg Val Glu Ile Ile His Ala Ala Asn Gln Ala Val Asp Gln 1835 1840 1845 gct ggt att gaa aaa ctg gta gaa gcg atg gca cag tat ccg gac 5589 Ala Gly Ile Glu Lys Leu Val Glu Ala Met Ala Gln Tyr Pro Asp 1850 1855 1860 cca ggt gcg gct gct gca gca cct cca gcg gct cgt gtg ccg gat 5634 Pro Gly Ala Ala Ala Ala Ala Pro Pro Ala Ala Arg Val Pro Asp 1865 1870 1875 acc ctg atg cag agc ctg gcc gtc aat tgg cgt taa 5670 Thr Leu Met Gln Ser Leu Ala Val Asn Trp Arg 1880 1885 <210> 58 <211> 1889 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 58 Met Gln Gln Ser His Gln Ala Gly Tyr Ala Asn Ala Ala Asp Arg Glu 1 5 10 15 Ser Gly Ile Pro Ala Ala Val Leu Asp Gly Ile Lys Ala Val Ala Lys 20 25 30 Glu Lys Asn Ala Thr Leu Met Phe Arg Leu Val Asn Pro His Ser Thr 35 40 45 Ser Leu Ile Ala Glu Gly Val Ala Thr Lys Gly Leu Gly Val His Ala 50 55 60 Lys Ser Ser Asp Trp Gly Leu Gln Ala Gly Tyr Ile Pro Val Asn Pro 65 70 75 80 Asn Leu Ser Lys Leu Phe Gly Arg Ala Pro Glu Val Ile Ala Arg Ala 85 90 95 Asp Asn Asp Val Asn Ser Ser Leu Ala His Gly His Thr Ala Val Asp 100 105 110 Leu Thr Leu Ser Lys Glu Arg Leu Asp Tyr Leu Arg Gln Ala Gly Leu 115 120 125 Val Thr Gly Met Ala Asp Gly Val Val Ala Ser Asn His Ala Gly Tyr 130 135 140 Glu Gln Phe Glu Phe Arg Val Lys Glu Thr Ser Asp Gly Arg Tyr Ala 145 150 155 160 Val Gln Tyr Arg Arg Lys Gly Gly Asp Asp Phe Glu Ala Val Lys Val 165 170 175 Ile Gly Asn Ala Ala Gly Ile Pro Leu Thr Ala Asp Ile Asp Met Phe 180 185 190 Ala Ile Met Pro His Leu Ser Asn Phe Arg Asp Ser Ala Arg Ser Ser 195 200 205 Val Thr Ser Gly Asp Ser Val Thr Asp Tyr Leu Ala Arg Thr Arg Arg 210 215 220 Ala Ala Ser Gly Gln Ala Glu Pro Asp Arg Ala His Tyr Asn Ile Val 225 230 235 240 Thr Phe Cys Cys Lys Cys Asp Ser Thr Leu Arg Leu Cys Val Gln Ser 245 250 255 Thr His Val Asp Ile Arg Thr Leu Glu Asp Leu Leu Met Gly Thr Leu 260 265 270 Gly Ile Val Cys Pro Ile Cys Ser Gln Lys Pro Ala Ser Gly Val Asn 275 280 285 His Gln His Leu Pro Ala Arg Arg Ala Glu Pro Gln Arg His Thr Met 290 295 300 Leu Cys Met Cys Cys Lys Cys Glu Ala Arg Ile Glu Leu Val Val Glu 305 310 315 320 Ser Ser Ala Asp Asp Leu Arg Ala Phe Gln Gln Leu Phe Leu Asn Thr 325 330 335 Leu Ser Phe Val Cys Pro Trp Cys Ala Ser Gln Gln Gly Val Ser His 340 345 350 Ala Gln Leu Pro Ala Arg Arg Ala Glu Pro Gln Arg His Lys Ile Leu 355 360 365 Cys Val Cys Cys Lys Cys Asp Gly Arg Ile Glu Leu Thr Val Glu Ser 370 375 380 Ser Ala Glu Asp Leu Arg Thr Leu Gln Gln Leu Phe Leu Ser Thr Leu 385 390 395 400 Ser Phe Val Cys Pro Trp Cys Ala Thr Asn Gln Met His Gly Asp Thr 405 410 415 Pro Thr Leu His Glu Tyr Met Leu Asp Leu Gln Pro Glu Thr Thr Asp 420 425 430 Leu Tyr Cys Tyr Glu Gln Leu Asn Met His Gly Pro Lys Ala Thr Leu 435 440 445 Gln Asp Ile Val Leu His Leu Glu Pro Gln Asn Glu Ile Pro Val Asp 450 455 460 Leu Leu Cys His Glu Gln Leu Met His Gly Pro Arg Glu Thr Leu Gln 465 470 475 480 Glu Ile Val Leu His Leu Glu Pro Gln Asn Glu Leu Asp Pro Val Asp 485 490 495 Leu Leu Cys Tyr Glu Gln Leu Glu Ser Gln Met Leu Thr Arg Gly Gln 500 505 510 Leu Lys Glu Tyr Ile Gly Gln Gln Arg Gly Glu Gly Tyr Val Phe Tyr 515 520 525 Glu Asn Arg Ala Tyr Gly Val Ala Gly Lys Ser Leu Phe Asp Asp Gly 530 535 540 Leu Gly Ala Ala Pro Gly Val Pro Ser Gly Arg Ser Lys Phe Ser Pro 545 550 555 560 Asp Val Leu Glu Thr Val Pro Ala Ser Pro Gly Leu Arg Arg Pro Ser 565 570 575 Leu Gly Ala Val Glu Arg Gln Asp Ser Gly Tyr Asp Ser Leu Asp Gly 580 585 590 Val Gly Ser Arg Ser Phe Ser Leu Gly Glu Val Ser Asp Met Ala Ala 595 600 605 Val Glu Ala Ala Glu Leu Glu Met Thr Arg Gln Val Leu His Ala Gly 610 615 620 Ala Arg Gln Asp Asp Ala Glu Pro Gly Val Ser Gly Ala Ser Ala His 625 630 635 640 Trp Gly Gln Arg Ala Leu Gln Gly Ala Gln Ala Val Ala Ala Ala Gln 645 650 655 Arg Leu Val His Ala Ile Ala Leu Met Thr Gln Phe Gly Arg Ala Gly 660 665 670 Ser Thr Asn Thr Pro Gln Glu Ala Ala Ser Leu Ser Ala Ala Val Phe 675 680 685 Gly Leu Gly Glu Ala Ser Ser Ala Val Ala Glu Thr Val Ser Gly Phe 690 695 700 Phe Arg Gly Ser Ser Arg Trp Ala Gly Gly Phe Gly Val Ala Gly Gly 705 710 715 720 Ala Met Ala Leu Gly Gly Gly Ile Ala Ala Ala Val Gly Ala Gly Met 725 730 735 Ser Leu Thr Asp Asp Ala Pro Ala Gly Gln Lys Ala Ala Ala Gly Ala 740 745 750 Glu Ile Ala Leu Gln Leu Thr Gly Gly Thr Val Glu Leu Ala Ser Ser 755 760 765 Ile Ala Leu Ala Leu Ala Ala Ala Arg Gly Val Thr Ser Gly Leu Gln 770 775 780 Val Ala Gly Ala Ser Ala Gly Ala Ala Ala Gly Ala Leu Ala Ala Ala 785 790 795 800 Leu Ser Pro Met Glu Ile Tyr Gly Leu Val Gln Gln Ser His Tyr Ala 805 810 815 Asp Gln Leu Asp Lys Leu Ala Gln Glu Ser Ser Ala Tyr Gly Tyr Glu 820 825 830 Gly Asp Ala Leu Leu Ala Gln Leu Tyr Arg Asp Lys Thr Ala Ala Glu 835 840 845 Gly Ala Val Ala Gly Val Ser Ala Val Leu Ser Thr Val Gly Ala Ala 850 855 860 Val Ser Ile Ala Ala Ala Ala Ser Val Val Gly Ala Pro Val Ala Val 865 870 875 880 Val Thr Ser Leu Leu Thr Gly Ala Leu Asn Gly Ile Leu Arg Gly Val 885 890 895 Gln Gln Pro Ile Ile Glu Lys Leu Ala Asn Asp Tyr Ala Arg Lys Ile 900 905 910 Asp Glu Leu Gly Gly Pro Gln Ala Tyr Phe Glu Lys Asn Leu Gln Ala 915 920 925 Arg His Glu Gln Leu Ala Asn Ser Asp Gly Leu Arg Lys Met Leu Ala 930 935 940 Asp Leu Gln Ala Gly Trp Asn Ala Ser Ser Val Ile Gly Val Gln Thr 945 950 955 960 Thr Glu Ile Ser Lys Ser Ala Leu Glu Leu Ala Ala Ile Thr Gly Asn 965 970 975 Ala Asp Asn Leu Lys Ser Val Asp Val Phe Val Asp Arg Phe Val Gln 980 985 990 Gly Glu Arg Val Ala Gly Gln Pro Val Val Leu Asp Val Ala Ala Gly 995 1000 1005 Gly Ile Asp Ile Ala Ser Arg Lys Gly Glu Arg Pro Ala Leu Thr 1010 1015 1020 Phe Ile Thr Pro Leu Ala Ala Pro Gly Glu Glu Gln Arg Arg Arg 1025 1030 1035 Thr Lys Thr Gly Lys Ser Glu Phe Thr Thr Phe Val Glu Ile Val 1040 1045 1050 Gly Lys Gln Asp Arg Trp Arg Ile Arg Asp Gly Ala Ala Asp Thr 1055 1060 1065 Thr Ile Asp Leu Ala Lys Val Val Ser Gln Leu Val Asp Ala Asn 1070 1075 1080 Gly Val Leu Lys His Ser Ile Lys Leu Asp Val Ile Gly Gly Asp 1085 1090 1095 Gly Asp Asp Val Val Leu Ala Asn Ala Ser Arg Ile His Tyr Asp 1100 1105 1110 Gly Gly Ala Gly Thr Asn Thr Val Ser Tyr Ala Ala Leu Gly Arg 1115 1120 1125 Gln Asp Ser Ile Thr Val Ser Ala Asp Gly Glu Arg Phe Asn Val 1130 1135 1140 Arg Lys Gln Leu Asn Asn Ala Asn Val Tyr Arg Glu Gly Val Ala 1145 1150 1155 Thr Gln Thr Thr Ala Tyr Gly Lys Arg Thr Glu Asn Val Gln Tyr 1160 1165 1170 Arg His Val Glu Leu Ala Arg Val Gly Gln Leu Val Glu Val Asp 1175 1180 1185 Thr Leu Glu His Val Gln His Ile Ile Gly Gly Ala Gly Asn Asp 1190 1195 1200 Ser Ile Thr Gly Asn Ala His Asp Asn Phe Leu Ala Gly Gly Ser 1205 1210 1215 Gly Asp Asp Arg Leu Asp Gly Gly Ala Gly Asn Asp Thr Leu Val 1220 1225 1230 Gly Gly Glu Gly Gln Asn Thr Val Ile Gly Gly Ala Gly Asp Asp 1235 1240 1245 Val Phe Leu Gln Asp Leu Gly Val Trp Ser Asn Gln Leu Asp Gly 1250 1255 1260 Gly Ala Gly Val Asp Thr Val Lys Tyr Asn Val His Gln Pro Ser 1265 1270 1275 Glu Glu Arg Leu Glu Arg Met Gly Asp Thr Gly Ile His Ala Asp 1280 1285 1290 Leu Gln Lys Gly Thr Val Glu Lys Trp Pro Ala Leu Asn Leu Phe 1295 1300 1305 Ser Val Asp His Val Lys Asn Ile Glu Asn Leu His Gly Ser Arg 1310 1315 1320 Leu Asn Asp Arg Ile Ala Gly Asp Asp Gln Asp Asn Glu Leu Trp 1325 1330 1335 Gly His Asp Gly Asn Asp Thr Ile Arg Gly Arg Gly Gly Asp Asp 1340 1345 1350 Ile Leu Arg Gly Gly Leu Gly Leu Asp Thr Leu Tyr Gly Glu Asp 1355 1360 1365 Gly Asn Asp Ile Phe Leu Gln Asp Asp Glu Thr Val Ser Asp Asp 1370 1375 1380 Ile Asp Gly Gly Ala Gly Leu Asp Thr Val Asp Tyr Ser Ala Met 1385 1390 1395 Ile His Pro Gly Arg Ile Val Ala Pro His Glu Tyr Gly Phe Gly 1400 1405 1410 Ile Glu Ala Asp Leu Ser Arg Glu Trp Val Arg Lys Ala Ser Ala 1415 1420 1425 Leu Gly Val Asp Tyr Tyr Asp Asn Val Arg Asn Val Glu Asn Val 1430 1435 1440 Ile Gly Thr Ser Met Lys Asp Val Leu Ile Gly Asp Ala Gln Ala 1445 1450 1455 Asn Thr Leu Met Gly Gln Gly Gly Asp Asp Thr Val Arg Gly Gly 1460 1465 1470 Asp Gly Asp Asp Leu Leu Phe Gly Gly Asp Gly Asn Asp Met Leu 1475 1480 1485 Tyr Gly Asp Ala Gly Asn Asp Thr Leu Tyr Gly Gly Leu Gly Asp 1490 1495 1500 Asp Thr Leu Glu Gly Gly Ala Gly Asn Asp Trp Phe Gly Gln Thr 1505 1510 1515 Gln Ala Arg Glu His Asp Val Leu Arg Gly Gly Asp Gly Val Asp 1520 1525 1530 Thr Val Asp Tyr Ser Gln Thr Gly Ala His Ala Gly Ile Ala Ala 1535 1540 1545 Gly Arg Ile Gly Leu Gly Ile Leu Ala Asp Leu Gly Ala Gly Arg 1550 1555 1560 Val Asp Lys Leu Gly Glu Ala Gly Ser Ser Ala Tyr Asp Thr Val 1565 1570 1575 Ser Gly Ile Glu Asn Val Val Gly Thr Glu Leu Ala Asp Arg Ile 1580 1585 1590 Thr Gly Asp Ala Gln Ala Asn Val Leu Arg Gly Ala Gly Gly Ala 1595 1600 1605 Asp Val Leu Ala Gly Gly Glu Gly Asp Asp Val Leu Leu Gly Gly 1610 1615 1620 Asp Gly Asp Asp Gln Leu Ser Gly Asp Ala Gly Arg Asp Arg Leu 1625 1630 1635 Tyr Gly Glu Ala Gly Asp Asp Trp Phe Phe Gln Asp Ala Ala Asn 1640 1645 1650 Ala Gly Asn Leu Leu Asp Gly Gly Asp Gly Arg Asp Thr Val Asp 1655 1660 1665 Phe Ser Gly Pro Gly Arg Gly Leu Asp Ala Gly Ala Lys Gly Val 1670 1675 1680 Phe Leu Ser Leu Gly Lys Gly Phe Ala Ser Leu Met Asp Glu Pro 1685 1690 1695 Glu Thr Ser Asn Val Leu Arg Asn Ile Glu Asn Ala Val Gly Ser 1700 1705 1710 Ala Arg Asp Asp Val Leu Ile Gly Asp Ala Gly Ala Asn Val Leu 1715 1720 1725 Asn Gly Leu Ala Gly Asn Asp Val Leu Ser Gly Gly Ala Gly Asp 1730 1735 1740 Asp Val Leu Leu Gly Asp Glu Gly Ser Asp Leu Leu Ser Gly Asp 1745 1750 1755 Ala Gly Asn Asp Asp Leu Phe Gly Gly Gln Gly Asp Asp Thr Tyr 1760 1765 1770 Leu Phe Gly Val Gly Tyr Gly His Asp Thr Ile Tyr Glu Ser Gly 1775 1780 1785 Gly Gly His Asp Thr Ile Arg Ile Asn Ala Gly Ala Asp Gln Leu 1790 1795 1800 Trp Phe Ala Arg Gln Gly Asn Asp Leu Glu Ile Arg Ile Leu Gly 1805 1810 1815 Thr Asp Asp Ala Leu Thr Val His Asp Trp Tyr Arg Asp Ala Asp 1820 1825 1830 His Arg Val Glu Ile Ile His Ala Ala Asn Gln Ala Val Asp Gln 1835 1840 1845 Ala Gly Ile Glu Lys Leu Val Glu Ala Met Ala Gln Tyr Pro Asp 1850 1855 1860 Pro Gly Ala Ala Ala Ala Ala Pro Pro Ala Ala Arg Val Pro Asp 1865 1870 1875 Thr Leu Met Gln Ser Leu Ala Val Asn Trp Arg 1880 1885 <210> 59 <211> 12000 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> plasmid comprising SEQ ID NO:57 <400> 59 atcgagatct gtatggctgt gcaggtcgta aatcactgca taattcgtgt cgctcaaggc 60 gcactcccgt tctggataat gttttttgcg ccgacatcat aacggttctg gcaaatattc 120 tgaaatgagc tgttgacaat taatcatcgg ctcgtataat gtgtggaatt gtgagcggat 180 aacaattata attttgttta actttaagaa ggagatatac atatgcagca gtcccatcag 240 gccggttacg caaacgcagc cgatcgtgaa tctggtatcc cggcagcggt tctggatggt 300 attaaggcag ttgccaaaga gaagaacgct accctgatgt tccgtctggt caacccacac 360 tctacttccc tgatcgcgga aggtgtggcg accaaaggcc tgggtgtgca cgccaaaagc 420 agcgactggg gtctgcaggc aggttatatt ccggtgaacc cgaatctgtc taaactgttc 480 ggtcgtgccc cggaggtgat cgcacgtgca gacaacgatg tcaactcttc tctggcgcat 540 ggtcacaccg cggttgatct gaccctgtcc aaagaacgcc tggattacct gcgtcaggcg 600 ggcctggtga cgggcatggc cgacggtgtt gtagcgagca accacgcggg ttatgaacaa 660 tttgagtttc gcgttaaaga gacctctgac ggtcgttacg cggtgcagta ccgccgcaaa 720 ggtggcgatg actttgaagc tgtcaaagtg atcggtaacg ctgctggaat tccgctgacc 780 gcggatatcg acatgtttgc catcatgcct cacctgtcca actttcgcga ttccgcacgc 840 agctctgtga cgtctggtga ttccgtcact gactacctgg ctcgtacccg tcgtgcggcc 900 tctggtcagg cggaaccgga tcgcgcgcac tacaacatcg ttactttttg ttgcaaatgt 960 gattccactc tgcgcctgtg tgtgcaatcc acccacgtag acattcgcac tctggaagac 1020 ctgctgatgg gtacccttgg tattgtttgt ccgatttgct cccagaagcc ggcgtctggc 1080 gttaaccacc aacacctgcc ggcgcgtcgc gcagagccgc agcgtcacac catgctgtgc 1140 atgtgctgta aatgtgaggc ccgtatcgag ctggtcgttg agtctagcgc cgacgatctg 1200 cgtgcgtttc agcagctgtt cctgaacacg ctgagcttcg tttgcccgtg gtgtgctagc 1260 cagcagggcg tgtctcacgc tcagctgccg gcacgtcgtg ctgagcctca gcgtcacaaa 1320 atcctgtgcg tgtgctgcaa atgcgatggc cgcatcgaac tgaccgtgga atctagcgca 1380 gaagacctgc gtacgctgca gcaactgttc ctgagcacgc tgtccttcgt atgcccttgg 1440 tgcgcaacta atcagatgca cggtgacacc ccgaccctgc acgaatacat gctggacctg 1500 cagccagaaa ccaccgatct gtactgttac gaacagctga acatgcatgg cccaaaagct 1560 actctgcagg atatcgtcct gcatctggaa ccacagaacg aaatcccggt agatctgctg 1620 tgccatgagc agctgatgca tggtccgcgt gaaaccctgc aggaaatcgt tctgcacctg 1680 gaaccgcaaa acgaactgga cccggttgac ctgctgtgct atgaacagct ggaatcccag 1740 atgctgactc gtggccagct gaaagaatac atcggccaac agcgtggcga aggctacgtt 1800 ttctacgaga atcgtgctta cggcgttgcg ggcaaatccc tgttcgacga tggtctgggc 1860 gctgcaccgg gcgttccgag cggccgttct aaattcagcc cggacgtact ggaaactgtg 1920 ccggcttccc cgggcctgcg ccgtccgtcc ctgggcgcag tcgaacgtca ggactccggc 1980 tacgattccc tggatggcgt tggctcccgc tccttctccc tgggcgaggt ttctgacatg 2040 gctgcggtgg aagcggcaga gctggaaatg acccgtcaag tgctgcacgc gggcgcacgt 2100 caggacgatg ctgagccggg cgtgtccggt gcgtctgcac actggggtca acgtgccctg 2160 cagggtgctc aagctgtcgc ggcagcgcag cgtctggtac atgcgatcgc actgatgacc 2220 cagttcggtc gcgcaggttc taccaacact cctcaggaag cagctagcct gtctgctgct 2280 gttttcggtc tgggcgaagc gtcttctgcg gttgcagaaa ccgtgagcgg tttcttccgt 2340 ggttctagcc gctgggcggg tggttttggt gtagcaggtg gcgctatggc cctgggtggc 2400 ggtatcgcgg ctgctgtcgg cgcaggtatg agcctgaccg acgatgctcc tgcgggccag 2460 aaagccgcag ctggcgctga aatcgcgctg cagctgactg gtggtaccgt tgaactggct 2520 agctctatcg cgctggctct ggcagcggca cgtggcgtga cttctggcct gcaagtcgcc 2580 ggtgcctctg cgggcgctgc tgcgggcgct ctggcagctg cactgtcccc catggaaatc 2640 tacggtctgg tacagcagtc tcactacgca gaccagctgg ataaactggc gcaggagtct 2700 tctgcatacg gttacgaagg cgacgcactg ctggcgcagc tgtatcgtga caaaactgct 2760 gctgaaggtg ctgtggcagg cgtttctgcg gtactgtcta ccgttggcgc tgcggtttct 2820 attgcggctg ccgcatccgt tgtaggtgcg ccggttgctg tagttacctc tctgctgact 2880 ggtgcactga acggtatcct gcgtggtgtt cagcagccta ttatcgaaaa actggcgaat 2940 gattatgccc gtaaaatcga cgaactgggc ggtccgcagg cttattttga aaaaaacctg 3000 caggcgcgcc acgaacagct ggcaaacagc gacggcctgc gcaaaatgct ggcagacctg 3060 caagctggtt ggaacgcgtc ttctgtgatc ggcgtgcaga ccaccgaaat tagcaaatct 3120 gcgctggaac tggctgcaat tactggcaac gcggataacc tgaaaagcgt tgatgttttt 3180 gtcgatcgct tcgttcaggg cgagcgcgtt gctggtcagc cggttgttct ggacgttgcg 3240 gcaggcggca tcgacatcgc tagccgcaag ggcgagcgtc cggctctgac tttcattacc 3300 ccgctggcag ctccgggtga agaacagcgt cgccgtacca agactggtaa aagcgagttc 3360 accaccttcg tggaaatcgt aggtaaacag gaccgctggc gtattcgcga cggtgcggcg 3420 gacaccacca tcgacctggc aaaagttgtt tcccaactgg tagatgctaa cggcgtgctg 3480 aaacattcta ttaaactgga tgtaatcggc ggtgacggcg atgacgttgt actggcgaac 3540 gcgtctcgta tccactatga cggcggcgca ggtaccaaca cggtttccta cgcagcgctg 3600 ggccgccagg attccatcac tgttagcgcc gatggcgaac gtttcaacgt gcgtaaacag 3660 ctgaataacg caaacgtcta tcgtgagggt gtagctaccc agaccaccgc gtacggtaag 3720 cgtaccgaaa acgttcagta tcgtcacgtg gaactggcac gtgtgggtca gctggtagag 3780 gtggatacgc tggaacacgt gcagcacatc atcggtggcg ccggtaacga ttccattact 3840 ggtaacgctc acgacaactt cctggcaggt ggttctggtg atgatcgtct ggacggtggt 3900 gcgggtaacg atacgctggt aggcggcgaa ggtcagaaca ccgtaattgg tggtgccggt 3960 gacgacgttt tcctgcagga tctgggcgtt tggagcaacc agctggatgg cggtgccggt 4020 gttgacacgg ttaagtataa cgttcaccag ccgtctgaag agcgcctgga acgtatgggt 4080 gacactggta ttcatgccga tctgcagaaa ggcactgttg aaaaatggcc tgcgctgaac 4140 ctgttctctg tggaccatgt taagaacatt gaaaacctgc atggctctcg cctgaacgac 4200 cgtatcgctg gtgacgacca ggataacgaa ctgtggggtc atgacggcaa tgataccatt 4260 cgcggtcgtg gcggcgacga tattctgcgt ggcggtctgg gcctggatac cctgtatggt 4320 gaagatggta acgatatttt cctgcaagac gatgaaacgg tatctgatga catcgacggt 4380 ggtgcaggcc tggacaccgt agattacagc gctatgatcc atccgggtcg tatcgtagct 4440 ccgcacgagt acggcttcgg tatcgaggcg gacctgtctc gtgaatgggt tcgtaaagcg 4500 tccgcgctgg gtgtggacta ctacgataac gttcgtaacg tggaaaacgt gatcggtacc 4560 tccatgaaag acgtgctgat tggcgacgca caggccaaca ctctgatggg ccagggcggt 4620 gatgacacgg ttcgcggcgg cgacggtgat gacctgctgt tcggtggtga cggcaacgac 4680 atgctgtacg gcgacgcggg caacgacacc ctgtacggcg gtctgggtga cgacactctg 4740 gaaggtggtg caggtaacga ctggttcggc caaacccagg cacgcgaaca cgacgtgctg 4800 cgtggtggcg acggcgtaga caccgtggat tactcccaaa ctggcgctca cgcgggtatc 4860 gcggccggtc gtatcggtct gggcattctg gccgatctgg gtgccggccg tgtcgacaaa 4920 ctgggtgagg ctggctctag cgcctatgat actgtttccg gcatcgaaaa cgtggtaggc 4980 actgaactgg cagatcgtat cacgggtgac gcgcaagcga acgttctgcg tggtgctggc 5040 ggtgcagacg tgctggcggg tggtgaaggc gacgacgtac tgctgggcgg tgacggtgac 5100 gatcagctga gcggtgatgc gggtcgtgac cgtctgtacg gtgaagcagg tgacgattgg 5160 ttcttccagg acgctgctaa cgctggcaac ctgctggacg gcggcgatgg ccgtgacact 5220 gttgacttca gcggtccggg tcgcggtctg gacgcaggcg cgaaaggcgt tttcctgagc 5280 ctgggtaagg gtttcgcatc tctgatggac gaaccagaaa ccagcaatgt cctgcgtaac 5340 atcgaaaacg ctgtcggttc cgcacgcgat gatgttctga ttggcgatgc tggtgccaat 5400 gttctgaacg gtctggcggg taatgatgta ctgtctggtg gcgctggtga tgatgtcctg 5460 ctgggtgatg agggcagcga tctgctgtcc ggcgatgccg gcaacgacga tctgttcggt 5520 ggccaaggtg atgatactta cctgttcggc gttggctatg gtcatgacac catctatgag 5580 tctggtggcg gccacgatac gattcgtatt aatgcaggtg ctgaccaact gtggtttgca 5640 cgtcagggta acgatctgga aattcgcatc ctgggtactg atgacgctct gaccgtacac 5700 gactggtacc gcgatgcgga tcaccgcgta gaaatcatcc atgcggctaa ccaagctgta 5760 gaccaggctg gtattgaaaa actggtagaa gcgatggcac agtatccgga cccaggtgcg 5820 gctgctgcag cacctccagc ggctcgtgtg ccggataccc tgatgcagag cctggccgtc 5880 aattggcgtt aatggatcca ggcctcttta gaaggagata taccatgctg ccgtctgcac 5940 aggcgccgtc tctgctgaat ccaactgatg acttcgctgc gctgggtaac atcgcgtggc 6000 tgtggatgaa cagcccgatg caccgtgact ggccggttca cctgctggca cgtaacacgc 6060 tggcgccgat ccagctgggt caatacatcc tgctgcgttg taacgacgtg cctgtggcgt 6120 attgctcctg ggcactgatg gatgcggata ccgagctgtc ctacgttatg gccccatcta 6180 gcctgggcgg taacgcttgg aactgcggcg atcgtctgtg gatcattgat tggattgctc 6240 cgtttagccg tgacgacaac cgtgctctgc gtcgcgcgct ggccgaacgt catccggatt 6300 ctgttggccg ttccctgcgc gtacgtcgcg gtggcgacac cgctcgcgtc aaagaatacc 6360 gtggtcgtgc tctggacgca gcggcggccc gcgctcagct ggaccgctac cacgcagaac 6420 tgattgccgg tctgcgtgca tccaatggcg gttatgctcc gcgtggccgt ggcaccgcat 6480 aatctagaat tctttaatta aagatccggc tgctaacaaa gcccgaaagg aagctgagtt 6540 ggctgctgcc accgctgagc aatccaggca tcaaataaaa cgaaaggctc agtcgaaaga 6600 ctgggccttt cgttttatct gttgtttgtc ggtgaacgct ctcctgagta ggacaaatcc 6660 gccgggagcg gatttgaacg ttgcgaagca acggcccgga gggtggcggg caggacgccc 6720 gccataaact gccaggcatc aaattaagca gaaggccatc ctgacggatg gcctttttgc 6780 tagcagcacg ccatagtgac tggcgatgct gtcggaatgg acgatatccc gcaagaggcc 6840 cggcagtacc ggcataacca agcctatgcc tacagcatcc agggtgacgg tgccgaggat 6900 gacgatgagc gcattgttag atttcataca cggtgcctga ctgcgttagc aatttaactg 6960 tgataaacta ccgcattaaa gcttatcgat gataagctgt caaacatgag aattcttaga 7020 aaaactcatc gagcatcaaa tgaaactgca atttattcat atcaggatta tcaataccat 7080 atttttgaaa aagccgtttc tgtaatgaag gagaaaactc accgaggcag ttccatagga 7140 tggcaagatc ctggtatcgg tctgcgattc cgactcgtcc aacatcaata caacctatta 7200 atttcccctc gtcaaaaata aggttatcaa gtgagaaatc accatgagtg acgactgaat 7260 ccggtgagaa tggcaaaagc ttatgcattt ctttccagac ttgttcaaca ggccagccat 7320 tacgctcgtc atcaaaatca ctcgcatcaa ccaaaccgtt attcattcgt gattgcgcct 7380 gagcgagacg aaatacgcga tcgctgttaa aaggacaatt acaaacagga atcgaatgca 7440 accggcgcag gaacactgcc agcgcatcaa caatattttc acctgaatca ggatattctt 7500 ctaatacctg gaatgctgtt ttcccgggga tcgcagtggt gagtaaccat gcatcatcag 7560 gagtacggat aaaatgcttg atggtcggaa gaggcataaa ttccgtcagc cagtttagtc 7620 tgaccatctc atctgtaaca tcattggcaa cgctaccttt gccatgtttc agaaacaact 7680 ctggcgcatc gggcttccca tacaatcgat agattgtcgc acctgattgc ccgacattat 7740 cgcgagccca tttataccca tataaatcag catccatgtt ggaatttaat cgcggcctcg 7800 agcaagacgt ttcccgttga atatggctca taacacccct tgtattactg tttatgtaag 7860 cagacagttt tattgttcat gaccaaaatc ccttaacgtg agttttcgtt ccactgagcg 7920 tcagaccccg tagaaaagat caaaggatct tcttgagatc ctttttttct gcgcgtaatc 7980 tgctgcttgc aaacaaaaaa accaccgcta ccagcggtgg tttgtttgcc ggatcaagag 8040 ctaccaactc tttttccgaa ggtaactggc ttcagcagag cgcagatacc aaatactgtc 8100 cttctagtgt agccgtagtt aggccaccac ttcaagaact ctgtagcacc gcctacatac 8160 ctcgctctgc taatcctgtt accagtggct gctgccagtg gcgataagtc gtgtcttacc 8220 gggttggact caagacgata gttaccggat aaggcgcagc ggtcgggctg aacggggggt 8280 tcgtgcacac agcccagctt ggagcgaacg acctacaccg aactgagata cctacagcgt 8340 gagctatgag aaagcgccac gcttcccgaa gggagaaagg cggacaggta tccggtaagc 8400 ggcagggtcg gaacaggaga gcgcacgagg gagcttccag ggggaaacgc ctggtatctt 8460 tatagtcctg tcgggtttcg ccacctctga cttgagcgtc gatttttgtg atgctcgtca 8520 ggggggcgga gcctatggaa aaacgccagc aacgcggcct ttttacggtt cctggccttt 8580 tgctggcctt ttgctcacat gttctttcct gcgttatccc ctgattctgt ggataaccgt 8640 attaccgcct ttgagtgagc tgataccgct cgccgcagcc gaacgaccga gcgcagcgag 8700 tcagtgagcg aggaagcgga agagcgcctg atgcggtatt ttctccttac gcatctgtgc 8760 ggtatttcac accgcaatgg tgcactctca gtacaatctg ctctgatgcc gcatagttaa 8820 gccagtatac actccgctat cgctacgtga ctgggtcatg gctgcgcccc gacacccgcc 8880 aacacccgct gacgcgccct gacgggcttg tctgctcccg gcatccgctt acagacaagc 8940 tgtgaccgtc tccgggagct gcatgtgtca gaggttttca ccgtcatcac cgaaacgcgc 9000 gaggcagctg cggtaaagct catcagcgtg gtcgtgaagc gattcacaga tgtctgcctg 9060 ttcatccgcg tccagctcgt tgagtttctc cagaagcgtt aatgtctggc ttctgataaa 9120 gcgggccatg ttaagggcgg ttttttcctg tttggtcact gatgcctccg tgtaaggggg 9180 atttctgttc atgggggtaa tgataccgat gaaacgagag aggatgctca cgatacgggt 9240 tactgatgat gaacatgccc ggttactgga acgttgtgag ggtaaacaac tggcggtatg 9300 gatgcggcgg gaccagagaa aaatcactca gggtcaatgc cagcgcttcg ttaatacaga 9360 tgtaggtgtt ccacagggta gccagcagca tcctgcgatg cagatccgga acataatggt 9420 gcagggcgct gacttccgcg tttccagact ttacgaaaca cggaaaccga agaccattca 9480 tgttgttgct caggtcgcag acgttttgca gcagcagtcg cttcacgttc gctcgcgtat 9540 cggtgattca ttctgctaac cagtaaggca accccgccag cctagccggg tcctcaacga 9600 caggagcacg atcatgcgca cccgtggcca ggacccaacg ctgcccgaga tgcgccgcgt 9660 gcggctgctg gagatggcgg acgcgatgga tatgttctgc caagggttgg tttgcgcatt 9720 cacagttctc cgcaagaatt gattggctcc aattcttgga gtggtgaatc cgttagcgag 9780 gtgccgccgg cttccattca ggtcgaggtg gcccggctcc atgcaccgcg acgcaacgcg 9840 gggaggcaga caaggtatag ggcggcgcct acaatccatg ccaacccgtt ccatgtgctc 9900 gccgaggcgg cataaatcgc cgtgacgatc agcggtccaa tgatcgaagt taggctggta 9960 agagccgcga gcgatccttg aagctgtccc tgatggtcgt catctacctg cctggacagc 10020 atggcctgca acgcgggcat cccgatgccg ccggaagcga gaagaatcat aatggggaag 10080 gccatccagc ctcgcgtcgc gaacgccagc aagacgtagc ccagcgcgtc ggccgccatg 10140 ccggcgataa tggcctgctt ctcgccgaaa cgtttggtgg cgggaccagt gacgaaggct 10200 tgagcgaggg cgtgcaagat tccgaatacc gcaagcgaca ggccgatcat cgtcgcgctc 10260 cagcgaaagc ggtcctcgcc gaaaatgacc cagagcgctg ccggcacctg tcctacgagt 10320 tgcatgataa agaagacagt cataagtgcg gcgacgatag tcatgccccg cgcccaccgg 10380 aaggagctga ctgggttgaa ggctctcaag ggcatcggtc gactcatagc tgtttcctgt 10440 gtgaaattgt tatccgctca caattccaca caacatacga gccggaagca taaagtgtaa 10500 agcctggggt gcctaatgag tgagctaact tacattaatt gcgttgcgct cactgcccgc 10560 tttccagtcg ggaaacctgt cgtgccagct gcattaatga atcggccaac gcgcggggag 10620 aggcggtttg cgtattgggc gctagcgtgg tttttctttt caccagtgag acgggcaaca 10680 gctgattgcc cttcaccgcc tggccctgag agagttgcag caagcggtcc acgctggttt 10740 gccccagcag gcgaaaatcc tgtttgatgg tggttaacgg cgggatataa catgagctgt 10800 cttcggtatc gtcgtatccc actaccgaga tatccgcacc aacgcgcagc ccggactcgg 10860 taatggcgcg cattgcgccc agcgccatct gatcgttggc aaccagcatc gcagtgggaa 10920 cgatgccctc attcagcatt tgcatggttt gttgaaaacc ggacatggca ctccagtcgc 10980 cttcccgttc cgctatcggc tgaatttgat tgcgagtgag atatttatgc cagccagcca 11040 gacgcagacg cgccgagaca gaacttaatg ggcccgctaa cagcgcgatt tgctggtgac 11100 ccaatgcgac cagatgctcc acgcccagtc gcgtaccgtc ttcatgggag aaaataatac 11160 tgttgatggg tgtctggtca gagacatcaa gaaataacgc cggaacatta gtgcaggcag 11220 cttccacagc aatggcatcc tggtcatcca gcggatagtt aatgatcagc ccactgacgc 11280 gttgcgcgag aagattgtgc accgccgctt tacaggcttc gacgccgctt cgttctacca 11340 tcgacaccac cacgctggca cccagttgat cggcgcgaga tttaatcgcc gcgacaattt 11400 gcgacggcgc gtgcagggcc agactggagg tggcaacgcc aatcagcaac gactgtttgc 11460 ccgccagttg ttgtgccacg cggttgggaa tgtaattcag ctccgccatc gccgcttcca 11520 ctttttcccg cgttttcgca gaaacgtggc tggcctggtt caccacgcgg gaaacggtct 11580 gataagagac accggcatac tctgcgacat cgtataacgt tactggtttc acattcacca 11640 ccctgaattg actctcttcc gggcgctatc atgccatacc gcgaaaggtt ttgcgccatt 11700 cgatggtgtc ggaatttatg cggtgtgaaa taccgcacag atgcgtaagg agaaaatacc 11760 gcatcaggcg ctcttccgct tcctcgctca ctgactcgct gccaccccgt ggcatgcaag 11820 gagatggcgc ccaacagtcc cccggccacg gggcctgcca ccatacccac gccgaaacaa 11880 gcgctcatga gcccgaagtg gcgagcccga tcttccccat cggtgatgtc ggcgatatag 11940 gcgccagcaa ccgcacctgt ggcgccggtg atgccggcca cgatgcgtcc ggcgtagagg 12000 <210> 60 <211> 5340 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> nucleotide encoding chimeric CyaA delta 203+ antigen HPV16, HVP18 and HPV45 acidic-deleted <220> <221> CDS <222> (1)..(5340) <400> 60 atg cag cag tcc cat cag gcc ggt tac gca aac gca gcc gat cgt gaa 48 Met Gln Gln Ser His Gln Ala Gly Tyr Ala Asn Ala Ala Asp Arg Glu 1 5 10 15 tct ggt atc ccg gca gcg gtt ctg gat ggt att aag gca gtt gcc aaa 96 Ser Gly Ile Pro Ala Ala Val Leu Asp Gly Ile Lys Ala Val Ala Lys 20 25 30 gag aag aac gct acc ctg atg ttc cgt ctg gtc aac cca cac tct act 144 Glu Lys Asn Ala Thr Leu Met Phe Arg Leu Val Asn Pro His Ser Thr 35 40 45 tcc ctg atc gcg gaa ggt gtg gcg acc aaa ggc ctg ggt gtg cac gcc 192 Ser Leu Ile Ala Glu Gly Val Ala Thr Lys Gly Leu Gly Val His Ala 50 55 60 aaa agc agc gac tgg ggt ctg cag gca ggt tat att ccg gtg aac ccg 240 Lys Ser Ser Asp Trp Gly Leu Gln Ala Gly Tyr Ile Pro Val Asn Pro 65 70 75 80 aat ctg tct aaa ctg ttc ggt cgt gcc ccg gag gtg atc gca cgt gca 288 Asn Leu Ser Lys Leu Phe Gly Arg Ala Pro Glu Val Ile Ala Arg Ala 85 90 95 gac aac gat gtc aac tct tct ctg gcg cat ggt cac acc gcg gtt gat 336 Asp Asn Asp Val Asn Ser Ser Leu Ala His Gly His Thr Ala Val Asp 100 105 110 ctg acc ctg tcc aaa gaa cgc ctg gat tac ctg cgt cag gcg ggc ctg 384 Leu Thr Leu Ser Lys Glu Arg Leu Asp Tyr Leu Arg Gln Ala Gly Leu 115 120 125 gtg acg ggc atg gcc gac ggt gtt gta gcg agc aac cac gcg ggt tat 432 Val Thr Gly Met Ala Asp Gly Val Val Ala Ser Asn His Ala Gly Tyr 130 135 140 gaa caa ttt gag ttt cgc gtt aaa gag acc tct gac ggt cgt tac gcg 480 Glu Gln Phe Glu Phe Arg Val Lys Glu Thr Ser Asp Gly Arg Tyr Ala 145 150 155 160 gtg cag tac cgc cgc aaa ggt ggc gat gac ttt gaa gct gtc aaa gtg 528 Val Gln Tyr Arg Arg Lys Gly Gly Asp Asp Phe Glu Ala Val Lys Val 165 170 175 atc ggt aac gct gct gga att ggt cag gcg gaa ccg gat cgc gcg cac 576 Ile Gly Asn Ala Ala Gly Ile Gly Gln Ala Glu Pro Asp Arg Ala His 180 185 190 tac aac atc gtt act ttt tgt tgc aaa tgt gat tcc act ctg cgc ctg 624 Tyr Asn Ile Val Thr Phe Cys Cys Lys Cys Asp Ser Thr Leu Arg Leu 195 200 205 tgt gtg caa tcc acc cac gta gac att cgc act ctg gaa gac ctg ctg 672 Cys Val Gln Ser Thr His Val Asp Ile Arg Thr Leu Glu Asp Leu Leu 210 215 220 atg ggt acc ctt ggt att gtt tgt ccg att tgc tcc cag aag ccg gcg 720 Met Gly Thr Leu Gly Ile Val Cys Pro Ile Cys Ser Gln Lys Pro Ala 225 230 235 240 tct ggc gtt aac cac caa cac ctg ccg gcg cgt cgc gca gag ccg cag 768 Ser Gly Val Asn His Gln His Leu Pro Ala Arg Arg Ala Glu Pro Gln 245 250 255 cgt cac acc atg ctg tgc atg tgc tgt aaa tgt gag gcc cgt atc gag 816 Arg His Thr Met Leu Cys Met Cys Cys Lys Cys Glu Ala Arg Ile Glu 260 265 270 ctg gtc gtt gag tct agc gcc gac gat ctg cgt gcg ttt cag cag ctg 864 Leu Val Val Glu Ser Ser Ala Asp Asp Leu Arg Ala Phe Gln Gln Leu 275 280 285 ttc ctg aac acg ctg agc ttc gtt tgc ccg tgg tgt gct agc cag cag 912 Phe Leu Asn Thr Leu Ser Phe Val Cys Pro Trp Cys Ala Ser Gln Gln 290 295 300 ggc gtg tct cac gct cag ctg ccg gca cgt cgt gct gag cct cag cgt 960 Gly Val Ser His Ala Gln Leu Pro Ala Arg Arg Ala Glu Pro Gln Arg 305 310 315 320 cac aaa atc ctg tgc gtg tgc tgc aaa tgc gat ggc cgc atc gaa ctg 1008 His Lys Ile Leu Cys Val Cys Cys Lys Cys Asp Gly Arg Ile Glu Leu 325 330 335 acc gtg gaa tct agc gca gaa gac ctg cgt acg ctg cag caa ctg ttc 1056 Thr Val Glu Ser Ser Ala Glu Asp Leu Arg Thr Leu Gln Gln Leu Phe 340 345 350 ctg agc acg ctg tcc ttc gta tgc cct tgg tgc gca act aat cag atg 1104 Leu Ser Thr Leu Ser Phe Val Cys Pro Trp Cys Ala Thr Asn Gln Met 355 360 365 cac ggt gac acc ccg acc ctg cac gaa tac atg ctg gac ctg cag cca 1152 His Gly Asp Thr Pro Thr Leu His Glu Tyr Met Leu Asp Leu Gln Pro 370 375 380 gaa acc acc gat ctg tac tgt tac gaa cag ctg aac atg cat ggc cca 1200 Glu Thr Thr Asp Leu Tyr Cys Tyr Glu Gln Leu Asn Met His Gly Pro 385 390 395 400 aaa gct act ctg cag gat atc gtc ctg cat ctg gaa cca cag aac gaa 1248 Lys Ala Thr Leu Gln Asp Ile Val Leu His Leu Glu Pro Gln Asn Glu 405 410 415 atc ccg gta gat ctg ctg tgc cat gag cag ctg atg cat ggt ccg cgt 1296 Ile Pro Val Asp Leu Leu Cys His Glu Gln Leu Met His Gly Pro Arg 420 425 430 gaa acc ctg cag gaa atc gtt ctg cac ctg gaa ccg caa aac gaa ctg 1344 Glu Thr Leu Gln Glu Ile Val Leu His Leu Glu Pro Gln Asn Glu Leu 435 440 445 gac ccg gtt gac ctg ctg tgc tat gaa cag ctg ccg ggc ctg cgc cgt 1392 Asp Pro Val Asp Leu Leu Cys Tyr Glu Gln Leu Pro Gly Leu Arg Arg 450 455 460 ccg tcc ctg ggc gca gtc gaa cgt cag gac tcc ggc tac gat tcc ctg 1440 Pro Ser Leu Gly Ala Val Glu Arg Gln Asp Ser Gly Tyr Asp Ser Leu 465 470 475 480 gat ggc gtt ggc tcc cgc tcc ttc tcc ctg ggc gag gtt tct gac atg 1488 Asp Gly Val Gly Ser Arg Ser Phe Ser Leu Gly Glu Val Ser Asp Met 485 490 495 gct gcg gtg gaa gcg gca gag ctg gaa atg acc cgt caa gtg ctg cac 1536 Ala Ala Val Glu Ala Ala Glu Leu Glu Met Thr Arg Gln Val Leu His 500 505 510 gcg ggc gca cgt cag gac gat gct gag ccg ggc gtg tcc ggt gcg tct 1584 Ala Gly Ala Arg Gln Asp Asp Ala Glu Pro Gly Val Ser Gly Ala Ser 515 520 525 gca cac tgg ggt caa cgt gcc ctg cag ggt gct caa gct gtc gcg gca 1632 Ala His Trp Gly Gln Arg Ala Leu Gln Gly Ala Gln Ala Val Ala Ala 530 535 540 gcg cag cgt ctg gta cat gcg atc gca ctg atg acc cag ttc ggt cgc 1680 Ala Gln Arg Leu Val His Ala Ile Ala Leu Met Thr Gln Phe Gly Arg 545 550 555 560 gca ggt tct acc aac act cct cag gaa gca gct agc ctg tct gct gct 1728 Ala Gly Ser Thr Asn Thr Pro Gln Glu Ala Ala Ser Leu Ser Ala Ala 565 570 575 gtt ttc ggt ctg ggc gaa gcg tct tct gcg gtt gca gaa acc gtg agc 1776 Val Phe Gly Leu Gly Glu Ala Ser Ser Ala Val Ala Glu Thr Val Ser 580 585 590 ggt ttc ttc cgt ggt tct agc cgc tgg gcg ggt ggt ttt ggt gta gca 1824 Gly Phe Phe Arg Gly Ser Ser Arg Trp Ala Gly Gly Phe Gly Val Ala 595 600 605 ggt ggc gct atg gcc ctg ggt ggc ggt atc gcg gct gct gtc ggc gca 1872 Gly Gly Ala Met Ala Leu Gly Gly Gly Ile Ala Ala Ala Val Gly Ala 610 615 620 ggt atg agc ctg acc gac gat gct cct gcg ggc cag aaa gcc gca gct 1920 Gly Met Ser Leu Thr Asp Asp Ala Pro Ala Gly Gln Lys Ala Ala Ala 625 630 635 640 ggc gct gaa atc gcg ctg cag ctg act ggt ggt acc gtt gaa ctg gct 1968 Gly Ala Glu Ile Ala Leu Gln Leu Thr Gly Gly Thr Val Glu Leu Ala 645 650 655 agc tct atc gcg ctg gct ctg gca gcg gca cgt ggc gtg act tct ggc 2016 Ser Ser Ile Ala Leu Ala Leu Ala Ala Ala Arg Gly Val Thr Ser Gly 660 665 670 ctg caa gtc gcc ggt gcc tct gcg ggc gct gct gcg ggc gct ctg gca 2064 Leu Gln Val Ala Gly Ala Ser Ala Gly Ala Ala Ala Gly Ala Leu Ala 675 680 685 gct gca ctg tcc ccc atg gaa atc tac ggt ctg gta cag cag tct cac 2112 Ala Ala Leu Ser Pro Met Glu Ile Tyr Gly Leu Val Gln Gln Ser His 690 695 700 tac gca gac cag ctg gat aaa ctg gcg cag gag tct tct gca tac ggt 2160 Tyr Ala Asp Gln Leu Asp Lys Leu Ala Gln Glu Ser Ser Ala Tyr Gly 705 710 715 720 tac gaa ggc gac gca ctg ctg gcg cag ctg tat cgt gac aaa act gct 2208 Tyr Glu Gly Asp Ala Leu Leu Ala Gln Leu Tyr Arg Asp Lys Thr Ala 725 730 735 gct gaa ggt gct gtg gca ggc gtt tct gcg gta ctg tct acc gtt ggc 2256 Ala Glu Gly Ala Val Ala Gly Val Ser Ala Val Leu Ser Thr Val Gly 740 745 750 gct gcg gtt tct att gcg gct gcc gca tcc gtt gta ggt gcg ccg gtt 2304 Ala Ala Val Ser Ile Ala Ala Ala Ala Ser Val Val Gly Ala Pro Val 755 760 765 gct gta gtt acc tct ctg ctg act ggt gca ctg aac ggt atc ctg cgt 2352 Ala Val Val Thr Ser Leu Leu Thr Gly Ala Leu Asn Gly Ile Leu Arg 770 775 780 ggt gtt cag cag cct att atc gaa aaa ctg gcg aat gat tat gcc cgt 2400 Gly Val Gln Gln Pro Ile Ile Glu Lys Leu Ala Asn Asp Tyr Ala Arg 785 790 795 800 aaa atc gac gaa ctg ggc ggt ccg cag gct tat ttt gaa aaa aac ctg 2448 Lys Ile Asp Glu Leu Gly Gly Pro Gln Ala Tyr Phe Glu Lys Asn Leu 805 810 815 cag gcg cgc cac gaa cag ctg gca aac agc gac ggc ctg cgc aaa atg 2496 Gln Ala Arg His Glu Gln Leu Ala Asn Ser Asp Gly Leu Arg Lys Met 820 825 830 ctg gca gac ctg caa gct ggt tgg aac gcg tct tct gtg atc ggc gtg 2544 Leu Ala Asp Leu Gln Ala Gly Trp Asn Ala Ser Ser Val Ile Gly Val 835 840 845 cag acc acc gaa att agc aaa tct gcg ctg gaa ctg gct gca att act 2592 Gln Thr Thr Glu Ile Ser Lys Ser Ala Leu Glu Leu Ala Ala Ile Thr 850 855 860 ggc aac gcg gat aac ctg aaa agc gtt gat gtt ttt gtc gat cgc ttc 2640 Gly Asn Ala Asp Asn Leu Lys Ser Val Asp Val Phe Val Asp Arg Phe 865 870 875 880 gtt cag ggc gag cgc gtt gct ggt cag ccg gtt gtt ctg gac gtt gcg 2688 Val Gln Gly Glu Arg Val Ala Gly Gln Pro Val Val Leu Asp Val Ala 885 890 895 gca ggc ggc atc gac atc gct agc cgc aag ggc gag cgt ccg gct ctg 2736 Ala Gly Gly Ile Asp Ile Ala Ser Arg Lys Gly Glu Arg Pro Ala Leu 900 905 910 act ttc att acc ccg ctg gca gct ccg ggt gaa gaa cag cgt cgc cgt 2784 Thr Phe Ile Thr Pro Leu Ala Ala Pro Gly Glu Glu Gln Arg Arg Arg 915 920 925 acc aag act ggt aaa agc gag ttc acc acc ttc gtg gaa atc gta ggt 2832 Thr Lys Thr Gly Lys Ser Glu Phe Thr Thr Phe Val Glu Ile Val Gly 930 935 940 aaa cag gac cgc tgg cgt att cgc gac ggt gcg gcg gac acc acc atc 2880 Lys Gln Asp Arg Trp Arg Ile Arg Asp Gly Ala Ala Asp Thr Thr Ile 945 950 955 960 gac ctg gca aaa gtt gtt tcc caa ctg gta gat gct aac ggc gtg ctg 2928 Asp Leu Ala Lys Val Val Ser Gln Leu Val Asp Ala Asn Gly Val Leu 965 970 975 aaa cat tct att aaa ctg gat gta atc ggc ggt gac ggc gat gac gtt 2976 Lys His Ser Ile Lys Leu Asp Val Ile Gly Gly Asp Gly Asp Asp Val 980 985 990 gta ctg gcg aac gcg tct cgt atc cac tat gac ggc ggc gca ggt acc 3024 Val Leu Ala Asn Ala Ser Arg Ile His Tyr Asp Gly Gly Ala Gly Thr 995 1000 1005 aac acg gtt tcc tac gca gcg ctg ggc cgc cag gat tcc atc act 3069 Asn Thr Val Ser Tyr Ala Ala Leu Gly Arg Gln Asp Ser Ile Thr 1010 1015 1020 gtt agc gcc gat ggc gaa cgt ttc aac gtg cgt aaa cag ctg aat 3114 Val Ser Ala Asp Gly Glu Arg Phe Asn Val Arg Lys Gln Leu Asn 1025 1030 1035 aac gca aac gtc tat cgt gag ggt gta gct acc cag acc acc gcg 3159 Asn Ala Asn Val Tyr Arg Glu Gly Val Ala Thr Gln Thr Thr Ala 1040 1045 1050 tac ggt aag cgt acc gaa aac gtt cag tat cgt cac gtg gaa ctg 3204 Tyr Gly Lys Arg Thr Glu Asn Val Gln Tyr Arg His Val Glu Leu 1055 1060 1065 gca cgt gtg ggt cag ctg gta gag gtg gat acg ctg gaa cac gtg 3249 Ala Arg Val Gly Gln Leu Val Glu Val Asp Thr Leu Glu His Val 1070 1075 1080 cag cac atc atc ggt ggc gcc ggt aac gat tcc att act ggt aac 3294 Gln His Ile Ile Gly Gly Ala Gly Asn Asp Ser Ile Thr Gly Asn 1085 1090 1095 gct cac gac aac ttc ctg gca ggt ggt tct ggt gat gat cgt ctg 3339 Ala His Asp Asn Phe Leu Ala Gly Gly Ser Gly Asp Asp Arg Leu 1100 1105 1110 gac ggt ggt gcg ggt aac gat acg ctg gta ggc ggc gaa ggt cag 3384 Asp Gly Gly Ala Gly Asn Asp Thr Leu Val Gly Gly Glu Gly Gln 1115 1120 1125 aac acc gta att ggt ggt gcc ggt gac gac gtt ttc ctg cag gat 3429 Asn Thr Val Ile Gly Gly Ala Gly Asp Asp Val Phe Leu Gln Asp 1130 1135 1140 ctg ggc gtt tgg agc aac cag ctg gat ggc ggt gcc ggt gtt gac 3474 Leu Gly Val Trp Ser Asn Gln Leu Asp Gly Gly Ala Gly Val Asp 1145 1150 1155 acg gtt aag tat aac gtt cac cag ccg tct gaa gag cgc ctg gaa 3519 Thr Val Lys Tyr Asn Val His Gln Pro Ser Glu Glu Arg Leu Glu 1160 1165 1170 cgt atg ggt gac act ggt att cat gcc gat ctg cag aaa ggc act 3564 Arg Met Gly Asp Thr Gly Ile His Ala Asp Leu Gln Lys Gly Thr 1175 1180 1185 gtt gaa aaa tgg cct gcg ctg aac ctg ttc tct gtg gac cat gtt 3609 Val Glu Lys Trp Pro Ala Leu Asn Leu Phe Ser Val Asp His Val 1190 1195 1200 aag aac att gaa aac ctg cat ggc tct cgc ctg aac gac cgt atc 3654 Lys Asn Ile Glu Asn Leu His Gly Ser Arg Leu Asn Asp Arg Ile 1205 1210 1215 gct ggt gac gac cag gat aac gaa ctg tgg ggt cat gac ggc aat 3699 Ala Gly Asp Asp Gln Asp Asn Glu Leu Trp Gly His Asp Gly Asn 1220 1225 1230 gat acc att cgc ggt cgt ggc ggc gac gat att ctg cgt ggc ggt 3744 Asp Thr Ile Arg Gly Arg Gly Gly Asp Asp Ile Leu Arg Gly Gly 1235 1240 1245 ctg ggc ctg gat acc ctg tat ggt gaa gat ggt aac gat att ttc 3789 Leu Gly Leu Asp Thr Leu Tyr Gly Glu Asp Gly Asn Asp Ile Phe 1250 1255 1260 ctg caa gac gat gaa acg gta tct gat gac atc gac ggt ggt gca 3834 Leu Gln Asp Asp Glu Thr Val Ser Asp Asp Ile Asp Gly Gly Ala 1265 1270 1275 ggc ctg gac acc gta gat tac agc gct atg atc cat ccg ggt cgt 3879 Gly Leu Asp Thr Val Asp Tyr Ser Ala Met Ile His Pro Gly Arg 1280 1285 1290 atc gta gct ccg cac gag tac ggc ttc ggt atc gag gcg gac ctg 3924 Ile Val Ala Pro His Glu Tyr Gly Phe Gly Ile Glu Ala Asp Leu 1295 1300 1305 tct cgt gaa tgg gtt cgt aaa gcg tcc gcg ctg ggt gtg gac tac 3969 Ser Arg Glu Trp Val Arg Lys Ala Ser Ala Leu Gly Val Asp Tyr 1310 1315 1320 tac gat aac gtt cgt aac gtg gaa aac gtg atc ggt acc tcc atg 4014 Tyr Asp Asn Val Arg Asn Val Glu Asn Val Ile Gly Thr Ser Met 1325 1330 1335 aaa gac gtg ctg att ggc gac gca cag gcc aac act ctg atg ggc 4059 Lys Asp Val Leu Ile Gly Asp Ala Gln Ala Asn Thr Leu Met Gly 1340 1345 1350 cag ggc ggt gat gac acg gtt cgc ggc ggc gac ggt gat gac ctg 4104 Gln Gly Gly Asp Asp Thr Val Arg Gly Gly Asp Gly Asp Asp Leu 1355 1360 1365 ctg ttc ggt ggt gac ggc aac gac atg ctg tac ggc gac gcg ggc 4149 Leu Phe Gly Gly Asp Gly Asn Asp Met Leu Tyr Gly Asp Ala Gly 1370 1375 1380 aac gac acc ctg tac ggc ggt ctg ggt gac gac act ctg gaa ggt 4194 Asn Asp Thr Leu Tyr Gly Gly Leu Gly Asp Asp Thr Leu Glu Gly 1385 1390 1395 ggt gca ggt aac gac tgg ttc ggc caa acc cag gca cgc gaa cac 4239 Gly Ala Gly Asn Asp Trp Phe Gly Gln Thr Gln Ala Arg Glu His 1400 1405 1410 gac gtg ctg cgt ggt ggc gac ggc gta gac acc gtg gat tac tcc 4284 Asp Val Leu Arg Gly Gly Asp Gly Val Asp Thr Val Asp Tyr Ser 1415 1420 1425 caa act ggc gct cac gcg ggt atc gcg gcc ggt cgt atc ggt ctg 4329 Gln Thr Gly Ala His Ala Gly Ile Ala Ala Gly Arg Ile Gly Leu 1430 1435 1440 ggc att ctg gcc gat ctg ggt gcc ggc cgt gtc gac aaa ctg ggt 4374 Gly Ile Leu Ala Asp Leu Gly Ala Gly Arg Val Asp Lys Leu Gly 1445 1450 1455 gag gct ggc tct agc gcc tat gat act gtt tcc ggc atc gaa aac 4419 Glu Ala Gly Ser Ser Ala Tyr Asp Thr Val Ser Gly Ile Glu Asn 1460 1465 1470 gtg gta ggc act gaa ctg gca gat cgt atc acg ggt gac gcg caa 4464 Val Val Gly Thr Glu Leu Ala Asp Arg Ile Thr Gly Asp Ala Gln 1475 1480 1485 gcg aac gtt ctg cgt ggt gct ggc ggt gca gac gtg ctg gcg ggt 4509 Ala Asn Val Leu Arg Gly Ala Gly Gly Ala Asp Val Leu Ala Gly 1490 1495 1500 ggt gaa ggc gac gac gta ctg ctg ggc ggt gac ggt gac gat cag 4554 Gly Glu Gly Asp Asp Val Leu Leu Gly Gly Asp Gly Asp Asp Gln 1505 1510 1515 ctg agc ggt gat gcg ggt cgt gac cgt ctg tac ggt gaa gca ggt 4599 Leu Ser Gly Asp Ala Gly Arg Asp Arg Leu Tyr Gly Glu Ala Gly 1520 1525 1530 gac gat tgg ttc ttc cag gac gct gct aac gct ggc aac ctg ctg 4644 Asp Asp Trp Phe Phe Gln Asp Ala Ala Asn Ala Gly Asn Leu Leu 1535 1540 1545 gac ggc ggc gat ggc cgt gac act gtt gac ttc agc ggt ccg ggt 4689 Asp Gly Gly Asp Gly Arg Asp Thr Val Asp Phe Ser Gly Pro Gly 1550 1555 1560 cgc ggt ctg gac gca ggc gcg aaa ggc gtt ttc ctg agc ctg ggt 4734 Arg Gly Leu Asp Ala Gly Ala Lys Gly Val Phe Leu Ser Leu Gly 1565 1570 1575 aag ggt ttc gca tct ctg atg gac gaa cca gaa acc agc aat gtc 4779 Lys Gly Phe Ala Ser Leu Met Asp Glu Pro Glu Thr Ser Asn Val 1580 1585 1590 ctg cgt aac atc gaa aac gct gtc ggt tcc gca cgc gat gat gtt 4824 Leu Arg Asn Ile Glu Asn Ala Val Gly Ser Ala Arg Asp Asp Val 1595 1600 1605 ctg att ggc gat gct ggt gcc aat gtt ctg aac ggt ctg gcg ggt 4869 Leu Ile Gly Asp Ala Gly Ala Asn Val Leu Asn Gly Leu Ala Gly 1610 1615 1620 aat gat gta ctg tct ggt ggc gct ggt gat gat gtc ctg ctg ggt 4914 Asn Asp Val Leu Ser Gly Gly Ala Gly Asp Asp Val Leu Leu Gly 1625 1630 1635 gat gag ggc agc gat ctg ctg tcc ggc gat gcc ggc aac gac gat 4959 Asp Glu Gly Ser Asp Leu Leu Ser Gly Asp Ala Gly Asn Asp Asp 1640 1645 1650 ctg ttc ggt ggc caa ggt gat gat act tac ctg ttc ggc gtt ggc 5004 Leu Phe Gly Gly Gln Gly Asp Asp Thr Tyr Leu Phe Gly Val Gly 1655 1660 1665 tat ggt cat gac acc atc tat gag tct ggt ggc ggc cac gat acg 5049 Tyr Gly His Asp Thr Ile Tyr Glu Ser Gly Gly Gly His Asp Thr 1670 1675 1680 att cgt att aat gca ggt gct gac caa ctg tgg ttt gca cgt cag 5094 Ile Arg Ile Asn Ala Gly Ala Asp Gln Leu Trp Phe Ala Arg Gln 1685 1690 1695 ggt aac gat ctg gaa att cgc atc ctg ggt act gat gac gct ctg 5139 Gly Asn Asp Leu Glu Ile Arg Ile Leu Gly Thr Asp Asp Ala Leu 1700 1705 1710 acc gta cac gac tgg tac cgc gat gcg gat cac cgc gta gaa atc 5184 Thr Val His Asp Trp Tyr Arg Asp Ala Asp His Arg Val Glu Ile 1715 1720 1725 atc cat gcg gct aac caa gct gta gac cag gct ggt att gaa aaa 5229 Ile His Ala Ala Asn Gln Ala Val Asp Gln Ala Gly Ile Glu Lys 1730 1735 1740 ctg gta gaa gcg atg gca cag tat ccg gac cca ggt gcg gct gct 5274 Leu Val Glu Ala Met Ala Gln Tyr Pro Asp Pro Gly Ala Ala Ala 1745 1750 1755 gca gca cct cca gcg gct cgt gtg ccg gat acc ctg atg cag agc 5319 Ala Ala Pro Pro Ala Ala Arg Val Pro Asp Thr Leu Met Gln Ser 1760 1765 1770 ctg gcc gtc aat tgg cgt taa 5340 Leu Ala Val Asn Trp Arg 1775 <210> 61 <211> 1779 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 61 Met Gln Gln Ser His Gln Ala Gly Tyr Ala Asn Ala Ala Asp Arg Glu 1 5 10 15 Ser Gly Ile Pro Ala Ala Val Leu Asp Gly Ile Lys Ala Val Ala Lys 20 25 30 Glu Lys Asn Ala Thr Leu Met Phe Arg Leu Val Asn Pro His Ser Thr 35 40 45 Ser Leu Ile Ala Glu Gly Val Ala Thr Lys Gly Leu Gly Val His Ala 50 55 60 Lys Ser Ser Asp Trp Gly Leu Gln Ala Gly Tyr Ile Pro Val Asn Pro 65 70 75 80 Asn Leu Ser Lys Leu Phe Gly Arg Ala Pro Glu Val Ile Ala Arg Ala 85 90 95 Asp Asn Asp Val Asn Ser Ser Leu Ala His Gly His Thr Ala Val Asp 100 105 110 Leu Thr Leu Ser Lys Glu Arg Leu Asp Tyr Leu Arg Gln Ala Gly Leu 115 120 125 Val Thr Gly Met Ala Asp Gly Val Val Ala Ser Asn His Ala Gly Tyr 130 135 140 Glu Gln Phe Glu Phe Arg Val Lys Glu Thr Ser Asp Gly Arg Tyr Ala 145 150 155 160 Val Gln Tyr Arg Arg Lys Gly Gly Asp Asp Phe Glu Ala Val Lys Val 165 170 175 Ile Gly Asn Ala Ala Gly Ile Gly Gln Ala Glu Pro Asp Arg Ala His 180 185 190 Tyr Asn Ile Val Thr Phe Cys Cys Lys Cys Asp Ser Thr Leu Arg Leu 195 200 205 Cys Val Gln Ser Thr His Val Asp Ile Arg Thr Leu Glu Asp Leu Leu 210 215 220 Met Gly Thr Leu Gly Ile Val Cys Pro Ile Cys Ser Gln Lys Pro Ala 225 230 235 240 Ser Gly Val Asn His Gln His Leu Pro Ala Arg Arg Ala Glu Pro Gln 245 250 255 Arg His Thr Met Leu Cys Met Cys Cys Lys Cys Glu Ala Arg Ile Glu 260 265 270 Leu Val Val Glu Ser Ser Ala Asp Asp Leu Arg Ala Phe Gln Gln Leu 275 280 285 Phe Leu Asn Thr Leu Ser Phe Val Cys Pro Trp Cys Ala Ser Gln Gln 290 295 300 Gly Val Ser His Ala Gln Leu Pro Ala Arg Arg Ala Glu Pro Gln Arg 305 310 315 320 His Lys Ile Leu Cys Val Cys Cys Lys Cys Asp Gly Arg Ile Glu Leu 325 330 335 Thr Val Glu Ser Ser Ala Glu Asp Leu Arg Thr Leu Gln Gln Leu Phe 340 345 350 Leu Ser Thr Leu Ser Phe Val Cys Pro Trp Cys Ala Thr Asn Gln Met 355 360 365 His Gly Asp Thr Pro Thr Leu His Glu Tyr Met Leu Asp Leu Gln Pro 370 375 380 Glu Thr Thr Asp Leu Tyr Cys Tyr Glu Gln Leu Asn Met His Gly Pro 385 390 395 400 Lys Ala Thr Leu Gln Asp Ile Val Leu His Leu Glu Pro Gln Asn Glu 405 410 415 Ile Pro Val Asp Leu Leu Cys His Glu Gln Leu Met His Gly Pro Arg 420 425 430 Glu Thr Leu Gln Glu Ile Val Leu His Leu Glu Pro Gln Asn Glu Leu 435 440 445 Asp Pro Val Asp Leu Leu Cys Tyr Glu Gln Leu Pro Gly Leu Arg Arg 450 455 460 Pro Ser Leu Gly Ala Val Glu Arg Gln Asp Ser Gly Tyr Asp Ser Leu 465 470 475 480 Asp Gly Val Gly Ser Arg Ser Phe Ser Leu Gly Glu Val Ser Asp Met 485 490 495 Ala Ala Val Glu Ala Ala Glu Leu Glu Met Thr Arg Gln Val Leu His 500 505 510 Ala Gly Ala Arg Gln Asp Asp Ala Glu Pro Gly Val Ser Gly Ala Ser 515 520 525 Ala His Trp Gly Gln Arg Ala Leu Gln Gly Ala Gln Ala Val Ala Ala 530 535 540 Ala Gln Arg Leu Val His Ala Ile Ala Leu Met Thr Gln Phe Gly Arg 545 550 555 560 Ala Gly Ser Thr Asn Thr Pro Gln Glu Ala Ala Ser Leu Ser Ala Ala 565 570 575 Val Phe Gly Leu Gly Glu Ala Ser Ser Ala Val Ala Glu Thr Val Ser 580 585 590 Gly Phe Phe Arg Gly Ser Ser Arg Trp Ala Gly Gly Phe Gly Val Ala 595 600 605 Gly Gly Ala Met Ala Leu Gly Gly Gly Ile Ala Ala Ala Val Gly Ala 610 615 620 Gly Met Ser Leu Thr Asp Asp Ala Pro Ala Gly Gln Lys Ala Ala Ala 625 630 635 640 Gly Ala Glu Ile Ala Leu Gln Leu Thr Gly Gly Thr Val Glu Leu Ala 645 650 655 Ser Ser Ile Ala Leu Ala Leu Ala Ala Ala Arg Gly Val Thr Ser Gly 660 665 670 Leu Gln Val Ala Gly Ala Ser Ala Gly Ala Ala Ala Gly Ala Leu Ala 675 680 685 Ala Ala Leu Ser Pro Met Glu Ile Tyr Gly Leu Val Gln Gln Ser His 690 695 700 Tyr Ala Asp Gln Leu Asp Lys Leu Ala Gln Glu Ser Ser Ala Tyr Gly 705 710 715 720 Tyr Glu Gly Asp Ala Leu Leu Ala Gln Leu Tyr Arg Asp Lys Thr Ala 725 730 735 Ala Glu Gly Ala Val Ala Gly Val Ser Ala Val Leu Ser Thr Val Gly 740 745 750 Ala Ala Val Ser Ile Ala Ala Ala Ala Ser Val Val Gly Ala Pro Val 755 760 765 Ala Val Val Thr Ser Leu Leu Thr Gly Ala Leu Asn Gly Ile Leu Arg 770 775 780 Gly Val Gln Gln Pro Ile Ile Glu Lys Leu Ala Asn Asp Tyr Ala Arg 785 790 795 800 Lys Ile Asp Glu Leu Gly Gly Pro Gln Ala Tyr Phe Glu Lys Asn Leu 805 810 815 Gln Ala Arg His Glu Gln Leu Ala Asn Ser Asp Gly Leu Arg Lys Met 820 825 830 Leu Ala Asp Leu Gln Ala Gly Trp Asn Ala Ser Ser Val Ile Gly Val 835 840 845 Gln Thr Thr Glu Ile Ser Lys Ser Ala Leu Glu Leu Ala Ala Ile Thr 850 855 860 Gly Asn Ala Asp Asn Leu Lys Ser Val Asp Val Phe Val Asp Arg Phe 865 870 875 880 Val Gln Gly Glu Arg Val Ala Gly Gln Pro Val Val Leu Asp Val Ala 885 890 895 Ala Gly Gly Ile Asp Ile Ala Ser Arg Lys Gly Glu Arg Pro Ala Leu 900 905 910 Thr Phe Ile Thr Pro Leu Ala Ala Pro Gly Glu Glu Gln Arg Arg Arg 915 920 925 Thr Lys Thr Gly Lys Ser Glu Phe Thr Thr Phe Val Glu Ile Val Gly 930 935 940 Lys Gln Asp Arg Trp Arg Ile Arg Asp Gly Ala Ala Asp Thr Thr Ile 945 950 955 960 Asp Leu Ala Lys Val Val Ser Gln Leu Val Asp Ala Asn Gly Val Leu 965 970 975 Lys His Ser Ile Lys Leu Asp Val Ile Gly Gly Asp Gly Asp Asp Val 980 985 990 Val Leu Ala Asn Ala Ser Arg Ile His Tyr Asp Gly Gly Ala Gly Thr 995 1000 1005 Asn Thr Val Ser Tyr Ala Ala Leu Gly Arg Gln Asp Ser Ile Thr 1010 1015 1020 Val Ser Ala Asp Gly Glu Arg Phe Asn Val Arg Lys Gln Leu Asn 1025 1030 1035 Asn Ala Asn Val Tyr Arg Glu Gly Val Ala Thr Gln Thr Thr Ala 1040 1045 1050 Tyr Gly Lys Arg Thr Glu Asn Val Gln Tyr Arg His Val Glu Leu 1055 1060 1065 Ala Arg Val Gly Gln Leu Val Glu Val Asp Thr Leu Glu His Val 1070 1075 1080 Gln His Ile Ile Gly Gly Ala Gly Asn Asp Ser Ile Thr Gly Asn 1085 1090 1095 Ala His Asp Asn Phe Leu Ala Gly Gly Ser Gly Asp Asp Arg Leu 1100 1105 1110 Asp Gly Gly Ala Gly Asn Asp Thr Leu Val Gly Gly Glu Gly Gln 1115 1120 1125 Asn Thr Val Ile Gly Gly Ala Gly Asp Asp Val Phe Leu Gln Asp 1130 1135 1140 Leu Gly Val Trp Ser Asn Gln Leu Asp Gly Gly Ala Gly Val Asp 1145 1150 1155 Thr Val Lys Tyr Asn Val His Gln Pro Ser Glu Glu Arg Leu Glu 1160 1165 1170 Arg Met Gly Asp Thr Gly Ile His Ala Asp Leu Gln Lys Gly Thr 1175 1180 1185 Val Glu Lys Trp Pro Ala Leu Asn Leu Phe Ser Val Asp His Val 1190 1195 1200 Lys Asn Ile Glu Asn Leu His Gly Ser Arg Leu Asn Asp Arg Ile 1205 1210 1215 Ala Gly Asp Asp Gln Asp Asn Glu Leu Trp Gly His Asp Gly Asn 1220 1225 1230 Asp Thr Ile Arg Gly Arg Gly Gly Asp Asp Ile Leu Arg Gly Gly 1235 1240 1245 Leu Gly Leu Asp Thr Leu Tyr Gly Glu Asp Gly Asn Asp Ile Phe 1250 1255 1260 Leu Gln Asp Asp Glu Thr Val Ser Asp Asp Ile Asp Gly Gly Ala 1265 1270 1275 Gly Leu Asp Thr Val Asp Tyr Ser Ala Met Ile His Pro Gly Arg 1280 1285 1290 Ile Val Ala Pro His Glu Tyr Gly Phe Gly Ile Glu Ala Asp Leu 1295 1300 1305 Ser Arg Glu Trp Val Arg Lys Ala Ser Ala Leu Gly Val Asp Tyr 1310 1315 1320 Tyr Asp Asn Val Arg Asn Val Glu Asn Val Ile Gly Thr Ser Met 1325 1330 1335 Lys Asp Val Leu Ile Gly Asp Ala Gln Ala Asn Thr Leu Met Gly 1340 1345 1350 Gln Gly Gly Asp Asp Thr Val Arg Gly Gly Asp Gly Asp Asp Leu 1355 1360 1365 Leu Phe Gly Gly Asp Gly Asn Asp Met Leu Tyr Gly Asp Ala Gly 1370 1375 1380 Asn Asp Thr Leu Tyr Gly Gly Leu Gly Asp Asp Thr Leu Glu Gly 1385 1390 1395 Gly Ala Gly Asn Asp Trp Phe Gly Gln Thr Gln Ala Arg Glu His 1400 1405 1410 Asp Val Leu Arg Gly Gly Asp Gly Val Asp Thr Val Asp Tyr Ser 1415 1420 1425 Gln Thr Gly Ala His Ala Gly Ile Ala Ala Gly Arg Ile Gly Leu 1430 1435 1440 Gly Ile Leu Ala Asp Leu Gly Ala Gly Arg Val Asp Lys Leu Gly 1445 1450 1455 Glu Ala Gly Ser Ser Ala Tyr Asp Thr Val Ser Gly Ile Glu Asn 1460 1465 1470 Val Val Gly Thr Glu Leu Ala Asp Arg Ile Thr Gly Asp Ala Gln 1475 1480 1485 Ala Asn Val Leu Arg Gly Ala Gly Gly Ala Asp Val Leu Ala Gly 1490 1495 1500 Gly Glu Gly Asp Asp Val Leu Leu Gly Gly Asp Gly Asp Asp Gln 1505 1510 1515 Leu Ser Gly Asp Ala Gly Arg Asp Arg Leu Tyr Gly Glu Ala Gly 1520 1525 1530 Asp Asp Trp Phe Phe Gln Asp Ala Ala Asn Ala Gly Asn Leu Leu 1535 1540 1545 Asp Gly Gly Asp Gly Arg Asp Thr Val Asp Phe Ser Gly Pro Gly 1550 1555 1560 Arg Gly Leu Asp Ala Gly Ala Lys Gly Val Phe Leu Ser Leu Gly 1565 1570 1575 Lys Gly Phe Ala Ser Leu Met Asp Glu Pro Glu Thr Ser Asn Val 1580 1585 1590 Leu Arg Asn Ile Glu Asn Ala Val Gly Ser Ala Arg Asp Asp Val 1595 1600 1605 Leu Ile Gly Asp Ala Gly Ala Asn Val Leu Asn Gly Leu Ala Gly 1610 1615 1620 Asn Asp Val Leu Ser Gly Gly Ala Gly Asp Asp Val Leu Leu Gly 1625 1630 1635 Asp Glu Gly Ser Asp Leu Leu Ser Gly Asp Ala Gly Asn Asp Asp 1640 1645 1650 Leu Phe Gly Gly Gln Gly Asp Asp Thr Tyr Leu Phe Gly Val Gly 1655 1660 1665 Tyr Gly His Asp Thr Ile Tyr Glu Ser Gly Gly Gly His Asp Thr 1670 1675 1680 Ile Arg Ile Asn Ala Gly Ala Asp Gln Leu Trp Phe Ala Arg Gln 1685 1690 1695 Gly Asn Asp Leu Glu Ile Arg Ile Leu Gly Thr Asp Asp Ala Leu 1700 1705 1710 Thr Val His Asp Trp Tyr Arg Asp Ala Asp His Arg Val Glu Ile 1715 1720 1725 Ile His Ala Ala Asn Gln Ala Val Asp Gln Ala Gly Ile Glu Lys 1730 1735 1740 Leu Val Glu Ala Met Ala Gln Tyr Pro Asp Pro Gly Ala Ala Ala 1745 1750 1755 Ala Ala Pro Pro Ala Ala Arg Val Pro Asp Thr Leu Met Gln Ser 1760 1765 1770 Leu Ala Val Asn Trp Arg 1775 <210> 62 <211> 11670 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> plasmid comprising SEQ ID NO:60. <400> 62 atcgagatct gtatggctgt gcaggtcgta aatcactgca taattcgtgt cgctcaaggc 60 gcactcccgt tctggataat gttttttgcg ccgacatcat aacggttctg gcaaatattc 120 tgaaatgagc tgttgacaat taatcatcgg ctcgtataat gtgtggaatt gtgagcggat 180 aacaattata attttgttta actttaagaa ggagatatac atatgcagca gtcccatcag 240 gccggttacg caaacgcagc cgatcgtgaa tctggtatcc cggcagcggt tctggatggt 300 attaaggcag ttgccaaaga gaagaacgct accctgatgt tccgtctggt caacccacac 360 tctacttccc tgatcgcgga aggtgtggcg accaaaggcc tgggtgtgca cgccaaaagc 420 agcgactggg gtctgcaggc aggttatatt ccggtgaacc cgaatctgtc taaactgttc 480 ggtcgtgccc cggaggtgat cgcacgtgca gacaacgatg tcaactcttc tctggcgcat 540 ggtcacaccg cggttgatct gaccctgtcc aaagaacgcc tggattacct gcgtcaggcg 600 ggcctggtga cgggcatggc cgacggtgtt gtagcgagca accacgcggg ttatgaacaa 660 tttgagtttc gcgttaaaga gacctctgac ggtcgttacg cggtgcagta ccgccgcaaa 720 ggtggcgatg actttgaagc tgtcaaagtg atcggtaacg ctgctggaat tggtcaggcg 780 gaaccggatc gcgcgcacta caacatcgtt actttttgtt gcaaatgtga ttccactctg 840 cgcctgtgtg tgcaatccac ccacgtagac attcgcactc tggaagacct gctgatgggt 900 acccttggta ttgtttgtcc gatttgctcc cagaagccgg cgtctggcgt taaccaccaa 960 cacctgccgg cgcgtcgcgc agagccgcag cgtcacacca tgctgtgcat gtgctgtaaa 1020 tgtgaggccc gtatcgagct ggtcgttgag tctagcgccg acgatctgcg tgcgtttcag 1080 cagctgttcc tgaacacgct gagcttcgtt tgcccgtggt gtgctagcca gcagggcgtg 1140 tctcacgctc agctgccggc acgtcgtgct gagcctcagc gtcacaaaat cctgtgcgtg 1200 tgctgcaaat gcgatggccg catcgaactg accgtggaat ctagcgcaga agacctgcgt 1260 acgctgcagc aactgttcct gagcacgctg tccttcgtat gcccttggtg cgcaactaat 1320 cagatgcacg gtgacacccc gaccctgcac gaatacatgc tggacctgca gccagaaacc 1380 accgatctgt actgttacga acagctgaac atgcatggcc caaaagctac tctgcaggat 1440 atcgtcctgc atctggaacc acagaacgaa atcccggtag atctgctgtg ccatgagcag 1500 ctgatgcatg gtccgcgtga aaccctgcag gaaatcgttc tgcacctgga accgcaaaac 1560 gaactggacc cggttgacct gctgtgctat gaacagctgc cgggcctgcg ccgtccgtcc 1620 ctgggcgcag tcgaacgtca ggactccggc tacgattccc tggatggcgt tggctcccgc 1680 tccttctccc tgggcgaggt ttctgacatg gctgcggtgg aagcggcaga gctggaaatg 1740 acccgtcaag tgctgcacgc gggcgcacgt caggacgatg ctgagccggg cgtgtccggt 1800 gcgtctgcac actggggtca acgtgccctg cagggtgctc aagctgtcgc ggcagcgcag 1860 cgtctggtac atgcgatcgc actgatgacc cagttcggtc gcgcaggttc taccaacact 1920 cctcaggaag cagctagcct gtctgctgct gttttcggtc tgggcgaagc gtcttctgcg 1980 gttgcagaaa ccgtgagcgg tttcttccgt ggttctagcc gctgggcggg tggttttggt 2040 gtagcaggtg gcgctatggc cctgggtggc ggtatcgcgg ctgctgtcgg cgcaggtatg 2100 agcctgaccg acgatgctcc tgcgggccag aaagccgcag ctggcgctga aatcgcgctg 2160 cagctgactg gtggtaccgt tgaactggct agctctatcg cgctggctct ggcagcggca 2220 cgtggcgtga cttctggcct gcaagtcgcc ggtgcctctg cgggcgctgc tgcgggcgct 2280 ctggcagctg cactgtcccc catggaaatc tacggtctgg tacagcagtc tcactacgca 2340 gaccagctgg ataaactggc gcaggagtct tctgcatacg gttacgaagg cgacgcactg 2400 ctggcgcagc tgtatcgtga caaaactgct gctgaaggtg ctgtggcagg cgtttctgcg 2460 gtactgtcta ccgttggcgc tgcggtttct attgcggctg ccgcatccgt tgtaggtgcg 2520 ccggttgctg tagttacctc tctgctgact ggtgcactga acggtatcct gcgtggtgtt 2580 cagcagccta ttatcgaaaa actggcgaat gattatgccc gtaaaatcga cgaactgggc 2640 ggtccgcagg cttattttga aaaaaacctg caggcgcgcc acgaacagct ggcaaacagc 2700 gacggcctgc gcaaaatgct ggcagacctg caagctggtt ggaacgcgtc ttctgtgatc 2760 ggcgtgcaga ccaccgaaat tagcaaatct gcgctggaac tggctgcaat tactggcaac 2820 gcggataacc tgaaaagcgt tgatgttttt gtcgatcgct tcgttcaggg cgagcgcgtt 2880 gctggtcagc cggttgttct ggacgttgcg gcaggcggca tcgacatcgc tagccgcaag 2940 ggcgagcgtc cggctctgac tttcattacc ccgctggcag ctccgggtga agaacagcgt 3000 cgccgtacca agactggtaa aagcgagttc accaccttcg tggaaatcgt aggtaaacag 3060 gaccgctggc gtattcgcga cggtgcggcg gacaccacca tcgacctggc aaaagttgtt 3120 tcccaactgg tagatgctaa cggcgtgctg aaacattcta ttaaactgga tgtaatcggc 3180 ggtgacggcg atgacgttgt actggcgaac gcgtctcgta tccactatga cggcggcgca 3240 ggtaccaaca cggtttccta cgcagcgctg ggccgccagg attccatcac tgttagcgcc 3300 gatggcgaac gtttcaacgt gcgtaaacag ctgaataacg caaacgtcta tcgtgagggt 3360 gtagctaccc agaccaccgc gtacggtaag cgtaccgaaa acgttcagta tcgtcacgtg 3420 gaactggcac gtgtgggtca gctggtagag gtggatacgc tggaacacgt gcagcacatc 3480 atcggtggcg ccggtaacga ttccattact ggtaacgctc acgacaactt cctggcaggt 3540 ggttctggtg atgatcgtct ggacggtggt gcgggtaacg atacgctggt aggcggcgaa 3600 ggtcagaaca ccgtaattgg tggtgccggt gacgacgttt tcctgcagga tctgggcgtt 3660 tggagcaacc agctggatgg cggtgccggt gttgacacgg ttaagtataa cgttcaccag 3720 ccgtctgaag agcgcctgga acgtatgggt gacactggta ttcatgccga tctgcagaaa 3780 ggcactgttg aaaaatggcc tgcgctgaac ctgttctctg tggaccatgt taagaacatt 3840 gaaaacctgc atggctctcg cctgaacgac cgtatcgctg gtgacgacca ggataacgaa 3900 ctgtggggtc atgacggcaa tgataccatt cgcggtcgtg gcggcgacga tattctgcgt 3960 ggcggtctgg gcctggatac cctgtatggt gaagatggta acgatatttt cctgcaagac 4020 gatgaaacgg tatctgatga catcgacggt ggtgcaggcc tggacaccgt agattacagc 4080 gctatgatcc atccgggtcg tatcgtagct ccgcacgagt acggcttcgg tatcgaggcg 4140 gacctgtctc gtgaatgggt tcgtaaagcg tccgcgctgg gtgtggacta ctacgataac 4200 gttcgtaacg tggaaaacgt gatcggtacc tccatgaaag acgtgctgat tggcgacgca 4260 caggccaaca ctctgatggg ccagggcggt gatgacacgg ttcgcggcgg cgacggtgat 4320 gacctgctgt tcggtggtga cggcaacgac atgctgtacg gcgacgcggg caacgacacc 4380 ctgtacggcg gtctgggtga cgacactctg gaaggtggtg caggtaacga ctggttcggc 4440 caaacccagg cacgcgaaca cgacgtgctg cgtggtggcg acggcgtaga caccgtggat 4500 tactcccaaa ctggcgctca cgcgggtatc gcggccggtc gtatcggtct gggcattctg 4560 gccgatctgg gtgccggccg tgtcgacaaa ctgggtgagg ctggctctag cgcctatgat 4620 actgtttccg gcatcgaaaa cgtggtaggc actgaactgg cagatcgtat cacgggtgac 4680 gcgcaagcga acgttctgcg tggtgctggc ggtgcagacg tgctggcggg tggtgaaggc 4740 gacgacgtac tgctgggcgg tgacggtgac gatcagctga gcggtgatgc gggtcgtgac 4800 cgtctgtacg gtgaagcagg tgacgattgg ttcttccagg acgctgctaa cgctggcaac 4860 ctgctggacg gcggcgatgg ccgtgacact gttgacttca gcggtccggg tcgcggtctg 4920 gacgcaggcg cgaaaggcgt tttcctgagc ctgggtaagg gtttcgcatc tctgatggac 4980 gaaccagaaa ccagcaatgt cctgcgtaac atcgaaaacg ctgtcggttc cgcacgcgat 5040 gatgttctga ttggcgatgc tggtgccaat gttctgaacg gtctggcggg taatgatgta 5100 ctgtctggtg gcgctggtga tgatgtcctg ctgggtgatg agggcagcga tctgctgtcc 5160 ggcgatgccg gcaacgacga tctgttcggt ggccaaggtg atgatactta cctgttcggc 5220 gttggctatg gtcatgacac catctatgag tctggtggcg gccacgatac gattcgtatt 5280 aatgcaggtg ctgaccaact gtggtttgca cgtcagggta acgatctgga aattcgcatc 5340 ctgggtactg atgacgctct gaccgtacac gactggtacc gcgatgcgga tcaccgcgta 5400 gaaatcatcc atgcggctaa ccaagctgta gaccaggctg gtattgaaaa actggtagaa 5460 gcgatggcac agtatccgga cccaggtgcg gctgctgcag cacctccagc ggctcgtgtg 5520 ccggataccc tgatgcagag cctggccgtc aattggcgtt aatggatcca ggcctcttta 5580 gaaggagata taccatgctg ccgtctgcac aggcgccgtc tctgctgaat ccaactgatg 5640 acttcgctgc gctgggtaac atcgcgtggc tgtggatgaa cagcccgatg caccgtgact 5700 ggccggttca cctgctggca cgtaacacgc tggcgccgat ccagctgggt caatacatcc 5760 tgctgcgttg taacgacgtg cctgtggcgt attgctcctg ggcactgatg gatgcggata 5820 ccgagctgtc ctacgttatg gccccatcta gcctgggcgg taacgcttgg aactgcggcg 5880 atcgtctgtg gatcattgat tggattgctc cgtttagccg tgacgacaac cgtgctctgc 5940 gtcgcgcgct ggccgaacgt catccggatt ctgttggccg ttccctgcgc gtacgtcgcg 6000 gtggcgacac cgctcgcgtc aaagaatacc gtggtcgtgc tctggacgca gcggcggccc 6060 gcgctcagct ggaccgctac cacgcagaac tgattgccgg tctgcgtgca tccaatggcg 6120 gttatgctcc gcgtggccgt ggcaccgcat aatctagaat tctttaatta aagatccggc 6180 tgctaacaaa gcccgaaagg aagctgagtt ggctgctgcc accgctgagc aatccaggca 6240 tcaaataaaa cgaaaggctc agtcgaaaga ctgggccttt cgttttatct gttgtttgtc 6300 ggtgaacgct ctcctgagta ggacaaatcc gccgggagcg gatttgaacg ttgcgaagca 6360 acggcccgga gggtggcggg caggacgccc gccataaact gccaggcatc aaattaagca 6420 gaaggccatc ctgacggatg gcctttttgc tagcagcacg ccatagtgac tggcgatgct 6480 gtcggaatgg acgatatccc gcaagaggcc cggcagtacc ggcataacca agcctatgcc 6540 tacagcatcc agggtgacgg tgccgaggat gacgatgagc gcattgttag atttcataca 6600 cggtgcctga ctgcgttagc aatttaactg tgataaacta ccgcattaaa gcttatcgat 6660 gataagctgt caaacatgag aattcttaga aaaactcatc gagcatcaaa tgaaactgca 6720 atttattcat atcaggatta tcaataccat atttttgaaa aagccgtttc tgtaatgaag 6780 gagaaaactc accgaggcag ttccatagga tggcaagatc ctggtatcgg tctgcgattc 6840 cgactcgtcc aacatcaata caacctatta atttcccctc gtcaaaaata aggttatcaa 6900 gtgagaaatc accatgagtg acgactgaat ccggtgagaa tggcaaaagc ttatgcattt 6960 ctttccagac ttgttcaaca ggccagccat tacgctcgtc atcaaaatca ctcgcatcaa 7020 ccaaaccgtt attcattcgt gattgcgcct gagcgagacg aaatacgcga tcgctgttaa 7080 aaggacaatt acaaacagga atcgaatgca accggcgcag gaacactgcc agcgcatcaa 7140 caatattttc acctgaatca ggatattctt ctaatacctg gaatgctgtt ttcccgggga 7200 tcgcagtggt gagtaaccat gcatcatcag gagtacggat aaaatgcttg atggtcggaa 7260 gaggcataaa ttccgtcagc cagtttagtc tgaccatctc atctgtaaca tcattggcaa 7320 cgctaccttt gccatgtttc agaaacaact ctggcgcatc gggcttccca tacaatcgat 7380 agattgtcgc acctgattgc ccgacattat cgcgagccca tttataccca tataaatcag 7440 catccatgtt ggaatttaat cgcggcctcg agcaagacgt ttcccgttga atatggctca 7500 taacacccct tgtattactg tttatgtaag cagacagttt tattgttcat gaccaaaatc 7560 ccttaacgtg agttttcgtt ccactgagcg tcagaccccg tagaaaagat caaaggatct 7620 tcttgagatc ctttttttct gcgcgtaatc tgctgcttgc aaacaaaaaa accaccgcta 7680 ccagcggtgg tttgtttgcc ggatcaagag ctaccaactc tttttccgaa ggtaactggc 7740 ttcagcagag cgcagatacc aaatactgtc cttctagtgt agccgtagtt aggccaccac 7800 ttcaagaact ctgtagcacc gcctacatac ctcgctctgc taatcctgtt accagtggct 7860 gctgccagtg gcgataagtc gtgtcttacc gggttggact caagacgata gttaccggat 7920 aaggcgcagc ggtcgggctg aacggggggt tcgtgcacac agcccagctt ggagcgaacg 7980 acctacaccg aactgagata cctacagcgt gagctatgag aaagcgccac gcttcccgaa 8040 gggagaaagg cggacaggta tccggtaagc ggcagggtcg gaacaggaga gcgcacgagg 8100 gagcttccag ggggaaacgc ctggtatctt tatagtcctg tcgggtttcg ccacctctga 8160 cttgagcgtc gatttttgtg atgctcgtca ggggggcgga gcctatggaa aaacgccagc 8220 aacgcggcct ttttacggtt cctggccttt tgctggcctt ttgctcacat gttctttcct 8280 gcgttatccc ctgattctgt ggataaccgt attaccgcct ttgagtgagc tgataccgct 8340 cgccgcagcc gaacgaccga gcgcagcgag tcagtgagcg aggaagcgga agagcgcctg 8400 atgcggtatt ttctccttac gcatctgtgc ggtatttcac accgcaatgg tgcactctca 8460 gtacaatctg ctctgatgcc gcatagttaa gccagtatac actccgctat cgctacgtga 8520 ctgggtcatg gctgcgcccc gacacccgcc aacacccgct gacgcgccct gacgggcttg 8580 tctgctcccg gcatccgctt acagacaagc tgtgaccgtc tccgggagct gcatgtgtca 8640 gaggttttca ccgtcatcac cgaaacgcgc gaggcagctg cggtaaagct catcagcgtg 8700 gtcgtgaagc gattcacaga tgtctgcctg ttcatccgcg tccagctcgt tgagtttctc 8760 cagaagcgtt aatgtctggc ttctgataaa gcgggccatg ttaagggcgg ttttttcctg 8820 tttggtcact gatgcctccg tgtaaggggg atttctgttc atgggggtaa tgataccgat 8880 gaaacgagag aggatgctca cgatacgggt tactgatgat gaacatgccc ggttactgga 8940 acgttgtgag ggtaaacaac tggcggtatg gatgcggcgg gaccagagaa aaatcactca 9000 gggtcaatgc cagcgcttcg ttaatacaga tgtaggtgtt ccacagggta gccagcagca 9060 tcctgcgatg cagatccgga acataatggt gcagggcgct gacttccgcg tttccagact 9120 ttacgaaaca cggaaaccga agaccattca tgttgttgct caggtcgcag acgttttgca 9180 gcagcagtcg cttcacgttc gctcgcgtat cggtgattca ttctgctaac cagtaaggca 9240 accccgccag cctagccggg tcctcaacga caggagcacg atcatgcgca cccgtggcca 9300 ggacccaacg ctgcccgaga tgcgccgcgt gcggctgctg gagatggcgg acgcgatgga 9360 tatgttctgc caagggttgg tttgcgcatt cacagttctc cgcaagaatt gattggctcc 9420 aattcttgga gtggtgaatc cgttagcgag gtgccgccgg cttccattca ggtcgaggtg 9480 gcccggctcc atgcaccgcg acgcaacgcg gggaggcaga caaggtatag ggcggcgcct 9540 acaatccatg ccaacccgtt ccatgtgctc gccgaggcgg cataaatcgc cgtgacgatc 9600 agcggtccaa tgatcgaagt taggctggta agagccgcga gcgatccttg aagctgtccc 9660 tgatggtcgt catctacctg cctggacagc atggcctgca acgcgggcat cccgatgccg 9720 ccggaagcga gaagaatcat aatggggaag gccatccagc ctcgcgtcgc gaacgccagc 9780 aagacgtagc ccagcgcgtc ggccgccatg ccggcgataa tggcctgctt ctcgccgaaa 9840 cgtttggtgg cgggaccagt gacgaaggct tgagcgaggg cgtgcaagat tccgaatacc 9900 gcaagcgaca ggccgatcat cgtcgcgctc cagcgaaagc ggtcctcgcc gaaaatgacc 9960 cagagcgctg ccggcacctg tcctacgagt tgcatgataa agaagacagt cataagtgcg 10020 gcgacgatag tcatgccccg cgcccaccgg aaggagctga ctgggttgaa ggctctcaag 10080 ggcatcggtc gactcatagc tgtttcctgt gtgaaattgt tatccgctca caattccaca 10140 caacatacga gccggaagca taaagtgtaa agcctggggt gcctaatgag tgagctaact 10200 tacattaatt gcgttgcgct cactgcccgc tttccagtcg ggaaacctgt cgtgccagct 10260 gcattaatga atcggccaac gcgcggggag aggcggtttg cgtattgggc gctagcgtgg 10320 tttttctttt caccagtgag acgggcaaca gctgattgcc cttcaccgcc tggccctgag 10380 agagttgcag caagcggtcc acgctggttt gccccagcag gcgaaaatcc tgtttgatgg 10440 tggttaacgg cgggatataa catgagctgt cttcggtatc gtcgtatccc actaccgaga 10500 tatccgcacc aacgcgcagc ccggactcgg taatggcgcg cattgcgccc agcgccatct 10560 gatcgttggc aaccagcatc gcagtgggaa cgatgccctc attcagcatt tgcatggttt 10620 gttgaaaacc ggacatggca ctccagtcgc cttcccgttc cgctatcggc tgaatttgat 10680 tgcgagtgag atatttatgc cagccagcca gacgcagacg cgccgagaca gaacttaatg 10740 ggcccgctaa cagcgcgatt tgctggtgac ccaatgcgac cagatgctcc acgcccagtc 10800 gcgtaccgtc ttcatgggag aaaataatac tgttgatggg tgtctggtca gagacatcaa 10860 gaaataacgc cggaacatta gtgcaggcag cttccacagc aatggcatcc tggtcatcca 10920 gcggatagtt aatgatcagc ccactgacgc gttgcgcgag aagattgtgc accgccgctt 10980 tacaggcttc gacgccgctt cgttctacca tcgacaccac cacgctggca cccagttgat 11040 cggcgcgaga tttaatcgcc gcgacaattt gcgacggcgc gtgcagggcc agactggagg 11100 tggcaacgcc aatcagcaac gactgtttgc ccgccagttg ttgtgccacg cggttgggaa 11160 tgtaattcag ctccgccatc gccgcttcca ctttttcccg cgttttcgca gaaacgtggc 11220 tggcctggtt caccacgcgg gaaacggtct gataagagac accggcatac tctgcgacat 11280 cgtataacgt tactggtttc acattcacca ccctgaattg actctcttcc gggcgctatc 11340 atgccatacc gcgaaaggtt ttgcgccatt cgatggtgtc ggaatttatg cggtgtgaaa 11400 taccgcacag atgcgtaagg agaaaatacc gcatcaggcg ctcttccgct tcctcgctca 11460 ctgactcgct gccaccccgt ggcatgcaag gagatggcgc ccaacagtcc cccggccacg 11520 gggcctgcca ccatacccac gccgaaacaa gcgctcatga gcccgaagtg gcgagcccga 11580 tcttccccat cggtgatgtc ggcgatatag gcgccagcaa ccgcacctgt ggcgccggtg 11640 atgccggcca cgatgcgtcc ggcgtagagg 11670 <210> 63 <211> 5775 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleotide encoding chimeric CyaA delta 93+ antigen HPV16, HVP18 and HPV45 full <220> <221> CDS <222> (1)..(5775) <400> 63 atg cag cag tcc cat cag gcc ggt tac gca aac gca gcc gat cgt gaa 48 Met Gln Gln Ser His Gln Ala Gly Tyr Ala Asn Ala Ala Asp Arg Glu 1 5 10 15 tct ggt atc ccg gca gcg gtt ctg gat ggt att aag gca gtt gcc aaa 96 Ser Gly Ile Pro Ala Ala Val Leu Asp Gly Ile Lys Ala Val Ala Lys 20 25 30 gag aag aac gct acc ctg atg ttc cgt ctg gtc aac cca cac tct act 144 Glu Lys Asn Ala Thr Leu Met Phe Arg Leu Val Asn Pro His Ser Thr 35 40 45 tcc ctg atc gcg gaa ggt gtg gcg acc aaa ggc ctg ggt gtg cac gcc 192 Ser Leu Ile Ala Glu Gly Val Ala Thr Lys Gly Leu Gly Val His Ala 50 55 60 aaa agc agc gac tgg ggt ctg cag gca ggt tat att ccg gtg aac ccg 240 Lys Ser Ser Asp Trp Gly Leu Gln Ala Gly Tyr Ile Pro Val Asn Pro 65 70 75 80 aat ctg tct aaa ctg ttc ggt cgt gcc ccg gag gtg atc gca cgt gca 288 Asn Leu Ser Lys Leu Phe Gly Arg Ala Pro Glu Val Ile Ala Arg Ala 85 90 95 gac aac gat gtc aac tct tct ctg gcg cat ggt cac acc gcg gtt gat 336 Asp Asn Asp Val Asn Ser Ser Leu Ala His Gly His Thr Ala Val Asp 100 105 110 ctg acc ctg tcc aaa gaa cgc ctg gat tac ctg cgt cag gcg ggc ctg 384 Leu Thr Leu Ser Lys Glu Arg Leu Asp Tyr Leu Arg Gln Ala Gly Leu 115 120 125 gtg acg ggc atg gcc gac ggt gtt gta gcg agc aac cac gcg ggt tat 432 Val Thr Gly Met Ala Asp Gly Val Val Ala Ser Asn His Ala Gly Tyr 130 135 140 gaa caa ttt gag ttt cgc gtt aaa gag acc tct gac ggt cgt tac gcg 480 Glu Gln Phe Glu Phe Arg Val Lys Glu Thr Ser Asp Gly Arg Tyr Ala 145 150 155 160 gtg cag tac cgc cgc aaa ggt ggc gat gac ttt gaa gct gtc aaa gtg 528 Val Gln Tyr Arg Arg Lys Gly Gly Asp Asp Phe Glu Ala Val Lys Val 165 170 175 atc ggt aac gct gct gga att ccg ctg acc gcg gat atc gac atg ttt 576 Ile Gly Asn Ala Ala Gly Ile Pro Leu Thr Ala Asp Ile Asp Met Phe 180 185 190 gcc atc atg cct cac ctg tcc aac ttt cgc gat tcc gca cgc agc tct 624 Ala Ile Met Pro His Leu Ser Asn Phe Arg Asp Ser Ala Arg Ser Ser 195 200 205 gtg acg tct ggt gat tcc gtc act gac tac ctg gct cgt acc cgt cgt 672 Val Thr Ser Gly Asp Ser Val Thr Asp Tyr Leu Ala Arg Thr Arg Arg 210 215 220 gcg gcc tct gaa gac gaa atc gac ggc cct gcg ggc cag gct gaa cca 720 Ala Ala Ser Glu Asp Glu Ile Asp Gly Pro Ala Gly Gln Ala Glu Pro 225 230 235 240 gat cgt gct cac tac aac atc gta act ttt tgc tgt aag tgc gat agc 768 Asp Arg Ala His Tyr Asn Ile Val Thr Phe Cys Cys Lys Cys Asp Ser 245 250 255 act ctg cgt ctg tgc gta cag tct act cac gtt gat atc cgc act ctg 816 Thr Leu Arg Leu Cys Val Gln Ser Thr His Val Asp Ile Arg Thr Leu 260 265 270 gaa gat ctg ctg atg ggt acc ctg ggt atc gtc tgc cca atc tgc tct 864 Glu Asp Leu Leu Met Gly Thr Leu Gly Ile Val Cys Pro Ile Cys Ser 275 280 285 caa aag cct gct tct ggt gtt aac cat cag cac ctg ccg gct cgt cgc 912 Gln Lys Pro Ala Ser Gly Val Asn His Gln His Leu Pro Ala Arg Arg 290 295 300 gct gaa cca cag cgt cac acg atg ctg tgc atg tgt tgc aaa tgc gag 960 Ala Glu Pro Gln Arg His Thr Met Leu Cys Met Cys Cys Lys Cys Glu 305 310 315 320 gct cgc atc gaa ctg gtt gtt gaa tcc agc gct gac gac ctg cgt gcg 1008 Ala Arg Ile Glu Leu Val Val Glu Ser Ser Ala Asp Asp Leu Arg Ala 325 330 335 ttt cag caa ctg ttc ctg aac acg ctg tct ttt gtt tgt ccg tgg tgt 1056 Phe Gln Gln Leu Phe Leu Asn Thr Leu Ser Phe Val Cys Pro Trp Cys 340 345 350 gcc tcc cag cag gag aac gat gaa gcg gat ggc gtg tcc cac gcg cag 1104 Ala Ser Gln Gln Glu Asn Asp Glu Ala Asp Gly Val Ser His Ala Gln 355 360 365 ctg ccg gca cgt cgt gca gaa ccg cag cgc cac aag att ctg tgc gtt 1152 Leu Pro Ala Arg Arg Ala Glu Pro Gln Arg His Lys Ile Leu Cys Val 370 375 380 tgc tgt aaa tgt gat ggc cgt atc gaa ctg act gtg gaa tcc tcc gcg 1200 Cys Cys Lys Cys Asp Gly Arg Ile Glu Leu Thr Val Glu Ser Ser Ala 385 390 395 400 gaa gat ctg cgt acg ctg cag cag ctg ttc ctg tct acc ctg tct ttc 1248 Glu Asp Leu Arg Thr Leu Gln Gln Leu Phe Leu Ser Thr Leu Ser Phe 405 410 415 gtg tgc ccg tgg tgc gcc acc aat caa atg cac ggc gac acc ccg acc 1296 Val Cys Pro Trp Cys Ala Thr Asn Gln Met His Gly Asp Thr Pro Thr 420 425 430 ctg cac gaa tac atg ctg gac ctg cag ccg gaa acc acg gat ctg tat 1344 Leu His Glu Tyr Met Leu Asp Leu Gln Pro Glu Thr Thr Asp Leu Tyr 435 440 445 tgt tat gaa cag ctg aac gat agc agc gag gaa atg cac ggt ccg aaa 1392 Cys Tyr Glu Gln Leu Asn Asp Ser Ser Glu Glu Met His Gly Pro Lys 450 455 460 gca act ctg cag gac att gtg ctg cat ctg gag cca cag aac gaa atc 1440 Ala Thr Leu Gln Asp Ile Val Leu His Leu Glu Pro Gln Asn Glu Ile 465 470 475 480 ccg gtt gat ctg ctg tgc cac gag caa ctg agc gat tcc gaa gag gaa 1488 Pro Val Asp Leu Leu Cys His Glu Gln Leu Ser Asp Ser Glu Glu Glu 485 490 495 aac gac gaa att gat atg cat ggt ccg cgc gag acc ctg caa gaa atc 1536 Asn Asp Glu Ile Asp Met His Gly Pro Arg Glu Thr Leu Gln Glu Ile 500 505 510 gtc ctg cac ctg gaa ccg caa aac gaa ctg gac cct gta gac ctg ctg 1584 Val Leu His Leu Glu Pro Gln Asn Glu Leu Asp Pro Val Asp Leu Leu 515 520 525 tgc tac gaa cag ctg tcc gaa tct gaa gaa gaa tcc cag atg ctg act 1632 Cys Tyr Glu Gln Leu Ser Glu Ser Glu Glu Glu Ser Gln Met Leu Thr 530 535 540 cgt ggc cag ctg aaa gaa tac atc ggc caa cag cgt ggc gaa ggc tac 1680 Arg Gly Gln Leu Lys Glu Tyr Ile Gly Gln Gln Arg Gly Glu Gly Tyr 545 550 555 560 gtt ttc tac gag aat cgt gct tac ggc gtt gcg ggc aaa tcc ctg ttc 1728 Val Phe Tyr Glu Asn Arg Ala Tyr Gly Val Ala Gly Lys Ser Leu Phe 565 570 575 gac gat ggt ctg ggc gct gca ccg ggc gtt ccg agc ggc cgt tct aaa 1776 Asp Asp Gly Leu Gly Ala Ala Pro Gly Val Pro Ser Gly Arg Ser Lys 580 585 590 ttc agc ccg gac gta ctg gaa act gtg ccg gct tcc ccg ggc ctg cgc 1824 Phe Ser Pro Asp Val Leu Glu Thr Val Pro Ala Ser Pro Gly Leu Arg 595 600 605 cgt ccg tcc ctg ggc gca gtc gaa cgt cag gac tcc ggc tac gat tcc 1872 Arg Pro Ser Leu Gly Ala Val Glu Arg Gln Asp Ser Gly Tyr Asp Ser 610 615 620 ctg gat ggc gtt ggc tcc cgc tcc ttc tcc ctg ggc gag gtt tct gac 1920 Leu Asp Gly Val Gly Ser Arg Ser Phe Ser Leu Gly Glu Val Ser Asp 625 630 635 640 atg gct gcg gtg gaa gcg gca gag ctg gaa atg acc cgt caa gtg ctg 1968 Met Ala Ala Val Glu Ala Ala Glu Leu Glu Met Thr Arg Gln Val Leu 645 650 655 cac gcg ggc gca cgt cag gac gat gct gag ccg ggc gtg tcc ggt gcg 2016 His Ala Gly Ala Arg Gln Asp Asp Ala Glu Pro Gly Val Ser Gly Ala 660 665 670 tct gca cac tgg ggt caa cgt gcc ctg cag ggt gct caa gct gtc gcg 2064 Ser Ala His Trp Gly Gln Arg Ala Leu Gln Gly Ala Gln Ala Val Ala 675 680 685 gca gcg cag cgt ctg gta cat gcg atc gca ctg atg acc cag ttc ggt 2112 Ala Ala Gln Arg Leu Val His Ala Ile Ala Leu Met Thr Gln Phe Gly 690 695 700 cgc gca ggt tct acc aac act cct cag gaa gca gct agc ctg tct gct 2160 Arg Ala Gly Ser Thr Asn Thr Pro Gln Glu Ala Ala Ser Leu Ser Ala 705 710 715 720 gct gtt ttc ggt ctg ggc gaa gcg tct tct gcg gtt gca gaa acc gtg 2208 Ala Val Phe Gly Leu Gly Glu Ala Ser Ser Ala Val Ala Glu Thr Val 725 730 735 agc ggt ttc ttc cgt ggt tct agc cgc tgg gcg ggt ggt ttt ggt gta 2256 Ser Gly Phe Phe Arg Gly Ser Ser Arg Trp Ala Gly Gly Phe Gly Val 740 745 750 gca ggt ggc gct atg gcc ctg ggt ggc ggt atc gcg gct gct gtc ggc 2304 Ala Gly Gly Ala Met Ala Leu Gly Gly Gly Ile Ala Ala Ala Val Gly 755 760 765 gca ggt atg agc ctg acc gac gat gct cct gcg ggc cag aaa gcc gca 2352 Ala Gly Met Ser Leu Thr Asp Asp Ala Pro Ala Gly Gln Lys Ala Ala 770 775 780 gct ggc gct gaa atc gcg ctg cag ctg act ggt ggt acc gtt gaa ctg 2400 Ala Gly Ala Glu Ile Ala Leu Gln Leu Thr Gly Gly Thr Val Glu Leu 785 790 795 800 gct agc tct atc gcg ctg gct ctg gca gcg gca cgt ggc gtg act tct 2448 Ala Ser Ser Ile Ala Leu Ala Leu Ala Ala Ala Arg Gly Val Thr Ser 805 810 815 ggc ctg caa gtc gcc ggt gcc tct gcg ggc gct gct gcg ggc gct ctg 2496 Gly Leu Gln Val Ala Gly Ala Ser Ala Gly Ala Ala Ala Gly Ala Leu 820 825 830 gca gct gca ctg tcc ccc atg gaa atc tac ggt ctg gta cag cag tct 2544 Ala Ala Ala Leu Ser Pro Met Glu Ile Tyr Gly Leu Val Gln Gln Ser 835 840 845 cac tac gca gac cag ctg gat aaa ctg gcg cag gag tct tct gca tac 2592 His Tyr Ala Asp Gln Leu Asp Lys Leu Ala Gln Glu Ser Ser Ala Tyr 850 855 860 ggt tac gaa ggc gac gca ctg ctg gcg cag ctg tat cgt gac aaa act 2640 Gly Tyr Glu Gly Asp Ala Leu Leu Ala Gln Leu Tyr Arg Asp Lys Thr 865 870 875 880 gct gct gaa ggt gct gtg gca ggc gtt tct gcg gta ctg tct acc gtt 2688 Ala Ala Glu Gly Ala Val Ala Gly Val Ser Ala Val Leu Ser Thr Val 885 890 895 ggc gct gcg gtt tct att gcg gct gcc gca tcc gtt gta ggt gcg ccg 2736 Gly Ala Ala Val Ser Ile Ala Ala Ala Ala Ser Val Val Gly Ala Pro 900 905 910 gtt gct gta gtt acc tct ctg ctg act ggt gca ctg aac ggt atc ctg 2784 Val Ala Val Val Thr Ser Leu Leu Thr Gly Ala Leu Asn Gly Ile Leu 915 920 925 cgt ggt gtt cag cag cct att atc gaa aaa ctg gcg aat gat tat gcc 2832 Arg Gly Val Gln Gln Pro Ile Ile Glu Lys Leu Ala Asn Asp Tyr Ala 930 935 940 cgt aaa atc gac gaa ctg ggc ggt ccg cag gct tat ttt gaa aaa aac 2880 Arg Lys Ile Asp Glu Leu Gly Gly Pro Gln Ala Tyr Phe Glu Lys Asn 945 950 955 960 ctg cag gcg cgc cac gaa cag ctg gca aac agc gac ggc ctg cgc aaa 2928 Leu Gln Ala Arg His Glu Gln Leu Ala Asn Ser Asp Gly Leu Arg Lys 965 970 975 atg ctg gca gac ctg caa gct ggt tgg aac gcg tct tct gtg atc ggc 2976 Met Leu Ala Asp Leu Gln Ala Gly Trp Asn Ala Ser Ser Val Ile Gly 980 985 990 gtg cag acc acc gaa att agc aaa tct gcg ctg gaa ctg gct gca att 3024 Val Gln Thr Thr Glu Ile Ser Lys Ser Ala Leu Glu Leu Ala Ala Ile 995 1000 1005 act ggc aac gcg gat aac ctg aaa agc gtt gat gtt ttt gtc gat 3069 Thr Gly Asn Ala Asp Asn Leu Lys Ser Val Asp Val Phe Val Asp 1010 1015 1020 cgc ttc gtt cag ggc gag cgc gtt gct ggt cag ccg gtt gtt ctg 3114 Arg Phe Val Gln Gly Glu Arg Val Ala Gly Gln Pro Val Val Leu 1025 1030 1035 gac gtt gcg gca ggc ggc atc gac atc gct agc cgc aag ggc gag 3159 Asp Val Ala Ala Gly Gly Ile Asp Ile Ala Ser Arg Lys Gly Glu 1040 1045 1050 cgt ccg gct ctg act ttc att acc ccg ctg gca gct ccg ggt gaa 3204 Arg Pro Ala Leu Thr Phe Ile Thr Pro Leu Ala Ala Pro Gly Glu 1055 1060 1065 gaa cag cgt cgc cgt acc aag act ggt aaa agc gag ttc acc acc 3249 Glu Gln Arg Arg Arg Thr Lys Thr Gly Lys Ser Glu Phe Thr Thr 1070 1075 1080 ttc gtg gaa atc gta ggt aaa cag gac cgc tgg cgt att cgc gac 3294 Phe Val Glu Ile Val Gly Lys Gln Asp Arg Trp Arg Ile Arg Asp 1085 1090 1095 ggt gcg gcg gac acc acc atc gac ctg gca aaa gtt gtt tcc caa 3339 Gly Ala Ala Asp Thr Thr Ile Asp Leu Ala Lys Val Val Ser Gln 1100 1105 1110 ctg gta gat gct aac ggc gtg ctg aaa cat tct att aaa ctg gat 3384 Leu Val Asp Ala Asn Gly Val Leu Lys His Ser Ile Lys Leu Asp 1115 1120 1125 gta atc ggc ggt gac ggc gat gac gtt gta ctg gcg aac gcg tct 3429 Val Ile Gly Gly Asp Gly Asp Asp Val Val Leu Ala Asn Ala Ser 1130 1135 1140 cgt atc cac tat gac ggc ggc gca ggt acc aac acg gtt tcc tac 3474 Arg Ile His Tyr Asp Gly Gly Ala Gly Thr Asn Thr Val Ser Tyr 1145 1150 1155 gca gcg ctg ggc cgc cag gat tcc atc act gtt agc gcc gat ggc 3519 Ala Ala Leu Gly Arg Gln Asp Ser Ile Thr Val Ser Ala Asp Gly 1160 1165 1170 gaa cgt ttc aac gtg cgt aaa cag ctg aat aac gca aac gtc tat 3564 Glu Arg Phe Asn Val Arg Lys Gln Leu Asn Asn Ala Asn Val Tyr 1175 1180 1185 cgt gag ggt gta gct acc cag acc acc gcg tac ggt aag cgt acc 3609 Arg Glu Gly Val Ala Thr Gln Thr Thr Ala Tyr Gly Lys Arg Thr 1190 1195 1200 gaa aac gtt cag tat cgt cac gtg gaa ctg gca cgt gtg ggt cag 3654 Glu Asn Val Gln Tyr Arg His Val Glu Leu Ala Arg Val Gly Gln 1205 1210 1215 ctg gta gag gtg gat acg ctg gaa cac gtg cag cac atc atc ggt 3699 Leu Val Glu Val Asp Thr Leu Glu His Val Gln His Ile Ile Gly 1220 1225 1230 ggc gcc ggt aac gat tcc att act ggt aac gct cac gac aac ttc 3744 Gly Ala Gly Asn Asp Ser Ile Thr Gly Asn Ala His Asp Asn Phe 1235 1240 1245 ctg gca ggt ggt tct ggt gat gat cgt ctg gac ggt ggt gcg ggt 3789 Leu Ala Gly Gly Ser Gly Asp Asp Arg Leu Asp Gly Gly Ala Gly 1250 1255 1260 aac gat acg ctg gta ggc ggc gaa ggt cag aac acc gta att ggt 3834 Asn Asp Thr Leu Val Gly Gly Glu Gly Gln Asn Thr Val Ile Gly 1265 1270 1275 ggt gcc ggt gac gac gtt ttc ctg cag gat ctg ggc gtt tgg agc 3879 Gly Ala Gly Asp Asp Val Phe Leu Gln Asp Leu Gly Val Trp Ser 1280 1285 1290 aac cag ctg gat ggc ggt gcc ggt gtt gac acg gtt aag tat aac 3924 Asn Gln Leu Asp Gly Gly Ala Gly Val Asp Thr Val Lys Tyr Asn 1295 1300 1305 gtt cac cag ccg tct gaa gag cgc ctg gaa cgt atg ggt gac act 3969 Val His Gln Pro Ser Glu Glu Arg Leu Glu Arg Met Gly Asp Thr 1310 1315 1320 ggt att cat gcc gat ctg cag aaa ggc act gtt gaa aaa tgg cct 4014 Gly Ile His Ala Asp Leu Gln Lys Gly Thr Val Glu Lys Trp Pro 1325 1330 1335 gcg ctg aac ctg ttc tct gtg gac cat gtt aag aac att gaa aac 4059 Ala Leu Asn Leu Phe Ser Val Asp His Val Lys Asn Ile Glu Asn 1340 1345 1350 ctg cat ggc tct cgc ctg aac gac cgt atc gct ggt gac gac cag 4104 Leu His Gly Ser Arg Leu Asn Asp Arg Ile Ala Gly Asp Asp Gln 1355 1360 1365 gat aac gaa ctg tgg ggt cat gac ggc aat gat acc att cgc ggt 4149 Asp Asn Glu Leu Trp Gly His Asp Gly Asn Asp Thr Ile Arg Gly 1370 1375 1380 cgt ggc ggc gac gat att ctg cgt ggc ggt ctg ggc ctg gat acc 4194 Arg Gly Gly Asp Asp Ile Leu Arg Gly Gly Leu Gly Leu Asp Thr 1385 1390 1395 ctg tat ggt gaa gat ggt aac gat att ttc ctg caa gac gat gaa 4239 Leu Tyr Gly Glu Asp Gly Asn Asp Ile Phe Leu Gln Asp Asp Glu 1400 1405 1410 acg gta tct gat gac atc gac ggt ggt gca ggc ctg gac acc gta 4284 Thr Val Ser Asp Asp Ile Asp Gly Gly Ala Gly Leu Asp Thr Val 1415 1420 1425 gat tac agc gct atg atc cat ccg ggt cgt atc gta gct ccg cac 4329 Asp Tyr Ser Ala Met Ile His Pro Gly Arg Ile Val Ala Pro His 1430 1435 1440 gag tac ggc ttc ggt atc gag gcg gac ctg tct cgt gaa tgg gtt 4374 Glu Tyr Gly Phe Gly Ile Glu Ala Asp Leu Ser Arg Glu Trp Val 1445 1450 1455 cgt aaa gcg tcc gcg ctg ggt gtg gac tac tac gat aac gtt cgt 4419 Arg Lys Ala Ser Ala Leu Gly Val Asp Tyr Tyr Asp Asn Val Arg 1460 1465 1470 aac gtg gaa aac gtg atc ggt acc tcc atg aaa gac gtg ctg att 4464 Asn Val Glu Asn Val Ile Gly Thr Ser Met Lys Asp Val Leu Ile 1475 1480 1485 ggc gac gca cag gcc aac act ctg atg ggc cag ggc ggt gat gac 4509 Gly Asp Ala Gln Ala Asn Thr Leu Met Gly Gln Gly Gly Asp Asp 1490 1495 1500 acg gtt cgc ggc ggc gac ggt gat gac ctg ctg ttc ggt ggt gac 4554 Thr Val Arg Gly Gly Asp Gly Asp Asp Leu Leu Phe Gly Gly Asp 1505 1510 1515 ggc aac gac atg ctg tac ggc gac gcg ggc aac gac acc ctg tac 4599 Gly Asn Asp Met Leu Tyr Gly Asp Ala Gly Asn Asp Thr Leu Tyr 1520 1525 1530 ggc ggt ctg ggt gac gac act ctg gaa ggt ggt gca ggt aac gac 4644 Gly Gly Leu Gly Asp Asp Thr Leu Glu Gly Gly Ala Gly Asn Asp 1535 1540 1545 tgg ttc ggc caa acc cag gca cgc gaa cac gac gtg ctg cgt ggt 4689 Trp Phe Gly Gln Thr Gln Ala Arg Glu His Asp Val Leu Arg Gly 1550 1555 1560 ggc gac ggc gta gac acc gtg gat tac tcc caa act ggc gct cac 4734 Gly Asp Gly Val Asp Thr Val Asp Tyr Ser Gln Thr Gly Ala His 1565 1570 1575 gcg ggt atc gcg gcc ggt cgt atc ggt ctg ggc att ctg gcc gat 4779 Ala Gly Ile Ala Ala Gly Arg Ile Gly Leu Gly Ile Leu Ala Asp 1580 1585 1590 ctg ggt gcc ggc cgt gtc gac aaa ctg ggt gag gct ggc tct agc 4824 Leu Gly Ala Gly Arg Val Asp Lys Leu Gly Glu Ala Gly Ser Ser 1595 1600 1605 gcc tat gat act gtt tcc ggc atc gaa aac gtg gta ggc act gaa 4869 Ala Tyr Asp Thr Val Ser Gly Ile Glu Asn Val Val Gly Thr Glu 1610 1615 1620 ctg gca gat cgt atc acg ggt gac gcg caa gcg aac gtt ctg cgt 4914 Leu Ala Asp Arg Ile Thr Gly Asp Ala Gln Ala Asn Val Leu Arg 1625 1630 1635 ggt gct ggc ggt gca gac gtg ctg gcg ggt ggt gaa ggc gac gac 4959 Gly Ala Gly Gly Ala Asp Val Leu Ala Gly Gly Glu Gly Asp Asp 1640 1645 1650 gta ctg ctg ggc ggt gac ggt gac gat cag ctg agc ggt gat gcg 5004 Val Leu Leu Gly Gly Asp Gly Asp Asp Gln Leu Ser Gly Asp Ala 1655 1660 1665 ggt cgt gac cgt ctg tac ggt gaa gca ggt gac gat tgg ttc ttc 5049 Gly Arg Asp Arg Leu Tyr Gly Glu Ala Gly Asp Asp Trp Phe Phe 1670 1675 1680 cag gac gct gct aac gct ggc aac ctg ctg gac ggc ggc gat ggc 5094 Gln Asp Ala Ala Asn Ala Gly Asn Leu Leu Asp Gly Gly Asp Gly 1685 1690 1695 cgt gac act gtt gac ttc agc ggt ccg ggt cgc ggt ctg gac gca 5139 Arg Asp Thr Val Asp Phe Ser Gly Pro Gly Arg Gly Leu Asp Ala 1700 1705 1710 ggc gcg aaa ggc gtt ttc ctg agc ctg ggt aag ggt ttc gca tct 5184 Gly Ala Lys Gly Val Phe Leu Ser Leu Gly Lys Gly Phe Ala Ser 1715 1720 1725 ctg atg gac gaa cca gaa acc agc aat gtc ctg cgt aac atc gaa 5229 Leu Met Asp Glu Pro Glu Thr Ser Asn Val Leu Arg Asn Ile Glu 1730 1735 1740 aac gct gtc ggt tcc gca cgc gat gat gtt ctg att ggc gat gct 5274 Asn Ala Val Gly Ser Ala Arg Asp Asp Val Leu Ile Gly Asp Ala 1745 1750 1755 ggt gcc aat gtt ctg aac ggt ctg gcg ggt aat gat gta ctg tct 5319 Gly Ala Asn Val Leu Asn Gly Leu Ala Gly Asn Asp Val Leu Ser 1760 1765 1770 ggt ggc gct ggt gat gat gtc ctg ctg ggt gat gag ggc agc gat 5364 Gly Gly Ala Gly Asp Asp Val Leu Leu Gly Asp Glu Gly Ser Asp 1775 1780 1785 ctg ctg tcc ggc gat gcc ggc aac gac gat ctg ttc ggt ggc caa 5409 Leu Leu Ser Gly Asp Ala Gly Asn Asp Asp Leu Phe Gly Gly Gln 1790 1795 1800 ggt gat gat act tac ctg ttc ggc gtt ggc tat ggt cat gac acc 5454 Gly Asp Asp Thr Tyr Leu Phe Gly Val Gly Tyr Gly His Asp Thr 1805 1810 1815 atc tat gag tct ggt ggc ggc cac gat acg att cgt att aat gca 5499 Ile Tyr Glu Ser Gly Gly Gly His Asp Thr Ile Arg Ile Asn Ala 1820 1825 1830 ggt gct gac caa ctg tgg ttt gca cgt cag ggt aac gat ctg gaa 5544 Gly Ala Asp Gln Leu Trp Phe Ala Arg Gln Gly Asn Asp Leu Glu 1835 1840 1845 att cgc atc ctg ggt act gat gac gct ctg acc gta cac gac tgg 5589 Ile Arg Ile Leu Gly Thr Asp Asp Ala Leu Thr Val His Asp Trp 1850 1855 1860 tac cgc gat gcg gat cac cgc gta gaa atc atc cat gcg gct aac 5634 Tyr Arg Asp Ala Asp His Arg Val Glu Ile Ile His Ala Ala Asn 1865 1870 1875 caa gct gta gac cag gct ggt att gaa aaa ctg gta gaa gcg atg 5679 Gln Ala Val Asp Gln Ala Gly Ile Glu Lys Leu Val Glu Ala Met 1880 1885 1890 gca cag tat ccg gac cca ggt gcg gct gct gca gca cct cca gcg 5724 Ala Gln Tyr Pro Asp Pro Gly Ala Ala Ala Ala Ala Pro Pro Ala 1895 1900 1905 gct cgt gtg ccg gat acc ctg atg cag agc ctg gcc gtc aat tgg 5769 Ala Arg Val Pro Asp Thr Leu Met Gln Ser Leu Ala Val Asn Trp 1910 1915 1920 cgt taa 5775 Arg <210> 64 <211> 1924 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 64 Met Gln Gln Ser His Gln Ala Gly Tyr Ala Asn Ala Ala Asp Arg Glu 1 5 10 15 Ser Gly Ile Pro Ala Ala Val Leu Asp Gly Ile Lys Ala Val Ala Lys 20 25 30 Glu Lys Asn Ala Thr Leu Met Phe Arg Leu Val Asn Pro His Ser Thr 35 40 45 Ser Leu Ile Ala Glu Gly Val Ala Thr Lys Gly Leu Gly Val His Ala 50 55 60 Lys Ser Ser Asp Trp Gly Leu Gln Ala Gly Tyr Ile Pro Val Asn Pro 65 70 75 80 Asn Leu Ser Lys Leu Phe Gly Arg Ala Pro Glu Val Ile Ala Arg Ala 85 90 95 Asp Asn Asp Val Asn Ser Ser Leu Ala His Gly His Thr Ala Val Asp 100 105 110 Leu Thr Leu Ser Lys Glu Arg Leu Asp Tyr Leu Arg Gln Ala Gly Leu 115 120 125 Val Thr Gly Met Ala Asp Gly Val Val Ala Ser Asn His Ala Gly Tyr 130 135 140 Glu Gln Phe Glu Phe Arg Val Lys Glu Thr Ser Asp Gly Arg Tyr Ala 145 150 155 160 Val Gln Tyr Arg Arg Lys Gly Gly Asp Asp Phe Glu Ala Val Lys Val 165 170 175 Ile Gly Asn Ala Ala Gly Ile Pro Leu Thr Ala Asp Ile Asp Met Phe 180 185 190 Ala Ile Met Pro His Leu Ser Asn Phe Arg Asp Ser Ala Arg Ser Ser 195 200 205 Val Thr Ser Gly Asp Ser Val Thr Asp Tyr Leu Ala Arg Thr Arg Arg 210 215 220 Ala Ala Ser Glu Asp Glu Ile Asp Gly Pro Ala Gly Gln Ala Glu Pro 225 230 235 240 Asp Arg Ala His Tyr Asn Ile Val Thr Phe Cys Cys Lys Cys Asp Ser 245 250 255 Thr Leu Arg Leu Cys Val Gln Ser Thr His Val Asp Ile Arg Thr Leu 260 265 270 Glu Asp Leu Leu Met Gly Thr Leu Gly Ile Val Cys Pro Ile Cys Ser 275 280 285 Gln Lys Pro Ala Ser Gly Val Asn His Gln His Leu Pro Ala Arg Arg 290 295 300 Ala Glu Pro Gln Arg His Thr Met Leu Cys Met Cys Cys Lys Cys Glu 305 310 315 320 Ala Arg Ile Glu Leu Val Val Glu Ser Ser Ala Asp Asp Leu Arg Ala 325 330 335 Phe Gln Gln Leu Phe Leu Asn Thr Leu Ser Phe Val Cys Pro Trp Cys 340 345 350 Ala Ser Gln Gln Glu Asn Asp Glu Ala Asp Gly Val Ser His Ala Gln 355 360 365 Leu Pro Ala Arg Arg Ala Glu Pro Gln Arg His Lys Ile Leu Cys Val 370 375 380 Cys Cys Lys Cys Asp Gly Arg Ile Glu Leu Thr Val Glu Ser Ser Ala 385 390 395 400 Glu Asp Leu Arg Thr Leu Gln Gln Leu Phe Leu Ser Thr Leu Ser Phe 405 410 415 Val Cys Pro Trp Cys Ala Thr Asn Gln Met His Gly Asp Thr Pro Thr 420 425 430 Leu His Glu Tyr Met Leu Asp Leu Gln Pro Glu Thr Thr Asp Leu Tyr 435 440 445 Cys Tyr Glu Gln Leu Asn Asp Ser Ser Glu Glu Met His Gly Pro Lys 450 455 460 Ala Thr Leu Gln Asp Ile Val Leu His Leu Glu Pro Gln Asn Glu Ile 465 470 475 480 Pro Val Asp Leu Leu Cys His Glu Gln Leu Ser Asp Ser Glu Glu Glu 485 490 495 Asn Asp Glu Ile Asp Met His Gly Pro Arg Glu Thr Leu Gln Glu Ile 500 505 510 Val Leu His Leu Glu Pro Gln Asn Glu Leu Asp Pro Val Asp Leu Leu 515 520 525 Cys Tyr Glu Gln Leu Ser Glu Ser Glu Glu Glu Ser Gln Met Leu Thr 530 535 540 Arg Gly Gln Leu Lys Glu Tyr Ile Gly Gln Gln Arg Gly Glu Gly Tyr 545 550 555 560 Val Phe Tyr Glu Asn Arg Ala Tyr Gly Val Ala Gly Lys Ser Leu Phe 565 570 575 Asp Asp Gly Leu Gly Ala Ala Pro Gly Val Pro Ser Gly Arg Ser Lys 580 585 590 Phe Ser Pro Asp Val Leu Glu Thr Val Pro Ala Ser Pro Gly Leu Arg 595 600 605 Arg Pro Ser Leu Gly Ala Val Glu Arg Gln Asp Ser Gly Tyr Asp Ser 610 615 620 Leu Asp Gly Val Gly Ser Arg Ser Phe Ser Leu Gly Glu Val Ser Asp 625 630 635 640 Met Ala Ala Val Glu Ala Ala Glu Leu Glu Met Thr Arg Gln Val Leu 645 650 655 His Ala Gly Ala Arg Gln Asp Asp Ala Glu Pro Gly Val Ser Gly Ala 660 665 670 Ser Ala His Trp Gly Gln Arg Ala Leu Gln Gly Ala Gln Ala Val Ala 675 680 685 Ala Ala Gln Arg Leu Val His Ala Ile Ala Leu Met Thr Gln Phe Gly 690 695 700 Arg Ala Gly Ser Thr Asn Thr Pro Gln Glu Ala Ala Ser Leu Ser Ala 705 710 715 720 Ala Val Phe Gly Leu Gly Glu Ala Ser Ser Ala Val Ala Glu Thr Val 725 730 735 Ser Gly Phe Phe Arg Gly Ser Ser Arg Trp Ala Gly Gly Phe Gly Val 740 745 750 Ala Gly Gly Ala Met Ala Leu Gly Gly Gly Ile Ala Ala Ala Val Gly 755 760 765 Ala Gly Met Ser Leu Thr Asp Asp Ala Pro Ala Gly Gln Lys Ala Ala 770 775 780 Ala Gly Ala Glu Ile Ala Leu Gln Leu Thr Gly Gly Thr Val Glu Leu 785 790 795 800 Ala Ser Ser Ile Ala Leu Ala Leu Ala Ala Ala Arg Gly Val Thr Ser 805 810 815 Gly Leu Gln Val Ala Gly Ala Ser Ala Gly Ala Ala Ala Gly Ala Leu 820 825 830 Ala Ala Ala Leu Ser Pro Met Glu Ile Tyr Gly Leu Val Gln Gln Ser 835 840 845 His Tyr Ala Asp Gln Leu Asp Lys Leu Ala Gln Glu Ser Ser Ala Tyr 850 855 860 Gly Tyr Glu Gly Asp Ala Leu Leu Ala Gln Leu Tyr Arg Asp Lys Thr 865 870 875 880 Ala Ala Glu Gly Ala Val Ala Gly Val Ser Ala Val Leu Ser Thr Val 885 890 895 Gly Ala Ala Val Ser Ile Ala Ala Ala Ala Ser Val Val Gly Ala Pro 900 905 910 Val Ala Val Val Thr Ser Leu Leu Thr Gly Ala Leu Asn Gly Ile Leu 915 920 925 Arg Gly Val Gln Gln Pro Ile Ile Glu Lys Leu Ala Asn Asp Tyr Ala 930 935 940 Arg Lys Ile Asp Glu Leu Gly Gly Pro Gln Ala Tyr Phe Glu Lys Asn 945 950 955 960 Leu Gln Ala Arg His Glu Gln Leu Ala Asn Ser Asp Gly Leu Arg Lys 965 970 975 Met Leu Ala Asp Leu Gln Ala Gly Trp Asn Ala Ser Ser Val Ile Gly 980 985 990 Val Gln Thr Thr Glu Ile Ser Lys Ser Ala Leu Glu Leu Ala Ala Ile 995 1000 1005 Thr Gly Asn Ala Asp Asn Leu Lys Ser Val Asp Val Phe Val Asp 1010 1015 1020 Arg Phe Val Gln Gly Glu Arg Val Ala Gly Gln Pro Val Val Leu 1025 1030 1035 Asp Val Ala Ala Gly Gly Ile Asp Ile Ala Ser Arg Lys Gly Glu 1040 1045 1050 Arg Pro Ala Leu Thr Phe Ile Thr Pro Leu Ala Ala Pro Gly Glu 1055 1060 1065 Glu Gln Arg Arg Arg Thr Lys Thr Gly Lys Ser Glu Phe Thr Thr 1070 1075 1080 Phe Val Glu Ile Val Gly Lys Gln Asp Arg Trp Arg Ile Arg Asp 1085 1090 1095 Gly Ala Ala Asp Thr Thr Ile Asp Leu Ala Lys Val Val Ser Gln 1100 1105 1110 Leu Val Asp Ala Asn Gly Val Leu Lys His Ser Ile Lys Leu Asp 1115 1120 1125 Val Ile Gly Gly Asp Gly Asp Asp Val Val Leu Ala Asn Ala Ser 1130 1135 1140 Arg Ile His Tyr Asp Gly Gly Ala Gly Thr Asn Thr Val Ser Tyr 1145 1150 1155 Ala Ala Leu Gly Arg Gln Asp Ser Ile Thr Val Ser Ala Asp Gly 1160 1165 1170 Glu Arg Phe Asn Val Arg Lys Gln Leu Asn Asn Ala Asn Val Tyr 1175 1180 1185 Arg Glu Gly Val Ala Thr Gln Thr Thr Ala Tyr Gly Lys Arg Thr 1190 1195 1200 Glu Asn Val Gln Tyr Arg His Val Glu Leu Ala Arg Val Gly Gln 1205 1210 1215 Leu Val Glu Val Asp Thr Leu Glu His Val Gln His Ile Ile Gly 1220 1225 1230 Gly Ala Gly Asn Asp Ser Ile Thr Gly Asn Ala His Asp Asn Phe 1235 1240 1245 Leu Ala Gly Gly Ser Gly Asp Asp Arg Leu Asp Gly Gly Ala Gly 1250 1255 1260 Asn Asp Thr Leu Val Gly Gly Glu Gly Gln Asn Thr Val Ile Gly 1265 1270 1275 Gly Ala Gly Asp Asp Val Phe Leu Gln Asp Leu Gly Val Trp Ser 1280 1285 1290 Asn Gln Leu Asp Gly Gly Ala Gly Val Asp Thr Val Lys Tyr Asn 1295 1300 1305 Val His Gln Pro Ser Glu Glu Arg Leu Glu Arg Met Gly Asp Thr 1310 1315 1320 Gly Ile His Ala Asp Leu Gln Lys Gly Thr Val Glu Lys Trp Pro 1325 1330 1335 Ala Leu Asn Leu Phe Ser Val Asp His Val Lys Asn Ile Glu Asn 1340 1345 1350 Leu His Gly Ser Arg Leu Asn Asp Arg Ile Ala Gly Asp Asp Gln 1355 1360 1365 Asp Asn Glu Leu Trp Gly His Asp Gly Asn Asp Thr Ile Arg Gly 1370 1375 1380 Arg Gly Gly Asp Asp Ile Leu Arg Gly Gly Leu Gly Leu Asp Thr 1385 1390 1395 Leu Tyr Gly Glu Asp Gly Asn Asp Ile Phe Leu Gln Asp Asp Glu 1400 1405 1410 Thr Val Ser Asp Asp Ile Asp Gly Gly Ala Gly Leu Asp Thr Val 1415 1420 1425 Asp Tyr Ser Ala Met Ile His Pro Gly Arg Ile Val Ala Pro His 1430 1435 1440 Glu Tyr Gly Phe Gly Ile Glu Ala Asp Leu Ser Arg Glu Trp Val 1445 1450 1455 Arg Lys Ala Ser Ala Leu Gly Val Asp Tyr Tyr Asp Asn Val Arg 1460 1465 1470 Asn Val Glu Asn Val Ile Gly Thr Ser Met Lys Asp Val Leu Ile 1475 1480 1485 Gly Asp Ala Gln Ala Asn Thr Leu Met Gly Gln Gly Gly Asp Asp 1490 1495 1500 Thr Val Arg Gly Gly Asp Gly Asp Asp Leu Leu Phe Gly Gly Asp 1505 1510 1515 Gly Asn Asp Met Leu Tyr Gly Asp Ala Gly Asn Asp Thr Leu Tyr 1520 1525 1530 Gly Gly Leu Gly Asp Asp Thr Leu Glu Gly Gly Ala Gly Asn Asp 1535 1540 1545 Trp Phe Gly Gln Thr Gln Ala Arg Glu His Asp Val Leu Arg Gly 1550 1555 1560 Gly Asp Gly Val Asp Thr Val Asp Tyr Ser Gln Thr Gly Ala His 1565 1570 1575 Ala Gly Ile Ala Ala Gly Arg Ile Gly Leu Gly Ile Leu Ala Asp 1580 1585 1590 Leu Gly Ala Gly Arg Val Asp Lys Leu Gly Glu Ala Gly Ser Ser 1595 1600 1605 Ala Tyr Asp Thr Val Ser Gly Ile Glu Asn Val Val Gly Thr Glu 1610 1615 1620 Leu Ala Asp Arg Ile Thr Gly Asp Ala Gln Ala Asn Val Leu Arg 1625 1630 1635 Gly Ala Gly Gly Ala Asp Val Leu Ala Gly Gly Glu Gly Asp Asp 1640 1645 1650 Val Leu Leu Gly Gly Asp Gly Asp Asp Gln Leu Ser Gly Asp Ala 1655 1660 1665 Gly Arg Asp Arg Leu Tyr Gly Glu Ala Gly Asp Asp Trp Phe Phe 1670 1675 1680 Gln Asp Ala Ala Asn Ala Gly Asn Leu Leu Asp Gly Gly Asp Gly 1685 1690 1695 Arg Asp Thr Val Asp Phe Ser Gly Pro Gly Arg Gly Leu Asp Ala 1700 1705 1710 Gly Ala Lys Gly Val Phe Leu Ser Leu Gly Lys Gly Phe Ala Ser 1715 1720 1725 Leu Met Asp Glu Pro Glu Thr Ser Asn Val Leu Arg Asn Ile Glu 1730 1735 1740 Asn Ala Val Gly Ser Ala Arg Asp Asp Val Leu Ile Gly Asp Ala 1745 1750 1755 Gly Ala Asn Val Leu Asn Gly Leu Ala Gly Asn Asp Val Leu Ser 1760 1765 1770 Gly Gly Ala Gly Asp Asp Val Leu Leu Gly Asp Glu Gly Ser Asp 1775 1780 1785 Leu Leu Ser Gly Asp Ala Gly Asn Asp Asp Leu Phe Gly Gly Gln 1790 1795 1800 Gly Asp Asp Thr Tyr Leu Phe Gly Val Gly Tyr Gly His Asp Thr 1805 1810 1815 Ile Tyr Glu Ser Gly Gly Gly His Asp Thr Ile Arg Ile Asn Ala 1820 1825 1830 Gly Ala Asp Gln Leu Trp Phe Ala Arg Gln Gly Asn Asp Leu Glu 1835 1840 1845 Ile Arg Ile Leu Gly Thr Asp Asp Ala Leu Thr Val His Asp Trp 1850 1855 1860 Tyr Arg Asp Ala Asp His Arg Val Glu Ile Ile His Ala Ala Asn 1865 1870 1875 Gln Ala Val Asp Gln Ala Gly Ile Glu Lys Leu Val Glu Ala Met 1880 1885 1890 Ala Gln Tyr Pro Asp Pro Gly Ala Ala Ala Ala Ala Pro Pro Ala 1895 1900 1905 Ala Arg Val Pro Asp Thr Leu Met Gln Ser Leu Ala Val Asn Trp 1910 1915 1920 Arg <210> 65 <211> 12105 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Plasmid comprising SEQ ID NO:63 <400> 65 atcgagatct gtatggctgt gcaggtcgta aatcactgca taattcgtgt cgctcaaggc 60 gcactcccgt tctggataat gttttttgcg ccgacatcat aacggttctg gcaaatattc 120 tgaaatgagc tgttgacaat taatcatcgg ctcgtataat gtgtggaatt gtgagcggat 180 aacaattata attttgttta actttaagaa ggagatatac atatgcagca gtcccatcag 240 gccggttacg caaacgcagc cgatcgtgaa tctggtatcc cggcagcggt tctggatggt 300 attaaggcag ttgccaaaga gaagaacgct accctgatgt tccgtctggt caacccacac 360 tctacttccc tgatcgcgga aggtgtggcg accaaaggcc tgggtgtgca cgccaaaagc 420 agcgactggg gtctgcaggc aggttatatt ccggtgaacc cgaatctgtc taaactgttc 480 ggtcgtgccc cggaggtgat cgcacgtgca gacaacgatg tcaactcttc tctggcgcat 540 ggtcacaccg cggttgatct gaccctgtcc aaagaacgcc tggattacct gcgtcaggcg 600 ggcctggtga cgggcatggc cgacggtgtt gtagcgagca accacgcggg ttatgaacaa 660 tttgagtttc gcgttaaaga gacctctgac ggtcgttacg cggtgcagta ccgccgcaaa 720 ggtggcgatg actttgaagc tgtcaaagtg atcggtaacg ctgctggaat tccgctgacc 780 gcggatatcg acatgtttgc catcatgcct cacctgtcca actttcgcga ttccgcacgc 840 agctctgtga cgtctggtga ttccgtcact gactacctgg ctcgtacccg tcgtgcggcc 900 tctgaagacg aaatcgacgg ccctgcgggc caggctgaac cagatcgtgc tcactacaac 960 atcgtaactt tttgctgtaa gtgcgatagc actctgcgtc tgtgcgtaca gtctactcac 1020 gttgatatcc gcactctgga agatctgctg atgggtaccc tgggtatcgt ctgcccaatc 1080 tgctctcaaa agcctgcttc tggtgttaac catcagcacc tgccggctcg tcgcgctgaa 1140 ccacagcgtc acacgatgct gtgcatgtgt tgcaaatgcg aggctcgcat cgaactggtt 1200 gttgaatcca gcgctgacga cctgcgtgcg tttcagcaac tgttcctgaa cacgctgtct 1260 tttgtttgtc cgtggtgtgc ctcccagcag gagaacgatg aagcggatgg cgtgtcccac 1320 gcgcagctgc cggcacgtcg tgcagaaccg cagcgccaca agattctgtg cgtttgctgt 1380 aaatgtgatg gccgtatcga actgactgtg gaatcctccg cggaagatct gcgtacgctg 1440 cagcagctgt tcctgtctac cctgtctttc gtgtgcccgt ggtgcgccac caatcaaatg 1500 cacggcgaca ccccgaccct gcacgaatac atgctggacc tgcagccgga aaccacggat 1560 ctgtattgtt atgaacagct gaacgatagc agcgaggaaa tgcacggtcc gaaagcaact 1620 ctgcaggaca ttgtgctgca tctggagcca cagaacgaaa tcccggttga tctgctgtgc 1680 cacgagcaac tgagcgattc cgaagaggaa aacgacgaaa ttgatatgca tggtccgcgc 1740 gagaccctgc aagaaatcgt cctgcacctg gaaccgcaaa acgaactgga ccctgtagac 1800 ctgctgtgct acgaacagct gtccgaatct gaagaagaat cccagatgct gactcgtggc 1860 cagctgaaag aatacatcgg ccaacagcgt ggcgaaggct acgttttcta cgagaatcgt 1920 gcttacggcg ttgcgggcaa atccctgttc gacgatggtc tgggcgctgc accgggcgtt 1980 ccgagcggcc gttctaaatt cagcccggac gtactggaaa ctgtgccggc ttccccgggc 2040 ctgcgccgtc cgtccctggg cgcagtcgaa cgtcaggact ccggctacga ttccctggat 2100 ggcgttggct cccgctcctt ctccctgggc gaggtttctg acatggctgc ggtggaagcg 2160 gcagagctgg aaatgacccg tcaagtgctg cacgcgggcg cacgtcagga cgatgctgag 2220 ccgggcgtgt ccggtgcgtc tgcacactgg ggtcaacgtg ccctgcaggg tgctcaagct 2280 gtcgcggcag cgcagcgtct ggtacatgcg atcgcactga tgacccagtt cggtcgcgca 2340 ggttctacca acactcctca ggaagcagct agcctgtctg ctgctgtttt cggtctgggc 2400 gaagcgtctt ctgcggttgc agaaaccgtg agcggtttct tccgtggttc tagccgctgg 2460 gcgggtggtt ttggtgtagc aggtggcgct atggccctgg gtggcggtat cgcggctgct 2520 gtcggcgcag gtatgagcct gaccgacgat gctcctgcgg gccagaaagc cgcagctggc 2580 gctgaaatcg cgctgcagct gactggtggt accgttgaac tggctagctc tatcgcgctg 2640 gctctggcag cggcacgtgg cgtgacttct ggcctgcaag tcgccggtgc ctctgcgggc 2700 gctgctgcgg gcgctctggc agctgcactg tcccccatgg aaatctacgg tctggtacag 2760 cagtctcact acgcagacca gctggataaa ctggcgcagg agtcttctgc atacggttac 2820 gaaggcgacg cactgctggc gcagctgtat cgtgacaaaa ctgctgctga aggtgctgtg 2880 gcaggcgttt ctgcggtact gtctaccgtt ggcgctgcgg tttctattgc ggctgccgca 2940 tccgttgtag gtgcgccggt tgctgtagtt acctctctgc tgactggtgc actgaacggt 3000 atcctgcgtg gtgttcagca gcctattatc gaaaaactgg cgaatgatta tgcccgtaaa 3060 atcgacgaac tgggcggtcc gcaggcttat tttgaaaaaa acctgcaggc gcgccacgaa 3120 cagctggcaa acagcgacgg cctgcgcaaa atgctggcag acctgcaagc tggttggaac 3180 gcgtcttctg tgatcggcgt gcagaccacc gaaattagca aatctgcgct ggaactggct 3240 gcaattactg gcaacgcgga taacctgaaa agcgttgatg tttttgtcga tcgcttcgtt 3300 cagggcgagc gcgttgctgg tcagccggtt gttctggacg ttgcggcagg cggcatcgac 3360 atcgctagcc gcaagggcga gcgtccggct ctgactttca ttaccccgct ggcagctccg 3420 ggtgaagaac agcgtcgccg taccaagact ggtaaaagcg agttcaccac cttcgtggaa 3480 atcgtaggta aacaggaccg ctggcgtatt cgcgacggtg cggcggacac caccatcgac 3540 ctggcaaaag ttgtttccca actggtagat gctaacggcg tgctgaaaca ttctattaaa 3600 ctggatgtaa tcggcggtga cggcgatgac gttgtactgg cgaacgcgtc tcgtatccac 3660 tatgacggcg gcgcaggtac caacacggtt tcctacgcag cgctgggccg ccaggattcc 3720 atcactgtta gcgccgatgg cgaacgtttc aacgtgcgta aacagctgaa taacgcaaac 3780 gtctatcgtg agggtgtagc tacccagacc accgcgtacg gtaagcgtac cgaaaacgtt 3840 cagtatcgtc acgtggaact ggcacgtgtg ggtcagctgg tagaggtgga tacgctggaa 3900 cacgtgcagc acatcatcgg tggcgccggt aacgattcca ttactggtaa cgctcacgac 3960 aacttcctgg caggtggttc tggtgatgat cgtctggacg gtggtgcggg taacgatacg 4020 ctggtaggcg gcgaaggtca gaacaccgta attggtggtg ccggtgacga cgttttcctg 4080 caggatctgg gcgtttggag caaccagctg gatggcggtg ccggtgttga cacggttaag 4140 tataacgttc accagccgtc tgaagagcgc ctggaacgta tgggtgacac tggtattcat 4200 gccgatctgc agaaaggcac tgttgaaaaa tggcctgcgc tgaacctgtt ctctgtggac 4260 catgttaaga acattgaaaa cctgcatggc tctcgcctga acgaccgtat cgctggtgac 4320 gaccaggata acgaactgtg gggtcatgac ggcaatgata ccattcgcgg tcgtggcggc 4380 gacgatattc tgcgtggcgg tctgggcctg gataccctgt atggtgaaga tggtaacgat 4440 attttcctgc aagacgatga aacggtatct gatgacatcg acggtggtgc aggcctggac 4500 accgtagatt acagcgctat gatccatccg ggtcgtatcg tagctccgca cgagtacggc 4560 ttcggtatcg aggcggacct gtctcgtgaa tgggttcgta aagcgtccgc gctgggtgtg 4620 gactactacg ataacgttcg taacgtggaa aacgtgatcg gtacctccat gaaagacgtg 4680 ctgattggcg acgcacaggc caacactctg atgggccagg gcggtgatga cacggttcgc 4740 ggcggcgacg gtgatgacct gctgttcggt ggtgacggca acgacatgct gtacggcgac 4800 gcgggcaacg acaccctgta cggcggtctg ggtgacgaca ctctggaagg tggtgcaggt 4860 aacgactggt tcggccaaac ccaggcacgc gaacacgacg tgctgcgtgg tggcgacggc 4920 gtagacaccg tggattactc ccaaactggc gctcacgcgg gtatcgcggc cggtcgtatc 4980 ggtctgggca ttctggccga tctgggtgcc ggccgtgtcg acaaactggg tgaggctggc 5040 tctagcgcct atgatactgt ttccggcatc gaaaacgtgg taggcactga actggcagat 5100 cgtatcacgg gtgacgcgca agcgaacgtt ctgcgtggtg ctggcggtgc agacgtgctg 5160 gcgggtggtg aaggcgacga cgtactgctg ggcggtgacg gtgacgatca gctgagcggt 5220 gatgcgggtc gtgaccgtct gtacggtgaa gcaggtgacg attggttctt ccaggacgct 5280 gctaacgctg gcaacctgct ggacggcggc gatggccgtg acactgttga cttcagcggt 5340 ccgggtcgcg gtctggacgc aggcgcgaaa ggcgttttcc tgagcctggg taagggtttc 5400 gcatctctga tggacgaacc agaaaccagc aatgtcctgc gtaacatcga aaacgctgtc 5460 ggttccgcac gcgatgatgt tctgattggc gatgctggtg ccaatgttct gaacggtctg 5520 gcgggtaatg atgtactgtc tggtggcgct ggtgatgatg tcctgctggg tgatgagggc 5580 agcgatctgc tgtccggcga tgccggcaac gacgatctgt tcggtggcca aggtgatgat 5640 acttacctgt tcggcgttgg ctatggtcat gacaccatct atgagtctgg tggcggccac 5700 gatacgattc gtattaatgc aggtgctgac caactgtggt ttgcacgtca gggtaacgat 5760 ctggaaattc gcatcctggg tactgatgac gctctgaccg tacacgactg gtaccgcgat 5820 gcggatcacc gcgtagaaat catccatgcg gctaaccaag ctgtagacca ggctggtatt 5880 gaaaaactgg tagaagcgat ggcacagtat ccggacccag gtgcggctgc tgcagcacct 5940 ccagcggctc gtgtgccgga taccctgatg cagagcctgg ccgtcaattg gcgttaatgg 6000 atccaggcct ctttagaagg agatatacca tgctgccgtc tgcacaggcg ccgtctctgc 6060 tgaatccaac tgatgacttc gctgcgctgg gtaacatcgc gtggctgtgg atgaacagcc 6120 cgatgcaccg tgactggccg gttcacctgc tggcacgtaa cacgctggcg ccgatccagc 6180 tgggtcaata catcctgctg cgttgtaacg acgtgcctgt ggcgtattgc tcctgggcac 6240 tgatggatgc ggataccgag ctgtcctacg ttatggcccc atctagcctg ggcggtaacg 6300 cttggaactg cggcgatcgt ctgtggatca ttgattggat tgctccgttt agccgtgacg 6360 acaaccgtgc tctgcgtcgc gcgctggccg aacgtcatcc ggattctgtt ggccgttccc 6420 tgcgcgtacg tcgcggtggc gacaccgctc gcgtcaaaga ataccgtggt cgtgctctgg 6480 acgcagcggc ggcccgcgct cagctggacc gctaccacgc agaactgatt gccggtctgc 6540 gtgcatccaa tggcggttat gctccgcgtg gccgtggcac cgcataatct agaattcttt 6600 aattaaagat ccggctgcta acaaagcccg aaaggaagct gagttggctg ctgccaccgc 6660 tgagcaatcc aggcatcaaa taaaacgaaa ggctcagtcg aaagactggg cctttcgttt 6720 tatctgttgt ttgtcggtga acgctctcct gagtaggaca aatccgccgg gagcggattt 6780 gaacgttgcg aagcaacggc ccggagggtg gcgggcagga cgcccgccat aaactgccag 6840 gcatcaaatt aagcagaagg ccatcctgac ggatggcctt tttgctagca gcacgccata 6900 gtgactggcg atgctgtcgg aatggacgat atcccgcaag aggcccggca gtaccggcat 6960 aaccaagcct atgcctacag catccagggt gacggtgccg aggatgacga tgagcgcatt 7020 gttagatttc atacacggtg cctgactgcg ttagcaattt aactgtgata aactaccgca 7080 ttaaagctta tcgatgataa gctgtcaaac atgagaattc ttagaaaaac tcatcgagca 7140 tcaaatgaaa ctgcaattta ttcatatcag gattatcaat accatatttt tgaaaaagcc 7200 gtttctgtaa tgaaggagaa aactcaccga ggcagttcca taggatggca agatcctggt 7260 atcggtctgc gattccgact cgtccaacat caatacaacc tattaatttc ccctcgtcaa 7320 aaataaggtt atcaagtgag aaatcaccat gagtgacgac tgaatccggt gagaatggca 7380 aaagcttatg catttctttc cagacttgtt caacaggcca gccattacgc tcgtcatcaa 7440 aatcactcgc atcaaccaaa ccgttattca ttcgtgattg cgcctgagcg agacgaaata 7500 cgcgatcgct gttaaaagga caattacaaa caggaatcga atgcaaccgg cgcaggaaca 7560 ctgccagcgc atcaacaata ttttcacctg aatcaggata ttcttctaat acctggaatg 7620 ctgttttccc ggggatcgca gtggtgagta accatgcatc atcaggagta cggataaaat 7680 gcttgatggt cggaagaggc ataaattccg tcagccagtt tagtctgacc atctcatctg 7740 taacatcatt ggcaacgcta cctttgccat gtttcagaaa caactctggc gcatcgggct 7800 tcccatacaa tcgatagatt gtcgcacctg attgcccgac attatcgcga gcccatttat 7860 acccatataa atcagcatcc atgttggaat ttaatcgcgg cctcgagcaa gacgtttccc 7920 gttgaatatg gctcataaca ccccttgtat tactgtttat gtaagcagac agttttattg 7980 ttcatgacca aaatccctta acgtgagttt tcgttccact gagcgtcaga ccccgtagaa 8040 aagatcaaag gatcttcttg agatcctttt tttctgcgcg taatctgctg cttgcaaaca 8100 aaaaaaccac cgctaccagc ggtggtttgt ttgccggatc aagagctacc aactcttttt 8160 ccgaaggtaa ctggcttcag cagagcgcag ataccaaata ctgtccttct agtgtagccg 8220 tagttaggcc accacttcaa gaactctgta gcaccgccta catacctcgc tctgctaatc 8280 ctgttaccag tggctgctgc cagtggcgat aagtcgtgtc ttaccgggtt ggactcaaga 8340 cgatagttac cggataaggc gcagcggtcg ggctgaacgg ggggttcgtg cacacagccc 8400 agcttggagc gaacgaccta caccgaactg agatacctac agcgtgagct atgagaaagc 8460 gccacgcttc ccgaagggag aaaggcggac aggtatccgg taagcggcag ggtcggaaca 8520 ggagagcgca cgagggagct tccaggggga aacgcctggt atctttatag tcctgtcggg 8580 tttcgccacc tctgacttga gcgtcgattt ttgtgatgct cgtcaggggg gcggagccta 8640 tggaaaaacg ccagcaacgc ggccttttta cggttcctgg ccttttgctg gccttttgct 8700 cacatgttct ttcctgcgtt atcccctgat tctgtggata accgtattac cgcctttgag 8760 tgagctgata ccgctcgccg cagccgaacg accgagcgca gcgagtcagt gagcgaggaa 8820 gcggaagagc gcctgatgcg gtattttctc cttacgcatc tgtgcggtat ttcacaccgc 8880 aatggtgcac tctcagtaca atctgctctg atgccgcata gttaagccag tatacactcc 8940 gctatcgcta cgtgactggg tcatggctgc gccccgacac ccgccaacac ccgctgacgc 9000 gccctgacgg gcttgtctgc tcccggcatc cgcttacaga caagctgtga ccgtctccgg 9060 gagctgcatg tgtcagaggt tttcaccgtc atcaccgaaa cgcgcgaggc agctgcggta 9120 aagctcatca gcgtggtcgt gaagcgattc acagatgtct gcctgttcat ccgcgtccag 9180 ctcgttgagt ttctccagaa gcgttaatgt ctggcttctg ataaagcggg ccatgttaag 9240 ggcggttttt tcctgtttgg tcactgatgc ctccgtgtaa gggggatttc tgttcatggg 9300 ggtaatgata ccgatgaaac gagagaggat gctcacgata cgggttactg atgatgaaca 9360 tgcccggtta ctggaacgtt gtgagggtaa acaactggcg gtatggatgc ggcgggacca 9420 gagaaaaatc actcagggtc aatgccagcg cttcgttaat acagatgtag gtgttccaca 9480 gggtagccag cagcatcctg cgatgcagat ccggaacata atggtgcagg gcgctgactt 9540 ccgcgtttcc agactttacg aaacacggaa accgaagacc attcatgttg ttgctcaggt 9600 cgcagacgtt ttgcagcagc agtcgcttca cgttcgctcg cgtatcggtg attcattctg 9660 ctaaccagta aggcaacccc gccagcctag ccgggtcctc aacgacagga gcacgatcat 9720 gcgcacccgt ggccaggacc caacgctgcc cgagatgcgc cgcgtgcggc tgctggagat 9780 ggcggacgcg atggatatgt tctgccaagg gttggtttgc gcattcacag ttctccgcaa 9840 gaattgattg gctccaattc ttggagtggt gaatccgtta gcgaggtgcc gccggcttcc 9900 attcaggtcg aggtggcccg gctccatgca ccgcgacgca acgcggggag gcagacaagg 9960 tatagggcgg cgcctacaat ccatgccaac ccgttccatg tgctcgccga ggcggcataa 10020 atcgccgtga cgatcagcgg tccaatgatc gaagttaggc tggtaagagc cgcgagcgat 10080 ccttgaagct gtccctgatg gtcgtcatct acctgcctgg acagcatggc ctgcaacgcg 10140 ggcatcccga tgccgccgga agcgagaaga atcataatgg ggaaggccat ccagcctcgc 10200 gtcgcgaacg ccagcaagac gtagcccagc gcgtcggccg ccatgccggc gataatggcc 10260 tgcttctcgc cgaaacgttt ggtggcggga ccagtgacga aggcttgagc gagggcgtgc 10320 aagattccga ataccgcaag cgacaggccg atcatcgtcg cgctccagcg aaagcggtcc 10380 tcgccgaaaa tgacccagag cgctgccggc acctgtccta cgagttgcat gataaagaag 10440 acagtcataa gtgcggcgac gatagtcatg ccccgcgccc accggaagga gctgactggg 10500 ttgaaggctc tcaagggcat cggtcgactc atagctgttt cctgtgtgaa attgttatcc 10560 gctcacaatt ccacacaaca tacgagccgg aagcataaag tgtaaagcct ggggtgccta 10620 atgagtgagc taacttacat taattgcgtt gcgctcactg cccgctttcc agtcgggaaa 10680 cctgtcgtgc cagctgcatt aatgaatcgg ccaacgcgcg gggagaggcg gtttgcgtat 10740 tgggcgctag cgtggttttt cttttcacca gtgagacggg caacagctga ttgcccttca 10800 ccgcctggcc ctgagagagt tgcagcaagc ggtccacgct ggtttgcccc agcaggcgaa 10860 aatcctgttt gatggtggtt aacggcggga tataacatga gctgtcttcg gtatcgtcgt 10920 atcccactac cgagatatcc gcaccaacgc gcagcccgga ctcggtaatg gcgcgcattg 10980 cgcccagcgc catctgatcg ttggcaacca gcatcgcagt gggaacgatg ccctcattca 11040 gcatttgcat ggtttgttga aaaccggaca tggcactcca gtcgccttcc cgttccgcta 11100 tcggctgaat ttgattgcga gtgagatatt tatgccagcc agccagacgc agacgcgccg 11160 agacagaact taatgggccc gctaacagcg cgatttgctg gtgacccaat gcgaccagat 11220 gctccacgcc cagtcgcgta ccgtcttcat gggagaaaat aatactgttg atgggtgtct 11280 ggtcagagac atcaagaaat aacgccggaa cattagtgca ggcagcttcc acagcaatgg 11340 catcctggtc atccagcgga tagttaatga tcagcccact gacgcgttgc gcgagaagat 11400 tgtgcaccgc cgctttacag gcttcgacgc cgcttcgttc taccatcgac accaccacgc 11460 tggcacccag ttgatcggcg cgagatttaa tcgccgcgac aatttgcgac ggcgcgtgca 11520 gggccagact ggaggtggca acgccaatca gcaacgactg tttgcccgcc agttgttgtg 11580 ccacgcggtt gggaatgtaa ttcagctccg ccatcgccgc ttccactttt tcccgcgttt 11640 tcgcagaaac gtggctggcc tggttcacca cgcgggaaac ggtctgataa gagacaccgg 11700 catactctgc gacatcgtat aacgttactg gtttcacatt caccaccctg aattgactct 11760 cttccgggcg ctatcatgcc ataccgcgaa aggttttgcg ccattcgatg gtgtcggaat 11820 ttatgcggtg tgaaataccg cacagatgcg taaggagaaa ataccgcatc aggcgctctt 11880 ccgcttcctc gctcactgac tcgctgccac cccgtggcat gcaaggagat ggcgcccaac 11940 agtcccccgg ccacggggcc tgccaccata cccacgccga aacaagcgct catgagcccg 12000 aagtggcgag cccgatcttc cccatcggtg atgtcggcga tataggcgcc agcaaccgca 12060 cctgtggcgc cggtgatgcc ggccacgatg cgtccggcgt agagg 12105 <210> 66 <211> 5445 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleotide encoding chimeric CyaA delta 203+ antigen HPV16, HVP18 and HPV45 full <220> <221> CDS <222> (1)..(5445) <400> 66 atg cag cag tcc cat cag gcc ggt tac gca aac gca gcc gat cgt gaa 48 Met Gln Gln Ser His Gln Ala Gly Tyr Ala Asn Ala Ala Asp Arg Glu 1 5 10 15 tct ggt atc ccg gca gcg gtt ctg gat ggt att aag gca gtt gcc aaa 96 Ser Gly Ile Pro Ala Ala Val Leu Asp Gly Ile Lys Ala Val Ala Lys 20 25 30 gag aag aac gct acc ctg atg ttc cgt ctg gtc aac cca cac tct act 144 Glu Lys Asn Ala Thr Leu Met Phe Arg Leu Val Asn Pro His Ser Thr 35 40 45 tcc ctg atc gcg gaa ggt gtg gcg acc aaa ggc ctg ggt gtg cac gcc 192 Ser Leu Ile Ala Glu Gly Val Ala Thr Lys Gly Leu Gly Val His Ala 50 55 60 aaa agc agc gac tgg ggt ctg cag gca ggt tat att ccg gtg aac ccg 240 Lys Ser Ser Asp Trp Gly Leu Gln Ala Gly Tyr Ile Pro Val Asn Pro 65 70 75 80 aat ctg tct aaa ctg ttc ggt cgt gcc ccg gag gtg atc gca cgt gca 288 Asn Leu Ser Lys Leu Phe Gly Arg Ala Pro Glu Val Ile Ala Arg Ala 85 90 95 gac aac gat gtc aac tct tct ctg gcg cat ggt cac acc gcg gtt gat 336 Asp Asn Asp Val Asn Ser Ser Leu Ala His Gly His Thr Ala Val Asp 100 105 110 ctg acc ctg tcc aaa gaa cgc ctg gat tac ctg cgt cag gcg ggc ctg 384 Leu Thr Leu Ser Lys Glu Arg Leu Asp Tyr Leu Arg Gln Ala Gly Leu 115 120 125 gtg acg ggc atg gcc gac ggt gtt gta gcg agc aac cac gcg ggt tat 432 Val Thr Gly Met Ala Asp Gly Val Val Ala Ser Asn His Ala Gly Tyr 130 135 140 gaa caa ttt gag ttt cgc gtt aaa gag acc tct gac ggt cgt tac gcg 480 Glu Gln Phe Glu Phe Arg Val Lys Glu Thr Ser Asp Gly Arg Tyr Ala 145 150 155 160 gtg cag tac cgc cgc aaa ggt ggc gat gac ttt gaa gct gtc aaa gtg 528 Val Gln Tyr Arg Arg Lys Gly Gly Asp Asp Phe Glu Ala Val Lys Val 165 170 175 atc ggt aac gct gct gga att gaa gac gaa atc gac ggc cct gcg ggc 576 Ile Gly Asn Ala Ala Gly Ile Glu Asp Glu Ile Asp Gly Pro Ala Gly 180 185 190 cag gct gaa cca gat cgt gct cac tac aac atc gta act ttt tgc tgt 624 Gln Ala Glu Pro Asp Arg Ala His Tyr Asn Ile Val Thr Phe Cys Cys 195 200 205 aag tgc gat agc act ctg cgt ctg tgc gta cag tct act cac gtt gat 672 Lys Cys Asp Ser Thr Leu Arg Leu Cys Val Gln Ser Thr His Val Asp 210 215 220 atc cgc act ctg gaa gat ctg ctg atg ggt acc ctg ggt atc gtc tgc 720 Ile Arg Thr Leu Glu Asp Leu Leu Met Gly Thr Leu Gly Ile Val Cys 225 230 235 240 cca atc tgc tct caa aag cct gct tct ggt gtt aac cat cag cac ctg 768 Pro Ile Cys Ser Gln Lys Pro Ala Ser Gly Val Asn His Gln His Leu 245 250 255 ccg gct cgt cgc gct gaa cca cag cgt cac acg atg ctg tgc atg tgt 816 Pro Ala Arg Arg Ala Glu Pro Gln Arg His Thr Met Leu Cys Met Cys 260 265 270 tgc aaa tgc gag gct cgc atc gaa ctg gtt gtt gaa tcc agc gct gac 864 Cys Lys Cys Glu Ala Arg Ile Glu Leu Val Val Glu Ser Ser Ala Asp 275 280 285 gac ctg cgt gcg ttt cag caa ctg ttc ctg aac acg ctg tct ttt gtt 912 Asp Leu Arg Ala Phe Gln Gln Leu Phe Leu Asn Thr Leu Ser Phe Val 290 295 300 tgt ccg tgg tgt gcc tcc cag cag gag aac gat gaa gcg gat ggc gtg 960 Cys Pro Trp Cys Ala Ser Gln Gln Glu Asn Asp Glu Ala Asp Gly Val 305 310 315 320 tcc cac gcg cag ctg ccg gca cgt cgt gca gaa ccg cag cgc cac aag 1008 Ser His Ala Gln Leu Pro Ala Arg Arg Ala Glu Pro Gln Arg His Lys 325 330 335 att ctg tgc gtt tgc tgt aaa tgt gat ggc cgt atc gaa ctg act gtg 1056 Ile Leu Cys Val Cys Cys Lys Cys Asp Gly Arg Ile Glu Leu Thr Val 340 345 350 gaa tcc tcc gcg gaa gat ctg cgt acg ctg cag cag ctg ttc ctg tct 1104 Glu Ser Ser Ala Glu Asp Leu Arg Thr Leu Gln Gln Leu Phe Leu Ser 355 360 365 acc ctg tct ttc gtg tgc ccg tgg tgc gcc acc aat caa atg cac ggc 1152 Thr Leu Ser Phe Val Cys Pro Trp Cys Ala Thr Asn Gln Met His Gly 370 375 380 gac acc ccg acc ctg cac gaa tac atg ctg gac ctg cag ccg gaa acc 1200 Asp Thr Pro Thr Leu His Glu Tyr Met Leu Asp Leu Gln Pro Glu Thr 385 390 395 400 acg gat ctg tat tgt tat gaa cag ctg aac gat agc agc gag gaa atg 1248 Thr Asp Leu Tyr Cys Tyr Glu Gln Leu Asn Asp Ser Ser Glu Glu Met 405 410 415 cac ggt ccg aaa gca act ctg cag gac att gtg ctg cat ctg gag cca 1296 His Gly Pro Lys Ala Thr Leu Gln Asp Ile Val Leu His Leu Glu Pro 420 425 430 cag aac gaa atc ccg gtt gat ctg ctg tgc cac gag caa ctg agc gat 1344 Gln Asn Glu Ile Pro Val Asp Leu Leu Cys His Glu Gln Leu Ser Asp 435 440 445 tcc gaa gag gaa aac gac gaa att gat atg cat ggt ccg cgc gag acc 1392 Ser Glu Glu Glu Asn Asp Glu Ile Asp Met His Gly Pro Arg Glu Thr 450 455 460 ctg caa gaa atc gtc ctg cac ctg gaa ccg caa aac gaa ctg gac cct 1440 Leu Gln Glu Ile Val Leu His Leu Glu Pro Gln Asn Glu Leu Asp Pro 465 470 475 480 gta gac ctg ctg tgc tac gaa cag ctg tcc gaa tct gaa gaa ccg ggc 1488 Val Asp Leu Leu Cys Tyr Glu Gln Leu Ser Glu Ser Glu Glu Pro Gly 485 490 495 ctg cgc cgt ccg tcc ctg ggc gca gtc gaa cgt cag gac tcc ggc tac 1536 Leu Arg Arg Pro Ser Leu Gly Ala Val Glu Arg Gln Asp Ser Gly Tyr 500 505 510 gat tcc ctg gat ggc gtt ggc tcc cgc tcc ttc tcc ctg ggc gag gtt 1584 Asp Ser Leu Asp Gly Val Gly Ser Arg Ser Phe Ser Leu Gly Glu Val 515 520 525 tct gac atg gct gcg gtg gaa gcg gca gag ctg gaa atg acc cgt caa 1632 Ser Asp Met Ala Ala Val Glu Ala Ala Glu Leu Glu Met Thr Arg Gln 530 535 540 gtg ctg cac gcg ggc gca cgt cag gac gat gct gag ccg ggc gtg tcc 1680 Val Leu His Ala Gly Ala Arg Gln Asp Asp Ala Glu Pro Gly Val Ser 545 550 555 560 ggt gcg tct gca cac tgg ggt caa cgt gcc ctg cag ggt gct caa gct 1728 Gly Ala Ser Ala His Trp Gly Gln Arg Ala Leu Gln Gly Ala Gln Ala 565 570 575 gtc gcg gca gcg cag cgt ctg gta cat gcg atc gca ctg atg acc cag 1776 Val Ala Ala Ala Gln Arg Leu Val His Ala Ile Ala Leu Met Thr Gln 580 585 590 ttc ggt cgc gca ggt tct acc aac act cct cag gaa gca gct agc ctg 1824 Phe Gly Arg Ala Gly Ser Thr Asn Thr Pro Gln Glu Ala Ala Ser Leu 595 600 605 tct gct gct gtt ttc ggt ctg ggc gaa gcg tct tct gcg gtt gca gaa 1872 Ser Ala Ala Val Phe Gly Leu Gly Glu Ala Ser Ser Ala Val Ala Glu 610 615 620 acc gtg agc ggt ttc ttc cgt ggt tct agc cgc tgg gcg ggt ggt ttt 1920 Thr Val Ser Gly Phe Phe Arg Gly Ser Ser Arg Trp Ala Gly Gly Phe 625 630 635 640 ggt gta gca ggt ggc gct atg gcc ctg ggt ggc ggt atc gcg gct gct 1968 Gly Val Ala Gly Gly Ala Met Ala Leu Gly Gly Gly Ile Ala Ala Ala 645 650 655 gtc ggc gca ggt atg agc ctg acc gac gat gct cct gcg ggc cag aaa 2016 Val Gly Ala Gly Met Ser Leu Thr Asp Asp Ala Pro Ala Gly Gln Lys 660 665 670 gcc gca gct ggc gct gaa atc gcg ctg cag ctg act ggt ggt acc gtt 2064 Ala Ala Ala Gly Ala Glu Ile Ala Leu Gln Leu Thr Gly Gly Thr Val 675 680 685 gaa ctg gct agc tct atc gcg ctg gct ctg gca gcg gca cgt ggc gtg 2112 Glu Leu Ala Ser Ser Ile Ala Leu Ala Leu Ala Ala Ala Arg Gly Val 690 695 700 act tct ggc ctg caa gtc gcc ggt gcc tct gcg ggc gct gct gcg ggc 2160 Thr Ser Gly Leu Gln Val Ala Gly Ala Ser Ala Gly Ala Ala Ala Gly 705 710 715 720 gct ctg gca gct gca ctg tcc ccc atg gaa atc tac ggt ctg gta cag 2208 Ala Leu Ala Ala Ala Leu Ser Pro Met Glu Ile Tyr Gly Leu Val Gln 725 730 735 cag tct cac tac gca gac cag ctg gat aaa ctg gcg cag gag tct tct 2256 Gln Ser His Tyr Ala Asp Gln Leu Asp Lys Leu Ala Gln Glu Ser Ser 740 745 750 gca tac ggt tac gaa ggc gac gca ctg ctg gcg cag ctg tat cgt gac 2304 Ala Tyr Gly Tyr Glu Gly Asp Ala Leu Leu Ala Gln Leu Tyr Arg Asp 755 760 765 aaa act gct gct gaa ggt gct gtg gca ggc gtt tct gcg gta ctg tct 2352 Lys Thr Ala Ala Glu Gly Ala Val Ala Gly Val Ser Ala Val Leu Ser 770 775 780 acc gtt ggc gct gcg gtt tct att gcg gct gcc gca tcc gtt gta ggt 2400 Thr Val Gly Ala Ala Val Ser Ile Ala Ala Ala Ala Ser Val Val Gly 785 790 795 800 gcg ccg gtt gct gta gtt acc tct ctg ctg act ggt gca ctg aac ggt 2448 Ala Pro Val Ala Val Val Thr Ser Leu Leu Thr Gly Ala Leu Asn Gly 805 810 815 atc ctg cgt ggt gtt cag cag cct att atc gaa aaa ctg gcg aat gat 2496 Ile Leu Arg Gly Val Gln Gln Pro Ile Ile Glu Lys Leu Ala Asn Asp 820 825 830 tat gcc cgt aaa atc gac gaa ctg ggc ggt ccg cag gct tat ttt gaa 2544 Tyr Ala Arg Lys Ile Asp Glu Leu Gly Gly Pro Gln Ala Tyr Phe Glu 835 840 845 aaa aac ctg cag gcg cgc cac gaa cag ctg gca aac agc gac ggc ctg 2592 Lys Asn Leu Gln Ala Arg His Glu Gln Leu Ala Asn Ser Asp Gly Leu 850 855 860 cgc aaa atg ctg gca gac ctg caa gct ggt tgg aac gcg tct tct gtg 2640 Arg Lys Met Leu Ala Asp Leu Gln Ala Gly Trp Asn Ala Ser Ser Val 865 870 875 880 atc ggc gtg cag acc acc gaa att agc aaa tct gcg ctg gaa ctg gct 2688 Ile Gly Val Gln Thr Thr Glu Ile Ser Lys Ser Ala Leu Glu Leu Ala 885 890 895 gca att act ggc aac gcg gat aac ctg aaa agc gtt gat gtt ttt gtc 2736 Ala Ile Thr Gly Asn Ala Asp Asn Leu Lys Ser Val Asp Val Phe Val 900 905 910 gat cgc ttc gtt cag ggc gag cgc gtt gct ggt cag ccg gtt gtt ctg 2784 Asp Arg Phe Val Gln Gly Glu Arg Val Ala Gly Gln Pro Val Val Leu 915 920 925 gac gtt gcg gca ggc ggc atc gac atc gct agc cgc aag ggc gag cgt 2832 Asp Val Ala Ala Gly Gly Ile Asp Ile Ala Ser Arg Lys Gly Glu Arg 930 935 940 ccg gct ctg act ttc att acc ccg ctg gca gct ccg ggt gaa gaa cag 2880 Pro Ala Leu Thr Phe Ile Thr Pro Leu Ala Ala Pro Gly Glu Glu Gln 945 950 955 960 cgt cgc cgt acc aag act ggt aaa agc gag ttc acc acc ttc gtg gaa 2928 Arg Arg Arg Thr Lys Thr Gly Lys Ser Glu Phe Thr Thr Phe Val Glu 965 970 975 atc gta ggt aaa cag gac cgc tgg cgt att cgc gac ggt gcg gcg gac 2976 Ile Val Gly Lys Gln Asp Arg Trp Arg Ile Arg Asp Gly Ala Ala Asp 980 985 990 acc acc atc gac ctg gca aaa gtt gtt tcc caa ctg gta gat gct aac 3024 Thr Thr Ile Asp Leu Ala Lys Val Val Ser Gln Leu Val Asp Ala Asn 995 1000 1005 ggc gtg ctg aaa cat tct att aaa ctg gat gta atc ggc ggt gac 3069 Gly Val Leu Lys His Ser Ile Lys Leu Asp Val Ile Gly Gly Asp 1010 1015 1020 ggc gat gac gtt gta ctg gcg aac gcg tct cgt atc cac tat gac 3114 Gly Asp Asp Val Val Leu Ala Asn Ala Ser Arg Ile His Tyr Asp 1025 1030 1035 ggc ggc gca ggt acc aac acg gtt tcc tac gca gcg ctg ggc cgc 3159 Gly Gly Ala Gly Thr Asn Thr Val Ser Tyr Ala Ala Leu Gly Arg 1040 1045 1050 cag gat tcc atc act gtt agc gcc gat ggc gaa cgt ttc aac gtg 3204 Gln Asp Ser Ile Thr Val Ser Ala Asp Gly Glu Arg Phe Asn Val 1055 1060 1065 cgt aaa cag ctg aat aac gca aac gtc tat cgt gag ggt gta gct 3249 Arg Lys Gln Leu Asn Asn Ala Asn Val Tyr Arg Glu Gly Val Ala 1070 1075 1080 acc cag acc acc gcg tac ggt aag cgt acc gaa aac gtt cag tat 3294 Thr Gln Thr Thr Ala Tyr Gly Lys Arg Thr Glu Asn Val Gln Tyr 1085 1090 1095 cgt cac gtg gaa ctg gca cgt gtg ggt cag ctg gta gag gtg gat 3339 Arg His Val Glu Leu Ala Arg Val Gly Gln Leu Val Glu Val Asp 1100 1105 1110 acg ctg gaa cac gtg cag cac atc atc ggt ggc gcc ggt aac gat 3384 Thr Leu Glu His Val Gln His Ile Ile Gly Gly Ala Gly Asn Asp 1115 1120 1125 tcc att act ggt aac gct cac gac aac ttc ctg gca ggt ggt tct 3429 Ser Ile Thr Gly Asn Ala His Asp Asn Phe Leu Ala Gly Gly Ser 1130 1135 1140 ggt gat gat cgt ctg gac ggt ggt gcg ggt aac gat acg ctg gta 3474 Gly Asp Asp Arg Leu Asp Gly Gly Ala Gly Asn Asp Thr Leu Val 1145 1150 1155 ggc ggc gaa ggt cag aac acc gta att ggt ggt gcc ggt gac gac 3519 Gly Gly Glu Gly Gln Asn Thr Val Ile Gly Gly Ala Gly Asp Asp 1160 1165 1170 gtt ttc ctg cag gat ctg ggc gtt tgg agc aac cag ctg gat ggc 3564 Val Phe Leu Gln Asp Leu Gly Val Trp Ser Asn Gln Leu Asp Gly 1175 1180 1185 ggt gcc ggt gtt gac acg gtt aag tat aac gtt cac cag ccg tct 3609 Gly Ala Gly Val Asp Thr Val Lys Tyr Asn Val His Gln Pro Ser 1190 1195 1200 gaa gag cgc ctg gaa cgt atg ggt gac act ggt att cat gcc gat 3654 Glu Glu Arg Leu Glu Arg Met Gly Asp Thr Gly Ile His Ala Asp 1205 1210 1215 ctg cag aaa ggc act gtt gaa aaa tgg cct gcg ctg aac ctg ttc 3699 Leu Gln Lys Gly Thr Val Glu Lys Trp Pro Ala Leu Asn Leu Phe 1220 1225 1230 tct gtg gac cat gtt aag aac att gaa aac ctg cat ggc tct cgc 3744 Ser Val Asp His Val Lys Asn Ile Glu Asn Leu His Gly Ser Arg 1235 1240 1245 ctg aac gac cgt atc gct ggt gac gac cag gat aac gaa ctg tgg 3789 Leu Asn Asp Arg Ile Ala Gly Asp Asp Gln Asp Asn Glu Leu Trp 1250 1255 1260 ggt cat gac ggc aat gat acc att cgc ggt cgt ggc ggc gac gat 3834 Gly His Asp Gly Asn Asp Thr Ile Arg Gly Arg Gly Gly Asp Asp 1265 1270 1275 att ctg cgt ggc ggt ctg ggc ctg gat acc ctg tat ggt gaa gat 3879 Ile Leu Arg Gly Gly Leu Gly Leu Asp Thr Leu Tyr Gly Glu Asp 1280 1285 1290 ggt aac gat att ttc ctg caa gac gat gaa acg gta tct gat gac 3924 Gly Asn Asp Ile Phe Leu Gln Asp Asp Glu Thr Val Ser Asp Asp 1295 1300 1305 atc gac ggt ggt gca ggc ctg gac acc gta gat tac agc gct atg 3969 Ile Asp Gly Gly Ala Gly Leu Asp Thr Val Asp Tyr Ser Ala Met 1310 1315 1320 atc cat ccg ggt cgt atc gta gct ccg cac gag tac ggc ttc ggt 4014 Ile His Pro Gly Arg Ile Val Ala Pro His Glu Tyr Gly Phe Gly 1325 1330 1335 atc gag gcg gac ctg tct cgt gaa tgg gtt cgt aaa gcg tcc gcg 4059 Ile Glu Ala Asp Leu Ser Arg Glu Trp Val Arg Lys Ala Ser Ala 1340 1345 1350 ctg ggt gtg gac tac tac gat aac gtt cgt aac gtg gaa aac gtg 4104 Leu Gly Val Asp Tyr Tyr Asp Asn Val Arg Asn Val Glu Asn Val 1355 1360 1365 atc ggt acc tcc atg aaa gac gtg ctg att ggc gac gca cag gcc 4149 Ile Gly Thr Ser Met Lys Asp Val Leu Ile Gly Asp Ala Gln Ala 1370 1375 1380 aac act ctg atg ggc cag ggc ggt gat gac acg gtt cgc ggc ggc 4194 Asn Thr Leu Met Gly Gln Gly Gly Asp Asp Thr Val Arg Gly Gly 1385 1390 1395 gac ggt gat gac ctg ctg ttc ggt ggt gac ggc aac gac atg ctg 4239 Asp Gly Asp Asp Leu Leu Phe Gly Gly Asp Gly Asn Asp Met Leu 1400 1405 1410 tac ggc gac gcg ggc aac gac acc ctg tac ggc ggt ctg ggt gac 4284 Tyr Gly Asp Ala Gly Asn Asp Thr Leu Tyr Gly Gly Leu Gly Asp 1415 1420 1425 gac act ctg gaa ggt ggt gca ggt aac gac tgg ttc ggc caa acc 4329 Asp Thr Leu Glu Gly Gly Ala Gly Asn Asp Trp Phe Gly Gln Thr 1430 1435 1440 cag gca cgc gaa cac gac gtg ctg cgt ggt ggc gac ggc gta gac 4374 Gln Ala Arg Glu His Asp Val Leu Arg Gly Gly Asp Gly Val Asp 1445 1450 1455 acc gtg gat tac tcc caa act ggc gct cac gcg ggt atc gcg gcc 4419 Thr Val Asp Tyr Ser Gln Thr Gly Ala His Ala Gly Ile Ala Ala 1460 1465 1470 ggt cgt atc ggt ctg ggc att ctg gcc gat ctg ggt gcc ggc cgt 4464 Gly Arg Ile Gly Leu Gly Ile Leu Ala Asp Leu Gly Ala Gly Arg 1475 1480 1485 gtc gac aaa ctg ggt gag gct ggc tct agc gcc tat gat act gtt 4509 Val Asp Lys Leu Gly Glu Ala Gly Ser Ser Ala Tyr Asp Thr Val 1490 1495 1500 tcc ggc atc gaa aac gtg gta ggc act gaa ctg gca gat cgt atc 4554 Ser Gly Ile Glu Asn Val Val Gly Thr Glu Leu Ala Asp Arg Ile 1505 1510 1515 acg ggt gac gcg caa gcg aac gtt ctg cgt ggt gct ggc ggt gca 4599 Thr Gly Asp Ala Gln Ala Asn Val Leu Arg Gly Ala Gly Gly Ala 1520 1525 1530 gac gtg ctg gcg ggt ggt gaa ggc gac gac gta ctg ctg ggc ggt 4644 Asp Val Leu Ala Gly Gly Glu Gly Asp Asp Val Leu Leu Gly Gly 1535 1540 1545 gac ggt gac gat cag ctg agc ggt gat gcg ggt cgt gac cgt ctg 4689 Asp Gly Asp Asp Gln Leu Ser Gly Asp Ala Gly Arg Asp Arg Leu 1550 1555 1560 tac ggt gaa gca ggt gac gat tgg ttc ttc cag gac gct gct aac 4734 Tyr Gly Glu Ala Gly Asp Asp Trp Phe Phe Gln Asp Ala Ala Asn 1565 1570 1575 gct ggc aac ctg ctg gac ggc ggc gat ggc cgt gac act gtt gac 4779 Ala Gly Asn Leu Leu Asp Gly Gly Asp Gly Arg Asp Thr Val Asp 1580 1585 1590 ttc agc ggt ccg ggt cgc ggt ctg gac gca ggc gcg aaa ggc gtt 4824 Phe Ser Gly Pro Gly Arg Gly Leu Asp Ala Gly Ala Lys Gly Val 1595 1600 1605 ttc ctg agc ctg ggt aag ggt ttc gca tct ctg atg gac gaa cca 4869 Phe Leu Ser Leu Gly Lys Gly Phe Ala Ser Leu Met Asp Glu Pro 1610 1615 1620 gaa acc agc aat gtc ctg cgt aac atc gaa aac gct gtc ggt tcc 4914 Glu Thr Ser Asn Val Leu Arg Asn Ile Glu Asn Ala Val Gly Ser 1625 1630 1635 gca cgc gat gat gtt ctg att ggc gat gct ggt gcc aat gtt ctg 4959 Ala Arg Asp Asp Val Leu Ile Gly Asp Ala Gly Ala Asn Val Leu 1640 1645 1650 aac ggt ctg gcg ggt aat gat gta ctg tct ggt ggc gct ggt gat 5004 Asn Gly Leu Ala Gly Asn Asp Val Leu Ser Gly Gly Ala Gly Asp 1655 1660 1665 gat gtc ctg ctg ggt gat gag ggc agc gat ctg ctg tcc ggc gat 5049 Asp Val Leu Leu Gly Asp Glu Gly Ser Asp Leu Leu Ser Gly Asp 1670 1675 1680 gcc ggc aac gac gat ctg ttc ggt ggc caa ggt gat gat act tac 5094 Ala Gly Asn Asp Asp Leu Phe Gly Gly Gln Gly Asp Asp Thr Tyr 1685 1690 1695 ctg ttc ggc gtt ggc tat ggt cat gac acc atc tat gag tct ggt 5139 Leu Phe Gly Val Gly Tyr Gly His Asp Thr Ile Tyr Glu Ser Gly 1700 1705 1710 ggc ggc cac gat acg att cgt att aat gca ggt gct gac caa ctg 5184 Gly Gly His Asp Thr Ile Arg Ile Asn Ala Gly Ala Asp Gln Leu 1715 1720 1725 tgg ttt gca cgt cag ggt aac gat ctg gaa att cgc atc ctg ggt 5229 Trp Phe Ala Arg Gln Gly Asn Asp Leu Glu Ile Arg Ile Leu Gly 1730 1735 1740 act gat gac gct ctg acc gta cac gac tgg tac cgc gat gcg gat 5274 Thr Asp Asp Ala Leu Thr Val His Asp Trp Tyr Arg Asp Ala Asp 1745 1750 1755 cac cgc gta gaa atc atc cat gcg gct aac caa gct gta gac cag 5319 His Arg Val Glu Ile Ile His Ala Ala Asn Gln Ala Val Asp Gln 1760 1765 1770 gct ggt att gaa aaa ctg gta gaa gcg atg gca cag tat ccg gac 5364 Ala Gly Ile Glu Lys Leu Val Glu Ala Met Ala Gln Tyr Pro Asp 1775 1780 1785 cca ggt gcg gct gct gca gca cct cca gcg gct cgt gtg ccg gat 5409 Pro Gly Ala Ala Ala Ala Ala Pro Pro Ala Ala Arg Val Pro Asp 1790 1795 1800 acc ctg atg cag agc ctg gcc gtc aat tgg cgt taa 5445 Thr Leu Met Gln Ser Leu Ala Val Asn Trp Arg 1805 1810 <210> 67 <211> 1814 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 67 Met Gln Gln Ser His Gln Ala Gly Tyr Ala Asn Ala Ala Asp Arg Glu 1 5 10 15 Ser Gly Ile Pro Ala Ala Val Leu Asp Gly Ile Lys Ala Val Ala Lys 20 25 30 Glu Lys Asn Ala Thr Leu Met Phe Arg Leu Val Asn Pro His Ser Thr 35 40 45 Ser Leu Ile Ala Glu Gly Val Ala Thr Lys Gly Leu Gly Val His Ala 50 55 60 Lys Ser Ser Asp Trp Gly Leu Gln Ala Gly Tyr Ile Pro Val Asn Pro 65 70 75 80 Asn Leu Ser Lys Leu Phe Gly Arg Ala Pro Glu Val Ile Ala Arg Ala 85 90 95 Asp Asn Asp Val Asn Ser Ser Leu Ala His Gly His Thr Ala Val Asp 100 105 110 Leu Thr Leu Ser Lys Glu Arg Leu Asp Tyr Leu Arg Gln Ala Gly Leu 115 120 125 Val Thr Gly Met Ala Asp Gly Val Val Ala Ser Asn His Ala Gly Tyr 130 135 140 Glu Gln Phe Glu Phe Arg Val Lys Glu Thr Ser Asp Gly Arg Tyr Ala 145 150 155 160 Val Gln Tyr Arg Arg Lys Gly Gly Asp Asp Phe Glu Ala Val Lys Val 165 170 175 Ile Gly Asn Ala Ala Gly Ile Glu Asp Glu Ile Asp Gly Pro Ala Gly 180 185 190 Gln Ala Glu Pro Asp Arg Ala His Tyr Asn Ile Val Thr Phe Cys Cys 195 200 205 Lys Cys Asp Ser Thr Leu Arg Leu Cys Val Gln Ser Thr His Val Asp 210 215 220 Ile Arg Thr Leu Glu Asp Leu Leu Met Gly Thr Leu Gly Ile Val Cys 225 230 235 240 Pro Ile Cys Ser Gln Lys Pro Ala Ser Gly Val Asn His Gln His Leu 245 250 255 Pro Ala Arg Arg Ala Glu Pro Gln Arg His Thr Met Leu Cys Met Cys 260 265 270 Cys Lys Cys Glu Ala Arg Ile Glu Leu Val Val Glu Ser Ser Ala Asp 275 280 285 Asp Leu Arg Ala Phe Gln Gln Leu Phe Leu Asn Thr Leu Ser Phe Val 290 295 300 Cys Pro Trp Cys Ala Ser Gln Gln Glu Asn Asp Glu Ala Asp Gly Val 305 310 315 320 Ser His Ala Gln Leu Pro Ala Arg Arg Ala Glu Pro Gln Arg His Lys 325 330 335 Ile Leu Cys Val Cys Cys Lys Cys Asp Gly Arg Ile Glu Leu Thr Val 340 345 350 Glu Ser Ser Ala Glu Asp Leu Arg Thr Leu Gln Gln Leu Phe Leu Ser 355 360 365 Thr Leu Ser Phe Val Cys Pro Trp Cys Ala Thr Asn Gln Met His Gly 370 375 380 Asp Thr Pro Thr Leu His Glu Tyr Met Leu Asp Leu Gln Pro Glu Thr 385 390 395 400 Thr Asp Leu Tyr Cys Tyr Glu Gln Leu Asn Asp Ser Ser Glu Glu Met 405 410 415 His Gly Pro Lys Ala Thr Leu Gln Asp Ile Val Leu His Leu Glu Pro 420 425 430 Gln Asn Glu Ile Pro Val Asp Leu Leu Cys His Glu Gln Leu Ser Asp 435 440 445 Ser Glu Glu Glu Asn Asp Glu Ile Asp Met His Gly Pro Arg Glu Thr 450 455 460 Leu Gln Glu Ile Val Leu His Leu Glu Pro Gln Asn Glu Leu Asp Pro 465 470 475 480 Val Asp Leu Leu Cys Tyr Glu Gln Leu Ser Glu Ser Glu Glu Pro Gly 485 490 495 Leu Arg Arg Pro Ser Leu Gly Ala Val Glu Arg Gln Asp Ser Gly Tyr 500 505 510 Asp Ser Leu Asp Gly Val Gly Ser Arg Ser Phe Ser Leu Gly Glu Val 515 520 525 Ser Asp Met Ala Ala Val Glu Ala Ala Glu Leu Glu Met Thr Arg Gln 530 535 540 Val Leu His Ala Gly Ala Arg Gln Asp Asp Ala Glu Pro Gly Val Ser 545 550 555 560 Gly Ala Ser Ala His Trp Gly Gln Arg Ala Leu Gln Gly Ala Gln Ala 565 570 575 Val Ala Ala Ala Gln Arg Leu Val His Ala Ile Ala Leu Met Thr Gln 580 585 590 Phe Gly Arg Ala Gly Ser Thr Asn Thr Pro Gln Glu Ala Ala Ser Leu 595 600 605 Ser Ala Ala Val Phe Gly Leu Gly Glu Ala Ser Ser Ala Val Ala Glu 610 615 620 Thr Val Ser Gly Phe Phe Arg Gly Ser Ser Arg Trp Ala Gly Gly Phe 625 630 635 640 Gly Val Ala Gly Gly Ala Met Ala Leu Gly Gly Gly Ile Ala Ala Ala 645 650 655 Val Gly Ala Gly Met Ser Leu Thr Asp Asp Ala Pro Ala Gly Gln Lys 660 665 670 Ala Ala Ala Gly Ala Glu Ile Ala Leu Gln Leu Thr Gly Gly Thr Val 675 680 685 Glu Leu Ala Ser Ser Ile Ala Leu Ala Leu Ala Ala Ala Arg Gly Val 690 695 700 Thr Ser Gly Leu Gln Val Ala Gly Ala Ser Ala Gly Ala Ala Ala Gly 705 710 715 720 Ala Leu Ala Ala Ala Leu Ser Pro Met Glu Ile Tyr Gly Leu Val Gln 725 730 735 Gln Ser His Tyr Ala Asp Gln Leu Asp Lys Leu Ala Gln Glu Ser Ser 740 745 750 Ala Tyr Gly Tyr Glu Gly Asp Ala Leu Leu Ala Gln Leu Tyr Arg Asp 755 760 765 Lys Thr Ala Ala Glu Gly Ala Val Ala Gly Val Ser Ala Val Leu Ser 770 775 780 Thr Val Gly Ala Ala Val Ser Ile Ala Ala Ala Ala Ser Val Val Gly 785 790 795 800 Ala Pro Val Ala Val Val Thr Ser Leu Leu Thr Gly Ala Leu Asn Gly 805 810 815 Ile Leu Arg Gly Val Gln Gln Pro Ile Ile Glu Lys Leu Ala Asn Asp 820 825 830 Tyr Ala Arg Lys Ile Asp Glu Leu Gly Gly Pro Gln Ala Tyr Phe Glu 835 840 845 Lys Asn Leu Gln Ala Arg His Glu Gln Leu Ala Asn Ser Asp Gly Leu 850 855 860 Arg Lys Met Leu Ala Asp Leu Gln Ala Gly Trp Asn Ala Ser Ser Val 865 870 875 880 Ile Gly Val Gln Thr Thr Glu Ile Ser Lys Ser Ala Leu Glu Leu Ala 885 890 895 Ala Ile Thr Gly Asn Ala Asp Asn Leu Lys Ser Val Asp Val Phe Val 900 905 910 Asp Arg Phe Val Gln Gly Glu Arg Val Ala Gly Gln Pro Val Val Leu 915 920 925 Asp Val Ala Ala Gly Gly Ile Asp Ile Ala Ser Arg Lys Gly Glu Arg 930 935 940 Pro Ala Leu Thr Phe Ile Thr Pro Leu Ala Ala Pro Gly Glu Glu Gln 945 950 955 960 Arg Arg Arg Thr Lys Thr Gly Lys Ser Glu Phe Thr Thr Phe Val Glu 965 970 975 Ile Val Gly Lys Gln Asp Arg Trp Arg Ile Arg Asp Gly Ala Ala Asp 980 985 990 Thr Thr Ile Asp Leu Ala Lys Val Val Ser Gln Leu Val Asp Ala Asn 995 1000 1005 Gly Val Leu Lys His Ser Ile Lys Leu Asp Val Ile Gly Gly Asp 1010 1015 1020 Gly Asp Asp Val Val Leu Ala Asn Ala Ser Arg Ile His Tyr Asp 1025 1030 1035 Gly Gly Ala Gly Thr Asn Thr Val Ser Tyr Ala Ala Leu Gly Arg 1040 1045 1050 Gln Asp Ser Ile Thr Val Ser Ala Asp Gly Glu Arg Phe Asn Val 1055 1060 1065 Arg Lys Gln Leu Asn Asn Ala Asn Val Tyr Arg Glu Gly Val Ala 1070 1075 1080 Thr Gln Thr Thr Ala Tyr Gly Lys Arg Thr Glu Asn Val Gln Tyr 1085 1090 1095 Arg His Val Glu Leu Ala Arg Val Gly Gln Leu Val Glu Val Asp 1100 1105 1110 Thr Leu Glu His Val Gln His Ile Ile Gly Gly Ala Gly Asn Asp 1115 1120 1125 Ser Ile Thr Gly Asn Ala His Asp Asn Phe Leu Ala Gly Gly Ser 1130 1135 1140 Gly Asp Asp Arg Leu Asp Gly Gly Ala Gly Asn Asp Thr Leu Val 1145 1150 1155 Gly Gly Glu Gly Gln Asn Thr Val Ile Gly Gly Ala Gly Asp Asp 1160 1165 1170 Val Phe Leu Gln Asp Leu Gly Val Trp Ser Asn Gln Leu Asp Gly 1175 1180 1185 Gly Ala Gly Val Asp Thr Val Lys Tyr Asn Val His Gln Pro Ser 1190 1195 1200 Glu Glu Arg Leu Glu Arg Met Gly Asp Thr Gly Ile His Ala Asp 1205 1210 1215 Leu Gln Lys Gly Thr Val Glu Lys Trp Pro Ala Leu Asn Leu Phe 1220 1225 1230 Ser Val Asp His Val Lys Asn Ile Glu Asn Leu His Gly Ser Arg 1235 1240 1245 Leu Asn Asp Arg Ile Ala Gly Asp Asp Gln Asp Asn Glu Leu Trp 1250 1255 1260 Gly His Asp Gly Asn Asp Thr Ile Arg Gly Arg Gly Gly Asp Asp 1265 1270 1275 Ile Leu Arg Gly Gly Leu Gly Leu Asp Thr Leu Tyr Gly Glu Asp 1280 1285 1290 Gly Asn Asp Ile Phe Leu Gln Asp Asp Glu Thr Val Ser Asp Asp 1295 1300 1305 Ile Asp Gly Gly Ala Gly Leu Asp Thr Val Asp Tyr Ser Ala Met 1310 1315 1320 Ile His Pro Gly Arg Ile Val Ala Pro His Glu Tyr Gly Phe Gly 1325 1330 1335 Ile Glu Ala Asp Leu Ser Arg Glu Trp Val Arg Lys Ala Ser Ala 1340 1345 1350 Leu Gly Val Asp Tyr Tyr Asp Asn Val Arg Asn Val Glu Asn Val 1355 1360 1365 Ile Gly Thr Ser Met Lys Asp Val Leu Ile Gly Asp Ala Gln Ala 1370 1375 1380 Asn Thr Leu Met Gly Gln Gly Gly Asp Asp Thr Val Arg Gly Gly 1385 1390 1395 Asp Gly Asp Asp Leu Leu Phe Gly Gly Asp Gly Asn Asp Met Leu 1400 1405 1410 Tyr Gly Asp Ala Gly Asn Asp Thr Leu Tyr Gly Gly Leu Gly Asp 1415 1420 1425 Asp Thr Leu Glu Gly Gly Ala Gly Asn Asp Trp Phe Gly Gln Thr 1430 1435 1440 Gln Ala Arg Glu His Asp Val Leu Arg Gly Gly Asp Gly Val Asp 1445 1450 1455 Thr Val Asp Tyr Ser Gln Thr Gly Ala His Ala Gly Ile Ala Ala 1460 1465 1470 Gly Arg Ile Gly Leu Gly Ile Leu Ala Asp Leu Gly Ala Gly Arg 1475 1480 1485 Val Asp Lys Leu Gly Glu Ala Gly Ser Ser Ala Tyr Asp Thr Val 1490 1495 1500 Ser Gly Ile Glu Asn Val Val Gly Thr Glu Leu Ala Asp Arg Ile 1505 1510 1515 Thr Gly Asp Ala Gln Ala Asn Val Leu Arg Gly Ala Gly Gly Ala 1520 1525 1530 Asp Val Leu Ala Gly Gly Glu Gly Asp Asp Val Leu Leu Gly Gly 1535 1540 1545 Asp Gly Asp Asp Gln Leu Ser Gly Asp Ala Gly Arg Asp Arg Leu 1550 1555 1560 Tyr Gly Glu Ala Gly Asp Asp Trp Phe Phe Gln Asp Ala Ala Asn 1565 1570 1575 Ala Gly Asn Leu Leu Asp Gly Gly Asp Gly Arg Asp Thr Val Asp 1580 1585 1590 Phe Ser Gly Pro Gly Arg Gly Leu Asp Ala Gly Ala Lys Gly Val 1595 1600 1605 Phe Leu Ser Leu Gly Lys Gly Phe Ala Ser Leu Met Asp Glu Pro 1610 1615 1620 Glu Thr Ser Asn Val Leu Arg Asn Ile Glu Asn Ala Val Gly Ser 1625 1630 1635 Ala Arg Asp Asp Val Leu Ile Gly Asp Ala Gly Ala Asn Val Leu 1640 1645 1650 Asn Gly Leu Ala Gly Asn Asp Val Leu Ser Gly Gly Ala Gly Asp 1655 1660 1665 Asp Val Leu Leu Gly Asp Glu Gly Ser Asp Leu Leu Ser Gly Asp 1670 1675 1680 Ala Gly Asn Asp Asp Leu Phe Gly Gly Gln Gly Asp Asp Thr Tyr 1685 1690 1695 Leu Phe Gly Val Gly Tyr Gly His Asp Thr Ile Tyr Glu Ser Gly 1700 1705 1710 Gly Gly His Asp Thr Ile Arg Ile Asn Ala Gly Ala Asp Gln Leu 1715 1720 1725 Trp Phe Ala Arg Gln Gly Asn Asp Leu Glu Ile Arg Ile Leu Gly 1730 1735 1740 Thr Asp Asp Ala Leu Thr Val His Asp Trp Tyr Arg Asp Ala Asp 1745 1750 1755 His Arg Val Glu Ile Ile His Ala Ala Asn Gln Ala Val Asp Gln 1760 1765 1770 Ala Gly Ile Glu Lys Leu Val Glu Ala Met Ala Gln Tyr Pro Asp 1775 1780 1785 Pro Gly Ala Ala Ala Ala Ala Pro Pro Ala Ala Arg Val Pro Asp 1790 1795 1800 Thr Leu Met Gln Ser Leu Ala Val Asn Trp Arg 1805 1810 <210> 68 <211> 11776 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Plasmid comprising SEQ ID NO:65 <400> 68 atcgagatct gtatggctgt gcaggtcgta aatcactgca taattcgtgt cgctcaaggc 60 gcactcccgt tctggataat gttttttgcg ccgacatcat aacggttctg gcaaatattc 120 tgaaatgagc tgttgacaat taatcatcgg ctcgtataat gtgtggaatt gtgagcggat 180 aacaattata attttgttta actttaagaa ggagatatac atatgcagca gtcccatcag 240 gccggttacg caaacgcagc cgatcgtgaa tctggtatcc cggcagcggt tctggatggt 300 attaaggcag ttgccaaaga gaagaacgct accctgatgt tccgtctggt caacccacac 360 tctacttccc tgatcgcgga aggtgtggcg accaaaggcc tgggtgtgca cgccaaaagc 420 agcgactggg gtctgcaggc aggttatatt ccggtgaacc cgaatctgtc taaactgttc 480 ggtcgtgccc cggaggtgat cgcacgtgca gacaacgatg tcaactcttc tctggcgcat 540 ggtcacaccg cggttgatct gaccctgtcc aaagaacgcc tggattacct gcgtcaggcg 600 ggcctggtga cgggcatggc cgacggtgtt gtagcgagca accacgcggg ttatgaacaa 660 tttgagtttc gcgttaaaga gacctctgac ggtcgttacg cggtgcagta ccgccgcaaa 720 ggtggcgatg actttgaagc tgtcaaagtg atcggtaacg ctgctggaat tgaagacgaa 780 atcgacggcc ctgcgggcca ggctgaacca gatcgtgctc actacaacat cgtaactttt 840 tgctgtaagt gcgatagcac tctgcgtctg tgcgtacagt ctactcacgt tgatatccgc 900 actctggaag atctgctgat gggtaccctg ggtatcgtct gcccaatctg ctctcaaaag 960 cctgcttctg gtgttaacca tcagcacctg ccggctcgtc tgcgctgaac cacagcgtca 1020 cacgatgctg tgcatgtgtt gcaaatgcga ggctcgcatc gaactggttg ttgaatccag 1080 cgctgacgac ctgcgtgcgt ttcagcaact gttcctgaac acgctgtctt ttgtttgtcc 1140 gtggtgtgcc tcccagcagg agaacgatga agcggatggc gtgtcccacg cgcagctgcc 1200 ggcacgtcgt gcagaaccgc agcgccacaa gattctgtgc gtttgctgta aatgtgatgg 1260 ccgtatcgaa ctgactgtgg aatcctccgc ggaagatctg cgtacgctgc agcagctgtt 1320 cctgtctacc ctgtctttcg tgtgcccgtg gtgcgccacc aatcaaatgc acggcgacac 1380 cccgaccctg cacgaataca tgctggacct gcagccggaa accacggatc tgtattgtta 1440 tgaacagctg aacgatagca gcgaggaaat gcacggtccg aaagcaactc tgcaggacat 1500 tgtgctgcat ctggagccac agaacgaaat cccggttgat ctgctgtgcc acgagcaact 1560 gagcgattcc gaagaggaaa acgacgaaat tgatatgcat ggtccgcgcg agaccctgca 1620 agaaatcgtc ctgcacctgg aaccgcaaaa cgaactggac cctgtagacc tgctgtgcta 1680 cgaacagctg tccgaatctg aagaaccggg cctgcgccgt ccgtccctgg gcgcagtcga 1740 acgtcaggac tccggctacg attccctgga tggcgttggc tcccgctcct tctccctggg 1800 cgaggtttct gacatggctg cggtggaagc ggcagagctg gaaatgaccc gtcaagtgct 1860 gcacgcgggc gcacgtcagg acgatgctga gccgggcgtg tccggtgcgt ctgcacactg 1920 gggtcaacgt gccctgcagg gtgctcaagc tgtcgcggca gcgcagcgtc tggtacatgc 1980 gatcgcactg atgacccagt tcggtcgcgc aggttctacc aacactcctc aggaagcagc 2040 tagcctgtct gctgctgttt tcggtctggg cgaagcgtct tctgcggttg cagaaaccgt 2100 gagcggtttc ttccgtggtt ctagccgctg ggcgggtggt tttggtgtag caggtggcgc 2160 tatggccctg ggtggcggta tcgcggctgc tgtcggcgca ggtatgagcc tgaccgacga 2220 tgctcctgcg ggccagaaag ccgcagctgg cgctgaaatc gcgctgcagc tgactggtgg 2280 taccgttgaa ctggctagct ctatcgcgct ggctctggca gcggcacgtg gcgtgacttc 2340 tggcctgcaa gtcgccggtg cctctgcggg cgctgctgcg ggcgctctgg cagctgcact 2400 gtcccccatg gaaatctacg gtctggtaca gcagtctcac tacgcagacc agctggataa 2460 actggcgcag gagtcttctg catacggtta cgaaggcgac gcactgctgg cgcagctgta 2520 tcgtgacaaa actgctgctg aaggtgctgt ggcaggcgtt tctgcggtac tgtctaccgt 2580 tggcgctgcg gtttctattg cggctgccgc atccgttgta ggtgcgccgg ttgctgtagt 2640 tacctctctg ctgactggtg cactgaacgg tatcctgcgt ggtgttcagc agcctattat 2700 cgaaaaactg gcgaatgatt atgcccgtaa aatcgacgaa ctgggcggtc cgcaggctta 2760 ttttgaaaaa aacctgcagg cgcgccacga acagctggca aacagcgacg gcctgcgcaa 2820 aatgctggca gacctgcaag ctggttggaa cgcgtcttct gtgatcggcg tgcagaccac 2880 cgaaattagc aaatctgcgc tggaactggc tgcaattact ggcaacgcgg ataacctgaa 2940 aagcgttgat gtttttgtcg atcgcttcgt tcagggcgag cgcgttgctg gtcagccggt 3000 tgttctggac gttgcggcag gcggcatcga catcgctagc cgcaagggcg agcgtccggc 3060 tctgactttc attaccccgc tggcagctcc gggtgaagaa cagcgtcgcc gtaccaagac 3120 tggtaaaagc gagttcacca ccttcgtgga aatcgtaggt aaacaggacc gctggcgtat 3180 tcgcgacggt gcggcggaca ccaccatcga cctggcaaaa gttgtttccc aactggtaga 3240 tgctaacggc gtgctgaaac attctattaa actggatgta atcggcggtg acggcgatga 3300 cgttgtactg gcgaacgcgt ctcgtatcca ctatgacggc ggcgcaggta ccaacacggt 3360 ttcctacgca gcgctgggcc gccaggattc catcactgtt agcgccgatg gcgaacgttt 3420 caacgtgcgt aaacagctga ataacgcaaa cgtctatcgt gagggtgtag ctacccagac 3480 caccgcgtac ggtaagcgta ccgaaaacgt tcagtatcgt cacgtggaac tggcacgtgt 3540 gggtcagctg gtagaggtgg atacgctgga acacgtgcag cacatcatcg gtggcgccgg 3600 taacgattcc attactggta acgctcacga caacttcctg gcaggtggtt ctggtgatga 3660 tcgtctggac ggtggtgcgg gtaacgatac gctggtaggc ggcgaaggtc agaacaccgt 3720 aattggtggt gccggtgacg acgttttcct gcaggatctg ggcgtttgga gcaaccagct 3780 ggatggcggt gccggtgttg acacggttaa gtataacgtt caccagccgt ctgaagagcg 3840 cctggaacgt atgggtgaca ctggtattca tgccgatctg cagaaaggca ctgttgaaaa 3900 atggcctgcg ctgaacctgt tctctgtgga ccatgttaag aacattgaaa acctgcatgg 3960 ctctcgcctg aacgaccgta tcgctggtga cgaccaggat aacgaactgt ggggtcatga 4020 cggcaatgat accattcgcg gtcgtggcgg cgacgatatt ctgcgtggcg gtctgggcct 4080 ggataccctg tatggtgaag atggtaacga tattttcctg caagacgatg aaacggtatc 4140 tgatgacatc gacggtggtg caggcctgga caccgtagat tacagcgcta tgatccatcc 4200 gggtcgtatc gtagctccgc acgagtacgg cttcggtatc gaggcggacc tgtctcgtga 4260 atgggttcgt aaagcgtccg cgctgggtgt ggactactac gataacgttc gtaacgtgga 4320 aaacgtgatc ggtacctcca tgaaagacgt gctgattggc gacgcacagg ccaacactct 4380 gatgggccag ggcggtgatg acacggttcg cggcggcgac ggtgatgacc tgctgttcgg 4440 tggtgacggc aacgacatgc tgtacggcga cgcgggcaac gacaccctgt acggcggtct 4500 gggtgacgac actctggaag gtggtgcagg taacgactgg ttcggccaaa cccaggcacg 4560 cgaacacgac gtgctgcgtg gtggcgacgg cgtagacacc gtggattact cccaaactgg 4620 cgctcacgcg ggtatcgcgg ccggtcgtat cggtctgggc attctggccg atctgggtgc 4680 cggccgtgtc gacaaactgg gtgaggctgg ctctagcgcc tatgatactg tttccggcat 4740 cgaaaacgtg gtaggcactg aactggcaga tcgtatcacg ggtgacgcgc aagcgaacgt 4800 tctgcgtggt gctggcggtg cagacgtgct ggcgggtggt gaaggcgacg acgtactgct 4860 gggcggtgac ggtgacgatc agctgagcgg tgatgcgggt cgtgaccgtc tgtacggtga 4920 agcaggtgac gattggttct tccaggacgc tgctaacgct ggcaacctgc tggacggcgg 4980 cgatggccgt gacactgttg acttcagcgg tccgggtcgc ggtctggacg caggcgcgaa 5040 aggcgttttc ctgagcctgg gtaagggttt cgcatctctg atggacgaac cagaaaccag 5100 caatgtcctg cgtaacatcg aaaacgctgt cggttccgca cgcgatgatg ttctgattgg 5160 cgatgctggt gccaatgttc tgaacggtct ggcgggtaat gatgtactgt ctggtggcgc 5220 tggtgatgat gtcctgctgg gtgatgaggg cagcgatctg ctgtccggcg atgccggcaa 5280 cgacgatctg ttcggtggcc aaggtgatga tacttacctg ttcggcgttg gctatggtca 5340 tgacaccatc tatgagtctg gtggcggcca cgatacgatt cgtattaatg caggtgctga 5400 ccaactgtgg tttgcacgtc agggtaacga tctggaaatt cgcatcctgg gtactgatga 5460 cgctctgacc gtacacgact ggtaccgcga tgcggatcac cgcgtagaaa tcatccatgc 5520 ggctaaccaa gctgtagacc aggctggtat tgaaaaactg gtagaagcga tggcacagta 5580 tccggaccca ggtgcggctg ctgcagcacc tccagcggct cgtgtgccgg ataccctgat 5640 gcagagcctg gccgtcaatt ggcgttaatg gatccaggcc tctttagaag gagatatacc 5700 atgctgccgt ctgcacaggc gccgtctctg ctgaatccaa ctgatgactt cgctgcgctg 5760 ggtaacatcg cgtggctgtg gatgaacagc ccgatgcacc gtgactggcc ggttcacctg 5820 ctggcacgta acacgctggc gccgatccag ctgggtcaat acatcctgct gcgttgtaac 5880 gacgtgcctg tggcgtattg ctcctgggca ctgatggatg cggataccga gctgtcctac 5940 gttatggccc catctagcct gggcggtaac gcttggaact gcggcgatcg tctgtggatc 6000 attgattgga ttgctccgtt tagccgtgac gacaaccgtg ctctgcgtcg cgcgctggcc 6060 gaacgtcatc cggattctgt tggccgttcc ctgcgcgtac gtcgcggtgg cgacaccgct 6120 cgcgtcaaag aataccgtgg tcgtgctctg gacgcagcgg cggcccgcgc tcagctggac 6180 cgctaccacg cagaactgat tgccggtctg cgtgcatcca atggcggtta tgctccgcgt 6240 ggccgtggca ccgcataatc tagaattctt taattaaaga tccggctgct aacaaagccc 6300 gaaaggaagc tgagttggct gctgccaccg ctgagcaatc caggcatcaa ataaaacgaa 6360 aggctcagtc gaaagactgg gcctttcgtt ttatctgttg tttgtcggtg aacgctctcc 6420 tgagtaggac aaatccgccg ggagcggatt tgaacgttgc gaagcaacgg cccggagggt 6480 ggcgggcagg acgcccgcca taaactgcca ggcatcaaat taagcagaag gccatcctga 6540 cggatggcct ttttgctagc agcacgccat agtgactggc gatgctgtcg gaatggacga 6600 tatcccgcaa gaggcccggc agtaccggca taaccaagcc tatgcctaca gcatccaggg 6660 tgacggtgcc gaggatgacg atgagcgcat tgttagattt catacacggt gcctgactgc 6720 gttagcaatt taactgtgat aaactaccgc attaaagctt atcgatgata agctgtcaaa 6780 catgagaatt cttagaaaaa ctcatcgagc atcaaatgaa actgcaattt attcatatca 6840 ggattatcaa taccatattt ttgaaaaagc cgtttctgta atgaaggaga aaactcaccg 6900 aggcagttcc ataggatggc aagatcctgg tatcggtctg cgattccgac tcgtccaaca 6960 tcaatacaac ctattaattt cccctcgtca aaaataaggt tatcaagtga gaaatcacca 7020 tgagtgacga ctgaatccgg tgagaatggc aaaagcttat gcatttcttt ccagacttgt 7080 tcaacaggcc agccattacg ctcgtcatca aaatcactcg catcaaccaa accgttattc 7140 attcgtgatt gcgcctgagc gagacgaaat acgcgatcgc tgttaaaagg acaattacaa 7200 acaggaatcg aatgcaaccg gcgcaggaac actgccagcg catcaacaat attttcacct 7260 gaatcaggat attcttctaa tacctggaat gctgttttcc cggggatcgc agtggtgagt 7320 aaccatgcat catcaggagt acggataaaa tgcttgatgg tcggaagagg cataaattcc 7380 gtcagccagt ttagtctgac catctcatct gtaacatcat tggcaacgct acctttgcca 7440 tgtttcagaa acaactctgg cgcatcgggc ttcccataca atcgatagat tgtcgcacct 7500 gattgcccga cattatcgcg agcccattta tacccatata aatcagcatc catgttggaa 7560 tttaatcgcg gcctcgagca agacgtttcc cgttgaatat ggctcataac accccttgta 7620 ttactgttta tgtaagcaga cagttttatt gttcatgacc aaaatccctt aacgtgagtt 7680 ttcgttccac tgagcgtcag accccgtaga aaagatcaaa ggatcttctt gagatccttt 7740 ttttctgcgc gtaatctgct gcttgcaaac aaaaaaacca ccgctaccag cggtggtttg 7800 tttgccggat caagagctac caactctttt tccgaaggta actggcttca gcagagcgca 7860 gataccaaat actgtccttc tagtgtagcc gtagttaggc caccacttca agaactctgt 7920 agcaccgcct acatacctcg ctctgctaat cctgttacca gtggctgctg ccagtggcga 7980 taagtcgtgt cttaccgggt tggactcaag acgatagtta ccggataagg cgcagcggtc 8040 gggctgaacg gggggttcgt gcacacagcc cagcttggag cgaacgacct acaccgaact 8100 gagataccta cagcgtgagc tatgagaaag cgccacgctt cccgaaggga gaaaggcgga 8160 caggtatccg gtaagcggca gggtcggaac aggagagcgc acgagggagc ttccaggggg 8220 aaacgcctgg tatctttata gtcctgtcgg gtttcgccac ctctgacttg agcgtcgatt 8280 tttgtgatgc tcgtcagggg ggcggagcct atggaaaaac gccagcaacg cggccttttt 8340 acggttcctg gccttttgct ggccttttgc tcacatgttc tttcctgcgt tatcccctga 8400 ttctgtggat aaccgtatta ccgcctttga gtgagctgat accgctcgcc gcagccgaac 8460 gaccgagcgc agcgagtcag tgagcgagga agcggaagag cgcctgatgc ggtattttct 8520 ccttacgcat ctgtgcggta tttcacaccg caatggtgca ctctcagtac aatctgctct 8580 gatgccgcat agttaagcca gtatacactc cgctatcgct acgtgactgg gtcatggctg 8640 cgccccgaca cccgccaaca cccgctgacg cgccctgacg ggcttgtctg ctcccggcat 8700 ccgcttacag acaagctgtg accgtctccg ggagctgcat gtgtcagagg ttttcaccgt 8760 catcaccgaa acgcgcgagg cagctgcggt aaagctcatc agcgtggtcg tgaagcgatt 8820 cacagatgtc tgcctgttca tccgcgtcca gctcgttgag tttctccaga agcgttaatg 8880 tctggcttct gataaagcgg gccatgttaa gggcggtttt ttcctgtttg gtcactgatg 8940 cctccgtgta agggggattt ctgttcatgg gggtaatgat accgatgaaa cgagagagga 9000 tgctcacgat acgggttact gatgatgaac atgcccggtt actggaacgt tgtgagggta 9060 aacaactggc ggtatggatg cggcgggacc agagaaaaat cactcagggt caatgccagc 9120 gcttcgttaa tacagatgta ggtgttccac agggtagcca gcagcatcct gcgatgcaga 9180 tccggaacat aatggtgcag ggcgctgact tccgcgtttc cagactttac gaaacacgga 9240 aaccgaagac cattcatgtt gttgctcagg tcgcagacgt tttgcagcag cagtcgcttc 9300 acgttcgctc gcgtatcggt gattcattct gctaaccagt aaggcaaccc cgccagccta 9360 gccgggtcct caacgacagg agcacgatca tgcgcacccg tggccaggac ccaacgctgc 9420 ccgagatgcg ccgcgtgcgg ctgctggaga tggcggacgc gatggatatg ttctgccaag 9480 ggttggtttg cgcattcaca gttctccgca agaattgatt ggctccaatt cttggagtgg 9540 tgaatccgtt agcgaggtgc cgccggcttc cattcaggtc gaggtggccc ggctccatgc 9600 accgcgacgc aacgcgggga ggcagacaag gtatagggcg gcgcctacaa tccatgccaa 9660 cccgttccat gtgctcgccg aggcggcata aatcgccgtg acgatcagcg gtccaatgat 9720 cgaagttagg ctggtaagag ccgcgagcga tccttgaagc tgtccctgat ggtcgtcatc 9780 tacctgcctg gacagcatgg cctgcaacgc gggcatcccg atgccgccgg aagcgagaag 9840 aatcataatg gggaaggcca tccagcctcg cgtcgcgaac gccagcaaga cgtagcccag 9900 cgcgtcggcc gccatgccgg cgataatggc ctgcttctcg ccgaaacgtt tggtggcggg 9960 accagtgacg aaggcttgag cgagggcgtg caagattccg aataccgcaa gcgacaggcc 10020 gatcatcgtc gcgctccagc gaaagcggtc ctcgccgaaa atgacccaga gcgctgccgg 10080 cacctgtcct acgagttgca tgataaagaa gacagtcata agtgcggcga cgatagtcat 10140 gccccgcgcc caccggaagg agctgactgg gttgaaggct ctcaagggca tcggtcgact 10200 catagctgtt tcctgtgtga aattgttatc cgctcacaat tccacacaac atacgagccg 10260 gaagcataaa gtgtaaagcc tggggtgcct aatgagtgag ctaacttaca ttaattgcgt 10320 tgcgctcact gcccgctttc cagtcgggaa acctgtcgtg ccagctgcat taatgaatcg 10380 gccaacgcgc ggggagaggc ggtttgcgta ttgggcgcta gcgtggtttt tcttttcacc 10440 agtgagacgg gcaacagctg attgcccttc accgcctggc cctgagagag ttgcagcaag 10500 cggtccacgc tggtttgccc cagcaggcga aaatcctgtt tgatggtggt taacggcggg 10560 atataacatg agctgtcttc ggtatcgtcg tatcccacta ccgagatatc cgcaccaacg 10620 cgcagcccgg actcggtaat ggcgcgcatt gcgcccagcg ccatctgatc gttggcaacc 10680 agcatcgcag tgggaacgat gccctcattc agcatttgca tggtttgttg aaaaccggac 10740 atggcactcc agtcgccttc ccgttccgct atcggctgaa tttgattgcg agtgagatat 10800 ttatgccagc cagccagacg cagacgcgcc gagacagaac ttaatgggcc cgctaacagc 10860 gcgatttgct ggtgacccaa tgcgaccaga tgctccacgc ccagtcgcgt accgtcttca 10920 tgggagaaaa taatactgtt gatgggtgtc tggtcagaga catcaagaaa taacgccgga 10980 acattagtgc aggcagcttc cacagcaatg gcatcctggt catccagcgg atagttaatg 11040 atcagcccac tgacgcgttg cgcgagaaga ttgtgcaccg ccgctttaca ggcttcgacg 11100 ccgcttcgtt ctaccatcga caccaccacg ctggcaccca gttgatcggc gcgagattta 11160 atcgccgcga caatttgcga cggcgcgtgc agggccagac tggaggtggc aacgccaatc 11220 agcaacgact gtttgcccgc cagttgttgt gccacgcggt tgggaatgta attcagctcc 11280 gccatcgccg cttccacttt ttcccgcgtt ttcgcagaaa cgtggctggc ctggttcacc 11340 acgcgggaaa cggtctgata agagacaccg gcatactctg cgacatcgta taacgttact 11400 ggtttcacat tcaccaccct gaattgactc tcttccgggc gctatcatgc cataccgcga 11460 aaggttttgc gccattcgat ggtgtcggaa tttatgcggt gtgaaatacc gcacagatgc 11520 gtaaggagaa aataccgcat caggcgctct tccgcttcct cgctcactga ctcgctgcca 11580 ccccgtggca tgcaaggaga tggcgcccaa cagtcccccg gccacggggc ctgccaccat 11640 acccacgccg aaacaagcgc tcatgagccc gaagtggcga gcccgatctt ccccatcggt 11700 gatgtcggcg atataggcgc cagcaaccgc acctgtggcg ccggtgatgc cggccacgat 11760 gcgtccggcg tagagg 11776 <210> 69 <211> 5121 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleotide sequence encoding the wild type CyaA protein of Bordetella pertussis, optimized for E. coli expression <400> 69 atgcagcagt cccatcaggc cggttacgca aacgcagccg atcgtgaatc tggtatcccg 60 gcagcggttc tggatggtat taaggcagtt gccaaagaga agaacgctac cctgatgttc 120 cgtctggtca acccacactc tacttccctg atcgcggaag gtgtggcgac caaaggcctg 180 ggtgtgcacg ccaaaagcag cgactggggt ctgcaggcag gttatattcc ggtgaacccg 240 aatctgtcta aactgttcgg tcgtgccccg gaggtgatcg cacgtgcaga caacgatgtc 300 aactcttctc tggcgcatgg tcacaccgcg gttgatctga ccctgtccaa agaacgcctg 360 gattacctgc gtcaggcggg cctggtgacg ggcatggccg acggtgttgt agcgagcaac 420 cacgcgggtt atgaacaatt tgagtttcgc gttaaagaga cctctgacgg tcgttacgcg 480 gtgcagtacc gccgcaaagg tggcgatgac tttgaagctg tcaaagtgat cggtaacgct 540 gctggaattc cgctgaccgc ggatatcgac atgtttgcca tcatgcctca cctgtccaac 600 tttcgcgatt ccgcacgcag ctctgtgacg tctggtgatt ccgtcactga ctacctggct 660 cgtacccgtc gtgcggcctc tgaagccact ggtggtctgg atcgtgaacg cattgacctg 720 ctgtggaaaa tcgcccgtgc cggtgcgcgc tctgctgttg gtaccgaagc acgccgccaa 780 tttcgttacg acggcgatat gaacatcggt gtgatcacgg attttgaact ggaagttcgc 840 aatgccctga accgtcgtgc acacgcggtc ggcgcgcagg acgttgttca gcacggtacg 900 gagcagaata acccgttccc agaagcggac gaaaagatct ttgttgtgtc tgccaccggt 960 gaatcccaga tgctgactcg tggccagctg aaagaataca tcggccaaca gcgtggcgaa 1020 ggctacgttt tctacgagaa tcgtgcttac ggcgttgcgg gcaaatccct gttcgacgat 1080 ggtctgggcg ctgcaccggg cgttccgagc ggccgttcta aattcagccc ggacgtactg 1140 gaaactgtgc cggcttcccc gggcctgcgc cgtccgtccc tgggcgcagt cgaacgtcag 1200 gactccggct acgattccct ggatggcgtt ggctcccgct ccttctccct gggcgaggtt 1260 tctgacatgg ctgcggtgga agcggcagag ctggaaatga cccgtcaagt gctgcacgcg 1320 ggcgcacgtc aggacgatgc tgagccgggc gtgtccggtg cgtctgcaca ctggggtcaa 1380 cgtgccctgc agggtgctca agctgtcgcg gcagcgcagc gtctggtaca tgcgatcgca 1440 ctgatgaccc agttcggtcg cgcaggttct accaacactc ctcaggaagc agctagcctg 1500 tctgctgctg ttttcggtct gggcgaagcg tcttctgcgg ttgcagaaac cgtgagcggt 1560 ttcttccgtg gttctagccg ctgggcgggt ggttttggtg tagcaggtgg cgctatggcc 1620 ctgggtggcg gtatcgcggc tgctgtcggc gcaggtatga gcctgaccga cgatgctcct 1680 gcgggccaga aagccgcagc tggcgctgaa atcgcgctgc agctgactgg tggtaccgtt 1740 gaactggcta gctctatcgc gctggctctg gcagcggcac gtggcgtgac ttctggcctg 1800 caagtcgccg gtgcctctgc gggcgctgct gcgggcgctc tggcagctgc actgtccccc 1860 atggaaatct acggtctggt acagcagtct cactacgcag accagctgga taaactggcg 1920 caggagtctt ctgcatacgg ttacgaaggc gacgcactgc tggcgcagct gtatcgtgac 1980 aaaactgctg ctgaaggtgc tgtggcaggc gtttctgcgg tactgtctac cgttggcgct 2040 gcggtttcta ttgcggctgc cgcatccgtt gtaggtgcgc cggttgctgt agttacctct 2100 ctgctgactg gtgcactgaa cggtatcctg cgtggtgttc agcagcctat tatcgaaaaa 2160 ctggcgaatg attatgcccg taaaatcgac gaactgggcg gtccgcaggc ttattttgaa 2220 aaaaacctgc aggcgcgcca cgaacagctg gcaaacagcg acggcctgcg caaaatgctg 2280 gcagacctgc aagctggttg gaacgcgtct tctgtgatcg gcgtgcagac caccgaaatt 2340 agcaaatctg cgctggaact ggctgcaatt actggcaacg cggataacct gaaaagcgtt 2400 gatgtttttg tcgatcgctt cgttcagggc gagcgcgttg ctggtcagcc ggttgttctg 2460 gacgttgcgg caggcggcat cgacatcgct agccgcaagg gcgagcgtcc ggctctgact 2520 ttcattaccc cgctggcagc tccgggtgaa gaacagcgtc gccgtaccaa gactggtaaa 2580 agcgagttca ccaccttcgt ggaaatcgta ggtaaacagg accgctggcg tattcgcgac 2640 ggtgcggcgg acaccaccat cgacctggca aaagttgttt cccaactggt agatgctaac 2700 ggcgtgctga aacattctat taaactggat gtaatcggcg gtgacggcga tgacgttgta 2760 ctggcgaacg cgtctcgtat ccactatgac ggcggcgcag gtaccaacac ggtttcctac 2820 gcagcgctgg gccgccagga ttccatcact gttagcgccg atggcgaacg tttcaacgtg 2880 cgtaaacagc tgaataacgc aaacgtctat cgtgagggtg tagctaccca gaccaccgcg 2940 tacggtaagc gtaccgaaaa cgttcagtat cgtcacgtgg aactggcacg tgtgggtcag 3000 ctggtagagg tggatacgct ggaacacgtg cagcacatca tcggtggcgc cggtaacgat 3060 tccattactg gtaacgctca cgacaacttc ctggcaggtg gttctggtga tgatcgtctg 3120 gacggtggtg cgggtaacga tacgctggta ggcggcgaag gtcagaacac cgtaattggt 3180 ggtgccggtg acgacgtttt cctgcaggat ctgggcgttt ggagcaacca gctggatggc 3240 ggtgccggtg ttgacacggt taagtataac gttcaccagc cgtctgaaga gcgcctggaa 3300 cgtatgggtg acactggtat tcatgccgat ctgcagaaag gcactgttga aaaatggcct 3360 gcgctgaacc tgttctctgt ggaccatgtt aagaacattg aaaacctgca tggctctcgc 3420 ctgaacgacc gtatcgctgg tgacgaccag gataacgaac tgtggggtca tgacggcaat 3480 gataccattc gcggtcgtgg cggcgacgat attctgcgtg gcggtctggg cctggatacc 3540 ctgtatggtg aagatggtaa cgatattttc ctgcaagacg atgaaacggt atctgatgac 3600 atcgacggtg gtgcaggcct ggacaccgta gattacagcg ctatgatcca tccgggtcgt 3660 atcgtagctc cgcacgagta cggcttcggt atcgaggcgg acctgtctcg tgaatgggtt 3720 cgtaaagcgt ccgcgctggg tgtggactac tacgataacg ttcgtaacgt ggaaaacgtg 3780 atcggtacct ccatgaaaga cgtgctgatt ggcgacgcac aggccaacac tctgatgggc 3840 cagggcggtg atgacacggt tcgcggcggc gacggtgatg acctgctgtt cggtggtgac 3900 ggcaacgaca tgctgtacgg cgacgcgggc aacgacaccc tgtacggcgg tctgggtgac 3960 gacactctgg aaggtggtgc aggtaacgac tggttcggcc aaacccaggc acgcgaacac 4020 gacgtgctgc gtggtggcga cggcgtagac accgtggatt actcccaaac tggcgctcac 4080 gcgggtatcg cggccggtcg tatcggtctg ggcattctgg ccgatctggg tgccggccgt 4140 gtcgacaaac tgggtgaggc tggctctagc gcctatgata ctgtttccgg catcgaaaac 4200 gtggtaggca ctgaactggc agatcgtatc acgggtgacg cgcaagcgaa cgttctgcgt 4260 ggtgctggcg gtgcagacgt gctggcgggt ggtgaaggcg acgacgtact gctgggcggt 4320 gacggtgacg atcagctgag cggtgatgcg ggtcgtgacc gtctgtacgg tgaagcaggt 4380 gacgattggt tcttccagga cgctgctaac gctggcaacc tgctggacgg cggcgatggc 4440 cgtgacactg ttgacttcag cggtccgggt cgcggtctgg acgcaggcgc gaaaggcgtt 4500 ttcctgagcc tgggtaaggg tttcgcatct ctgatggacg aaccagaaac cagcaatgtc 4560 ctgcgtaaca tcgaaaacgc tgtcggttcc gcacgcgatg atgttctgat tggcgatgct 4620 ggtgccaatg ttctgaacgg tctggcgggt aatgatgtac tgtctggtgg cgctggtgat 4680 gatgtcctgc tgggtgatga gggcagcgat ctgctgtccg gcgatgccgg caacgacgat 4740 ctgttcggtg gccaaggtga tgatacttac ctgttcggcg ttggctatgg tcatgacacc 4800 atctatgagt ctggtggcgg ccacgatacg attcgtatta atgcaggtgc tgaccaactg 4860 tggtttgcac gtcagggtaa cgatctggaa attcgcatcc tgggtactga tgacgctctg 4920 accgtacacg actggtaccg cgatgcggat caccgcgtag aaatcatcca tgcggctaac 4980 caagctgtag accaggctgg tattgaaaaa ctggtagaag cgatggcaca gtatccggac 5040 ccaggtgcgg ctgctgcagc acctccagcg gctcgtgtgc cggataccct gatgcagagc 5100 ctggccgtca attggcgtta a 5121 <210> 70 <211> 85 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PEP225 complete sequence 85 aa (Hpv31E742-98/1-28) <400> 70 Ala Gly Gln Ala Lys Pro Asp Thr Ser Asn Tyr Asn Ile Val Thr Phe 1 5 10 15 Cys Cys Gln Cys Glu Ser Thr Leu Arg Leu Cys Val Gln Ser Thr Gln 20 25 30 Val Asp Ile Arg Ile Leu Gln Glu Leu Leu Met Gly Ser Phe Gly Ile 35 40 45 Val Cys Pro Asn Cys Ser Thr Arg Leu Met Arg Gly Glu Thr Pro Thr 50 55 60 Leu Gln Asp Tyr Val Leu Asp Leu Gln Pro Glu Ala Thr Asp Leu Tyr 65 70 75 80 Cys Tyr Glu Gln Leu 85 <210> 71 <211> 84 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PEP226 complete sequence 84 aa (Hpv33E743-97/1-29) <400> 71 Gly Gln Ala Gln Pro Ala Thr Ala Asp Tyr Tyr Ile Val Thr Cys Cys 1 5 10 15 His Thr Cys Asn Thr Thr Val Arg Leu Cys Val Asn Ser Thr Ala Ser 20 25 30 Asp Leu Arg Thr Ile Gln Gln Leu Leu Met Gly Thr Val Asn Ile Val 35 40 45 Cys Pro Ser Cys Ala Gln Leu Met Arg Gly His Lys Pro Thr Leu Lys 50 55 60 Glu Tyr Ile Leu Asp Leu Tyr Pro Glu Pro Thr Asp Leu Tyr Cys Tyr 65 70 75 80 Glu Gln Leu Ser <210> 72 <211> 95 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PEP215 complete sequence 95aa (HPV45E7 44-106/1-32) <400> 72 Gly Val Ser His Ala Gln Leu Pro Ala Arg Arg Ala Glu Pro Gln Arg 1 5 10 15 His Lys Ile Leu Cys Val Cys Cys Lys Cys Asp Gly Arg Ile Glu Leu 20 25 30 Thr Val Glu Ser Ser Ala Glu Asp Leu Arg Thr Leu Gln Gln Leu Phe 35 40 45 Leu Ser Thr Leu Ser Phe Val Cys Pro Trp Cys Ala Thr Asn Gln Met 50 55 60 His Gly Pro Arg Glu Thr Leu Gln Glu Ile Val Leu His Leu Glu Pro 65 70 75 80 Gln Asn Glu Leu Asp Pro Val Asp Leu Leu Cys Tyr Glu Gln Leu 85 90 95 <210> 73 <211> 84 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PEP235 complete sequence 84 aa (Hpv52E745-99/1-29 modified to deleted an auto-immune antigen) <400> 73 Gly Gln Ala Glu Gln Ala Thr Ser Asn Tyr Tyr Ile Val Thr Tyr Cys 1 5 10 15 His Ser Cys Asp Ser Thr Leu Arg Leu Cys Ile His Ser Thr Ala Thr 20 25 30 Asp Leu Arg Thr Leu Gln Gln Leu Leu Met Gly Thr Leu Gln Val Val 35 40 45 Cys Pro Gly Cys Ala Arg Leu Met Arg Gly Asp Lys Ala Thr Ile Lys 50 55 60 Asp Tyr Ile Leu Asp Leu Gln Pro Glu Thr Thr Asp Leu His Cys Tyr 65 70 75 80 Glu Gln Leu Gly <210> 74 <211> 84 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PEP228 complete sequence 84 aa (HPV58E744-98/1-29) <400> 74 Gly Gln Ala Gln Pro Ala Thr Ala Asn Tyr Tyr Ile Val Thr Cys Cys 1 5 10 15 Tyr Thr Cys Asp Thr Thr Val Arg Leu Cys Ile Asn Ser Thr Thr Thr 20 25 30 Asp Val Arg Thr Leu Gln Gln Leu Leu Met Gly Thr Cys Thr Ile Val 35 40 45 Cys Pro Ser Cys Ala Gln Gln Met Arg Gly Asn Asn Pro Thr Leu Arg 50 55 60 Glu Tyr Ile Leu Asp Leu His Pro Glu Pro Thr Asp Leu Phe Cys Tyr 65 70 75 80 Glu Gln Leu Cys <210> 75 <211> 255 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DNA SEQUENCE OF PEP225 (Hpv31E742-98/1-28) >pep225 complete sequence 255 bp <400> 75 gcgggtcaag ccaaaccgga tacctccaac tacaacattg tgaccttctg ttgtcaatgc 60 gagagcacgc tgcgtctgtg tgttcaaagc acccaggttg acattcgtat cctgcaagaa 120 ctgctgatgg gctcttttgg catcgtctgc ccaaattgca gcactcgcct gatgcgtggt 180 gaaacgccga ccctgcagga ttatgtgttg gacttgcagc cggaggcaac ggacctgtac 240 tgctatgagc agctg 255 <210> 76 <211> 252 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DNA SEQUENCE OF PEP226 (Hpv33E743-97/1-29) >pep226 complete sequence 252 bp <400> 76 ggtcaggcgc aaccggccac ggcggactac tatatcgtga cctgttgcca cacctgcaac 60 actaccgttc gcttgtgtgt caatagcacc gcttccgatc tgcgtaccat tcaacaactg 120 ctgatgggta ccgttaacat cgtgtgcccg agctgcgcac agctgatgcg tggccataag 180 ccgacgctga aagagtatat tctggacctg tacccagagc cgacggattt gtactgttat 240 gaacagctga gc 252 <210> 77 <211> 285 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DNA SEQUENCE OF PEP215 (HPV45E7 44-106/1-32) >pep215 complete sequence 285 bp <400> 77 ggtgtttctc acgcacaact gccagcgcgt cgcgcggaac cgcaacgtca taagatcctg 60 tgtgtgtgct gcaaatgcga cggccgcatt gagctgactg tagaatcctc tgctgaagac 120 ctgcgtacgc tgcagcagct gtttctgagc accctgtctt tcgtctgtcc ttggtgcgcc 180 accaaccaga tgcacggtcc gcgtgagacc ctgcaggaaa tcgtgctgca cctggaaccg 240 cagaatgaac tggacccggt tgatctgctg tgttacgaac agctg 285 <210> 78 <211> 252 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DNA SEQUENCE OF PEP235 (Hpv52E745-99/1-29 modified to delete an auto-immune antigen >pep235 complete sequence 252 bp <400> 78 ggccaggcgg agcaggcgac gagcaactac tacattgtca cgtattgcca ttcctgtgat 60 agcactctgc gtctgtgtat ccacagcacg gcaaccgatc tgcgtacctt gcaacaactg 120 ctgatgggca ccctgcaggt ggtttgtccg ggttgcgctc gcctgatgcg tggtgacaag 180 gccaccatta aagattacat cctggacttg caaccggaaa ccaccgacct gcactgctat 240 gagcagctgg gt 252 <210> 79 <211> 252 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DNA SEQUENCE OF PEP228 (HPV58E744-98/1-29) >pep228 complete sequence 252 bp <400> 79 ggccaggcgc agccagcgac ggccaattac tacatcgtta cctgttgcta tacgtgcgat 60 actaccgtcc gtctgtgcat taacagcacc accacggacg tgcgtaccct gcaacagctg 120 ctgatgggta cctgcacgat tgtttgtccg agctgtgcac aacaaatgcg cggtaataac 180 ccgaccttgc gtgagtatat cttggacctg cacccggagc cgaccgatct gttctgttac 240 gaacagctgt gc 252

Claims (26)

1) 서열 번호 2에 개시된 보르데텔라 페르투시스 CyaA 단백질의 단편으로서, 상기 단편의 서열은 서열 번호 2의 첫 번째 잔기로 시작하여 서열 번호 2의 위치 183 내지 위치 227에 위치한 잔기로 끝나는 것인 단편,에 융합된
2) HPV의 E7 항원 또는 그의 항원성 단편을 포함하고, 음의 정전하를 갖는 이종 폴리펩티드, 에 융합된
3) 서열 번호 2에 개시된 보르데텔라 페르투시스(Bordetella pertussis) CyaA 단백질의 단편으로서, 상기 단편의 서열은 서열 번호 2의 위치 321 내지 위치 387에 위치한 잔기로 시작하여 서열 번호 2의 마지막 잔기로 끝나는 것인 단편
을 포함하거나 이들로 이루어지는 CyaA 유래 단백질을 코딩하는 키메라 폴리뉴클레오티드.
제1항에 있어서, 보르데텔라 페르투시스 균주의 CyaC 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 3' 말단에 포함하는 키메라 폴리뉴클레오티드.
제1항에 있어서,
1) 5'에서 3'으로, (a) 서열 번호 2의 잔기 1 내지 227로 이루어지는 폴리펩티드 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드, (b) HPV의 E7 항원 또는 그의 항원성 단편을 포함하는 이종 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드로서, 상기 이종 폴리펩티드는 음의 정전하를 갖는 것인 폴리뉴클레오티드 및 (c) 서열 번호 2의 잔기 321 내지 1706으로 이루어지는 폴리펩티드 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하거나 이들로 이루어지는 폴리뉴클레오티드;
2) 5'에서 3'으로, (a) 서열 번호 2의 잔기 1 내지 183으로 이루어지는 폴리펩티드 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드, (b) HPV의 E7 항원 또는 그의 항원성 단편을 포함하는 이종 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드로서, 상기 이종 폴리펩티드는 음의 정전하를 갖는 것인 폴리뉴클레오티드 및 (c) 서열 번호 2의 잔기 387 내지 1706으로 이루어지는 폴리펩티드 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하거나 이들로 이루어지는 폴리뉴클레오티드;
3) 5'에서 3'으로, (a) 서열 번호 2의 잔기 1 내지 227로 이루어지는 폴리펩티드 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드, (b) HPV의 E7 항원 또는 그의 항원성 단편을 포함하는 이종 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드로서, 상기 이종 폴리펩티드는 음의 정전하를 갖는 것인 폴리뉴클레오티드 및 (c) 서열 번호 2의 잔기 387 내지 1706으로 이루어지는 폴리펩티드 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하거나 이들로 이루어지는 폴리뉴클레오티드;
4) 5'에서 3'으로, (a) 서열 번호 2의 잔기 1 내지 183으로 이루어지는 폴리펩티드 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드, (b) HPV의 E7 항원 또는 그의 항원성 단편을 포함하는 이종 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드로서, 상기 이종 폴리펩티드는 음의 정전하를 갖는 것인 폴리뉴클레오티드 및 (c) 서열 번호 2의 잔기 321 내지 1706으로 이루어지는 폴리펩티드 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하거나 이들로 이루어지는 폴리뉴클레오티드;
로 이루어지는 군으로부터 선택되는 키메라 폴리뉴클레오티드.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 따른 키메라 폴리뉴클레오티드, 및 발현 조절 서열을 포함하고, 보르데텔라 균주의 CyaC 코딩 서열을 추가로 포함하는 벡터.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 따른 키메라 폴리뉴클레오티드를 포함하는 세포 배양물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 따른 키메라 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩되는 CyaA 유래 단백질.
N-말단에서 C-말단으로, (a) 서열 번호 2에 개시된 보르데텔라 페르투시스 CyaA 단백질의 단편으로서, 상기 단편의 서열은 서열 번호 2의 첫 번째 잔기로 시작하여 서열 번호 2의 위치 183 내지 위치 227에 위치한 잔기로 끝나는 것인 단편, (b) HPV의 E7 항원 또는 그의 항원성 단편을 포함하고, 음의 정전하를 갖는 이종 폴리펩티드, 및 (c) 서열 번호 2에 개시된 보르데텔라 페르투시스 CyaA 단백질의 단편으로서, 상기 단편의 서열은 서열 번호 2의 위치 321 내지 위치 387에 위치한 잔기로 시작하여 서열 번호 2의 마지막 잔기로 끝나는 것인 단편을 포함하거나 이들로 이루어지는 키메라 단백질.
제7항에 있어서,
1) N-말단에서 C-말단으로, (a) 서열 번호 2의 잔기 1 내지 227로 이루어지는 단편, (b) HPV의 E7 항원 또는 그의 항원성 단편을 포함하고, 음의 정전하를 갖는 이종 폴리펩티드; 및 (c) 서열 번호 2의 잔기 321 내지 1706으로 이루어지는 단편을 포함하거나 이들로 이루어지는 단백질;
2) N-말단에서 C-말단으로, (a) 서열 번호 2의 잔기 1 내지 183으로 이루어지는 단편, (b) HPV의 E7 항원 또는 그의 항원성 단편을 포함하고, 음의 정전하를 갖는 이종 폴리펩티드; 및 (c) 서열 번호 2의 잔기 387 내지 1706으로 이루어지는 단편을 포함하거나 이들로 이루어지는 단백질
로 이루어지는 군으로부터 선택되는 키메라 단백질.
제7항에 있어서, 상기 이종 폴리펩티드가 하나 이상의 에피토프를 보유하는 것인 키메라 단백질.
제9항에 있어서, 상기 이종 폴리펩티드가 하나 이상의 CD8+ 에피토프 및/또는 하나 이상의 CD4+ 에피토프를 보유하는 것인 키메라 단백질.
제7항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 이종 폴리펩티드가 HPV의 E7 항원 또는 그의 항원성 단편을 포함하고, 9 내지 500, 또는 20 내지 500, 또는 50 내지 500, 또는 100 내지 500 개 아미노산 잔기 범위의 크기를 갖는 것인 키메라 단백질.
제7항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 이종 폴리펩티드가 HPV의 E7 항원 또는 그의 항원성 단편을 포함하고, 서열 번호 70, 서열 번호 71, 서열 번호 72, 서열 번호 73 또는 서열 번호 74의 서열을 갖는 것인 키메라 단백질.
제7항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 키메라 단백질 및 적합한 약학적 비이클과, 1종 이상의 애쥬번트를 포함하는, HPV에 대한 예방 면역 반응 또는 치료 면역 반응을 유도하기 위한 약학 조성물.
제7항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 키메라 단백질을 포함하는, HPV에 의한 병원체 감염 또는 HPV에 의한 감염과 관련한 발암성 질환의 예방 또는 치료를 위한 약학 조성물.
(i) 폴리펩티드(들)에 포함된 제1 군의 에피토프에 대하여 T 세포 면역 반응을 유발함으로써, 포유동물 숙주에서 진단된 제1의 결정된 병리학적 상태(들)의 면역요법 치료에, 그리고 (ii) 상기 폴리펩티드(들)에 포함된 제2 군의 에피토프에 대하여 T 세포 기억 면역 반응을 유발함으로써, 동일한 포유동물 숙주에서 제2의 결정된 병리학적 상태(들)에 대한 예방에 사용하기 위한, 제13항에 따른 약학 조성물로서, 상기 면역 반응은 상기 키메라 단백질 또는 상기 조성물이 상기 숙주로 투여된 후 얻어지고, 제2의 결정된 병리학적 상태(들)에 대한 상기 예방은 상기 제2 군의 에피토프가 상기 투여된 벡터에 담지된 폴리펩티드(들)에 포함되지 않은 경우 관찰되지 않는 것인 약학 조성물.
(a) 서열 번호 2에 개시된 보르데텔라 페르투시스 CyaA를 코딩하는 폴리뉴클레오티드로부터, 처음 3개의 뉴클레오티드가 서열 번호 2의 잔기 184 내지 잔기 228에 위치한 아미노산 잔기를 코딩하고 마지막 3개의 뉴클레오티드가 서열 번호 2의 잔기 320 내지 잔기 386에 위치한 아미노산 잔기를 코딩하는 것인 뉴클레오티드 단편을 결실시키는 단계;
(b) (a)에서 얻어진 폴리뉴클레오티드 내 결실된 뉴클레오티드 단편 부위에 이종 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 삽입하는 단계로서, 상기 이종 폴리펩티드는 HPV의 E7 항원 또는 그의 항원성 단편을 포함하고, 음의 정전하를 가지며, 여기서 단계 (a) 및 (b)는 임의의 순서로 또는 동시에 수행될 수 있고, 그에 의해 제1항에 따른 키메라 폴리뉴클레오티드를 회수하는 것인 단계,
(c) (b)에서 얻어진 폴리뉴클레오티드를 세포에서 발현시키는 단계; 및
(d) 발현된 키메라 단백질을 회수하는 단계
를 포함하는 제7항에 따른 키메라 단백질의 제조 방법.
제16항에 있어서, 키메라 폴리뉴클레오티드 구조물 내에 단계 (b)에서 얻어진 폴리뉴클레오티드 및 CyaC 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 통합시키는 단계를 포함하며, 여기서 키메라 폴리뉴클레오티드 구조물은, 상기 통합 후에, 얻어진 키메라 폴리뉴클레오티드가, 5' 말단에서 3' 말단으로, 단계 (b)의 폴리뉴클레오티드 구조물에 이어진 보르데텔라 페르투시스 균주의 CyaC 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 구조물을 포함하거나 함유하도록, 단계 (b)에서 얻어진 폴리뉴클레오티드 및 CyaC 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 것인 방법.
제17항에 있어서, 상기 단계 (a)가, 서열 번호 2에 개시된 보르데텔라 페르투시스 CyaA를 코딩하는 폴리뉴클레오티드로부터, 서열 번호 2의 잔기 228 내지 320을 코딩하는 뉴클레오티드 단편, 또는 서열 번호 2의 잔기 184 내지 386을 코딩하는 뉴클레오티드 단편, 또는 서열 번호 2의 잔기 228 내지 386을 코딩하는 뉴클레오티드 단편, 또는 서열 번호 2의 잔기 184 내지 320을 코딩하는 뉴클레오티드 단편을 결실시키는 것으로 이루어지는 것인 방법.
제17항에 있어서, 상기 단계 (a)가 서열 번호 1 또는 서열 번호 69에 개시된 폴리뉴클레오티드로부터, 서열 번호 1 또는 서열 번호 69의 뉴클레오티드 682 내지 960으로 이루어지는 뉴클레오티드 단편, 또는 서열 번호 1 또는 서열 번호 69의 뉴클레오티드 550 내지 1158로 이루어지는 뉴클레오티드 단편, 또는 서열 번호 1 또는 서열 번호 69의 뉴클레오티드 682 내지 1158로 이루어지는 뉴클레오티드 단편, 또는 서열 번호 1 또는 서열 번호 69의 뉴클레오티드 550 내지 960으로 이루어지는 뉴클레오티드 단편을 결실시키는 것으로 이루어지는 것인 방법.
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제
KR1020157004541A 2012-07-23 2013-07-23 이종 폴리펩티드를 포함하는 ＣｙａＡ에 기초한 키메라 단백질 및 면역 반응의 유도에 있어서의 그의 용도 KR102148413B1 (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP12305897.6 2012-07-23
EP12305897.6A EP2690172A1 (en) 2012-07-23 2012-07-23 CYAA-based chimeric proteins comprising a heterologous polypeptide and their uses in the induction of immune responses
PCT/EP2013/065546 WO2014016310A1 (en) 2012-07-23 2013-07-23 Cyaa-based chimeric proteins comprising a heterologous polypeptide and their uses in the induction of immune responses

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20150032341A KR20150032341A (ko) 2015-03-25
KR102148413B1 true KR102148413B1 (ko) 2020-08-26

Family

ID=48832934

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020157004541A KR102148413B1 (ko) 2012-07-23 2013-07-23 이종 폴리펩티드를 포함하는 ＣｙａＡ에 기초한 키메라 단백질 및 면역 반응의 유도에 있어서의 그의 용도

Country Status (13)

Country Link
US (2) US9499809B2 (ko)
EP (2) EP2690172A1 (ko)
JP (3) JP2015524270A (ko)
KR (1) KR102148413B1 (ko)
CN (1) CN104662152B (ko)
AU (1) AU2013295045B2 (ko)
BR (1) BR112015001350A2 (ko)
CA (1) CA2879990C (ko)
ES (1) ES2780525T3 (ko)
HK (1) HK1208048A1 (ko)
MX (1) MX365560B (ko)
RU (1) RU2015100211A (ko)
WO (1) WO2014016310A1 (ko)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105481953B (zh) * 2016-02-02 2018-02-13 成都天邦生物制品有限公司 作为猪繁殖与呼吸综合征病毒疫苗抗原的靶细胞特异性融合蛋白和疫苗组合物
EP3323424A1 (en) * 2016-11-17 2018-05-23 Cyanimal IP Cyaa polypeptides as immune enhancer
WO2018091613A1 (en) 2016-11-17 2018-05-24 Ecole Nationale Vétérinaire de Toulouse Immunogenic and vaccine compositions for use against bordetella bronchiseptica infection
EP3323426A1 (en) 2016-11-17 2018-05-23 Ecole Nationale Vétérinaire de Toulouse Immunogenic and vaccine compositions for use against bordetella bronchiseptica infection
EP3342421A1 (en) * 2016-12-27 2018-07-04 Genticel Immunogenic composition comprising cyaa-derived polypeptide promoting a th1/th17-oriented immune response

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH01209817A (ja) 1988-02-17 1989-08-23 Yamaha Corp 浮動少数点形ディジタル・アナログ変換器
ATE438409T1 (de) * 2000-09-15 2009-08-15 Pasteur Institut Proteinhaltigen vektoren zur einführung von moleküle in cd11b exprimirende zellen
EP1489092A1 (en) 2003-06-18 2004-12-22 Institut Pasteur Modified Bordetella adenylate cyclase comprising or lacking CD11b/CD18 interaction domain and uses thereof
PL1684801T3 (pl) 2003-11-21 2010-07-30 Pasteur Institut Rekombinowana toksyna cyklazy adenylanowej indukuje odpowiedzi komórek T przeciwko antygenom nowotworowym
ES2293178T3 (es) * 2004-03-18 2008-03-16 Institut Pasteur Proteina recombinante que contiene epitopos del papilomavirus humano insertados en un proteina adenilato ciclasa o un fragmento de la misma y usos terapeuticos de la misma.
EP1894941A1 (en) 2006-09-01 2008-03-05 Institut Pasteur Treatment of cervical carcinoma with a recombinant adenylate cyclase carrying HPV antigens
RU2448729C2 (ru) 2006-09-01 2012-04-27 Жантисель Композиции, вызывающие специфический ответ цитотоксических т-лимфоцитов, включающие лимфо-аблативное соединение и молекулу, содержащую антигенные последовательности и нацеленную на специализированные антиген-презентирующие клетки
EP2326953B1 (en) 2008-07-22 2018-03-21 Promega Corporation Adp detection based luminescent phosphotransferase or atp hydrolase assay
WO2010136231A1 (en) * 2009-03-23 2010-12-02 Institut Pasteur MUTANT CyaA POLYPEPTIDES AND POLYPEPTIDE DERIVATIVES SUITABLE FOR THE DELIVERY OF IMMUNOGENIC MOLECULES INTO A CELL
EP2478915A1 (en) * 2011-01-24 2012-07-25 Genticel CyaA-carried polypeptide(s) and use to induce both therapeutic and prophylactic immune responses
EP2689786A1 (en) * 2012-07-23 2014-01-29 Genticel HPV/CYAA-based chimeric proteins and their uses in the induction of immune responses against HPV infection and HPV-induced disorders

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
J. Holubova 등, Infection and Immunity, Vol.80, NO.3, p.1181-1192(2012.01.03.)*
X. Preville et al., Cancer Research, Vol.65, p.641-649 (2005)

Also Published As

Publication number Publication date
CN104662152B (zh) 2020-06-12
EP2875130A1 (en) 2015-05-27
ES2780525T3 (es) 2020-08-26
WO2014016310A1 (en) 2014-01-30
AU2013295045A1 (en) 2015-02-05
BR112015001350A2 (pt) 2017-08-01
JP2019013229A (ja) 2019-01-31
MX365560B (es) 2019-06-07
US20150184143A1 (en) 2015-07-02
CA2879990C (en) 2021-11-16
KR20150032341A (ko) 2015-03-25
JP2022046617A (ja) 2022-03-23
CA2879990A1 (en) 2014-01-30
JP2015524270A (ja) 2015-08-24
EP2690172A1 (en) 2014-01-29
RU2015100211A3 (ko) 2018-12-20
US20170096458A1 (en) 2017-04-06
RU2015100211A (ru) 2018-12-20
EP2875130B1 (en) 2020-01-01
US9499809B2 (en) 2016-11-22
US9982024B2 (en) 2018-05-29
HK1208048A1 (en) 2016-02-19
MX2015001018A (es) 2015-07-14
AU2013295045B2 (en) 2019-05-02
CN104662152A (zh) 2015-05-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102148413B1 (ko) 이종 폴리펩티드를 포함하는 ＣｙａＡ에 기초한 키메라 단백질 및 면역 반응의 유도에 있어서의 그의 용도
CZ298347B6 (cs) Fúzní protein z rodiny MAGE, kódová sekvence nukleové kyseliny, vektor, hostitelská bunka, vakcina a použití fúzního proteinu pro výrobu vakciny
CA2674552A1 (en) Vaccine
EP1943344A2 (en) Methods for stimulating an immune response using bacterial antigen delivery system
AU2013295047B2 (en) HPV/CyaA-based chimeric proteins and their uses in the induction of immune responses against HPV infection and HPV-induced disorders
JP2010532656A (ja) 癌退縮抗原ｎｙ−ｅｓｏ−１およびｌａｇｅ−１を含む融合タンパク質
US8309096B2 (en) Fusion protein
Hu et al. Japanese flounder (Paralichthys olivaceus) Hsp70: adjuvant effect and its dependence on the intrinsic ATPase activity
WO2016091912A1 (en) Neisseria meningitidis trypsin-like serine protease polypeptides and compositions thereof
KR101713635B1 (ko) 비브리오 패혈증균의 시스테인 단백질 분해효소 도메인 유래 재조합 단백질 및 이의 용도
AU2008206463B2 (en) Fusion proteins comprising the tumor rejection antigens NY-ESO-1 and LAGE-1

Legal Events

Date Code Title Description
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant