KR102122586B1 - 괭생이모자반 추출박을 포함하는 면역증강용 사료첨가제 조성물 및 그 제조방법 - Google Patents

괭생이모자반 추출박을 포함하는 면역증강용 사료첨가제 조성물 및 그 제조방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 괭생이모자반의 부산물로 수반되는 추출박(찌꺼기)을 양식어류, 조류, 가축류 등의 사료로써 제공하는 괭생이모자반 추출박을 포함하는 면역증강용 사료첨가제 조성물 및 그 제조방법에 관한 것이다. 이를 위해 본 발명은, 괭생이모자반(Sargassum horneri) 추출박을 유효성분으로 포함하는 사료 조성물을 제공하는 것을 특징으로 한다. 또한, 상기 사료 조성물은 괭생이모자반을 초임계 추출한 다음 남은 찌꺼기인 추출박을 얻는 단계; 및 상기 추출박을 열수추출 또는 용매추출하는 단계를 거쳐 제조된 것을 특징으로 한다.

Description

괭생이모자반 추출박을 포함하는 면역증강용 사료첨가제 조성물 및 그 제조방법{Feed additive compositions for immuno-enhancement comprising sargassum horneri garbage and methods for their production}
본 발명은 괭생이모자반의 부산물로 수반되는 추출박(찌꺼기)을 양식어류, 조류, 가축류 등의 사료로써 제공하는 괭생이모자반 추출박을 포함하는 면역증강용 사료첨가제 조성물 및 그 제조방법에 관한 것이다.
면역질환은 포유류 면역계의 구성성분들이 포유류의 병리상태를 야기 또는 매개하거나 기타 공헌하는 질환으로서, 특히 염증성 장애는 국내뿐만 아니라, 전 세계적으로 중요한 건강 문제 중 하나이다.
이러한 염증성 장애의 원인은 박테리아, 바이러스 및 기생충과 같은 감염성 원인, 화상 또는 방사선 조사와 같은 물리적 원인, 독소·약물 또는 산업적 제제와 같은 화학약품, 알레르기, 또는 산화성 스트레스와 연관된 상태일 수 있다.
한편, 괭생이모자반(Sargassum horneri)은 모자반목 모자반과에 속하는 갈조류로 우리나라 동남해안 및 일본의 전 연안에서 서식하고 있다. 괭생이모자반에 대한 현재까지의 연구를 살펴보면, 괭생이모자반 추출물이 골다공증을 방지하는 기능이 있고(Yakugaku Zasshi 2006, 126, 1117-1137), 혈액응고를 방지하는 효과가 있다고 보고되었다(Bioresour, Technol, 2007, 98, 1711-1716). 또한, 괭생이모자반의 열수추출물이 헤르페스 바이러스(Herpes simplex virus type Ⅰ)의 억제 효과가 있음이 보고되었다(Cham Pharm. Bull. 2001. 49, 484-485; Biol, Pharm. Bull, 1998, 21, 730-734).
이러한 배경하에 본 발명자들은 괭생이모자반 추출물의 면역증강 효과를 확인하고 괭생이모자반 추출물을 함유하는 면역증강용 조성물을 개시한 바 있다. 그러나 괭생이모자반 추출물을 제조 후 수반되는 부산물인 괭생이모자반 추출박(찌꺼기)은 그대로 폐기되며, 이는 잘 부패되지 않아 환경부하 문제가 있으나, 별다른 재활용 방안에 대해서는 제시되지 않고 있다.
따라서, 본 발명자들은 괭생이모자반 추출물 제조 후 수반되는 부산물인 추출박을 재활용할 수 있는 방안에 대해 고찰하던 중, 마우스(mouse)에 괭생이모자반 추출박을 경구 투여한 결과, 비장세포를 활성화시켜 사이토카인 분비를 증가시키고, T helper 세포의 분포를 증가시키는 것으로부터 괭생이모자반 추출박을 사료첨가제로 효과적으로 재활용할 수 있음을 발견하고 본 발명을 완성하였다.
한국 공개특허 제10-2014-0083493호(2014.07.04. 참모자반 추출물 또는 괭생이모자반 추출물을 유효성분으로 함유하는 항비만 조성물) 한국 등록특허 제10-1613693호(2016.04.12. 괭생이 모자반 추출물을 유효성분으로 포함하는 아토피성 피부질환 예방 또는 치료용 조성물 및 이의 제조방법) 한국 등록특허 제10-1918239호(2018.11.07. 괭생이 모자반 가수분해물을 유효성분으로 함유하는 고혈압 예방 또는 치료용 약학적 조성물)
본 발명의 목적은, 부산물의 일종인 괭생이모자반 추출박을 양식어류, 조류, 가축류 등의 사육과정에 급여하여 면역력 증진을 도모함으로써 양질의 사육을 가능토록 함과 동시에 폐기되는 추출박의 생산적인 처리가 가능한 괭생이모자반 추출박을 포함하는 면역증강용 사료첨가제 조성물 및 그 제조방법을 제공함에 있다.
상기의 목적을 달성하기 위한 본 발명의 과제 해결 수단 구성은,
괭생이모자반 추출박을 포함하는 사료첨가제 조성물의 제조방법에 있어서,
상기 사료첨가제 조성물은, 괭생이모자반을 초임계 추출한 다음 남은 찌꺼기인 추출박을 얻는 단계; 및 상기 추출박을 열수추출 또는 용매추출하는 단계를 거쳐 제조하되,
상기 괭생이모자반의 초임계 추출은,
a) 추출 원물인 괭생이모자반을 세척 및 자숙하는 단계;
b) 상기 a)단계에서 세척 및 자숙된 괭생이모자반을 수분함량이 10% 이내가 되도록 건조한 다음, 1 - 5㎜ 입경으로 분쇄하여 괭생이모자반 분말을 얻는 단계;
c) 상기 b)단계의 괭생이모자반 분말을 초임계유체 추출기에 투입하고, 45 - 50℃의 온도로 300 - 400bar의 압력하에서 250 - 300분 동안 추출하여 초임계 추출물을 얻는 단계; 및
d) 상기 c)단계의 초임계 추출물을 감압농축기를 이용하여 45 - 55℃의 온도에서 농축하는 단계로 이루어진다.
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본 발명에 따른 괭생이모자반 추출박을 포함하는 면역증강용 사료첨가제 조성물 및 그 제조방법은,
첫째, 양식어류, 조류, 가축류 등의 사육과정에 급여하여 면역력 증진을 도모하고,
둘째, 질병으로부터 건강하게 사육되면서 증체량이 증가되어 농가 소득증대에 일조할 수 있으며,
셋째, 대부분 폐기되는 괭생이모자반 추출박을 양식어류, 조류, 가축류 등의 사료로 재활용함에 따라 환경과 생산적 측면에서 고무적이다.
도 1은 본 발명의 바람직한 일 실시예에 따른 괭생이모자반 추출박 처리에 따른 비장세포 증식능을 나타낸 그래프.
도 2는 본 발명의 바람직한 일 실시예에 따른 괭생이모자반 추출박 처리에 따른 비장세포 사이토카인 분비 유도능을 나타낸 그래프.
도 3은 본 발명의 바람직한 일 실시예에 따른 괭생이모자반 추출박 투여에 따른 마우스의 비장세포 증식능을 평가한 그래프.
도 4는 본 발명의 바람직한 일 실시예에 따른 괭생이모자반 추출박 투여에 따른 마우스의 비장세포 사이토카인(IL-2, IFN-γ) 분비 유도능을 나타낸 그래프.
도 5는 본 발명의 바람직한 일 실시예에 따른 괭생이모자반 추출박 투여에 따른 마우스의 비장내 CD4 T helper 세포의 분포 변화를 나타낸 그래프.
이하, 본 발명에 따른 괭생이모자반 추출박을 포함하는 면역증강용 사료첨가제 조성물 및 그 제조방법에 대하여 상세하게 설명한다.
본 발명은 괭생이모자반으로부터 수반되는 부산물인 추출박을 유효성분으로 하여 양식어류, 조류, 가축류 등의 면역활성을 강화할 수 있도록 하는 사료첨가제 조성물 및 그 제조방법에 관한 것이다.
상기 괭생이모자반은 모자반목 모자반과에 속하는 갈조류로, 골다공증 예방, 혈액응고 방지, 헤르페스 바이러스(Herpes simplex virus type Ⅰ)의 억제 효능 등이 있음이 학계를 통해 보고된 바 있는 식물체이다.
이러한 괭생이모자반으로부터 수반되는 부산물의 일종인 추출박은 버려지는 찌꺼기로서 취급되고, 잘 부패되지 않아 막대한 환경오염을 심화시켰지만, 본 발명에서는 상기와 같은 문제점에 초점을 두고 고찰하였고 그 결과, 추출박을 사료첨가제로써 이용할 때 충분한 가치와 면역활성 등의 기능성이 우수함을 확인하였다.
본 발명의 바람직한 일 실시예로서, 상기 괭생이모자반 추출박을 유효성분으로 포함하는 사료첨가제 조성물은 대두박, 밀기울, 옥수수, 당밀, 석회석, 비타민, 라이신, 미네랄 프리믹스, 인산칼슘, 효소제를 포함하는 기초사료 조성물을 포함할 수 있으며, 상기 사료첨가제 조성물과 기초사료 조성물을 배합할 경우, 30-70중량%:30-70중량%의 비율로 배합되는 것이 바람직하다.
또한, 본 발명에 있어서, 상기 사료첨가제 조성물은, 사료 총 중량에 대하여 0.1 내지 2.0중량%의 함량으로 포함될 수 있다.
한편, 상기 괭생이모자반 추출박을 유효성분으로 포함하는 사료첨가제 조성물은, 괭생이모자반을 초임계 추출한 다음 남은 찌꺼기인 추출박을 얻는 단계; 및 상기 추출박을 열수추출 또는 용매추출하는 단계를 거쳐 제조된다. 상기와 같은 방법은 유효성분의 소실을 최소화하는 이점을 갖는다.
상기 괭생이모자반을 초임계 추출하는 일 실시예로서, a) 추출 원물인 괭생이모자반을 세척 및 자숙하는 단계; b) 상기 a)단계에서 세척 및 자숙된 괭생이모자반을 수분함량이 10% 이내가 되도록 건조한 다음, 1 - 5㎜ 입경으로 분쇄하여 괭생이모자반 분말을 얻는 단계; c) 상기 b)단계의 괭생이모자반 분말을 초임계유체 추출기에 투입하고, 45 - 50℃의 온도로 300 - 400bar의 압력하에서 250 - 300분 동안 추출하여 초임계 추출물을 얻는 단계; 및 d) 상기 c)단계의 초임계 추출물을 감압농축기를 이용하여 45 - 55℃의 온도에서 농축하는 단계를 거쳐 실시할 수 있다.
각 단계별로 구분하여 상세하게 설명하면, 상기 a)단계에서는 괭생이모자반에 잔존하는 협잡물 등이 제거되도록 세척한 후, 세척된 괭생이모자반을 자숙시킨다. 본 발명의 바람직한 일 구현예로서, 상기 괭생이모자반의 자숙은 통상의 자숙탱크에 넣어 열수로써 자숙시킬 수 있다. 이때, 상기 괭생이모자반을 자숙하는 이유는 살균과 소독 효과를 득하기 위함이다.
상기 b)단계에서는 a)단계를 거쳐 세척 및 자숙된 괭생이모자반을 수분함량이 10% 이내가 되도록 열풍건조 또는 자연건조한 다음, 그 건조된 괭생이모자반을 1 내지 5㎜ 입경으로 분쇄하여 괭생이모자반 분말을 얻는다.
상기 c)단계에서는 b)단계에서 얻은 괭생이모자반 분말을 통상의 초임계유체 추출기에 투입하고, 바람직하게는 40 내지 55℃, 보다 바람직하게는 45 내지 50℃의 온도로, 바람직하게는 250 내지 500bar, 보다 바람직하게는 300 내지 400bar의 압력하에서, 바람직하게는 200 내지 400분, 보다 바람직하게는 250 내지 300분 동안 추출하여 초임계 추출물을 얻는다.
여기서, 상기 초임계유체로서 이산화탄소(CO2)를 사용하고, 초임계 추출시 보조용매로서 발효주정을 사용하는 것이 바람직하며, 상기 초임계유체 보조용매의 공급 속도, 즉 유속은 각각 3ℓ/min, 0.3ℓ/min 인 것이 바람직하다.
상기 d)단계에서는 c)단계에서 얻은 초임계 추출물을 감압농축기를 이용하여 바람직하게는 40 내지 60℃, 보다 바람직하게는 45 내지 55℃의 온도에서 농축한다.
한편, 상술한 바와 같은 초임계 추출 단계를 거쳐서 얻어진 찌꺼기의 일종인 추출박(이하, '초임계 추출박'이라 함)은 열수추출 또는 용매추출을 추가 실시함으로써 본 발명에 따른 사료첨가제 조성물을 최종적으로 제조할 수 있다.
상기 초임계 추출박을 열수추출하는 일 실시예로서, a) 정제수에 상기 초임계 추출박을 18:1 내지 22:1의 중량비로 첨가하고, 80 - 100℃의 온도로 220 - 260분간 추출하여 추출액을 얻는 단계; b) 상기 a)단계의 추출액을 50 - 60㎛의 여과기로 여과 후, 여과하여 얻은 여액을 고형물 함량이 18 - 22% brix가 될 때까지 농축하여 농축물을 얻는 단계; c) 상기 b)단계의 농축물을 90 - 100℃의 온도로 50 - 70분간 살균처리하는 단계; 및 d) 상기 c)단계에서 살균처리된 농축물에 전체 중량 대비 덱스트린(dextrin) 20 - 40중량%를 첨가한 후, 분무건조하는 단계를 거쳐 실시할 수 있다.
각 단계별로 구분하여 상세하게 설명하면, 상기 a)단계에서는 정제수에 초임계 추출박을, 바람직하게는 15:1 내지 22:1, 보다 바람직하게는 18:1 내지 22:1의 중량비로 첨가하고, 바람직하게는 70 내지 100℃, 보다 바람직하게는 80 내지 100℃의 온도로, 바람직하게는 200 내지 280분, 보다 바람직하게는 220 내지 260분간 추출하여 추출액을 얻는다.
별법으로, 상기 온도조건에 의해 정제수의 부피가 대략 절반정도로 줄어들 때, 초임계 추출박과 상등액을 분리한 다음, 다시 상기 초임계 추출박에 정제수를 가하는 일련의 과정을 반복수행할 수 있다. 이로써 유효성분의 회수율을 더욱 높일 수 있는 이점이 발생하는 것이다.
상기 b)단계에서는 c)단계에서 얻은 추출액을 바람직하게는 40 내지 80㎛, 보다 바람직하게는 50 내지 60㎛의 여과기로 여과 후, 여과하여 수득한 여액을 고형물 함량이 바람직하게는 16 내지 24% brix, 보다 바람직하게는 18 내지 22% brix가 될 때까지 농축하여 농축물을 얻는다.
상기 c)단계에서는 b)단계에서 얻은 농축물을 바람직하게는 80 내지 100℃, 보다 바람직하게는 90 내지 100℃의 온도로, 바람직하게는 40 내지 80분, 보다 바람직하게는 50 내지 70분간 살균처리한다.
상기 d)단계에서는 c)단계에서 살균처리된 농축물에 전체 중량 대비 덱스트린을 바람직하게는 10 내지 50중량%, 보다 바람직하게는 20 내지 40중량%를 첨가한 후 분무 건조한다.
한편, 상기 초임계 추출박을 용매추출하는 일 실시예로서, a) 발효주정에 상기 초임계 추출박을 18:1 내지 22:1의 중량비로 첨가하고, 70 - 90℃의 온도로 220 - 260분간 추출하여 추출물을 얻는 단계; 및 b) 상기 a)단계의 추출물을 70 - 90℃의 온도하에서 감압농축기를 통해 상기 추출물 전체 부피 대비 2 - 4%의 부피로 감압농축한 다음 영하 70℃ 이하의 온도에서 분무건조하는 단계를 거쳐 실시할 수 있다.
각 단계별로 구분하여 상세하게 설명하면, 상기 a)단계에서는 발효주정에 상기 초임계 추출박을 바람직하게는 15:1 내지 25:1, 보다 바람직하게는 18:1 내지 22:1의 중량비로 첨가하고, 바람직하게는 60 내지 100℃, 보다 바람직하게는 70 내지 90℃의 온도로, 바람직하게는 200 내지 280분, 보다 바람직하게는 220 내지 260분간 추출하여 추출물을 얻는다.
상기 b)단계에서는 a)단계에서 얻은 추출물을 바람직하게는 60 내지 100℃, 보다 바람직하게는 70 내지 90℃의 온도하에서 감압농축기를 통해 바람직하게는 상기 추출물 전체 부피 대비 1 내지 5%, 보다 바람직하게는 2 내지 4%의 부피로 감압농축한 다음 영하 70℃ 이하의 온도에서 분무건조한다.
이하, 실시예 및 실험예를 통하여 본 발명의 구성에 따른 작용효과에 대해서 보다 상세하게 설명한다.
[실시예 1]
- 초임계 추출박 열수추출물 제조
초임계 추출된 추출박 1㎏에 원물 대비 30배에 상당한 정제수 30ℓ를 가하여 90℃ 온도하에서 4시간 동안 추출하였다. 상기 방법에 의해 추출된 추출물은 55㎛의 백필터(bag filter) 여과 후, 원심박막농축기(evaporator, CEP-LABO, Okawahara, Japan)를 이용하여 농축하였고, 최종 농축액을 동결건조한 후, 이를 하기 실험의 재료로서 사용하였다.
[실시예 2]
- 초임계 추출박 용매추출물 제조
초임계 추출된 추출박을 50% 발효주정을 용매로 하여 상기 용매 20ℓ를 가하여 90℃ 온도하에서 4시간 동안 추출하였다. 상기 방법에 의해 추출된 추출물은 회전식 감압농축기(evaporator, HS-20SP, Hahnshin S&T, 대한민국)를 이용하여 80℃ 온도하에서 농축물 부피 3ℓ 수준으로 감압 농축하였고, 최종 농축액을 동결건조한 후, 이를 하기 실험의 재료로서 사용하였다.
삭제
[비교 실시예]
추출 대상물을 홍삼으로 하여 상기 실시예 1과 동일한 방법을 통해 홍삼추출물을 얻었으며, 이를 하기 실험의 양성대조구로서 사용하였다.
[실험예 1]
- 비장세포 생존율 평가
마우스로부터 비장을 적출하여 그 비장의 비장세포를 유리시킨 후, 96 well plate에 2×105 cell/well로 분주하고, 상기 실시예 1 및 2에서 제조된 괭생이모자반 추출박을 3.125, 6.25, 12.5, 25, 50㎍/㎖의 농도로 처리하고 24시간 후 MTT 방법에 따라 세포 생존율을 측정하였으며, 세포생존율은 무처리구 대비 생존 %로 나타내었다.
도 1은 상기 실시예 1 및 2에서 열수추출과 용매추출하여 얻은 추출박 처리에 따른 비장세포 증식능을 나타낸 결과이다.
도 1에서 'CTRL'은 아무것도 처리하지 않은 군, 'CON A'는 비장세포의 mitogen인 concanavalin A(CON A) 처리구를 나타내며, '박 열수'는 괭생이모자반 추출박 열수추출물을 나타내고, '박 주정'은 괭생이모자반 추출박 용매추출물을 나타낸다.
도 1을 참조하면, 열수추출 및 용매추출하여 얻은 괭생이모자반 추출박의 처리는 농도 의존적으로 비장세포의 세포 증식능을 증가시키는 것을 확인할 수 있다.
삭제
[실험예 2]
- 비장세포 사이토카인 분비능 평가
마우스로부터 분리된 비장세포를 6 well plate에 1×106 cell/well로 분주한 후, 상기 실시예 1 및 2에서 제조된 괭생이모자반 추출박을 3.125, 6.25, 12.5, 25, 50㎍/㎖의 농도로 처리하고 24시간 후 분리된 배양 상등액에서 사이토카인 IL-2 및 IFN-γ의 함량을 측정하였다. 사이토카인 함량은 ELISA kit(eBioscience Co., San Diege, CA, USA)를 사용하여 측정하였으며, 이때 사이토카인의 농도는 kit에 포함되어 있는 standard 표준 용액으로부터 산출된 표준곡선으로부터 계산되었다.
도 2는 상기 실시예 1 및 2에서 열수추출과 용매추출하여 얻은 추출박 처리에 따른 비장세포 사이토카인 분비능을 나타낸 결과이다.
도 2에서 'CTRL'은 아무것도 처리하지 않은 군, 'CON A'는 비장세포의 mitogen인 concanavalin A(CON A) 처리구를 나타내며, '박 열수'는 괭생이모자반 추출박 열수추출물을 나타내고, '박 주정'은 괭생이모자반 추출박 용매추출물을 나타낸다.
도 2를 참조하면, 열수추출 및 용매추출하여 얻은 괭생이모자반 추출박의 처리는 상기 표기된 농도에서 비장세포에 대한 사이토카인(IL-2, IFN-gamma)의 분비 유도 면역 활성을 나타내며 농도 의존적으로 사이토카인 분비 유도능을 증가시키는 것을 확인할 수 있다.
[실험예 3]
- 마우스의 비장세포 증식능 평가
6주령의 BALB/C 마우스를 구입하여 1주간 순화하고, 상기 실시예 1 및 2에서 제조된 괭생이모자반 추출박과 상기 비교 실시예의 홍삼 추출물을 50, 100㎎/㎏ body weight로 7일 동안 경구 투여하고, 8일째 마우스를 희생하여 비장을 분리하였다. 분리된 비장에서 비장세포를 유리하였으며, 유리된 비장세포를 96 well plate에 2×105 cell/well로 분주하여 24시간 동안 배양하였으며, 각각의 mitogen(CON A, LPS) 첨가에 따른 세포 생존율을 비교하였다. 세포생존율은 MTT 방법에 따라 수행되었으며, 추출물 투여구 대비 생존 %로 나타내었다.
도 3은 상기 실시예 1 및 2에서 열수추출과 용매추출하여 얻은 추출박과 비교 실시예에서 얻은 홍삼 추출물을 50, 100㎎/㎏ body weight로 경구 투여한 마우스의 비장세포 증식능을 나타낸 결과이다.
도 3에서 'CON'은 본 실험의 음성대조구로서 시료 대신 시료를 녹인 용매인 PBS만을 7일 동안 경구 투여한 그룹을 나타내며, '열수'는 상기 실시예 1에서 제조된 괭생이모자반 추출박(50, 100㎎/㎏ body weight)을 경구 투여한 그룹을 나타내며, '주정'은 상기 실시예 2에서 제조된 괭생이모자반 추출박(50, 100㎎/㎏ body weight)을 경구 투여한 그룹을 나타내며, '홍삼'은 본 실험의 양성대조구로서 상기 비교 실시예에서 제조된 홍삼 추출물을 50, 100㎎/㎏ body weight의 농도로 7일 동안 경구 투여한 그룹을 나타낸다.
도 3을 참조하면, 열수추출 및 용매추출하여 얻은 괭생이모자반 추출박의 처리는 음성대조구인 'CON' 그룹과 비교하였을 때 비장세포의 증식능이 높게 증가하는 것을 확인할 수 있다.
[실험예 4]
- 비장세포 사이토카인 분비능 평가
상기 실시예 1 및 2에서 열수추출과 용매추출하여 얻은 추출박과 비교 실시예에서 얻은 홍삼 추출물을 50, 100㎎/㎏ body weight로 7일 동안 경구 투여한 마우스로부터 분리된 비장세포를 48 well plate에 1×106 cell/well로 분주한 후, 24시간 동안 배양하였으며, 분리된 배양 상등액에서 사이토카인 IL-2 및 IFN-γ의 함량을 측정하였다. 사이토카인 함량은 ELISA kit(eBioscience Co., San Diege, CA, USA)를 사용하여 측정하였으며, 이때 사이토카인의 농도는 kit에 포함되어 있는 standard 표준 용액으로부터 산출된 표준곡선으로부터 계산되었다.
도 4는 상기 실시예 1 및 2에서 열수추출과 용매추출하여 얻은 추출박과 비교 실시예를 통해 얻은 홍삼 추출물을 50, 100㎎/㎏ body weight로 경구 투여한 마우스의 비장세포 사이토카인 분비 유도능을 나타낸 결과이다.
도 4에서 'CON'은 본 실험의 음성대조구로서 시료 대신 시료를 녹인 용매인 PBS만 7일 동안 경구 투여한 그룹을 나타내며, '열수'는 상기 실시예 1에서 제조된 괭생이모자반 추출박(50, 100㎎/㎏ body weight)을 경구 투여한 그룹을 나타내며, '주정'은 상기 실시예 2에서 제조된 괭생이 모자반 추출박(50, 100㎎/㎏ body weight)을 경구 투여한 그룹을 나타내며, '홍삼'은 본 실험의 양성대조구로서 상기 비교 실시예에서 제조된 홍삼 추출물을 50, 100㎎/㎏ body weight의 농도로 7일 동안 경구 투여한 그룹을 나타낸다.
도 4를 참조하면, 열수추출 및 용매추출하여 얻은 괭생이모자반 추출박은 활성화된 비장세포가 분비하는 사이토카인(IL-2, IFN-γ)의 분비를 증가시키는 것으로 나타났다. 따라서, 괭생이모자반 추출박의 투여는 비장세포를 활성화시켜 사이토카인의 분비를 증가시키는 것으로 판단된다.
[실험예 5]
- 비장세포 내 CD4+ T helper 세포의 분포 변화 확인
상기 실시예 1 및 2에서 열수추출과 용매추출하여 얻은 추출박과 비교 실시예에서 얻은 홍삼 추출물을 50, 100㎎/㎏ body weight로 7일 동안 경구 투여한 마우스에서 비장세포를 분리하고, 유세포분석기(Beckman Coulter, USA)를 이용하여 비장세포 내 CD4+ T helper 세포의 분포를 확인하였다.
도 5는 상기 실시예 1 및 2에서 열수추출과 용매추출하여 얻은 추출박과 비교 실시예를 통해 얻은 홍삼추출물 50, 100㎎/㎏ body weight로 경구 투여한 마우스의 비장세포 내 면역 T helper 세포의 분포를 나타낸 결과이다.
도 5에서 'PBS'는 본 실험의 음성대조군으로서 시료 대신 시료를 녹인 용매인 PBS만 7일 동안 경구 투여한 그룹을 나타내며, '열수'는 상기 실시예 1에서 제조된 괭생이모자반 추출박(50, 100㎎/㎏ body weight)을 경구 투여한 그룹을 나타내며, '주정'은 상기 실시예 2에서 제조된 '괭생이모자반 추출박(50, 100㎎/㎏ body weight)을 경구 투여한 그룹을 나타내며, '홍삼'은 본 실험의 양성대조구로서 상기 비교 실시예에서 제조된 홍삼 추출물을 50, 100㎎/㎏ body weight의 농도로 7일 동안 경구 투여한 그룹을 나타낸다.
도 5를 참조하면, 본 실험에서 음성대조구인 PBS만 투여한 마우스의 T helper 세포의 분포는 50,45%였고, 열수추출 및 용매추출한 추출박을 100㎎/㎏ body weight로 경구 투여한 마우스는 각각 60.48% 및 58.23%의 T helper 세포의 분포를 나타내는 것으로 보아 괭생이모자반 추출박은 T helper 세포의 분포를 증가시키는 것으로 판단된다.

Claims (8)

  1. 삭제
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 괭생이모자반 추출박을 포함하는 사료첨가제 조성물의 제조방법에 있어서,
    상기 사료첨가제 조성물은, 괭생이모자반을 초임계 추출한 다음 남은 찌꺼기인 추출박을 얻는 단계; 및 상기 추출박을 열수추출 또는 용매추출하는 단계를 거쳐 제조하되,
    상기 괭생이모자반의 초임계 추출은,
    a) 추출 원물인 괭생이모자반을 세척 및 자숙하는 단계;
    b) 상기 a)단계에서 세척 및 자숙된 괭생이모자반을 수분함량이 10% 이내가 되도록 건조한 다음, 1 - 5㎜ 입경으로 분쇄하여 괭생이모자반 분말을 얻는 단계;
    c) 상기 b)단계의 괭생이모자반 분말을 초임계유체 추출기에 투입하고, 45 - 50℃의 온도로 300 - 400bar의 압력하에서 250 - 300분 동안 추출하여 초임계 추출물을 얻는 단계; 및
    d) 상기 c)단계의 초임계 추출물을 감압농축기를 이용하여 45 - 55℃의 온도에서 농축하는 단계로 이루어지는 것을 특징으로 하는 괭생이모자반 추출박을 포함하는 사료첨가제 조성물의 제조방법.
  5. 삭제
  6. 제4 항에 있어서,
    상기 초임계 추출은,
    초임계유체로서 이산화탄소(CO2)를 사용하고, 초임계 추출시 보조용매로서 발효주정을 사용하는 것을 특징으로 하는 괭생이모자반 추출박을 포함하는 사료첨가제 조성물의 제조방법.
  7. 제4 항에 있어서,
    상기 추출박의 열수추출은,
    a) 정제수에 상기 추출박을 18:1 내지 22:1의 중량비로 첨가하고, 80 - 100℃의 온도로 220 - 260분간 추출하여 추출액을 얻는 단계;
    b) 상기 a)단계의 추출액을 50 - 60㎛의 여과기로 여과 후, 여과하여 얻은 여액을 고형물 함량이 18 - 22% brix가 될 때까지 농축하여 농축물을 얻는 단계;
    c) 상기 b)단계의 농축물을 90 - 100℃의 온도로 50 - 70분간 살균처리하는 단계; 및
    d) 상기 c)단계에서 살균처리된 농축물에 전체 중량 대비 덱스트린(dextrin) 20 - 40중량%를 첨가한 후, 분무건조하는 단계로 이루어지는 것을 특징으로 하는 괭생이모자반 추출박을 포함하는 사료첨가제 조성물의 제조방법.
  8. 제4 항에 있어서,
    상기 추출박의 용매추출은,
    a) 발효주정에 상기 추출박을 18:1 내지 22:1의 중량비로 첨가하고, 70 - 90℃의 온도로 220 - 260분간 추출하여 추출물을 얻는 단계; 및
    b) 상기 a)단계의 추출물을 70 - 90℃의 온도하에서 감압농축기를 통해 상기 추출물 전체 부피 대비 2 - 4%의 부피로 감압농축한 다음 영하 70℃ 이하의 온도에서 분무건조하는 단계로 이루어지는 것을 특징으로 하는 괭생이모자반 추출박을 포함하는 사료첨가제 조성물의 제조방법.
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