KR102109453B1 - 세포배양용기 - Google Patents

세포배양용기 Download PDF

Info

Publication number
KR102109453B1
KR102109453B1 KR1020180081702A KR20180081702A KR102109453B1 KR 102109453 B1 KR102109453 B1 KR 102109453B1 KR 1020180081702 A KR1020180081702 A KR 1020180081702A KR 20180081702 A KR20180081702 A KR 20180081702A KR 102109453 B1 KR102109453 B1 KR 102109453B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
cell culture
tyr
adhesive layer
lys
pro
Prior art date
Application number
KR1020180081702A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20190008148A (ko
Inventor
장선호
구송희
서인용
이승훈
김찬
Original Assignee
주식회사 아모라이프사이언스
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 주식회사 아모라이프사이언스 filed Critical 주식회사 아모라이프사이언스
Publication of KR20190008148A publication Critical patent/KR20190008148A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102109453B1 publication Critical patent/KR102109453B1/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
    • C12M23/46—Means for fastening
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M25/00—Means for supporting, enclosing or fixing the microorganisms, e.g. immunocoatings
    • C12M25/14—Scaffolds; Matrices
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M21/00—Bioreactors or fermenters specially adapted for specific uses
    • C12M21/08—Bioreactors or fermenters specially adapted for specific uses for producing artificial tissue or for ex-vivo cultivation of tissue
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
    • C12M23/20—Material Coatings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
    • C12M23/34—Internal compartments or partitions
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
    • C12M23/02—Form or structure of the vessel
    • C12M23/12—Well or multiwell plates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M25/00—Means for supporting, enclosing or fixing the microorganisms, e.g. immunocoatings
    • C12M25/02—Membranes; Filters
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M25/00—Means for supporting, enclosing or fixing the microorganisms, e.g. immunocoatings
    • C12M25/02—Membranes; Filters
    • C12M25/04—Membranes; Filters in combination with well or multiwell plates, i.e. culture inserts

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Clinical Laboratory Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

세포배양용기가 제공된다. 본 발명의 일 실시예에 따른 세포배양용기는 내부에 세포배양 지지체를 수용하는 내부 공간인 수용부를 구비한 세포배양용기에 있어서, 상기 세포배양용기는 상기 수용부의 하부면에 상기 세포배양 지지체를 고정시키기 위한 고정부재를 포함하며, 상기 고정부재는, 상기 수용부의 하부면에 부착되는 제1접착층; 상기 세포배양 지지체의 하부면과 부착되는 제2접착층; 및 상기 제1접착층 및 제2접착층 사이에 개재되어 지지기능을 수행하는 지지필름;을 포함하고, 상기 제2접착층과 세포배양 지지체 사이의 접착력은 상기 제1접착층과 수용부의 하부면 사이의 접착력 보다 크도록 구현된다. 이에 의하면, 세포가 배양되는 과정에서 지지체의 흔들림으로 인한 배양용액의 불균일한 분산 및 배양되는 세포들의 이동에 의한 쏠림 등을 방지할 수 있어 각 세포에 동일한 기계, 물리, 화학적 자극을 부여함으로써 세포의 균일한 증식에 기여할 수 있다. 또한, 세포배양 지지체를 세포배양용기로부터 용이하게 분리할 수 있어, 생화학적 기작으로 인한 세포의 변질이나 탈리 등을 방지할 수 있고, 배양된 세포에 필요 이상의 자극으로 인한 손상을 방지할 수 있다. 나아가, 군집을 형성하며 증식되는 콜로니 세포의 경우, 세포배양지지체를 회수하는 과정에서 각 군집체 별로 가하여지는 물리, 화학적 자극의 차이로 인한 군집체 형상의 균일성 저하를 방지할 수 있다.

Description

세포배양용기{cell culture CONTAINER}
본 발명은 세포배양용기에 관한 것이며, 더욱 상세하게는 배양되는 각각의 세포에 균일한 미세환경을 제공함과 동시에 배양된 세포에 손상을 가하지 않고 용이하게 회수할 수 있는 세포배양용기에 관한 것이다.
최근, 질병 치료에 배양 세포의 이용이 확대됨에 따라 세포배양에 대한 관심 및 연구가 증가하고 있다. 세포배양은 세포를 생체로부터 채취하고, 생체 밖에서 배양시키는 기술이며, 배양된 세포는 피부, 장기, 신경 등 신체의 다양한 조직으로 분화시켜 인체에 이식되거나 분화시키기 전 상태로 인체에 이식시켜 생착 및 분화를 동시에 이루어지게 하여 다양한 질병 치료에 활용될 수 있다.
이와 같은 세포배양이 연계된 분야가 조직공학(tissue engineering)이며, 세포학, 생명과학, 공학, 의학 등의 기존의 과학 영역을 응용하는 다학제간 학문으로써, 생체조직의 구조와 기능 사이의 상관관계를 이해하고, 손상된 조직이나 장기를 정상적인 조직으로 대체, 재생시키기 위한 새로운 융합기술이 연구되고 있다.
한편, 재생 의료 분야에서 환자에게서 채취한 세포를 생체 외에서 배양할 수 있도록 세포배양 지지체와 세포배양용기를 제작하고, 세포배양 지지체에서 배양된 세포를 다시 생체 내로 이식함으로써 의료 효과를 향상시키는 연구가 진행되고 있다.
그러나 현재까지 개발된 세포배양 지지체와 세포배양용기는 세포배양 지지체가 세포배양용기에 견고히 부착되어 있기 때문에, 세포배양 지지체의 세포-세포간의 결합에 손상을 가하지 않고 세포배양용기에서 세포배양 지지체를 박리하는 것이 용이하지 않다. 또한, 이를 해결하기 위해 세포배양 지지체를 세포배양용기에 느슨하게 고정시킬 경우, 배양되는 세포에 균일한 환경을 제공할 수 없어 각 세포의 물리, 화학적 자극의 차이로 인한 균일성 저하의 문제점이 있다.
또한, 일반적으로 세포는 생물화학적 기타 외적 영향에 매우 민감하기 때문에 세포배양 지지체를 세포배양용기로부터 박리하기 위해 화학적 기작을 가하는 것은 균일하게 배양된 세포를 얻기 위한 방법으로 적절하지 않다.
나아가 군집을 이루는 콜로니 세포의 경우 세포군집체가 증식된 경우에도 세포를 증식시킨 세포배양 지지체의 형상뿐만 아니라 세포배양 지지체에서 박리하는 물리, 화학적 방법에 따라서 세포군집체의 형상이 각기 다를 수 있다. 세포군집체의 형상이 일률적이지 않을 경우 배양된 세포군집체마다 다른 반응을 나타낼 수 있으며 이 경우 재현성 있는 결과를 도출할 수 없어서 증식된 세포군집체를 검사, 실험용으로 사용하기에 매우 부적합한 문제가 있다.
이에 따라 세포배양 지지체에서 배양된 세포에 손상을 가하지 않고, 세포배양 지지체를 세포배양용기로부터 용이하게 분리시킬 수 있으면서, 세포를 배양하는 과정에서 각 세포에 동일한 미세환경을 제공하는 기술에 대한 개발이 시급한 실정이다.
공개특허공보 제10-2014-0048733호(공개일: 2014.04.24)
본 발명은 지지체의 흔들림을 방지할 수 있어 배양되는 각 세포에 동일한 기계, 물리, 화학적 자극을 부여함으로써 세포를 균일하게 증식시킬 수 있는 세포배양용기를 제공하는데 목적이 있다.
또한, 본 발명은 세포가 배양된 세포배양 지지체를 세포배양용기로부터 용이하게 회수할 수 있는 세포배양용기를 제공하는 다른 목적이 있다.
또한, 본 발명은 세포배양 지지체의 분리과정에서 세포에 손상을 가하지 않고 목적하는 검사 및 실험에 적합한 형상을 가지는 세포를 배양할 수 있는 세포배양용기를 제공하는데 또 다른 목적이 있다.
또한, 본 발명은 세포군집체의 형상을 일정하게 배양하고, 세포-세포간 결합을 깨지 않는 세포배양 지지체 및 이를 포함하는 세포배양용기를 제공하는데 또 다른 목적이 있다.
본 발명은 상기와 같은 점을 감안하여 안출한 것으로, 본 발명은 내부에 세포배양 지지체를 수용하는 내부 공간인 수용부를 구비한 세포배양용기에 있어서, 상기 세포배양용기는 상기 수용부의 하부면에 상기 세포배양 지지체를 고정시키기 위한 고정부재를 포함하며, 상기 고정부재는, 상기 수용부의 하부면에 부착되는 제1접착층; 상기 세포배양 지지체의 하부면과 부착되는 제2접착층; 및 상기 제1접착층 및 제2접착층 사이에 개재되어 지지기능을 수행하는 지지필름;을 포함하고, 상기 제2접착층과 세포배양 지지체 사이의 접착력은 상기 제1접착층과 수용부의 하부면 사이의 접착력 보다 큰 세포배양용기를 제공한다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 제1접착층과 수용부의 하부면 사이의 접착력 및, 상기 제2접착층과 세포배양 지지체 사이의 접착력은 접착력 비가 1 : 1.3 ~ 4일 수 있다.
또한, 상기 제1접착층과 수용부의 하부면 사이의 접착력 및, 상기 제2접착층과 세포배양 지지체 사이의 접착력은 접착력 비가 1 : 1.5 ~ 3일 수 있다.
또한, 상기 제1접착층과 수용부의 하부면 사이의 접착력은 3 ~ 30 gf/inch일 수 있다.
또한, 상기 제2접착층과 세포배양 지지체 사이의 접착력은 7 ~ 60 gf/inch일 수 있다.
또한, 상기 제1접착층 및 제2접착층은 각각 독립적으로 실리콘계 접착제 및 우레탄계 접착제로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상을 포함할 수 있다.
또한, 상기 제1접착층은 두께가 7 ~ 55㎛일 수 있다.
또한, 상기 제2접착층은 두께가 3 ~ 25㎛일 수 있다.
또한, 상기 지지필름은 두께가 30 ~ 220㎛일 수 있다.
또한, 상기 지지필름은 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 폴리이미드, 가교 폴리프로필렌, 나일론, 폴리우레탄계 수지, 아세테이트, 폴리벤즈이미다졸, 폴리이미드아마이드, 폴리에테르이미드, 폴리페닐렌설파이드(PPS), 폴리에틸렌테레프탈레이트(PET), 폴리트리메틸렌테레프탈레이트(PTT), 폴리부틸렌테레프탈레이트(PBT), 폴리비닐리덴플루오라이드(PVDF), 폴리테트라플루오로에틸렌(PTFE), 폴리클로로트리플루오로에틸렌(PCTFE), 폴리에틸렌테트라플루오로에틸렌(ETFE)로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 포함할 수 있다.
또한, 상기 세포배양 지지체는 편물, 직물 및 부직포 중 어느 하나 이상을 포함하는 원단일 수 있다.
또한, 상기 원단은 세포배양 향상물질을 포함할 수 있다.
또한, 상기 세포배양 향상물질은 세포의 부착, 이동, 성장, 증식(proliferation) 및 분화(differentiation) 중 어느 하나 이상을 유도하는 생리활성성분을 포함할 수 있다.
본 발명에서 사용된 아미노산 서열은 IUPAC-IUB 명명법에 따라 하기 표 1과 같이 약어로 기재하였다.
IUPAC-IUB 명명 기호 약자 IUPAC-IUB 명명 기호 약자 IUPAC-IUB 명명 기호 약자
알라닌 A Ala 글라이신 G Gly 프롤린 P Pro
아르기닌 R Arg 히스티딘 H His 세린 S Ser
아스파라긴 N Asn 아이소루신 I Ilt 트레오닌 T Thr
시스테인 C Cys 라이신 K Lys 트립토판 W Trp
글루탐산 E Glu 메티오닌 M Met 타이로신 Y Tyr
글루타민 Q Gln 페닐알라닌 F Phe 발린 V Val
본 발명의 의하면, 세포가 배양되는 과정에서 지지체의 흔들림으로 인한 배양용액의 불균일한 분산 및 배양되는 세포들의 이동에 의한 쏠림 등을 방지할 수 있어 각 세포에 동일한 기계, 물리, 화학적 자극을 부여함으로써 세포의 균일한 증식에 기여할 수 있다.
또한, 세포배양 지지체를 세포배양용기로부터 용이하게 분리할 수 있어, 생화학적 기작으로 인한 세포의 변질이나 탈리 등을 방지할 수 있고, 배양된 세포에 필요 이상의 자극으로 인한 손상을 방지할 수 있다.
나아가, 군집을 형성하며 증식되는 콜로니 세포의 경우, 세포배양지지체를 회수하는 과정에서 각 군집체 별로 가하여지는 물리, 화학적 자극의 차이로 인한 군집체 형상의 균일성 저하를 방지할 수 있다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 세포배양용기를 나타내는 사시도,
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 세포배양용기를 구성하는 복수의 수용부 중 하나의 수용부를 나타낸 사시도, 그리고,
도 3은 도 1에 도시된 I-I'의 단면도이다.
이하, 첨부한 도면을 참고로 하여 본 발명의 실시예에 대하여 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 상세히 설명한다. 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되지 않는다. 도면에서 본 발명을 명확하게 설명하기 위해서 설명과 관계없는 부분은 생략하였으며, 명세서 전체를 통하여 동일 또는 유사한 구성요소에 대해서는 동일한 참조부호를 부가한다.
도 1 내지 도 3에 도시된 바와 같이 본 발명에 따른 세포배양용기(100, 100')는, 내부에 세포배양 지지체(130)를 수용하는 내부 공간인 수용부(110)를 구비한 세포배양용기(100)에 있어서, 상기 세포배양용기(100)는 상기 수용부의 하부면(111)에 상기 세포배양 지지체(130)를 고정시키기 위한 고정부재(120)를 포함하며, 상기 고정부재(120)는, 상기 수용부의 하부면(111)에 부착되는 제1접착층(125); 상기 세포배양 지지체(130)의 하부면과 부착되는 제2접착층(121); 및 상기 제1접착층(125) 및 제2접착층(121) 사이에 개재되어 지지기능을 수행하는 지지필름(123);을 포함하여 구현된다.
먼저, 본 발명에 따른 세포배양용기(100, 100')의 각 구성에 대해 설명하기에 앞서, 상기 제2접착층(121)과 세포배양 지지체(130) 사이의 접착력이 상기 제1접착층(125)과 수용부의 하부면(111) 사이의 접착력 보다 커야 하는 이유에 대하여 설명한다.
세포배양용기에 구비되는 고정부재에서, 제2접착층(121)과 세포배양 지지체(130) 사이의 접착력이 작을 경우 접착력 저하로 인한 세포배양 지지체의 흔들림 등이 발생할 수 있어 균일한 세포배양이 어려움에 따라 목적하는 수준으로의 세포배양 및 증식이 용이하지 않을 수 있고, 제1접착층(125)과 수용부의 하부면(111) 사이의 접착력이 클 경우 세포배양용기(100)로부터 고정부재(120)를 분리하는 과정에서 세포에 손상이 가해질 수 있다.
이에 따라, 본 발명에 따른 세포배양용기에 구비되는 고정부재에서, 상기 제2접착층(121)과 세포배양 지지체(130) 사이의 접착력이 상기 제1접착층(125)과 수용부의 하부면(111) 사이의 접착력 보다 크도록 구현하였으며, 바람직하게는, 상기 제1접착층과 수용부의 하부면 사이의 접착력 및, 상기 제2접착층과 세포배양 지지체 사이의 접착력은 접착력 비가 1 : 1.3 ~ 4일 수 있고, 더욱 바람직하게는 상기 제1접착층과 수용부의 하부면 사이의 접착력 및, 상기 제2접착층과 세포배양 지지체 사이의 접착력은 접착력 비가 1 : 1.5 ~ 3일 수 있다.
만일, 상기 제2접착층과 세포배양 지지체 사이의 접착력이 상기 제1접착층과 수용부의 하부면 사이의 접착력 보다 작으면, 접착력 저하로 인한 세포배양 지지체의 흔들림 등이 발생할 수 있어 균일한 세포배양이 어려움에 따라 목적하는 수준으로의 세포배양 및 증식이 용이하지 않을 수 있다.
또한, 만일 상기 제1접착층과 수용부의 하부면 사이의 접착력 및, 상기 제2접착층과 세포배양 지지체 사이의 접착력 간의 접착력 비가 1 : 1.3 미만이면 접착력 저하로 인한 세포배양 지지체의 흔들림 등이 발생할 수 있어 균일한 세포배양이 어려움에 따라 목적하는 수준으로의 세포배양 및 증식이 용이하지 않을 수 있고, 세포배양용기(100)로부터 고정부재(120)를 분리하는 과정에서 세포에 손상이 가해질 수 있으며, 접착력 비가 1 : 4를 초과하면 세포배양용기(100)와 고정부재(120)의 부착력 저하로 인한 세포배양 지지체의 흔들림 등이 발생할 수 있어 균일한 세포배양이 어려움에 따라 목적하는 수준으로의 세포배양 및 증식이 용이하지 않을 수 있고, 세포배양 지지체(130)를 분리하는 과정에서 과도한 기계적 응력이 작용하여 세포배양 지지체(130)에서 배양된 세포에 손상이 생길 수 있다.
이하, 본 발명의 세포배양용기(100)의 각 구성에 대하여 설명한다.
내부에 세포배양 지지체(130)를 수용하는 내부 공간인 수용부(110)는 세포배양 지지체를 수용할 수 있는 형상이면 어떠한 형상이라도 가능하다. 즉, 도면에는 상기 수용부(110)가 원통형의 균일한 형상을 갖는 것으로 도시하였으나, 이에 한정되지 않고 예를 들어, 비커, 웰 플레이트, 병, 관 등의 형상이 가능하며, 배양되는 세포의 크기와 종류를 고려하여 형상과 크기가 각각 상이한 수용부로 구성될 수 있다.
또한 세포배양용기(100)를 형성하는 재료는 특별히 제한되지 않으며 세포배양에 있어서 일반적으로 이용되는 재료를 이용할 수 있다. 예를 들어 폴리스티렌 수지, 폴리에스테르 수지, 폴리에틸렌 수지, 폴리에틸렌 테레프탈레이트 수지, 폴리프로필렌 수지, ABS 수지, 나일론, 아크릴 수지, 불소 수지, 폴리카보네이트 수지, 폴리우레탄 수지, 메틸펜텐 수지, 페놀 수지, 멜라민 수지, 에폭시 수지, 염화비닐 수지 등의 수지 재료, 표면 친수화 처리를 실시한 상기의 적어도 1종을 포함한 수지 재료, 유리나 석영 등의 무기 재료 이용할 수 있다.
또한, 도 2 및 도 3을 참조하면, 본 발명의 일 실시예에 따른 수용부(110)는 수용부의 하부면(111)과 수용부의 하부면에서 연장된 수용부의 측면(113)을 구비하고 상부 방향으로 개방되어 있는 형상을 가지고 있다. 도면에는 도시되지 않았지만 상기 수용부의 하부면(111) 및 수용부의 측면(113)에는 배양용액이 유입 또는 유출될 수 있는 개구부가 형성될 수 있다. 또한, 개방된 상부를 덮을 수 있는 덮개가 착탈이 가능하도록 추가적으로 구비되어 수용부(110)를 밀봉 또는 개방시킬 수 있다.
상기 수용부(110)의 직경은 목적하는 세포의 종류와 크기 및 군집체 형성 유무를 고려하여 설계될 수 있으며, 하나의 세포배양용기(100)에서 직경의 크기가 상이한 복수 개의 수용부(110)가 형성될 수도 있다.
상기 수용부(110)에는 수용부의 하부면(111)과 동일한 형상과 크기를 가지는 고정부재(120)와 세포배양 지지체(130)가 고정된다. 본 발명에 따른 일 실시예에 따라 상기 고정부재(120)와 세포배양 지지체(130)는 원형의 모양을 갖도록 형성되어 상기 수용부(110)에 수용될 수 있다.
한편, 산업적인 세포배양을 실시할 수 있는 세포는 크게 초대 배양 세포에서 대를 이어 얻어진 세포계(cell line)세포와 배아 또는 성체에 있는 여러 종류의 세포로 분화할 수 있는 미분화 세포인 줄기세포(stem cell)로 구분할 수 있다. 최근 보고된 바에 의하면 줄기세포의 경우 세포계 세포의 배양보다 훨씬 섬세한 조작이 필요하다. 즉 기계적 응력이나 기타 생화학적 영향에 매우 민감하여 간단한 손상에 의하여도 세포가 사멸에 이를 수 있어 배양된 세포를 기계적, 화학적으로 분리시키는 일반적인 세포배양기에서의 증식은 적절하지 않다.
또한 공지된 세포배양용기의 경우 세포를 배양하는 과정에서 세포배양 지지체가 세포배양용기에 고정되지 않기 때문에 세포의 균일한 성장의 저해가 있을 수 있음에 따라 목적하는 수준만큼 세포를 증식시킬 수 없으며, 나아가 군집을 이루는 콜로니 세포의 경우 세포군집체가 증식된 경우에도 세포를 증식시킨 세포배양 지지체의 형상뿐만 아니라 세포배양 지지체에서 박리하는 물리, 화학적 방법에 따라서 세포군집체의 형상이 각기 다를 수 있다. 이와 같이 세포군집체의 형상이 일률적이지 않을 경우 배양된 세포군집체마다 다른 반응을 나타낼 수 있으며 이 경우 재현성 있는 결과를 도출할 수 없어서 증식된 세포군집체를 검사, 실험용으로 사용하기에 매우 부적합한 문제가 있다.
따라서, 본 발명에서는 상술한 바와 같이 상기 제2접착층(121)과 세포배양 지지체(130) 사이의 접착력과 상기 제1접착층(125)과 수용부의 하부면(111) 사이의 접착력 간의 관계를 만족하도록 구현하여, 전술한 줄기세포와 같이 세포의 손상에 매우 민감한 세포에 대하여 세포의 손상을 가하지 않고 세포배양용기로부터 용이하게 분리시킬 수 있다. 또한, 세포가 배양되는 세포배양 지지체(130)를 세포배양용기에 고정시켜 각 세포가 균일하게 목적하는 수준으로 증식하도록 물리적, 화학적, 기계적으로 동일한 환경을 제공시킬 수 있고, 군집을 이루는 콜로니 세포의 경우 세포-세포간의 충격을 가하지 않고, 군집체의 형상과 크기를 일정하게 분리함으로써 배양된 군집체의 이용률 향상을 기대할 수 있다.
보다 구체적으로, 상술한 상기 제2접착층(121)과 세포배양 지지체(130) 사이의 접착력과 상기 제1접착층(125)과 수용부의 하부면(111) 사이의 접착력 간의 관계를 만족하고, 세포배양 지지체(130)에 대한 지지기능을 수행하는 지지필름(123)을 구비함으로써 세포배양 지지체를 흔들림 없이 고정시킬 수 있기 때문에 세포배양 지지체에서 배양되는 세포들에 동일한 미세환경을 제공할 수 있다. 즉 세포배양 지지체에서 세포가 배양되는 과정에서 지지체의 흔들림으로 인한 배양용액의 불균일한 분산 및 배양되는 세포들의 이동에 의한 쏠림 등을 방지할 수 있어 각 세포에 동일한 기계, 물리, 화학적 자극을 부여함으로써 세포의 균일한 증식 및 목적하는 수준으로의 세포 증식에 기여할 수 있다.
이에 따라, 상기 제1접착층(125)과 수용부의 하부면(111) 사이의 접착력은 3 ~ 30 gf/inch일 수 있고, 바람직하게는 5 ~ 25 gf/inch일 수 있다. 만일 상기 제1접착층(125)과 수용부의 하부면(111) 사이의 접착력이 3 gf/inch 미만이면 세포배양용기(100)와 고정부재(120)의 부착력 저하로 인한 세포배양 지지체의 흔들림 등이 발생할 수 있어 균일한 세포배양에 문제가 있음에 따라 목적하는 수준으로의 세포배양 및 증식이 용이하지 않을 수 있고, 접착력이 30 gf/inch를 초과하면 세포배양용기(100)로부터 고정부재(120)를 분리하는 과정에서 세포에 손상이 가해질 수 있다.
또한, 상기 제2접착층(121)과 세포배양 지지체(130) 사이의 접착력은 7 ~ 60 gf/inch일 수 있고, 바람직하게는 10 ~ 50 gf/inch일 수 있다. 만일 상기 제2접착층(121)과 세포배양 지지체(130) 사이의 접착력이 7 gf/inch 미만이면 접착력 저하로 인한 세포배양 지지체의 흔들림 등이 발생할 수 있어 균일한 세포배양이 어려울 수 있음에 따라 목적하는 수준으로의 세포배양 및 증식이 용이하지 않을 수 있고, 접착력이 60 gf/inch를 초과하면 세포배양 지지체(130)를 분리하는 과정에서 과도한 기계적 응력이 작용하여 세포배양 지지체(130)에서 배양된 세포에 손상이 생길 우려가 있다.
한편, 상기 제1접착층(125)과 수용부의 하부면(111) 사이의 접착력과 상기 제2접착층(121)과 세포배양 지지체(130) 사이의 접착력의 범위가 일부 겹치더라도, 상술한 제1접착층(125)과 수용부의 하부면(111) 사이의 접착력과 상기 제2접착층(121)과 세포배양 지지체(130) 사이의 접착력의 범위 간의 관계를 만족하도록 구현되는 것은 자명하다.
상기 제1접착층(125) 및 제2접착층(121)은 통상적으로 세포 배양에 무해한 물질을 포함하는 성분을 포함하여 형성될 수 있고, 바람직하게는 각각 독립적으로 실리콘계 접착제 및 우레탄계 접착제로 이루어진 군에서 1종 이상을 포함할 수 있고, 보다 바람직하게는 실리콘계 접착제를 포함할 수 있다.
또한, 상기 제1접착층(125)은 두께가 7 ~ 55㎛일 수 있고, 바람직하게는 두께가 10 ~ 50㎛일 수 있다. 만일 상기 제1접착층(125)의 접착력이 7㎛ 미만이면 수용부의 하부면(111)에 고정되지 않을 수 있음에 따라, 세포 배양과정에서 워싱 솔루션(PBS, 에탄올(ethanol) 및 미디어(media) 등)에 의해 고정부재(120)가 박리될 수 있고, 두께가 55㎛를 초과하면 수용부의 하부면(111)에서 고정부재(120) 박리 시 박리가 용이하지 않은 문제가 있을 수 있다.
그리고, 상기 제2접착층(121)은 두께가 3 ~ 25㎛일 수 있고, 바람직하게는 두께가 5 ~ 20㎛일 수 있다. 만일 상기 제2접착층(121)의 두께가 3㎛ 미만이면 세포 배양 시 멤브레인이 박리될 수 있고, 두께가 25㎛를 초과하면 세포배양 지지체(130) 박리 시 배양된 세포가 손상될 수 있다.
상기 제1접착층(125) 및 제2접착층(121) 사이에 개재되어 지지기능을 수행하는 지지필름(123)은 당업계에서 통상적으로 일정한 수준의 기계적 강도를 가지며 지지기능을 수행할 수 있는 재료라면 제한 없이 사용할 수 있고, 바람직하게는 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 폴리이미드, 가교 폴리프로필렌, 나일론, 폴리우레탄계 수지, 아세테이트, 폴리벤즈이미다졸, 폴리이미드아마이드, 폴리에테르이미드, 폴리페닐렌설파이드(PPS), 폴리에틸렌테레프탈레이트(PET), 폴리트리메틸렌테레프탈레이트(PTT), 폴리부틸렌테레프탈레이트(PBT), 폴리비닐리덴플루오라이드(PVDF), 폴리테트라플루오로에틸렌(PTFE), 폴리클로로트리플루오로에틸렌(PCTFE), 폴리에틸렌테트라플루오로에틸렌(ETFE)로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 포함할 수 있다.
또한, 상기 지지필름(123)은 두께가 30 ~ 220㎛일 수 있고, 바람직하게는 두께가 50 ~ 200㎛일 수 있다. 만일 상기 지지필름(123)의 두께가 30㎛ 미만이면 충분한 기계적 강도를 얻기 어려울 수 있고, 두께가 220㎛를 초과하면 세포 회수 시 지지체를 제거하기 용이하지 않을 수 있다.
다음, 본 발명에 따른 세포배양용기(100, 100')에 구비되는 세포배양 지지체(130)에 대하여 설명한다.
상기 세포배양 지지체(130)는 직물, 편물 및 부직포 중 어느 하나 이상을 포함하는 원단일 수 있다.
예를 들어 상기 세포배양 지지체(130)가 직물로 구성된 경우, 직물에 포함되는 섬유가 종횡의 방향성이 있으며, 구체적인 조직은 평직, 능직 등일 수 있으며, 경사와 위사의 밀도는 특별히 한정하지 않는다.
또한, 예를 들어 상기 세포배양 지지체(130)가 편물로 구성된 경우, 편물을 이루는 조직은 공지의 니트조직으로 이루어질 수 있다. 일예로, 위편물, 경편물 등일 수 있으나 이에 대해서는 특별히 한정하지 않는다.
그리고, 예를 들어 상기 세포배양 지지체(130)가 부직포로 구성된 경우, 부직포는 포함되는 섬유에 종횡의 방향성이 없는 것을 의미하고, 케미컬본딩 부직포, 써멀본딩 부직포, 에어레이 부직포 등의 건식부직포나 습식부직포, 스판레스 부직포, 니들펀칭 부직포 또는 멜트블로운와 같은 공지된 부직포를 사용할 수 있으며, 일 예로 상기 부직포는 전기방사된 나노섬유로 형성된 나노섬유웹일 수 있다.
이와 같이 본 발명에 따른 세포배양 지지체를 구성하는 원단은 세포의 크기 및 종류를 고려하여 다양한 형태의 원단으로 구성이 가능하나, 도 2에서는 부직포로 구성된 것을 도시하였다.
도 2에 도시된 세포배양 지지체(130)에 대한 부분 확대로를 참조하면, 본 발명의 세포배양 지지체(130)를 이루는 원단은 방적사, 필라멘트사 또는 슬리팅사(slitting yarn), 전기방사된 나노섬유로 이루어진 원사일 수 있다.
상기 원사가 방적사나 필라멘트사일 경우 직경이 10㎚ ~ 100㎛, 바람직하게는 50㎚ ~ 90㎛일 수 있다. 다만, 이에 제한되는 것은 아니며, 배양시키려는 세포의 종류, 크기, 세포집합체의 형상 및 크기에 적합하도록 변경될 수 있다.
또한, 상기 방적사는 공지된 방법에 의한 원면을 통하여 제조된 것일 수 있다. 또한, 상기 필라멘트사는 공지된 방법에 의하여 방사되어 제조된 것일 수 있고, 상기 방사는 화학방사 또는 전기방사 등의 공지된 방사방법일 수 있다.
또한, 상기 슬리팅사는 시트상의 섬유집합체, 원단 등을 소정의 폭을 갖도록 절단시켜 제조된 것일 수 있다. 바람직하게는 상기 슬리팅사는 3차원 네트워크 구조를 갖는 시트상의 섬유웹을 소정의 폭을 갖도록 절단시켜 제조된 원사일 수 있다. 이때, 상기 섬유웹은 일정한 압력으로 압착시켜 슬리팅 공정의 용이성을 향상시키고, 슬리팅사의 강도를 증가시킬 수 있다. 일 예로 상기 슬리팅사는 평량이 0.1 ~ 100g/㎡인 섬유웹을 폭이 0.1 ~ 30㎜ 되도록 절단한 원사일 수 있다. 만일 폭을 0.1㎜ 미만으로 슬리팅할 경우 절단이 용이하지 않고, 가연시 가해지는 장력과 회전력에 의해 쉽게 사절될 수 있는 문제가 있다. 또한, 폭을 30㎜ 초과하여 슬리팅할 경우 연사 시 불균일한 꼬임이 발생할 수 있는 문제가 있다.
또한 상기 전기방사된 나노섬유는 방향의 정함 없이 복수 회 폴딩되어 배열/적층됨을 통해 3차원 네트워크 구조를 형성할 수 있다. 또는 복수개의 나노섬유를 포함하여 각각의 나노섬유가 독립적으로 폴딩 및/또는 섬유길이방향의 정함이 없이 각각이 배열/적층됨을 통해 3차원 네트워크 구조를 형성할 수 있다. 이때, 한 가닥 나노섬유 내의 서로 다른 표면간 및/또는 서로 다른 나노섬유의 표면 간에는 접착 또는 융착이 발생할 수 있고, 이를 통해 3차원 네트워크 구조가 구조적으로 더 복잡해지며 지지체에 로딩된 세포가 3차원 네트워크 구조로 형성된 기공 내부로 이동/증식할 수 있고, 입체적 형상/구조를 갖는 세포군집체로 세포를 배양시키기에 유리할 수 있다. 또한, 지지체 내부/외부에서 배양되는 세포의 증식률 및 생존률을 증가시키기 위해서는 세포의 증식에 필요한 영양분 등의 공급이 중요한데, 3차원 네트워크 구조의 나노섬유의 영양분을 포함하는 배양용액의 유로가 매우 복잡, 다양하게 형성됨으로써 지지체 내부에 위치한 세포까지 용이하게 영양분이 공급되어 세포사멸을 방지하고 세포증식을 향상시킬 수 있다.
다음으로, 상술한 원사는 섬유상으로 제조될 수 있는 공지된 섬유형성성분으로 구현된 것일 수 있으며, 원사의 종류에 따라서 적합한 재질을 선택하여 구현될 수 있고, 분해성이 요구되는 등 특별한 목적에 따라서 재질을 달리 선택할 수 있음에 따라서 본 발명은 이에 대해 특별히 한정하지 않는다. 상기 섬유형성성분은 면, 마, 등의 셀룰로오스 성분, 양모, 견 등의 단백질 성분, 또는 광물성 성분 등의 천연섬유 성분을 포함할 수 있다. 또는 상기 섬유형성성분은 공지된 인조섬유의 성분일 수 있다.
한편, 상기 섬유형성성분은 목적에 따라서 폴리스티렌(PS), 폴리에틸렌테레프탈레이트(PET), 폴리이더술폰(PES), 폴리비닐리덴플루오라이드(PVDF), 폴리아크릴로나이트릴(PAN), 폴리디메틸실록산(PDMS), 폴리아미드, 폴리알킬렌, 폴리알킬렌옥사이드(poly(alkylene oxide)), 폴리아미노산(poly(amino acids)), 폴리알릴아민(poly(allylamines), 폴리포스파젠(polyphosphazene) 및 폴리에틸렌옥사이드-폴리프로필렌옥사이드 블록공중합체로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 비생분해성 성분, 또는 폴리카프로락톤(polycaprolactone), 폴리다이옥사논(polydioxanone), 폴리글리콜릭산(polyglycolic acid), PLLA(poly(L-lactide)), PLGA(poly(DL-lactide-co-glycolide)), 폴리락틱산(Polylactic acid) 및 폴리비닐알코올(polyvinyl alcohol)로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 생분해성 성분을 포함할 수 있다.
한편, 상술한 원사는 섬유형성성분 이외에 세포배양성 향상물질을 포함할 수 있고, 상기 세포배양성 향상물질로서 접착성분이나 생리활성성분 중 어느 하나 이상을 더 포함할 수 있다. 이때, 상기 원사의 내부에는 접착성분이나 생리활성성분이 구비되지 않고, 외부면 일 영역에 고정된 접착성분을 통해 생리활성성분이 원사 외부면 일부분에 고정될 수 있다. 또는 원사의 외부면을 전부 피복하여 구비되는 접착성분을 전부 피복하도록 생리활성성분이 구비될 수도 있다.
최근 연구되고 있는 세포배양기술은 실제 체내의 세포간 환경을 in vitro에서 구현시키는 방향으로 연구되고 있으며, 세포배양 환경을 체내의 세포환경과 유사하게 조성시키기 위하여 체내 세포외 기질(ECM)에 구비되는 각종 성분을 in vitro 배양시 배양용액에 포함시켜 적용하는 추세에 있다. 그러나 배양용액에 세포배양을 증진시킬 수 있는 물질을 포함시킬 경우 배양되는 세포에 지속적으로 상기 물질을 노출시키는데 한계가 있으며, 지속적 노출을 위해서는 배양용액에 상기 물질의 함량을 증가시켜야 하나, 이는 비용의 증가, 증식효율에 있어서 문제가 있다.
이에 따라 본 발명의 일 실시예에 따른 원사의 표면에는 접착성분 및 생리활성성분이 고정된 상태로 지지체에 구비시켜 원사 상 또는 원사로 둘러싸인 공간 내에 위치하는 배양세포에 생리활성성분을 통한 세포자극 및 이를 통한 세포 내 신호전달을 지속, 증폭시켜 세포증식을 더욱 가속화 시킬 수 있는 이점이 있다.
상기 접착성분은 배양세포를 초기에 세포 지지체 상에 고정시켜 배양용액상에 로딩된 세포가 부유하는 것을 방지하는 기능 및/또는 생리활성성분을 원사상에 고정시켜 생리활성성분이 원사 상에 세포배양 되는 과정에서 지지섬유에서 탈리를 방지하는 기능을 수행할 수 있다. 상기 접착성분은 통상의 생체적합성이 있어서 세포독성을 발생시키지 않는 공지된 접착성분의 경우 제한없이 사용될 수 있으나, 바람직하게는 서열번호 1 내지 서열번호 7의 아미노산 서열이 1회 내지 20회 반복하여 이루어진 단백질 및 이들 단백질 중 적어도 2개가 융합된 단백질로 이루어진 군에서 선택된 1 종 이상을 포함할 수 있고, 이를 통해 세포독성이 현저히 저하되고, 생리활성성분의 접착력이 우수한 동시에 세포배양 중 접착성분이 배양용액에 용해됨에 따라서 발생하는 생리활성성분의 탈리나 세포의 단리가 방지될 수 있는 이점이 있다.
다음으로, 원사에 구비될 수 있는 생리활성성분에 대해 보다 구체적으로 설명한다. 상기 생리활성성분은 세포배양을 증진시킬 수 있도록 세포의 부착, 이동, 성장, 증식(proliferation) 및 분화(differentiation) 중 어느 하나 이상을 직/간접적으로 유도하는 물질일 수 있으며, 이와 같은 기능을 발현하는 것으로 알려진 공지의 물질인 경우 제한 없이 포함될 수 있다. 일예로, 상기 생리활성성분은 모노아민, 아미노산, 펩타이드, 당류(saccharide), 지질(lipid), 단백질, 당단백질(glucoprotein), 당지질(glucolipid), 프로테오글리칸, 뮤코다당(mucopolysaccharide) 및 핵산(nucleic acid) 으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 화합물 및 세포 중 어느 하나 이상을 포함할 수 있다. 이때, 모노아민은 일예로, 카테콜아민, 인돌아민 등 1차 아민을 포함하는 화합물을 포함한다. 또한, 상기 펩타이드는 올리고펩타이드를 포함하며, 상기 단백질은 폴리펩티드를 포함하고 일 예로, 피브로넥틴 등일 수 있다. 상기 당류는 단당류, 다당류, 올리고당 및 탄수화물을 포함하고, 상기 지질은 일예로 스테로이드 호르몬일 수 있다.
한편, 상기 생리활성성분은 모티프를 포함할 수 있다. 상기 모티프는 생장인자(growth factor) 또는 세포외기질(extracellular matrix)에 포함되는 단백질, 당단백질 및 프로테오글리칸 중에서 선택된 어느 하나 이상에 구비된 소정의 아미노산 서열을 포함하는 천연 펩타이드 또는 재조합 펩타이드일 수 있다. 구체적으로 상기 모티프는 아드레노메둘린(Adrenomedullin), 앙기오포이에틴(Angiopoietin), 뼈형성단백질(BMP), 뇌유래신경영양인자(BDNF), 표피생장인자(EGF), 에리스로포이에틴(Erythropoietin), 섬유아세포 증식인자(Fibroblast growth factor), 신경교의세포주유래신경영양인자(GDNF), 과립구집락자극인자(Granulocyte colony-stimulating factor, G-CSF), 과립대식세포집락자극인자(Granulocyte macrophage colony-stimulating factor, GM-CSF), 성장분화인자-9(Growth differentiation factor-9, GDF9), 간세포생장인자(HGF), 간세포선종 유래 생장인자(Hepatoma-derived growth factor, HDGF), 인슐린유사생장인자(Insulin-like growth factor, IGF), 각질세포 증식인자(Keratinocyte growth factor , KGF), 이동자극인자(Migration-stimulating factor, MSF), 마이오스타틴(Myostatin , GDF-8), 신경생장인자(Nerve growth factor, NGF), 혈소판유래생장인자(Platelet-derived growth factor, PDGF), 트롬보포이에틴(Thrombopoietin, TPO), T-세포생장인자(T-cell growth factor, TCGF), 뉴로필린, 형질전환생장인자-알파(TGF-α), 형질전환생장인자-베타(TGF-β), 종양괴사인자-알파(TNF-α), 혈관내피생장인자(VEGF), IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6 및 IL-7로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 생장인자(GF)에 포함된 소정의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 또는, 히알루론산, 헤파린황산염, 콘드로이틴황산염, 테르마틴황산염, 케라탄황산염, 알진염, 피브린, 피브리노겐, 콜라겐, 엘라스틴, 피브로넥틴, 비트로넥틴, 카드헤린 및 라미닌으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 세포외기질(extracellular matrix)에 포함되는 소정의 아미노산의 서열을 포함할 수 있다. 또한, 상기 모티프는 생장인자에 포함되는 소정의 아미노산 서열 및 상기 세포외기질에 포함되는 소정의 아미노산 서열을 모두 포함할 수도 있다. 보다 바람직하게는 상기 모티프는 서열번호 8 내지 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하여 이루어진 단백질 및 이들 단백질 중 적어도 2개가 융합된 단백질로 이루어진 군에서 선택된 1 종 이상을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
한편, 상기 모티프는 상술한 접착성분에 공유결합시켜 일체로 구현될 수도 있다. 일 예로, 상기 접착성분이 단백질인 경우 폴리펩티드의 N-말단 및/또는 C-말단에 상기 모티프를 직접 공유결합시키거나 이종의 펩타이드 또는 폴리펩타이드를 개재시켜 공유결합, 시킬 수 있으며, 이 경우 원사에 더욱 견고히 생리활성성분을 부착시킬 수 있고, 생리활성성분의 세포배양 중 탈리를 최소화시킬 수 있다.
또한, 상기 생리활성성분이 모티프일 경우 상기 모티프는 세포의 부착성을 증진시키기 위하여 공지된 홍합단백질 또는 홍합단백질 중 특정한 도메인이나 모티프를 더 포함하여 구현될 수 있다.
한편, 본 발명은 본 발명의 일 실시예에 따른 세포배양용기에 구비되는 세포배양 지지체인 원단에 배양세포를 이식시켜 배양된 세포들을 포함하는 조직공학용 이식체를 구현할 수 있다. 이때, 상기 배양세포는 원사의 외부면 및 해연되어 원사간 이격된 공간을 포함하는 부분에서는 세포가 상기 공간으로 이동하여 배양됨에 따라서 원사의 내부에 배양된 세포가 위치할 수 있다. 이때, 배양된 세포들 중 인접한 세포들 사이에는 이격된 원사들이 위치할 수 있고 이 경우 인접된 세포간의 접촉이 직접적으로 방지되어 세포배양에 더욱 유리할 수 있다.
또한, 상기 세포는 전능줄기세포, 만능줄기세포, 다능줄기세포, 올리고포텐트(oligopotent) 줄기세포 및 단일줄기세포로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 줄기세포, 및 조혈모세포, 간세포, 섬유세포, 상피세포, 중피세포, 내피세포, 근육세포, 신경세포, 면역세포, 지방세포, 연골세포, 골세포, 혈액세포 및 피부세포로 이루어진 군에서 선택된 분화세포 중 1종 이상을 포함할 수 있다. 일예로, 상기 세포는 형상이 구형보다는 일방향으로 길쭉한 형상을 갖는 세포이거나 이동성이 강한 세포일 수 있다.
또한, 상기 원사의 재질을 인체에 무해한 섬유형성성분으로 구현할 경우 배양된 세포가 부착된 지지체를 직접 인체 내부로 이식이 가능하며, 이를 통해 배양된 세포를 조직 내 더욱 용이하고, 안정적으로 생착시킬 수 있는 이점이 있다.
하기 표 2는 본 발명에서 설명된 서열번호에 따른 아미노산 서열을 나타낸 서열목록에 대한 표이다.
서열번호 아미노산 서열
1 Met Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr
Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala
Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro
Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ser Ser Glu
Glu Tyr Lys Gly Gly Tyr Tyr Pro Gly Asn Thr Tyr His Tyr His Ser
Gly Gly Ser Tyr His Gly Ser Gly Tyr His Gly Gly Tyr Lys Gly Lys
Tyr Tyr Gly Lys Ala Lys Lys Tyr Tyr Tyr Lys Tyr Lys Asn Ser Gly
Lys Tyr Lys Tyr Leu Lys Lys Ala Arg Lys Tyr His Arg Lys Gly Tyr
Lys Lys Tyr Tyr Gly Gly Ser Ser Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr
Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser
Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys
Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro
Pro Thr Tyr Lys
2 Met Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr
Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala
Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro
Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ser Ser Glu
Glu Tyr Lys Gly Gly Tyr Tyr Pro Gly Asn Thr Tyr His Tyr His Ser
Gly Gly Ser Tyr His Gly Ser Gly Tyr His Gly Gly Tyr Lys Gly Lys
Tyr Tyr Gly Lys Ala Lys Lys Tyr Tyr Tyr Lys Tyr Lys Asn Ser Gly
Lys Tyr Lys Tyr Leu Lys Lys Ala Arg Lys Tyr His Arg Lys Gly Tyr
Lys Lys Tyr Tyr Gly Gly Ser Ser Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr
Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser
Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys
Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro
Pro Thr Tyr Lys Gly Arg Gly Asp Ser Pro
3 Met Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr
Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala
Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro
Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Pro Trp Ala
Asp Tyr Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Pro Pro Arg Arg Tyr Gly Gly Gly
Asn Tyr Asn Arg Tyr Gly Arg Arg Tyr Gly Gly Tyr Lys Gly Trp Asn
Asn Gly Trp Lys Arg Gly Arg Trp Gly Arg Lys Tyr Tyr Gly Ser Ala
Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro
Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro
Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr
Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Leu
4 Ala Asp Tyr Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Pro Pro Arg Arg Tyr Gly Gly
Gly Asn Tyr Asn Arg Tyr Gly Arg Arg Tyr Gly Gly Tyr Lys Gly Trp
Asn Asn Gly Trp Lys Arg Gly Arg Trp Gly Arg Lys Tyr Tyr
5 Ser Ser Glu Glu Tyr Lys Gly Gly Tyr Tyr Pro Gly Asn Thr Tyr His
Tyr His Ser Gly Gly Ser Tyr His Gly Ser Gly Tyr His Gly Gly Tyr
Lys Gly Lys Tyr Tyr Gly Lys Ala Lys Lys Tyr Tyr Tyr Lys Tyr Lys
Asn Ser Gly Lys Tyr Lys Tyr Leu Lys Lys Ala Arg Lys Tyr His Arg
Lys Gly Tyr Lys Lys Tyr Tyr Gly Gly Gly Ser Ser
6 Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys
7 Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro
Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys
Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr
Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys
8 Arg Gly Asp
9 Arg Gly Asp Ser
10 Arg Gly Asp Cys
11 Arg Gly Asp Val
12 Arg Gly Asp Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
13 Gly Arg Gly Asp Ser
14 Gly Arg Gly Asp Thr Pro
15 Gly Arg Gly Asp Ser Pro
16 Gly Arg Gly Asp Ser Pro Cys
17 Tyr Arg Gly Asp Ser
18 Ser Pro Pro Arg Arg Ala Arg Val Thr
19 Trp Gln Pro Pro Arg Ala Arg Ile
20 Asn Arg Trp His Ser Ile Tyr Ile Thr Arg Phe Gly
21 Arg Lys Arg Leu Gln Val Gln Leu Ser Ile Arg Thr
22 Lys Ala Phe Asp Ile Thr Tyr Val Arg Leu Lys Phe
23 Ile Lys Val Ala Asn
24 Lys Lys Gln Arg Phe Arg His Arg Asn Arg Lys Gly Tyr Arg Ser Gln
25 Val Ala Glu Ile Asp Gly Ile Gly Leu
26 Pro His Ser Arg Asn Arg Gly Asp Ser Pro
27 Asn Arg Trp His Ser Ile Tyr Ile Thr Arg Phe Gly
28 Thr Trp Tyr Lys Ile Ala Phe Gln Arg Asn Arg Lys
하기의 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 구체적으로 설명하기로 하지만, 하기 실시예가 본 발명의 범위를 제한하는 것은 아니며, 이는 본 발명의 이해를 돕기 위한 것으로 해석되어야 할 것이다.
<실시예 1>
먼저 지지필름으로 두께 75㎛의 폴리에스터 필름(Poyester, 세기 컨버텍)의 하부면에 실리콘계 접착제로 두께 30㎛의 제1접착층을 형성시키고, 상부면에 실리콘계 접착제로 두께 15㎛의 제2접착층을 형성시켜서 고정부재를 제조하였다.
그리고, 접착물질로 피프로넥틴(fibronectin, RGD based)을 0.3mg/ml 및 생리활성물질로 라미닌(laminin)을 0.3mg/ml로 포함하고, 섬유형성성분으로 PLGA을 13중량% 및 용매로 THF과 DMF를 3 : 7의 중량비로 총 87중량%로 포함하는 제1방사용액을 전기방사 장치를 사용하여 인가전압 25KV, 집전체와 방사구까지의 거리 25cm, 토출량 0.05ml/hole의 조건으로 RH 60% 30의 환경에서 전기방사를 실시하여 평균직경이 600nm인 나노섬유로 형성된 나노섬유웹을 수득하였다. 수득된 나노섬유웹을 온도 130℃, 압력 4 kPa로 캘린더링 2회 실시한 방법으로 평량이 15.1 g/㎡이고, 두께가 25 ㎛이며, 평균 공경이 0.8 ㎛이고, 공기투과도 5 cfm의 원단인 세포배양 지지체를 제조하여 상기 제조한 고정부재의 제2접착층과 접하도록 부착하였다.
이후, 그리고, 폴리에틸렌 테레프탈레이트 수지로 형성되고, 수용부를 구비하는 세포배양용 용기의 수용부 하부면에, 세포배양 지지체를 부착한 고정부재를 제1접착층이 접하도록 부착하여 세포배양용기를 제조하였다.
이때, 제1접착층과 수용부의 하부면 사이의 접착력은 25 gf/inch였고, 제2접착층과 세포배양 지지체 사이의 접착력은 50 gf/inch였다.
<실시예 2 ~ 11 및 비교예 1>
실시예 1과 동일하게 실시하여 제조하되, 제1접착층과 수용부의 하부면 사이의 접착력, 제2접착층과 세포배양 지지체 사이의 접착력, 제1접착층의 두께, 제2접착층의 두께 및 지지필름의 두께 등을 변경하여 표 3 및 표 4와 같은 세포배양용기를 제조하였다.
<실험예>
실시예 및 비교예에서 제조된 각각의 세포배양용기에 섬유아세포(HS27)를 로딩시킨 후 10% 완전배지에서 4일동안 증식시켰다. 이때, 10 % 완전배지는 듀베코스의 변형된 이글즈 배지(DMEM)에 함의(Ham's) F12 배지를 1 : 1.5의 부피비로 혼합한 후, 소태아혈청(fetal bovine serum) 7 vol%, 페니실린 65 U/mL 및 스트렙토마이신 65㎍/mL을 첨가하여 제조하였다. 이후, 하기의 물성을 평가하여 하기 표 3 및 표 4에 나타내었다.
1. 세포배양의 균일성 평가
증식시킨 섬유아세포를 포함하는 각각의 세포배양용기에서 세포배양 지지체와 고정부재 적층체를 분리하고, 적층체에서 세포배양 지지체를 분리한 후, 세포계수기(cell counter)을 이용하여 세포수를 측정한 후 실시예 1에서 측정된 세포수를 100%로 기준하여 다른 실시예 및 비교예의 세포수를 상대적으로 나타내었다.
이때, 세포수가 작다는 것은 지지체의 흔들림으로 인한 배양용액의 불균일한 분산 및 배양되는 세포들의 이동에 의한 쏠림 등에 의해 균일한 세포배양이 어려움에 따라, 세포배양 및 증식이 저하된 것을 나타낸다.
2. 세포 손상 평가
증식시킨 섬유아세포를 포함하는 각각의 세포배양용기에서 세포배양 지지체와 고정부재 적층체를 분리하고, 적층체에서 세포배양 지지체를 분리한 후, 세포계수기(cell counter)을 이용하여 세포수 측정 및 세포생사판별시험을 통해 전체 세포에 대하여 살아있는 세포의 비율을 측정하여 세포 손상을 평가하였다.
구분 실시예
1		 실시예
2		 실시예
3		 실시예
4		 실시예
5		 실시예
6
제1
접착층		 수용부의 하부면 사이의 접착력
(gf/inch), a		 25 5 35 25 15 15
두께(㎛) 30 30 30 30 30 30
제2
접착층		 세포배양 지지체 사이의 접착력
(gf/inch), b		 50 10 38.5 37.5 45 75
두께(㎛) 15 15 15 15 15 15
a와 b의 접착력 비 1:2 1:2 1:1.1 1:1.5 1:3 1:5
지지
필름		 두께(㎛) 75 75 75 75 75 75
세포배양 균일성 평가(%) 100 95.4 99.2 99.8 97.2 97.0
세포 손상 평가(%) 95.1 93.0 78.5 94.7 94.8 76.6
구분 실시예
7		 실시예
8		 실시예
9		 실시예
10		 실시예
11		 비교예
1
제1
접착층		 수용부의 하부면 사이의 접착력
(gf/inch), a		 1 25 25 25 25 10
두께(㎛) 30 5 60 30 30 30
제2
접착층		 세포배양 지지체 사이의 접착력
(gf/inch), b		 2 50 50 50 50 5
두께(㎛) 15 15 15 1 30 15
a와 b의 접착력 비 1:2 1:2 1:2 1:1.1 1:1.5 1:0.5
지지
필름		 두께(㎛) 75 75 75 75 75 75
세포배양 균일성 평가(%) 40.3 82.7 96.3 83.5 93.2 62.7
세포 손상 평가(%) 67.9 92.8 81.1 89.6 80.4 84.5
상기 표 3 및 표 4에서 알 수 있듯이,본 발명에 따른 제1접착층과 수용부의 하부면 사이의 접착력, 제2접착층과 세포배양 지지체 사이의 접착력, 제1접착층의 두께, 제2접착층의 두께 및 지지필름의 두께 등을 모두 만족하는 실시예 1, 2, 4 및 5가, 이 중에서 하나라도 누락된 실시예 3, 6 ~ 11 및 비교예 1에 비하여 세포배양의 균일성이 우수한 동시에, 세포 손상이 발생하지 않는 것을 확인할 수 있다.
이상에서 본 발명의 일 실시예에 대하여 설명하였으나, 본 발명의 사상은 본 명세서에 제시되는 실시 예에 제한되지 아니하며, 본 발명의 사상을 이해하는 당업자는 동일한 사상의 범위 내에서, 구성요소의 부가, 변경, 삭제, 추가 등에 의해서 다른 실시 예를 용이하게 제안할 수 있을 것이나, 이 또한 본 발명의 사상범위 내에 든다고 할 것이다.
100, 100': 세포배양용기
110: 수용부
111: 수용부의 하부면
113: 수용부의 측면
120: 고정부재
121: 제2접착층
123: 지지필름
125: 제1접착층
130: 세포배양 지지체
<110> AMOLIFESCIENCE <120> CELL CULTURE CONTAINER <130> 1064318 <150> KR 10-2017-0089071 <151> 2017-07-13 <160> 28 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 196 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 1 Met Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr 1 5 10 15 Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala 20 25 30 Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro 35 40 45 Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ser Ser Glu 50 55 60 Glu Tyr Lys Gly Gly Tyr Tyr Pro Gly Asn Thr Tyr His Tyr His Ser 65 70 75 80 Gly Gly Ser Tyr His Gly Ser Gly Tyr His Gly Gly Tyr Lys Gly Lys 85 90 95 Tyr Tyr Gly Lys Ala Lys Lys Tyr Tyr Tyr Lys Tyr Lys Asn Ser Gly 100 105 110 Lys Tyr Lys Tyr Leu Lys Lys Ala Arg Lys Tyr His Arg Lys Gly Tyr 115 120 125 Lys Lys Tyr Tyr Gly Gly Ser Ser Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr 130 135 140 Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser 145 150 155 160 Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys 165 170 175 Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro 180 185 190 Pro Thr Tyr Lys 195 <210> 2 <211> 202 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 2 Met Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr 1 5 10 15 Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala 20 25 30 Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro 35 40 45 Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ser Ser Glu 50 55 60 Glu Tyr Lys Gly Gly Tyr Tyr Pro Gly Asn Thr Tyr His Tyr His Ser 65 70 75 80 Gly Gly Ser Tyr His Gly Ser Gly Tyr His Gly Gly Tyr Lys Gly Lys 85 90 95 Tyr Tyr Gly Lys Ala Lys Lys Tyr Tyr Tyr Lys Tyr Lys Asn Ser Gly 100 105 110 Lys Tyr Lys Tyr Leu Lys Lys Ala Arg Lys Tyr His Arg Lys Gly Tyr 115 120 125 Lys Lys Tyr Tyr Gly Gly Ser Ser Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr 130 135 140 Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser 145 150 155 160 Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys 165 170 175 Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro 180 185 190 Pro Thr Tyr Lys Gly Arg Gly Asp Ser Pro 195 200 <210> 3 <211> 172 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 3 Met Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr 1 5 10 15 Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala 20 25 30 Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro 35 40 45 Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Pro Trp Ala 50 55 60 Asp Tyr Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Pro Pro Arg Arg Tyr Gly Gly Gly 65 70 75 80 Asn Tyr Asn Arg Tyr Gly Arg Arg Tyr Gly Gly Tyr Lys Gly Trp Asn 85 90 95 Asn Gly Trp Lys Arg Gly Arg Trp Gly Arg Lys Tyr Tyr Gly Ser Ala 100 105 110 Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro 115 120 125 Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro 130 135 140 Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr 145 150 155 160 Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Leu 165 170 <210> 4 <211> 46 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 4 Ala Asp Tyr Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Pro Pro Arg Arg Tyr Gly Gly 1 5 10 15 Gly Asn Tyr Asn Arg Tyr Gly Arg Arg Tyr Gly Gly Tyr Lys Gly Trp 20 25 30 Asn Asn Gly Trp Lys Arg Gly Arg Trp Gly Arg Lys Tyr Tyr 35 40 45 <210> 5 <211> 76 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 5 Ser Ser Glu Glu Tyr Lys Gly Gly Tyr Tyr Pro Gly Asn Thr Tyr His 1 5 10 15 Tyr His Ser Gly Gly Ser Tyr His Gly Ser Gly Tyr His Gly Gly Tyr 20 25 30 Lys Gly Lys Tyr Tyr Gly Lys Ala Lys Lys Tyr Tyr Tyr Lys Tyr Lys 35 40 45 Asn Ser Gly Lys Tyr Lys Tyr Leu Lys Lys Ala Arg Lys Tyr His Arg 50 55 60 Lys Gly Tyr Lys Lys Tyr Tyr Gly Gly Gly Ser Ser 65 70 75 <210> 6 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 6 Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys 1 5 10 <210> 7 <211> 60 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 7 Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro 1 5 10 15 Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys 20 25 30 Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr 35 40 45 Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys 50 55 60 <210> 8 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 8 Arg Gly Asp 1 <210> 9 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 9 Arg Gly Asp Ser 1 <210> 10 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 10 Arg Gly Asp Cys 1 <210> 11 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 11 Arg Gly Asp Val 1 <210> 12 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 12 Arg Gly Asp Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro 1 5 10 <210> 13 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 13 Gly Arg Gly Asp Ser 1 5 <210> 14 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 14 Gly Arg Gly Asp Thr Pro 1 5 <210> 15 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 15 Gly Arg Gly Asp Ser Pro 1 5 <210> 16 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 16 Gly Arg Gly Asp Ser Pro Cys 1 5 <210> 17 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 17 Tyr Arg Gly Asp Ser 1 5 <210> 18 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 18 Ser Pro Pro Arg Arg Ala Arg Val Thr 1 5 <210> 19 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 19 Trp Gln Pro Pro Arg Ala Arg Ile 1 5 <210> 20 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 20 Asn Arg Trp His Ser Ile Tyr Ile Thr Arg Phe Gly 1 5 10 <210> 21 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 21 Arg Lys Arg Leu Gln Val Gln Leu Ser Ile Arg Thr 1 5 10 <210> 22 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 22 Lys Ala Phe Asp Ile Thr Tyr Val Arg Leu Lys Phe 1 5 10 <210> 23 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 23 Ile Lys Val Ala Asn 1 5 <210> 24 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 24 Lys Lys Gln Arg Phe Arg His Arg Asn Arg Lys Gly Tyr Arg Ser Gln 1 5 10 15 <210> 25 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 25 Val Ala Glu Ile Asp Gly Ile Gly Leu 1 5 <210> 26 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 26 Pro His Ser Arg Asn Arg Gly Asp Ser Pro 1 5 10 <210> 27 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 27 Asn Arg Trp His Ser Ile Tyr Ile Thr Arg Phe Gly 1 5 10 <210> 28 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 28 Thr Trp Tyr Lys Ile Ala Phe Gln Arg Asn Arg Lys 1 5 10

Claims (13)

  1. 내부에 세포배양 지지체를 수용하는 내부 공간인 수용부를 구비한 세포배양용기에 있어서,
    상기 세포배양용기는 상기 수용부의 하부면에, 나노섬유로 형성된 나노섬유웹인 상기 세포배양 지지체를 고정시키기 위한 고정부재를 포함하며,
    상기 고정부재는,
    상기 수용부의 하부면에 부착되는 두께가 7 ~ 55㎛인 제1접착층;
    상기 세포배양 지지체의 하부면과 부착되는 두께가 3 ~ 25㎛인 제2접착층; 및
    상기 제1접착층 및 제2접착층 사이에 개재되어 지지기능을 수행하는 지지필름;을 포함하고,
    상기 제2접착층과 세포배양 지지체 사이의 접착력은 7 ~ 60 gf/inch이며,
    상기 제1접착층과 수용부의 하부면 사이의 접착력 및, 상기 제2접착층과 세포배양 지지체 사이의 접착력은 접착력 비가 1 : 1.5 ~ 3인 세포배양용기.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 제1항에 있어서,
    상기 제1접착층과 수용부의 하부면 사이의 접착력은 3 ~ 30 gf/inch인 세포배양용기.
  5. 삭제
  6. 제1항에 있어서,
    상기 제1접착층 및 제2접착층은 각각 독립적으로 실리콘계 접착제 및 우레탄계 접착제로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상을 포함하는 세포배양용기.
  7. 삭제
  8. 삭제
  9. 제1항에 있어서,
    상기 지지필름은 두께가 30 ~ 220㎛인 세포배양용기.
  10. 제1항에 있어서,
    상기 지지필름은 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 폴리이미드, 가교 폴리프로필렌, 나일론, 폴리우레탄계 수지, 아세테이트, 폴리벤즈이미다졸, 폴리이미드아마이드, 폴리에테르이미드, 폴리페닐렌설파이드(PPS), 폴리에틸렌테레프탈레이트(PET), 폴리트리메틸렌테레프탈레이트(PTT), 폴리부틸렌테레프탈레이트(PBT), 폴리비닐리덴플루오라이드(PVDF), 폴리테트라플루오로에틸렌(PTFE), 폴리클로로트리플루오로에틸렌(PCTFE), 폴리에틸렌테트라플루오로에틸렌(ETFE)로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 포함하는 세포배양용기.
  11. 삭제
  12. 제1항에 있어서,
    상기 나노섬유웹은 세포배양 향상물질을 포함하는 세포배양용기.
  13. 제12항에 있어서,
    상기 세포배양 향상물질은 세포의 부착, 이동, 성장, 증식(proliferation) 및 분화(differentiation) 중 어느 하나 이상을 유도하는 생리활성성분을 포함하는 세포배양용기.
KR1020180081702A 2017-07-13 2018-07-13 세포배양용기 KR102109453B1 (ko)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020170089071 2017-07-13
KR20170089071 2017-07-13

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20190008148A KR20190008148A (ko) 2019-01-23
KR102109453B1 true KR102109453B1 (ko) 2020-05-13

Family

ID=65001409

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020180081702A KR102109453B1 (ko) 2017-07-13 2018-07-13 세포배양용기

Country Status (5)

Country Link
US (1) US11248201B2 (ko)
EP (1) EP3653696A4 (ko)
KR (1) KR102109453B1 (ko)
CN (1) CN111065727B (ko)
WO (1) WO2019013580A1 (ko)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100378682B1 (ko) * 2000-12-26 2003-04-07 백남춘 가공 생선 제조방법
KR20210157046A (ko) * 2020-06-19 2021-12-28 주식회사 아모그린텍 세포배양기

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102253725B1 (ko) * 2019-08-09 2021-05-20 주식회사 티앤알바이오팹 바이오 접착제가 전처리된 3차원 세포 조직체의 배양 및 테스트 장치
US20230340402A1 (en) * 2019-12-27 2023-10-26 Amolifescience Co., Ltd. Cell culture substrate and manufacturing method thereof
WO2021133143A1 (ko) * 2019-12-27 2021-07-01 주식회사 아모라이프사이언스 세포배양기재 및 이의 제조방법
US20230357688A1 (en) * 2020-09-30 2023-11-09 Corning Incorporated Culture vessels containing 3d cell culture substrates with diffusion structures
DE102021106915A1 (de) * 2021-03-19 2022-09-22 Dynamic42 Gmbh Zellkulturkammer und Verfahren zur Kultivierung von Zellen und zur in vitro-Herstellung von Zellschichten und Organmodellen

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2013099286A (ja) * 2011-11-08 2013-05-23 Dainippon Printing Co Ltd 細胞培養容器
JP2016013111A (ja) * 2014-07-03 2016-01-28 大日本印刷株式会社 底面部を剥離可能な培養容器
WO2016068266A1 (ja) * 2014-10-31 2016-05-06 国立大学法人京都大学 生分解性ポリマーを用いた３次元培養方法、及び細胞移植を可能にする培養基材

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20040017842A (ko) * 2001-07-30 2004-02-27 가부시키가이샤 재팬 티슈 엔지니어링 조직 재생용 기재, 이식용 재료 및 그의 제조방법
EP2011857A4 (en) * 2006-04-26 2012-12-26 Toyo Gosei Co Ltd METHOD FOR PRODUCING A CELL CULTURAL CONTAINER
US20080274054A1 (en) * 2007-05-01 2008-11-06 Taipei Veterans General Hospital Composite for Thermo-Sensitive Cell-Tissue Transplanted Scaffold and Use thereof
AU2008268566A1 (en) * 2007-06-22 2008-12-31 Innovative Surface Technologies, Inc. Stimuli responsive nanofibers
CN101676382B (zh) * 2008-09-18 2013-03-27 中国人民解放军第三军医大学 仿生组织培养室
JP5496488B2 (ja) * 2008-10-22 2014-05-21 学校法人東京女子医科大学 細胞パターン回収ツール
KR20110135211A (ko) * 2010-06-10 2011-12-16 포항공과대학교 산학협력단 세포 배양용 용기 및 그 제조 방법
CN102952751A (zh) * 2011-08-23 2013-03-06 首都医科大学附属北京友谊医院 多种细胞共培养支架
KR20140048733A (ko) 2012-10-16 2014-04-24 삼성전자주식회사 다중 웰 플레이트 및 상기 다중 웰 플레이트를 이용한 표적 물질 분석 방법
KR101431914B1 (ko) * 2012-12-20 2014-08-22 경북대학교 산학협력단 세포배양 미세 플레이트 및 이를 포함하는 세포배양용기
WO2014112633A1 (ja) * 2013-01-18 2014-07-24 東洋合成工業株式会社 細胞培養用基材及び細胞培養用基材の製造方法
CN205347445U (zh) * 2016-01-22 2016-06-29 天津卫凯生物工程有限公司 细胞培养纤维膜支撑架、细胞培养支架及细胞培养装置

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2013099286A (ja) * 2011-11-08 2013-05-23 Dainippon Printing Co Ltd 細胞培養容器
JP2016013111A (ja) * 2014-07-03 2016-01-28 大日本印刷株式会社 底面部を剥離可能な培養容器
WO2016068266A1 (ja) * 2014-10-31 2016-05-06 国立大学法人京都大学 生分解性ポリマーを用いた３次元培養方法、及び細胞移植を可能にする培養基材

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100378682B1 (ko) * 2000-12-26 2003-04-07 백남춘 가공 생선 제조방법
KR20210157046A (ko) * 2020-06-19 2021-12-28 주식회사 아모그린텍 세포배양기
KR102523612B1 (ko) * 2020-06-19 2023-04-27 주식회사 아모그린텍 세포배양기

Also Published As

Publication number Publication date
US20210087509A1 (en) 2021-03-25
EP3653696A1 (en) 2020-05-20
US11248201B2 (en) 2022-02-15
CN111065727A (zh) 2020-04-24
WO2019013580A1 (ko) 2019-01-17
CN111065727B (zh) 2023-09-12
KR20190008148A (ko) 2019-01-23
EP3653696A4 (en) 2021-05-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102109453B1 (ko) 세포배양용기
KR101916153B1 (ko) 세포배양 지지체용 원사, 이를 포함하는 세포배양 지지체용 원단
KR101856575B1 (ko) 세포배양 지지체용 원사 및 이를 포함하는 원단
Sun et al. Self-organization of skin cells in three-dimensional electrospun polystyrene scaffolds
KR102119514B1 (ko) 세포배양용 또는 조직공학용 지지체
KR101927840B1 (ko) 세포배양 지지체용 원사 및 이를 포함하는 원단
AU2005319401A1 (en) Tissue engineering devices for the repair and regeneration of tissue
US20190382719A1 (en) Three-dimensional micro-environment structure for controlling cell behavior, three-dimensional surface for controlling cell behavior, and method for manufacturing array and three-dimensional micro-environment structure
KR102394713B1 (ko) 세포배양용기
KR102527073B1 (ko) 세포배양 지지체용 혼섬사 및 이를 포함하는 세포배양 지지체용 원단
KR102511304B1 (ko) 세포배양 지지체용 혼섬사 제조방법, 이를 통해 구현된 세포배양 지지체용 혼섬사 및 이를 포함하는 원단
KR102443838B1 (ko) 세포배양용 카트리지
KR102463360B1 (ko) 세포배양시트 및 이를 포함하는 대용량 세포 배양기
KR102386538B1 (ko) 세포배양 지지체용 원단 및 이를 포함하는 세포배양기
KR102591579B1 (ko) 세포배양 지지체용 멀티레이어 원단
KR102386537B1 (ko) 세포배양 지지체용 시스-코어형 복합섬유 및 이를 포함하는 세포배양 지지체용 원단
KR20200056344A (ko) 대용량 배양기용 세포배양시트 집합체 및 이를 포함하는 대용량 배양기

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
AMND Amendment
E601 Decision to refuse application
X091 Application refused [patent]
AMND Amendment
X701 Decision to grant (after re-examination)
GRNT Written decision to grant