KR102394713B1 - 세포배양용기 - Google Patents

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Abstract

세포배양용기가 제공된다. 본 발명의 일 실시예에 따른 세포배양용기는 세포배양용기의 바닥부로부터 일정 높이로 이격되도록 세포배양용기의 측벽부에 고정되는 세포배양 지지체를 포함한다. 이에 의하면 세포가 배양되는 과정에서 지지체의 상면과 하면에 부착된 세포에 세포배양액을 균일하게 분산시키면서 세포배양 지지체의 흔들림을 방지할 수 있어서 세포배양효율을 제고할 수 있다. 또한 세포배양액에 대한 세포배양 지지체의 투과율을 향상시켜 세포배양액을 고르게 순환시킬 수 있으며, 세포배양 지지체의 기계적 물성이 향상되어 배양되는 세포의 부착, 이동, 증식, 분화에 적합한 미세환경이 구현되고 세포의 생존율이 향상되며 세포를 입체적으로 증식시킬 수 있다.

Description

세포배양용기{CELL CULTURE CONTAINER}
본 발명은 세포배양용기에 관한 것이며, 더욱 상세하게는 세포배양 지지체를 구비한 세포배양용기에 관한 것이다.
최근, 질병 치료에 배양 세포의 이용이 확대됨에 따라 세포배양에 대한 관심 및 연구가 증가하고 있다. 세포배양은 세포를 생체로부터 채취하고, 생체 밖에서 배양시키는 기술이며, 배양된 세포는 피부, 장기, 신경 등 신체의 다양한 조직으로 분화시켜 인체에 이식되거나 분화시키기 전 상태로 인체에 이식시켜 생착 및 분화를 동시에 이루어지게 하여 다양한 질병 치료에 활용될 수 있다.
이와 같은 세포배양이 연계된 분야가 조직공학(tissue engineering)이며, 세포학, 생명과학, 공학, 의학 등의 기존의 과학 영역을 응용하는 다학제간 학문으로써, 생체조직의 구조와 기능 사이의 상관관계를 이해하고, 손상된 조직이나 장기를 정상적인 조직으로 대체, 재생시키기 위한 새로운 융합기술이 연구되고 있다.
한편, 재생 의료 분야에서 환자에게서 채취한 세포를 생체 외에서 배양할 수 있도록 세포배양 지지체와 세포배양용기를 제작하고, 세포배양 지지체에서 배양된 세포를 다시 생체 내로 이식함으로써 의료 효과를 향상시키는 연구가 진행되고 있다.
이러한 세포배양용기를 통해 세포를 배양하기 위해서는 목적하는 세포가 부착된 세포배양 지지체를 세포배양용기에 넣고 세포의 크기와 종류를 고려하여 다양한 세포배양액을 주입하여 목적하는 세포의 배양이 가능하다.
통상적인 세포배양은 세포배양 지지체를 배양용기의 하면에 부착한 후 세포배양 지지체의 상면에서 세포를 배양하는 방법인데, 이 경우 배양되는 세포가 2차원적으로만 증식, 성장하는 경향이 커서 3차원 세포군집체를 제조하기 어려운 문제가 있다. 또한, 세포배양 지지체 내부로 이동하여 증식, 성장하는 세포가 있을 경우 세포배양액이 세포배양 지지체 내부로 세포배양액이 균일하게 분산되지 않는 문제점이 있다. 이로 인해 배양된 세포의 균일성이 저하되고 세포 배양 효율이 현저히 떨어지게 된다.
이에 따라 세포배양용기에서 세포배양액이 고르게 분산되어 목적하는 세포의 크기와 형태가 균일하고, 세포배양 지지체의 파손 등으로 인한 배양율 저하를 방지할 수 있는 세포배양 지지체 및 이를 포함하는 세포배양용기에 대한 개발이 시급한 실정이다.
공개특허공보 제10-2014-0048733호
본 발명은 상기와 같은 문제점을 감안하여 안출한 것으로, 세포배양 지지체가 세포배양액에 대한 일정 수준 이상의 투과율을 가짐으로 인해 세포배양액이 고르게 분산될 수 있는 세포배양용기를 제공하는데 목적이 있다.
또한 본 발명은 세포배양 지지체에 세포배양액을 분산시켜도 지지체의 흔들림을 방지할 수 있고 지지체의 부위에 상관없이 배양되는 각 세포에 동일한 기계, 물리, 화학적 자극을 부여함으로써 세포를 균일하게 증식시킬 수 있는 세포배양용기를 제공하는데 목적이 있다.
또한, 본 발명은 세포배양 지지체의 분리과정에서 세포에 손상을 가하지 않고 목적하는 검사 및 실험에 적합한 형상을 가지는 세포를 배양할 수 있는 세포배양용기를 제공하는데 또 다른 목적이 있다.
상술한 과제를 해결하기 위하여 본 발명은 세포배양 지지체를 구비한 세포배양용기에 있어서, 상기 세포배양 지지체는 세포배양용기의 바닥부로부터 일정 높이로 이격되도록 세포배양용기의 측벽부에 고정되는 세포배양용기를 제공한다.
본 발명의 실시예에 의하면, 상기 세포배양 지지체는 방적사, 필라멘트사 및 슬리팅사 중 어느 하나 이상의 원사를 포함하는 원단일 수 있다.
또한, 상기 직물로 이루어진 세포배양 지지체는 평량이 1 ~ 10g/㎡일 수 있다.
또한, 상기 세포배양 지지체는 고정부재를 통해 상기 세포배양용기의 측벽부에 고정될 수 있다.
또한, 상기 고정부재는 세포배양용기의 측벽부와 부착되는 제1 접착부, 세포배양 지지체와 부착되는 제2 접착부, 및 상기 제1 접착부와 제2 접착부 사이에 개재되어 지지기능을 수행하는 지지부를 포함하는 접착필름일 수 있다.
또한, 상기 세포배양용기의 측벽부 또는 바닥부에는 세포배양액이 유입되거나 배출되는 유입구 또는 유출구를 더 포함할 수 있다.
또한, 상기 세포배양용기을 밀폐시킬 수 있는 개폐 부재를 더 포함할 수 있다.
또한, 상기 세포배양 지지체는 점도가 1 ~ 100 cps인 세포배양액에 대하여 평균 투과량이 0.01 ~ 10㎖/㎟·min·bar일 수 있다.
또한, 상기 세포배양 지지체는 원단을 포함하고, 상기 원단을 형성하는 원사에는 세포배양 향상물질을 포함할 수 있다.
또한, 세포배양 향상물질은 세포의 부착, 이동, 성장, 증식(proliferation) 및 분화(differentiation) 중 어느 하나 이상을 유도하는 생리활성성분일 수 있다.
또한, 생리활성성분은 모노아민, 아미노산, 펩타이드, 당류(saccharide), 지질(lipid), 단백질, 당단백질(glucoprotein), 당지질(glucolipid), 프로테오글리칸, 뮤코다당(mucopolysaccharide) 및 핵산(nucleic acid)으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 화합물 및 세포 중 어느 하나 이상을 포함할 수 있다.
또한, 상기 원사는 폴리스티렌(PS), 폴리에틸렌테레프탈레이트(PET), 폴리이더술폰(PES), 폴리비닐리덴플루오라이드(PVDF), 폴리아크릴로나이트릴(PAN), 폴리디메틸실록산(PDMS), 폴리아미드, 폴리알킬렌, 폴리알킬렌옥사이드(poly(alkylene oxide)), 폴리아미노산(poly(amino acids)), 폴리알릴아민(poly(allylamines), 폴리포스파젠(polyphosphazene) 및 폴리에틸렌옥사이드-폴리프로필렌옥사이드 블록공중합체로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 비생분해성 섬유형성성분을 포함하거나 또는 폴리카프로락톤(polycaprolactone), 폴리다이옥사논(polydioxanone), 폴리글리콜릭산(polyglycolic acid), PLLA(poly(L-lactide)), PLGA(poly(DL-lactide-co-glycolide)), 폴리락틱산(Polylactic acid) 및 폴리비닐알코올(polyvinyl alcohol)로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 생분해성 섬유형성성분을 포함할 수 있다.
또한, 본 발명은 본 발명에 따른 세포배양용기를 포함하는 세포배양용 어세이를 포함한다.
본 발명의 의하면, 세포가 배양되는 과정에서 지지체의 상면과 하면에 부착된 세포에 세포배양액을 균일하게 분산시키면서 세포배양 지지체의 흔들림을 방지할 수 있어서 세포배양효율을 제고할 수 있다. 또한, 세포배양액에 대한 세포배양 지지체의 투과율을 향상시켜 세포배양액을 고르게 순환시킬 수 있으며, 세포배양 지지체의 기계적 물성이 향상되어 배양되는 세포의 부착, 이동, 증식, 분화에 적합한 미세환경이 구현되고 세포의 생존율이 향상되며 세포를 입체적으로 증식시킬 수 있다.
삭제
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 세포배양용기를 나타내는 사시도,
도 2은 본 발명의 일 실시예에 따른 세포배양 지지체를 나타내는 도면,
도 3는 본 발명의 일 실시예에 따른 세포배양용기에 세포배양 지지체와 접착 테이프가 삽입되는 모습을 나타내는 사시도,
도 4은 본 발명의 일 실시예에 따른 세포배양용기를 나타내는 사시도, 그리고
도 5는 본 발명의 다른 실시예에 따른 세포배양용기를 나타내는 사시도이다.
이하, 첨부한 도면을 참고로 하여 본 발명의 실시예에 대하여 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 상세히 설명한다. 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되지 않는다. 도면에서 본 발명을 명확하게 설명하기 위해서 설명과 관계없는 부분은 생략하였으며, 명세서 전체를 통하여 동일 또는 유사한 구성요소에 대해서는 동일한 참조부호를 부가한다.
도 1을 참조하면 본 발명의 일 실시예에 따른 세포배양용 어세이(10)는 복수 개의 세포배양용기(100)를 포함한다. 상기 세포배양용기(100)는 후술할 세포배양 지지체(110)를 수용할 수 있는 형상이면 어떠한 형상이라도 가능하다. 즉 도면에는 상기 세포배양용기(100)가 원통형의 일률적인 형상을 형상을 갖는 것으로 도시하였으나 이에 한정되지 않고 예를 들어 비커, 웰 플레이트, 병, 관 등의 형상이 가능하며, 배양되는 세포의 크기와 종류를 고려하여 형상과 크기가 변경될 수 있다.
또한, 상기 세포배양용기(100)를 형성하는 재료는 특별히 제한되지 않으며 세포배양에 있어서 일반적으로 이용되는 재료를 이용할 수 있다. 예를 들어 폴리스티렌 수지, 폴리에스테르 수지, 폴리에틸렌 수지, 폴리에틸렌 테레프탈레이트 수지, 폴리프로필렌 수지, ABS 수지, 나일론, 아크릴 수지, 불소 수지, 폴리카보네이트 수지, 폴리우레탄 수지, 메틸펜텐 수지, 페놀 수지, 멜라민 수지, 에폭시 수지, 염화비닐 수지 등의 수지 재료, 표면 친수화 처리를 실시한 상기의 적어도 1종을 포함한 수지 재료, 유리나 석영 등의 무기 재료 이용할 수 있다.
도 2를 참조하면, 본 발명의 일 실시예에 따른 세포배양용기(100)는 바닥부(103)와 상기 바닥부(103)와 연결된 측벽부(101)를 구비하고, 측벽부(101)에서 이어지는 상방이 개방된 형상일 수 있다.
또한, 도 5를 참조하면, 본 발명의 다른 실시예에 따른 세포배양용기(100')는 세포배양액이 내부로 유입되는 유입구(105) 및 세포배양액이 배출되는 유출구(107)를 더 포함할 수 있다. 도면에 도시된 것과 같이 유입구(105)를 통해 세포배양용기(100')의 내부로 유입된 세포배양액은 세포배양용기(100)의 측벽에 고정된 세포배양 지지체(110)를 통과하고 유출구(107)를 통해 다시 외부로 유출될 수 있다.
이와 같이 세포배양용기(100)는 목적하는 세포의 종류와 크기 및 군집체 형성 유무를 고려하여 다양한 형태로 설계될 수 있으며, 하나의 세포배양용 어세이(10)는 직경과 형태가 상이한 복수 개의 세포배양용기(100)를 포함할 수 있다.
한편, 상술한 세포배양용기(100)의 내부에는 도 4와 같이 세포배양 지지체(110)가 세포배양용기의 바닥부로부터 일정 높이로 이격되도록 세포배양용기(100)의 측벽부(101)에 고정된다.
산업적으로 세포배양을 실시할 수 있는 세포는 크게 초대 배양 세포에서 대를 이어 얻어진 세포계(cell line) 세포와 배아 또는 성체에 있는 여러 종류의 세포로 분화할 수 있는 미분화 세포인 줄기세포(stem cell)로 구분할 수 있다. 최근 보고된 바에 의하면 줄기세포의 경우 세포계(cell line) 세포의 배양보다 훨씬 섬세한 조작이 필요하다. 즉 세포배양 과정에서 세포가 배양된 세포배양 지지체(110)의 미세한 흔들림이나 작은 충격에도 세포가 사멸할 수 있는데, 일반적으로 공지된 세포배양용기(100)는 이를 해결하기 위해 세포배양 지지체(110)를 세포배양용기(100) 바닥부(103)에 고정시켜 외부의 흔들림이나 충격이 세포에 가해지는 영향을 최소화하고 있다.
그러나 바닥부(103)에 고정된 세포배양 지지체(110)에서 배양되는 세포는 2차원적으로만 증식, 성장하는 경향이 커서 3차원 세포군집체를 제조하기 어려운 문제가 있다. 또한, 세포배양 지지체 내부로 이동하여 증식, 성장하는 세포가 있을 경우 세포배양액이 세포배양 지지체(110) 내부로 세포배양액이 균일하게 분산되기 어렵고, 지지체 내부에 침투한 세포배양액은 지지체 상부에 위치한 세포배양액과 순환이 원활히 이루어지지 않은 문제점이 있고, 이로 인해 배양된 세포의 균일성이 저하되고 세포 배양효율이 현저히 떨어지게 된다.
상기와 같은 문제점을 해결하기 위해 세포배양 지지체(110)를 세포배양용기(100) 바닥면으로부터 일정공간 이격시킨 형태로 세포배양용기(100) 측벽부(101)에 고정시키는 경우, 세포배양 지지체(110)의 상면과 하면에 부착된 세포에 세포배양액이 고르게 분산될 수 있다. 이에 따라 본 발명에 따른 세포배양용기(100)는 세포배양용기(100)의 바닥부(103)와 이격되도록 내부의 빈 공간 상에 세포배양 지지체(110)를 배치시킴으로써 3차원 세포군집체 배양에 적합하고, 내부에서 증식 배양하는 세포 배양에 유리할 수 있다. 또한, 측벽부에 고정됨에 따라서 배양 중 세포배양액의 압력으로 인한 흔들림을 최소화할 수 있다.
나아가 세포배양 지지체(110)를 세포배양용기(100)의 바닥부(103)에서 이격시킨 상태로 세포를 배양할 경우, 세포는 세포배양 지지체(110)의 상면뿐만 아니라 세포배양 지지체(110)의 하면에서도 증식, 성장할 수 있다. 이때 세포배양액이 세포배양 지지체(110)를 원활히 투과하지 못하는 경우, 세포 배양용기 상면과 하면에 부착된 각각의 세포에 균일한 세포배양액을 분산시킬 수 없어서 전술한 줄기세포와 같이 세포의 자극에 매우 민감한 세포에 대하여 균일한 미세환경을 부여할 수 없어 세포 균일성에 문제점이 있을 수 있다. 또한, 군집을 이루는 콜로니 세포의 경우 세포배양 지지체(110)의 상면과 하면에 각각 부착되어 배양된 세포 군집체의 크기 및 형상 등이 상이할 수 있어 이를 이용한 조직공학 또는 세포 이식 과정에서 효율이 현저히 저하될 수 있다. 또한, 세포배양액의 압력으로 인해 세포배양 지지체(110)가 세포배양용기(100)에 안정적으로 부착되지 않을 수 있고 세포배양 중 지지체의 흔들림으로 인한 지지체의 파손이나 구부러짐이 발생하여 안정적인 세포배양 환경을 제공할 수 없는 문제점이 있다.
따라서 본 발명에 따른 세포배양 지지체(110)는 전술한 것과 같이 세포배양 지지체(110)를 세포배양용기(100)의 바닥부(103)에서 일정공간 이격시켜 측벽부(101)에 고정함과 동시에, 세포배양 지지체(110)를 세포배양액에 대하여 일정 수준 이상의 대한 투과율을 가지는 직물로 구성함에 따라 배양액을 고르게 순환시켜 세포배양 지지체(110)의 상면과 하면에 부착된 세포의 균일한 미세환경을 부여하여 배양된 세포의 균일성을 제고할 수 있다.
보다 구체적으로, 도 3에 도시된 것과 같이 본 발명은 세포배양용기(100)와 동일한 단면모양을 갖는 세포배양 지지체(110)를 포함하며, 이를 세포배양용기의 측벽에 고정시킬 수 있는 고정부재(120)를 더 포함할 수 있다.
상기 세포배양 지지체(110)는 직물, 편물 및 부직포 중 어느 하나 이상을 포함할 수 있으며, 바람직하게는 적어도 직물을 포함할 수 있다. 상기 세포배양 지지체(110)가 직물만을 포함하여 구성된 경우, 위사와 경사로 이루어진 섬유로 형성되는 규칙적인 배열의 공경으로 인해 세포배양액의 투과율이 향상될 수 있다.
예를 들어, 도 3에 도시된 것과 같이 상기 세포배양 지지체(110)가 직물로 구성된 경우, 직물에 포함되는 원사(115)가 종횡의 방향성이 있으며, 구체적인 조직은 평직, 능직 등일 수 있으며, 경사와 위사의 밀도는 특별히 한정하지 않는다.
예를 들어 상기 세포배양 지지체(110)가 편물로 구성된 경우, 편물을 이루는 원사(115)는 공지의 니트조직이거나, 위편물, 경편물 등일 수 있으나 이에 대해서는 특별히 한정하지 않는다.
다음, 세포배양 지지체(110)가 부직포로 구성된 경우, 부직포에 포함되는 원사(115)에 종횡의 방향성이 없는 것을 의미하고, 케미컬본딩 부직포, 써멀본딩 부직포, 에어레이 부직포 등의 건식부직포나 습식부직포, 스판레스 부직포, 니들펀칭 부직포 또는 멜트블로운와 같은 공지된 부직포를 사용할 수 있으며, 부직포의 공경, 기공율, 평량 등은 목적하는 기계적 강도에 따라 달라질 수 있어서 본 발명은 이에 대해 특별히 한정하지 않는다. 일 예로 상기 부직포는 전기방사된 나노섬유로 형성된 나노섬유웹일 수 있다.
다음, 상술한 본 발명의 일 실시예에 따라 세포배양 지지체(110)가 직물로 구성된 경우 상기 직물을 구성하는 원사(115)는 한 개 또는 복수 개의 모노사로 이루어질 수 있으며 상기 한 개 또는 복수 개의 모노사는 방적사, 필라멘트사, 슬리팅사(slitting yarn) 또는 전기방사된 나노섬유일 수 있다.
모노사가 방적사나 필라멘트사일 경우 직경이 10nm ~ 10㎛ 일 수 있다. 다만, 이에 제한되는 것은 아니며, 배양시키려는 세포의 종류, 크기, 세포집합체의 형상 및 크기에 적합하도록 변경될 수 있다.
또한, 상기 방적사는 공지된 방법에 의한 원면을 통하여 제조된 것일 수 있다. 또한, 상기 필라멘트사는 공지된 방법에 의하여 방사되어 제조된 것일 수 있고, 상기 방사는 화학방사 또는 전기방사 등의 공지된 방사방법일 수 있다.
또한, 상기 슬리팅사는 시트상의 섬유집합체, 원단 등을 소정의 폭을 갖도록 절단시켜 제조된 것일 수 있다. 바람직하게는 상기 슬리팅사는 3차원 네트워크 구조를 갖는 시트상의 섬유웹을 소정의 폭을 갖도록 절단시켜 제조된 모노사일 수 있다. 이때, 상기 섬유웹은 일정한 압력으로 압착시켜 슬리팅 공정의 용이성을 향상시키고, 슬리팅사의 강도를 증가시킬 수 있다.
일 예로 상기 슬리팅사는 평량이 0.1 ~ 100g/㎡인 섬유웹을 폭이 0.1 ~ 30㎜ 되도록 절단한 모노사일 수 있다. 만일 폭을 0.1㎜ 미만으로 슬리팅할 경우 절단이 용이하지 않고, 가연시 가해지는 장력과 회전력에 의해 쉽게 사절될 수 있는 문제가 있다. 또한, 폭을 30㎜ 초과하여 슬리팅할 경우 연사시 불균일한 꼬임이 발생할 수 있는 문제가 있다.
또한 상기 전기방사된 나노섬유는 방향의 정함 없이 복수 회 폴딩되어 배열/적층됨을 통해 3차원 네트워크 구조를 형성할 수 있다. 또는 복수개의 나노섬유를 포함하여 각각의 나노섬유가 독립적으로 폴딩 및/또는 섬유길이방향의 정함이 없이 각각이 배열/적층됨을 통해 3차원 네트워크 구조를 형성할 수 있다. 이때, 한 가닥 나노섬유 내의 서로 다른 표면 간 및/또는 서로 다른 나노섬유의 표면 간에는 접착 또는 융착이 발생할 수 있고, 이를 통해 3차원 네트워크 구조가 구조적으로 더 복잡해지며 지지체에 로딩된 세포가 3차원 네트워크 구조로 형성된 기공 내부로 이동/증식할 수 있고, 입체적 형상/구조를 갖는 세포군집체로 세포를 배양시키기에 유리할 수 있다. 또한, 지지체 내부/외부에서 배양되는 세포의 증식률 및 생존률을 증가시키기 위해서는 세포의 증식에 필요한 영양분 등의 공급이 중요한데, 3차원 네트워크 구조의 나노섬유의 영양분을 포함하는 배양용액의 유로가 매우 복잡, 다양하게 형성됨으로써 지지체 내부에 위치한 세포까지 용이하게 영양분이 공급되어 세포사멸을 방지하고 세포증식을 향상시킬 수 있다.
상술한 원사(115)를 구성하는 모노사들은 섬유상으로 제조될 수 있는 공지된 섬유형성성분으로 구현된 것일 수 있으며, 모노사 종류에 따라서 적합한 재질을 선택하여 구현될 수 있고, 분해성이 요구되는 등 특별한 목적에 따라서 재질을 달리 선택할 수 있음에 따라서 본 발명은 이에 대해 특별히 한정하지 않는다. 상기 섬유형성성분은 면, 마, 등의 셀룰로오스 성분, 양모, 견 등의 단백질 성분, 또는 광물성 성분 등의 천연섬유 성분을 포함할 수 있다. 또는 상기 섬유형성성분(210)은 공지된 인조섬유의 성분일 수 있다.
한편, 상기 섬유형성성분은 목적에 따라서 폴리스티렌(PS), 폴리에틸렌테레프탈레이트(PET), 폴리이더술폰(PES), 폴리비닐리덴플루오라이드(PVDF), 폴리아크릴로나이트릴(PAN), 폴리디메틸실록산(PDMS), 폴리아미드, 폴리알킬렌, 폴리알킬렌옥사이드(poly(alkylene oxide)), 폴리아미노산(poly(amino acids)), 폴리알릴아민(poly(allylamines), 폴리포스파젠(polyphosphazene) 및 폴리에틸렌옥사이드-폴리프로필렌옥사이드 블록공중합체로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 비생분해성 성분, 또는 폴리카프로락톤(polycaprolactone), 폴리다이옥사논(polydioxanone), 폴리글리콜릭산(polyglycolic acid), PLLA(poly(L-lactide)), PLGA(poly(DL-lactide-co-glycolide)), 폴리락틱산(Polylactic acid) 및 폴리비닐알코올(polyvinyl alcohol)로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 생분해성 성분을 포함할 수 있다.
다음, 본 발명에 따른 세포배양 지지체(110)의 세포배양액 평균 투과량은 점도가 1 ~ 100cps인 세포배양액에 대하여 평균수투과량은 0.01 ~ 10㎖/㎟·min·bar일 수 있다. 세포배양 지지체(110)를 통과하여 순환하는 세포배양액의 투과량은 세포배양 지지체(110)에서 배양되는 세포의 성장 및 분화에 다양한 영향을 미칠 수 있기 때문에 세포배양액에 대한 최소한의 투과량을 만족하는 것이 바람직하다. 다만, 투과량이 과도할 경우 배양된 세포가 탈리되어 세포의 밀도가 저하되거나 세포배양 지지체(110)에 과도한 압력이 가해져서 지지체가 붕괴될 수 있다. 또한, 세포배양 중 세포배양액이 세포배양용기(100)를 순환하며 세포에 배양용액을 제공하거나 배양액이 지속적으로 투과되는 경우, 세포배양 지지체(110)가 세포배양액의 투과 압력에 견디지 못하여 측벽부(101)로부터 분리되거나 손상될 수 있으므로 일정 수준 이상의 투과량을 만족할 필요가 있다. 이에 따라서 점도가 1 ~ 100cps인 세포배양액에 대하여 평균수투과량은 0.01 ~ 10㎖/㎟·min·bar일 수 있으며, 만일 세포배양 지지체(110)의 평균 세포배양액 투과량이 10㎖/㎟·min·bar 를 초과하는 경우 세포배양 지지체(110)에 과도한 압력이 가해져서 세포배양 지지체(110)가 휘어지거나 절단되는 문제점이 있을 수 있다. 또한, 만일 세포배양 지지체(110)의 평균 세포배양액 투과량이 0.01㎖/㎟·min·bar 미만일 경우 세포배양액이 유입되는 세포배양 지지체(110) 면의 타면에서 배양되는 세포에 세포배양액의 공급이 원활하지 못할 수 있고, 세포배양액의 압력이 증가하여 세포배양 지지체(110)의 손상이 유발될 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 세포배양 지지체(110)의 기공의 평균공경은 0.1 ~ 300㎛ 일 수 있다. 상기 기공은 세포배양 지지체(110)를 이루는 원사(115)가 경위사로 배열됨에 따라 형성되는 원사(115)들 사이의 공간으로 세포배양 지지체(110)가 직물로 배열된 경우 기공의 크기는 모두 균일하게 형성될 수 있다. 상기 기공의 평균공경은 전술한 세포배양액에 투과량에 밀접한 관계가 있는 것으로 만일 기공의 평균공경이 0.1㎛ 미만일 경우, 세포배양액의 투과도가 저하되고 세포배양액의 순환이 원활하지 않아서 세포배양의 균일도가 저하되거나, 세포배양 지지체(110)의 과도한 압력이 가해져서 세포배양 지지체(110)가 휘어지거나 절단될 수 있다. 또한, 상기 기공의 평균공경이 300㎛를 초과하는 경우 세포배양액의 투과량이 증가하고 세포배양 지지체(110)의 기계적 강도가 저하되어 세포배양의 안정성이 저하될 수 있다.
또한 본 발명에 따른 세포배양 지지체(110)의 기공도는 10 ~ 60% 일 수 있다. 상기 기공도는 세포배양 지지체(110)를 구성하는 전체 원사(115) 대비 기공의 면적을 나타내는 것으로, 기공의 평균공경과 더불어 세포배양액의 투과량에 밀접한 영향을 미친다. 만일 세포배양 지지체의 기공도가 10% 미만일 경우 세포배양액의 투과도가 저하되고 세포배양액의 순환이 원활하지 않아서 세포배양의 균일도가 저하되거나, 세포배양 지지체(110)의 과도한 압력이 가해져서 세포배양 지지체(110)가 휘어지거나 절단될 수 있다. 또한, 만일 기공도가 60%를 초과하는 경우 세포배양액의 투과량이 증가하고 세포배양 지지체(110)의 기계적 강도가 저하되어 세포배양의 안정성이 저하될 수 있다.
또한 본 발명에 따른 세포배양 지지체(110)의 평량은 1 ~ 10g/㎡일 수 있다. 만일 세포배양 지지체(110)의 평량이 1g/㎡ 미만일 경우 세포배양 지지체(110)가 세포배양액의 압력을 견디지 못하고 구부러지는 등의 기계적 파손이 발생할 수 있고, 만일 세포배양 지지체(110)의 평량이 10g/㎡을 초과하는 경우 공경 사이즈가 작아져서 세포배양액의 용이한 침투가 어려워서 세포 배양율이 저하될 수 있다.
이와 같이 본 발명에 따른 세포배양 지지체(110)는 일정 수준 이상의 세포배양액 투과량을 가짐으로써, 세포배양액을 고르게 순환시켜 지지체의 상면과 하면에 부착된 세포의 균일한 미세환경을 부여하여 배양된 세포의 균일성을 제고할 수 있다.
다음, 상기 고정부재(120)는 상기 세포배양 지지체(110)를 세포배양용기(100)의 바닥부(103)로부터 일정공간 이격시키면서 측벽부(101)에 고정시키는 는 역할을 한다. 이러한 고정부재(120)는 접착필름, 링 클립 타입, 지그 타입 등 공지된 재료가 사용될 수 있으나, 본 명세서에서는 설명의 편의를 위해 상기 고정부재(120)가 접착필름으로 구성된 일 실시예로 서술하기로 한다.
상기 세포배양용기(100)의 담체에는 바닥부(103)와 동일한 형상과 크기를 가지는 접착필름과 세포배양 지지체(110)가 고정된다. 일 실시예에 따라 상기 접착필름과 세포배양 지지체(110)는 원형의 모양을 갖도록 형성되어 상기 세포배양용기(100)에 수용될 수 있다. 또한, 상기 접착필름이 세포배양 지지체(110)의 측면을 감싸도록 접착된 후 세포배양용기(100)에 고정되거나 상기 접착필름이 세포배양용기(100)에 먼저 고정되고 이후 세포배양 지지체(110)와 접착될 수 있다.
상기 접착필름은 지지기능을 수행하는 지지부, 지지부 하면에 배치되어 상기 세포배양용기(100)의 측벽부(101)와 접착되는 제1 접착부 및 상기 지지부 상면에 배치되어 세포배양 지지체(110)와 접착되는 제2 접착부를 포함할 수 있다. 이러한 제1 접착부와 제2 접착부는 세포배양 지지체(110)의 회수를 위해 상이한 접착력의 크기를 가질 수 있다. 예를 들어 제2 접착부의 접착력이 제1 접착부의 접착력보다 큰 경우 제1 접착부에 일정한 외력을 가하여 세포배양 지지체(110)와 접착필름을 세포배양용기(100)로부터 동시에 회수할 수 있으며, 만일 제1 접착부의 접착력이 제2 접착부의 접착력보다 큰 경우 제2 접착부에 일정한 외력을 가하여 접착필름을 세포배양용기(100)에 부착시킨 상태로 세포배양 지지체(110)만을 용이하게 회수할 수 있다.
이와 같이 상기 고정부재(120)를 접착필름의 형태로 구성할 경우 물리화학적인 자극 없이, 세포배양 지지체(110)를 세포배양용기(100)로부터 용이하게 분리할 수 있어서 생화학적 기작으로 인한 세포의 변질이나 탈리 등을 방지할 수 있고, 배양된 세포에 필요 이상의 자극으로 인한 손상을 방지할 수 있다. 뿐만 아니라 군집을 형성하며 증식되는 콜로니 세포의 경우, 세포배양 지지체(110)를 회수하는 과정에서 각 군집체 별로 가하여지는 물리, 화학적 자극의 차이로 인한 군집체 형상의 균일성 저하를 방지할 수 있는 장점이 있다. 이러한 접착력의 크기는 배양되는 세포의 크기와 종류를 고려하여 적절하게 선택될 수 있다.
다음, 도 4를 참조하면 본 발명에 따른 세포배양 지지체(110)와 고정부재(120)를 포함한 세포배양기(100)에서의 세포배양액의 순환 모습을 알 수 있고 도 5를 통해 유입구(105)와 유출구(107)를 통해 흐르는 세포배양액이 세포배양 지지체(110)를 투과하는 모습을 알 수 있다.
상기 세포배양액은 목적하는 세포에 따라 세포의 부착, 이동, 성장, 증식(proliferation) 및 분화(differentiation) 중 어느 하나 이상을 촉진하거나 세포에 영양분을 제공하는 세포배양액일 수 있으며, 이에 대해서는 특별히 제한하지 않는다.
도 4에 도시된 것과 같이, 상기 세포배양액은 세포배양 지지체(110)를 통과하면서 세포배양 지지체(110)의 상면 및 하면에서 배양되는 세포에 배양 물질을 제공하며 세포배양용기(100)를 순환할 수 있다. 이때 직물로 이루어진 세포배양 지지체(110)의 세포배양액에 대한 투과성으로 인해 세포배양액은 세포배양 지지체(110)를 통과하면서 세포배양 지지체(110)에 과도한 압력이 걸리지 않게 하여, 흔들림이나 기계적 파손을 방지할 수 있다. 또한, 세포배양 지지체(110)의 상면과 하면을 고르게 순환함으로써 세포배양 지지체(110)의 상면과 하면에서 배양되는 세포의 균일성을 제고할 수 있으며 세포배양 지지체(110)의 면적에 따른 배양 세포를 늘릴 수 있어 세포배양 지지체(110)의 경제성이 향상될 수 있다. 나아가 고정부재(120)의 효과로 세포배양 지지체(110)의 기계적 강도 및 세포배양용기와의 부착성이 향상됨에 따라 미세한 자극에도 사멸할 수 있는 세포에 대한 배양효율을 향상시킬 수 있고, 안정적인 세포배양 환경을 제공할 수 있다.
이와 유사하게 도 5에 도시된 세포배양용기(100') 또한 유입구(105)를 통해 내부로 유입된 세포배양액이 세포배양 지지체(110)를 투과하면서 세포배양 지지체(110)에 과도한 압력이 걸리지 않게 하여, 기계적 물성에 저하를 방지할 수 있다.
한편, 상술한 세포배양 지지체(110)를 구성하는 원사(115)는 섬유형성성분 이외에 세포배양성 향상물질로서 접착성분이나 생리활성성분 중 어느 하나 이상을 더 포함할 수 있다. 이때, 상기 원사의 내부에는 접착성분이나 생리활성성분이 구비되지 않고, 외부면 일 영역에 고정된 접착성분을 통해 생리활성성분이 원사 외부면 일부분에 고정될 수 있다. 또는 원사의 외부면을 전부 피복하여 구비되는 접착성분을 전부 피복하도록 생리활성성분이 구비될 수도 있다.
최근 연구되고 있는 세포배양기술은 실제 체내의 세포간 환경을 in vitro에서 구현시키는 방향으로 연구되고 있으며, 세포배양 환경을 체내의 세포환경과 유사하게 조성시키기 위하여 체내 세포외 기질(ECM)에 구비되는 각종 성분을 in vitro 배양시 배양용액에 포함시켜 적용하는 추세에 있다. 그러나 배양용액에 세포배양을 증진시킬 수 있는 물질을 포함시킬 경우 배양되는 세포에 지속적으로 상기 물질을 노출시키는데 한계가 있으며, 지속적 노출을 위해서는 배양용액에 상기 물질의 함량을 증가시켜야 하나, 이는 비용의 증가, 증식효율에 있어서 문제가 있다.
이에 따라 본 발명의 일 실시예에 따른 원사의 표면에는 접착성분 및 생리활성성분이 고정된 상태로 지지체에 구비시켜 원사 상 또는 원사로 둘러싸인 공간 내에 위치하는 배양세포에 생리활성성분을 통한 세포자극 및 이를 통한 세포 내 신호전달을 지속, 증폭시켜 세포증식을 더욱 가속화 시킬 수 있는 이점이 있다.
상기 접착성분은 배양세포를 초기에 세포 지지체 상에 고정시켜 배양용액상에 로딩된 세포가 부유하는 것을 방지하는 기능 및/또는 생리활성성분을 원사상에 고정시켜 생리활성성분이 원사 상에 세포배양 되는 과정에서 지지섬유에서 탈리를 방지하는 기능을 수행할 수 있다. 상기 접착성분은 통상의 생체적합성이 있어서 세포독성을 발생시키지 않는 공지된 접착성분의 경우 제한 없이 사용될 수 있다.
다음으로, 원사(115)에 구비될 수 있는 생리활성성분에 대해 보다 구체적으로 설명한다. 상기 생리활성성분은 세포배양을 증진시킬 수 있도록 세포의 부착, 이동, 성장, 증식(proliferation) 및 분화(differentiation) 중 어느 하나 이상을 직/간접적으로 유도하는 물질일 수 있으며, 이와 같은 기능을 발현하는 것으로 알려진 공지의 물질인 경우 제한 없이 포함될 수 있다. 일예로, 상기 생리활성성분은 모노아민, 아미노산, 펩타이드, 당류(saccharide), 지질(lipid), 단백질, 당단백질(glucoprotein), 당지질(glucolipid), 프로테오글리칸, 뮤코다당(mucopolysaccharide) 및 핵산(nucleic acid) 으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 화합물 및 세포 중 어느 하나 이상을 포함할 수 있다. 이때, 모노아민은 일예로, 카테콜아민, 인돌아민 등 1차 아민을 포함하는 화합물을 포함한다. 또한, 상기 펩타이드는 올리고펩타이드를 포함하며, 상기 단백질은 폴리펩티드를 포함하고 일 예로, 피브로넥틴 등일 수 있다. 상기 당류는 단당류, 다당류, 올리고당 및 탄수화물을 포함하고, 상기 지질은 일예로 스테로이드 호르몬일 수 있다.
한편, 상기 생리활성성분은 모티프를 포함할 수 있다. 상기 모티프는 생장인자(growth factor) 또는 세포외기질(extracellular matrix)에 포함되는 단백질, 당단백질 및 프로테오글리칸 중에서 선택된 어느 하나 이상에 구비된 소정의 아미노산 서열을 포함하는 천연 펩타이드 또는 재조합 펩타이드일 수 있다. 구체적으로 상기 모티프는 아드레노메둘린(Adrenomedullin), 앙기오포이에틴(Angiopoietin), 뼈형성단백질(BMP), 뇌유래신경영양인자(BDNF), 표피생장인자(EGF), 에리스로포이에틴(Erythropoietin), 섬유아세포 증식인자(Fibroblast growth factor), 신경교의세포주유래신경영양인자(GDNF), 과립구집락자극인자(Granulocyte colony-stimulating factor, G-CSF), 과립대식세포집락자극인자(Granulocyte macrophage colony-stimulating factor, GM-CSF), 성장분화인자-9(Growth differentiation factor-9, GDF9), 간세포생장인자(HGF), 간세포선종 유래 생장인자(Hepatoma-derived growth factor, HDGF), 인슐린유사생장인자(Insulin-like growth factor, IGF), 각질세포 증식인자(Keratinocyte growth factor , KGF), 이동자극인자(Migration-stimulating factor, MSF), 마이오스타틴(Myostatin , GDF-8), 신경생장인자(Nerve growth factor, NGF), 혈소판유래생장인자(Platelet-derived growth factor, PDGF), 트롬보포이에틴(Thrombopoietin, TPO), T-세포생장인자(T-cell growth factor, TCGF), 뉴로필린, 형질전환생장인자-알파(TGF-α), 형질전환생장인자-베타(TGF-β), 종양괴사인자-알파(TNF-α), 혈관내피생장인자(VEGF), IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6 및 IL-7로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 생장인자(GF)에 포함된 소정의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 또는, 히알루론산, 헤파린황산염, 콘드로이틴황산염, 테르마틴황산염, 케라탄황산염, 알진염, 피브린, 피브리노겐, 콜라겐, 엘라스틴, 피브로넥틴, 비트로넥틴, 카드헤린 및 라미닌으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 세포외기질(extracellular matrix)에 포함되는 소정의 아미노산의 서열을 포함할 수 있다. 또한, 상기 모티프는 생장인자에 포함되는 소정의 아미노산 서열 및 상기 세포외기질에 포함되는 공지된 아미노산 서열을 모두 포함할 수도 있다.
한편, 상기 모티프는 상술한 접착성분에 공유결합시켜 일체로 구현될 수도 있다. 일 예로, 상기 접착성분이 단백질인 경우 폴리펩티드의 N-말단 및/또는 C-말단에 상기 모티프를 직접 공유결합 시키거나 이종의 펩타이드 또는 폴리펩타이드를 개재시켜 공유결합 시킬 수 있으며, 이 경우 원사에 더욱 견고히 생리활성성분을 부착시킬 수 있고, 생리활성성분의 세포배양 중 탈리를 최소화시킬 수 있다.
또한, 상기 생리활성성분이 모티프일 경우 상기 모티프는 세포의 부착성을 증진시키기 위하여 공지된 홍합단백질 또는 홍합단백질 중 특정한 도메인이나 모티프를 더 포함하여 구현될 수 있다.
한편, 본 발명은 본 발명의 일 실시예에 따른 상술한 세포배양 지지체(110)에 배양세포를 이식시켜 배양된 세포들을 포함하는 조직공학용 이식체를 구현할 수 있다. 이때, 상기 배양세포는 원사(115)의 외부면 및 해연되어 원사간 이격된 공간을 포함하는 부분에서는 세포가 상기 공간으로 이동하여 배양됨에 따라서 원사(115)의 내부에 배양된 세포가 위치할 수 있다. 이때, 배양된 세포들 중 인접한 세포들 사이에는 이격된 원사(115)들이 위치할 수 있고 이 경우 인접된 세포간의 접촉이 직접적으로 방지되어 세포배양에 더욱 유리할 수 있다.
또한, 상기 세포는 전능줄기세포, 만능줄기세포, 다능줄기세포, 올리고포텐트(oligopotent) 줄기세포 및 단일줄기세포로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 줄기세포, 및 조혈모세포, 간세포, 섬유세포, 상피세포, 중피세포, 내피세포, 근육세포, 신경세포, 면역세포, 지방세포, 연골세포, 골세포, 혈액세포 및 피부세포로 이루어진 군에서 선택된 분화세포 중 1 종 이상을 포함할 수 있다. 일예로, 상기 세포는 형상이 구형보다는 일방향으로 길쭉한 형상을 갖는 세포이거나 이동성이 강한 세포일 수 있다.
또한, 상기 원사(115)의 재질을 인체에 무해한 섬유형성성분으로 구현할 경우 배양된 세포가 부착된 지지체를 직접 인체 내부로 이식이 가능하며, 이를 통해 배양된 세포를 조직내 더욱 용이하고, 안정적으로 생착시킬 수 있는 이점이 있다.
하기 표 1은 본 발명에서 설명된 서열번호에 따른 아미노선 서열을 나타낸 서열목록에 대한 표이다.
서열번호 아미노산 서열
1 Met Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr
Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala
Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro
Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ser Ser Glu
Glu Tyr Lys Gly Gly Tyr Tyr Pro Gly Asn Thr Tyr His Tyr His Ser
Gly Gly Ser Tyr His Gly Ser Gly Tyr His Gly Gly Tyr Lys Gly Lys
Tyr Tyr Gly Lys Ala Lys Lys Tyr Tyr Tyr Lys Tyr Lys Asn Ser Gly
Lys Tyr Lys Tyr Leu Lys Lys Ala Arg Lys Tyr His Arg Lys Gly Tyr
Lys Lys Tyr Tyr Gly Gly Ser Ser Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr
Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser
Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys
Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro
Pro Thr Tyr Lys
2 Met Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr
Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala
Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro
Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ser Ser Glu
Glu Tyr Lys Gly Gly Tyr Tyr Pro Gly Asn Thr Tyr His Tyr His Ser
Gly Gly Ser Tyr His Gly Ser Gly Tyr His Gly Gly Tyr Lys Gly Lys
Tyr Tyr Gly Lys Ala Lys Lys Tyr Tyr Tyr Lys Tyr Lys Asn Ser Gly
Lys Tyr Lys Tyr Leu Lys Lys Ala Arg Lys Tyr His Arg Lys Gly Tyr
Lys Lys Tyr Tyr Gly Gly Ser Ser Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr
Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser
Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys
Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro
Pro Thr Tyr Lys Gly Arg Gly Asp Ser Pro
3 Met Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr
Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala
Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro
Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Pro Trp Ala
Asp Tyr Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Pro Pro Arg Arg Tyr Gly Gly Gly
Asn Tyr Asn Arg Tyr Gly Arg Arg Tyr Gly Gly Tyr Lys Gly Trp Asn
Asn Gly Trp Lys Arg Gly Arg Trp Gly Arg Lys Tyr Tyr Gly Ser Ala
Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro
Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro
Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr
Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Leu
4 Ala Asp Tyr Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Pro Pro Arg Arg Tyr Gly Gly
Gly Asn Tyr Asn Arg Tyr Gly Arg Arg Tyr Gly Gly Tyr Lys Gly Trp
Asn Asn Gly Trp Lys Arg Gly Arg Trp Gly Arg Lys Tyr Tyr
5 Ser Ser Glu Glu Tyr Lys Gly Gly Tyr Tyr Pro Gly Asn Thr Tyr His
Tyr His Ser Gly Gly Ser Tyr His Gly Ser Gly Tyr His Gly Gly Tyr
Lys Gly Lys Tyr Tyr Gly Lys Ala Lys Lys Tyr Tyr Tyr Lys Tyr Lys
Asn Ser Gly Lys Tyr Lys Tyr Leu Lys Lys Ala Arg Lys Tyr His Arg
Lys Gly Tyr Lys Lys Tyr Tyr Gly Gly Gly Ser Ser
6 Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys
7 Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro
Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys
Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr
Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys
8 Arg Gly Asp
9 Arg Gly Asp Ser
10 Arg Gly Asp Cys
11 Arg Gly Asp Val
12 Arg Gly Asp Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro
13 Gly Arg Gly Asp Ser
14 Gly Arg Gly Asp Thr Pro
15 Gly Arg Gly Asp Ser Pro
16 Gly Arg Gly Asp Ser Pro Cys
17 Tyr Arg Gly Asp Ser
18 Ser Pro Pro Arg Arg Ala Arg Val Thr
19 Trp Gln Pro Pro Arg Ala Arg Ile
20 Asn Arg Trp His Ser Ile Tyr Ile Thr Arg Phe Gly
21 Arg Lys Arg Leu Gln Val Gln Leu Ser Ile Arg Thr
22 Lys Ala Phe Asp Ile Thr Tyr Val Arg Leu Lys Phe
23 Ile Lys Val Ala Asn
24 Lys Lys Gln Arg Phe Arg His Arg Asn Arg Lys Gly Tyr Arg Ser Gln
25 Val Ala Glu Ile Asp Gly Ile Gly Leu
26 Pro His Ser Arg Asn Arg Gly Asp Ser Pro
27 Asn Arg Trp His Ser Ile Tyr Ile Thr Arg Phe Gly
28 Thr Trp Tyr Lys Ile Ala Phe Gln Arg Asn Arg Lys
이상에서 설명한 본 발명은 전술한 실시예 및 첨부된 도면에 한정되는 것이 아니고, 본 발명의 기술적 사항을 벗어나지 않는 범위 내에서 여러 가지 치환, 변형 및 변경이 가능하다는 것이 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어 명백할 것이다. 그러므로 본 발명의 범위는 후술하는 특허청구범위에 의하여 나타내어지며, 특허청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.
100: 세포배양용기 101: 측벽부
103: 바닥부 105: 유입구
107: 유출구 110: 세포배양 지지체
115: 원사 120: 고정부재
<110> AMOLIFESCIENCE <120> CELL CULTURE CONTAINER <130> 1060404 <160> 28 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 196 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 1 Met Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr 1 5 10 15 Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala 20 25 30 Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro 35 40 45 Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ser Ser Glu 50 55 60 Glu Tyr Lys Gly Gly Tyr Tyr Pro Gly Asn Thr Tyr His Tyr His Ser 65 70 75 80 Gly Gly Ser Tyr His Gly Ser Gly Tyr His Gly Gly Tyr Lys Gly Lys 85 90 95 Tyr Tyr Gly Lys Ala Lys Lys Tyr Tyr Tyr Lys Tyr Lys Asn Ser Gly 100 105 110 Lys Tyr Lys Tyr Leu Lys Lys Ala Arg Lys Tyr His Arg Lys Gly Tyr 115 120 125 Lys Lys Tyr Tyr Gly Gly Ser Ser Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr 130 135 140 Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser 145 150 155 160 Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys 165 170 175 Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro 180 185 190 Pro Thr Tyr Lys 195 <210> 2 <211> 202 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 2 Met Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr 1 5 10 15 Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala 20 25 30 Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro 35 40 45 Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ser Ser Glu 50 55 60 Glu Tyr Lys Gly Gly Tyr Tyr Pro Gly Asn Thr Tyr His Tyr His Ser 65 70 75 80 Gly Gly Ser Tyr His Gly Ser Gly Tyr His Gly Gly Tyr Lys Gly Lys 85 90 95 Tyr Tyr Gly Lys Ala Lys Lys Tyr Tyr Tyr Lys Tyr Lys Asn Ser Gly 100 105 110 Lys Tyr Lys Tyr Leu Lys Lys Ala Arg Lys Tyr His Arg Lys Gly Tyr 115 120 125 Lys Lys Tyr Tyr Gly Gly Ser Ser Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr 130 135 140 Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser 145 150 155 160 Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys 165 170 175 Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro 180 185 190 Pro Thr Tyr Lys Gly Arg Gly Asp Ser Pro 195 200 <210> 3 <211> 172 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 3 Met Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr 1 5 10 15 Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala 20 25 30 Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro 35 40 45 Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Pro Trp Ala 50 55 60 Asp Tyr Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Pro Pro Arg Arg Tyr Gly Gly Gly 65 70 75 80 Asn Tyr Asn Arg Tyr Gly Arg Arg Tyr Gly Gly Tyr Lys Gly Trp Asn 85 90 95 Asn Gly Trp Lys Arg Gly Arg Trp Gly Arg Lys Tyr Tyr Gly Ser Ala 100 105 110 Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro 115 120 125 Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro 130 135 140 Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr 145 150 155 160 Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Leu 165 170 <210> 4 <211> 46 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 4 Ala Asp Tyr Tyr Gly Pro Lys Tyr Gly Pro Pro Arg Arg Tyr Gly Gly 1 5 10 15 Gly Asn Tyr Asn Arg Tyr Gly Arg Arg Tyr Gly Gly Tyr Lys Gly Trp 20 25 30 Asn Asn Gly Trp Lys Arg Gly Arg Trp Gly Arg Lys Tyr Tyr 35 40 45 <210> 5 <211> 76 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 5 Ser Ser Glu Glu Tyr Lys Gly Gly Tyr Tyr Pro Gly Asn Thr Tyr His 1 5 10 15 Tyr His Ser Gly Gly Ser Tyr His Gly Ser Gly Tyr His Gly Gly Tyr 20 25 30 Lys Gly Lys Tyr Tyr Gly Lys Ala Lys Lys Tyr Tyr Tyr Lys Tyr Lys 35 40 45 Asn Ser Gly Lys Tyr Lys Tyr Leu Lys Lys Ala Arg Lys Tyr His Arg 50 55 60 Lys Gly Tyr Lys Lys Tyr Tyr Gly Gly Gly Ser Ser 65 70 75 <210> 6 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 6 Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys 1 5 10 <210> 7 <211> 60 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 7 Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro 1 5 10 15 Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys 20 25 30 Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr 35 40 45 Tyr Lys Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys 50 55 60 <210> 8 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 8 Arg Gly Asp 1 <210> 9 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 9 Arg Gly Asp Ser 1 <210> 10 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 10 Arg Gly Asp Cys 1 <210> 11 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 11 Arg Gly Asp Val 1 <210> 12 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 12 Arg Gly Asp Ser Pro Ala Ser Ser Lys Pro 1 5 10 <210> 13 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 13 Gly Arg Gly Asp Ser 1 5 <210> 14 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 14 Gly Arg Gly Asp Thr Pro 1 5 <210> 15 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 15 Gly Arg Gly Asp Ser Pro 1 5 <210> 16 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 16 Gly Arg Gly Asp Ser Pro Cys 1 5 <210> 17 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 17 Tyr Arg Gly Asp Ser 1 5 <210> 18 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 18 Ser Pro Pro Arg Arg Ala Arg Val Thr 1 5 <210> 19 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 19 Trp Gln Pro Pro Arg Ala Arg Ile 1 5 <210> 20 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 20 Asn Arg Trp His Ser Ile Tyr Ile Thr Arg Phe Gly 1 5 10 <210> 21 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 21 Arg Lys Arg Leu Gln Val Gln Leu Ser Ile Arg Thr 1 5 10 <210> 22 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 22 Lys Ala Phe Asp Ile Thr Tyr Val Arg Leu Lys Phe 1 5 10 <210> 23 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 23 Ile Lys Val Ala Asn 1 5 <210> 24 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 24 Lys Lys Gln Arg Phe Arg His Arg Asn Arg Lys Gly Tyr Arg Ser Gln 1 5 10 15 <210> 25 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 25 Val Ala Glu Ile Asp Gly Ile Gly Leu 1 5 <210> 26 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 26 Pro His Ser Arg Asn Arg Gly Asp Ser Pro 1 5 10 <210> 27 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 27 Asn Arg Trp His Ser Ile Tyr Ile Thr Arg Phe Gly 1 5 10 <210> 28 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Motif for cell culture scaffold <400> 28 Thr Trp Tyr Lys Ile Ala Phe Gln Arg Asn Arg Lys 1 5 10

Claims (12)

  1. 세포배양 지지체를 구비한 세포배양용기에 있어서,
    상기 세포배양 지지체는 주표면이 세포배양용기의 바닥부로부터 일정 높이로 이격되도록 고정부재를 통해 세포배양용기의 측벽부에 고정되고,
    상기 세포배양 지지체는 슬리팅사를 포함하는 원단이며,
    상기 슬리팅사는 평량이 0.1 ~ 100g/㎡인 섬유웹을 폭이 0.1 ~ 30㎜가 되도록 절단한 모노사이고,
    상기 세포배양 지지체는 기공의 평균공경이 0.1 ~ 300㎛, 기공도는 10 ~ 60%, 평량은 1 ~ 10g/㎡이며,
    상기 세포배양 지지체는 점도가 1 ~ 100 cps인 세포배양액에 대하여 평균 투과량이 0.01 ~ 10㎖/㎟·min·bar인 세포배양용기.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 슬리팅사에는 세포의 부착, 이동, 성장, 증식(proliferation) 및 분화(differentiation) 중 어느 하나 이상을 유도하는 생리활성성분인 세포배양 향상물질을 더 포함하는 세포배양용기.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 고정부재는 세포배양용기의 측벽부와 부착되는 제1 접착부, 세포배양 지지체와 부착되며, 상기 제1 접착부와 접착력이 상이한 제2 접착부, 및 상기 제1 접착부와 제2 접착부 사이에 개재되어 지지기능을 수행하는 지지부를 포함하는 접착필름인 세포배양용기.
  4. 삭제
  5. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 따른 세포배양용기를 포함하는 세포배양용 어세이.
  6. 삭제
  7. 삭제
  8. 삭제
  9. 삭제
  10. 삭제
  11. 삭제
  12. 삭제
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