KR102083081B1

KR102083081B1 - 유데나필을 유효성분으로 포함하는 지방줄기세포의 발모 유도능 증진용 조성물

Info

Publication number: KR102083081B1
Application number: KR1020180062118A
Authority: KR
Inventors: 성종혁; 최나현
Original assignee: 연세대학교 산학협력단
Priority date: 2018-05-30
Filing date: 2018-05-30
Publication date: 2020-02-28
Also published as: CN110548031B; KR20190136423A; US20190367879A1; CN110548031A; US11608490B2

Abstract

본 발명은 유데나필을 처리하여 배양된 지방줄기세포의 발모 유도능 증진 효과에 관한 것으로, 이와 함께 유데나필을 처리하여 배양된 지방줄기세포, IL-4 또는 IL-12B를 유효 성분으로 포함하는 탈모증 예방, 치료 또는 발모 촉진용 조성물을 제공한다. 지방줄기세포의 배양 배지에 유데나필을 처리해 배양하였을 때, 지방줄기세포에서 IL-4 및 IL-12B의 발현 수준이 증가하며, 이에 따라 모낭 세포의 성숙을 보다 촉진시켜 모발 성장이 유도될 수 있다. 이러한 모발 성장 유도능은, 유데나필을 처리하지 않고 배양된 지방줄기세포가 나타내는 유도능에 비해 현저히 증가된 수준이며, 따라서 유데나필을 처리하여 배양된 지방줄기세포는 탈모 예방, 개선 또는 발모 증진용 조성물의 유효성분으로서 사용될 수 있다. 또한, 유데나필을 처리하여 배양된 지방줄기세포에서 발현되는 IL-4 및 IL-12B를 피부 조직에 도포하였을 때, 모발 성장이 유도될 수 있으므로, IL-4 및 IL-12B는 탈모 예방, 개선 또는 발모 증진용 조성물의 유효성분으로서 사용될 수 있다.

Description

유데나필을 유효성분으로 포함하는 지방줄기세포의 발모 유도능 증진용 조성물{Composition for enhancing the action for hair growth of adipose stem comprising udenafil as an active ingredient}

본 발명은 유데나필을 처리하여 배양된 지방줄기세포의 발모 유도능 증진 효과, 및 상기 지방줄기세포에서 발현 수준이 증가된 IL-4 및 IL-12B에 의한 발모 유도능 증진 효과에 관한 것으로, 이와 함께 유데나필을 처리하여 배양된 지방줄기세포를 유효 성분으로 포함하는 탈모증 예방, 치료 또는 발모 촉진용 조성물을 제공한다.

사람의 모발은 일차적으로는 자외선 등의 외부 자극요인으로부터 두피를 보호하기 위한 방어 기능을 담당하며 개인의 외적 이미지를 표현하는 미적 기능을 담당한다. 그러나 현대 사회에서는 환경 오염과 강한 자외선 등의 자연적인 요인, 스트레스 및 호르몬 불균형 등의 생리학적인 요인에 의해 탈모가 빈번히 발생되고 있으며 성인 남성에 국한되던 과거와 다르게 남녀노소를 불문하고 탈모 현상이 나타남에 따라 이의 예방 및 치료를 위한 소재의 필요성이 절실해졌다.

모발을 만들어내는 신체 내의 생리학적 기관인 모낭(hair follicle)은 모발의 성장부터 유지, 탈락의 과정에 관여하며, 모발성장 주기가 반복되며 모발의 성장 및 유지할 수 있도록 한다. 최근 탈모 현상이 증가하고 발모 및 모발 성장의 촉진에 대한 수요가 증가함에 따라, 모낭의 활성에 대한 관심이 증가되었다.

현재 발모 및 모발 성장을 촉진할 수 있는 약물로서 FDA에서 승인된 대표적인 약물은 미녹시딜(minoxidil)과 피나스테라이드(finasteride)이 있다. 그러나, 이들 약물은 전신의 발모 및 성기능 저하 등의 부작용이 따르고 구체적인 작용 기전 또한 명확하게 밝혀지지는 않은 상태이다. 따라서, 모낭에서 모유두 세포의 증식을 촉진하고 성장인자의 발현을 증가시키면서 인체에 안정한 약물을 개발하기 위한 노력을 기울이고 있다.

이러한 안정적인 약물로서의 역할을 할 수 있는 후보군으로, 지방줄기세포가 제시될 수 있다. 지방유래줄기세포(Adipose-derived Stem Cells)는 중간엽 줄기세포로 피부의 상처치유 및 노화예방 효과를 나타낸다. 보고된 바에 따르면, 저산소 상태 또는 비타민 C를 전처리한 지방줄기세포에 의해 마우스의 모발 성장 주기가 휴지기에서 성장기로 전환되는 것을 확인하여, 지방줄기세포가 모발 재생능을 유도할 수 있다(비특허문헌 1, 비특허문헌 2). 이에 더하여, 지방줄기세포의 활성을 조절하여 지방줄기세포가 가지는 모발 성장 유도능을 보다 증가시킬수 있음이 보고된 바 있다(특허문헌 1).

따라서, 본 발명자들은 발모 촉진 효과를 나타내는 지방줄기세포에서 보다 발모 유도능이 증진될 수 있도록 하는 방법을 개발하기 위해 노력한 결과, 유데나필(udenafil)을 처리하여 지방줄기세포를 배양하였을 때, 지방줄기세포에서 IL-4 및 IL-12B의 발현 수준이 증가하며 지방줄기세포가 모낭 세포의 성숙을 유도하여 발모 유도능이 보다 증가될 수 있음을 확인하고, IL-4 및 IL-12B 또한 자체적으로 모낭 세포의 성숙을 유도하여 발모 유도능이 증가될 수 있음을 확인함으로서, 본 발명을 완성하였다.

KR 10-1686229 B1

Won, Chong Hyun, et al. "Hair growth promoting effects of adipose tissue-derived stem cells." Journal of dermatological science 57.2 (2010): 134-137. Kim, Ji Hye, et al. "The molecular mechanism underlying the proliferating and preconditioning effect of vitamin C on adipose-derived stem cells." Stem cells and development 23.12 (2014): 1364-1376.

본 발명의 목적은, 지방줄기세포가 나타내는 발모 유도능을 보다 증진시킬 수 있는 방법을 제공하는 것에 있다.

본 발명의 또 다른 목적은 발모 유도능이 보다 증가된 지방줄기세포를 포함하는, 탈모증 예방, 치료 또는 발모 촉진용 조성물을 제공하는 것에 있다.

본 발명의 또 다른 목적은 발모 유도능이 보다 증가된 지방줄기세포에서 발현수준이 증가하는 인자, 즉 IL-4 및 IL-12B를 포함하는, 탈모증 예방, 치료 또는 발모 촉진용 조성물을 제공하는 것에 있다.

상기 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 유데나필(udenafil) 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는, 지방줄기세포의 발모 유도능 증진용 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 지방줄기세포 배양 배지에 유데나필을 처리하여 배양하는 단계;를 포함하는, 지방줄기세포의 발모 유도능 증진 방법을 제공한다.

본 발명의 바람직한 일실시예에서, 상기 유데나필은 하기 [화학식 1]의 구조를 가지는 것일 수 있다:

[화학식 1]

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본 발명의 바람직한 일실시예에서, 상기 유데나필은 지방줄기세포에서 IL-4 및 IL-12B 발현 수준 증가를 유도하는 것일 수 있다.

본 발명의 바람직한 일실시예에서, 상기 유데나필은 0.1 μM 내지 1 mM의 농도로 지방줄기세포에 처리되는 것일 수 있다.

또한, 본 발명은 유데나필 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 처리하여 배양된 지방줄기세포, 또는 그 배양액을 유효성분으로 포함하는, 탈모증 예방, 치료 또는 발모 촉진용 약학적 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 유데나필 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 처리하여 배양된 지방줄기세포, 또는 그 배양액을 유효성분으로 포함하는, 탈모 예방, 개선 또는 발모 촉진용 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 유데나필 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 처리하여 배양된 지방줄기세포에서 발현 수준이 증가하는 사이토카인을 유효성분으로 포함하는, 탈모증 예방, 치료 또는 발모 촉진용 약학적 조성물을 제공한다.

아울러, 본 발명은 유데나필 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 처리하여 배양된 지방줄기세포에서 발현 수준이 증가하는 사이토카인을 유효성분으로 포함하는, 탈모 예방, 개선 또는 발모 촉진용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 바람직한 일실시예에서, 상기 사이토카인은 IL-4 및 IL-12B로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것일 수 있다.

본 발명은 유데나필(udenafil)을 유효성분으로 포함하는, 지방줄기세포의 발모 유도 증진용 조성물을 제공한다. 지방줄기세포의 배양 배지에 유데나필을 처리해 배양하였을 때, 지방줄기세포에서 IL-4 및 IL-12B의 발현 수준이 증가하며, 이에 따라 모낭 세포의 성숙을 보다 촉진시켜 모발 성장이 유도될 수 있다. 이러한 모발 성장 유도능은, 유데나필을 처리하지 않고 배양된 지방줄기세포가 나타내는 유도능에 비해 현저히 증가된 수준이며, 따라서 유데나필을 처리하여 배양된 지방줄기세포는 탈모 예방, 개선 또는 발모 증진용 조성물의 유효성분으로서 사용될 수 있다. 또한, 유데나필을 처리하여 배양된 지방줄기세포에서 발현되는 IL-4 및 IL-12B를 피부 조직에 도포하였을 때, 모발 성장이 유도될 수 있으므로, IL-4 및 IL-12B는 탈모 예방, 개선 또는 발모 증진용 조성물의 유효성분으로서 사용될 수 있다.

도 1은 유데나필을 처리하여 배양한 지방줄기세포를 피하주입한 마우스 등에서 발모 효과를 확인한 결과이다.
도 2는 유데나필을 처리하여 배양한 지방줄기세포를 피하주입한 마우스 등의 모낭 조직을 관찰한 결과이다.
도 3은 유데나필을 처리하여 배양한 지방줄기세포에서 발현된 IL-4 및 IL-12B의 mRNA 발현 수준을 확인한 결과이다.
도 4는 IL4 펩타이드 또는 IL-12B 펩타이드를 도포한 마우스 등에서 발모 효과를 확인한 결과이다.
도 5는 마우스 코에서 수득한 모낭 세포에 IL-4 펩타이드 또는 IL-12B 펩타이드를 처리하여 모발 성장 유도 효과를 확인한 결과이다.

이하, 본 발명에서 사용된 용어를 설명한다.

본 발명의 용어 "탈모"는 모발이 완전히 두피 밖으로 빠져나오는 현상을 의미한다. 탈모가 진행되고 있는 사람은 성장기가 짧아지고 휴지기가 긴 모발 주기를 가지게 되는데, 본 발명에 따라 유데나필을 처리해 배양된 지방줄기세포는 모낭 세포의 성숙을 유도하는 유도능이 증가되어 모발의 성장을 유도하므로, 탈모에 대한 개선 효과를 나타낼 수 있다.

본 발명의 용어 "발모"는 두피에서 모발이 나는 것을 의미하고, 구체적으로 탈모된 부위 또는 털이 없는 부위(무모 부위)에 모낭을 형성하여 털이 나도록 유도하는 것을 의미한다. 이는 당업계에서 모발의 길이가 길어지는 것(즉, 모발 성장)을 의미하는 "육모" 또는 "양모"와 동일한 의미로 사용된다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명은 유데나필(udenafil)을 유효성분으로 포함하는, 지방줄기세포의 발모 유도능 증진용 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 유데나필은 PDE5 저해제(PDE5 inhibitor)로서, 음경해면체 동맥을 통해 평활근으로 유입되면 PDE5 효소의 활성을 억제시키고 세포 내 cGMP의 비활성화를 방지해 오랫동안 활성을 지속시켜 성적 자극에 대한 발기 반응을 촉진시킬 수 있어, 종래 발기부전 치료제로서 사용되고 있다. 보다 구체적으로, 상기 유데나필은 하기 [화학식 1]의 구조를 가지는 것이 바람직하다.

[화학식 1]

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상기 유데나필을 지방줄기세포의 배양액에 처리하여 배양하였을 때, 지방줄기세포의 자극을 유도할 수 있으며, 이에 따라 지방줄기세포의 IL-4 및 IL-12B의 발현 수준이 증가될 수 있다. 구체적으로, 상기 유데나필은 0.1 μM 내지 1 mM의 농도로 지방줄기세포에 처리되는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않으며, 당업자에 의해 적절한 농도로 조절되어 지방줄기세포의 배양액에 첨가될 수 있다.

본 발명에 따른 조성물은, 유데나필의 약학적으로 허용가능한 염을 포함할 수 있다. 상기 유데나필을 약학적으로 허용가능한 염의 형태로 사용하는 경우, 약학적으로 허용가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산부가염이 유용하다. 산 부가염은 염산, 질산, 인산, 황산, 브롬화수소산, 요드화수소산, 아질산 또는 아인산과 같은 무기산류와 지방족 모노 및 디카르복실레이트, 페닐-치환된 알카노에이트, 하이드록시 알카노에이트 및 알칸디오에이트, 방향족산류, 지방족 및 방향족 설폰산류와 같은 무독성 유기산으로부터 얻는다. 이러한 약학적으로 무독한 염류로는 설페이트, 피로설페이트, 바이설페이트, 설파이트, 바이설파이트, 니트레이트, 포스페이트, 모노하이드로겐 포스페이트, 디하이로겐 포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 플루오라이드, 아세테이트, 프로피오네이트, 데카노에이트, 카프릴레이트, 아크릴레이트, 포메이트, 이소부티레이트, 카프레이트, 헵타노에이트, 프로피올레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 석시네이트, 수베레이트, 세바케이트, 푸마레이트, 말리에이트, 부틴-1,4-디오에이트, 헥산-1,6-디오에이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 디니트로 벤조에이트, 하이드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 프탈레이트, 테레프탈레이트, 벤젠설포네이트, 톨루엔설포네이트, 클로로벤젠설포네이트, 크실렌설포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시트레이트, 락테이트, β-하이드록시부티레이트, 글리콜레이트, 말레이트, 타트레이트, 메탄설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트 또는 만델레이트를 포함한다.

본 발명에 따른 산 부가염은 통상의 방법, 예를 들면, 상기 유데나필을 과량의 산 수용액 중에 용해시키고, 이 염을 수혼화성 유기 용매, 예를 들면 메탄올, 에탄올, 아세톤 또는 아세토니트릴을 사용하여 침전시켜서 제조할 수 있다. 동량의 유데나필 및 물 중의 산 또는 알코올을 가열하고, 이어서 이 혼합물을 증발시켜서 건조시키거나 또는 석출된 염을 흡입 여과시켜 제조할 수도 있다.

또한, 염기를 사용하여 약학적으로 허용 가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염은 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물 염을 여과하고, 여액을 증발, 건조시켜 얻는다. 이때, 금속염으로는 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하다. 또한, 이에 대응하는 은 염은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염을 적당한 은염(예, 질산은)과 반응시켜 얻는다.

또한, 본 발명의 상기 유데나필은 약학적으로 허용되는 염뿐만 아니라, 통상의 방법에 의해 제조될 수 있는 모든 염, 수화물 및 용매화물을 모두 포함한다.

본 발명에 따른 부가염은 통상의 방법으로 제조할 수 있으며, 예를 들면 유데나필을 수혼화성 유기용매, 예를 들면 아세톤, 메탄올, 에탄올, 또는 아세토니트릴 등에 녹이고 과량의 유기산을 가하거나 무기산의 산 수용액을 가한 후 침전시키거나 결정화시켜서 제조할 수 있다. 이어서 이 혼합물에서 용매나 과량의 산을 증발시킨 후 건조시켜서 부가염을 얻거나 또는 석출된 염을 흡인 여과시켜 제조할 수 있다.

상기 유데나필 및 이의 약학적으로 허용가능한 염에 대하여는, 지방줄기세포의 발모 유도능 증진용 조성물과 관련하여 상술한 바 있으므로 중복된 설명을 생략한다.

본 발명의 조성물을 의약품으로 사용하는 경우, 유데나필 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 처리된 지방줄기세포를 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물은 임상투여 시에 다양한 하기의 경구 또는 비경구 투여 형태로 제제화되어 투여될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

경구 투여용 제형으로는 예를 들면 정제, 환제, 경/연질 캅셀제, 액제, 현탁제, 유화제, 시럽제, 과립제, 엘릭시르제 등이 있는데, 이들 제형은 유효 성분 이외에 희석제(예: 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 만니톨, 솔비톨, 셀룰로즈 및/ 또는 글리신), 활택제(예: 실리카, 탈크, 스테아르산 및 그의 마그네슘 또는 칼슘염 및/또는 폴리에틸렌 글리콜)를 함유하고 있다. 정제는 또한 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분 페이스트, 젤라틴, 메틸셀룰로즈, 나트륨 카복시메틸셀룰로즈 및/또는 폴리비닐피롤리딘과 같은 결합제를 함유할 수 있으며, 경우에 따라 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨 염과 같은 붕해제 또는 비등 혼합물 및/또는 흡수제, 착색제, 향미제, 및 감미제를 함유할 수 있다.

본 발명의 유데나필 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 처리된 지방줄기세포를 유효 성분으로 하는 약학적 조성물은 비경구 투여할 수 있으며, 상기 비경구 투여는 정맥내 주입, 피하주입, 근육 주입, 복강 주입, 경피 투여 등으로 주입되는 방법에 의한다. 이 때, 적용되는 질환의 종류에 따라 투여경로가 결정되는 것이 바람직하다. 예를 들어, 본 발명의　의약　조성물은 발모촉진 또는 탈모의 예방 및 치료에 사용되기 때문에 피부에 국소적으로 적용되는 방식으로 투여되는 것이 바람직하다. 따라서, 본 발명의 발모 촉진용　의약　조성물은 국소 투여용 주사제인 것이 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 비경구 투여용 제형으로 제제화하기 위하여 상기 지방줄기세포를 안정제 또는 완충제와 함께 물에 혼합하여 용액 또는 현탁액으로 제조하고, 이를 앰플 또는 바이알 단위 투여형으로 제조할 수 있다. 상기 조성물은 멸균되고/되거나 방부제, 안정화제, 수화제 또는 유화 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염 및/또는 완충제 등의 보조제, 및 기타 치료적으로 유용한 물질을 함유할 수 있으며, 통상적인 방법인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 따라 제제화할 수 있다.

본 발명의 의약 조성물은 유효량의 지방줄기세포 또는 이의 배양액을 포함할 때 바람직한 탈모증 예방, 치료 또는 발모 촉진 효과를 제공할 수 있다. 본 발명에 있어서, '유효량'이라 함은 탈모증 예방, 치료 또는 발모 촉진 효과가 나타나는 조성물의 양을 의미한다. 본 발명의 조성물에 포함되는 지방줄기세포 또는 이의 배양액의 유효량은 조성물이 제품화되는 형태, 상기 화합물이 피부에 적용되는 방법 및 피부에 머무르는 시간 등에 따라 달라질 것이다. 예컨대, 상기 조성물이 탈모증 예방 또는 치료를 위한 의약품으로 제품화되는 경우에는 일상적으로 피부에 적용하게 되는 화장품으로 제품화되는 경우에 비해 높은 농도로 지방줄기세포 또는 이의 배양액을 포함할 수 있을 것이다.

아울러, 본 발명은 유데나필 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 처리하여 배양된 지방줄기세포, 또는 그 배양액을 유효성분으로 포함하는, 탈모 예방, 개선 또는 발모 촉진용 화장료 조성물을 제공한다.

아울러, 본 발명에서 제공하는 유데나필 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 처리한 지방줄기세포, 또는 이의 배양액은 탈모 예방, 개선 또는 발모 촉진용 의약외품으로도 제공될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 유데나필 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 처리된 지방줄기세포, 또는 이의 배양액을 유효성분으로 함유하며 피부학적으로 허용 가능한 부형제와 함께 기초 화장품 조성물(화장수, 크림, 에센스, 클렌징 폼 및 클렌징 워터와 같은 세안제, 팩, 보디오일), 색조 화장품 조성물(화운데이션, 립스틱, 마스카라, 메이크업 베이스), 두발 제품 조성물(샴푸, 린스, 헤어컨디셔너, 헤어젤) 및 비누 등의 형태로 제조될 수 있다. 이 외에도, 적절한 화장료 조성물의 제형, 예를 들면 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 연고, 에센스, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.

상기 부형제로는 이에 한정되지는 않으나 예를 들어, 피부연화제, 피부 침투 증강제, 착색제, 방향제, 유화제, 농화제 및 용매를 포함할 수 있다. 또한, 향료, 색소, 살균제, 산화방지제, 방부제 및 보습제 등을 추가로 포함할 수 있으며, 물성개선을 목적으로 점증제, 무기염류, 합성 고분자 물질 등을 포함할 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 화장료 조성물로 세안제 및 비누를 제조하는 경우에는 통상의 세안제 및 비누 베이스에 상기 지방줄기세포 또는 이의 배양액을 첨가하여 용이하게 제조할 수 있다. 크림을 제조하는 경우에는 일반적인 수중유적형(O/W)의 크림베이스에 지방줄기세포를 첨가하여 제조할 수 있다. 여기에 향료, 킬레이트제, 색소, 산화방지제, 방부제 등과 물성개선을 목적으로 한 단백질, 미네랄, 비타민 등 합성 또는 천연소재를 추가로 첨가할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에 함유되는 지방줄기세포 또는 이의 배양액의 함량은 이에 한정되지 않지만 전체 조성물 총중량에 대하여 0.001 내지 10 중량%인 것이 바람직하고, 0.01 내지 5중량%인 것이 더욱 바람직하다. 상기 함량이 0.001중량% 미만에서는 목적하는 탈모 예방, 개선 또는 발모 촉진 효과를 기대할 수 없고, 10중량% 초과에서는 안전성 또는 제형상의 제조에 어려움이 있을 수 있다.

본 발명의 지방줄기세포 또는 이의 배양액을 화장료 조성물 또는 의약외품 조성물의 유효성분으로 사용할 경우, 탈모 예방, 개선 또는 발모 촉진 효과를 나타내는 상기 지방줄기세포 또는 이의 배양액을 그대로 첨가하거나, 다른 의약외품 또는 의약외품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합량은 사용목적에 따라 적합하게 결정될 수 있다.

본 발명의 탈모 예방, 개선 또는 발모 촉진용 의약외품은 그 제형에 있어서 특별히 한정하지 않으며, 탈모 예방, 개선 또는 발모 촉진 효과를 나타내는 것으로 당업계에 공지된 의약외품의 형태로 다양하게 제형화될 수 있다. 상기 제형화된 제품은 자외선 차단제, 선크림, 선로션, 선스프레이, 헤어토닉, 헤어로션, 헤어크림, 헤어스프레이, 헤어무스, 헤어젤, 헤어컨디셔너, 헤어샴푸, 헤어 린스, 헤어팩, 헤어트리트먼트, 눈썹발모제, 속눈썹발모제, 속눈썹영양제, 애완동물용 샴푸, 애완동물용 린스, 손 세정제, 세제 비누, 비누, 소독 청결제, 물티슈, 마스크, 연고제, 패치 또는 필터 충진제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 의약외품을 모두 포함한다.

본 발명의 약학적 조성물 또는 화장료 조성물과 관련하여서는, 상기 유데나필 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 처리하여 배양된 지방줄기세포, 또는 이의 배양액을 포함하는 조성물과 관련하여 상술한 바 있으므로 중복된 설명을 생략한다.

본 발명의 약학적 조성물 또는 화장료 조성물에 있어서, 상기 사이토카인은 유데나필을 처리한 배양 배지에서 배양된 지방줄기세포에서 mRNA 또는 펩타이드(단백질)의 발현 수준이 증가된 사이토카인을 의미한다. 구체적으로, 상기 사이토카인은 IL-4, IL-12B 또는 이들 둘 다인 것이 보다 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.

유데나필(udenafil)에 의한 발모 촉진 효과 확인

유데나필에 의해 자극된 지방줄기세포가 모발 증식 유도 효과를 나타낼 수 있는지 확인하였다.

<1-1> 유데나필로 자극된 지방줄기세포에 의한 모발 성장 유도 효과 확인

먼저 지방줄기세포에 유데나필을 전처리하여 자극된 지방줄기세포를 준비하였다. 지방줄기세포(adipose stem cell)를 100 ㎚ 접시에 접종하여 배양하고, 다음날 1 μM의 유데나필을 배양 배지에 처리하고 3 내지 4 일을 추가 배양하였다. 그런 다음, 부착 배양된 지방줄기세포를 트립신으로 탈리시킨 후, 원심분리기로 수득하였다. 수득한 지방줄기세포는 100 ㎕ PBS에 섞어 준비하였다.

그런 다음, 6 주령의 C3H 마우스의 등 모발을 완전히 제거하고, 상기 준비한 지방줄기세포를 1×10⁴ 세포씩 피하주사로 주입하였다. 주입 후 15일 동안 마우스의 등을 관찰하여 모발이 자라는 것을 확인한 다음, 자란 모발을 면도로 수득하여 무게를 측정하고, 사진을 촬영하였다.

그 결과, 도 1에서 나타난 바와 같이, 유데나필을 전처리한 지방줄기세포를 주입한 실험군 마우스(ASC^Udenafil)에서 모발 성장 효과가 나타나, 전처리하지 않은 지방줄기세포를 주입한 실험군 마우스(ASC^ctrl)에 비해 유의적으로 높은 수준의 모발 성장 효과를 나타내는 것으로 확인하였다.

<1-2> 유데나필로 자극된 지방줄기세포에 의한 모낭세포 조직 관찰

조직학적 분석을 수행하기 위해 표본을 조직 표본을 제작하였다. 상기 실시예 <1-1>에서 관찰 종료된 마우스 등의 피부를 가로×세로=1㎝×1㎝의 정사각형으로 자른 다음, 상온의 포르말린에 1 일 동안 담구어 조직을 고정시켰다. 다음날, 샘플 수거용 카세트에 넣고 흐르는 물에서 15 분간 세척한 다음, 파라핀 블록을 제작하였다.

제작한 조직의 파라핀 블록은 Mayer hematoxilin 방법을 사용해 H&E 염색으로 염색하여 조직을 관찰하였다. 파라핀 블록을 65℃ 배양기에 10 분 정도 정치시켜 파라핀을 녹인 후, 3 번의 다른자일렌에 10 분씩 담가둔 다음, 100%, 90%, 80% 및 70%의 에탄올에 순차적으로 1 분씩 담구어 세척하고, 최종적으로 물에서 3 분 정도 세척하였다. 그런 다음, Hematoxylin에 9 분 정도 담구고 흐르는 물에서 3 분간 세척하고, 다시 eosin Y에 90초 정도 담구고 흐르는 물에서 3 분간 세척하였다. 다시, 70%, 80%, 90% 및 100%의 에탄올에 순차적으로 2 분씩 담구어 탈수하고, 자일렌에 10 분씩 총 3회 담근 다음, 상온에서 건조시키고 커버글러스를 덮어 관찰 슬라이드를 제작하였다. 제작한 관찰 슬라이드는 현미경으로 관찰하여 염색된 모낭세포의 조직을 확인하였다.

그 결과, 도 2에서 나타난 바와 같이 지방줄기세포를 주입하지 않은 대조군(Control) 및 유데나필 전처리 없이 지방줄기세포를 바로 주입한 대조군(ASC^ctrl)의 모낭세포조직에 비해, 우나데필을 전처리한 지방줄기세포를 주입한 실험군(ASC^unadefil)에서 성숙된 모낭세포가 증가한 것을 확인하였다.

유데나필에 의한 지방줄기세포 자극 효과의 확인

<2-1> 유데나필에 의한 성장인자의 발현 수준 변화 확인

유데나필을 처리한 지방줄기세포에서 발모 효과를 나타낼 수 있음을 확인하여, 이에 더해 발모 효과가 유데나필을 처리한 지방줄기세포에 의한 것인지 구체적으로 확인하기 위해, 모발 성장 인자인 IL-4 및 IL-12B의 발현 수준을 확인하였다.

구체적으로, 상기 실시예 <1-1>에서 수행한 바와 같이 유데나필을 지방줄기세포에 처리하고 배양하였다. 배양 종료 후, 세포를 수득하여 트리졸을 처리해 세포로부터 RNA를 추출하였다. 추출한 RNA를 주형으로 하여 역전사 PCR을 통해 cDNA를 합성하고, 합성된 cDNA 및 SYBR premix를 성장 인자 확인용 QPCR 분석 96 well에 가해 QPCR 반응을 수행하였다. QPCR 수행 결과를 분석하여, 유데나필이 처리된 지방줄기세포 내 IL-4 및 IL-12B의 발현 수준을 각각 확인하였다.

그 결과, 도 3에서 나타난 바와 같이 유데나필을 처리하지 않은 지방줄기세포(control)에 비해, 유데나필을 처리한 지방줄기세포에서 IL-4의 mRNA 발현 수준이 약 4 배 정도 높고, IL-12B의 mRNA 발현 수준은 약 6 배 정도 높은 것으로 확인하였다.

<2-2> IL-4 및 IL-12B의 발모 효과 확인

상기 실시예 <2-1>에서 유데나필을 처리한 지방줄기세포에서 IL-4 및 IL-12B의 발현 수준이 증가하는 것을 확인하였으므로, 이에 더하여 IL-4 또는 IL-12B 자체가 가지는 모발 성장 유도 효과를 확인하였다.

구체적으로, 6 주령의 C3H 마우스의 등 모발을 완전히 제거하고, 100 ng/mℓ의 IL-4 펩타이드 또는 IL-12B 펩타이드를 1일 1회씩 마우스의 등에 도포하였다. 13 내지 14일 동안 IL-4 펩타이드 또는 IL-12B 펩타이드를 도포하여 모발이 자라는 것을 확인한 다음, 사진을 촬영하고 등쪽 피부 조직을 수득하여 H&E 염색으로 조직을 관찰하였다.

그 결과 , 도 4에서 나타난 바와 같이 IL-4 펩타이드 또는 IL-12B 펩타이드를 도포한 마우스의 등에서 발모 효과가 증가하고, 모낭 조직 역시 유의적으로 성숙된 것을 확인하였다.

또한, 5 주령의 C57b1/6 마우스의 코털 모낭을 해부하여 모낭 세포를 수득하고 48 웰 플레이트에 옮긴 다음, IL-4 펩타이드 또는 IL-12B 펩타이드를 5 ng/mℓ 또는 20 ng/mℓ 농도로 처리해 3 일 동안 배양하였다. 배양 종료 후, 모낭 조직을 촬영하고 이로부터 자란 모발의 길이를 측정하였다.

그 결과, 도 5에서 나타난 바와 같이 코털 모낭세포를 IL-4 또는 IL-12B와 함께 배양하였을 때, 미처리 대조군에 비해 모낭 세포로부터 자라난 모발의 길이가 더 긴 것으로 확인하여, IL-4 및 IL-12B가 모발 성장 유도 효과를 나타내는 것으로 확인하였다.

Claims

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지방줄기세포 배양 배지에 유데나 필을 처리하여 배양하는 단계;를 포함하며, 상기 유데나필은 하기 [화학식 1]의 구조를 가지는 것을 특징으로 하는, 지방줄기세포의 발모 유도능 증진 방법:
[화학식 1]

.
제 4항에 있어서, 상기 유데나필은 0.1 μM 내지 1 mM의 농도로 처리하는 것을 특징으로 하는, 지방줄기세포의 발모 유도능 증진 방법.
유데나필 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 처리하여 배양된 지방줄기세포, 또는 그 배양액을 유효성분으로 포함하는, 탈모증 예방, 치료 또는 발모 촉진용 약학적 조성물.
유데나필 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 처리하여 배양된 지방줄기세포, 또는 그 배양액을 유효성분으로 포함하는, 탈모 예방, 개선 또는 발모 촉진용 화장료 조성물.
유데나필 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 처리하여 배양된 지방줄기세포에서 발현 수준이 증가하는 사이토카인을 유효성분으로 포함하는, 탈모증 예방, 치료 또는 발모 촉진용 약학적 조성물.
제 8항에 있어서, 상기 사이토카인은 IL-4 및 IL-12B로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 탈모증 예방, 치료 또는 발모 촉진용 약학적 조성물.
유데나필 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 처리하여 배양된 지방줄기세포에서 발현 수준이 증가하는 사이토카인을 유효성분으로 포함하는, 탈모 예방, 개선 또는 발모 촉진용 화장료 조성물.
제 10항에 있어서, 상기 사이토카인은 IL-4 및 IL-12B로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는, 탈모 예방, 개선 또는 발모 촉진용 화장료 조성물.