BE1023155B1

BE1023155B1 - Samenstelling voor wondheling

Info

Publication number: BE1023155B1
Application number: BE2015/5411A
Authority: BE
Inventors: Guido Wouters
Original assignee: Guido Wouters
Priority date: 2015-06-30
Filing date: 2015-06-30
Publication date: 2016-12-02
Also published as: EP3111946B1; EP3111946A1; US20170000853A1

Abstract

De onderhavige uitvinding heeft betrekking op samenstellingen voor gebruik in farmaceutische, cosmetische en cosmeceutische toepassingen, in het bijzonder wondheling, met inbegrip van de behandeling van laesies en brandwonden. In het bijzonder heeft de onderhavige uitvinding betrekking op samenstellingen die bloedplaatjes-verrijkt plasma (PRP) en stamcel-geconditioneerd medium (SC CM) omvatten, voor gebruik in farmaceutische, cosmetische en cosmeceutische toepassingen, zoals wondheling.

Description

SAMENSTELLING VOOR WONDHELING GEBIED VAN DE UITVINDING

De onderhavige uitvinding heeft betrekking op samenstellingen voor gebruik in farmaceutische, cosmetische en cosmeceutische toepassingen, in het bijzonder wondheling, waaronder de behandeling van laesies en brandwonden. In het bijzonder heeft de onderhavige uitvinding betrekking op samenstellingen die bloedplaatjes-verrijkt plasma (PRP) en stamcel-geconditioneerd medium (SC CM) omvatten voor gebruik in farmaceutische, cosmetische en cosmeceutische toepassingen, zoals wondheling.

ACHTERGROND VAN DE UITVINDING

Wondheling is een proces dat verschillende fasen kent. In eerste instantie, in de ontstekingsfase, reageert het lichaam op de beschadiging door samentrekking van de bloedvaten in het wondbed en de vorming van een prop. Wanneer hémostase bereikt is, verwijden de bloedvaten zich zodat essentiële cellen; antilichamen, witte bloedcellen, groeifactoren, enzymen en voedingsstoffen de gelegenheid krijgen het wondgebied te bereiken. Dit leidt tot een toename van de hoeveelheid exsudaat en daarom moet de omliggende huid gecontroleerd worden op tekenen van maceratie. In dit stadium zijn de karakteristieke tekenen van ontsteking te zien; erytheem, warmte, oedeem, pijn en gestoorde functie. De cellen die hier voornamelijk werken zijn de fagocytische cellen; ‘neutrofielen en macrofagen’; deze sorgen voor een gastheerreactie en autolyse van eventueel gedevitaliseerd ‘necrotisch/dood’ weefsel.

Tijdens proliferatie wordt de wond ‘herbouwd’ met nieuw granulatieweefsel dat collageen en extracellulaire matrix omvat en waarin zich een nieuw netwerk van bloedvaten ontwikkelt, een proces dat bekend is als ‘angiogenese’. Gezond granulatieweefsel is afhankelijk van fibrobiasten die voldoende hoeveelheden zuurstof en voedingsstoffen kunnen krijgen die door de bloedvaten worden aangeleverd. Gezond granulatieweefsel heeft een korrelige en ongelijkmatige textuur; het bloedt niet gemakkelijk en heeft een roze/rode kleur. De kleur en toestand van het granulatieweefsel zijn vaak een aanwijzing voor hoe de wond heelt. Donker granulatieweefsel kan duiden op slechte perfusie, ischemie en/of infectie. Ten slotte komen epitheelcellen opnieuw aan het oppervlak van de wond, een proces dat bekend is als ‘epithelialisatie’.

Maturatie is de laatste fase en treedt op wanneer de wond gesloten is. Deze fase omvat remodelering van collageen type III tot collageen type I. De cellulaire activiteit neemt af en er treedt regressie op van de bloedvaten in de wondgebied en het aantal daarvan neemt af.

Stamcellen zijn van groot belang op een groot aantal therapeutische, cosmetische en cosmeceutische gebieden vanwege hun vermogen cellen van meerdere typen te vormen. Er is beschreven dat de kweekmedia die gebruikt worden voor het kweken van cellen, met inbegrip van stamcellen, voor therapeutische, cosmetische en cosmeceutische toepassingen, ontstaan doordat de groeiende cellen eiwitten en andere factoren in het medium uitscheiden. Zie bijvoorbeeld US 7.118.746; US 7.160.726 en W02008/020815.

Verder is bloedplaatjes-verrijkt plasma (PRP), een product van bloedplasma dat rijk is aan bloedplaatjes, bekend voor gebruik in een verscheidenheid aan therapeutische of cosmetische toepassingen, met inbegrip van het bevorderen van wondheling bij tandimplantaten en sinusbodemelevatie, hartoperatie, orthopedische operatie en dermatologie (heling van chronische wonden). W02005/065269 openbaart bijvoorbeeld enkele samenstellingen die PRP en fibroblastcellen omvatten voor de behandeling van huid, in het bijzonder herhaalde toediening van PRP in een dermatologisch aanvaardbare drager aan de huid om bijvoorbeeld het verschijnen van rimpels te verminderen.

Desalniettemin blijft er behoefte aan alternatieve samenstellingen voor therapeutische, cosmetische en cosmeceutische doeleinden. Het is in het bijzonder gewenst om nieuwe typen samenstellingen te identificeren die doeltreffender werken dan de reeds bestaande producten.

SAMENVATTING VAN DE UITVINDING

In een eerste aspect heeft de onderhavige uitvinding betrekking op een samenstelling die bloedplaatjes-verrijkt plasma (PRP) en stamcel-geconditioneerd medium (SC CM) omvat.

Meer in het bijzonder omvat het PRP in de samenstelling volgens de onderhavige uitvinding transformerende groeifactor-ß (TGF-ß), fibrinogeen, van bloedplaatjes afgeleide groeifactor (PDGF), epidermale groeifactor (EGF), transformerende groeifactor-α (TGF-a), vasculaire endotheliale groeifactor (VEGF), bloedplaatjestromboplastine, trombospondine, stollingsfactoren, calcium, serotonine, histamine en hydrolytische enzymen.

Meer in het bijzonder is het SC CM in de samenstelling volgens de onderhavige uitvinding het medium dat na het kweken van mesenchymale stamcellen geoogst wordt.

Meer in het bijzonder omvat het SC CM in de samenstelling volgens de onderhavige uitvinding hepatocytgroeifactor, transformerende groeifactor ß (TGF-ß), anti-apoptotische factoren, keratinocytgroeifactor, hersenen-afgeleide neurotrofe factor (BDNF), Flt-3-ligand, granulocytkolonie-stimulerende factor (G-CSF), granulocyt/macrofaagkolonie-stimulerende factor (GM-CSF), macrofaagkolonie-stimulerende factor (M-CSF), interleukine-6 (IL-6), interleukine-7 (IL-7), interleukine-8 (IL-8), interleukine-11 (IL-11), interleukine leukine-12 (IL-12), leukemie-remmende factor (LIF) en tumornecrosefactor-alfa (TNF-a).

In het bijzonder omvat de samenstelling volgens de onderhavige uitvinding verder DMSO.

In het bijzonder omvat de samenstelling volgens de onderhavige uitvinding verder een geleermiddel.

Meer in het bijzonder zijn het PRP en het SC CM in de samenstelling volgens de onderhavige uitvinding in een verhouding van ongeveer 3:1 tot ongeveer 1:3 in de samenstelling aanwezig.

In het bijzonder wordt het SC CM in de samenstelling volgens de onderhavige uitvinding bereid uit stamcellen die uit beenmerg of vetweefsel geïsoleerd zijn. In het bijzonder zijn de stamcellen mesenchymale stamcellen.

Meer in het bijzonder is het geconditioneerde medium in de samenstelling volgens de onderhavige uitvinding een verwerkt geconditioneerd medium.

Volgens een tweede aspect heeft de onderhavige uitvinding betrekking op de samenstellingen zoals hierin beschreven voor (dier)geneeskundige toepassing, meer in het bijzonder voor toepassing bij de behandeling van weefselbeschadigingen bij een individu. Bij voorkeur omvatten de weefselbeschadigingen huidverbrandingen, peesbeschadigingen, zweren en huidwonden, waarbij de weefselbeschadigingen bij voorkeur huidwonden zijn. Bij voorkeur is het individu een zoogdier, bij voorkeur gekozen uit huisdieren, zoals honden, katten en konijnen, of boerderijdieren, zoals paarden, koeien, schapen en geiten.

Volgens een derde aspect heeft de onderhavige uitvinding betrekking op het gebruik van de samenstellingen zoals hierin beschreven voor het bevorderen van haargroei bij een zoogdierlijk individu.

Volgens een derde aspect heeft de onderhavige uitvinding betrekking op een werkwijze voor het bereiden van een samenstelling volgens de onderhavige uitvinding, welke ten minste het mengen van bloedplaatjes-verrijkt plasma (PRP) en stamcel-geconditioneerd medium (SC CM) omvat.

KORTE BESCHRIJVING VAN DE FIGUREN

Figuur 1 toont het effect van de samenstelling volgens de uitvinding op wonden bij egels.

Figuur 2 toont het effect van de samenstelling volgens de uitvinding op wonden bij egels.

Figuur 3 toont het effect van de samenstelling volgens de uitvinding op wonden bij paarden.

Figuur 4 toont het effect van de samenstelling volgens de uitvinding op wonden bij honden.

GEDETAILLEERDE BESCHRIJVING VAN DE UITVINDING

Alvorens de onderhavige werkwijze en inrichtingen die bij de uitvinding gebruikt worden, te beschrijven, dient opgemerkt te worden dat deze uitvinding niet beperkt is tot bijzondere werkwijzen, componenten of inrichtingen die beschreven zijn, omdat dergelijke werkwijzen, componenten en inrichtingen vanzelfsprekend kunnen variëren. Het dient eveneens duidelijk te zijn dat de hierin gebruikte terminologie niet bedoeld is als beperking, omdat de beschermingsomvang van de onderhavige uitvinding uitsluitend beperkt zal worden door de bijgevoegde conclusies.

Tenzij anders gedefinieerd, hebben alle technische en wetenschappelijke termen die hierin gebruikt worden, dezelfde betekenis als een gemiddelde deskundige op dit gebied waartoe deze uitvinding behoort, daaraan zou hechten. Ofschoon alle werkwijzen en materialen die overeenkomen met of gelijkwaardig zijn aan die welke hierin beschreven zijn, bij het in de praktijk brengen of testen van de onderhavige uitvinding gebruikt kunnen worden, worden nu de werkwijzen en materialen beschreven die de voorkeur hebben.

In deze beschrijving en de bijgevoegde conclusies omvatten de enkelvoudsvormen “een”, “de” en “het” verwijzingen naar meervouden tenzij de context duidelijk anders bepaalt.

De termen "omvattende", "omvat” en "omvatten" zoals hierin gebruikt, zijn synoniem met "inbegrepen", "met inbegrip van" of "bevattende" en "bevat” en sluiten bijkomende, niet genoemde leden, elementen of stappen van een werkwijze niet uit.

De termen "omvattende", "omvat" en "omvatten" omvatten eveneens de term “bestaande uit”.

De term "ongeveer" zoals hierin gebruikt wanneer verwezen wordt naar een meetbare waarde, zoals een parameter, een hoeveelheid, een tijdsduur, en dergelijke, is bedoeld om variaties van +/-10% of minder, bij voorkeur +1-5% of minder, met meer voorkeur +/-1% of minder, en met nog meer voorkeur +/-0,1% of minder ten opzichte van de aangegeven waarde te omvatten, voor zover dergelijke variaties van toepassing zijn voor de geopenbaarde uitvinding. Het dient duidelijk te zijn dat de waarde waarnaar de bepaling “ongeveer” verwijst zelf eveneens specifiek en bij voorkeur geopenbaard wordt.

De vermelding van numerieke bereiken door middel van eindpunten omvat alle waarden en fracties die in de respectieve bereiken liggen, alsook de genoemde eindpunten.

De onderhavige uitvinding verschaft samenstellingen die zowel bloedplaatjes-verrijkt plasma (PRP) als stamcel-geconditioneerd medium (SC CM) omvatten.

De term "PRP" of "bloedplaatjes-rijk plasma" zoals hierin gebruikt, dient te worden opgevat als een bloedproduct dat bloedplaatjesconcentraat in een klein volume plasma omvat. Bloedplaatjes-verrijkt plasma (PRP) wordt verkregen door het verwerken van bloed zodat bloedplaatjes-verrijkt plasma verkregen wordt, bijvoorbeeld door dubbele centrifugatie die bedoeld is om de PRP-fractie van bloedplaatjes-arm plasma en rode bloedcellen af te scheiden.

De term "SC CM" of "stamcel-geconditioneerd medium" zoals hierin gebruikt, dient te worden opgevat als een medium dat geoogst is uit gekweekte cellen, typisch gekweekte stamcellen. Stamcel-geconditioneerd medium bevat typisch metabolieten, groeifactoren en eiwitten van de extracellulaire matrix die door de gekweekte stamcellen in het medium uitgescheiden zijn. Voorbeelden van elk daarvan zouden het volgende kunnen omvatten: metabolieten, zoals glucose, aminozuren en nucleosiden; groeifactoren, zoals interleukinen, EGF (epidermale groeifactor) en PDGF (van bloedplaatjes afgeleide groeifactor); en matrixeiwitten, zoals collageen, fibronectine en verschillende proteoglycanen.

Hoewel therapeutische behandelingen met bloedplaatjes-rijk plasma en stamcel-geconditioneerd medium afzonderlijk veelbelovend zijn gebleken, is er nu gevonden dat de combinatie van beide een synergistisch effect produceert. In het bijzonder voor de heling van wonden liggen typische helingstijden met de in de handel verkrijgbare producten in het bereik van 3 tot 6 weken, terwijl de combinatie van bloedplaatjes-verrijkt plasma en stamcel-geconditioneerd medium een verdere vermindering van de helingstijd tot 1 tot 2 weken mogelijk maakt.

Met het oog op zowel de kosten als het succes van het helingsproces is het bij de heling van operatiewonden of traumatische wonden belangrijk dat de heling snel en zonder vertraging optreedt. Er is gevonden dat de samenstelling volgens de uitvinding zorgt voor een succesvol en snel wondhelingsproces van de huid. Een rijke bron van de complexe groep groeifactoren in het product maakt het natuurlijke herstel van de wond mogelijk. De bloedplaatjes spelen een rol in de hémostase; wondheling en herepithelialisatie waardoor diverse GF’s vrijkomen die de angiogenese, groei en vasculaire fibroblastproliferatie stimuleren, die op hun beurt zorgen voor een toename in de collageensynthese. Zowel bloedplaatjes-rijk plasma (PRP) als stamcel-geconditioneerd medium (SC CM) is 100% biologisch verenigbaar en veilig. De helingssnelheid en het terugkeren van de oorspronkelijke huid onthult de grote regeneratieve potentie.

Dienovereenkomstig verschaft de onderhavige uitvinding in een eerste aspect derhalve samenstellingen die bloedplaatjes-verrijkt plasma (PRP) en stamcel-geconditioneerd medium (SC CM) omvatten.

Bij voorkeur omvat het PRP in de samenstellingen volgens de uitvinding ten minste transformerende groeifactor-fc (TGF-ß), fibrinogeen, van bloedplaatjes afgeleide groeifactor (PDGF), epidermale groeifactor (EGF), transformerende groeifactor-α (TGF-a), vasculaire endotheliale groeifactor (VEGF), bloedplaatjestromboplastine, trombospondine, stollingsfactoren, calcium, serotonine, histamine en hydrolytische enzymen.

Aan de PRP-fractie kunnen eveneens andere stoffen toegevoegd worden, met inbegrip van bijvoorbeeld anti-oxidantia, zoals vitaminen, zoals vitamine C (ascorbinezuur), vitamine E, vitamine A en andere retinoïden; en de carotenen, zoals beta-caroteen.

Bij voorkeur is het SC CM in de samenstellingen volgens de uitvinding het medium dat na het kweken van mesenchymale stamcellen geoogst wordt.

Een bijzonder synergetisch effect werd waargenomen toen de cellen waarvan het geconditioneerde medium geoogst werd, mesenchymale stamcellen waren.

Mesenchymale stamcellen (MSC’s) zijn multipotente stromacellen die kunnen differentiëren tot een verscheidenheid aan celtypen, met inbegrip van: Osteoblasten (botcellen), chondrocyten (kraakbeencellen), myocyten (spiercellen) en adipocyten (vetcellen). MSC’s worden typisch geoogst uit beenmerg, vetweefsel, de placenta, navelstrengbloed, adulte spier, hoornvliesstroma of de tandzenuw van het melkgebit van een baby en een bepaalde tijd gekweekt (typisch 2 weken) voordat de cellen en het geconditioneerde medium geoogst worden. Het geconditioneerde medium is rijk aan groeifactoren, zoals hepatocytgroeifactor, transformerende groeifactor ß, anti-apoptotische factoren, keratinocytgroeifactor, hersenen-afgeleide neurotrofe factor (BDNF), Flt-3-ligand, granulocytkolonie-stimulerende factor (G-CSF), granulocyt/macrofaagkolonie-stimulerende factor (GM-CSF), macrofaagkolonie-stimulerende factor (M-CSF), interleukine-6 (IL-6), interleukine-7 (IL-7), interleukine-8 (IL-8), interleukine-11 (IL-11), interleukine leukine-12 (IL-12), leukemie-remmende factor (LIF) en tumornecrosefactor-alfa (TNF-a).

Dienovereenkomstig omvat het SC CM in de samenstelling volgens de onderhavige uitvinding ten minste hepatocytgroeifactor, transformerende groeifactor ß (TGF-ß), anti-apoptotische factoren, keratinocytgroeifactor, hersenen-afgeleide neurotrofe factor (BDNF), Flt-3-ligand, granulocytkolonie-stimulerende factor (G-CSF), granulocyt/macrofaagkolonie-stimulerende factor (GM-CSF), macrofaagkolonie-stimulerende factor (M-CSF), interleukine-6 (IL-6), interleukine-7 (IL-7), interleukine-8 (IL-8), interleukine-11 (IL-11), interleukine leukine-12 (IL-12), leukemie-remmende factor (LIF) en tumornecrosefactor-alfa (TNF-a).

Aan de SC CM-fractie kunnen eveneens andere stoffen toegevoegd worden, met inbegrip van bijvoorbeeld Ca2+-ionen, die de bloedplaatjes van de PRP-stoffen kunnen activeren.

In de samenstelling volgens de onderhavige uitvinding zijn de stamcellen waarvan het SC CM verkregen wordt, bij voorkeur geïsoleerd uit beenmerg of vetweefsel.

In het bijzonder omvat de samenstelling volgens de onderhavige uitvinding verder DMSO. Dimethylsulfoxide (DMSO) is een organische zwavelverbinding met de formule (CH3)2SO. DMSO is een kleurloze vloeistof en een belangrijk polair aprotisch oplosmiddel dat zowel polaire als apolaire verbindingen oplost, en is mengbaar in een groot aantal uiteenlopende organische oplosmiddelen alsook water. Er is gevonden dat de toevoeging van DMSO aan de samenstelling volgens de uitvinding bijzonder nuttig was en daarnaast de doeltreffendheid van de samenstelling voor de behandeling van weefselbeschadigingen bij een individu, en in het bijzonder voor wondhelingsdoeleinden verbeterde.

Door het gebruik van de samenstelling die PRP en SC CM gecombineerd met DMSO omvat, werd een zeer efficiënt wondhelingsproces waargenomen. De tijd waarin de wond zich sluit, wordt nog veel verder verminderd en de heling is beter (granulatie, roze kleur, sluitingstijd). De verschillende fasen van ontstekingsfase, proliferatiefase en maturatiefase zijn korter. DMSO is bij voorkeur in de samenstelling volgens de onderhavige uitvinding aanwezig in hoeveelheid in het bereik van 5% tot 25%, bij voorkeur 7,5% tot 20% en met meer voorkeur ongeveer 10%, 15% of 20%.

Alhoewel de samenstelling volgens de onderhavige uitvinding in vloeibare vorm gebruikt kan worden (in een behandelingsbad of als een spray), kan de doeltreffendheid verder verbeterd worden door de samenstelling volgens de uitvinding in de vorm van een gel te verschaffen. Derhalve omvat de samenstelling volgens de uitvinding bij voorkeur verder een geleermiddel. Bijgevolg kan de samenstelling volgens de uitvinding als een topische behandeling toegepast worden.

In voorkeursuitvoeringsvormen ligt de verhouding waarin het PRP en het SC CM in de samenstelling volgens de uitvinding aanwezig zijn in het bereik van ongeveer 3:1 tot ongeveer 1:3, bij voorkeur ongeveer 2:1 tot ongeveer 1:2, en met meer voorkeur 2:1, 1:1 of 1:2.

In een bijzondere uitvoeringsvorm is het geconditioneerde medium in de samenstelling volgens de onderhavige uitvinding een verwerkt geconditioneerd medium. De omschrijving “verwerkt geconditioneerd medium” verwijst naar een geconditioneerd medium dat verscheidene behandelingen heeft ondergaan, zoals was-, zuiverings- en/of voedingsstappen. Het medium wordt bij voorkeur geoogst na een confluente groei van de celkweek.

In een tweede aspect heeft de onderhavige uitvinding betrekking op een samenstelling zoals hierboven beschreven, voor geneeskundige toepassing en bij voorkeur diergeneeskundige toepassing.

Meer in het bijzonder is gebleken dat de samenstelling volgens de uitvinding een verhoogd en synergetisch klinisch effect op de regeneratie van het weefsel heeft (wondheling). Er is gevonden dat de samenstelling weefselepithelialisatie en granulatie van wonden bevordert. De samenstelling kan aangebracht worden op oppervlakkige en diepe wonden die het gevolg zijn van een trauma, operatie of welke andere externe weefselbeschadiging dan ook waarbij sluiting van de huid een probleem is. Er is gevonden dat de samenstellingen volgens de uitvinding wonden sneller helen dan bij gebruikelijke behandelingen en de samenstellingen volgens de uitvinding kunnen daarom gebruikt worden om het helingsproces te versnellen en littekenvorming te verminderen.

De onderhavige uitvinding heeft bij voorkeur betrekking op een samenstelling zoals hierboven beschreven, voor gebruik bij de behandeling van weefselbeschadigingen bij een individu.

Er is ook gevonden dat zowel het PRP als het SC CM zoals aanwezig is in de samenstellingen volgens de uitvinding van "autogene" donoren dan wel "allogène" donoren afkomstig kan zijn. Dit vereenvoudigt de behandeling omdat het niet langer nodig is dat de donor van de bron van de samenstellingen volgens de uitvinding, de donor van de stamcellen of het bloed, dezelfde is als de ontvanger van de behandeling. Autogene werkwijzen waarbij typisch het eigen bloed en de stamcellen van de patiënt zelf gebruikt worden, zijn kostbaarder omdat zij een geïndividualiseerde benadering vereisen, terwijl voor een allogène werkwijze bloed en/of stamcellen gedoneerd door één of meer derde partijen voor het bereiden van de samenstellingen gebruikt kunnen worden. Dit maakt de productie van grotere hoeveelheden mogelijk, hetgeen bijgevolg de productiekosten drastisch vermindert.

Dienovereenkomstig heeft de onderhavige uitvinding betrekking op een samenstelling zoals hierboven beschreven, voor gebruik bij de allogène behandeling van weefselbeschadigingen bij een individu.

Bij voorkeur omvatten de weefselbeschadigingen huidverbrandingen, peesbeschadigingen, zweren en huidwonden, waarbij de weefselbeschadigingen bij voorkeur huidwonden zijn.

Bij voorkeur is het individu een zoogdier, bij voorkeur gekozen uit huisdieren, zoals honden, katten en konijnen, of boerderijdieren, zoals paarden, koeien, schapen en geiten.

De samenstellingen volgens de uitvinding worden aangebracht op een schoongemaakte wond. De samenstelling, bij voorkeur in de vorm van een gel, kan direct of met gebruikmaking van een steriele dressing op de wond aangebracht worden. Doorgaans is slechts een enkele maal aanbrengen op de wond voldoende, maar afhankelijk van de grootte en het uiterlijk van de wond kan de behandeling na een week herhaald worden.

In een verder aspect heeft de onderhavige uitvinding betrekking op het gebruik van een samenstelling zoals hierboven beschreven, voor het bevorderen van haargroei als een essentieel onderdeel van huidregeneratie bij een zoogdierlijk individu.

Daarnaast is er waargenomen dat de samenstellingen volgens de uitvinding en zoals hierboven beschreven haargroei bij zoogdieren bevorderen. Bij voorkeur heeft de onderhavige uitvinding betrekking op het gebruik van de samenstellingen volgens de uitvinding voor het bevorderen van haargroei bij zoogdieren, waarbij het haar gekozen wordt uit die boven op het hoofd, op de oksels, in de schaamstreek, op het gezicht met inbegrip van wimpers, wenkbrauwen, oogleden, snor, baard en bakkebaard, op de borst, armen en benen, waarbij het haar bij voorkeur gekozen wordt uit die op de schedelhuid, de baard, het hoofd, de schaamstreek, de bovenlip, de wimper, de wenkbrauw en het ooglid.

In een verder aspect heeft de onderhavige uitvinding betrekking op een werkwijze voor het bereiden van een samenstelling volgens de uitvinding, welke ten minste het mengen van bloedplaatjes-verrijkt plasma (PRP) en stamcel-geconditioneerd medium (SC CM) omvat. De werkwijze omvat het verzamelen van de uitscheidingen van mesenchymale stamcellen die de gelering van het bloedplaatjes-verrijkte plasma activeren. De vorming van een lijm is na ongeveer 6 uur te zien.

De onderhavige uitvinding wordt in het navolgende toegelicht door illustratie van bijzondere, niet-beperkende voorbeelden.

VOORBEELDEN VOORBEELD 1 - Wondhelingsonderzoek

Een onderzoek werd uitgevoerd met gebruikmaking van de samenstelling volgens de uitvinding. De samenstelling bestond uit 30% bloedplaatjes-verrijkt plasma, 60% met mesenchymale stamcellen geconditioneerd medium en 10% DMSO.

Egels die gediagnosticeerd waren met huidwonden, werden behandeld met de behandelingssamenstelling die bloedplaatjes-verrijkt plasma en met mesenchymale stamcellen geconditioneerd medium omvatte. Een overzicht van de uitkomst van de behandeling wordt gegeven in tabel 1.

Tabel 1

A = aanbrengen van de behandelingssamenstelling RA = nogmaals aanbrengen van de behandelingssamenstelling - = geen verdere verbetering + = geringe verbetering +++ = grote verbetering

Figuur 1 A en B tonen de verbetering na verloop van tijd van de wond van individu 3

Figuur 2 A en B tonen de verbetering na verloop van tijd van de wond van individu 4 VOORBEELD 2 - Haargroeionderzoek

Egels die vanwege schurft ten minste gedeeltelijk kaal waren, werden behandeld met de behandelingssamenstelling die bloedplaatjes-verrijkt plasma en met mesenchymale stamcellen geconditioneerd medium omvatte. De kaalheid was veroorzaakt door beschadiging van de wortels van de stekels.

De samenstelling zoals in voorbeeld 1 gebruikt, werd aangebracht en na 10 dagen werd waargenomen dat nieuwe stekels verschenen. VOORBEELD 3 - Wondhelingsonderzoek

De samenstelling zoals in voorbeeld 1 gebruikt, werd eveneens met succes gebruikt voor het behandelen van wonden bij paarden en honden. De samenstelling zoals in voorbeeld 1 gebruikt, werd aangebracht op ernstige wonden bij paarden (figuur 3A) en honden (figuur 4A) en na ongeveer twee weken waren de wonden vrijwel volledig geheeld (figuren 3B en 4B).

Claims

CONCLUSIES

1. Samenstelling die bloedplaatjes-verrijkt plasma (PRP) en stamcel-geconditioneerd medium (SC CM) omvat.
2. Samenstelling volgens conclusie 1, waarbij het PRP transformerende groeifactor-ß (TGF-ß), fibrinogeen, van bloedplaatjes afgeleide groeifactor (PDGF), epidermale groeifactor (EGF), transformerende groeifactor-α (TGF-a), vasculaire endotheliale groeifactor (VEGF), bloedplaatjestromboplastine, trombospondine, stollingsfactoren, calcium, serotonine, histamine en hydrolytische enzymen omvat.
3. Samenstelling volgens conclusie 1 of 2, waarbij het SC CM het medium is, dat geoogst wordt na het kweken van mesenchymale stamcellen.
4. Samenstelling volgens een van de conclusies 1 tot 3, waarbij het SC CM hepatocytgroeifactor, transformerende groeifactor ß (TGF-ß), anti-apoptotische factoren, keratinocytgroeifactor, hersenen-afgeleide neurotrofe factor (BDNF), Flt-3-ligand, granulocytkolonie-stimulerende factor (G-CSF), granulocyt/macrofaagkolonie-stimulerende factor (GM-CSF), macrofaagkolonie-stimulerende factor (M-CSF), interleukine-6 (IL-6), interleukine-7 (IL-7), interleukine-8 (IL-8), interleukine-11 (IL-11), interleukine leukine-12 (IL-12), leukemie-remmende factor (LIF) en tumornecrosefactor-alfa (TNF-α) omvat.
5. Samenstelling volgens een van de conclusies 1 tot 4, waarbij de samenstelling verder DMSO omvat.
6. Samenstelling volgens een van de conclusies 1 tot 5, waarbij de samenstelling verder een geleermiddel omvat.
7. Samenstelling volgens een van de conclusies 1 tot 6, waarbij het PRP en het SC CM in een verhouding van ongeveer 3:1 tot ongeveer 1:3 in de samenstelling zijn aanwezig.
8. Samenstelling volgens een van de conclusies 1 tot 7, waarbij de stamcellen uit beenmerg of vetweefsel geïsoleerd zijn.
9. Samenstelling volgens een van de conclusies 1 tot 8, waarbij de stamcellen mesenchymale stamcellen zijn.
10. Samenstelling volgens een van de conclusies 1 tot 9, waarbij het geconditioneerde medium een verwerkt geconditioneerd medium is.
11. Samenstelling volgens een van de conclusies 1 tot 10, voor geneeskundige toepassing.
12. Samenstelling volgens conclusie 11, voor toepassing bij de behandeling van weefselbeschadigingen bij een individu.
13. Samenstelling voor toepassing volgens conclusie 12, waarbij de weefselbeschadigingen huidverbrandingen, peesbeschadigingen, zweren en huidwonden omvatten, en waarbij de weefselbeschadigingen bij voorkeur huidwonden zijn.
14. Samenstelling voor toepassing volgens een van de conclusies 12 en 13, waarbij het individu een zoogdier is, bij voorkeur gekozen uit huisdieren, zoals honden, katten en konijnen, of boerderijdieren, zoals paarden, koeien, schapen en geiten.
15. Toepassing van een samenstelling volgens een van de conclusies 1 tot 10, voor het bevorderen van haargroei bij een zoogdierlijk individu.
16. Werkwijze voor het bereiden van een samenstelling volgens een van de conclusies 1 tot 10, welke ten minste het mengen van bloedplaatjes-verrijkt plasma (PRP) en stamcel-geconditioneerd medium (SC CM) omvat.