KR102078670B1 - 자소엽 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 안티폴루션용 조성물 - Google Patents

자소엽 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 안티폴루션용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 자소엽 추출물을 유효성분으로 함유하며, 다환 방향족 탄화수소, 질소산화물, 알데하이드류로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 오염물질에 대하여 피부 항오염 효과를 갖는 것을 특징으로 하는 자소엽 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 안티폴루션용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 자소엽 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 안티폴루션용 조성물은 피부 세포 보호 조성물 또는 피부 세포 사멸 억제, 방지용 조성물이다.

Description

자소엽 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 안티폴루션용 조성물 {A cosmetic composition for extracting Perilla leaves having antipollution effect and a method for producing the same}
본 발명은 피부 안티폴루션용 조성물에 관한 것으로, 더 자세하게는 자소엽 추출물을 유효성분으로 함유하며, 벤조피렌, 질산암모늄, 포름알데히드 중 어느 하나 이상의 오염물질에 대하여 피부 항오염 효과를 갖는 것을 특징으로 하는 자소엽 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 안티폴루션용 조성물에 관한 것이다.
현대사회로 접어들면서, 환경오염이 심해지고 생활반경 주위의 공해 물질 농도가 높아지면서 사회적 문제로 대두되고 있다. 이러한 공해물질은 체내로 들어와 누적되면서 각종 질병을 일으키는 등의 문제점이 많다.
상기 공해물질은 체내로의 침투뿐만 아니라 피부에 직접적으로 맞닿으면 피부에 악영향을 미치게 되는데, 피부염, 피부발진, 피부괴사 등의 악영향을 미치게 된다. 따라서, 자외선뿐만 아니라 공해물질로부터 피부를 보호할 수 있는 화장품에 대한 수요가 증가하고 있다.
상기 공해물질에 속하는 것으로 벤조피렌을 예로 들 수 있다. 상기 벤조피렌은 자동차 배기가스 또는 담배 연기 등 불완전 연소로 인해 생성되며, 에폭시드로의 대사전환과 DNA와의 반응을 통해 세포 손상을 일으키는 유독 물질이다. 최근, 아토피성 피부염을 유발한다는 소식이 접해지면서 피부에 대한 악영향이 드러나고 있으며, 세포 변이, 세포 손상 등의 문제로 피부 악화를 일으킬 수 있는 위험한 물질 중 하나이다.
또한, 상기 공해물질에 속하는 것으로 질소산화물이 있다. 상기 질소산화물은 질소와 산소로 이루어진 화합물로 일산화질소, 이산화질소, 일산화이질소, 삼산화이질소, 사산화이질소, 오산화이질소 등과 이들의 이온화물이 있다. 일반적으로 질소가스는 안정하여 그 구성을 이루는 원자가 둘로 쪼개지기 어려우나, 매우 높은 온도가 가해지면 그 결합이 깨질 수 있다. 흔히, 자동차의 엔진 내부는 고온이 형성되어 자동차의 배기가스는 다량의 질소산화물을 포함하게 된다.
상기 질소산화물은 암모늄 또는 그 염을 포함할 수 있다. 질소산화물의 다른 형태인 질산기는 물과 반응하여 질산을 형성하고 산성비의 원인이 되기도 한다. 상기 질산은 대기 중의 알칼리성 물질인 암모늄과 결합하여 질산암모늄을 생성하는데, 상기 질산암모늄은 대기중 입자상 물질로서 2차적 미세먼지이며 인체에 악영향을 미치게 된다. 상기 질산암모늄이 인체에 닿으면, 눈, 코 점막 그리고 피부에 염증을 일으키게 된다.
또한, 상기 공해물질에 속하는 것으로 포름알데히드가 있다. 상기 포름알데히드는 실온에서 자극성이 강한 냄새를 띤 무색의 기체로 메탄알(methanal)이라고도 한다. 상기 포름알데히드는 탄소가 포함된 물질이 불완전 연소할 때에 쉽게 만들어지며 공기 중에서는 메테인과 같은 탄화수소에 햇빛과 산소가 가해지면서 합성된다. 상기 포름알데히드는 피부 알러지원이며, 피부에 접촉 시 피부 발진, 피부, 피부염 등의 문제를 일으킬 수 있다.
상기 기재한 오염물질들은 피부에 대하여 고농도의 접촉 시 직접적인 염증 또는 괴사의 원인이 되며, 대기 중의 잔량일지라도 지속적으로 접촉하면 피부에 지속적인 스트레스를 주므로 피부노화의 원인으로 작용한다.
상기와 같은 오염물질이 피부에 미치는 영향에 비하여, 대중들의 위험 인식은 아직 낮은 편이나, 최근 미세먼지 등의 이슈가 떠오르면서 점차 그 위험성이 주목되고 있으며 점차적으로 오염물질의 위험성을 인식하는 사람들의 수가 늘어나고 있다.
이러한 오염물질로부터 피부를 보호할 수 있는 조성물들이 연구되고 있으나, 아직까지는 그 다양성이 부족하고 효과가 뚜렷하지 않으며, 제조하기 어렵거나 구하기 어려운 물질로 제조되는 경우가 많아, 주변에서 쉽게 구할 수 있는 신규한 조성물의 개발이 요구되고 있다.
한국 등록특허 10-1825713호(2018.02.06. 공고). "아레카야자 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물"
일 측면에서, 본 발명은 자소엽의 신규한 용도를 제공하는데 목적이 있다.
일 측면에서, 본 발명은 자연물인 자소엽 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물을 이용하여, 피부 자극을 최소화하면서 효과적으로 오염물질로부터 피부를 보호하는데 목적이 있다.
일 측면에서, 본 발명의 목적은 화학물질로 인한 피부 각질 세포의 사멸을 최소화 하는데 목적이 있다.
상기와 같은 문제점을 해결하기 위해서, 본 발명은 자소엽 추출물을 유효성분으로 함유하며, 다환 방향족 탄화수소, 질소산화물, 알데하이드류로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 오염물질에 대하여 피부 항오염 효과를 갖는 것을 특징으로 하는 자소엽 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 안티폴루션용 조성물을 제공한다.
또한, 상기 다환 방향족 탄화수소는 벤조피렌을 포함하고, 질소산화물은 질산암모늄을 포함하며, 알데하이드류는 포름알데히드를 포함하는 것을 특징으로 하는 자소엽 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 안티폴루션용 조성물을 제공한다.
또한, 상기 조성물은 피부 세포 보호 조성물 또는 피부 세포 사멸 억제, 방지용 조성물인 것을 특징으로 하는 자소엽 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 안티폴루션용 조성물을 제공한다.
또한, 상기 자소엽 추출물은 물, 유기용매 또는 이들의 혼합물로부터 추출되는 것을 특징으로 하는 자소엽 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 안티폴루션용 조성물을 제공한다.
또한, 상기 조성물은 자소엽 추출물을 유효성분으로 함유하며, 다환 방향족 탄화수소, 질소산화물, 알데하이드류로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 오염물질에 대하여 피부 항오염 효과를 갖는 화장료 조성물인 것을 특징으로 하는 자소엽 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 안티폴루션용 조성물을 제공한다.
본 발명의 자소엽 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물은, 피부 세포에 대해 독성이 있는 화학물질로부터 피부를 보호하는 항오염 효능을 갖는다. 구체적으로, 독성 화학물질이 처리된 피부에 상기조성물을 처리하면, 피부 세포의 사멸을 최소화할 수 있고, 독성 화학물질로 인해 저하된 피부 상태를 개선할 수 있다.
도 1은 자소엽 추출물의 세포 독성에 대한 농도별 그래프.
도 2는 자소엽 추출물의 벤조피렌에 대한 안티폴루션 효과를 나타낸 그래프.
도 2는 자소엽 추출물의 질산암모늄에 대한 안티폴루션 효과를 나타낸 그래프.
도 2는 자소엽 추출물의 포름알데히드에 대한 안티폴루션 효과를 나타낸 그래프.
이하의 본 발명에 관한 상세한 설명들은 본 발명이 실시될 수 있는 실시 예이고 해당 실시 예의 예시로써 도시된 첨부 도면을 참조한다. 이들 실시 예는 당 업자가 본 발명의 실시에 충분하도록 상세히 설명된다. 본 발명의 다양한 실시 예는 서로 다르지만 상호 배타적일 필요는 없음이 이해되어야 한다. 예를 들어, 여기에 기재되어 있는 특정 형상, 구조 및 특성은 일 실시 예에 관련하여 본 발명의 사상 및 범위를 벗어나지 않으면서 다른 실시 예로 구현될 수 있다. 또한, 각각의 기재된 실시 예 내의 개별 구성요소의 위치 또는 배치는 본 발명의 사상 및 범위를 벗어나지 않으면서 변경될 수 있음이 이해되어야 한다.
따라서, 후술되는 상세한 설명은 한정적인 의미로서 취하려는 것이 아니며, 본 발명의 범위는 적절하게 설명된다면 그 청구항들이 주장하는 것과 균등한 모든 범위와 더불어 첨부된 청구항에 의해서만 한정된다. 도면에서 유사한 참조부호는 여러 측면에 걸쳐서 동일하거나 유사한 기능을 지칭한다.
본 발명에서 사용되는 용어는 본 발명에서의 기능을 고려하면서 가능한 현재 널리 사용되는 일반적인 용어들을 선택하였으나, 이는 당 분야에 종사하는 기술자의 의도 또는 판례, 새로운 기술의 출현 등에 따라 달라질 수 있다. 또한, 특정한 경우는 출원인이 임의로 선정한 용어도 있으며, 이 경우 해당되는 발명의 설명 부분에서 상세히 그 의미를 기재할 것이다. 따라서 본 발명에서 사용되는 용어는 단순한 용어의 명칭이 아닌, 그 용어가 가지는 의미와 본 발명의 전반에 걸친 내용을 토대로 정의되어야 한다.
본 발명에서 어떤 부분이 어떤 구성요소를 “포함”한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한, 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성요소를 더 포함할 수 있음을 의미한다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 자소엽 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 항오염 조성물이다.
또한, 본 발명은 자소엽 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 세포 보호용 조성물이다. 또한, 본 발명은 자소엽 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 세포 사멸 억제 또는 방지용 조성물이다.
즉, 본 발명의 조성물은 오염물질로부터 피부를 보호하는 역할을 수행할 수 있다.
다시 말해, 본 발명의 조성물은 자소엽 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 안티폴루션용 조성물이다.
본 명세서에서 "피부"라 함은, 동물의 체표를 덮는 조직을 의미하는 것으로서, 얼굴 또는 바디 등의 체표를 덮는 조직뿐만 아니라, 두피를 포함하는 광범위한 개념이다.
본 명세서에서 용어 "항오염(anti-pollution)"은, 피부에 독성이 있는 물질로 인한 피부 상태의 저하를 방지하거나 개선하는 것을 의미할 수 있다.
또한, 본 명세서에서 용어 "피부 세포 보호"는, 피부 세포의 괴사 또는 사멸을 최소화하거나, 세포 증식 저해를 개선하는 것을 의미할 수 있다.
본 명세서에서 "추출물"은 추출 방법, 추출 용매, 추출된 성분 또는 추출물의 형태를 불문하고, 천연물의 성분을 뽑아냄으로써 얻어진 물질을 모두 포함하는 것이며, 또한, 천연물의 성분을 뽑아내어 얻어진 물질을 추출 후 다른 방법으로 가공 또는 처리하여 얻어질 수 있는 물질을 모두 포함하는 광범위한 개념이다.
본 명세서에서 "자소엽 추출물"은 추출 방법, 추출 용매, 추출된 성분 또는 추출물의 형태를 불문하고, 자소엽의 성분을 뽑아냄으로써 얻어진 물질을 모두 포함하는 것이며 그 성분을 뽑아내는 과정에서 열, 산(acid), 염기(base), 효소 등으로 처리하는 공정을 포함하는 추출 방법을 통해 얻어진 물질을 포함하며, 또한, 자소엽의 성분을 뽑아내어 얻어진 물질을 추출 후 다른 방법으로 가공 또는 처리하여 얻어질 수 있는 물질을 모두 포함하는 광범위한 개념이다.
본 발명에서, 상기 자소엽(紫蘇葉)은 흔히 들깨의 잎을 말한다. 차즈기 (Perilla frutescens Britton var. acuta Kudo) 또는 주름소엽(Perilla frutescens Britton var. crispa Decaisne(꿀풀과 Labiatae))의 잎 및 끝가지이다. 잎 및 끝가지를 자소엽이라 하고 줄기를 자소경이라 한다.
본 발명의 자소엽 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 안티폴루션용 조성물은 오염물질에 의한 피부 오염, 피부 세포 사멸 또는 피부 세포 증식 저해, 또는 피부상태 저하를 개선하는 것일 수 있다.
본 발명에서 오염물질은 다환 방향족 탄화수소, 알데하이드류 및 질소산화물류를 포함하는 것일 수 있다.
구체적으로 상기 다환 방향족 탄화수소는 벤조피렌을 포함할 수 있고, 상기 알데하이드류는 포름알데하이드를 포함할 수 있다. 또한, 상기 질소산화물류는, NOx의 화학식으로 표현되는 질소산화물을 포함할 수 있고, 예컨대, NO, NO2, N2O, N4O, N2O3, N2O4, N2O5, N4O6 또는 이들의 이온화물을 포함할 수 있다. 또한, 상기 질소산화물류는, 암모늄 또는 그 염을 포함할 수 있고, 예컨대, 상기 암모늄의 그 염은 암모늄의 질산염인, 질산암모늄을 포함할 수 있다.
상기 벤조피렌은 자동차 배기가스 또는 담배 연기 등 불완전 연소로 인해 생성되며, 에폭시드로의 대사전환과 DNA와의 반응을 통해 세포 손상을 일으키는 유독 물질이다. 최근, 아토피성 피부염을 유발한다는 소식이 접해지면서 피부에 대한 악영향이 드러나고 있으며, 세포 변이, 세포 손상 등의 문제로 피부 악화를 일으킬 수 있는 위험한 물질 중 하나이다.
상기 질소산화물은 질소와 산소로 이루어진 화합물로 일산화질소, 이산화질소, 일산화이질소, 삼산화이질소, 사산화이질소, 오산화이질소 등과 이들의 이온화물이 있다. 일반적으로 질소가스는 안정하여 그 구성을 이루는 원자가 둘로 쪼개지기 어려우나, 매우 높은 온도가 가해지면 그 결합이 깨질 수 있다. 흔히, 자동차의 엔진 내부는 고온이 형성되어 자동차의 배기가스는 다량의 질소산화물을 포함하게 된다.
상기 질소산화물은 암모늄 또는 그 염을 포함할 수 있다. 질소산화물의 다른 형태인 질산기는 물과 반응하여 질산을 형성하고 산성비의 원인이 되기도 한다. 상기 질산은 대기 중의 알칼리성 물질인 암모늄과 결합하여 질산암모늄을 생성하는데, 상기 질산암모늄은 대기중 입자상 물질로서 2차적 미세먼지이며 인체에 악영향을 미치게 된다. 상기 질산암모늄이 인체에 닿으면, 눈, 코 점막 그리고 피부에 염증을 일으키게 된다.
상기 포름알데히드는 실온에서 자극성이 강한 냄새를 띤 무색의 기체로 메탄알(methanal)이라고도 한다. 상기 포름알데히드는 탄소가 포함된 물질이 불완전 연소할 때에 쉽게 만들어지며 공기 중에서는 메테인과 같은 탄화수소에 햇빛과 산소가 가해지면서 합성된다. 상기 포름알데히드는 피부 알러지원이며, 피부에 접촉 시 피부 발진, 피부 괴사, 피부염 등의 문제를 일으킬 수 있다.
본 발명의 조성물은 상기와 같은 오염물질로부터 피부를 보호하기 위해 안출된 것으로, 상기 조성물은, 전체 조성물 대비 자소엽 추출물을 6.25 ~ 25㎍/mL의 농도로 포함할 수 있다. 가장 바람직하게는 25㎍/mL이다.
상기 자소엽 추출물이 25㎍/mL를 초과시에는 세포 독성을 나타낼 수도 있으며, 6.25㎍/mL 미만일 경우에는 함량이 지나치게 낮아 본 발명에 기재된 효과들을 기대하기 어렵다는 문제점이 있다.
본 발명의 일 실시예에서, 상기 자소엽 추출물은 자소엽을 세척하고 건조하는 단계, 건조한 자소엽을 용매 추출하는 단계, 용매 추출액을 여과하는 단계, 여과액을 농축기를 통해 용매를 휘발시키는 단계, 동결건조하는 단계를 거쳐 수득하는 것일 수 있다.
상기 자소엽을 세척하고 건조하는 단계, 건조한 자소엽을 용매 추출하는 단계, 용매 추출액을 여과하는 단계는 총 1 ~ 5회 반복 수행되는 것일 수 있다.
상기 단계에서의 용매는 물, 유기 용매, 물과 유기 용매의 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상일 수 있다. 상기 물은 증류수 또는 정제수를 포함하며, 상기 유기용매는 탄소수 1 내지 6의 저급알코올을 예로 들 수 있는 에탄올, 아세톤, 에테르, 에틸아세테이트, 디에틸에테르, 에틸메킬케톤 및 클로로폼으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상을 포함한, 이에 제한되는 것은 아니다.
다시 말해, 본 발명의 자소엽 추출물은 물, 유기용매 또는 이들의 혼합물로 부터 추출되는 것일 수 있다.
상기 자소엽 추출물은 자소엽의 탄소수 1 내지 6의 알코올 추출물을 포함할 수 있고, 구체적으로 상기 알코올은 메탄올 또는 에탄올일 수 있으며, 바람직하게는 메탄올일 수 있다.
본 발명에서 상기 자소엽 추출물은 물, 탄소수 1 내지 6의 알코올, 및 이들이 조합으로 구성된 그룹에서 선택된 용매의 조추출물일 수 있다. 상기 탄소수 1 내지 6의 알코올은 구체적으로 메탄올일 수 있다. 자소엽을 용매로 추출 시, 자소엽의 약 5 내지 15 배 정도에 해당하는 용매를 가하여 추출하는 것이 바람직하며, 구체적으로 약 10 배의 용매를 가하여 추출하는 것이 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 추출은 가열 추출, 냉침추출, 환류냉각 추출, 또는 초음파 추출 등이 이용될 수 있으며, 당업자에게 자명한 추출법이라면 제한이 없다.
상기 추출은 실온에서 수행할 수도 있으나, 보다 효율적인 추출을 위해서는 가온 조건 하에서 수행할 수 있으며, 바람직하게는 약 40 내지 100, 더욱 바람직하게는 약 80의 온도에서 추출할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 추출시간은 바람직하게는 약 2 내지 4시간, 더욱 바람직하게는 약 3 시간 동안 수행할 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니며, 추출 용매 및 추출 온도 등의 조건에 따라 달라질 수 있다. 상기 추출은 활성성분을 보다 다량 수득하기 위해 1 회 이상 여러 번 추출할 수 있으며, 바람직하게는 1 내지 5회, 더욱 바람직하게는 3회 연속 추출하여 합한 추출액을 이용할 수 있다.
본 발명에서 자소엽 추출물은 상기와 같이 자소엽의 조추출물을 포함할 수 있고, 상기 조추출물을 극성이 낮은 유기 용매로 더욱 추출하여 얻어진 유기 용매의 가용성 분획물로서 포함할 수도 있다. 상기 유기 용매로는 헥산, 메틸렌클로라이드, 에틸 아세테이트, n-부탄올 등이 이용될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기의 방법으로 추출한 추출물 또는 그 추출물의 가용성 분획물은 그대로 사용할 수도 있으나, 여과 후 농축하여 엑기스 형태로 사용할 수 있으며, 농축 후 동결 건조하여 동결건조물의 형태로서 사용할 수 있다.
일 측면에서, 상기 조성물은 화장료 조성물일 수 있다.
상기 화장료 조성물은 피부학 적으로 허용 가능한 부형제와 함께 기초 화장품 조성물(화장수, 크림, 에센스, 클렌징 폼 및 클렌징 워터와 같은 세안제, 팩, 바디오일), 색조 화장품 조성물(파운데이션, 립스틱, 마스카라, 메이크업 베이스), 두발 또는 두피 제품 조성물(샴푸, 린스, 헤어컨디셔너, 헤어젤) 및 비누 등의 형태로 제조될 수 있다.
상기 부형제로는 이에 한정되지는 않으나 예를 들어, 피부연화제, 피부 침투 증강제, 착색제, 방향제, 유화제, 농화제 및 용매를 포함할 수 있다. 또한, 향료, 색소, 살균제, 산화방지제, 방부제 및 보습제 등을 추가로 포함할 수 있으며, 물성개선을 목적으로 점증제, 무기염류, 합성 고분자 물질 등을 포함할 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 화장료 조성물로 세안제 및 비누를 제조하는 경우에는 통상의 세안제 및 비누 베이스에 본 발명의 바이아릴아미드 유도체를 첨가하여 용이하게 제조할 수 있다. 크림을 제조하는 경우에는 일반적인 수중유적형 (O/W)의 크림베이스에 본 발명의 바이아릴아미드 유도체를 첨가하여 제조할 수 있다. 여기에 향료, 킬레이트제, 색소, 산화방지제, 방부제 등과 물성개선을 목적으로 한 단백질, 미네랄, 비타민 등 합성 또는 천연소재를 추가로 첨가할 수 있다.
일 실시예에서, 상기 피부 세포는 피부 각질 세포를 포함할 수 있다.
이하, 실시예 및 시험예를 들어 본 발명의 구성 및 효과를 보다 구체적으로 설명한다. 그러나 이들은 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐 본 발명의 범주 및 범위가 하기 예에 의해 제한되는 것은 아니다.
본 실험예에서는 다환 방향족 탄화수소의 일 예로 벤조피렌에 대한 항오염 활성을 측정하였고, 질소산화물의 일 예로 질산암모늄에 대한 항오염 활성을 측정하였으며, 알데히드류의 일 예로 포름알데히드에 대한 함오염 활성을 측정하였다.
본 실험예에서는 상기 기술한 오염물질인 다환 방향족 탄화수소, 질소산화물, 알데히드류의 일 예로 벤조피렌, 질산암모늄, 포름알데히드를 사용하여 실험을 진행하였을 뿐, 본 발명의 권리 범위가 이에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 자소엽 추출물의 제조
자소엽 건중량 50g에 1000ml의 메탄올을 넣고, 상온에서 3일 동안 침지 시킨 후, 추출액을 거름종이로 여과하였다.
이 과정을 3회 반복하여 여과된 여과액을 농축기를 통하여 용매를 휘발시킨 뒤 동결 건조하여 자소엽의 메탄올 추출물을 제조하였다.
실험예 1. 세포 독성 시험( MTT Assay )
실시예 1의 자소엽 추출물에 대해 세포독성 실험을 실시하였다.
사람 피부 각질 세포(HaCat)를 1×10⁴cells/mL 농도로 96-well plate에 200 ㎕씩 분주하여 37℃, CO₂인큐베이터에서 24시간 동안 배양하였다. 이때, 배지는 소형청 10%와 항생제가 1% 포함된 IMDM 배지를 이용하였다. 배양 후 소혈청과 항생제가 배제된 IMDM 배지로 교체한 다음, 자소엽 추출물을 농도별로 처리하여 동일 배양조건에서 21시간 추가 배양하였다. 그 후 5mg/mL 농도의 MTT solution을 넣고 3시간 배양한 다음 배지를 제거하고 dimethyl sulfoxide(DMSO)를 150㎕씩 각 well에 넣어주고 10분간 shaking 한 후 570nm(reference 655nm) 조건으로 흡광도를 측정하였다. 실험은 6회씩 나누어 3번에 걸쳐 진행되었으며, 세포증식율에 대한 평균값과 표준 편차를 통해 세포에 대한 독성을 추론했다.
1st - MTT assay(5mg/ml MTT solution 20㎕ loading, 1x104 cells / ml ) : Bo Yun (2018.10.24)

single
blank		 자소엽(㎍/mL)
100 75 50 25 10 5 2.5 1 0.1
1st 0.207 0.114 0.118 0.160 0.264 0.264 0.249 0.237 0.228 0.223
2nd 0.221 0.123 0.108 0.168 0.268 0.254 0.242 0.242 0.230 0.215
3rd 0.204 0.119 0.114 0.144 0.249 0.246 0.229 0.219 0.216 0.203
4th 0.198 0.112 0.100 0.142 0.261 0.234 0.225 0.220 0.224 0.193
5th 0.206 0.121 0.100 0.143 0.258 0.253 0.242 0.238 0.214 0.193
6th 0.224 0.122 0.114 0.156 0.259 0.256 0.236 0.234 0.224 0.196
평균 0.21 0.1185 0.109 0.1521667 0.2598333 0.2511667 0.2371667 0.2316667 0.2226667 0.2038333
Proliferation(%) 100.0 56.4 51.9 72.5 123.7 119.6 112.9 110.3 106.0 97.1
2nd - MTT assay(5mg/ml MTT solution 20㎕ loading, 1x104 cells / ml ) : Bo Yun (2018.10.24)
single Blank 자소엽(㎍/mL)
100 75 50 25 10 5 2.5 1 0.1
1st 0.231 0.125 0.121 0.170 0.277 0.275 0.240 0.251 0.234 0.216
2nd 0.235 0.121 0.112 0.161 0.270 0.271 0.245 0.242 0.234 0.218
3rd 0.222 0.119 0.109 0.164 0.277 0.257 0.237 0.244 0.220 0.213
4th 0.227 0.117 0.113 0.172 0.276 0.250 0.254 0.238 0.229 0.211
5th 0.228 0.119 0.114 0.193 0.278 0.261 0.236 0.240 0.221 0.228
6th 0.241 0.126 0.127 0.183 0.280 0.280 0.267 0.252 0.232 0.205
평균 0.2306667 0.1211667 0.116 0.1738333 0.2763333 0.2656667 0.2465 0.2445 0.2283333 0.2151667
Proliferation (%) 100.0 52.5 50.3 75.4 119.8 115.2 106.9 106.0 99.0 93.3
3rd - MTT assay(5mg/ml MTT solution 20㎕ loading, 1x104 cells / ml ) : Bo Yun (2018.10.24)
single Blank 자소엽(㎍/mL)
100 75 50 25 10 5 2.5 1 0.1
1st 0.231 0.118 0.120 0.198 0.301 0.284 0.274 0.262 0.240 0.220
2nd 0.219 0.113 0.110 0.114 0.316 0.285 0.272 0.269 0.230 0.226
3rd 0.211 0.110 0.105 0.227 0.246 0.284 0.278 0.276 0.247 0.218
4th 0.214 0.112 0.107 0.221 0.352 0.300 0.297 0.287 0.233 0.212
5th 0.214 0.109 0.111 0.227 0.245 0.280 0.259 0.273 0.248 0.216
6th 0.195 0.113 0.118 0.130 0.313 0.286 0.265 0.266 0.240 0.220
평균 0.214 0.1125 0.1118333 0.1861667 0.2955 0.2865 0.2741667 0.2721667 0.2396667 0.2186667
Proliferation (%) 100.0 52.6 52.3 87.0 138.1 133.9 128.1 127.2 112.0 102.2
총 평균값 및 표준편차
single Control 자소엽 추출물(㎍/mL)
0 100 75 50 25 10 5 2.5 1 0.1
1st 100.0 56.4 51.9 72.5 123.7 119.6 112.9 110.3 106.0 97.1
2nd 100.0 52.5 50.3 75.4 119.8 115.2 106.9 106.0 99.0 93.3
3rd 100.0 52.6 52.3 87.0 138.1 133.9 128.1 127.2 112.0 102.2
평균 100.0 53.8 51.5 78.3 127.2 122.9 116.0 114.5 105.7 97.5
표준편차 0.0 2.2 1.0 7.7 9.6 9.8 10.9 11.2 6.5 4.5
표 1 ~ 표 3에 나타낸 바와 같이 실험을 반복 진행하였고, 세포 증식율에 대한 평균값 및 표준편차를 표 4 및 도 1에 나타내었다. 그 결과 자소엽 추출물은 25㎍/mL 농도 이하에서 세포 독성이 없음을 확인할 수 있었다.
실험예 2. 벤조피렌에 대한 항오염 활성 측정
실시예 1의 자소엽 추출물에 대해 벤조피렌에 대한 항오염 활성을 측정하였다.
일반적으로 공해물질과 직접적으로 맞닿게 되는 피부의 각질세포를 사용하여 공해물질에 의한 세포 손상정도를 측정하고, 실시예 1의 자소엽 추출물을 농도별로 처리하고, 피부 세포 손상 억제효과를 확인하였다. 사람 각질세포 HaCaT를 1×10⁴cells/ml 농도로 96-well plate에 분주하고 24시간 배양시킨 후, 벤조피렌(2.5 ㎍/mL)와 실시예 1의 자소엽 추출물을 처리하고, 21시간 동안 추가로 배양하였다. 그 후 5mg/mL 농도의 MTT solution을 넣고 3시간 배양한 다음 배지를 제거하고 dimethyl sulfoxide(DMSO)를 150㎕씩 각 well에 넣어주고 10분간 shaking 하고 570nm(reference 655nm) 조건으로 흡광도를 측정하였다. 결과를 표 5 및 도 2에 나타내었다.
Sample Controls (㎍/mL)
Blank Negative 자소엽추출물
0 0 25 12.5 6.25
Benzo[a]pyrene
(2.5 μg/mL)		 - + + + +
1st 100 68.36735 100.4535 89.3424 78.34467
2nd 100 66.98565 90.90909 89.95215 80.02392
3rd 100 51.15546 75.78782 67.33193 60.81933
Mean 100 62.16949 89.05014 82.20883 73.06264
SD 0 9.563409 12.43748 12.88738 10.63621
생존율개선(%) 26.9 20.0 10.9
생존율 개선은 샘플(농도별) 처리군과 샘플 미처리군(Negative)의 차이값으로 계산되었다.
자소엽 추출물은 농도가 6.25 ~ 25μg/mL 일 때, 벤조피렌에 대해 10.9 ~ 26.9%의 안티폴루션 효과를 가짐을 알 수 있다.
실험예 3. 질산암모늄에 대한 항오염 활성 측정
실시예 1의 자소엽 추출물에 대해 질산암모늄에 대한 항오염 활성을 측정하였다.
일반적으로 공해물질과 직접적으로 맞닿게 되는 피부의 각질세포를 사용하여 공해물질에 의한 세포 손상정도를 측정하고, 실시예 1의 자소엽 추출물을 농도별로 처리하고, 피부 세포 손상 억제효과를 확인하였다. 사람 각질세포 HaCaT를 1×10⁴cells/ml 농도로 96-well plate에 분주하고 24시간 배양시킨 후, 질산암모늄(500 ㎍/mL)와 실시예 1의 자소엽 추출물을 처리하고, 21시간 동안 추가로 배양하였다. 그 후 5mg/mL 농도의 MTT solution을 넣고 3시간 배양한 다음 배지를 제거하고 dimethyl sulfoxide(DMSO)를 150㎕씩 각 well에 넣어주고 10분간 shaking 하고 570nm(reference 655nm) 조건으로 흡광도를 측정하였다. 결과를 표 6 및 도 3에 나타내
Sample Controls (㎍/mL)
Blank Negative 자소엽추출물
0 0 25 12.5 6.25
Ammonium nitrate
(500 μg/mL)		 - + + + +
1st 100 70.77088 84.04711 82.54818 79.55032
2nd 100 70.57471 82.29885 83.44828 79.77011
3rd 100 58.86364 79.03409 80.79545 71.93182
Mean 100 66.73641 81.79335 82.26397 77.08408
SD 0 6.818727 2.544452 1.349054 4.463347
생존율개선(%) 15.1 15.5 10.3
생존율 개선은 샘플(농도별) 처리군과 샘플 미처리군(Negative)의 차이값으로 계산되었다.
자소엽 추출물은 농도가 6.25 ~ 25μg/mL 일 때, 질산암모늄에 대해 10.3 ~ 15.1%의 안티폴루션 효과를 가짐을 알 수 있다.
실험예 4. 포름알데히드에 대한 항오염 활성 측정
실시예 1의 자소엽 추출물에 대해 포름알데히드에 대한 항오염 활성을 측정하였다.
일반적으로 공해물질과 직접적으로 맞닿게 되는 피부의 각질세포를 사용하여 공해물질에 의한 세포 손상정도를 측정하고, 실시예 1의 자소엽 추출물을 농도별로 처리하고, 피부 세포 손상 억제효과를 확인하였다. 사람 각질세포 HaCaT를 1×10⁴cells/ml 농도로 96-well plate에 분주하고 24시간 배양시킨 후, 포름알데히드(1.5 ㎍/mL)와 실시예 1의 자소엽 추출물을 처리하고, 21시간 동안 추가로 배양하였다. 그 후 5mg/mL 농도의 MTT solution을 넣고 3시간 배양한 다음 배지를 제거하고 dimethyl sulfoxide(DMSO)를 150㎕씩 각 well에 넣어주고 10분간 shaking 하고 570nm(reference 655nm) 조건으로 흡광도를 측정하였다. 결과를 표 7 및 도 4에 나타내었다.
Sample Controls (㎍/mL)
Blank Negative 자소엽추출물
0 0 25 12.5 6.25
Formaldehyde
(1.5 μg/mL)		 - + + + +
1st 100 79.18051 105.9801 98.22813 89.59025
2nd 100 80.75561 101.6529 98.81936 93.74262
3rd 100 68.57868 82.58883 85.02538 78.78173
Mean 100 76.1716 96.7406 94.02429 87.37153
SD 0 6.622654 12.4453 7.798889 7.723285
생존율개선(%) 20.6 17.9 11.2
생존율 개선은 샘플(농도별) 처리군과 샘플 미처리군(Negative)의 차이값으로 계산되었다.
자소엽 추출물은 농도가 6.25 ~ 25μg/mL 일 때, 포름알데하이드에 대해 11.2 ~ 20.6%의 안티폴루션 효과를 가짐을 알 수 있다.
결론.
실험예 1 내지 4를 통해 본 발명 자소엽 추출물의 특성에 대하여 실험한 결과, 본 발명의 자소엽 추출물은 세포독성이 없어 피부에 안정적이며, 벤조피렌, 질산암모늄, 포름알데히드에 대하여 항오염 효과를 가짐을 확인할 수 있었다.
본 발명의 자소엽 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 안티폴루션용 조성물은 자소엽 추출물을 25㎍/mL 농도 이하로 포함시 피부에 대하여 세포독성을 나타내지 않는다.
또한, 본 발명의 자소엽 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 안티폴루션용 조성물은 자소엽 추출물의 농도가 6.25 ~ 25μg/mL 일 때, 벤조피렌에 대해 10.9 ~ 26.9%의 안티폴루션 효과를 가진다.
또한, 본 발명의 자소엽 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 안티폴루션용 조성물은 자소엽 추출물의 농도가 6.25 ~ 25μg/mL 일 때, 질산암모늄에 대해 10.3 ~ 15.1%의 안티폴루션 효과를 가진다.
또한, 본 발명의 자소엽 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 안티폴루션용 조성물은 자소엽 추출물의 농도가 6.25 ~ 25μg/mL 일 때, 포름알데하이드에 대해 11.2 ~ 20.6%의 안티폴루션 효과를 가진다.
상기한 결과로부터, 본 발명의 자소엽 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 안티폴루션용 조성물은 동일 내지 유사한 군에 속하는 다환 방향족 탄화수소, 질소산화물, 알데하이드류에 대한 안티폴루션 효과를 갖고 있음을 유추할 수 있다.
즉, 본 발명의 자소엽 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 안티폴루션용 조성물은 피부 독성에 대하여 안정적이고, 다환 방향족 탄화수소, 질소산화물, 알데하이드류에 대하여 안티폴루션 효과를 가진다.
이에 따라, 본 발명인은 자소엽 추출물을 유효성분으로 함유하며, 다환 방향족 탄화수소, 질소산화물, 알데하이드류로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 오염물질에 대하여 피부를 보호할 수 있도록 항오염 효과를 갖는 것을 특징으로 하는 자소엽 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 안티폴루션용 조성물을 발명하였음을 명시한다.
또한, 상기 다환 방향족 탄화수소는 세포 변이, 세포 손상을 야기하는 벤조피렌을 포함하고, 상기 질소산화물은 눈과 코의 점막, 피부에 염증을 야기하는 질산암모늄을 포함하며, 상기 알데하이드류는 피부 발진, 피부 괴사, 피부염의 문제를 야기하는 포름알데히드를 포함하는 것을 특징으로 하는 자소엽 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 안티폴루션용 조성물을 발명하였음을 명시한다.
또한, 상기 조성물은 피부 세포에 대한 보호용 조성물이거나 피부 세포의 사멸을 억제하고 방지하기 위한 조성물인 것을 특징으로 하는 자소엽 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 안티폴루션용 조성물을 발명하였음을 명시한다.
또한, 상기 자소엽 추출물은 6.25 ~ 25㎍/mL의 농도로 포함되되, 이는 피부에 대한 독성을 나타내지 않도록 25㎍/mL 이하로 포함되고, 다환 방향족 탄화수소, 질소산화물, 알데하이드류로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 오염물질에 대하여 피부 항오염 효과를 얻을 수 있도록 6.25㎍/mL 이상이 포함된 것을 특징으로 하는 자소엽 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 안티폴루션용 조성물을 발명하였음을 명시한다.
또한, 상기 조성물은 자소엽 추출물을 유효성분으로 함유하며, 다환 방향족 탄화수소, 질소산화물, 알데하이드류로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 오염물질에 대하여 피부 항오염 효과를 갖는 화장수, 크림, 에센스, 클렌징 폼, 세안제, 팩, 바디오일, 파운데이션, 립스틱, 마스카라, 메이크업 베이스, 샴푸, 린스, 헤어컨디셔너, 헤어젤 중 어느 하나 이상의 제품에 포함되는 화장료 조성물인 것을 특징으로 하는 자소엽 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 안티폴루션용 조성물을 발명하였음을 명시한다.
즉, 본 발명인은 피부에 안전하며, 오염물질에 대하여 안티폴루션 효과를 갖는 신규한 물질로서 자소엽 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 안티폴루션용 조성물을 발명하였음을 명시한다.
본 발명을 첨부된 도면과 함께 설명하였으나, 이는 본 발명의 요지를 포함하는 다양한 실시 형태 중의 하나의 실시 예에 불과하며, 당 업계에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 하는 데에 그 목적이 있는 것으로, 본 발명은 상기 설명된 실시예에만 국한되는 것이 아님은 명확하다. 따라서, 본 발명의 보호범위는 하기의 청구범위에 의해 해석되어야 하며, 본 발명의 요지를 벗어나지 않는 범위 내에서 변경, 치환, 대체 등에 의해 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 기술 사상은 본 발명의 권리에 포함될 것이다. 또한, 도면의 일부 구성은 구성을 보다 명확하게 설명하기 위한 것으로 실제보다 과장되거나 축소되어 제공되는 것임을 명확히 한다.

Claims (5)

  1. 자소엽 추출물을 유효성분으로 함유하며,
    다환 방향족 탄화수소, 질소산화물, 알데하이드류로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 오염물질에 대하여 피부 항오염 효과를 가짐으로써, 상기 오염물질에 의한 피부 오염, 피부 세포 사멸, 피부 세포 증식 저해, 또는 피부상태 저하 중 어느 하나 이상의 증상에 대하여 개선효과를 갖는 화장료 조성물인 것을 특징으로 하는 자소엽 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 안티폴루션용 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 다환 방향족 탄화수소는 벤조피렌을 포함하고, 상기 질소산화물은 질산암모늄을 포함하며, 상기 알데하이드류는 포름알데히드를 포함하는 것을 특징으로 하는 자소엽 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 안티폴루션용 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 피부 세포 보호 조성물 또는 피부 세포 사멸 억제, 방지용 조성물인 것을 특징으로 하는 자소엽 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 안티폴루션용 조성물.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 자소엽 추출물은 물, 유기용매 또는 이들의 혼합물로부터 추출되는 것을 특징으로 하는 자소엽 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 안티폴루션용 조성물.
  5. 삭제
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