KR101332214B1 - 연꽃, 쌀, 개똥쑥 복합발효추출물을 포함하는 피부 스트레스 완화용 화장료 조성물 - Google Patents

연꽃, 쌀, 개똥쑥 복합발효추출물을 포함하는 피부 스트레스 완화용 화장료 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 연꽃, 쌀, 개똥쑥 복합발효추출물을 포함하는 피부 스트레스 완화용 화장료조성물에관한 것으로서, 구체적으로는 연꽃, 쌀 및 개똥쑥의 발효 추출물을 제조하여 외부 자극으로부터 오는 피부 스트레스를 완화하고 진정시키는 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 복합발효추출물은 피부 수렴효과와 외부 스트레스에서 오는 세포 독성 완화, 염증 매개 인자 발현 억제에 효과적이어서 이를 유효성분으로 함유하는 화장료는 피부 진정 및 스트레스 완화에 우수한 효과를 나타낸다.

Description

연꽃, 쌀, 개똥쑥 복합발효추출물을 포함하는 피부 스트레스 완화용 화장료 조성물{Cosmetic composition for reducing skin stress comprising Nelumbo nucifera flower extract, rice extract and Artemisia annua Extract}
본 발명은 연꽃, 쌀, 개똥쑥 복합발효추출물을 포함하는 피부 스트레스 완화용 화장료조성물에관한 것으로서, 구체적으로는 연꽃, 쌀, 및 개똥쑥의 발효 추출물을 제조하여 외부 자극으로부터 오는 피부 스트레스를 완화하고 진정시키는 화장료 조성물을 제조하는 기술에 관한 것이다.
피부 스트레스를 쌓이게 하는 요인으로는 자외선, 유해환경, 과도한 화장품의 사용, 심리적 스트레스 등이 있다. 피부에 스트레스를 주는 요인 중 가장 큰 영향을 미치는 것으로 자외선을 들 수 있는데 환경오염으로 오존 농도가 낮아지면서 피부는 사계절 내내 자외선에 노출되어 있다. 이러한 자외선은 피부 건조, 피부암, 색소침착 등을 일으켜 피부 손상을 가져온다. 또한 매연, 산성비 등의 유해환경도 피부에 스트레스를 주는데 산성비는 눈, 피부, 두피 등에 자극을 주고 황사는 피부의 탄력과 수분을 빼앗아 피부에 자극이 없도록 관리를 철저히 해야 한다. 피부에 스트레스를 주는 다른 원인으로 과도한 화장품의 사용을 들 수 있는데 피부가 흡수할 수 있는 것 이상의 양을 바르거나 피부에 맞지 않는 제품을 계속 사용하거나, 혹은 클렌징을 제대로 하지 않는 것도 피부에 스트레스를 주는 원인이 된다. 이렇게 다양한 요인으로 인해 피부가 스트레스를 받게 되면 피부는 민감한 상태가 되어 피부 재생 능력이 저하되고 이로 인해 피부 탄력이 저하되어 피부색이 칙칙해진다. 또한 유해환경이나 심리적인 스트레스로 인해 피부 노화가 촉진되고 피부 트러블이 생겨 피부에 염증을 유발하게 된다.
이러한 피부 스트레스를 완화하기 위해 각종 천연물을 이용한 화장료의 개발이 이루어지고 있다. 대한민국 등록특허 제100949390호 "항산화 또는 항염 또는 자극완화 또는 보습 효과가 있는 비비추 추출물을 함유하는 화장료 조성물"에는 '항산화, 피부자극 완화, 항염, 외부스트레스 방어 및 보습 효과가 우수한 비비추의 추출물을 유효성분으로 함유함으로써 노화방지 및 피부개선 효과를 발휘'하는 화장료조성물이 개시되어 있다. 대한민국 공개특허 제2010-0000900호 "식물 복합 추출물을 함유하는 피부 보호용 화장료 조성물"에는 '국화, 천상초, 작약, 진피, 천궁, 당귀 및 지황으로부터 추출한 식물 복합 추출물을 함유하여 세포 자극 완화, 스트레스에 의한 MMP-1의 합성을 억제하고 피부 보습 효과를 가지는 화장료 조성물'이 개시되어 있다.
한편, 발효는 자연에서 얻은 친환경 가공 기술로 미생물이 자신이 가지고 있는 효소를 이용해 유기물을 분해시키는 과정으로 식품뿐 아니라 의약품과 한약, 화장품 영역까지 확대되고 있다. 발효되는 과정에서 미생물이 유기물의 분자 구조를 잘게 부수어 흡수력을 높이고 원래의 유기물보다 더 우수한 새로운 물질을 생성해 영양분을 풍부하게 한다. 원료가 발효되는 과정에서 발생하는 효모의 대사물질은 피부에 좋은 각종 아미노산, 유기산, 항산화 물질을 함유하고 있어 원료의 풍부한 영양소뿐 아니라 대사 물질까지 얻을 수 있다. 따라서 이러한 발효의 장점을 이용하여 스트레스 요인에 의한 피부 자극 및 염증을 감소 시키고 자극에 대한 완화 효능이 있는 물질이 개발되어야 한다.
본 발명자들은 피부스트레스를 완화하는 천연물 추출물에 관하여 연구하였으며, 연꽃, 쌀 및 개똥쑥 추출물에 발효공정을 더하는 경우 자외선 등의 외부자극에 의한 피부스트레스를 완화하고 피부를 진정시키는 효과가 뛰어나다는 것을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
그러므로 본 발명은 연꽃, 쌀 및 개똥쑥 복합발효추출물을 혼합하여 외부 자극으로부터 오는 피부 스트레스를 완화 하고 진정시키는 화장료조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한 본 발명은 피부 수렴효과와 외부 스트레스에서 오는 세포 독성 완화, 염증 매개 인자 발현 억제에 효과적인 연꽃, 쌀, 개똥쑥 복합발효추출물을 제조하는 방법을 제공하는 것을 다른 목적으로 한다.
상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명에 따르면, 연꽃, 쌀 및 개똥쑥 복합발효추출물을 함유하는 피부스트레스 완화용 화장료 조성물이 제공된다. 상기 복합발효추출물은 연꽃, 쌀 및 개똥쑥 추출물을 효모균, 유산균 또는 이의 혼합물로 발효시켜 얻어진다. 바람직하게는 상기 효모균은 사카로미세스 세레비시아(Saccharomyces cerevisiae) 이다. 이때 유효성분으로서의 상기 연꽃, 쌀 및 개똥쑥 복합발효추출물은 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.1~10 중량% 함유된다. 또한 바람직하게는 상기 연꽃, 쌀 및 개똥쑥 복합발효추출물은 연꽃, 쌀 및 개똥쑥을 각각 1~2 : 1~2 : 1~2의 중량비로 혼합하여 발효추출되는 것이며, 더욱 바람직하게는 2:1:2의 비율로 혼합하여 발효추출되는 것이다. 상기 연꽃, 쌀, 개똥쑥 추출물은 열수추출물이거나, 물, 탄소수 1~4의 저급 알코올, 에틸아세테이트, 글리세린, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 및 부틸렌글리콜로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 용매에 의한 용매추출물이다. 더욱 바람직하게는 70% 에탄올 용매에 의한 추출물이다.
상기 다른 목적을 달성하기 위하여 본 발명에 따르면, A)연꽃, 쌀 및 개똥쑥을 1~2 : 1~2 : 1~2의 중량비로 혼합하고 물, 탄소수 1~4의 저급 알코올, 에틸아세테이트, 글리세린, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 및 부틸렌글리콜로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 용매로 추출하여 혼합추출물을 제조하는 단계; (B)제조된 혼합추출물에 효모균, 유산균 또는 이의 혼합물을 접종하여 발효시키는 단계; 및 (C)멸균 후 여과하고 농축하는 단계를 포함하는 복합발효추출물의 제조방법이 제공된다.
바람직하게는 상기 (B)단계는 혼합추출물에 사카로미세스 세레비시아(Saccharomyces cerevisiae)를 접종 후 22~28℃에서 4~6일간 발효 시키는 것으로 이루어진다.
본 발명에 따른 연꽃, 쌀 및 개똥쑥 복합발효추출물은 피부 수렴효과와 외부 스트레스에서 오는 세포 독성 완화, 염증 매개 인자 발현 억제에 효과적이어서 이를 유효성분으로 함유하는 화장료는 피부 진정 및 스트레스 완화에 우수한 효과를 나타낸다.
이하 본 발명을 더욱 상세히 설명한다.
본 발명은 연꽃, 쌀, 개똥쑥의 복합발효추출물을 함유하여 외부 자극으로부터 오는 피부 스트레스를 완화하고 진정시키는 화장료 조성물에 관한 것이다.
연꽃은 온대기후에 해당하는 북반구의 넓은 지역에서 화석이 나타나는 화석식물로, 1400~1500년 전에 매몰되었던 씨앗이 싹을 틔우고 개화해 지금의 재배종과거의 동일한 꽃을 피운 일이 여러 차례 있었다. 진흙 속에서 자라면서도 고결한 모습을 잃지 않으며, 연못에서 흔히 자라지만 논밭에서 재배하기도 한다. 불교에서는 특히 연꽃을 신성시하여 부처님의 좌대를 연꽃 모양으로 수놓는데, 이를 '연화좌'라 한다. 꽃의 색이 깨끗하고 고와서인지 꽃말도 청결, 신성, 아름다움이다. 잎은 수렴제, 지혈제로 사용하거나 민간에서 오줌싸개 치료에 이용한다. 땅속줄기는 연근(蓮根)이라고 하며, 비타민과 미네랄의 함량이 비교적 높아 생채나 그 밖의 요리에 많이 이용한다. 뿌리줄기와 열매는 약용으로 하고 부인병에 쓴다. 연꽃은 여드름, 습진, 종기 등의 피부트러블 및 각종 독성물질에 대하여 중화작용을 하고 연꽃 오일에 포함된 캄페롤 성분은 항산화 작용을 하여 노화 피부의 원인인 유해 활성 산소를 감소시켜주어 피부세포를 탄력 있고 유연하게 해준다.
쌀은 밀과 함께 세계적으로 중요한 식량 자원으로 대부분의 아시아 사람들이 주식으로 삼고 있다. 이처럼 오랜 시간 쌀을 주식으로 삼고 있다는 것은 약리적으로 쌀에 큰 효능이 있음을 깨달았기 때문이고 이러한 쌀은 인류의 생명을 지탱하는 주요한 곡물이다. 쌀에 들어있는 단백질은 쌀의 비중으로 7 ~ 8% 이며 상대적으로는 매우 낮은 수치일수 있으나 단백질을 보다 효율적으로 섭취할 수 있다. 쌀의 단백질은 필수아미노산으로 분해되어 몸 속 지방을 배출시키는 작용을 한다. 쌀은 비타민 B1, B2, B3, B6 등 어느 곡물보다 비타민 B 군이 다량 함유되어 있다. 이러한 비타민은 성장을 촉진시키는 작용을 하기도 하고 피부를 윤택하게 하는 작용을 하기도 한다. 또한 항산화 작용으로 노화를 방지하고 피부가 거칠어지는 것을 막아준다. 따라서 쌀은 활성산소와 같은 피부 자극 요인으로부터 피부를 보호하는 역할을 하고 있다.
개똥쑥(Artemisia annua)은 국화과 쑥속에 속하는 한해살이풀이다. 쑥 속은 북반구에 약 400여종이 있으며 우리나라에는 약 38종이 알려져 있다. 개똥쑥을 손으로 뜯어서 비벼 보면 '개똥 비슷한 냄새가 난다'고 하여 '개똥쑥'이라고 부르게 되었고 북한에서는 잎이 자잘하게 갈라진다고 하여 '잔잎쑥' 이라고 부른다. 만지거나 건드리면 강한 냄새가 나며 줄기는 녹색이고 전체에 털이 거의 없고 가지가 많이 갈라진다. 개똥쑥의 효능으로는 항암작용, 항산화 작용, 항균 작용, 피부 진균 억제 작용 등 다양하다. 외에 개똥쑥 효능으로 말라리아치료, 면역력강화, 해열작용, 결핵 및 이질 예방 치료, 각종 염증치료 등에 효과적인 것으로 알려져 있다.
본 발명의 일 구체예에 따르면 상기 연꽃, 쌀, 개똥쑥 혼합추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 무수 또는 함수알코올, 에틸아세테이트, 글리세린, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 및 부틸렌글리콜 중에서 선택된 하나 이상의 용매로 추출하여 제조된다. 또는 연꽃, 쌀, 개똥쑥 각각을 상기 용매로 추출한 후 혼합한 혼합추출물 형태로 사용될 수 있다. 발명의 다른 일구체예에 따르면 연꽃, 쌀 및 개똥쑥 혼합 추출물은 연꽃, 쌀 및 개똥쑥을 세절하여 물, 에탄올, 메탄올, 부탄올, 프로판올, 부틸렌글리콜, 글리세린, 클로로포름, 에틸아세테이트, 디클로로메탄, 헥산, 아세톤, 아세토나이트릴, 페트로레움에테르 및 디에틸에테르로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 용매로 추출한 것이다.
이와 같이 제조된 연꽃, 쌀 및 개똥쑥 혼합추출물을 효모균, 유산균 또는 이의 혼합물로 발효시킨다. 바람직하게는 상기 효모균은 사카로미세스 세레비시아(Saccharomyces cerevisiae) 이다. 상기 미생물에 의한 발효에 의하여 피부 흡수가 촉진되며, 피부 진정 및 스트레스 완화효과가 더욱 증가된다.
본 발명의 화장료 조성물에서 상기 연꽃, 쌀 및 개똥쑥 혼합 발효 추출물은 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 0.001~10.0중량%의 양으로 화장료 조성물에 첨가될 수 있고, 바람직하게는 0.001∼5.0 중량%의 양으로 화장료 조성물에 첨가될 수 있다. 상기 연꽃, 쌀 및 개똥쑥은 각각 1~2 : 1~2 : 1~2의 중량비율로 혼합되어 추출되는 것이며, 더욱 바람직하게는 2:1:2의 비율로 혼합 추출되는 경우에 항산화 활성이 가장 우수하며, 피부 진정 효과가 우수하였다.
이와 같이 제조된 본 발명의 연꽃, 쌀 및 개똥쑥 혼합 발효 추출물은 그 상승작용에 의하여 각각의 성분과 비교하여 항산화활성이 우수하여(시험예 1) 피부 보호에 유리하고, 자외선 조사로부터 세포 독성이 완화되었고(시험예 2), 염증 매개 인자의 발현 억제효과(시험예 3) 있어서도 우수한 효과를 나타내는 것을 확인할 수 있었다. 또한 피부 자극 완화 효과(시험예 4)에 있어서도 우수한 효과를 나타내는 것을 확인할 수 있었다.
본 발명의 외부 스트레스로부터 피부 완화 효과를 갖는 연꽃, 쌀 및 개똥쑥을 발효 시킨 혼합추출물을 함유하는 화장료 조성물은 통상적으로 제조 되는 어떠한 제형으로도 제조 될 수 있으며 그 예로는 화장수, 크림, 에센스, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 바디 로션, 바디 오일, 바디 젤, 샴푸, 린스, 헤어 콘디셔너, 헤어 젤, 화운데이션, 립스틱, 마스카라, 메이크업 베이스 등을 들 수 있다.
[실시예]
이하, 하기의 실시예와 시험예들을 통하여 본 발명을 상세하게 설명하지만, 본 발명이 이 예들에 의하여 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 연꽃, 쌀 및 개똥쑥 혼합 발효 추출물 제조
채취하여 건조한 후 세척한 연꽃 50g, 쌀 50g, 개똥쑥 50g(건조중량비=1:1:1)을 혼합한 시료에 70% 함수 에탄올 3㎏을 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 100℃로 8시간 끓여서 추출하였다. 추출물에 Saccharomyces cerevisiae를 접종 후 25℃에서 5일간 발효 시킨 뒤 95℃에서 2시간 동안 멸균 후 300메쉬 여과지로 여과하고, 3일간 실온에서 방치하여 침전물을 에드벤텍 5번 여과지와 와트만 GFC 47mm 여과지로 2번 여과시켰다. 그리고 감압 농축기를 이용하여 50℃에서 농축한 후 스프레이드라이어(BUCHI사 제품)를 이용하여 건조시켜 건조 중량 15.7g의 혼합추출물 분말을 얻었다.
실시예 2 ~ 7: 연꽃, 쌀 및 개똥쑥 혼합 발효 추출물 제조
하기 표 1의 조성과 같이 연꽃, 쌀 및 개똥쑥의 혼합 중량비율을 달리하여 실시예 1과 동일한 방법으로 추출 및 여과하여 혼합 발효 추출물 분말을 제조하였다.
(중량비) 실시예 2 실시예 3 실시예 4 실시예 5 실시예 6 실시예 7
연꽃 1 1 1 2 2 2
쌀 1 2 2 1 1 2
개똥쑥 2 1 2 1 2 1
비교예 1: 연꽃 발효 추출 분말 제조
채취하여 건조한 후 세척한 연꽃 50g에 70% 함수 에탄올 1㎏을 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 100℃로 8시간 끓여서 추출한다. 추출물에 Saccharomyces cerevisiae를 접종 후 25℃에서 5일간 발효 시킨 뒤 95℃에서 2시간 동안 멸균 후 300메쉬 여과지로 여과하고, 3일간 실온에서 방치하여 침전물을 에드벤텍 5번 여과지와 와트만 GFC 47mm 여과지로 2번 여과시켰다. 그리고 감압 농축기를 이용하여 50℃에서 농축한 후 스프레이드라이어(BUCHI사 제품)를 이용하여 건조시켜 건조 중량 15.7g의 혼합추출물 분말을 얻었다.
비교예 2: 쌀 발효 추출 분말 제조
세척한 쌀 50g에 70% 함수 에탄올 1㎏을 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 100℃로 8시간 끓여서 추출한다. 추출물에 Saccharomyces cerevisiae를 접종 후 25℃에서 5일간 발효 시킨 뒤 95℃에서 2시간 동안 멸균 후 300메쉬 여과지로 여과하고, 3일간 실온에서 방치하여 침전물을 에드벤텍 5번 여과지와 와트만 GFC 47mm 여과지로 2번 여과시켰다. 그리고 감압 농축기를 이용하여 50℃에서 농축한 후 스프레이드라이어(BUCHI사 제품)를 이용하여 건조시켜 건조 중량 15.7g의 혼합추출물 분말을 얻었다.
비교예 3: 개똥쑥 추출 분말 제조
채취하여 건조한 후 세척한 개똥쑥 50g에 70% 함수 에탄올 1㎏을 넣고 냉각 콘덴서가 달린 추출기에서 100℃로 8시간 끓여서 추출한다. 추출물에 Saccharomyces cerevisiae를 접종 후 25℃에서 5일간 발효 시킨 뒤 95℃에서 2시간 동안 멸균 후 300메쉬 여과지로 여과하고, 3일간 실온에서 방치하여 침전물을 에드벤텍 5번 여과지와 와트만 GFC 47mm 여과지로 2번 여과시켰다. 그리고 감압 농축기를 이용하여 50℃에서 농축한 후 스프레이드라이어(BUCHI사 제품)를 이용하여 건조시켜 건조 중량 15.7g의 혼합추출물 분말을 얻었다.
실시예 8~14: 연꽃, 쌀 및 개똥쑥 혼합발효추출물을 이용한 제형 제조
연꽃, 쌀 및 개똥쑥 혼합 발효 추출물을 함유한 로션을 하기의 표 2의 조성 및 함량으로 통상의 방법에 따라 제조하였다.
(중량%) 대조예 비교예 실시예
4 5 6 8 9 10 11 12 13 14
연꽃발효추출물(비교예 1) - 0.5 - - - - - - - - -
쌀 발효추출물(비교예 2) - - 0.5 - - - - - - - -
개똥쑥발효추출물(비교예 3) - - - 0.5 - - - - - - -
혼합발효추출물(실시예 1) - - - - 0.5 - - - - - -
혼합발효추출물(실시예 2) - - - - - 0.5 - - - - -
혼합발효추출물(실시예 3) - - - - - - 0.5 - - - -
혼합발효추출물(실시예 4) - - - - - - - 0.5 - - -
혼합발효추출물(실시예 5) - - - - - - - - 0.5 - -
혼합발효추출물(실시예 6) - - - - - - - - - 0.5 -
혼합발효추출물(실시예 7) - - - - - - - - - - 0.5
밀납 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
폴리솔베이트 60 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5
솔비탄 세스퀴올레이트 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
유동 파라핀 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0
소르비탄 스테아레이트 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
친유형 모노스테아린산 글리세린 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
스테아린산 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5
글리세릴스테아레이트/
피이지-400 스테아레이트		 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
프로필렌글리콜 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0
카르복시폴리머 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1
트리에탄올아민 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2
방부제 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량 미량
정제수 To 100 To 100 To 100 To 100 To 100 To 100 To 100 To 100 To 100 To 100 To 100
시험예 1: NBT법을 이용한 항산화 효과 측정 실험
실시예 1 내지 7에서 수득한 연꽃, 쌀 및 개똥쑥 혼합 발효 추출물의 항산화 효과를 확인하기 위해 실험실 조건에서 다른 항산화제 즉, BHT를 비교샘플로 하여, NBT법을 이용하여 항산화 활성을 측정하였다. 항산화 효과를 측정하기 위해서 크산틴과 크산틴옥시다제에 의해 생성되는 활성산소를 NBT법에 의해 측정하고 피검물질이 활성산소를 제거하는 효과, 즉 활성산소 소거효과를 평가하였다. 크산틴과 크산틴옥시다제에 의해 생성된 활성산소를 니트로블루테트라졸리움(Nitro Blue Tetrazolium;NBT)과 반응시켜 이것에 의해 생성되는 청색을 파장 560nm에서 측정하는 것으로 활성산소 소거율을 측정하였으며, 구체적인 활성산소 소거율 측정방법은 다음과 같다. 바이알(5ml vial)에 0.05M Na2CO3 2.4ml, 3mM 크산틴 용액 0.1ml, 3mM EDTA 용액 0.1ml, BSA 용액 0.1ml 및 0.72mM NBT 용액 0.1ml를 가하고, 여기에 DMSO(dimethyl sulfoxide)에 0.1(wt/v)%농도로 제조한 시료용액 0.1ml을 첨가하고 25℃에서 10분간 방치한다. 그 후 크산틴 옥시다제 용액 0.1ml을 가하여 빨리 교반하고 25℃ 에서 20분간의 배양을 개시한다. 그 후 6Mm CuCl2 용액 0.1ml을 가하여 반응을 정지시키고 560nm에서의 흡광도 St를 측정한다. 공시험은 시료용액 대신에 증류수를 사용한 것을 상기와 똑같이 조작해 흡광도 Bt를 측정한다. 역시, 시료용액의 블랭크(Blank)는 크산틴 옥시다제 용액 대신에 증류수를 사용해 똑같이 조작하여 흡광도 Bo를 측정한다. 효과의 결과는 하기 식에 의하여 산출하였으며, 결과는 하기 표 3에 나타내었다.
억제율(%) = 〔1-(St-So)/(Bt-Bo)〕× 100
St:시료용액의 효소 반응 후의 560nm에서의 흡광도
Bt:공시험용액의 효소 반응 후의 560nm에서의 흡광도
So:시료용액의 효소 무첨가시 반응전의 560nm에서의 흡광도
Bo:공시험용액의 효소 무첨가시 반응전의 560nm에서의 흡광도
시료명 처리농도(w/v%) 항산화효과(%)
연꽃, 쌀 및 개똥쑥 혼합 발효 추출물(실시예 1) 0.1 93
연꽃, 쌀 및 개똥쑥 혼합 발효 추출물(실시예 2) 0.1 92
연꽃, 쌀 및 개똥쑥 혼합 발효 추출물(실시예 3) 0.1 93
연꽃, 쌀 및 개똥쑥 혼합 발효 추출물(실시예 4) 0.1 94
연꽃, 쌀 및 개똥쑥 혼합 발효 추출물(실시예 5) 0.1 93
연꽃, 쌀 및 개똥쑥 혼합 발효 추출물(실시예 6) 0.1 96
연꽃, 쌀 및 개똥쑥 혼합 발효 추출물(실시예 7) 0.1 94
연꽃 발효 추출물(비교예 1) 0.1 86
쌀 발효 추출물(비교예 2) 0.1 87
개똥쑥 발효 추출물(비교예 3) 0.1 88
BHT(butylated hydroxyanisole, DUKSAN KOREA) 0.1 90
상기 표 3에서 확인되는 바와 같이 0.1(wt/v)% 농도에서 시험한 시료 모두에서 항산화 효과를 확인할 수 있었다. 특히 연꽃, 쌀 및 개똥쑥 혼합 발효 추출물은 연꽃 또는 쌀 또는 개똥쑥 단독 추출물에 비하여 우수한 항산화 효과를 나타냈을 뿐만 아니라, BHT 보다 우수한 항산화 효과를 나타내었다. 그 중에서도 실시예 6에서 가장 우수한 항산화 효과를 나타내었다.
시험예 2: 자외선 조사에 의한 세포 독성 완화 효과 확인
사람 유래 섬유아세포 2×105 cells/well 의 농도로 96 well plate에 배양하고 10% FBS를 함유하는 IMDM 배지 0.2㎖를 공급한 후 24시간 동안 CO2 배양기에서 배양하였다. 여기에 DMSO에 녹인 시료용액을 처리 한 다음 2 MED의 자외선 양을 10분간 조사한 후 24시간 동안 배양하였다. 이후, 세포의 생존력을 알아보기 위하여 MTT assay를 수행하였다. MTT assay는 배양한 세포에 MTT 용액 0.1㎖을 가한 후 4 시간 동안 배양한 다음 배지는 제거하고 DMSO 0.5㎖를 넣어 형성된 포마잔을 ELISA를 사용하여 570㎚에서 흡광도를 측정하였다. 대조군으로는 BHT를 사용하였다.
시료명 처리농도(w/v%) 세포 생존율(%)
연꽃, 쌀 및 개똥쑥 혼합 발효 추출물(실시예 1) 0.1 76.9
연꽃, 쌀 및 개똥쑥 혼합 발효 추출물(실시예 2) 0.1 74.2
연꽃, 쌀 및 개똥쑥 혼합 발효 추출물(실시예 3) 0.1 72.4
연꽃, 쌀 및 개똥쑥 혼합 발효 추출물(실시예 4) 0.1 79.2
연꽃, 쌀 및 개똥쑥 혼합 발효 추출물(실시예 5) 0.1 77.2
연꽃, 쌀 및 개똥쑥 혼합 발효 추출물(실시예 6) 0.1 82.8
연꽃, 쌀 및 개똥쑥 혼합 발효 추출물(실시예 7) 0.1 78.8
연꽃 발효 추출물(비교예 1) 0.1 65.9
쌀 발효 추출물(비교예 2) 0.1 62.1
개똥쑥 발효 추출물(비교예 3) 0.1 68.9
BHT(butylated hydroxyanisole, DUKSAN KOREA) 0.1 81.0
상기 표 5에서 확인되는 바와 같이 0.1(wt/v)% 농도에서 시험한 시료 모두에서 세포 독성 완화 효과를 확인할 수 있었다. 특히 연꽃, 쌀 및 개똥쑥 혼합 발효 추출물은 연꽃 또는 쌀 또는 개똥쑥 단독 추출물에 비하여 우수한 세포독성 완화 효과를 나타냈을 뿐만 아니라, BHT 보다 우수한 세포독성 완화 효과를 나타내었다. 그 중에서도 실시예 6에서 가장 우수한 세포독성 완화 효과를 나타내었다.
시험예 3: 자외선 조사에 의한 염증 매개 인자 발현 억제효과 확인
RAW 264.7 세포를 10% FBS가 첨가된 DMEM 배지를 이용하여 5×105 cell/well로 조절한 후 24 well plate에 접종하고, 시료를 처리하고 2 MED의 자외선 양을 10분간 조사한 후 24시간 동안 배양하였다. 생성된 TNF-α의 양은 TNF-α ELISA kit(eBioscience INC, USA)를 이용하여 측정한 값을 측정하였다. TNF-α 생성 억제율은 하기 식에 의해 산출되었고, 그 결과는 하기 표 6에 나타내었다.
TNF-α생성억제율(%)=
[(대조군 TNF-α생성양 - 시료 TNF-α생성양)/대조군 TNF-α양] × 100
시료명 처리농도(w/v%) TNF-α 억제율(%)
연꽃, 쌀 및 개똥쑥 혼합 발효 추출물(실시예 1) 0.1 54.8
연꽃, 쌀 및 개똥쑥 혼합 발효 추출물(실시예 2) 0.1 54.5
연꽃, 쌀 및 개똥쑥 혼합 발효 추출물(실시예 3) 0.1 57.2
연꽃, 쌀 및 개똥쑥 혼합 발효 추출물(실시예 4) 0.1 55.2
연꽃, 쌀 및 개똥쑥 혼합 발효 추출물(실시예 5) 0.1 53.6
연꽃, 쌀 및 개똥쑥 혼합 발효 추출물(실시예 6) 0.1 65.1
연꽃, 쌀 및 개똥쑥 혼합 발효 추출물(실시예 7) 0.1 55.9
연꽃 발효 추출물(비교예 1) 0.1 49.8
쌀 발효 추출물(비교예 2) 0.1 50.2
개똥쑥 발효 추출물(비교예 3) 0.1 53.7
BHT(butylated hydroxyanisole, DUKSAN KOREA) 0.1 0
상기 표 6에서 확인되는 바와 같이 0.1(wt/v)% 농도에서 시험한 시료 모두에서 TNF-α 억제 효과를 확인할 수 있었다. 특히 연꽃, 쌀 및 개똥쑥 혼합 발효 추출물은 연꽃, 쌀 또는 개똥쑥 단독 추출물에 비하여 우수한 TNF-α 억제 완화 효과를 나타내었고 그 중에서도 실시예 6에서 가장 우수한 TNF-α 억제 효과를 나타내었다.
시험예 4: 피부 진정 효과 확인
현재 피부 알레르기 증상이 없는 20 내지 30대 남녀 10명을 대상으로 하완의 안쪽 부위에 테입 스트리핑 법(Tape Stripping Method)을 통한 피부자극을 유발한 후 본 발명에 따른 천연물 발효 추출물을 함유한 화장료와 함유되지 않는 화장료를 도포하여 유발된 자극이 진정되는 정도를 상대평가 하였다. 먼저 하완의 안쪽 부위 두 곳에 일반 스카치 테잎으로 30회 테이핑을 하여 피부 홍반을 유발하였다. 홍반 유발된 후, 본 발명에 따른 천연물 발효 추출물을 함유한 화장료를 도포하였으며, 본 발명에 따른 천연물 발효 추출물을 함유하지 않은 화장료를 도포하였다. 도포 후 3시간 후 피부진정 정도를 평가하였다.
<피부자극정도 (홍반) 평가>
0 (무반응) 1 (매우 경미한 홍반흔적) 2 (희미한 또는 가벼운 홍반)
3 (경계가 뚜렷하나 약한 홍반) 4 (뚜렷한 홍반) 5 (심한 홍반)
시료명 피부 자극 정도
좌 우
연꽃, 쌀 및 개똥쑥 혼합 발효 추출물(실시예 8) 1 1
연꽃, 쌀 및 개똥쑥 혼합 발효 추출물(실시예 9) 1 1
연꽃, 쌀 및 개똥쑥 혼합 발효 추출물(실시예 10) 1 2
연꽃, 쌀 및 개똥쑥 혼합 발효 추출물(실시예 11) 2 1
연꽃, 쌀 및 개똥쑥 혼합 발효 추출물(실시예 12) 1 0
연꽃, 쌀 및 개똥쑥 혼합 발효 추출물(실시예 13) 0 0
연꽃, 쌀 및 개똥쑥 혼합 발효 추출물(실시예 14) 0 1
연꽃 발효 추출물(비교예 4) 2 1
쌀 발효 추출물(비교예 5) 2 2
개똥쑥 발효 추출물(비교예 6) 1 1
상기 표 7에서 확인되는 바와 같이, 본 발명 연꽃, 쌀 및 개똥쑥 혼합 발효 추출물을 함유하는 실시예 8 ~ 14의 로션 조성물은 발명 연꽃, 쌀 및 개똥쑥 혼합 발효 추출물을 함유하지 않은 대조예에 비해 피부 자극 완화 효과가 우수하였다. 또한, 발명 연꽃, 쌀 및 개똥쑥 혼합 발효 추출물을 단독으로 함유할 때보다 혼합 되었을 때 피부 자극 완화 효과가 더 우수함을 확인할 수 있었다. 그 중에서도 실시예 13의 로션 제형에서 가장 우수한 피부 자극 완화 효과가 나타내었다.

Claims (10)

  1. 연꽃, 쌀 및 개똥쑥 복합발효추출물을 함유하는 피부 진정 및 피부 자극 완화용 화장료 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 복합발효추출물은 연꽃, 쌀 및 개똥쑥 추출물을 효모균, 유산균 또는 이의 혼합물로 발효시켜 얻어진 것임을 특징으로 하는 피부 진정 및 피부 자극 완화용 화장료 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 복합발효추출물은 사카로미세스 세레비시아(Saccharomyces cerevisiae)로 발효시켜 얻어진 것임을 특징으로 하는 피부 진정 및 피부 자극 완화용 화장료 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 연꽃, 쌀 및 개똥쑥 복합발효추출물은 연꽃, 쌀 및 개똥쑥을 각각 1~2 : 1~2 : 1~2의 중량비로 혼합하여 발효추출되는 것임을 특징으로 하는 피부 진정 및 피부 자극 완화용 화장료 조성물.
  5. 제4항에 있어서, 상기 연꽃, 쌀 및 개똥쑥을 각각 2 : 1 : 2의 중량비로 혼합하여 발효추출되는 것임을 특징으로 하는 피부 진정 및 피부 자극 완화용 화장료 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 상기 연꽃, 쌀 및 개똥쑥 복합발효추출물은 화장료 조성물 전체 중량에 대하여 0.1~10 중량% 함유되는 것임을 특징으로 하는 피부 진정 및 피부 자극 완화용 화장료 조성물.
  7. 제1항에 있어서, 상기 화장료조성물은 자외선으로 인한 세포 독성 완화 효과를 갖는 것임을 특징으로 하는 피부 진정 및 피부 자극 완화용 화장료 조성물.
  8. 제1항에 있어서, 상기 화장료조성물은 자외선으로 인한 피부의 염증 매개 인자 발현 억제를 통해 피부의 염증을 억제하는 것임을 특징으로 하는 피부 진정 및 피부 자극 완화용 화장료 조성물.
  9. A)연꽃, 쌀 및 개똥쑥을 1~2 : 1~2 : 1~2의 중량비로 혼합하고 물, 탄소수 1~4의 저급 알코올, 에틸아세테이트, 글리세린, 에틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 및 부틸렌글리콜로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 용매로 추출하여 혼합추출물을 제조하는 단계;
    (B)제조된 혼합추출물에 효모균, 유산균 또는 이의 혼합물을 접종하여 발효시키는 단계; 및
    (C)멸균 후 여과하고 농축하는 단계를 포함하는 연꽃, 쌀 및 개똥쑥 복합발효추출물의 제조방법.
  10. 제9항에 있어서, 상기 (B)단계는 상기 혼합추출물에 사카로미세스 세레비시아(Saccharomyces cerevisiae)를 접종 후 22~28℃에서 4~6일간 발효 시키는 것으로 이루어지는 것임을 특징으로 하는 연꽃, 쌀 및 개똥쑥 복합발효추출물의 제조방법.
















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