CN108403495B - 一种山茶花提取物及包含该山茶花提取物的中草药化妆品 - Google Patents

一种山茶花提取物及包含该山茶花提取物的中草药化妆品 Download PDF

Info

Publication number
CN108403495B
CN108403495B CN201810324219.5A CN201810324219A CN108403495B CN 108403495 B CN108403495 B CN 108403495B CN 201810324219 A CN201810324219 A CN 201810324219A CN 108403495 B CN108403495 B CN 108403495B
Authority
CN
China
Prior art keywords
camellia
extract
camellia extract
solution
skin
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201810324219.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN108403495A (zh
Inventor
洪民华
王英存
汤晓琳
刘丹
张营
吕智
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanghai Inoherb Cosmetic Co ltd
Original Assignee
Shanghai Inoherb Cosmetic Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanghai Inoherb Cosmetic Co ltd filed Critical Shanghai Inoherb Cosmetic Co ltd
Priority to CN201810324219.5A priority Critical patent/CN108403495B/zh
Publication of CN108403495A publication Critical patent/CN108403495A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108403495B publication Critical patent/CN108403495B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A61K8/9783—Angiosperms [Magnoliophyta]
    • A61K8/9789—Magnoliopsida [dicotyledons]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/82—Theaceae (Tea family), e.g. camellia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/16—Emollients or protectives, e.g. against radiation
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/18—Antioxidants, e.g. antiradicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q17/00—Barrier preparations; Preparations brought into direct contact with the skin for affording protection against external influences, e.g. sunlight, X-rays or other harmful rays, corrosive materials, bacteria or insect stings
    • A61Q17/04—Topical preparations for affording protection against sunlight or other radiation; Topical sun tanning preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/02—Preparations for care of the skin for chemically bleaching or whitening the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/30—Extraction of the material
    • A61K2236/33—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones
    • A61K2236/331—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones using water, e.g. cold water, infusion, tea, steam distillation, decoction
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/30—Extraction of the material
    • A61K2236/39—Complex extraction schemes, e.g. fractionation or repeated extraction steps
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
    • A61K2236/51—Concentration or drying of the extract, e.g. Lyophilisation, freeze-drying or spray-drying
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
    • A61K2236/53—Liquid-solid separation, e.g. centrifugation, sedimentation or crystallization
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/74—Biological properties of particular ingredients
    • A61K2800/78—Enzyme modulators, e.g. Enzyme agonists
    • A61K2800/782—Enzyme inhibitors; Enzyme antagonists
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/80—Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
    • A61K2800/82—Preparation or application process involves sonication or ultrasonication

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Cosmetics (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

本发明提供一种山茶花提取物，所述山茶花提取物为菊瓣提取物、大理茶提取物和猴子木提取物中的任意一种。本发明的第二个方面在于提供一种山茶花提取物的制备方法和包含山茶花提取物的中草药化妆品。本发明提供的山茶花提取物对蘑菇酪氨酸酶具有较好的抑制效果，并具有较高的DPPH自由基清除活性，以及弹性蛋白酶的抑制功效。另外，大理茶、猴子木能够有效地抑制UVB照射对HaCat细胞的氧化损伤。即本发明提供的山茶花提取物具有显著的美白、抗氧化、抗衰老，并能改善肤质和预防皮肤紫外线损伤等功效，在日用化学品和药物领域具有较高的生物学应用价值。

Description

一种山茶花提取物及包含该山茶花提取物的中草药化妆品
技术领域
本发明属于医药化学、化妆品领域，涉及一种山茶花提取物及包含山茶花提取物的化妆品，尤其涉及一种具有优异的抗衰老、美白作用的山茶花提取物及包含所述山茶花提取物的中草药化妆品。
背景技术
茶花(学名：Camellia sp.)又名山茶花，是山茶科、山茶属多种植物和园艺品种的通称。山茶属，包含灌木和乔木，是山茶科中植株最大，经济、社会和生态价值最高的属，山茶花原产于中国东部，在长江流域、珠江流域、重庆、云南和四川各地，朝鲜、日本、中国台湾和印度等地普遍种植。山茶花品种非常的多，全世界有几千种不同的品种。山茶花因其植株形姿优美，花形艳丽缤纷，而受到世界园艺界的珍视，是中国传统的观赏花卉，亦是世界名贵花木之一。
山茶花中花叶、花蕾富含各种氨基酸、多种维生素和多种稀缺的微量元素，尤其是它所含的丰富的山茶花精油是天然的而又是人工合成的，香气持久、能轻松地被肌肤所吸收，深层杀菌消炎，提供肌肤护理养分，能够有效地锁入肌肤表层细胞的水分，使肌肤表层恢复水润活力，具有很高的护肤价值。
山茶花叶中含有700多种已被发现的可促进人类健康的化合物。现代科学已经证明山茶属具有皮肤愈合、抗微生物、抗氧化、抗过敏、抗病毒的特性，被广泛应用于药物的开发。此外，山茶花精油富含儿茶素，多酚，皂角甙和角鲨烯等，这些成分具有美白、抗氧化、抗渗透、抗炎、镇痛和抗癌属性。
中国专利CN105726420A公开了一种山茶花精油护肤露，该护肤露中包含了山茶花提取液、茶油、青刺果油以及山茶花精油等成分，得到的山茶花精油护肤露具有抗衰老、抗癌和抑制癌细胞增长的作用，但由于其加入的产品种类较多，且每种产品中又含有复杂的组分，且山茶花的种类繁多，不同种的山茶花性能差异较大，而对比文件中均未公开相应内容。
目前，山茶花提取液的提取工艺主要有水提和乙醇提两种，但使用乙醇提得到的山茶花提取液或浓缩液、干粉中会残留有一定量的乙醇，由于乙醇具有一定的刺激性，当用在日用化妆品中时，会对皮肤产生一定的刺激，严重时出现发痒、红肿等现象，因此，日用化妆品中一般会尽量减少乙醇的含量，也有一些群体不适合含有乙醇的化妆品，这样就会对相应化妆品的适宜人群量造成极大的限制，影响产品的市场占有率。
发明内容
本发明的第一个方面在于提供一种山茶花提取物，所述山茶花提取物为菊瓣(Camellia reticulata Lindl.Ju Ban)提取物、大理茶(Camellia reticulata.cv.TaliCamellia)提取物和猴子木(Camellia yunnanensis)提取物中的任意一种。
在一个优选实施例中，所述山茶花提取物中，按重量份，儿茶素5％-20％，如8％、10％、13％、18％等，多酚5％-20％，如8％、10％、13％、18％等，皂角甙5％-20％，如8％、10％、13％、18％等，和角鲨烯5％-20％，如8％、10％、13％、18％等。
本发明的第二个方面在于提供一种山茶花提取物的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：
步骤1、取干燥山茶花，除杂、粉碎至20-80目，备用；
步骤2、向粉碎后的山茶花中加入山茶花重量10-30倍量的去离子水在常压75-90℃条件下回流煎煮不少于两次，每次回流煎煮时间不少于1小时，提取结束后将提取液真空浓缩至山茶花重量的50％-200％，得到粗提物；
步骤3、将步骤2得到的粗提物加入到超声波提取器中，加入果酸调节溶液的pH值＝3-5，在30-50kHZ、70-85℃条件下超声处理1小时，得到超声处理液；
步骤4、向步骤3得到的超声处理液中加入山茶花重量的10％-20％吸附剂，微波震荡吸附至溶液无色，过滤除去杂质；
步骤5、将步骤4得到的无色溶液在2000-3000r/min的转速下离心20min，以进一步除去其中的杂质，得到山茶花提取物。
在一个优选实施例中，所述山茶花的提取部位包括花瓣、花萼、花丝。
在一个优选实施例中，还可以包括将山茶花提取物干燥处理。
在一个优选实施例中，所述干燥为热空气干燥、喷雾干燥、电加热干燥中的任意一种或几种组合。
作为本发明的一个优选实施例，所述喷雾干燥过程中，高压泵在80-120MPa压力下将所述过滤液通过雾化器形成100-200μm的颗粒，与所述颗粒接触的热空气的温度为60-100℃，接触时间为5-50s。
本发明的第三个方面在于提供一种中草药化妆品，所述中草药化妆品包括菊瓣(Camellia reticulata Lindl.Ju Ban)提取物、大理茶(Camellia reticulata.cv.TaliCamellia)提取物和猴子木(Camellia yunnanensis)提取物中的任意一种或几种组合。
在一个优选实施例中，所述中草药化妆品中，所述提取物的重量含量为0.1-30％，如0.5％、1％、3％、5％、8％、10％、15％、18％、20％、25％、28％等。
本发明提供的山茶花提取物采用去离子水提取，不含醇类组分，避免将制备的山茶花提取物用于化妆品时对皮肤表面造成刺激。采用去离子水提取和超声提取结合的方式，山茶花的活性组分提取更加充分。筛选出对蘑菇酪氨酸酶具有较好的抑制效果、具有较高的DPPH自由基清除活性，以及弹性蛋白酶的抑制功效的菊瓣提取物、大理茶提取物和猴子木提取物。另外，大理茶、猴子木能够有效地抑制UVB照射对HaCat细胞的氧化损伤。即本发明提供的山茶花提取物具有显著的美白、抗氧化、抗衰老，并能改善肤质和预防皮肤紫外线损伤等功效，在日用化学品和药物领域具有较高的生物学应用价值。
具体实施方式
为了更清楚的说明本发明提供的山茶花提取物的性能，下面以具体实施例进行表征，但需要说明的是，本发明具体实施例部分只是本发明需要保护的山茶花提取物的具体实施方式，并不必然对本发明的保护范围造成任何限制。
山茶花提取物原料的选取
本发明实施例中的山茶花均选自滇南地区的山茶花，不同种山茶花的花期、花色和种属如表1所示。
表1、山茶花提取物原料的选取
Figure BDA0001626053000000041
实施例一至实施例五山茶花提取物的制备
选取表1中的新鲜山茶花10kg，去离子水清洗2次后，低温干燥至恒重，并使用破碎机将干燥的山茶花粉碎至20-80目，向粉碎后的山茶花中加入100-300kg的去离子水，在常压75-90℃条件下回流煎煮几次，每次回流煎煮时间为1小时，以充分提取其中的活性组分，提取结束后将提取液真空浓缩至5-20kg，如8kg、10kg、13kg、18kg等，得到粗提物；将得到的粗提物加入到超声波提取器中，加入果酸，如苹果酸、葡萄酸、乳酸中的任意一种或几种，调节溶液的pH值＝3-5，如pH值＝4，在30-50kHZ、70-85℃条件下超声处理1小时，得到超声处理液。向得到的超声处理液中加入山茶花重量的10％-20％吸附剂，微波震荡吸附至溶液无色，过滤除去杂质；将得到的无色溶液在2000-3000r/min，如2500r/min的转速下离心20min，以进一步除去其中的杂质，得到山茶花提取物，成品得率为500％-2500％，即每1.0kg山茶花，经过提取后得到5-25kg液态的山茶花提取物。
山茶花提取物提取结束后，还可以经过喷雾干燥，喷雾干燥的条件为：高压泵在80-120MPa压力下使用雾化器将山茶花提取物雾化形成100-200μm的颗粒，与颗粒接触的热空气的温度为60-100℃，接触时间为5-50s。
具体制备工艺条件如表2所示：
表2、山茶花提取物工艺条件
实施例 一 二 三 四 五
去离子水重量kg 100 100 200 200 300
回流煎煮温度℃ 75 80 85 85 90
浓缩液重量kg 5 8 10 15 20
超声频率kHZ 30 35 45 40 50
超声温度℃ 85 80 80 75 70
吸附剂 活性炭 硅藻土 活性炭 活性炭 硅藻土
成品得率％ 500 1000 1500 1250 2500
是否干燥 是 是 否 否 否
山茶花提取物活性检测
对实施例四中制备得到的山茶花提取物进行活性检测，检测前将山茶花提取物配制成相应的浓度，具体配制方法为：
取本发明制备的一定体积的山茶花提取物，用PBS稀释为不同体积百分比的测试浓度的样品，即：
样品浓度％＝体积山茶花提取物/(体积山茶花提取物+体积PBS)×100％。
材料与试剂
PBS,pH 7.4(GibcoTM，Catalog#:10010023，500mL)；DMEM(GibcoTM，Catalog#:11965-092，500mL)；蘑菇酪氨酸酶(Sigma-AldrichTM，Catalog#:T3824-25KU)；弹性蛋白酶(Sigma-AldrichTM，Catalog#:E7885-5MG)；FBS(GibcoTM，Catalog#:12484-028，500mL)；2,2-二(4-叔辛基苯基)-1-苦肼基自由基(DPPH，Sigma-AldrichTM，Catalog#:257621-100MG)；曲酸(Sigma-AldrichTM，Catalog#:95197-100MG)；EGCG(Sigma-AldrichTM，Catalog#:93894-10MG)；弹性蛋白-刚果红(Elastin-Congo red，Sigma-AldrichTM，Catalog#:E0502-5G)；Tris-HCl(Sigma-AldrichTM，Catalog#:T3253-100G)；CaCl2(Sigma-AldrichTM，Catalog#:499609-10G)；噻唑蓝(MTT，Sigma-AldrichTM，Catalog#:M2128-100MG)；HaCat细胞(来自细胞实验室冻存与传代细胞)；细胞培养皿(Thermo ScientificTMNunclonTMDelta，35x12mm Dish)和多孔细胞培养板(
Figure BDA0001626053000000062
公司，规格为96孔板、48孔板和12孔板)。
山茶花提取物对蘑菇酪氨酸酶抑制性能
酪氨酸酶是一种广泛分布于自然界的多功能含铜酶，存在于蔬菜，水果和蘑菇中。在哺乳动物中，它是黑色素生成的限速酶，并导致皮肤色素沉着异常，如皮肤斑点和缺陷。大多数黑色素抑制剂通过抑制酪氨酸酶活性抑制黑素的生成。因此，抑制酪氨酸酶是化妆品行业用来达到日晒后皮肤美白效果和淡化色素的产品研发策略之一。
取PBS配制的待测药物5μL，加入的10U/mL蘑菇酪氨酸酶溶液(PBS，PH＝6.8配制)45μL，37℃孵育30min，加入10mg/mL多巴溶液(PBS，PH＝6.8配制)50μL，37℃孵育30min，于475nm测定吸光度值，样品重复数为3个，以0.1mg/mL曲酸为阳性对照，结果如表3所示。
蘑菇酪氨酸酶抑制率％＝(1-(A样品-A样品空白对照))/(A对照组-A空白对照组))×100％。
表3、山茶花提取物对蘑菇酪氨酸酶的抑制能力
Figure BDA0001626053000000061
Figure BDA0001626053000000071
由表3可知，不同种类的山茶花提取物抑制蘑菇酪氨酸酶的能力具有较大的差距，猴子木提取物在浓度为0.25％、0.5％和1％时，其对蘑菇酪氨酸酶的抑制率分别为4％、11％和27％，在较低浓度时，仍然具有明显的蘑菇酪氨酸酶抑制性能，且在受试浓度范围内呈现一定的量效关系，随着猴子木水提取物浓度的增加，其对蘑菇酪氨酸酶的抑制性能明显增强，能够较好抑制酪氨酸酶的活性；菊瓣提取物在浓度为0.25％时，其对蘑菇酪氨酸酶的抑制率也达到了28％，对蘑菇酪氨酸酶具有明显的抑制能力。大理茶水提取物在浓度为0.25％、0.5％和1％时，蘑菇酪氨酸酶抑制率分别为0％、0％和12％，说明大理茶水提取物在浓度为1％时显示出轻微的酪氨酸酶抑制活性。不同种类的山茶花提取物对蘑菇酪氨酸酶的抑制能力差异显著。而其他品种山茶花水提取物均没有检测到明显的酪氨酸酶抑制活性，这说明，菊瓣、猴子木和大理茶具有独特潜在的美白作用。
且在相同制备工艺条件下得到的山茶花提取物，菊瓣、猴子木和大理茶的提取物作为一种天然的山茶花提取物，具有更显著的蘑菇酪氨酸酶抑制率，能够减少皮肤黑色素的生成，具有美白和提亮肤色的作用，在日用化妆品以及药品中具有很大的应用开发价值。
山茶花提取物对DPPH自由基的清除能力
在生物进化过程中，好氧生物已经发展出一定的抗自由基与细胞氧化的防御机制。人体中天然存在的抗氧化剂通过预防，去除和修复氧化损伤而起作用。最近，已经从植物中分离出来了许多抗氧化剂。抗氧化应激天然化合物的存在，使传统草药和药用植物得到了广泛应用。
山茶花水提取物含有较高含量的抗坏血酸，酚类，黄酮和黄酮醇。药用植物中的多酚(如黄酮醇，类黄酮和酚类化合物)含量在抗氧化活性中有极大作用。而且，已有报道山茶花提取物中的主要活性酚类化合物如EGCG和ECG对DPPH自由基有极好的清除活性。
为了说明本发明提供的山茶花对DPPH自由基的清除能力，本发明实施例中作出如下性能检测。
取PBS配制的待测样品10μL，加入无水乙醇配制的0.2mM DPPH溶液90μL，室温避光孵育30min，于540nm测定吸光度值，以0.01mg/mL EGCG为阳性对照，样品重复数为3个，结果如表4所示。
DPPH自由基清除率％＝(1-(A样品-A样品空白对照))/(A对照组-A空白对照组))×100％。
表4、山茶花提取物对DPPH自由基的清除能力
Figure BDA0001626053000000081
Figure BDA0001626053000000091
由表4所示，不同种类的山茶花使用水提取得到的提取物对DPPH自由基的清除效果具有较大差异，如2％的锦楼春水提取物、2％的麻叶银红水提取物对DPPH自由基的清除率分别为47％和69％，而同等浓度下，猴子木水提取物对DPPH自由基的清除率接近77％。
另外，继续参考表4，在水提取物浓度为2％时，除了云南红花油茶、塞桃红、葛蕾丝、龙火珠、凤山茶和闽鄂山茶外，相对于其他种类的山茶花提取物，菊瓣、大理茶和猴子木三种山茶花提取物具有更优异的DPPH自由基去除能力。说明这三种山茶花具有较强的DPPH自由基清除活性，能够有效减少机体氧化应激损伤，具有潜在的抗氧化和抗衰老的功效。
且这三种山茶花在受试浓度范围内呈现一定的量效关系，随着水提取物浓度的增加，这三种山茶花水提取物对DPPH自由基的抑制性能均明显增强，能够较好DPPH自由基清除活性。且在该三种山茶花中，又以猴子木水提取物对DPPH自由基的清除活性最佳。
山茶花提取物对弹性蛋白酶的抑制能力
弹性蛋白是皮肤结缔组织的主要成分，是一种不溶性纤维蛋白，仅占真皮基质的2-4％，但在皮肤弹性方面起着重要作用。它还包括表皮下有胶原纤维的网状结构，通常被弹性蛋白酶降解，其可以水解结缔组织中的外周蛋白和结构蛋白。弹性蛋白酶可以被紫外光或ROS激活，所以从某种意义上说，抑制弹性蛋白酶的活性可以预防弹性蛋白蛋白酶诱导的皮肤衰老和皮肤弹性减少，本发明实施例检测不同种类的山茶花提取物对弹性蛋白酶的抑制作用，具体考察方法如下：
取96孔板，分别加入20μL山茶花水提取物以及20μL弹性蛋白酶溶液(0.5mg/ml，用PBS，pH＝7.4配制)，37℃孵育30min，然后每孔均加入160μL ECR buffer缓冲溶液，包含Tris-HCl(100mM)，CaCl2(1mM,pH＝7.5)，以及5mg/ml Elastin-Congo red，用PBS，pH 7.4配制，37℃震荡孵育60min，2,500×g，5min，去除不溶性的Elastin-Congo red(ECR)，上清液转移到新的96孔板，充分摇匀并于OD 495nm处测定其吸光度。以0.01mg/mL EGCG为阳性对照，样品重复数为3个，结果如表5所示。
弹性蛋白酶抑制率％＝(1-(A样品-A样品空白对照))/(A对照组-A空白对照组))×100％。
表5、山茶花提取物对弹性蛋白酶活性的抑制能力
Figure BDA0001626053000000101
Figure BDA0001626053000000111
本发明实施例研究分析了多种山茶花水提取物对弹性蛋白酶的抑制作用，结果如表4所示，结果表明，菊瓣水提取物的浓度为0.25％、0.5％和1％时，其对弹性蛋白酶的抑制活性分别为33％、45％和52％。猴子木水提取物的浓度为0.25％、0.5％和1％时，其对弹性蛋白酶抑制活性分别为48％、52％和58％，大理茶水提取物的浓度为0.25％、0.5％和1％时，其对弹性蛋白酶抑制活性分别为55％、61％和64％，而其他种类的山茶花水提取物在近似浓度或更高浓度时，对弹性蛋白酶的抑制效果明显更低，如张家茶水提取物的浓度为0.25％和1％时，其会激活弹性蛋白酶的活性，且浓度越高，弹性蛋白酶的活性越高。葛蕾丝水提取物的浓度为0.25％和1％时，对弹性蛋白酶的抑制率分别为25％和15％，对弹性蛋白酶的抑制率均明显低于菊瓣水提取物、大理茶水提取物和猴子木水提取物对弹性蛋白酶的抑制能力。
另外，菊瓣水提取物、大理茶水提取物和猴子木水提取物中，猴子木水提取物能够更强的抑制弹性蛋白酶活性，这三种山茶花水提取物均能够预防弹性蛋白诱导的皮肤衰老和皮肤弹性减少，可以应用于预防皮肤老化和皮肤松弛的日用化妆品和药物的产品研发中。
HaCat细胞UVB光损伤的保护作用
皮肤，特别是其最外层主要由角质形成细胞组成的表皮，直接暴露于来自日光的紫外线(UV)辐射下。而日光紫外线包含UVA、UVB和UVC，其中UVB会引起皮肤晒伤和遗传毒性，从而对皮肤有许多有害作用，如炎症，免疫抑制，皮肤过早老化(光老化)和皮肤癌。因此，探究天然提取物对HaCat细胞的UVB光保护作用，对于日用化妆品和药物的研究与开发具有重要的意义，本发明实施例按照如下方案考察山茶花提取物对HaCat细胞的UVB光保护作用大小。
本测试分为空白对照组、UVB对照组和实验组，其中，实验组的测试方法如下：
取对数生长期的、HaCat细胞以每孔细胞数1.0×104个种96孔黑色板，以10％FBSDMEM培养液37℃，5％CO2培养24h后，待细胞完全贴壁，换成包含待测试样品的新鲜10％FBSDMEM培养液，37℃，5％CO2培养24h后，PBS洗2-3次。
然后将培养液换成PBS，使用30mJ/cm2的UVB紫外光照射6h后，换成新鲜10％FBSDMEM培养液，于37℃，5％CO2的环境中培养48h，然后利用MTT法检测细胞密度，计算HaCat细胞存活率。
空白对照组的制备方法如下：
取对数生长期的、HaCat细胞以每孔细胞数1.0×104个种96孔黑色板，以10％FBSDMEM培养液37℃，5％CO2培养24h后，待细胞完全贴壁，换成新鲜10％FBS DMEM培养液，37℃，5％CO2培养24h后，PBS洗2-3次。
然后将培养液换成PBS，于37℃，5％CO2的环境中培养6h，换成新鲜10％FBS DMEM培养液，于37℃，5％CO2的环境中培养48h，然后利用MTT法检测细胞密度，计算HaCat细胞存活率。
UVB对照组的制备方法如下：
取对数生长期的、HaCat细胞以每孔细胞数1.0×104个种96孔黑色板，以10％FBSDMEM培养液37℃，5％CO2培养24h后，待细胞完全贴壁，换成新鲜10％FBS DMEM培养液，37℃，5％CO2培养24h后，PBS洗2-3次。
然后将培养液换成PBS，使用30mJ/cm2的UVB紫外光照射6h后，换成新鲜10％FBSDMEM培养液，于37℃，5％CO2的环境中培养48h，然后利用MTT法检测细胞密度，计算HaCat细胞存活率。
测试结果如表6所示。
表6、山茶花水提取物对HaCat细胞UVB光损伤的保护作用
Figure BDA0001626053000000131
由表6可知，除了菊瓣水提取物以外，大理茶和猴子木均能够抑制UVB对HaCat细胞的氧化应激损伤，UVB组的细胞存活率为79％，UVB对HaCat细胞有极显著性的光损伤作用，大理茶UVB照射后细胞存活率为87％，能够极显著地恢复UVB导致的细胞氧化应激损伤(p<0.01)，猴子木UVB照射后细胞存活率为83％，能够显著地恢复UVB导致的细胞氧化应激损伤(0.01<p<0.05)。因此，大理茶和猴子木具有HaCat细胞UVB光保护作用，在化妆品和药物的光保护、抗衰老和预防皮肤紫外线损伤的产品开发中具有潜在的价值。
毛缘大黑红、相国茶、龙火珠、凤山茶、色奔、闽鄂山茶、麻叶银红和锦楼春这8种山茶花也表现出了抑制UVB对HaCat细胞的氧化应激损伤的活性，但考虑到它们酪氨酸酶和弹性蛋白酶等抑制作用相对于菊瓣、大理茶和猴子木的不足，故不作为重点保护的山茶花品种。
本发明通过研究多种山茶属山茶花提取物对蘑菇酪氨酸酶抑制效果、DPPH自由基清除活性、弹性蛋白酶抑制功效以及UVB照射下HaCat细胞的光保护作用，发现菊瓣、大理茶和猴子木均具有蘑菇酪氨酸酶抑制效果、DPPH自由基清除活性和弹性蛋白酶抑制功效，而且大理茶和猴子木能够很好地抑制UVB引起的皮肤细胞的氧化应激损伤，综合这些山茶花水提取物的生物学功效，这说明，山茶花提取物，尤其是猴子木、菊瓣和大理茶，具有美白，抗氧化，抗衰老，改善肤质和预防皮肤紫外线损伤等功效，在日用化学品和药物有很好的生物学应用价值。猴子木，自然分布于云南和四川西南部，生于海拔1500-3000米的常绿阔叶林至针阔混交林或林缘灌丛。为中国特有种属。所以，基于猴子木具有很好的生物学应用价值，其作为重要的中草药活性物质来源，有很好的应用于山茶花提取物的中草药化妆品保护价值。
以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。

Claims (17)

1.一种山茶花提取物，其特征在于，所述山茶花提取物为菊瓣(Camellia reticulataLindl.Ju Ban)提取物、大理茶(Camellia reticulata.cv.Tali Camellia)提取物和猴子木(Camellia yunnanensis)提取物中的任意一种，并且所述山茶花提取物是采用下列方法制备的：
步骤1、取干燥山茶花，除杂、粉碎至20-80目；
步骤2、加入山茶花重量10-30倍量的去离子水在常压75-90℃条件下回流煎煮不少于两次，每次回流煎煮时间不少于1小时，提取结束后将提取液真空浓缩至山茶花重量的50％-200％，得到粗提物；
步骤3、将步骤2得到的粗提物加入到超声波提取器中，加入果酸调节溶液的pH值＝3-5，在30-50kHZ、70-85℃条件下超声处理1小时，得到超声处理液；
步骤4、向步骤3得到的超声处理液中加入山茶花重量的10％-20％吸附剂，微波震荡吸附至溶液无色，过滤除去杂质；
步骤5、将步骤4得到的无色溶液在2000-3000r/min的转速下离心，以进一步除去其中的杂质，得到山茶花提取物。
2.根据权利要求1所述的山茶花提取物，其特征在于，在所述山茶花提取物中，按重量份计含有儿茶素5％-20％、多酚5％-20％、皂角甙5％-20％和角鲨烯5％-20％。
3.根据权利要求1或2所述的山茶花提取物，其特征在于，所述果酸选自苹果酸、葡萄酸、乳酸中的任意一种或几种。
4.根据权利要求1或2所述的山茶花提取物，其特征在于，所述山茶花的提取部位包括花瓣、花萼、花丝。
5.一种制备山茶花提取物的方法，其特征在于，包括下列步骤：
步骤1、取干燥山茶花，除杂、粉碎至20-80目；
步骤2、加入山茶花重量10-30倍量的去离子水在常压75-90℃条件下回流煎煮不少于两次，每次回流煎煮时间不少于1小时，提取结束后将提取液真空浓缩至山茶花重量的50％-200％，得到粗提物；
步骤3、将步骤2得到的粗提物加入到超声波提取器中，加入果酸调节溶液的pH值＝3-5，在30-50kHZ、70-85℃条件下超声处理1小时，得到超声处理液；
步骤4、向步骤3得到的超声处理液中加入山茶花重量的10％-20％吸附剂，微波震荡吸附至溶液无色，过滤除去杂质；
步骤5、将步骤4得到的无色溶液在2000-3000r/min的转速下离心，以进一步除去其中的杂质，得到山茶花提取物。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述山茶花为菊瓣(Camellia reticulataLindl.Ju Ban)、大理茶(Camellia reticulata.cv.Tali Camellia)和猴子木(Camelliayunnanensis)中的任意一种。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述果酸选自苹果酸、葡萄酸、乳酸中的任意一种或几种。
8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述山茶花的提取部位包括花瓣、花萼、花丝。
9.根据权利要求5-8任一项所述的方法，其特征在于，进一步包括将山茶花提取物干燥处理。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述干燥处理为热空气干燥、喷雾干燥、电加热干燥中的任意一种或几种组合。
11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，在所述喷雾干燥过程中，高压泵在80-120MPa压力下将所述过滤液通过雾化器形成100-200μm的颗粒，与所述颗粒接触的热空气的温度为60-100℃，接触时间为5-50s。
12.根据权利要求5-11任一项的方法制备的山茶花提取物。
13.一种中草药化妆品，其特征在于，所述中草药化妆品包含权利要求1-4任一项所述的山茶花提取物或根据权利要求5-11任一项的方法制备的山茶花提取物。
14.根据权利要求13所述的中草药化妆品，其中所述山茶花提取物的重量含量为0.1-30％。
15.根据权利要求13或14所述的中草药化妆品，其特征在于，所述山茶花提取物具有蘑菇酪氨酸酶抑制效果、DPPH自由基清除活性和弹性蛋白酶抑制功效，并且能够抑制UVB引起的皮肤细胞的氧化应激损伤。
16.根据权利要求13或14所述的中草药化妆品，其特征在于，所述化妆品具有美白、抗氧化、抗衰老、改善肤质和预防皮肤紫外线损伤的功效。
17.根据权利要求1-4任一项所述的山茶花提取物、或根据权利要求5-11任一项的方法制备的山茶花提取物在制备中草药化妆品中的用途，所述化妆品具有美白、抗氧化、抗衰老、改善肤质和预防皮肤紫外线损伤的功效。
CN201810324219.5A 2018-04-12 2018-04-12 一种山茶花提取物及包含该山茶花提取物的中草药化妆品 Active CN108403495B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810324219.5A CN108403495B (zh) 2018-04-12 2018-04-12 一种山茶花提取物及包含该山茶花提取物的中草药化妆品

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810324219.5A CN108403495B (zh) 2018-04-12 2018-04-12 一种山茶花提取物及包含该山茶花提取物的中草药化妆品

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108403495A CN108403495A (zh) 2018-08-17
CN108403495B true CN108403495B (zh) 2021-04-13

Family

ID=63135144

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810324219.5A Active CN108403495B (zh) 2018-04-12 2018-04-12 一种山茶花提取物及包含该山茶花提取物的中草药化妆品

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108403495B (zh)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109044913B (zh) * 2018-09-30 2021-11-12 上海清轩生物科技有限公司 一种山茶花提取液的制备方法及其应用
CN109662924A (zh) * 2019-01-22 2019-04-23 广州达人研选生物科技有限公司 一种无刺激补水修复面膜及其制备方法
CN110236965B (zh) * 2019-07-23 2022-05-13 广州市科能化妆品科研有限公司 抗蓝光护肤化妆品及其制备方法
CN113855746B (zh) * 2021-10-26 2022-09-13 完美（广东）日用品有限公司 一种平卧菊三七组合物及其应用
CN114016307A (zh) * 2021-10-29 2022-02-08 达利(中国)有限公司 山茶花色素在提高蚕丝织物抗紫外线能力上的应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011083110A2 (en) * 2010-01-08 2011-07-14 Chanel Parfums Beaute Use of at least one extract of flowers of camellia japonica alba plena for moisturizing the skin
WO2012172199A1 (fr) * 2011-03-31 2012-12-20 Laboratoire Nuxe Composition a base de camellia japonica et polygonum hydropiper pour protection de la peau
WO2016016515A1 (fr) * 2014-08-01 2016-02-04 Chanel Parfums Beaute Extrait de camellia japonica et compositions cosmétiques le comprenant
CN105997754A (zh) * 2016-07-25 2016-10-12 上海得高实业有限公司 一种山茶花提取液及其制备方法与应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011083110A2 (en) * 2010-01-08 2011-07-14 Chanel Parfums Beaute Use of at least one extract of flowers of camellia japonica alba plena for moisturizing the skin
WO2012172199A1 (fr) * 2011-03-31 2012-12-20 Laboratoire Nuxe Composition a base de camellia japonica et polygonum hydropiper pour protection de la peau
WO2016016515A1 (fr) * 2014-08-01 2016-02-04 Chanel Parfums Beaute Extrait de camellia japonica et compositions cosmétiques le comprenant
CN105997754A (zh) * 2016-07-25 2016-10-12 上海得高实业有限公司 一种山茶花提取液及其制备方法与应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN108403495A (zh) 2018-08-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108403495B (zh) 一种山茶花提取物及包含该山茶花提取物的中草药化妆品
KR101332214B1 (ko) 연꽃, 쌀, 개똥쑥 복합발효추출물을 포함하는 피부 스트레스 완화용 화장료 조성물
KR100702519B1 (ko) 애기닥나무 추출물을 포함하는 미백용 조성물
KR20090055309A (ko) 피부미백 및 주름개선용 피부외용 화장료 조성물
KR100872454B1 (ko) 식물에서 기능성 화장품 성분 추출 방법
JP2009256272A (ja) Ａｔｐ産生促進剤および表皮細胞賦活化剤
JP2011105644A (ja) メラニン取込抑制剤
KR100785505B1 (ko) 항산화효과와 미백효과를 갖는 한방 약재 추출물과 그추출물의 제조방법 및 이를 포함하는 화장료 조성물
KR930010548B1 (ko) 닥나무 추출물을 함유한 미백화장료
KR100604073B1 (ko) 삼칠 추출물, 첨과 추출물 및 석곡 추출물 중에서 선택된 1 종을 함유하는 화장료 조성물
KR101819060B1 (ko) 황련해독탕 발효물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물
CN107412046B (zh) 桃花提取液的制备方法及其美白组合物
KR102329986B1 (ko) 유산균 발효 미선나무 추출액을 포함하는 피부광노화 개선용 화장료 조성물 및 그 제조방법
KR20140130277A (ko) 글리코프로테인을 함유하는 피부 외용제 조성물
KR102303400B1 (ko) 제주 용암해수, 제주 보리누룩 및 천연식물을 이용한 발효물 제조방법 및 이를 포함하는 화장품 조성물 및 그 제조방법
KR102308756B1 (ko) 귤껍질 및 칼메그의 혼합추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물
KR20190049067A (ko) 커피 실버스킨 및 커피박 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물
KR102327023B1 (ko) 청열, 항균 및 과산화지질 제거 기능을 갖는 샴푸 조성물 및 그 제조방법
KR101571517B1 (ko) 제주 쉰다리 전통 발효 기술에 의해 피부 주름개선 효능 및 항산화 효능이 증진된 삼백초 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 노화방지용 화장료 조성물
KR100789634B1 (ko) 멜라닌 생성 억제 활성을 갖는 식물 추출물을 함유하는피부미백용 화장료
KR102163509B1 (ko) 적송 솔방울 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물
KR101381755B1 (ko) 비활성 다당체가 제거된 삼나무추출물의 제조방법 및 이를 포함하는 화장료 조성물
KR20090128230A (ko) 포제를 활용한 황금 추출물을 함유하는 화장료 조성물
KR101119288B1 (ko) 송절 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물및 그의 제조방법
KR102615332B1 (ko) 피버퓨 추출물을 포함하는 화장료 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant