CN109044913B - 一种山茶花提取液的制备方法及其应用 - Google Patents

一种山茶花提取液的制备方法及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种山茶花提取液的制备方法及其应用，所述方法包括以下步骤：A、挑选新鲜无损伤、无病害山茶花，采用折射窗干燥技术进行干燥处理，得山茶花干制品；B、将山茶花干制品经气流超微粉碎、过筛后，加入四元体系低共熔溶剂进行超声萃取，得萃取混合物；C、将萃取混合物和去离子水混合，并调节pH，然后加入酶进行酶解；D、酶解后放置一定时间，然后进行过滤，即得山茶花提取液。该方法采用折射窗干燥技术进行干燥，超微粉碎，以无毒的低共熔溶剂为萃取剂，生产过程简单、高效、安全、绿色；克服了传统表儿茶素生产需要大量有毒有机溶剂及复杂的柱分离过程。所得提取液具有皮肤修复功效、抑菌作用、抗氧化能力强且安全无刺激。

Description

一种山茶花提取液的制备方法及其应用
技术领域
本发明属于天然产物提取技术领域，涉及一种山茶花提取液的制备方法和应用，所得提取液具有皮肤修复和抑菌作用。
背景技术
表儿茶素属于儿茶素类，儿茶素类物质是一种重要的酚类物质。植物中的天然抗氧化成分除了生育酚、抗坏血酸、类胡萝卜素、生物碱之外，酚类物质是分布最广、种类及含量最多的成分。经研究表明，表儿茶素具有清除自由基、抑制肿瘤、抗诱变、抗病毒、抑制微生物、降脂助消化、护肤美容等多种生物活性。
表儿茶素不溶于水，传统的萃取方法常采用有机溶剂(如甲醇、乙醇、乙酸乙酯、氯仿、正丁醇等)对其进行提取。目前，侯蕾等报道从西南山茶花中提取制备表儿茶素，其方法为使用柱色谱法(侯蕾,于大永,冯宝民，等.西南红山茶花化学成分的分离与鉴定《时珍国医国药》2011,22(7):1701-1703)。中国专利CN105219815A公布了一种表儿茶素单体的制备方法，先采用单宁酶酶解，后使用乙醇和吸附树脂分离制备表儿茶素单体。就目前通用的分离制备方法来看，主要依赖于传统的薄层色谱、柱色谱来分离制备，但薄层色谱分离量很低，柱色谱的分离效果也不高，尤其是在分离过程中会使用大量的有机溶剂，既污染环境又浪费成本，而且，提取的时间也不经济。
低共熔溶剂，是由两种或多种成分通过加热制备而成的低共熔液体，是一种绿色液体。低共熔溶剂通常是由一定化学计量比的氢键供体和氢键受体组合而成的低共熔混合物，在常温下为液体，是一种新型的离子液体。低共熔溶剂制备原料成本低廉，制备过程简单，产物易生物降解、对环境友好以及无毒副作用，是一种新型绿色溶剂。低共熔溶剂在提取分离工程中有着广泛的应用。利用组成成分性质的不同，可以制备出不同特性(如极性、溶解性等)的低共熔溶剂，并利用这种特性高效高选择性萃取具有特殊性质的天然活性成分，这是多数有机溶剂不具备的性质。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种山茶花提取液的制备方法及其应用，所得提取液具有皮肤修复和抑菌作用。该方法简便，不使用对环境有毒有害的有机溶剂，制备周期短，成本低，符合绿色和安全的要求，适宜规模化生产，可以广泛应用于化妆品行业。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
本发明提供了一种山茶花提取液的制备方法，包括以下步骤：
A、挑选新鲜无损伤、无病害山茶花，采用折射窗干燥技术进行干燥处理，得山茶花干制品；
B、将山茶花干制品经气流超微粉碎、过筛后，加入四元体系低共熔溶剂进行超声萃取，得萃取混合物；
C、将萃取混合物和去离子水混合，并调节pH，然后加入酶进行酶解；
D、酶解后放置一定时间，然后进行过滤，即得山茶花提取液。
优选地，步骤A中，所述采用的折射窗干燥的条件为：以水温85～90℃的循环热水作为加热源，山茶花厚度为3.0～10mm，冷却温度为10～15℃，干燥时间为20～30min，干燥腔空气相对湿度为35～40％。
优选地，步骤B中，采用氮气保护进行气流超微粉碎，具体条件为：气压0.8～1.0MPa，系统风量3.5～4.5m3/min，分级机转速2800～3000r/min，加料速度5.0～7.5kg/h；
所述超声萃取的参数为：料液比1∶8～12、温度18～25℃、超声功率100W，萃取时间1.0～2.0h。
优选地，步骤B中，所述四元体系低共熔溶剂包括以下溶剂：1，3-丁二醇、戊二醇、丙氨酸、山梨醇。
优选地，所述1,3-丁二醇、戊二醇、丙氨酸、山梨醇的摩尔比为0.5～3:8～12:3～6:1～3.5。更优选摩尔比为2:10:5：2。
优选地，步骤C中，所述萃取混合物和去离子水的质量比为1∶5～8；采用柠檬酸调节pH值为5.0～6.0。
优选地，步骤C中，所述加入的酶为单宁酶，添加量为萃取混合物总量的0.01-0.05％。
优选地，步骤C中，所述酶解条件为：温度35～45℃下，酶解2.0～3.0h。
优选地，步骤D中，所述放置的温度为0.5～4℃，放置时间为1.0～2.0h；所述过滤采用微孔超滤膜过滤。
本发明还提供了一种根据前述方法制得的山茶花提取液在化妆品中的应用。
本发明使用山茶花作为材料，利用低共熔溶剂进行了植物提取物的制备，获得的植物提取物产品具有优秀的抗氧化效果，优越皮肤修复功效；具有抑菌效果优秀，无需添加防腐剂，延长货架期；可以制备成粉末，其表儿茶素(EC)的纯度大于85％，可以便于运输和储存，也可进一步提纯分离，获得更高纯度的表儿茶素。
与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：
1、本发明采用折射窗干燥技术对山茶花进行干燥，较之热风干燥和微波干燥相比，其物料的中心温度低，能更好的保留山茶花的色泽和活性成分；与冻干技术相比，生产相同质量的山茶花干燥时间和运行成本及能源消耗明显降低。
2、本发明方法联用低共熔提取和酶工程技术，经过单宁酶酶解，获得含有较高浓度的表儿茶素(EC)提取液；
3、采用安全、清洁、无毒的低共熔溶剂替代部分有毒有害有机溶剂(如甲醇等)，萃取过程更为绿色、环保；
4、萃取过程在低温环境下进行，避免了儿茶素成分降解，且时间短、效率高，方法简便，制备周期短，成本低，符合环保和安全的要求，适宜规模化生产。
5、本发明的提取液具有优秀的抗氧化效果，优越的皮肤修复功效；
6、本发明的提取液抑菌效果优秀，无需添加防腐剂，货架期长，目前市售的植物提取物都会添加防腐剂防止微生物污染；
7、本发明的提取液可以制备成粉末，其表儿茶素(EC)的纯度大于85％，可以便于运输和储存，也可进一步提纯分离，获得更高纯度的表儿茶素。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变化和改进。这些都属于本发明的保护范围。
实施例1
(1)挑选新鲜无损伤、无病害山茶花100g，采用折射窗干燥技术进行干燥处理，得到山茶花干制品；折射窗干燥的条件为：水温90℃的循环热水作为加热源，山茶花厚度为10mm，冷却温度为10℃，干燥时间为30min，干燥腔空气相对湿度为35％。
(2)通过氮气保护气流超微粉碎，条件为：气压1.0MPa，系统风量3.5m3/min，分级机转速3000r/min，加料速度7.5kg/h；粉碎后过400目筛；
(3)放入1，3-丁二醇/戊二醇/丙氨酸/山梨醇组成的四元体系低共熔溶剂(摩尔比例为2:10:5：2，在90℃下加热共熔，冷却后形成的透明液体)1000g，混合均匀，放入超声容器内，料液温度22℃、超声功率100W，时间1.5h；
(4)按萃取混合物和去离子水质量比1∶5的比例添加去离子水到萃取混合物中，加入柠檬酸调节pH为5.4；
(5)添加萃取物总质量0.02％的单宁酶，在40℃下酶解，酶解时间3.0h，间歇搅拌，4℃下放置1.5h；
(6)微孔超滤膜过滤，得到澄清液体。
实施例2
(1)挑选新鲜无损伤、无病害山茶花100g，采用折射窗干燥技术进行干燥处理，得到山茶花干制品；折射窗干燥的条件为：水温87℃的循环热水作为加热源，山茶花厚度为7mm，冷却温度为12℃，干燥时间为24min，干燥腔空气相对湿度为35％。
(2)通过氮气保护气流超微粉碎，条件为：气压0.8MPa，系统风量4.0m3/min，分级机转速2800r/min，加料速度7.0kg/h；粉碎后过400目筛；
(3)放入1，3-丁二醇/戊二醇/丙氨酸/山梨醇组成的四元体系低共熔溶剂(摩尔比例为2:8:6：1，在90℃下加热共熔，冷却后形成的透明液体)800g，混合均匀，放入超声容器内，料液温度18℃、超声功率100W，时间2.0h。
(4)按萃取混合物和去离子水质量比1∶6的比例添加去离子水到萃取混合物中，加入柠檬酸调节pH为5.2；
(5)添加萃取物总质量0.01％的单宁酶，在42℃下酶解，酶解时间2.0h，间歇搅拌，2℃下放置1.0h；
(6)微孔超滤膜过滤，得到澄清液体。
实施例3
(1)挑选新鲜无损伤、无病害山茶花100g，采用折射窗干燥技术进行干燥处理，得到山茶花干制品；折射窗干燥的条件为：水温85℃的循环热水作为加热源，山茶花厚度为3.0mm，冷却温度为10℃，干燥时间为23min，干燥腔空气相对湿度为38％。
(2)通过氮气保护气流超微粉碎，条件为：气压0.85MPa，系统风量3.5m3/min，分级机转速2850r/min，加料速度5.5kg/h；粉碎后过400目筛；
(3)放入1，3-丁二醇/戊二醇/丙氨酸/山梨醇组成的四元体系低共熔溶剂(摩尔比例为3:10:3：3.5，在90℃下加热共熔，冷却后形成的透明液体)1200g，混合均匀，放入超声容器内，料液温度25℃、超声功率100W，时间1.0h。
(4)按萃取混合物和去离子水质量比1∶8的比例添加去离子水到萃取混合物中，加入柠檬酸调节pH为5.8；
(5)添加萃取物总质量0.05％的单宁酶，在35℃下酶解，酶解时间2.5h，间歇搅拌，1℃下放置2.0h；
(6)微孔超滤膜过滤，得到澄清液体。
实施例4
(1)挑选新鲜无损伤、无病害山茶花100g，采用折射窗干燥技术进行干燥处理，得到山茶花干制品；折射窗干燥的条件为：水温88℃的循环热水作为加热源，山茶花厚度为6mm，冷却温度为15℃，干燥时间为20min，干燥腔空气相对湿度为40％。
(2)通过氮气保护气流超微粉碎，条件为：气压0.95MPa，系统风量4.5m3/min，分级机转速2950r/min，加料速度5.0kg/h；粉碎后过400目筛；
(3)放入1，3-丁二醇/戊二醇/丙氨酸/山梨醇组成的四元体系低共熔溶剂(摩尔比例为0.5:12:4：3，在90℃下加热共熔，冷却后形成的透明液体)1100g，混合均匀，放入超声容器内，料液温度22℃、超声功率100W，时间1.5h。
(4)按萃取混合物和去离子水质量比1∶6的比例添加去离子水到萃取混合物中，加入柠檬酸调节pH为5.5；
(5)添加萃取物总质量0.03％的单宁酶，在42℃下酶解，酶解时间2.8h，间歇搅拌，0.5℃下放置1.2h；
(6)微孔超滤膜过滤，得到澄清液体。
对比例1
本对比例不使用低共熔溶剂，使用水代替，不采用单宁酶酶解，其余与实施例1的方法一致。
对比例2
本对比例不使用低共熔溶剂，使用水代替，其余与实施例1的方法一致。
对比例3
本对比例不使用单宁酶酶解，其余与实施例1的方法一致。
对比例4
本对比例中低共熔溶剂的摩尔比例为1:1:1：5，不在本发明规定的范围，其余与实施例1的方法一致。
对比例5
本对比例中低共熔溶剂的料液比为1:20，不在本发明规定的范围，其余与实施例1的方法一致。
对比例6
本对比例中单宁酶酶解时间不在本发明规定的范围内，酶解时间为0.5h,其余与实施例1的方法一致。
对比例7
本对比例采用传统热风干燥进行干燥处理，其余与实施例1的方法一致。
对比例8
本对比例采用微波干燥进行干燥处理，其余与实施例1的方法一致。
对比例9
本对比例采用冻干技术进行干燥处理，其余与实施例1的方法一致。
效果验证：
1、HPLC法检测产品中的表儿茶素的含量测试
检测方法参考文献[边宝林,王宏洁,司南，等.鸡血藤药材中表儿茶素的含量测定《中国实验方剂学杂志》,2004,10(6):31-33],利用HPLC测定植物提取物中的表儿茶素含量。
表1实施例1-4和对比例1-6的植物提取液表儿茶素的含量
Figure BDA0001819932600000061
Figure BDA0001819932600000071
备注：——表示未检出，检出限为2.0μg/mL。
由表1可知，实施例1的表儿茶素的含量为35.78μg/mL，显著高于实施例2的26.15μg/mL(P＜0.05)、实施例3的24.43μg/mL(P＜0.05)、实施例4的27.75μg/mL(P＜0.05)。比较例1-6中，对比例1(不使用低共熔溶剂和不使用单宁酶酶解)表儿茶素未检出、对比例2(不使用低共熔溶剂但使用单宁酶酶解)、对比例3(不使用单宁酶酶解)、对比例4(低共熔溶剂的摩尔比例不在范围内)、对比例5(低共熔溶剂的料液比不在范围内)、对比例6(使用单宁酶酶解但时间不在范围内)的表儿茶素的含量分别为3.86μg/mL、2.43μg/mL、10.65μg/mL、12.43μg/mL、11.32μg/mL。结果显示，对比例1-6的表儿茶素含量显著小于实验例1-4(P＜0.05)，说明植物提取物的提取条件如不在本发明要求的条件范围内，则得到的植物提取物中的表儿茶素的含量显著小于本发明条件下得到的植物提取物。
对比例7(热风干燥)、对比例8(微波干燥)以及对比例9(冻干干燥)的表儿茶素的含量的分别为9.77μg/mL、13.53μg/mL、25.82μg/mL。与实施例1-4的结果相比较，对比例7(热风干燥)和对比例8(微波干燥)的表儿茶素的含量显著小于实验例1-4(P＜0.05)，对比例9(冻干干燥)表儿茶素的含量与实验例1-4无显著性差异(P＞0.05)，说明热风干燥和微波干燥的处理方式得到的植物提取液中的表儿茶素的含量显著小于本发明条件下(实施例1-4)得到的植物提取液。而冻干干燥处理方式(对比例9)得到的植物提取液中的表儿茶素的含量与本发明条件下(实施例1-4)得到的植物提取液无显著差异，但是与实施例1相比的表儿茶素含量差异显著，且该处理方式的干燥时间和运行成本及能源消耗比本发明采用的折射窗处理明显要多。
2、DPPH抗氧化能力测试
DPPH自由基(二苯代苦味肼基自由基)是一种稳定的以氮为中心的质子自由基其乙醇溶液呈紫色并在517nm处有强烈吸收在有自由基清除剂存在时自由基清除剂提供一个电子与DPPH的孤对电子配对而使其褪色褪色程度与其接受的电子呈定量关系在517nm处的吸光度变小其变化程度与自由基清除程度呈线形关系即自由基清除剂的清除自由基能力越强吸光度越小。
DPPH自由基清除实验的具体实验步骤为：
(1)取等体积(2mL)的待测液与2×10-4mol/L的DPPH溶液混匀(A1)；(2)取等体积的无水乙醇(待测物溶剂)与2×10-4mol/L的DPPH溶液混匀(A2)；(3)取等体积的无水乙醇与待测液混匀(A3)；(4)反应40min后，在517nm下测A1、A2、A3管吸光度值。
清除率计算公式为：清除率(％)＝[1－(A1－A3)/A2]×100％
IC50为半数抑制率浓度：也就是指自由基清除率为50％时的自由基清除剂的浓度。IC50值是评价自由基清除剂效果的常用指标，其值越小表示达到50％自由基清除率时所用的自由基清除剂的浓度剂量越小，其自由基清除效果也就越好。在作出植物提取液对DPPH自由基清除作用曲线后，计算IC50值表示其抗氧化活性。结果如下表2所示：
表2实施例1-4和对比例1-6的植物提取液DPPH自由基的IC50值
Figure BDA0001819932600000081
Figure BDA0001819932600000091
备注：——表示无抑制效果。
由表2可知，实施例1所得植物提取液对DPPH清除作用的IC50＝22.38μg/mL，与对比例1(不使用低共熔溶剂和不采用单宁酶酶解的植物提取物)与对比例2(不使用低共熔溶剂但使用单宁酶酶解的植物提取液)和对比例3(不使用单宁酶酶解的植物提取液)相比，有极显著性差异(P＜0.01),与其他不同条件下相比(对比例4、对比例5、对比例6)同样有极显著性差异(P＜0.01)。从上述结果可以看出，在不使用低共熔溶剂和单宁酶酶解条件下(对比例1)，植物提取液不显示抗氧化性效果，说明如不利用低共熔溶剂和单宁酶酶解无法将活性物质(尤其是表儿茶素没食子酸酯(ECG))萃取出来；其他对比例(对比例2-6)的结果显示，提取条件如不在本发明的条件范围内，所得到的植物提取液其抗氧化性效果与实施例1-4有极显著差异(P＜0.01)；上述结果可以说明本发明的植物提取液具有较强的抗氧化能力，可以清除自由基，促进细胞代谢，增强细胞活力，改善机体的结构和功能，从而延缓细胞老化，促进皮肤的修复。
3、实施例1-4植物提取液的安全性测试-斑贴测试
人体斑贴试验主要是用于评估化妆品原料的刺激性。本发明对实施例1-4获得的植物提取液进行人体封闭式斑贴试验，旨在对其潜在皮肤刺激性进行评估。
1、试验对象
选择合适的志愿者30人，年龄范围在18-45岁随机选择。
2、试验方法
本提取液样品为液体，量取0.025mL-0.2mL滴加于滤纸片上，再将滤纸片置于斑试器内。样品设置空白对照，在对照斑试器孔内加入与样品等量的蒸馏水。
试验部位选为人体前臂屈侧，利用无刺激性的胶带将斑试器固定贴敷于受试者前臂屈侧。测试周期持续24h。24h后去除斑试器，静置30min后，等待压痕消失，观察皮肤的反应。如果试验结果为阴性，则需要在斑贴试验后24h和48h分别再观察一次。
3、试验结果
斑贴试验结果如表3所示：
"-"表示阴性反应；
"±"表示可疑反应：仅有微弱红斑；
"+"表示弱阳性反应(红斑反应)：红斑、浸润、水肿、可有丘疹；
"++"表示强阳性反应(疱疹反应)；红斑、浸润、水肿、丘疹、疱疹；反应可超出受试区；
"+++"表示极强阳性反应(融合性疱疹反应)；明显红斑、严重浸润、水肿、融合性疱疹；反应超出受试区。
根据化妆品卫生规范2007，人体斑贴试验判断标准为：
30例受试者中出现1级皮肤不良反应的人数多于5例，或二级皮肤不良反应的人数多于2例，或出现任何1例三级或三级以上皮肤不良反应时，则判定受试物对人体有不良反应，反之，则视为对人体无不良反应。
表3、实施例1-4得到的植物提取液的斑贴试验结果
Figure BDA0001819932600000101
Figure BDA0001819932600000111
从表3中可以看出：实施例1-4得到的植物提取液无一例可疑反应，说明本发明提供的植物提取液具有较高的安全性，可以适用于化妆品中。
4、皮肤修复斑贴试验：
4.1试验对象
选择合适的志愿者10人，年龄范围在18-45岁随机选择。
4.2试验方法：
在志愿者前臂内侧健康皮肤上，用适量浓度的SDS(十二烷基硫酸钠)刺激，使之变红肿，然后分别涂上本实施例1样品和阴性对照溶液(生理盐水)斑贴器，轻压使样品液均匀地贴敷于受损皮肤上，观察皮肤的修复效果，结果见下表4。
表4实施例1的皮肤修复斑贴试验
Figure BDA0001819932600000112
Figure BDA0001819932600000121
表4的实验结果表明，本发明产品能有效改善受损皮肤出现的红斑、红肿、脱皮等症状，能够起到消炎作用，明显提高皮肤修复能力。
5、实施例1-4的抑菌效果测试
检测方法及评价依据：参考ISO 11930及USP 35<51>，采用一次接种方式(第0天)，对接种后7天，14天，21天及28天进行取样分析测试，根据不同取样时间测得存活菌量判定样品的防腐效力(抑菌效果)。
所用细菌指示菌：E.co1i(大肠杆菌)+(P.aeruginosa)(铜绿假单胞菌)+S.aureus(金黄色葡萄球菌)；真菌指示菌：A.niger(黑曲霉)+C.albicans(白色念珠菌)。检测结果参见表5。
表5实施例1-4的抑菌测试
Figure BDA0001819932600000122
Figure BDA0001819932600000131
备注：符号“B”表示混合细菌：大肠杆菌(ATCC8739)、金黄色葡萄球菌(ATCC6538)、铜绿假单孢杆菌(ATCC9027)；符号“M”表示霉菌：黑曲霉(ATCC16404)；符号“Y”表示白色念珠菌(ATCC10231)。实验温度：细菌为32.5±2.5℃；霉菌、酵母菌为28±1℃；试验时间：28天。N.I.表示微生物数量不再增加。
从表5中的试验结果可见，实施例1～4在接菌后第7、14、21、28天的混合细菌微生物数量依次较少，28天内不见增长，且各个实施例在各个检测时间点上的抑菌效果上无显著性差异，结果显示本发明的产品具有优异的抑菌效果，说明本发明的植物提取物具有抑制真菌和细菌生长的作用，这应该是表儿茶素和其他活性物质协同作用所致。
6、HPLC定性分析
将实施例1得到的提取液，在-5℃下放置2.0h，经过10,000rpm离心后去除上清液，沉淀经真空干燥，获得棕色粉末，与表儿茶素(EC)标准品(购自美国Sigma-Aldrich公司，C15H14O6，M.W.290.27，纯度≥98％(HPLC))对照鉴定，同时用HPLC法分析检测。棕色粉末用柱层析法分离后再经过重结晶等方式获得高纯度单体，鉴定结果为：分子量为290，(-)ESI-MS m/z：289[M－H]-，熔点241℃，显示固体粉末分离纯化后得到的单体为表儿茶素(EC)。HPLC分析，棕色粉末中表儿茶素的纯度大于85％。制备得到的儿茶素粗品粉末便于运输和储存，也可进一步提纯分离，获得更高纯度的表儿茶素。
应用例1
将实施例制备的山茶花提取液用于水剂制备，各原料组分见表6，其制备方法具体为：先在水中加入甘油、1,3-丁二醇、EDTA-2Na、透明质酸，加热调整至85℃，搅拌均匀，冷却至45度，加入本发明的植物提取物，防腐剂，搅拌均匀。最后将香精溶解于变性乙醇中，加入上述水溶液中，搅拌均匀，过滤，出料。
表6水剂产品配方表
原料 含量(％)
甘油 5.0
1,3-丁二醇 8.0
实施例制备的山茶花提取液 20.0
EDTA-2NA 0.05
透明质酸 0.05
乙醇 3.0
香精 适量
防腐剂 适量
水 余量
应用例2膏霜
将实施例制备的山茶花提取液用于膏霜制备，各原料组分见表7，其制备方法具体为：首先，在水中加入保湿剂，加热调整至85℃，制备A相，B相中分别添加油相成分，升温至85℃，搅拌均匀后将B相添加到A相，利用搅拌机均质20分钟，接着冷却至40℃，添加C相，搅拌均匀，脱泡，最后过滤，出料。
表7膏霜产品配方表
Figure BDA0001819932600000141
Figure BDA0001819932600000151
综上所述，本发明以山茶花为原料，折射窗干燥技术进行干燥，超微粉碎，以低共熔溶剂为萃取剂，利用天然低共熔溶剂的特性，配合超声处理，高度选择性地提取表儿茶素没食子酸酯(ECG)。再通过单宁酶进行酶解，得到具有皮肤修复功效、抑菌作用、抗氧化能力强且安全无刺激的山茶花提取液。该方法采用折射窗干燥技术进行干燥，超微粉碎，以无毒的低共熔溶剂为萃取剂，生产过程简单、高效、安全、绿色；克服了传统表儿茶素生产需要大量有毒有机溶剂及复杂的柱分离过程。
以上对本发明的具体实施例进行了描述。需要理解的是，本发明并不局限于上述特定实施方式，本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变化或修改，这并不影响本发明的实质内容。在不冲突的情况下，本申请的实施例和实施例中的特征可以任意相互组合。

Claims (6)

1.一种山茶花提取液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
A、挑选新鲜无损伤、无病害山茶花，采用折射窗干燥技术进行干燥处理，得山茶花干制品；
B、将山茶花干制品经气流超微粉碎、过筛后，加入四元体系低共熔溶剂进行超声萃取，得萃取混合物；
C、将萃取混合物和去离子水混合，并调节pH，然后加入酶进行酶解；
D、酶解后放置一定时间，然后进行过滤，即得山茶花提取液；
所述四元体系低共熔溶剂包括以下溶剂：1，3-丁二醇、戊二醇、丙氨酸、山梨醇；
所述1,3-丁二醇、戊二醇、丙氨酸、山梨醇的摩尔比为0.5～3: 8～12: 3～6: 1～3.5；
步骤C中，所述酶解条件为：温度35～45℃下，酶解2.0～3.0 h；
所述超声萃取的料液比1∶8～12；
所述四元体系低共熔溶剂在超声萃取步骤前需在90℃下加热共熔；
步骤C中，所述加入的酶为单宁酶，添加量为萃取混合物总量的0.01-0.05%。
2.根据权利要求1所述的山茶花提取液的制备方法，其特征在于，步骤A中，所述采用的折射窗干燥的条件为：以水温85～90℃的循环热水作为加热源，山茶花厚度为3.0～10mm，冷却温度为10～15℃，干燥时间为20～30min，干燥腔空气相对湿度为35～40％。
3.根据权利要求1所述的山茶花提取液的制备方法，其特征在于，步骤B中，采用氮气保护进行气流超微粉碎，具体条件为：气压0.8～1.0MPa，系统风量3.5～4.5m3/min，分级机转速2800～3000r/min，加料速度5.0～7.5kg/h；
所述超声萃取的参数为：温度18～25℃、超声功率100W，萃取时间1.0～2.0 h。
4.根据权利要求1所述的山茶花提取液的制备方法，其特征在于，步骤C中，所述萃取混合物和去离子水的质量比为1∶5～8；采用柠檬酸调节pH值为5.0～6.0。
5.根据权利要求1所述的山茶花提取液的制备方法，其特征在于，步骤D中，所述放置的温度为0.5～4℃，放置时间为1.0～2.0h；所述过滤采用微孔超滤膜过滤。
6.一种根据权利要求1所述方法制得的山茶花提取液在化妆品中的应用。
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