CN112587462B

CN112587462B - 一种芫荽提取物的应用、抗紫外抗氧化美白化妆品及其制备方法

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Publication number: CN112587462B
Application number: CN202110045251.1A
Authority: CN
Inventors: 单承莺; 史东海; 马世宏; 聂韡; 束成杰
Original assignee: Jiangsu Aoguang Daily Chemical Group Co ltd; NANJING INSTITUTE FOR COMPREHENSIVE UTILIZATION OF WILD PLANTS CHINA COOP
Current assignee: Jiangsu Aoguang Daily Chemical Group Co ltd; NANJING INSTITUTE FOR COMPREHENSIVE UTILIZATION OF WILD PLANTS CHINA COOP
Priority date: 2021-01-08
Filing date: 2021-01-08
Publication date: 2023-04-14
Anticipated expiration: 2041-01-08
Also published as: CN112587462A

Abstract

本发明属于化妆品技术领域，具体涉及芫荽提取物的应用、抗紫外抗氧化美白化妆品及其制备方法。本发明提供了一种芫荽提取物在抗紫外辐射、抗氧化和美白化妆品中的应用，该芫荽提取物的有效成分包括芫荽精油和芫荽多糖。其中芫荽精油具有优良的抑制酪氨酸酶活性性能，能够抑制黑色素的生成，起到美白的作用；芫荽多糖除了常见的锁水保湿功效外，还具有优良的抗氧化与抗紫外辐射作用，能够保护皮肤，隔绝外界的刺激、炎症及紫外线污染。将芫荽提取物首次应用到化妆品中，在和其他成分的共同作用下，使得化妆品具有抗紫外辐射、抗氧化和美白的功效。

Description

一种芫荽提取物的应用、抗紫外抗氧化美白化妆品及其制备方法

技术领域

本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种芫荽提取物的应用、抗紫外抗氧化美白化妆品及其制备方法。

背景技术

在炎炎夏日或日照强烈的地区，防晒类化妆品是消费者必不可少使用的一类产品。皮肤是人体最大的器官，是人体的第一道防线，身体中暴露于外部的皮肤，如面部、颈部、上下肢等部位，极易受到紫外线的伤害，防晒类化妆品可以保护人体裸露部分的皮肤。在我国，防晒化妆品属于特殊用途化妆品，是指能够防止或减轻由于紫外线辐射而造成的皮肤损害的一类化妆品。

对人体皮肤造成伤害的紫外线依据波长的不同，主要分为UVB(290～320nm)和UVA(320～400nm)两个波段，UVB主要作用于皮肤表皮而UVA主要作用于真皮层，其深度可达真皮中部。可以说，紫外线是皮肤的第一大杀手，能引起皮肤的氧化损伤，可诱发各种活性氧(ROS)的产生，ROS可引发多种生理生化过程，细胞中产生的过量ROS如不及时清除，就会造成细胞内生物大分子的损伤，引起细胞氧化还原状态改变，诱导细胞凋亡，造成皮肤急慢性损害。

防晒化妆品中主要靠防晒剂来对抗紫外线，分为物理防晒剂和化学防晒剂两大类。物理防晒剂不吸收紫外线，主要作用是反射和散射紫外线，也称为无机防晒剂，如二氧化钛、氧化锌、高岭土、滑石粉、氧化铁等；化学防晒剂主要作用在于吸收紫外线，常见的化学防晒剂有二苯酮、水杨酸乙基己酯等；但由于化学防晒剂分子会被皮肤吸收，因此吸收紫外线的过程发生在皮肤内部，所以化学防晒剂对皮肤有一定的刺激性。在这两种传统防晒剂以外，人们聚焦于从动植物中寻找既安全又高效的能够抵御紫外线辐射的新生物活性物质作为新型防晒剂，这也是目前防晒化妆品领域的研究热点。

芫荽(Coriandrum sativum L)俗称香菜，伞形科芫荽属，一年生或两年生的草本植物，具有强烈特殊香气。芫荽全草色泽油绿，气味芳香，其茎叶是人们餐桌上提味去腥和点缀菜肴的首选蔬菜，深受大众喜爱。同时，芫荽也是一种常用的药用植物，但是芫荽在日化行业的应用还罕有报道。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种芫荽提取物的应用、抗紫外抗氧化美白化妆品及其制备方法，该芫荽提取物的有效成分包括芫荽精油和芫荽多糖，首次将其应用到化妆品中，能够同时有效起到抗紫外辐射、抗氧化和美白的作用。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明提供了一种芫荽提取物在抗紫外辐射、抗氧化和美白化妆品中的应用，所述芫荽提取物的有效成分包括芫荽精油和芫荽多糖。

优选的，所述芫荽提取物的制备方法，包括以下步骤：

将芫荽叶超声提取，得到初级提取物；

将所述初级提取物进行蒸馏，得到芫荽精油和提取液；

将所述提取液进行过滤、醇提，得到芫荽多糖。

优选的，所述超声提取的功率为200～300W，时间为60～120min，温度为50～70℃。

优选的，所述蒸馏为水蒸气蒸馏，蒸馏的时间为2～6h。

优选的，得到芫荽多糖后还包括对芫荽多糖的精制，所述精制包括酶水解和除杂。

优选的，所述除杂用试剂为氯仿和正丁醇，所述氯仿和正丁醇的质量为3～6∶1。

本发明还提供了一种抗紫外抗氧化美白化妆品，包括以下质量百分含量的组分：芫荽提取物2.5～11％、甘油硬脂酸酯1～5％、棕榈酸异丙酯3～8％、鲸蜡硬脂酸醇1～5％、白油1～5％、硅油3～8％、维生素E0.5～1.5％、乳化剂1～3％、甘油1～3％、纳米钛白粉1～5％、苯氧乙醇0.3～1.0％和余量的去离子水；所述芫荽提取物为上述技术方案所述芫荽提取物。

优选的，所述抗紫外抗氧化美白化妆品中芫荽精油的含量为0.5～3％，芫荽多糖的含量为2～8％。

本发明还提供了上述抗紫外线防晒美白化妆品的制备方法，包括以下步骤：

将甘油硬脂酸酯、棕榈酸异丙酯、鲸蜡硬脂酸醇、白油、硅油、维生素E、乳化剂混合，得到油相体系；

将甘油、纳米钛白粉和芫荽多糖分散在水中，得到水相体系；

将所述油相体系、水相体系和芫荽精油、苯氧乙醇混合，得到抗紫外抗氧化美白化妆品。

优选的，所述油相体系和水相体系混合时的温度为65～75℃。

本发明提供了一种芫荽提取物在抗紫外辐射、抗氧化和美白化妆品中的应用，该芫荽提取物的有效成分包括芫荽精油和芫荽多糖。其中芫荽精油具有优良的抑制酪氨酸酶活性，进而能够抑制黑色素的生成，起到美白的作用；芫荽多糖除了常见的锁水保湿功效外，还具有优良的抗氧化与抗紫外辐射作用，能够保护皮肤，隔绝外界的刺激、炎症及紫外线污染。本发明首次将芫荽精油和芫荽多糖应用到化妆品中，在和其他成分的共同作用下，使得化妆品同时具有抗紫外辐射、抗氧化和美白的功效。

附图说明

图1为芫荽多糖对超氧阴离子自由基的清除活性测试结果。

图2为芫荽多糖对羟自由基的清除活性测试结果。

图3为芫荽多糖抗脂质过氧化活性测试结果。

图4为芫荽精油抑制酪氨酸酶活性测试结果。

具体实施方式

在本发明中，如无特殊说明，所用原料采用本领域技术人员所熟知的市售商品即可。

在本发明中，所述芫荽提取物的制备方法，包括以下步骤：

将芫荽叶超声提取，得到初级提取物；

将所述初级提取物进行蒸馏，得到芫荽精油和提取液；

将所述提取液进行过滤、醇提，得到芫荽多糖。

本发明将芫荽叶超声提取，得到初级提取物。在本发明中，所述超声提取的方式优选为将芫荽叶粉碎后加入水中进行超声提取；所述芫荽叶和水的质量比为1∶10～30，进一步优选为1∶12～28，更优选为1∶15～25。在本发明中，所述超声提取的功率优选为200～300W，进一步优选为210～290W，更优选为220～280W；在本发明的实施例中，超声提取的功率具体为250W。在本发明中，所述超声提取的时间优选为60～120min，进一步优选为70～110min，更优选为80～100min；在本发明的实施例中，超声提取的时间具体为90min。在本发明中，所述超声提取的温度优选为50～70℃，进一步优选为52～68℃，更优选为55～65℃。

得到初级提取物后，本发明将所述初级提取物进行蒸馏，得到芫荽精油和提取液。本发明优选采用水蒸气蒸馏。在本发明中，所述蒸馏的时间优选为2～6h，进一步优选为3～5h，更优选为3.5～4h。在本发明中，所述蒸馏后收集到的挥发油即为芫荽精油，剩余的底液即为提取液。

得到提取液后，本发明将所述提取液进行过滤、醇提，得到芫荽多糖。本发明优选将提取液趁热进行过滤，得到上清液。

进行醇提前本发明优选对上清液进行浓缩，所述浓缩的方式优选为减压蒸馏浓缩，所述浓缩后的体积优选为上清液的1/5。本发明对所述减压蒸馏浓缩的条件参数没有特殊要求，能得到所需体积的浓缩液即可。在本发明中，所述醇提的方式优选为向浓缩液中加入95％乙醇，静置后离心，所得到的沉淀即为芫荽多糖；所述乙醇和浓缩液的体积比优选为2～5∶1，进一步优选为2.5～4.5∶1，更优选为3～4∶1；所述静置的时间优选为20～30h，进一步优选为22～28h，更优选为24h。本发明采用超声辅助水蒸气蒸馏-热水耦合提取，经过一次加热水提过程就能够同时获得芫荽精油和多糖组分，一方面能够提高精油和多糖的产率，另一方面制备方法简便高效且节能。

得到芫荽多糖后，本发明优选对芫荽多糖进行精制，所述精制的方式优选包括酶水解和除杂。在本发明中，所述酶水解优选采用向芫荽多糖溶液中加入木瓜蛋白酶进行水解，所述芫荽多糖溶液的质量浓度优选为5～10％，进一步优选为6～9％，更优选为7～8％；所述木瓜蛋白酶占芫荽多糖的2～4wt.％，进一步优选为2.5～3.5wt.％，更优选为3wt.％；所述酶水解优选在加热的条件下进行；所述加热的方式优选采用水浴加热，加热的温度优选为40～50℃，进一步优选为42～48℃，更优选为45℃；加热的时间优选为1～3h，进一步优选为1.5～2.5h，更优选为2h。

在酶水解后，本发明优选对水解后的溶液进行除杂，所述除杂的方式优选为向溶液中加入除杂试剂进行萃取，得到水相部分；在本发明的实施例中，所述除杂试剂具体为氯仿和正丁醇，所述氯仿和正丁醇的质量比优选为3～6∶1，进一步优选为3.5～5.5∶1，更优选为4～5∶1；所述除杂试剂的用量优选为多糖溶液体积的1/10～1/2，进一步优选为1/5～2/5，更优选为1/3。得到水相部分后，本发明优选对水相部分进行浓缩和醇提，得到芫荽多糖；所述浓缩的方式优选为减压蒸馏浓缩，所述浓缩后的体积优选为水相部分体积的1/5。本发明对所述减压蒸馏浓缩的条件参数没有特殊要求，能得到所需体积的浓缩液即可。得到浓缩液后，本发明优选对浓缩液进行醇提，所述醇提的方式优选为向浓缩液中加入95％乙醇，静置后离心，所得到的沉淀即为芫荽多糖；所述乙醇和浓缩液的体积比优选为2～5∶1，进一步优选为2.5～4.5∶1，更优选为3～4∶1；所述静置的时间优选为20～30h，进一步优选为22～28h，更优选为24h。本发明优选对醇提后得到的芫荽多糖进行干燥，所述干燥的方式优选为真空冷冻干燥；本发明对真空干燥的参数没有特殊要求，能够得到干燥的芫荽多糖即可。本发明采用酶水解和除杂的方式进行精制，能够有效的脱除多糖中的蛋白，使多糖的纯度更高。

本发明还提供了一种抗紫外抗氧化美白化妆品，包括以下质量百分含量的组分：芫荽提取物2.5～11％、甘油硬脂酸酯1～5％、棕榈酸异丙酯3～8％、鲸蜡硬脂酸醇1～5％、白油1～5％、硅油3～8％、维生素E0.5～1.5％、乳化剂1～3％、甘油1～3％、纳米钛白粉1～5％、苯氧乙醇0.3～1.0％和余量的去离子水；所述芫荽提取物为前述技术方案制备得到的芫荽精油和芫荽多糖。

以质量百分含量计，本发明提供的抗紫外抗氧化美白化妆品包括芫荽提取物2.5～11％，进一步优选为3～10.5％，更优选为3.5～10％，所述抗紫外抗氧化美白化妆品中芫荽精油的含量为0.5～3％，进一步优选为1～2.5％，更优选为1.5～2％；芫荽多糖的含量为2～8％，进一步优选为2.5～7.5％，更优选为3～7％。在本发明中，所述芫荽多糖除了具有锁水保湿的功效外，具有很好的抗紫外辐射和抗氧化性能；所述芫荽精油能够抑制酪氨酸酶活性，抑制黑色素的产生，具有美白的作用。

以质量百分含量计，本发明提供的抗紫外抗氧化美白化妆品包括甘油硬脂酸酯1～5％，进一步优选为1.5～4.5％，更优选为2～4％。在本发明中，所述甘油硬脂酸酯能够起到润滑和乳化的作用，可以将化妆品变成稳定的白色膏体。

以质量百分含量计，本发明提供的抗紫外抗氧化美白化妆品包括棕榈酸异丙酯3～8％，进一步优选为3.5～7.5％，更优选为4～7％。在本发明中，所述棕榈酸异丙酯能够增加化妆品的延展性，使化妆品细腻、光亮、无油腻感。

以质量百分含量计，本发明提供的抗紫外抗氧化美白化妆品包括鲸蜡硬脂酸醇1～5％，进一步优选为1.5～4.5％，更优选为2～4％。在本发明中，所述鲸蜡硬脂酸醇是一种非离子乳化剂，对皮肤可以起到保湿的作用。

以质量百分含量计，本发明提供的抗紫外抗氧化美白化妆品包括白油1～5％，进一步优选为1.5～4.5％，更优选为2～4％。在本发明中，所述白油能够阻隔皮肤水分蒸发，在化妆品中起润滑、保湿的作用。

以质量百分含量计，本发明提供的抗紫外抗氧化美白化妆品包括硅油3～8％，进一步优选为3.5～7.5％，更优选为4～7％。在本发明中，所述硅油能够在化妆品中起到保湿、润滑的作用，能调节肤感，使化妆品更易推开。

以质量百分含量计，本发明提供的抗紫外抗氧化美白化妆品包括维生素E0.5～1.5％，进一步优选为0.6～1.4％，更优选为0.7～1.3％。在本发明中，所述维生素E能够加快皮肤新陈代谢，促进皮肤修复和再生。

以质量百分含量计，本发明提供的抗紫外抗氧化美白化妆品包括乳化剂1～3％，进一步优选为1.2～2.8％，更优选为1.5～2.5％。在本发明中，所述乳化剂能够对化妆品中的精油成分起到乳化作用，使精油在化妆品中更加稳定。

以质量百分含量计，本发明提供的抗紫外抗氧化美白化妆品包括甘油1～3％，进一步优选为1.2～2.8％，更优选为1.5～2.5％。在本发明中，所述甘油能够使皮肤保持湿润。

以质量百分含量计，本发明提供的抗紫外抗氧化美白化妆品包括纳米钛白粉1～5％，进一步优选为1.5～4.5％，更优选为2～4％。在本发明中，所述纳米钛白粉作为物理防晒剂对紫外线起到吸收和阻隔作用。

以质量百分含量计，本发明提供的抗紫外抗氧化美白化妆品包括苯氧乙醇0.3～1.0％，进一步优选为0.4～0.9％，更优选为0.5～0.8％，在本发明中，所述苯氧乙醇能够起到防腐剂作用。

本发明还提供了所述抗紫外抗氧化美白化妆品的制备方法，包括一下步骤：

本发明将甘油硬脂酸酯、棕榈酸异丙酯、鲸蜡硬脂酸醇、白油、硅油、维生素E、乳化剂混合，得到油相体系。

本发明优选先将甘油硬脂酸酯、棕榈酸异丙酯和鲸蜡硬脂酸醇混合，在加热条件下，搅拌均匀；在本发明中，所述加热的温度优选为60～75℃，进一步优选为62～73℃，更优选为65～70℃；本发明对所述搅拌的条件没有特殊要求，能够混合均匀即可。混合均匀后，优选加入白油、硅油、维生素E和乳化剂，在加热条件下，搅拌均匀；在本发明中，所述加热的温度优选为85～95℃，进一步优选为87～93℃，更优选为85～90℃，所述搅拌的时间优选为15～30min，进一步优选为18～27min，更优选为20～25min。搅拌均匀后，优选将混合物降温至65～75℃得到油相体系。在上述温度下进行混合能够使油相体系中各组分互溶的更好。

本发明将甘油、纳米钛白粉和芫荽多糖分散在水中，得到水相体系。

本发明优选将甘油、纳米钛白粉和芫荽多糖分散在水中，在加热条件下，搅拌均匀；在本发明中，所述加热的温度优选为45～60℃，进一步优选为47～58℃，更优选为45～55℃；搅拌均匀后，优选在搅拌条件下升温至65～75℃得到水相体系。在上述温度下能够使水性体系的乳化效果更好。

本发明将所述油相体系、水相体系和芫荽精油、苯氧乙醇混合，得到抗紫外抗氧化美白化妆品。本发明优选将油相体系和水相体系在65～75℃下混合，搅拌均匀，待体系温度降至50～60℃后，加入芫荽精油后搅拌均匀，加入苯氧乙醇即得抗紫外抗氧化美白化妆品。在本发明中，上述制备过程能够防止精油的挥发，且能够使得各组分更好的乳化在产品中。

为了进一步说明本发明，下面结合附图和实施例对本发明提供的芫荽提取物在抗紫外辐射、抗氧化和美白化妆品中的应用和抗紫外抗氧化美白化妆品及其制备方法进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

将芫荽叶粉碎加入去离子水，芫荽叶和水的质量比为1∶20，在超声功率为250W、温度为60℃的条件下超声90min得到初级提取物。

将初级提取物进行水蒸气蒸馏，蒸馏的时间为4h，收集到的挥发油即为芫荽精油，剩余的底液即为提取液，其中芫荽精油的提取率为0.26～0.34％。

将提取液趁热进行过滤，取上清液进行减压蒸馏浓缩至上清液体积的1/5后得到浓缩液，加入4倍于浓缩液体积的95％乙醇，静置24h后离心，所得到的沉淀即为芫荽多糖。

将芫荽多糖配置成质量浓度为6％的溶液，加入3wt.％的木瓜蛋白酶；在45℃下水浴加热2h，然后加入多糖溶液体积1/3的除杂试剂(氯仿和正丁醇的质量比为5∶1)，进行萃取，得到水相部分。将水相部分蒸馏浓缩至体积的1/5后，加入4倍于浓缩液体积的95％乙醇，静置24h后离心，将沉淀进行真空冷冻干燥得到芫荽多糖。

实施例2

取实施例1所得到芫荽多糖和芫荽精油制备抗紫外抗氧化美白化妆品，按如下配方组分备料：甘油硬脂酸酯5％、棕榈酸异丙酯1.5％、鲸蜡硬脂酸醇2.5％、白油4％、硅油5％、维生素E 1％、芫荽精油2％，乳化剂2％，甘油3％、芫荽多糖5％、纳米钛白粉3％、苯氧乙醇0.5％和余量的去离子水。

将甘油硬脂酸酯、棕榈酸异丙酯和鲸蜡硬脂酸醇混合，在65℃下搅拌均匀后；加入白油、硅油、维生素E和乳化剂，在90℃下搅拌25min，然后降温至70℃得到油相体系；将甘油、纳米钛白粉和芫荽多糖分散在水中，在50℃下搅拌均匀；升温至70℃得到水相体系。

将油相体系和水相体系在70℃下混合均匀，降温至55℃后加入芫荽精油，搅拌均匀后加入苯氧乙醇得到抗紫外抗氧化美白化妆品。

实施例3

取实施例1所得到芫荽多糖和芫荽精油制备抗紫外抗氧化美白化妆品，按如下配方组分备料：甘油硬脂酸酯3％、棕榈酸异丙酯6％、鲸蜡硬脂酸醇3％、白油3％、硅油5％、维生素E 1％、芫荽精油1％、乳化剂2％、甘油2％、芫荽多糖5％、纳米钛白粉3％、苯氧乙醇0.5％和余量的去离子水。

将甘油硬脂酸酯、棕榈酸异丙和鲸蜡硬脂酸醇混合，在60℃下搅拌均匀后；加入白油、硅油、维生素E和乳化剂，在85℃下搅拌30min，然后降温至65℃得到油相体系；将甘油、纳米钛白粉和芫荽多糖分散在水中，在45℃下搅拌均匀；升温至65℃得到水相体系。

将油相体系和水相体系在65℃下混合均匀，降温至50℃后加入芫荽精油，搅拌均匀后加入苯氧乙醇得到抗紫外抗氧化美白化妆品。

实施例4

取实施例1所得到芫荽多糖和芫荽精油制备抗紫外抗氧化美白化妆品，按如下配方组分备料：甘油硬脂酸酯8％、棕榈酸异丙酯3％、鲸蜡硬脂酸醇1.5％、白油6％、硅油3％、维生素E 1.5％、芫荽精油0.5％、乳化剂1％、甘油2％、芫荽多糖8％、纳米钛白粉2％、苯氧乙醇1.0％和余量的去离子水。

将甘油硬脂酸酯、棕榈酸异丙酯和鲸蜡硬脂酸醇混合，在75℃下搅拌均匀后；加入白油、硅油、维生素E和乳化剂，在95℃下搅拌15min，然后降温至75℃得到油相体系；将甘油、纳米钛白粉和芫荽多糖分散在水中，在60℃下搅拌均匀；升温至75℃得到水相体系。

将油相体系和水相体系在75℃下混合合均匀，降温至60℃后加入芫荽精油，搅拌均匀后加入苯氧乙醇得到抗紫外抗氧化美白化妆品。

芫荽多糖的抗氧化性能验证：

实施例5

取实施例1所得到的芫荽多糖进行对超氧阴离子自由基的清除活性测定实验。

配置质量浓度为0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/mL的芫荽多糖溶液，精密量取0.05mol/L Tris-HCl缓冲液(pH 8.2)6.50mL，置于25℃水浴中预热20min，分别加入1.00mL不同浓度的芫荽多糖溶液和25mmol/L邻苯三酚溶液0.40mL，混匀后置于25℃水浴中反应5min，加入8mmol/L的HCl溶液1.00mL终止反应。在波长325nm处测定吸光度。每个试样作三次平行样份，取其均值为A3。阳性对照为维生素C，另参照上述操作分别测定相应的本底吸光度值A1、A2和A4，按下式计算超氧阴离子清除率：

清除率＝{[(A1-A2)-(A3-A4)]/(A1-A2)}*100％

A1：不含样品的吸光度值；

A2：不含样品和邻苯三酚的吸光度值；

A3：含有样品和邻苯三酚的吸光度值；

A4：含样品，但不含邻苯三酚的吸光度值。

芫荽多糖对超氧阴离子自由基的清除活性测试结果如表1和图1所示。

表1芫荽多糖对超氧阴离子自由基的清除活性测试结果

由表1可看出，在实验浓度范围内，随着维生素C和芫荽多糖浓度的升高，维生素C和芫荽多糖对超氧阴离子自由基的清除率也明显升高，芫荽多糖的半数抑制浓度(IC₅₀)值大约为0.40mg/mL，略高于维生素C的半数抑制浓度(0.28mg/mL)；这表明本发明的芫荽多糖和维生素C的对超氧阴离子自由基的清除活性在同一数量级水平。

实施例6

取实施例1所得到的芫荽多糖进行对羟自由基的清除活性测定实验。

配置质量浓度为0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/mL的芫荽多糖溶液，采用改良的Smirnoff水杨酸法，即利用H₂O₂与Fe²⁺反应产生羟自由基，在体系内加入水杨酸捕捉羟自由基并产生有色物质，该物质在510nm处有最大吸收。用10mL具塞试管，每管加入10mmol/LFeSO₄溶液和10mmol/L的水杨酸溶液各1mL及不同浓度的芫荽多糖溶液1mL，最后加入9mmol/L的H₂O₂溶液1mL启动反应，并加蒸馏水至10mL，于37℃水浴中作用30min后，以蒸馏水调零，测定510nm处吸光度。每个试样作三个平行样份，取其平均值A1。阳性对照为维生素C，另参照上述操作分别测定相应的本底吸光度值A2，按下式计算羟自由基清除率：

清除率＝[1-(A1-A2)/A0]×100％

A0：不加样品，即以1mL蒸馏水代替样品加入体系中；

A1：加样反应；

A2：加样但不反应，即以1mL蒸馏水代替H₂O₂溶液加入体系中。

芫荽多糖对超羟自由基的清除活性测试结果如表2和图2所示。

表2芫荽多糖对羟自由基的清除活性测试结果

由表2可看出，随着浓度的增大，芫荽多糖清除羟基自由基作用显著，且清除能力与浓度有明显的量效关系，其IC₅₀值与维生素C几乎相等，说明本发明得到的芫荽多糖在清除羟自由基的能力与维生素C相当。

实施例7

取实施例1所得到的芫荽多糖进行抗脂质过氧化活性测定实验。

配置质量浓度为0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/mL的芫荽多糖溶液，精密量取0.50mL卵磷脂溶液，加入pH值为7.4的PBS缓冲液1.00mL，不同浓度的芫荽多糖溶液1.00mL，2.5mmol/L EDTA-Fe(II)1.00mL，混匀后在37℃水浴中反应45min，再加入28％(w/v)的三氯乙酸2.00mL，1％(w/v)的硫代巴比妥酸1.00mL，混匀后置于100℃沸水浴中加热10min，冷却后在532nm处测定吸光度。用PBS缓冲液调零，空白管用PBS缓冲液代替样品测吸光度A0。每个试样作三个平行样份，取其平均值A1。阳性对照为维生素C。按下式计算脂质过氧化抑制率：

抑制率(％)＝[(A0-A1)/A0]*100％

A0：不含样品的吸光度；

A1：含样品的吸光度。

芫荽多糖抗脂质过氧化活性测试结果如表3和图3所示。

表3芫荽多糖抗脂质过氧化活性测试结果

由表3可看出，芫荽多糖对Fe²⁺引发的卵磷脂脂质体过氧化有抑制作用，抑制率随着浓度的增加而缓慢增大，与维生素C对脂质过氧化的抑制率相当。

超氧阴离子自由基是一种与人体密切相关的有害自由基，它们攻击生物大分子，使其交链或断裂，引起细胞结构和功能的破坏，从而造成衰老；羟自由基是人体中最活泼、对机体危害最大的自由基，它可与脂类、多肽、蛋白质和DNA等反应，引发不饱和脂肪酸氧化，形成脂质过氧化物(LPO)，破坏膜结构，导致细胞和组织器官损伤，诱发各种疾病，加快生物体的衰老；脂质过氧化能够损害生物膜及其功能，以致形成细胞透明性病变、纤维化，大面积细胞损伤造成进皮肤、神经、组织、器官等损伤。由表1～3可知，芫荽多糖对超氧阴离子自由基和羟自由基都有很好的清除能力，且对脂质过氧化也具有很好的抑制作用，具有较优异的体外抗氧化活性。

芫荽多糖的抗紫外辐射性能验证：

实施例8

取实施例1所得到芫荽多糖进行抗紫外辐射测试，采用大肠杆菌作为模型菌体进行了体外辐射试验，来检测芫荽多糖的抗紫外辐射保护作用。

1.悬菌液的制备

取出冷冻菌种，准备好无菌试管(带塞)、灭菌的LB液体培养基和移液枪。在超净工作台内，先向带塞试管中加入1/2的LB液体培养基，再用移液枪取0.5mL菌种加入试管中，最后盖上塞子后放入摇床培养18h-24h，温度为37℃，转速为180rpm，结束后取出放冰箱冷藏备用。

2.不同浓度多糖溶液的制备

精确称量芫荽多糖粉末5g溶于100mL无菌生理盐水中，制成浓度为5％的溶液，再稀释十倍得到0.5％的溶液，冷藏备用。

3.固体营养琼脂培养基的制备

精确称量胰蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化钠10g、琼脂粉20g置于烧杯中，再向烧杯中加入1000mL的蒸馏水，加热并搅拌使其充分溶解后，倒入锥形瓶中封口，放入高压灭菌锅内121℃灭菌20min，灭菌结束后分装倒入灭菌平板中，等完全冷却凝固后放入冰箱冷藏，备用。

4.体外菌体辐射实验

取三个灭菌后的平板，用移液管向每个平板中加入1mL之前配制的菌悬液，向两个平板中分别加入9mL不同浓度的芫荽多糖溶液，还有一个作为空白对照组，加入9mL的无菌生理盐水。充分混匀后将平板置于紫外灯下，从打开紫外灯开始计时，至关闭紫外灯时终止。从经过不同时间紫外照射的平板中分别取出100μL混合菌液，再根据不同浓度要求，用无菌生理盐水逐步稀释，最后将稀释过的混合菌液用移液枪取20μL分别加入相应标注的营养琼脂培养基平板内。最后将加入了混合菌液的培养基平板放入温箱内37℃培养24h。

通过观察结果，确定了菌悬液最佳稀释倍数为100，紫外照射时间取0min、5min、10min和15min，在此条件下观察活菌数量的变化。实验参数设计如表4所示，实验结果如表5所示。

表4大肠杆菌混合菌液抗紫外辐射实验设计

表5大肠杆菌混合菌液抗紫外辐射实验结果

	0min	5min	10min	15min
					空白对照组	+++	+	-	-
0.5％多糖溶液组	+++	+++	++	+
					5％多糖溶液组	+++	+++	++	++

注：+++代表菌落数≥20个，++代表菌落数≥10个，+代表菌落数≥5个，-代表无肉眼可见菌落数。

从表5可以明显看出，空白对照组中的大肠杆菌在紫外照射5min后就只剩下了少数存活，且从10min之后培养基上就没有存活的大肠杆菌。浓度为0.5％芫荽多糖溶液组，从5min、10min、15min这三个时间段的培养基上可以明显的看出大肠杆菌存活数量也是逐步降低，但在照射了15min之后培养基上仍然有存活的大肠杆菌。浓度为5％的芫荽多糖溶液组，大肠杆菌数量从5min、10min、15min这三个时间段的培养基上也是逐渐减少的状态，但即使在照射15min后的培养基上依然存在着较多数量的存活大肠杆菌。综上所述，芫荽多糖溶液在相同环境和时间下被紫外照射，呈现出了对于大肠杆菌抗紫外辐射保护作用，且作用效果随浓度增大而增加。

芫荽精油抑制酪氨酸酶性能验证：

实施例9

取实施例1所得到的芫荽精油进行抑制酪氨酸酶测试。

1.试剂配制

磷酸钠缓冲液(1/15M，pH＝6.8)：精确称取1.0001g磷酸二氢钠，1.1860g磷酸氢二钠，加入少量去离子水溶解后，定容至500mL，4℃冰箱保存备用。

L-酪氨酸溶液(7.5mmol/L)：精确称取L-酪氨酸0.2721g，先加入数滴浓盐酸，加去离子水约50mL，微热完全溶解后，用氢氧化钠溶液调pH至7.0，加去离子水定容至200mL。

受试液：精确称取芫荽精油0.1000g，溶于20mL二甲基亚砜，得到5mg/mL的待测液，再对倍稀释到2.5mg/mL、1.25mg/mL、0.625mg/mL、0.3125mg/mL、0.15625mg/mL。

阳性对照(+CK)：精确称取0.1000g熊果苷粉末，溶于20mL的去离子水中，得到5.00mg/mL的阳性对照母液，再对倍稀释到2.5mg/mL、1.2500mg/mL、0.6250mg/mL、0.3125mg/mL、0.1562mg/mL。

2.酪氨酸酶液的制备

将马铃薯洗净，于4℃预冷4h左右。去皮后切成约1×1×1cm³丁状，于-20℃冷冻过夜。按1∶1(W∶V)的比例加入4℃预冷的磷酸钠缓冲液，用组织捣碎机制成匀浆，采用3层纱布过滤，滤液于4000r/min离心10min，上清即为所得的酪氨酸酶粗酶液，4℃保存，2h内用完。

3.样品对酪氨酸酶活性的抑制

向试管中依次加入磷酸盐缓冲液、不同浓度梯度的受试液(包括阳性对照)、酶液，于30℃水浴10min。然后加入底物L-酪氨酸，立即开始计时。测定反应20min时475nm波长下的吸光值。测定时以相应的阴性对照为参比，用下列公式计算受试液(包括阳性对照)对酪氨酸酶的抑制率，并依据浓度-酶抑制率曲线估算半数抑制浓度(IC₅₀)的近似值。每个实验做3个平行实验。芫荽精油抑制酪氨酸酶的活性的试验参数设置如表6所示，测试结果如表7和图4所示。

抑制率＝[(A-B)/A]*100％

其中，“A”为标准对照的吸光值，“B”为受试液(或阳性对照)的吸光值。

表6芫荽精油抑制酪氨酶活性试验参数设计

表7芫荽精油抑制酪氨酸酶活性测试结果

从表7可以看出，在实验浓度范围内，随着浓度的升高，样品及阳性对照对酪氨酸酶的抑制率均呈上升趋势，均表现为剂量依赖性抑制。在实验浓度范围内，芫荽精油对酪氨酸酶的抑制率明显高于熊果苷。

实施例10

取实施例2得到的抗紫外抗氧化美白化妆品进行皮肤敏感度测试

受试人群：受试者共48人，男12人，女36人，年龄在25-59岁之间，身体健康。

将抗紫外抗氧化美白化妆品作为试验组进行皮肤敏感度测试，同时以水作为空白组，并以辅料本底作为阴性组。具体测试方法为：将受试者随机均分为6组，组1-3对应涂抹实施例2制得的抗紫外抗氧化美白化妆品，组4为空白组，组5为阴性组。

采用的检测方法是斑贴试验：选择斑试器，以封闭式斑贴试验方法，将受试物0.020-0.025ml涂于斑试器内，外用专用胶带贴敷于受试者背部，24h后去除受试物，分别于去除后0.5h、24h、48h观察皮肤反应，按《化妆品卫生规范》(2015年版)中皮肤反应分级标准记录不同反应的人数。具体结果如表8所示。

表8人体皮肤斑贴试验结果

组别	0.5h敏感人数	24h敏感人数	48h敏感人数
				组1	0	0	0
组2	0	0	0
				组3	0	0	0
组4	0	0	0
				组5	0	0	0

从表8人体皮肤斑贴试验结果可以看出，本发明提供的抗紫外抗氧化美白化妆品无一人出现皮肤不良反应，说明本发明提供的抗紫外防晒化妆品均对人体无刺激，安全可靠。

实施例11

取实施例2得到的抗紫外抗氧化美白化妆品进行志愿者试用测试。

受试人群：志愿者20人，均为女性，18～55周岁，身体健康，时间30d。

受试人员按防晒类化妆品使用方法，在外出前15min涂抹于身体暴露肌肤，如在室外超过3h则需要再次涂抹。试用结果如表9所示。

表9抗紫外抗氧化美白化妆品试用结果

由表9可以看出，30天试用结束后，所有受试人员未发现有红痒和刺激反应，自述感觉爽滑舒适，无油腻感，特别适合在夏天使用。

由以上实施例可知，芫荽多糖具有优异的体外抗氧化性能和抗紫外辐射性能，芫荽精油能够抑制酪氨酸酶活性。添加有芫荽多糖和芫荽精油的化妆品能够控制黑色素的生成，起到美白的作用，同时能够积极保护人体皮肤，隔绝外界的刺激、炎症及紫外线污染等造成的皮肤老化问题等，使肌肤能保持较为持久的水润健康状态。同时化妆品对人体无刺激，安全可靠。

尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。

Claims

1.一种芫荽提取物作为唯一活性成分在制备同时具有抗紫外辐射、抗氧化美白效果的化妆品中的应用；

所述芫荽提取物的有效成分为芫荽精油和芫荽多糖；

所述同时具有抗紫外辐射、抗氧化美白效果的化妆品中芫荽精油的含量为0.5~3%，芫荽多糖的含量为2~8%；

所述芫荽提取物的制备包括以下步骤：

将芫荽叶粉碎加入去离子水，芫荽叶和水的质量比为1∶20，在超声功率为250W、温度为60℃的条件下超声90min得到初级提取物；

将所述初级提取物进行水蒸气蒸馏，蒸馏的时间为4h，收集到的挥发油即为芫荽精油，剩余的底液即为提取液；

将所述提取液趁热进行过滤，取上清液进行减压蒸馏浓缩至上清液体积的1/5后得到浓缩液，加入4倍于浓缩液体积的95％乙醇，静置24h后离心，所得到的沉淀即为芫荽多糖；

将所述芫荽多糖配置成质量浓度为6％的溶液，加入3wt.％的木瓜蛋白酶；在45℃下水浴加热2h，然后加入多糖溶液体积1/3的除杂试剂，进行萃取，得到水相部分；所述除杂试剂包括氯仿和正丁醇；所述氯仿和正丁醇的质量比为5∶1；

将所述水相部分蒸馏浓缩至体积的1/5后，加入4倍于浓缩液体积的95％乙醇，静置24h后离心，将沉淀进行真空冷冻干燥得到芫荽多糖。

2. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述同时具有抗紫外辐射、抗氧化美白效果的化妆品，包括以下质量百分含量的组分：甘油硬脂酸酯5％、棕榈酸异丙酯1.5％、鲸蜡硬脂酸醇2.5％、白油4％、硅油5％、维生素E 1％、芫荽精油2％、乳化剂2％、甘油3％、芫荽多糖5％、纳米钛白粉3％、苯氧乙醇0.5％和余量的去离子水。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述同时具有抗紫外辐射、抗氧化美白效果的化妆品的制备方法，包括以下步骤：

将所述油相体系、水相体系和芫荽精油、苯氧乙醇混合，得到所述同时具有抗紫外辐射、抗氧化美白效果的化妆品。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述油相体系和水相体系混合时的温度为65~75℃。