CN107303255B - 具有抗炎、抗过敏和特应性皮肤改善作用的高粱发酵产物，其制备方法及其化妆料组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供制备具有抗炎、抗过敏和特应性皮肤改善作用的高粱发酵产物的方法，所述方法包括如下步骤：通过将高粱粉碎，获得高粱粉末(S10)；通过酸水解所述高粱粉末，获得高粱溶液(S20)；通过在所述高粱溶液中加入中和剂，调节pH(S30)；使用用于发酵的肠道细菌或乳杆菌接种所述调节pH后的高粱溶液之后，获得高粱发酵产物(S40)；以及通过灭菌、过滤和冷冻干燥所述高粱发酵产物，获得高粱发酵粉末(S50)。此外，本发明提供含有具有抗炎、抗过敏和特应性皮肤改善作用的高粱发酵产物的化妆料组合物。

Description

具有抗炎、抗过敏和特应性皮肤改善作用的高粱发酵产物，其 制备方法及其化妆料组合物
技术领域
本发明涉及具有抗炎、抗过敏和特应性皮肤改善作用的高粱发酵产物及其制备方法，更具体地，涉及具有抗炎、抗过敏和特应性皮肤改善作用的高粱发酵产物及其制备方法，其中，将高粱茎和叶粉碎后，获得高粱粉末，提供通过用肠道细菌和乳杆菌接种和发酵所述高粱粉末而获得的发酵材料，从而除去细胞中的自由基并阻止脂质过氧化、脂氧合酶和透明质酸酶的活性。
此外，本发明涉及包含具有抗炎、抗过敏和特应性皮肤改善作用的高梁发酵产物的化妆料组合物及其制备方法，通过提供含有高粱发酵产物的化妆料组合物用于改善皮肤的炎症、过敏和特应性皮肤并防止皮肤刺激物的副作用。
背景技术
1950年代中期，D.Harman提出了一种自由基理论，最近引起学术界和相关工业的关注。
由于数种原因，自由基存在于人体内。自由基导致细胞的破坏、真皮层中结缔组织的切割或交联，从而导致诸如皱纹形成、皮肤癌、细胞破坏、类风湿性关节炎、特应性皮炎和痤疮等各种问题。
自由基的产生由白血细胞吞噬、线粒体中ATP生产过程中的电子传递系统、髓过氧化物(MPO)功能、紫外线、烟雾、正常代谢过程、应激、污染物、细菌等引起。
人体具有超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶、维生素E、维生素C和泛酚等抗氧化剂(自由基清除剂)。然而，抗氧化系统会开始逐渐由年龄、污染、紫外线和应激所破坏。
因此，抗氧化剂体系失效，自由基会逐渐增加。
自由基破坏真皮结缔组织如胶原蛋白、弹性蛋白和透明质酸，由此在皮肤的某些区域引起沉陷现象(皱纹)，并且，自由基通过氧化细胞膜的脂质部分导致细胞的破坏现象，从而引起皮肤痤疮和皮肤癌等疾病。
此外，自由基可能在形成黑色素期间参与自氧化(多巴醌黑色素)，从而引起黑斑病、雀斑和皱纹(Journal of Korea Society of cosmetics，Vol.23，No.1，75-132)。
炎症是一种生理反应，用于保护活体免受有害环境的侵害，例如细菌和物理损伤等异物的入侵。
炎症现象引起了数种多形核粒细胞(PMN)和免疫物质的大量增加。
这些细胞可以通过分泌炎症细胞产物如各种类型的蛋白水解酶和细胞分裂素来进行治愈和防御。
酶，诸如弹性蛋白酶、透明质酸酶和脂氧合酶作为在炎症期间产生的蛋白质和脂质分解酶是众所周知的。
同时，上述酶的功能有时会对邻近的组织细胞和非细胞成分产生损伤甚至对其有害。
因此，炎症在适当的条件下会被恢复到正常功能，然而，当刺激炎症的刺激物不消失或不断产生时，结果是引起慢性炎症，这会对组织造成更严重的损伤。
因此，细胞和结缔组织被过度炎症引起的蛋白水解酶损伤，对结缔组织的损伤降低了皮肤的弹性，引起皱纹。
此外，所述损伤对细胞的再生和增殖产生负面影响，从而导致皮肤老化加快。
此外，皮肤的炎症以局部红斑和肿胀为特性。
当所述损伤变得更大时，通过由成纤维细胞增殖和结缔组织蛋白的积聚引起的瘢痕组织会在分散步骤中恢复为正常组织。
然而，当组织受到严重损伤和炎症持续时，将组织恢复到正常的组织结构和功能变得更加困难。
通过使用花生四烯酸的方法，也产生刺激白细胞随炎症迁移的介质。
该路径包括通过环氧合酶的方法和脂氧合酶的方法，并且由酶产生的白三烯和前列腺素作为炎症诱导因子。
因此，脂氧合酶和环氧合酶的抑制剂可以显示出作为抑制炎性诱导物质的产生、抑制细胞膜破坏以及由炎症期间产生的活性氧引起的脂质过氧化作用的物质的抗炎作用。
此外，由过度炎症产生的蛋白酶和脂肪酶得到抑制，以保护可能被蛋白酶和脂肪酶损伤的细胞，进而抑制皮肤老化。
此外，特应性皮肤主要发生在婴儿期，所以称为“出生热”。
特应性皮肤主要是由于死亡的皮肤细胞层内的神经酰胺含量降低而产生的。
当死亡的皮肤细胞层的保湿功能降低时，皮肤变干，容易产生死亡的皮肤细胞，当皮肤屏障功能降低时，刺激诱导物质侵入死亡的皮肤细胞层引起刺激，当难以侵入正常皮肤的抗原蛋白质侵入时，会产生皮肤过敏等，从而能引起难以忍受的瘙痒症状。
因此，超过90％的特应性患者感染葡萄球菌，其中，由于患者因难以忍受瘙痒而挠伤，患者有时被细菌感染，然而，根据最近的报告，细菌的外毒素诱导刺激身体免疫系统的化学物质而引起过敏，从而使特应性皮肤恶化。也就是说，细菌本身就是一种过敏原。
众所周知，目前特应性皮肤由四个原因引起。首先是遗传因素。由于作为保护皮肤的皮肤保护层的细胞膜的磷脂以及作为形成细胞内脂质的必需脂肪酸的γ-亚油酸(GLA)这一粘合物质的状态不足，皮肤保护层不能硬化，皮肤表面的水分容易失去，易于由外部刺激引起过敏。第二个原因是由环境因素引起。随着现代人的居住环境发生变化，公寓的生活得到普及，生活环境变为干燥状态，特应性皮肤在世界各地越来越多。因此，保水能力下降，皮肤保护功能丧失，皮肤甚至对于少量的刺激物也会敏感地反应，从而产生过敏。第三个原因是由活性氧引起。过氧化物脂质是由活性氧产生，导致特应性皮肤。作为第四个原因，特应性皮肤是由细菌、病毒和真菌的感染引起的。据报道，这些原因是以组合方式相关的(Dermatology，韩国皮肤病学协会出版委员会，Ryo Moon Gak.P.Co，1992)。
例如，关于抗炎、抗过敏和特应性皮肤的相关现有技术，韩国专利公开号10-1051077公开了2-哌嗪基-4,5-二取代-1,3-噻唑衍生物、其制备方法、由含有其作为活性成分的SPC活性诱导的抗炎症治疗剂。具体地说，上述专利文件的公开内容涉及与炎症相关的疾病的治疗剂，对于由含有2-哌嗪基-4,5-二取代-1,3-噻唑衍生物或由其分离的光学异构体作为活性成分的SPC受体的活性引起的其它疾病、瘙痒或皮肤感染引起的特应性皮炎有效。
上述相关现有技术的优点在于大量生产是可能的并且是便宜的。
然而，上述相关现有技术是通过人工有机合成来制造化合物，因而存在因合成时的稳定性低而难以获得实质效果的问题，并且化合物造成因人而异的副作用。
因此，为了降低该技术的副作用，需要包含对有机合成化合物以外的、人体副作用较少的天然提取物的组合物。
作为解决上述问题的相关现有技术，韩国专利公开号10-1262813公开了一种组合物，其包含苦木提取物作为预防和治疗特应性皮炎或过敏性皮肤病的活性成分。更具体地，通过使用回流提取器浓缩所述苦木提取物并冷冻干燥该浓缩物，获得苦木提取物。
相关现有技术涉及通过提取天然提取物而获得的组合物，其优点在于其比通过有机合成提取的治疗剂具有更少的副作用，活性成分的破坏最小化。
然而，通过使用回流提取器提取的方式存在因使用高能量而增加成本、降低稳定性的问题，并且，因为在高温下进行提取，由于成分变性引起对特应性皮炎或过敏性皮肤疾病的效果降低。
因此，为了降低技术的副作用，需要通过发酵进行提取，同时尽量减少能量损失和提取成分的变性，而不是在高温下加热的方式。
作为解决上述问题的相关现有技术，韩国专利公开号10-1403523公开了一种制备主要含有发酵发芽谷物的发酵化妆品的方法。具体地，上述专利文件的公开内容提供了通过研磨机粉碎颗粒，将纤维素酶植入谷物并发酵所述谷物而获得的发酵化妆品。
由于相关现有技术是通过将谷物(糙米、绿豆、黑芝麻、高粱、薏仁、黑豆和小黑豆)发芽，植入植物乳杆菌并在室温的温度条件下发酵而实现，因此，其优点在于，没有能量损失、没有因成分变性引起的稳定性降低和损失。
然而，它的缺点在于发酵需要花费太多时间，并且不能实现抗炎、抗过敏和特应性皮肤改善作用。
因此，需要减少谷物发酵时间的方法，同时也需要具有抗炎、抗过敏和特应性皮肤改善作用的天然提取物。
发明内容
本发明是为了解决上述问题而提出的，其目的在于提供具有抗炎、抗过敏、特应性皮肤改善作用的高粱发酵产物及其制备方法，所述方法包括：通过将高粱茎(高粱秸秆)和叶粉碎，获得粉末形式的高粱，通过使用酸对所获得的高粱粉末进行水解，通过使用中和剂调节pH值，对拉乌尔(Raoultella)菌株或明串珠菌(Leuconostoc)菌株进行接种和发酵，以获得高粱发酵产物，从而缩短发酵时间，并具有抗炎、抗过敏和特应性皮肤改善作用。
另外，本发明提供含有高粱发酵产物的化妆料组合物，本发明的目的在于提供一种含有高粱发酵产物的化妆料组合物，其具有用于细胞内自由基清除作用、脂质过氧化反应抑制作用、透明质酸酶活性抑制作用、脂氧合酶活性抑制作用的抗炎、抗过敏和特异性皮肤改善作用。
本发明提供了具有消炎、抗过敏和特应性皮肤改善作用的高粱发酵产物，其中，将高粱粉碎，酸水解，中和，并使用肠道细菌或乳杆菌进行发酵。
另外，本发明提供一种制备具有抗炎、抗过敏、特应性皮肤改善作用的高粱发酵产物的方法，所述方法包括如下步骤：通过将高粱粉碎，获得高粱粉末(S10)；通过酸水解所述高粱粉末，获得高粱溶液(S20)；通过在所述高粱溶液中加入中和剂调节pH(S30)；使用用于发酵的肠道细菌或乳杆菌接种所述调节pH后的高粱溶液之后，获得高粱发酵产物(S40)；以及通过灭菌、过滤和冷冻干燥所述高粱发酵产物，获得高粱发酵粉末(S50)。
此外，本发明提供含有具有抗炎、抗过敏、特应性皮肤改善作用的高粱发酵产物的化妆料组合物。
如上所述，根据本发明，制备具有抗炎、抗过敏和特应性皮肤改善作用的高粱发酵产物的方法包括：通过将高粱茎(高粱秸秆)和叶粉碎，获得粉末形式的高粱；通过使用酸对所获得的高粱粉末进行水解；通过加入中和剂调节pH；以及对拉乌尔(Raoultella)菌株或明串珠菌(Leuconostoc)菌株进行接种和发酵，以提供高粱发酵产物，使得可以除去细胞中的自由基，同时可以抑制脂质过氧化、透明质酸酶活性和脂氧合酶活性。
此外，根据本发明，含有具有抗炎、抗过敏、特应性皮肤改善作用的高粱发酵产物的化妆料组合物可以改善皮肤的炎症、过敏和特应性皮肤，并且可以防止皮肤刺激物的副作用。
附图说明
图1是表示本发明的具有抗炎、抗过敏和特应性皮肤改善作用的高粱发酵产物的制备方法的流程图。
具体实施方式
通过对各种天然材料进行调研以发现具有抗炎、抗过敏和特应性皮肤改善作用的基础材料，本发明已经发现高粱发酵产物具有非常优异的效果，例如抗炎、抗过敏和特应性皮肤改善作用，通过使用该发酵产物同时解决产品的稳定性和安全性。
此外，还发现在实验结果中，高粱发酵产物与预定浓度或更高浓度的化妆料组合物混合并直接施用于人皮肤上，皮肤状态明显得到改善。
以下，对本发明进行详细说明。
本发明提供了具有消炎、抗过敏和特应性皮肤改善作用的高粱发酵产物，其中，将高粱粉碎，酸水解，中和，并使用肠道细菌或乳杆菌发酵。
高粱(Sorghum Bicolor)是单子叶禾本科植物的一年生植物，由于耐旱性强，在贫瘠和干燥的土壤中生长，作为亚洲和非洲的重要食物来源而被栽培，在韩国也被作为食物来源与水稻、大麦、小麦和玉米一起而被栽培。高梁有各种各样的种类，根据用途分为食用高梁、糖用高梁和帚用高梁等(Chang等，2005)。帚用高梁在穗上没有茎节，连接穗体(pod)的茎杆长度为20厘米至30厘米，果实具有即使是脱粒也很难剥开的厚壳，因此果实只能作为种子使用。作为民间疗法，帚用高梁已经被用于各种症状，如改善食欲、促进消化、维持体温、保护胃肠道和解毒。已知高粱含有大量的活性成分，例如膳食纤维、酚类化合物和单宁，然而，红高粱具有不包括单宁的特征。酚类化合物主要包括类黄酮、酚酸和花青素，其中大多数被称为黄酮类化合物(Ryu HS,Kim J,Kim HS.2006.Enhancing effect of sorghumbicolor L.Moench(sorghum,su su)extracts on mouse spleen and macrophage cellactivation.J.Korean Diet.Assoc.19:176-182.)(Chae KY,Hong JS.2006.Qualitycharacteristics of Sulgidduk with different amounts of waxy sorghumflour.Korean J Food Cookery Sci 22:363-369.,Chang HG,Park YS.2005.Effects ofwaxy and normal sorghum flours on sponge cake properties.Food Eng Prog 9:199-207.)(Kim KO,Kim HS,Ryu HS.2006.Effect of Sorghum bicolor L.Moench(sorghum,su-su)Water extracts on mouse immune cell activation.J Korean Diet Assoc 12:82-88.)。
尽管可以使用高粱的各个部位，但优选使用茎或叶。
将高粱粉碎，酸水解，中和，得到具有抗炎、抗过敏和特应性皮肤改善作用的活性成分，使用肠道细菌或乳杆菌发酵，得到高粱发酵产物。
也就是说，本发明的高粱发酵产物具有除去细胞中的自由基并抑制脂质过氧化、脂氧合酶和透明质酸酶的活性的优异效果。
将参照附图描述使用高粱制备高粱发酵产物的方法。
图1是表示本发明的具有抗炎、抗过敏和特应性皮肤改善作用的高粱发酵制品的制备方法的流程图。
将参照附图描述本发明的优选实施例。本发明的具有抗炎、抗过敏和特应性皮肤改善作用的高粱发酵产物的制备方法优选包括以下步骤，但不限于此。
本发明包括通过在粉碎机中将高粱粉碎，获得高粱粉末(S10)；通过酸水解所述高粱粉末，获得高粱溶液(S20)；通过向所述高粱溶液中加入中和剂，调节pH(S30)；使用肠道细菌或乳杆菌接种所述调节pH值后的高梁溶液之后，使所述接种后的溶液发酵，获得高粱发酵产物(S40)；以及通过对所述高粱发酵产物进行灭菌，过滤和冷冻干燥，获得高粱发酵粉末(S50)。
本发明的制备方法将对于每个步骤分别进行描述。
实施通过将粉碎机中的高粱粉碎获得高梁粉末的步骤S10。
将高粱在阴凉处干燥，以2500rpm至3500rpm的转速在粉碎机中将其粉碎，其中，优选的粉碎后的高粱粒径为约0.1μm-35μm。
此外，粉碎高粱期间，当粉碎机的转速为2500rpm以下时，由于高粱粘在另一高粱上，高粱几乎不被粉碎；当粉碎机的转速为3500rpm以上时，由于能量成本的增加、噪音以及高粱与粉碎机之间的摩擦，高粱的活性成分被破坏。
实施通过酸水解所述高粱粉末获得所述高粱溶液的步骤S20。通过选择硫酸、盐酸、硝酸、乙酸、甲酸和磷酸中的至少一种，可以将步骤S10中得到的高粱粉末进行酸水解，其中，更优选使用硫酸、硝酸或盐酸进行酸水解，最优选地，可以使用硫酸进行酸水解。
根据本发明，硫酸从0.1％-3.0％(v/v)的稀硫酸制备，并且加入稀硫酸后，将步骤S10中获得的高粱粉末在100℃-130℃进行15-60分钟的热处理。
优选使用0.5-2.0％(v/v)的稀硫酸进行20-40分钟的热处理。将所得产物保持在室温，并使用离心或膜过滤器分离以获得固相和高粱溶液。
实施通过将中和剂添加到所述高粱溶液中调节pH的步骤S30。
通过选择碳酸钙(CaCO3)、氢氧化钠(NaOH)、碳酸钠(Na2CO3)和氢氧化钙(Ca(OH)2)中的至少一种中和所述高粱溶液，优选地，通过加入碳酸钙将pH值调节至5.0至7.0。
实施使用肠道细菌或乳杆菌接种所述调节pH后的高粱溶液之后，得到发酵的高粱发酵产物的步骤S40。
通过使用0.1μm-0.5μm的膜过滤器过滤步骤S30中获得的提取物，经过预培养活性增加的肠道细菌或乳杆菌进行预培养使得具有0.9的OD570值，然后，将其接种到高粱悬浮液中，使其成为相对于总重量为1重量％至5重量％(v/v)的浓度。
此外，优选单独使用或混合使用肠道细菌和乳杆菌。
优选地，肠道细菌(拉乌尔菌)可以包括选自以下的至少一种菌株：解鸟氨酸拉乌尔菌(Raoultella ornithinolytica)、植生拉乌尔菌(Raoultella planticola)和土生拉乌尔菌(Raoultella terrigena)。
优选地，乳杆菌(明串珠菌属)包括选自下列乳杆菌的至少一种菌株：肉色明串珠菌(Leaconostoc carnosum)、嗜柠檬酸明串珠菌(Leuconostoc citreum)、Leuconostocdurionis、欺诈明串珠菌(Leuconostoc fallax)、Leuconostoc ficulneum、Leuconostocfructosum、Leuconostoc garlicum、Leuconostoc gasicomitatum、冷明串珠菌(Leuconostoc gelidum)、仁海明串珠菌(Leuconostoc inhae)、泡菜明串珠菌(Leuconostoc kimchii)、乳酸明串珠菌(Leuconostoc lactis)、肠膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides)、Leuconostoc pseudoficulneum和假肠膜明串珠菌(Leaconostoc pseudomesenteroides)。
在30℃-37℃的培养温度、pH 4.0-6.0、搅拌速度150rpm-220rpm的条件下，通过使用10L的发酵罐培养24小时-48小时，得到高粱发酵产物。
实施通过对高粱发酵产物进行灭菌，过滤和冷冻干燥获得高粱发酵粉末的步骤S50。
所述发酵溶液进行灭菌(121℃、15分钟、1.5个大气压)以防止步骤S40中获得的发酵产物被进一步发酵。
将乙醇加入灭菌的高粱发酵产物中以防止发酵微生物进一步增殖，将浓度调节至乙醇水溶液最终浓度为30％(v/v)，并将高粱发酵产物在沸水中进行热提取，所述热提取在装配有冷凝器的提取器中、于70℃-90℃的范围内进行2至5次，每次进行3小时。所提取的高粱发酵产物通过100-500目的过滤器进行过滤，并用Advantec 5过滤器和Watman GF/C150mm过滤器在30℃-60℃的温度下过滤两次，最后仅针对高粱发酵液进行精确过滤。
此外，通过使用减压浓缩器将在50℃浓缩后的浓缩物冷冻干燥，从而获得干燥粉末。
根据本发明，具有抗炎、抗过敏和特应性皮肤改善作用的高粱发酵产物可以改善皮肤的炎症、过敏和特应性皮肤，不会对皮肤有毒性，可施用于敏感皮肤，并且即使长期使用时也不会产生皮肤副作用，因此，所述高粱发酵产物可用于各种化妆料组合物中。
此外，根据本发明，含有具有抗炎、抗过敏和特应性皮肤改善作用的高粱发酵产物的化妆料组合物具有优异的抗炎和皮肤改善效果，例如细胞内自由基清除作用、抑制脂质过氧化、透明质酸酶活性和脂氧合酶活性的抑制，所述化妆料组合物是安全的，因为在皮肤刺激试验中没有副作用，并且是由于生产成本低而易于使用的化妆品材料。因此，它是具有优异的功能性、安全性、低成本和容易使用的优异的化妆料组合物。
也就是说，高粱发酵化妆料组合物对于配方没有特别限制，例如可以配制为化妆水(cosmetic water)、爽肤水(toner)、乳液(lotion)、面霜、粉底、精华素、凝胶、面膜、乳液型紫外线阻隔霜、乳剂型粉底、乳液型隔离霜(emulsion type makeup base)、油饼型粉底(oil cake type foundation)、干湿两用粉饼(two-way cake)、粉饼(powder pact)或按摩膏的形式；优选地，可以配制为爽肤水、营养乳液、营养霜、按摩膏、精华素、面膜等的形式。
用于抗炎、抗过敏和特应性皮肤改善作用的高粱发酵产物可以作为液相以0.1重量％至30重量％的量加入到所述化妆料组合物中，按照干重0.001％至5％、优选0.01％至5％的量添加到化妆料组合物中，同时，通过使用装备有冷凝器的蒸馏装置循环利用蒸发出的溶剂。
以下，通过本发明的实施方式、对比例、实验例，对本发明的结构和效果进行详细说明，但本发明不限于此。
实施例1制备根据本发明的高粱发酵提取物和高粱粉末的方法(溶剂-水)
用流水清洗高粱叶或茎，以去除异物，在通风阴凉处干燥。将粉碎机中粉碎的1kg粉末加入到10L制备成2％(v/v)硫酸浓度的稀硫酸，在121℃进行30分钟的热处理，冷却，在室温下保持，在其中加入碳酸钙(CaCO3)，调节至pH 5.5，并使用离心机离心分离，从而制备得到用于发酵的预处理溶液。
将10L预处理溶液引入到20L的发酵罐，用300ml培养液接种，所述培养液通过预培养解鸟氨酸拉乌尔菌使其OD570值为0.9，在培养温度30℃-37℃、pH 4.0-6.0、搅拌速度150-220rpm、培养时间48小时的条件下进行发酵。发酵结束后，对发酵溶液进行灭菌(121℃、15分钟、1.5个大气压)以防止发酵溶液被进一步发酵。水作为溶剂加入到经灭菌的高粱发酵产物中以防止发酵微生物进一步增殖，将高粱发酵产物在沸水中进行热提取，所述热提取在装配有冷凝器的提取器中、于70℃-90℃的范围内进行2至5次，每次进行3小时。所述提取物通过300目的过滤器进行过滤，并使用Advantec 5过滤器和Watman GF/C 150mm过滤器在50℃的温度下过滤两次，最后仅针对0.1μm或更小的所述发酵提取物进行精确过滤。此外，通过使用减压浓缩器，在50℃浓缩该浓缩物，冷冻干燥，由此获得97.1克干粉。
实施例2制备根据本发明的高粱发酵提取物和高粱粉末的方法(溶剂-30％(v/v)乙醇)
采用30％(v/v)乙醇作为溶剂，以与实施例1相同的方式进行提取、浓缩和冷冻干燥，得到105.1g干粉。
实施例3制备根据本发明的高粱发酵提取物和高粱粉末的方法(溶剂-50％(v/v)的乙醇)
采用50％(v/v)乙醇作为溶剂，以与实施例1相同的方式进行提取、浓缩和冷冻干燥，得到103.9g干粉。
实施例4制备根据本发明的高粱发酵提取物和高粱粉末的方法(溶剂-70％(v/v)乙醇)
采用70％(v/v)乙醇作为溶剂，以与实施例1相同的方式进行提取、浓缩和冷冻干燥，得到102.7g干粉。
对比例1制备根据本发明的高粱提取物和高粱粉末的方法(溶剂-水)
用流水清洗高粱叶或茎，以除去异物，在透气阴凉处干燥。然后，将20kg水加入到处于粉碎机中的1kg粉碎粉末中，使用装配有冷凝器的提取器进行提取，提取条件为：在80℃热水中加热5小时，通过300目的过滤器在热的温度下过滤以从药材中分离提取物，密封以防止污染，在室温下放置3天，使用Advantec 5过滤器和Watman GF/C 150mm过滤器对沉淀过滤两次，使用减压浓缩器在50℃进行浓缩，冷冻干燥，得到干重71.2g。
对比例2制备根据本发明的高粱提取物和高粱粉末的方法(溶剂-30％(v/v)乙醇)
采用30％(v/v)乙醇作为溶剂，以与对比例1相同的方式进行提取、浓缩和冷冻干燥，得到干重82.6g。
对比例3制备根据本发明的高粱提取物和高粱粉末的方法(溶剂-乙醇50％(v/v))
采用50％(v/v)乙醇作为溶剂，以与对比例1相同的方式进行提取、浓缩和冷冻干燥，得到干重78.3g。
对比例4制备根据本发明的高粱提取物和高粱粉末的方法(溶剂-乙醇70％(v/v))
采用70％(v/v)乙醇作为溶剂，以与对比例1相同的方式进行提取、浓缩和冷冻干燥，得到干重77.5g。
制备实施例1含有根据本发明的具有抗炎、抗过敏和特应性皮肤改善作用的高粱发酵产物的化妆水的配制品
以下是包含实施例2的高粱叶和茎发酵产物粉末的化妆料的化妆水(皮肤乳液)的配方例。
表1
编号 原材料 含量(重量％)
1 高粱发酵粉末(实施例2) 1.0
2 甘油 3.0
3 丁二醇 2.0
4 丙二醇 2.0
5 聚氧乙烯氢化蓖麻油 1.0
6 乙醇 10.0
7 三乙醇胺 0.1
8 防腐剂 少量
9 着色剂 少量
10 香料 少量
11 纯净水 余量
制备方法
将编号为2、3、4和8的物料顺序加入编号为11的物料中，搅拌并溶解，通过在约60℃加热，将编号为5的物料溶解，将编号为10的物料加入并溶解，然后将其加入到编号为11的物料中。最后，将编号为1、6、7和9的物料加入，充分搅拌，老化。
制备实施例2含有根据本发明的具有抗炎、抗过敏和特应性皮肤改善作用的高粱发酵产物的营养乳液的配制品
表2示出包含实施例2的高粱叶和茎发酵产物粉末的化妆料的营养乳液的配方例。
表2
Figure GDA0002379334970000131
Figure GDA0002379334970000141
制备方法
将编号为10、11、13和16的物料在80℃-85℃之间的温度下加热，同时混合和搅拌，将其加入到制备单元，启动乳化器，将编号为2、3、4、5、6、7、8、9和12的物料在80℃-85℃之间的温度加热的同时溶解，乳化。乳化结束后，在使用搅拌器搅拌该乳液的同时，冷却至50℃后，将编号为15的物料加入所述乳液中，冷却至40℃后，将编号为14的物料加入所述乳液中，冷却至35℃后，将编号为1的物料加入所述乳液中，冷却至25℃，老化。
制备实施例3含有根据本发明的具有抗炎、抗过敏和特应性皮肤改善作用的高粱发酵产物的营养霜的配制品
表3示出了包含实施例2的高粱叶和茎发酵产物粉末的化妆料的营养霜的配方例。
表3
编号 原材料 含量(重量％)
1 高粱发酵粉末(实施例2) 1.0
2 硬脂酸 2.0
3 鲸蜡醇 2.0
4 单硬脂酸甘油酯 2.0
5 聚氧乙烯失水山梨醇单硬脂酸酯 0.5
6 失水山梨醇倍半油酸酯 0.5
7 单硬脂酸甘油酯/硬脂酸甘油酯/聚氧乙烯硬脂酸酯 1.0
8 蜡 1.0
9 液体石蜡 4.0
10 角鲨烷 4.0
11 辛酸/癸酸甘油三酯 4.0
12 羧乙烯基聚合物 0.3
13 丁二醇 5.0
14 甘油 3.0
15 三乙醇胺 0.5
16 纯净水 余量
制备方法
将编号为12、13、14和16的物料在80℃-85℃之间的温度下加热，同时混合和搅拌，将其加入到制备单元，将编号为2、3、4、5、6、7、8、9、10和11的物料在80℃-85℃之间的温度加热的同时溶解。然后，在搅拌的同时加入编号为15的物料，将其加入到制备单元。乳化结束后，在使用搅拌器搅拌该乳液的同时，将其冷却至35℃，将编号为1的物料加入所述乳液中，冷却至25℃，老化。
制备实施例4含有根据本发明的具有抗炎、抗过敏和特应性皮肤改善作用的高粱发酵产物的精华素的配制品
表4示出包含实施例2的高粱叶和茎发酵产物粉末的化妆料的精华素的配方例。
表4
编号 原材料 含量(重量％)
1 高粱发酵粉末(实施例2) 1.0
2 谷甾醇 1.7
3 聚甘油-2-油酸酯 1.5
4 神经酰胺 0.7
5 硬脂醇聚醚-4 1.2
6 胆固醇 1.5
7 磷酸二鲸蜡酯 0.4
8 浓缩甘油 5.0
9 澳洲坚果油 15.0
10 羧乙烯基聚合物 0.2
11 黄原胶 0.2
12 防腐剂 少量
13 香料 少量
14 纯净水 余量
制备方法
将编号为2、3、4、5和6的物料恒温均质，并称之为非离子两亲脂质。所述非离子两亲脂质与编号为1、7、8和14的物料混合，恒温均质，通过微流化装置，然后向其中缓慢地加入编号为9的物料，恒温均质，再次通过微流化装置，向其中加入编号为10、11、12和13的物料，分散，稳定化，老化。
实验例1对细胞无毒性和细胞增殖效果的评价
就实施例1-4中制备的发酵干粉以及对比例1-4制备的提取粉末，测量使用细胞培养的细胞增殖的效果。
1)实验方法
细胞毒性和增殖实验在以下方案中实施。按照5,000个细胞/孔，将培养中的细胞(成纤维细胞和3T3细胞)分配在96孔微量板中，并在恒温室中培养30分钟，基于25、50、100、200(μg/ml)的浓度给予样品并培养72小时。另外，给予噻唑啉蓝，另外培养4小时。弃去所有的培养物，在微量板的每个孔中加入反应终止溶液，搅拌5分钟，然后测定570nm的吸光度。作为对照组，以加入的样品量同样的量给予10％胎牛血清(FBS)，同时在细胞生长的最佳条件下培养。通过设定对照组的细胞增殖为100％，计算样品加入实验组的细胞增殖率。
2)实验结果
细胞增殖作用由等式1计算，结果示于下表5中。
等式1：细胞增殖率(％)＝(在提取处理时吸光度-对照组的吸光度)×100/对照组的吸光度
表5
Figure GDA0002379334970000161
本实验测定以确定高粱发酵粉末(实施例1-4)和高粱提取粉末(对比例1-4)的细胞毒性和增殖。如表5所示，设定最佳细胞生长条件下的细胞增殖为100％时，高粱提取粉末(对比例1-4)具有非常微弱的细胞增殖效果，然而，高粱发酵粉末(实施例1-4)的细胞增殖效果非常优异。实验例2自由基清除作用效果的评价
就实施例1-4制备的发酵干粉和对比例1-4制备的提取粉末测量自由基清除效果。
1)实验方法
该实验是通过使用DPPH(1,1-二苯基-2-三硝基苯肼)方法(参见Blois.M.S.Nature 181，1190，1958)进行，DPPH和槲皮素是Sigma公司的产品。相对于0.2mM的DPPH甲醇溶液，测量具有不同浓度(5、10、20、50和100μg/ml)的实施例1-4和对比例1-4在517nm处的吸光度，其中，代替每个样品，将纯净水用作空白试验。
清除活性(SC50)表示将自由基的浓度减少50％所需的浓度，其代表具有较低数值的SC50使得自由基清除活性优异。
通过使用等式2计算自由基清除效果，并将结果记载在下表6中。
等式2：自由基清除效果(％)＝100-{各样品的反应吸光度×100/对照组的反应吸光度}
2)实验结果
表6
Figure GDA0002379334970000171
如表6所示，实施例1-4中的高粱发酵粉末的自由基50％清除浓度(SC50)是34.45、18.45、27.21和32.28μg/ml，而对比例1-4中的高粱提取粉末的自由基50％清除浓度(SC50)是44.70、42.29、45.33和50.24μg/ml，这表示实施例1-4的高粱发酵粉末的自由基清除效果显著优于对比例1-4的高粱提取粉末的自由基清除效果。
实验例3脂质过氧化抑制效果的评价
就实施例1-4制备的发酵干粉和对比例1-4制备的提取粉末测量脂质过氧化抑制效果，其中，绿茶提取物被用于对比物质。
1)实验方法
0.1％亚麻酸溶解于8％月桂基硫酸钠水溶液中，取3.9ml，向其中加入0.1ml不同浓度(100、300、500、700、1000和1500μg/ml)的样品，向其上照射紫外线，取1ml，在其中加入1.5ml的0.8％的TBA水溶液和1.5ml 20％乙酸(pH 3.5)，通过在沸水中加热1小时，冷却，在其中加入1ml纯净水和5ml正丁醇:吡啶(15:1)，振荡，离心分离，取正丁醇层，测量在532nm处的吸光度，其中，在空白试样中没有加入所述样品。
抑制浓度(IC50)表示使脂质过氧化的活性降低50％所需的浓度，其代表具有较低数值的IC50使得脂质过氧化活性的抑制效果优异。
通过使用等式3计算脂质过氧化作用，并将结果记载在下表7中。
等式3：脂质过氧化抑制效果的评价(％)＝100-{各样品的反应吸光度×100/对照组的反应吸光度}
2)实验结果
表7
Figure GDA0002379334970000181
如表7所示，实施例1-4中的高粱发酵粉末的脂质过氧化作用50％抑制浓度(IC50)为495.47、279.79、383.84和420.36μg/ml，这显著优于对比例1-4的高梁提取粉末以及绿茶提取粉末的脂质过氧化50％抑制浓度(IC50)，其为636.45、581.86、567.32、715.68和737.33μg/ml。
实验例4脂氧合酶活性抑制效果的评价
就实施例1-4制备的发酵干粉和对比例1-4制备的提取粉末测量脂氧合酶的抑制效果。
1)实验方法
该实验是通过使用TBAS方法进行，实验中使用的亚油酸、脂氧合酶、硫代巴比妥酸和槲皮素是Sigma公司的产品。各种浓度(10、30、50和100μg/ml)的实施例1-4的高粱发酵粉末和对比例1-4的高梁提取粉末以及作为对比物质的0.05ml槲皮素加入1ml的1mM的亚油酸中，向其中给予0.95ml的脂氧合酶，充分搅拌，使其在25℃反应10分钟，向其中给予0.5ml三氯乙酸，向其中加入1ml硫代巴比妥酸，加热10分钟，并在冰水中冷却2-3分钟，从而完成该反应。将2ml丁醇加入到完成所述反应的反应溶液中，并以4,000×g离心分离5分钟，由此在535nm处测定吸光度，其中，代替每个样品，将纯净水用作空白试验。
抑制浓度(IC50)表示脂氧合酶的活性降低50％所需的浓度，其代表具有较低数值的IC50使得脂肪氧合酶活性的抑制效果优异。
通过使用等式4计算脂肪氧合酶活性的抑制效果，并将结果记载在下表8中。
等式4：脂氧合酶活性的抑制效果(％)＝100-{各样品的反应吸光度×100/对照组的反应吸光度}
2)实验结果
表8
Figure GDA0002379334970000191
如表8所示，实施例1-4中的高粱发酵粉末的脂氧合酶50％抑制浓度(IC50)为55.17、40.97、59.14和61.07μg/ml，这显著优于对比例1-4中的高粱提取粉末的脂氧合酶50％抑制浓度(IC50)，其为68.79、65.47、67.74、68.19μg/ml。
实验例5透明质酸酶活性抑制效果的评价
就实施例1-4制备的发酵干粉和对比例1-4制备的提取粉末测量透明质酸酶活性的抑制效果。
1)实验方法
使用摩根-埃尔森方法。透明质酸酶的最终酶活性被设定为400NF单元/ml，HA的最终浓度被设定为0.4mg/ml。此外，透明质酸酶活性是通过使用作为活性剂的复合48/80缓冲溶液(0.1mg/ml)，基于非活性型透明质酸酶的活化步骤的抑制作用进行测量。将样品溶解在所述缓冲液中作为样品溶液，代替该样品溶液，将缓冲液用作对照组。此外，代替酶溶液，将缓冲液用作每个空白，并且将绿茶提取物用作对照组。
抑制浓度(IC50)表示透明质酸酶的活性降低50％所需的浓度，其代表具有较低数值的IC50使得透明质酸酶的活性抑制效果优异。
通过使用等式5计算透明质酸酶活性的抑制效果，并将结果记载在下表9中。
等式5：透明质酸酶活性的抑制效果(％)＝100-{各样品的反应吸光度×100/对照组的反应吸光度}
2)实验结果
表9
Figure GDA0002379334970000201
如表9所示，实施例1-4中的高粱发酵粉末的透明质酸酶50％抑制浓度为460.53、293.29、504.60和512.67μg/ml，这显著优于对比例1-4中的高粱提取粉末的透明质酸酶50％抑制浓度，其为527.72、503.57、626.87和559.39μg/ml，作为对比物质的绿茶提取粉末，透明质酸酶50％抑制浓度为544.34μg/ml。
实验例6特应性皮肤改善效果的评价
就制备实施例3的化妆料，测量特应性皮肤改善效果的临床评价。为了评价制备实施例3的化妆料的特应性皮肤改善效果，就15名患有特应性皮炎、前往东方中医诊所和医院接受治疗的成人进行如下实验。试验样品根据双盲试验分成右侧和左侧，并施用于全身，尽可能禁止使用另一种可能会影响试验样品效果的保湿剂。通过使用计分特应性皮炎(SCORAD)测量来评价从施用试验样品后1、2、3和4周后的效果，结果示于下表10中。
1)评价标准
①范围标准：量＝皮肤损伤部分/100
②强度标准
-红斑(1/2/3)
-水肿(1/2/3)
-渗出(1/2/3)
-皮肤剥落(1/2/3)
-苔藓样硬化的程度(1/2/3)
-干燥的程度(1/2/3)
③主观标准
-瘙痒(1-10)
-失眠(1-10)
*SCORAD计算＝(范围标准/5)+(强度标准/7)+主观标准表10
Figure GDA0002379334970000211
在对比例5中，根据制备实施例3的配方例制造的营养霜，其中，通过加入纯净水而不是高粱发酵粉末来制造营养霜。
如表10所示，在特应性皮肤改善方面，含有制备实施例3的高粱发酵粉末(实施例2)的营养霜显著优于对比例5的营养霜。
特别是，在第4周的结果中，制备实施例3的营养霜具有85％的特应性皮肤改善作用，确认制备实施例3的营养霜在可持续性方面优于对比例5的营养霜。
本发明的记载仅仅是用于具有抗炎、抗过敏和特应性皮肤改善作用的高粱发酵产物，其制备方法及其化妆料组合物的实施例。然而，本发明不限于上述实施例，其可以以各种不同的形式来实施。提供实施例以完成本发明的公开，并将本发明的范围清楚地教导给具有本领域普通知识的技术人员，因此，本发明将仅由权利要求书的范围所限定。

Claims (10)

1.具有抗炎、抗过敏和特应性皮肤改善作用的高粱发酵提取物，其中，
将高粱的茎或叶粉碎，用至少一种选自硫酸、盐酸、硝酸、乙酸、甲酸和磷酸的酸水解，中和，在肠道细菌中发酵，所述肠道细菌是拉乌尔（Raoultella）菌株，并且其中，所述肠道细菌是解鸟氨酸拉乌尔菌（Raoultella ornithinolytica），得到高粱发酵产物；以及
通过对所述高粱发酵产物进行灭菌、以水或乙醇水溶液作为溶剂进行提取，获得所述高粱发酵提取物。
2.如权利要求1所述的高粱发酵提取物，其中，所述乙醇水溶液中，乙醇的含量为30%v/v、50%v/v或70%v/v。
3.根据权利要求1或2所述的高粱发酵提取物，其中，所述酸水解包括将所述高粱的茎或叶粉碎后，加入稀硫酸。
4.根据权利要求1或2所述的高粱发酵提取物，其中，使用选自碳酸钙（CaCO3）、氢氧化钠（NaOH）、碳酸钠（Na2CO3）和氢氧化钙（Ca(OH)2）中的至少一种实施所述中和。
5.具有抗炎、抗过敏和特应性皮肤改善作用的高粱发酵提取物，其中，
将高粱的茎或叶粉碎，用至少一种选自硫酸、盐酸、硝酸、乙酸、甲酸和磷酸的酸水解，中和，在肠道细菌中发酵，所述肠道细菌是拉乌尔（Raoultella）菌株，并且其中，所述酸水解包括：加入10L具有2%v/v硫酸浓度的稀硫酸，在121℃的温度下进行30分钟的热处理，并且，所述发酵包括接种解鸟氨酸拉乌尔菌，得到高粱发酵产物；以及
通过对所述高粱发酵产物进行灭菌、以水或乙醇水溶液作为溶剂进行提取，获得所述高粱发酵提取物。
6.如权利要求5所述的高粱发酵提取物，其中，所述乙醇水溶液中，乙醇的含量为30%v/v、50%v/v或70%v/v。
7.根据权利要求5或6所述的高粱发酵提取物，其中，使用选自碳酸钙（CaCO3）、氢氧化钠（NaOH）、碳酸钠（Na2CO3）和氢氧化钙（Ca(OH)2）中的至少一种实施所述中和。
8.化妆料组合物，其中，所述化妆料组合物含有根据权利要求1-7任一项所述的具有抗炎、抗过敏和特应性皮肤改善作用的高粱发酵提取物。
9.根据权利要求8所述的化妆料组合物，其中，所述化妆料组合物被配制为化妆水、乳液、面霜、粉底、精华素、凝胶、面膜或粉饼的形式。
10.根据权利要求8所述的化妆料组合物，其中，所述化妆料组合物被配制为爽肤水、乳液型紫外线阻隔霜、乳剂型粉底、乳液型隔离霜、油饼型粉底或干湿两用粉饼的形式。
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