CN109998955B - 一种山茶花抑菌洗手液及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种山茶花抑菌洗手液及其制备方法，由以下重量百分数的组分制成：山茶花乙醇提取物5.0％～10.0％、醚醇磺基琥珀酸单酯二钠盐5.0％～10.0％、椰油酰胺丙基甜菜碱20.0％～30.0％、甘油与丙二醇混合物(体积比1:2)2.0％～3.0％、透明质酸1.0％～3.0％、2,4‑己二烯酸钾0.5％～1.5％、羧甲基纤维素钠1.0％～3.0％、乙二胺四乙酸二钠0.8％，余量为蒸馏水。本发明公开的洗手液安全性高、抑菌效果好、质量可控、温和无刺激，能有效抑制金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、蜡状芽孢杆菌等，各项质量指标及抑菌指标符合国家标准，部分性能指标优于市售同类产品。

Description

一种山茶花抑菌洗手液及其制备方法

技术领域

本发明属于清洁剂技术领域，具体涉及一种山茶花抑菌洗手液及其制备方法。

背景技术

洗手液是日常生活中重要的日用品之一，品种繁多，消费量大。作为个人家庭和公共场所的主要清洁用品，洗手液与健康息息相关。一款优质的抑菌洗手液应该具备安全性高、去污力强、抑菌性好、刺激性低等特点。然而，目前市场上的洗手液要么偏重于清洁、去污，对手上常见的致病菌无能为力，要么洗手液中所含的抑菌成分为氯类、苯酚类化学物质，长期使用不但会刺激手部皮肤，还可能污染环境。因此，开发一款天然安全、高效抑菌、有效去污、环境友好并且成本低廉的新型洗手液具有重要的现实意义。

山茶(Camellia japonica)为山茶科(Theaceae)山茶属(Camellia)山茶亚属(Subgen.Camellia)红山茶组(Sect.Camellia)植物。山茶与传统上制作茶叶的茶(Camellia sinensis)不是同一种植物，后者为山茶科(Theaceae)山茶属(Camellia)茶亚属(Subgen.Thea)茶组(Sect.Thea)植物。山茶花为山茶(Camellia japonica)的花，是常见的观赏花卉，在我国各地广泛栽培。山茶花作为蒙药收载在《中华人民共和国卫生部药品标准蒙药分册》中，其性甘凉而味苦辛，具有清热、消痛等功效。现代研究表明，山茶花中含有酚酸、三萜类化合物、黄酮类化合物等多种活性成分，山茶花提取物具有抗氧化、抗血小板聚集、抑制血栓形成、抗炎、抗肿瘤等生理作用。但是迄今鲜见有关山茶花乙醇提取物抑菌的研究报道，亦未见以山茶花为主要原料制备抑菌洗手液的报道。

公告号为CN107982187A的专利申请公开了一种中药植物洗手液配方，其中除了含有中药提取物、紫薇提取物、茶叶提取物等成分外，还含有1227杀菌剂(苯扎氯铵)和乙氧基化烷基硫酸钠。苯扎氯铵是一种阳离子表面活性剂，具有一定的毒性。公告号为CN108451799A的专利申请公开了一种含有大麻提取物的洗手液及其制备方法，采用低分子醇(甲醇、乙醇)、乙醚等溶剂制备大麻提取物。有研究报道称大麻的乙醚提取物对大鼠具有潜在的致畸作用。公告号为CN103145770A的专利申请公开了一种从山茶花中提取多酚的方法，但是该方法未对多酚含量做出要求，亦未制成山茶花洗手液。

发明内容

为了克服上述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种山茶花抑菌洗手液及其制备方法。

为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案予以实现：

一种山茶花抑菌洗手液，以质量百分比计，包括：山茶花乙醇提取物5.0％～10.0％、醚醇磺基琥珀酸单酯二钠盐5.0％～10.0％、椰油酰胺丙基甜菜碱20.0％～30.0％、甘油与丙二醇的混合物2.0％～3.0％、透明质酸1.0％～3.0％、2,4-己二烯酸钾0.5％～1.5％、羧甲基纤维素钠1.0％～3.0％、乙二胺四乙酸二钠0.8％，余量为水；

其中，甘油与丙二醇的混合物中甘油与丙二醇的体积比为1:2；

山茶花乙醇提取物中总酚的含量≥70％。

优选地，山茶花乙醇提取物中总酚的含量≥70％、绿原酸的含量≥300μg/mg及表没食子儿茶素的含量≥90μg/mg。

优选地，山茶花乙醇提取物5.0％、醚醇磺基琥珀酸单酯二钠盐10.0％、椰油酰胺丙基甜菜碱30.0％、甘油与丙二醇混合物3.0％、透明质酸2.0％、2,4-己二烯酸钾1.0％、羧甲基纤维素钠2.0％、乙二胺四乙酸二钠0.8％，余量为水；

其中，甘油与丙二醇的混合物中甘油与丙二醇的体积比为1:2；

山茶花乙醇提取物中总酚的含量≥70％。

优选地，所述山茶花乙醇提取物是将新鲜山茶花洗净、粉碎、干燥后，制得山茶花粉末，然后将山茶花粉末用体积分数为的70％乙醇回流提取，得到山茶花粗提液，将山茶花粗提液浓缩后真空冷冻干燥，制得山茶花粗提物，将山茶花粗提物经柱层析分离后制得；

其中，柱层析采用大孔吸附树脂，先水洗去除杂质，然后采用体积分数为40％～50％的乙醇溶液以1mL/min的流速洗脱，收集洗脱液；将洗脱液浓缩回收乙醇，然后真空冷冻干燥，制得山茶花乙醇提取物。

本发明还公开了一种山茶花抑菌洗手液的制备方法，包括以下步骤：

1)以质量百分比计，取山茶花乙醇提取物5.0％～10.0％、醚醇磺基琥珀酸单酯二钠盐5.0％～10.0％、椰油酰胺丙基甜菜碱20.0％～30.0％、甘油与丙二醇的混合物2.0％～3.0％、透明质酸1.0％～3.0％、2,4-己二烯酸钾0.5％～1.5％、羧甲基纤维素钠1.0％～3.0％、乙二胺四乙酸二钠0.8％，余量为水；

其中，甘油与丙二醇的混合物中甘油与丙二醇的体积比为1：2；

山茶花乙醇提取物中总酚的含量≥70％；

2)将水加热至85℃后加入山茶花乙醇提取物、2,4-己二烯酸钾和羧甲基纤维素钠，搅拌溶解，待混合液冷却至40℃时，依次加入醚醇磺基琥珀酸单酯二钠盐、椰油酰胺丙基甜菜碱、甘油与丙二醇混合物和透明质酸，充分搅拌均匀，再用乙二胺四乙酸二钠调节pH值为6.8～7.2，得到混合溶液；

3)将混合溶液静置陈化24h后，制得山茶花抑菌洗手液。

优选地，山茶花乙醇提取物的制备，包括以下步骤：

S1：制备山茶花粉末

将新鲜山茶花，用自来水和蒸馏水依次漂洗3～5次，阴干后粉碎、过120～150目筛，在50～55℃烘干至恒重，即得山茶花粉末；

S2：分离

按1g：40mL的料液比，将山茶花粉末加入体积分数为70％的乙醇溶液中，在温度85℃条件下回流提取40分钟，过滤后得到山茶花粗提液；将山茶花粗提液在温度55～60℃、真空度0.1MPa条件下减压蒸馏，制成体积占原液体积四分之一的山茶花粗提液浓缩液，同时冷凝、回收蒸馏逸出的乙醇；将山茶花粗提液浓缩液在温度-60～-40℃、真空度10～100Pa条件下真空冻干，得到山茶花粗提物；

S3：纯化

将山茶花粗提取物配制成质量浓度为2mg/mL的水溶液，以1mL/min的流速上样到装有AB-8型大孔树脂的层析柱中，洗去杂质，再用体积分数为40％～50％的乙醇溶液以1mL/min的流速洗脱，收集洗脱液；然后将洗脱液在温度55～60℃、真空度0.1MPa条件下减压蒸馏，得到体积占原液体积四分之一的洗脱液浓缩液，同时冷凝、回收蒸馏逸出的乙醇；将洗脱液浓缩液在温度-60～-40℃、真空度10～100Pa条件下真空冻干，制得山茶花乙醇提取物。

进一步优选地，S1中，所述新鲜山茶花选择处于始花期或盛花期的山茶花。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

(1)安全性高

本发明以天然山茶花作为主要原料，对皮肤温和、无刺激性，山茶花作为蒙药被收载在《中华人民共和国卫生部药品标准蒙药分册》中，长期应用实践证明山茶花疗效确切，安全性较高。此外，本发明所用其他原辅材料也均达到了国家标准《GB/T34855-2017洗手液》等标准法规的安全性要求。下面通过配方试用实验也证实山茶花抑菌洗手液不会伤害人体皮肤，安全性较高。

(2)抑菌性能好

经实验验证，本发明公开的山茶花抑菌洗手液能有效抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、蜡状芽孢杆菌和黑曲霉，具有广谱、高效抑菌的特点。

(3)质量可控

本发明对洗手液的抑菌成分山茶花乙醇提取物的质量控制有明确要求，有助于保障洗手液的质量与抑菌功效。

(4)成本低廉

山茶花在我国广泛分布，资源丰富，价格便宜。

(5)易于生产

山茶花可以人工栽培，有助于保护野生资源。其花朵较大，易于采摘。山茶花抑菌洗手液制备方法简单易行，有利于实现工业化大规模生产。

附图说明

图1为酚类单体混合对照品色谱图；

图2为本发明山茶花乙醇提取物的高效液相色谱分析图。

图中的1、2、3、4、5、6和7号色谱峰分别代表没食子酸、表没食子儿茶素、绿原酸、儿茶素、表儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯和阿魏酸。

具体实施方式

为了使本技术领域的人员更好地理解本发明方案，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。

下面结合附图对本发明做进一步详细描述：

实施例1

山茶花乙醇提取物5.0％、醚醇磺基琥珀酸单酯二钠盐(MES)10.0％、椰油酰胺丙基甜菜碱(CAB-35)30.0％、甘油与丙二醇混合物(体积比1:2)3.0％、透明质酸2.0％、2,4-己二烯酸钾1.0％、羧甲基纤维素钠(CMC-Na)2.0％、乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)0.8％，余量为蒸馏水。

本实施例的山茶花抑菌洗手液的制备方法如下：

(1)制备山茶花乙醇提取物

S1制备山茶花粉末：

选择处于始花期、盛花期并且新鲜完整的山茶花，用自来水和蒸馏水依次漂洗5次，阴干后用粉碎机粉碎，过150目筛，在50～55℃烘干至恒重，即得山茶花粉末。

S2分离、纯化山茶花乙醇提取物：

称取步骤S1所得的山茶花粉末，移入提取罐中，按照料液比1:40(g/mL)加入体积分数为70％的乙醇溶液，在温度85℃条件下回流提取40分钟，过滤后得到山茶花粗提液。

用旋转蒸发装置将山茶花粗提液在温度55～60℃、真空度0.1MPa条件下减压蒸馏，制得约占原液体积四分之一的山茶花粗提液浓缩液，同时冷凝、回收蒸馏逸出的乙醇。用真空冷冻干燥机将浓缩液在温度-60～-40℃、真空度10～100Pa条件下真空冻干，得到山茶花粗提物。

将山茶花粗提取物配制成质量浓度为2mg/mL的水溶液，以1mL/min的流速上样到装有AB-8型大孔树脂的层析柱中。上样完毕后，先用蒸馏水洗去水溶性多糖、蛋白质等杂质，再用体积分数为40％～50％的乙醇溶液以1mL/min的流速洗脱，收集洗脱液。

用旋转蒸发装置将洗脱液在温度55～60℃、真空度0.1MPa条件下减压蒸馏，得到约占原液体积四分之一的洗脱液浓缩液，同时冷凝、回收蒸馏逸出的乙醇。将洗脱液浓缩液用真空冷冻干燥机在温度-60～-40℃、真空度10～100Pa条件下真空冻干，最终得到山茶花乙醇提取物。

S3回收乙醇：收集步骤S2冷凝、回收的乙醇。

(2)称量：按照配方的重量百分比分别称取山茶花乙醇提取物、MES、CAB-35、甘油与丙二醇混合物(体积比1:2)、透明质酸、2,4-己二烯酸钾、CMC-Na、EDTA-2Na、蒸馏水备用。

(3)溶解、调pH：将蒸馏水注入调配罐中，加热至85℃后加入山茶花乙醇提取物、2,4-己二烯酸钾、CMC-Na，搅拌溶解。待液体冷却至40℃时，再依次加入MES、CAB-35、甘油与丙二醇混合物(体积比1:2)、透明质酸，在500r/min条件下搅拌5～10min，使所有物料充分溶解、混匀，再用EDTA-2Na调节pH至6.8～7.2。

(4)装瓶：将步骤(3)所得溶液静置陈化24h后，装瓶，即得山茶花抑菌洗手液。

其中，为了确保最终山茶花抑菌洗手液的效果，对步骤(1)制得的山茶花乙醇提取物的质量进行测定，具体地，采用国家标准GB/T 8313-2008规定的分光光度法测定山茶花乙醇提取物中的总酚含量，要求不低于70％；同时，优化的高效液相色谱法测定山茶花乙醇提取物中绿原酸、表没食子儿茶素的含量，绿原酸的含量不低于300μg/mg，表没食子儿茶素的含量不低于90μg/mg。

经本发明实验优化，定量分析山茶花乙醇提取物中绿原酸、表没食子儿茶素的高效液相色谱法，其色谱条件为：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶(C18)柱(5μm，250×4.6mm)；流动相A为0.15％三氟乙酸水溶液，流动相B为乙腈；梯度洗脱程序为0～5min(0％～18％B)、5～7min(18％～19％B)、7～9min(19％B)、9～11min(19％～20％B)、11～16min(20％～21％B)、16～18min(21％B)、18～20min(21％～22％B)、20～22min(22％B)、20～24min(22％～80％B)、24～28min(80％B)、28～32min(80％～20％B)；检测器为紫外检测器，检测波长为278nm；柱温为28℃；流速为0.9mL/min；进样量为10μL。

经检测，经检测其总酚含量为78％，绿原酸的含量为421.11μg/mg、表没食子儿茶素的含量为120.56μg/mg，山茶花乙醇提取物达到了质量要求。

实施例2

山茶花抑菌洗手液由如下重量百分数的组分制成：山茶花乙醇提取物7.5％、MES10.0％、CAB-35 30.0％、甘油与丙二醇混合物(体积比1:2)2.0％、透明质酸2.0％、2,4-己二烯酸钾1.5％、CMC-Na 1.0％、EDTA-2Na 0.8％，余量为蒸馏水。

本实施例的山茶花抑菌洗手液的制备方法与实施例1相同。

实施例3

山茶花抑菌洗手液由如下重量百分数的组分制成：山茶花乙醇提取物5.0％、MES5.0％、CAB-35 25.0％、甘油与丙二醇混合物(体积比1:2)2.0％、透明质酸3.0％、2,4-己二烯酸钾1.5％、CMC-Na 2.0％、EDTA-2Na 0.8％，余量为蒸馏水。

本实施例的山茶花抑菌洗手液的制备方法与实施例1相同。

为了确定本发明所涉及的山茶花抑菌洗手液的最优配方、优化山茶花抑菌洗手液制备方法、评价山茶花抑菌洗手液的抑菌效果与性能品质，进行了大量的试验研究，各种试验情况如下：

1.山茶花乙醇提取物的抑菌效果实验

1.1实验原料

供试菌种中，细菌包括革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)以及革兰氏阴性菌大肠杆菌(Escherichia coli)，真菌包括黑曲霉(Aspergillusnige)，全部来自中国工业微生物菌种保藏管理中心。山茶花乙醇提取物是以山茶科(Theaceae)山茶属(Camellia)山茶亚属(Subgen.Camellia)红山茶组(Sect.Camellia)植物山茶(Camellia japonica)的花为原料提取制备，经检测其总酚含量为78％，绿原酸的含量为421.11μg/mg、表没食子儿茶素的含量为120.56μg/mg，检测指标均符合山茶花乙醇提取物的质量要求。

1.2主要试剂与仪器设备

试剂包括：氨苄青霉素钠，USP级，上海源叶生物科技有限公司；苯甲酸钠、无水乙醇等，AR级，天津市科密欧化学试剂有限公司；营养肉汤(牛肉膏蛋白胨液体培养基)(NB培养基)、营养琼脂(牛肉膏蛋白胨固体培养基，LB培养基)、马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA培养基)，BR级，北京奥博星生物技术有限责任公司；酵母浸出粉胨葡萄糖液体培养基(YPD培养基)，BR级，青岛海博生物技术有限公司。

主要仪器设备包括：不锈钢牛津杯(内径6mm±0.1mm，外径8mm±0.1mm，高10mm±0.1mm)、压力蒸汽灭菌锅、隔水式培养箱、恒温生物摇床、双人净化工作台。

1.3供试菌悬液的制备

将保存在甘油中的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、蜡状芽孢杆菌、黑曲霉分别接种于NB、LB、LB、PDA固体培养基上，传代培养至第2代后，分别接种于对应的液体培养基中，于最适温度(金黄色葡萄球菌和大肠杆菌37℃、蜡状芽孢杆菌30℃、黑曲霉28℃)、110r/min条件下培养一段时间(细菌24h、真菌72h)，再分别用对应的液体培养基稀释菌液至10⁶～10⁷CFU/mL，备用。

1.4配制山茶花乙醇提取物的样品溶液：精密称取山茶花乙醇提取物，用无菌液体培养基配制成一定浓度的溶液，过滤膜(0.45μm)，备用。

1.5最小抑菌浓度(MIC)测定

按照二倍稀释法，在无菌环境下，向试管中加入浓度梯度为50.00、25.00、12.50、6.25、3.13、1.56、0.78、0.39、0.19、0.00mg/mL的山茶花乙醇提取物的样品溶液，按2％的接菌量加入供试菌菌悬液，于恒温生物摇床(110r/min)中培养一定时间(细菌24h、真菌72h)后，加入200μL 0.2％红四氮唑溶液(真菌不加入该溶液，直接肉眼观察菌落生长状况)，继续培养4h(避光)，观察菌液的颜色变化，以空白培养基作为阴性对照，以氨苄青霉素钠、苯甲酸钠分别作为细菌、真菌的阳性对照。实验重复3次，取平均值。实验结果如表1。

表1山茶花乙醇提取物对微生物的最小抑菌浓度(mg/mL)

样品	大肠杆菌	金黄色葡萄球菌	蜡状芽孢杆菌	黑曲霉
					山茶花乙醇提取物	6.250	0.430	1.470	25.000
苯甲酸钠	—	—	—	5.000
					氨苄青霉素钠	0.013	0.003	0.006	—

1.6抑菌圈测量

按照前述分组方法吸取200μL不同菌悬液，分别涂布于NB、LB、LB、YPD、PDA固体培养基上，制成带菌平板，将4个无菌牛津杯垂直放置于平板上。分别吸取200μL 10mg/mL的样品溶液加入牛津杯中，于最适条件下进行培养。以无菌生理盐水为阴性对照，以氨苄青霉素钠、苯甲酸钠分别为细菌、真菌的阳性对照。培养完成后移除牛津杯，用游标卡尺测定抑菌圈直径的大小(抑菌圈直径＝试样的抑菌圈直径-空白组抑菌圈直径)，测定3次取平均值，每组设3个重复。实验结果如表2。

表2山茶花乙醇提取物对微生物的抑菌圈直径(mm)

样品	大肠杆菌	金黄色葡萄球菌	蜡状芽孢杆菌	黑曲霉
					山茶花乙醇提取物	9.33±0.67	11.67±0.80	11.33±0.67	—
苯甲酸钠	—	—	—	＞16.00
					氨苄青霉素钠	＞16.00	＞16.00	＞16.00	—

由表1、表2可知，通过对山茶花乙醇提取物最小抑菌浓度和抑菌圈的测定，可以发现山茶花乙醇提取物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、蜡状芽孢杆菌、黑曲霉均有一定的抑制作用，抑制效果的顺序为：金黄色葡萄球菌＞蜡状芽孢杆菌＞大肠杆菌＞黑曲霉。

2.山茶花乙醇提取物的化学成分分析与质量控制

2.1总酚含量测定

根据国家标准《GB/T 8313-2008茶叶中茶多酚和儿茶素类含量的检测方法》中方法2(茶叶中茶多酚的检测)测定山茶花乙醇提取物中总酚的含量，得到山茶花乙醇提取物中总酚的含量为78％，符合山茶花乙醇提取物的质量要求。

2.2化学组分分析

采用高效液相色谱法测定山茶花乙醇提取物中绿原酸、没食子酸、表没食子儿茶素、儿茶素、表儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯、阿魏酸的含量。已有研究报道说明这几种酚类单体均具有一定的抑菌效果。

经本发明试验研究优化，定量分析山茶花乙醇提取物中绿原酸、表没食子儿茶素等的高效液相色谱法的色谱条件为：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶(C18)柱(5μm，250×4.6mm)；流动相A为0.15％三氟乙酸水溶液，流动相B为乙腈；梯度洗脱程序为0～5min(0～18％B)、5～7min(18％～19％B)、7～9min(19％B)、9～11min(19％～20％B)、11～16min(20％～21％B)、16～18min(21％B)、18～20min(21％～22％B)、20～22min(22％B)、20～24min(22％～80％B)、24～28min(80％B)、28～32min(80％～20％B)；检测器为紫外检测器，检测波长为278nm；柱温为28℃；流速为0.9mL/min；进样量为10μL。酚类单体对照品(购买自上海源叶生物科技有限公司)的高效液相色谱图见图1，山茶花乙醇提取物的高效液相色谱图见图2，山茶花乙醇提取物中各酚类单体的含量见表3。

表3山茶花乙醇提取物中酚类单体的含量(μg/mg)

从表3中可以看出，山茶花乙醇提取物中绿原酸的含量为421.11μg/mg、表没食子儿茶素的含量为120.56μg/mg，均符合山茶花乙醇提取物的质量要求。

3.洗手液最佳配方的优选

为了优化山茶花洗手液的配方，采用正交试验法优选了抑菌活性成分(山茶花乙醇提取物)与洗手液辅料[醚醇磺基琥珀酸单酯二钠盐(MES)、椰油酰胺丙基甜菜碱(CAB-35)、甘油与丙二醇混合物(体积比为1:2)、透明质酸、2,4-己二烯酸钾、羧甲基纤维素钠(CMC-Na)]的最优配比，得到了山茶花抑菌洗手液的最佳配方。

3.1原料与设备

主要原料包括山茶花乙醇提取物、醚醇磺基琥珀酸单酯二钠盐(MES)、椰油酰胺丙基甜菜碱(CAB-35)、甘油与丙二醇混合物(体积比为1:2)、透明质酸、2,4-己二烯酸钾、羧甲基纤维素钠(CMC-Na)、乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)等。主要设备包括调配罐、低速离心机等。

3.2正交试验

在文献调研和预实验的基础上选择山茶花乙醇提取物、MES、CAB-35、甘油与丙二醇混合物(体积比1:2)、透明质酸、2,4-己二烯酸钾、CMC-Na作为实验因素，每个因素设3个水平(表4)，采用L₁₈(3⁷)七因素三水平正交试验来确定洗手液最佳配方。评价小组由24名经过培训的评价员组成，其肤质状况不同，具有代表性。评价小组对产品的气味、分散性、泡沫性、易冲程度、紧绷感、脱脂性和刺激性7个方面指标进行评价，评分标准参考表5，满分为35.00分。

表4洗手液配方因素水平表(％)

表5洗手液评分标准

正交试验结果和极差分析结果见表6，方差分析结果见表7。由表7可以看出，MES、CAB-35、山茶花乙醇提取物、甘油与丙二醇混合物、透明质酸、2,4-己二烯酸钾、CMC-Na 7个实验因素对感官评分均有极显著影响(P＜0.01)。由表6的极差分析结果可知，7个实验因素的影响次序为：MES＞透明质酸＞甘油与丙二醇混合物＞CAB-35＝CMC-Na＞山茶花乙醇提取物＞2,4-己二烯酸钾。由表6可知，山茶花抑菌洗手液的理论优化配方为：MES 10.0％，CAB-35 30.0％、山茶花乙醇提取物5.0％、甘油与丙二醇混合物(体积比1:2)3.0％、透明质酸2.0％、2,4-己二烯酸钾1.0％、CMC-Na 2.0％(余量为蒸馏水)。在正交试验的第9个实验中，对感官评分影响较大的几个因素MES、CAB-35、山茶花乙醇提取物、甘油与丙二醇混合物(体积比1:2)、透明质酸、CMC-Na均处于最佳水平，与理论优化配方最为接近，并且其感官评分高于正交试验的其他17个实验(配方)，提示理论优化配方有较高的合理性。

为了进一步验证理论优化配方，按照理论优化配方制备了洗手液，发现该洗手液(按照理论优化配方制备的洗手液)的感官评分与正交试验第9个实验的感官评分没有显著性差异(P＞0.05)，说明采用正交试验优化得到的理论优化配方符合实际，山茶花抑菌洗手液的最优配方为：山茶花乙醇提取物5.0％、MES 10.0％，CAB-35 30.0％、甘油与丙二醇混合物(体积比1:2)3.0％、透明质酸2.0％、2,4-己二烯酸钾1.0％、CMC-Na 2.0％、EDTA-2Na0.8％(余量为蒸馏水)。

表6正交试验设计与结果

注：MES、CAB-35、CMC-Na分别代表醚醇磺基琥珀酸单酯二钠盐、椰油酰胺丙基甜菜碱、羧甲基纤维素钠，R代表极差。

表7正交试验的方差分析

方差来源	平方和	自由度	均方差	F值	显著性
						A	33.222	2	16.661	303.696	**
B	8.303	2	4.151	75.895	**
						C	17.432	2	8.716	159.350	**
D	33.667	2	16.833	307.758	**
						E	37.125	2	18.563	339.370	**
F	15.790	2	7.895	144.341	**
						G	10.146	2	5.073	92.745	**
误差	1.805	36	0.055
						总计	20853.870	50

注：A，MES；B，CAB-35；C，山茶花乙醇提取物；D，甘油与丙二醇混合物(体积比1:2)；E，透明质酸；F，2,4-己二烯酸钾；G，CMC-Na；**，差异极显著(P＜0.01)

4.洗手液性能评价

按照《GB/T34855-2017洗手液》、《GB19877.1-2005特种洗手液》等国家标准和规范要求，对山茶花抑菌洗手液的各项质量指标和性能指标进行了检测，并与市售普通洗手液(非抑菌)、抑菌洗手液进行了比较，结果见表8、表9。

表8洗手液的各项质量指标

表9山茶花抑菌洗手液的性能及其与市售洗手液的比较

通过表8可知，山茶花抑菌洗手液的各项指标完全符合《GB/T34855-2017洗手液》国家标准，产品泡沫丰富，去污性较好，手感滑顺细腻，泡沫易于冲洗，无刺激性和过敏反应。通过表9可知，山茶花抑菌洗手液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的抑菌率高于90.0％，达到了《GB19877.1-2005特种洗手液》国家标准要求。与市售洗手液相比，山茶花抑菌洗手液的抑菌效果以及去污力、保湿性等均较优越，在很多方面超过了市售洗手液的性能品质。

以上内容仅为说明本发明的技术思想，不能以此限定本发明的保护范围，凡是按照本发明提出的技术思想，在技术方案基础上所做的任何改动，均落入本发明权利要求书的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种山茶花抑菌洗手液，其特征在于，以质量百分比计，包括：山茶花乙醇提取物5.0％～10.0％、醚醇磺基琥珀酸单酯二钠盐5.0％～10.0％、椰油酰胺丙基甜菜碱20.0％～30.0％、甘油与丙二醇的混合物2.0％～3.0％、透明质酸1.0％～3.0％、2,4-己二烯酸钾0.5％～1.5％、羧甲基纤维素钠1.0％～3.0％、乙二胺四乙酸二钠0.8％，余量为水；

其中，甘油与丙二醇的混合物中甘油与丙二醇的体积比为1:2；

山茶花乙醇提取物中总酚的含量≥70％、绿原酸的含量≥300μg/mg及表没食子儿茶素的含量≥90μg/mg；

所述山茶花乙醇提取物是将新鲜山茶花洗净、粉碎、干燥后，制得山茶花粉末，然后将山茶花粉末用体积分数为的70％乙醇回流提取，得到山茶花粗提液，将山茶花粗提液浓缩后真空冷冻干燥，制得山茶花粗提物，将山茶花粗提物经柱层析分离后制得；其中，柱层析采用大孔吸附树脂，先水洗去除杂质，然后采用体积分数为40％～50％的乙醇溶液以1mL/min的流速洗脱，收集洗脱液；将洗脱液浓缩回收乙醇，然后真空冷冻干燥，制得山茶花乙醇提取物。

2.根据权利要求1所述的山茶花抑菌洗手液，其特征在于，山茶花乙醇提取物5.0％、醚醇磺基琥珀酸单酯二钠盐10.0％、椰油酰胺丙基甜菜碱30.0％、甘油与丙二醇混合物3.0％、透明质酸2.0％、2,4-己二烯酸钾1.0％、羧甲基纤维素钠2.0％、乙二胺四乙酸二钠0.8％，余量为水；

其中，甘油与丙二醇的混合物中甘油与丙二醇的体积比为1:2；

山茶花乙醇提取物中总酚的含量≥70％、绿原酸的含量≥300μg/mg及表没食子儿茶素的含量≥90μg/mg。

3.一种山茶花抑菌洗手液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)以质量百分比计，取山茶花乙醇提取物5.0％～10.0％、醚醇磺基琥珀酸单酯二钠盐5.0％～10.0％、椰油酰胺丙基甜菜碱20.0％～30.0％、甘油与丙二醇的混合物2.0％～3.0％、透明质酸1.0％～3.0％、2,4-己二烯酸钾0.5％～1.5％、羧甲基纤维素钠1.0％～3.0％、乙二胺四乙酸二钠0.8％，余量为水；

其中，甘油与丙二醇的混合物中甘油与丙二醇的体积比为1：2；

山茶花乙醇提取物中总酚的含量≥70％、绿原酸的含量≥300μg/mg及表没食子儿茶素的含量≥90μg/mg；

2)将水加热至85℃后加入山茶花乙醇提取物、2,4-己二烯酸钾和羧甲基纤维素钠，搅拌溶解，待混合液冷却至40℃时，依次加入醚醇磺基琥珀酸单酯二钠盐、椰油酰胺丙基甜菜碱、甘油与丙二醇混合物和透明质酸，充分搅拌均匀，再用乙二胺四乙酸二钠调节pH值为6.8～7.2，得到混合溶液；

3)将混合溶液静置陈化24h后，制得山茶花抑菌洗手液。

4.根据权利要求3所述的山茶花抑菌洗手液的制备方法，其特征在于，山茶花乙醇提取物的制备，包括以下步骤：

S1：制备山茶花粉末

将新鲜山茶花，用自来水和蒸馏水依次漂洗3～5次，阴干后粉碎、过120～150目筛，在50～55℃烘干至恒重，即得山茶花粉末；

S2：分离

按1g：40mL的料液比，将山茶花粉末加入体积分数为70％的乙醇溶液中，在温度85℃条件下回流提取40分钟，过滤后得到山茶花粗提液；将山茶花粗提液在温度55～60℃、真空度0.1MPa条件下减压蒸馏，制成体积占原液体积四分之一的山茶花粗提液浓缩液，同时冷凝、回收蒸馏逸出的乙醇；将山茶花粗提液浓缩液在温度-60～-40℃、真空度10～100Pa条件下真空冻干，得到山茶花粗提物；

S3：纯化

将山茶花粗提取物配制成质量浓度为2mg/mL的水溶液，以1mL/min的流速上样到装有AB-8型大孔树脂的层析柱中，洗去杂质，再用体积分数为40％～50％的乙醇溶液以1mL/min的流速洗脱，收集洗脱液；然后将洗脱液在温度55～60℃、真空度0.1MPa条件下减压蒸馏，得到体积占原液体积四分之一的洗脱液浓缩液，同时冷凝、回收蒸馏逸出的乙醇；将洗脱液浓缩液在温度-60～-40℃、真空度10～100Pa条件下真空冻干，制得山茶花乙醇提取物。

5.根据权利要求4所述的山茶花抑菌洗手液的制备方法，其特征在于，S1中，所述新鲜山茶花选择处于始花期或盛花期的山茶花。

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