CN101428047A - 一种石榴皮总酚的制备方法及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种具有抗菌活性的石榴皮总酚制备方法及应用，该方法为将新鲜石榴皮，清洗破碎，烘干，采用溶剂提取法得到石榴皮总酚提取物或经加水稀释后，通过大孔吸附树脂吸附－解吸，浓缩，干燥制得石榴皮总酚纯化物。采用该方法得到的石榴皮总酚具有很好的抗菌和抗氧化活性，特别适于医药、保健领域，可用于生产抑菌、抗氧化和抗癌作用的药品或辅助剂，克服人工合成的抗生素和西药药剂毒副作用大、价格高等缺点。同时为石榴皮这一资源的综合开发利用提供了有效途径。

Description

一种石榴皮总酚的制备方法及其应用

技术领域

本发明涉及医药和保健领域，具体是一种可食植物提取物及其应用领域，尤其涉及石榴皮中提取和纯化一种具有抗菌活性的石榴皮总酚的方法，由该方法获得的石榴皮总酚作为制备抗菌和抗氧化药物，或此类药物的辅助剂治疗各种妇科疾病和癌症的用途。

背景技术

妇科疾病是指妇女生殖系统感染所引起的疾病。由于女性生殖器官的特殊性，加之繁重的工作和社会压力等因素，导致妇科疾病呈现逐年上升趋势，其临床表现多种多样，病因复杂且常伴有多种严重并发症，对女性的生活和工作带来了很大影响。

据WHO的调查表明：中国41％的女性患者有不同程度的阴道炎症。已婚女性，尤其在农牧区和边远地区发病率高达70％以上。这些地区，卫生条件极其落后，妇科疾病现已成为急需解决的区域性疾病之一，已引起相关部门的重视。

石榴皮是石榴科植物石榴(Punica granatum L.)的干燥果皮。秋季果实成熟后收集，晒干。石榴皮作为传统中药在我国历版药典中均有收载，具有涩肠止泻，止血，驱虫等作用。用于治疗细菌性痢疾、阿米巴痢疾、小儿消化不良、烧伤、化脓性中耳炎，脱肛，白带，虫积腹痛等。现代药理研究显示其具有杀灭精子、防止性病传播、抗菌、抗病毒、抗癌等独特的活性。

石榴总酚是一类具有总酚羟基化合物的总称，包括鞣花单宁、没食子单宁、鞣花酸、没食子酸、儿茶素、花色素、绿原酸、阿魏酸等多种化合物，具有抗氧化、抗衰老、抗癌防癌、抗菌、润肤美容、降血压和预防心脑血管疾病等多种生理和药理作用。与茶多酚和葡萄多酚相比，石榴总酚的抗氧化性和抗菌活性更高，抗动脉粥样硬化作用更为显著因此石榴多酚在食品、医药和日用化学品等领域显示出巨大的应用价值。

鞣花酸是一个最有效的抗氧化剂，它能清除人体内致癌物，抑制致癌物代谢，具有抗氧化、抗菌、抑制人体免疫缺陷病毒的性能。还具有凝血、降压、镇静功能。在食品制作、饲料生产方面，鞣花酸可以防止和延缓食品氧化、饲料出现酸败变质作用。

因此，含鞣花酸类天然产物广泛应用于药品、保健品、化妆品、食品领域。

发明专利(申请号为200710106039.1)“一种石榴皮提取物及其制备方法”，公开了一种以石榴皮为原料，经溶剂提取和柱层析纯化等方法得到安石榴苷含量高的提取物；发明专利(申请号为200510002081.x)“一种石榴皮制备鞣花酸的方法”，公开了一种以石榴皮为原料，经溶媒萃取、蒸发浓缩、酸化水解及结晶等过程制备高纯度鞣花酸的方法。都与本发明的目的与方法有区别。

经过专利检索，没有发现与本发明类似的制备石榴皮总酚及其应用在抗菌活性方面的文献。

发明内容

本发明的目的在于提供一种以石榴皮为原料，经溶剂提取、浓缩、大孔吸附树脂吸附一解吸、干燥等步骤制备石榴皮总酚的方法。本发明以大量被人们废弃的占石榴20-30％的石榴皮作为原料，对于增加农产品的附加值和综合利用率方面起很大的作用。采用本发明所述的方法获得的石榴皮总酚中鞣花酸含量高，工艺简单，不含有机溶剂残留物、无毒无害、符合食品、药物等领域的质量安全认证要求。同时，由该方法获得的石榴皮总酚作为制备抗菌、抗氧化和抗癌药物的用途，或此类药物的辅助剂的用途。

本发明所述的一种石榴皮总酚的制备方法，按下列步骤进行：

a、采集新鲜石榴皮，清洗破碎后加入10-40倍量的提取溶剂水或甲醇或乙醇或丙酮溶液，在温度20-60℃下浸泡提取，提取时间0.5-3个小时，提取1-3次，过滤，合并滤液，除去药渣；

b、将步骤a的提取液，于温度30-40℃浓缩，干燥得到石榴皮总酚提取物，其中总酚含量达到38％，鞣花酸含量为4％；

c、或将步骤a的提取液，于温度40℃浓缩至无乙醇味，加水稀释后，通过大孔吸附树脂，用水洗脱杂质后，再用含水乙醇溶液洗脱，流出液经减压浓缩，干燥，得到石榴皮总酚纯化物，总酚含量达到60-80％，其中鞣花酸含量达到40-50％。

步骤a中提取溶剂浓度为20-80％含水甲醇、乙醇或丙酮溶液。

步骤b干燥采用真空干燥或低温真空喷雾干燥或冷冻干燥。

步骤c加水量为1-5倍。

步骤c洗脱杂质用水量为2-5倍体积。

步骤c乙醇的浓度范围30-100％，用量为4-5倍体积

步骤c大孔吸附树脂为苯乙烯骨架的弱极性大孔吸附树脂，如：D101、D141、AB-8、HPD-100、HPD-300、HPD-450、HPD-750型。

所述的制备方法获得的石榴皮总酚作为制备治疗抑菌、抗氧化和抗癌药物的用途。

所述的制备方法获得的石榴皮总酚作为制备治疗抑菌、抗氧化和抗癌药物辅助剂的用途。

本发明所述的制备方法获得的石榴皮总酚具有很好的抗菌活性，可用于生产抑菌、抗氧化和抗癌作用的药品或此类样品的辅助剂，能克服人工合成的抗生素和西药药剂毒副作用大、价格高等缺点。

具体实施方式

实施例1

采集新鲜石榴皮1kg，清洗破碎，将碎石榴皮加入10倍量的提取溶剂水，在温度20℃下浸泡提取3次，提取时间0.5小时，过滤，合并滤液，除去药渣；

将提取液，于温度30℃浓缩，真空干燥，得到石榴皮总酚提取物，其中总酚含量达到38％，鞣花酸含量为4％。

实施例2

采集新鲜石榴皮1kg，清洗破碎，将碎石榴皮中加入12倍量的提取溶剂水，室温浸泡提取2次，时间1小时，过滤，合并滤液，除去药渣；

将提取液，于温度40℃浓缩至无乙醇味，加1倍量的水稀释后，通过D101型大孔吸附树脂，用2倍体积的水洗脱杂质后，再用5倍体积浓度为30％乙醇溶液洗脱，流出液经减压浓缩，干燥，得到石榴皮总酚纯化物，总酚含量达到65％，其中鞣花酸含量达到26％。

实施例3

采集新鲜石榴皮1kg，清洗破碎，将碎石榴皮中加入20倍量的提取溶剂浓度为20％乙醇溶液，在温度30℃下浸泡提取3次，每次1小时，过滤，合并滤液，除去药渣；

将提取液，于温度35℃浓缩，低温真空喷雾干燥，得到石榴皮总酚提取物，其中总酚含量达到22％，鞣花酸含量为2％。

实施例4

采集新鲜石榴皮1kg，清洗破碎，将碎石榴皮中加入25倍量的提取溶剂浓度为40％甲醇溶液，在温度40℃下浸泡提取2次，每次1小时，过滤，合并滤液，除去药渣；

将提取液，于温度40℃浓缩至无乙醇味，加3倍水稀释后，通过AB-8型大孔吸附树脂，用3倍体积水洗脱杂质后，再用4倍体积浓度为50％乙醇溶液洗脱，流出液经减压浓缩，干燥，得到石榴皮总酚纯化物，总酚含量达到60％，其中鞣花酸含量达到40％。

实施例5

采集新鲜石榴皮1kg，清洗破碎，将碎石榴皮中加入35倍量的提取溶剂浓度为50％丙酮溶液，在温度45℃下浸泡提取3次，每次0.5小时，过滤，合并滤液，除去药渣；

将提取液，于温度40℃浓缩，冷冻干燥得到石榴皮总酚提取物，其中总酚含量达到30％，鞣花酸含量为3％；

实施例6

采集新鲜石榴皮1kg，清洗破碎，将碎石榴皮中加入25倍量的提取溶剂浓度为70％乙醇溶液，在温度55℃下浸泡提取1次，时间1.5小时，过滤，合并滤液，除去药渣；

将提取液，于温度40℃浓缩至无乙醇味，加4倍水稀释后，通过HPD-300型大孔吸附树脂，用4倍体积水洗脱杂质后，再用5倍体积浓度为85％乙醇溶液洗脱，流出液经减压浓缩，干燥，得到石榴皮总酚纯化物，总酚含量达到70％，其中鞣花酸含量达到45％。

实施例7

采集新鲜石榴皮1kg，清洗破碎，将碎石榴皮中加入40倍量的提取溶剂浓度为80％甲醇溶液，在温度58℃下浸泡提取2次，每次1小时，过滤，合并滤液，除去药渣；

将提取液，于温度40℃浓缩，真空干燥，得到石榴皮总酚提取物，其中总酚含量达到35％，鞣花酸含量为3％。

实施例8

采集新鲜石榴皮1kg，清洗破碎，将碎石榴皮加入40倍量的提取溶剂水，在温度58℃下浸泡提取2次，每次1.5小时，过滤，合并滤液，除去药渣；

将提取液，于温度40℃浓缩至无乙醇味，加5倍水稀释后，通过HPD-750型大孔吸附树脂，用5倍体积水洗脱杂质后，再用5倍体积浓度为100％乙醇溶液洗脱，流出液经减压浓缩，干燥，得到石榴皮总酚纯化物，总酚含量达到80％，其中鞣花酸含量达到50％。

实施例9

采集新鲜石榴皮1kg，清洗破碎，将碎石榴皮加入28倍量的提取溶剂水溶液，在温度23℃下浸泡提取1次，提取时间0.5小时，过滤，合并滤液，除去药渣；

将提取液，于温度32℃浓缩，低温真空喷雾干燥得到石榴皮总酚提取物，其中总酚含量达到32％，鞣花酸含量为3.4％。

实施例10

采集新鲜石榴皮1kg，清洗破碎，将碎石榴皮加入32倍量的提取溶剂浓度为35％丙酮溶液，在温度45℃下浸泡提取3次，每次1小时，过滤，合并滤液，除去药渣；

将提取液，于温度40℃浓缩至无乙醇味，加4倍水稀释后，通过HPD-450型大孔吸附树脂，用3.5倍体积水洗脱杂质后，再用4倍体积浓度为60％乙醇溶液洗脱，流出液经减压浓缩，干燥，得到石榴皮总酚纯化物，总酚含量达到75％，其中鞣花酸含量达到46％。

实施例11

采用本发明所述方法获得的石榴皮多酚作为制备治疗抑菌、抗氧化和抗癌药物的用途或作为制备治疗抑菌、抗氧化和抗癌药物辅助剂的用途的实验

抗菌实验

(1)、受试药物：由本发明所述方法获得的总酚提取物和总酚纯化物。

(2)、试验菌：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、变形杆菌、肺炎克雷伯菌、粪链球菌和白色念珠菌；标准菌：大肠埃氏菌ATCC25922、金黄色葡萄球菌ATCC25923、铜绿假单胞菌ATCC27853和白色念珠菌ATCC10231。

(3)、培养基：MH琼脂培养基、MH肉汤培养基、沙保罗氏琼脂培养基、沙保罗氏肉汤培养基，由杭州天和微生物试剂有限公司生产。

(4)、方法：根据提取物性状，采用琼脂稀释法，分别用8种受试药物对不同菌株进行抑菌试验。将各稀释度的提取物定量加入相应的平皿中。用MH/沙保罗氏琼脂培养基定量倾注平板，使提取物的终浓度分别为：40、20、10、5、2.5、1.25、1.25、0.625mg/ml。分别取MH/沙保罗氏肉汤液培养的上述各种试验菌，用灭菌生理盐水配置成浓度为1×10⁷CFU/ml的菌液，每点接种5μl，细菌总数约为0.5×10⁵CFU，同时设不含药物但接种与药物组等量试验菌的正常对照，置37℃培养24h后观察结果。以同种菌株未生长的药物最高稀释度为其MIC值。

(5)、实验结果：受试的样品对试验菌均有一定抗菌效果，其中大孔吸附树脂纯化后的总酚抑菌效果最好。

Claims (9)

1、一种具有抗菌活性石榴皮总酚的制备方法，其特征在于按下列步骤进行：

a、采集新鲜石榴皮，清洗破碎后加入10-40倍量的提取溶剂水或甲醇或乙醇或丙酮溶液，在温度20-60℃下浸泡提取，提取时间0.5-3个小时，提取1-3次，过滤，合并滤液，除去药渣；

b、将步骤a的提取液，于温度30-40℃浓缩，干燥得到石榴皮总酚提取物，其中总酚含量达到22—38％，鞣花酸含量为2—4％；

c、或将步骤a的提取液，于温度40℃浓缩至无乙醇味，加水稀释后，通过大孔吸附树脂，用水洗脱杂质后，再用含水乙醇溶液洗脱，流出液经减压浓缩，干燥，得到石榴皮总酚纯化物，总酚含量达到60-80％，其中鞣花酸含量达到40-50％。

2、根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤a中提取溶剂浓度为20-80％含水甲醇、乙醇或丙酮溶液。

3、根据专利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤b干燥采用真空干燥或低温真空喷雾干燥或冷冻干燥。

4、根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤c加水量为1-5倍。

5、根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤c洗脱杂质用水量为2-5倍体积。

6、根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤c乙醇的浓度范围30-100％，用量为4-5倍体积。

7、根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤c大孔吸附树脂为苯乙烯骨架的弱极性大孔吸附树脂，如：D101、D141、AB-8、HPD-100、HPD-300、HPD-450、HPD-750型。

8、根据权利要求1所述的制备方法获得的石榴皮总酚作为制备治疗抑菌、抗氧化和抗癌药物的用途。

9、根据权利要求1所述的制备方法获得的石榴皮总酚作为制备治疗抑菌、抗氧化和抗癌药物辅助剂的用途。