KR20150073438A - 미생물을 이용한 단삼 발효산물을 제조하는 방법 - Google Patents

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    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A23B - A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L19/00Products from fruits or vegetables; Preparation or treatment thereof

Abstract

본 발명은 단삼을 원료로 하여 건조하는 제1단계; 상기 제1단계의 건조물을 분쇄하여 분말로 생성하고, 고압멸균장치(autoclave)를 이용하여 잡균을 멸균하는 제2단계; 상기 제3단계의 분말을 배양조 상에서 발효미생물과 증류수를 혼합하여 혼합물을 생성하는 제3단계; 상기 제3단계의 혼합물을 발효실 상에서 인큐베이터를 이용하여 발효하는 제4단계; 상기 제4단계의 발효혼합물을 재 건조하고, 고압멸균장치(autoclave)를 이용하여 발효미생물을 멸균하는 제5단계; 상기 제5단계의 발효혼합물을 발효조 상에서 식용발효미생물과 혼합하여 액상화된 발효산물을 생성하는 제6단계; 상기 제6단계의 발효산물을 규조토여과기를 이용하여 불순물을 제거하고 가열하여 농축하는 제7단계; 및 상기 제7단계의 발효산물을 스프레이 드라이어(Spray dryer)를 이용하여 수분율 5~7%를 지니도록 건조하는 제8단계;를 포함하여 이루어지는 것을 특징으로 한다.
이에 따라 본 발명은, 단삼을 발효미생물을 이용하여 발효과정을 거쳐 발효산물을 취득과 함께 제형의 어려운 부분을 개선함에 따라, 제형의 변화를 쉽게 바꿀 수 있어 식품원료를 비롯하여 음용원료, 의약원료, 기능성 식품 원료 및 향장원료 등 다양한 원료로 제형 변화가 가능하고 인체에 용이하게 흡수될 수 있도록 저비용으로 부가성이 부여된 물질을 대량으로 양산 가능한 효과가 있다.

Description

미생물을 이용한 단삼 발효산물을 제조하는 방법{Method for preparing fermented extract of Salvia miltiorrhiza Bunge by using of microorganism}
본 발명은 미생물을 이용하여 생물공정을 통해 단삼의 뿌리로 발효산물을 제조하는 방법에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 단삼을 발효미생물을 이용하여 발효과정을 거쳐 발효산물을 취득과 함께 제형의 어려운 부분을 개선함에 따라, 제형의 변화를 쉽게 바꿀 수 있어 식품원료를 비롯하여 음용원료, 의약원료, 기능성 식품 원료 및 향장원료 등 다양한 원료로 제형 변화가 가능하고 인체에 용이하게 흡수될 수 있도록 저비용으로 부가성이 부여된 물질을 대량으로 양산 가능한 미생물을 이용한 단삼 발효산물을 제조하는 방법에 관한 것이다.
통상, 단삼(丹參; Salvia miltiorrhiza Bunge)의 뿌리로 만든 약재(한국, 중국)로 일본에서는 사용하지 않는다. 다섯 가지 삼(參)으로는 인삼, 고삼, 단삼, 현삼, 사삼은 오색(五色)을 띄며 오장(五臟)에 각각 배속되는데 단삼은 심(心)에 들어가기 때문에 적삼(赤參)이라고 부르기도 하였다. 또한 단삼은 풍병(風病)을 치료하여 하지무력감을 없애주므로 달리는 말을 쫓아갈 수 있게 한다하여 분마초(奔馬草)라는 이름으로 부르기도 하였다.
이러한 단삼은 약간 특이한 향기가 있고 약성은 쓰고 떫으며 약간 차다.[苦微寒] 혈액순환을 돕고, 어혈을 제거하며 사지관절 동통을 완화시킨다. 부인의 생리불순, 생리통, 산후복통, 어혈성심복부통, 타박상 등을 치료한다. 고열로 인한 정신혼몽, 헛소리, 번조, 불면증, 피부발진, 심계항진 등을 치료한다. 약리작용은 관상동맥 확장, 콜레스테롤 강하, 혈압 강하, 간기능 활성화, 진정 항염, 항암, 항균작용이 보고되었다.(신농본초경; 神農本草經, 본초강목;本草綱目, 동의보감; 東醫寶鑑)
단삼의 뿌리줄기(근경)는 짧고 거칠며 끝부분에 보통 줄기 자국이 남아 있다. 뿌리는 긴 원통형으로 여러 개로 갈라져 있으며 바깥면은 적갈색 또는 어두운 적갈색이고 거칠고 세로 주름이 있다. 오래된 것은 자갈색을 띠며 보통 비늘 모양의 것이 떨어져 나온다. 단삼은 극선초, 목양유(木羊乳), 분마초(奔馬草), 산삼(山參), 적삼(赤參), 축마(逐馬), 홍근(紅根)이라고도 한다. 이러한 단삼의 주요 성분으로는 scatellacin tanshinone, cyptotanshinone, hydroxytanshionoe, methyltanshionoate, salviot, vitamin A, vitamin E 등이다.
한편, 이와 관련된 선행기술로, 한국 등록특허공보 제10-0512897호의 "농축양조식초를 이용한 기능성건강음료 및 그 제조방법", 한국 등록특허공보 제10-0753863호의 "탈모방지 및 양모 활성 보조기능을 갖는 조성물과 그 조성물의 제조방법", 한국 등록특허공보 제10-1160926호의 "탈모방지 및 모발생장 촉진용 생약재 추출물의 정제방법 및 이를 이용한 화장료 조성물", 한국 공개특허공보 제10-2013-0059640호의 "탈모방지 또는 모발 성장 촉진용 조성물"등이 알려져 있다.
그러나 상기한 선행기술문헌은 단삼에 발효미생물을 이용하여 발효과정을 거쳐 단삼 발효산물 및 미생물 2차대사산물 조성물에 대한 특허등록 및 공개중인 문서는 존재하지 않을 뿐만 아니라, 특히 단삼을 여러 가지 형태로 제형의 변화가 어려워 대량으로 가공하여 양산하기에 곤란하므로 이를 활용하는데 있어 그 한계성을 보이고 있다.
한국 등록특허공보 제10-0512897호 "농축양조식초를 이용한 기능성건강음료 및 그 제조방법"(등록일자: 2005. 08. 30) 한국 등록특허공보 제10-0753863호 "탈모방지 및 양모 활성 보조기능을 갖는 조성물과 그 조성물의 제조방법"(등록일자: 2007.08.24) 한국 등록특허공보 제10-1160926호 "탈모방지 및 모발생장 촉진용 생약재 추출물의 정제방법 및 이를 이용한 화장료 조성물"(등록일자: 2012. 06. 22) 한국 공개특허공보 제10-2013-0059640호 "탈모방지 또는 모발 성장 촉진용 조성물"(공개일자: 2013. 06. 07)
상기와 같은 종래의 문제점들을 근본적으로 개선하기 위한 본 발명의 목적은, 단삼을 발효미생물을 이용하여 발효과정을 거쳐 발효산물을 취득과 함께 제형의 어려운 부분을 개선함에 따라, 제형의 변화를 쉽게 바꿀 수 있어 식품원료를 비롯하여 음용원료, 의약원료, 기능성 식품 원료 및 향장원료 등 다양한 원료로 제형 변화가 가능하고 인체에 용이하게 흡수될 수 있도록 저비용으로 부가성이 부여된 물질을 대량으로 양산 가능한 미생물을 이용한 단삼 발효산물을 제조하는 방법을 제공하려는데 있다.
상기 목적을 달성하기 위한 본 발명은, 단삼을 원료로 하여 건조하는 제1단계; 상기 제1단계의 건조물을 분쇄하여 분말로 생성하고, 고압멸균장치(Autoclave)를 이용하여 잡균을 멸균하는 제2단계; 상기 제3단계의 분말을 배양조 상에서 발효미생물과 증류수를 혼합하여 혼합물을 생성하는 제3단계; 상기 제3단계의 혼합물을 발효실 상에서 인큐베이터를 이용하여 발효하는 제4단계; 상기 제4단계의 발효혼합물을 재 건조하고, 고압멸균장치(Autoclave)를 이용하여 발효미생물을 멸균하는 제5단계; 상기 제5단계의 발효혼합물을 발효조 상에서 식용발효미생물과 혼합하여 액상화된 발효산물을 생성하는 제6단계; 상기 제6단계의 발효산물을 규조토여과기를 이용하여 불순물을 제거하고 가열하여 농축하는 제7단계; 및 상기 제7단계의 발효산물을 스프레이 드라이어(Spray dryer)를 이용하여 수분율 5~7%를 지니도록 건조하는 제8단계;를 포함하여 이루어지는 것을 특징으로 한다.
또, 본 발명에 따르면 상기 제2단계는 분쇄기로 100~200메쉬의 분말로 생성하고, 고압멸균장치를 이용하여 121~132℃의 온도로 5~20분간 잡균을 멸균하는 것을 특징으로 한다.
또, 본 발명에 따르면 상기 제3단계는 분말에 발효미생물 Ganoderma lucidum, Coriolus versicolor, Phellinus linteus, Fomes fomentarius, Coriolus sinensis를 ml 당 개체수가
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~
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의 개체수가 되도록 배양시켜 증류수와 혼합하여 pH 4.5~6.7을 지니도록 한 다음, 질소원 5~10중량%와 탄소원 5~10중량%를 추가하여 수분율 15~30%를 지닌 혼합물을 생성하는 것을 특징으로 한다.
또, 본 발명에 따르면 상기 제4단계는 혼합물을 인큐베이터의 온도 15~45℃와, 습도 40~80%를 유지하는 조건 하에서 3~40일간 발효하여 고체화된 발효혼합물을 생성하는 것을 특징으로 한다.
또, 본 발명에 따르면 상기 제5단계는 발효혼합물을 수분율이 10%이하가 되도록 재 건조하고, 고압멸균장치를 이용하여 121℃~132℃의 온도로 5~20분간 발효미생물을 멸균하는 것을 특징으로 한다.
또, 본 발명에 따르면 상기 제6단계는 발효혼합물을 발효조의 온도 18℃~50℃를 유지하는 조건 하에서 식용발효미생물인 아스퍼질러스(Aspergillus), 바실러스(Bacillus), 락토바실러스(Lactobacillus)속을 ml 당 개체수가
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Figure pat00004
의 개체수가 되도록 배양시켜 투입하고, 무압에서 발효하여 액상화된 발효산물을 생성하는 것을 특징으로 한다.
또, 본 발명에 따르면 상기 제7단계는 발효산물을 증발 농축(evaporation)방법으로 고형분의 함량 25~60 Brix를 지니도록 농축하는 것을 특징으로 한다.
한편, 이에 앞서 본 명세서 및 특허청구범위에 사용된 용어나 단어는 통상적이거나 사전적인 의미로 한정해서 해석되어서는 아니 되며, 발명자는 그 자신의 발명을 가장 최선의 방법으로 설명하기 위해 용어의 개념을 적절하게 정의할 수 있다는 원칙에 입각하여 본 발명의 기술적 사상에 부합하는 의미와 개념으로 해석되어야만 한다. 따라서 본 명세서에 기재된 실시예와 도면에 도시된 구성은 본 발명의 가장 바람직한 일 실시예에 불과할 뿐이고, 본 발명의 기술적 사상을 모두 대변하는 것은 아니므로, 본 출원시점에 있어서 이들을 대체할 수 있는 다양한 균등물과 변형예들이 있을 수 있음을 이해하여야 한다.
이상의 구성 및 작용에서 설명한 바와 같이, 본 발명에 의한 제조방법을 통해 얻어진 단삼 발효산물은 단삼의 뿌리 및 부산물 발효산물을 발효 미생물을 이용하여 발효과정을 거쳐 발효 조성물을 취득하여 제형의 어려운 부분을 개선토록 함에 따라, 제형의 변화를 쉽게 바꿀 수 있어 식품원료를 비롯하여 음용원료, 의약원료, 기능성식품 원료 및 향장원료 등 다양한 원료로 변경이 가능하고, 불용성인 비타민, 무기질들이 인체에 용이하게 흡수될 수 있도록 저비용으로 고부가성 물질을 대량 가공으로 양산 가능한 효과를 제공한다.
도 1은 본 발명에 따른 미생물 발효를 통한 단삼 발효산물을 제조하는 방법을 순차적으로 나타내는 블록도.
도 2는 본 발명에 따른 단삼 및 단삼 발효산물을 80% methanol에 여과한 추출물을 각각 농축하여 ethyl acetate 분획물을 확보하는 방법을 보인 흐름도.
도 3은 본 발명에 따른 단삼 및 단삼 발효산물의 페놀성 성분 함량(A,C), 플라노이드 성분 함량(B,D)을 측정한 결과를 나타내는 그래프.
도 4는 본 발명에 따른 단삼 및 단삼 발효산물의 DPPH 라디칼 소거능 결과를 나타내는 그래프.
도 5는 본 발명에 따른 단삼 및 단삼 발효산물의 산화적 DNA 손상 억제력을 비세포적 시스템으로 평가한 결과를 나타내는 도면.
도 6은 본 발명에 따른 단삼 및 단삼 발효산물의 항염증 효능을 NO 생성 억제를 통한 평가한 결과를 나타내는 그래프.
도 7a, b는 본 발명에 따른 단삼 및 단삼 발효산물을 LPS 자극 RAW264.7 세포에서 iNOS 및 COX-2 단백질 발현을 통해 평가한 결과를 나타내는 도면.
이하, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명에 따른 바람직한 실시예를 상세하게 설명한다.
본 발명은 단삼을 원료, 즉 단삼의 뿌리를 이용하여 단삼 발효산물을 제조하는 방법에 관련되며, 이를 간략하게 설명하면 건조, 분쇄, 멸균, 미생물 투입, 고체발효, 건조, 멸균, 발효조에 투입, 미생물 투입, 액상발효, 여과, 농축, 건조단계를 거쳐 발효산물을 제조한다.
본 발명의 제1단계는 단삼을 주원료로 하여 건조한다. 제1단계는 주원료를 건조하는 단계로, 단삼 뿌리를 주원료로 하여 건조하며, 품질 안정과 생산성 향상을 위한 자동화 장치를 도입한다. 이때, 제1단계에서는 단삼 뿌리는 건조시 영양분의 소실이 최소화되는 것을 제공한다.
본 발명의 제2단계는 상기 제1단계의 건조물을 분쇄하여 분말로 생성하고, 고압멸균장치(Autoclave)를 이용하여 잡균을 멸균한다. 제2단계는 건조단계를 거친 주원료를 파쇄, 분쇄하는 단계로, 특히 주원료를 파쇄 및 분쇄하여 분말로 생성함에 있어서 생산성 향상을 위해 전용의 자동화 설비를 도입하는 것이 좋다.
이때, 본 발명에 의한 상기 제2단계는 분쇄기로 100~200메쉬의 분말로 생성하고, 고압멸균장치(Autoclave)를 이용하여 121℃~ 132℃의 온도로 5~20분간 잡균을 멸균한다. 이는 건조된 주원료, 즉 단삼 뿌리를 1차적으로 파쇄기를 이용하여 분쇄한 다음 2차적으로 분쇄기를 이용하여 100~200메쉬의 분말을 생성한다. 이어서, 분말에 함유되어 있는 미생물들의 멸균을 위해 원활한 생물공정을 위해 고압멸균장치인 오토크레버를 이용하여 121℃~ 132℃의 온도로 5~20분간하는 멸균하여 잡균을 제거한다.
본 발명의 제3단계는 상기 제3단계의 분말을 배양조 상에서 발효미생물과 증류수를 혼합하여 혼합물을 생성한다. 제3단계는 분말된 주원료에 발효미생물과 증류수를 혼합하여 혼합물을 생성하는 단계로, 품질 안정과 생산성 향상을 위해 해당 공정을 자동화한다.
이때, 본 발명에 의한 상기 제3단계는 분말에 발효미생물 Ganoderma lucidum(영지버섯), Coriolus versicolor(구름버섯), Phellinus linteus(상황버섯), Fomes fomentarius(말굽버섯), Coriolus sinensis(동충하초)를 ml 당 개체수가
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Figure pat00006
의 개체수가 되도록 배양시켜 증류수와 혼합하여 pH 4.5~6.7을 지니도록 한 다음, 질소원 5~10중량%와 탄소원 5~10중량%를 추가하여 수분율 15~30%를 지닌 혼합물을 생성한다. 이는, 급속 멸균된 단삼 뿌리의 분말을 고체화하기 위해 발효미생물 중 유용성이 입증된 버섯균주와 증류수, 질소원, 탄소원을 사용한다. 즉 이들을 고체화된 발효분말을 생성하기 위해 분말에 1차적으로 배양조 상에 대량으로 배양된 발효미생물을 ml 당 개체수가
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의 개체수가 되도록 배양한 다음, 증류수와 혼합하여 pH 4.5~6.7을 지닌 혼합물을 생성하고, 질소원 5~10중량%와 탄소원 5~10중량%를 추가하여 미생물이 활동하기 좋은 수분율 15~30%를 지니도록 고루 잘 섞어주어 혼합물을 생성한다.
한편, 발효미생물로 사용되는 담자균류가 생성하는 2차대사산물에는 다른 균류에는 볼 수 없는 특징을 가지고 있다. 즉, 발효미생물인 Ganoderma lucidum(영지버섯), Coriolus versicolor(구름버섯), Phellinus linteus(상황버섯), Fomes fomentarius(말굽버섯), Coriolus sinensis(동충하초)는 많은 대사산물을 가지고 있다. 이는 1차대사산물은 생물의 생존에 필수적인 물질로서 생리적 의의는 밝혀져 있으나 2차 대사산물의 의의는 아직 불명확하다. 외적에 대한 방어물질로서 항생물질로 연구가 되고 있으며, 생리활성에 대한 산물로 항 종양성 다당류, 항바이러스 물질, 항균성 물질, 효소저해제, 핵산관련물질, 아미노산 관련물질, 유기산, 식물 호르몬류, 그 외의 생리활성 물질로 펩타이드나 단백질계의 생리활성 물질들로 곤충, 선충, 점균 등에 작용하는 물질, 식물 생육저해물질, 비타민 B1 파쇄물질, 약리활성 물질 등 아직도 밝혀지지 않는 많은 부분들이라고 볼 수 있다.
본 발명의 제4단계는 상기 제3단계의 혼합물을 발효실 상에서 인큐베이터를 이용하여 발효한다. 제4단계는 혼합물을 발효실 상에서 발효하는 단계로, 품질 안정을 위해 해당 공정을 자동화한다. 여기서, 말하는 고체발효를 위한 발효실은 무균시스템으로 되어 있고, 온습도가 자동으로 조정되어 미생물이 단삼 뿌리분말과 발효에 필요한 질소원 5~10%와 탄소원 5~10%의 조성물이 미생물의 증식과 발효가 동시에 이루어지는 인큐베이터를 말한다.
이때, 본 발명에 의한 상기 제4단계는 혼합물을 인큐베이터의 온도 15~45℃와, 습도 40~80%를 유지하는 조건 하에서 3~40일간 발효하여 고체화된 발효혼합물을 생성한다. 이는 혼합물을 밀폐된 발효실에서 온도 15~45℃, 습도 40~80%가 자동으로 관리되는 인큐베이터에서 투입하여 3~40일간 발효과정을 거쳐 수분율이 거의 없는 상태에서 발효미생물인 Ganoderma lucidum, Coriolus versicolor, Phellinus linteus, Fomes fomentarius, Coriolus sinensis이 원활한 발효작업을 할 수 있도록 하여 고체화된 발효분말을 생성한다.
본 발명의 제5단계는 상기 제4단계의 발효혼합물을 재 건조하고, 고압멸균장치(Autoclave)를 이용하여 발효미생물을 멸균한다. 제5단계는 고체화된 발효혼합물을 재 건조 및 멸균하는 단계로, 특히 발효혼합물을 재 건조함에 있어 품질 안정과 생산성 향상을 위해 전용의 자동화 설비를 도입하는 것이 좋다.
이때, 본 발명에 의한 상기 제5단계는 발효혼합물을 수분율이 10%이하가 되도록 재 건조하고, 고압멸균장치를 이용하여 121℃~132℃의 온도로 5~20분간 발효미생물을 멸균한다. 이는 발효과정을 거친 발효혼합물을 수분율이 10%이하가 되도록 건조한 다음, 고압멸균장치인 오토크레버로 121℃~132℃의 온도로 5~20분간 발효시 투입된 발효미생물인 Ganoderma lucidum, Coriolus versicolor, Phellinus linteus, Fomes fomentarius, Coriolus sinensis를 멸균한다.
한편, 통상 급속 멸균이라 하면 온도 121도℃에서 10분~30분간, 132℃에서 10분~30분이 사용되고 있으나, 본 발명에서는 무살균, 또는 호기성으로 설계된 생물반응기(bioreactor)를 사용하므로 이보다 처리온도가 121℃~132℃의 온도에서 5~20분 동안 처리하는 것을 효과적이다.
본 발명의 제6단계는 상기 제5단계의 발효혼합물을 발효조 상에서 식용발효미생물과 혼합하여 액상화된 발효산물을 생성한다. 제6단계는 고체화된 발효혼합물을 발효조 상에서 식용발효미생물과 혼합하여 액상화된 발효산물을 생성하는 단계로, 품질 안정을 위해 해당 공정을 자동화한다.
여기서, 말하는 액상화 발효를 위한 발효조는 특정물질이나 세포를 생산하기 위해, 비완전 무균 시스템과 완전 무균 시스템으로 나뉘며, 발효조의 종류로는 연속교반식 생물 반응기, 공기 부양식 생물반응기, 혐기성 생물반응기로 나뉘며, 본 발명에서 사용되는 발효조는 비완전 무균 시스템으로 공기 부양식 생물반응기를 사용한다. 액상화(액체)발효단계는 생물공정 응용분야에 대표적으로 상용되는 작업인 물질재료분야인 생분해 가능한 식품 부가물, 미네랄추출물과 유사한 작업이 진행된다.
이때, 본 발명에 의한 상기 제6단계는 발효혼합물을 발효조의 온도 18℃~50℃를 유지하는 조건 하에서 식용발효미생물인 아스퍼질러스(Aspergillus), 바실러스(Bacillus), 락토바실러스(Lactobacillus)속을 ml 당 개체수가
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의 개체수가 되도록 배양시켜 투입하고, 무압에서 발효하여 액상화된 발효산물을 생성한다. 이는, 1차로 발효실에서 고체 발효과정을 마친 분말(발효혼합물)을 더욱 안전하게 식용 및 원료로 사용하기 위해 된장이나 메주와 김치의 발효에 많이 고착되어 이용되는 미생물 토양미생물(식용발효미생물)인 아스퍼질러스(Aspergillus), 바실러스(Bacillus), 유산균은 고온성의 락토바실러스(Lactobacillus)들을 이용하여 액상 발효하는 것이다. 이때, 미생물의 생물반응의 적합한 온도범위는 18℃ 내지 50℃ 정도이며, 발효조의 표준은 살균된 연속교반식 생물반응기를 말한다. 생물반응기의 부피기준은 76%는 무 교반, 무 살균, 또는 호기성으로 설계된 것들이 사용되고 있으며, 무균유지가 가능한 생물반응기는 10%에 불가하다. 무균성 생물반응기는 항생제등의 고부가가치 산물에만 이용되고 있다.
즉, 급속 멸균된 단삼 뿌리 발효혼합물을 액체화하기 위해 토양미생물 중 유용성이 입증된 아스퍼질러스(Aspergillus), 바실러스(Bacillus), 락토바실러스(Lactobacillus)를 사용한다. 즉 이들을 액상화된 발효산물을 생성하기 위해 발효혼합물에 1차적으로 발효조 상에 대량으로 배양된 식용발효미생물을 ml 당 개체수가
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의 개체수가 되도록 배양시켜 투입하여 무압에서 발효조의 온도 18℃~50℃를 유지하는 조건 하에서 발효하여 액상화된 발효산물을 생성한다.
한편, 본 발명에 사용하고자 하는 토양미생물, 유산균, 진균은 특히 2차 대사산물에 있어서 화학구조의 다양성과 종의 풍부함으로 인하여 산업적으로 가장 중요한 미생물로 인식되어 있다. 물질대사산물은 1차 대사산물, 2차대사산물로 나뉘며, 1차대사산물이란 동, 식물, 미생물에 보편적으로 들어 있는 가공 아미노산, 당질, 지질, 핵산 등 생체유지에 기본적인 역할을 하는 물질을 말하며, 2차대사산물은 주로 식물, 미생물에서 나타나는 알칼로이드, 테르펜, 플라보노이드, 항생물질등의 다양한 화합물로 이들은 약용, 향료, 향장원료, 기능성 식품의 원료 등에 유용한 물질로 부각되고 있다. 앞으로도 토양미생물, 유산균, 진균은 새로운 균주의 분리, 유전자 기능 등을 통하여 생물소재 산업의 중요한 위치를 차지하고 있다.
본 발명의 제7단계는 상기 제6단계의 발효산물을 규조토여과기를 이용하여 불순물을 제거하고 가열하여 농축한다. 제7단계는 액상화된 발효산물을 여과 및 농축하는 단계로, 특히 발효산물을 여과 및 농축함에 있어서 생산성 향상을 위해 전용의 자동화 설비를 도입하는 것이 좋다.
이때, 본 발명에 의한 상기 제7단계는 발효산물을 증발 농축(evaporation)방법으로 고형분의 함량 25~60 Brix를 지니도록 농축한다. 이는 발효산물을 1차적으로 규조토여과기를 이용하여 불순물을 여과한 다음, 2차적으로 증발 농축(evaporation)방법을 이용하여 고형분의 함량 25~60 Brix를 지니도록 농축한다.
즉, 발효가 완료된 액상 발효산물은 많은 부유물질과 불투명한 액체상태의 물질로 되어 있기 때문에 규조토 여과기를 이용하여 불순물을 거의 여과시켜 고형분이 투명한 수용성 물질의 상태를 유지한다. 이어서, 액상 발효산물을 농축하는데, 농축(Concentration)이라 함은 용액으로부터 용매를 제거하여 용액의 농도를 높여주는 조작으로 증발 농축(evaporation)방법으로 용액을 비점(끓는점)까지 가열하여, 기화에 의하여 용액으로부터 수분을 제거하는 방법으로 고형분의 함량이 25~60 Brix로 농축한다.
본 발명의 제8단계는 상기 제7단계의 발효산물을 스프레이 드라이어(Spray dryer)를 이용하여 수분율 5~7%를 지니도록 건조한다. 제8단계는 농축된 발효산물을 건조하는 단계로, 발효산물을 건조함에 있어서 생산성 향상을 위해 전용의 자동화 설비를 도입하는 것이 좋다. 이는 농축 발효산물을 저장, 포장, 수송 등의 경비를 절감하고 액체부피를 줄여 가용성 성분의 농도를 높여 응용범위를 높이고, 넓혀 용도를 다양화시키고 저장성을 향상시키기 위해 수분율이 5%~7%가 되도록 스프레이 건조 분말로 제조한다.
한편, 발효식품은 자연이 우리에게 내린 하늘의 선물이다. 발효식품은 저장성이 낮은 식품소재에 미생물을 적용시킨 결과 장기적인 저장성을 부여하고 식품의 고유한 맛과 특유의 향을 생성시킨 식품군을 지칭하고 있다. 예로 장류, 주류, 젓갈류, 김치류, 식초류, 조미료 및 미생물을 이용한 신물질 등을 총괄하여 발효식품이라 한다. 먼저 발효식품은 미생물의 대사작용을 거쳤기 때문에 복잡한 물질이 간단한 물질로 분해되어 우리 몸에서 소화, 흡수가 빠른 영양식품이란 점이다. 그리고 위생적이라는 점이다. 발효란 수많은 미생물 중에서 우리가 원하는 미생물만 살아서 우리가 바라는 작용을 하기 때문에 병원균을 포함한 다른 미생물이 자랄 수가 없다.
또한, 발효식품의 맛은 그 맛을 아는 사람만이 즐길 수 있는 독특한 감칠맛을 지니고 있다. 식품의 재료에 따라 발효식품의 종류는 다양하며, 각기 독특한 특징과 풍미를 지닌다. 농산물, 축산물 수산물 등 다양한 식품들이 발효식품의 재료로 쓰이는데, 그 특유의 성분들이 미생물의 작용으로 분해되고 새로운 성분이 합성되어 영양가가 향상될 뿐 만 아니라 저장성 부여와 식품의 향ㆍ풍미ㆍ조직감 향상ㆍ기호성 등이 우수해진다.
본 발명의 단삼을 이용하여 제조된 발효조성물의 용도에 있어서, 2차에 걸친 고체발효와 액체발효의 생물반응 단계를 포함하는 발효를 거듭함에 따라 단삼에 함유된 유효 물질의 분자의 사슬을 적은 단위로 끊어서 향장원료로 사용할 시 피부모공으로 흡수가 용이하게 만들고, 음용 원료로 사용시 장내에 흡수가 용이하여 유효 성분이 인체에 더욱 효과적인 흡수를 제공 가능하고, 이외에도, 식품원료, 의약원료 및 기능성식품 원료 등에도 병용할 수도 있다.
이와 같이, 본 발명의 발효조성물을 제조하는 방법은 단삼 발효산물의 대량 발효가공을 위하여 단삼의 잡균을 멸균한 다음, 항균성이 강하므로 1차적인 발효과정인 분말상태에서 진균을 투입하여 고체발효과정을 거치고, 액체발효를 발효조(생물반응기)를 이용하여 유산균, 토양미생물 중 바실러스 속, 아스퍼질러스 속을 투입하여 발효공정을 마친 발효산물은 2차에 걸쳐 발효가 되는 과정에 뿌리의 세포막이 파괴되고 미생물들이 잘게 부수어 함유되어 있는 유효성분이 수용성으로 용해되고, 용해된 발효산물은 체내에서 쉽게 흡수될 수 있는 조성물의 제조를 할 수 있다. 또한 미생물에 발효에 따른 비타민과 미생물간의 2차대사산물을 아울러 제공 가능하다.
이하, 단삼 및 단삼 발효산물(발효 단삼)의 기능성 성분 및 항산화 활성 평가, 산화적 DNA 손상 억제 효능 및 항염증 효능을 비교하여 본 발명의 효과를 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
[실시예1] 단삼 및 단삼 발효산물의 에탄올 추출물 제조
먼저, 단삼 및 단삼 발효산물을 건조된 시료에 세절하여 80% methanol에 24시간 침지하여 여과한 추출물을 각각 농축하여 도 2와 같은 방법으로 분획한 후 ethyl acetate 분획물을 확보하도록 추출하였다.
[실시예2] 단삼 및 단삼 발효산물의 기능성성분 및 항산화 활성 평가
(2-1) 총 페놀 화합물 함량 비교
단삼 및 단삼 발효산물의 총 페놀 화합물 함량비교는 Folin-Ciocalteu colorimetic method(Bao et al., 2005)에 의해 비교 분석하였다. Ethyl acetate 분획물 4mg을 DMSO 1ml에 녹인 시료 125㎕에 Folin-Ciocalteu 용액 500㎕를 첨가하고 상온에서 약 6분간 반응 후 7%-sodium carbonate 1.25ml과 증류수 1.125ml을 첨가하고 상온에서 약 90분간 재 반응시켰다. 반응 후 760nm에서 흡광도를 측정하고 총 페놀 화합물의 함량은 gallic acid의 표준물질곡선을 이용하여 정량하였다.
(2-2) 총 플라보노이드 함량 비교
단삼 및 단삼 발효산물의 총 플라보노이드 함량비교는 Colorimetric method (Bao et al., 2005)에 의해 비교 분석하였다. Ethyl acetate 분획물 4mg을 DMSO 1ml에 녹인 시료 250㎕, 증류수 1.25ml 그리고 5% NaNO2 75㎕를 희석한 후 상온에서 약 5분간 반응시켰다. 반응 후 10%-AlCl3ㆍ6H2O 150㎕를 첨가하고 상온에서 약 6분간 재 반응 후 1M NaOH 500㎕와 증류수 225㎕를 첨가하고 상온에서 15분간 반응시켰다. 반응 후 415nm에서 흡광도를 측정하고 총 플라보노이드 함량은 rutin의 표준물질곡선을 이용하여 정량하였다.
(2-3) DPPH 라디칼 소거능
단삼 및 단삼 발효산물 Ethyl acetate 분획물의 DPPH에 대한 전자 공여능은 Bondet등(1997) 방법에 의해 측정하였다. 시료 40㎕를 300μM DPPH용액 760㎕에 첨가한 후 30분간 37℃에 방치한 후 UV/Visible spectrophotometer(Berkman,USA)을 이용하여 515nm에서 흡광도를 측정하였다. Ethyl acetate 분획물의 전자 공여능은 다음 식으로 %를 구하였다.
소거능(%)={1-(추출물 첨가구의 흡광도/추출물 무 첨가구의 흡광도)}×100
[실시예3] 단삼 및 단삼 발효산물의 산화적 DNA 손상 억제 효능 비교
(3-1) 단삼 및 단삼 발효산물의 산화적 DNA 손상 억제력 비교(ΨX-174 RF I plasmid DNA cleavage assay)
단삼 및 단삼 발효산물 Ethyl acetate 추출물의 산화적 ΨX-174 RF I plasmid DNA cleavage 억제력은 Jung(2001)등의 방법에 의해 측정하였다. 플라스미드 DNA의 supercoiled 형태가 open-circular와 linear 형태로 변환되는 정도는 산화적 DNA 손상 지표로 사용되어 왔다(Jung et al., 2001). 2mM FeCl2 60㎕, 증류수 700㎕와 시료 40㎕를 혼합한 후 상온에서 약 15분간 반응시켰다. 15분 후 반응 혼합물 20㎕와 ΨX-174 RF I plasmid DNA 5㎕를 다시 혼합하여 37℃에서 약 30분간 재 반응 후, 5㎕ 버퍼(50% glycerol(v/v), 40mM EDTA and 0.05% bromophenol blue)를 첨가하고 1% agarose gel로 전기영동을 실시 한 후 ethidium bromide로 염색하여 UV하에서 사진 촬영을 하였다.
[실시예4] 단삼 및 단삼 발효산물의 항염증 효능 비교
(4-1) 단삼 및 단삼 발효산물의 염증반응 시 생성되는 염증유발물질 생성 억제력
(가) Nitric oxide(NO) generation assay
RAW264.7 세포주로부터 생성된 nitric oxide(NO)의 양은 세포 배양액 중에 존재하는 NO2 -의 형태로서 Griess시약을 이용하여 측정하였다. RAW264.7 세포를 12-well plate에 분주하고 24시간 배양시켰다. 비발효 단삼 및 단삼 발효산물 Ethyl acetate 분획물을 12.5㎍/ml로 처리하고 2시간 후, lipopolysaccharide(LPS) 1㎍/ml의 농도 처리하여 24시간 배양하고, 24시간 후 세포 배양 상등액 100㎕와 Griess시약 [0.1% N-(1-napthyl)-ethylene diamine 200㎕, 1% sulfanilamide in 5% phosphoric acid 200㎕] 400㎕를 혼합하여 10분 동안 상온에서 반응시킨 후 96well에 100㎕씩 주입하여 540nm 파장에서 측정하였다.
(나) Western blot을 통한 iNOS (또는 COX-2) 단백질 발현정도 비교분석
RAW264.7 세포를 6-well plate에 분주하고 24시간 배양시켰다. 비발효 단삼 및 단삼 발효산물 Ethyl acetate 분획물을 12.5㎍/ml로 2시간 처리하고 lipopolysaccharide(LPS) 1㎍/ml의 농도 처리하여 24시간 배양시켰다. 그 후 차가운 phosphate-buffered saline(PBS)으로 세척 후 세포를 회수하고 단백질을 추출하고, 추출한 단백질 40㎍을 8% (또는 12%) Tric-HCl 겔을 이용하여 SDS-PAGE 후 PVDF membrane으로 transfer blot. 단백질이 transfer된 PVDF를 blocking 버퍼(5% non-fatmilk/1×TBS-0.1% Tween 20)로 약 1시간 90분간 blocking 후1×TBS-0.1% Tween 20로 5분씩 3회 세척하였다. 세척 후 iNOS (또는 COX-2) 1차항체가 1:1000비율로 희석된 5% non-fatmilk(1×TBS-0.1% Tween 20)를 이용하여 4℃에서 18시간동안 반응시키고, 반응 후 0.1% Tween 20/1×TBS로 5분씩 3회 세척하고, 2차항체 anti-rabbit이 1:1000비율로 희석된 5% non-fatmilk(1×TBS-0.1% Tween 20)를 이용하여 상온에서 1시간동안 반응시켰다. 반응 후 1×TBS-0.1% Tween 20로 10분씩 2회 세척 후 detection agent로 membrane을 발색한 후 즉시 Polaroid film을 사진 촬영을 하였다.
[실험 결과1] 단삼 및 단삼 발효산물의 기능성 성분 및 항산화 활성 평가
(1-1) 단삼 및 단삼 발효산물의 총 페놀 및 플라보노이드 함량 비교 결과
도 3처럼 단삼 및 단삼 발효산물의 총 페놀성 성분 함량을 비교한 결과 3차발효>2차발효>1차발효>비발효순으로 높았으며, 총 플라보노이드 성분 함량을 비교한 결과, 총 페놀성 성분 함량과 유사하게 3차발효>2차발효>1차발효>비발효 순으로 높았다.
(1-2) DPPH 라디칼 소거능 비교 결과
생체 내 산소가 유입되어 세포 내에서 이용될 때, superoxide anion radical(ㆍO2), hydrogen peroxide(H2O2), hydroxyl radical(ㆍOH), single oxygen (1O2), 그리고 지질의 free radical 즉, alkoxyl radical(ROㆍ), alkoxyl peroxyl radical(ROOㆍ)과 같은 활성산소 종이 부산물로 생성된다(Singfh, 1989). 이러한 활성산소 종은 많은 질환을 초래하기 때문에 활성 종에 의해 유발된 질환을 예방할 뿐만 아니라, 그 발암성과 독성이 문제시되고 있는 합성 항산화제를 대체하기 위해, 천연물로부터 강력하면서도 독성이 없는 천연 항산화제를 찾아내는 것이 절실히 요구되고 있는 실정이다(Moure et al., 2001).
DPPH 라디칼 소거능은 DPPH가 추출물 내 항산화물질에 의해 전자나 수소를 받아 불가역적으로 안정한 분자를 형성하여 환원되어짐에 따라 짙은 자색이 탈색되어지는 원리를 이용하여 측정한다. 전자공여 작용은 활성 라디칼에 전자를 공여하여 기질(subtence)의 지방질 산화를 억제하는 목적으로 사용되고 있을 뿐만 아니라, 인체 내에서 활성 라디칼에 의한 노화를 억제하는 목적으로 이용되고 있다.
단삼 및 단삼 발효산물 Ethyl acetate 분획물의 DPPH scavenging activity 결과, 도 4처럼 3차발효>2차발효>1차발효>비발효 순으로 활성을 보였다.
즉, DPPH 라디칼 소거능 결과, 8㎍/ml농도에서 비발효단삼 79.8%, 1차발효단삼 90.39%, 2차발효단삼 91.45%, 3차발효단삼 93.58%의 활성을 보였다(A). 따라서 비발효 단삼보다 단삼 발효산물의 DPPH 라디칼 소거능 활성이 높아짐을 확인 할 수 있었다. 또한 고농도에서는 모두 90%이상의 활성을 보여 저농도(1.6㎍/ml)에서 비교해 본 결과, 비발효단삼 43.34%, 1차발효단삼 69.37%, 2차발효단삼 70.28%, 3차발효단삼 72.4%의 활성을 보였다(B).
[실험 결과2] 단삼 및 단삼 발효산물의 산화적 DNA 손상 억제력 평가
암은 유전적인 요인과 환경적인 요인이 복합적으로 작용하여 진행되는 다단계 과정이다. 정상세포에서 암 조직으로 발달 되는 데는 크게 개시(initiation), 촉진(promotion), 진행(progression)의 세 단계를 거쳐 발생하는 것으로 알려져 있으며, 발암의 initiation은 전자 친화성 발암인자(initiator)가 생체 내에서 대사적으로 활성화되어 유전자의 핵산에 비가역적으로 결합함으로써 정상세포의 DNA를 손상시켜 신생물 전구세포(preneoplastic cell)를 형성하는 돌연변이 현상으로 설명된다. 암의 initiation 단계에서 발생되는 DNA 손상은 암 발생과 83% 이상의 높은 상관성을 나타내므로 initiation 단계에서의 DNA 손상 억제는 항암활성에 있어서 중요한 역할을 한다(Surh, 1999; Johnson et al., 1994).
단삼 및 단삼 발효산물 Ethyl acetate분획물의 산화적 DNA 손상 억제 활성은 ΨX-174 RF I plasmid DNA cleavage assay를 이용한 비세포적 시스템으로 평가하였다. ΨX-174 RF I plasmid DNA cleavage assay는 정상적인 plasmid DNA는 supercoiled form (SC, untreated group) 형태로 존재하나 산화적 손상을 받아 open-circular form (OC)형태로 전환되는 원리를 이용하여 산화적 DNA 손상 억제력을 평가한다(Surh, 1999).
단삼 및 단삼 발효산물 Ethyl acetate분획물의 ΨX-174 RF I plasmid DNA cleavage assay를 통한 FeCl2에 의한 산화적 DNA 손상을 평가한 결과, 도 5처럼 비발효와 단삼 발효산물 모두 산화적 DNA 손상을 억제하였다. control과 비교하여 비발효에서 58.7%, 1차발효에서 75%, 2차발표에서74%, 3차발효에서 84% DNA손상 억제를 하였으며, B시료에서 1차발효는 70%, 2차발효에서 89.5%, 3차발효에서 98.7% 손상 억제를 하여 3차발효에서 가장 높은 억제력을 보였다.
즉, ΨX-174 RF I plasmid DNA cleavage assay를 통한 FeCl2에 의한 산화적 DNA 손상을 평가한 결과, control과 비교하였을 때 비발효에서 58.7%, 1차발효에서 75%, 2차발표에서74%, 3차발효에서 84% DNA손상 억제를 하였으며, B시료에서 1차발효는 70%, 2차발효에서 89.5%, 3차발효에서 98.7% DNA손상손상 억제를 하였다.
[실험 결과3] 단삼 및 단삼 발효산물의 항염증 효능 평가
단삼 및 단삼 발효산물의 항염증 효능은 NO 생성 억제를 통한 평가와 iNOS 및 COX-2 단백질 발현을 통해 평가하였다. NO는 피부손상 및 노화의 주요원인이 되며 매우 불안정한 화합물로서 lipopolysccaride (LPS)와 같은 염증유발물질에 의한 NO 생성효소인 iNOS의 활성화를 통해 생성된다. RAW 264.7 cells는 LPS 자극에 의하여 염증신호가 전달되면 다량의 NO를 생성하며, 생성된 NO는 배지로 방출된다.
단삼 및 단삼 발효산물 ethyl acetate 분획물의 NO 생성 억제력을 평가한 결과, 도 6처럼 LPS로 자극된 RAW 264.7 cells는 자극되지 않은 구간보다 NO가 약 2.5배 이상(64μM)생성되었다. 그러나 LPS 존재 하 단삼을 처리하였을 때 대조구에 비하여 NO 생성을 억제하였다.
비발효 및 단삼 발효산물의 농도를 100㎍/ml(도 6(A))에서 처리하였을 때 NO 생성 억제력이 높았으며 비발효에서 가장 높은 NO생성억제력을 보였다. 또한, 12.5㎍/ml농도에서 비교 한 결과(도 6(B))에서도 비발효구간에서 가장 높은 NO생성억제력을 보였다.
도 7a와 도 7b에서 NO 생성은 iNOS 단백질의 발현과 밀접한 관련이 있기 때문에 단삼 및 단삼 발효산물 ethyl acetate 분획물의 NO 생성억제가 iNOS 단백질의 발현 조절에 의한 것인지를 평가한 결과, LPS는 과도한 iNOS의 발현을 유도했으나 비발효단삼과 단삼 발효산물 ethyl acetate 분획물은 LPS에 의해 야기되는 iNOS의 발현을 억제하였으며, 특히 1차발효단삼에서 각각 61%, 59%의 억제율을 보인 반면, COX-2의 발현은 억제하지 못하였다.
이러한 결과를 통해, 단삼 발효산물은 염증반응 시 발현되는 과도한 iNOS 단백질의 생성을 억제하여 피부손상 및 노화의 주요원인인 NO의 생성을 억제한다고 사료된다.
즉, 단삼 및 단삼 발효산물의 항염증 효능 평가에서 ethyl acetate 분획은 항염증 효능은 뛰어났다. LPS 존재 하 단삼 및 단삼 발효산물의 처리는 비발효에서 가장 높은 NO 생성 억제력을 보였고, 단삼 및 단삼 발효산물은 iNOS 단백질 발현을 억제한 것으로 나타났으며 COX-2 발현은 억제하지 못하는 것으로 확인되었다.
따라서 본 연구 결과들을 종합해 볼 때 비발효 및 단삼 발효산물의 약리규명에 대한 기초자료 데이터를 제공하여 항노화 및 항염을 타킷으로 하는 의약품, 화장품 및 기능성 식품 소재로의 이용과 천연물 소재로 생리활성물질 탐색에 중요한 천연자원으로 이용이 가능하고, 고부가가치 제품개발이 가능한 소재로 판단된다.
본 발명은 기재된 실시예에 한정되는 것은 아니고, 본 발명의 사상 및 범위를 벗어나지 않고 다양하게 수정 및 변형할 수 있음은 이 기술의 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 자명하다. 따라서 그러한 변형예 또는 수정예들은 본 발명의 특허청구범위에 속한다 해야 할 것이다.

Claims (7)

  1. 단삼을 원료로 하여 건조하는 제1단계;
    상기 제1단계의 건조물을 분쇄하여 분말로 생성하고, 고압멸균장치(autoclave)를 이용하여 잡균을 멸균하는 제2단계;
    상기 제3단계의 분말을 배양조 상에서 발효미생물과 증류수를 혼합하여 혼합물을 생성하는 제3단계;
    상기 제3단계의 혼합물을 발효실 상에서 인큐베이터를 이용하여 발효하는 제4단계;
    상기 제4단계의 발효혼합물을 재 건조하고, 고압멸균장치(autoclave)를 이용하여 발효미생물을 멸균하는 제5단계;
    상기 제5단계의 발효혼합물을 발효조 상에서 식용발효미생물과 혼합하여 액상화된 발효산물을 생성하는 제6단계;
    상기 제6단계의 발효산물을 규조토여과기를 이용하여 불순물을 제거하고 가열하여 농축하는 제7단계; 및
    상기 제7단계의 발효산물을 스프레이 드라이어(Spray dryer)를 이용하여 수분율 5~7%를 지니도록 건조하는 제8단계;를 포함하여 이루어지는 것을 특징으로 하는 미생물을 이용한 단삼 발효산물을 제조하는 방법.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 제2단계는 분쇄기로 100~200메쉬의 분말로 생성하고, 고압멸균장치를 이용하여 121~132℃의 온도로 5~20분간 잡균을 멸균하는 것을 특징으로 하는 미생물을 이용한 단삼 발효산물을 제조하는 방법.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 제3단계는 분말에 발효미생물 Ganoderma lucidum, Coriolus versicolor, Phellinus linteus , Fomes fomentarius , Coriolus sinensis를 ml 당 개체수가
    Figure pat00013
    ~
    Figure pat00014
    의 개체수가 되도록 배양시켜 증류수와 혼합하여 pH 4.5~6.7을 지니도록 한 다음, 질소원 5~10중량%와 탄소원 5~10중량%를 추가하여 수분율 15~30%를 지닌 혼합물을 생성하는 것을 특징으로 하는 미생물을 이용한 단삼 발효산물을 제조하는 방법.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 제4단계는 혼합물을 인큐베이터의 온도 15~45℃와, 습도 40~80%를 유지하는 조건 하에서 3~40일간 발효하여 고체화된 발효혼합물을 생성하는 것을 특징으로 하는 미생물을 이용한 단삼 발효산물을 제조하는 방법.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 제5단계는 발효혼합물을 수분율이 10%이하가 되도록 재 건조하고, 고압멸균장치를 이용하여 121℃~132℃의 온도로 5~20분간 발효미생물을 멸균하는 것을 특징으로 하는 미생물을 이용한 단삼 발효산물을 제조하는 방법.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 제6단계는 발효혼합물을 발효조의 온도 18℃~50℃를 유지하는 조건 하에서 식용발효미생물인 아스퍼질러스(Aspergillus), 바실러스(Bacillus), 락토바실러스(Lactobacillus)속을 ml 당 개체수가
    Figure pat00015
    ~
    Figure pat00016
    의 개체수가 되도록 배양시켜 투입하고, 무압에서 발효하여 액상화된 발효산물을 생성하는 것을 특징으로 하는 미생물을 이용한 단삼 발효산물을 제조하는 방법.
  7. 제1항에 있어서,
    상기 제7단계는 발효산물을 증발 농축(evaporation)방법으로 고형분의 함량 25~60 Brix를 지니도록 농축하는 것을 특징으로 하는 미생물을 이용한 단삼 발효산물을 제조하는 방법.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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WO2021010791A1 (ko) * 2019-07-17 2021-01-21 주식회사 리바이오 단삼 생물전환 추출물 및 홍삼 생물전환 추출물을 포함하는 심혈관계 질환 개선, 예방 또는 치료용 조성물
WO2021010790A1 (ko) * 2019-07-17 2021-01-21 주식회사 리바이오 단삼 생물전환 추출물 및 홍삼 생물전환 추출물을 포함하는 항암용 조성물

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WO2021010791A1 (ko) * 2019-07-17 2021-01-21 주식회사 리바이오 단삼 생물전환 추출물 및 홍삼 생물전환 추출물을 포함하는 심혈관계 질환 개선, 예방 또는 치료용 조성물
WO2021010790A1 (ko) * 2019-07-17 2021-01-21 주식회사 리바이오 단삼 생물전환 추출물 및 홍삼 생물전환 추출물을 포함하는 항암용 조성물
KR20210009731A (ko) * 2019-07-17 2021-01-27 주식회사 리바이오 단삼 생물전환 추출물 및 홍삼 생물전환 추출물을 포함하는 항암용 조성물

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