KR20140068351A

KR20140068351A - 카테킨 생물전환능을 가지는 로도토룰라 그라미니스 ｊａｇ－１２ 및 이를 이용한 카테킨의 생물전환방법

Info

Publication number: KR20140068351A
Application number: KR1020120135692A
Authority: KR
Inventors: 최혁준; 한복경; 박수범
Original assignee: 주식회사 비케이바이오
Priority date: 2012-11-28
Filing date: 2012-11-28
Publication date: 2014-06-09
Also published as: KR101458806B1

Abstract

본 발명은 에피갈로카테킨 갈레이트를 에피카테킨 갈레이트로 전환시키는 생물전환능을 가진 로도토룰라 그라미니스(Rhodotorula graminis) JAG-12[기탁번호: KFCC11539P], 이를 이용한 녹차 추출물 발효물의 제조방법, 및 이를 이용한 생물전환을 이용한 에피갈로카테킨 갈레이트의 저감방법에 관한 것으로, 본 발명의 균주를 통해 쓴 맛이 저감되고 기호성이 증진된 발효 녹차의 제조가 가능해지고, 에피갈로카테킨 갈레이트로부터 에피카테킨 갈레이트를 생산할 수 있다.

Description

카테킨 생물전환능을 가지는 로도토룰라 그라미니스 ＪＡＧ－１２ 및 이를 이용한 카테킨의 생물전환방법{Rhodotorula graminis JAG-12 having bioconversion capacity of catechin and method for bioconversion using it}

본 발명은 로도토룰라 그라미니스 균주 및 그 이용에 관한 것이다. 특히 에피갈로카테킨 갈레이트를 에피카테킨 갈레이트로 생물전환시킬 수 있으므로, 녹차 또는 이를 포함하는 식품이나 건강기능식품의 쓴 맛을 저감시켜 기호성을 증진시킬 수 있는 균주 및 그 이용에 관한 것이다.

오랜 동안 녹차의 인체에 대한 건강 효능은 세계적으로 주목을 받고 있고, 세계 각국에서 생체 효능에 대한 연구가 활발히 진행되고 있음. 녹차에는 알칼로이드, 폴리페놀, 아미노산(theanine), 비타민 등 여러 기능성 물질이 함유되어 있으며, 이 기능성 물질들은 혈액순환, 항암효과, 항산화 효과, 노화억제, 항당뇨 효과, 항균 효과, 인체 독성 제거 효과 등이 있는 것으로 알려져 있다[차의 기능성 성분과 생리활성, 한국차학회지, 1(1), 175-191(1995)].

다른 식물에 비하여 녹차에는 폴리페놀류가 다량 함유되어 있어 일반식물과는 달리 항암효과, 항산화효과, 항균효과 등의 여러 생리활성이 있는 것으로 알려져 있음. 폴리페놀류 중에서 카테킨은 녹차의 효능을 나타내는 성분으로 가장 잘 알려져 있으며, 많은 연구에 의해 녹차가 여러 생리활성을 발휘하는데 가장 중요한 역할을 하는 성분이 카테킨이라는 사실이 밝혀졌다.

카테킨에는 에피갈로카테킨(epigallocatechin: EGC), 에피카테킨(epicatechin: EC), 에피갈로카테킨 갈레이트(epigallocatechin gallate: EGCG), 에피카테킨 갈레이트(epicatechin gallate: ECG) 등으로 구분된다. 상기 카테킨은 인체에 유익한 여러 가지 생리학적 기능을 가지는 것으로 알려져 있는데, 예를 들어, 항산화(Joshi S et al., Biomed. Environ. Sci. 17(4):402-409, 2004; Cai Y J et al., Chem. Phys. Lipids 12(1-2):109-117, 2002; Liu ZQ et al., Chem. Phys. Lipids 106(1):53-63, 2000), 항암(Moyers S. B et al., Nutr. Rev. 62(5):204-211, 2004), 항염증(Tedeschi E et al., Ann. NY Acad. Sci. 973:435-437, 2002; Trompezinski S et al., Arch. Dermatol. Res. 295(3):112-116, 2003), 항노화(Cooper R. et al., J. Altern. Complement Med . 11(3):521-528, 2005), 항균 및 항바이러스(Yanagawa Y et al., Curr. Microbiol. 47(3):244-249, 2003; Stapleton P. D. et al., Int. J. Antimicrob. Agents 23(5):462-467, 2004; Fassina G. et al., AIDS 16(6):939-941, 2002) 활성을 가지고 있는 것으로 보고 되고 있다.

그러나 녹차 추출물 또는 카테킨 성분을 농축할 경우 특히 카테킨에 포함된 에피갈로카테킨 갈레이트 성분으로 인하여 특유의 쓴 맛이 발현되어 녹차 또는 이들 카테킨을 함유하는 카테킨 강화 식품이나 건강기능식품의 제조시 용량 및 용법에 제한을 받아왔다.

이를 해결하기 위해서 한국공개특허 제 2011-60199호 및 한국등록특허 제1150555호는 감미료와 산미료 및 사이클로덱스트린 등으로 마스킹하는 방법을 제시하고 있고, 한국등록특허 제0720817호는 녹차 추출물의 쓴 맛을 은폐하기 위한 백당 또는 미결정 셀룰로오스를 이용하는 펠렛 시드를 활용하는 방법을 제시하고 있다.

그러나 모두 마스킹이나 펠렛화를 위해 부형제가 사용되고 있으며, 부형제가 최종 식품 또는 건강기능식품의 형태에 따라 다시 검토되어야 하고, 부형제의 사용에 따라 유효성분인 카테킨의 함량이 충분히 강화될 수 없는 문제가 빈번히 발생하게 되었다.

본 발명은 에피갈로카테킨 갈레이트를 에피카테킨 갈레이트로 생물전환시켜, 녹차 또는 이를 포함하는 식품이나 건강기능식품의 쓴 맛을 저감시키면서 기호성을 증진시킬 수 있는 균주 및 그 이용방법을 제공하기 위한 것이다.

본 발명은 에피갈로카테킨 갈레이트를 에피카테킨 갈레이트로 전환시키는 생물전환능을 가진 로도토룰라 그라미니스(Rhodotorula graminis) JAG-12[기탁번호: KFCC11539P]을 제공한다.

또한 본 발명은 녹차 추출물에 로도토룰라 그라미니스(Rhodotorula graminis) JAG-12[기탁번호: KFCC11539P]을 접종하는 단계를 포함하는 녹차 추출물 발효물의 제조방법을 제공한다.

본 발명의 녹차 추출물 발효물의 제조방법은, 상기 접종 단계 후, 22 내지 32 ℃, 바람직하게는 25 내지 30 ℃에서 15 내지 25 시간, 바람직하게는 18 내지 24 시간, 더욱 바람직하게는 20 내지 22 시간 배양하는 단계를 더 포함한다.

본 발명의 녹차 추출물 발효물의 제조방법은, 상기 배양하는 단계에서 진탕 배양하는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 녹차 추출물 발효물의 제조방법에서, 상기 진탕 배양은 100 내지 300 rpm으로 수행하는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 녹차 추출물 발효물의 제조방법에서, 상기 배양하는 단계는 pH 4 내지 7에서 수행되는 것을 특징으로 한다.

또한 본 발명은 에피갈로카테킨 갈레이트 함유 용액에 로도토룰라 그라미니스(Rhodotorula graminis) JAG-12[기탁번호: KFCC11539P]을 접종하여, 에피갈로카테킨 갈레이트를 에피카테킨 갈레이트로 생물전환시키는 에피갈로카테킨 갈레이트의 저감방법을 제공한다.

본 발명의 로도토룰라 그라미니스(Rhodotorula graminis) JAG-12를 통해 쓴 맛이 저감되고 기호성이 증진된 발효 녹차의 제조가 가능해지고, 에피갈로카테킨 갈레이트로부터 생물전환을 통해 에피카테킨 갈레이트를 생산함으로써 에피갈로카테킨 갈레이트를 저감시킬 수 있으므로, 카테킨 특유의 쓴 맛이 발현되는 녹차를 비롯하여, 카테킨을 함유하는 카테킨 강화 식품이나 건강기능식품의 쓴 맛 및 기호성을 증진시키기 위해 활용 가능성이 높다.

도 1은 본 발명의 로도토룰라 그라미니스 JAG-12 계통발생론적관계를 나타낸 것이다.
도 2는 실시예 3의 녹차 추출물 농도에 따른 로도토룰라 그라미니스 JAG-12의 생육곡선을 나타낸 것이다.
도 3은 실시예 4의 온도에 따른 로도토룰라 그라미니스 JAG-12의 생육곡선을 나타낸 것이다.
도 4는 실시예 4의 정치배양 및 진탕배양의 속도에 따른 로도토룰라 그라미니스 JAG-12의 생육곡선을 나타낸 것이다.
도 5는 실시예 4의 pH에 따른 로도토룰라 그라미니스 JAG-12의 균수를 나타낸 것이다.
도 6은 실시예 5의 최적조건에서 배양시간에 따른 카테킨 조성의 변화를 나타낸 것이다.
도 7은 실시예 5의 0 시간째와 18시간째의 카테킨 함량의 크로마토그램을 나타낸 것이다.

본 발명의 균주는 고추장에서 분리된 것으로, 탄나아제 생성능이 뛰어나 카테킨 특유의 쓴 맛을 나타내는 주요 성분이 에피갈로카테킨 갈레이트를 에피카테킨 갈레이트로 생물전환시킴으로써, 카테킨 특유의 쓴 맛이 발현되는 녹차를 비롯하여, 카테킨을 함유하는 카테킨 강화 식품이나 건강기능식품의 쓴 맛 및 기호성을 증진시키기 위해 이용된다.

본 발명의 균주는 동정 결과 로도토룰라 그라미니스(Rhodotorula graminis) 에 속했으며 본 발명에서는 이를 로도토룰라 그라미니스(Rhodotorula graminis) JAG-12로 명명하고 2012년 9월 27일자로 한국미생물보존센터에 기탁하여 기탁번호를 KFCC11539P로 부여받았다.

이하 실시예, 비교예 및 실험예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명한다. 하기 실시예는 본 발명을 설명하기 위한 예시적인 것일 뿐 이에 의해 본 발명의 기술적 사상의 범위가 한정되는 것은 아니다.

실시예1: 국산 발효식품에서 탄나아제 생성 균주의 분리 및 선발

국산 발효식품에서 탄나아제 생성 균주를 분리하였다. 상기 발효식품 1 g을 시료로, 완전히 현탁 또는 잘게 절단하고, 10 mL의 0.88% NaCl용액을 첨가하여 내용물 전체를 파쇄하였다. 이를 10 진 희석법(serial dilution)에의해 0.88% NaCl용액에 희석하여, 1%(w/v) tannic acid가포함된 YM 아가배지(YM agar, Difco Co., France) 또는 PDA 배지(PDA, Difco Co., France)에 도말하였다. 상기 도말한 아가배지(agar plate)는 37 ℃에서 3 일간 배양한 다음, 균주 주변에 투명환을 형성하는 균주를 분리하였고, 총 2 종의 효모와 7 종의 곰팡이를 선택하였다.

2 종의 효모 중 1 종은 고추장에서 분리하였으며, 나머지 1 종은 무에서 분리하였다. 7 종의 곰팡이 중 4주는 김치로부터, 나머지 3 종은 각각 포도, 감, 콩나물에서 분리하였다. 상기 분리된 9 종의 균주를 각각 효모는 YM 배지, 곰팡이는 PDB 배지에서 액체배양 한 후, 배양 상등액의 tannase 활성을 측정하여 활성이 가장 우수한 균주인 고추장에서 분리 된 효모 1 종을 최종 선정하였다.

실시예2: 균주의 동정

상기 실시예 1에서 선발된 JAG-12는 API kit(20C AUX, Biomrieux Co., France)을 이용한 생화학적 특성과 18S rRNA 염기서열 분석을 통하여 동정하였다.

API 20C AUX kit(Biomrieux Co., France)을 이용한 당대사능을 확인한 결과는 표 1에 나타내었다. 표 1에서 +은 당대사 활성이 있는 경우를 의미하고, -는당대사 활성이 없는 경우를 의미한다.

당	반응
Glycerol 2-Keto-D-Gluconate Arabinose Xylose Adonitol Xylitol Galactose Inositol Sorbitol α-Methyl-D-Glucoside N-Acetyl-D-Glucosamine Cellobiose Lactose Maltose Saccharose Trehalose Melezitose Raffinose Hyphae/Pseudohyphae	+ + + + + + + + + + - - - + + + + + -

상기 표 1에 나타낸 바와 같이, 상기 JAG-12는 글리세롤(Glycerol), 아라비노스(Arabinose), 자일로즈(Xylose), 아도니톨(Adonitol), 자일리톨(Xylitol), 갈락토스(Galactose) 및 소르비톨(Sorbitol) 등을 당공급원으로 이용할 수 있고, 셀로바이오스(Cellobiose), 락토스(Lactose), 말토스(Maltose) 및사카로스(Saccharose) 등을 당공급원으로 이용할 수 없는 것으로 확인되었다.

한편 JAG-12에 대한 분자유전학적 특성에 의한 동정은 18S rRNA유전자의염기서열을 결정한후, 분석을 통해 수행하였다. 구체적으로, Genomic DNA를 분리한 후, 18S ribosomal RNA를 추출하여 서열번호 1의 NS1 프라이머 및 서열번호 2의 NS2 프라이머로 이루어진 프라이머쌍으로 PCR을 수행함으로써 18S rRNA 염기서열분석을 수행하였고, JAG-12의 18S rRNA는 총 1685 bp로서 서열번호 3에 나타내었다.

상기 서열번호 3의 18S rRNA 염기서열을 GenBank의 블라스트 검색 데이터베이스(blast search database)를 이용하여 상동성 검색을 실시한 결과를 기초로 다른 효모와의 계통발생론적관계를 도 1에 나타내었다.

상기 도 1에 나타낸 바와 같이, 상기 JAG-12균주는 로도토룰라 그라미니스(Rhodotorula graminis)로 최종 동정되었다.

본 발명에서는 이를 로도토룰라 그라미니스(Rhodotorula graminis) JAG-12로 명명하고 2012년 9월 27일자로 한국미생물보존센터에 기탁하여 기탁번호를 KFCC11539P로 부여받았다.

실시예3: 녹차 추출물 농도에 따른 생육곡선

건조 녹차 시료 2 kg에 중량 20배의 증류수을 가하여 80℃, 2시간 추출 후 여과하여 획득한 녹차 추출물을 얻고, 이를 0.45 ㅅm의 syringe filter로 제균하였다.

상기 제균한 녹차 추출물 농도가 2, 4, 8, 16, 25, 50, 75, 100 중량%가 되도록 멸균증류수로 희석한 후 본 발명의 로도토룰라 그라미니스 JAG-12 균주를 2 부피%가 되도록첨가한 후, 초기 10시간까지는 2시간 간격으로 배양액을 취하였고, 24 시간 및 48 시간에도 배양액 1 mL씩 취하였다. 상기 배양액을 YM 한천고체배지에 도말한 다음 27 ℃에서 2 일 배양하여 생균수를 측정하였으며, 그 결과를 기초로 생육곡선을 작성하여 도 2에 나타내었다.

도 2에 나타낸 바와 같이, 접종후 2 시간부터 대수증식기가 시작되어 접종 후 8 시간 후에 대수증식기가 종료되었다. 녹차 추출물의 농도가 25 % 미만인 경우에는 균수의 증가가 10 시간 이전, 약 7 내지 9 시간째에 더 이상 증대되지 않았고, 25 % 이상의 녹차 추출물 농도에서는 약 20 내지 25 시간째에 더 이상 증대되지 않음을 확인할 수 있었다. 따라서 JAG-12의 생육에 충분한 배양시간이 주어질 경우 100% 녹차 추출물을 사용하는 것도 가능하다고 판단하였고, 25 중량% 이상에서는 균주의 생육곡선에 큰 차이가 없었다.

실시예4: 배양조건에 따른 녹차 추출물 발효물의 제조

상기 실시예 3의 제균한 녹차 추출물(희석하지 않은 100 % 녹차 추출물)를 사용하였다.

상기 녹차 추출물에 본 발명의 로도토룰라 그라미니스 JAG-12를 모배양을 실시한 후, 상기 녹차 추출물에 2%(v/v)가 되도록 접종하여 배양하였다. 상기 v/v는 녹차 추출물 전체 부피를 기준으로 모배양액의 첨가 부피를 표현한 부피비이다.

온도 조건은 각각 25, 30, 35 및 37℃에서 수행하였고, 배양 조건의 경우 정치배양과 진탕배양(150 및 250 rpm)에서 수행하였으며, pH의 경우 각각 pH 4, pH 5, pH 6, pH 7, pH 8 및 pH 9에서 수행하였다.

로도토룰라 그라미니스 JAG-12를 2%(v/v) 접종한 후, pH를 조절하지 않고, 녹차 추출물의 자체 pH에서 배양 온도만을 변화시켜, 각각 25, 30, 35 및 37℃에서배양을 수행하여 균수를 확인하였으며, 그 결과를 도 3에 나타내었다. 상기 도 3에 나타낸 바와 같이, 25, 30℃에서 배양시켰을 때 JAG-12의 생육이 가장 높았고, 25℃와 30℃는 크게 차이가 나지 않았다.

로도토룰라 그라미니스 JAG-12를 2%(v/v) 접종한 후, pH를 조절하지 않고, 25 ℃에서 각각 정치배양과 진탕배양으로 구분하고, 진탕배양은 각각 150, 250 rpm에서 배양하여 규수를 확인하였으며, 그 결과를 도 4에 나타내었다. 상기 도 4에나타낸 바와 같이 정치배양은 다른 시료구와 비교하여 균수가 저조한 것으로 나타나, 정치배양에 비해서 진탕배양이 적합한 것으로 확인되었고, 그 외의 rpm 범위에서는 rpm에따른 균수의 변화는 크지 않은 것으로 나타났다.

로도토룰라 그라미니스 JAG-12를 2%(v/v) 접종한 후, 25℃에서 150 rpm로 24 시간 배양하되, pH만을 변화시켜, 각각 pH4, pH 5, pH 6, pH 7, pH 8 및 pH 9에서발효를수행하여 균수를 확인하였으며, 그 결과를 도 5에 나타내었다. 상기 도 5에 나타낸 바와 같이 pH 8 및 pH 9는 다른 시료구와 비교하여 균수가 저조한 것으로 나타나, 배양조건으로 부적합한 것으로 확인되었다.

실시예5: 에피갈로카테킨 갈레이트 저감효과 확인

상기 실시예 4에서 검토한 최적 조건, 즉 로도토룰라 그라미니스 JAG-12를 2%(v/v)만큼 접종한 후, 25℃에서 150 rpm으로 24시간 동안 배양하면서 각각 0, 6, 9, 12, 15, 18, 24 시간 째에 카테킨 조성 변화를 확인하였다.

카테킨 함량은 표 2의 기기 및 조건, 그리고 표 3의 용매 용출 조건을 이용하여 고성능액체크로마토그래피로 분석하였다.

사용기기	YL9110 (YOUNG-LIN Co., Ltd., Seoul, Korea)
검출기	YL9120 (UV, YOUNG-LIN Co., Ltd., Seoul, Korea)
검출기흡광도	280 nm
분석컬럼	Eclipes XDB-C18 (Agilent Co., Ltd., Santa Clara, CA, USA)
컬럼크기	4.6ㅧ250 mm, 5 μm
컬럼온도	Room temp.
유속	1 mL/min

Time (min)	Water (%)	Methanol (%)	1%(v/v) acetic acid (%)
0	75	20	5
15	75	20	5
25	30	65	5
30	30	65	5
32	75	20	5
40	75	20	5

도 6에 나타낸 것과 같이 총 9개의 카테킨을 분석하였으며, 18시간의 배양시간동안 에피갈로카테킨 갈레이트(epigallocatechin gallate, EGCG)가 에피카테킨 갈레이트(epicatechin gallate, ECG)로, 에피갈로카테킨(epigallocatechin, EGC)이 에피카테킨(epicatechin, EC)으로 생물전환되는 것을 확인하였다. 18시간 이후에는 카페인(CF)의 함량이 증가하였으나, 크게 변화하지 않았다.

상기 0 시간째의 배양전과 18시간 배양했을 때의 카테킨 함량을 나타내는 크로마토그램을 도 7에 나타내었다. 위쪽 배양전의 크로마토그램은 EGCG와 ECG의함량이 높고 갈레이트의 함량이 매우 낮지만, 아래쪽 18 시간 배양 후의 크로마토그램은 생물전환에 의해 갈레이트 함량이 증가하고 EGCG와 ECG의 함량이 현저히 낮아진 것을 확인할 수 있다.

한국미생물보존센터(국내)

KFCC11539P

20120927

<110> BKBIO.CO.,Ltd. <120> Rhodotorula graminis JAG-12 having bioconversion capacity of catechin and method for bioconversion using it <130> HPC3711 <160> 3 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> NS1 primer <400> 1 gtagtcatat gcttgtctc 19 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> NS4 primer <400> 2 cttccgtcaa ttcctttaag 20 <210> 3 <211> 1685 <212> DNA <213> Rhodotorula graminis <400> 3 aatggctcat taaatcagtc atagtttatt tgatggtacc ttactacatg gataactgtg 60 gtaattctag agctaataca tgctgaaaaa tcccgacttc tggaagggat gtatttatta 120 gatccaaaac caatggcctt cgggtctcct tggtgaatca tgataactgc tcgaatcgca 180 tggccttgcg ccggcgatgc ttcattcaaa tatctgccct atcaactttc gatggtagga 240 tagaggccta ccatggtgat gacgggtaac ggggaataag ggttcgattc cggagagagg 300 gcctgagaaa cggccctcag gtctaaggac acgcagcagg cgcgcaaatt atcccctggc 360 aacactttgc cgagatagtg acaataaata acaatgcagg gctcttacgg gtcttgcaat 420 tggaatgagt acaatttaaa tcccttaacg aggatcaatt ggagggcaag tctggtgcca 480 gcagccgcgg taattccagc tccaatagcg tatattaaag ttgttgccgt taaaaagctc 540 gtagtcgaac ttcgggtcct gtccgccggt ccgccttctt ggtgtgtact tgttggatgg 600 gaccttacct cctggtgaac ggcgatgtcc tttactgggt gtcgtcgcaa accaggacgt 660 ttactttgaa aaaattagag tgttcaaagc aggcctttgc ccgaatacat tagcatggaa 720 taatagaata ggacgcgcgt tcccattttg ttggtttctg agatcgccgt aatgattaat 780 agggatagtt gggggcattt gtattccgac gtcagaggtg aaattcttgg attgccggaa 840 gacaaactac tgcgaaagca tttgccaagg atgttttcat tgatcaagaa cgaaggaagg 900 gggatcgaaa acgattagat accgttgtag tctcttctgt aaactatgcc aattggggat 960 cggcacagga tttttaatga ctgtgtcggc acccgaagag aaatctttaa atgaggttcg 1020 ggggggagta tggtcgcaag gctgaaactt aaaggaattg acggaagggc accaccaggt 1080 gtggagcctg cggcttaatt tgactcaaca cggggaaact caccaggtcc agacacaata 1140 aggattgaca gattgatagc tctttcttga tcttgtggtt ggtggtgcat ggccgttctt 1200 agttggtgga gtgatttgtc tggttaattc cgataacgaa cgagacctta acctgctaaa 1260 tagaccagcc ggctttggct agctgctgtc ttcttagagg gactatcagc gtttagctga 1320 tggaagtttg aggcaataac aggtctgtga tgcccttaga tgttctgggc cgcacgcgcg 1380 ctacactgac agagccagcg agtctaccac ctttgccgga aggcatgggt aatcttgtga 1440 aactctgtcg tgatggggat agaacattgc aattattgtt cttcaacgag gaatacctag 1500 taagcgtgat tcatcagatc gcgttgatta cgtccctgcc ctttgtacac accgcccgtc 1560 gctactaccg attgaatggc ttagtgaggc ctccggattg gctattggga gctcgcgaga 1620 gcacccgact gccgagaagt gtatgacact ggtgcgatcc tgctgatcgt agtggtctag 1680 ctccc 1685

Claims

에피갈로카테킨 갈레이트를 에피카테킨 갈레이트로 전환시키는 생물전환능을 가진 로도토룰라 그라미니스(Rhodotorula graminis) JAG-12[기탁번호: KFCC11539P].
녹차 추출물에 로도토룰라 그라미니스(Rhodotorula graminis) JAG-12[기탁번호: KFCC11539P]을 접종하는 단계를 포함하는 녹차 추출물 발효물의 제조방법.
제 2 항에 있어서, 상기 접종 단계 후, 22 내지 32 ℃에서 15 내지 24 시간 배양하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 녹차 추출물 발효물의 제조방법.
제 3 항에 있어서, 상기 배양하는 단계에서 진탕 배양하는 것을 특징으로 하는 녹차 추출물 발효물의 제조방법.
제 4 항에 있어서, 상기 진탕 배양은 100 내지 300 rpm으로 수행하는 것을 특징으로 하는 녹차 추출물 발효물의 제조방법.
제 3 항에 있어서, 상기 배양하는 단계는 pH 4 내지 7에서 수행되는 것을 특징으로 하는 녹차 추출물 발효물의 제조방법.
에피갈로카테킨 갈레이트 함유 용액에 로도토룰라 그라미니스(Rhodotorula graminis) JAG-12[기탁번호: KFCC11539P]을 접종하여, 에피갈로카테킨 갈레이트를 에피카테킨 갈레이트로 생물전환시키는 에피갈로카테킨 갈레이트의 저감방법.