CN111265446A - 一种鱼腥草提取物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种鱼腥草提取物及其制备方法和应用。鱼腥草提取物的制备方法包括如下步骤:将鱼腥草粉末加入添加有纤维素酶和/或果胶酶的提取溶剂中提取，制备得到提取液；将提取液加热灭活酶的活性，离心取上清液，减压抽滤得到滤液；将滤液经过大孔吸附树脂纯化，真空冷冻干燥的到鱼腥草提取物。本发明利用酶处理同步结合醇提取，鱼腥草总黄酮的提取率可达95％，提取物中总黄酮含量可达86％，对大肠埃希氏菌的抑菌直径可达10mm，对金黄色葡萄球菌的抑菌直径可达15mm，对铜绿假单胞菌的抑菌直径可达7mm，具有优异的抗菌性能，对ABTS自由基清除率可达96％，弹性蛋白酶的抑制率可达92％，具有优异的抗自由基清除能力和抗衰老效果。

Description

一种鱼腥草提取物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及化妆品技术领域，更具体地，涉及一种鱼腥草提取物及其制备方法和在化妆品防腐中的应用。
背景技术
鱼腥草，别名为蕺菜、臭菜、侧耳根、臭根草，是三白草科蕺菜属多年生草本植物，因有鱼腥味而得名。鱼腥草的主要药用成分为鱼腥草素(癸酰乙醛)、月桂醛、a一蒎浠、芳樟醇、蕺菜硷、异槲皮甙、钾盐、黄酮类等，其中黄酮类物质为其主要有效成分。目前植物中总黄酮传统的提取方法有水煎煮法、乙醇回流提取、索氏提取、渗漉法等，这些方法均存在提取时间长、提取效率低等问题，一些新兴的提取方包括法超声波提取、酶法提取等，酶法条件温和、提取的收率较高，但时间较长，提取的效率不高。
CN110013506A公开了一种鱼腥草有效杀菌成分的提取方法及应用，其先蒸馏手机鱼腥草挥发油，将蒸馏参渣进行酶解处理，再升温至75～85℃进行提取，还需要加入壳聚糖沉淀才能得到鱼腥草黄酮类提取物，不仅提取步骤较为繁杂，且提取温度过高，任意破坏黄酮类物质，最终的黄酮类化合物的得率也只有1.8％，提取率有待提升。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有酶法提取鱼腥草黄酮类物质的提取温度过高，提取率低的缺陷和不足，提供一种鱼腥草提取物的制备方法。
本发明的另一目的在于提供一种鱼腥草提取物，具备优异的抗菌性能和自由基清除效果，抗衰效果显著。
本发明的再一目的在于提供一种鱼腥草提取物在制备大肠埃希氏菌抑制剂中的应用。
本发明的再一目的在于提供一种鱼腥草提取物在制备金黄色葡萄球菌抑制剂中的应用。
本发明的再一目的在于提供一种鱼腥草提取物在制备铜绿假单胞菌抑制剂中的应用。
本发明的又一目的在于提供一种鱼腥草提取物在化妆品防腐中的应用。
本发明上述目的通过以下技术方案实现：
一种鱼腥草提取物的制备方法，包括如下步骤：
S1.将鱼腥草粉末加入添加有纤维素酶和/或果胶酶的提取溶剂中提取，制备得到提取液；
S2.将提取液加热灭活酶的活性，离心取上清液，减压抽滤得到滤液；
S3.将滤液经过大孔吸附树脂纯化，真空冷冻干燥的到鱼腥草提取物；
其中，S1中酶的添加质量与提取溶剂的体积比为0.01～0.04g/L，
提取溶剂为质量浓度为5～50％的丙二醇或甘油或丁二醇的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，
提取pH为3.0～6.0，提取温度为25～65℃，提取料液比为1Kg:20～60L，提取时间0.5～3h。
在本本发明提供的提取方法中，果胶酶和纤维素酶可以破坏细胞壁，加速有效成分的析出，利用丙二醇或甘油或丁二醇的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液作为提取溶剂，可以使黄酮成分更容易提出。
利用酶法辅助醇提取，将植物中总黄酮提取出来，耗时短、成本低、能实现工厂化大规模生产，且安全性高，同时提高了提取率，提取率可达95％左右，提取物中总黄酮含量在86％左右，产品纯度高。
本发明的提取溶剂中丙二醇和其他成分均具有一定的粘度，溶剂浓度过低会导致总黄酮析出降低，浓度过高会导致液体粘稠，阻碍有效成分的析出，同时导致粉末与溶剂接触的表面积减少，也是不利于总黄酮提取的。在酶辅助提取过程中，总黄酮的提取率一定范围内随着酶的增加而上升，但一定范围后总黄酮的提取率不上升，不具有明显的规律性，发明人长期探究得出本发明的具体酶的添加量能够最大限度的达到总黄酮提取量。
提取条件，包括提取pH、提取温度等的确定既要考虑到酶的有效作用，也需要考虑整体的提取功能最大化。将酶处理和溶剂提取一步进行，提取工艺简单化，一步到位，从而缩短时间，减少成本，同时可减少生产设备的投入，更有效提高黄酮提取率。
优选地，S1中提取溶剂中添加纤维素酶和果胶酶，纤维素酶和果胶酶的质量比为1:1。
优选地，S1中提取溶剂中添加0.02g/L的纤维素酶。细胞壁的主要组成成分是纤维素，其他成分含量少，使用纤维素酶更加有效果。细胞壁的胞间层基本上是由果胶质组成，如果植物组织中的果胶质用果胶酶分解掉，细胞就会离散，果胶酶将细胞的胞间层溶解，细胞彼此分离，纤维素酶更加针对细胞壁。
优选地，S1中提取溶剂为丁二醇的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，质量浓度为30％。丁二醇无色无味，粘度低，容易提取，流动性强，比起其他两种成分更加容易析出有效成分。
优选地，S1中提取pH为5.0，提取温度为50℃，提取时间1h，提取料液比为1Kg:30L。
S1中高温灭活酶的具体操作可以为：将提取液在100℃中加热30min，灭酶的活性，然后离心8000rpm 15min，取上清液，进行减压抽滤，舍去残渣，得滤液。
优选地，S3中大孔吸附树脂纯化采用ADS-17型号树脂，70％乙醇解析。本发明的大孔吸附树脂纯化可以采用一般常用的纯化树脂，例如ADS-17、DM-130、HPD-400、DA201-C、S-8；D101、AB-8、HPD-100。
本发明还保护一种鱼腥草提取物的制备方法制备得到的鱼腥草提取物，所述鱼腥草提取物中总黄酮的质量含量≥90％。本发明提供的制备方法、提取得到的鱼腥草提取物中总黄酮含量可以达到90％以上，含有槲皮素、槲皮苷、金丝桃苷、芸香苷等，在防腐抑菌的同时，兼具抗炎、抗衰老、清除自由基等功效，增强了产品的使用效果。
上述鱼腥草提取物在制备大肠埃希氏菌抑制剂中的应用也在本发明的保护范围之内，其具体的应用浓度为：所述大肠埃希氏菌抑制剂中鱼腥草提取物的浓度为25～100mg/mL。
优选地，所述大肠埃希氏菌抑制剂中鱼腥草提取物的浓度为100mg/mL。
上述鱼腥草提取物在制备金黄色葡萄球菌抑制剂中的应用也在本发明的保护范围之内，其具体的应用浓度为：所述金黄色葡萄球菌抑制剂中鱼腥草提取物的浓度为25～100mg/mL。
优选地，所述金黄色葡萄球菌抑制剂中鱼腥草提取物的浓度为100mg/mL。
上述鱼腥草提取物在制备铜绿假单胞菌抑制剂中的应用也在本发明的保护范围之内，其具体的应用浓度为：所述铜绿假单胞菌抑制剂中鱼腥草提取物的浓度为25～100mg/mL。
优选地，所述铜绿假单胞菌抑制剂中鱼腥草提取物的浓度为100mg/mL。
本发明还保护上述鱼腥草提取物在化妆品防腐中的应用。
将鱼腥草总黄酮应用于化妆品防腐中，能有效抑制微生物生长，实现防腐效果，同时有别于传统防腐剂，药食两用植物鱼腥草提取物，天然、安全，提高了消费者的体验感。
鱼腥草提取物对弹性蛋白酶具有抑制作用，弹性蛋白酶可以使皮肤中的弹性蛋白和/或胶原蛋白分解，从而使皮肤产生皱纹，皮肤在衰老过程中弹性蛋白和胶原蛋白会减少，同时分解速度加快，鱼腥草提取物能起到对弹性蛋白酶产生抑制的作用，对ABTS自由基清除率可达96％，弹性蛋白酶的抑制率可达92％，具有优秀的抗衰老性能和自由基清除能力。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明提供了一种鱼腥草提取物的制备方法，利用酶处理同步结合醇提取，有效加速了总黄酮成分的析出和提取，极大缩短了鱼腥草黄酮的提取时间，解决了酶提取耗时长的问题，且提取效率高，鱼腥草总黄酮的提取率可达95％，提取物中总黄酮含量可达86％作用，产品纯度高。
本发明的鱼腥草提取物具有优异的抗菌性能，可以用于抑制大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌，对大肠埃希氏菌的抑菌直径可达10mm，对金黄色葡萄球菌的抑菌直径可达15mm，对铜绿假单胞菌的抑菌直径可达7mm。
本发明提供的鱼腥草提取物ABTS自由基清除率可达96％，弹性蛋白酶的抑制率可达92％，具有优异的自由基清除能力和抗衰老效果。
附图说明
图1为芦丁标准曲线。
图2为鱼腥草提取物对大肠埃希氏菌的抑制作用。
图3为鱼腥草提取物对金黄色葡萄球菌的抑制作用。
图4为鱼腥草提取物对铜绿假单胞菌的抑制作用。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步的说明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非另有说明，本发明实施例采用的原料试剂为常规购买的原料试剂。
实施例1
一种鱼腥草提取物的制备方法，包括如下步骤：
S1.将鱼腥草粉末加入添加有纤维素酶的提取溶剂中提取，制备得到提取液；
S2.将提取液100℃灭活0.5h，8000r/min离心15min，取上清液，减压抽滤得到滤液；
S3.将滤液经过大孔吸附树脂纯化，大孔吸附树脂纯化采用ADS-17型号树脂，70％乙醇解析，真空冷冻干燥的到鱼腥草提取物；
其中，S1中酶的添加质量与提取溶剂的体积比为0.02g/L，
提取溶剂为质量浓度为30％的丁二醇的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，
提取pH为5.0，提取温度为50℃，提取料液比为1Kg:30L，提取时间1h。
实施例2
一种鱼腥草提取物的制备方法，包括如下步骤：
S1.将鱼腥草粉末加入添加有纤维素酶的提取溶剂中提取，制备得到提取液；
S2.将提取液100℃灭活0.5h，8000r/min离心15min，取上清液，减压抽滤得到滤液；
S3.将滤液经过大孔吸附树脂纯化，大孔吸附树脂纯化采用ADS-17型号树脂，70％乙醇解析，真空冷冻干燥的到鱼腥草提取物；
其中，S1中酶的添加质量与提取溶剂的体积比为0.04g/L，
提取溶剂为质量浓度为50％的丁二醇的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，
提取pH为5.0，提取温度为50℃，提取料液比为1Kg:30L，提取时间1h。
实施例3
一种鱼腥草提取物的制备方法，包括如下步骤：
S1.将鱼腥草粉末加入添加有纤维素酶的提取溶剂中提取，制备得到提取液；
S2.将提取液100℃灭活0.5h，8000r/min离心15min，取上清液，减压抽滤得到滤液；
S3.将滤液经过大孔吸附树脂纯化，大孔吸附树脂纯化采用ADS-17型号树脂，70％乙醇解析，真空冷冻干燥的到鱼腥草提取物；
其中，S1中酶的添加质量与提取溶剂的体积比为0.01g/L，
提取溶剂为质量浓度为5％的丁二醇的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，
提取pH为5.0，提取温度为50℃，提取料液比为1Kg:30L，提取时间1h。
实施例4
一种鱼腥草提取物的制备方法，包括如下步骤：
S1.将鱼腥草粉末加入添加有纤维素酶的提取溶剂中提取，制备得到提取液；
S2.将提取液100℃灭活0.5h，8000r/min离心15min，取上清液，减压抽滤得到滤液；
S3.将滤液经过大孔吸附树脂纯化，大孔吸附树脂纯化采用ADS-17型号树脂，70％乙醇解析，真空冷冻干燥的到鱼腥草提取物；
其中，S1中酶的添加质量与提取溶剂的体积比为0.02g/L，
提取溶剂为质量浓度为30％的丁二醇的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，
提取pH为3.0，提取温度为25℃，提取料液比为1Kg:20L，提取时间3h。
实施例5
一种鱼腥草提取物的制备方法，包括如下步骤：
S1.将鱼腥草粉末加入添加有纤维素酶和果胶酶的复合酶的提取溶剂中提取，制备得到提取液；
S2.将提取液100℃灭活0.5h，8000r/min离心15min，取上清液，减压抽滤得到滤液；
S3.将滤液经过大孔吸附树脂纯化，大孔吸附树脂纯化采用ADS-17型号树脂，70％乙醇解析，真空冷冻干燥的到鱼腥草提取物；
其中，S1中酶的添加质量与提取溶剂的体积比为0.02g/L，纤维素酶和果胶酶的质量比为1:1，
提取溶剂为质量浓度为30％的丁二醇的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，
提取pH为6.0，提取温度为65℃，提取料液比为1Kg:60L，提取时间0.5h。
对比例1
一种鱼腥草提取物的制备方法，包括如下步骤：
S1.将鱼腥草粉末加入添加有纤维素酶的提取溶剂中提取，制备得到提取液；
S2.将提取液100℃灭活0.5h，8000r/min离心15min，取上清液，减压抽滤得到滤液；
S3.将滤液经过大孔吸附树脂纯化，大孔吸附树脂纯化采用ADS-17型号树脂，70％乙醇解析，真空冷冻干燥的到鱼腥草提取物；
其中，S1中酶的添加质量与提取溶剂的体积比为0.02g/L，
提取溶剂为质量浓度为30％的丁二醇的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，
提取pH为8.0，提取温度为75℃，提取料液比为1Kg:30L，提取时间1h。
对比例2
一种鱼腥草提取物的制备方法，包括如下步骤：
S1.将鱼腥草粉末加入提取溶剂中提取，制备得到提取液；
S2.将提取液100℃灭活0.5h，8000r/min离心15min，取上清液，减压抽滤得到滤液；
S3.将滤液经过大孔吸附树脂纯化，大孔吸附树脂纯化采用ADS-17型号树脂，70％乙醇解析，真空冷冻干燥的到鱼腥草提取物；
其中，S1中提取溶剂为质量浓度为30％的丁二醇的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，
提取pH为5.0，提取温度为50℃，提取料液比为1Kg:30L，提取时间1h。
结果检测
(1)黄酮提取率和提取物中黄酮含量检测
a标准曲线绘制
分别移取0mL、0.4mL、0.8mL、1.2mL、1.6mL、2.0mL、2.4mL的标准贮备溶液于10mL具塞刻度试管中，分别加入水2.4mL、2.0mL、1.6mL、1.2mL、0.8mL、0.4mL、0mL(即各加水至2.4ml)，再分别加入5％NaNO2溶液0.4mL，振荡混匀，静置6min；再加入10％Al(NO3)3溶液0.4mL，振荡混匀，静置6min；再加入4％NaOH溶液4.0mL，再加水定容至10mL(加2.8ml)，振荡混匀，静置15min，以相应溶剂空白调零，在510nm处测定吸光度。以芦丁浓度为横坐标，以510nm吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，见附图1。
b样品测定：将样品稀释至适宜浓度，精密吸取样品1mL，置于10mL具塞试管中，按上述“芦丁标准曲线的制备”项下自“加水至2.4mL”起，依法测定样品的吸光值，再由标准曲线回归方程计算总黄酮含量。
c药材测定：将鱼腥草粉碎成60目的粉末，取20g粉末，加入30倍70％乙醇加热回流提取2小时，过滤，药渣加15倍90％乙醇加热回流2次，每次提取1小时，过滤，合并滤液，残渣用70％乙醇洗涤，洗液并入同一量瓶中定容，按上述样品测定法测定总黄酮含量。黄酮提取率的计算公式如下：
提取率(％)＝(C1×K1×V1×0.001)/((C2×V2×K2/m2)×m1)
式中:
K1：样品稀释倍数，
C1：根据标准曲线计算的含量(μg/mL)
V1：为供试品溶液体积(mL)。
m1：为提取样品是所用药材重量，mg
K2：步骤c中样品稀释倍数，
C2：步骤c中样品根据标准曲线计算的含量(μg/mL)
V2：步骤c中样品溶液体积(mL)。
m2：步骤c中样品所用药材重量，mg
检测结果如下表1所示：
表1
序号 黄酮提取率/％ 总黄酮含量/％
实施例1 95.2 86.3
实施例2 94.3 84.0
实施例3 89.0 82.1
实施例4 82.3 79.2
实施例5 86.3 81.2
对比例1 63.2 52.0
对比例2 59.3 49.3
(2)鱼腥草提取物对大肠埃希氏菌的抑制作用
采用牛津杯法研究鱼腥草提取物的抑菌性，根据抑菌圈的大小直观反应出待测物的抑菌效果。
具体方法步骤:
1、菌种复苏：钩取少量冻存的大肠埃希氏菌于胰酪大豆胨液体培养基，置于细菌培养箱培养20h左右。将复苏好的菌液进行稀释、扩培，选择合适的稀释倍数进行抑菌圈实验。
2、取培养过后的大肠埃希氏菌稀释10-3、10-4、10-5。在无菌操作条件下，取100μL稀释后的大肠埃希氏菌，均匀涂布于培养基上，置于37℃的细菌培养箱中，培养24h。观察结果，选择单层铺满致密菌为抑菌圈实验最佳稀释倍数，制备相应稀释倍数稀释制备菌悬液。
3、抑菌直径测定：在无菌操作条件下，取制备好的大肠埃希氏菌菌悬液100μL，均匀涂布于培养基上，将四个牛津杯放在培养基表面，编号1、2、3、4取200μL鱼腥草提取液加入牛津杯其中一个编号为1，另外三个牛津杯分别加入200μL20％乙醇空白、生理盐水和卡那霉素编号为2、3和4，作为空白对照、阴性对照和阳性对照，在37℃恒温箱中培养24h后，结果见附图2，其中从左至右的1分别为20、50、100mg/mL的鱼腥草提取物。
检测结果见表2。
表2鱼腥草提取物对大肠埃希氏菌的抑菌圈
样品 直径(mm) 样品 直径(mm)
a.鱼腥草25mg/mL 7 100ug/ml卡那霉素 17
b.鱼腥草50mg/mL 7 100ug/ml卡那霉素 20
c.鱼腥草100mg/mL 10 100ug/ml卡那霉素 20
20％乙醇空白 0 生理盐水 0
从表2和附图2可见，实施例1具有抑制大肠埃希氏菌生长的作用，效果基本可以达到卡那霉素的50％左右。
(3)鱼腥草提取物对金黄色葡萄球菌的抑制作用
金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染,能够在痤疮病灶上加重感染发炎，导致痤疮更严重，曾有研究证实，当金黄色葡萄球菌感染得到控制时，痤疮明显好转。
采用牛津杯法研究鱼腥草提取物的抑菌性，根据抑菌圈的大小直观反应出待测物的抑菌效果。
具体方法步骤:
1、菌种复苏：钩取少量冻存的金黄色葡萄球菌于培养基中，置于细菌培养箱培养20h左右。将复苏好的菌液进行稀释、扩培，选择合适的稀释倍数进行抑菌圈实验。
2、取培养过后的金黄色葡萄球菌稀释10-3、10-4、10-5。在无菌操作条件下，取100μL稀释后的金黄色葡萄球菌，均匀涂布于培养基上，置于37℃的细菌培养箱中，培养24h。观察结果，选择单层铺满致密菌为抑菌圈实验最佳稀释倍数，制备相应稀释倍数稀释制备菌悬液。
3、抑菌直径测定:在无菌操作条件下，取制备好的金黄色葡萄球菌菌悬液100μL，均匀涂布于培养基上，将四个牛津杯放在培养基表面，编号1、2、3、4取200μL鱼腥草提取液加入牛津杯其中一个编号为1，另外三个牛津杯分别加入200μL20％乙醇空白、生理盐水和卡那霉素编号为2、3和4，作为空白对照、阴性对照和阳性对照，在37℃恒温箱中培养24h后，结果见附图3，其中从左至右的1分别为20、50、100mg/mL的鱼腥草提取物。
检测结果见表3。
表3鱼腥草提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌圈
样品 直径(mm) 样品 直径(mm)
a.鱼腥草25mg/mL 13 100ug/ml卡那霉素 24
b.鱼腥草50mg/mL 14 100ug/ml卡那霉素 22
c.鱼腥草100mg/mL 15 100ug/ml卡那霉素 21
20％乙醇空白 0 生理盐水 0
从表3和附图3可见，实施例1具有抑制金黄色葡萄球菌生长的作用，效果基本可以达到卡那霉素的70％以上。皮肤表面的过多的细菌容易引起皮肤炎症和过敏，严重时可导致化脓性病变，故本发明通过抑菌作用可以达到预防过敏，降低过敏时受感染的几率。同时可以协同增效防腐效果，降低防腐剂用量，达到天然无刺激作用。
(4)鱼腥草提取物对铜绿假单胞菌的抑制作用
铜绿假单胞菌(P.Aeruginosa)原称绿脓杆菌，是假单胞菌属的代表菌种。在自然界分布广泛，为土壤中存在的最常见的细菌之一。各种水、空气、正常人的皮肤、呼吸道和肠道等都会存在。本菌是一种常见的条件致病菌，属于非发酵革兰氏阴性杆菌。铜绿假单胞菌会引起伤口感染，也可引起褥疮、脓肿、化脓性中耳炎等。在化妆品中微生物要求不能检出。
采用牛津杯法研究鱼腥草提取物的抑菌性，根据抑菌圈的大小直观反应出待测物的抑菌效果。
具体方法步骤:
1、菌种复苏：钩取少量冻存的铜绿假单胞菌于培养基中，置于细菌培养箱培养20h左右。将复苏好的菌液进行稀释、扩培，选择合适的稀释倍数进行抑菌圈实验。
2、取培养过后的铜绿假单胞菌稀释10-3、10-4、10-5。在无菌操作条件下，取100μL稀释后的铜绿假单胞菌，均匀涂布于培养基上，置于37℃的细菌培养箱中，培养24h。观察结果，选择单层铺满致密菌为抑菌圈实验最佳稀释倍数，制备相应稀释倍数稀释制备菌悬液。
3、抑菌直径测定:在无菌操作条件下，取制备好的铜绿假单胞菌菌悬液100μL，均匀涂布于培养基上，将四个牛津杯放在培养基表面，编号1、2、3、4取200μL鱼腥草提取液加入牛津杯其中一个编号为1，另外三个牛津杯分别加入200μL20％乙醇空白、生理盐水和卡那霉素编号为2、3和4，作为空白对照、阴性对照和阳性对照，在37℃恒温箱中培养24h后，结果见附图4，其中从左至右的1分别为20、50的鱼腥草提取物。
检测结果见表4。
表4鱼腥草提取物对铜绿假单胞菌的抑菌圈
样品 直径(mm) 样品 直径(mm)
a.鱼腥草25mg/mL 7 100ug/ml卡那霉素 17
b.鱼腥草50mg/mL 7 100ug/ml卡那霉素 18
c.鱼腥草100mg/mL 12 100ug/ml卡那霉素 17
20％乙醇空白 0 生理盐水 0
从表4和附图4可见，实施例1具有抑制铜绿假单胞菌生长的作用。铜绿假单胞菌是起皮肤炎症的主要病因之一，故本发明通过抑菌作用可以达到抑制炎症的作用，降低炎症发生时受感染的几率。同时可以协同增效防腐效果，降低防腐剂用量，达到天然无刺激作用。
(5)ABTS自由基清除能力的测定
试验方法：取7mmol/L ABTS储备液，10mmol/L的PBS(pH＝7.4)稀释60-70倍，使其在734nm处吸光值为0.7±0.02(30℃)，得到ABTS工作液；样品测定：吸取3mLABTS工作液，加入30μL样品溶液，为振荡20s，30℃条件下静置6min，测定734nm处吸光值。均配成含2mg/mL鱼腥草提取物。
3.2计算公式：
Figure BDA0002426137750000121
ABTS自由基清除能力测定结果如下表5所示：
表5
组别 ABTS自由基清除率/％
实施例1 96.32
实施例2 90.10
实施例3 86.21
实施例4 81.02
实施例5 83.20
对比例1 52.10
对比例2 42.30
从表5数据可以看出，鱼腥草提取物对ABTS自由基具有强清除能力。
(6)弹性蛋白酶抑制作用的测定
试验方法：取100μL Tris-HCl(0.05mol/L，pH值＝8.0)，50μL弹性蛋白酶和50μL2.0mg/mL鱼腥草提取物溶液(/缓冲液代替)震荡摇匀，在25℃预温育20分钟后，添加50μL、4mmol/L MAAPVM(/缓冲液代替)，震荡摇匀，在25℃预温育60分钟后，酶标仪410nm检测吸光度。
弹性蛋白酶抑制作用的结果如下表6所示：
表6
Figure BDA0002426137750000122
Figure BDA0002426137750000131
从表6的数据可以看出，鱼腥草提取物对弹性蛋白酶具有抑制作用。弹性蛋白酶可以使皮肤中的弹性蛋白和/或胶原蛋白分解，从而使皮肤产生皱纹，皮肤在衰老过程中弹性蛋白和胶原蛋白会减少，同时分解速度加快，鱼腥草提取物能起到对弹性蛋白酶产生抑制的作用，具有优秀的抗衰老性能。
显然，本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种鱼腥草提取物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1.将鱼腥草粉末加入添加有纤维素酶和/或果胶酶的提取溶剂中提取，制备得到提取液；
S2.将提取液加热灭活酶的活性，离心取上清液，减压抽滤得到滤液；
S3.将滤液经过大孔吸附树脂纯化，真空冷冻干燥的到鱼腥草提取物；
其中，S1中酶的添加质量与提取溶剂的体积比为0.01～0.04g/L，
提取溶剂为质量浓度为5～50％的丙二醇或甘油或丁二醇的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，
提取pH为3.0～6.0，提取温度为25～65℃，提取料液比为1Kg:20～60L，提取时间0.5～3h。
2.如权利要求1所述鱼腥草提取物的制备方法，其特征在于，S1中提取溶剂中添加0.02g/L的纤维素酶。
3.如权利要求1所述鱼腥草提取物的制备方法，其特征在于，S1中提取溶剂为丁二醇的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，质量浓度为30％。
4.如权利要求3所述鱼腥草提取物的制备方法，其特征在于，S1中提取pH为5.0，提取温度为50℃，提取时间1h，提取料液比为1Kg:30L。
5.如权利要求1所述鱼腥草提取物的制备方法，其特征在于，S3中大孔吸附树脂纯化采用ADS-17型号树脂，70％乙醇解析。
6.权利要求1～5任意一项所述鱼腥草提取物的制备方法制备得到的鱼腥草提取物，其特征在于，所述鱼腥草提取物中总黄酮的质量含量≥90％。
7.权利要求6所述鱼腥草提取物在制备大肠埃希氏菌抑制剂中的应用，其特征在于，所述大肠埃希氏菌抑制剂中鱼腥草提取物的浓度为25～100mg/mL。
8.权利要求6所述鱼腥草提取物在制备金黄色葡萄球菌抑制剂中的应用，其特征在于，所述金黄色葡萄球菌抑制剂中鱼腥草提取物的浓度为25～100mg/mL。
9.权利要求6所述鱼腥草提取物在制备铜绿假单胞菌抑制剂中的应用，其特征在于，所述铜绿假单胞菌抑制剂中鱼腥草提取物的浓度为25～100mg/mL。
10.权利要求6所述鱼腥草提取物在化妆品防腐中的应用。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112076121A (zh) * 2020-09-14 2020-12-15 可帮(天津)高新技术有限公司 一种润肤液及其生产方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110013506A (zh) * 2019-04-30 2019-07-16 龙岩学院 一种鱼腥草有效杀菌成分的提取方法及应用
CN110025691A (zh) * 2019-04-30 2019-07-19 龙岩学院 一种复方鱼腥草制剂及制备方法和应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110013506A (zh) * 2019-04-30 2019-07-16 龙岩学院 一种鱼腥草有效杀菌成分的提取方法及应用
CN110025691A (zh) * 2019-04-30 2019-07-19 龙岩学院 一种复方鱼腥草制剂及制备方法和应用

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
余科 等: "鱼腥草中黄酮类化合物的提取工艺及其对自由基清除能力的研究", 《湖北民族学院学报（自然科学版）》 *
唐春红: "《天然防腐剂与抗氧化剂》", 31 May 2010 *
李先栓: "《高中化学创新实验课程》", 30 June 2011 *
段文录 等: "纤维素酶法提取鱼腥草总黄酮工艺", 《河南科技大学学报：自然科学版》 *
焦云鹏: "《酶制剂生产与应用》", 31 August 2015 *
王苏丽 等: "《生药学》", 31 August 2007 *
黄德娜 等: "复合酶法提取鱼腥草中黄酮类化合物工艺", 《食品科技》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112076121A (zh) * 2020-09-14 2020-12-15 可帮(天津)高新技术有限公司 一种润肤液及其生产方法

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