CN102071028A - 一种壳斗抗氧化剂的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种壳斗抗氧化剂的精制方法，包括如下顺序进行的步骤：1)将壳斗加入到水或含水乙醇溶剂中，加热提取，制得壳斗提取液；2)将壳斗提取液进行大孔树脂柱或离子交换柱分离，即得。本发明精制得到的壳斗抗氧剂的抗氧化活性与自由基清除活性高，壳斗抗氧化剂中单宁(tannins)类含量大于50％。实验研究表明，利用该工艺制备得到的壳斗抗氧化剂具有较强的抗氧化和自由基清除能力，可以用作食品添加剂、抗氧化剂、药品或用作防晒、抗衰老类化妆品。

Description

一种壳斗抗氧化剂的制备方法

技术领域

本发明涉及农产品的深加工技术领域，具体涉及壳斗科植物壳斗抗氧化剂的提取和制备方法。本发明还涉及壳斗抗氧化剂提取物的用途。

背景技术

壳斗科(Fagaceae)又名山毛榉科，分布广泛，在我国有栗属(Castanea)、锥属(Castanopsis)、水青冈属(Fagus)、柯属(Lithocarpus)、栎属(Quercus)、三棱栎属(Trigonobalanus)等，约300种，其中，常见的有板栗、麻栎、栓皮栎等。壳斗又称总苞、刺苞或苞壳，内含2-3个坚果，呈杯状或囊状，壳斗半包或全包坚果，外有鳞片或刺，成熟时不裂，瓣裂或撕裂，其内坚果的果皮称为壳，有别于壳斗。

壳斗科中分布最广，产量最大的是板栗，俗称栗子，其甘甜芳香，含淀粉、蛋白质、糖、粗纤维、维生素、矿物质等，脂肪含量是有壳类果实中最低的，普遍用于食品加工，是健胃补肾、延年益寿的上等果品。随着板栗等壳斗科植物的种植面积和深加工不断深入，板栗等坚果的产量不断增加，壳斗的产量也急剧增加。但是，目前对壳斗类资源的应用还比较少，除橡碗等少量用作提取栲胶的原料外，大部分作为垃圾抛弃，未得到充分利用。据《中药大辞典》记载，板栗壳斗性甘、平，味涩，无毒，具有健脾益气、补肾强筋、散结解毒之功效，可以治疗丹毒、肿毒、瘰疬等疾病；板栗壳斗在民间常作为抗菌、抗炎药物得到应用。因此，深入挖掘板栗壳斗潜在利用价值，尤其是其潜在的食用和药用价值对于提高资源利用率，减少环境污染，提高产品附加值以及增加林农收入均具有十分重要的意义。

目前，对于板栗壳斗的研究日益受到国内外的关注。例如，1991年吴龙云等从板栗壳斗中首次分离得到4-羟基-3-甲氧基苯甲酸(4-hydtoxy-3-methoxybenzoic acid)和没食子酸乙酯(ethyl gallate)；2006年，杨志斌等研究发现，板栗壳斗中单宁含量为18％，其水提物中单宁含量为40％；2009年焦启扬等人从板栗壳斗的95％乙醇提取物中分离鉴定了18个化学成分，包括5-羟甲基糠醛、没食子酸、对羟基苯甲酸、对苯二酚、麦角甾-6，22-二烯-3β，5α，8α三醇、莽草酸、豆甾-4-烯-6β-3-酮、Ganschisandrin、齐墩果酸、山柰酚-3-O-(6″-反式-对-香豆酰基)-β-D-葡萄吡喃糖苷、山柰酚-3-O-(6″，4″-双-反式-对-香豆酰基)-β-D-葡萄吡喃糖苷、2-羟基-丁二酸二丁酯、槲皮素、大黄素、3′，3″-dimethoxylarreatricin、原儿茶酸、乌索酸、山柰酚等；沈阳药科大学焦启阳等人对板栗壳斗的95％乙醇提取物进行了体外抗菌实验，结果显示板栗壳斗的95％乙醇提取物的总浸膏及萃取后水层对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和藤黄微球菌均有一定抗菌活性；2009年5月举行的第九届国际化学与过程工程会议上，西班牙的G.Vazquez等发表了关于欧洲栗(Ccastanea sativa)壳斗的最新研究成果，发现板栗壳斗水提物中总酚的提取率可以达到21％，提取物中总酚含量可以达到38％，且表现出较强的自由基清除活性和抗氧化活性(FRAP测定法、DPPH测定法以及ABTS测定法)，该提取物的数均分子量与重均分子量分别为1388Da与2122Da，提示其化学组成中含有较多大分子量的酚类物质，如单宁等。1999年沈阳药科大学中药系周应军等在《沈阳药科大学学报》发表《巴东栎化学成分研究》，报道了巴东栎叶片的主要化学成分，包括胡萝卜甙、槲皮素、山奈酚及其苷类；2010年郑州大学药学院贾陆等在《中国医药工业杂志》发表了《板栗壳化学成分研究》，结果显示板栗壳中含有的酚类物质主要为分子量较小的没食子酸、原儿茶酸、对羟基桂皮酸甲酯及芦丁等黄酮类物质；2010年7月沈阳药科大学高丽梅等在《沈阳药科大学学报》发表了《板栗花的化学成分》，结果显示板栗花中主要为黄酮及其甙类物质，如山奈酚、槲皮素及其甙类，另含有没食子酸、原儿茶酸等简单酚类物质。这些研究结果显示，以板栗、巴东栎等为代表的壳斗科植物，其壳、壳斗、叶片由于生理功能的不同，其含有的主要化学成分种类也不同，尤其是壳斗提取物中含有大量分子量较大的酚类物质，而这与已经报道的壳、花和叶片中含有的酚类成分的种类有较大区别。在前期研究中我们也发现，壳斗中含有得酚类物质70％以上为分子量较大单宁类成分，不同于板栗壳、花和叶片，且这些成分在体内与体外实验中均表现出具有较强的自由基清除活性和抗氧化活性，因此具有广泛的应用前景。但是，这些成分在粗提物中含量较低，因此急需一种简单有效的方法对其中的活性成分进行提取和富集，且提取纯化过程中应该尽量避免丙酮等有毒溶剂的污染，从而利于其在食品、化妆品和医药领域的应用。

目前对于板栗等壳斗科植物果实的加工工艺报道较多，对于板栗壳的加工也有一些报道和专利公开，如公开号为CN 101402657A的发明专利申请公开了一种板栗壳多酚的制备方法。包括以下步骤：浸提、过滤与浓缩、富集/分离、浓缩、干燥，即可得到棕红色板栗壳多酚。该方法制备的板栗壳多酚含量高，原花青素含量占50％以上；又如公开号为CN101870849A的专利申请涉及一种超声强化提取板栗苞生产栲胶的新方法。将收集的板栗苞原料干燥、粉碎、过筛，以有机溶剂-水为提取溶媒，经超声强化提取、液-固分离、浓缩、干燥及粉碎即可得到粗栲胶产品；将得到的粗栲胶用水重新溶解，除去不溶物，或将提取液直接用饱和金属离子沉淀剂进行沉淀，再向沉淀加入水混合成悬浊液，通入酸性气体使其复溶，除去不溶物，上清液经浓缩、干燥即可得到精制栲胶产品，但该方法精制过程中大量使用金属离子沉淀剂和酸性气体，得到的单宁类物质适于工业使用，但不适于用作食品、化妆品和药品。

发明内容

本发明的首要目的是提供一种简单、高效且不引入有毒化学试剂的壳斗抗氧化剂制备方法，本发明制备工艺简单，原料中抗氧化活性成分提取率高，可以有效富集壳斗中的单宁类成分，最终精制得到的壳斗抗氧化剂自由基清除活性和还原力强，扩大了板栗等壳斗科植物的壳斗在食品、化妆品和医药领域的应用。

为了达到上述目的，本发明一方面提供一种壳斗抗氧化剂的精制方法，包括如下顺序进行的步骤：1)将壳斗加入到提取溶剂中，进行加热提取2-3次，制得壳斗提取液；2)将壳斗提取液进行大孔树脂柱或离子交换树脂柱分离，即得。

其中，其中，步骤1)中所述壳斗为壳斗科植物的壳斗，如板栗、麻栎、栓皮栎等的壳斗。

尤其是，壳斗的含水率≤20％，优选为10-15％。

特别是，还包括将壳斗粉碎成粒度≤10目的壳斗粉后再进行所述的加热提取。

尤其是，所述壳斗粉的粒度优选为≤20目。

其中，步骤1)中所述提取溶剂为水或含水的乙醇溶液。

特别是，所述乙醇溶液的质量百分比浓度为10-75％，优选为30-75％，进一步优选为50％。

其中，步骤1)中每次加热提取过程中所述壳斗的重量与所述提取溶剂的体积之比为1∶5-15(即当壳斗的重量为1kg时，提取溶剂的体积为5-15L；当壳斗的重量为1g时，提取溶剂的体积为5-15ml)，优选为1∶10。

特别是，所述加热提取的加热温度为50-85℃，优选为80℃；提取时间为0.5-2h/次，优选为1h/次。

其中，步骤2)中所述大孔树脂柱分离包括如下步骤：

A)将壳斗提取液浓缩，得到壳斗浓缩液；

B)将壳斗浓缩液进行过滤或离心处理，制得壳斗浓缩滤液或上清液；

C)将壳斗浓缩滤液或上清液上大孔树脂柱，进行梯度洗脱，流动相依次蒸馏水、含水乙醇溶液，收集流动相为乙醇溶液的洗脱液；

D)将收集的洗脱液浓缩、干燥处理，即得。

其中，步骤A)中所述的浓缩处理为减压浓缩处理，浓缩处理的温度为35-60℃，优选为50℃；真空度为0.04-0.1MPa，优选为0.06-0.08MPa。

特别是，所述壳斗浓缩液在25℃下的比重为1.02-0.05。

其中，步骤B)中所述过滤处理的过滤精度为40-200目(即74-420微米)；所述离心处理的转速≥1000rpm，优选为5000-8000r/min。

特别是，采用40-200目滤布或板框过滤器进行所述的过滤处理。

特别是，步骤B)中还包括将壳斗浓缩液避光静置后再进行所述的过滤或离心处理。

其中，避光静置处理的温度为0-15℃，优选4℃；静置时间为12-72h，优选24h。

其中，步骤C)中所述大孔树脂为极性或非极性大孔树脂。

特别是，所述大孔树脂的平均孔径为65-95A°，优化为80-90A°；平均粒径为0.3-1.2mm；比表面积为500-900m²/g。

特别是，所述大孔树脂选择AB-8型树脂、D101型树脂或HPD型树脂。

尤其是，所述HPD型树脂选用HPD-100型树脂。

其中，步骤C)中所述大孔树脂柱内的大孔树脂与壳斗浓缩滤液或上清液的重量之比为1∶1-3，优选为1∶2。

特别是，所述含水乙醇溶液的质量百分比浓度为30-70％，优选为45-60％，进一步优选为50％。

其中，流动相蒸馏水与树脂柱的柱体积之比为2-5∶1，优选为3∶1；流动相含水乙醇溶液与树脂柱的柱体积之比为2-5∶1，优选为3∶1。

其中，步骤D)中所述的浓缩处理为减压浓缩处理，浓缩处理的温度为40-65℃，优选为55℃；真空度为0.04-0.1MPa，优选为0.06-0.08MPa。

特别是，浓缩后的洗脱液在25℃下的相对密度为1.15-1.22。

其中，步骤D)中所述干燥为冷冻干燥或喷雾干燥。

特别是，所述冷冻干燥的温度为-40-70℃；绝对压力为0.06-0.1MPa；所述喷雾干燥的进风温度为160-210℃，出风温度为80-95℃。

其中，步骤2)中所述离子交换树脂柱分离包括如下步骤：

A)将壳斗提取液浓缩，得到壳斗浓缩液；

B)将壳斗浓缩液进行过滤或离心处理，制得壳斗浓缩滤液或上清液；

C)将壳斗浓缩滤液或上清液上离子交换树脂柱，进行梯度洗脱，流动相依次蒸馏水、含水乙醇溶液，收集流动相为乙醇溶液的洗脱液；

D)将收集的洗脱液浓缩、干燥处理，即得。

其中，步骤A)中所述的浓缩处理为减压浓缩处理，浓缩处理的温度为35-60℃，优选为50℃；真空度为0.04-0.1MPa，优选为0.06-0.08MPa。

特别是，所述壳斗浓缩液在25℃下的比重为1.02-0.05。

其中，步骤B)中所述过滤处理的过滤精度为40-200目(即74-420微米)；所述离心处理的转速≥1000rpm，优选为5000-8000r/min。

特别是，采用40-200目滤布或板框过滤器进行所述的过滤处理。

特别是，步骤B)中还包括将壳斗浓缩液避光静置后再进行所述的过滤或离心处理。

其中，避光静置处理的温度为0-15℃，优选4℃；静置时间为12-72h，优选24h。

其中，步骤C)中所述离子交换树脂为阴离子交换树脂。

特别是，所述阴离子交换树脂为D201阴离子交换树脂、D-92大孔弱碱性苯乙烯系阴离子交换树脂、D-72A苯乙烯系大孔强碱性阴离子交换树脂或724弱酸性阳离子交换树脂中的一种。

其中，步骤C)中所述离子交换树脂柱内的离子交换树脂与壳斗浓缩滤液或上清液的重量之比为1∶1-3，优选为1∶2。

特别是，所述含水乙醇溶液的质量百分比浓度为30-70％，优选为45-60％，进一步优选为50％。

其中，流动相蒸馏水与树脂柱的柱体积之比为2-5∶1，优选为3∶1；流动相含水乙醇溶液与树脂柱的柱体积之比为2-5∶1，优选为3∶1。

其中，步骤D)中所述的浓缩处理为减压浓缩处理，浓缩处理的温度为40-65℃，优选为55℃；真空度为0.04-0.1MPa，优选为0.06-0.08MPa。

特别是，浓缩后的洗脱液在25℃下的相对密度位1.15-1.22。

其中，步骤D)中所述干燥为冷冻干燥或喷雾干燥。

特别是，所述冷冻干燥的温度为-40-70℃；绝对压力为0.06-0.1MPa；所述喷雾干燥的进风温度为160-210℃，出风温度为80-95℃。

本发明具有以下优点：

1、本发明以壳斗科植物的壳斗为原料，精制得到具有高抗氧化和自由基清除活性的壳斗抗氧化剂，可以用作食品添加剂、抗氧化剂、药品或用作防晒、抗衰老类化妆品，使得占板栗资源60％的板栗壳斗等废弃物的附加值大幅提高。

2、本发明制备过程采用无毒有机溶剂，工艺简单，操作方便，有效成分富集效果明显，壳斗抗氧化剂得率高达6-8.0％，壳斗抗氧化剂的提取效率高，且适用于大规模工业化生产。

3、本发明制备的壳斗抗氧化剂的生物活性高，表现为壳斗抗氧化剂的总还原力、ABTS和DPPH自由基清除活性较高，其中ABTS自由基清除活性高于5mmolTRE/g(mmol Trolox equivalent/g)，DPPH自由基清除活性高于5.2mmolTRE/g(mmol Trolox equivalent/g)，生物活性比壳斗原料提高了7倍以上。

附图说明

图1为实施例1的壳斗抗氧化剂与壳斗原材料的总还原力活性比较图

具体实施例方式

下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。

本发明采用板栗壳斗作为原料制备壳斗抗氧化剂，其它壳斗科植物的壳斗，如板栗、麻栎、栓皮栎等的壳斗均适用于本发明。

实施例1

1、原料的提取

1)将含水率为10％的板栗壳斗粉碎，过20目筛，得到板栗壳斗粉；

2)将板栗壳斗粉(2kg)和质量百分比浓度为50％的乙醇溶液(20L)置于提取罐内，75℃提取1h，提取液60目筛过滤，滤渣同等条件下再提取2次，合并3次提取液，备用；

2、纯化处理

壳斗提取液于55℃，绝对压力为0.02MPa下真空浓缩至相对密度为1.03(25℃)；

浓缩液于4℃下避光静置48h，200目滤布过滤，滤液(4kg)加样于用蒸馏水平衡好的装有1.5kg AB-8大孔树脂柱内，充分吸附后加入4倍柱体积的蒸馏水清洗，然后加入3倍柱体积质量百分比浓度为50％的乙醇溶液进行洗脱，收集乙醇溶液洗脱液；

3、浓缩、干燥处理

洗脱液于温度50℃，绝对压力0.02MPa下减压浓缩至相对密度1.2，然后于温度-55℃，绝对压力0.01MPa条件下真空冷冻干燥，得到148g含水率为3％的棕色壳斗抗氧化剂，得率为7.4％。

采用《中国药典(2005)一部》中磷钼钨酸-干酪素法测定制得的壳斗抗氧化剂的总单宁含量(以没食子酸计)，结果见表1。

实施例2

原料提取步骤，除了板栗壳斗的含水率为10％，粉碎后的粒度≤10目，提取溶剂为质量百分比浓度为30％的乙醇溶液，提取温度为78℃之外，其余与实施例1相同。

纯化处理步骤，除了浓缩液的相对密度为1.02，于6℃下避光静置36h，采用管式离心机12000rpm离心后取上清液(4.2kg)加样于2kg HPD100大孔树脂柱内进行树脂柱分离，先加入3倍柱体积的蒸馏水清洗，然后加入4倍柱体积质量百分比浓度为60％的乙醇溶液进行洗脱，收集乙醇溶液洗脱液之外，其余与实施例1相同；

浓缩、干燥处理步骤，除了减压浓缩后的洗脱液相对密度为1.18之外，其余与实施例1相同。

得到154g壳斗抗氧化剂，得率为7.7％。

采用《中国药典(2005)一部》中磷钼钨酸-干酪素法测定制得的壳斗抗氧化剂的总单宁含量(以没食子酸计)，结果见表1。

实施例3

原料提取步骤，除了板栗壳斗的用量为6kg，含水率为15％，提取溶剂为质量百分比浓度为75％的乙醇溶液，每次提取过程中乙醇溶液的体积为70L，提取温度为75℃之外，其余与实施例1相同。

纯化处理步骤，除了浓缩液的相对密度为1.01，于4℃下避光静置24h，采用管式离心机12000rpm离心后取上清液(12.7kg)加样于9kg HPD600大孔树脂柱内进行树脂柱分离，先加入3倍柱体积的蒸馏水清洗，然后加入2.5倍柱体积质量百分比浓度为50％的乙醇溶液进行洗脱，收集乙醇溶液洗脱液之外，其余与实施例1相同；

浓缩、干燥处理步骤，除了减压浓缩后的洗脱液相对密度为1.19，采用在进风温度为170℃，出风温度为90℃条件下的喷雾干燥之外，其余与实施例1相同。

得到440g壳斗抗氧化剂，得率为7.33％。

采用《中国药典(2005)一部》中磷钼钨酸-干酪素法测定制得的壳斗抗氧化剂的总单宁含量(以没食子酸计)，结果见表1。

实施例4

原料提取步骤，除了板栗壳斗的用量为5kg，含水率为10％，提取溶剂为水，每次提取过程中水的体积为60L，提取温度为80℃之外，其余与实施例1相同。

纯化处理步骤，除了浓缩液的相对密度为1.04，于4℃下避光静置54h，采用200目滤布板框过滤，滤液(9.8kg)加样于8kg D101大孔树脂柱内进行树脂柱分离，先加入3倍柱体积的蒸馏水清洗，然后加入3倍柱体积质量百分比浓度为45％的乙醇溶液进行洗脱，收集乙醇溶液洗脱液之外，其余与实施例1相同；

浓缩、干燥处理步骤，除了减压浓缩的温度55℃，绝对压力0.02MPa，浓缩后的洗脱液相对密度为1.19，采用在进风温度为185℃，出风温度为97℃条件下的喷雾干燥之外，其余与实施例1相同。

得到364g壳斗抗氧化剂，得率为7.28％。

采用《中国药典(2005)一部》中磷钼钨酸-干酪素法测定制得的壳斗抗氧化剂的总单宁含量(以没食子酸计)，结果见表1。

实施例5

原料提取步骤，除了除了板栗壳斗粉碎后的粒度≤10目，提取溶剂为质量百分比浓度50％的乙醇，提取温度为73℃之外，其余与实施例1相同。

纯化处理步骤，除了浓缩液的相对密度为1.04，于4℃下避光静置36h，采用管式离心机12000rpm离心后取上清液(3.8kg)加样于3kg D201阴离子交换树脂柱内进行树脂柱分离，先加入3倍柱体积的蒸馏水清洗，然后加入4倍柱体积质量百分比浓度为55％的乙醇溶液进行洗脱，收集乙醇溶液洗脱液之外，其余与实施例1相同；

本发明中的离子交换树脂除了选用D201阴离子交换树脂，其他阴离子交换树脂均适用于本发明，例如D-92大孔弱碱性苯乙烯系阴离子交换树脂、D-72A苯乙烯系大孔强碱性阴离子交换树脂、724弱酸性阳离子交换树脂等。

浓缩、干燥处理步骤，除了减压浓缩的温度55℃，绝对压力0.02MPa，浓缩后的洗脱液相对密度为1.20，冷冻干燥的温度-55℃，绝对压力0.01MPa之外，其余与实施例1相同。

得到145g壳斗抗氧化剂，得率为7.61％。

采用《中国药典(2005)一部》中磷钼钨酸-干酪素法测定制得的壳斗抗氧化剂的总单宁含量(以没食子酸计)，结果见表1。

表1壳斗抗氧化剂中单宁含量测定结果

	实施例1	实施例2	实施例3	实施例4	实施例5
						总单宁含量(％)	61.5	60.2	61.1	55.6	57.3

试验例1DPPH自由基清除活性测定

将实施例1-5制备的壳斗抗氧化剂以甲醇为溶剂，分别配置0.04、0.08、0.12、0.16、0.2mg/ml的样品溶液，取各样品溶液0.1ml，分别加入2.0ml甲醇以及0.25ml 1，1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)溶液(1mM)，混合后放置20～30min，以甲醇为空白在517nm处测定吸光值，以等同活性的水溶性维生素E(mmolTrolox equivalent，mmolTRE)的量表示自由基清除活性(mmolTRE/g)，测定结果如表2。

试验例2ABTS自由基清除活性测定

将7mmol/L的ABTS溶液和140mmol/L的高硫酸钾溶液以62.5∶1的比例混合，在室温、避光的条件下静置过夜，形成ABTS⁺自由基储备液，在室温避光条件下存放。使用前用无水甲醇稀释成ABTS⁺工作液(稀释大概比例为储备液：甲醇＝1∶48)，要求当4ml工作液中加入1ml无水甲醇时其在734nm波长下的吸光度为0.51±0.02。

将实施例1-5制备的壳斗抗氧化剂以甲醇为溶剂，分别配制0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06mg/ml的样品甲醇溶液。测定时取0.15ml样品溶液与2.85mlABTS⁺工作液混合10s，30℃下静置6～10min，以无水甲醇为空白在734nm波长下测吸光度，以等同活性的水溶性维生素E(mmol Trolox equivalent，mmolTRE)的量表示自由基清除活性(mmolTRE/g)，测定结果如表2。

表2壳斗抗氧化剂抗氧化活性测定结果

试验例3总还原力测定

将实施例1制备的壳斗抗氧化剂以蒸馏水为溶剂，分别配制0.04、0.08、0.12、0.16、0.2mg/ml的样品蒸馏水溶液。1ml样品溶液加入2.5ml磷酸缓冲液(0.2M，PH＝6.6)以及2.5ml铁氰化钾[K₃Fe(CN)₆]溶液(1％，w/v)，50℃水浴20min，接着加入2.5ml三氯乙酸溶液(10％，w/v)静置10min，然后取2.5ml混合溶液加入2.5ml蒸馏水和0.5ml三氯化铁(FeCl₃)溶液(0.1％，w/v)，混合均匀，以水为空白对照，在700nm处测吸光度，以吸光度为纵坐标，样品量为横坐标，进行线性回归拟合，作图；同法测定壳斗原材料的抗氧化活性，并作图，测定结果如图1。

有图1可知，本发明制备的壳斗抗氧化的生物活性显著提高，总还原能力强，抗氧化活性比壳斗原料提高了7倍以上。

Claims (10)

1.一种壳斗抗氧化剂的制备方法，包括如下顺序进行的步骤：1)将壳斗加入到提取溶剂中，进行加热提取2-3次，制得壳斗提取液；2)将壳斗提取液进行大孔树脂柱或离子交换树脂柱分离，即得。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征是步骤1)中所述的提取溶剂为水或含水的乙醇溶液。

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征是所述的乙醇溶液的质量百分比浓度为10-75％。

4.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征是步骤1)中每次加热提取过程中所述壳斗的重量与提取溶剂的体积之比为1∶5-15。

5.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征是步骤2)中所述大孔树脂柱分离包括如下步骤：

A)将壳斗提取液浓缩，得到壳斗浓缩液；

B)将壳斗浓缩液进行过滤或离心处理，制得壳斗浓缩滤液或上清液；

C)将壳斗浓缩滤液或上清液上大孔树脂柱，进行梯度洗脱，流动相依次为蒸馏水、含水乙醇溶液，收集流动相为乙醇溶液的洗脱液；

D)将收集的洗脱液浓缩、干燥处理，即得。

6.如权利要求5所述的制备方法，其特征是步骤B)中所述大孔树脂为极性或非极性大孔树脂。

7.如权利要求5所述的制备方法，其特征是还包括首先将步骤A)制得的壳斗浓缩液进行过滤或离心，然后将滤液或离心上清液进行所述的大孔树脂柱洗脱分离。

8.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征是步骤2)中所述离子交换树脂柱分离包括如下步骤：

A)将壳斗提取液浓缩，得到壳斗浓缩液；

B)将壳斗浓缩液进行过滤或离心处理，制得壳斗浓缩滤液或上清液；

C)将壳斗浓缩滤液或上清液上离子交换树脂柱，进行梯度洗脱，流动相依次为蒸馏水、含水乙醇溶液，收集流动相为乙醇溶液的洗脱液；

D)将收集的洗脱液浓缩、干燥处理，即得。

9.如权利要求8所述的制备方法，其特征是步骤B)中所述离子交换树脂为阴离子交换树脂。

10.如权利要求8所述的制备方法，其特征是还包括首先将步骤A)制得的壳斗浓缩液进行过滤或离心，然后将滤液或离心上清液进行所述的离子交换树脂柱洗脱分离。

Images