CN107789316A - 一种含金盏花干细胞提取物的保湿抗氧化组合物及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种保湿抗氧化组合物，包含如下成分：金盏花干细胞提取物、牡丹花提取物、牡丹籽提取物和绿茶提取物。本发明将金盏花干细胞提取物、牡丹花提取物、牡丹籽提取物和绿茶提取物制成保湿抗氧化组合物，该四种提取物之间可起到保湿和抗氧化协同增效的作用，使得组合物具有显著的保湿和抗氧化作用，且对皮肤温和无刺激、无副作用。本发明的保湿抗氧化组合物结合化妆品各种剂型常规的基料即可制备成多种剂型的保湿抗氧化护肤品。

Description

一种含金盏花干细胞提取物的保湿抗氧化组合物及其应用
技术领域
本发明涉及化妆品领域，尤其涉及一种含金盏花干细胞提取物的保湿抗氧化组合物及其应用。
背景技术
随着生活水平和人们健康意识的提高，抗氧化防衰老成为人们研究的热点，越来越多的人开始注重如何健康的保养皮肤，如何能在抗氧化的同时达到滋润保养皮肤的效果，成为了目前人们关注的焦点。这也正是本产品优越于其他产品的重要一点：不但具有保湿的功效，而且还具有极强的抗氧化能力，不易出现过敏等现象。适用于不同肤质的人群，令肌肤展现迷人质感。
发明内容
本发明的目的是针对上述现有技术的缺点，提供一种含金盏花干细胞提取物的保湿抗氧化组合物及其应用。
为达到其目的，本发明所采用的技术方案为：一种保湿抗氧化组合物，包含如下成分：金盏花干细胞提取物、牡丹花提取物、牡丹籽提取物和绿茶提取物。
金盏花(Calendula officinalis L.)又名金盏菊，为菊科金盏菊属植物。金盏花能滋润干燥唇部，促进皮肤的新陈代谢，尤其针对干燥的肌肤，有高度的滋润效果。金盏花干细胞中所含的有效成分较金盏花植株丰富，且金盏花干细胞的成分易于被皮肤吸收。研究表明，植物干细胞具有较好的护肤和抗氧化作用，对皮肤抗衰老具有较好的效果。目前还未见有将金盏花干细胞应用于化妆品领域的报道出现，故本发明将金盏花干细胞应用于护肤品上，以填补金盏花干细胞在化妆品领域的空白。
牡丹花提取物的提取来源为毛茛科(Ranuculaceae)芍药属(Paeonia L.)植物牡丹(Paeonia suffruticosa Andrews)的花，牡丹花提取物含有紫云英苷、没食子酸、多酚化合物等活性成分，具有良好的抗氧化性能。
牡丹籽提取物的提取来源为毛茛科(Ranuculaceae)芍药属(Paeonia L.)植物牡丹(Paeonia suffruticosa Andrews)的种子。牡丹籽提取物所含有的牡丹多酚(单宁)具有美白、保湿、抗皱、收敛、防晒、防腐的作用。
绿茶提取物是从绿茶中提取的纯天然复合物，其主要成分为茶多酚，具有良好的抗氧化作用，其可与体内自由基结合转变为惰性的物质，从而阻止体内自由基反应，对皮肤衰老有良好的治疗效果。
本发明将金盏花干细胞提取物、牡丹花提取物、牡丹籽提取物和绿茶提取物四者复配制得组合物，该四种提取物的搭配使用，在抗氧化和保湿上可起到协同增效的作用，且均为天然提取物，安全性高，对皮肤无刺激性、无副作用。
本发明采用的牡丹花提取物、牡丹籽提取物和绿茶提取物均为市售购买，也可采用现有的提取方法制得，本发明对其不作限制，其实施皆在本发明的保护范围之内。
优选地，所述的保湿抗氧化组合物，由如下重量份的成分组成：金盏花干细胞提取物0.05～0.3份、牡丹花提取物1～8份、牡丹籽提取物0.5～3份和绿茶提取物3～10份。
优选地，所述的保湿抗氧化组合物，由如下重量份的成分组成：金盏花干细胞提取物0.1～0.3份、牡丹花提取物3～8份、牡丹籽提取物1～3份和绿茶提取物5～10份。
优选地，所述的保湿抗氧化组合物，由如下重量份的成分组成：金盏花干细胞提取物0.2～0.3份、牡丹花提取物5～8份、牡丹籽提取物1～3份和绿茶提取物8～10份。
优选地，所述的保湿抗氧化组合物，由如下重量份的成分组成：金盏花干细胞提取物0.3份、牡丹花提取物8份、牡丹籽提取物3份和绿茶提取物10份。
一种保湿抗氧化护肤品，含有所述的保湿抗氧化组合物。
一种金盏花干细胞提取物的制备方法，包括如下步骤：
(1)以金盏花的新生枝条为外植体，表面灭菌后剥离皮质和表皮，获得含有形成层的组织；
(2)将含有形成层的组织置于分离培养基上培养，新生的形成层干细胞与脱分化的愈伤组织分离，获得形成层干细胞；
(3)将形成层干细胞转移到生长培养基，摇床培养获得单细胞；
(4)将所述单细胞接种于生长培养基中进行扩大培养，获得金盏花干细胞；
(5)将金盏花干细胞冷冻、粉碎，即得金盏花干细胞提取物。
优选地，所述分离培养基为含有吲哚乙酸1mg/L、蔗糖4％和琼脂8g/L的MS固体培养基，所述分离培养基的pH为6.0。
优选地，所述生长培养基为含有二氯苯氧乙酸2mg/L、BA1mg/L、水解酪蛋白1mg/L和活性炭1mg/L的MS液体培养基，所述生长培养基的pH为6.0。
优选地，所述步骤(5)的具体操作为：将金盏花干细胞放入-100℃超低温速冻2h，取出解冻40min，然后再放入-100℃超低温速冻，依次3次，最后一次解冻后将金盏花干细胞放入低温冷冻真空干燥机内进行真空冷冻干燥，然后高速粉碎成60目的冻干粉。
优选地，所述步骤(2)为暗培养，温度为25℃，时间为30天。
优选地，所述步骤(3)中，摇床培养的具体操作为：每小时用20W的白炽灯照射8min，摇床培养的温度为25℃；转速为150r/min；时间为10天。培养后用100目的不锈钢筛网过滤，除去细胞团和残渣，得到单细胞悬液。
优选地，所述步骤(4)中，所述扩大培养的具体操作为：将单细胞悬液转移至20L的生物反应器中进行大规模培养，生物反应器中添加5L生长培养基，培养7天后添加新鲜的生长培养基继续培养7天，获得金盏花干细胞。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：本发明将金盏花干细胞提取物、牡丹花提取物、牡丹籽提取物和绿茶提取物制成保湿抗氧化组合物，该四种提取物之间可起到保湿和抗氧化协同增效的作用，使得组合物具有显著的保湿和抗氧化作用，且对皮肤温和无刺激、无副作用。本发明的保湿抗氧化组合物结合化妆品各种剂型常规的基料即可制备成多种剂型的保湿抗氧化护肤品。
具体实施方式
为更清楚地表述本发明的技术方案，下面结合具体实施例进一步说明，但不能用于限制本发明，此仅是本发明的部分实施例而已。
实施例1
本实施例1提供一种金盏花干细胞提取物的制备方法，其包括如下步骤：
①以金盏花的新生枝条为外植体，表面灭菌后剥离皮质和表皮，获得含有形成层的组织；
②将含有形成层的组织放入pH为6.0的分离培养基中，在25℃下进行暗培养30天，新生的形成层干细胞与脱分化的愈伤组织分离，获得形成层干细胞；所述所述分离培养基为含有吲哚乙酸1mg/L、蔗糖4％和琼脂8g/L的MS固体培养基；
③将形成层干细胞转移到pH为6.0的生长培养基，在25℃下，摇床培养10天后用100目的不锈钢筛网过滤，除去细胞团和残渣，得到单细胞悬液；摇床培养期间，每小时用20W的白炽灯照射8min，摇床培养的转速为150r/min；所述生长培养基为含有二氯苯氧乙酸2mg/L、BA1mg/L、水解酪蛋白1mg/L和活性炭1mg/L的MS液体培养基；
④将单细胞悬液转移至20L的生物反应器中进行大规模培养，生物反应器中添加5L生长培养基，培养7天后添加新鲜的生长培养基继续培养7天，获得金盏花干细胞悬液；所述生长培养基与上述生长培养基的浓度和成分相同；
⑤将获得的金盏花干细胞悬液用1um的过滤器过滤，滤掉培养基，收获截留的金盏花干细胞，并将金盏花干细胞放入-100℃超低温速冻2h，取出解冻40min，然后再放入-100℃超低温速冻，依次3次，最后一次解冻后将金盏花干细胞放入低温冷冻真空干燥机内进行真空冷冻干燥，然后高速粉碎成60目的冻干粉。
实施例2
一种保湿抗氧化组合物，其由以下重量份的成分组成：金盏花干细胞提取物0.3份、牡丹花提取物8份、牡丹籽提取物3份和绿茶提取物10份。
实施例3
一种保湿抗氧化组合物，其由以下重量份的成分组成：金盏花干细胞提取物0.2份、牡丹花提取物5份、牡丹籽提取物1份和绿茶提取物8份。
实施例4
一种保湿抗氧化组合物，其由以下重量份的成分组成：金盏花干细胞提取物0.1份、牡丹花提取物3份、牡丹籽提取物0.8份和绿茶提取物5份。
实施例5
一种保湿抗氧化组合物，其由以下重量份的成分组成：金盏花干细胞提取物0.05份、牡丹花提取物1份、牡丹籽提取物0.5份和绿茶提取物3份。
对照组1：金盏花干细胞提取物；
对照组2：牡丹花提取物；
对照组3：牡丹籽提取物；
对照组3：绿茶提取物。
抗氧化功效检测
将实施例2～5的组合物及对照组1～4的提取物分别制成相同浓度的样品溶液，进行以下实验。
试剂：1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH·)由Sigma公司提供；
无水乙醇(AR)、硫酸亚铁、H2O2、水杨酸由天津市江天化工技术有限公司提供；
UV1601型紫外分光光度计由日本岛津公司提供。
1.清除自由基(DPPH·)的能力
DPPH·溶液的配制：称取8mg DPPH·，用50％乙醇溶液溶解后转移至100ml容量瓶中，定容，摇匀，得到浓度为2.0×10-4mol/L的DPPH·乙醇溶液，于4℃下保存备用。
DPPH·在517nm处呈现出深紫色，有强吸收，由于自由基清除剂的存在，使DPPH·的孤电子对被配对(如式1)，导致溶液颜色变浅，最大吸收波长处的吸光度变小，且颜色的变浅程度与配对电子数成化学计量关系。所以，可以通过测定在波长517nm处的吸光度来评判自由基清除情况。
式1：AH+DPPH·→DPPH-H+A·
分别精确吸取各样品溶液2.0ml放入试管中，加入浓度为2.0×10-4mol/L的DPPH·乙醇溶液2.0ml，摇匀后置于暗处反应30min，然后测定其在517nm处的吸光度值(A1)；用2.0mlDPPH·乙醇溶液加等体积的去离子水为空白对照样，测定其在517nm处的吸光度值(A0)；分别用2.0ml各样品溶液加等体积的去离子水作为样品对照，测定其在517nm处的吸光度值(A2)，以消除样品溶液本身颜色的影响。
清除率按下式计算：
R(％)＝{[A0-(A1-A2)]/A0}×100
结果见表1：
表1
样品溶液 对DPPH·的清除率(％)
实施例2 92.38
实施例3 88.61
实施例4 83.24
实施例5 75.63
对照组1 35.59
对照组2 25.64
对照组3 28.92
对照组4 32.65
从表1的结果可见，与对照组1～4的提取物相比，实施例2～5的组合物对DPPH·的清除作用明显更显著，说明金盏花干细胞提取物、牡丹花提取物、牡丹籽提取物和绿茶提取物之间可起到抗氧化协同增效的作用。
2.清除羟自由基的能力
取25mL比色管9支(8支样品管，1支空白管)，分别加入5ml1mmol/LFeSO4，5ml3mmol/LH2O2，样品管中加入1ml样品溶液，空白管中加入1ml蒸馏水，摇匀，接着加入3mmol/L水杨酸至刻度，摇匀，在37℃的恒温水中加热15min后取出，用分光光度计在510nm的波长下测定各管的吸光度。以3mmol/L水杨酸调零。下式为样品溶液对·OH羧自由基的清除率SA(％)计算式：
清除率SA(％)＝(A3-A4)/A3100％
式中:A3—不加样品的吸光度；A4—加入样品的吸光度。
结果见表2：
表2
样品溶液 对·OH的清除率(％)
实施例2 82.61
实施例3 79.48
实施例4 74.16
实施例5 70.53
对照组1 30.19
对照组2 22.37
对照组3 25.52
对照组4 28.96
从表2的结果可见，与对照组1～4的提取物相比，实施例2～5的组合物对·OH的清除作用明显更显著，说明金盏花干细胞提取物、牡丹花提取物、牡丹籽提取物和绿茶提取物之间可起到抗氧化协同增效的作用。
保湿功效检测
面霜配方表
成分 重量百分含量
活性物质 8wt％
单硬脂酸甘油酯 5wt％
凡士林 8wt％
蜂蜡 3wt％
十二烷基硫酸钠 0.5wt％
三乙醇胺 0.7wt％
去离子水 余量
所述面霜的制备方法，包括如下步骤：
(1)将单硬脂酸甘油酯、凡士林和蜂蜡混合，搅拌条件下加热至75℃，使其熔化成液态，得到油相物；
(2)将十二烷基硫酸钠、三乙醇胺和去离子水混合，搅拌条件下加热至95℃，保持30min，得到水相物；
(3)将水相物加入乳化锅中，控制温度75℃下乳化8min，然后加入油相物乳化25min，降温至45℃，加入活性物质，乳化60min，冷却至室温，得到所述面霜。
以实施例2～5的组合物及对照组1～4的提取物作为上述面霜的活性物质，制成样品面霜。
以制得的样品面霜作为受试物，检测其刺激性和保湿功效。
1.皮肤刺激性试验
实验动物：普通级健康成年新西兰种白色家兔由广西医科大学提供。
试验方法
采用一次皮肤刺激试验方法。每种样品面霜试验用10只家兔，体重2.0kg～3.0kg，雌雄性兼用。实验前日，将家兔背部脊柱两侧毛剪掉，不可损伤表皮，去毛范围左、右各约3cm×3cm。将0.5g样品面霜均匀涂抹于家兔背部一侧去毛皮肤上，范围2.5cm×2.5cm，然后用二层纱布(2.5cm×2.5cm)和一层玻璃纸覆盖，再用医用胶布固定。另一侧皮肤作空白对照。敷贴4h，拿除覆盖物后1h、24h、48h和72h观察涂抹部位皮肤反应，与对照部位对比后评分。按《化妆品卫生规范》中皮肤刺激反应评分标准评分，根据1h、24h、48h和72h各观察时点的刺激反应最高积分均值，按皮肤刺激强度分级标准判定样品面霜对皮肤的刺激强度，共分3个档次，结果见表3。
表3
注：(皮-)：无刺激性；(皮+)：轻刺激性；(皮++)：中刺激性。
白色家兔对有刺激性或腐蚀性的物质较人类敏感，从表3可看出，所有样品面霜对白色家兔的皮肤均无刺激性，证明本发明的组合物对皮肤温和无刺激。
2.保湿效果试验
试验环境：在正常室温条件下(温度为25℃，相对湿度为40％～60％)进行试验。
人体皮肤水分含量参考数据表
皮肤状况 前额、脸部或颈部的皮肤水分含量值
皮肤较干燥 ＜40％
皮肤干燥 40％～50％
皮肤水分充分 ＞50％
受试者：抽选80名健康志愿者作为受试者，均分为8组，每组10人。
试验方法：受试者统一用清水清洗面部，用菲斯凯尔SK-III型手持式数显皮肤水份测试仪测试受试者的额头、左脸、右脸和下巴皮肤的水分含量，取算术平均值。按上述分组情况在受试者面部均匀涂抹样品面霜，轻轻按摩面部至面霜被皮肤吸收。3h后再用皮肤水份测试仪测试受试者的额头、左脸、右脸和下巴皮肤的水分含量，取算术平均值。结构见表4。
表4
从表4的结果可见，与含对照组1～4的提取物的面霜相比，含实施例2～5的组合物的面霜对皮肤的保湿作用明显更显著，说明金盏花干细胞提取物、牡丹花提取物、牡丹籽提取物和绿茶提取物之间可起到保湿协同增效的作用。使用含实施例2～5的组合物的面霜3h后，受试者面部的皮肤还能保持充足的水分，说明实施例2～5的组合物对皮肤具有深层和持久的保湿作用，进一步说明本发明的组合物对皮肤具有显著的保湿效果。
通过上述实验证明，可见本发明的组合物对皮肤具有较好的保湿和抗氧化作用，也说明本发明将金盏花干细胞提取物、牡丹花提取物、牡丹籽提取物和绿茶提取物制成保湿抗氧化组合物，该四种提取物之间可起到保湿和抗氧化协同增效的作用。本发明的组合物对皮肤温和无刺激，使用安全。
最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对其限制。尽管参照上述实施例对本发明进行了详细的说明，所属领域的普通技术人员应当理解：依然可以对本发明的具体实施方式进行修改或者等同替换，而未脱离本发明精神和范围的任何修改或者等同替换，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (10)

1.一种保湿抗氧化组合物，其特征在于，包含如下成分：金盏花干细胞提取物、牡丹花提取物、牡丹籽提取物和绿茶提取物。
2.如权利要求1所述的保湿抗氧化组合物，其特征在于，由如下重量份的成分组成：金盏花干细胞提取物0.05～0.3份、牡丹花提取物1～8份、牡丹籽提取物0.5～3份和绿茶提取物3～10份。
3.如权利要求2所述的保湿抗氧化组合物，其特征在于，由如下重量份的成分组成：金盏花干细胞提取物0.1～0.3份、牡丹花提取物3～8份、牡丹籽提取物1～3份和绿茶提取物5～10份。
4.如权利要求3所述的保湿抗氧化组合物，其特征在于，由如下重量份的成分组成：金盏花干细胞提取物0.2～0.3份、牡丹花提取物5～8份、牡丹籽提取物1～3份和绿茶提取物8～10份。
5.如权利要求4所述的保湿抗氧化组合物，其特征在于，由如下重量份的成分组成：金盏花干细胞提取物0.3份、牡丹花提取物8份、牡丹籽提取物3份和绿茶提取物10份。
6.一种保湿抗氧化护肤品，其特征在于，含有权利要求1～5任一项所述的保湿抗氧化组合物。
7.一种金盏花干细胞提取物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)以金盏花的新生枝条为外植体，表面灭菌后剥离皮质和表皮，获得含有形成层的组织；
(2)将含有形成层的组织置于分离培养基上培养，新生的形成层干细胞与脱分化的愈伤组织分离，获得形成层干细胞；
(3)将形成层干细胞转移到生长培养基，摇床培养获得单细胞；
(4)将所述单细胞接种于生长培养基中进行扩大培养，获得金盏花干细胞；
(5)将金盏花干细胞冷冻、粉碎，即得金盏花干细胞提取物。
8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述分离培养基为含有吲哚乙酸1mg/L、蔗糖4％和琼脂8g/L的MS固体培养基，所述分离培养基的pH为6.0。
9.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述生长培养基为含有二氯苯氧乙酸2mg/L、BA1mg/L、水解酪蛋白1mg/L和活性炭1mg/L的MS液体培养基，所述生长培养基的pH为6.0。
10.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(5)的具体操作为：将金盏花干细胞放入-100℃超低温速冻2h，取出解冻40min，然后再放入-100℃超低温速冻，依次3次，最后一次解冻后将金盏花干细胞放入低温冷冻真空干燥机内进行真空冷冻干燥，然后高速粉碎成60目的冻干粉。
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