KR102349188B1

KR102349188B1 - 미세먼지로 인한 피부 트러블 개선용 화장료 조성물

Info

Publication number: KR102349188B1
Application number: KR1020190150477A
Authority: KR
Inventors: 류근석; 김한영; 고훈건; 박상현; 안태욱
Original assignee: 애경산업(주)
Priority date: 2019-11-21
Filing date: 2019-11-21
Publication date: 2022-01-10
Also published as: KR20210062350A

Abstract

본 발명은 미세먼지로 인한 피부 트러블 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다. 김치 유래 유산균인 락토바실러스 쿠르바투스(Lactobacillus curvatus) J2K-01, 그 파쇄물, 그 배양물 또는 그 추출물로 발효된 식물 추출물을 유효성분으로 포함하며, 미세 먼지로 인한 피부 트러블을 개선하는 화장료 조성물을 제공한다.

Description

미세먼지로 인한 피부 트러블 개선용 화장료 조성물{Cosmetic composition for improving skin troubles due to fine dust}

본 발명은 미세먼지로 인한 피부 트러블 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.

최근 피부와 관련된 대기 오염물질의 이슈로 미세먼지에 대한 관심이 높아지고 안티폴루션 시장이 확대되고 있다.

미세먼지에 대한 노출은 피부 건강에 대한 주요 위협요소 중 하나이다. 미세먼지는 일반적으로 황사 등에 비하여 매우 작은 크기의 입자를 갖기 때문에 눈에 보이지 않고 2014년 미세먼지 성분분석 가이드라인과 2016년 환경부 보고자료에 따르면 미세먼지는 황산염, 질산염, 탄소류와 검댕, 중금속 및 다환 방향족 탄화수소(PAHs) 등 다양한 유해물질을 포함하고 있다고 보고하고 있다.

미세먼지에 포함된 유해물질은 여러 단계에서 피부에 영향을 미친다. 산화 스트레스인 활성산소(Reactive oxygen species, ROS)를 유발하고 염증 경로를 자극해 염증성 물질인 사이토카인 등을 증가시키고 가시적인 피부 노화 징후를 촉진한다(Furue M et al., Arch Dermatol Res. 306(9):769-79, 2014).

미세먼지는 신체에 가장 넓은 면적으로 차지하고 외부자극에 대한 방어기전을 담당하고 있는 피부에 부정적 영향을 끼치는지에 대한 생리학적 기전 및 타겟 연구가 화장품 업계에서 미비한 수준에 그치고 있으며, 이에 따라 문제점을 해결하기 위해 안티폴루션 소재 발굴에 대한 연구가 중요하다.

본 발명은 천연 유래 유산균 및 식물 추출물을 이용하여 피부에 부작용이 없으면서도 미세 먼지로 인한 피부 트러블을 종합적으로 개선할 수 있는 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 김치 유래 유산균인 락토바실러스 쿠르바투스(Lactobacillus curvatus) J2K-01, 그 파쇄물, 그 배양물, 또는 그 추출물로 발효된 식물 추출물을 유효성분으로 포함하며, 미세 먼지로 인한 피부 트러블을 개선하는 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 식물 추출물은 티트리 추출물, 안젤리카 추출물 및 순비기 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 식물 추출물인 것이 바람직하다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 식물은 소나무 추출물, 지치 추출물, 파극천 추출물 및 감국 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 식물을 더 포함하는 것이 바람직하다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 식물 추출물은, 티트리 추출물, 안젤리카 추출물, 순비기 추출물, 소나무 추출물, 지치 추출물, 파극천 추출물 및 감국 추출물을 포함하는 것이 바람직하다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 김치 유래 유산균, 그 파쇄물, 그 배양물 또는 그 추출물은 상기 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 0.0001 내지 10중량%로 포함되는 것이 바람직하다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 미세먼지로 인한 피부 트러블 개선이 피부 손상 개선, 피부 염증 완화, 피부 자극 완화 또는 피부 주름 예방 및 개선인 것이 바람직하다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 화장료 조성물은 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 에센스, 영양 오일, 보습 오일, 영양 크림, 파우더, 팩, 파운데이션, 메이크업 베이스, 클렌징, 젤, 로션, 마사지 크림, 바디로션, 핸드크림 및 화장비누로 이루어진 군으로부터 선택된 제형으로 구현되는 것이 바람직하다.

본 발명에 의해 제공되는 화장료 조성물은 김치 유래 유산균 및 이 균주로 식물을 발효시켜 추출한 추출물을 포함하는 천연 물질로 구성되어 부작용이 없고 남녀노소 누구나 사용할 수 있으면서도, 미세먼지로 인한 여러 가지 피부 트러블을 토탈케어할 수 있다.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따라 김치 유래 유산균으로 발효한 식물 추출물의 제조공정을 도시한 플로우 챠트이다.
도 2(a)은 미세먼지 모사체의 농도, 도 2(b)는 본 발명에 따른 실시예 1의 혼합 발효 추출물의 농도에 따른 세포독성을 나타낸 것이다.
도 3는 실시예 1 및 비교예 1의 추출물의 처리에 의해 AhR(Aryl hydrocarbon receptor) 유전자의 단백질 발현량이 감소함을 나타낸 것이다.
도 4은 실시예 1 및 비교예 1의 추출물의 처리에 의해 CYP1A1, Nrf2, NQO1, IL-8 유전자의 mRNA 발현량 변화를 나타낸 도면이다.
도 5는 실시예 1 및 비교예 1의 처리에 의해 CYP1A1 , Nrf2 , NQO1 , IL-8 유전자의 mRNA 발현량 변화를 정량적으로 나타낸 것이다.
도 6는 실시예 1 및 비교예 1의 혼합 발효 추출물의 처리에 의해 활성산소(Reactive oxygen species, ROS) 발생량이 감소함을 나타낸 것이다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다. 본 발명의 상세한 설명은 본 발명을 보다 이해하기 쉽도록 설명하기 위한 것이며 본 발명의 특허청구범위로 규정되는 발명의 범위를 제한하는 방법으로 사용되어서는 안 된다.

본 발명은 김치 유래 유산균, 그 파쇄물, 그 배양물 또는 그 추출물로 배양된 식물 추출물을 유효성분으로 포함하며, 상기 김치 유래 유산균이 락토바실러스 쿠르바투스(Lactobacillus curvatus) J2K-01이고, 미세 먼지로 인한 피부 트러블을 개선하는 화장료 조성물을 제공한다.

상기 락토바실러스 쿠르바투스(Lactobacillus curvatus) J2K-01은 수탁번호 KCTC13494BP(수탁일자 20180314, 기탁기관: 한국생명공학연구원)으로, 구매하여 사용한다.

본 명세서에서 '김치 유래 유산균'은 김치, 그 중에서도 오랜 기간 묵은 김치로부터 분리된 유산균으로서 한국생명공학연구원에 기탄된 유산균을 의미한다(수탁번호 KCTC1349BP, 2019년 3월 14일 수탁).

본 명세서에서 '균주 파쇄물'은 균주 자체를 화학적 또는 물리적 힘을 가하여 파쇄하여 얻은 산물을 의미한다.

본 명세서에서 '추출물'이란 균주 자체, 균주의 파쇄물, 그 배양물 또는 이들의 혼합물을 추출 용매를 이용하여 추출한 산물을 의미한다.

본 발명에서 "미세먼지"는 눈에 보이지 않는 작은 물질로 입경이 10um 이하의 물질인 미세먼지와 2.5um 이하의 물질인 초미세먼지를 모두 포함하는 것으로 석탄/석유 등 화석연료 연소에 의한 매연, 자동차 배기가스, 건설 현장 등에서 발생하는 비산먼지 및 소각장 연기 등이 발생원으로 작용한다. 1차적 발생은 고체상태의 미세먼지로 나타나고 2차적 발생은 가스상태의 물질이 공기 중의 다른 물질과 화학반응 일으켜 미세먼지로 나타나는 것을 의미한다.

특히 입경이 2.5μm(PM 2.5) 이하인 입자상의 물질은 "초미세먼지"라 하는데, 본 명세서에서 "미세먼지"는 "초미세먼지"도 포함하는 것으로 의도된다.

일 실시예에서, 본 발명에서 미세먼지는 비소(arsenic), 카드뮴(cadmium), 납(lead), 및 니켈(nickel) 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 상기 비소(arsenic), 카드뮴(cadmium), 납(lead), 및 니켈(nickel) 등의 중금속 성분은 미세먼지에 함께 포함되어 피부 세포를 공격해 피부 알러지, 색소 침착, 염증 등을 일으켜 피부노화를 유발시킬 수 있다. 일 실시예에서, 상기 미세먼지는 비소(arsenic), 카드뮴(cadmium), 납(lead), 및 니켈(nickel)을 포함한다.

본 명세서에서 피부 트러블은 미세먼지로 발생할 수 있는 피부에 발생하는 모든 문제들을 의미하며, 예를 들어 피부 자극, 피부 염증, 피부 건조, 아토피 발생, 주름 발생 또는 심화 등을 의미한다.

본 명세서에서 피부 트러블의 개선은, 나빠진 피부를 원상회복 시키거나 원래 피부 상태에 최대한 가깝게 회복시키거나, 그 증세를 완화시키는 것을 의미한다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 김치 유래 유산균 추출물은 식물 추출물을 상기 김치 유래 유산균으로 발효시켜 얻은 추출물인 것이 바람직하다.

상기 식물 추출물은 당해 기술분야에서 사용될 수 있는 어떠한 식물의 추출물로도 가능하며, 예를 들어, 녹차 추출물, 허브 추출물 등의 예를 들어 물, 에탄올 또는 이들의 혼합물로 추출된 용매 추출물이거나, 초임계 추출물 또는 아임계 추출물 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 식물 추출물은 티트리 추출물, 안젤리카 추출물 및 순비기(황형) 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 식물 추출물인 것이 바람직하다.

상기 티트리(Melaleuca alternifolia)는 오스트렐리아가 원산지로 공기를 상쾌하게 정화하는 허브의 한 종류로 자생력이 강하며, 티트리의 잎, 꽃, 뿌리, 줄기, 씨를 포함하는 모든 추출물이 다 사용 가능하다.

상기 안젤리카(angelica archangelica)는 산형화목 미나리과 여러해살이풀의 일종으로 줄기, 잎 및 뿌리 모두 사용할 수 있다.

상기 황형(Vitex negundo)는 마편초과 순비기나무속(또는 황형속; Vitex)에 속하는 본초이며, 남아시아, 중국, 일본, 인도네시아, 동아프리카 등에서 자생하는데 중국에서는 황형(Huangjjing)로 불린다. 황형의 잎, 꽃, 뿌리, 씨를 포함하는 모든 부위의 추출물이 사용될 수 있다.

본 발명에 의하면, 김치 유래 유산균을 그대로 사용하는 것보다는 식물의 추출물을 김치 유래 유산균으로 발효시켜 얻은 김치 유래 유산균 식물 발효 추출물을 사용하는 것이 더욱 바람직하다. 이는 김치 유래 유산균에 의해 식물 추출물이 발효되면서, 김치 유래 유산균과 식물 추출물의 기능이 서로 상호작용하여 보다 상승적인 효과를 나타내기 때문이다. 특히 상기 기재된 티트리, 안젤리카 및 황형의 각각의 추출물 중 어느 하나의 추출물을 김치 유래 유산균으로 발효시킨 경우 다른 식물 추출물의 발효 추출물보다 미세먼지에 대해 보다 우수한 효과를 나타낼 수 있다.

상기 소나무(Pinus densiflora)는 소나무과의 큰키나무로서 잎, 꽃, 열매, 줄기, 껍질, 겨울눈 등이 모두 사용될 수 있다.

상기 지치(Lithospermum erythrorhizon)는 대한민국에 자생하는 다년생 초본으로 뿌리 또는 열매를 사용할 수 있다.

상기 파극천은 일명 노니(Morinda Officinalis)의 뿌리로서 수염뿌리를 제거하고 납작하게 눌러서 말린 것을 말하며, 이를 추출물로 만들어 사용한다.

감국(Dendranthema indicum)은 황국이라고도 하고, 꽃을 말려 사용하거나, 꽃 줄기 전체를 빻아 추출하여 사용하기도 한다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 식물 추출물은, 티트리 추출물, 안젤리카 추출물, 황형 추출물, 소나무 추출물, 지치 추출물, 파극천 추출물 및 감국 추출물을 포함하는 혼합 추출물인 것이 바람직하다.

상기 혼합 추출물은 각각의 식물 추출물을 제조한 후 혼합하거나, 각각의 식물을 혼합한 후 추출물로 제조할 수 있다.

예를 들어 각각의 식물들은 건조되거나 건조되지 않은 상태에서 세절하고 혼합한 후 과량의 추출 용매를 가하여 당해 기술 분야에서 통상 사용되는 온도와 압력 조건하에서, 예를 들어 pH 5.5로 조정한 액체배지에 락토바실러스 쿠르바투스 J2K-01 균주를 5%(v/v)되도록 접종한 후 발효조 내에서 온도 20~38℃, 바람직하게는 35℃, 회전수 100~200rpm, 통기량 5~2.0vvm의 조건으로 30~50시간 배양하였다. 배양 후 배양액으로부터 균체를 제거한 다음 유산균 발효 식물 추출물을 수득하였다.

상기 배양배지는 상기 식물 추출물외에 추가적으로 탄소원, 질소원, 미량 원소 및 계면활성제를 포함하여 이루어질 수 있다.

본 발명의 배지에서 탄소원으로 이용가능한 것은 글루코오스, 수크로오스, 말토오스, 프럭토오스, 락토오스, 자일로오스, 갈락토오스 및 아라비노오스로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나가 사용될 수 있으며, 바람직하게는 글루코오스가 사용될 수 있다. 상기 탄소원은 상기 식물추출물의 총 중량에 대하여 1 내지 10중량%이며, 바람직하게는 2~5중량%이다.

본 발명의 배양 배지에서 질소원으로 이용가능한 것은 효모 추출물(yeast extract), 소이톤(soytone), 펩톤, 비프 추출물, 트립톤 및 카시톤으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것이 사용될 수 있으며, 바람직하게는 효모 추출물이 사용될 수 있다. 질소원은 식물 추출물의 총 중량의 1 내지 10 중량%, 바람직하게는 2 내지 5중량%로 사용될 수 있다.

상기 탄소원 및 질소원외에 미넬라 등의 미량 원소가 사용될 수 있으며, 디포테슘 포스페이트, 마그네슘 설페이트, 소듐 아세테이트, 망가닉 설페이트, 페릭 설페이트 및 칼슘 클로라이드로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나가 사용될 수 있다. 상기 미량원소는 식물 추출물의 총 중량의 0.001 내지 1중량%이다.

상기 유산균의 접종량은 접종 후의 초기 균수가 2 X 10^6 cfu/ml이 되도록 하는 것이 바람직하다. 배양 조건은 pH 5.5로 조정한 배지에 온도 35℃, 회전수 150rpm 조건으로 48시간 동안 배양하는 것이 바람직하다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 김치 유래 유산균, 그 파쇄물, 그 배양물 또는 그 추출물, 바람직하게는 유산균 발효 식물 추출물은 상기 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 0.0001 내지 10중량%로 포함되는 것이 바람직하다.

0.0001중량% 보다 적게 포함되면 원하는 효과를 얻기 어려우며, 10중량% 보다 많이 포함되면, 화장료 조성물의 본연의 기능이 떨어질 수 있다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 그 제형에 특별히 한정되지 않는다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 상기 유산균 등 및 유산균 발효 추출물외에 다른 성분들은 기타 화장료 제형 또는 사용 목적에 따라 당업자가 용이하게 선택하여 배합할 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 의하면 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스 등을 더 포함할 수 있다.

이외에 첨가해도 되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.

또한, 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 또, 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하다.일 측면에서, 본 발명의 녹차 유래 유산균을 포함하는 약학적 조성물은 약학조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

이하, 실시예를 들어 본 발명의 구성 및 효과를 보다 구체적으로 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐 본 발명의 범주 및 범위가 하기 예에 의해 제한되는 것은 아니다.

[제조예 1: 식물 혼합 추출물의 제조]

세젤하여 음건한 티트리잎30g, 안젤리카뿌리30g, 황형전초30g, 소나무잎30g, 지치뿌리30g, 파극천뿌리30g, 감국꽃30g 을 1차 정제수 수용액으로 4시간 환류추출하고 냉침한 후, 와트만(whatman)#5 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50℃ 이하에서 감압농축 및 동결건조를 시킨 후, 수득한 동결 건조물을 5중량% 함유되도록 정제수, 에탄올, 부틸렌글라이콜 및 프로필렌글라이콜 혼합용매에 용해하여 생약재 추출물을 제조하였다.

[제조예 2: 유산균 발효 식물 추출물의 제조]

유산균 락토바실러스 쿠르바투스(기탁번호KCTC13494BP) J2K-01 균주를 MRS 한천배지가 든 시험관에 사면 배양하여 4℃에 보관하고 1개월마다 계대배양하여 사용하였다. 상기 사면배지에서 계대배양된 유산균을 무균적으로 균질화하여 제조예 1에서 수득한 식물 혼합추출물을 기질로 하여 배지를 제조하였으며, pH 5.5로 조정한 액체배지에 락토바실러스 쿠르바투스 J2K-01 균주를 5%(v/v)되도록 접종한 후 발효조 내에서 온도 35℃, 회전수 150rpm, 통기량 1.0vvm의 조건으로 48시간 배양하였다. 배양 후 배양액으로부터 균체를 제거한 다음 유산균 발효 식물 추출물을 수득하였다.

실시예 및 비교예

상기 제조예 1 및 2의 방법에 따라 제조된 식물 추출물을 김치 유래 유산균으로 발효한 발효 추출물을 하기 표 1(실시예)의 구성에 따라 제조하였고, 실시예와 동일한 방법으로 제조하나, 유산균 발효가 없이 식물 추출물을 그대로 사용한 것을 표2(비교예)의 구성에 따라 조성물을 제조하였다.

발효에 사용된 균주는 Lactobacillus curvatus J2K-01이었다.

(중량%)

실시예	티트리 발효 추출물	안젤리카 발효추출물	황형 발효추출물	소나무 발효추출물	지치 발효추출물	파극천 발효추출물	감국 발효추출물
1	14.28	14.28	14.28	14.28	14.28	14.28	14.28

(중량%)

비교예	티트리 추출물	안젤리카 추출물	황형 추출물	소나무 추출물	지치 추출물	파극천 추출물	감국 추출물
1	14.28	14.28	14.28	14.28	14.28	14.28	14.28

<제조예 3> 미세먼지 모사체 제조

본 발명의 미세먼지에 의한 피부 영향성을 확인하기 위해, 미세먼지 모사체를 제조하였다.

미세먼지 모사체는 황산암모늄(Ammonium sulfate, Sigma-aldrich, USA), 질산암모늄(Ammonium nitrate, Sigma-aldrich, USA), 카본블랙(Carbon black, Avention), 벤조피렌(Benzo[a]pyrene, B[a]P, Sigma-aldrich)으로 구성하였다.

황산암모늄과 질산암모늄은 정제수를 용매로 사용하였고, 카본블랙과 벤조피렌은 DMSO를 용매로 사용하였다. 각 용매에 용해시킨 시료를 적정 비율로 혼합해 미세먼지 모사체를 제조하고 하기 실험에 사용하였다.

<실험예 1> 미세먼지 모사체 및 혼합 발효 추출물의 세포독성 측정

사람 유래의 각질형성세포(Human epidermal keratinocyte cells, HaCaT cells)를 100mm cell culture dish에 계대배양 하며, CO₂배양기(CO₂incubator)에서 37℃, 5.0%의 CO₂조건 하에서 배양을 하였다.

<제조예 3>의 미세먼지 모사체와 실시예 1의 혼합 발효 추출물을 각각 50, 100, 200, 300, 400, 500 ppm의 농도로 사람 유래의 각질형성세포에 처리하고, 세포독성을 MTT assay로 확인하였다.

도 2에 나타낸 바와 같이, 상기 세포주에서 혼합 발효 추출물 50 내지 300 ppm의 농도에서 세포독성이 없는걸 확인할 수 있었다.

<실험예 2> 미세먼지 모사체에 대한 혼합 발효 추출물의 AhR(Aryl hydrocarbon receptor) 단백질 발현량 감소 효과

미세먼지에 의해 활성화되는 AhR(Aryl hydrocarbon receptor) 단백질 발현량이 혼합 발효 추출물의 영향으로 감소되는 효과를 확인하기 위해서 사람 유래의 각질형성세포(Human epidermal keratinocyte cells, HaCaT cells)를 100mm cell culture dish에 계대배양 후, 6웰 플레이트에 실시예 1의 조성물 및 비교예 1의 추출물을 각각 100 ppm의 농도로 옮긴 후, 한 웰 당 미세먼지 모사체, 혼합 발효 추출물 및 일반(물) 추출물을 각각 200 ppm, 100 ppm으로 배지에 처리하고 24시간 배양하였다. 인산염 완충액(Phosphate Buffered Saline, PBS)로 세포에 처리한 다음, 단백질 추출 용액(RIPA buffer)을 사용해서 세포 내 단백질을 분리하였다. 분리한 시료를 AhR 단백질 측정 키트(Human AhR ELISA kit, Elabscience)로 분석하였고 각 시료의 흡광도를 측정한 후, 키트 내 표준물질로 AhR 단백질량을 산출하였다.도 3에 나타낸 바와 같이, 미세먼지 모사체에 의해 증가된 피부 세포 내 AhR 단백질 발현량이 혼합 발효 추출물의 처리로 감소되었으며, 물로 추출한 일반 혼합 추출물에 비해 상대적으로 정상 수준으로 되돌아 가는데 더욱 효과적이었다.

따라서, 본 발명에 따른 조성물은 미세먼지 모사체에 의해 손상된 피부 세포에서 AhR(Aryl hydrocarbon receptor)의 단백질 발현량을 증가시켜 혼합 발효 추출물에 의해 정상 수준으로 조절함으로써 미세먼지에 의한 피부 손상을 억제하는 것을 알 수 있다.

상기 AhR(Aryl hydrocarbon receptor)은 피부에 접촉한 미세먼지에 포함된 유해물질들이 가장 먼저 결합해 발현량이 증가되는 유전자이므로, 이 유전자의 발현량을 혼합 발효 추출물로 감소시켜 정상 수준으로 조절함으로써 피부 손상을 억제할 수 있다는 것을 확인한 것이다.

<실험예 3> 미세먼지 모사체에 대한 혼합 발효 추출물의 AhR(Aryl hydrocarbon receptor) 기전 관련 하위 유전자 발현 변화 측정

미세먼지에 의한 피부 세포 내 AhR(Aryl hydrocarbon receptor) 기전 관련한 하위 유전자인 CYP1A1, Nrf2, NQO1, IL-8의 mRNA 발현량을 확인하기 위해서 100mm cell culture dish에서 계대배양 후, 6 웰 플레이트에 실시예 1 및 비교예 1의 조성물을 적정농도로 옮겼다. 각 웰에 미세먼지 모사체, 혼합 발효 추출물 및 일반(물) 추출물을 같이 처리하고 24시간 배양한 후, 인산염 완충액(Phosphate Buffered Saline, PBS)으로 세포를 세척한 다음, RNA 정제 키트(easy-spin kit, Intron biotechnology)로 RNA를 분리하였다.

분리된 RNA를 역전사 키트(maxime RT premix, Intron biotechnology)로 처리한 물질에 따른 cDNA 시료를 합성하였다.

그 후, 합성한 cDNA를 CYP1A1, Nrf2, NQO1, IL-8 유전자의 프라이머와 중합효소 연쇄반응 키트(maxime PCR premix, Intron biotechnology)로 반응시키고 PCR 기기(Bio-rad, USA)를 이용하여 PCR을 수행하였다.

CYP1A1, Nrf2, NQO1, IL-8 유전자의 mRNA 발현패턴을 아가로오스(Agarose, Bioneer)에 DEPC(Diethyl pyrocarbonate)-DW, EtBr(Ethidium bromide, Sigma-aldrich, USA)을 첨가해 만든 아가로오스-겔(Agarose-gel)에 로딩하고 겔-전기영동(Gel-electrophoresis) 장치를 이용해 발현패턴을 확인하였다.

미세먼지 모사체에 의해 증가된 피부 세포 내 CYP1A1, Nrf2, NQO1, IL-8 mRNA 발현패턴이 실시예 1의 혼합 발효 추출물 처리로 정상 수준으로 조절되고, 물로 추출한 비교예 1 추출물에 비해 상대적으로 더욱 효과적인걸 확인할 수 있었다. 그 결과를 도 4에 나타내었다.

본 발명에서 미세먼지에 의해 발현량이 영향을 받는 피부세포 내 유전자로는 미세먼지에 의해 활성화된 AhR(Aryl hydrocarbon receptor)에 의해 특정적으로 발현되는 CYP1A1, 길항작용을 하는 Nrf2와 NQO1은 미세먼지에 의해 발현량이 변화하는 유전자이므로, 이들 유전자의 발현량을 정상 수준과 동일한 수준으로 조절함으로써 피부 자극을 완화할 수 있다는 것을 확인하였다.

<실험예 4> 미세먼지 모사체에 대한 혼합 발효 추출물의 AhR(Aryl hydrocarbon receptor) 기전 관련 하위 유전자 발현 변화 정량적 측정

본 실험예에서는 미세먼지에 의한 피부 세포 내 AhR(Aryl hydrocarbon receptor) 기전 관련한 하위 유전자인 CYP1A1, Nrf2, NQO1, IL-8의 mRNA 발현량을 정량적으로 확인하기 위해서 실시간 중합효소 연쇄반응(Real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR) 실험을 수행하였다.

<실험예 3>과 같은 방법으로 미세먼지 모사체, 실시예 1의 혼합 발효 추출물 및 비교예 1의 식물 추출물을 처리하고 처리한 피부 세포에서 RNA를 분리하였다.

CYP1A1, Nrf2, NQO1, IL-8 유전자의 mRNA 발현패턴을 사이버그린(Power SYBR green, Applied Biosystems) 시약을 이용해 비교했고, 미세먼지 모사체에 의해 증가된 피부 세포 내 CYP1A1, Nrf2, NQO1, IL-8 mRNA 발현량이 혼합 발효 추출물 처리로 감소하는 패턴을 확인할 수 있었다. 그 결과를 도 5에 나타내었다.

<실험예 5> 미세먼지 모사체에 대한 혼합 발효 추출물의 산화 스트레스 완화 효과

본 실험예에서는 미세먼지에 의해 유발되는 산화 스트레스인 활성산소(Reactive oxygen species, ROS) 발생량 감소 효과를 확인하였다.

사람 유래 각질형성세포(Human epidermal keratinocyte cells, HaCaT cells)를 100mm cell culture dish에서 96웰 black 플레이트에 적정농도로 옮긴 후, 제조한 미세먼지 모사체, 실시예 1의 혼합 발효 추출물 및 비교예 1의 혼합 추출물을 처리하고 배양하였다.

배양액을 제거하고 인산염 완충액(Phosphate Buffered Saline, PBS)으로 세포를 세척한 다음, DCF-DA(dichlorofluorescin diacetate)를 페놀 무첨가 배지(Phenol free media)에 희석하여 100 uM로 30분간 처리하였다.

그 후 인산염 완충액으로 2회 세척한 뒤, 자외선 조사기(UV irradiator)로 30mJ/cm² 의 일정 파장으로 조사하고 형광분석기(Fluorescent plate reader, Victor X2)를 이용하여 측정하였다.

도 6에 나타낸 바와 같이, 미세먼지 모사체에 의해 생성된 피부 세포 내 활성산소(ROS)가 혼합 발효 추출물의 처리로 감소하고 물로 추출한 일반 혼합 추출물에 비해 상대적으로 더욱 효과적인걸 확인하였다.

이에 따라서, 본 발명에 따른 조성물은 미세먼지 모사체에 의한 염증성 사이토카인 유전자의 발현량과 산화 스트레스인 활성산소(Reactive oxygen species, ROS) 생성량을 감소시킴으로써, 미세먼지에 의한 피부 염증을 완화하는 효능을 제공한다는 것을 확인하였다.

또한, 상기 실험으로부터 본 발명에 따른 조성물이 미세먼지에 포함된 유해물질과 결합해 활성화된 AhR(Aryl hydrocarbon receptor)에 의해 발현량이 증가하는 염증성 사이토카인 유전자인 IL-8과 산화 스트레스를 유발하는 활성산소(Reactive oxygen species, ROS)의 생성량을 감소시켜 조절함으로써 피부 염증을 완화할 수 있다는 것을 확인하였다.

이하, 상기 실험예의 결과를 근거로 하여, 하기에 혼합 발효 추출물을 이용한 여러 제형예를 조성하여 제시한다. 그러나 이들 제형예에만 국한되지 않고 본 발명을 구체적으로 설명하기 위한 것이다.

<제형예 1> 유연 화장수(skin toner)

성분명	함량(중량%)
혼합 발효 추출물	1.0
글리세린	5.0
1,3-부틸렌글리콜	3.0
에탄올	5.0
폴리옥시에틸렌노닐페닐에테르	0.5
향료	적량
방부제	적량
정제수	잔량

<제형예 2> 로션(emulsion)

성분명	함량(중량%)
혼합 발효 추출물	1.0
글리세린	5.0
1,3-부틸렌글리콜	8.0
스쿠알란	10.0
모노올레인산폴리옥시에틸렌소르비탄	2.0
트리에탄올아민	1.5
글리세릴스테아레이트	0.5
스테아릴글리시레티네이트	0.2
카르복시비닐폴리머	0.1
아르기닌	0.1
향료	적량
방부제	적량
정제수	잔량

<제형예 3> 크림(cream)

성분명	함량(중량%)
혼합 발효 추출물	1.0
글리세린	5.0
스테아린산	8.0
스쿠알란	5.0
자기유화형 모노스테아린산 글리세린	2.5
모노스테아린산 폴리옥시에틸렌 소르비탄	1.5
프로필렌 글리콜	4.0
스테아릴글리시레티네이트	0.2
바셀린	2.0
산화방지제	적량
향료	적량
방부제	적량
정제수	잔량

<제형예 4> 연고제(ointment)

성분명	함량(중량%)
혼합 발효 추출물	1.0
세토스아릴알코올	2.0
자기유화형 모노스테아린산	2.0
스테아린산	1.0
밀납	4.0
스쿠알란	7.0
모노스테아린 글리세린	3.0
모노스테아린산 소르비탄	1.0
폴리솔베이트 80	3.0
글리세린	5.0
프로필렌글리콜	4.0
향료	적량
바세린	잔량

Claims

김치 유래 유산균으로서 락토바실러스 쿠르바투스(Lactobacillus curvatus) J2K-01, 그 파쇄물, 그 배양물 또는 그 추출물로 발효된 식물 추출물을 유효성분으로 포함하며,
상기 식물 추출물은 티트리 추출물, 안젤리카 추출물 및 황형(순비기) 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상과 소나무 추출물, 지치 추출물, 파극천 추출물 및 감국 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상을 포함하는 화장료 조성물.
삭제
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제1항에 있어서,
상기 식물 추출물은, 상기 티트리 추출물, 상기 안젤리카 추출물, 상기 순비기 추출물, 상기 소나무 추출물, 상기 지치 추출물, 상기 파극천 추출물 및 상기 감국 추출물을 포함하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제1항에 있어서,
상기 발효된 식물 추출물은 상기 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 0.0001 내지 10중량%로 포함되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
삭제
제1항에 있어서,
상기 화장료 조성물은 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 에센스, 영양 오일, 보습 오일, 영양 크림, 파우더, 팩, 파운데이션, 메이크업 베이스, 클렌징, 젤, 로션, 마사지 크림, 바디로션, 핸드크림 및 화장비누로 이루어진 군으로부터 선택된 제형인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.