KR101822043B1

KR101822043B1 - 블루 로터스 및 아이슬란드 이끼의 복합 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물

Info

Publication number: KR101822043B1
Application number: KR1020170088985A
Authority: KR
Inventors: 엄지나; 권정화; 민진우; 주광식; 강희철
Original assignee: (주)지에프씨
Priority date: 2017-07-13
Filing date: 2017-07-13
Publication date: 2018-01-25

Abstract

본 발명은 주름 개선용, 항산화용 및 항염증용 화장료 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 블루 로터스 및 아이슬란드 이끼의 복합 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다. 상기 화장료 조성물은 블루 로터스 추출물과 아이슬란드 이끼의 복합 추출물을 포함함으로써 주름 개선 효과를 갖고 염증 개선 효과 및 노화 방지 효과를 얻을 수 있다.

Description

블루 로터스 및 아이슬란드 이끼의 복합 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물{Cosmetic Compositions Containing complex Extracts of Nymphaea Caerulea and Cetraria islandica}

본 발명은 블루 로터스(Nymphaea Caerulea) 및 아이슬란드 이끼(Cetraria islandica)의 복합 추출물을 유효성분으로 포함하는 주름 개선, 항산화 및 항염증용 화장료 조성물에 관한 것이다.

주름방지는 아름다움의 상징으로써 꾸준한 관심의 대상이 되어 왔다. 이러한관심으로 주름 방지용 제품에 대한 수요는 꾸준히 증가하고 있고, 관련 화장품 산업은 고부가 가치 산업으로 성장하고 있다.

최근 기술의 발달과 삶의 질 향상으로 미(美)에 대한 욕구와 관심이 증대되면서 주름생성을 완화시키는 주름 억제 제품 개발이 필요하게 되었고 이에 따라 주름 억제제 및 주름 개선 화장품 개발에 관한 연구가 활발히 진행 중이다.

주름과 가장 밀접하게 연관되어 있는 것은 피부 세포의 노화이다. 일반적으로 피부 노화의 원인은 고령화에 따라 나타나는 자연 노화와 외부환경에 의해 나타나는 내적인 노화로 분류될 수 있다.

자연 노화는 유전자적 요인 등이 많이 관여되기 때문에 제어가 어렵다. 때문에 자외선, 산화, 건조 등과 같은 환경적 요인을 제어하기 위해 많은 연구가 진행되고 있다.

환경적 요인은 주로 진피층에 포함된 콜라겐 단백질, 엘라스틴(elastin) 단백질 등을 파괴하거나 변성을 일으켜 주름을 유발한다. 특히, 태양의 자외선은 피부세포(섬유아세포)를 산화시키고 엘라스틴의 생성저하 및 파괴를 일으키는데, 자외선 등에 의해 피부 내에 엘라스틴 분해효소(elastase)가 발현되며 이 효소가 피부 내의 정상적인 엘라스틴을 분해하여 피부탄력 저하를 가져온다.

또한, 환경적 요인에 의해 양산된 활성산소는 산화작용에 의해 피부 세포 내의 단백질 파괴, 당의 산화, 유전자 변형 등을 일으켜 피부에 노화 및 주름을 유발할 수 있다. 이러한 산화력과 활성산소는 피부 세포 내의 단백질 파괴, 당의 산화, 유전자 변형 등을 일으켜 피부에 노화 및 주름을 유발할 수 있다.

이와 관련하여 공개특허공보 제2009-0043904호에서는 나노베지클 비타톡스와 블루로터스 추출물을 유효성분으로 포함하여 자유라디칼 소거 능력을 더욱 강화하고 그 효능을 오래 지속시킬 수 있는 화장료 조성물을 개시하고 있으며, 등록특허공보 제10-1458887호에서는 히카마, 콜리플라워, 말로우 및 아이슬란드 이끼 천연 복합추출물을 포함하여 항산화 효과, 염증 매개 인자 발현 억제에 효과적이고 보습 관련 인자 발현 증가 및 우수한 피부 자극 완화 효과를 갖는 화장료를 개시하고 있다.

그러나 산화 방지 및 주름 방지 효과를 모두 얻을 수 있는 수준의 정도로 기술이 개발되고 있지 않아, 상기 효과 모두를 극대화시킬 수 있는 물질의 개발이 요구되고 있으며, 피부자극, 세포독성 등의 위해 요소가 적어 함량의 제한 없이 사용할 수 있는 화장료 조성물에 대한 요구도 증가하고 있다.

본 발명은 피부주름 방지, 항산화 및 항염증 효과가 우수하며, 세포 독성이 없고, 인체에 무해하며, 피부 자극이 적은 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 블루 로터스 및 아이슬란드 이끼의 복합 추출물을 유효성분으로 포함하는 주름 개선, 항산화 및 항염증용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

상기 복합 추출물은 상기 조성물 전체 중량에 대하여 0.01 내지 50중량%의 함량으로 포함되는 것을 특징으로 한다.

상기 복합 추출물은 블루 로터스 및 아이슬란드 이끼를 건조중량으로 하여 블루 로터스 1 중량부에 대하여 아이슬란드 이끼를 0.01 내지 20중량부로 혼합하여 추출된 것임을 특징으로 한다.

상기 화장료 조성물은 화장수, 에센스, 파운데이션, 파우더, 로션, 크림, 팩, 젤 연고, 패치, 분무제, 마스크 시트 및 세정제 중 어느 하나의 제형인 것임을 특징으로 한다.

본 발명에 따른 블루 로터스 및 아이슬란드 이끼의 복합 추출물을 유효 성분으로 포함하는 화장료 조성물은 항산화 및 항염증 효과가 우수하면서도 피부주름 방지도 향상시켜, 세포 독성이 없고, 인체에 무해하며, 피부 자극이 적은 우수한 효과를 가진다.

도 1은 본 발명의 일 구현예에 따른 실시예 1 내지 3의 세포활성도 시험결과를 나타낸 그래프이다.
도 2는 본 발명의 일 구현예에 따른 비교예 1 내지 2의 세포활성도 시험결과를 나타낸 그래프이다.
도 3은 본 발명의 일 구현예에 따른 실시예 1 내지 3의 NO 생성 억제 능력 시험결과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명의 일 구현예에 따른 비교예 1 내지 2의 NO 생성 억제 능력 시험결과를 나타낸 그래프이다.
도 5는 본 발명의 일 구현예에 따른 실시예 1 내지 3의 자유라디칼 제거 능력 시험결과를 나타낸 그래프이다.
도 6은 본 발명의 일 구현예에 따른 비교예 1 내지 2의 자유라디칼 제거 능력 시험결과를 나타낸 그래프이다.
도 7은 본 발명의 일 구현예에 따른 실시예 1 내지 3의 주름방지 효능 시험결과를 나타낸 그래프이다.
도 8은 본 발명의 일 구현예에 따른 비교예 1 내지 2의 주름방지 효능 시험결과를 나타낸 그래프이다.

본 발명의 일 구현예에 따르면 블루 로터스 및 아이슬란드 이끼의 복합 추출물을 유효성분으로 포함하는 주름 개선, 항산화 및 항염증용 화장료 조성물을 제공할 수 있다.

본 발명에 사용되는 블루 로터스는 수련과(Nymphaeaceae)에 속하는 여러해살이풀로서, 태국산 수련(Nymphaeacoerulea), 인도산 수련(Nymphaea, stellata)등이 이에 속하며 원산지는 남아프리카이다. 수련과 식물은 지름 30㎝ 정도의 잎을 가진 매우 크게 자라는 야생수초로서 남부아시아와 동아시아 인근의 섬들에서 자란다.

블루 로터스 (blue lotus), 푸른 연꽃, 청련 등으로 불리는 이 식물의 이름은 푸른색 꽃이 피는 것에서 기인하였으며, 항노화, 항산화제 성분을 함유하고 프리라디칼을 억제하는데 탁월한 것으로 알려져 있다. 본 발명에서는 이 식물의 꽃을 이용하여 일상적인 추출방법을 이용하여 추출물을 얻어서 사용하였다.

또한, 아이슬란드 이끼(Cetraria islandica)는 북반구 추운 지대 및 고산지대에서도 자생하는 이끼류의 일종으로서 여러 나라에서 수 세기동안 이후두 장애, 결핵치료 및 건강증진제로 사용되어 왔으며, 유럽보건기구에서도 인후염, 호흡기장애 등의 치료약제로 허가하였다. 이러한 이끼류에서 추출한 다당류는 염증 완화 및 면역력 강화 효과가 있는 것으로 알려져 있다. 또한 아이슬란드 이끼는 사이토카인 분비의 변화(IL-12, IL-10)를 유발하여 항염증 효과를 나타내는 것으로 알려져 있다.

본 발명에서는 상기 블루 로터스 및 아이슬란드 이끼를 혼합하여 복합 추출물을 도입함으로써 종래기술 대비 항산화 및 항염증 효과가 우수하면서도 피부주름 방지도 향상시켜, 세포 독성이 없고, 인체에 무해하며, 피부 자극이 적은 우수한 효과를 가질 수 있는 것이다.

본 발명에 따른 블루 로터스 및 아이슬란드 이끼의 복합 추출물은 본 발명이 속한 분야에 공지된 다양한 방법을 통해 얻어질 수 있고, 구체적으로는 물, 유기용매 또는 이들의 혼합 용매를 추출용매로 하여 하기의 추출방법으로 사용하여 제조될 수 있다.

상기 물은 알칼리 물일 수 있고, 상기 유기용매는 탄소수 1 내지 4의 무수 또는 함수 저급 알코올, 예를 들면, 에탄올, 프로판올, 메탄올, n-부탄올, 아세톤, 1,3-부틸렌글라이콜 등의 극성 유기용매; 에테르, 헥산, 벤젠, 클로로포름, 에틸아세테이트 등의 비극성 유기용매; 콩기름, 참기름 등의 식물성 유기용매; 및 이들의 혼합물 중 1종 이상을 포함할 수 있다. 상기 유기용매는 1종을 단독으로 사용하거나 2종 이상을 혼합하여 사용할 수 있다.

상기 추출 시 사용되는 용매로서 에탄올, 메탄올, n-부탄올, 프로판올 중 하나 이상의 유기용매 및 1,3-부틸렌글라이콜 또는 이들의 용매에 물을 포함하여 혼합용매로 사용할 수 있다. 상기 추출용매로서, 상기 혼합용매를 사용하는 경우, 유효성분의 추출 효율이 더욱 향상될 수 있다. 이 때, 상기 혼합용매를 사용하는 경우 임의의 목적에 따라 적절히 혼합하여 사용가능하다.

본 발명의 블루 로터스 및 아이슬란드 이끼의 복합 추출물을 제조하는 방법을 일례로 설명하면 다음과 같다.

먼저, 상기 블루 로터스 및 아이슬란드 이끼 각각의 성분 또는 이들의 혼합성분(이하, 추출 물질이라 칭함)에 상술한 추출 용매를 첨가한 후, 중탕추출, 환류냉각추출, 초음파추출, 냉침추출 및 페르콜레이션(percolation) 추출방법 중에서 어느 하나 이상의 방법을 선택하여 블루 로터스 및 아이슬란드 이끼 추출물을 제조할 수 있다.

상기 추출하는 단계에서 추출 횟수는 구체적으로 1회 내지 5회 반복될 수 있다. 이러한 경우, 유효성분의 추출효율이 더욱 향상될 수 있다.

상기 추출하는 단계는 환류 냉각기가 달린 추출기에 추출 물질 및 추출 용매를 투입한 후, 50℃ 내지 100℃에서 4 내지 20시간 동안 가열 환류 냉각 추출하는 것일 수 있다. 이때 상기 가열 환류 냉각 추출방법은 가열하면서 환류시킨 후, 냉각하여 추출하는 방법인데, 구체적으로 가열로 인해 기화현상이 발생하여 용매 손실이 발생할 수 있기 때문에 냉각과정을 함께 실시함으로써, 용매 손실을 최소화하는 추출방법을 의미한다. 다른 방법으로 상기 추출하는 단계는 추출 물질에 추출 용매를 투입한 후, 5℃ 내지 37℃에서 1 내지 15일간 침적시켜 냉침하여 추출할 수 있다.

또 다른 방법으로 상기 추출하는 단계는 추출 물질에 추출 용매를 투입한 후, 1 내지 200시간 동안 퍼콜레이션(percolation)할 수 있다.

또 다른 방법으로 상기 추출하는 단계는 추출 물질에 추출 용매를 투입한 후, 50℃ 내지 100℃에서 0.5 내지 72시간동안 중탕하여 추출할 수 있다.

또한, 본 발명의 추출 물질은 상술한 추출 용매에 의해 추출된 추출 물질뿐만 아니라, 통상적인 정제 과정을 거쳐 추출된 추출 물질도 포함한다. 예컨대, 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외여과막을 이용한 분리 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 활성 분획도 본 발명의 추출물에 포함되는 것이다.

상기 블루 로터스와 아이슬란드 이끼의 복합 추출물은 추출액, 상기 추출액을 건조시킨 분말, 상기 추출액을 농축여과한 농축물 등 다양한 형태로 가공되어 이용될 수 있다. 상기 블루 로터스와 아이슬란드 이끼로부터 제조된 추출액은 특별히 제한되지 않으나, 예를 들면 함수알코올을 침출 용매로 포함하는 틴크, 농축물, 엑기스, 유동엑기스 등의 형태로 이용될 수 있다.

또한, 상기 추출하는 단계는 추출 물질의 건조 고형물 기준으로 상기 추출 물질 중량의 10배 내지 50배의 에탄올을 가하고, 20℃ 내지 80℃에서 1 내지 72시간동안 추출하고, 필터여과 및 농축하여 농축물 상태의 추출액을 얻을 수 있다.

상술한 방법으로 추출된 블루 로터스 및 아이슬란드 이끼의 복합 추출물은 조성물 전체 중량에 대하여 고형분의 형태로 0.01 내지 50중량%, 바람직하게는 0.2 내지 30중량%, 더욱 바람직하게는 0.5 내지 20중량%의 함량으로 포함되는 것이 좋다.

본 발명에서는 상기 복합 추출물의 함량 범위에 따라 보다 우수하게 구현되는 효과를 가질 수 있는데, 상기 복합 추출물의 함량이 1 내지 15중량%, 바람직하게는 1 내지 10중량%의 범위로 포함되는 경우 항염증 특성이 우수한 효과를 얻을 수 있다.

또한, 상기 복합 추출물의 함량이 0.1 내지 15중량%, 바람직하게는 1 내지 10중량%의 범위로 포함되는 경우 항산화 특성이 우수한 효과를 얻을 수 있다.

특히, 상기 복합 추출물의 함량이 0.5 내지 15중량%, 바람직하게는 1 내지 10중량%의 범위로 포함되는 경우 상기 항염증 및 항산화 특성을 향상시키면서도 주름 개선 특성이 우수한 효과를 얻을 수 있다.

상기 복합 추출물은 블루 로터스 및 아이슬란드 이끼를 건조중량으로 하여 블루 로터스 1 중량부에 대하여 아이슬란드 이끼를 0.01 내지 20중량부, 바람직하게는 0.1 내지 10중량부, 더욱 바람직하게는 0.5 내지 5중량부로 혼합하여 추출된 것이 좋이 항염증, 항산화 및 항주름 특성을 모두 향상시킬 수 있다는 점에서 좋다. 특히, 상기 복합 추출물은 블루 로터스 및 아이슬란드 이끼를 건조중량으로 하여 블루 로터스 1 중량부에 대하여 아이슬란드 이끼를 0.8 내지 1.2 중량부로 혼합되는 경우 단일 추출물인 경우에 비해 항염증 및 항산화 특성을 동일 수준으로 향상시키면서도 항주름 효과를 보다 현저하게 향상시킬 수 있다는 점에서 바람직하다.

상술한 복합 추출물을 포함하는 조성물은 정제수(water), 글리세린(glycerin), 미리스틱애씨드(myristic acid), 부틸렌글라이콜(butylene glycol), 포타슘하이드록사이드(potassium hydroxide), 폴리에틸렌글리콜(polyethylene glycol), 스테아레이트(sterate), 스테아릭애씨드(stearic acid), 라우릭애씨드(laruic acid), 라우라마이드디이에이(lauramide DEA), 글리세릴스테아레이트(glyceryl stearate), 배헤닐알코올(behenyl alcohol), 마이크로크리스탈린왁스(microcrystalline wax), 페녹시에탄올(phenoxyethanol), 에칠헥실글리세린(ethylhexylglycerin), 토코페릴아세테이트(tocopheryl acetate), 1,2-헥산디올(1,2-hexanediol), 카프릴릴글라이콜(caprylyl glycol), 히드록시에틸렌셀룰로오스(hydroxyethylene cellulose), 잔탄검(xanthan gum), 콜라겐(collagen), 시트르산나트륨(sodium citrate), 시트르산(citrate), 아스코르빈산마그네슘(magnesium ascorbate) 및향료(fragrance) 중 1종 이상을 포함할 수 있다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물에는 필요에 따라 통상 화장료에 배합되는 다른 성분을 배합할 수 있다. 일 예로, 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제 또는 정제수가 바람직하나 이에 한정되지 않는다.

상기한 바와 같이, 블루 로터스 추출물과 아이슬란드 이끼 추출물 또는 이들의 복합 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물은 주름개선, 항산화 및 항염증 효과를 나타내어 피부 화장료 조성물로서의 효과가 우수하다.

실시예

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명 하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 이에 의해 본 발명이 한정되는 것은 아니다.

<비교예 1: 블루 로터스 추출물의 제조>

건조된 블루 로터스 50g 및 상기 건조된 블루 로터스 중량의 40배로 70% 에탄올을 첨가하여 80℃에서 2시간 동안 가열 환류 냉각 추출 방법으로 추출하였다. 상기 과정을 1회 반복 시행한 후 0.45㎛ 필터로 여과하여 얻은 여과액을 감압농축하여 동결 건조하였으며, 분말 형태의 블루 로터스 추출물을 제조하였다.

<비교예 2: 아이슬란드 이끼 추출물의 제조>

건조된 아이슬란드 이끼 50g 및 상기 건조된 아이슬란드 이끼 중량의 40배로 70% 에탄올을 첨가하여 80℃에서 2시간 동안 가열 환류 냉각 추출 방법으로 추출하였다. 상기 과정을 1회 반복 시행한 후 0.45㎛ 필터로 여과하여 얻은 여과액을 감압농축하여 동결 건조하였으며, 분말 형태의 아이슬란드 이끼 추출물을 제조하였다.

<실시예 1: 블루 로터스와 아이슬란드 이끼의 복합 추출물(1:1 중량비) 제조>

건조된 블루 로터스 50g과 아이슬란드 이끼 50g 및 상기 건조된 블루 로터스 및 아이슬란드 이끼의 총 중량에 대하여 40배로 70% 에탄올을 첨가하여 80℃에서 2시간 동안 가열 환류 냉각 추출 방법으로 추출하였다. 상기 과정을 1회 반복 시행한 후 0.45㎛ 필터로 여과하여 얻은 여과액을 감압농축하여 동결 건조하였으며, 분말 형태의 블루 로터스와 아이슬란드 이끼의 복합 추출물을 제조하였다.

<실시예 2: 블루 로터스와 아이슬란드 이끼의 복합 추출물(1:2 중량비) 제조>

건조된 블루 로터스 50g과 아이슬란드 이끼 100g 및 상기 건조된 블루 로터스 및 아이슬란드 이끼의 총 중량에 대하여 40배로 70% 에탄올을 첨가하는 것을 제외하고는 실시예 1과 동일한 방법으로 실시하였다.

<실시예 3: 블루 로터스와 아이슬란드 이끼의 복합 추출물(2:1 중량비) 제조>

건조된 블루 로터스 100g과 아이슬란드 이끼 50g 및 상기 건조된 블루 로터스 및 아이슬란드 이끼의 총 중량에 대하여 40배로 70% 에탄올을 첨가하는 것을 제외하고는 실시예 1과 동일한 방법으로 실시하였다.

<효능 평가>

(1) 세포독성시험

상기 실시예 및 비교예에 따른 추출물 시료에 DMSO를 첨가하여 하기 표 1에 표시된 농도로 희석하고, 농도에 따른 세포독성정도를 평가하였다.

대식세포의 일종인 RAW 264.7 cell을 1% 페니실린/스트렙토마이신 및 10% FBS(fetal bovineserum)가 포함된 DMEM 배지(Dulbecco's Modified Eagle Medium)를이용하여 24 well plate에 1.0 × 10⁴cell/well씩 동일하게 계수하여 분주한 후, 37℃ 및 5%의 이산화탄소 조건에서 24 시간동안 배양하였다.

상기 24시간 배양한 cell에 상기 실시예 및 비교예에 따른 시료를 농도별로 배지와 혼합시킨 후, 각 well에 1ml씩 첨가하고 37℃ 및 5% CO₂조건의 incubator에서 24시간 동안 배양한 다음, 각 well의 상등액만을 따로 취한 뒤 각 well에 WST-1 assay solution(ez-cytox)을 첨가하여 배양기에서 2시간 반응시킨 후 ELISA reader기로 450nm에서 흡광도를 측정하였으며, 하기 계산식 1에 의하여 세포 생존율을 계산하여 그 결과를 하기 표 1 및 도 1 내지 2에 나타내었다.

[계산식 1]

세포생존율(%) = [(시료 처리군의 흡광도 / 무처리군의 흡광도) × 100]

	비교예 1	비교예 2	실시예 1	실시예 2	실시예 3
0 (㎍/ml)	100	100	100	100	100
6.25 (㎍/ml)	103.35	95.45	98.03	97.39	94.14
12.5 (㎍/ml)	104.08	96.84	99.51	97.33	94.22
25 (㎍/ml)	103.84	97.35	97.48	97.39	93.9
50 (㎍/ml)	103.26	96.09	96.29	95.8	94.05
100 (㎍/ml)	103.65	97.41	96.23	96.26	91.59

상기 표 1 및 도 1 내지 2에서 확인할 수 있듯이, 실시예 1 내지 3은 100㎍/㎖의 농도에서도 세포생존율이 90% 이상으로 세포에 대한 독성이 나타나지 않아 화장품에 안전한 소재로 사용이 가능함을 확인하였다.

(2) 항염증 효능 검증 시험 : NO(Nitric Oxide) 생성 억제능

상기 실시예 및 비교예에 따른 추출물의 각각 시료에 DMSO를 첨가하여 하기 표 2에 표시된 농도로 희석하고, 농도에 따른 NO(Nitric Oxide) 생성 억제 정도를 평가하였다.

대식세포의 일종인 RAW 264.7 cell을 1% 페니실린/스트렙토마이신 및 10% FBS(fetal bovineserum)가 포함된 DMEM 배지를 이용하여 24well plate에 1.0 × 10⁴cell/well씩 동일하게 계수하여 분주한 후, 37℃ 및 5%의 이산화탄소 조건에서 24시간 동안 배양하였다.

상기 24시간 배양한 cell에 상기 실시예 및 비교예에 따른 시료를 각각 농도별로 배지와 혼합시킨 후, 각 well에 1ml씩 첨가하고 37℃ 및 5% CO₂조건의 인큐베이터에서 24시간 반응시켜주었다. 이때, NO를 발현시키는 염증유발인자인 LPS(lipo poly saccharide)를 1㎍/㎖의 농도로 같이 처리하고 37℃ 및 5%의 이산화탄소 조건에서 24시간 동안 반응시켰다. 각 well의 상등액만을 따로 취한 뒤 각 well에 Nitric Oxide detection kit를 이용하여 배양액 중 100㎕를 96 well plate에 취하고 Griess reagent A(N-1-Naphthylethylenediamine (NEDHC)) 50㎕ 및 Griess reagent B(Sulfanilamide) 50㎕를 각각 넣어준 뒤 각각 10분 동안 반응시킨 뒤, ELISA plate reader를 이용하여 540nm에서 흡광도를 측정하여 그 결과를 하기 표 2 및 도 3 내지 4에 나타내었다.

	비교예 1	비교예 2	실시예 1	실시예 2	실시예 3
0 (㎍/ml)	0	0	0	0	0
6.25 (㎍/ml)	1.64	7.59	7.17	6.64	3.94
12.5 (㎍/ml)	2.39	16.75	5.88	7.05	11.25
25 (㎍/ml)	5.22	15.54	11.52	18.25	21.15
50 (㎍/ml)	19.25	22.53	23.98	33.8	40.02
100 (㎍/ml)	30.75	36.27	45.36	58.48	55.99
IC₅₀	-	-	-	82.68	81.36

상기 표 2 및 도 3 내지 4에서 확인할 수 있듯이, 비교예 1 및 2 대비 실시예 1 내지 3이 Nitric oxide(NO) 생성 억제능이 우수한 것을 확인할 수 있었다. 특히, 비교예 1(블루 로터스 추출물)에 비하여 실시예 1 내지 3의 Nitric oxide(NO) 생성 억제능이 현저하게 높은 것을 확인하였다.

(3) 항산화 효능 검증 시험 : DPPH radical 소거 활성

프리라디칼은 활성산소를 말하며, 우리가 호흡한 산소가 에너지를 만들고 물로 환원되는 과정에서 나타나는 산화력이 수 천배나 높은 물질이다. 동식물의 체내 세포들의 대사과정에서 생성되거나 스트레스, 광자극, 세균 침투에 의해서도 발생되며, 과량의 활성산소가 체내에 존재하면 정상세포까지 무차별공격, 각종 질병과 노화의 주범이 된다. 또한, 외부자극에 민감한 면역반응을 보이는 병리적인자로 작용하게 된다.

상기 실시예 및 비교예에 따른 추출물 각각의 시료에 DMSO를 첨가하여 하기 표 3에 표시된 농도로 희석하고, 농도에 따른 DPPH 억제 정도를 평가하였다.

실시예 및 비교예에 따른 시료를 농도별로 0.1M DPPH 250㎕(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) 용액을 혼합시킨 후 30 분간 4℃에서 반응시켰다. 반응이 끝나면 각 sample을 96 well plate에 담아 ELISA reader기를 이용하여 520nm에서 흡광도를 측정하였다.

이때, 시료를 넣지 않은 sample을 대조군으로 하여 하기 계산식 2에 의해 시료의 자유라디칼소거능(Free radical scavenging activity, %)을 계산하여 그 결과를 하기 표 3 및 도 5 내지 6에 나타내었다. 이때, 양성대조군으로는 아스코르브산(Ascorbic acid)을 사용하였고, 자유라디칼소거능이 50%일 때 아스코르브산(Ascorbic acid)의 농도는 2.12㎍/㎖으로 나타났다.

[계산식 2]

자유라디칼소거능(%) = [(시료 처리군의 흡광도 / 무처리군의 흡광도) × 100]

	비교예 1	비교예 2	실시예 1	실시예 2	실시예 3
0 (㎍/ml)	0	0	0	0	0
3.125 (㎍/ml)	24.08	3.47	47.06	40.21	44.35
6.25 (㎍/ml)	45.03	6.7	65.22	64.81	65.84
12.5 (㎍/ml)	61.78	9.43	67.77	70.11	69.15
25 (㎍/ml)	62.83	15.14	69.82	70.63	67.49
50 (㎍/ml)	64.40	26.05	72.63	71.96	66.67
100 (㎍/ml)	64.14	38.21	75.7	73.28	70.25
IC₅₀	9.04	-	4.33	4.54	4.37

상기 표 3 및 도 5 내지 6에서 확인할 수 있듯이, 비교예 1 및 2 대비 실시예 1 내지 3이 현저하게 높은 것을 확인하였다.

(4) 주름개선 효능 검증 시험 : 엘라스테이즈(Elastase) 억제 활성

상기 실시예 및 비교예에 따른 추출물 각각의 시료에 DMSO를 첨가하여 하기 표 4에 표시된 농도로 희석하고, 농도에 따른 엘라스테이즈(Elastase) 억제 정도를 평가하였다.

실시예 및 비교예에 따른 시료를 농도별로 10mM Tris-HCl buffer(pH 8.0)에 녹인 N-succinyl-(Ala)3-p-nitroanilide(S4760, Sigma) 1.6 mM 농도의 기질과 Elastase from porcine pancreas Type Ⅳ(E0258, Sigma) 0.4U/mL를 혼합하여 25℃에서 5분 동안 반응시킨 후 96 well plate에 담아 410nm에서 흡광도를 측정하였다.

이때, 시료를 넣지 않은 sample을 대조군으로 하여 하기 계산식 3을 이용하여 계산하여 그 결과를 하기 표 4 및 도 7 내지 8에 나타내었다. 이때, 양성대조군으로 올레아놀릭산(Oleanolic acid)를 사용하였고, 엘라스테이즈 저해 활성이 50% 일 때 올레아놀릭산의 농도는 8.47㎍/㎖으로 나타났다.

[계산식 3]

엘라스테이즈 저해활성 (%) = 100 - [(시료를 처리한 군의 흡광도 / 시료를처리하지않은군의흡광도) × 100]

	비교예 1	비교예 2	실시예 1	실시예 2	실시예 3
0 (㎍/ml)	0	0	0	0	0
3.125 (㎍/ml)	3.06	1.47	9.58	8.51	1.66
6.25 (㎍/ml)	4.28	0.91	15.24	9	21.21
12.5 (㎍/ml)	13.97	2.17	31.57	14.68	21.92
25 (㎍/ml)	26.71	11.14	45.07	19.8	27.44
50 (㎍/ml)	41.9	28.59	54.21	33.61	37.46
100 (㎍/ml)	55.25	41.63	63.93	39.17	38.41
IC₅₀	79.77	-	26.06	-	-

상기 표 4 및 도 7 내지 8에서 확인할 수 있듯이, 비교예 1 및 2 대비 실시예 1이 엘라스테이즈(Elastase) 억제능이 현저하게 높은 것을 확인하였다.

상술한 물성 데이터로부터 본 발명의 일 구현예에 따른 화장료 조성물은 블루 로터스 또는 아이슬란드 이끼의 단일 성분으로 추출된 추출물 대비 동등 수준의 우수한 주름 개선 및 항산화 효과를 가지면서도 항염증 효과도 현저하게 향상시킬 수 있음을 알 수 있다.

<제조예 1> 화장수 제조

하기 표 5에 기재된 성분을 사용하여 통상의 방법에 의하여 화장수를 제조하였다.

성분	함량(중량%)
실시예1의 복합 추출물	3.00
히드록시에틸렌셀룰로오스 (2% 수용액)	12.00
잔탄검(2% 수용액)	2.00
1,3-부틸렌글라이콜	6.00
글리세린	4.00
히알루론산나트륨(1% 수용액)	5.00
정제수	잔량
계	100.0

< 제조예 2> 영양로션 제조

하기 표 6에 기재된 성분을 사용하여 통상의 방법에 의하여 영양로션을 제조하였다.

성분	함량(중량%)
실시예1의복합 추출물	3.00
아스코르빈산-2-인산마그네슘염	1.00
수용성콜라겐(1% 수용액)	1.00
시트르산나트륨	0.01
시트르산	0.05
1,3-부틸렌글라이콜	3.00
정제수	잔량
계	100.0

본 발명의 단순한 변형 또는 변경은 모두 이 분야의 통상의 지식을 가진 자에 의하여 용이하게 실시될 수 있으며 이러한 변형이나 변경은 모두 본 발명의 영역에 포함되는 것으로 볼 수 있다.

Claims

블루 로터스 및 아이슬란드 이끼의 복합 추출물을 유효성분으로 포함하되,
상기 복합 추출물은 조성물 전체 중량에 대하여 1 내지 10중량%의 함량으로 포함되고,
상기 복합 추출물은 블루 로터스 및 아이슬란드 이끼를 건조중량으로 하여 블루 로터스 1 중량부에 대하여 아이슬란드 이끼를 0.5 내지 5 중량부로 혼합하여 추출된 것임을 특징으로 하는 주름 개선, 항산화 및 항염증용 화장료 조성물.
삭제
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제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 화장수, 에센스, 파운데이션, 파우더, 로션, 크림, 팩, 젤 연고, 패치, 분무제, 마스크 시트 및 세정제 중 어느 하나의 제형인 주름 개선, 항산화 및 항염증용 화장료 조성물.