KR102122475B1 - 강황 잎, 꽃잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 - Google Patents

강황 잎, 꽃잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 강황 잎과 꽃잎의 혼합추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로서, 구체적으로는 강황 잎과 꽃잎의 혼합추출물 함유하여 항산화 효과, 엘라스타아제 활성 억제 및 MMP-1 생성 억제 효과, 자외선 유도에 의한 MMP-1 생성억제효과가 탁월하며, 멜라닌 생성 억제 효과, 자외선 조사에 의한 세포독성 완화 효과, 자외선 조사에 의한 염증성 사이토카인 발현 억제 효과, 종양괴사인자알파 및 사이클로옥시게나제-2의 생합성 억제효과가 우수한 화장료 조성물에 관한 것이다.

Description

강황 잎, 꽃잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물{Cosmetic compositions containing the extract of Curcuma Longa leaf and flower as active ingredient}
본 발명은 강황 잎, 꽃잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 구체적으로는 강황 잎과 꽃잎의 혼합추출물을 유효성분으로 함유하여 항산화 효과, 엘라스타아제 활성 억제 및 MMP-1 생성 억제 효과, 자외선 유도에 의한 MMP-1 생성억제효과가 우수하며, 멜라닌 생성 억제 효과, 자외선 조사에 의한 세포독성 완화 효과, 자외선 조사에 의한 염증성 사이토카인 발현 억제 효과, 종양괴사인자알파 및 사이클로옥시게나제-2의 생합성 억제효과가 우수한 화장료 조성물에 관한 것이다.
화장품은 피부를 보호하고 아름다움을 부여하는 목적으로 사용되어 왔다. 그러나 최근에는 기능성을 강조하여 기존의 단순한 피부보호나 보습 등을 넘어서 피부주름이나 탄력개선, 항산화, 미백 등 다양한 기능을 가지는 기능성 화장품이 각광을 받고 있다. 이에 따라 다양한 활성을 가지는 성분들이 함유되게 되고, 이는 피부 트러블이나 염증을 유발하기도 한다. 이에 따라 안전한 천연물 성분을 이용하는 화장료에 대한 관심 높아지고 있으며, 안전하고도 피부유용활성을 가지는 천연물 소재를 찾는데 노력을 기울이고 있는 실정이다.
본 발명자들은 이러한 다양한 피부유용활성을 가지는 천연물 소재를 탐색 및 연구하여 왔으며, 주로 약재와 향신료로 사용되던 강황의 뿌리가 아닌 강황의 잎과 꽃잎에 항산화, 피부 주름 및 항염 효과를 가지는 성분이 함유되어 있음을 확인하고 이를 화장료로 이용하는 기술에 대하여 연구한 결과 본 발명을 완성하였다.
강황은 생강목에 속하는 다년생 식물로서 인도를 중심으로 한 열대, 아열대 지역에서 주로 재배되며 줄기와 뿌리를 식용, 약용 등으로 사용한다. 인도, 중국, 동남아시아 등지에서 많이 재배되며, 우리나라는 전남 진도, 전남 해남, 전북 부안 등지에서 재배되고 있다. 꽃 이삭은 잎 보다 먼저 나오고 넓은 달걀모양이며 연한 녹색의 포에 싸여 있다. 4∼6월에 잎겨드랑이에서 노란 꽃이 핀다. 윗부분의 포는 나비가 약간 좁고 끝은 담자홍색이며 잎겨드랑이에 꽃이 달리지 않는다. 뿌리줄기의 겉은 연한 노랑색이고, 속은 주홍빛으로 장뇌 같은 향기가 난다. 강황은 뿌리줄기를 한약재로 사용한다. 맵고 쓴 맛이 나는 황색의 약재로, 통증 완화와 월경불순에 효능이 있다. 인도에서는 타박상이나 염좌에 바르는 약으로 쓰며 카레 가루의 향신료로 쓰기도 한다.
대한민국 공개특허 제2017-0061360호 “커큐민을 포함하는 강황 추출물을 유효 성분으로 포함하는 피부 미백, 주름 형성 억제, 및 소양증 완화용 화장품 조성물”에는 ‘강황 추출물에 포함된 커큐민(Curcumin)이 피부 멜라닌 생성의 감소, 주름 생성 감소 및 소양증 완화에 효과를 나타낼 수 있음’이 개시되어 있다.
또한, 대한민국 공개특허 제2016-0012676호 “강황 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물”에는 ‘강황 잎 추출물을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염 개선에 효과를 나타낼 수 있음’이 개시되어 있다.
본 발명자들은 강황 잎에 꽃잎을 특정한 비율로 혼합한 후 추출한 혼합추출물은 종래의 강황 잎 추출물에 비하여 매우 우수한 항노화 및 항염 활성을 나타내는 것을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 강황 잎과 꽃잎의 혼합추출물을 함유하여 피부 항산화 효과, 엘라스타아제 활성 억제 및 MMP-1 생성 억제 효과, 자외선 유도에 의한 MMP-1 생성억제효과, 멜라닌 생성 억제 효과, 자외선 조사에 의한 세포독성 완화 효과, 자외선 조사에 의한 염증성 사이토카인 발현 억제 효과, 종양괴사인자알파 및 사이클로옥시게나제-2의 생합성 억제 효과와 같은 항노화 활성 및 항염 활성이 우수한 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한 본 발명은 상기 강황 잎과 꽃잎의 혼합추출물을 제조하는 방법을 제공하는 것을 다른 목적으로 한다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명에 따르면, 강황 잎과 꽃잎의 혼합추출물을 조성물 전체중량에 대하여 0.01 ~ 20.0중량% 함유하는 화장료 조성물이 제공된다.
바람직하게는 상기 혼합추출물은 강황 잎과 꽃잎을 동일 중량비로 혼합하여 추출한 것이다.
상기 강황 잎과 꽃잎의 혼합추출물은 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올(예를 들면 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올), 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 에틸 아세테이트, 클로로포름, 부틸 아세테이트, 디에틸에테르, 디클로로메탄 및 헥산으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 용매를 이용하여 추출한 추출물이거나, 초임계 추출법 또는 초음파 추출법을 이용하여 추출한 추출물이다. 또는 상기 추출물은 효모, 유산균 및 바실러스속 균 및 이의 혼합물에 의한 발효추출물이며, 바람직하게는 에탄올침전법에 의하여 비활성 다당체가 제거된 추출물이다.
상기 화장료 조성물은 항산화용인 것을 특징으로 한다. 또한, 상기 화장료 조성물은 피부 주름개선용인 것을 특징으로 한다. 또한, 상기 화장료 조성물은 피부 보습용인 것을 특징으로 한다. 또한. 상기 화장료 조성물은 피부 염증 개선용인 것을 특징으로 한다.
본 발명의 다른 목적을 달성하기 위하여 본 발명에 따르면, (A)정제수로 세척하고 건조시킨 강황 잎과 꽃잎의 혼합물을 분쇄하여 분말화하는 단계; (B)상기 강황 잎과 꽃잎의 혼합 분말을 60℃~150℃, 10분∼2시간 조건으로 증기로 찌는 단계; (C)상기 증기로 찐 분말을 음건하는 단계; 및 (D)탄소수 1-4의 저급 알코올 용매로 추출하는 단계를 포함하는 강황 잎과 꽃잎의 혼합추출물의 제조방법이 제공된다.
또한, (A)정제수로 세척하고 건조시킨 강황 잎과 꽃잎 혼합물을 분쇄하여 분말화하는 단계; (B)반응기에 상기 강황 잎과 꽃잎 혼합분말을 넣고 0.1~3.0%(v/v)되게 효소를 가하여 50~60℃ 조건에서 4~6일간 배양하는 단계; (C)배양이 완료된 강황 잎과 꽃잎 혼합 발효액을 원심분리하여 배양균을 제거한 후 여과하는 단계; 및 (D)여과액을 다시 3~5℃의 저온 창고에서 8~12일간 숙성시킨 후 여과하는 단계를 포함하는 강황 잎과 꽃잎의 혼합추출물의 제조방법이 제공된다. 이 때, 상기 효소로는 플라보자임(Flavourzyme), 수미자임(Sumizyme), 프로타멕스(Protamex), 알칼라제(Alcalase) 및 코지자임(Kojizyme)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 것이 사용될 수 있다.
또한, (A)정제수로 세척하고 건조시킨 강황 잎과 꽃잎 혼합물을 분쇄하여 분말화하는 단계; (B)건조된 강황 잎과 꽃잎 혼합물에 5~10배 중량의 용매를 가하여 100~120℃에서 열수 추출하는 단계; (C)얻어진 열수 추출액을 여과 및 회수한 후, 초기 부피의 1/20~1/5이 되도록 감압 농축하는 단계; (D)최종 농축액의 3~7배 부피의 에탄올을 가하여 침전반응이 생길 때까지 교반하는 단계; 및 (E)침전물을 여과하여 제거하는 단계를 포함하는 강황 잎과 꽃잎의 혼합추출물의 제조방법이 제공된다.
본 발명에 따른 강황 잎과 꽃잎의 혼합추출물은 자유라디칼 소거, 엘라스타아제 활성 억제, 콜라겐분해효소 활성 억제, Nitric Oxide (NO) radical 소거 효과가 우수하여, 항산화, 피부 주름개선 및 피부염증 개선용 화장료로 유용하게 사용될 수 있다. 또한 화장품 제조 원료의 수급면에서도 강황 뿌리보다는 강황 잎이나 꽃잎을 이용하는 것이 경제적으므로 화장료로 이용되기에 유용하다.
본 발명은 강황 잎과 꽃잎의 혼합추출물을 유효성분으로 함유하여 항산화, 피부주름 개선, 피부 염증 개선, 피부 보습 활성이 우수한 화장료 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 강황 잎과 꽃잎의 혼합추출물은 통상의 용매추출법에 따라 제조될 수 있다. 즉, 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올(예를 들면, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올), 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 디에틸에테르, 에틸 아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, 클로로포름, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 용매를 이용한 용매 추출법에 의해 제조될 수 있다.
그런데 본 발명의 강황 잎, 꽃잎 추출물은 하기와 같은 특정한 방법에 의하여 추출되는 경우 더욱 우수한 효과를 나타내었다. 그 일 구체예에 따르면, (A)정제수로 세척하고 건조시킨 강황 잎과 꽃잎 혼합물을 분쇄하여 분말화하는 단계; (B)상기 강황 잎, 꽃잎 또는 그 혼합 분말을 60℃~150℃, 10분∼2시간 조건으로 증기로 찌는 단계; (C)상기 증기로 찐 분말을 음건하는 단계; 및 (D)탄소수 1-4의 저급 알코올 용매로 추출하는 단계를 포함한다. 상기 방법은 약재를 찌는 방법으로 가공 처리함으로써 약재 본래의 성질을 변화시키는 제약 기술을 응용한 것으로서 상기 방법에 의하여 추출물을 제조하는 경우 더욱 우수한 효과를 나타내었다.
다른 구체예에 따르면, (A)정제수로 세척하고 건조시킨 강황 잎과 꽃잎 혼합물을 분쇄하여 분말화하는 단계; (B)반응기에 상기 강황 잎과 꽃잎 혼합분말을 넣고 0.1~3.0%(v/v)되게 효소를 가하여 50~60℃ 조건에서 4~6일간 배양하는 단계; (C)배양이 완료된 강황 잎과 꽃잎의 혼합 발효액을 원심분리하여 배양균을 제거 한 후 여과하는 단계; 및 (D)여과액을 다시 3~5℃의 저온 창고에서 8~12일간 숙성시킨 후 여과하는 단계를 포함하는 혼합추출물의 제조 방법이 제공된다. 이 때, 상기 효소로는 플라보자임(Flavourzyme), 수미자임(Sumizyme), 프로타멕스(Protamex), 알칼라제(Alcalase) 및 코지자임(Kojizyme)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 효소가 사용될 수 있다.
또 다른 구체예에 따르면, (A)정제수로 세척하고 건조시킨 강황 잎과 꽃잎 혼합물을 분쇄하여 분말화하는 단계; (B)건조된 강황 잎과 꽃잎 혼합물에 5~10배 중량의 용매를 가하여 100 ~ 120℃에서 열수 추출하는 단계; (C)얻어진 열수 추출액을 여과 및 회수한 후, 초기 부피의 1/20~1/5이 되도록 감압 농축하는 단계; (D)최종 농축액의 3~7배 부피의 에탄올을 가하여 침전반응이 생길 때까지 교반하는 단계; 및 (E)침전물을 여과하여 제거하는 단계를 포함하는 혼합추출물의 제조방법이 제공된다. 상기 방법을 통하여 비활성 다당체를 제거한 강황 잎과 꽃잎의 혼합추출물은 더욱 우수한 효과를 나타내었다.
본 발명의 강황 잎과 꽃잎 혼합추출물에는 상술한 추출 용매에 의한 추출물뿐만 아니라, 통상적인 정제 과정을 거친 추출물도 포함된다. 일정한 분자량 cut-off 값을 갖는 한외 여과막을 이용한 분리, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 활성 분획도 본 발명의 추출물에 포함된다.
또한 이산화탄소에 의한 초임계추출법에 의한 추출, 초음파를 이용한 추출법에 의한 추출물도 포함된다. 상기 이산화탄소에 의한 초임계추출법은 초임계 유체 추출법(supercritical fluid extraction)을 의미하는 것으로, 일반적으로 초임계 유체는 기체가 고온 고압 조건에서 임계점에 도달하였을 때 갖는 액체 및 기체의 성질을 지니고 있으며, 화학적으로 비극성 용매와 유사한 극성을 지니고 있으며 이러한 특성으로 인해 초임계 유체는 지용성 물질의 추출에 사용되고 있다(J. Chromatogr. A. 1998; 479:200-205). 이산화탄소는 초임계 유체기기의 작동으로 압력 및 온도가 임계점까지 이르는 과정을 거치면서 액체 및 기체 성질을 동시에 지닌 초임계 유체가 되고 그 결과 지용성 용질에 대한 용해도가 증가한다. 초임계 이산화탄소가 일정량의 시료를 함유한 추출 용기를 통과하게 되면 시료에 함유된 지용성 물질은 초임계 이산화탄소에 추출되어 나온다. 지용성 물질을 추출한 후 추출 용기에 남아있는 시료에 다시 소량의 공용매가 함유된 초임계 이산화탄소를 흘려 통과시키면 순수한 초임계 이산화탄소만으로는 추출되지 않았던 성분들이 추출되어 나오게 할 수 있다.
본 발명의 초임계추출법에 사용되는 초임계 유체는 초임계 이산화탄소 또는 이산화탄소에 추가적으로 공용매를 혼합한 혼합유체를 사용함으로써 효과적으로 유효 성분을 추출할 수 있다. 이러한 공용매는 클로로포름, 에탄올, 메탄올, 물, 에틸아세테이트, 헥산 및 디에틸에테르로 이루어진 군에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 사용할 수 있다. 추출된 시료는 대부분 이산화탄소를 함유하고 있는데 이산화탄소는 실온에서 공기 중으로 휘발되므로 상기 방법으로 얻은 추출물을 화장료 조성물로서 사용할 수 있으며, 공용매는 감압증발기로 제거할 수 있다.
또한 상기 초음파 추출법은 초음파 진동에 의해 발생되는 에너지를 이용하는 추출방법으로, 초음파가 수용성 용매 속에서 시료에 포함된 불용성인 용매를 파괴시킬 수 있으며, 이때 발생되는 높은 국부온도로 인하여 주위에 위치하는 반응물 입자들의 운동에너지를 크게 하기 때문에 반응에 필요한 충분한 에너지를 얻게 되고, 초음파 에너지의 충격효과로 높은 압력을 유도하여 시료에 함유된 물질과 용매의 혼합 효과를 높여주어 추출 효율을 증가시키게 된다. 초음파 추출법에 사용할 수 있는 추출용매는 클로로포름, 에탄올, 메탄올, 물, 에틸아세테이트, 헥산 및 디에틸에테르로 이루어진 군에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 사용할 수 있다. 추출된 시료는 진공 여과하여 여과액을 회수한 후 감압증발기로 제거하고, 동결 건조하는 통상의 추출물 제조방법을 통해 추출물을 얻을 수 있다.
또한, 미생물을 이용한 발효물도 본 발명의 강황 잎과 꽃잎 혼합추출물에 포함되며, 이때 이용할 수 있는 미생물은 효모, 유산균, 바실러스속 균 및 이의 혼합물로 이루어지는 균 중에서 선택되는 균으로 20 내지 40 ℃의 온도 조건 하에서 pH 5 내지 7을 유지하면서, 1 내지 7일간 발효시킨다.
본 발명의 강황 잎과 꽃잎의 혼합물을 발효시키는데 사용되는 효모는, 진핵미생물(핵과 세포질이 핵막에 의하여 나누어져 있는 생물)에 속하며, 세포벽, 세포막, 핵, 사립체, 과립 등 세포 소기관을 갖추고 있다. 성의 구별이 없는 이들은 주로 budding(출아법)으로 번식하는데, 분리된 많은 효모들 중에는 발효능이 없는 것, budding 대신 fission(분열) 혹은 bud-fission 방법으로 증식하는 것, 자낭포자(ascospore)가 아닌 사출포자(ballistospore)를 형성하거나 포자(spore)형성이 관찰되지 않는 것 등 다양한 그룹의 효모도 존재한다. 크기는 보통 5×5-12 ~ 10×5-12㎛로 세균의 5~10배 크기이며, 적정 pH는 4.5~5.5이나 1~10에서도 생존한다. pH 1에서 12시간 생존하는 효모는 박테리아보다 산에 강하므로 배지의 조건을 pH 3.5 내지 pH 3.8 정도로 맞추면 박테리아의 오염을 어느 정도 억제할 수 있다.
효모는 균종에 따라서 조금씩 차이가 있으나, 대부분 20~25℃에서 잘 자란다. 보통은 50℃이상에서는 사멸한다고 하지만, 그 온도 이상에서 합성이 되지않는 성장요소를 배지에 직접 첨가해 줌으로써 어느 정도는 극복이 가능하다. 사카로마이세스 세레비시애(Saccharomyces cerevisiae)의 경우 40℃이상에서 사멸하지만 배지에 올레산(oleic acid)와 에르고스테롤(ergosterol)을 첨가해 줌으로써 이를 방지할 수 있다. 효모 균체 자체는 단세포 식물로서 단백질과 미량광물질을 다량 함유하고 있다. 본 발명의 강황 잎과 꽃잎을 발효시키는데 사용하기에 바람직한 효모는 사카로마이세스 세레비시애이다.
또한 본 발명에서 강황 잎, 꽃잎을 발효시키는데 사용된 발효균으로서의 유산균은, 포도당 또는 유당과 같은 탄수화물을 분해하여 유산(젖산)이나 초산과 같은 유기산을 생성하는 인체에 매우 유익한 미생물의 일종이다. 본 발명에서 사용될 수 있는 유산균은 바람직하게는 락토바실러스, 스트렙토코커스, 비피도 박테리움, 류코노스톡, 페디오 코커스, 락토 코커스 및 이들의 혼합물을 포함하며, 가장 바람직하게는 락토바실러스(Lactobacillus)이다. 락토바실러스 중에서도 본 발명의 강황 잎과 꽃잎을 발효시키는데 가장 바람직한 유산균은 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum)이다.
또한 본 발명에서 강황 잎, 꽃잎을 발효시키는데 사용된 발효균으로 바실러스(Bacillus)균을 사용할 수 있으며, 바실러스는 포자 형성균으로, 토양이나 물속에 서식하며 대부분 유기물 분해와 관련되어 있다. 본 발명에서 사용될 수 있는 바실러스는 바람직하게는 바실러스 서브틸리스, 바실러스 푸밀리스, 바실러스 리케니포미스, 바실러스 메가테리움, 바실러스 폴리퍼멘티커스, 바실러스 메센테리커스 및 이들의 혼합물을 포함하며, 가장 바람직하게는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)로서 이 균은 고초균으로도 알려져 있는데, 포도당과 같은 다양한 당류, 전분 등을 혐기적으로 대사하여, 메주나 청국장과 같은 발효 식품 제조에 이용되기도 하는 유기물 분해 미생물이다.
또한, 본 발명의 강황 잎과 꽃잎의 혼합추출물에는 플라보자임(Flavourzyme), 수미자임(Sumizyme), 프로타멕스(Protamex), 알칼라제(Alcalase), 코지자임(Kojizyme)과 같은 효소용매를 이용하여 추출한 것도 포함된다.
또한, 본 발명의 강황 잎과 꽃잎의 혼합추출물은 포제법을 이용하여 얻어낸 추출물도 포함한다. 포제란 한방이론에 근거하여 약재를 가공 처리함으로써 약재 본래의 성질을 변화시키는 제약 기술이다. 주로 찌거나, 삶거나, 불에 볶거나, 불에 굽거나 달구는 공정 또는 이들이 혼합된 공정의 방법을 말한다. 처리 조건은 삶는 경우 온도 60 내지 100℃, 30분 내지 6시간이고, 찌는 경우 120 내지 180℃, 10분 내지 2시간이고, 굽는 경우 80 내지 100℃, 10분 내지 2시간에서 용이하게 선정한다. 본 발명의 일 구체예에 따르면 강황 잎과 꽃잎을 쪄서 건조시킨 후 추출물을 제조하였다. 강황 잎과 꽃잎을 쪄서 건조시키는 포제법을 이용하여 추출한 후 용매 추출법 뿐만 아니라, 이산화탄소에 의한 감압 및 고온에 의한 초임계 추출법 또는 초음파 추출법에 의한 추출 방법으로 추출할 수 있으며, 본 발명의 실시예에서는 70% 에탄올을 이용하여 추출물을 제조하여 실험에 사용하였다.
상기의 방법에 의하여 제조된 강황 잎과 꽃잎의 혼합추출물은 종래의 강황 잎 추출물과 비교해 볼 때, 더욱 우수한 항산화 효과(시험예 2), 엘라스타아제 활성 억제 효과(시험예 3), MMP-1 생성 억제 효과(시험예 4), 자외선 유도에 의한 MMP-1 생성 억제 효과(시험예 5), 멜라닌 생성 억제 효과(시험예 6), 자외선 유도에 의한 세포독성 완화 효과(시험예 7), 염증성 사이토카인 발현 억제 효과(시험예 8), 종양괴사인자알파 및 사이클로옥시게나제-2의 생합성 억제효과(시험예 9), 피부주름 개선 효과(시험예 10), 피부탄력 개선 효과(시험예 11), 보습 효과(시험예 12)를 나타내었다. 이때, 상기 강황 잎과 꽃잎의 혼합추출물은 강황 잎과 꽃잎을 동일 중량비로 혼합하여 추출하는 경우에 가장 우수한 활성을 나타내었다.
본 발명의 화장료 조성물은 상기의 방법에 의하여 제조된 강황 잎과 꽃잎의 혼합추출물을 화장료 조성물의 전체 중량에 대하여 0.01 ~ 20.0%(w/w), 더욱 바람직하게는 0.01 ~ 5.0 중량% 함유한다. 상기 추출물의 함량이 0.01 중량% 미만인 경우에는 피부 개선 효과가 나타나지 않으며, 20.0 중량%를 초과하는 경우에는 함유량 증가에 대한 피부 개선 효과 증대 정도가 미미하며, 제형상의 안전 및 안정성에 문제가 있으며 경제적이지도 못하다.
우수한 활성을 가지는 강황 잎, 꽃잎 추출물을 포함하는 본 발명의 화장료 조성물은 항산화용, 피부노화 방지용, 자외선에 의한 피부 손상완화 및 자극완화용, 피부주름 개선 및 피부탄력 개선용 화장료로 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 상기 유효성분 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다. 본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.
[실시예]
이하, 실시예 및 시험예를 통하여 본 발명을 상세히 설명한다
실시예 1 ~ 14: 강황 잎과 꽃잎 용매 추출물의 제조
강황 잎, 꽃잎 및 그 혼합물(잎:꽃잎=1:1)을 분쇄한 조분쇄 분말 200g을취하여 물과 에탄올의 비율을 7:3으로 조정한 70% 에탄올 1000㎖를 가하여 110℃, 6시간동안 고온고압 추출조건에서 추출하였다. 이를 여과하고 여액을 진공 농축하여 건조 추출물을 얻었으며, 추출 수율은 각각 25.4g/1000g, 20.7g/1000g, 23.4g/1000g 이었다. 상기 건조 추출물을 1%(w/v) 농도가 되도록 50% 1,3-부틸렌글리콜 용액으로 용해하고 여과한 후 본 발명의 실험에 적용하였다.
또한 하기 표 1과 같이 추출용매를 달리하여 상기 실시예 1과 같은 방법으로 강황 잎, 꽃잎 및 그 혼합물(잎:꽃잎=1:1)을 각각 추출하여 추출물을 얻었으며(실시예 2~14), 하기 표 1에 강황 잎, 꽃잎 및 그 혼합물 1kg으로부터 얻은 추출물의 무게를 나타내었다.
실시예 15 ~ 16: 강황 잎, 꽃잎 초임계 및 초음파 추출물의 제조
통상적인 초임계 추출법, 초음파 추출법을 통해 강황 잎, 꽃잎 및 그 혼합물(잎:꽃잎=1:1)의 추출물을 얻었다. 공용매로 올리브유를 사용하였으며 액상이며, 그 결과는 하기 표 1과 같다.
(g) 추출 용매 강황 잎 추출물 강황 꽃잎 추출물 강황 잎과 꽃잎 혼합추출물
실시예 2 정제수 12.2 9.8 10.8
실시예 3 25% 에탄올 21.1 17.2 19.4
실시예 4 50% 에탄올 22.1 18.4 21.5
실시예 5 100% 에탄올 21.0 17.5 20.6
실시예 6 80% 메탄올 19.8 15.2 18.3
실시예 7 100% 메탄올 21.3 17.7 19.7
실시예 8 아세톤 18.4 16.0 17.1
실시예 9 디에틸에테르 16.9 12.1 15.4
실시예 10 헥산 12.3 10.9 11.9
실시예 11 노말-프로판올 16.9 13.5 14.7
실시예 12 이소프로판올 16.4 13.4 14.6
실시예 13 노말-부탄올 17.6 14.8 15.8
실시예 14 에틸아세테이트 18.4 13.8 17.8
실시예 15 초임계 추출 48.0 35.8 47.2
실시예 16 초음파 추출 20.3 19.1 19.3
실시예 17: 강황 잎과 꽃잎의 발효추출물 제조
정제수로 세척하고 건조시킨 강황 잎, 꽃잎 및 그 혼합물(잎:꽃잎 = 1:1)을 각각 분말화한 후 300메시를 이용하여 미세하게 만들었다. 이것을 10g/L되게 효모 배양액(Potato Dextrose Broth, Acumedia, USA)에 첨가하였다. 발효에 사용한 효모 균주는 사카로마이세스 세레비시애(Saccharomyces cerevisiae)를 사용하였으며, 배양액 당 50,000 cfu/L로 첨가하였다. 배양은 5L 발효조를 이용하여 5~7일간, 30℃, pH 5∼7로 유지하며 배양하였다. 배양이 완료된 강황 잎, 꽃잎 및 그 혼합물의 발효액을 원심분리하여 배양균을 1차 제거 한 후 0.25μM 여과지를 이용하여 최종 여과하였다. 이렇게 얻은 여과액을 다시 4℃의 저온 창고에서 약 10일간 숙성시킨 후 이 여과 숙성액을 다시 0.25μM의 여과기를 이용하여 여과하여 본 발명에 사용하였으며, 편의상 이 발효 여과액을 강황 잎, 꽃잎 및 혼합물의 발효추출물이라 칭하였다. 또한, 이 방법에 의한 추출 수율은 각각 274.2g/1kg, 254.5g/1Kg, 267.8g/1kg이었다. 이하 실험에 사용된 강황 잎, 꽃잎 및 그 혼합물의 발효추출물은 최종농도가 1g/100mL가 되게 유지하여 사용하였다.
실시예 18: 강황 잎, 꽃잎 유산균 발효 추출물의 제조
정제수로 세척하고 건조시킨 강황 잎, 꽃잎 및 그 혼합물(잎:꽃잎 = 1:1)을 분말화한 후 300메시를 이용하여 미세하게 만들었다. 이것을 10g/L되게 유산균 배양배지(Lactobacillus MRS Broth, Difco, USA)에 첨가하여 혼합한 후 121℃에서 멸균시킨 뒤 유산균을 접종하였다.
발효에 사용한 유산균주는 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum)을 사용하였으며, 배양액 당 50,000 cfu/L로 첨가하였다. 배양은 5L 발효조를 이용하여 3일간, 30℃, pH 5∼7로 유지하며 배양하였다. 배양이 완료된 강황 잎, 꽃잎 및 그 혼합물의 발효액을 원심분리하여 배양균을 1차 제거한 후 0.25μM 여과지를 이용하여 최종여과 하였다. 이렇게 얻은 여과액을 다시 4℃의 저온 창고에서 약 10일간 숙성시킨 후 이 여과 숙성액을 다시 0.25μM의 여과지를 이용하여 여과하여 본 발명에 사용하였으며, 편의상 이 발효 여과액을 강황 잎, 꽃잎 및 그 혼합물의 유산균 발효추출물이라 칭하였다. 또한, 이 방법에 의한 추출 수율은 각각 274.5g/1kg, 257.3g/1kg, 261.9g/1kg이었다. 이하 실험에 사용된 강황 잎, 꽃잎 및 그 혼합물의 유산균 발효추출물은 최종농도가 1g/100mL가 되게 유지하여 사용하였다.
실시예 19: 강황 잎, 꽃잎 바실러스균 발효 추출물의 제조
정제수로 세척하고 건조시킨 강황 잎, 꽃잎 및 그 혼합물(잎:꽃잎 = 1:1)을 분말화한 후 300메시를 이용하여 미세하게 만들었다. 이것을 10g/L되게 바실러스 배양배지에 첨가하였다.
발효에 사용한 바실러스 균주는 바실러스 서브틸리스(고초균;Bacillus subtilis)를 사용하였으며, 배양액 당 50,000 cfu/L로 첨가하였다. 배양은 5L 발효조를 이용하여 3일간, 30℃, pH 5∼7로 유지하며 배양하였다. 배양이 완료된 강황 잎, 꽃잎 및 그 혼합물의 발효액을 원심분리하여 배양균을 1차 제거한 후 0.25 μM 여과지를 이용하여 최종여과 하였다. 이렇게 얻은 여과액을 다시 4℃의 저온 창고에서 약 10일간 숙성시킨 후 이 여과 숙성액을 다시 0.25μM의 여과기를 이용하여 여과하여 본 발명에 사용하였으며, 편의상 이 발효 여과액을 강황 잎, 꽃잎 및 그 혼합물의 바실러스 발효추출물이라 칭하였다. 또한, 이 방법에 의한 추출 수율은 각 각 238.2g/1kg, 201.9g/1kg, 221.5g/1kg이었다. 이하 실험에 사용된 강황 잎, 꽃잎 및 그 혼합물의 바실러스 발효추출물은 최종농도 1g/100mL가 되게 유지하여 사용하였다
실시예 20: 강황 잎, 꽃잎 비활성 다당체 제거 추출물의 제조
정제수로 세척하고 건조시킨 강황 잎, 꽃잎 및 그 혼합물(1:1)을 분쇄하여 분말화한 후 300메시 시브를 이용하여 미세하게 만든 뒤, 분쇄한 조분쇄 분말 200g에 10배 중량의 물 용매를 가하여 110℃, 6시간동안 고온고압 추출조건에서 추출하였다. 얻어진 열수 추출액을 여과 및 회수한 후, 초기 부피의 1/5이 되도록 감압 농축하였다. 최종 농축액의 3배, 5배, 7배 부피의 에탄올을 가하여 침전반응이 생길 때까지 교반하는 단계를 거쳐 가라앉은 침전물을 여과하여 제거하였다. 이렇게 얻은 여액을 진공 농축하여 건조 추출물을 얻었으며, 각 에탄올 처리 농도에 의한 추출 수율은 하기 표 2와 같다.
편의상 이 여과액을 강황 잎, 꽃잎 및 그 혼합물의 비활성 다당체 제거 추출물이라 칭하였다. 이하 실험에 사용된 강황 잎, 꽃잎 및 그 혼합물의 비활성 다당체 제거 추출물은 최종농도 1g/100mL가 되게 유지하여 사용하였다.
강황 잎 1kg으로 부터 얻은 추출물의 무게(g) 강황 꽃잎 1kg으로 부터 얻은 추출물의 무게(g) 강황 잎, 꽃잎 혼합물(1:1) 1kg으로 부터 얻은 추출물의 무게(g)
실시예 20-1
(3배 에탄올)		 27.9 14.8 24.8
실시예 20-2
(5배 에탄올)		 24.3 12.3 19.3
실시예 20-3
(7배 에탄올)		 17.4 11.9 16.9
시험예 1: 비활성 다당체 제거 추출법에 의한 추출물의 활성시험
상기 실시예 20에서 각 에탄올 혼합비율에 따라 제조된 추출물에 대하여 아래의 활성시험을 수행하였다.
1.DPPH법을 이용한 항산화 효과 측정
상기 실시예 20에서 수득한 강황 잎, 꽃잎 및 그 혼합물의 추출물의 항산화 효과를 측정하기 위해, 항산화 효과가 있는 것으로 알려진 물질인 비타민 C를 비교군으로 하여 DPPH법을 이용하여 항산화 효과(자유라디칼 소거율)를 측정하였다. 96공 평판배양기에 Ethanol에 용해한 DPPH 용액 100ul(0.4mM)과 상기 실시예에서 얻은 9가지 강황 잎, 꽃잎 및 혼합물(잎:꽃잎 = 1:1) 추출물을 0.01%~0.5%의 농도로 동량의 시료를 가하여 37℃에서 30분간 반응시켰다. 반응 후 560nm에서 ELISA 방법으로 흡광도를 측정하여 DPPH radical 소거활성을 측정하였다. 양성 대조군으로 비타민 C를 사용하였다.
자유라디칼 소거율(%)의 결과는 하기 식에 의하여 산출하였으며, 결과는 하기의 표 3과 같다.
Figure 112018095927971-pat00001
St : 시료용액의 자유라디칼 소거 후의 560nm에서의 흡광도
Bt : 공시험용액의 자유라디칼 소거 후의 560nm에서의 흡광도
So : 시료용액의 자유라디칼 무첨가시 반응 전의 560nm에서의 흡광도
Bo : 공시험용액의 자유라디칼 무첨가시 반응 전의 560nm에서의 흡광도
처리농도
(%, v/v)		 강황 잎 강황 꽃잎 혼합물
(잎:꽃잎 = 1:1)
실시예 20-1 0.01 67.4 52.1 67.8
0.1 81.6 68.5 78.3
0.5 90.2 70.1 87.2
실시예 20-2 0.01 85.5 72.3 84.9
0.1 89.6 77.5 91.5
0.5 90.7 78.2 92.8
실시예 20-3 0.01 72.4 40.4 77.4
0.1 85.3 52.5 87.6
0.5 90.1 60.8 91.7
vitamin C 0.01 89.7
2. 세포재생 효과
24공 평판배양기에 Hacat keratinocyte(German Cancer Research Institute, Germany)를 2×105 cells/well의 농도로 배양한 다음, 24시간동안 10% FBS 첨가 배지 조건하에 안정화시킨 뒤, 무혈청 배지로 교환 후, 강황 잎, 꽃잎 및 혼합물(잎:꽃잎 = 1:1) 추출물들의 시료를 1.0%(v/v) 되게 처리하여 3일 배양하였다. 배양 후 세포생성 효과를 보기 위해 MTT assay법을 이용하여 세포의 생성 정도를 비교 평가하였으며, 양성 대조군으로 TGF-β(10ng/mL)을 적용하였고 음성 대조군으로는 시료를 처리하지 않은 결과를 나타내며, 전체 결과는 하기 표 4에 나타내었다.
처리농도
(%, v/v)		 강황 잎 강황 꽃잎 혼합물
(잎:꽃잎 = 1:1)
실시예 20-1 0.01 1.545 1.045 1.620
0.1 1.699 1.198 1.890
0.5 1.791 1.291 1.954
실시예 20-2 0.01 1.686 1.146 1.768
0.1 1.877 1.197 1.932
0.5 1.944 1.224 2.120
실시예 20-3 0.01 1.482 1.082 1.635
0.1 1.783 1.183 1.810
0.5 1.882 1.282 1.910
양성 대조군
TGF-β(10ng/ml)		 10ng/ml 1.398
음성 대조군 0.0 0.918
위와 같은 실험 결과를 바탕으로 가장 효과가 우수하게 나타나는 비활성 다당체가 제거된 강황 잎, 꽃잎 및 혼합물(잎:꽃잎=1:1) 추출물(실시예 20-2)을 이하 실험에 최종농도가 1g/100mL가 되게 유지하여 사용하였다.
시험예 2: DPPH법을 이용한 항산화 효과 측정
상기 실시예에서 수득한 강황 잎, 꽃잎 및 그 혼합물(잎:꽃잎=1:1) 추출물의 항산화 효과를 측정하기 위해, 항산화 효과가 있는 것으로 알려진 물질인 비타민 C를 비교군으로 하여 DPPH법을 이용하여 항산화 효과(자유라디칼 소거율)를 측정하였다. 96공 평판배양기에 Ethanol에 용해한 DPPH 용액 100ul(0.4mM)과 상기 실시예에서 얻은 추출물을 0.1%의 농도로 동량의 시료를 가하여 37℃에서 30분간 반응하였다. 반응 후 560nm에서 ELISA 방법으로 흡광도를 측정하여 DPPH radical 소거활성을 측정하였다. 양성 대조군으로 비타민 C를 사용하였다.
자유라디칼 소거율(%)의 결과는 하기 식에 의하여 산출하였으며, 결과는 하기의 표 5와 같다.
Figure 112018095927971-pat00002
St : 시료용액의 자유라디칼 소거 후의 560nm에서의 흡광도
Bt : 공시험용액의 자유라디칼 소거 후의 560nm에서의 흡광도
So : 시료용액의 자유라디칼 무첨가시 반응 전의 560nm에서의 흡광도
Bo : 공시험용액의 자유라디칼 무첨가시 반응 전의 560nm에서의 흡광도
시료명 처리 농도
(%, w/v)		 항산화효과(%)
강황 잎 추출물(실시예 1) 0.1 85.2
강황 잎 추출물(실시예 15) 0.1 88.8
강황 잎 추출물(실시예 20-2) 0.1 90.5
강황 꽃잎 추출물(실시예 1) 0.1 75.2
강황 꽃잎 추출물(실시예 15) 0.1 78.8
강황 꽃잎 추출물(실시예 20-2) 0.1 83.5
강황 잎, 꽃잎 혼합물(1:1)(실시예 1) 0.1 89.9
강황 잎, 꽃잎 혼합물(1:1)(실시예 15) 0.1 91.1
강황 잎, 꽃잎 혼합물(1:1)(실시예 20-2) 0.1 92.4
vitamin-C 0.01 91.3
상기 표 5에서 확인되는 바와 같이 강황 잎에 꽃잎을 혼합하여 추출한 혼합추출물은 0.1% 농도에서 강황 잎 및 꽃잎 추출물에 비해 항산화 효과가 훨씬 우수한 것으로 나타났고, 항산화 효과가 있는 것으로 알려진 물질인 비타민 C와 비교해도 우수한 항산화 효과를 갖고 있음이 확인되었다. 그 중에서도 비활성 다당체 제거법에 의한 실시예 20-2의 효과가 가장 우수하였다.
시험예 3: 엘라스타아제 활성 억제 효능 측정
상기 실시예에서 수득한 강황 잎, 꽃잎 및 그 혼합물(잎:꽃잎=1:1)의 추출물의 엘라스타아제 활성 저해능을 EGCG와 비교하여 측정하였다. 사용된 엘라스타아제와 기질은 미국 시그마알드리치사로부터 상업적으로 구매하여 측정하였다.
96공 평판배양기에 10mg/L Tris-HCL 완충액(pH 8.0)으로 조제한 것에 하기 표 6에 나타낸 시험물질 50μL 및 20㎍/mL 엘라스타아제·타입 III 용액 50μL를 혼합하였다. EGCG 250μM 은 양성 대조군으로 사용하였으며 음성대조군인 비처리군은 증류수를 사용하였다. 그 후, 상기 완충액으로 조제한 0.4514㎎/mL N-SUCCINYL-ALA-ALAALA-p-NITROANILIDE 100μL를 첨가하고, 25℃에서 15분 반응시켰다. 반응종료 후, 파장 415㎚에 있어서의 흡광도를 측정하였다. 동일한 방법으로 공시험을 행하여 보정하였다.
엘라스타아제 활성 저해작용(%)의 결과는 하기 식에 의하여 산출하였으며, 결과는 하기의 표 6과 같다.
엘라스타아제 활성 저해율(%) = 〔1-(C-D)/(A-B)〕× 100
A: 실험시료 무첨가, 효소 첨가에서의 파장 415 ㎚에 있어서의 흡광도
B: 실험시료 무첨가, 효소 무첨가에서의 파장 415 ㎚에 있어서의 흡광도
C: 실험시료 첨가, 효소 첨가에서의 파장 415 ㎚에 있어서의 흡광도
D: 실험시료 첨가, 효소 무첨가에서의 파장 415 ㎚에 있어서의 흡광도
시료명 처리 농도
(%, w/v)		 엘라스타아제 활성 억제 효과(%)
강황 잎 추출물(실시예 1) 0.1 33.2
강황 잎 추출물(실시예 15) 0.1 43.8
강황 잎 추출물(실시예 20-2) 0.1 50.5
강황 꽃잎 추출물(실시예 1) 0.1 25.2
강황 꽃잎 추출물(실시예 15) 0.1 38.8
강황 꽃잎 추출물(실시예 20-2) 0.1 43.5
강황 잎, 꽃잎 혼합물(1:1)(실시예 1) 0.1 59.9
강황 잎, 꽃잎 혼합물(1:1)(실시예 15) 0.1 60.1
강황 잎, 꽃잎 혼합물(1:1)(실시예 20-2) 0.1 62.4
양성대조군 EGCG 10ng 59.0
음성대조군 - 0
상기 표 6에서 확인되는 바와 같이 강황 잎과 꽃잎 혼합물(1:1)의 추출물은 0.1% 농도에서 각각의 강황 잎 및 꽃잎 추출물에 비해 엘라스타아제 활성 억제 효과가 훨씬 우수한 것으로 나타났고, 엘라스타아제 활성 억제제로 알려져 있는 EGCG의 효과보다 탁월한 엘라스타아제 활성 억제 효과를 갖고 있음이 확인되었다. 그 중에서도 비활성 다당체 제거법에 의한 실시예 20-2의 효과가 더욱 우수하였다.
시험예 4: MMP-1 생성 억제 효과
상기 실시예에서 얻은 강황 잎, 꽃잎 및 그 혼합물(잎:꽃잎=1:1)의 추출물이 콜라겐 분해효소인 MMP-1(matrix metalloproteinase I) 생성을 억제하는 효과가 있는지의 여부를 측정하기 위해, MMP-1의 생성을 억제하는 효과가 있는 것으로 알려진 물질인 비타민 C(20 ㎍/ml)를 비교군으로 하여 MMP-1의 생성을 억제하는 효과를 측정하였다.
인간 정상 섬유아세포를 48공 평판배양기에 1×106 cells/well의 농도로 배양한 다음, 24시간동안 10% FBS 첨가 배지 조건하에 안정화시킨 뒤, 무혈청 배지로 교환 후, 강황 잎, 꽃잎 및 그 혼합물(잎:꽃잎=1:1) 추출물들의 시료를 최종 농도 100 ㎍/㎖ 되게 처리하여 48시간동안 배양하였다. 대조군은 상기 강황 잎, 꽃잎 추출물을 포함하지 않는 무혈청 배지에서 동 시간 배양한 조건으로 하였다. 배양 후, 각 평판기의 상층액을 모아 MMP-1 분석 Kit(Amersham, USA)를 이용하여 합성된 MMP-1의 양(ng/㎖)을 측정하고, 하기 식에 따라 MMP-1 생성 억제율(%)을 계산하였으며, 그 결과를 표 7에 나타내었다.
Figure 112018095927971-pat00003
시료명 MMP-1 생성 억제율(%)
강황 잎 추출물(실시예 1) 79.5
강황 잎 추출물(실시예 15) 85.6
강황 잎 추출물(실시예 20-2) 88.2
강황 꽃잎 추출물(실시예 1) 59.5
강황 꽃잎 추출물(실시예 15) 70.6
강황 꽃잎 추출물(실시예 20-2) 73.2
강황 잎, 꽃잎 혼합물(1:1)(실시예 1) 88.2
강황 잎, 꽃잎 혼합물(1:1)(실시예 15) 91.3
강황 잎, 꽃잎 혼합물(1:1)(실시예 20-2) 94.8
양성 대조군 비타민 C (20 ㎍/ml) 75.9
상기 표 7의 결과에서와 같이, 본 발명의 강황 잎과 꽃잎의 혼합추출물은 동일한 100㎍/㎖ 농도에서 강황 잎 및 꽃잎 추출물과 비교하였을 때, MMP-1 생성 억제율이 훨씬 더 우수한 것으로 나타났다. 그 중에서도 비활성 다당체 제거법에 의한 강황 잎과 꽃잎 혼합추출물(실시예 20-2)의 억제율은 94.8%로 나타났으며, MMP-1 생성 억제효과가 있는 것으로 알려진 물질인 비타민 C(20 ㎍/ml)와 본 발명의 강황 잎, 꽃잎 혼합물(1:1) 추출물의 실험 농도(100㎍/㎖) 차이를 감안해도 MMP-1 생성 억제 효과가 있다는 것을 나타내었다.
시험예 5: 자외선 유도에 의한 MMP-1 생성 억제 효과
MMP-1은 자외선에 의해 그 양이 증가되는 것으로 알려져 있으며, 본 발명의 강황 잎, 꽃잎 및 그 혼합물(잎:꽃잎=1:1) 추출물이 자외선에 의해 생성이 증가되는 MMP-1의 양을 억제하는지를 알아보고자 실험을 실시하였다. 자외선 유도에 의한 MMP-1 생성 억제 효과 측정은 시료 처리에 앞서 UV-B(40mJ/cm2)를 일정량 처리하는 것을 제외하고는 상기 시험예 4와 동일하게 실시하였다.
강황 잎, 꽃잎 및 그 혼합물(잎:꽃잎=1:1)의 추출물의 MMP-1 생성 억제율(%)은 상기 시험예 4의 식에 따라 계산하였으며, 그 결과를 하기 표 8에 나타내었다. 이때, MMP-1 생성 억제 효과가 있는 것으로 알려진 물질인 비타민 C (20 ㎍/ml)을 비교군으로 사용하였고, 강황 잎, 꽃잎 및 그 혼합물의 추출물은 0.1%(w/v) 농도로 실험을 실시하였다.
시료명 MMP-1 생성 억제율(%)
강황 잎 추출물(실시예 1) 65.5
강황 잎 추출물(실시예 15) 70.3
강황 잎 추출물(실시예 20-2) 82.8
강황 꽃잎 추출물(실시예 1) 40.1
강황 꽃잎 추출물(실시예 15) 51.6
강황 꽃잎 추출물(실시예 20-2) 62.7
강황 잎, 꽃잎 혼합물(1:1)(실시예 1) 80.1
강황 잎, 꽃잎 혼합물(1:1)(실시예 15) 85.6
강황 잎, 꽃잎 혼합물(1:1)(실시예 20-2) 92.7
양성 대조군 비타민 C (20 ㎍/ml) 62.8
배양된 섬유아세포에 UV-B를 조사 후 강황 잎, 꽃잎 및 그 혼합물(잎:꽃잎=1:1) 추출물 및 TGF-β가 첨가된 배양액에 분비된 콜라겐 분해효소 MMP-1의 양을 측정한 결과를 상기 표 8에 나타내었다. 본 발명의 강황 잎, 꽃잎 혼합물(잎:꽃잎=1:1) 추출물은 동일한 100㎍/㎖ 농도에서 강황 잎, 꽃잎 추출물과 비교하였을 때, MMP-1 생성 억제율이 더 우수한 것으로 나타났다. 특히 비활성 다당체 제거법에 의한 강황 잎과 꽃잎 혼합추출물(실시예 20-2)이 92.7%의 억제율을 나타냈다. MMP-1 생성 억제효과가 있는 것으로 알려진 물질인 비타민 C의 농도(20 ㎍/ml)와 본 발명의 강황 잎, 꽃잎 혼합물(잎:꽃잎=1:1) 농도 차이를 감안해도, 본 발명의 강황 잎, 꽃잎 혼합물(잎:꽃잎=1:1)는 MMP-1 생성 억제 효과가 있다는 것을 보여준다.
시험예 6: B16F10 멜라닌형성세포에 대한 멜라닌 생성 억제효과
상기 실시예에서 수득한 강황 잎, 꽃잎 및 그 혼합물(잎:꽃잎=1:1) 추출물의 미백 효과를 확인하기 위해서 B16F10 멜라닌 형성 세포를 이용하여 멜라닌 생성 억제 정도를 알아보고자 실험을 실시하였다.
B16F10 마우스 유래 멜라닌 형성 세포를 6공 평판배양기에 2 × 106개의 농도로 배양한 다음, 독성을 유발하지 않는 농도로 강황 잎, 꽃잎 및 그 혼합물(잎:꽃잎=1:1) 추출물을 처리하여 72시간 동안 배양하였다. 배양 후, 세포를 회수하여, 세포 내 멜라닌을 로탄법(Lotan: Cancer Res., 40: 3345-3350, 1980)을 변형하여 정량하였다. 회수한 세포를 PBS로 세척 후, 균질화 용액을 첨가하여 5분간 와류한 후, 원심분리하고 세포 여액에 NaOH를 첨가하여 405nm에서 흡광도를 측정하여 멜라닌을 정량하고 멜라닌 생성 저해율(%)을 측정하였다.
B16F1 멜라닌 형성 세포의 멜라닌 생성 저해율(%)은 하기 식에 의하여 계산하였으며, 그 결과를 표 9에 나타내었다. 이때 멜라닌 생성 저해 효과가 있는 것으로 알려진 물질인 알부틴을 비교군으로 사용하였다.
Figure 112018095927971-pat00004
A : 시료를 첨가하지 않은 웰의 멜라닌 양
B : 시료를 첨가한 웰의 멜라닌 양
시료명 처리농도
(%, w/v)		 멜라닌 생성 저해율(%)
강황 잎 추출물(실시예 1) 0.1 41.2
강황 잎 추출물(실시예 15) 0.1 59.4
강황 잎 추출물(실시예 20-2) 0.1 62.9
강황 꽃잎 추출물(실시예 1) 0.1 2.04
강황 꽃잎 추출물(실시예 15) 0.1 28.1
강황 꽃잎 추출물(실시예 20-2) 0.1 33.6
강황 잎, 꽃잎 혼합물(1:1)(실시예 1) 0.1 55.8
강황 잎, 꽃잎 혼합물(1:1)(실시예 15) 0.1 61.5
강황 잎, 꽃잎 혼합물(1:1)(실시예 20-2) 0.1 68.9
알부틴 1.0 46.7
상기 표 9의 결과에서 알 수 있듯이, 본 발명의 강황 잎에 꽃잎을 동일중량비로 혼합하여 추출한 혼합추출물은 각각의 강황 잎, 꽃잎 추출물보다 B16F10 멜라닌 형성 세포에서 멜라닌 생성을 더욱 저해하는 것을 알 수 있다. 특히 강황 잎, 꽃잎 혼합물(1:1)의 비활성 다당체 제거법에 의한 추출물(실시예 20-2)은 0.1% 농도에서 멜라닌 생성 저해율 값이 68.9%로 나타났으며, 동일한 농도에서 기존의 미백 효과가 있는 것으로 알려진 물질인 알부틴과 비교했을 때, 우수한 멜라닌 생성 저해효과를 나타내었다. 따라서 본 발명의 강황 잎, 꽃잎 혼합물(1:1) 추출물을 포함하는 화장료 조성물은 멜라닌 생성 억제에 우수한 효과가 있음을 알 수 있다.
시험예 7: 자외선 조사에 의한 세포 독성 완화 효과
상기 실시예에서 수득한 강황 잎, 꽃잎 및 그 혼합물(잎:꽃잎=1:1)의 추출물의 자외선 조사에 의한 세포 독성의 완화 효과를 평가하기 위하여 실험하였다. 인간 정상 섬유아세포를 24공 평판배양기에 5×104 cells/well의 농도로 배양한 다음, 24시간동안 10% FBS 첨가 배지 조건하에 안정화시킨 뒤, 배양액을 제거하고 PBS 조건하에서 UV-B(10mJ/cm2) 조사한 후 PBS를 제거하고 세포 배양 배지(FBS가 첨가된 것)로 교체하였다. 여기에 강황 잎, 꽃잎 및 그 혼합물의 추출물을 처리한 후 24 시간 동안 배양하였다. 배양 후 세포 독성 완화 효과를 보기 위해 MTT assay을 이용하여 세포의 생성 정도를 비교 평가하였으며, 양성 대조군으로 TGF-β(10ng/mL)을 적용하였으며 그 결과는 하기 표 10에 나타내었다. 하기 식에 의해 세포 생존율(%)을 측정하고, 자외선 조사에 의한 세포 독성 완화율(%)을 계산하였다.
Figure 112018095927971-pat00005
Bo: 세포배양배지 만을 발색 반응한 웰의 565 nm 흡광도
Bt: 시료를 처리하지 않은 웰을 발색 반응한 웰의 565 nm 흡광도
St: 시료를 처리한 웰을 발색 반응한 웰의 565 nm 흡광도
Figure 112018095927971-pat00006
Bo: 자외선 조사하지 않고 시료 처리하지 않은 웰의 세포 생존율
Bt: 자외선 조사하고 시료를 처리하지 않은 웰의 세포생존율
St: 자외선 조사하고 시료를 처리한 웰의 세포생존율
시료명 처리 농도(%, w/v) 세포 독성 완화율(%)
강황 잎 추출물
(실시예 1)		 0.01 70
0.1 75
0.5 79
강황 잎 추출물
(실시예 15)		 0.01 75
0.1 80
0.5 87
강황 잎 추출물
(실시예 20-2)		 0.01 74
0.1 87
0.5 91
강황 꽃잎 추출물
(실시예 1)		 0.01 52
0.1 55
0.5 59
강황 꽃잎 추출물
(실시예 15)		 0.01 55
0.1 60
0.5 67
강황 꽃잎 추출물
(실시예 20-2)		 0.01 64
0.1 77
0.5 81
강황 잎, 꽃잎 혼합물(1:1)
(실시예 1)		 0.01 72
0.1 85
0.5 94
강황 잎, 꽃잎 혼합(1:1)
(실시예 15)		 0.01 70
0.1 82
0.5 93
강황잎, 꽃잎 혼합물(1:1)
(실시예 20-2)		 0.01 72
0.1 85
0.5 95
양성 대조군(TGF-β10ng/ml) 10 ng/m 84
상기 표 10에 나타나는 바와 같이, 본 발명의 강황 혼합물(잎:꽃잎=1:1) 추출물은 강황 잎, 꽃잎 추출물보다 인간 정상 섬유아세포에서 세포 독성 완화율을 우수하게 낮추는 것을 알 수 있다. 특히, 강황 혼합물(잎:꽃잎=1:1)의 비활성 다당체 제거법에 의한 추출물(실시예 20-2)은 0.01% 농도에서 자외선에 의한 세포 독성 완화율은 72%, 0.1% 농도에서 85%, 0.5% 농도에서 95% 결과를 얻었으며, 처리농도가 증가됨에 따라 농도 의존적으로 세포 독성 완화율이 증가되는 양상을 보여, 자외선에 의한 세포 독성을 효과적으로 방어함을 알 수 있었다. 상기 실험결과를 통해 본 발명의 강황 잎과 꽃잎의 혼합추출물은 자외선 조사에 의한 세포손상을 낮은 농도에서도 효과적으로 방어함을 알 수 있었다.
시험예 8: 자외선 조사에 의한 염증성 사이토카인 발현 억제 효과
상기 실시예에서 수득한 강황 잎, 꽃잎 및 그 혼합물(잎:꽃잎=1:1)의 추출물의 자외선 조사에 의해 발현되는 염증성 사이토카인 발현 억제 효과를 평가하였다. 인간 정상 섬유아세포를 24공 평판배양기에 5×104 cells/well의 농도로 배양한 다음, 24시간동안 10% FBS 첨가 배지 조건하에 안정화시킨 뒤, 배양액을 제거하고 PBS 조건하에서 UV-B(10mJ/cm2) 조사한 후 PBS를 제거하고 세포 배양 배지(FBS가 첨가된 것)로 교체하였다. 여기에 강황 잎, 꽃잎 및 그 혼합물(잎:꽃잎=1:1) 추출물을 처리한 후 5시간 배양하였다. 배양 후, 상층액을 취하여 IL-1α를 정량함으로서 강황 잎, 꽃잎 추출물의 염증성 사이토카인 발현 억제 효과를 판단하였다. IL-1α의 양은 효소 면역 분석법(Enzyme-linked Immunosorbent Assay)을 이용하여 정량화하였으며, 양성대조군으로 케토 프로펜(Ketoprofen)를 사용하였다. 염증성 사이토카인(IL-1α)의 발현 억제율(%)은 하기 식에 의해 계산하였다.
Figure 112018095927971-pat00007
Bo: 자외선 조사하지 않고 시료 처리하지 않은 웰의 IL-1α생성량
Bt: 자외선 조사하고 시료를 처리하지 않은 웰의 IL-1α생성량
St: 자외선 조사하고 시료를 처리한 웰의 IL-1α생성량
시료명 처리 농도(%, w/v) 염증성 사이토카인
발현 억제율(%)
강황 잎 추출물
(실시예 1)		 0.01 46
0.1 59
0.5 80
강황 잎 추출물
(실시예 15)		 0.01 47
0.1 60
0.5 80
강황 잎 추출물
(실시예 20-2)		 0.01 45
0.1 63
0.5 81
강황 꽃잎 추출물
(실시예 1)		 0.01 26
0.1 29
0.5 30
강황 꽃잎 추출물
(실시예 15)		 0.01 27
0.1 30
0.5 40
강황 꽃잎 추출물
(실시예 20-2)		 0.01 35
0.1 43
0.5 51
강황 잎,꽃잎 혼합물(1:1)
(실시예 1)		 0.01 43
0.1 66
0.5 81
강황 잎,꽃잎 혼합물(1:1)
(실시예15)		 0.01 45
0.1 57
0.5 82
강황 잎,꽃잎 혼합물(1:1)
(실시예 20-2)		 0.01 47
0.1 68
0.5 85
Ketoprofen 100 μg/mL 44
상기 표 11에서 확인되는 바와 같이, 강황 혼합물(잎:꽃잎=1:1) 추출물은 강황 잎, 꽃잎 추출물보다 인간 정상 섬유아세포에서 염증 사이토카인 발현 억제율을 우수하게 낮추는 것을 알 수 있다. 강황 혼합물(잎:꽃잎=1:1)의 비활성 다당체 제거법에 의한 추출물(실시예 20-2)은 자외선에 의한 염증성 사이토카인인 IL-1α의 생성을 0.01% 농도에서 47%로 억제하였으며, 0.1%의 농도로 처리했을 때는 IL-1α의 생성을 68%로 억제하고, 0.5%의 농도로 처리 했을 때는 IL-1α의 생성을 85%로 억제하는 것을 알 수 있었다. 따라서 본 발명의 강황 혼합물(잎:꽃잎=1:1) 추출물은 자외선에 의한 염증 발생을 낮은 농도에서도 효과적으로 방어함을 알 수 있다.
시험예 9: LPS(Lipopolysaccharide)로 유도된 종양괴사인자알파(TNF-α) 및 사이클로옥시게나제-2 (COX-2)의 생합성 억제 효과
인간 정상 섬유아세포를 12공 평판배양기에 1 X 105 cells/well의 농도로 배양한 다음 LPS를 처리한 후, 상기 농도로 포함하는 배지로 교체하였다. 배양 2일째 세포를 수확하여 웨스턴블랏(Western blot) 방법을 사용하여 유도된 TNF-α와 COX-2의 양을 정량하였다. 상기 추출물을 포함하지 않고 배양한 미처리군을 대조군으로 하여 100으로 잡고 측정값과의 비교치를 산출하였다. 결과는 아래 표와 같다.
시료명 처리 농도(%, w/v) TNF-α 생합성(%) COX-2 생합성(%)
대조군 - 100 100
강황 잎 추출물
(실시예 1)		 0.01 95 100
0.1 83 93
0.5 65 71
강황 잎 추출물
(실시예 15)		 0.01 91 95
0.1 79 83
0.5 55 73
강황 잎 추출물
(실시예 20-2)		 0.01 55 67
0.1 43 60
0.5 27 23
강황 꽃잎 추출물
(실시예 1)		 0.01 92 100
0.1 80 98
0.5 88 95
강황 꽃잎 추출물
(실시예 15)		 0.01 92 97
0.1 85 89
0.5 85 77
강황 꽃잎 추출물
(실시예 20-2)		 0.01 76 74
0.1 52 50
0.5 48 43
강황 잎,꽃잎 혼합물(1:1)
(실시예 1)		 0.01 85 90
0.1 75 83
0.5 62 71
강황 잎,꽃잎 혼합물(1:1)
(실시예 15)		 0.01 90 85
0.1 78 73
0.5 52 63
강황 잎,꽃잎 혼합물(1:1)
(실시예 20-2)		 0.01 55 67
0.1 43 30
0.5 17 8
상기 표 12에서 확인되는 바와 같이, 실시예 20-2의 강황 혼합물(잎:꽃잎=1:1) 추출물은 염증반응 유발 인자인 LPS를 처리함으로써 생성된 TNF-α와 COX-2의 생합성을 농도 의존적으로 감소시킴으로써 염증반응을 억제하는 것을 확인하였다.
제형예 1 ~ 2: 유연화장수
유연화장수의 제형예는 통상의 방법에 따라 하기 표 13과 같이 제조하였다.
성분(%) 제형예 1 제형예 2 비교 제형예1 비교 제형예2
강황 잎,꽃잎 혼합물(1:1)추출물
(실시예 20-2) 		3.0 - - -
강황 잎 추출물
(실시예 20-2) 		- 3.0 - -
정제수 - - 3.0 -
대나무 추출물 - - - 3.0
글리세린 5.1 5.1 5.1 5.1
프로필렌글리콜 4.2 4.2 4.2 4.2
토코페릴아세테이트 3.0 3.0 3.0 3.0
유동파라핀 4.6 4.6 4.6 4.6
트리에탄올아민 1.0 1.0 1.0 1.0
스쿠알란 3.1 3.1 3.1 3.1
마카다미아너트오일 2.5 2.5 2.5 2.5
폴리솔베이트60 1.6 1.6 1.6 1.6
솔비탄세스퀴롤레이트 1.6 1.6 1.6 1.6
프로필파라벤 0.6 0.6 0.6 0.6
카르복실비닐폴리머 1.5 1.5 1.5 1.5
향 미량 미량 미량 미량
방부제 미량 미량 미량 미량
정제수 잔량 잔량 잔량 잔량
계 100 100 100 100
제형예 3 ~ 4: 영양크림
영양크림의 제형예는 통상의 방법에 따라 하기 표 14과 같이 제조하였다.
성 분(%) 제형예 3 제형예 4 비교 제형예 3 비교 제형예 4
강황 잎,꽃잎 혼합물(1:1)추출물
(실시예 20-2)		 3.0 - - -
강황 잎 추출물
(실시예 20-2)		 - 3.0 - -
아데노신 - - - 3.0
친유형 모노스테아린산글리세린 2.0 2.0 2.0 2.0
세테아릴알콜 2.2 2.2 2.2 2.2
스테아린산 1.5 1.5 1.5 1.5
밀납 1.0 1.0 1.0 1.0
폴리솔베이트 60 1.5 1.5 1.5 1.5
솔비탄스테아레이트 0.6 0.6 0.6 0.6
경화식물유 1.0 1.0 1.0 1.0
스쿠알란 3.0 3.0 3.0 3.0
광물유 5.0 5.0 5.0 5.0
트리옥타노인 5.0 5.0 5.0 5.0
디메치콘 1.0 1.0 1.0 1.0
소듐마그네슘실리케이트 0.1 0.1 0.1 0.1
글리세린 5.0 5.0 5.0 5.0
베타인 3.0 3.0 3.0 3.0
트리에타올아민 1.0 1.0 1.0 1.0
소듐히아루로네이트 4.0 4.0 4.0 4.0
방부제, 향, 색소 미량 미량 미량 미량
정제수 잔량 잔량 잔량 잔량
합계 100 100 100 100
시험예 10: 피부 주름 개선 효과
본 발명의 강황 잎과 꽃잎의 혼합추출물과, 강황 잎 추출물을 각각 함유하는 화장료의 주름 개선 효과를 실제 사용 테스트를 통하여 평가 하였다. 상기 강황 잎, 꽃잎 혼합추출물, 강황 잎 추출물을 함유하는 영양크림(제형예 3, 제형예 4), 강황 잎, 꽃잎 추출물을 정제수로 대체한 크림(비교 제형예 3), 강황 잎, 꽃잎 추출물 대신 주름개선효과가 있는 것으로 알려진 물질인 아데노신을 함유하는 크림(비교 제형예 4)을 사용하였다. 30명의 여성을 대상으로 얼굴 양쪽면을 사용하여 6주 후의 주름 개선 효과를 육안으로 평가하여 주름 개선 정도를 확인하였다. 이 평가를 토대한 주름 개선 효과 결과는 하기의 표 15에 나타내었다.
주름 개선 효과
우수 약간 없음
제형예 3
(강황 잎,꽃잎 혼합물(1:1)추출물)		 16 4 1
제형예 4
(강황 잎 추출물)		 16 3 1
비교 제형예 3
(정제수)		 0 1 19
비교 제형예 4(아데노신) 15 4 1
상기 표 15의 결과에서도 알 수 있듯이, 본 발명의 강황 잎과 꽃잎의 혼합추출물 및 강황 잎 추출물을 함유한 제형예 3, 제형예 4의 영양크림은 강황 잎, 꽃잎 추출물을 함유하지 않은 비교 제형예 3의 크림에 비하여 높은 주름개선 효과를 보여주었으며, 또한, 강황 잎, 꽃잎 추출물 대신 아데노신을 함유하는 비교 제형예 4의 크림과 유사한 우수한 피부 주름개선 효과를 나타내었다.
시험예 11: 피부 탄력 개선효과
본 발명의 강황 잎, 꽃잎 혼합물(1:1)의 추출물 및 강황 잎 추출물을 함유하는 화장료의 피부 탄력 개선효과에 대한 임상실험을 실시하였다. 임상시험은 각 화장료의 실제 사용 테스트를 통하여 평가하였다.
실험은 상기 강황 잎, 꽃잎 혼합물(1:1) 추출물 및 강황 잎 추출물을 함유하는 영양크림(제형예 3, 제형예 4), 강황 잎, 꽃잎 추출물을 정제수로 대체한 크림(비교 제형예 3), 강황 잎, 꽃잎 추출물 대신 주름개선효과가 있는 것으로 알려진 물질인 아데노신을 함유하는 크림(비교 제형예 4)을 사용하여, 사람을 대상으로 화장료의 사용으로 인한 피부 탄력 개선효과를 확인 및 비교 평가하였다.
피실험자(30세~45세의 여성) 40명을 대상으로, 실험군을 두 부류로 나누어, 각각 20명씩을 나누어 한 군은 얼굴 오른쪽 부위에는 제형예 3 이나 제형예 4와 비교 제형예 3, 나머지 한 군은 얼굴 오른쪽 부위에는 제형예 3 이나 제형예 4와 비교 제형예 4를 각각 1일 2회씩 연속 8주간 도포하였다. 실험 완료 후 피부 탄력 개선 효과는 제품 사용 전과 2개월간 사용 후의 피부 탄력을 각각 피부 탄력 측정기(cutometer SEM 575, C+K Electronic Co., Germany)를 이용하여 측정하고, 실험결과를 하기 표 16에 Cutometer SEM 575의 △R8값으로 나타내었다. 이러한 △R8값은 피부의 점탄성(viscoelasticity)의 성질을 나타낸다.
실험군 피부탄력효과(△R8)
제형예 3
(강황 잎,꽃잎 혼합물(1:1))		 0.45
제형예 4(강황 잎 추출물) 0.31
비교 제형예 3(정제수) 0.08
비교 제형예 4(아데노신) 0.21
상기 표 16에 나타난 바와 같이, 유효성분으로 강황 잎, 꽃잎 혼합물(1:1) 및 강황 잎 추출물을 함유한 제형예 3, 제형예 4의 크림은 강황 잎, 꽃잎 추출물을 함유하지 않는 비교 제형예 3의 크림에 비해 각각 약 6배, 4배의 우수한 피부 탄력 개선 효과를 나타내었고, 아데노신을 함유하는 비교 제형예 4의 화장료 조성물과 비교하여 약 2배 정도 피부 탄력 개선 효과를 나타내어 본 발명의 강황 잎, 꽃잎 혼합물(1:1) 추출물을 함유하는 화장료 조성물이 우수한 피부 탄력 개선 효과가 있음을 알 수 있다.
시험예 12: 피부 보습력 개선효과
본 발명의 강황 잎과 꽃잎 혼합물(1:1)의 추출물 및 강황 잎 추출물을 함유하는 화장료의 피부 보습력 개선효과를 알아보기 위하여 다음과 같이 실험을 실시하였다. 피부 질환이 없는 20~40대 80명을 대상으로 1조 당 20명 씩 4개조로 나누고, 각 조별로 본 발명의 강황 잎, 꽃잎 혼합물(1:1) 추출물 및 강황 잎 추출물을 함유하는 유연 화장수(제형예 1, 제형예 2)를 적용하였다. 이때 비교를 위하여, 강황 잎, 꽃잎 혼합물(1:1)추출물 및 강황 잎 추출물 대신에 정제수를 포함하는 화장료(비교 제형예 1)를 대조처방예로, 강황 잎, 꽃잎 혼합물(1:1)추출물 및 강황 잎 추출물 대신에 보습효과가 있는 것으로 알려진 대나무 추출물을 함유하는 화장료(비교 제형예 2)를, 매일 2회씩 1개월간 얼굴 및 전박부에 도포하게 하였다.
미리 도포 시작 전 항온, 항습 조건(24도, 습도 40%)에서 Corneometer를 이용하여 피부 전도도를 측정하여 기본 값을 삼고, 1주, 2주, 4주경과 후의 피부 전도도를 측정하여 그 증가율을 평가하였다. 그 결과를 하기 표 17에 나타내었다.
시료 피부 전도도 증가율(%)
1 주 후 2 주 후 4 주 후
제형예 1
(강황 잎,꽃잎 혼합물(1:1))		 55 60 60
제형예 2
(강황 잎 추출물)		 45 50 49
비교 제형예 1
(정제수)		 11 13 11
비교 제형예 3(대나무 추출물) 60 65 60
상기 표 17의 결과에서 확인되는 바와 같이, 본 발명의 강황 잎과 꽃잎 혼합물(1:1) 추출물을 함유하는 화장료인 제형예 1의 경우 비교 제형예 1에 비하여 피부 전도도 증가율이 매우 우수하였다. 또 다른 대조군으로 보습효과가 있는 것으로 알려진 대나무 추출물을 함유하는 화장료인 비교 제형예 2와 유사하게 높은 피부 전도도 증가율을 나타내었다. 본 발명의 강황 잎, 꽃잎 혼합물(1:1) 추출물을 함유하는 화장료는 정제수를 함유하는 화장료에 비해 피부 수분 함량도 높게 유지한다는 것을 확인할 수 있다. 피부 전도도는 피부 수분량에 비례하므로, 본 발명의 강황 잎, 꽃잎 혼합물(1:1)추출물을 함유하는 화장료는 피부 보습력 개선 효과가 탁월함을 알 수 있다.
임상평가
상기 제형예에 따라 제조된 화장료 조성물에 대한 임상 보습 효과를 다음과 같이 측정하였다. 설문 조사를 통하여 피부가 건조하다고 느끼는 건강한 성인 남녀 20명을 선정한 후 상박을 10개 사이트로 나눈 후 각 시료를 1일 2회씩 4주간 도포하게 하였다. 보습 효과는 실사용 시험 시작 후부터 매 2주간, 그리고 종료 후의 개선 효과를 Corneometer CM 820 사용하여 평가하였다. 상기 실험 결과는 하기 표 18에 나타내었다.
구분 TEWL(g/h/m2)
초기값 사용 2주 후 사용 4주 후
제형예 1
(강황 잎,꽃잎 혼합물(1:1))		 32.0 46.5 57.6
제형예 2
(강황 잎 추출물)		 31.0 36.2 48.3
비교 제형예 1
(정제수)		 31.2 33.1 34.2
비교 제형예 2
(대나무 추출물)		 31.0 48.1 57.0
상기 표 18에 나타난 바와 같이, 기기 측정에 의한 피부 보습력 개선 효과 평가 결과에서, 본 발명의 강황 잎, 꽃잎 혼합물(1:1)을 함유하는 화장료(제형예 1)는 강황 잎, 꽃잎 추출물을 함유하지 않는 화장료(비교제형예 2)에 비하여 피부 보습력 개선 효과가 매우 우수하였다. 또 다른 대조군으로 보습효과가 있는 것으로 알려진 대나무 추출물을 함유하는 화장료(비교 제형예 2)와 비교했을 때에도 유사하게 우수한 보습력 개선효과가 있는 것으로 측정되었다. 사용 2주, 4주 후 보습력 개선 효과를 측정한 결과, 본 발명의 강황 잎, 꽃잎 혼합물(1:1) 추출물을 함유하는 화장료를 사용하면 피부 보습력 개선 효과가 있음을 확인할 수 있었다.
상기에서는 본 발명의 바람직한 실시예에 대하여 설명하였지만, 본 발명은 이에 한정되는 것이 아니고 특허청구범위와 발명의 상세한 설명의 범위 안에서 여러 가지로 변형하여 실시하는 것이 가능하고 이 또한 본 발명의 범위에 속하는 것은 당연하다.

Claims (8)

  1. (A)정제수로 세척하고 건조시킨 강황 잎과 꽃잎을 각각 1:1의 중량비로 혼합분쇄하여 분말화하는 단계;
    (B)건조된 강황 잎과 꽃잎에 5~10배 중량의 용매를 가하여 100~120℃에서 열수추출하는 단계;
    (C)얻어진 열수 추출액을 여과 및 회수한 후, 초기 부피의 1/20~1/5이 되도록 감압 농축하는 단계;
    (D)최종 농축액의 3~7배 부피의 에탄올을 가하여 침전반응이 생길 때까지 교반하는 단계; 및
    (E)침전물을 여과하여 제거하는 단계를 포함하여 제조되는 강황 잎과 꽃잎의 혼합추출물을 조성물 전체중량에 대하여 0.01 ~ 20.0중량% 함유하는 화장료 조성물.
  2. 삭제
  3. 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 항산화용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부 주름 및 탄력개선용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부 염증개선용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부 미백 및 보습용인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
  7. 삭제
  8. 삭제
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