KR20220083398A

KR20220083398A - 금화규 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 안티폴루션용 조성물

Info

Publication number: KR20220083398A
Application number: KR1020200173610A
Authority: KR
Inventors: 김경태; 이원미; 김영혜; 이상민; 이호근
Original assignee: 동의대학교 산학협력단
Priority date: 2020-12-11
Filing date: 2020-12-11
Publication date: 2022-06-20
Also published as: KR102544880B1

Abstract

본 발명은 금화규(Aurea Helianthus) 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 안티폴루션용 조성물에 관한 것으로, 상기 조성물에 의하는 경우, 자외선 및 미세먼지에 노출된 세포의 세포사멸을 저해하는 작용을 통해 피부 보호 활성을 나타낼 수 있으며, 피부 진정 및 완화 효과를 나타낼 수 있다.

Description

금화규 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 안티폴루션용 조성물{SKIN ANTI-POLLUTION COMPOSITION CONTAINING AUREA HELIANTHUS EXTRACT}

본 발명은 금화규 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 안티폴루션용 조성물에 관한 것이다. 보다 상세하게는, 금화규로부터 추출한 것으로 피부 보호활성, 피부진정 및 완화효과를 나타내는 피부 안티폴루션용 조성물에 관한 것이다.

피부는 외부 환경에 직접적으로 노출되는 신체 부위로서, 우리 몸의 중요한 기관들을 보호하는 보호막 역할을 할 뿐만 아니라 수분 증발을 조절하고 외부 감염으로부터 몸을 보호하는 역할을 한다. 하지만, 아무리 외부로부터의 바이러스 침투를 막아내는 피부일지라도 과도한 자외선, 미세먼지 및 오염된 환경 등 외부로부터 받는 스트레스는 피부자극을 유발하게 되고, 결국에는 피부 노화로 이어지게 된다.

상기 자외선은 파장에 따라 자외선은 파장에 따라 자외선 C(UVC, 200 내지 280 nm), 자외선 B(UVB, 280 내지 320 nm), 자외선 A(UVA, 320 내지 400 nm)로 나뉘며, 자외선 C는 파장이 짧아 대부분 지구의 오존층에 흡수되어 지표면에 도달하지 않으며, 주로 피부에는 자외선 B와 자외선 A가 직접적인 영향을 미친다.

자외선 B(ultraviolet B, UVB 방사선(radiation), 파장: 280-320 nm)는 피부암(skin cancer), 면역시스템 억제 및 광노화(photo-aging) 등의 피부에 대한 유해 작용을 일으키는 주요 환경 요인 중 하나이다. 이러한 자외선 B에 의해 발생된 활성산소종(reactive oxygen species, ROS)은 지질(lipids), 단백질(proteins) 및 DNA와 같은 세포 성분들에 산화성 손상(oxidative damage)을 일으켜, 결과적으로 피부 노화를 촉진시키고 다양한 피부 병변을 유발하게 된다.

상기 활성산소종은 생물체가 호흡을 통하여 에너지를 만들어 낼 때 산소분자가 전자각에서의 전자배열의 특수성 때문에 생성되는 반응성이 높은 산소 라디칼이다. 이렇게 생성된 활성산소종은 프리라디칼(free radical)의 일종으로, 이 활성산소종들은 반응성이 대단히 높아 세포의 주요 구성물질인 지질, 단백질 및 DNA를 파괴하여 조직에 산화적 손상을 초래하게 되고 만성적인 산화적 손상은 세포의 기능저하뿐만 아니라 노화나 암과 같은 각종 만성질환을 유발하는 원인이 된다.

이런 활성산소종(reactive oxygen species; ROS)은 과산화음이온(superoxide anion, O₂ ^-), 과산화수소(hydrogen peroxide, H₂O₂), 하이드록실라디칼(hydroxyl radical, OH)이 있으며 이들은 세포 내 미토콘드리아나 마이크로솜 같은 과립이나 시토솔에서 주로 생성된다.

활성산소종들은 정상 에너지 대사과정에서는 물론 그 외 여러 기전에 의해 끊임없이 생성되며 동시에 각종 효소 및 비효소적 항산화 물질에 의해 제거되어 정상 생체에서는 이들의 생성과 소거가 균형을 이루고 있다. 생체에 존재하는 효소적 항산화제로는 superoxide dismutase(SOD), catalase 등이 있고 비 효소적 항산화제에는 비타민C, 토코페롤, 환원형 glutathione, 셀레늄, 요산 등이 알려져 있다. 이러한 인체의 항산화제의 활동은 활성산소종에 의한 세포의 지질, 단백질 및 핵산의 손상 방어한다.

또한, 적정량의 활성산소종은 세포내 신호전달 물질로 작용함으로써, 미토콘드리아 내의 전자전달계 및 백혈구 세포의 활성화 등 세포기능을 유지하는데 중요한 역할을 담당하지만, 과잉 생성된 활성 산소종은 생체 내의 산화방지 균형을 무너뜨림으로 산화적 스트레스를 야기한다.

상기 산화적 스트레스는 세포에 스트레스를 주는 요인으로 체내 여러 물질과 반응하며 세포들을 공격하고 세포와 조직에 비가역적인 손상을 유도하거나 돌연변이, 세포 독성 및 발암 등을 초래하면서 뇌질환, 심장질환, 동맥경화, 당뇨병, 폐섬유증, 암, 관절염 및 치매 등의 여러 질환과 노화의 중요 병인으로 알려져 있다.

한편, 최근 중국의 산업화로 인해 발생하고 있는 중금속 등의 유해물질이 섞인 미세먼지, 황사, 스모그는 피부노화 및 피부 트러블의 주요 원인으로 인식되고 있다.

미세먼지는 아황산가스, 질소 산화물, 중금속, 오존 및 일산화 탄소 등의 유해 물질을 포함하는 대기오염 물질로서 자동차 및 공장 등에서 발생하며, 대기 중 장기간 떠다니는 물질을 의미한다. 상기 미세먼지는 입경 10㎛ 이하인 경우, PM 10이라 표기하고, 미세먼지의 입경이 2.5㎛ 이하인 경우는 PM 2.5라고 표기하며 “초미세먼지” 또는 “극미세먼지"라고 부른다.

이러한 미세먼지는 코, 입뿐 아니라 피부를 통해서도 몸 속에 침입하게 된다. 인체의 피부는 크게 표피층 및 진피층으로 구성되며, 상기 표피층은 벽돌을 촘촘히 쌓은 것처럼 방어막(피부장벽)을 형성, 먼지 등의 체내 침투를 막는다. 그러나, 중금속 및 환경호르몬 등을 함유한 미세먼지는 이러한 피부 장벽을 무너뜨리고 체내에 침투할 수 있다.

이러한 유독성 화학물질을 함유한 미세먼지는, 피부와 접촉하여 세포 변형을 일으키게 되는데, 이로 인해 피부장벽에 균열이 발생하여 상기 미세먼지에 포함된 각종 발암물질 및 환경호르몬 등이 인체에 용이하게 침투할 수 있다. 인체 모공의 크기는, 미세먼지 크기(0.01mm 내외)의 2~5배의 크기를 갖기 때문에 모공을 용이하게 통과할 수 있다.

그러므로, 미세먼지는 각종 피부 질환의 주요 원인으로 작용한다. 중금속인 납, 카드뮴 등과 각종 화학물질을 내포하는 초미세먼지의 위험성은 피부의 대사 흐름을 약화시켜 피지에 대한 조절의 기능을 떨어뜨리며 건조증과 가려움증, 피부 트러블을 유발시키고 미세먼지에 내포된 중금속과 환경호르몬 등 유해한 물질이 세포의 염증성 사이토카인 분비 촉진, 백혈구 수를 증가시켜 아토피성 피부염으로 알레르기 반응 또한 야기시킨다.

상기 사이토카인은 세포 신호전달에 중요한 소형 단백질들로 구성된 넓고 느슨한 카테고리이다. 사이토카인으로는 케모카인, 인터페론, 인터루킨, 림포카인 및 종양 괴사 인자 등이 있으며, 대식세포, B림프구, T 림프구 및 비만 세포와 같은 면역 세포뿐만 아니라 내피 세포, 섬유모세포 및 다양한 기질 세포 등의 광범위한 세포들에서 생산된다.

사이토카인은 수용체를 통해 작용하며, 특히 면역 시스템에 중요한데, 사이토카인은 체액성 면역 반응과 세포성 면역 반응 간의 균형을 조절하고, 이로써 특정 세포 집단의 성숙화, 생장 및 반응성을 조절한다.

상기 사이토카인의 염증 발생에 관여하는 염증성 사이토카인은 세균이나 바이러스 감염, 조직 손상 따위에 의한 염증 반응에 특히 깊이 관여하며 그 종류로는 인터류킨1(IL-1), 인터류킨(IL-6), 종양괴사인자(TNF-α) 등이 있다.

IL-1는 염증반응을 야기시키며 발열을 일으키는 사이토카인으로 림프구와 호중구의 활성화를 담당하며, IL-6은 B세포의 분화 및 항체생산을 증가시키는 역할을 가지며,

종양괴사인자(TNF-α)는 면역반응에 중추적인 역할을 하는 사이토카인으로 면역반응을 관장하며, 발열과 붉게 붓고, 통증이 수반되는 염증반응을 유도한다. 염증반응은 면역반응이 일어나는 과정에서 나타나는 필연적인 현상이지만 장기간 지속되면 해로운 반응이 될 수 있고, TNF-α 농도가 너무 높아지면 패혈증과 같은 쇼크가 발생할 수 있고, 낮은 농도라도 오래 지속되면 암 환자의 경우에서 보듯이 체력저하현상이 일어날 수 있다

상기와 같이 자외선이나 미세먼지 등 환경 오염원이 피부에 자극을 주거나 피부의 표면에 부착하여 신체 내부로 침투되는 것을 방지하는 안티 폴루션(Anti-pollution) 효과를 갖는 화장료 조성물, 세정제, 외용제에 대한 개발이 활발히 진행되고 있다. 그러나, 현재 개발되어 있는 대다수의 제품은 단순히 피부에 부착 내지 침투된 오염원을 제거하는 정도의 역할을 할 뿐 단순히 피부로부터 오염원을 제거하고 있을 뿐이며, 환경 오염원으로부터 피부를 근본적으로 보호하지 못할 뿐 아니라 오염원으로부터 피부를 보호하는 능력이 미미한 문제가 있었다.

이에 본 발명에서는 피부 안티폴루션 효과를 갖는 화장료 조성물을 개발하고자 하였다.

KR 2019-0134193 A KR 2078670 B1 KR 2019-0006888 A

본 발명의 목적은 본 발명은 금화규 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 안티폴루션용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 금화규 추출물을 유효성분으로 포함하여, 피부 보호 활성, 피부 진정 및 완화 효과를 나타낼 수 있는 피부 안티폴루션용 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명의 일 실시예에 따른 피부 안티폴루션용 조성물은 금화규 추출물을 유효성분으로 포함한다.

상기 조성물은 자외선 및 미세먼지에 노출된 세포의 세포사멸을 저해하는 작용을 통해 피부 보호 활성을 나타내는 것이다.

상기 조성물은 피부 진정 및 완화 효과를 나타내는 것이다.

상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 6의 알코올 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 추출 용매를 이용하여 추출된다.

본 발명의 다른 일 실시예에 따른 진정 크림은 금화규 추출물을 유효성분으로 포함하여 제조한 것이다.

본 발명의 다른 일 실시예에 따른 재생 크림은 금화규 추출물을 유효성분으로 포함하여 제조한 것이다.

본 발명의 다른 일 실시예에 따른 로션은 금화규 추출물을 유효성분으로 포함하여 제조한 것이다.

이하, 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다.

본 명세서에서 "추출물(extract)"이란 생약을 적절한 침출액으로 짜내고 침출액을 증발시켜 농축한 제제를 의미하는 것으로, 이에 제한되지는 않으나, 추출처리에 의해 얻어지는 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출 액을 건조하여 얻어지는 건조물, 이들의 조정제물 또는 정제물일 수 있다.

본 명세서에서 "유효성분"이란 단독으로 목적하는 활성을 나타내거나 또는 그 자체는 활성이 없는 담체와 함께 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미한다.

또, 본 명세서에서 "안티폴루션(Anti-pollution)"이란 유해한 유기화합물, 무기오염원 또는 미세먼지 등 각종 유해 환경으로부터 신체를 보호하고 오염을 방지한다는 의미를 가진다.

본 발명의 일 실시예에 따른 피부 안티폴루션용 조성물은 금화규 추출물을 유효성분으로 포함한다.

금화규(Aurea Helianthus)는 히비스커스(Hibiscus)속에 속하는 일년생 초본식물이며, 일명 야생부용이라고도 불리운다. 본초강목에 실려 있는 약용식물로서, 중국에서 복원이 되어 재배되기 시작하였으며, 최근에는 중국으로부터 국내로 종자가 유입되어 국내에서도 재배가 이루어지고 있다.

금화규는 7 또는 8월이면 사람의 키를 넘게 자라며 꽃송이 직경이 보통 16~18cm되고 꽃잎은 노랗고 엷으며 주홍빛이 나는 꽃술에 잎은 짙푸른 색의 풍엽형이고, 꽃은 7월말부터 따서 잘게 찢고 말린 후, 분말로 하여 식품, 화장품 및 차의 원료로 사용되며, 금화규의 잎 역시 다양한 생리활성 물질을 함유하고 있어 여러 용도에 이용되고 있다.

또한, 금화규는 뿌리, 줄기, 잎, 꽃 모두를 약용할 수 있으며, 임질(gonorrhea), 종기(furuncle)를 치료하고 해독(detoxication)에 효과가 있으며, 플라보노이드, 리놀레산, 올레산, 비타민E, 셀레늄 및 식물성 콜라겐 등을 함유하고 있어 이러한 인체에 유용한 효과를 활용하고자 하는 연구가 진행되고 있다.

상기 플라보노이드는 항산화 효과를 나타내며, 항균, 항암, 항바이러스, 항알레르기 및 항염증 활성을 가지며 독성은 거의 나타나지 않는다.

피부가 자외선 및 미세먼지에 노출될 경우 활성산소종을 생성하여 산화적 스트레스를 유발함으로써 다양한 피부 구성 세포에 손상을 유발한다.

상기 활성산소종(ROS)은 프리라디칼(free radical)의 일종으로, 이 활성산소종들은 반응성이 대단히 높아 세포의 주요 구성물질인 지질, 단백질 및 DNA를 파괴하여 조직에 산화적 손상을 초래하게 되고 만성적인 산화적 손상은 세포의 기능저하뿐만 아니라 노화나 암과 같은 각종 만성질환을 유발하는 원인이 된다.

자외선에 피부가 노출될 때, 자외선의 작용으로 생성된 활성산소종(ROS)은 세포막에 존재하는 불포화 지방산의 알릴 자리의 수소를 탈취함으로써 지질 라디칼을 생성시키고, 이 지질 라디칼에 산소 분자가 결합하여 퍼옥시 지질 라디칼이 생성되면 세포막에서는 지질과산화(Lipid peroxide) 연쇄반응이 일어나게 된다. 이 지질 산화물은 PLA₂를 활성화시킴으로써 막 인지질을 가수분해시킬 뿐 아니라 활성화된 PLA₂는 NAD(P)H 옥시다제를 자극하여, 미토콘드리아와 세포질 내의 활성산소종 생성을 유도하여 세포 손상을 일으킬 수 있다.

또한, 미세먼지에 피부가 노출되면 미세먼지는 모공보다 20배나 더 작기 때문에 인체의 피부에는 손쉽게 침투될 수 있으며, 미세먼지는 미토콘드리아에서 활성산소를 생산하여 손상을 주어 콜라겐 합성을 감소시키고 분해를 증가시켜 주름 및 피부노화를 일으킬 수 있다.

상기와 같이, 자외선과 미세먼지로 인해 세포에 손상을 주는 활성산소종의 생성과 이를 제거하는 항산화 반응 간의 불균형으로 인해 세포 내 활성산소종이 증가하여 단백질, 지질 및 DNA와 반응해 세포를 손상시키는 것을 의미하는 '산화적 스트레스'가 나타나 다양한 피부 구성 세포에 손상을 유발하게 된다.

이에, 본 발명은 자외선 및 미세먼지에 노출된 세포의 세포사멸을 저해하여 활성산소종의 생성을 억제시키는 것으로 피부 보호 활성을 나타낼 수 있다.

상기 조성물은 피부 진정 및 자극 완화 효과를 나타내는 것이다.

상기 피부 진정은 피부냉감, 피지분배 억제, 모공수축 또는 피부의 항염증 효과를 부여하여 자극받은 피부 부위 등을 완화시켜 건강한 상태로 유지하는 것을 말한다.

상기 피부자극은 가려움, 따끔거림, 화끈거림 등의 자극감과 홍반, 부종 등이 나타나는 것을 말한다.

피부에 자극이 발생하기 위해서는 외부 자극을 매개하는 다양한 사이토카인이 생성되는데 그 대표적인 성분은 인터류킨1(IL-1), 인터류킨(IL-6), 종양괴사인자(TNF-α)이다.

상기 성분들의 생성을 조절해줌으로써 피부 자극을 완화해줄 수 있다.

즉, 본 발명은 상기 외부 자극에 의해 발생될 수 있는 사이토카인의 생성을 억제하여 피부 진정의 효과를 나타낼 수 있고, 피부냉감, 피지분배 억제, 모공수축 또는 피부의 항염증 효과를 부여하여 자극받은 피부 부위 등을 완화시켜 건강한 상태로 유지할 수 있다.

상기 금화규 추출물은 건조한 금화규를 분쇄한 분쇄물을 물, 에탄올, 메탄올 등과 같은 탄소수 1 내지 6의 알코올과 같은 극성 용매 또는 알코올과 물의 1:0.1 내지 1:10의 혼합비를 갖는 혼합 용매로 용출할 수 있으며, 보다 상세하게는 추출 용매로 물을 이용할 수 있다. 이때, 추출 온도는 10℃ 내지 100℃, 바람직하게는 실온에서 추출한 추출물일 수 있다.

상기 추출 용매는 시료의 중량 기준으로 2 내지 50배를 사용할 수 있으며, 바람직하게는 2 내지 20배이다. 추출을 위해 시료는 추출 용매에서 침출을 위해 1 내지 72 시간 동안 방치될 수 있으며, 상세하게는 1 내지 24시간 동안 방치될 수 있다.

여과된 추출물을 진공 회전 농축기로 감압 농축하여 수득한 결과물일 수 있으나, 본 발명의 금화규 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물인 한, 이에 제한되지 않고, 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 이의 조정제물 또는 정제물을 모두 포함한다.

본 발명의 일 실시예에 따라, 금화규 추출물을 유효 성분으로 포함하여, 피부 안티폴루션용 조성물로 제공이 가능하며, 구체적으로 상기 금화규 추출물은 미세먼지 등에 의한 피부 자극을 완화하거나 피부 진정에서 우수한 효과를 나타낼 수 있다.

다만, 본 발명의 피부 안티폴루션용 조성물은 금화규 추출물 이외에 천연 추출물을 추가로 포함하여, 안티폴루션의 효과를 보다 극대화할 수 있을 뿐 아니라, 기호도가 우수한 조성물로의 제공을 가능하게 한다.

상기 천연 추출물은 멱쇠채 추출물, 선등갈퀴 추출물 및 붉은참반디 추출물 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 추출물을 추가로 포함할 수 있다.

상기 멱쇠채 (Scorzonera austriaca subsp. glabra (Rupr.) Lipsch. & Krasch. ex Lipsch.)는 햇빛이 잘 드는 양지에 자라는 국화과의 여러해살이풀로 잎은 굵은 뿌리에서 뭉쳐나고, 줄기는 곧추서며 높이 20-40cm, 길이 14-18cm, 폭 10-18mm이다. 끝은 뾰족하고 밑은 좁아지면서 잎자루처럼 되며 가장자리는 밋밋하다. 줄기잎은 거의 없거나 비늘 모양으로 어긋나며 끝은 뾰족하고 밑은 넓어져서 줄기를 감싸고 털이 없다. 꽃은 지름 2.5cm의 머리모양꽃이 줄기 끝에서 1개씩 달린다. 머리모양꽃은 혀 모양의 양성꽃으로 되며, 화관은 노란색이고 끝은 5갈래로 깊게 갈라진다.

상기 선등갈퀴 (Vicia heptajuga Nakai)는 산지에서 자라는 여러해살이풀로 잎은 어긋나기하고 4~6쌍의 소엽으로 구성된 짝수깃모양겹잎이며 끝에 덩굴손의 흔적이 있으며 밑은 둔하고 끝은 길게 뽀족하며 가장자리는 밋밋하다. 꽃은 6~7월에 홍자색으로 피며 잎겨드랑이에서 2~4cm의 화경이 나와 총상꽃차례로 한쪽으로 치우쳐 달린다.

상기 붉은참반디(Eranthis vaniotiana Lev.)는 숲속에서 자라는 여러해살이풀로 높이는 20~50cm로 자란다. 잎은 잎자루가 기고 둥근 신장 모양이며, 3개로 갈라진 다음 옆갈래조각은 다시 2갈래로 갈라진다. 각 갈래조각은 달걀을 거꾸로 세운듯한 모양이며 3~5개로 얕게 갈라지고 톱니가 있다. 꽃은 6월에 피며 꽃자루는 길이가 3~6cm이다. 뿌리는 짧고 굵으며 흑갈색 수염뿌리가 뭉쳐난다.

바람직하게, 상기 금화규 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 안티폴루션용 조성물은 금화규 추출물에 멱쇠채 추출물, 선등갈퀴 추출물 및 붉은참반디 추출물을 추가로 첨가하여 자외선 및 미세먼지의 노출로 인한 피부 보호 활성 및 피부 자극에 대한 완화 효과를 나타낸다.

보다 바람직하게, 상기 피부 안티폴루션용 조성물은 금화규 추출물 100 중량부에 대하여, 멱쇠채 추출물 40 내지 60 중량부, 선등갈퀴 추출물 40 내지 60 중량부 및 붉은참반디 추출물 40 내지 60 중량부로 포함할 수 있다. 상기 함량 범위내에서 사용하는 경우에, 각 성분간의 혼합 사용에 따른 피부 보호활성, 피부진정 및 완화 효과의 상승 작용을 나타낼 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌증, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 및 스프레이 등으로 제형화 될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형, 수중유(O/W)형 또는 유중수(W/O)형의 제형 또는 연고로 제조될 수 있다.

또한, 필요에 따라 기능적 물질, 예컨대 미백제, 보습제, 항염증제, 항박테리아제, 항진 균제, 비타민, 자외선 차단제, 항생제, 여드름 방지제, 향수, 염료가 포함될 수도 있으며, 이들은 화장품 분야에서 통상적으로 사용되는 양으로 본 발명에 따른 화장용 조성물에 포함될 수 있다.

상기 피부학적으로 허용된 담체는 정제수, 오일, 왁스, 지방산, 지방산 알코올, 지방산 에스테르, 계면활성제, 흡습제, 증점제, 항산화제, 점도 안정화제, 킬레이팅제, 완충제, 방부제, 저급 알코올 등이 포함될 수 있지만, 이에 한정되는 것은 아니며, 그 종류와 농도는 다양하고, 당업자가 본 발명의 범위 내에서 변경할 수 있는 부분을 포함한다.

본 발명의 화장료 조성물로부터 제조되는 화장품은 일반적인 유화제형 및 가용화 제형의 형태로 제조할 수 있다. 유화 제형의 화장품으로는 영양화장수, 크림, 에센스 등이 있으며, 가용화 제형의 화장품으로는 유연화장수가 있다.

상기 화장품은 본 발명의 금화규 추출물 이외에도 피부학적으로 허용된 매질 또는 기제를 함유함으로써 당업계에서 통상적으로 사용되는 국소 적용 또는 전신 적용할 수 있는 보조제 형태로 제조될 수 있다.

적합한 화장품의 제형으로는 예를 들면, 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱(conceal stick)의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물을 첨가할 수 있는 제품으로는, 예를 들어, 수렴화장수, 유연화장수, 영양화장수, 각종 크림, 에센스, 팩, 파운데이션 등과 같은 화장품류와 클렌징, 세안제, 비누, 트리트먼트 또는 미용액 등이 있다. 구체적인 제형으로서는 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징 폼, 클렌징로션, 클 렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 프레스파우더, 루스파우더 또는 아이섀도 등의 제형을 포함한다.

본 발명의 금화규 추출물을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물에 의하면 자외선 및 미세먼지에 노출된 세포의 세포사멸을 저해하는 작용을 통해 피부 보호 활성, 피부 진정 및 완화를 통해 피부 안티폴루션 효과를 나타낼 수 있다.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 복합추출물의 안티폴루션 활성 평가에 대한 실험 결과이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 각질세포를 이용한 세포독성측정에 대한 실험 결과이다.

이하, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본 발명의 실시예에 대하여 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되지 않는다.

[제조예 1: 추출물의 제조]

1. 금화규 추출물의 제조

금화규를 세척하고 건조한 뒤 이를 분쇄하였다. 상기 분쇄물을 에탄올에 혼합하고 이를 2시간 동안 98 내지 100℃를 유지하고, 이를 냉각시킨 뒤 와트만 여과지로 여과하여 그 여액을 수득하였다.

2. 기타 천연 추출물 제조

상기 금화규 추출물(G)의 제조 방법과 동일한 방법을 이용하여 멱쇠채 추출물(S), 선등갈퀴 추출물(V), 붉은참반디 추출물(E)을 제조하였다.

3. 복합 추출물의 제조

상기 금화규 추출물, 멱쇠채 추출물, 선등갈퀴 추출물, 및 붉은참반디 추출물은 하기 표 1과 같은 중량 범위내로 혼합하여 피부 안티폴루션용 조성물로 제조하였다.

	MX1	MX2	MX3	MX4	MX5	MX6
금화규 추출물	100	100	100	100	100	100
멱쇠채 추출물	-	30	40	50	60	70
선등갈퀴 추출물	-	30	40	50	60	70
붉은참반디 추출물	-	30	40	50	60	70

(단위: 중량부)

[실험예 1: 피부 안전성 시험]

1-1. 인체피부모델에서의 피부자극성 측정

금화규 추출물의 생체 안전성을 평가하고자 인체피부모델(Reconstructed Human Epidermis; LabCyte EPIMODEL24 SIT, J-TEC, Japan)에서의 피부자극시험을 진행하였다. LabCyte EPI-MODEL을 새로운 24-well plate에 옮긴 후, human epidermis model media 500 μL를 첨가하여 24시간 배양하였다. 시료를 농도(1%, 10%)를 달리하여 인체피부조직 표면에 15 분간 처리하였다. 시험물질을 제거하고, PBS 로 3번 세척한 후 새로운 배지를 첨가하여 42시간 동안 배양하였다. MTT assay를 이용하여 조직 생존율을 측정하였다. 조직 생존율이 50%를 초과(>)하면 GHS '범주외'에 해당하는 피부 비자극성 물질이라고 판단할 수 있다. 각 시료는 모든 농도에서 조직 생존율이 50% 미만이었으며, 피부 비자극성으로 평가되었다.

또한, 시료 처리시, 인체피부모델의 조직형태학을 확인하고자 H&E 염색을 수행하였다. 시료를 농도(1%, 10%)를 달리하여 인공피부에 처리하였을 때 자극이 나타나지 않았다. 상기 결과는 상기 시료가 인체에 무해할 뿐만 아니라 인체 안전성이 우수함을 시사한다.

1-2. 각질세포를 이용한 세포독성 측정

금화규 추출물에 대한 피부 안전성을 검증하기 위해, 각질세포(HaCaT)에 대한 MTT assay 실험을 수행하였다. 금화규 추출물을 정제수에 농도별(50 mg/L)로 현탁한 후, 세포 생존율을 측정하였다. 세포 독성은 MTT{3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2-5-diphenyltetrazolium bromide} 시약을 이용하여 세포 생존율을 측정하는 모스만(Mosmann)의 방법을 변형하여 수행하였다. 각질세포(HaCaT)를 각각 96-well plate에 1×10⁴cells/well의 농도로 분주하여 37℃, 5% CO₂에서 48시간 동안 배양하였다. 배양 배지를 제거하고 시료를 농도별로 처리한 배지에 48시간 동안 배양한 후 배지를 제거하고 PBS(Phosphate buffered saline)로 반복 세척하였다.

MTT를 5 mg/mL로 PBS에 녹여 50 L 첨가하고 37℃, 5%의 CO₂에서 24시간 동안 배양하였다. DMSO(Dimethylsulfoxide)를 웰(well) 당 100L 넣고, 10 분 동안 교반한 후 540 nm에서 흡광도를 측정하였다.

하기 도 1을 참조하면, 금화규 추출물은 0 ~ 100μg/ml 농도에서 세포 독성이 거의 증가하지 않았다. 이를 통하여 상기 시료가 인체에 무해할 뿐만 아니라 인체 안전성이 우수할 수 있다는 점을 알 수 있다.

1-3. 복합 추출물의 각질세포를 이용한 세포독성 측정

앞서 각질세포를 이용한 세포독성 평가와 동일한 방법에 의해 실험을 진행하였다. 그 결과의 상대적인 비교를 위해, 금화규 추출물(MX1), 복합추출물MX2 내지 MX6을 지수로 평가하였으며, 하기 표 2에 나타내었다. 지수가 높을수록 세포 독성에 대한 안전성이 우수한 것이다.

	MX1	MX2	MX3	MX4	MX5	MX6
세포 독성에 대한 안전성	5	5	6	7	8	6

(단위: 지수)

[실험예 2: 안티폴루션 활성 평가]

일반적으로 공해 물질과 직접적으로 맞닿게 되는 피부 각질세포를 사용하여 질산암모늄(500 ppm)에 의한 세포손상 정도를 측정하였고, 복합 추출물을 농도별(25 μg/ml, 50 μg/ml, 100 μg/ml)로 처리하여 질산암모늄에 의한 세포 손상 정도를 측정하였으며, 이를 비교하여 피부 세포 손상 억제 효과를 확인하였다.

사람 각질 세포 HaCaT를 1×10⁴ cells/ml 농도로 96-well plate에 200 ㎕씩 분주하여 37℃, CO2 인큐베이터에서 24시간 배양하였다. 이때, 배지는 소혈청 10%와 항생제 1%가 포함된 IMDM 배지를 이용하였다.

배양 후 소혈청과 항생제가 배제된 IMDM 배지로 교체한 다음, 질산암모늄을 처리한 후 복합 추출물을 21시간 추가 배양하였다. 그 후 5 mg/ml 농도의 MTT solution을 넣고 3시간 배양한 다음, 배지를 제거하고 dimethyl sulfoxide를 150 ul씩 각 well에 넣어주고 10분간 shaking 하고, 570 nm로 흡광도를 측정하였다.

그 결과를 도 2 및 표 3에 나타내었다.

복합 추출물(농도)	Blank (-)	Blank (+)	100 μg/ml	50 μg/ml	25 μg/ml
세포 증식률(%)	100	45	66	84	71

[실험예 3: 항염 활성 시험]

NF-kB reporter assay를 통해 NF-kB 전사 억제 효과를 측정하였다. LPS에 의해 유도되는 iNOS, COX-2, IFN-β 또는 TNF-α 등은 전사인자인 NF-kB에 의해 발현된다.

NF-kB는 세포질에서는 IkB와 복합체 상태로 불활성화되어 있다가 I-kB-αkinase에 의해 I-kB-α가 인산화되면 결합되어 있던 복합체가 분해되어 NF-kB로 활성화되어 핵 내로 이동(translocation)한다.

NF-kB의 표적유전자의 발현을 유도하여 염증작용을 일으킨다. 다발성 경화증(multiple sclerosis)과 같은 염증질환에 작용하는 TRIF는 인터페론-β를 유발하는 수용체를 가지는 TIP-도메인으로 TLRs(toll-like-receptors)의 활성에 반응하는 수용체로서, 상기 TLRs는 침입 미생물의 특정 구성을 인식하여 항원에 대한 면역반응을 활성화한다.

상기 수용체는 잘 보존된 병원성 패턴을 인식해서 염증성 사이토카인의 방출을 자극하기 위해 신호를 활성화한다.

IRF-3(인터페론자극유전인자3)은 인터페론α/β자극에 의해 유도되는 전사 활성화 인자로 대부분 인터페론 유도 유전자의 전사조절영역에 있는 인터페론자극반응순서(ISRE)에 결합하여 그 전사를 활성화한다.

제조자의 프로토콜(Jin et al., 2009)에 따라 12-웰 플레이트에 PEI 방법을 이용하여 β갈락토시다제(β와 같은 수용체 분자(MyD88 및 TRIF)의 존부에 따라 NF-kB-Luc 또는 TRIF 각각을 포함하는 플라스미드 1μg을 HEK293(1×10⁶cells/ml)세포에 주입(transfection)하였다.

24시간 동안 배양한 후 LPS(100 ng/ml) 및 20 μg/Ml 농도의 추출물을 처리하고, 24시간 후에 루시퍼라제 분석법(Luciferase assays)을 이용하여 NF-kB의 활성 및 IRF-3 활성을 측정하였다.

루시퍼라제 분석법은 제조자의 프로토콜(Jung et al., 2009)에 보고된 루시퍼라제 분석 시스템(Promega Co., USA)을 이용하여 수행하였으며, 분석 결과는 하기 표 4와 같다.

구분	NF-kB 활성	IRF-3 활성
MX1	1	1
MX2	1.55	1.85
MX3	1.64	1.94
MX4	1.7	1.94
MX5	1.79	2
MX6	1.71	2.01

표 4를 참조하면, 금화규 추출물을 포함하는 복합 추출물에 의해 NF-kB의 활성 및 IRF-3의 활성이 현저히 감소하였다.

상기 결과는 상기 추출물 시료가 NF-kB의 전사를 효과적으로 억제하므로 이를 통해 염증을 저해 또는 완화시킬 수 있으며 염증 질환의 예방 및 개선 효과가 있음을 시사한다.

[실험예 4: 항산화 활성 시험]

자유라디칼인 DPPH(1, 1-diphenyl-2-picryl hydrazyl)를 이용한 자유라디칼 소거활성 측정방법을 이용하여 활성산소 분해 효과를 확인하였다.

시험관에 4mL 메탄올을 넣고 상기 40μg/mL 농도의 추출물을 첨가하였다. 0.15mM DPPH 용액 1mL를 첨가하여 실온에서 30분간 반응시킨 후 520 nm에서 흡광도를 측정하였다.

기질과 DPPH가 없는 Initial(Ai)과 blank(Ab)를 측정하였으며, 양성대조군으로 α-tocopherol 및 BHT를 사용하였다. 결과는 하기 표 5에 나타내었다.

구분	DPPH 소거율%
α-tocopherol	76.5
BHT	71.5
MX1	66.7
MX2	69.7
MX3	76.3
MX4	79.7
MX5	74.5
MX6	69.7

표 5를 참조하면, 상기 복합추출물 시료는 당업계에 널리 알려진 α-tocopherol 및 BHT와 동등하거나 높은 수준의 자유라디칼 소거활성을 가진 것으로 평가되었다.

즉, MX1 ~ MX6의 복합추출물 시료 의해 활성산소의 분해가 촉진될 수 있으며, 상기 결과는 항산화 활성에 의한 피부 노화 방지 및 피부 상태 개선 효과가 우수함을 시사한다.

[실험예 5: 피부 진정 효과 확인]

현재 피부 알레르기 증상이 없는 20 내지 30대 남녀 10명을 대상으로 하완의 안쪽 부위에 테입 스트리핑 법(Tape Stripping Method)을 통한 피부자극을 유발한 후, 본 발명에 따른 천연물 발효 추출물을 함유한 크림과 함유되지 않는 크림 도포하여 유발된 자극이 진정되는 정도를 상대평가 하였다. 먼저 하완의 안쪽 부위 두곳에 일반 스카치 테잎으로 30회 테이핑을 하여 피부 홍반을 유발하였다. 홍반 유발된 후, 본 발명에 따른 복합추출물(MX1 내지 MX6)을 함유한 크림을 도포하였으며, 본 발명에 따른 복합추출물을 함유하지 않은 크림(대조예)을 도포하였다. 도포 후 3시간 후 피부진정 정도를 평가하였다.

<피부자극정도(홍반) 평가>

0 (무반응) 1 (매우 경미한 홍반흔적) 2 (희미한 또는 가벼운 홍반)

3 (경계가 뚜렷하나 약한 홍반) 4 (뚜렷한 홍반) 5 (심한 홍반)

시료명	피부 자극 정도
시료명	좌	우
대조예	2	2
MX1을 함유하는 크림	1	0
MX2를 함유하는 크림	1	1
MX3을 함유하는 크림	1	0
MX4를 함유하는 크림	0	0
MX5를 함유하는 크림	0	0
MX6을 함유하는 크림	1	1

상기 표 6에서 확인되는 바와 같이, 본 발명 금화규, 멱쇠채, 선등갈퀴 및 붉은참반디 복합추출물을 함유하는 실시예 MX3 내지 MX5를 포함하는 크림은 상기 복합추출물을 함유하지 않은 대조예나 MX1을 포함한 크림, 바람직한 중량부 범위에서 벗어난 MX 2및 MX6을 포함하는 크림에 비해 피부 자극 완화 효과가 우수하였다. 그 중에서도 MX4를 함유하는 크림에서 가장 우수한 피부 자극 완화 효과를 나타내었다.

이상에서 본 발명의 바람직한 실시예에 대하여 상세하게 설명하였지만 본 발명의 권리범위는 이에 한정되는 것은 아니고 다음의 청구범위에서 정의하고 있는 본 발명의 기본 개념을 이용한 당업자의 여러 변형 및 개량 형태 또한 본 발명의 권리범위에 속하는 것이다.

Claims

금화규(Aurea Helianthus) 추출물을 유효성분으로 포함하는
피부 안티폴루션용 조성물.
제 1항에 있어서,
상기 조성물은 자외선 및 미세먼지에 노출된 세포의 세포사멸을 저해하는 작용을 통해 피부 보호 활성을 나타내는 것인
피부 안티폴루션용 조성물.
제 1항에 있어서,
상기 조성물은 피부 진정 및 완화 효과를 나타내는 것인
피부 안티폴루션용 조성물.
제 1항에 있어서,
상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 6의 알코올 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 추출 용매를 이용하여 추출된
피부 안티폴루션용 조성물.
제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항에 따른 피부 안티폴루션용 조성물을 포함하는 진정 크림.
제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항에 따른 피부 안티폴루션용 조성물을 포함하는 재생 크림.
제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항에 따른 피부 안티폴루션용 조성물을 포함하는 로션.