KR102072250B1 - Ｒａｎｋｌ 결합 펩티드를 이용한 골 재흡수 억제 - Google Patents

Ｒａｎｋｌ 결합 펩티드를 이용한 골 재흡수 억제 Download PDF

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Abstract

골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키는 방법을 제공한다. 더욱 구체적으로, 피험체에서 예상 밖으로 장기간에 걸쳐 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성은 그대로 효과적으로 억제시키면서, 특히, 투여량에 있어서, RANKL에 대한 폴리펩티드를 더 적은 빈도로 및/또는 보다 저용량으로 투여하는 것인 방법을 제공한다.

Description

ＲＡＮＫＬ 결합 펩티드를 이용한 골 재흡수 억제{INHIBITION OF BONE RESORPTION WITH RANKL BINDING PEPTIDES}
본 발명은 핵 인자 카파 B 리간드의 수용체 활성화제(RANKL: Receptor Activator of Nuclear factor Kappa B Ligand)에 대한 아미노산 서열을 사용하여 장기간 동안 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키는 방법에 관한 것이다. 더욱 구체적으로, 본 발명은 RANKL 매개 골 재흡수 또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 것으로서, 특정 용량 범위의 RANKL에 대한 폴리펩티드를 제공한다.
골의 재형성(remodelling)(교체(turnover))은 성인 골격이 연속적으로 재흡수(제거) 되고 형성(대체) 되는 과정이다. 골 재형성은 조골세포에 의한 골 간질의 합성 및 파골세포에 의한 그의 재흡수를 포함한다. 조혈 세포로부터 유도된 파골세포는 골 조직을 재흡수할 수 있는 능력을 가진 고유 형태의 조직 대식세포이다. 조골세포는 골 콜라겐을 분비할 수 있는 능력을 가진 분화된 섬유아세포이다. 이들 골 세포의 활성들 사이에 골 형성 및 골 재흡수 과정을 연결하는 정교한 공동작업이 존재한다.
골 재형성은 RANKL/RANK 및 RANKL 유인(decoy) 수용체 OPG 사이의 균형에 의해 제어된다. RANKL 및 그의 수용체 RANK는 파골세포의 발생 및 활성화에 필수적이다. 분비 단백질인 OPG는 파골세포 성숙 및 파골세포 활성화에 대해 효과적인 억제제이다. 정상적인 골 항상성에서, RANKL 및 OPG는 단핵세포 전구체로부터의 파골세포의 생성을 엄격하게 제어하는 사이토킨 주축에 참여한다. 조골세포 및 골수 기질 세포에 의해 발현되는 RANKL은 그의 기능적 수용체인 RANK에 결합하여 전구체 세포로부터의 파골세포의 분화, 및 성숙 파골세포의 증식 및 활성을 자극한다. 조골세포, 기질 세포, 수지상 세포 및 거핵세포에 의해 발현되는 OPG는 RANKL에 대한 가용성 유인 수용체로서 작용함으로써 상기 과정을 제한한다.
TNF 패밀리 분자 RANKL은 단일 유전자(rankl)에 의해 인간 염색체 13q14에서 코딩된다. RANKL mRNA 는 골 및 골수 뿐만 아니라, 임파 조직(림프절, 흉선, 비장, 태아의 간 및 페이어 패치(Peyer's patches))에서 가장 높은 수준으로 발현된다(문헌 [Anderson et al. 1997, Nature 390: 175-179]; [Wong et al. 1997, J. Biol. Chem. 272: 25190-25194]; [Lacey et al. 1998, Cell 93: 165-176]; [Yasuda et al. 1998, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95: 3597-3602]). RANKL mRNA의 선택적 스플라이싱은 316개 또는 270개 아미노산을 이루어진 II형 막간 당단백질로서의 발현, 또는 243개 아미노산으로 이루어진 가용성 리간드로서의 발현을 허용한다(문헌 [Kong et al. 1999, Nature 397: 315-323]; [Nagai et al. 2000, Biochem Biophys. Res. Cornmun. 269: 532-536]). 추가로, RANKL은 TNF-알파 컨버타제를 비롯한 메탈로프로테이나제에 의해 그의 막 결합 상태로부터 유리될 수 있다(문헌 [Lum et al. 1999, J. Biol. Chem. 274: 13613-13618]). RANKL의 4가지 이소형 모두 파골세포형성을 촉발시킬 수 있는 삼량체 분자로 회합된다.
전구파골세포 상에서 발현되는 RANK(NF카파B의 수용체 활성화제; 이는 또한 TRANCE-R, ODAR, 또는 TNFRSF11A로서도 알려져 있다)는 상기 세포 상의 RANKL에 대한 유일한 수용체이다(문헌 [Li et al. 2000, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97: 1566-1571]). RANK는 RANKL에 의해 활성화된 후, 이어서 TNF 수용체 회합된(TRAF: TNF receptor-associated) 패밀리의 구성원과 상호작용하고, 핵 인자(NF: nuclear factor)-카파 B 및 c-Fos, JNK, c-src, 및 세린/트레오닌 키나제 Akt/PKB를 활성화시킨다(문헌 [Anderson et al. 1997, Nature 390: 175-179]; [Hsu et al. 1999, Proc. Acad. Sci. USA 96: 3540-3545]).
OPG(오스테오프로테그린; "골 보호 인자"; 이는 또한 파골세포생성 억제 인자(OCIF: osteoclastogenesis inhibitory factor)로도 공지됨)는 RANKL에 대한 유인 수용체로서 작용하고, RANKL 결합에 대하여 RANK와 경쟁하는 것인, TNF 수용체 패밀리와 상동성이고, 활성화된 조골세포에 의해 생산되고 방출된, 110 kDa의 가용성 이황화 결합된 동종이량체 당단백질이다(문헌 [Simonet et al. 1997, Cell 89: 309-319]). 결과적으로, OPG는 파골세포 성숙 및 파골세포 활성화에 대해 효과적인 억제제이고(문헌 [Simonet et al. 1997, Cell 89: 309-319]; [Lacey et al. 1998, Cell 93: 165-176]; [Kong et al. 1999, Nature 397: 315-323]), 이로써 골 재흡수를 감소시킨다.
골 형성 및 파괴에 대한 매개 인자로서의 OPG/RANKL/RANK 시스템에 관한 보다 상세한 개요는 문헌 [Khosla, (2001 Endocrinology 142: 5050-5055)], [Holstead Jones et al. (2002, Ann. Rheum. Dis. 61 (Suppl II)]: ii32-ii39)], [Bezerra et al. (2005, Brazilian J. Med. Biol. Res. 38: 161-170)] 및 [McClung (2006, Current Osteoporosis Reports 4: 28-33)]에 제시되어 있다.
몇몇 골 장애는 골 재형성 활성의 재흡수 및 형성 성분들 사이에 불균형(골 항상성의 해제)이 있을 때 발생된다. 파골세포 및 조골세포 활성 사이의 불균형은 광범위한 호르몬 변화 또는 염증 및 성장 인자의 교란, 예컨대, OPG 및 RANKL 사이의 균형 변경으로부터 유발될 수 있다. 골 재흡수가 골 형성에 비하여 더 큰 경우, 시간에 따른 골의 순 손실(net loss)이 일어난다. 이는 결국 낮은 골 질량(골감소증) 또는 골다공증을 일으킬 수 있다. 골 형성이 재흡수를 초과하는 경우, 골 질량의 순 증가(골화석증)가 일어난다.
RANKL가 보다 높거나, HPG가 보다 낮거나, 또는 이 둘 모두에 해당되는 경우, 그에 기인하여 일어나는 과도한 골 손실 또는 파괴는 폐경후 골다공증(문헌 [Eghbali-Fatourechi et al. 2003, Journal of Clinical Investigation 111: 1221-1230]; [Tsangari et al. 2004, Bone 35: 334-342]; [Abdallah et al. 2005, Calcified Tissue International 76: 90-97])를 비롯한, 많은 질환 상태에 연루되어 있다.
골절의 위험을 감소시키는 약리학적 제제가 10년 넘게 이용되어 왔다. 이화작용 억제 약물(에스트로겐, 비스포스포네이트, 칼시토닌 및 선택적 에스트로겐 수용체 조절제)은 골 재흡수를 감소시키는 반면, 동화작용제, 예컨대, 재조합 인간 부갑상선 호르몬(PTH: parathyroid hormone)은 골 형성 및 골 크기를 증가시킨다 . 비스포스포네이트 부류의 약물은 골다공증의 치료에 있어 가장 빈번하게 사용되는 약물이다. 비록 이러한 약물 부류가 일반적으로 매우 안전하지만, 경구 투약은 복잡하고, 소수의 임상 실험 환자에서 일어난 위장관 부작용과 연관이 있다. 임상 시험은 정맥내 비스포스포네이트 투약의 간격을 증가시키는 것에 관해 평가하는 중이다.
OPG/RANKL/RANK 시스템이 골다공증과 같은 골 질환 및 장애의 발병에서 중추적 조절 인자로서의 역할을 한다는 최근의 발견은 치료제를 위한 유례없는 표적을 제공한다 . 실험실 동물 및 인간에서, OPG 형태를 투여한 경우, 파골세포 활성은 현저히 억제되었고, 골 강도는 개선되었다(문헌 [Bekker et al. 2001, J. Bone Miner. Res. 16: 348-360]; [Campagnuolo et al. 2002, Arthritis Rheum. 46: 1926-1936]; [Bezerra et al. 2005, Brazilian J. Med. Biol. Res. 38: 161-170]; [McClung 2006, Current Osteoporosis Reports 4: 28-33]). 인간에서의 초기 연구에서 RANKL에 대한 완전한 인간 항체(데노수맙(Denosumab))는 골 교체를 감소시키고, 골 밀도를 개선시켰다(문헌 [Body et al. 2003, Cancer 97: 887-892]; [Bekker et al. 2004, J. Bone Miner. Res. 19: 1059-1066]; [McClung 2006, Current Osteoporosis Reports 4: 28-33]; [Lewiecki 2006, Expert Opin. Biol. Ther. 6: 1041-1050]; [McClung et al. 2006, N. Engl. J. Med. 354: 821-831]). 그러나, 이러한 완전 항체들은 전체 크기의 항체에 대한 단점, 예컨대, 높은 생산 비용, 낮은 안정성 및 이들의 큰 크기(이는 예를 들면, 특정의 숨겨진 에피토프에의 접근을 방해한다)에 직면한다.
본 발명의 요약
본 출원인은 인간 피험체에게 본원에 기술된 바와 같은, RANKL에 특이적으로 결합하는 폴리펩티드(이는 또한 본원에서 "본 발명의 폴리펩티드(들)"로도 지칭된다)를 투여하는 것이 관련 바이오마커(예컨대, CTX-1, NTX-1 TRACP5b, P1NP, 및/또는 BAP)의 변화를 통해 관찰되는 바와 같이, 인간 피험체에서 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성에 대해 예상 밖으로 지속적이고 장기간에 걸쳐 영향을 준다는 것을 발견하게 되었다. 예를 들어, 골 대사 및/또는 골 항상성에 대한 하나 이상의 마커의 변화를 투여 후 30일 이상 동안 측정할 수 있다. 골 대사 및/또는 골 항상성에 대한 하나 이상의 마커의 변화는 장기간 동안, 예컨대, 60일 이상, 90일 이상, 120일 이상, 150일 이상, 180일 이상, 210일 이상, 240일 이상, 270일 이상, 300일 이상, 330일 이상, 또는 360일 이상 동안 지속될 수 있다. 상기 효과 또한 신속하게 달성되는데, 일부 실시양태에서, 바이오마커의 감소는 RANKL에 특이적으로 결합하는 폴리펩티드 투여 후 8시간 경과시에 관찰되었다.
RANKL 매개 골 재흡수 및 파골세포 활성에 대한 예상 밖의 지속적이고, 장기간에 걸친 영향은 주로 배경 기술 및 임상 전 정보에 기반하여 예측된 것보다 생체내에서의 본 발명의 폴리펩티드의 효능(IC50)이 훨씬 더 우수한 것이 원인이 되었다. 상기와 같이 본 발명의 폴리펩티드의 효능이 더 우수하기 때문에, 임상 전 형성에 기반하여 평가된 것과 비교하여, 인간 피험체에서 RANKL 매개 골 재흡수 및 파골세포 활성에 대한 예상 밖의 지속적이고, 장기간에 걸친 영향이 관찰되었다. 그 결과, (관련 바이오마커, 예컨대, CTX-1, NTX-1, TRACP5b, P1NP, 및/또는 BAP의 변화를 통해 관찰되는) RANKL 매개 골 재흡수 및 파골세포 활성에 대해 동일한 효과를 얻기 위해서 보다 소량의 치료제 분자(즉, 보다 저용량)를 투여해야 하거나, 또는 치료제 분자를 더 적은 빈도로 투약하는 것을 적용시켜야 한다.
그러므로, 본 발명은 특히 투여량을 고려하여, 예상 밖으로 장기간에 걸쳐에 피험체에서 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키는, 본원에 기술된 폴리펩티드의 용도에 관한 것이다. 본 발명은 또한 특히 투여량을 고려하여, 예상 밖으로 장기간에 걸쳐에 피험체에서 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 효과적으로 억제시키는 것은 계속해서 유지하면서, 피험체에게 본원에 기술된 폴리펩티드를 더 적은 빈도로 및/또는 보다 저용량으로 투여하는 것을 제공한다. 특히, 본 발명은 현재 사용되고 있고/거나, 당업계에 공지되어 있는 작용제, 조성물, 방법 및/또는 투약 스케줄과 비교하여, RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키는 데 있어서 등가인 효과를 얻기 위해 더 적은 빈도로 투약할 수 있거나, 보다 저용량으로 투여할 수 있는 능력을 비롯한, 특정의 이점을 가지는 약리학상 활성인 작용제, 조성물, 방법 및/또는 투약 스케줄을 제공한다.
본 발명의 한 측면에 따라서, 피험체에서 골 재흡수 또는 파골세포 활성을 억제시키는 방법을 제공한다. 본 방법은 피험체에게 핵 인자 카파 B 리간드의 수용체 활성화제(RANKL)(이는 또한 "본 발명의 폴리펩티드"로도 지칭된다)에 특이적으로 결합하는 폴리펩티드를 투여하는 단계를 포함한다. 투여되는 폴리펩티드의 양은 투여 후 30일 이상 동안 골 대사 및/또는 골 항상성에 대한 하나 이상의 마커를 변화시키는 데 효과적이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.01 mg/kg 내지 약 10 mg/kg인 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 골 대사의 마커는 I형 콜라겐의 가교 결합 텔로펩티드(CTX-1), I형 콜라겐의 N 말단 텔로펩티드(NTX-1)는 타르트레이트 저항성 산성 포스파타제 이소형 5b(TRACP5b: tartrate-resistant acid phosphatase isoform 5b), I형 프로콜라겐의 N 말단 프로펩티드(P1NP: N-terminal propeptide of type I procollagen) 및 골 특이 알칼리성 포스파타제(BAP: bone-specific alkaline phosphatase)로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 각각 CTX-1, NTX-1, 또는 TRACP5b에 특이적인 ELISA 검정법; P1NP에 특이적인 방사면역검정법, 또는 BAP에 특이적인 면역효소 검정법을 이용하여 CTX-1, NTX-1, TRACP5b, P1NP 및 BAP 중 하나 이상을 측정한다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 피험체에서 골 재흡수 또는 파골세포 활성을 억제시키는 방법을 제공한다. 본 방법은 피험체에게 핵 인자 카파 B 리간드의 수용체 활성화제(RANKL)에 특이적으로 결합하는 폴리펩티드(본 발명의 폴리펩티드)를 투여하는 단계를 포함한다. 투여되는 폴리펩티드의 양은 투여 후 30일 이상 동안 I형 콜라겐의 가교 결합 텔로펩티드(CTX-1)의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소시키는 데 효과적이다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 CTX-1의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 약 30일 이상 동안 CTX-1의 혈청 수준을 30% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.003 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.003 mg/kg 내지 약 0.03 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 약 30일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.003 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 60일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 CTX-1의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 약 60일 이상 동안 CTX-1의 혈청 수준을 30% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.01 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.01 mg/kg 내지 약 0.1 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 약 30일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.01 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 90일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 CTX-1의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 약 90일 이상 동안 CTX-1의 혈청 수준을 30% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.01 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.01 mg/kg 내지 약 0.1 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 약 90일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.01 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 120일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 CTX-1의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 약 120일 이상 동안 CTX-1의 혈청 수준을 30% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.01 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.01 mg/kg 내지 약 0.1 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 약 120일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.01 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 150일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 CTX-1의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 약 150일 이상 동안 CTX-1의 혈청 수준을 30% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.01 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.01 mg/kg 내지 약 0.1 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 약 150일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.01 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, CTX-1은 일부 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 180일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 CTX-1의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 약 180일 이상 동안 CTX-1의 혈청 수준을 30% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.1 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 1 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.1 mg/kg 내지 약 10 mg/kg인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.1 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 약 180일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.1 mg/kg 이하인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 약 180일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 1 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, CTX-1은 일부 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 210일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 CTX-1의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 약 210일 이상 동안 CTX-1의 혈청 수준을 30% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.1 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 1 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.1 mg/kg 내지 약 10 mg/kg인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.1 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 약 210일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.1 mg/kg 이하인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 약 210일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 1 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, CTX-1은 일부 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 270일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 CTX-1의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 약 270일 이상 동안 CTX-1의 혈청 수준을 30% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.1 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 1 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.1 mg/kg 내지 약 10 mg/kg인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.1 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 약 270일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.1 mg/kg 이하인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 약 270일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 1 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 투여되는 폴리펩티드의 양은 투여 후 약 30일 이상 동안 I형 콜라겐의 가교 결합 텔로펩티드(CTX-1)의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소시키는 데 효과적이다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 CTX-1의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 약 30일 이상 동안 CTX-1의 혈청 수준을 45% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.01 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.01 mg/kg 내지 약 0.1 mg/kg인 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.01 mg/kg 내지 약 3 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 약 30일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.01 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 투여되는 폴리펩티드의 양은 투여 후 약 60일 이상 동안 I형 콜라겐의 가교 결합 텔로펩티드(CTX-1)의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소시키는 데 효과적이다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 CTX-1의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 약 60일 이상 동안 CTX-1의 혈청 수준을 45% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.01 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.01 mg/kg 내지 약 0.1 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 약 60일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.01 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 투여되는 폴리펩티드의 양은 투여 후 약 90일 이상 동안 I형 콜라겐의 가교 결합 텔로펩티드(CTX-1)의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소시키는 데 효과적이다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 CTX-1의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 약 90일 이상 동안 CTX-1의 혈청 수준을 45% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.03 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.03 mg/kg 내지 약 0.3 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 약 90일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.03 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 약 30일 내지 3개월 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 CTX-1의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 약 30일 이상 내지 3개월 동안 CTX-1의 혈청 수준을 45% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.01 mg/kg 내지 약 0.3 mg/kg인 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.03 mg/kg 내지 약 0.3 mg/kg인 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 약 30일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 약 0.03 mg/kg 내지 약 0.3 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 약 30일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.03 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 투여되는 폴리펩티드의 양은 투여 후 약 120일 이상 동안 I형 콜라겐의 가교 결합 텔로펩티드(CTX-1)의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소시키는 데 효과적이다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 CTX-1의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 약 120일 이상 동안 CTX-1의 혈청 수준을 45% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.1 mg/kg인 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.1 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 약 120일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.1 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 약 150일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 CTX-1의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 150일 이상 동안 CTX-1의 혈청 수준을 45% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 1 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 1 mg/kg 내지 약 10 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 약 150일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 1 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 180일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 CTX-1의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 180일 이상 동안 CTX-1의 혈청 수준을 45% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 1 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 1 mg/kg 내지 약 10 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 약 180일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 1 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 약 3개월 내지 6개월 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 CTX-1의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 약 3개월 내지 6개월 동안 CTX-1의 혈청 수준을 45% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.3 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 약 3개월 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 약 0.3 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 약 3개월 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.3 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 6개월 이상 내지 1년 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 CTX-1의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 약 6개월 내지 1년 동안 CTX-1의 혈청 수준을 45% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 1 mg/kg 내지 약 10 mg/kg인 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 1 mg/kg 내지 약 3 mg/kg인 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 약 6개월 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 약 1 mg/kg 내지 약 3 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 약 6개월 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 1 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, CTX-1은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여, 투여 후 30일 이상 동안, 예컨대, 투여 후 60일 이상 동안, 투여 후 90일 이상 동안, 투여 후 120일 이상 동안, 투여 후 150일 이상 동안, 투여 후 180일 이상 동안, 상기 기간의 중간 기간 동안, 또는 본원 전역 어디에나 기술되어 있고, 본원에서 제공하는 실시예 및 도면에 제시되어 있는 바와 같이, 상기 기간보다 더 긴 장기간 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 50% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 CTX-1의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 50% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 60일 이상 동안, 투여 후 90일 이상 동안, 투여 후 120일 이상 동안, 투여 후 150일 이상 동안, 투여 후 180일 이상 동안, 상기 기간의 중간 기간 동안, 또는 본원 전역 어디에나 기술되어 있고, 본원에서 제공하는 실시예 및 도면에 제시되어 있는 바와 같이, 상기 기간보다 더 긴 장기간 동안 CTX-1의 혈청 수준을 50% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다.
일부 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 30일 이상 동안, 예컨대, 투여 후 60일 이상 동안, 투여 후 90일 이상 동안, 투여 후 120일 이상 동안, 투여 후 150일 이상 동안, 상기 기간의 중간 기간 동안, 또는 본원 전역 어디에나 기술되어 있고, 본원에서 제공하는 실시예 및 도면에 제시되어 있는 바와 같이, 상기 기간보다 더 긴 장기간 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 60% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 CTX-1의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 60% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 60일 이상 동안, 투여 후 90일 이상 동안, 투여 후 120일 이상 동안, 투여 후 150일 이상 동안, 상기 기간의 중간 기간 동안, 또는 본원 전역 어디에나 기술되어 있고, 본원에서 제공하는 실시예 및 도면에 제시되어 있는 바와 같이, 상기 기간보다 더 긴 장기간 동안 CTX-1의 혈청 수준을 60% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다.
일부 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 30일 이상 동안, 예컨대, 투여 후 60일 이상 동안, 투여 후 90일 이상 동안, 투여 후 120일 이상 동안, 상기 기간의 중간 기간 동안, 또는 본원 전역 어디에나 기술되어 있고, 본원에서 제공하는 실시예 및 도면에 제시되어 있는 바와 같이, 상기 기간보다 더 긴 장기간 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 CTX-1의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 60일 이상 동안, 투여 후 90일 이상 동안, 투여 후 120일 이상 동안, 상기 기간의 중간 기간 동안, 또는 본원 전역 어디에나 기술되어 있고, 본원에서 제공하는 실시예 및 도면에 제시되어 있는 바와 같이, 상기 기간보다 더 긴 장기간 동안 CTX-1의 혈청 수준을 70% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 투여되는 폴리펩티드의 양은 투여 후 30일 이상 동안 I형 콜라겐의 가교 결합 텔로펩티드(CTX-1)의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소시키는 데 효과적이다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 CTX-1의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 약 30일 이상 동안 CTX-1의 혈청 수준을 70% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.03 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.03 mg/kg 내지 약 0.3 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 약 30일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.03 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 60일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 CTX-1의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 60일 이상 동안 CTX-1의 혈청 수준을 70% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.1 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.1 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 약 30일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.1 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 90일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 CTX-1의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 90일 이상 동안 CTX-1의 혈청 수준을 70% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.1 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.1 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 약 90일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.1 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 120일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 CTX-1의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 120일 이상 동안 CTX-1의 혈청 수준을 70% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.1 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.1 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 약 120일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.1 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 30일 이상 동안, 예컨대, 투여 후 60일 이상 동안, 투여 후 90일 이상 동안, 상기 기간의 중간 기간 동안, 또는 본원 전역 어디에나 기술되어 있고, 본원에서 제공하는 실시예 및 도면에 제시되어 있는 바와 같이, 상기 기간보다 더 긴 장기간 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 80% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 CTX-1의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 80% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 60일 이상 동안, 투여 후 90일 이상 동안, 상기 기간의 중간 기간 동안, 또는 본원 전역 어디에나 기술되어 있고, 본원에서 제공하는 실시예 및 도면에 제시되어 있는 바와 같이, 상기 기간보다 더 긴 장기간 동안 CTX-1의 혈청 수준을 80% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.1 mg/kg인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.1 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 약 90일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 80% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.1 mg/kg 이하인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 약 90일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 80% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.3 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 투여되는 폴리펩티드의 양은 투여 후 약 60일 동안 I형 콜라겐의 가교 결합 텔로펩티드(CTX-1)의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소시키는 데 효과적이고, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 매달 약 0.003 mg/kg 이하이다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드를 제공하는 것으로서, 여기서, 폴리펩티드는 매달 약 0.003 mg/kg 이하인 양으로 투여되고, 여기서, CTX-1의 혈청 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 투여 후 약 60일 동안 30% 이상으로 유지되는 것인, 본 발명의 폴리펩티드를 제공한다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 투여되는 폴리펩티드의 양은 투여 후 약 150일 동안 I형 콜라겐의 가교 결합 텔로펩티드(CTX-1)의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소시키는 데 효과적이고, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 매달 약 0.01 mg/kg 이하이다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드를 제공하는 것으로서, 여기서, 폴리펩티드는 매달 약 0.01 mg/kg 이하인 양으로 투여되고, 여기서, CTX-1의 혈청 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 투여 후 약 150일 동안 30% 이상으로 유지되는 것인, 본 발명의 폴리펩티드를 제공한다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 투여되는 폴리펩티드의 양은 투여 후 약 90일 동안 I형 콜라겐의 가교 결합 텔로펩티드(CTX-1)의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소시키는 데 효과적이고, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 매달 약 0.03 mg/kg 이하이다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드를 제공하는 것으로서, 여기서, 폴리펩티드는 매달 약 0.03 mg/kg 이하인 양으로 투여되고, 여기서, CTX-1의 혈청 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 투여 후 약 90일 동안 30% 이상으로 유지되는 것인, 본 발명의 폴리펩티드를 제공한다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 투여되는 폴리펩티드의 양은 투여 후 약 210일 동안 I형 콜라겐의 가교 결합 텔로펩티드(CTX-1)의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소시키는 데 효과적이고, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 매달 약 0.1 mg/kg 이하이다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드를 제공하는 것으로서, 여기서, 폴리펩티드는 매달 약 0.1 mg/kg 이하인 양으로 투여되고, 여기서, CTX-1의 혈청 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 투여 후 약 210일 동안 30% 이상으로 유지되는 것인, 본 발명의 폴리펩티드를 제공한다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 투여되는 폴리펩티드의 양은 투여 후 약 210일 동안 I형 콜라겐의 가교 결합 텔로펩티드(CTX-1)의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소시키는 데 효과적이고, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 매달 약 0.3 mg/kg 이하이다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드를 제공하는 것으로서, 여기서, 폴리펩티드는 매달 약 0.3 mg/kg 이하인 양으로 투여되고, 여기서, CTX-1의 혈청 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 투여 후 약 210일 동안 30% 이상으로 유지되는 것인, 본 발명의 폴리펩티드를 제공한다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 투여되는 폴리펩티드의 양은 투여 후 약 270일 동안 I형 콜라겐의 가교 결합 텔로펩티드(CTX-1)의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소시키는 데 효과적이고, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 매달 약 1 mg/kg 이하이다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드를 제공하는 것으로서, 여기서, 폴리펩티드는 매달 약 1 mg/kg 이하인 양으로 투여되고, 여기서, CTX-1의 혈청 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 투여 후 약 270일 동안 30% 이상으로 유지되는 것인, 본 발명의 폴리펩티드를 제공한다.
일부 실시양태에서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 투여 후 8시간까지 I형 콜라겐의 가교 결합 텔로펩티드(CTX-1)의 혈청 수준을 30% 이상만큼 감소시키는 데 효과적이다.
일부 실시양태에서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 투여 후 8시간까지 I형 콜라겐의 가교 결합 텔로펩티드(CTX-1)의 혈청 수준을 45% 이상만큼 감소시키는 데 효과적이다.
일부 실시양태에서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 투여 후 8시간까지 I형 콜라겐의 가교 결합 텔로펩티드(CTX-1)의 혈청 수준을 70% 이상만큼 감소시키는 데 효과적이다.
일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 단일 용량으로 투여된다.
일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 피하로 투여된다.
일부 실시양태에서, CTX-1에 대한 ELISA 검정법에 의해 측정되는 바와 같이, 골 재흡수는 피험체에서 억제된다.
일부 실시양태에서, 피험체는 골다공증을 앓는 피험체, 예를 들어, 인간 피험체, 예컨대, 여성 인간 피험체이고, 일부 특정 실시양태에서, 폐경 후 여성 인간 피험체이다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 피험체에서 골 재흡수 또는 파골세포 활성을 억제시키는 방법을 제공한다. 본 방법은 피험체에게 핵 인자 카파 B 리간드의 수용체 활성화제(RANKL)에 특이적으로 결합하는 폴리펩티드(본 발명의 폴리펩티드)를 투여하는 단계를 포함한다. 투여되는 폴리펩티드의 양은, 투여 후 30일 이상 동안, 뇨 중 I형 콜라겐의 N 말단 텔로펩티드(NTX-1) : 크레아티닌의 비로서 측정되는 NTX-1를 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소시키는 데 효과적이다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 I형 콜라겐의 N 말단 텔로펩티드(NTX-1)의 뇨 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 약 30일 이상 동안 I형 콜라겐의 N 말단 텔로펩티드(NTX-1)의 뇨 수준을 30% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.01 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.01 mg/kg 내지 약 0.1 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 약 30일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.01 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 60일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 NTX-1의 뇨 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 60일 이상 동안 NTX-1의 뇨 수준을 30% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.01 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.01 mg/kg 내지 약 0.1 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 약 60일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.01 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 90일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 NTX-1의 뇨 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 90일 이상 동안 NTX-1의 뇨 수준을 30% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.03 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.03 mg/kg 내지 약 0.3 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 약 90일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.03 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 120일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 NTX-1의 뇨 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 120일 이상 동안 NTX-1의 뇨 수준을 30% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.1 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.1 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 약 120일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.01 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 180일(또는 6개월) 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 NTX-1의 뇨 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 180일(또는 6개월) 이상 동안 NTX-1의 뇨 수준을 30% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 1 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 1 mg/kg 내지 약 10 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 약 180일(또는 6개월) 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 1 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 10개월 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 NTX-1의 뇨 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 10개월 이상 동안 NTX-1의 뇨 수준을 30% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 1 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 1 mg/kg 내지 약 10 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 약 10개월 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 1 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 12개월(또는 약 360일) 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 NTX-1의 뇨 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 12개월(또는 약 360일) 이상 동안 NTX-1의 뇨 수준을 30% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 1 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 1 mg/kg 내지 약 10 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 약 12개월(또는 약 360일) 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 1 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, 투여되는 폴리펩티드의 양은, 투여 후 30일 이상 동안, 뇨 중 I형 콜라겐의 N 말단 텔로펩티드(NTX-1) : 크레아티닌의 비로 측정되는 NTX-1을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소시키는 데 효과적이다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 NTX-1의 뇨 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 약 30일 이상 동안 NTX-1의 뇨 수준을 45% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.01 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.01 mg/kg 내지 약 0.1 mg/kg인 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.01 mg/kg 내지 약 3 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 약 30일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.01 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 60일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 NTX-1의 뇨 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 60일 이상 동안 NTX-1의 뇨 수준을 45% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.03 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.03 mg/kg 내지 약 0.1 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 약 60일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.03 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 90일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 NTX-1의 뇨 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 90일 이상 동안 NTX-1의 뇨 수준을 45% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.1 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.1 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 약 90일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.01 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 약 30일 내지 3개월 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 NTX-1의 뇨 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 약 30일 이상 내지 3개월 동안 NTX-1의 뇨 수준을 45% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.01 mg/kg 내지 약 0.3 mg/kg인 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.03 mg/kg 내지 약 0.3 mg/kg인 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 약 30일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 약 0.03 mg/kg 내지 약 0.3 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 약 30일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.03 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 120일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 NTX-1의 뇨 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 120일 이상 동안 NTX-1의 뇨 수준을 45% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.1 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.1 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 약 120일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.01 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 150일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 NTX-1의 뇨 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 150일 이상 동안 NTX-1의 뇨 수준을 45% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.1 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.1 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 약 150일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.01 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 약 3개월 내지 6개월 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 NTX-1의 뇨 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 약 3개월 내지 6개월 동안 NTX-1의 뇨 수준을 45% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.3 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 약 3개월 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 약 0.3 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 약 3개월 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.3 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 180일(또는 6개월) 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 NTX-1의 뇨 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 180일(또는 6개월) 이상 동안 NTX-1의 뇨 수준을 45% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 1 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 1 mg/kg 내지 약 10 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 약 180일(또는 6개월) 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 1 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 210일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 NTX-1의 뇨 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 210일 이상 동안 NTX-1의 뇨 수준을 45% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 1 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 1 mg/kg 내지 약 10 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 약 210일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 1 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 6개월 이상 내지 1년 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 NTX-1의 뇨 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 6개월 이상 내지 1년 동안 NTX-1의 뇨 수준을 45% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 1 mg/kg 내지 약 10 mg/kg인 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 1 mg/kg 내지 약 3 mg/kg인 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 약 6개월 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 약 1 mg/kg 내지 약 3 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 약 6개월 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 1 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, 투여되는 폴리펩티드의 양은, 투여 후 30일 이상 동안, 뇨 중 I형 콜라겐의 N 말단 텔로펩티드(NTX-1) : 크레아티닌의 비로서 측정되는 NTX-1을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소시키는 데 효과적이다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 NTX-1의 뇨 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 약 30일 이상 동안 NTX-1의 뇨 수준을 70% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.1 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.1 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 약 30일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.01 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 60일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 NTX-1의 뇨 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 60일 이상 동안 NTX-1의 뇨 수준을 70% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.3 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.3 mg/kg 내지 약 3 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 약 60일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 폴리펩티드는 0.3 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 90일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 NTX-1의 뇨 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 90일 이상 동안 NTX-1의 뇨 수준을 70% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.3 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.3 mg/kg 내지 약 3 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 약 90일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.3 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 120일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 NTX-1의 뇨 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 120일 이상 동안 NTX-1의 뇨 수준을 70% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 1 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 1 mg/kg 내지 약 10 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 약 120일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 1 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, NTX-1은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여, 투여 후 90일 이상 동안, 예컨대, 투여 후 120일 이상 동안, 투여 후 150일 이상 동안, 투여 후 180일 이상 동안, 상기 기간의 중간 기간 동안, 또는 본원 전역 어디에나 기술되어 있고, 본원에서 제공하는 실시예 및 도면에 제시되어 있는 바와 같이, 상기 기간보다 더 긴 장기간 동안 20% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 NTX-1의 뇨 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 20% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 90일 이상 동안, 투여 후 120일 이상 동안, 투여 후 150일 이상 동안, 투여 후 180일 이상 동안, 상기 기간의 중간 기간 동안, 또는 본원 전역 어디에나 기술되어 있고, 본원에서 제공하는 실시예 및 도면에 제시되어 있는 바와 같이, 상기 기간보다 더 긴 장기간 동안 NTX-1의 뇨 수준을 20% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다.
일부 실시양태에서, 투여되는 폴리펩티드의 양은, 투여 후 30일 이상 동안, 뇨 중 I형 콜라겐의 N 말단 텔로펩티드(NTX-1) : 크레아티닌의 비로서 측정되는 NTX-1을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 20% 이상만큼 감소시키는 데 효과적이다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 I형 콜라겐의 N 말단 텔로펩티드(NTX-1)의 뇨 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 20% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 약 30일 이상 동안 I형 콜라겐의 N 말단 텔로펩티드(NTX-1)의 뇨 수준을 20% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.01 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.01 mg/kg 내지 약 0.1 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 약 30일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 20% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.01 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 60일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 20% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 NTX-1의 뇨 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 20% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 60일 이상 동안 NTX-1의 뇨 수준을 20% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.01 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.01 mg/kg 내지 약 0.1 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 약 60일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 20% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.01 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 90일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 20% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 NTX-1의 뇨 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 20% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 90일 이상 동안 NTX-1의 뇨 수준을 20% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.01 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.01 mg/kg 내지 약 0.1 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 약 90일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 20% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.01 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 120일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 20% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 NTX-1의 뇨 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 20% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 120일 이상 동안 NTX-1의 뇨 수준을 20% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.01 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.01 mg/kg 내지 약 0.1 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 약 120일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 20% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.01 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 180일(또는 6개월) 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 20% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 NTX-1의 뇨 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 20% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 180일(또는 6개월) 이상 동안 NTX-1의 뇨 수준을 20% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.1 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.1 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 약 180일(또는 6개월) 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 20% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.01 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 10개월 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 20% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 NTX-1의 뇨 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 20% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 10개월 이상 동안 NTX-1의 뇨 수준을 20% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 1 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 1 mg/kg 내지 약 10 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 약 10개월 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 20% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 1 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 12개월(또는 약 360일) 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 20% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 NTX-1의 뇨 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 20% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 12개월(또는 약 360일) 이상 동안 NTX-1의 뇨 수준을 20% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 1 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 1 mg/kg 내지 약 10 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 약 12개월(또는 약 360일) 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 20% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 1 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, 투여되는 폴리펩티드의 양은, 투여 후 30일 이상 동안, 뇨 중 I형 콜라겐의 N 말단 텔로펩티드(NTX-1) : 크레아티닌의 비로서 측정되는 NTX-1을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 80% 이상만큼 감소시키는 데 효과적이다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 NTX-1의 뇨 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 80% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 약 30일 이상 동안 NTX-1의 뇨 수준을 80% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.3 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.3 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.3 mg/kg 내지 약 3 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 약 30일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 80% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.3 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 60일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 80% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 NTX-1의 뇨 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 80% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 60일 이상 동안 NTX-1의 뇨 수준을 80% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 1 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 1 mg/kg 내지 약 10 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 약 60일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 80% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 1 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 90일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 80% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 NTX-1의 뇨 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 80% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 90일 이상 동안 NTX-1의 뇨 수준을 80% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 1 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 1 mg/kg 내지 약 10 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 약 90일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 80% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 1 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 약 30일 내지 3개월 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 80% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 NTX-1의 뇨 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 80% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 약 30일 이상 내지 3개월 동안 NTX-1의 뇨 수준을 80% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.1 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.3 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 약 30일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 80% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 약 0.3 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, 피험체에서 뇨 중 NTX-1 : 크레아티닌의 비는 NTX-1에 대한 ELISA 검정법에 의해 측정된다.
일부 실시양태에서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 투여 후 8시간까지 NTX-1의 뇨 수준을 30% 이상만큼 감소시키는 데 효과적이다.
일부 실시양태에서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 투여 후 8시간까지 NTX-1의 뇨 수준을 45% 이상만큼 감소시키는 데 효과적이다.
일부 실시양태에서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 투여 후 8시간까지 NTX-1의 뇨 수준을 70% 이상만큼 감소시키는 데 효과적이다.
일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 단일 용량으로 투여된다.
일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 피하로 투여된다.
일부 실시양태에서, 피험체는 골다공증을 앓는 피험체, 예를 들어, 인간 피험체, 예컨대, 여성 인간 피험체이고, 일부 특정 실시양태에서, 폐경 후 여성 인간 피험체이다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 피험체에서 골 재흡수 또는 파골세포 활성을 억제시키는 방법을 제공한다. 본 방법은 피험체에게 핵 인자 카파 B 리간드의 수용체 활성화제(RANKL)에 특이적으로 결합하는 폴리펩티드(본 발명의 폴리펩티드)를 투여하는 단계를 포함한다. 투여되는 폴리펩티드의 양은 투여 후 30일 이상 동안 타르트레이트 저항성 산성 포스파타제 이소형 5b(TRACP5b)의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소시키는 데 효과적이다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 TRACP5b의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 약 30일 이상 동안 TRACP5b의 혈청 수준을 30% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.03 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.03 mg/kg 내지 약 0.3 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, TRACP5b는 투여 후 약 30일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.03 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, TRACP5b는 투여 후 60일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 TRACP5b의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 약 60일 이상 동안 TRACP5b의 혈청 수준을 30% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.03 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.03 mg/kg 내지 약 0.3 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, TRACP5b는 투여 후 약 60일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.03 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, TRACP5b는 투여 후 90일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 TRACP5b의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 90일 이상 동안 TRACP5b의 혈청 수준을 30% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.1 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에, 폴리펩티드는 약 0.1 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, TRACP5b는 투여 후 약 90일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.1 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, TRACP5b는 투여 후 120일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 TRACP5b의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 120일 이상 동안 TRACP5b의 혈청 수준을 30% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.3 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.3 mg/kg 내지 약 3 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, TRACP5b는 투여 후 약 120일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.3 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 투여되는 폴리펩티드의 양은 투여 후 30일 이상 동안 타르트레이트 저항성 산성 포스파타제 이소형 5b(TRACP5b)의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소시키는 데 효과적이다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 TRACP5b의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 약 30일 이상 동안 TRACP5b의 혈청 수준을 45% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.1 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.1 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, TRACP5b는 투여 후 약 30일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.01 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, TRACP5b는 투여 후 60일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 TRACP5b의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 60일 이상 동안 TRACP5b의 혈청 수준을 45% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.3 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.3 mg/kg 내지 약 3 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, TRACP5b는 투여 후 약 60일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.3 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, TRACP5b는 투여 후 90일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 TRACP5b의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 90일 이상 동안 TRACP5b의 혈청 수준을 45% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.3 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.3 mg/kg 내지 약 3 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, TRACP5b는 투여 후 약 90일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.3 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 단일 용량으로 투여된다.
일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 피하로 투여된다.
일부 실시양태에서, 골 재흡수는 TRACP5b에 대한 ELISA 검정법에 의해 측정되는 바, 피험체에서 억제된다.
일부 실시양태에서, 피험체는 골다공증을 앓는 피험체, 예를 들어, 인간 피험체, 예컨대, 여성 인간 피험체이고, 일부 특정 실시양태에서, 폐경 후 여성 인간 피험체이다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 피험체에서 골 재흡수 또는 파골세포 활성을 억제시키는 방법을 제공한다. 본 방법은 피험체에게 핵 인자 카파 B 리간드의 수용체 활성화제(RANKL)에 특이적으로 결합하는 폴리펩티드(본 발명의 폴리펩티드)를 투여하는 단계를 포함한다. 투여되는 폴리펩티드의 양은 투여 후 30일 이상 동안 I형 프로콜라겐의 N 말단 프로펩티드(P1NP)의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소시키는 데 효과적이다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 P1NP의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 약 30일 이상 동안 P1NP의 혈청 수준을 30% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.003 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.003 mg/kg 내지 약 0.03 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, P1NP는 투여 후 약 30일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.003 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, P1NP는 투여 후 60일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 P1NP의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 약 60일 이상 동안 P1NP의 혈청 수준을 30% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.003 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.003 mg/kg 내지 약 0.03 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, P1NP는 투여 후 약 60일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.003 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, P1NP는 투여 후 90일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 P1NP의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 약 90일 이상 동안 P1NP의 혈청 수준을 30% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.01 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.01 mg/kg 내지 약 0.1 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, P1NP는 투여 후 약 90일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.01 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, P1NP는 투여 후 120일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 P1NP의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 약 120일 이상 동안 P1NP의 혈청 수준을 30% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.01 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.01 mg/kg 내지 약 0.1 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, P1NP는 투여 후 약 120일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.01 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 투여되는 폴리펩티드의 양은 투여 후 30일 이상 동안 I형 프로콜라겐의 N 말단 프로펩티드(P1NP)의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소시키는 데 효과적이다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 P1NP의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 약 30일 이상 동안 P1NP의 혈청 수준을 45% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.03 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.03 mg/kg 내지 약 0.3 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, P1NP는 투여 후 약 30일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.03 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, P1NP는 투여 후 60일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 P1NP의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 60일 이상 동안 P1NP의 혈청 수준을 45% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.03 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.03 mg/kg 내지 약 0.3 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, P1NP는 투여 후 약 30일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.03 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, P1NP는 투여 후 90일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 P1NP의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 90일 이상 동안 P1NP의 혈청 수준을 45% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.03 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.03 mg/kg 내지 약 0.3 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, P1NP는 투여 후 약 90일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.03 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, P1NP는 투여 후 120일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 P1NP의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 120일 이상 동안 P1NP의 혈청 수준을 45% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.1 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.1 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, P1NP는 투여 후 약 120일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.01 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 투여되는 폴리펩티드의 양은 투여 후 30일 이상 동안 I형 프로콜라겐의 N 말단 프로펩티드(P1NP)의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소시키는 데 효과적이다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 P1NP의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 약 30일 이상 동안 P1NP의 혈청 수준을 70% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.1 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.1 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, P1NP는 투여 후 약 30일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.01 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, P1NP는 투여 후 60일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 P1NP의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 60일 이상 동안 P1NP의 혈청 수준을 70% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.1 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.1 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, P1NP는 투여 후 약 30일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.1 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, P1NP는 투여 후 90일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 P1NP의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 90일 이상 동안 P1NP의 혈청 수준을 70% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.1 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.1 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, P1NP는 투여 후 약 90일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.01 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, P1NP는 투여 후 120일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소된다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 P1NP의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소시키고, 투여 후 120일 이상 동안 P1NP의 혈청 수준을 70% 이상으로 유지시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 0.1 mg/kg 이상인 양으로 투여된다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드는 약 0.1 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여된다. 다른 실시양태에서, P1NP는 투여 후 약 120일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되고, 폴리펩티드는 0.01 mg/kg 이하인 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 단일 용량으로 투여된다.
일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 피하로 투여된다.
일부 실시양태에서, 골 재흡수는 P1NP에 대한 방사면역검정법에 의해 측정되는 바, 피험체에서 억제된다.
일부 실시양태에서, 피험체는 골다공증을 앓는 피험체, 예를 들어, 인간 피험체, 예컨대, 여성 인간 피험체이고, 일부 특정 실시양태에서, 폐경 후 여성 인간 피험체이다.
본 발명의 방법은 골 질환 및/또는 장애, 예컨대, 원발성 골다공증, 내분비성 골다공증(갑상선기능항진증, 부갑상샘기능항진증, 쿠싱 증후군, 및 말단거대증을 포함하나, 이에 한정되지 않는다), 유전 및 선천적 형태의 골다공증(불완전 골생성증, 호모시스틴뇨증, 멩케 증후군, 릴리 데이 증후군을 포함하나, 이에 한정되지 않는다), 사지 고정에 기인한 골다공증, 글루코코르티코이드 유도성 골다공증 및 폐경 후 골다공증을 포함하나, 이에 한정되지 않는 골다공증을 앓는 피험체의 예방 및/또는 치료를 위해 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 폴리펩티드는 RANKL에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 면역글로불린 단일 가변 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 폴리펩티드는 비아코어(Biacore)에 의해 측정되는 바, 재조합 가용성 RANKL(sRANKL: : soluble RANKL)에의 결합에 대하여 0.01-0.05 nM, 바람직하게는, 약 0.04 nM의 겉보기 KD를 가진다. 일부 실시양태에서, 면역글로불린 단일 가변 도메인은 하나 이상의 VHH 도메인, 하나 이상의 인간화된 VHH 도메인 및/또는 하나 이상의 카멜화된 VH 도메인을 포함하거나, 그로 구성된다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 RANKL에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 도메인 항체, RANKL에 특이적으로 결합하고, 도메인 항체로서 사용하기에 적합한 하나 이상의 아미노산 서열, RANKL에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 단일 도메인 항체, RANKL에 특이적으로 결합하고, 단일 도메인 항체로서 사용하기에 적합한 하나 이상의 아미노산 서열, 또는 RANKL에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 "dAb"를 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 RANKL에 특이적으로 결합하는 2개 이상의 면역글로불린 단일 가변 도메인을 포함하는 다가 구성체이다. 일부 실시양태에서, 다가 구성체는 RANKL에 특이적으로 결합하는 2개의 면역글로불린 단일 가변 도메인을 포함한다.
본 발명의 바람직한 폴리펩티드는 4개의 골격 영역(FR: framework region, 각각 FR1 내지 FR4) 및 3개의 상보성 결정 영역(CDR: complementarity determining region, 각각 CDR1 내지 CDR3)(여기서, CDR1은 SYPMG(서열 번호 1)로 구성되고, CDR2는 SITGSGGSTYYADSVKG(서열 번호 2)로 구성되고, CDR3은 YIRPDTYLSRDYRKY(서열 번호 3)로 구성된다)으로 구성된 하나 이상의 면역글로불린 단일 가변 도메인을 포함하거나, 그로 구성된 다가 구성체(multivalent construct)이다.
일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 US 2010/0104568의 서열 번호 755
Figure 112013113807716-pct00001
를 포함하는 다가 구성체이다.
일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 상기 정의된 바와 같은 2개 이상의 면역글로불린 단일 가변 도메인을 포함하거나, 그로 구성된 다가 구성체이다. 일부 실시양태에서, 다가 구성체는 상기 정의된 바와 같은 2개의 면역글로불린 단일 가변 도메인을 포함하거나, 그로 구성된다.
일부 실시양태에서, 다가 구성체는 1 이상의 반감기 연장 모이어티를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 1 이상의 반감기 연장 모이어티는 혈청 단백질에 특이적으로 결합한다. 일부 실시양태에서, 혈청 단백질은 혈청 알부민, 및 특히 인간 혈청 알부민, 티록신 결합 단백질, (인간) 트랜스페린, 피브리노겐, 면역글로불린, 예컨대, IgG, IgE 또는 IgM, 또는 WO 04/003019에 열거된 혈청 단백질 중 하나이다.
일부 실시양태에서, 1 이상의 반감기 연장 모이어티는 면역글로불린 단일 가변 도메인을 포함하거나, 그로 구성된다. 일부 실시양태에서, 면역글로불린 단일 가변 도메인은 VHH 도메인, 인간화된 VHH 도메인 또는 카멜화된 VH 도메인을 포함하거나, 그로 구성된다. 일부 실시양태에서, 1 이상의 반감기 연장 모이어티는 도메인 항체, 도메인 항체로서 사용하기에 적합한 아미노산 서열, 단일 도메인 항체, 단일 도메인 항체로서 사용하기에 적합한 아미노산 서열, 또는 "dAb"를 포함한다.
혈청 알부민에 결합하는 바람직한 면역글로불린 단일 가변 도메인은 US 2010/0104568의 서열 번호 791(서열 번호 14)을 포함하거나, 그로 구성된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 폴리펩티드는 US 2010/0104568의 서열 번호 759
Figure 112013113807716-pct00002
를 포함하거나, 그로 구성된 다가 구성체이다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 폴리펩티드는 US 2010/0104568의 서열 번호 755(서열 번호 10)의, 또는 US 2010/0104568의 서열 번호 759(서열 번호 12)의 RANKL에의 결합을 교차 차단시킨다. 일부 실시양태에서, 본 발명의 폴리펩티드는 US 2010/0104568의 서열 번호 755(서열 번호 10), 또는 US 2010/0104568의 서열 번호 759(서열 번호 12)에 의한 RANKL 결합으로부터 교차 차단된다.
일부 실시양태에서, 1 이상의 반감기 연장 모이어티는 하나 이상의 폴리에틸렌 글리콜 분자를 포함한다.
바람직한 측면에서, 본 발명의 폴리펩티드는 서열 번호 12이다. 따라서, 본 발명은 본 발명은 피험체에게 서열 번호 12의 폴리펩티드를 매달 약 0.003 mg/kg 내지 약 0.01인 양을 투여하는 단계를 포함하며, 여기서, 혈청 중 CTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 30% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 피험체에서 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키는 방법에 관한 것이다. 따라서, 본 발명은 또한 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 서열 번호 12의 폴리펩티드로서, 여기서, 폴리펩티드는 매달 약 0.003 mg/kg 내지 약 0.01 mg/kg인 양으로 투여되고, 여기서, 혈청 중 CTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 30% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 서열 번호 12의 폴리펩티드에 관한 것이다.
또 다른 바람직한 측면에서, 본 발명은 피험체에게 서열 번호 12의 폴리펩티드를 매달 약 0.01 mg/kg 내지 약 0.03 mg/kg인 양을 투여하는 단계를 포함하며, 여기서, 혈청 중 CTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 45% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 피험체에서 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키는 방법에 관한 것이다. 따라서, 본 발명은 또한 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 서열 번호 12의 폴리펩티드로서, 여기서, 폴리펩티드는 매달 약 0.01 mg/kg 내지 약 0.03 mg/kg인 양으로 투여되고, 여기서, 혈청 중 CTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 45% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 서열 번호 12의 폴리펩티드에 관한 것이다.
또 다른 바람직한 측면에서, 본 발명은 피험체에게 서열 번호 12의 폴리펩티드를 매달 약 0.03 mg/kg 내지 약 0.1 mg/kg인 양을 투여하는 단계를 포함하며, 여기서, 혈청 중 CTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되고, 70% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 피험체에서 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키는 방법에 관한 것이다. 따라서, 본 발명은 또한 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 서열 번호 12의 폴리펩티드로서, 여기서, 폴리펩티드는 매달 약 0.03 mg/kg 내지 약 0.1 mg/kg인 양으로 투여되고, 여기서, 혈청 중 CTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되고, 70% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 서열 번호 12의 폴리펩티드에 관한 것이다.
또 다른 바람직한 측면에서, 본 발명은 피험체에게 서열 번호 12의 폴리펩티드를 매 2개월마다 약 0.01 mg/kg 내지 약 0.03 mg/kg인 양으로 투여하는 단계를 포함하며, 여기서, 혈청 중 CTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 30% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 피험체에서 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키는 방법에 관한 것이다. 따라서, 본 발명은 또한 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 서열 번호 12의 폴리펩티드로서, 여기서, 폴리펩티드는 매 2개월마다 약 0.01 mg/kg 내지 약 0.03 mg/kg인 양으로 투여되고, 여기서, 혈청 중 CTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 30% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 서열 번호 12의 폴리펩티드에 관한 것이다.
또 다른 바람직한 측면에서, 본 발명은 피험체에게 서열 번호 12의 폴리펩티드를 매 2개월마다 약 0.01 mg/kg 내지 약 0.03 mg/kg인 양으로 투여하는 단계를 포함하며, 여기서, 혈청 중 CTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 45% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 피험체에서 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키는 방법에 관한 것이다. 따라서, 본 발명은 또한 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 서열 번호 12의 폴리펩티드로서, 여기서, 폴리펩티드는 매 2개월마다 약 0.01 mg/kg 내지 약 0.03 mg/kg인 양으로 투여되고, 여기서, 혈청 중 CTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 45% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 서열 번호 12의 폴리펩티드에 관한 것이다.
또 다른 바람직한 측면에서, 본 발명은 피험체에게 서열 번호 12의 폴리펩티드를 매 2개월마다 약 0.1 mg/kg 내지 약 0.3 mg/kg인 양으로 투여하는 단계를 포함하며, 여기서, 혈청 중 CTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되고, 70% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 피험체에서 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키는 방법에 관한 것이다. 따라서, 본 발명은 또한 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 서열 번호 12의 폴리펩티드로서, 여기서, 폴리펩티드는 매 2개월마다 약 0.1 mg/kg 내지 약 0.3 mg/kg인 양으로 투여되고, 여기서, 혈청 중 CTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되고, 70% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 서열 번호 12의 폴리펩티드에 관한 것이다.
또 다른 바람직한 측면에서, 본 발명은 피험체에게 서열 번호 12의 폴리펩티드를 매 3개월마다 약 0.01 mg/kg 내지 약 0.03 mg/kg인 양으로 투여하는 단계를 포함하며, 여기서, 혈청 중 CTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 30% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 피험체에서 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키는 방법에 관한 것이다. 따라서, 본 발명은 또한 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 서열 번호 12의 폴리펩티드로서, 여기서, 폴리펩티드는 매 3개월마다 약 0.01 mg/kg 내지 약 0.03 mg/kg인 양으로 투여되고, 여기서, 혈청 중 CTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 30% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 서열 번호 12의 폴리펩티드에 관한 것이다.
또 다른 바람직한 측면에서, 본 발명은 피험체에게 서열 번호 12의 폴리펩티드를 매 3개월마다 약 0.03 mg/kg 내지 약 0.1 mg/kg인 양으로 투여하는 단계를 포함하며, 여기서, 혈청 중 CTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 45% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 피험체에서 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키는 방법에 관한 것이다. 따라서, 본 발명은 또한 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 서열 번호 12의 폴리펩티드로서, 여기서, 폴리펩티드는 매 3개월마다 약 0.03 mg/kg 내지 약 0.1 mg/kg인 양으로 투여되고, 여기서, 혈청 중 CTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 45% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 서열 번호 12의 폴리펩티드에 관한 것이다.
또 다른 바람직한 측면에서, 본 발명은 피험체에게 서열 번호 12의 폴리펩티드를 매 3개월마다 약 0.1 mg/kg 내지 약 0.3 mg/kg인 양으로 투여하는 단계를 포함하며, 여기서, 혈청 중 CTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되고, 70% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 피험체에서 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키는 방법에 관한 것이다. 따라서, 본 발명은 또한 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 서열 번호 12의 폴리펩티드로서, 여기서, 폴리펩티드는 매 3개월마다 약 0.1 mg/kg 내지 약 0.3 mg/kg인 양으로 투여되고, 여기서, 혈청 중 CTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되고, 70% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 서열 번호 12의 폴리펩티드에 관한 것이다.
또 다른 바람직한 측면에서, 본 발명은 피험체에게 서열 번호 12의 폴리펩티드를 매 4개월마다 약 0.01 mg/kg 내지 약 0.03 mg/kg인 양으로 투여하는 단계를 포함하며, 여기서, 혈청 중 CTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 30% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 피험체에서 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키는 방법에 관한 것이다. 따라서, 본 발명은 또한 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 서열 번호 12의 폴리펩티드로서, 여기서, 폴리펩티드는 매 4개월마다 약 0.01 mg/kg 내지 약 0.03 mg/kg인 양으로 투여되고, 여기서, 혈청 중 CTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 30% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 서열 번호 12의 폴리펩티드에 관한 것이다.
또 다른 바람직한 측면에서, 본 발명은 피험체에게 서열 번호 12의 폴리펩티드를 매 4개월마다 약 0.1 mg/kg 내지 약 0.3 mg/kg인 양으로 투여하는 단계를 포함하며, 여기서, 혈청 중 CTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 45% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 피험체에서 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키는 방법에 관한 것이다. 따라서, 본 발명은 또한 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 서열 번호 12의 폴리펩티드로서, 여기서, 폴리펩티드는 매 4개월마다 약 0.1 mg/kg 내지 약 0.3 mg/kg인 양으로 투여되고, 여기서, 혈청 중 CTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 45% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 서열 번호 12의 폴리펩티드에 관한 것이다.
또 다른 바람직한 측면에서, 본 발명은 피험체에게 서열 번호 12의 폴리펩티드를 매 4개월마다 약 0.1 mg/kg 내지 약 0.3 mg/kg인 양으로 투여하는 단계를 포함하며, 여기서, 혈청 중 CTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되고, 70% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 피험체에서 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키는 방법에 관한 것이다. 따라서, 본 발명은 또한 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 서열 번호 12의 폴리펩티드로서, 여기서, 폴리펩티드는 매 4개월마다 약 0.1 mg/kg 내지 약 0.3 mg/kg인 양으로 투여되고, 여기서, 혈청 중 CTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되고, 70% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 서열 번호 12의 폴리펩티드에 관한 것이다.
또 다른 바람직한 측면에서, 본 발명은 피험체에게 서열 번호 12의 폴리펩티드를 매달 약 0.01 mg/kg 내지 약 0.03 mg/kg인 양으로 투여하는 단계를 포함하며, 여기서, 뇨 중 NTX-1 : 크레아티닌의 비로 측정되는 NTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 30% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 피험체에서 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키는 방법에 관한 것이다. 따라서, 본 발명은 또한 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 서열 번호 12의 폴리펩티드로서, 여기서, 폴리펩티드는 매달 약 0.01 mg/kg 내지 약 0.03 mg/kg인 양으로 투여되고, 여기서, 뇨 중 NTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 30% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 서열 번호 12의 폴리펩티드에 관한 것이다.
또 다른 측면에서, 또 다른 바람직한 측면에서, 본 발명은 피험체에게 서열 번호 12의 폴리펩티드를 매달 약 0.01 mg/kg 내지 약 0.03 mg/kg인 양으로 투여하는 단계를 포함하며, 여기서, 뇨 중 NTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 45% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 피험체에서 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키는 방법에 관한 것이다. 따라서, 본 발명은 또한 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 서열 번호 12의 폴리펩티드로서, 여기서, 폴리펩티드는 매달 약 0.01 mg/kg 내지 약 0.03 mg/kg인 양으로 투여되고, 여기서, 뇨 중 NTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 45% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 서열 번호 12의 폴리펩티드에 관한 것이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 피험체에게 서열 번호 12의 폴리펩티드를 매달 약 0.1 mg kg 내지 약 0.3 mg/kg인 양으로 투여하는 단계를 포함하며, 여기서, 뇨 중 NTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되고, 70% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 피험체에서 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키는 방법에 관한 것이다. 따라서, 본 발명은 또한 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 서열 번호 12의 폴리펩티드로서, 여기서, 폴리펩티드는 매달 약 0.1 mg/kg 내지 약 0.3 mg/kg인 양으로 투여되고, 여기서, 뇨 중 NTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되고, 70% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 서열 번호 12의 폴리펩티드에 관한 것이다.
또 다른 바람직한 측면에서, 본 발명은 피험체에게 서열 번호 12의 폴리펩티드를 매 2개월마다 약 0.03 mg/kg 내지 약 0.1 mg/kg인 양으로 투여하는 단계를 포함하며, 여기서, 뇨 중 NTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 30% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 피험체에서 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키는 방법에 관한 것이다. 따라서, 본 발명은 또한 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 서열 번호 12의 폴리펩티드로서, 여기서, 폴리펩티드는 매 2개월마다 약 0.03 mg/kg 내지 약 0.1 mg/kg인 양으로 투여되고, 여기서, 뇨 중 NTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 30% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 서열 번호 12의 폴리펩티드에 관한 것이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 피험체에게 서열 번호 12의 폴리펩티드를 매 2개월마다 약 0.03 mg/kg 내지 약 0.1 mg/kg인 양으로 투여하는 단계를 포함하며, 여기서, 뇨 중 NTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 45% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 피험체에서 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키는 방법에 관한 것이다. 따라서, 본 발명은 또한 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 서열 번호 12의 폴리펩티드로서, 여기서, 폴리펩티드는 매 2개월마다 약 0.03 mg/kg 내지 약 0.1 mg/kg인 양으로 투여되고, 여기서, 뇨 중 NTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 45% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 서열 번호 12의 폴리펩티드에 관한 것이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 피험체에게 서열 번호 12의 폴리펩티드를 매 2개월마다 약 0.3 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여하는 단계를 포함하며, 여기서, 뇨 중 NTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되고, 70% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 피험체에서 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키는 방법에 관한 것이다. 따라서, 본 발명은 또한 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 서열 번호 12의 폴리펩티드로서, 여기서, 폴리펩티드는 매 2개월마다 약 0.3 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여되고, 여기서, 뇨 중 NTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되고, 70% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 서열 번호 12의 폴리펩티드에 관한 것이다.
또 다른 바람직한 측면에서, 본 발명은 피험체에게 서열 번호 12의 폴리펩티드를 매 3개월마다 약 0.03 mg/kg 내지 약 0.1 mg/kg인 양으로 투여하는 단계를 포함하며, 여기서, 뇨 중 NTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 30% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 피험체에서 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키는 방법에 관한 것이다. 따라서, 본 발명은 또한 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 서열 번호 12의 폴리펩티드로서, 여기서, 폴리펩티드는 매 3개월마다 약 0.03 mg/kg 내지 약 0.1 mg/kg인 양으로 투여되고, 여기서, 뇨 중 NTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 30% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 서열 번호 12의 폴리펩티드에 관한 것이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 피험체에게 서열 번호 12의 폴리펩티드를 매 3개월마다 약 0.1 mg/kg 내지 약 0.3 mg/kg인 양으로 투여하는 단계를 포함하며, 여기서, 뇨 중 NTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 45% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 피험체에서 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키는 방법에 관한 것이다. 따라서, 본 발명은 또한 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 서열 번호 12의 폴리펩티드로서, 여기서, 폴리펩티드는 매 3개월마다 약 0.1 mg/kg 내지 약 0.3 mg/kg인 양으로 투여되고, 여기서, 뇨 중 NTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 45% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 서열 번호 12의 폴리펩티드에 관한 것이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 피험체에게 서열 번호 12의 폴리펩티드를 매 3개월마다 약 0.3 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여하는 단계를 포함하며, 여기서, 뇨 중 NTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되고, 70% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 피험체에서 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키는 방법에 관한 것이다. 따라서, 본 발명은 또한 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 서열 번호 12의 폴리펩티드로서, 여기서, 폴리펩티드는 매 3개월마다 약 0.3 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여되고, 여기서, 뇨 중 NTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되고, 70% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 서열 번호 12의 폴리펩티드에 관한 것이다.
또 다른 바람직한 측면에서, 본 발명은 피험체에게 서열 번호 12의 폴리펩티드를 매 4개월마다 약 0.03 mg/kg 내지 약 0.1 mg/kg인 양으로 투여하는 단계를 포함하며, 여기서, 뇨 중 NTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 30% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 피험체에서 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키는 방법에 관한 것이다. 따라서, 본 발명은 또한 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 서열 번호 12의 폴리펩티드로서, 여기서, 폴리펩티드는 매 4개월마다 약 0.03 mg/kg 내지 약 0.1 mg/kg인 양으로 투여되고, 여기서, 뇨 중 NTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되고, 30% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 서열 번호 12의 폴리펩티드에 관한 것이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 피험체에게 서열 번호 12의 폴리펩티드를 매 4개월마다 약 0.1 mg/kg 내지 약 0.3 mg/kg인 양으로 투여하는 단계를 포함하며, 여기서, 뇨 중 NTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 45% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 피험체에서 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키는 방법에 관한 것이다. 따라서, 본 발명은 또한 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 서열 번호 12의 폴리펩티드로서, 여기서, 폴리펩티드는 매 4개월마다 약 0.1 mg/kg 내지 약 0.3 mg/kg인 양으로 투여되고, 여기서, 뇨 중 NTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되고, 45% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 서열 번호 12의 폴리펩티드에 관한 것이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 피험체에게 서열 번호 12의 폴리펩티드를 매 4개월마다 약 1 mg/kg 내지 약 3 mg/kg인 양으로 투여하는 단계를 포함하며, 여기서, 뇨 중 NTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되고, 70% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 피험체에서 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키는 방법에 관한 것이다. 따라서, 본 발명은 또한 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 서열 번호 12의 폴리펩티드로서, 여기서, 폴리펩티드는 매 4개월마다 약 1 mg/kg 내지 약 3 mg/kg인 양으로 투여되고, 여기서, 뇨 중 NTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되고, 70% 이상으로 (전 치료 기간 동안에 걸쳐) 유지되는 것인, 서열 번호 12의 폴리펩티드에 관한 것이다.
발명의 상세한 설명
본 발명의 방법
본 출원인은 인간 피험체에게 RANKL에 특이적으로 결합하는 본원에 기술된 바와 같은 폴리펩티드를 투여하는 것이 관련 바이오마커(예컨대, CTX-1, NTX-1 TRACP5b, 및 P1NP)의 변화를 통해 관찰되는 바, 인간 피험체에서 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성에 대해 예상 밖으로 지속적으로 장기간에 걸쳐 영향을 준다는 것을 발견하게 되었다. 그러므로, 본 발명은 특히 투여량에 있어서, 예상 밖으로 장기간에 걸쳐 피험체에서 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키는, 본원에 기술된 폴리펩티드의 용도에 관한 것이다. 본 발명은 또한 피험체에서 예상 밖으로 장기간에 걸쳐 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성은 그대로 효과적으로 억제시키면서, 특히, 투여량에 있어서, RANKL에 대한 폴리펩티드를 더 적은 빈도로 및/또는 보다 저용량으로 투여하는 것을 제공한다.
골 대사를 측정하는 각종 마커가 이용될 수 있다. 바람직한 측면에서, 골 대사의 마커는 I형 콜라겐의 C 말단 텔로펩티드(이는 또한 I형 콜라겐의 가교 결합 텔로펩티드로도 지칭된다)(CTX-1), I형 콜라겐의 N 말단 텔로펩티드(NTX-1) 및/또는 바람직하게는, (예컨대, 뇨 중) NTX-1/크레아티닌의 비, 타르트레이트 저항성 산성 포스파타제 이소형 5b(TRACP5b), I형 프로콜라겐의 N 말단 프로펩티드(P1NP) 및 골 특이 알칼리성 포스파타제(BAP)로부터 선택된다. 이러한 마커는 당업자에게 알려져 있고, 그들이 사용하는 표준 방법, 예컨대, 효소 결합 면역흡착 검정법(ELISA: enzyme-linked immunosorbent assay, 이는 또한 효소 면역검정법(EIA: enzyme immunoassay)으로도 알려져 있다), 방사면역검정법 또는 면역효소 검정법을 비롯한, 각종의 면역학 기반 검정법을 사용하여 측정될 수 있다. 적합할 경우, 화학, 비색 및 효소 기반 검정법 또한 사용될 수 있다.
예를 들어, 일부 실시양태에서, CTX-1, NTX-1 및 TRACP5b의 하나 이상은 CTX-1, NTX-1, 또는 TRACP5b에 특이적인 ELISA 검정법을 사용하여 측정될 수 있고/거나; P1NP는 P1NP에 특이적인 방사면역검정법을 사용하여 측정될 수 있고/거나; BAP는 BAP에 특이적인 면역효소 검정법을 사용하여 측정될 수 있고/거나; 크레아티닌은 비색 검정법(예컨대, 개선된 자페(Jaffe) 검정법)을 사용하여 측정될 수 있다.
1형 콜라겐의 가교 결합 텔로펩티드(CTX-1)는 파골세포 활성의 결과로 유리되는 골 분해 생성물이다. CTX-1을 임상적으로 유의적이게 감소시키는, 즉, 기준선에 대한 상대적인 비율로 70% 미만으로 감소시키는(즉, 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 초과 감소) 용량을 생물학상 활성인 것으로 간주한다. 문헌 [Christgau et al. 2000, Bone 26: 505-511]에 공개된 데이터로부터 도출된 유의적인 변화 이상의 것에 기초한다. CTX-1을 상기와 같이 임상적으로 유의적이게 감소시키는 용량을 생물학상 활성인 것으로 간주하였다.
CTX-1의 혈청 수준은 본원에 기술되고/거나, 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해 측정될 수 있다. ELISA 방법은 1형 콜라겐의 C 텔로펩티드(CTX-1) ELISA 키트(바이오코마레(Biocomare: 미국 캘리포니아주 사우쓰 샌프란시스코)), I형 콜라겐 C 텔로펩티드 ELISA 키트(C-Telopeptide of Type I Collagen ELISA Kit)(antibodies online.com), 및 크로스랩(CROSSLAPS)® ELISA(카탈로그 번호 AC-02F1; 이뮤노다이어그나스틱시스템즈 인코퍼레이티드(Immunodiagnostic systems Inc.: 영국 타인 & 위어 볼던))를 포함한다.
1형 콜라겐의 N 말단 텔로펩티드(NTX-1)는 세포외 기질의 유기 주요 성분인 I형 콜라겐의 골 분해 생성물이다. 그러므로, NTX-1은 파골세포 활성의 결과로서 골 재흡수에 대한 바이오마커로 간주된다. 뇨 중 NTX-1 농도는 뇨 부피에 따라 달라지기 때문에, 상기 변량을 보정하기 위해 NTX-1의 뇨 농도 대신 뇨 중 NTX-1 : 크레아티닌의 비는 측정하였다. NTX-1의 뇨 수준은 본원에 기술되고/거나, 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해 측정될 수 있다. 본원에 기술되고/거나, 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해 측정될 수 있다. ELISA 방법은 1형 콜라겐의 가교 결합된 N 텔로펩티드(NTXI) ELISA 키트(바이오코마레: 미국 캘리포니아주 사우쓰 샌프란시스코), 및 오스테오마크 NTx 뇨 ELISA(OSTEOMARK NTx Urine ELISA)(카탈로그 번호 9006; 인버네스 메디컬(Inverness Medical: 미국 뉴저지주 프린스턴 왐폴 라보라토리즈))를 포함할 수 있다. 테스트는 단일클론 항체 및 분광법으로 판독하는 ELISA 방법을 사용한다. 크레아틴 수준은 예컨대, 엔지크롬 크레아틴 검정용 키트(EnzyChrom™ Creatine Assay Kit)(바이오어세이 시스템즈(BioAssay Systems: 미국 캘리포니아주 헤이워드)), 크레아틴 검정용 키트(Creatinine Assay Kit)(셀 바이오랩스(Cell Biolabs: 미국 캘리포니아주 샌디에고)) 또는 크레아티닌 검사(카탈로그 번호 03039070; 지멘스 메디컬 솔루션즈 다이어그나스틱스(Siemens Medical Solutions Diagnostics: 네덜란드 브레다))를 사용하여 측정될 수 있다. 뇨 NTx 수준은 뇨 크레아티닌에 대해 정규화된다. ELISA 결과는 크레아티닌 1 mM당 골 콜라겐 당량(nM)(nM BCE: bone collagen equivalents)으로 표시된다.
타르트레이트 저항성 산성 포스파타제(TRACP5b)는 파골세포로부터 유래된 효소고, 이는 파골세포 개수에 대한 척도가 되며, 따라서, 골 재흡수에 대한 바이오마커로서 간주된다. TRACP5b의 혈청 수준은 본원에 기술되고/거나, 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해 측정될 수 있다. ELISA 방법으로는 인간 타르트레이트 저항성 산성 포스파타제 5b Elisa 키트(라이프 사이언시즈 어드밴스드 테크놀로지스 인코퍼레이티드(Life Sciences Advanced Technologies, Inc.: 미국 플로리다 세인트 피터즈버그)), 타르트레이트 저항성 산성 포스파타제 5b(파시픽 바이오마커스 인코퍼레이티드(Pacific Biomarkers, Inc.: 미국 워싱턴주 시애틀)), 및 보네트랩® 검정용 ELISA(BONETRAP® Assay ELISA)(카탈로그 번호 SB-TR201A; 이뮤노다이어그나스틱시스템즈 인코퍼레이티드: 영국 타인 & 위어 볼던)를 포함할 수 있다.
I형 프로콜라겐의 아미노 말단 프로펩티드(P1NP)는 콜라겐이 골로 혼입되기 전에 새로 합성된 프리프로콜라겐으로부터 세포외 프로세싱시에 유리되고, 이는 골 형성에 대한 바이오마커로서 간주된다. P1NP의 혈청 수준은 본원에 기술되고/거나, 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해 측정될 수 있다. 검정 방법으로는 경쟁적 RIA(UNIQ™ P1NP RIA; 카탈로그 번호 Q67034; 오리온 다이아그노스티카 Oy(Orion Diagnostica Oy: 핀란드 에스포)), I형 프로콜라겐의 IDS-ISYS 온전한 아미노 말단 프로펩티드(IDS-ISYS Intact amino-terminal propeptide of type I procollagen) (온전한 P1NP(Intact P1NP)) 검정법(이뮤노다이어그나스틱 시스템즈 인코퍼레이티드: 영국 타인 & 위어 볼던), 또는 프로콜라겐 I N 말단 프로펩티드(P1NP)에 대한 ELISA 키트(Uscn 라이프 사이언스 인코퍼레이티드(Uscn Life Science Inc.: 중국 우한))를 포함할 수 있다.
골 특이 알칼리성 포스파타제(BAP)는 활성인 골 형성에 대한 바이오마커로서의 역할을 하는 효소이다. BAP의 혈청 수준은 본원에 기술되고/거나, 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해 측정될 수 있다. 검정 방법으로는 골 특이 알칼리성 포스파타제 ELISA 키트(안티바디스-온라인 인코퍼레이티드(Antibodies-online Inc.: 미국 조지아주 아틀란타)), 또는 오스타제(OSTASE)® BAP 면역효소 검정법(OSTASE® BAP Immunoenzymetric Assay)(카탈로그 번호 AC-20F1; 이뮤노다이어그나스틱시스템즈 인코퍼레이티드: 영국 타인 & 위어 볼던)을 포함할 수 있다.
피험체에서 골 재흡수 또는 파골세포 활성을 억제시키는 방법의 예는 피험체에게 RANKL에 특이적으로 결합하는 본원에 기술된 폴리펩티드를 투여하는 것으로 포함하며, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 투여 후 약 30일 이상 동안 골 대사 및/또는 골 항상성의 하나 이상의 마커를 변화시키는 데, 예컨대, I형 콜라겐의 가교 결합 텔로펩티드(CTX-1)의 혈청 수준, 1형 프로콜라겐 아미노 말단 프로펩티드(P1NP)의 혈청 수준, 및/또는 NTX-1의 뇨 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상, 더욱 바람직하게는, 35% 이상, 더욱 바람직하게는, 40% 이상, 더욱 바람직하게는, 45% 이상, 더욱 바람직하게는, 50% 이상, 더욱 바람직하게는, 55% 이상, 더욱 바람직하게는, 60% 이상, 더욱 바람직하게는, 65% 이상, 더욱 바람직하게는, 70% 이상, 예컨대, 75% 이상, 또는 심지어는 80% 이상만큼 감소시키는 데 효과적이다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 투여 후 약 30일 이상 동안 CTX-1 및/또는 P1NP의 혈청 수준, 및/또는 NTX-1의 수준(뇨 중 NTX-1 : 크레아틴의 비로 측정)을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상, 더욱 바람직하게는, 35% 이상, 더욱 바람직하게는, 40% 이상, 더욱 바람직하게는, 45% 이상, 더욱 바람직하게는, 50% 이상, 더욱 바람직하게는, 55% 이상, 더욱 바람직하게는, 60% 이상, 더욱 바람직하게는, 65% 이상, 더욱 바람직하게는, 70% 이상, 예컨대, 75% 이상, 또는 심지어 80% 이상만큼 감소시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 예를 들어, 투여되는 폴리펩티드의 양은 골 대사 및/또는 골 항상성의 하나 이상의 마커를 변화시키는 데, 예컨대, CTX-1 및/또는 P1NP의 혈청 수준, 및/또는 NTX-1의 뇨 수준을 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 59%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 또는 80% 이상만큼 감소시키는 데 효과적이다.
또 다른 측면에서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 투여 후 약 30일 이상 동안 타르트레이트 저항성 산성 포스파타제(TRACP5b)의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상, 더욱 바람직하게는, 35% 이상, 더욱 바람직하게는, 40% 이상, 더욱 바람직하게는, 45% 이상, 더욱 바람직하게는, 50% 이상, 예컨대, 55% 이상, 또는 60% 이상만큼 감소시키는 데 효과적이다. 따라서, 본 발명은 또한 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 투여 후 약 30일 이상 동안 TRACP5b의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상, 더욱 바람직하게는, 35% 이상, 더욱 바람직하게는, 40% 이상, 더욱 바람직하게는, 45% 이상, 더욱 바람직하게는, 50% 이상, 예컨대, 55% 이상, 또는 60% 이상만큼 감소시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 예를 들어, 투여되는 폴리펩티드의 양은 TRACP5b를 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 59%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59% 또는 60% 이상만큼 변화시키는 데 효과적이다.
일부 실시양태에서, 피험체에게 핵 인자 카파 B 리간드의 수용체 활성화제(RANKL)에 특이적으로 결합하는 폴리펩티드를 투여하는 단계를 포함하는 방법으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 투여 후 30일 이상 동안 골 대사 및/또는 골 항상성의 하나 이상의 마커를 변화시키는 데 효과적인 것인, 피험체에서 골 재흡수 또는 파골세포 활성을 억제시키는 방법을 제공한다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 30일 이상 동안 골 대사 및/또는 골 항상성의 하나 이상의 마커를 변화시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 골 대사 및/또는 골 항상성의 하나 이상의 마커의 변화는 보다 장기간 동안, 예컨대, 60일 이상, 90일 이상, 120일 이상, 150일 이상, 180일 이상, 210일 이상, 240일 이상, 270일 이상, 300일 이상, 330일 이상, 또는 360일 이상 동안; 예를 들어, (각 범위의 끝점 포함) 30-60일, 60-90일, 90-120일, 120-150일, 150-180일, 180-210일, 210-240일, 240-270일, 270-300일, 300-330일, 330-360일, 30-90일, 60-120일, 90-150일, 120-180일, 150-210일, 180-240일, 210-270일, 240-300일, 300-360일, 30-120일, 60-150일, 90-180일, 120-210일, 150-240일, 180-270일, 210-300일, 240-330일, 270-360일, 30-150일, 60-180일, 90-210일, 120-240일, 150-270일, 180-300일, 210-330일, 240-360일, 30-180일, 60-210일, 90-240일, 120-270일, 150-300일, 180-330일, 210-360일, 30-210일, 60-240일, 90-270일, 120-300일, 150-330일, 180-360일, 30-240일, 60-270일, 90-300일, 120-330일, 150-360일, 30-270일, 60-300일, 90-330일, 120-360일, 30-300일, 60-330일, 90-360일, 30-330일, 60-360일, 및 30-360일 동안; 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개월 이상 동안; 예를 들어, 30일-3개월, 1-3개월, 2-4개월, 3-5개월, 4-6개월, 5-7개월, 6-8개월, 7-9개월, 8-10개월, 9-11개월, 10-12개월, 1-4개월, 2-5개월, 3-6개월, 4-7개월, 5-8개월, 6-9개월, 7-10개월, 8- 11개월, 9-12개월, 1-5개월, 2-6개월, 3-7개월, 4-8개월, 5-9개월, 6-10개월, 7-11개월, 8-12개월, 1-6개월, 2-7개월, 3-8개월, 4-9개월, 5-10개월, 6-11개월, 7-12개월, 1-7개월, 2-8개월, 3-9개월, 4-10개월, 5-11개월, 6-12개월, 1-8개월, 2-9개월, 3-10개월, 4-11개월, 5-12개월, 1-9개월, 2-10개월, 3-11개월, 4-12개월, 1-10개월, 2-11개월, 3-12개월, 1-11개월, 2-12개월, 또는 1-12개월 동안 지속될 수 있다.
다른 실시양태에서, 피험체에게 핵 인자 카파 B 리간드의 수용체 활성화제(RANKL)에 특이적으로 결합하는 폴리펩티드를 투여하는 단계를 포함하는 방법으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 투여 후 30일 이상 동안 I형 콜라겐의 가교 결합 텔로펩티드(CTX-1)의 혈청 수준을 감소시키는 데 효과적인 것인, 피험체에서 골 재흡수 또는 파골세포 활성을 억제시키는 방법을 제공한다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 투여 후 약 30일 이상 동안 CTX-1의 혈청 수준을 감소시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, CTX-1의 혈청 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30%-80% 이상만큼, 예컨대, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47, 48, 59, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 또는 80% 이상만큼 감소된다. CTX-1의 혈청 수준의 감소는 보다 장기간 동안, 예컨대, 60일 이상, 90일 이상, 120일 이상, 150일 이상, 180일 이상, 210일 이상, 240일 이상, 270일 이상, 300일 이상, 330일 이상, 또는 360일 이상 동안; 예를 들어, (각 범위의 끝점 포함) 30-60일, 60-90일, 90-120일, 120-150일, 150-180일, 180-210일, 210-240일, 240-270일, 270-300일, 300-330일, 330-360일, 30-90일, 60-120일, 90-150일, 120-180일, 150-210일, 180-240일, 210-270일, 240-300일, 270-330일, 300-360일, 30-120일, 60-150일, 90-180일, 120-210일, 150-240일, 180-270일, 210-300일, 240-330일, 270-360일, 30-150일, 60-180일, 90-210일, 120-240일, 150-270일, 180-300일, 210-330일, 240-360일, 30-180일, 60-210일, 90-240일, 120-270일, 150-300일, 180-330일, 210-360일, 30-210일, 60-240일, 90-270일, 120-300일, 150-330일, 180-360일, 30-240일, 60-270일, 90-300일, 120-330일, 150-360일, 30-270일, 60-300일, 90-330일, 120-360일, 30-300일, 60-330일, 90-360일, 30-330일, 60-360일, 및 30-360일 동안; 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개월 이상 동안; 예를 들어, 30일-3개월, 1-3개월, 2-4개월, 3-5개월, 4-6개월, 5-7개월, 6-8개월, 7-9개월, 8-10개월, 9-11개월, 10-12개월, 1-4개월, 2-5개월, 3-6개월, 4-7개월, 5-8개월, 6-9개월, 7-10개월, 8-11개월, 9-12개월, 1-5개월, 2-6개월, 3-7개월, 4-8개월, 5-9개월, 6-10개월, 7-11개월, 8-12개월, 1-6개월, 2-7개월, 3-8개월, 4-9개월, 5-10개월, 6-11개월, 7-12개월, 1-7개월, 2-8개월, 3-9개월, 4-10개월, 5-11개월, 6-12개월, 1-8개월, 2-9개월, 3-10개월, 4-11개월, 5-12개월, 1-9개월, 2-10개월, 3-11개월, 4-12개월, 1-10개월, 2-11개월, 3-12개월, 1-11개월, 2-12개월, 또는 1-12개월 동안 지속될 수 있다.
특정 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 최대 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 240, 270 또는 280일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소된다.
특정 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 최대 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 240 또는 270일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 40% 이상만큼 감소된다.
특정 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 최대 30, 60, 90, 120, 150, 180, 또는 190일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소된다.
특정 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 최대 30, 60, 90, 120, 150 또는 180일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 50% 이상만큼 감소된다.
특정 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 최대 30, 60, 90, 120 또는 150일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 60% 이상만큼 감소된다.
특정 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 최대 30, 60, 90 또는 120일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소된다.
특정 실시양태에서, CTX-1은 투여 후 최대 30, 60 또는 90일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 80% 이상만큼 감소된다.
다른 실시양태에서, 피험체에게 핵 인자 카파 B 리간드의 수용체 활성화제(RANKL)에 특이적으로 결합하는 폴리펩티드를 투여하는 단계를 포함하는 방법으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 투여 후 약 30일 이상 동안 I형 콜라겐의 N 말단 텔로펩티드(NTX-1)의 수준을 감소시키는 데 효과적인 것인, 피험체에서 골 재흡수 또는 파골세포 활성을 억제시키는 방법을 제공한다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 투여 후 약 30일 이상 동안 NTX-1의 뇨 수준을 감소시키는 데 효과적인 것인, 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, NTX-1의 뇨 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30%-80% 이상만큼, 예컨대, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47, 48, 59, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 또는 80% 이상만큼 감소된다. NTX-1 수준 감소는 보다 장기간 동안, 예컨대, 60일 이상, 90일 이상, 120일 이상, 150일 이상, 180일 이상, 210일 이상, 240일 이상, 270일 이상, 300일 이상, 330일 이상, 또는 360일 이상 동안; 예를 들어, (각 범위의 끝점 포함) 30-60일, 60-90일, 90-120일, 120-150일, 150-180일, 180-210일, 210-240일, 240-270일, 270-300일, 300-330일, 330-360일, 30-90일, 60-120일, 90-150일, 120-180일, 150-210일, 180-240일, 210-270일, 240-300일, 270-330일, 300-360일, 30-120일, 60-150일, 90-180일, 120-210일, 150-240일, 180-270일, 210-300일, 240-330일, 270-360일, 30-150일, 60-180일, 90-210일, 120-240일, 150-270일, 180-300일, 210-330일, 240-360일, 30-180일, 60-210일, 90-240일, 120-270일, 150-300일, 180-330일, 210-360일, 30-210일, 60-240일, 90-270일, 120-300일, 150-330일, 180-360일, 30-240일, 60-270일, 90-300일, 120-330일, 150-360일, 30-270일, 60-300일, 90-330일, 120-360일, 30-300일, 60-330일, 90-360일, 30-330일, 60-360일, 및 30-360일 동안; 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개월 동안; 예를 들어, 30일-3개월, 1-3개월, 2-4개월, 3-5개월, 4-6개월, 5-7개월, 6-8개월, 7-9개월, 8-10개월, 9-11개월, 10-12개월, 1-4개월, 2-5개월, 3-6개월, 4-7개월, 5-8개월, 6-9개월, 7-10개월, 8- 11개월, 9-12개월, 1-5개월, 2-6개월, 3-7개월, 4-8개월, 5-9개월, 6-10개월, 7-11개월, 8-12개월, 1-6개월, 2-7개월, 3-8개월, 4-9개월, 5-10개월, 6-11개월, 7-12개월, 1-7개월, 2-8개월, 3-9개월, 4-10개월, 5-11개월, 6-12개월, 1-8개월, 2-9개월, 3-10개월, 4-11개월, 5-12개월, 1-9개월, 2-10개월, 3-11개월, 4-12개월, 1-10개월, 2-11개월, 3-12개월, 1-11개월, 2-12개월, 또는 1-12개월 동안 지속될 수 있다.
특정 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 최대 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 240, 270, 300, 330 또는 360일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소된다.
특정 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 최대 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 240, 270, 300, 330 또는 360일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 40% 이상만큼 감소된다.
특정 실시양태에서, NTX-1은 NTX-1은 투여 후 최대 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 240 또는 250일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소된다.
특정 실시양태에서, NTX-1은 NTX-1은 투여 후 최대 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210 또는 240일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 50% 이상만큼 감소된다.
특정 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 최대 30, 60, 90, 120, 150, 180 또는 210일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 60% 이상만큼 감소된다.
특정 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 최대 30, 60, 90, 150 또는 180일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소된다.
특정 실시양태에서, NTX-1은 투여 후 최대 30, 60 또는 90일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 80% 이상만큼 감소된다.
다른 실시양태에서, 피험체에게 핵 인자 카파 B 리간드의 수용체 활성화제(RANKL)에 특이적으로 결합하는 폴리펩티드를 투여하는 단계를 포함하는 방법으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 투여 후 약 30일 이상 동안 타르트레이트 저항성 산성 포스파타제(TRACP5b)의 혈청 수준을 감소시키는 데 효과적인 것인, 피험체에서 골 재흡수 또는 파골세포 활성을 억제시키는 방법을 제공한다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 투여 후 약 30일 이상 동안 TRACP5b의 혈청 수준을 감소시키는 데 효과적이다. 일부 실시양태에서, TRACP5b의 혈청 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30%-80% 이상만큼, 예컨대, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47, 48, 59, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59 또는 60% 이상만큼 감소된다. TRACP5b의 혈청 수준의 감소는 보다 장기간 동안, 예컨대, 60일 이상, 90일 이상, 120일 이상, 150일 이상, 180일 이상, 210일 이상 동안; 예를 들어, (각 범위의 끝점 포함) 30-60일, 60-90일, 90-120일, 120-150일, 150-180일, 180-210일, 30-90일, 60-120일, 90-150일, 120-180일, 30-120일, 60-150일, 90-180일, 120-210일, 30-150일, 60-180일, 90-210일, 30-180일, 60-210일, 30-210일 동안; 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개월 이상 동안; 예를 들어, 30일-3개월, 1-3개월, 2-4개월, 3-5개월, 4-6개월, 5-7개월, 1-4개월, 2-5개월, 3-6개월, 4-7개월, 1-5개월, 2-6개월, 3-7개월, 1-6개월, 2-7개월 또는 1-7개월 동안 지속될 수 있다.
특정 실시양태에서, TRACP5b는 투여 후 최대 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소된다.
특정 실시양태에서, TRACP5b는 투여 후 최대 30, 60, 90, 120, 150일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 40% 이상만큼 감소된다.
특정 실시양태에서, TRACP5b는 투여 후 최대 30, 60, 90, 120, 150일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소된다.
특정 실시양태에서, TRACP5b는 투여 후 최대 30, 60일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 50% 이상만큼 감소된다.
특정 실시양태에서, TRACP5b는 투여 후 최대 30일 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 60% 이상만큼 감소된다.
다른 실시양태에서, 피험체에게 핵 인자 카파 B 리간드의 수용체 활성화제(RANKL)에 특이적으로 결합하는 폴리펩티드를 투여하는 단계를 포함하는 방법으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 투여 후 30일 이상 동안 1형 프로콜라겐 아미노 말단 프로펩티드의 혈청 수준을 감소시키는 데 효과적인 것인, 피험체에서 골 재흡수 또는 파골세포 활성을 억제시키는 방법을 제공한다. 따라서, 본 발명은 또한 RANKL 매개 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 투여 후 약 30일 이상 동안 P1NP의 혈청 수준을 감소시키는 데 효과적이다. 일부 실시양태에서, P1NP의 혈청 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30%-80% 이상만큼, 예컨대, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47, 48, 59, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 또는 80% 이상만큼 감소된다. P1NP의 혈청 수준의 감소는 보다 장기간 동안, 예컨대, 60일 이상, 90일 이상, 120일 이상, 150일 이상, 180일 이상, 210일 이상, 240일 이상, 270일 이상, 300일 이상, 330일 이상, 또는 360일 이상 동안; 예를 들어, (각 범위의 끝점 포함) 30-60일, 60-90일, 90-120일, 120-150일, 150-180일, 180-210일, 210-240일, 240-270일, 270-300일, 300-330일, 330-360일, 30-90일, 60-120일, 90-150일, 120-180일, 150-210일, 180-240일, 201-270일, 240-300일, 270-330일, 300-360일, 30-120일, 60-150일, 90-180일, 120-210일, 150-240일, 180-270일, 210-300일, 240-330일, 270-360일, 30-150일, 60-180일, 90-210일, 120-240일, 150-270일, 180-300일, 210-330일, 240-360일, 30-180일, 60-210일, 90-240일, 120-270일, 150-300일, 180-330일, 210-360일, 30-210일, 60-240일, 90-270일, 120-300일, 150-330일, 180-360일, 30-240일, 60-270일, 90-300일, 120-330일, 150-360일, 30-270일, 60-300일, 90-330일, 120-360일, 30-300일, 60-330일, 90-360일, 30-330일, 60-360일, 및 30-360일 동안; 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12개월 이상 동안; 예를 들어, 30일-3개월, 1-3개월, 2-4개월, 3-5개월, 4-6개월, 5-7개월, 6-8개월, 7-9개월, 8-10개월, 9-11개월, 10-12개월, 1-4개월, 2-5개월, 3-6개월, 4-7개월, 5-8개월, 6-9개월, 7-10개월, 8-11개월, 9-12개월, 1-5개월, 2-6개월, 3-7개월, 4-8개월, 5-9개월, 6-10개월, 7-11개월, 8-12개월, 1-6개월, 2-7개월, 3-8개월, 4-9개월, 5-10개월, 6-11개월, 7-12개월, 1-7개월, 2-8개월, 3-9개월, 4-10개월, 5-11개월, 6-12개월, 1-8개월, 2-9개월, 3-10개월, 4-11개월, 5-11개월, 1-9개월, 2-10개월, 3-11개월, 4-12개월, 1-10개월, 2-11개월, 3-12개월, 1-11개월, 2-12개월, 또는 1-12개월 동안 지속될 수 있다.
특정 실시양태에서, P1NP는 투여 후 최대 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 240, 270 또는 300일 동안 최대 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소된다.
특정 실시양태에서, P1NP는 투여 후 최대 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 240 또는 270일 동안 최대 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 40% 이상만큼 감소된다.
특정 실시양태에서, P1NP는 투여 후 최대 30, 60, 90, 120, 150, 180, 또는 210일 동안 최대 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소된다.
특정 실시양태에서, P1NP는 투여 후 최대 30, 60, 90, 120, 150, 180 또는 210일 동안 최대 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 50% 이상만큼 감소된다.
특정 실시양태에서, P1NP는 투여 후 최대 30, 60, 90, 120, 150, 180 또는 210일 동안 최대 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 60% 이상만큼 감소된다.
특정 실시양태에서, P1NP는 투여 후 최대 30, 60, 90, 120, 150 또는 180일 동안 최대 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소된다.
특정 실시양태에서, P1NP는 투여 후 최대 30, 60, 90 또는 120일 동안 최대 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 80% 이상만큼 감소된다.
일부 실시양태에서, CTX-1 및/또는 NTX-1의 감소는 폴리펩티드 투여 후 8시간까지, 예컨대, 폴리펩티드 투여 후 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 또는 24시간까지 달성된다.
일부 실시양태에서, TRACP5b의 감소는 폴리펩티드 투여 후 2일까지, 예컨대, 폴리펩티드 투여 후 3, 4 또는 5일까지 달성된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 예상 밖의 지속적이고, 장기간에 걸친 효과를 얻기 위해, RANKL에 특이적으로 결합하는 폴리펩티드는 약 0.001 mg/kg 내지 약 10 mg/kg인 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 용량 범위(각 범위 끝점에 있는 값 포함)로 0.003-10 mg/kg, 예컨대, 0.003-3 mg/kg, 0.003-1 mg/kg, 0.003-0.3 mg/kg, 0.003- 0.1 mg/kg, 0.003-0.03 mg/kg, 0.003-0.01 mg/kg, 0.01-10 mg/kg, 0.01-3 mg/kg, 0.01-1 mg/kg, 0.01-0.3 mg/kg, 0.01-0.1 mg/kg, 0.01-0.03 mg/kg, 0.03- 10 mg/kg, 0.03-3 mg/kg, 0.03-1 mg/kg, 0.03-0.3 mg/kg, 0.03-0.1 mg/kg, 0.1-10 mg/kg, 0.1-3 mg/kg, 0.1-1 mg/kg, 0.1-0.3 mg/kg, 0.3-10 mg/kg, 0.3-3 mg/kg, 0.3-1 mg/kg, 1-10 mg/kg, 1-3 mg/kg, 및 3-10 mg/kg을 포함한다. 일부 실시양태에서, 구체적인 용량으로 0.003, 0.004, 0.005, 0.006, 0.007, 0.008, 0.009, 0.01, 0.02, 0.03, 0.04, 0.05, 0.06, 0.07, 0.08, 0.09, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 mg/kg을 포함한다.
바람직한 용량은 편의상 단일 용량으로, 또는 적절한 간격을 두고 투여되는 분할 용량으로, 예를 들어, 1개월 용량, 예컨대, 1개월당 1회분 용량(Q1M), 1개월당 2회분 용량(Q2M), 1개월당 3회분 용량(Q3M), 또는 1개월당 4회분 용량(Q4M) 등으로 제공될 수 있다.
바람직한 측면에서, 본 발명의 폴리펩티드는 매달 약 0.003 mg/kg 내지 약 0.03 mg/kg인 양으로 투여된다.
또 다른 바람직한 측면에서, 본 발명의 폴리펩티드는 매 2개월마다 약 0.01 mg/kg 내지 약 0.1 mg/kg인 양으로 투여된다.
또 다른 바람직한 측면에서, 본 발명의 폴리펩티드는 매 3개월마다 약 0.01 mg/kg 내지 약 0.1 mg/kg인 양으로 투여된다.
또 다른 바람직한 측면에서, 본 발명의 폴리펩티드는 매 3개월마다 약 0.01 mg/kg 내지 약 0.1 mg/kg인 양으로 투여된다.
바람직하게는, 본 발명의 폴리펩티드는 서열 번호 12이다.
피험체에게 본 발명의 폴리펩티드를 약 0.003 mg/kg인 양으로 투여하는 단계를 포함하는 방법으로서, 여기서, 혈청 중 CTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 만큼 감소되고, 투여 후 30일 이상 동안 30% 이상으로 유지되는 것인, 피험체에서 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키는 방법을 제공한다.
또 다른 구체적인 측면에서, 본 발명의 폴리펩티드는 약 0.01 mg/kg 내지 0.03 mg/kg인 양으로 투여되고, 여기서, 혈청 중 CTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 만큼 감소되고, 투여 후 30일 이상 동안 30% 이상으로 유지된다. 일부 실시양태에서, CTX-1의 혈청 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 40% 이상, 예컨대, 45% 이상, 50% 이상, 더욱 바람직하게는, 60% 이상 또는 심지어는 70% 이상만큼 감소되고, 그러한 수준으로 유지된다. 구체적인 측면에서, 혈청 중 CTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 만큼 감소되고, 투여 후 최대 60일 이상, 90일 이상, 또는 120일 이상 동안 30% 이상으로 유지된다. 또 다른 구체적인 측면에서, 혈청 중 CTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 만큼 감소되고, 투여 후 최대 60일 동안 45% 이상으로 유지된다.
또 다른 구체적인 측면에서, 본 발명의 폴리펩티드는 약 0.1 mg/kg 내지 1 mg/kg 이상인 양으로 투여되고, 여기서, 혈청 중 CTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 만큼 감소되고, 투여 후 30일 이상 동안 30% 이상으로 유지된다. 일부 실시양태에서, CTX-1의 혈청 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 40% 이상, 예컨대, 45% 이상, 50% 이상, 더욱 바람직하게는, 60% 이상, 70% 이상 또는 심지어는 80% 이상만큼 감소되고, 그러한 수준으로 유지된다. 구체적인 측면에서, 혈청 중 CTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 만큼 감소되고, 투여 후 최대 60일 이상, 90일 이상, 120일 이상, 150일 이상, 210일 이상, 또는 심지어 270일 이상 동안 30% 이상으로 유지된다. 또 다른 구체적인 측면에서, 혈청 중 CTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 만큼 감소되고, 투여 후 최대 60일 이상, 90일 이상, 120일 이상, 또는 심지어 150일 이상 동안 45% 이상으로 유지된다.
피험체에게 본 발명의 폴리펩티드를 약 0.01 mg/kg 내지 0.03 mg/kg인 양으로 투여하는 단계를 포함하는 방법으로서, 여기서, 뇨 중 NTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 만큼 감소되고, 투여 후 30일 이상 동안 30% 이상으로 유지되는 것인, 피험체에서 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, NTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 40% 이상, 예컨대, 45% 이상, 더욱 바람직하게는, 50% 이상, 또는 심지어 60% 이상만큼 감소되고, 그러한 수준으로 유지된다. 구체적인 측면에서, 뇨 중 NTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 만큼 감소되고, 투여 후 최대 60일 이상, 또는 90일 이상 동안 30% 이상으로 유지된다. 또 다른 구체적인 측면에서, NTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 만큼 감소되고, 투여 후 최대 60일 이상 동안 45% 이상으로 유지된다.
또 다른 구체적인 측면에서, 본 발명의 폴리펩티드는 약 0.1 mg/kg 내지 1 mg/kg 이상인 양으로 투여되고, 여기서, NTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 만큼 감소되고, 투여 후 30일 이상 동안 30% 이상으로 유지된다. 일부 실시양태에서, NTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 40% 이상, 예컨대, 45% 이상, 50% 이상, 더욱 바람직하게는, 60% 이상, 또는 심지어 70% 이상만큼 감소되고, 그러한 수준으로 유지된다. 구체적인 측면에서, 뇨 중 NTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 만큼 감소되고, 투여 후 최대 60일 이상, 90일 이상, 120일 이상, 150일 이상, 210일 이상, 또는 심지어 270일 이상 동안 30% 이상으로 유지된다. 또 다른 구체적인 측면에서, 뇨 중 NTX-1 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 만큼 감소되고, 투여 후 최대 60일 이상, 90일 이상, 120일 이상, 또는 심지어 150일 이상 동안 45% 이상으로 유지된다.
피험체에게 본 발명의 폴리펩티드를 약 0.003 mg/kg인 양으로 투여하는 단계를 포함하는 방법으로서, 여기서, 혈청 중 TRACP5b 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 만큼 감소되고, 30% 이상으로 유지되는 것인, 피험체에서 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키는 방법을 제공한다.
또 다른 구체적인 측면에서, 본 발명의 폴리펩티드는 약 0.01 mg/kg 내지 0.03 mg/kg인 양으로 투여되고, 여기서, 혈청 중 TRACP5b 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 만큼 감소되고, 투여 후 30일 이상 동안 30% 이상으로 유지된다. 구체적인 측면에서, 혈청 중 TRACP5b 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 만큼 감소되고, 투여 후 최대 60일 이상 동안 30% 이상으로 유지된다.
또 다른 구체적인 측면에서, 본 발명의 폴리펩티드는 약 0.1 mg/kg 이상인 양으로 투여되고, 여기서, 혈청 중 TRACP5b 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 만큼 감소되고, 투여 후 30일 이상 동안 30% 이상으로 유지된다. 일부 실시양태에서, TRACP5b의 혈청 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 40% 이상, 예컨대, 45% 이상만큼 감소되고, 그러한 수준으로 유지된다. 구체적인 측면에서, 혈청 중 TRACP5b 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 만큼 감소되고, 투여 후 최대 60일 이상, 또는 심지어 90일 이상 동안 30% 이상으로 유지된다.
또 다른 구체적인 측면에서, 본 발명의 폴리펩티드는 약 0.3 mg/kg 내지 1 mg/kg 이상인 양으로 투여되고, 여기서, 혈청 중 TRACP5b 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 만큼 감소되고, 투여 후 30일 이상 동안 30% 이상으로 유지된다. 일부 실시양태에서, TRACP5b의 혈청 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 40% 이상, 예컨대, 45% 이상, 50% 이상, 또는 심지어 60% 이상만큼 감소되고, 그러한 수준으로 유지된다. 구체적인 측면에서, 혈청 중 TRACP5b 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 만큼 감소되고, 투여 후 최대 60일 이상, 90일 이상, 또는 심지어 120일 이상 동안 30% 이상으로 유지된다. 또 다른 구체적인 측면에서, 혈청 중 TRACP5b 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 만큼 감소되고, 투여 후 최대 60일 이상, 또는 90일 이상 동안 45% 이상으로 유지된다.
피험체에게 본 발명의 폴리펩티드를 약 0.003 mg/kg 내지 약 0.01 mg/kg인 양으로 투여하는 단계를 포함하는 방법으로서, 여기서, 혈청 중 P1NP 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 만큼 감소되고, 투여 후 30일 이상 동안 30% 이상으로 유지되는 것인, 피험체에서 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 혈청 중 P1NP 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 40% 이상만큼 감소되고, 그러한 수준으로 유지된다. 구체적인 측면에서, 혈청 중 P1NP 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 만큼 감소되고, 투여 후 최대 60일 이상, 또는 심지어 90일 이상 동안 30% 이상으로 유지된다.
또 다른 구체적인 측면에서, 본 발명의 폴리펩티드는 약 0.03 mg/kg인 양으로 투여되고, 여기서, 혈청 중 P1NP 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 만큼 감소되고, 투여 후 30일 이상 동안 30% 이상으로 유지된다. 일부 실시양태에서, P1NP의 혈청 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 40% 이상, 예컨대, 45% 이상만큼 감소되고, 그러한 수준으로 유지된다. 구체적인 측면에서, 혈청 중 P1NP 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 만큼 감소되고, 투여 후 최대 60일 이상, 90일 이상, 120일 이상, 또는 심지어 150일 이상 동안 30% 이상으로 유지된다. 또 다른 구체적인 측면에서, 혈청 중 P1NP 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 만큼 감소되고, 투여 후 최대 60일 이상, 또는 심지어 90일 이상 동안 45% 이상으로 유지된다.
또 다른 구체적인 측면에서, 본 발명의 폴리펩티드는 약 0.1 mg/kg 내지 1 mg/kg 이상인 양으로 투여되고, 여기서, 혈청 중 P1NP 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 만큼 감소되고, 투여 후 30일 이상 동안 30% 이상으로 유지된다. 일부 실시양태에서, P1NP의 혈청 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 40% 이상, 예컨대, 45% 이상, 50% 이상, 더욱 바람직하게는 60% 이상, 70% 이상, 또는 심지어 80% 이상만큼 감소되고, 그러한 수준으로 유지된다. 구체적인 측면에서, 혈청 중 P1NP 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 만큼 감소되고, 투여 후 최대 60일 이상, 90일 이상, 120일 이상, 150일 이상, 210일 이상, 또는 심지어 270일 동안 30% 이상으로 유지된다. 또 다른 구체적인 측면에서, 혈청 중 P1NP 수준은 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 만큼 감소되고, 투여 후 최대 60일 이상, 90일 이상, 120일 이상, 또는 심지어 150일 이상 동안 45% 이상으로 유지된다.
바람직한 측면에서, 본 발명의 폴리펩티드는 서열 번호 12이다.
본 발명의 폴리펩티드
면역글로불린 단일 가변 도메인
달리 명시되지 않는 한, "면역글로불린 서열"이라는 용어는, 본원에서 사용되는 바, 중쇄 항체를 의미하든, 또는 종래의 4쇄 항체를 의미하든 간에, 전장의 항체, 그의 개별 쇄 뿐만 아니라, 그의 모든 부분, 도메인, 또는 단편(항원 결합 도메인 또는 단편, 예컨대, 각각 VHH 도메인 또는 VH/VL 도메인을 포함하나, 이에 한정되지 않는다), 둘 모두를 포함하는 일반 용어로서 사용된다. 추가로, 본원에서 사용되는 "서열"이라는 용어는(예를 들어, "면역글로불린 서열," "항체 서열," "가변 도메인 서열," "VHH 서열" 또는 "단백질 서열"과 같은 용어에서), 문맥상 보다 제한된 해석을 요구하지 않는 한, 일반적으로는 관련 아미노산 서열 뿐만 아니라, 그를 코딩하는 핵산 서열 또는 뉴클레오티드 서열 둘 모두를 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
"단일 가변 도메인"과 상호교환적으로 사용되는 "면역글로불린 단일 가변 도메인"이라는 용어는 단일 면역글로불린 도메인 위에 항원 결합 부위가 존재하며, 단일 면역글로불린 도메인에 의해 형성된 것인 분자를 의미한다. 이를 통해 면역글로불린 단일 가변 도메인은, 두 면역글로불린 도메인, 특히 두 가변 도메인이 상호작용하여 항원 결합 부위를 형성하는 "종래의" 면역글로불린 또는 그의 단편로부터 구별된다. 전형적으로, 종래의 면역글로불린에서는 중쇄 가변 도메인(VH) 및 경쇄 가변 도메인(VL)이 상호작용하여 항원 결합 부위를 형성하는데, 이러한 경우, VH 및 VL, 둘 모두의 상보성 결정 영역(CDR)이 항원 결합 부위에 기여하게 되며, 즉, 총 6개의 CDR이 항원 결합 부위 형성에 관여하게 된다. 대조적으로, 면역글로불린 단일 가변 도메인의 결합 부위는 단일 VH 또는 VL 도메인에 의해 형성된다. 이에, 면역글로불린 단일 가변 도메인의 결합 부위는 3개 이하의 CDR에 의해 형성된다.
따라서, "면역글로불린 단일 가변 도메인" 및 "단일 가변 도메인"이라는 용어는 항원 결합 부위 형성을 위해 2개 이상의 가변 도메인이 상호작용하여야 하는 종래의 면역글로불린 또는 그의 단편을 포함하지 않는다. 그러나, 상기 용어는 항원 결합 부위가 단일 가변 도메인에 의해 형성된, 종래의 면역글로불린의 단편은 포함한다.
일반적으로, 단일 가변 도메인은 실질적으로 4개의 골격 영역(각각 FR1 내지 FR4) 및 3개의 상보성 결정 영역(각각 CDR1 내지 CDR3)으로 구성된 아미노산 서열; 또는 상기 아미노산 서열의 임의의 적합한 단편(이는 이어서 일반적으로는 CDR 중 1 이상을 형성하는 아미노산 잔기 중 적어도 일부를 함유할 것이다)일 것이다. 상기 단일 가변 도메인 및 단편은 면역글로불린 폴드를 포함하거나, 적합한 조건하에서 면역글로불린 폴드를 형성할 수 있는 것이 가장 바람직하다. 따라서, 단일 가변 도메인은, 그가 단일 항원 결합 단위(즉, 실질적으로 단일 가변 도메인으로 구성된 기능성 항원 결합 단위로, 이로써, 단일 항원 결합 도메인가 예컨대, VH/VL 상호작용을 통해 또 다른 가변 도메인과 상호작용하여 기능성 항원 결합 도메인을 형성하여야 하는 종래의 항체 및 scFv 단편에 존재하는 가변 도메인에 대한 경우에서와 같이 또 다른 가변 도메인과 상호작용하여 기능성 항원 결합 단위를 형성해야 할 필요는 없다)를 형성할 수 있는 한, 예를 들어, 경쇄 가변 도메인 서열(예컨대, VL 서열) 또는 그의 적합한 단편; 또는 중쇄 가변 도메인 서열(예컨대, VH 서열 또는 VHH 서열) 또는 그의 적합한 단편을 포함할 수 있다.
본 발명의 한 실시양태에서, 면역글로불린 단일 가변 도메인은 경쇄 가변 도메인 서열(예컨대, VL 서열), 또는 중쇄 가변 도메인 서열(예컨대, VH 서열)이고; 더욱 구체적으로, 면역글로불린 단일 가변 도메인은 종래의 4쇄 항체로부터 유래된 중쇄 가변 도메인 서열, 또는 중쇄 항체로부터 유래된 중쇄 가변 도메인 서열일 수 있다.
예를 들어, 단일 가변 도메인 또는 면역글로불린 단일 가변 도메인(또는 면역글로불린 단일 가변 도메인으로서 사용하기에 적합한 아미노산 서열)은 (단일) 도메인 항체(또는 (단일) 도메인 항체로서 사용하기에 적합한 아미노산 서열), "dAb" 또는 dAb(또는 dAb로서 사용하기에 적합한 아미노산 서열) 또는 나노바디 (본원에서 정의되는 것과 같은 것, 및 VHH 서열을 포함하나, 이에 한정되지 않는 것)); 다른 단일 가변 도메인, 또는 그의 어느 하나의 임의의 적합한 단편일 수 있다. (단일) 도메인 항체에 대한 일반적인 설명에 대해서는 본원에서 인용된 선행 기술 뿐만 아니라, EP 0368684 또한 참조할 수 있다. 'dAb'라는 용어에 대해서는, 예를 들어, 문헌 [Ward et al. (1989, Nature 341 (6242): 544-6)], [Holt et al. (2003, Trends Biotechnol. 21(11): 484-490)]; 뿐만 아니라, 예를 들어, WO 04/068820, WO 06/030220, WO 06/003388 및 도만티스 리미티드(Domantis Ltd.)의 다른 공개된 특허 출원을 참조할 수 있다. 포유동물 기원이 아니라는 점에서, 본 발명과 관련하여 덜 바람직하기는 하지만, 단일 가변 도메인은 특정 종의 상어로부터 유래된 것일 수 있다는 점에 주의하여야 한다(예를 들어, 소위 "IgNAR 도메인," 예를 들어, WO 05/18629 참조).
특히, 면역글로불린 단일 가변 도메인은 (본원에 정의된 바와 같은) 나노바디 또는 그의 적합한 단편일 수 있다. [주석: 나노바디(Nanobody)®, 나노바디즈(나노바디)® 및 나노클론(Nanoclone)®은 아블인스 엔. 브이.(Ablynx N.V.)의 등록된 상표명이다]. 나노바디에 대한 일반적인 설명은, 하기의 추가 설명 뿐만 아니라, 본원에 인용된 선행 기술, 예컨대, WO 08/020079(16페이지)에 기술되어 있는 것을 참조할 수 있다.
면역글로불린 서열 및 면역글로불린 단일 가변 도메인, 및 특히 나노바디의 아미노산 서열 및 구조는, 그로 제한되는 것은 아니지만, 4개의 골격 영역 또는 "FR"로 구성된 것으로 간주되는데, 이들은 당업계 및 본원에서 각각 "골격 영역 1" 또는 "FR1"로서; "골격 영역 2" 또는 "FR2"로서; "골격 영역 3" 또는 "FR3"으로서; 및 "골격 영역 4" 또는 "FR4"로서 지칭되며; 이 골격 영역에는, 당업계에 각각 "상보성 결정 영역 1" 또는 "CDR1"로서; "상보성 결정 영역 2" 또는 "CDR2"로서; 및 "상보성 결정 영역 3" 또는 "CDR3"로서 지칭되는 3개의 상보성 결정 영역 또는 "CDR"이 개입되어 있다.
면역글로불린 단일 가변 도메인, 및 특히 나노바디 중 아미노산 잔기의 총 개수는 약 110-120개일 수 있고, 바람직하게는, 112-115개이고, 가장 바람직하게는 113개이다. 그러나, 면역글로불린 단일 가변 도메인, 및 특히 나노바디의 (본원에서 추가로 기술된 것과 같은) 일부, 단편, 유사체, 또는 유도체는 상기와 같은 일부, 단편, 유사체, 또는 유도체가 본원에서 개략적으로 설명된 추가의 요건을 충족시키고, 또한 바람직하게는 본원에 기술된 목적에 적합하는 한, 그의 길이 및/또는 크기에 있어 특별히 제한되지 않는다는 점에 주의하여야 한다.
VHH 및 나노바디에 대한 추가의 설명을 위해, (Muyldermans)의 리뷰 논문(문헌 [(2001, Reviews in Molecular Biotechnology 74: 277-302)]) 뿐만 아니라, 일반 배경 기술로서 언급되는 하기 특허 출원: 브뤼셀 자유대학(Vrije Universiteit Bruseel)의 WO 94/04678, WO 95/04079 및 WO 96/34103; 유니레버(Unilever)의 WO 94/25591, WO 99/37681, WO 00/40968, WO 00/43507, WO 00/65057, WO 01/40310, WO 01/44301, EP 1134231 및 WO 02/48193; 플랜더스 생명공학 연구소(VIB: Vlaams Instituut voor Biotechnologie)의 WO 97/49805, WO 01/21817, WO 03/035694, WO 03/054016 및 WO 03/055527; 알고노믹스 엔.브이.(Algonomics N.V.) 및 아블인스 엔. 브이.의 WO 03/050531; 캐나다 국립 연구 회의(National Research Council of Canada)에 의한 WO 01/90190; 인스티튜트 오브 안티바디스(Institute of Antibodies)에 의한 WO 03/025020(= EP 1 433 793); 뿐만 아니라, 아블인스 엔. 브이.에 의한 WO 04/041867, WO 04/041862, WO 04/041865, WO 04/041863, WO 04/062551, WO 05/044858, WO 06/40153, WO 06/079372, WO 06/122786, WO 06/122787 및 WO 06/122825, 및 아블인스 엔. 브이.에 의한 추가의 공개된 특허 출원을 참고할 수 있다. 상기 출원에서 언급된 추가의 선행 기술, 및 특히, 국제 출원 WO 06/040153의 41-43페이지 상에서 언급된 참고 문헌에 관한 목록(상기 목록 및 참고 문헌은 본원에서 참고로 포함된다) 또한 참고할 수 있다. 이러한 참고문헌에서 기술된 바와 같이, 나노바디(특히, VHH 서열 및 부분적으로 인간화된 나노바디)는 특히 골격 서열 중 하나 이상에 하나 이상의 "홀마크 잔기"가 존재하는 것으로 특징으로 할 수 있다. 나노바디의 인간화 및/또는 카멜화 뿐만 아니라, 다른 변형, 일부 또는 단편, 유도체 또는 "나노바디 융합체," 다가 구성체(링커 서열의 일부 비제한적인 예 포함) 및 나노바디의 반감기를 증가시키기 위한 다른 변형 및 그의 제조 방법을 비롯한, 나노바디에 관한 추가 설명은 예컨대, WO 08/101985 및 WO 08/142164에서 살펴볼 수 있다.
따라서, 일반적으로, 나노바디는 WO 08/142164(30페이지 5번째줄부터 31페이지 7번째줄, 및 108페이지 26번째줄부터 140페이지 15번째줄)에 기술되어 있는 것과 같은 아미노산 서열로서 추가로 정의될 수 있다.
따라서, 본 발명의 의미히에서, "면역글로불린 단일 가변 도메인" 또는 "단일 가변 도메인"이라는 용어는 인간 공급원 이외의 것, 바람직하게는, 카멜리드로부터 유래된 폴리펩티드, 바람직하게는, 카멜 중쇄 항체를 포함한다. 이는 앞서 기술된 바와 같이 인간화된 것일 수 있다. 또한, 상기 용어는 카멜리드 공급원 이외의 것, 예컨대, 마우스 또는 인간으로부터 유래된 폴리펩티드로서, 앞서 기술된 바와 같이, "카멜화된" 것인 폴리펩티드를 포함한다.
"면역글로불린 단일 가변 도메인"이라는 용어는 마우스, 래트, 토끼, 당나귀, 인간 및 카멜리드 면역글로불린 서열을 포함하는, 상이한 기원의 면역글로불린 서열을 포함한다. 이는 또한 전체적으로 인간, 인간화된 또는 키메라 면역글로불린 서열을 포함한다. 예를 들어, 이는 카멜리드 면역글로불린 서열 및 인간화된 카멜리드 면역글로불린 서열, 또는 카멜화된 면역글로불린 단일 가변 도메인, 예컨대, (Ward) 등에 의해 기술된 것과 같은 카멜화된 dAb를 포함한다(예를 들어, WO 94/04678 및 문헌 [Davies and Riechmann (1994, FEBS 339:285-290;1995, Biotechnol. 13:475-479;1996, Prot. Eng. 9: 531-537)] 참조).
그러나, 본 발명이 본원에서 사용된 면역글로불린 서열(또는 그를 발현시키는 데 사용된 뉴클레오티드 서열)의 기원으로도, 면역글로불린 서열 또는 뉴클레오티드 서열을 생성하거나 수득하는 데 사용되는(또는 생성 또는 수득하는 데 사용된) 방법으로도 제한되는 것은 아니라는 점에 주의하여야 한다. 따라서, 본 발명의 면역글로불린 서열은 (임의의 적합한 종으로부터의) 천연적으로 발생된 아미노산 서열, 또는 합성 또는 반합성 아미노산 서열일 수 있다. 본 발명의 구체적이지만, 비제한적인 측면에서, 면역글로불린 서열은 (임의의 적합한 종으로부터의) 천연적으로 발생된 아미노산 서열, 또는 (본원에서 정의된 바와 같은) "인간화된" 면역글로불린 서열(예컨대, 부분적으로 또는 전체적으로 인간화된 마우스 또는 토끼 면역글로불린 서열, 및 특히 부분적으로 또는 전체적으로 인간화된 VHH 서열 또는 노바디), (본원에서 정의된 바와 같은) "카멜화된" 면역글로불린 서열 뿐만 아니라, 기법, 예컨대, 친화도 성숙(예를 들어, 합성 또는 무작위 또는 천연적으로 발생된 면역글로불린 서열로부터 출발하는 것), CDR 이식, 베니어링, 상이한 면역글로불린 서열로부터 유래된 단편의 조합, 중합 프라이머를 사용한 PCR 조립, 및 당업자에게 주지되어 있는 면역글로불린 서열을 조작하는 유사 기법; 또는 상기 중 어느 것의 임의의 적합한 조합에 의해 수득된 면역글로불린 서열을 포함하나, 이에 한정되지 않는 합성 또는 반합성 아미노산 서열이다. 예를 들어, 표준 판람 뿐만 아니라, 본원에서 언급된 추가의 설명 및 선행 기술을 참고할 수 있다.
유사하게, 본 발명에서 사용된 뉴클레오티드 서열은 천연적으로 발생된 뉴클레오티드 서열 또는 합성 또는 반합성 서열일 수 있고, 이는 예를 들어, 적합한 천연적으로 발생된 주형(예컨대, 세포로부터 단리된 DNA 또는 RNA)으로부터 PCR에 의해 단리되는 서열, 라이브러리(및 특히 발현 라이브러리)로부터 단리된 뉴클레오티드 서열, (그 자체가 공지되어 있는 임의의 적합한 기법, 예컨대, 미스매치 PCR을 사용하여) 돌연변이를 천연적으로 발생된 뉴클레오티드 서열로 도입시킴으로써 제조된 뉴클레오티드 서열, 중복 프라이머를 사용하여 PCR에 의해 제조된 뉴클레오티드 서열, 또는 그 자체가 공지된 DNA 합성 기법을 사용하여 제조된 뉴클레오티드 서열일 수 있다.
RANKL에 대한 면역글로불린 단일 가변 도메인(및 상기를 포함하는 폴리펩티드)은 US 2010/0104568 및 WO 08/142164에 기술되어 있다.
예를 들어, RANKL에 대한, 바람직한 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디는 4개의 골격 영역(각각 FR1 내지 FR4) 및 3개의 상보성 결정 영역(각각 CDR1 내지 CDR3)으로 구성될 수 있는데, 여기서,
- CDR1은
a) 서열 번호 1의 아미노산 서열 (US 2010/0104568의 서열 번호 200);
b) 서열 번호 1의 아미노산 서열(US 2010/0104568의 서열 번호 200)과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가지는 아미노산 서열;
c) 서열 번호 1의 아미노산 서열(US 2010/0104568의 서열 번호 200)과 3, 2, 또는 1개의 아미노산이 상이한 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택되고/거나,
- CDR2는
d) 서열 번호 2의 아미노산 서열 (US 2010/0104568의 서열 번호 324);
e) 서열 번호 2의 아미노산 서열(US 2010/0104568의 서열 번호 324)과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가지는 아미노산 서열;
f) 서열 번호 2의 아미노산 서열(US 2010/0104568의 서열 번호 324)과 3, 2, 또는 1개의 아미노산이 상이한 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택되고/거나,
- CDR3은
g) d) 서열 번호 3의 아미노산 서열 (US 2010/0104568의 서열 번호 448);
h) 서열 번호 3의 아미노산 서열(US 2010/0104568의 서열 번호 448)과 80% 이상의 아미노산 동일성을 가지는 아미노산 서열;
i) 서열 번호 3의 아미노산 서열(US 2010/0104568의 서열 번호 448)과 3, 2, 또는 1개의 아미노산이 상이한 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택된다.
면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디가 b) 및/또는 c)에 따른 하나 이상의 아미노산 서열을 함유할 때:
i) b) 및/또는 c)에 따른 상기 아미노산 서열 중 임의의 아미노산 치환은 바람직하게는, 및 a)에 따른 상응하는 아미노산 서열과 비교하여 (본원에서 정의된 바와 같은) 보존적 아미노산 서열이고/거나;
ii) b) 및/또는 c)에 따른 아미노산 서열은 바람직하게는 a)에 따른 상응하는 아미노산 서열과 비교하여 오직 아미노산 치환만을 함유하고, 아미노산 결실 또는 삽입은 함유하지 않고/거나;
iii) b) 및/또는 c)에 따른 아미노산 서열은 그 자체가 공지되어 있는 하나 이상의 친화도 성숙 기법을 사용하여 친화도 성숙에 의해 a)에 따른 상응하는 아미노산 서열로부터 유래된 아미노산 서열일 수 있다.
유사하게, 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디가 e) 및/또는 f)에 따른 하나 이상의 아미노산 서열을 함유할 때:
i) e) 및/또는 f)에 따른 상기 아미노산 서열 중 임의의 아미노산 치환은 바람직하게는, 및 d)에 따른 상응하는 아미노산 서열과 비교하여 (본원에서 정의된 바와 같은) 보존적 아미노산 서열이고/거나;
ii) e) 및/또는 f)에 따른 아미노산 서열은 바람직하게는 d)에 따른 상응하는 아미노산 서열과 비교하여 오직 아미노산 치환만을 함유하고, 아미노산 결실 또는 삽입은 함유하지 않고/거나;
iii) e) 및/또는 f)에 따른 아미노산 서열은 그 자체가 공지되어 있는 하나 이상의 친화도 성숙 기법을 사용하여 친화도 성숙에 의해 d)에 따른 상응하는 아미노산 서열로부터 유래된 아미노산 서열일 수 있다.
또한, 유사하게, 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디가 h) 및/또는 i)에 따른 하나 이상의 아미노산 서열을 함유할 때:
i) h) 및/또는 i)에 따른 상기 아미노산 서열 중 임의의 아미노산 치환은 바람직하게는, 및 g)에 따른 상응하는 아미노산 서열과 비교하여 (본원에서 정의된 바와 같은) 보존적 아미노산 서열이고/거나;
ii) h) 및/또는 i)에 따른 아미노산 서열은 바람직하게는 g)에 따른 상응하는 아미노산 서열과 비교하여 오직 아미노산 치환만을 함유하고, 아미노산 결실 또는 삽입은 함유하지 않고/거나;
iii) h) 및/또는 i)에 따른 아미노산 서열은 그 자체가 공지되어 있는 하나 이상의 친화도 성숙 기법을 사용하여 친화도 성숙에 의해 g)에 따른 상응하는 아미노산 서열로부터 유래된 아미노산 서열일 수 있다.
바람직하지만, 비제한적인 한 측면에서, 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디는 실질적으로 4개의 골격 영역(각각 FR1 내지 FR4) 및 3개의 상보성 결정 영역(각각 CDR1 내지 CDR3)으로 구성될 수 있는데, 여기서, 상기 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디의 CDR 서열은 서열 번호 4의 아미노산 서열(US 2010/0104568의 서열 번호 572)과 70% 이상의 아미노산 동일성, 바람직하게는 80% 이상의 아미노산 동일성, 더욱 바람직하게는, 90% 이상의 아미노산 동일성, 예컨대, 95% 이상의 아미노산 동일성 또는 더욱더 실질적으로는 100%의 아미노산 동일성을 가진다. 이러한 아미노산 동일성 정도는 예를 들어, (본원에 기술된 방식으로), 골격 영역을 형성하는 아미노산 잔기는 무시한 채로, 상기 아미노산 서열과 서열 번호 4(US 2010/0104568의 서열 번호 572) 사이의 아미노산 동일성 정도를 측정함으로써 측정될 수 있다.
바람직하지만, 비제한적인 또 다른 측면에서, CDR 서열은 서열 번호: 1, 서열 번호 2 및/또는 서열 번호: 3(US 2010/0104568의 서열 번호 200, 서열 번호 324 및/또는 서열 번호 448)과 80% 초과, 바람직하게는, 90% 초과, 더욱 바라직하게는 95% 초과, 예컨대, 99% 초과의 서열 동일성을 가진다.
특히, 상기 면역글로불린 단일 가변 도메인은 CDR1은 서열 번호 1로부터 선택되고/거나; CDR2는 서열 번호 2로부터 선택되고/거나; CDR3은 서열 번호 3로부터 선택될 수 있다. 더욱 바람직하게는, 본 발명에서 사용되는 면역글로불린 단일 가변 도메인은 실질적으로 4개의 골격 영역(각각 FR1 내지 FR4) 및 3개의 상보성 결정 영역(각각 CDR1 내지 CDR3)으로 구성될 수 있는데, 여기서,
a) CDR1은 서열 번호 1로부터 선택되고;
b) CDR2는 서열 번호 2로부터 선택되고;
c) CDR3은 서열 번호 3로부터 선택된다.
본 발명의 방법에서 사용하기에 바람직한 면역글로불린 단일 가변 도메인은 서열 번호 4(US 2010/0104568의 서열 번호 572) 및/또는 서열 번호 4와 80% 초과, 바람직하게는, 90% 초과, 더욱 바람직하게는, 95% 초과, 예컨대, 99% 이상의 서열 동일성을 가지는 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디를 포함한다.
인간화된 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디는 이전 단락에서 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디에 대해 일반적으로 정의된 것과 같지만, 인간화 치환인 것이고/거나, 그에 상응하는 1 이상의 아미노산 잔기가 (특히 1 이상의 골격 영역 중에) 존재하는 것인 아미노산 서열일 수 있다. 일부 바람직하지만, 비제한적인 인간화 치환(및 그의 적합한 조합)은 본원 개시내용에 기초하여 당업자에게는 자명할 것이다. 추가로, 또는 별법으로, 잠재적으로 유용한 다른 인간화 치환은 천연적으로 발생된 VHH 서열의 골격 영역의 서열과 하나 이상의 밀접하게 관련된 인간 VH 서열의 상응하는 골격 서열과 비교하여 확인할 수 있으며, 이후, 그렇게 확인된 잠재적으로 유용한 인간화 치환 중 하나 이상(또는 그의 조합)을 (본원에 추가로 기술된 바와 같이, 그 자체가 공지된 임의의 방식으로) 상기 VHH 서열에 도입할 수 있고, 생성된 인간화된 VHH 서열은 표적에 대한 친화성, 안정성, 발현의 용이성 및 수준, 및/또는 다른 바람직한 특성에 대하여 테스트할 수 있다. 이러한 방식으로, 제한된 정도의 시행 오차를 수단으로, 다른 적합한 인간화 치환(또는 그의 적합한 그의)을 당업자는 확인할 수 있다. 또한, 상기에 기초하여, 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디(의 골격 영역)는 부분적으로 인간화된 것이거나, 전체적으로 인간화된 것일 수 있다.
따라서, 구체적이지만, 비제한적인 한 측면에서, 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디는 4개의 골격 영역(각각 FR1 내지 FR4) 및 3개의 상보성 결정 영역(각각 CDR1 내지 CDR3)으로 구성된 인간화된 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디일 수 있는데, 여기서, CDR1 내지 CDR3은 본원에서 정의된 바와 같고, 여기서, 상기 인간화된 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디는 (본원에서 정의된 바와 같은) 그의 골격 서열 중 1 이상에 (본원에서 정의된 바와 같은) 1 이상의 인간화 치환, 및 특히 1 이상의 인간화 치환을 포함하는 것일 수 있다.
특히 바람직한 일부 인간화된 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디는 서열 번호 4(US 2010/0104568의 서열 번호 572)의 나노바디의 인간화된 변이체이다.
상기 인간화된 변이체의 바람직하지만, 비제한적인 일부 예로는 서열 번호 5-11(US 2010/0104568의 서열 번호 750-756)의 인간화된 나노바디가 있다. 따라서, 본 발명은 또한 서열 번호 5-11로 이루어진 군으로부터, 또는 서열 번호 5-11의 아미노산 서열 중 1 이상의 것과 80% 초과, 바람직하게는 90% 초과, 더욱 바람직하게는, 95% 초과, 예컨대, 99% 이상의 서열 동일성을 가지는 아미노산 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열(여기서, 후자의 아미노산 서열 군으로부터 선택되는 아미노산 서열은 이들이 서열 번호 5-11의 상응하는 서열에 존재하는 1 이상의 인간화 치환을 보유하는 한, 서열 번호 5-11의 상응하는 서열과 비교하여 더 많은 개수의 또는 더 적은 개수의 인간화 치환을 함유할 수 있다)을 포함하며, 여기서, 서열 번호 10이 특히 바람직한 것인, 인간화된 나노바디에 관한 것이다.
특히, 본 발명의 방법에서 사용되는 면역글로불린 단일 가변 도메인은
- (본원에서 정의된 바와 같이) RANKL에 대한 것이고, 서열 번호 4-11(US 2010/0104568의 서열 번호 572 및 750-756)의 아미노산 서열과 80% 이상, 바람직하게는 85% 이상, 예컨대, 90% 이상 또는 95% 이상의 서열 동일성을 가지는 아미노산일 수 있다. 상기 아미노산 서열은 추가로 RANK의 RANKL에의 결합을 중화시키고/거나; RANKL에의 결합에 대하여 RANK와 경쟁하고/거나; RANKL 상의 상호작용 부위(예컨대, RANK 또는 OP6 결합 부위)에 대한 것일 수 있다; 또는
- 서열 번호 4-11(US 2010/0104568의 서열 번호 572 및 750-756)의 아미노산 서열 중 1 이상의 RANKL에의 결합을 교차 차단하고/거나, RANKL에의 결합에 대하여 서열 번호 4-11(US 2010/0104568의 서열 번호 572 및 750-756)의 아미노산 서열 중 1 이상과 경쟁하는 아미노산 서열일 수 있다. 또한, 상기 아미노산 서열은 추가로 동족 리간드의 RANKL에의 결합을 중화시키고/거나; RANKL에의 결합에 대하여 동족 리간드와 경쟁하고/거나, (본원에서 정의된 바와 같은) RANKL 상의 상호작용 부위(예컨대, RANK 또는 OPG 결합 부위)에 대한 것일 수 있으며; 아미노산 서열은 본원에 추가로 기술된 바와 같을 수 있고(예를 들어, 나노바디일 수 있고); 이뿐 아니라, (본원에 추가로 기술된 바와 같을 수 있고, 예를 들어, 본원에 기술된 바와 같은 이중 특이성 및/또는 이중 파라토프 폴리펩티드일 수 있는), 상기 아미노산 서열 중 하나 이상을 포함하는 본 발명의 폴리펩티드, 및 상기 아미노산 서열 및 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열일 수 있다. 상기 아미노산 서열 및 폴리펩티드는 어떤 천연적으로 발생된 리간드도 포함하지 않는다.
본 발명의 비제한적이지만, 바람직한 측면에 따라, 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디(중에 존재하는 CDR 서열)는
- 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디가 10-5 내지 10-12 몰/ℓ 이하, 및 바람직하게는 10-7 내지 10-12 몰/ℓ 이하 및 더욱 바람직하게는 10-8 내지 10-12 몰/ℓ의 해리 상수(KD)(즉, 105 내지 1012 ℓ/몰 이상, 및 바람직하게는 107 내지 1012 ℓ/몰 이상 및 더욱 바람직하게는 108 내지 1012 ℓ/몰의 회합 상수(KA))로 RANKL에 결합할 수 있도록 하는 것; 및/또는
- 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디가 102 M-1s-1 내지 약 107 M-1s-1, 바람직하게는 103 M-1s-1 내지 약 107 M-1s-1, 더욱 바람직하게는 104 M-1s-1 내지 약 107 M-1s-1, 예컨대, 105 M-1s-1 내지 약 107 M-1s-1의 k온 속도로 RANKL에 결합할 수 있도록 하는 것; 및/또는
- 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디가 1 s-1(t½=0.69 s) 내지 10-6 s-1(t½가 수일인, 거의 비가역적인 복합체 제공), 바람직하게는 10-2 내지 10-6 s-1, 더욱 바람직하게는 10 -3 내지 10-6 s-1, 예컨대, 10-4 내지 10-6 s-1의 k오프 속도로 RANKL에 결합할 수 있도록 하는 것이다.
바람직하게는, 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디(중에 존재하는 CDR 서열)는 본 발명의 1가 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디(또는 본 발명의 오직 단 하나의 면역글로불린 단일 가변 도메인 또는 나노바디만을 함유하는 폴리펩티드)가 바람직하게는 500 nM 미만, 바람직하게는, 200 nM 미만, 더욱 바람직하게는, 10 nM 미만, 예컨대, 500 pM 미만의 친화도로 RANKL에 결합하도록 하는 것이 된다.
본 발명의 폴리펩티드
본 발명의 방법에서 사용하기 위한 면역글로불린 단일 가변 도메인 및 나노바디는 바람직하게는, 하나 이상의 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디를 포함하거나, 실질적으로 그로 구성될 수 있고, 임의적으로 (모두가 임의적으로 하나 이상의 적합한 링커를 통해 연결된) 하나 이상의 추가의 아미노산 서열을 추가로 포함할 수 있는 것인, (본원에서 "본 발명의 폴리펩티드"로서 지칭되는) 폴리펩티드의 실질적으로 단리된 형태, 또는 형태의 일부이다. "면역글로불린 단일 가변 도메인"이라는 용어는 또한 상기와 같은 본 발명의 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 예를 들어, 제한없이, 하나 이상의 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디는 상기와 같은 폴리펩티드에서 결합 단위로서 사용될 수 있으며, 폴리펩티드는 임의적으로, 모두 본원에 기술되어 있는 것과 같은 것인 1가, 다가, 또는 다중 특이성인 본 발명의 폴리펩티드를 각각 제공하기 위해서 결합 단위로서의 역할을 할 수 있는 하나 이상의 추가의 아미노산 서열을 함유할 수 있다. 상기 폴리펩티드는 또한 실질적으로 단리된 형태의 것일 수 있다.
일반적으로, 단일 면역글로불린 단일 가변 도메인 또는 나노바디를 포함하거나, 또는 실질적으로 그로 구성된 폴리펩티드는 본원에서 "1가(monovalent)" 폴리펩티드로, 또는 "1가 구성체"로 지칭될 것이다. 2개 이상의 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디를 포함하거나, 또는 실질적으로 그로 구성된 폴리펩티드는 본원에서 "다가(multivalent)" 단백질 또는 폴리펩티드로, 또는 "다가 구성체"로 지칭될 것이다.
구체적이지만, 비제한적인 한 측면에 따라, 본 발명의 폴리펩티드는 2개 이상의 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디, 예컨대, 2 또는 3개의 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디를 포함하거나, 또는 실질적으로 그로 구성된다. 본원에 추가로 기술되는 바와 같이, 상기와 같은 다가 구성체는 단일 면역글로불린 단일 가변 도메인 또는 나노바디를 포함하거나, 또는 실질적으로 그로 구성된 폴리펩티드에 비하여, 예컨대, RANKL에 대하여 훨씬 더 개선된 결합력과 같은 특정의 이점을 제공할 수 있다. 상기 다가 구성체는 본원의 개시내용에 기초하여 당업자에게 자명할 것이고; 바람직하지만, 비제한적인 일부 예로는 US 2010/0104568의 서열 번호 625, 631, 637, 640-645, 649, 655, 661, 667, 673, 676-681, 685, 691, 761, 772 및 766의 구성체(2가), 및 US 2010/0104568의 서열 번호 697, 703, 709, 712-717, 721, 727, 및 759의 구성체(3가)가 있다.
바람직하지만, 비제한적인 또 다른 측면에 따라, 본 발명의 폴리펩티드는 1 이상의 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디 및 1 이상의 다른 결합 단위(즉, 또 다른 에피토프, 항원, 표적, 단백질 또는 폴리펩티드에 대한 것)를 포함하거나, 또는 실질적으로 그로 구성되며, 또한 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디인 것이 바람직하다. 상기 폴리펩티드는 또한 본원에서 "다중 특이성 폴리펩티드로, 또는 "다중 특이성 구성체"로 지칭되고, 이는 (바람직하지만, 비제한적인 일부 다중 특이성 구성체에 관한 본원의 추가의 논의로부터 자명해지는 바와 같이) 상응하는 1가 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디에 비하여 특정의 이점을 제공할 수 있다. 상기 다중 특이성 구성체는 본원의 개시내용에 기초하여 당업자에게 자명할 것이고; 상기 다중 특이성 나노바디 구성체의 바람직하지만, 비제한적인 일부 예로는 US 2010/0104568의 서열 번호 697, 703, 709, 712-717, 721, 727, 및 759의 구성체가 있다.
또 다른 측면에서, 본 발명의 폴리펩티드는 하나 이상의 면역글로불린 단일 가변 도메인을 포함하거나, 또는 실질적으로 그로 구성될 수 있고, 임의적으로 하나 이상의 다른 기, 잔기, 모이어티, 또는 결합 단위를 추가로 포함한다. 본원 추가의 개시내용으로부터 당업자에게는 자명한 바와 같이, 상기와 같은 추가의 기, 잔기, 모이어티, 결합 단위 또는 아미노산 서열은 면역글로불린 단일 가변 도메인에(및/또는 그가 존재하는 폴리펩티드에) 추가의 기능을 제공하거나, 제공하지 않을 수 있고, 면역글로불린 가변 도메인의 특성을 변형시키거나, 변형시키지 않을 수 있다.
예를 들어, 상기와 같은 추가의 기, 잔기, 모이어티, 또는 결합 단위는 하나 이상의 추가의 아미노산 서열일 수 있으며, 이로써, 화합물 또는 구성체는 (융합) 단백질 또는 (융합) 폴리펩티드이다. 바람직하지만, 비제한적인 측면에서, 상기 하나 이상의 다른 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 단위는 면역글로불린 서열이다. 더욱더 바람직하게는, 상기 하나 이상의 다른 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 단위는 도메인 항체, 도메인 항체로서 사용하기에 적합한 아미노산 서열, 단일 도메인 항체, 단일 도메인 항체로서 사용하기에 적합한 아미노산 서열, "dAb", dAb로서 사용하기에 적합한 아미노산 서열, 또는 나노바디로 이루어진 군으로부터 선택된다.
별법으로, 상기와 같은 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 단위는 그 스스로 예를 들어, 생물학상, 및/또는 약리학상 활성일 수 있거나, 또는 그렇지 않을 수 있는 화학기, 잔기, 모이어티일 수 있다. 예를 들어, 및 제한없이, 상기 기는 본 발명의 면역글로불린 단일 가변 도메인 또는 폴리펩티드의 "유도체"를 제공하기 위해 하나 이상의 본 발명의 폴리펩티드에 연결될 수 있다.
본원에 추가로 기술된 바와 같이, 본 발명의 폴리펩티드는 RANKL에 대한 2개 이상의 면역글로불린 단일 가변 도메인을 함유할 수 있다. 일반적으로, 상기와 같은 폴리펩티드는 단일 면역글로불린 단일 가변 도메인과 비교하여 증가된 결합력으로 RANKL에 결합할 것이다. 상기 폴리펩티드는 예를 들어, (상호작용 부위일 수 있거나, 또는 그렇지 않을 수 있는) RANKL의 동일한 항원 결정기, 에피토프, 일부, 도메인, 서브유니트 또는 입체형태(적용가능한 경우)에 대한 2개 이상의 면역글로불린 단일 가변 도메인을 포함할 수 있거나; 또는 (상호작용 부위일 수 있거나, 또는 그렇지 않을 수 있는) RANKL의 제1 항원 결정기, 에피토프, 일부, 도메인, 서브유니트 또는 입체형태(적용가능한 경우)에 대한 1 이상의 "제1" 면역글로불린 단일 가변 도메인; 및 (이 역시 (상호작용 부위일 수 있거나, 또는 그렇지 않을 수 있는) 제1의 것과 상이한, 제2 항원 결정기, 에피토프, 일부, 도메인, 서브유니트 또는 입체형태(적용가능한 경우)에 대한 1 이상의 "제2" 면역글로불린 단일 가변 도메인을 포함할 수 있다. 바람직하게는, 상기와 같은 본 발명의 "이중 파라토프" 폴리펩티드에서, 1 이상의 면역글로불린 단일 가변 도메인은 비록 본 발명은 그의 가장 광범위한 의미에서 하기의 것으로 제한되는 것은 아니지만, (본원에서 정의된 바와 같은) 상호작용 부위에 대한 것이다. 본 발명의 폴리펩티드의 일례는 예컨대, WO 08/142164에 추가로 기술되어 있다.
따라서, 특정의 한 측면에서, 본 발명의 폴리펩티드는 RANKL 상의 RANK에 대한 결합 부위에 대한 2개 이상의 면역글로불린 단일 가변 도메인을 포함할 수 있거나; 또는 RANKL 상의 RANK에 대한 결합 부위에 대한 1 이상의 "제1" 면역글로불린 단일 가변 도메인; 및 제1의 것과 상이하며, RANKL 상의 RANK에 대한 결합 부위가 아닌, 제2 항원 결정기, 에피토프, 일부, 도메인, 서브유니트 또는 입체형태를 포함할 수 있다.
본 발명의 폴리펩티드가 RANKL의 2 또는 3개의 서브유니트에 결합할 수 있다는 것 또한 본 발명의 범주 내에 포함된다. 바람직하지만, 비제한적인 측면에서, 본 발명의 폴리펩티드는 RANKL 삼량체의 2 또는 3개의 서브유니트에 결합한다.
특히, 본 바람직한 실시양태에 따라, 본 발명은 각각이, RANKL 삼량체의 수용체 결합 부위(들)에 있고/거나, 그의 일부를 형성하는 것인 RANKL 상(및 특히 RANKL 삼량체 상)의 에피토프에 대한 것인 2개 이상의 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디를 포함하거나, 또는 실질적으로 그로 구성된 폴리펩티드에 관한 것으로서, 여기서, 상기 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디는 폴리펩티드가 단일 RANKL 삼량체 상의 2개 이상의 수용체 결합 부위에 동시에 결합할 수 있도록(다시 말해, RANKL 삼량체 상의 2개 이상의 수용체 결합 부위에 대해 분자내 결합을 할 수 있도록) 서로 연결되어 있는 것인, 폴리펩티드에 관한 것이다. 상기 실시양태에서, 2개 이상의 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디는 바람직하게는 상기 정의된 바와 같은 것이고, 가장 바람직하게는 나노바디이다(이에, 폴리펩티드는 다가 나노바디 구성체이다). 또한, 상기 실시양태에서, 2개 이상의 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디는 동일하거나, 상이할 수 있고; RANK 수용체 결합 부위(들) 내의 상이한 에피토프에 대한 것일 수도 있지만, 동일한 에피토프에 대한 것인 경우가 바람직하다. 본 발명의 상기 실시양태의 바람직하지만, 비제한적인 일부 구성체는 US 2010/0104568의 서열 번호 625, 631, 637, 640-645, 649, 655, 661, 667, 673, 676-681, 685, 691, 697, 703, 709, 712-717, 721, 727, 759, 761, 772 및 766이다.
상기 기술된 화합물 또는 구성체에서, 하나 이상의 면역글로불린 단일 가변 도메인 및 하나 이상의 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 단위는 서로 직접, 및/또는 하나 이상의 적합한 링커 또는 스페이서를 통해 연결되어 있을 수 있다. 예를 들어, 하나 이상의 기, 잔기, 모이어티 또는 결합 단위가 아미노산 서열인 경우, 링커는 또한 아미노산 서열일 수 있으며, 이로써, 생성된 화합물 또는 구성체는 융합 (단백질) 또는 융합 (폴리펩티드)이다.
본 발명의 특정 실시양태에서, 2개 이상의 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디는 보통 하나 이상의 적합한 링커를 통해 연결될 것이며, 이러한 링커는 각 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디가 동일한 RANKL 삼량체 상의 다른 수용체 결합 부위에 결합할 수 있게 하는 것이다. 적합한 링커는 특히 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디가 결합하는 RANKL 삼량체 상의 에피토프(그들 사이의 거리)에 따라 달라지게 되며, 본원의 개시내용에 기초하여, 임의적으로는 일부 제한된 정도의 통상적인 실험을 수행한 후에 당업자에게 자명해질 것이다. 예를 들어, 2개 이상의 면역글로불린 단일 가변 도메인이 (단일) 도메인 항체 또는 나노바디일 때, 적합한 링커는 본원에 기술된 링커로부터 선택될 수 있지만, 링커 길이는 2개 이상의 (단일) 도메인 항체 또는 나노바디가 각각 동일한 RANKL 삼량체 상의 다른 수용체 결합 부위에 결합할 수 있게 하는 길이이다.
더욱 바람직하게는, 상기 바람직한 측면에서, 링커 또는 스페이서는 길이가 바람직하게는 1 내지 최대 50개 이상의 아미노산, 더욱 바람직하게는 5 내지 30개의 아미노산, 예컨대, 약 9 내지 20개의 아미노산 길이인 것인 아미노산 서열이다. 바람직하지만, 비제한적인 한 실시양태에서, 링커는 실질적으로 (하기에서 추가로 기술되는 바와 같이) 글리신 및 세린 잔기로 구성된다. 예를 들어, 한 적합한 링커는 9개의 아미노산 잔기를 포함하는, US 2010/0104568에 기술된 GS9 링커, 15개의 아미노산 잔기를 포함하는, US 2010/0104568에 기술된 GS15 링커, 20개의 아미노산 잔기를 포함하는, US 2010/0104568에 기술된 GS20 링커, 30개의 아미노산 잔기를 포함하는, US 2010/0104568에 기술된 GS30 링커, 또는 당업계에 공지된 임의의 다른 링커, 예컨대, 하기 표 A-1에 제시되어 있는 것이다.
<표 A-1>
Figure 112013113807716-pct00003
또 다른 실시양태에서, RANKL에 대한 2개 이상의 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디는 또 다른 모이어티를 통해(임의적으로, 1 또는 2개의 링커를 통해), 예컨대, 또 다른 단백질 또는 폴리펩티드를 통해 서로에연결된다. 상기 실시양태에서, 예를 들어, 단백질 또는 폴리펩티드가 RANKL 삼량체와 (본원에 기술된 바와 같이) 여전히 분자내 결합을 할 수 있도록, 2개 이상의 항RANKL 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디의 N 말단과 C 말단 사이에 바람직한 겨리(즉, 상기 언급된 바와 같은 거리)를 가지는 것이 바람직할 수 있다. 상기 실시양태에서, 2개 이상의 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디는 바람직한 거리 및/또는 원하는 분자내 결합이 여전히 달성될 수 있는 한, 다른 모이어티에 직접, 또는 적합한 링커 또는 스페이서를 사용하여 연결될 수 있다. 모이어티는 폴리펩티드의 RANKL에의 결합, 및/또는 폴리펩티드의 바람직한 생물학적 또는 약리학적 특성을 (너무 많이) 손상시키지 않는 임의의 적합한 모이어티일 수 있다. 따라서, 모이어티는 실질적으로 불활성일 수 있거나, 또는 생물학적으로 활성일 수 있고, 따라서, 폴리펩티드의 원하는 특성을 개선시킬 수 있거나, 또는 그렇지 않을 수 있고/거나, 폴리펩티드에 하나 이상의 추가의 원하는 특성을 부여할 수 있다. 예를 들어, 및 제한없이, 모이어티는 폴리펩티드의 반감기를 개선시킬 수 있고/거나, 그의 면역원성을 감소시킬 수 있거나, 임의의 다른 원하는 특성을 개선시킬 수 있다. 한 바람직한 실시양태에서, 모이어티는 (반드시 필요한 것은 아니지만, 일반적으로는 덜 바람직한, RANKL에 대한 제3 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디를 포함하나, 이에 한정되지 않는) 또 다른 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디), 및 특히 폴리펩티드의 반감기를 개선시키는 또 다른 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디, 예컨대, 혈청 단백질, 예를 들어, 인간 혈청 알부민에 대한 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디일 수 있다 상기와 같은 구성체에 대한 비제한적인 일부 예로는 US 2010/0104568의 서열 번호 697, 703, 709, 712-717, 721, 717 및 759의 구성체가 있다.
본 발명의 한 구체적인 측면에서, 폴리펩티드는 상응하는 본 발명의 폴리펩티드와 비교하여 증가된 반감기를 가질 수 있다. 상기 폴리펩티드의 바람직하지만, 비제한적인 일부 예는 본원의 추가의 개시내용에 기초하여 당업자에게 자명해질 것이며, 예를 들어, (예를 들어, 페길화에 의해) 그의 반감기를 증가시키도록 화학적으로 변형된 본 발명의 폴리펩티드; 혈청 단백질(예컨대, 혈청 알부민)에의 결합을 위한 1 이상의 추가의 결합 부위를 포함하는 본 발명의 폴리펩티드; 또는 본 발명의 면역글로불린 단일 가변 도메인의 반감기를 증가시키는 1 이상의 모이어티(및 특히 1 이상의 아미노산 서열)에 연결된 1 이상의 면역글로불린 단일 가변 도메인을 포함하는 본 발명의 폴리펩티드를 포함한다. 상기와 같이 반감기를 연장시키는 모이어티를 포함하는 본 발명의 폴리펩티드의 예는 본원의 추가 개시내용에 기초하여 당업자에게 자명해질 것이며; 예를 들어, 제한없이, 하나 이상의 면역글로불린 단일 가변 도메인이 하나 이상의 혈청 단백질 또는 그의 단편(예컨대, (인간) 혈청 알부민 또는 그의 적합한 단편) 또는 혈청 단백질에 결합할 수 있는 하나 이상의 결합 단위, 예컨대, 도메인 항체, 도메인 항체로서 사용하기에 적합한 아미노산 서열, 단일 도메인 항체, 단일 도메인 항체로서 사용하기에 적합한 아미노산 서열, "dAb", dAb로서 사용하기에 적합한 아미노산 서열, 또는 혈청 단백질, 예컨대, 혈청 알부민(예컨대, 인간 혈청 알부민), 혈청 면역글로불린, 예컨대, IgG, 또는 트랜스페린에 결합할 수 있는 나노바디에 적합하게 연결된 폴리펩티드(본원의 추가의 상세한 설명 및 본원에서 언급된 참고 문헌을 참고할 수 있다); 면역글로불린 단일 가변 도메인이 Fc 부분(예컨대, 인간 Fc) 또는 그의 적합한 일부 또는 단편에 연결된 폴리펩티드; 또는 하나 이상의 면역글로불린 단일 가변 도메인이 혈청 단백질에 결합할 수 있는 하나 이상의 소형 단백질 또는 펩티드(예컨대, 제한없이, WO 91/01743, WO 01/45746, WO 02/076489에 기술되어 있는 단백질 및 펩티드)에 적합하게 연결된 폴리펩티드를 포함한다. WO 03/002609 및 WO 04/003019 및 문헌 [Harmsen et al. (Vaccine 23: 4926- 42, 2005)]; EP 0368684 뿐만 아니라, 아블인스 엔. 브이.에 의한 WO 08/028977, WO 08/043821, WO 08/043822 및 WO 08/068280에 기술된 dAb 또한 참조할 수 있다.
일반적으로, 반감기가 증가된, 본 발명의 방법에서 사용되는 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디(또는 상기를 포함하는 화합물, 구성체, 또는 폴리펩티드)의 반감기는 그 자체의 상응하는 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디의 반감기의 1.5배 이상, 바람직하게는 2배 이상, 예컨대, 5배 이상, 예를 들어, 10배 이상 또는 20배 초과로 더 길다. 예를 들어, 본 발명의 방법에서 사용되는 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디, 화합물, 구성체 또는 폴리펩티드는 그 자체의 상응하는 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디와 비교하여 1시간 초과, 바람직하게는, 2시간 초과, 더욱 바람직하게는, 6시간 초과, 예컨대, 12시간 초과, 또는 심지어는 24, 48 또는 72시간 초과로 증가된 반감기를 가질 수 있다.
본 발명의 바람직하지만, 비제한적인 측면에서, 본 발명의 방법에서 사용되는 상기와 같은 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디, 화합물, 구성체또는 폴리펩티드는 인간에서 약 12시간 이상, 바람직하게는 24시간 이상, 더욱 바람직하게는 48시간 이상, 더욱더 바람직하게는 72시간 이상의 혈청 반감기를 보인다. 예를 들어, 본 발명의 방법에서 사용되는 화합물 또는 폴리펩티드의 반감기는 5일 이상(예컨대, 약 5 내지 10일), 바람직하게는 9일 이상(예컨대, 약 9 내지 14일), 더욱 바람직하게는, 약 10일 이상(예컨대, 약 10 내지 15일), 또는 약 11일 이상(예컨대, 약 11 내지 16일), 더욱 바람직하게는, 약 12일 이상(예컨대, 약 12 내지 18일 이상), 또는 14일 초과(예컨대, 약 14 내지 19일)일 수 있다.
본 발명의 바람직한 폴리펩티드는 구성체의 혈청 반감기(바람직하게는 T1/2β)를 연장시키는 데 적합한 1 이상의 결합 도메인 또는 펩티드와 함께, RANKL에 대한 하나 이상의 면역글로불린 단일 가변 도메인, 예컨대, 서열 번호 4-11, 특히, 서열 번호 10에 따른 하나 이상의 면역글로불린 단일 가변 도메인을 포함한다. 상기 구성체에서, "혈청-알부민 결합 도메인 또는 펩티드"는 (혈청-알부민 결합 펩티드 또는 결합 도메인을 포함하지 않는 동일한 구성체와 비교하였을 때) 구성체의 반감기를(바람직하게는 T1/2β) 증가시킬 수 있는 임의의 적합한 혈청-알부민 결합 펩티드 또는 결합 도메인일 수 있다. 구체적으로, 혈청 반감기를 연장시키는 데 적합한 폴리펩티드 서열은 혈청 반감기가 긴 혈청 단백질, 예컨대, 혈청 알부민, 트랜스페린, IgG 등, 특히, 혈청 알부민에 결합할 수 있는 폴리펩티드 서열이다. 혈청 알부민에 결합할 수 있는 폴리펩티드 서열은 앞서 기술된 바 있으며, 이는 특히 본 출원인에 의한 WO 08/068280(특히 둘 모두 본 출원인에 의한 것인 WO 09/127691 및 WO 2011/095545)에 기술된 것과 같은 혈청 알부민 결합 펩티드, 또는 혈청 알부민 결합 면역글로불린 단일 가변 도메인(예컨대, 혈청 알부민 결합 나노바디; 예를 들어, Alb-1 또는 Alb-1의 인간화된 버전, 예컨대, Alb-8, 이에 대해서는 예를 들어, WO 06/122787 및 하기 표 A-2를 참조할 수 있다)일 수 있다.
<표 A-2>
Figure 112013113807716-pct00004
혈청 알부민에 결합하는 바람직한 면역글로불린 단일 가변 도메인은 서열 번호 13-15를 포함한다. 일부 실시양태에서, 면역글로불린 단일 가변 도메인은 서열 번호 14(US 2010/0104568의 서열 번호: 791)를 포함하거나, 그로 구성된다.
따라서, 한 실시양태에서, 본 발명은 2개 이상의 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디를 포함하는 다가 다중 특이성 구성체에 관한 것으로서, 상기 2개 이상의 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디는 각각이, 수용체 결합 부위에 있고/거나, 그의 일부를 형성하는 것인 RANKL 상(예컨대, RANKL 삼량체 상)의 에피토프에 대한 것이고, 반감기를 증가시키는 1 이상의 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디를 통해(및 임의적으로 하나 이상의 적합한 링커를 통해) 서로에 연결되어 있으며, 이로써, RANKL 삼량체에의 결합시 상기 폴리펩티드는 상기 RANKL 삼량체에 의해 매개되는 RANK 수용체 결합 및/또는 신호 전달을 억제 또는 감소시킬 수 있는 것인, 다가 다중 특이성 구성체에 관한 것이다. 상기 폴리펩티드는, 상기 언급된 2개 이상의 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디가 서로 RANKL 삼량체 상의 다른 수용체 결합 부위에 결합할 수 있는 것일 수 있다.
특히, 본 실시양태에서, 폴리펩티드는 각각이, 수용체 결합 부위에 있고/거나, 그의 일부를 형성하는 것인 RANKL 상의(및 특히 RANKL 삼량체의) 에피토프에 대한 것인 2개의 나노바디를 포함하는 3가 이중 특이성 나노바디를 포함할 수 있으며, 여기서, 상기 나노바디는 반감기를 증가시키는 제3의 나노바디(예컨대, 혈청 단백질 예컨대, 인간 혈청 알부민에 대한 나노바디)를 통해 서로에 연결되어 있고, 여기서, 상기 언급된 두 나노바디는 각각 상기 제3의 나노바디에 직접 또는 하나 이상의 적합한 링커를 통해 연결될 수 있고, 이로써, RANKL 삼량체에의 결합시 상기 폴리펩티드는 상기 RANKL 삼량체에 의해 매개되는 RANK 수용체 결합 및/또는 신호 전달을 억제 또는 감소시킬 수 있다. 상기 폴리펩티드는 상기 언급된 두 나노바디가 각각 RANKL 삼량체 상의 상이한 수용체 결합 부위에 결합할 수 있는 것일 수 있다. 추가로, 본 발명의 이러한 실시양태에서 사용하기에 특히 바람직한 나노바디는 서열 번호 4(US 2010/0104568의 서열 번호 572) 뿐만 아니라, 그의 인간화된 및 다른 변이체(예컨대, 서열 번호: 10(US 2010/0104568의 서열 번호 755)); 및 본원에 기술된 인간 혈청 알부민에 대한 나노바디로 제공된다. 본 발명의 이러한 실시양태의 바람직하지만, 비제한적인 구성체는 서열 번호 12(US 2010/0104568의 서열 번호 759)이다.
이러한 본 발명의 바람직한 측면에 따른 다른 폴리펩티드는 예를 들어, 서열 번호 12(US 2010/0104568의 서열 번호 759)과 (본원에서 정의된 바와 같이) 80% 초과, 바람직하게는 90% 초과, 더욱 바람직하게는 95% 초과, 예컨대, 99% 이상의 "서열 동일성"을 가지는 폴리펩티드로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있으며, 여기서, 상기 폴리펩티드 내에 포함되어 있는 나노바디는 바람직하게는 본원에서 추가로 정의된 바와 같다.
일부 실시양태에서, RANKL에 특이적으로 결합하는, 본 발명의 방법에서 투여되는 (본 발명의) 폴리펩티드는 비아코어 검정법에 의해 측정되는 바, 재조합 가용성 RANKL(sRANKL)에의 결합에 대하여, 0.005-0.1 nM, 예컨대, 0.005-0.05 nM, 0.01-0.1 nM, 0.01-0.05 nM(각 범위의 끝점의 값 포함), 예컨대, 0.005 nM, 0.006 nM, 0.007 nM, 0.008 nM, 0.009 nM, 0.01 nM, 0.011 nM, 0.012 nM, 0.013 nM, 0.014 nM, 0.015 nM, 0.016 nM, 0.017 nM, 0.018 nM, 0.019 nM, 0.02 nM, 0.021 nM, 0.022 nM, 0.023 nM, 0.024 nM, 0.025 nM, 0.026 nM, 0.027 nM, 0.028 nM, 0.029 nM, 0.03 nM, 0.031 nM, 0.032 nM, 0.033 nM, 0.034 nM, 0.035 nM, 0.036 nM, 0.037 nM, 0.038 nM, 0.039 nM, 0.04 nM, 0.041 nM, 0.042 nM, 0.043 nM, 0.044 nM, 0.045 nM, 0.046 nM, 0.047 nM, 0.048 nM, 0.049 nM, 0.05 nM, 0.06 nM, 0.07 nM, 0.08 nM, 0.09 nM, 또는 0.1 nM, 및 바람직하게는, 약 0.04 nM의 겉보기 KD를 가진다.
예를 들어, ELISA 또는 FACS에서 본 발명의 나노바디(및 상기를 포함하는 폴리펩티드)의 RANKL에의 결합에 대한 EC50 값은 바람직하게는 1 μM 내지 1 pM, 더욱 바람직하게는 1 nM 내지 1 pM 및 더욱 바람직하게는 100 pM 내지 1 pM이다. 예를 들어, 알파스크린(AlphaScreen)®, NF카파B 검정법 또는 TRAP 검정법에서 본 발명의 나노바디(및 상기를 포함하는 폴리펩티드)의 RANKL에의 결합에 대한 IC50 값은 (WO 2008/142164에 기술되어 있는 바와 같이) 바람직하게는 1 μM 내지 1 pM, 더욱 바람직하게는 1 nM 내지 1 pM 및 더욱 바람직하게는 100 pM 내지 1 pM이다.
본 발명의 또 다른 측면에서, 본 발명의 폴리펩티드는 바람직하게는 데노수맙의 에피토프, 또는 US 2010/0104568의 서열 번호 755의 에피토프와 중복되는 RANKL 상의 에피토프에 대한 것이다. 본 발명의 아미노산 서열 및 폴리펩티드의 데노수맙의 에피토프, 또는 US 2010/0104568의 서열 번호 755의 에피토프와 중복되는 RANKL 상의 에피토프에의 결합은 데노수맙, 또는 US 2010/0104568의 서열 번호 755의 RANKL에의 결합을 억제시키고,거나, 방해할 수 있다. 따라서, 본 발명의 폴리펩티드는 (예컨대, ELISA에서, 알파스크린®에서, NF카파B 검정법에서 및/또는 TRAP 검정법에서) 데노수맙, 또는 US 2010/0104568의 서열 번호 755의 RANKL에의 결합에 대한 경쟁적 또는 비경쟁적 억제제로서의 역할을 할 수 있다.
본원에 기술된 본 방법에서 유용한 폴리펩티드의 추가의 실시양태는 WO 08/142164, US 2010/0104568A1, 및 US 2011/0002929A1에 기술되어 있다.
본원에 정의되어 있는 바와 같은 면역글로불린 단일 가변 도메인, 및 특히, 나노바디, 및 본 발명의 폴리펩티드의 사용이 매우 바람직하기는 하지만, 본원의 기술 내용을 기초로 하여 당업자는 RANKL에 대한 다른 폴리펩티드 및 특히 (단일) 도메인 항체 뿐만 아니라, 본 발명의 방법에서 사용될 수 있는 상기와 같은 (단일) 도메인 항체를 포함하는 폴리펩티드를 유사한 방식으로 디자인하고/거나, 생성할 수 있다는 것은 자명할 것이다.
예를 들어, 나노바디에 대하여 상기 언급된 CDR 중 하나 이상을, 인간 스캐폴드 또는 비면역글로불린 스캐폴드를 포함하나, 이에 한정되지 않는, 상기 (단일) 도메인 항체 또는 다른 단백질 스캐폴드 상에 "이식"시킬 수 있다는 것 또한 당업자에게는 자명할 것이다. 상기 CDR 이식에 대해 적합한 스캐폴드 및 기법은 당업자에게 자명할 것이며, 이는 당업계에 주지되어 있고, 예를 들어, US 7,180,370, WO 01/27160, EP 0605522, EP 0460167, US 7,054,297, 문헌 [Nicaise et al. (2004, Protein Science 13: 1882-1891)], [Ewert et al. (2004, Methods 34(2): 184-199)], [Kettleborough et al. (1991, Protein Eng. 4(7): 773-783)], [O'Brien and Jones (2003, Method Mol. Biol. 207: 81-100)], [Skerra J. (2000 Mol. Recognit. 13: 167-187)], 및 [Saerens et al. (2005, J. Mol. Biol. 352(3): 597-607)], 및 상기 문헌에서 인용된 추가의 참고 문헌을 참조할 수 있다. 예를 들어, 그 자체가 공지되어 있는, 마우스 또는 래트 CDR을 인간 골격 및 스캐폴드 상에 이식시키는 기법을 유사한 방식으로 사용하여 본원에 기술된 나노바디의 CDR 중 하나 이상, 및 하나 이상의 인간 골격 영역 또는 서열을 포함하는 키메라 단백질을 수득할 수 있다.
일반적으로, 본 발명의 상기 측면에서, 본 발명이 방법에서 사용되는 폴리펩티드는 1 이상의 아미노산 잔기 스트레치를 포함하는 임의의 폴리펩티드로서, 여기서, 상기 아미노산 잔기 스트레치는 본원에 기술된 CDR 서열 중 1 이상의 서열에 상응하는 아미노산 서열을 가지는 것인 임의의 폴리펩티드일 수 있다. 상기 폴리펩티드는 면역글로불린 폴더를 포함하거나, 포함하지 않을 수 있다. 예를 들어, 및 제한없이, 상기 폴리펩티드는 1 이상의 상기 CDR을 포함하지만, (완전한) 면역글로불린 폴더를 형성할 만큼 충분히 크지는 않은 면역글로불린 서열의 적합한 단편일 수 있다(또한 예를 들어, WO 03/050531에 기술되어 있는 "엑스퍼다이트(Expedite) 단편"을 참조할 수 있다). 별법으로, 상기 폴리펩티드는 (즉, 그의 항원 결합 부위의 일부로서) 상기 CDR 서열에 상응하는 1 이상의 아미노산 잔기 스트레치를 포함하는 적합한 "단백질 스캐폴드"일 수 있다. 아미노산 서열을 제시하는 적합한 스캐폴드는 당업자에게 자명할 것이며, 예를 들어, 이는 제한없이, 면역글로불린에 기초하거나, 그로부터 유도된 결합 스캐폴드(즉, 본원에 이미 기술되어 있는 면역글로불린 서열 이외의 것), 단백질 A 도메인로부터 유도된 단백질 스캐폴드(예컨대, 아피바디즈(Affibodies)™), 텐다미스타트, 피브로넥틴, 리포칼린, CTLA-4, T 세포 수용체, 디자인된 안키린 반복부, 아비머 및 PDZ 도메인(문헌 [Binz et al. 2005, Nat. Biotech, 23: 1257]), 및 DNA 또는 RNA 압타머를 포함하나, 이에 한정되지 않는 DNA 또는 RNA에 기초한 결합 모이어티(문헌 [Ulrich et al. 2006, Comb. Chem. High Throughput Screen 9(8): 619-32])를 포함한다.
본 발명의 방법에서 사용되는 면역글로불린 단일 가변 도메인, 나노바디, 폴리펩티드 및 핵산은, 본원의 추가의 기술내용으로부터 당업자에게 자명한 바와 같이 그 자체가 공지되어 있는 방식으로 제조될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 면역글로불린 단일 가변 도메인, 나노바디 및 폴리펩티드는 그 자체가 공지되어 있는, 항체를 제조하는, 및 특히 ((단일) 도메인 항체 및 ScFv 단편을 포함하나, 이에 한정되지 않는) 항체 단편을 제조하는 임의의 방식으로 제조될 수 있다. 면역글로불린 단일 가변 도메인, 나노바디, 폴리펩티드 및 핵산을 제조하는, 바람직하지만, 비제한적인 일부 방법은 본원에 기술된 방법 및 기법을 포함한다.
당업자에게 자명한 바와 같이, 본 발명의 면역글로불린 단일 가변 도메인, 나노바디 및/또는 폴리펩티드를 제조하는 데 특히 유용한 방법은 일반적으로
i) (본원에서는 "본 발명의 숙주"로도 지칭되는) 적합한 숙주 세포 또는 숙주 유기체, 또는 또 다른 적합한 발현 시스템에서, 본 발명의 상기 면역글로불린 단일 가변 도메인, 나노바디 또는 폴리펩티드를 코딩하는 핵산을 발현시키는 단계, 이어서, 임의적으로
ii) 그렇게 수득된 본 발명의 면역글로불린 단일 가변 도메인, 나노바디 또는 폴리펩티드를 단리 및/또는 정제시키는 단계를 포함한다.
특히, 상기 방법은
i) 숙주가 본 발명의 1 이상의 면역글로불린 단일 가변 도메인, 나노바디 및/또는 폴리펩티드를 발현 및/또는 생산할 수 있는 조건하에서 상기 숙주를 배양 및/또는 유지시키는 단계; 임의적으로, 이어서,
ii) 그렇게 수득된 본 발명의 면역글로불린 단일 가변 도메인, 나노바디 또는 폴리펩티드를 단리 및/또는 정제시키는 단계를 포함할 수 있다.
바람직하지만, 비제한적인 한 실시양태에 따라, 본 발명의 폴리펩티드는 박테리아 세포, 특히, 대규모 제약 생산에 적합한 박테리아 세포에서 제조된다. 바람직하지만, 비제한적인 또 다른 실시양태에 따라, 본 발명의 폴리펩티드는 효모 세포, 특히, 대규모 제약 생산에 적합한 효모 세포에서 제조된다. 바람직하지만, 비제한적인 또 다른 추가의 실시양태에 따라, 본 발명의 폴리펩티드는 포유동물 세포에서, 특히, 인간 세포에서, 또는 인간 세포주의 세포에서, 및 더욱 특히 대규모 제약 생산에 적합한 인간 세포에서 또는 인간 세포주의 세포에서 제조된다.
산업적 규모로 생산하기 위해, 나노바디 또는 나노바디 함유 단백질 치료제의 (산업적) 생산을 위한 바람직한 이종성 숙주로는 대규모 발현/생산/발효, 및 특히, 대규모 제약 발현/생산/발효에 적합한 E. 콜라이(E. coli), 피키아 파스토리스(Pichia pastoris), S. 세레비지에(S. cerevisiae) 균주를 포함한다. 이러한 균주의 적합한 예는 숙련가에게 자명할 것이다.
별법으로, 포유동물 세포주, 특히, 차이니즈 햄스터 난소(CHO: Chinese hamster ovary) 세포는 대규모 발현/생산/발효, 특히 대규모 제약 발현/생산/발효에 사용될 수 있다.
후속하여, 이어서, 그 자체가 공지되어 있는 단백질 단리 및/또는 정제 기법, 예컨대, (분취용) 크로마토그래피 및/또는 전기영동 기법, 분별 침전 기법, 친화도 기법(예컨대, 본 발명의 폴리펩티드와 융합된 특이적인 절단가능한 아미노산 서열을 사용하는 것) 및/또는 분취용 면역학적 기법(즉, 단리시키고자 하는 아미노산 서열에 대한 항체를 사용하는 것)을 사용하여 본 발명의 폴리펩티드를 숙주 세포/숙주 유기체로부터, 및/또는 상기 숙주 세포 또는 숙주 유기체가 배양된 배지로부터 단리시킬 수 있다.
일반적으로, 제약 용도로, 본 발명의 폴리펩티드는 1 이상의 본 발명의 폴리펩티드 및 1 이상의 제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제 및/또는 애주번트, 및 임의적으로 하나 이상의 추가의 제약상 활성인 폴리펩티드 및/또는 화합물을 포함하는 제약 제제 또는 조성물로서 제제화될 수 있다.
따라서, 추가의 측면에서, 본 발명은 피험체(예컨대, 인간, 예컨대, 골다공증 환자, 예를 들어, 폐경 후 여성)에게 투여되었을 때, 장기간 동안 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 억제시키고/거나, 하나 이상의 골 대사의 마커 및/또는 골 항상성을 변화시키는 데 효과적인, 예컨대, 투여 후 약 30일 이상 동안, 예컨대, 30일 내지 3개월, 3개월 내지 6개월, 또는 6개월 내지 1년 동안 I형 콜라겐의 가교 결합 텔로펩티드(CTX-1)의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여, 30% 이상, 더욱 바람직하게는 35% 이상, 더욱 바람직하게는 40% 이상만큼, 더욱 바람직하게는 45% 이상, 더욱 바람직하게는 50% 이상, 더욱 바람직하게는 55% 이상, 더욱 바람직하게는 60% 이상, 더욱 바람직하게는 65% 이상, 더욱 바람직하게는 70% 이상, 예컨대, 75% 이상, 또는 심지어 80% 이상만큼 감소시키는 데 효과적인 것인, 1 이상의 본 발명의 폴리펩티드 및 (즉, 제약 용도로 적합한) 1 이상의 적합한 담체, 희석제 또는 부형제, 및 임의적으로 하나 이상의 추가의 활성 물질을 함유하는 제약 조성물에 관한 것이다.
일반적으로, 본 발명의 폴리펩티드는 그 자체가 공지되어 있는 임의의 적합한 방식으로 제제화 및 투여될 수 있으며, 그에 대해서는 예를 들어, 상기 인용된 일반 배경 기술(및 특히, WO 04/041862, WO 04/041863, WO 04/041865, WO 04/041867, WO 08/020079 및 WO 2011/026945) 뿐만 아니라, 표준 편람, 예컨대, 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed., Mack Publishing Company, USA (1990)] 또는 [Remington, the Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, Lippincott Williams and Wilkins (2005)]; 또는 [Handbook of Therapeutic Antibodies (S. Dubel, Ed.), Wiley, Weinheim, 2007 (예를 들어, pages 252-255 참조)])을 참조할 수 있다.
예를 들어, 본 발명의 폴리펩티드는 종래의 항체 및 (scFv 및 디아바디를 비롯한) 항체 단편, 및 다른 제약상 활성인 단백질에 대해 그 자체가 공지되어 있는 임의의 방식으로 제제화되고 투여될 수 있다. 이러한 제제 및 상기를 제조하는 방법은 당업자에게 자명할 것이고, 예를 들어, 비경구 투여(예를 들어, 정맥내, 복강내, 피하, 근육내, 내강내, 동맥내 또는 척수강내 투여) 투여에 적합한 제제를 포함한다.
비경구 투여용 제제는 예를 들어, 주입 또는 주사에 적합한 멸균 액제, 현탁제, 분산제 또는 에멀젼일 수 있다. 이러한 제제에 적합한 담체 또는 희석제로는, 예를 들어, 제한없이, 멸균수 및 수성 완충제 및 용액, 예컨대, 생리학적 포스페이트 완충처리된 염수, 링거액, 덱스트로스 용액, 및 행크 용액; 워터 오일; 글리세롤; 에탄올; 글리콜, 예컨대, 프로필렌 글리콜, 뿐만 아니라, 광유, 동물성 오일 및 식물성 오일, 예를 들어, 땅콩유, 대두유, 뿐만 아니라, 그의 적합한 혼합물을 포함한다. 대체적으로, 수성 용액 또는 현탁액이 바람직할 것이다.
본 발명의 폴리펩티드는 또한 주입 또는 주사에 의해 피하로, 정맥내로 또는 복강내로 투여될 수 있다. 본 발명의 폴리펩티드, 또는 그의 염의 용액은 물 중에서 제조될 수 있고, 임의적으로 비독성 계면활성제 및/또는 하나 이상의 완충제 성분과 혼합될 수 있다. 분산제는 또한 글리세롤, 액체 폴리에틸렌 글리콜, 트리아세틴, 및 그의 혼합물 중 및 오일 중에서 제조될 수 있다. 보관 및 사용에 대한 일반적인 조건하에서, 이들 제제는 미생물의 성장을 방지하기 위해 보존제를 함유한다.
주사 또는 주입에 적합한 제약 투여 형태로는 임의적으로 리포솜에 캡슐화되어 있는 멸균 주사용 또는 주입용 액제 또는 분산제의 즉석 제조에 적합화된 활성 성분을 포함하는 멸균 수용성 액제 또는 분산제 또는 멸균 분제를 포함할 수 있다. 모든 경우에, 최종 투여 형태는 멸균성 유체이고, 제조 및 보관 조건하에 안정하여야 한다. 액체 담체 또는 비히클은 예를 들어, 물, 에탄올, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 액체 폴리에틸렌 글리콜 등), 식물성 오일, 비독성 글리세릴 에스테르, 및 그의 적합한 혼합물을 포함하는 용매 또는 액체 분산 매질일 수 있다. 적절한 유동성은 예를 들어, 리포솜의 형성, 분산제인 경우, 필요한 입자 크기의 유지, 또는 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 미생물 작용은 다양한 각종 항박테리아제 및 항진균제, 예를 들어, 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 소르브산, 티메로살 등에 의해 방지될 수 있다. 많은 경우에, 등장성 제제, 예를 들어, 당, 완충제 또는 염화나트륨을 포함하는 것이 바람직할 것이다. 주사용 조성물은 흡수를 지연시키는 제제, 예를 들면 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴의 조성물에서 사용함으로써 흡수가 연장될 수 있다.
그러나, 본 발명은 또한 액체 제제의 추가의 프로세싱에 의해 수득가능한 제품, 예컨대, 냉동, 동결 건조, 또는 분무건조된 제품을 포함한다. 재구성시, 상기 제품은 본원에 기술된 바와 같이(그러나, 그로 제한하는 것은 아니다) 액체 제제가 될 수 있다. 따라서, 그의 광범위한 의미에서, "제제"라는 용어는 액체 및 고체 제제, 둘 모두를 포함한다. 그러나, 고체 제제는 (예컨대, 냉동, 동결 건조, 또는 분문 건조에 의해) 액체 제제로부터 유도가능한 것으로 이해되며, 따라서, 이는 본원에서 액체 제제에 대하여 기술된 특성에 의해 정의되는 특징을 가진다. 본 발명은 예컨대, 동결 건조 또는 분무 건조시키기 이전의 원래의 조성물에서 벗어나는 조성물을 유도하는 재구성을 배제시키지는 않는다.
멸균 주사용 액제는 본 발명의 폴리펩티드를 필요한 양으로 필요할 경우, 상기 열거된 각종의 다른 성분과 함께 적절한 용매 중에 혼입시킨 후, 이어서, 멸균 여과시킴으로써 제조된다. 멸균 주사용 액제 제조를 위한 멸균 분제의 경우, 바람직한 제조 방법은 진공 건조 및 냉동 건조 기법이며, 이를 통해 활성 성분과, 앞서 멸균 여과된 용액 중에 존재하는 임의의 추가의 바람직한 성분으로 이루어진 분제를 수득할 수 있다.
본원에 기술된 폴리펩티드, 면역글로불린 단일 가변 도메인 및/또는 나노바디의 비경구 투여용으로 바람직한 제제는 WO 2011/026945에 기술되어 있다.
일반적으로, 액체 조성물, 예컨대, 주사용 또는 주입용 제제, 또는 로션 중의 본 발명의 폴리펩티드의 농도는, 비록 그 양이 상기 범위로 제한되는 것은 아니지만, 약 0.1-25 wt%, 바람직하게는, 약 0.5-10 wt%일 것이며, 이는 적합한 부피로 투여될 수 있는 보다 고용량 또는 보다 저용량에 대한 요구에 따라서 보다 높은 또는 보다 낮은 중량%일 수 있다. 반고체 또는 고체 조성물, 예컨대, 겔 또는 분제 중의 농도는 약 0.1-5 wt%, 바람직하게는, 약 0.5-2.5 wt%가 될 것이다.
본원 실험 실시예에서 입증된 바와 같이, 0.65 mg/mL, 2.17 mg/mL, 6.5 mg/mL, 21.7 mg/mL 및 65 mg/mL의 농도가 사용될 수 있다. 따라서, 상기 농도 사이의 값을 가지는 다른 농도(및 또한 상기 값 바깥쪽 범위의 농도, 즉, 상기 값보다 더 높거나, 낮은 농도) 또한 사용될 수 있을 것으로 예상된다. 예를 들어, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 또는 70 mg/mL 농도가 사용될 수 있다.
본원에 기술된 효과를 예상 밖으로 장기간에 걸쳐 지속적으로 얻기 위해서, 본 발명의 폴리펩티드는 약 0.003 mg/kg 내지 약 10 mg/kg인 양으로 투여된다. 예시적인 용량 범위(각 범위의 끝점의 값 포함)는 0.003-10 mg/kg, 예컨대, 0.003-3 mg/kg, 0.003-1 mg/kg, 0.003-0.3 mg/kg, 0.003-0.1 mg/kg, 0.003-0.03 mg/kg, 0.003- 0.01 mg/kg, 0.01-10 mg/kg, 0.01-3 mg/kg, 0.01-1 mg/kg, 0.01-0.3 mg/kg, 0.01-0.1 mg/kg, 0.01-0.03 mg/kg, 0.03-10 mg/kg, 0.03-3 mg/kg, 0.03-1 mg/kg, 0.03-0.3 mg/kg, 0.03-0.1 mg/kg, 0.1-10 mg/kg, 0.1-3 mg/kg, 0.1-1 mg/kg, 0.1-0.3 mg/kg, 0.3-10 mg/kg, 0.3-3 mg/kg, 0.3-1 mg/kg, 1-10 mg/kg, 1-3 mg/kg, 및 3-10 mg/kg을 포함한다. 예시적인 용량은 0.003, 0.004, 0.005, 0.006, 0.007, 0.008, 0.009, 0.01, 0.02, 0.03, 0.04, 0.05, 0.06, 0.07, 0.08, 0.09, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 mg/kg을 포함한다.
주어진 투여량 범위에 대해 필요한 변형은 본원의 교시를 고려하여 오직 통상의 실험만을 이용함으로써 당업계의 숙련가에 의해 결정될 수 있다. 문헌 [ Remington's Pharmaceutical Sciences (Martin, E.W., ed. 4), Mack Publishing Co., Easton, PA]를 참조할 수 있다. 투여량은 또한 임의의 복합적인 경우에 개인별 담당 의사에 의해 조정될 수 있다.
치료학적 적용
따라서, 본 발명은 골 질환 및/또는 장애 예방 및/또는 치료를 필요로 하는 피험체에게 본 발명의 폴리펩티드, 및/또는 상기를 포함하는 제약 조성물을 제약상 활성인 양으로 투여하는 단계를 포함하는, 1 이상의 골 질환 및/또는 장애를 예방 및/또는 치료하는 방법에 관한 것이다. 더욱 특히, 본 발명은 골 질환 및/또는 장애에 대한 요법에서 사용하기 위한, 본원에 기술된 폴리펩티드에 관한 것이다.
본 발명의 방법 및 투약 스케줄은 골 질환 및/또는 장애 예방 및 치료를 위해 사용될 수 있다. 본 발명과 관련하여, "예방 및/또는 치료"라는 용어는 질환을 예방 및/또는 치료하는 것을 포함할 뿐만 아니라, 일반적으로는 상기 질환의 발병을 예방하는 것, 질환의 진행을 저속화 또는 역전시키는 것, 질환과 관련된 하나 이상의 증상의 발병을 예방 또는 저속화시키는 것, 질환과 관련된 하나 이상의 증상을 감소 및/또는 완화시키는 것, 질환 및/또는 그와 관련된 임의의 증상의 중증도 및/또는 지속 기간을 감소시키는 것, 및/또는 질환 및/또는 그와 관련된 임의의 증상의 중증도의 추가 증가를 예방하는 것, 질환에 의해 유발된 임의의 생리학상의 손상을 예방, 감소, 또는 역전시키는 것, 및 치료받는 환자에게 도움이 되는 일반적인 임의의 약리학적 작용을 포함한다.
본 발명은 1 이상의 질환 및/또는 장애 예방 및/또는 치료를 필요로 하는 피험체에게 본 발명의 폴리펩티드, 및/또는 상기를 포함하는 제약 조성물을 제약상 활성인 양으로 투여하는 단계를 포함하는, RANKL, 그의 생물학적 또는 약리학적 활성, 및/또는 RANKL가 관여하는 생물학적 경로 또는 신호전달과 관련이 있는, 1 이상의 질환 및/또는 장애를 예방 및/또는 치료하는 방법에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 1 이상의 질환 및/또는 장애 예방 및/또는 치료를 필요로 하는 피험체에게 본 발명의 폴리펩티드, 및/또는 상기를 포함하는 제약 조성물을 제약상 활성인 양으로 투여하는 단계를 포함하는, RANKL, 그의 생물학적 또는 약리학적 활성, 및/또는 RANKL가 관여하는 생물학적 경로 또는 신호전달 조절에 의해 치료될 수 있는, 1 이상의 질환 및/또는 장애를 예방 및/또는 치료하는 방법에 관한 것이다. 특히, 상기 제약상 유효량은 하나 이상의 골 대사의 마커 및/또는 골 항상성을 변화시키는 데 효과적인 양, 예컨대;
- 투여 후 약 30일 이상 동안 I형 콜라겐의 가교 결합 텔로펩티드(CTX-1)의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상, 더욱 바람직하게는 35% 이상, 더욱 바람직하게는 40% 이상, 더욱 바람직하게는 45% 이상, 더욱 바람직하게는 50% 이상, 더욱 바람직하게는 55% 이상, 더욱 바람직하게는 60% 이상, 더욱 바람직하게는 65% 이상, 더욱 바람직하게는 70% 이상, 예컨대, 75% 이상, 또는 심지어 80% 이상만큼 감소시키는 데 효과적이거나;
- 뇨 중 NTX-1 : 크레아티닌의 비로 측정되는 바, 투여 후 약 30일 이상 동안 I형 콜라겐의 N 말단 텔로펩티드(NTX-1)의 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상, 더욱 바람직하게는 35% 이상, 더욱 바람직하게는 40% 이상, 더욱 바람직하게는 45% 이상, 더욱 바람직하게는 50% 이상, 더욱 바람직하게는 55% 이상, 더욱 바람직하게는 60% 이상, 더욱 바람직하게는 65% 이상, 더욱 바람직하게는 70% 이상, 예컨대, 75% 이상, 또는 심지어 80% 이상만큼 감소시키는 데 효과적이거나;
- 투여 후 약 30일 이상 동안 타르트레이트 저항성 산성 포스파타제 이소형 5b(TRACP5b)의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상, 더욱 바람직하게 35% 이상, 더욱 바람직하게 40% 이상, 더욱 바람직하게 45% 이상, 더욱 바람직하게 50% 이상, 더욱 바람직하게 55% 이상, 더욱 바람직하게 60% 이상, 더욱 바람직하게 65% 이상, 더욱 바람직하게 70% 이상, 예컨대, 75% 이상, 또는 심지어 80% 이상만큼 감소시키는 데 효과적이거나;
- 투여 후 약 30일 이상 동안 I형 프로콜라겐의 N 말단 프로펩티드(P1NP)의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상, 더욱 바람직하게 35% 이상, 더욱 바람직하게 40% 이상, 더욱 바람직하게 45% 이상, 더욱 바람직하게 50% 이상, 더욱 바람직하게 55% 이상, 더욱 바람직하게 60% 이상, 더욱 바람직하게 65% 이상, 더욱 바람직하게 70% 이상, 예컨대, 75% 이상, 또는 심지어 80% 이상만큼 감소시키는 데 효과적인 양일 수 있다.
치료하고자 하는 피험체는 인간일 수 있다. 당업자에게 자명한 바와 같이, 치료하고자 하는 피험체는 특히 본원에서 언급된 질환 및/또는 장애를 앓고 있거나, 그러할 위험이 있는 사람일 수 있다. 예를 들어, 피험체는 골다공증을 앓고 있거나, 그러할 위험이 있는 사람, 및 특히 인간 여성, 더욱 특히 폐경 후 인간 여성일 수 있다.
본 발명의 방법 및 투약 스케줄은 다른 치료제보다 더 적은 용량으로 및/또는 더 적은 투약 빈도로 골 질환 및/또는 장애를 예방 및 치료하는 데 사용될 수 있다. 일반적으로, "골 질환 및/또는 장애"는 골 질환 및/또는 장애 예방 및/또는 치료를 필요로 하는 피험체(즉, 질환 및/또는 장애, 또는 그의 1 이상의 증상을 앓고/거나, 상기 질환 및/또는 장애를 유발하거나, 또는 그가 발생될 위험이 있는 피험체)에게 본 발명의 폴리펩티드 또는 상기를 포함하는 조성물(및 특히 그를 제약상 활성인 양으로), 및/또는 RANKL, 또는 RANKL이 관여하는 생물학적 경로 또는 기전에 대해 활성을 띠는 공지되 유효 성분(및 특히 특히 그를 제약상 활성인 양으로) 적합하게 투여함으로써 예방 및/또는 치료될 수 있는 질환 및/또는 장애로서 정의될 수 있다.
골 질환 및/또는 장애는 골 형성 및 재흡수 조절과 관련된 질환 및/또는 장애를 포함한다. 골의 순 손실(골 재흡수가 골 형성을 초과하는 거)을 특징으로 하는 골 질환 및/또는 장애는 또한 골감소증, 골다공증 및 골용해를 비롯한, 골감소증성 장애로 지칭되고, 이는 RANKL에 의한 과도한 및/또는 원치않는 신호전달 매개를 특징으로 한다. 보다 장기간 동안 및/또는 보다 저용량으로 및/또는 보다 적은 투약 빈도로 RANKL의 RANK에의 결합을 조절, 및 특히 억제 및/또는 방해하는 본 발명의 방법 및 투약 스케줄은 길항제로서의 역할을 하며, 이는 일반적으로 골의 순 손실을 특징으로 하는 골 질환 및/또는 장애를 예방 및/또는 치료하는 데 사용될 것이다.
상기 골 질환 및/또는 장애에 대한 예는 본원의 개시내용을 기초로 하여 당업자에게 자명할 것이며, 이는 예를 들어, 하기 질환 및/또는 장애: 원발성 골다공증, 내분비성 골다공증(갑상선기능항진증, 부갑상샘기능항진증(문헌 [Anandarajah and Schwarz 2006, J. Cell Biochem. 97: 226-232]), 쿠싱 증후군, 및 말단거대증을 포함하나, 이에 한정되지 않는다), 유전 및 선천적 형태의 골다공증(불완전 골생성증, 호모시스틴뇨증, 멩케 증후군, 릴리 데이 증후군을 포함하나, 이에 한정되지 않는다), 사지 고정에 기인한 골다공증, 글루코코르티코이드 유도성 골다공증(문헌 [Locklin et al. 2001, Bone 28 (SuppL):S80]; [McClung 2006, Current Osteoporosis Reports 4: 28-33]; [Anandaraja h and Schwarz 2006, J. Cell Biochem. 97: 226-232]) 및 폐경 후 골다공증(문헌 [McClung 2006, Current Osteoporosis Reports 4: 28-33])을 포함하나, 이에 한정되지 않는 골다공증(문헌 [McClung 2006, Current Osteoporosis Reports 4: 28-33])을 포함한다.
본 발명의 방법 및 투약 스케줄을 사용하는 RANKL/RANK/OPG에서의 불균형과 관련된 다른 질환 및/또는 장애의 예방 및/또는 치료 또한 본 발명의 범주 내에 포함된다. 상기와 같은 질환 및/또는 장애로는 골다공증을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
따라서, 본 발명의 일부 실시양태는 피험체에서의 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 예상 밖으로 장기간에 걸쳐에 걸쳐 억제시키기 위한, RANKL에 대한, 특히 인간 RANKL에 대한 폴리펩티드의 용도를 제공한다. 특히, 본 발명의 일부 실시양태는 인간에서 예방학적, 치료학적 및/또는 진단학적 사용을 위해, 및 특히 피험체에서의 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 예상 밖으로 장기간에 걸쳐에 걸쳐 억제시키기 위한 상기 폴리펩티드의 용도를 제공한다.
더욱 특히, 본 발명의 일부 실시양태는 인간에서 RANKL과 관계가 있고/거나, RANKL에 의해 매개되는 하나 이상의 질환, 장애 또는 병증(예컨대, 상기 언급된 질환, 장애 및 병증)의 방지, 예방, 치료, 완화 및/또는 진단을 위해, 및 특히 피험체에서의 골 재흡수 및/또는 파골세포 활성을 예상 밖으로 장기간에 걸쳐에 걸쳐 억제시키기 위한, 예컨대, 골다공증의 치료 또는 예방을 위한 상기 폴리펩티드의 용도를 제공한다.
본 발명의 일부 실시양태는 인간에서 RANKL과 관계가 있고/거나, RANKL에 의해 매개되는 하나 이상의 질환, 장애 또는 병증(예컨대, 상기 언급된 질환, 장애 및 병증)의 예방, 및/또는 치료를 위한 제약 조성물의 제조에서 사용하기 위한 상기 폴리펩티드의 용도를 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 1 이상의 골 질환 및/또는 장애의 예방 및/또는 치료를 위한; 및/또는 본원에서 언급된 치료 방법 중 하나 이상의 방법에서 사용하기 위한 본 발명의 폴리펩티드에 관한 것이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 1 이상의 골 질환 및/또는 장애의 예방 및/또는 치료를 위한; 및/또는 본원에서 언급된 치료 방법 중 하나 이상의 방법에서 사용하기 위한 제약 조성물의 제조에서의 본 발명의 폴리펩티드의 용도에 관한 것이다.
특히, 본 발명의 폴리펩티드는 본원에서 인용된 질환 및/또는 장애의 예방 및/또는 치료에 사용되거나, 사용될 수 있는 다른 제약상 활성인 화합물 또는 성분과 함께 병용될 수 있고, 그 결과로 시너지 효과를 얻거나, 그렇지 않을 수 있다. 상기와 같은 화합물 및 성분 뿐만 아니라, 그를 투여하기 위한 경로, 방법 및 제약 제제 또는 조성물에 대한 예는 임상의에게 자명할 것이다.
특히, 본 발명의 제약 조성물은 하나 이상의 본 발명의 폴리펩티드, 및 골 형태 형성 인자, 형질전환 성장 인자 β(TGF-β: transforming growth factor), 인터루킨-1 (IL-1) 억제제, IL-1ra, 키네레트(Kineret)™, TNFα 억제제, 가용성 TNFα 수용체, 엔브렐(Enbrel)™, 항TNFα 항체, 레미케이드(Remicade)™, D2E7 항체, 부갑상선 호르몬, 부갑상선 호르몬의 유사체, 부갑상선 호르몬 관련 단백질, 부갑상선 호르몬 관련 단백질의 유사체, 프로스타글란딘, 비스포스포네이트, 알렌드로네이트, 플루오라이드, 칼슘, 비스테로이드성 항염증성 약물(NSAID: non-steroidal anti-inflammatory drug), COX-2 저해제, 셀레브렉스(Celebrex)™, 비옥스(Vioxx)™, 면역억제제, 메토트렉세이트, 레플루노마이드, 세린 프로테아제 억제제, 분비성 백혈구 프로테아제 억제제(SLPI: secretory leukocyte protease inhibitor), IL-6 억제제, IL-6에 대한 항체 또는 나노바디, IL-8 억제제, IL-8 억제제에 대한 항체 또는 나노바디, IL-18 억제제, IL-18 결합 단백질, IL-18에 대한 항체 또는 나노바디, 인터류킨-1 전환 효소(ICE: Interleukin-1 converting enzyme) 섬유아세포 성장 인자(FGF: fibroblast growth factor), FGF 조절인자, PAF 길항제, 각질세포 성장 인자(KGF: keratinocyte growth factor), KGF 관련 분자, KGF 조절인자, 매트릭스 메탈로프로테이나제(MMP: matrix metalloproteinase) 조절인자, 일산화질소 신타제(NOS: nitric oxide synthase) 조절인자, 글루코코르티코이드 수용체 조절인자, 글루타메이트 수용체 조절인자, 지질다당류(LPS) 수준 조절인자, 노르아드레날린 조절인자, 노르아드레날린 모방체, 및 US 2004/00335353에 기술되어 있는 노르아드레날린 조절인자로부터 선택되는 1 이상의 추가의 치료제를 포함할 수 있다.
2개 이상의 물질 또는 성분을 병용 치료 요법의 일부로서 사용하고자 하는 경우, 이는 동일한 투여 경로를 통해, 또는 다른 투여 경로를 통해, 실질적으로는 동시에 또는 다른 시점에(실질적으로 동시에, 연속하여, 또는 교대 요법에 따라) 투여될 수 있다. 물질 또는 성분을 동일한 투여 경로를 통해 동시에 투여하고자 하는 경우, 당업자에게 자명한 바와 같이, 상이한 제약 제제 또는 조성물, 또는 조합된 제약 제제 또는 조성물의 일부로서 투여될 수 있다.
또한, 2개 이상의 활성 물질 또는 유효 성분을 병용 치료 요법의 일부로서 사용하조가 하는 경우, 각 물질 또는 성분은 상기 물질 또는 성분이 단독으로 사용될 때와 동일한 양으로 및 동일한 요법에 따라 투여될 수 있고, 그러한 병용 사용을 통해 시너지 효과를 얻을 수 있거나, 그렇지 않을 수 있다. 그러나, 2개 이상의 활성 물질 또는 유효 성분을 병용 사용함으로써 시너지 효과를 얻을 경우, 원하는 치료 작용은 여전히 달성하면서, 투여되는 물질 또는 성분 중 하나, 또는 그 이상 또는 그 모두의 양을 감소시킬 수 있다. 예를 들어, 원하는 제약 또는 치료 효과는 여전히 수득하면서 동시에, 물질 또는 성분을 그의 일반적인 양으로 사용하였을 때, 그 중 하나 이상의 사용과 관련된 임의의 원치않는 부작용을 피하거나, 제한하거나, 또는 감소시키기는 데 유용할 수 있다.
정의
달리 명시 또는 정의되지 않는 한, 사용되는 모든 용어는 당업계에서의 그의 일반적인 의미를 가지며, 이는 당업자에게는 자명할 것이다. 예를 들어, 표준 편람, 예컨대, 문헌 [Sambrook et al, "Molecular Cloning: A Laboratory Manual" (2nd. Ed.), Vols. 1-3, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989)]; [F. Ausubel et al, eds., "Current protocols in molecular biology", Green Publishing and Wiley Interscience, New York (1987)]; [Lewin, "Genes II", John Wiley & Sons, New York, N.Y., (1985)]; [Old et al., "Principles of Gene Manipulation: An Introduction to Genetic Engineering", 2nd edition, University of California Press, Berkeley, CA(1981)]; [Roitt et al., "Immunology" (6th. Ed.), Mosby/Elsevier, Edinburgh (2001)]; [Roitt et al., Roitt' s Essential Immunology, 10th Ed. Blackwell Publishing, UK (2001)]; 및 [Janeway et al., "Immunobiology" (6th Ed.), Garland Science Publishing/Churchill Livingstone, New York (2005)] 뿐만 아니라, 본원에서 인용된 일반 배경 기술도 참조할 수 있다.
달리 명시되지 않는 한, 당업자에게 자명한 바와 같이, 구체적으로 상세하게 기술되지 않은 모든 방법, 단계, 기법 및 조작은 그 자체가 공지되어 있는 방식으로 수행될 수 있고, 수행되었다. 추가로, 예를 들어, 표준 편람 및 본원에서 언급된 일반 배경 기술 및 그 참고 문헌에서 인용된 추가의 참고 문헌; 뿐만 아니라, 예를 들어, 하기 리뷰: 문헌 [Presta (2006, Adv. Drug Deliv. Rev. 58 (5-6): 640-56)]; [Levin and Weiss (2006, ol. Biosyst. 2(1): 49-57)]; [Irving et al. (2001, J. Immunol. Method, 248(1-2): 31-45)]; [Schmitz et al. (2000, Placenta, 21 Suppl. A: S106-12)]; [Gonzales et al. (2005, Tumour Biol. 26(1): 31-43)](단백질 조작 기법, 예컨대, 친화도 성숙 및 단백질, 예컨대, 면역글로불린의 특이성 및 다른 바람직한 특성을 개선시키기 위한 다른 기법 기술)을 참조할 수 있다.
핵산 서열 또는 아미노산 서열은 - 예를 들어, 그의 천연 생물학적 공급원 및/또는 이것이 수득된 반응 배지 또는 배양 배지와 비교하여-이 서열이 상기 공급원 또는 배지에서 대체적으로 회합되는 1 이상의 다른 성분, 예컨대, 또 다른 핵산, 또 다른 단백질/폴리펩티드, 또 다른 생물학적 성분 또는 거대분자 또는 1 이상의 오염원, 불순물 또는 소수의 성분으로부터 분리되어진 경우, "실질적으로 단리된 (형태)"인 것으로 간주된다. 특히, 핵산 서열 또는 아미노산 서열은, 그것이 2배 이상, 특히 10배 이상, 더욱 특히 100배 이상, 및 및 최대 1,000배 이상으로 정제되어진 경우, "실질적으로 단리"된 것으로 간주된다. "실질적으로 단리된 형태"의 핵산 서열 또는 아미노산 서열은 적합한 기법, 예컨대, 적합한 크로마토그래피 기법, 예컨대, 폴리아크릴아미드-겔 전기영동을 사용하여 측정되는 바, 바람직하게는 실질적으로 균질하다.
뉴클레오티드 서열 또는 아미노산 서열이 각각 또 다른 뉴클레오티드 서열 또는 아미노산 서열을 "포함한다," 또는 또 다른 뉴클레오티드 서열 또는 아미노산 서열로 "실질적으로 구성된다"라고 언급될 때, 이는 후자의 뉴클레오티드 서열 또는 아미노산 서열이 각각 먼저 언급된 뉴클레오티드 서열 또는 아미노산 서열 내로 혼입되어 있음을 의미할 수 있지만, 더욱 보편적으로 이는 일반적으로 먼저 언급된 뉴클레오티드 서열 또는 아미노산 서열은 각각 먼저 언급된 서열이 실제로 어떻게 생성되었는지 또는 수득되었는지(이는 예를 들어, 본원에 기술된 임의의 적합한 방법에 의한 것일 수 있다)와는 상관없이, 그의 서열 내에 각각 후자 서열과 동일한 뉴클레오티드 서열 또는 아미노산 서열을 가지는 뉴클레오티드 또는 아미노산 잔기 스트레치를 포함한다는 것을 의미한다. 비제한적인 일례로, 본 발명의 나노바디 또는 폴리펩티드가 CDR 서열을 포함한다고 언급될 경우, 이는 상기 CDR 서열이 본 발명의 나노바디 또는 폴리펩티드 내로 혼입되어 있다는 것을 의미할 수도 있지만, 더욱 보편적으로 이는 일반적으로는 본 발명의 나노바디 또는 폴리펩티드는 상기 본 발명의 나노바디 또는 폴리펩티드가 실제로 어떻게 생성되었는지 또는 수득되었는지와는 상관없이, 그의 서열 내에 상기 CDR 서열과 동일한 아미노산 서열을 가지는 뉴클레오티드 또는 아미노산 잔기 스트레치를 포함한다는 것을 의미한다. 후자 아미노산 서열이 특이적인 생물학적 또는 구조적 기능을 가지는 경우, 이는 상기 언급된 아미노산 서열의 것과 실질적으로 동일, 유사 또는 등가인 생물학적 또는 구조적 기능을 가진다(다시 말해, 상기 언급된 아미노산 서열은 바람직하게는 후자 서열이 실질적으로 동일, 유사 또는 등가인 생물학적 또는 구조적 기능을 수행할 수 있도록 하는 것이다)는 것 또한 주의하여야 한다. 예를 들어, 본 발명의 나노바디 또는 폴리펩티드가 각각 CDR 서열 또는 골격 서열을 포함한다고 언급되는 경우, CDR 서열 및 골격은 바람직하게는 상기 나노바디 또는 폴리펩티드에서 각각 CDR 서열 또는 골격 서열로서의 기능을 할 수 있다. 또한, 뉴클레오티드 서열이 또 다른 뉴클레오티드 서열을 포함한다고 언급되는 경우, 상기 언급된 뉴클레오티드 서열은 바람직하게 발현 생성물(예컨대, 폴리펩티드)로 발현되었을 때, 후자 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 아미노산 서열이 상기 발현 생성물의 일부를 형성하도록 하는 것이다(다시 말해, 후자 뉴클레오티드 서열이 먼저 언급된, 보다 큰 뉴클레오티드 서열와 동일한 리딩 프레임에 있도록 하는 것이다).
"실질적으로 구성된"이라는 것은 먼저 언급된 핵산 서열 또는 아미노산 서열이 후자 서열과 정확하게 동일하거나, 또는 제한된 개수의 핵산 또는 아미노산 잔기를 가지는 후자 서열, 예컨대, 핵산 또는 아미노산 서열의 아미노 말단 단부에, 카복시 말단 단부에, 또는 아미노 말단 단부 및 카복시 말단 단부, 둘 모두에 부가된 1-20개의 아미노산 잔기(를 코딩하며), 예를 들어, 1-10개의 아미노산 잔기(를 코딩하며) 및 바람직하게 1-6개 아미노산 잔기(를 코딩하며), 예컨대, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 아미노산 잔기(를 코딩하며)에 상응한다는 것을 의미한다.
특이적인 항원 결정기, 에피토프, 항원 또는 단백질에(또는 그의 1 이상의 일부, 단편 또는 에피토프)에 (특이적으로) 결합할 수 있고/거나, 그에 대해 친화도를 가지고/거나, 그에 대해 특이성을 가지는 아미노산 서열(예컨대, 본 발명의 나노바디, 항체, 폴리펩티드, 또는 일반적으로 항원 결합 단백질 또는 폴리펩티드 또는 그의 단편)은 상기 항원 결정기, 에피토프, 항원 또는 단백질'에 대한', 또는 '에 대해 지시되는' 것으로 언급할 수 있다.
"특이성"이라는 용어는 특정 항원 결합 분자 또는 항원 결합 단백질(예컨대, 본 발명의 나노바디 또는 폴리펩티드)가 결합할 수 있는 상이한 유형의 항원 또는 항원 결정기의 개수를 의미한다. 항원 결합 단백질의 특이성은 친화도 및/또는 결합력을 기반으로 측정될 수 있다. 항원의 항원 결합 단백질과의 해리 평형 상수(KD)로 표현되는 친화도는 항원 결정기와 항원 결합 단백질 상의 항원 결합 부위 사이의 결합 강도에 척도이며: KD 값이 작을수록 항원 결정기와 항원 결합 사이의 결합 강도는 더 강하다(별법으로, 친화도는 1/KD인, 친화도 상수(KA)로도 표현될 수 있다). (예를 들어, 본원의 추가 개시내용에 기초하여) 당업자에게 자명한 바와 같이, 친화도는 관심의 대상이 되는 특이적인 항원에 따라, 그 자체가 공지되는 있는 방식으로 측정될 수 있다. 결합력은 항원 결합 분자 또는 항원 결합 단백질(예컨대, 본 발명의 나노바디 또는 폴리펩티드)과 관련 항원 사이의 결합 강도의 척도이다. 결합력은 항원 결정기와 그의 항원 결합 분자 상의 항원 결합 부위 사이의 친화도, 및 항원 결합 분자 상에 존재하는 관련 결합 부위의 개수, 둘 모두와 관련이 있다. 전형적으로, 항원 결합 단백질(예컨대, 본 발명의 아미노산 서열, 나노바디 및/또는 폴리펩티드)는 10-5 내지 10-12 몰/ℓ 이하, 및 바람직하게 10-7 내지 10-12 몰/ℓ 이하 및 더욱 바람직하게 10-8 내지 10-12 몰/ℓ의 해리 상수(KD)로(즉, 105 내지 1012 ℓ/몰 이상, 및 바람직하게 107 내지 1012 ℓ/몰 이상 및 더욱 바람직하게 108 내지 1012 ℓ/몰의 회합 상수(KA)로 그의 항원에 결합할 것이다. 104 몰/ℓ 초과의 임의의 KD 값(또는 104 M-1(ℓ/몰) 미만의 임의의 KA 값)은 일반적으로 비특이 결합을 나타내는 것으로 간주된다. 바람직하게, 본 발명의 1가 면역글로불린 서열은 500 nM 미만, 바람직하게, 200 nM 미만, 더욱 바람직하게, 10 nM 미만, 예컨대, 500 pM 미만의 친화도로 원하는 항원에 결합할 것이다. 항원 결합 단백질의 항원 또는 항원 결정기에의 특이적인 결합은 예를 들어, 스캐차드(Scatchard) 분석 및/또는 경쟁 결합 검정법, 예컨대, 방사면역검정법(RIA: radioimmunoassay), 효소 면역검정법(EIA) 및 샌드위치 경쟁 검정법, 및 그 자체가 당업계에 공지되어 있는 것인 상기 방법들의 상이한 변형 방법; 뿐만 아니라, 본원에서 언급된 다른 기법을 비롯한, 그 자체가 공지되어 있는 임의의 적합한 방식으로 측정될 수 있다.
당업자에게 자명한 바와 같이, 해리 상수는 실제 또는 겉보기 해리 상수일 수 있다. 해리 상수를 측정하는 방법은 당업자에게 자명할 것이며, 이는 본원에서 언급된 기법을 포함한다. 이와 관련하여, 10-4 몰/ℓ 또는 10-3 몰/ℓ 초과(예컨대, 10-2 몰/ℓ)의 해리 상수를 측정하는 것이 가능하지 않을 수도 있다는 것 또한 자명할 것이다. 임의적으로, 이 또한 당업자에게 자명한 바와 같이, (실제 또는 겉보기) 해리 상수는 관계식 [KD = 1/KA]에 의해 (실제 또는 겉보기) 회합 상수(KA)를 기초로 계산될 수 있다.
친화도는 분자 상호작용의 강도 또는 안정성을 의미한다. 친화성은 보편적으로 KD 또는 해리 상수로 제시되며, 그 단위는 몰/ℓ(또는 M)이다. 친화도는 또한 회합 상수, KA로 표시될 수 있으며, 1/KD와 같고, 단위는 몰/ℓ-1(또는 M-1)이다. 본 명세서에서, 두 분자(예컨대, 본 발명의 나노바디 또는 폴리펩티드와 그가 의도하는 표적) 간의 상호작용의 안정성은 주로 그의 상호작용에 대한 KD 값으로 표시될 것이며; 관계식 KA=1/KD에 비추어 볼 때, 분자 상호작용의 강도를 그의 KD 값으로 명시되는 것 또한 상응하는 KA 값을 계산하는 데 사용될 수 있다는 것이 당업자에게는 자명할 것이다. KD 값은 주지된 관계식 DG= RT.ln(KD)(DG=-RT.ln(KA)와 같다)(여기서, R=기체 상수이고, T=절대 온도, 및 ln은 자연 로그를 나타낸다)에 의하면, 결합의 자유 에너지(DG)와 관련이 있는 바, KD 값은 또한 열역학적 의미에서도 분자 상호작용의 강도를 특징으로 한다.
(예컨대, 특이적인 것과 같이) 중요한 것으로 간주되는 생물학적 상호작용에 대한 KD는 전형적으로 10-10 M(0.1 nM) 내지 10-5 M(10,000 nM) 범위이다. 상호작용이 강하면 강할수록, 그의 KD 값은 더 낮다. KD는 또한 그의 회합 속도(k온으로 표시)에 대한 복합체의 해리 속도 상수(k오프로 표시)의 비(따라서, KD=k오프/k온 및 KA =k온/k오프)로 표시될 수 있다. 오프 속도인 k오프 단위는 s-1이다(여기서, s는 초에 대한 SI 단위 표시법이다). 온 속도인 k온 단위는 M-1s-1이다. 온 속도는 102 M-1s-1 내지 약 107 M-1s-1로 달라질 수 있고, 2분자 상호작용에 대한 확산 제한된 회합 숙도 상수에 도달할 수 있다. 오프 속도는 관계식 t½=ln(2)/k오프에 의하면, 주어진 분자의 상호작용의 반감기와 관련이 있다. 오프 속도는 10-6 s-1(t½이 수일인, 거의 비가역적인 복합체) 내지 1 s-1(t½=0.69 s)로 달라질 수 있다.
두 분자간의 분자 상호작용의 친화도는 그 자체가 공지되어 있는 상이한 기법, 예컨대, 한 분자는 바이오센서 칩 상에 고정도어 있고, 다른 분자는 유동 조건하에 고정된 분자 상을 통과하며, 이를 통해 k온, k오프 측정치 및 이로써 KD(또는 KA) 값을 수득하게 되는, 주지된 표면 플라스몬 공명(SPR: surface plasmon resonance) 바이오센서 기법(예를 들어, 문헌 [Ober et al. 2001, Intern. Immunology 13: 1551-1559] 참조)을 통해 측정될 수 있다. 이는 예를 들어, 주지된 비아코어 장치를 사용함으로써 수행될 수 있다.
예를 들어, 한 분자의 바이오센서 상의 코팅과 관련된 아티팩트에 의해 측정 과정이 내포된 분자의 내재성 결합 친화도에 다소 영향을 미친다면, 측정된 KD는 겉보기 KD와 일치할 수 있다는 것 또한 당업자에게는 자명할 것이다. 또한, 한 분자가 다른 분자에 대하여 1 초과의 인식 부위를 포함한다면, 겉보기 KD가 측정될 수 있다. 이러한 상황하에서, 측정된 친화도는 두 분자에 의한 상호작용의 결합력에 의해 영향을 받을 수 있다.
친화도를 평가하는 데 사용될 수 있는 또 다른 접근법은 문헌 [Friguet et al. (1985, J. Immunol. Methods, 77: 305-19)]의 2단계 ELISA(효소 결합 면역흡착 검정법) 방법이다. 본 방법을 통해 용액 상 결합 평형 측정이 확립되었고, 이를 통해 분자 중 하나가 지지체, 예컨대, 플라스틱 상에 흡착되는 것과 관련되는 가능한 아티팩트를 피할 수 있다.
그러나, KD를 정확하게 측정하는 것은 매우 노동 집약적일 수 있고, 그 결과, 대개는 겉보기 KD 값을 측정하여 두 분자의 결합 강도를 평가한다. 모든 측정을 일관된 방식으로(예컨대, 검정 조건을 바꾸지 않고 그대로 유지시키면서) 실시하는 한, 겉보기 KD 측정치는 실제 KD의 근사치로서 사용될 수 있고, 따라서, 본 명세서에서 KD 및 겉보기 KD는 동일한 중요도 또는 관련도로 처리될 수 있다는 점에 주의하여야 한다.
마지막으로, 여러 상황하에서 숙련된 과학자는 일부 참조 분자에 대해 상대적인 결합 친화도를 측정하는 것이 편리한지 여부를 판단할 수 있다는 점에 주의하여야 한다. 예를 들어, 분자 A와 B 사이의 결합 강도를 평가하기 위해, B에 결합하는 것으로 알려져 있으며, ELISA 또는 FACS(형광 활성 세포 분류: Fluorescent activated cell sorting) 또는 다른 포맷(형광 검출을 위한 형광단, 광 흡수 검출을 위한 발색단, 스트렙트아비딘 매개 ELISA 검출을 위한 비오틴)에서 용이하게 검출될 수 있도록 하기 위해 형광단 또는 발색단 기 또는 다른 화학 모이어티, 예컨대, 비오틴으로 적합하게 표지화되는 참조 분자 C를 사용할 수 있다. 전형적으로,참조 분자 C는 고정 농도로 유지되고, A의 농도는 B의 주어지 농도 또는 양에 대해 달라진다. 그 결과, IC50 값은 A 부재하에서 C에 대해 측정된 신호가 절반값이 되는 A 농도에 상응하는 것으로 수득된다. 참조 분자의 KD인 KD 참조 뿐만 아니라, 참조 분자의 총 농도 C참조도 공지되어 있다면, A-B 사이의 상호작용에 대한 겉보기 KD는 하기 공식 KD=IC50/(1+C참조/KD 참조)로부터 얻을 수 있다. C참조<<KD 참조라면, KD는 IC50의 근사치라는 것에 주의한다. 비교되는 결합제에 대해 IC50을 일관된 방식으로(예컨대, C참조를 고정 농도 그대로 유지시키면서) 측정한다면, 분자 상호작용의 강도 또는 안정성은 IC50에 의해 평가될 수 있고, 이 측정치는 본 명세서 전역에 걸쳐 KD와 또는 겉보기 KD와 등가인 것으로 판단된다.
본 발명의 화합물 또는 폴리펩티드의 반감기는 일반적으로 예를 들어, 자연 기전에 의한 화합물 또는 폴리펩티드의 제거 또는 화합물 또는 폴리펩티드의 분리에 기인하여 화합물 또는 폴리펩티드의 혈청 농도가 50% 만큼 감소되는 데 소요되는 시간으로 정의될 수 있다. 본 발명의 화합물 또는 폴리펩티드의 생체내 반감기는 그 자체가 공지된 임의의 방식으로, 예컨대, 약동학적 분석에 의해 측정될 수 있다. 적합한 기법은 당업자에게 자명할 것이며, 이는 예를 들어, 일반적으로는 온혈 동물에게(즉, 인간에게 또는 또 다른 적합한 포유동물, 예컨대, 마우스, 토끼, 래트, 돼지, 개, 또는 영장류, 예를 들어, 마카카(Macaca) 속으로부터의 원숭이(예컨대, 및 특히 시노몰구스 원숭이(마카카 파시쿨라리스(Macaca fascicularis) 및/또는 레수스 원숭이(마카카 물라토(Macaca mulatto))에게) 및 개코원숭이(파피오 우르시누스(Papio ursinus))에게 적합한 용량의 본 발명의 화합물 또는 폴리펩티드를 적합하게 투여하는 단계; 상기 동물로부터 혈액 시료 또는 다른 시료를 수집하는 단계; 상기 혈액 시료 중의 본 발명의 화합물 또는 폴리펩티드의 수준 또는 농도를 측정하는 단계; 및 상기와 같이 수득된 데이터(데이터 플롯)으로부터, 본 발명의 화합물 또는 폴리펩티드의 수준 또는 농도가 투약 시 초기 수준과 비교하여 50% 만큼 감소될 때까지의 시간을 계산하는 단계를 포함할 수 있다. 예를 들어, 하기 실험부 뿐만 아니라, 표준 편람, 예컨대, 문헌 [Kenneth, A et al.,: Chemical Stability of Pharmaceuticals: A Handbook for Pharmacists and Peters et al, Pharmacokinete analysis: A Practical Approach(1996)]를 참조할 수 있다. 또한 문헌 ["Pharmacokinetics", M Gibaldi & D Perron, published by Ma rcel Dekker, 2nd Rev. edition (1982)]도 참조할 수 있다.
당업자에게 자명한 바와 같이(예를 들어, WO 04/003019 6 및 7페이지, 및 상기 문헌에서 인용된 추가의 참조 문헌 참조)), 반감기는 파라미터, 예컨대, t½ 알파, t½ 베타 및 곡선하면적(AUC: area under the curve)으로 표시될 수 있다. 본 명세서에서, "반감기 증가"는 상기 파라미터 중 어느 하나, 예컨대, 상기 파라미터 중 어느 2개의 것, 또는 실질적으로 상기 3개의 파라미터 모두의 증가를 의미한다. 본원에서 사용되는 바, "반감기 증가" 또는 "증가된 반감기"라는 것은 특히 t½ 알파 또는 AUC, 또는 그 둘 모두의 증가 또는 비증가하의 t½ 베타 증가를 의미한다.
2개 이상의 뉴클레오티드 서열을 비교하기 위한 목적의 제1 뉴클레오티드 서열과 제2 뉴클레오티드 서열 사이의 "서열 동일성(%)"은 WO 08/142164 58-60페이지의 요점 e) 및 g)에 정의되어 있는 바와 같다.
2개 이상의 아미노산 서열을 비교하기 위한 목적의 제1 아미노산 서열과 제2 아미노산 서열 사이의 "서열 동일성(%)"은 WO 08/142164 58-60페이지의 요점 f), g) 및 h)에 정의되어 있는 바와 같다.
"항원 결정기"라는 용어는 항원 결합 분자(예컨대, 본 발명의 나노바디 또는 폴리펩티드)에 의해, 및 더욱 특히 상기 분자의 항원 결합 부위에 의해 인식되는 항원 상의 에피토프를 의미한다. "항원 결정기" 및 "에피토프"라는 용어는 또한 본원에서 상호 교환적으로 사용될 수 있다.
"교차 차단," "교차 차단된" 및 "교차 차단하는"이라는 용어는 본원에서 상호 교환적으로 사용되며, WO 08/142164 69-72페이지 요점 s)의 의미를 가진다.
나노바디의 아미노산 잔기는 (Riechmann and Muyldermans)의 논문(문헌 [2000, J. Immunol. Method 240 (1-2): 185-195])(예를 들어, 상기 공개 문헌의 도 2 참조)에서 카멜리드로부터의 VHH 도메인에 적용된 바와 같이; 또는 본원에서 언급된 바와 같이, (Kabat) 등(문헌 ["Sequence of proteins of immunological interest", US Public Health Services, NIH Bethesda, M D, Publication No. 91])에 의해 제공되는 VH 도메인에 대한 일반 번호매김에 따라 번호매김된 것이다. 이와 같은 번호매김에 따라, 나노바디의 FR1은 1-30번 위치에 아미노산 잔기를 포함하고, 나노바디의 CDR1은 31-35번 위치에 아미노산 잔기를 포함하고, 나노바디의 FR2는 36-49번 위치에 아미노산 잔기를 포함하고, 나노바디의 CDR2는 50-65번 위치에 아미노산 잔기를 포함하고, 나노바디의 FR3은 66-94번 위치에 아미노산 잔기를 포함하고, 나노바디의 CDR3은 95-102번 위치에 아미노산 잔기를 포함하고, 나노바디의 FR4는 103-113번 위치에 아미노산 잔기를 포함한다[이와 관련하여, VH 도메인 및 VHH 도메인에 대해 당업계에 주지되어 있는 바와 같이-각 CDR 중 아미노산 잔기의 총 개수는 달라질 수 있고, 이는 (Kabat) 번호매김에 의해 표시되는 아미노산 잔기의 총 개수와 일치하지 않을 수 있고(즉, (Kabat) 번호매김에 따른 하나 이상의 위치가 실제 서열에서는 존재하지 않을 수도 있거나, 또는 실제 서열은 (Kabat) 번호매김에 의해 허용되는 개수보다 더 많은 아미노산 잔기를 함유할 수 있다는 점에 주의하여야 한다). 이는 일반적으로는 (Kabat)에 따른 번호매김이 실제 서열에서 아미노산 잔기의 실제 번호매김과 일치할 수도, 또는 일치하지 않을 수도 있다는 것을 의미한다. 그러나, 일반적으로, (Kabat) 번호매김에 따라, 및 CDR 중의 아미노산 잔기의 개수와는 상관없이, (Kabat) 번호매김에 따른 1번 위치는 FR1 출발점과 일치하고, 그 반대의 경우도 그러하며, (Kabat) 번호매김에 따른 36번 위치는 FR2 출발점과 일치하고, 그 반대의 경우도 그러하며, (Kabat) 번호매김에 따른 66번 위치는 FR3 출발점과 일치하고, 그 반대의 경우도 그러하며, (Kabat) 번호매김에 따른 103번 위치는 FR4 출발점과 일치하고, 그 반대의 경우도 그러하다고 말할 수 있다].
본 발명의 폴리펩티드를 피험체에게 투여하였을 때, 마커 수준이 처리 이전과 비교하여, 또는 정상 수준과 비교하여 x% 감소하였다면, 본 발명의 폴리펩티드는 마커(예컨대, CTX-1, NTX-1, TRACP5b 또는 PIMP) 수준을 "x% 이상만큼" 감소시키거나, 마커 수준을 "처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 x% 이상만큼" 감소시킨다고" 언급된다. 이는 처리된 피험체에서의 마커 수준이 처리 이전의 마커 수준과 비교하여, 또는 마커의 정상 수준과 비교하여 x% 낮다는 것을 의미한다. 따라서, 처리 이전의 마커 수준 또는 마커의 정상 수준을 100%로 설정하였을 때, 처리된 피험체에서의 마커 수준(감소된 마커 수준)은 100%-처리 이전의 마커 수준 또는 마커의 정상 수준에 대한 상대적인 x%가 될 것이다. 따라서, 이러한 처리된 피험체에서의 마커 수준은 또한 "100%-기준선에 대한 상대적인 비율로 x%"라고 할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 폴리펩티드가 "CTX-1의 혈청 수준을 30% 이상만큼 감소시키거나," 또는 "CTX-1의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소시켰다"고 한다면, 처리된 피험체에서의 CTX-1의 혈청 수준은 처리 이전의 CTX-1 수준과 비교하여, 또는 CTX-1의 정상 수준과 비교하여 30% 더 낮은 것이 된다. 따라서, 처리 이전의 CTX-1 수준 또는 CTX-1의 정상 수준을 100%로 설정하였을 때, 처리된 피험체에서의 CTX-1 수준(감소된 CTX-1 수준)은 처리 이전의 CTX-1 수준 또는 CTX-1의 정상 수준에 대한 상대적인 비율로 70%(100%-30%)가 될 것이다. 따라서, 이러한 처리된 피험체에서의 CTX-1 수준은 또한 "기준선에 대한 상대적인 비율로 70%"라고 할 수 있다.
감소된 마커 수준이 처리 이전의 마커 수준과 비교하여, 또는 마커의 정상 수준과 비교하여 x% 더 낮은 상태로 유지된다면, 본 발명의 폴리펩티드는 마커(예컨대, CTX-1, NTX-1, TRACP5b or P1NP) 수준을 "x% 이상으로" 유지시킨다고 언급된다. 따라서, 마커 수준은 "100%-기준선에 대한 상대적인 비율로 x%"로 유지된다. 예를 들어, 감소된 혈청 CTX-1이 처리 이전의 CTX-1 수준과 비교하여, 또는 CTX-1의 정상 수준과 비교하여 30% 더 낮은 상태로 유지된다면, 본 발명의 폴리펩티드는 CTX-1의 혈청 수준을 "30% 이상으로" 유지시킨다고 언급된다. 따라서, CTX-1 수준은 "기준선에 대한 상대적인 비율로 70%"로 유지된다.
도면, 및 실험부/실시예는 단지 본 발명을 추가로 설명하기 위해 제공되는 것이며, 본원에서 달리 명확하게 명시되지 않는 한, 이를 어느 방식으로든 본 발명 및/또는 첨부된 특허청구범위의 범주로서 번역 또는 해석해서는 안된다.
이제 본 발명은 하기의 비제한적인 실시예 및 도면에 의해 추가로 기술될 것이다:
도 1: 중심 구획으로부터의 선형 및 비선형 제거를 포함하는 개방형 2 구획 약동학적 성질 모델. CL비 RANKL은 선형 비RANKL 매개 제거이고, Vc는 중심 구획의 부피이고, Vt는 말초 구획의 부피이고, CLd는 구획간 유속이고, CLRANKL은 비선형 RANKL-매개 제거이다(V최대는 최대 대사율이고, Km은 V최대의 50%에 상응하는 ALX-0141 농도이다). s.c. 투여 후의 흡수 속도 상수 및 생체이용률은 각각 ka 및 F로 표시되어 있다.
도 2: s.c. 공간으로부터의 병행 1차 흡수 및 중심 구획으로부터의 선형 및 비선형 제거를 포함하는 개방형 단일 구획 약동학적 성질 모델. CL비 RANKL/F는 s.c. 생체이용률에 대해 보정된 선형 비RANKL 매개 제거이고, V/F는 s.c. 생체이용률에 대해 보정된 중심 구획 부피이고, F1은 ka1로 흡수되는 용량의 분율이고, F2는 ka2로 흡수되는 용량의 분율이고, ka1 및 ka2는 각각 고속 및 저속 1차 흡수 속도 상수이고, CLRANKL/F는 s.c. 생체이용률에 대해 보정된 비선형 RANKL 매개 제거이다(V최대는 최대 대사율이고, Km은 V최대의 50%에 상응하는 ALX-0141 농도이다).
도 3: 약동학적 성질( pharmacokinetics ). ALX-0141의 기하 평균 혈장 농도 대 시간 프로파일. (a) 선형 눈금; (b) 반로그 눈금.
도 4: 약력학적 성질( pharmacodynamics ) - 혈청 CTX -1 변화. ALX-0141로 처리된 피험체에서 투약 후 8시간 이내에 혈청 CTX-1 수준의 급격한 감소가 관찰되었다. ALX-0141이 혈청 CTX-1 수준(기준선에 대한 상대적인 비율(%))에 미치는 용량 의존성의 장기 지속적인 억제 효과가 제시되어 있다. 값은 평균 ± SEM이고, 위약의 경우, n = 11이고, 각 ALX-0141 처리군의 경우, n = 6이다.
도 5: 약력학적 성질 - 뇨 NTX -1/크레아티닌 변화. ALX-0141로 처리된 피험체에서 투약 후 8시간 이내에 뇨 NTX-1/크레아티닌 수준의 급격한 감소가 관찰되었다. ALX-0141이 뇨 NTX-1/크레아티닌 수준(기준선에 대한 상대적인 비율(%))에 미치는 용량 의존성의 장기 지속적인 억제 효과가 제시되어 있다. 값은 평균 ± SEM이고, 위약의 경우, n = 11이고, 각 ALX-0141 처리군의 경우, n = 6이다.
도 6; 건강한 폐경 후 여성 지원자에서 ALX-0141 또는 위약을 s.c. 투약받은 이후의 산술 평균 CTX-1 혈청 농도(기준선에 대한 상대적인 비율(%)).
도 7: 건강한 폐경 후 여성 지원자에서 ALX-0141 또는 위약을 s.c. 투약받은 이후의 산술 평균 뇨 중 NTX-1/크레아티닌(기준선에 대한 상대적인 비율(%)).
도 8: 건강한 폐경 후 여성 지원자에서 ALX-0141 또는 위약을 s.c. 투약받은 이후의 산술 평균 TRACP5b 혈청 농도(기준선에 대한 상대적인 비율(%)).
도 9: 건강한 폐경 후 여성 지원자에서 ALX-0141 또는 위약을 s.c. 투약받은 이후의 산술 평균 P1NP 혈청 농도(기준선에 대한 상대적인 비율(%)).
도 10: 건강한 폐경 후 여성 지원자에서 ALX-0141 또는 위약을 s.c. 투약받은 이후의 산술 평균 BAP 혈청 농도(기준선에 대한 상대적인 비율(%)).
도 11: 건강한 폐경 후 여성에서의 ALX-0141의 (a) 0.003, (b) 0.01, (c) 0.03, (d) 0.1, (e) 0.3, 및 (f) 1 mg/kg 단일 s.c. 투약 이후의 관측치(데이터 점 표시된 선) 및 모델 기반 모의(보다 옅은 선, 데이터 점이 표시되지 않은 선) ALX-0141 혈장 농도(ug/ml)-시간(d) 프로파일.
도 12: 건강한 폐경 후 여성에서의 ALX-0141의 (a) 0.003, (b) 0.01, (c) 0.03, (d) 0.1, (e) 0.3, 및 (f) 1 mg/kg 단일 s.c. 투약 이후의 관측치(데이터 점 표시된 선) 및 모델 기반 모의(보다 옅은 선, 데이터 점이 표시되지 않은 선) 혈청 CTX-1-시간 프로파일.
실시예
약어 목록:
기호 단위 정의
ADA 항약물 항체(anti-drug antibody)
AUC무한대 (ug.d/mL) 무한대까지로 외삽된 혈장 약물 농도-시간 곡선하 면적
AUC마지막 (ug.d/mL) 0시점부터 투약 후의 마지막 측정가능 농도까지의 면적
BAP 골 특이 알칼리성 포스파타제
BED mg/kg 생물학적 유효량(biological effective dose)
b.w. - 체중(Body weight)
C 양/부피 ALX-0141 혈장 농도
CL 부피/시간*kg 혈청으로부터 약물의 겉보기 전신 제거율
CLd 부피/시간*kg 구획간 유속
CLRANKL 부피/시간*kg 비선형 RANKL 매개 제거
CL비 RANKL 부피/시간*kg 선형 비RANKL 매개 제거
CTX-1 - I형 콜라겐의 C 말단 가교 결합 텔로펩티드
D 양/kg 용량
F - s.c. 생체이용률
i.v. - 정맥내
F1 - ka1로 흡수되는 용량의 분율
F2 - ka2로 흡수되는 용량의 분율
I최대 % 혈청 CTX-1의 최대 억제율(1<I최대<0)
ka 1/시간 흡수 속도 상수(s.c. 투여)
k인 양/부피*시간 0차 합성률
ka1 1/시간 고속 1차 흡수 속도 상수(s.c. 투여)
ka2 1/시간 저속 1차 흡수 속도 상수(s.c. 투여)
k아웃 1/시간 혈청 CTX-1의 1차 제거 속도 상수
Km 양/부피 V최대의 50%에 상응하는 ALX-0141 농도(CLRANKL)
LK인 - 보다 저용량(0.003 및 0.01 mg/kg)에서 K인에 대해 미치는 전형적인 분율 용량 효과
LLOQ 정량 하한(Lower limit of quantification )
최하점 곡선에서 최저점
n - 농도-반응 형상 계수
NTX-1 1형 콜라겐의 N 말단 텔로펩티드
P1NP 1형 프로콜라겐 아미노 말단 프로펩티드
RANK(L) - 핵 인자 카파 B(리간드)에 대한 수용체 활성화제
R 양/부피 (약력학적) 반응(즉, 혈청 CTX-1 수준)
s.c. - 피하
t½, 말기 시간 ln(2)/λz로 계산된 말기 제거 반감기
TRACP5b 타르트레이트 저항성 산성 포스파타제
Vc 부피/kg 2 구획 모델에서 중심 또는 혈장 구획의 겉보기 부피
Vdss 부피/kg 정상 상태에서의 겉보기 분포 부피
V최대 양/시간 CLRANKL의 최대 대사율
vt 부피/kg 2 구획 모델에서 말초 구획의 겉보기 부피
실시예 1: ALX -0141을 이용한 독성 연구
단일 투약 독성 연구에서, ALX-0141을 0, 0.02, 2, 20, 및 50 mg/kg b.w ALX-0141의 단일 s.c. 용량으로, 및 20 mg/kg의 단일 i.v. 볼루스 용량으로서 수컷 및 암컷 시노몰구스 원숭이에 투여하였다. ALX-0141의 서열은 서열 번호 12(US 2010/0104568에서 서열 번호 759)로 제시된다.
약동학적 성질(PK), 항약물 항체(ADA), 및 약력학적 성질(PD) 분석 목적으로 혈액 시료를 투약 전 및 투약 후 선택된 시점에 모든 동물로부터 수집하였다. PK, PD 및 ADA 목적으로 승인받은 방법을 사용하여 시료를 분석하였는데, 단, 예외적으로, CTX-1을 측정하는 경우에는 시노몰구스 원숭이 CTX-1과 교차 반응성인 것으로 입증된 인간 시판용 키트를 사용함으로써 수행하였다.
반복 투약 독성 연구에서, ALX-0141을 2주 동안 6회에 걸쳐(테스트일: 1, 3, 5, 8, 10 및 12일째) 0, 0.2, 2, 20, 및 50 mg/kg b.w ALX-0141의 s.c. 용량으로서 수컷 및 암컷 시노몰구스 원숭이에 투여하였다.
최대 연구 15일까지(즉, 제1 용량 투여 후 14일까지) 독성 역학 시료를 채취하였다. 3개의 군(0, 2 및 50 mg/kg)은 회복기를 포함하였으며, 이 기간에 각 성별당 추가로 동물 2마리씩 처리하고, 99일 동안에 걸쳐(즉, 투약 후 최대 98일 동안에 걸쳐) 샘플링을 수행하였다.
PK, ADA, 및 PD 목적으로 혈액 시료를 투약 전 및 투약 후 선택된 시점에 모든 동물로부터 수집하였다. PK, PD 및 ADA 목적으로 승인받은 방법을 사용하여 시료를 분석하였는데, 단, 예외적으로, CTX-1을 측정하는 경우에는 시노몰구스 원숭이 CTX-1과 교차 반응성인 것으로 입증된 인간 시판용 키트를 사용함으로써 수행하였다.
실시예 2: 임상전 데이터
실시예 1에 기술된 바와 같이, 시노몰구스 원숭이에서의 ALX-0141을 이용한 단일 투약 독성 연구에서 생성된 데이터에 대하여 약동학적 성질(PK) 및 약력학적 성질(PD) 모델링을 실시하였다. 2주 동안 실시된 반복 투약 독성 연구로부터 얻은 데이터를 사용하여 단일 투약 데이터가 반복 투약 약동학적 성질을 정확하게 추정할 수 있는지 여부를 입증하였다(즉, ALX-0141 PK의 시간 의존성을 확인하였다).
시노몰구스 원숭이 ALX -0141 혈장 농도의 약동학적 성질 모델링
중심 구획으로부터의 선형 및 비선형 제거 및 1차 흡수(s.c. 적용)를 이용하여 데이터를 개방형 2 구획 약동학적 성질 모델로 피팅함으로써 시노몰구스 원숭이에서의 ALX-0141의 비선형 약동학적 거동을 포착하였다. 구조 모델은 도 1에 제시되어 있다.
선형 제거 기전은 ALX-0141의 비포화, 및 비RANKL 매개 제거와 관련이 있을 가능성이 있으며, 이는 비포화, 및 ALX-0141의 저속의 비특이 단백질 분해성 분해에 상응한다. 비선형 및 RANKL 매개 제거 과정은 거의 확실하게는 ALX-0141이 막 결합 RANKL에 결합한 후, 이어서, 내재화되고 제거되는 것을 나타내는 것인 포화 제거 기전이다.
ALX-0141을 이용하여 단일 s.c. 및 i.v. 투약한 후, 반복 가중치 재산정
Figure 112013113807716-pct00005
(여기서,
Figure 112013113807716-pct00006
는 혈장 농도 추정치이다)을 사용하여 이용가능한 개별 혈장 농도 데이터 모두를 모델(WinNonlin 프로페셔널 소프트웨어 버전 5.1(WinNonlin Professional Software Version 5.1)(파사이트 코퍼레이션(Pharsight Corporation: 미국 캘리포니아주 마운틴 뷰)))로 동시에 피팅하였다.
시노몰구스 원숭이에서의 ALX-0141의 추정치 PK 파라미터를 충분한 정밀도로 추정하였으며, 이는 하기 표 B-1에 열거되어 있다.
중심 구획 및 1차 흡수(s.c. 적용)로부터의 병행 선형 비RANKL 매개 제거(CL비R AN KL) 및 비선형 RANKL 매개 제거(CLRANKL)를 포함하는 개방형 2 구획 약동학적 성질 모델을 사용하여 시노몰구스 원숭이에서의 ALX-0141의 비선형 PK를 적절히 기술하였다.
저농도의 ALX-0141(C<<<Km)에서는 CLRANKL의 기여도가 우세한 반면, RANKL 포화 혈장 농도인 보다 고농도에서 전체 CL은 주로 CL비 RANKL에 의해 지배되었다.
CLRANKL 및 CL비RANKL의 추정치는 RANKL 매개 성분을 통한 제거가 비RANKL 매개 경로와 비교하여 더 효율적으로(약 5.6배) 이루어진다는 것을 나타낸다. 그러나, CLRANKL 경로의 낮은 Km 값(0.149 ㎍/mL; 3.6 nM)으로 제시되는 바와 같이, RANKL 매개 제거는 쉽게 포화되었다.
정상 상태에서 분포 부피의 추정치는 ALX-0141이 조직의 중심 구획 바깥쪽에서 간질 공간 내로 분포한다는 것을 제안한다.
RANKL 매개 경로를 포화시키는 ALX-0141 농도에서, ALX-0141의 반감기 추정치는 8.5일로, 즉, 시노몰구스 원숭이 혈청 알부민에 대해 보고된 것과 유사하였다.
전체 제거에서 ALX-0141의 비선형 RANKL 매개 성분의 중요한 역할은 보다 저용량 수준에서의 노출은 용량에 비례인 것보다 더 크게 증가한다는 것을 설명한다(C최대 및 AUC 값). 이어서, 전체 제거는 주로 선형 비RANKL 매개 경로에 의해 지시되기 때문에, 보다 고용량인 수준에서의 노출은 용량에 비례하는 방식으로 증가하였다.
보고된 용량 약동학적 성질은 단일 용량 데이터에 기초하여 적절히 예측할 수 있는 바, ALX-0141은 시간에 비의존하는 약동학적 성질을 보였다. 원숭이에서, ALX-0141의 (단일 용량) s.c. 절대 생체이용률은 거의 완벽에 가까웠다(96%).
반기계론적 PK / PD 모델링 ( 시노몰구스 원숭이 ALX -0141 혈장 농도 및 혈청 CTX-1 농도)
달성된 ALX-0141 혈장 농도와 CTX-1 수준에 미치는 효과 사이에는 어떤 직접적인 관계도 없었는 바, 이에 ALX-0141 투여가 혈청 CTX-1 수준에 미치는 효과는 사실상 간접적인 것으로 간주하였다. 그러므로, i.v. 및 s.c.로 투여된 ALX-0141이 혈청 CTX-1의 생리적 교체에 미치는 약리학적 효과를 기술하기 위해 간접 반응 모델을 사용하였다.
모델은 앞서 항RANKL 단일클론 항체 데노수맙에 대해 사용된 것과 유사하였고(문헌 [Peterson., Stouch B., Chen D. et al. 2004, A PK/PD Model Developed in cynomolgus Monkeys Predicts Concentrations and Effects of AMG 162, A Fully Human Monoclonal Antibody Against RANKL, in Healthy Postmenopausal Women. AAPS Annual Meeting, Baltimore, MD, November 7-11, 2004; Abstract]), 이는 혈청 CTX-1의 생산 억제로부터 유발되는 약물 반응을 기술한다. 상기의 간접 반응 모델에서, CTX-1 변화율(반응, R)은
Figure 112013113807716-pct00007
로 기술되는데,
여기서, k인은 0차 합성률이고; R은 혈청 CTX-1 수준이고, I최대는 최대 억제율(1<I최대<0)이고; C는 ALX-0141의 농도이고; n은 농도-반응 형상 계수이고; k아웃은 혈청 CTX-1의 1차 제거 속도 상수이다.
간접 반응 PK/PD 모델에 대한 입력 함수로서 약동학적 성질 함수를 사용하여 단일 i.v. 및 s.c. 투약 후 수득된 모든 이용가능한 혈청 CTX-1 데이터를 모델(WinNonlin 프로페셔널 소프트웨어 버전 5.1(WinNonlin Professional Software Version 5.1)(파사이트 코포레이션(Pharsight Corporation: 미국 캘리포니아주 마운티 뷰)))로 동시에 피팅하였다.
반기계론적 PK/PD 모델(간접 반응 모델)을 사용하여 i.v. 및 s.c.로 투여된 ALX-0141이 원숭이에서 혈청 CTX-1의 생리적 교체에 미치는 약력학적 효과를 적절히 포착하였다.
PK/PD 모델링은 ALX-0141이 시노몰구스 원숭이에서 혈청 CTX-1 생산에 대한 강력한 억제제(IC50=약 22 ng/mL 또는 0.54 nM)라는 것을 시사하였다. 추가로, ALX-0141은 혈청 CTX-1 생산을 거의 완전하게 억제시킬 수 있었다(I최대=~73%).
실시예 3: 인간으로의 스케일링: 인간에서의 ALX -0141 PK / PD 모의
인간 연구에서의 1차 용량 선별을 지원하기 위해 시노몰구스 원숭이에서의 ALX-0141 농도 및 상응하는 혈청 CTX-1 수준의 시간적 프로파일을 기술하기 위해 개발된 PK/PD 모델을 인간으로 스케일링하였다. 시노몰구스 원숭이 데이터에 기초한 데노수맙의 인간 PK/PD를 모의하는 데 유사한 접근법이 앞서 성공적으로 사용된 바 있다(문헌 [Peterson M., Stouch B., Chen D. et al. 2004, A PK/PD Model Developed in cynomolgus Monkeys Predicts Concentrations and Effects of AMG 162, A Fully Human Monoclonal Antibody Against RANKL, in Healthy Postmenopausal Women. AAPS Annual Meeting, Baltimore, M D, November 7-11, 2004; Abstract]).
이를 위해, 상대 성장 방정식(문헌 [Boxenbaum H. 1984, Interspecies Pharmacokinetic Scaling and the Evolutionary-Comparative Pardigm. Drug Metab. Rev. 15(5&6): 1071-1121]))을 사용하여 시노몰구스 원숭이에서의 CL비RA NKL 추정치, 분포 부피(Vc 및 Vt), 및 흡수 속도 상수(ka)를 인간으로 스케일링하였다. CLRANKL의 경우, Km 값은 시노몰구스 원숭이와 인간 사이에 유사한 것으로 추정된 반면, 골 교체에 대한 대사 속도가 인간에서 3배 더 느리기 때문에, 인간에서의 V최대 값이 시노몰구스 원숭이에서의 것의 ⅓인 것으로 간주되었다(문헌 [FDA. 1994, Guidelines for preclinical and clinical evaluation of agents used in the prevention or treatment of postmenopausal osteoporosis]).
생체이용률은 스케일링할 수 있는 바, 2개의 적정한 값, 즉, 0.8 및 1.0을 사용하여 예측하였다. ALX-0141 혈장 농도-시간 프로파일 모의에 사용된 PK 파라미터는 하기 표 B-2에 열거되어 있다.
s.c. 투여 후의 인간에서의 ALX-0141 농도의 시간적 프로파일을 모의하기 위해, 스케일링된 약동학적 파라미터를 중심 구획 및 1차 흡수(s.c. 적용)로부터의 병행 선형 비RANKL 매개 제거(CL비 RANKL) 및 비선형 RANKL 매개 제거(CLRANKL)를 포함하는 앞서 기술된 개방형 2 구획 약동학적 모델과 조합하였다.
이어서, 예측된 인간 ALX-0141 농도를 간접 PK/PD 반응 모델(합성 억제)에 대한 입력 함수로서 사용하여 인간에서의 시간적 혈청 CTX-1 프로파일을 예측하였다.
혈청 CTX-1의 기준선 값(R0) 및 1차 제거 속도 상수(k아웃)은 문헌으로부터 얻었다(문헌 [Glover S.J., Garnero P., Naylor K., Rogers A. and Eastell R. 2008, Establishing a reference range for bone turnover markers in young, healthy women. Bone 42: 623-630]; [Holford N, Pillai G, Kaila N, Collins W, Roy S, Cremers S, Trechsel U, Bouisset F, Steimer J-L. June 2006, PKPD model for cathepsin K inhibition with balicatib and changes in bone turnover biomarkers, in particular NTx. PAGE (Population Approach Group Europe), Bruges (B), 14-16]). 최대 효과 값(I최대) 및 ALX-0141 농도는 시노몰구스 원숭이 및 인간 사이에 유사한 것으로 추정된 반면, 최대 효과의 절반에 상응하는 농도(IC50)는 원숭이에 비하여 인간에서 6배 더 낮은 것으로 간주되었다. 후자의 경우, 이는 시노몰구스 원숭이 RANKL과 비교하여 인간 RANKL에 대한 결합에 대해 ALX-0141의 친화성이 2배 더 큰 것과 함께 (원숭이와 비교하여 인간에서 3배 더 느린) 골 교체 대사 속도 차이(문헌 [FDA. 1994, Guidelines for pre임상 and 임상 evaluation of agents used in the prevention or treatment of postmenopausal osteoporosis])에 따른 결과로서 나타나는, 원숭이와의 비교시 인간에서 3배 더 낮은 유효 농도와 관련이 있다.
하기 표 B-3에는 ALX-0141 혈청 CTX-1 농도-시간 프로파일 모의에 사용된 PD 파라미터가 열거되어 있다.
모의된 PD 프로파일은 ALX-0141 단일 s.c. 투여 이후의 용량에 의존하는 방식으로 이루어지는 혈청 CTX-1의 억제를 보이는데, 이는 혈청 CTX-1 합성 억제를 기술하는 간접 반응 모델과 일치하는 것이었다. 상기 모델에 따라, 혈청 CTX-1 억제는 ALX-0141의 용량에 의존할 것이다. 최대 혈청 CTX-1 억제도는 그의 최대 효과(I최대) 값까지 투여량에 따라 증가할 것이며; 용량의 추가 증가가 효과를 추가로 증가시킬 것이라고는 예상되지는 않았지만, 기준선으로 회복되는 데 소요되는 시간이 더 길어질 것으로 기대되었다.
실시예 4: 임상 데이터
4.1 방법
4.1.1 디자인
0.003 mg/kg의 ALX-0141 또는 위약(1 베럼(verum) and 1 위약)을 단일 피하(s.c.) 투약받는 2명의 건강한 폐경 후 여성 피험체로 이루어진 1개의 코호트 및 0.01, 0.03, 0.1, 0.3 및 1 mg/kg의 ALX-0141 또는 위약(각 코호트당 6 베럼 및 2 위약)을 단일 s.c. 투약받는 8명의 건강한 폐경 후 여성 피험체로 이루어진 5개의 코호트에서 이중 맹검, 위약 대조군, 단일 상승 용량 I상 연구를 수행하였다. 시료 타이밍 목적으로 처리 당일을 1일째로 하였다.
투약 전, 투약 후 8, 12, 24, 48, 72, 96, 120 및 144시간째, 14, 30, 60일째 및 추적시(90일째) 1회, 및 해당되는 경우, 매달 실시되는 추가의 추적 방문시에 혈장 시료를 수집하여 약물 및 바이오마커 CTX-1의 수준을 측량하였다.
4.1.2 방법 및 평가
스크리닝 및
각 추적 방문		 임상 검사실(칼슘[Ca] 및 무손상 부갑상선 호르몬(PTH)), 혈장 중 25 하이드록시 비타민 D, 활력 징후, 신체 검사(스크리닝시 및 1차 추적 방문시에만), 체중, 12 유도 심전도(ECG), 면역원성, PK 및 PD을 위한 채혈(면역원성을 위한 채혈 및 추적 방문시(마다) PD를 위한 혈액 및 뇨 채취);
오직 적격 스크리닝시에만 병력, 신장, 약물 및 알콜 스크린, B형 간염 표면 항원(hBsAg: hepatitis B surface angigen), 항C형 간염 바이러스(HCV: hepatitis C virus) 및 항인간 면역결핍 바이러스 1/2(HIV 1/2: human immunodeficiency virus 1/2);
가입시 반복 임상 검사실([Ca] 및 무손상 PTH), 25 하이드록시 비타민 D, 체중,
약물 및 알콜 스크린, 활력 징후, 및 ECG;
관찰 기간 진료소에서 -65 h(-3일째)부터 최대 1일째의 약물 투여 후 144 h째까지의 1기간, 14±2, 30±2, 60±5 및 90±5째 이동 방문(추적) 및 필요할 경우*, 추가의 추적 방문;
채혈


 - 혈장 중 ALX-0141의 PK를 위한 경우: 투약 전 및 1일째 투약 후 8 h 및 12 h째, 2-7일째 아침에 1회 및 14±2일째, 30±2일째, 60±5일째 및 90±5일째(추적) 및 필요할 경우*, 추가의 추적방문시 1회;
- 혈청 중 I형 프로콜라겐의 N 말단 프로펩티드(P1NP), I형 콜라겐의 가교 결합 텔로펩티드(CTX-1), 골 특이 알칼리성 포스파타제(BAP), 및 타르트레이트 저항성 산성 포스파타제 이소형 5b(TRACP5b)를 위한 경우: 스크리닝시, -2일째, -1일째, 1일째 투약 전, 투약 후 8 h 및 12 h째, 및 14±2, 30±2, 60±5 및 90±5일째(추적) 및 필요할 경우*, 추가의 추적 방문시 아침에 1회;
뇨 채취 뇨 중 CTX-1 및 I형 콜라겐의 N 말단 텔로펩티드(NTX-1), 및 크레아티닌(금식 조건하)의 PD를 위한 경우: -2일째, -1일째, 1일째(투약 전), 2, 3, 4, 5, 6, 7, 14±2, 30±2, 60±5 및 90±5일째(추적) 및 필요할 경우*, 추가의 추적 방문시 1회;
안전성 평가 유해 사레(AE: adverse event) 및 국소 내약성; 전 연구 기간 동안에 걸쳐; 활력 징후 및 12 유도 ECG: 투약 전 및 1일째 투약 후 3, 6, 9 h, 2-7일째 아침에 1회 및 14±2, 30±2, 60±5 및 90±5일째(추적) 및 필요할 경우*, 추가의 추적 방문시 1회; 임상 검사실([Ca] 및 무손상 PTH), 25 하이드록시 비타민 D, B 림프구와 T 림프구를 구별짓는 백혈구(WBC: white blood cell)의 면역 표현형 분석; 1, 2, 4, 6, 14±2, 30±2, 60±5 및 90±5일째(추적) 및 필요할 경우*, 추가의 추적 방문시 1회.
* CTX-1 수준이 기준선에 대한 상대적인 비율로 70%로 회복되지 않았다면, 매달 추가의 추적 방문을 수행하였고, CTX-1 수준이 기준선에 대한 상대적인 비율로 70%로 회복될 때까지 반복하였다. 420일째, 피험체 모두의 CTX-1 수준이 기준선에 대한 상대적인 비율로 70% 이상의 수준으로 회복되었고, 어느 피험체에 대해서도 추가의 추적 방문은 필요하지 않았다.
4.1.3 피험체
총 42명의 피험체가 본 연구에 등록하였다. 피험체 모두 건강한 폐경 후 여성 지원자였다. 폐경 후 여성 집단은 약물에 대한 예상 표적 집단이었다.
주요 포함 기준
연령: 최고 80세(80세 포함)
체질량 지수(BMI: Body Mass Index): 18 - 36 kg/㎡(18 및 36 kg/㎡ 포함)
성별: 여성
피험체: 건강한 폐경 후 여성 지원자
연구 약물
1. 활성 물질: ALX-0141(인간 혈청 알부민(HSA: human serum albumin)을 표적화하는 나노바디와 연결된 RANKL을 표적화하는 2개의 나노바디 빌딩 블록을 가지는, 41 kD의 삼량체 구성체).
활성: 항RANKL(항-NF카파B 리간드의 수용체 활성화제)
적응증: 골 손실
농도: 0.65 mg/mL(코호트 1), 2.17 mg/mL(코호트 2), 6.5 mg/mL(코호트 3), 21.7 mg/mL(코호트 4) 및 65 mg/mL(코호트 5) 및 6)
투여 형태: s.c. 주사
2. 위약: 시각적으로 매칭되는 약물
평가 기준
PK: 혈장 ALX-0141 농도, PK 파라미터
PD: 혈청 중 P1NP, CTX-1, BAP 및 TRACP5b 농도 및 뇨 중 크레아티닌, CTX-1 및 NTX-1 농도
안전성: AE, 국소 내약성, 활력 징후, 12 유도 ECG, 임상 검사실, 신체 검사, 면역원성, 혈청 중 25 하이드록시 비타민 D, WBC의 면역 표현형 분석.
4.1.4 분석
혈청 중 CTX-1, TRACP5b, P1NP 및 BAP 농도, 및 뇨 중 NTX-1/크레아티닌 농도 비를 측정함으로써 ALX-0141의 PD 효과를 분석하였다. CTX-1, TRACP5b 및 NTX-1은 골 재흡수에 관여하는 반면, P1NP 및 BAP는 골 형성에 관여하는 것이다.
사용된 바이오마커 검정법은 하기와 같았다:
CTX-1 혈청 크로스랩스® ELISA(카탈로그 번호 AC-02F1; 이뮤노다이어그나스틱 시스템즈 인코퍼레이티드(영국 타인&위어 볼던))
NTX-1 오스테오마크(OSTEOMARK) NTx 뇨 ELISA(카탈로그 번호 9006; 인버네스 메디컬(왐폴 라보라토리즈)(Inverness Medical(Wampole Laboratories): 미국 뉴저지주 프린스턴))
TRACP5b: 보네트랩(BONETRAP)® 검정 ELISA(카탈로그 번호 SB-TR201A; 이뮤노다이어그나스틱 시스템즈 인코퍼레이티드: 영국 타인&위어 볼던)
P1NP: 유니크(UNIQ)™ P1NP RIA(카탈로그 번호 Q67034; 오리온 다이어그나스티카 Oy(핀란드 에스포))
BAP: 오스타제® BAP 면역효소 검정법(카탈로그 번호 AC-20F1; 이뮤노다이어그나스틱 시스템즈 인코퍼레이티드: 영국 타인&위어 볼던)
크레아티닌: 크레아티닌 검사(카탈로그 번호 03039070; 지멘스 메디컬 솔루션즈 다이어그나스틱스(네덜란드 브레다)).
4.1.5 통계
NONMEM을 사용하여 비선형 혼합형 효과 모델에 의해 ALX-0141의 혈장 농도 및 혈청 CTX-1 수준을 모델링하였다. 개인간 변동성(IIV: interindividual variability)은 각 구조 파라미터 상에서 설정하고, 각 파라미터에 대한 분산의 제곱급 x 100으로 계산하였다. 잔차 변동성에 대해서는 지수 오차 모델(로그 눈금으로 가법형)을 추정하였다. NONMEM 내에서 사용된 추정 방법은 FOCEI였다.
이러한 집단에 대한 분석을 위해 31명의 인간 폐경 후 여성 지원자로부터 얻은 데이터를 사용하였다.
4.2 약동학적 성질
4.2.1 혈장 중 농도 데이터
입증된 ELISA 방법에 의해 ALX-0141의 약물 농도 측정을 수행하였다. 처리에 의한 기하 평균 ALX-0141 혈장 농도-시간 프로파일(선형 및 반로그 눈금)은 도 3에 제시되어 있다.
0.003 mg/kg ALX-0141(n=1) s.c. 투여 후, 투약 후 48 h 경과시부터 ALX-0141의 측정가능한 혈장 수준을 관찰하였다. 평균적으로, 0.01 mg/kg의 용량 수준에서는 24 h 이내에 혈장 중에서 ALX-0141이 측정가능하였다. 0.03 mg/kg 내지 최대 1 mg/kg ALX-0141의 용량 수준에서는 8 h 이내에 혈장 중에서 ALX-0141이 측정가능하였다. 기하 평균 ALX-0141 혈장 농도는 점진적으로 증가하는 것으로 관찰되었고, 최대 평균 혈장 농도는 0.003 mg/kg 내지 0.03 mg/kg 범위의 용량 수준에서는 투약 후 3 내지 6일 경과시에, 및 보다 고용량 수준(0.1 mg/kg 내지 1 mg/kg)에서는 1.5 내지 2일 경과시에 도달한 것으로 나타났다. ALX-0141의 평균 혈장 농도는 용량이 증가함에 따라 증가하였다. 피크 혈장 농도에 도달한 후, 평균 혈장 농도는 매우 점진적으로 감소하였다. 평균적으로, 최고 용량 수준에서 평균 ALX-0141 혈장 농도는 최대 60일째(0.1 mg/kg 및 0.3 mg/kg) 또는 90일째(1 mg/kg)까지는 여전히 LLOQ (0.0102 ㎍/ℓ)보다 높은 수준이었다. 최저 용량 수준에서 ALX-0141 혈장 농도는 최대 7일째(0.003 mg/kg 1, n=1), 14일째(0.01 mg/kg) 또는 30일째(0.03 mg/kg)까지 측정가능하였다.
4.2.1 혈장 중 약동학적 파라미터
ALX-0141 혈장 PK 파라미터에 대한 요약은 하기 표 B-4에 제시되어 있다.
t최대 중앙값은 투약 후 1.5 내지 6일 범위였고, 0.003 mg/kg 내지 0.03 mg/kg 범위의 보다 저용량 수준(3 내지 6일)과 비교하였을 때, 0.1 mg/kg 내지 1 mg/kg 범위의 보다 고용량 수준(1.5 내지 2일)에서는 보다 짧은 경향을 보였다. 기하 평균 반감기는 오직 보다 고용량 투약군(0.1 mg/kg, 0.3 mg/kg 및 1 mg/kg ALX-0141)의 경우에만 신뢰할 수 있게 계산할 수 있었고, 12.0 내지 20.6일 사이였다. ALX-0141의 단일 s.c. 용량 투여 후, C최대, AUC0 -마지막 및 AUC0 -무한대 값은 용량이 증가함에 따라 증가하였다. 0.1 mg/kg up 내지 1 mg/kg의 용량 범위에 걸쳐, C최대 및 AUC 값은 용량에 비례하는 방식으로 증가한 반면, 0.01 mg/kg 내지 최대 0.1 mg/kg의 보다 저용량에서 C최대, AUC0 -마지막은 용량에 비례인 것보다 다소 더 크게 증가하는 것으로 보였다.
4.2.3 약동학적 성질 분석
건강한 폐경 후 여성에서, ALX-0141의 약동학적 성질은 적절하게 피하 구획으로부터 2개의 1차 흡수율을 가지는 개방형 단일 구획 모델, 및 중심 구획으로부터 선형(비표적 관련) 및 비선형(표적 관련) 제거를 특징으로 하였다. 구조 모델은 도 2에 도시되어 있고, PK 파라미터 추정치는 하기 표 B-5에 열거되어 있다.
표적 매개 경로는 비RANKL 매개보다 약 4배 정도 더 효율적이었지만, 쉽게 포화되는 것으로 나타났다.
체중은 분포 부피에 대하여 결정 공변량이었다.
전반적으로, 최종 PK 모델의 모든 구조 파라미터는 우수한 정밀도(25.2% 이하)로 추정되었다. 개인간 변동성(IIV)은 V(22.2%) 및 F1(36.5%)의 경우 낮은 수준에서 중간 정도 수준이었다. ka1 및 ka2(각각 170 및 144%), CL(53%) 및 Km(135%)의 경우, 개인간 변동성은 더욱 큰 것으로 나타났다. 잔차 오차에 대한 표준 편차는 우수한 정밀도(13.7%)로 0.11인 것으로 추정되었다.
4.3 약력학적 성질
골 재흡수 및/또는 골 형성에 관여하는 CTX-1, TRACP5b, P1NP 및 BAP, 및 뇨 NTX-1/크레아티닌 비의 혈청 농도를 측정함으로써 ALX-0141의 PD 효과에 대해 연구하였다. 기준선에 대한 상대적인 비율(%)로서 표시된, CTX-1, TRACP5b, P1NP 및 BAP의 평균 혈청 농도는 도 4 및 6(CTX-1), 도 8(TRACP5b), 도 9(P1NP) 및 도 10(BAP)에 제시되어 있다. 평균 뇨 NTX-1/크레아티닌 농도 비는 도 5 및 7에 제시되어 있다. PD 파라미터에 관한 요약은 표 B-6에 제시되어 있다.
4.3.1 CTX -1
CTX-1은 파골세포 활성의 결과로서 방출된, 골 분해 생성물이며, 이는 골 재흡수에 대한 바이오마커로서 간주된다. 건강한 폐경 후 여성 지원자에서 ALX-0141 또는 위약을 s.c. 투약한 후의, CTX-1의 평균 혈청 농도(기준선에 대한 상대적인 비율(%)로 표시)가 도 4 및 6에 제시되어 있다. 기준선으로부터 CTX-1 변화는 하기 표 B-7에 제시되어 있다.
ALX-0141 s.c. 투약 후, 테스트된 6개의 용량 수준 모두의 경우에서 투약 후 8 h(제1 샘플링 시점) 이내에 CTX-1의 급격한 감소가 관찰되었다. ALX-0141을 이용하여 치료한 후(적극 치료), CTX-1 혈청 농도에 대한 평균 최하점 값은 연구된 용량 수준 간에 기준선에 대해 상대적인 비율로 8.8%(0.3 mg/kg, N=6) 내지 50.7%(0.003 mg/kg, n=1)로 다양하였고, 용량이 증가함에 따라 감소하였다(도 6). 그러나, 거의 최대치인 효과는 용량 수준이 0.1 mg/kg 이상일 때 도달되는 것으로 보였다. 본 연구에서, 0.003 mg/kg의 용량 수준은 BED로서 간주될 수 있었다. 3개의 최저 용량 수준에서, CTX-1 혈청 농도는 최하점에 도달한 후, 90일 이전에 증가하기 시작한 반면, 3개의 최고 용량 수준에서 평균 CTX-1 혈청 농도는 최대 90일까지 최하점에 가까운 저수준으로 유지되었고(0.1 mg/kg, 0.3 mg/kg, 1 mg/kg), 이후 점진적으로 증가하기 시작하였다. 코호트 1(0.003 mg/kg)의 ALX-0141로 처리된 피험체는 60일째, 기준선에 가까운, 즉, 기준선과의 차 - 30% 이내의 CTX-1 혈청 농도를 보였다. 다른 ALX-0141 투약군의 경우, 평균 CTX-1 값은 처음 계획대로 90일간의 추적 기간 이내에 기준선에 대한 상대적인 비율로 70%의 컷 오프에 도달하지 못하였다. ALX-0141로 처리된 거의 모든 피험체에서 90일 초과의 기간 동안 낮은 CTX-1 수준이 유지되었고, 이것이 0.01 mg/kg 이상으로 처리된 몇몇 피험체에서는 대략 1여 년 동안 지속되었다는 것은 단일 s.c. ALX-0141 주사에 대한 장기 지속되는 PD 효과를 나타내는 것이었다.
4.3.2 NTX -1
NTX-1은 세포외 기질의 유기 주요 성분인 I형 콜라겐의 분해 산물이다. 그러므로, NTX-1은 파골세포 활성의 결과로서 일어나는 골 재흡수에 대한 바이오마커로서 간주된다. 뇨 중 NTX-1 농도는 뇨 부피에 따라 다르기 때문에, 이러한 변량을 보정하기 위해 뇨 NTX-1 농도 대신 뇨 중 NTX-1 : 크레아티닌의 비를 측정하였다. 건강한 폐경 후 여성 지원자에서 ALX-0141 또는 위약을 s.c. 투약한 후의, 평균 뇨 NTX-1/크레아티닌 농도 비(기준선에 대한 상대적인 비율(%)로 표시)가 도 5 및 7에 제시되어 있다. 기준선으로부터 NTX-1/크레아틴 비 변화는 하기 표 B-8에 제시되어 있다.
ALX-0141 s.c. NTX-1/크레아티닌 농도 비의 급격한 감소가 관찰되었는데, 4일째(0.003 mg/kg, n=1), 6일째(0.3 mg/kg, n=6), 14일째(0.01 mg/kg [n=6] 및 0.03 mg/kg [n=6]) 및 60일째(0.1 mg/kg [n=6] 및 1 mg/kg [n=6])에 최하점인 것이 관찰되었다. 뇨 NTX-1/크레아티닌 비에 대한 평균 최하점 값은 연구된 용량 수준 간에 기준선에 대해 상대적인 비율로 64.8%(0.003 mg/kg, n=1) 내지 16.1%(1 mg/kg, n=6)로 다양하였고, 용량이 증가함에 따라 감소하였다. 0.01 mg/kg 및 0.03 mg/kg 처리 후, 평균 NTX-1/크레아티닌 농도 비는 최대 30일까지 낮게 유지되었고, 이후 증가하기 시작하였으며, 120일째에 기준선에 대한 상대적인 비율로 대략 70%였다. 0.1 mg/kg, 0.3 mg/kg 또는 1 mg/kg 처리 후, 뇨 중 NTX-1/크레아티닌 비는 최대 60일째(0.1 mg/kg) 또는 90일째(0.3 mg/kg 및 1 mg/kg)까지 낮게 유지되었다. 이후, NTX-1/크레아티닌 수준은 다시 증가하기 시작하였지만, 120일째에도 여전히 기준선보다 훨씬 더 아래인 수준으로 유지되었다. 22명의 피험체는 그의 개별 마지막 추적 시점에도 여전히 기준선에 대한 상대적인 비율로 80% 아래인 그의 NTX-1/크레아티닌 비를 가졌다. 위약 처리군에서, NTX-1/크레아티닌 비 수준은 전체 연구 기간 동안에 걸쳐 기준선(80-120%)에 가까운 수준으로 유지되었다.
4.3.3 TRACP5b
TRACP5b는 파골세포로부터 유래된 효소이며, 이는 파골세포 개수에 대한 척도이며, 따라서, 골 재흡수에 대한 바이오마커로서 간주된다. 건강한 폐경 후 여성 지원자에서 ALX-0141 또는 위약을 s.c. 투약한 후의, TRACP5b의 산술 평균 혈청 농도(기준선에 대한 상대적인 비율(%)로 표시)가 도 8에 제시되어 있다. TRACP5b 혈청 농도는 CTX-1 혈청 수준과 유사한 프로파일을 보였다.
ALX-0141 s.c. 투약시, TRACPBb 혈청 농도는 투약 후 2 내지 4일 이내에 감소하기 시작하였다. 거의 최대치인 효과는 대략 14일 후에 도달하였고, 최하점은 30일째(0.003 mg/kg, 0.01 mg/kg, 0.03 mg/kg, 0.1 mg/kg 및 1 mg/kg) 또는 60일째(0.3 mg/kg) 도달하였다. TRACP5b 혈청 농도에 대한 평균 최하점 값은 연구된 용량 수준 간에 기준선에 대해 상대적인 비율로 70.1%(0.003 mg/kg, n=1) 내지 39.1%(0.3 mg/kg, n=6)로 다양하였고, 용량이 증가함에 따라 감소하였다. 60일까지(0.003 mg/kg, 0.01 mg/kg, 0.03 mg/kg 및 0.1 mg/kg) 및 90일까지(0.3 mg/kg 및 1 mg/kg), TRACP5b 혈청 농도에는 거의 변함이 없었고, 이미 14일째에 도달된 수준과 가까운 수준이었다. 이후, TRACP5b 수준은 점진적으로 증가하였고, 피험체 모두에 대한 마지막 추적 시점에 기준선에 대한 상대적인 비율로 80% 이상이 수준으로 회복되었다(80%를 사용한 이유는 위약으로 처리된 피험체 내에서 최저값은 80% 아래의 값에 거의 도달하지 못하였기 때문이다; 이는 ≤20% 감소는 시간 경과에 따른 정규 변동 범위 이내의 값이라는 것을 나타낸다). 0.3 mg/kg 및 1 mg/kg ALX-0141로 처리하였을 때, TRACP5b 혈청 농도가 가장 크게 감소하였다. 위약으로 처리된 피험체에서는 TRACP5b 수준 감소가 관찰되지 않았다. 개별 TRACP5b 및 CTX-1 농도 비교에 기초하였을 때, TRACP5b 혈청 농도가 CTX-1 혈청 농도와 비교하여 유사한 프로파일을 보이지만, TRACP5b 농도가 직접적으로 CTX-1 혈청 농도에 영향을 준다는 증거는 없었다.
4.3.4 P1NP
P1NP는 콜라겐이 골로 혼입되기 전에 새로 합성된 프리프로콜라겐으로부터 세포외 프로세싱시에 유리되고, 이는 골 형성에 대한 바이오마커로서 간주된다. 건강한 폐경 후 여성 지원자에서 ALX-0141 또는 위약을 s.c. 투약한 후의, P1NP의 산술 평균 혈청 농도(기준선에 대한 상대적인 비율(%)로 표시)가 도 9에 제시되어 있다.
ALX-0141 s.c. 투약 후, 연구된 용량 범위간에 있어서 P1NP 혈청 수준은 14일 내지 30일째 사이에 감소하기 시작하여, 이어서 최대 60일까지 계속하여 감소하였다. 60일째 내지 150일째 사이에 최하점 값에 도달하였다. 일반적으로, 처리 용량이 고용량일수록, P1NP 혈장 농도는 더 강하게 감소되고, P1NP 혈장 농도는 더 장기간 동안에 걸쳐 감소되었다. 그러나, 거의 최대치인 효과는 ALX-0141 용량 수준이 0.1 mg/kg일 때 도달되는 것으로 보였다. P1NP에 대한 평균 최하점 값은 연구된 용량 수준 간에 기준선에 대해 상대적인 비율로 60.4%(0.01 mg/kg, n=6) 내지 21.2%(1 mg/kg, n=5 기준)로 다양하였고, 용량이 증가함에 따라 증가하였다. 대부분의 피험체에서 그의 P1NP 혈청 농도는 그의 마지막 추적 방문시 기준선에 대한 상대적인 비율로 80% 수준으로 회복되지 못했다(80%를 사용한 이유는 위약으로 처리된 피험체 내에서 최저값은 80% 아래의 값에 거의 도달하지 못하였기 때문이다; 이는 ≤20% 감소는 시간 경과에 따른 정규 변동 범위 이내의 값이라는 것을 나타낸다). 상기 데이터는 P1NP에 미치는 효과는 CTX-1 및 TRACP5b에 미치는 효과에 비하여 강력하게 지연되었다는 것을 제안한다. 위약으로 처리된 피험체에서는 P1NP에 대해 미치는 어떤 효과도 관찰되지 않았다.
4.3.5 BAP
BAP는 활성인 골 형성에 대한 바이오마커로서의 역할을 하는 효소이다. 건강한 폐경 후 여성 지원자에서 ALX-0141 또는 위약을 s.c. 투약한 후의, BAP의 산술 평균 혈청 농도(기준선에 대한 상대적인 비율(%)로 표시)가 도 10에 제시되어 있다.
0.003 mg/kg ALX-0141(n=1) 처리 후에는 기준선으로부터 어떤 뚜렷한 변화도 없었고, 위약으로 처리된 피험체에서는 BAP 혈청 농도가 증가하는 경향이 있었다. 0.01 mg/kg 내지 1 mg/kg ALX-0141 처리 후, BAP 혈청 농도는 30일째부터 계속해서 감소하는 경향이 있었다. 이러한 BAP 혈청 수준 감소는 P1NP 혈청 수준보다는 덜 뚜렷하게 나타났다. 최하점은 0.01 mg/kg 및 0.03 mg/kg 처리 후 60일째에, 및 0.1 mg/kg, 0.3 mg/kg 및 1 mg/kg 처리 후 90일째에 도달하였다. BAP에 대한 평균 최하점 값은 연구된 용량 수준 간에 기준선에 대해 상대적인 비율로 85.3%(0.003 mg/kg, n=1) 내지 58.3%(1 mg/kg, n=6)로 다양하였고, 용량이 증가함에 따라 증가하였다. 0.01 mg/kg 및 0.03 mg/kg ALX-0141 처리 후, BAP 혈청 농도는 60일째부터 계속해서 감소하는 경향이 있었고, 90일째 기준선 수준에 가까운 수준이었다. 0.1 mg/kg, 0.3 mg/kg 및 1 mg/kg 처리 후, BAP 혈청 농도는 낮게 유지되거나(0.1 mg/kg 및 0.3 mg/kg), 또는 20일째에도 여전히 감소하였다(1 mg/kg). 피험체들 간에 마지막 추적 방문시의 BAP 혈청 농도는 다양하였는데, 대분의 피험체에서 BAP 수준은 기준선에 대한 상대적인 비율로 80% 이상으로 회복되었다. 상기 데이터는 P1NP와 유사하게, BAP에 대해 미치는 효과는 CTX-1 및 TRACP5b에 미치는 효과에 비하여 강력하게 지연된다는 것을 제안한다.
4.3.6 결론
0.003 mg/kg 내지 1 mg/kg 범위의 용량 수준으로 ALX-0141을 단일 s.c. 투여한 결과, CTX-1 및 TRACP5b 혈청 농도 뿐만 아니라, 뇨 NTX- 1/크레아티닌 농도 비도 급격하게 감소하였는데, 이는 골 재흡수 감소를 제안하는 것이다. 억제 효과는 용량에 의존하는 경향이 있었고, 장기간 지속되었다.
(거의) 최대치인 억제 효과는 CTX-1의 경우, 0.1 mg/kg ALX-0141일 때, 및 TRACP5b 혈청 농도 및 NTX-1/크레아티닌 농도 비의 경우, 0.3 mg/kg ALX-0141일 때, 도달되는 것으로 보였다.
0.003 mg/kg 내지 1 mg/kg ALX-014의 용량 수준으로 ALX-0141을 단일 s.c. 투여한 결과, P1NP 혈청 농도는 점진적으로 감소하였는데, 이는 골 혈성이 감소하는 경향이 있음을 보여주는 것이다. 억제 효과는 용량에 의존하는 경향이 있었으며, 대략 90일째 내지 150일째에 최하점에 도달하였다. 최대 억제 효과는 P1NP 혈청 농도의 경우, 0.1 mg/kg일 때, 도달되는 것으로 보였다.
P1NP 프로파일과 유사하지만, 그보다는 적게, 용량에 의존하는 방식으로 점진적으로 감소하는 BAP 혈청 농도의 경향은 테스트된 최고 용량 수준(0.1 mg/kg, 0.3 mg/kg 및 1 mg/kg ALX-0141)에서 이루어지는 것으로 보였다.
전반적으로, 최저 투여 용량(0.003 mg/kg)은 생물학상 효과적인 것으로 보인 반면, 0.1 mg/kg의 생물학적 효과는 0.3 mg/kg 및 1 mg/kg의 것과 유사한 것으로 보였다. 그러므로, 0.003 mg/kg의 용량 수준을 BED로서 간주할 수 있다. 재흡수 억제제의 예상되는 효과와 같이, ALX-0141은 골 재흡수 마커에 대하여 강력한 억제 효과를 보이며, 골 형성에 대한 마커 감소에 대하여 중간 정도의 효과를 나타낸다.
4.3.7 약력학적 성질 분석
혈청 CTX-1 생산 억제에 대한 간접적인 PK/PD 모델이 관찰된 혈청 CTX-1 시간 프로파일을 적절하게 포착하였다.
상기의 간접 반응 모델에서, CTX-1 변화율(반응, R)은
Figure 112013113807716-pct00008
로 기술되는데,
여기서, k인은 0차 합성률이고; R은 혈청 CTX-1 수준이고, I최대는 최대 억제율(1<I최대<0)이고; C는 ALX-0141의 농도이고; n은 농도-반응 형상 계수이고; k아웃은 혈청 CTX-1의 1차 제거 속도 상수이다.
전반적으로, 최종 PK/PD 모델의 구조 파라미터 모두 <88%의 정밀도로 추정되었다(하기 표 B-9 참조). 개인간 변동성(IIV)은 I최대(6.4%), 기준선(22.1%) k인(46.4%)의 경우 낮은 수준에서 중간 정도 수준이었다. 잔차 변동성은 우수한 정밀도(12.1%)로 32.1%인 것으로 추정되었다.
ALX-0141은 0.674 ng/ml 또는 16.4 pM인 그의 IC50 값이 낮은 것으로 입증되는 바와 같이, 혈청 CTX-1 생산에 대하여 강력한 억제제인 것으로 확인되었다.
용량 수준은 반응의 0차 생산율에 대한 결정 공변량인 것으로서 확인되었다(혈청 CTX-1).
모델의 예측 성능은 비쥬얼 프리딕티브 체크스(Visual Predictive Checks)에 의해 확인하였다.
4.4 논의
ALX-0141의 임상적 약동학적 성질을 원숭이로부터 얻은 임상전 데이터에 기초하여 매우 잘 예측할 수 있었고, 이를 상대 성장 방식으로(allometrically) 스케일링하고, 골 재형성 차이에 관하여 타당한 추정과 조합하였다(도 11 참조).
예상 밖으로, 폐경 후 여성에서 관찰된 혈청 CTX-1 시간 프로파일은 임상전 정보에 기초하여 예측된 것보다도 인간에서 상당 수준 더 지속되는 것으로 판명되었다(도 12 참조).
혈청 CTX-1 시간 프로파일에 관한 관찰 결과와 모델 기반 모의가 서로 불일치한 것은 임상전 데이터에 기초한 기대치(3.7 ng/ml 또는 89 pM)(하기 표 B-3 참조)와 비교하여 생체내 ALX-0141의 효능(IC50=0.674 ng/ml 또는 16.4 pM)(하기 표 B-9 참조)이 추정컨대, 5.4배 더 큰 것으로 나타났기 때문이다.
4.5 결론
건강한 폐경 후 여성에서 최대 1 mg/kg까지의 ALX-0141의 단일 s.c. 투여는 안정하였고, 우수한 내성을 보였다. 사망 또는 치료와 관련된 중증 유해 사례(SAE: serious adverse event)도 일어나지 않았고, 최대 허용 용량(MTD: maximum tolerated dose)에 도달하지 않았다.
용량 의존 방식의 노출 증가(C최대 및 AUC)가 관찰되었다. 포화가능한 표적 의존성 CL 성분에 기인하여 PK 모델을 비선형이었다. 0.1-1 mg/kg 코호트의 경우, 12.0 내지 20.6일의 혈청 반감기가 관찰되었다.
ALX-0141은 골 재흡수에 대한 혈청 CTX-1 및 뇨 IMTX- 1/크레아티닌 바이오카머를 통계학상 유의적으로 억제시키는 것으로 나타났다. 이러한 효과는 임산전 정보에 기초하여 예측된 것과 비교하여 예상 밖으로 장기간 동안 지속되었다.
ALX-0141의 단일 s.c. 주사 이후, 바이오마커 억제 지속 기간은 용량에 따라 증가하였고, 1 mg/kg 투약 후, 최대 지속 기간은 360일인 것에 도달하였다.
사용된 용어 및 표현은 제한이 아닌, 설명을 위해 사용된 것이며, 상기 용어 및 표현을 사용함에 있어, 제시되고 기술된 특징 또는 그의 일부에 대한 임의의 등가물을 배제시키고자 하는 의도는 없으며, 가능하게는 다양한 변형도 본 발명의 범주 내에 포함된다는 것을 이해할 것이다.
본원에 개시된 모든 참고 문헌은 특히, 본원에 기술된 본 방법에서 유용한 구체적인 폴리펩티드 및 폴리펩티드의 특성을 비롯한, 본원 상기에서 언급된 교시를 위해 참고로 포함된다.
표
<표 B-1>
Figure 112013113807716-pct00009
<표 B-2>
Figure 112013113807716-pct00010
<표 B-3>
Figure 112013113807716-pct00011
<표 B-4>
Figure 112013113807716-pct00012
<표 B-5>
Figure 112013113807716-pct00013
<표 B-6>
Figure 112013113807716-pct00014
<표 B-7>
Figure 112013113807716-pct00015
<표 B-8>
Figure 112013113807716-pct00016
<표 B-9>
Figure 112013113807716-pct00017
본 발명의 측면
측면 A-1: 피험체에게 핵 인자 카파 B 리간드의 수용체 활성화제(RANKL)에 특이적으로 결합하는 폴리펩티드를 투여하는 단계를 포함하고, 여기서, 투여되는 폴리펩티드의 양은 투여 후 30일 이상 동안 골 대사 및/또는 골 항상성의 하나 이상의 마커를 변화시키는 데 효과적인 것인, 피험체에서 골 재흡수 또는 파골세포 활성을 억제시키는 방법.
측면 A-2: 측면 A-1에 따라, 폴리펩티드가 약 0.01 mg/kg 내지 약 10 mg/kg인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 A-3: 측면 A-1 및 A-2 중 어느 한 측면에 따라, 골 대사의 마커가 I형 콜라겐의 가교 결합 텔로펩티드(CTX-1), I형 콜라겐의 N 말단 텔로펩티드(NTX-1), 타르트레이트 저항성 산성 포스파타제 이소형 5b(TRACP5b), I형 프로콜라겐의 N 말단 프로펩티드(P1NP) 및 골 특이 알칼리성 포스파타제(BAP)로부터 선택되는 것인 방법.
측면 A-4: 측면 A-3에 따라, CTX-1, NTX-1, TRACP5b, P1NP 및 BAP 중 하나 이상의 것을 각각 CTX-1, NTX-1, 또는 TRACP5b에 특이적인 ELISA 검정법; P1NP에 특이적인 방사면역검정법; 또는 BAP에 특이적인 면역효소 검정법을 사용하여 측정하는 것인 방법.
측면 A-5: 측면 A-1 내지 A-4 중 어느 한 측면에 따라, 폴리펩티드가 RANKL에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 면역글로불린 단일 가변 도메인을 포함하는 것인 방법.
측면 A-6: 측면 A-1 내지 A-5 중 어느 한 측면에 따라, 폴리펩티드의 재조합 가용성 RANKL(sRANKL)에의 결합에 대한 겉보기 KD가 비아코어에 의해 측정된 바, 0.01-0.05 nM, 바람직하게, 약 0.04 nM인 것인 방법.
측면 A-7: 측면 A-1 내지 A-6 중 어느 한 측면에 따라, 면역글로불린 단일 가변 도메인(들)이 하나 이상의 VHH 도메인, 하나 이상의 인간화된 VHH 도메인 및/또는 하나 이상의 카멜화된 VH 도메인을 포함하거나, 또는 그로 구성된 것인 방법.
측면 A-8: 측면 A-1 내지 A-7 중 어느 한 측면에 따라, 폴리펩티드가 RANKL에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 도메인 항체, 도메인 항체로서 사용하기에 적합한, RANKL에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 아미노산 서열, RANKL에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 단일 도메인 항체, 단일 도메인 항체로서 사용하기에 적합한, RANKL에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 아미노산 서열, 또는 RANKL에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 "dAb"를 포함하는 것인 방법.
측면 A-9: 측면 A-1 내지 A-8 중 어느 한 측면에 따라, 폴리펩티드가 RANKL에 특이적으로 결합하는 2개 이상의 면역글로불린 단일 가변 도메인을 포함하는 다가 구성체인 것인 방법.
측면 A-10: 측면 A-9에 따라, 다가 구성체가 RANKL에 특이적으로 결합하는 2개의 면역글로불린 단일 가변 도메인을 포함하는 것인 방법.
측면 A-11: 측면 A-5 내지 A-10 중 어느 한 측면에 따라, 면역글로불린 단일 가변 도메인이 실질적으로 4개의 골격 영역(각각 FR1 내지 FR4) 및 3개의 상보성 결정 영역(각각 CDR1 내지 CDR3)으로 구성되고, 여기서, CDR1은 서열 번호 1로부터 선택되고, CDR2는 서열 번호 2로부터 선택되고, CDR3은 서열 번호 3으로부터 선택되는 것인 방법.
측면 A-12: 측면 A-5 내지 A-11 중 어느 한 측면에 따라, 다가 구성체가 서열 번호 10 또는 서열 번호 12를 포함하거나, 그로 구성되는 것인 방법.
측면 A-13: 측면 A-5 내지 A-12 중 어느 한 측면에 따라, 다가 구성체가 1 이상의 반감기 연장 모이어티를 추가로 포함하는 것인 방법.
측면 A-14: 측면 A-13에 따라, 1 이상의 반감기 연장 모이어티가 혈청 단백질에 특이적으로 결합하는 것인 방법.
측면 A-15: 측면 A-14에 따라, 혈청 단백질이 혈청 알부민, 및 특히 인간 혈청 알부민, 티록신 결합 단백질, (인간) 트랜스페린, 피브리노겐, 면역글로불린 예컨대, IgG, IgE 또는 IgM, 또는 WO 04/003019에 열거된 혈청 단백질 중 하나인 것인 방법.
측면 A-16: 측면 A-13 내지 A-15 중 어느 한 측면에 따라, 1 이상의 반감기 연장 모이어티가 면역글로불린 단일 가변 도메인을 포함하거나, 그로 구성된 것인 방법.
측면 A-17: 측면 A-16에 따라, 면역글로불린 단일 가변 도메인이 VHH 도메인, 인간화된 VHH 도메인 또는 카멜화된 VH 도메인을 포함하거나, 그로 구성된 것인 방법.
측면 A-18: 측면 A-16 또는 A-17 중 어느 한 측면에 따라, 면역글로불린 단일 가변 도메인이 서열 번호 14를 포함하거나, 그로 구성된 것인 방법
측면 A-19: 측면 A-13 내지 A-16 중 어느 한 측면에 따라, 1 이상의 반감기 연장 모이어티가 도메인 항체, 도메인 항체로서 사용하기에 적합한 아미노산 서열, 단일 도메인 항체, 단일 도메인 항체로서 사용하기에 적합한 아미노산 서열, 또는 "dAb"를 포함하는 것인 방법.
측면 A-20: 측면 A-13에 따라, 1 이상의 반감기 연장 모이어티가 하나 이상의 폴리에틸렌 글리콜 분자를 포함하는 것인 방법.
측면 A-21: 측면 A-5 내지 A-11 중 어느 한 측면에 따라, 폴리펩티드가 서열 번호 10 또는 서열 번호 12의 RANKL에의 결합을 교차 차단하는 것인 방법.
측면 A-22: 측면 A-5 내지 A-11 중 어느 한 측면에 따라, 폴리펩티드가 서열 번호 10 또는 서열 번호 12에 의해 RANKL에의 결합이 교차 차단되는 것인 방법.
측면 A-23: 측면 A-1 내지 A-22 중 어느 한 측면에 따라, 폴리펩티드가 단일 용량으로 투여되는 것인 방법.
측면 A-24: 측면 A-1 내지 A-23 중 어느 한 측면에 따라, 폴리펩티드가 피하로 투여되는 것인 방법.
측면 A-25: 측면 A-1 내지 A-24 중 어느 한 측면에 따라, 피험체가 골다공증을 앓는 피험체인 것인 방법.
측면 B-1: 측면 A-1 내지 A-25 중 어느 한 측면에 따라, 골 대사 마커가 I형 콜라겐의 가교 결합 텔로펩티드(CTX-1)인 것인 방법.
측면 B-2: 측면 B-1에 따라, 투여되는 폴리펩티드의 양이 투여 후 약 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 또는 270일 이상 동안 CTX-1의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소시키는 데 효과적인 것인 방법.
측면 B-3: 측면 B-2에 따라,폴리펩티드가 약 0.003 mg/kg 내지 약 0.03 mg/kg인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 B-4: 측면 B-3에 따라, CTX-1의 혈청 수준이 투여 후 약 30일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 B-5: 측면 B-2에 따라, 폴리펩티드가 약 0.01 mg/kg 내지 약 0.1 mg/kg인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 B-6: 측면 B-5에 따라, CTX-1의 혈청 수준이 투여 후 약 60일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 B-7: 측면 B-6에 따라, CTX-1의 혈청 수준이 투여 후 약 90일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 B-8: 측면 B-7에 따라, CTX-1의 혈청 수준이 투여 후 약 120일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 B-9: 측면 B-2에 따라, 폴리펩티드가 약 0.1 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 B-10: 측면 B-9에 따라, CTX-1의 혈청 수준이 투여 후 약 150일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 B-11: 측면 B-10에 따라, CTX-1의 혈청 수준이 투여 후 약 180일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 B-12: 측면 B-11에 따라, CTX-1의 혈청 수준이 투여 후 약 210일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 B-13: 측면 B-12에 따라, CTX-1의 혈청 수준이 투여 후 약 270일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 B-14: 측면 B-1에 따라, 투여되는 폴리펩티드의 양이 투여 후 약 30, 60, 90, 120, 150, 또는 180일 이상, 및/또는 30일 내지 3개월, 3개월 내지 6개월, 또는 6개월 내지 1년 동안 I형 콜라겐의 가교 결합 텔로펩티드(CTX-1)의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소시키는 데 효과적인 것인 방법.
측면 B-15: 측면 B-14에 따라, 폴리펩티드가 0.03 mg/kg 이하인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 B-16: 측면 B-14에 따라, 폴리펩티드가 약 0.01 mg/kg 내지 약 3 mg/kg인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 B-17: 측면 B-16에 따라, 폴리펩티드가 약 0.01 mg/kg 내지 약 0.1 mg/kg인 양양으로 투여되는 것인 방법.
측면 B-18: 측면 B-15 내지 B-17 중 어느 한 측면에 따라, CTX-1의 혈청 수준이 투여 후 약 30일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 B-19: 측면 B-16 및 B-17 중 어느 한 측면에 따라, CTX-1의 혈청 수준이 투여 후 약 60일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 B-20: 측면 B-14에 따라, 폴리펩티드가 약 0.03 mg/kg 내지 약 0.3 mg/kg인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 B-21: 측면 B-14에 따라, 폴리펩티드가 약 0.01 mg/kg 내지 약 0.3 mg/kg인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 B-22: 측면 B-20 및 B-21 중 어느 한 측면에 따라, CTX-1의 혈청 수준이 투여 후 약 90일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 B-23: 측면 B-20 및 B-21 중 어느 한 측면에 따라, CTX-1이 투여 후 약 30일 내지 3개월 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 B-24: 측면 B-14에 따라, 폴리펩티드가 약 0.1 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 B-25: 측면 B-24에 따라, CTX-1의 혈청 수준이 투여 후 약 120일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 B-26: 측면 B-14에 따라, 폴리펩티드가 약 0.3 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 B-27: 측면 B-14에 따라, 폴리펩티드가 0.3 mg/kg 이하인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 B-28: 측면 B-26 및 B-27 중 어느 한 측면에 따라, CTX-1이 투여 후 약 3개월 내지 6개월 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 B-29: 측면 B-14에 따라, 폴리펩티드가 약 1 mg/kg 내지 약 10 mg/kg인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 B-30: 측면 B-14에 따라, 폴리펩티드가 약 1 mg/kg 내지 약 3 mg/kg인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 B-31: 측면 B-14에 따라, 폴리펩티드가 1 mg/kg 이하인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 B-32: 측면 B-29, B-30 및 B-31 중 어느 한 측면에 따라, CTX-1의 혈청 수준이 투여 후 약 150일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 B-33: 측면 B-32에 따라, CTX-1의 혈청 수준이 투여 후 약 180일(또는 6개월) 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 B-34: 측면 B-29, B-30 및 B-31 중 어느 한 측면에 따라, CTX-1의 혈청 수준이 투여 후 적어도 6개월 내지 1년 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 B-35: 측면 B-1에 따라, 투여되는 폴리펩티드의 양이 투여 후 약 30, 60, 90, 또는 120일 이상 동안 CTX-1의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소시키는 데 효과적인 것인 방법.
측면 B-36: 측면 B-35에 따라, 폴리펩티드가 약 0.03 mg/kg 내지 약 0.3 mg/kg인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 B-37: 측면 B-36에 따라, CTX-1의 혈청 수준이 투여 후 약 30일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 B-38: 측면 B-35에 따라, 폴리펩티드가 약 0.1 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 B-39: 측면 B-38에 따라, CTX-1의 혈청 수준이 투여 후 약 60일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 B-40: 측면 B-39에 따라, CTX-1의 혈청 수준이 투여 후 약 90일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 B-41: 측면 B-40에 따라, CTX-1의 혈청 수준이 투여 후 약 120일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 B-42: 측면 B-1에 따라, 투여되는 폴리펩티드의 양이 투여 후 약 30, 60, 또는 90일 이상 동안 CTX-1의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 80% 이상만큼 감소시키는 데 효과적인 것인 방법.
측면 B-43: 측면 B-42에 따라, 폴리펩티드가 약 0.1 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 B-44: 측면 B-42에 따라, 폴리펩티드가 약 0.3 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 B-45: 측면 B-43 및 B-44 중 어느 한 측면에 따라, CTX-1의 혈청 수준이 투여 후 약 60일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 80% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 B-46: 측면 B-45에 따라, CTX-1의 혈청 수준이 투여 후 약 90일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 80% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 B-47: 측면 B-1 내지 B-46 중 어느 한 측면에 따라, 투여되는 폴리펩티드의 양이 투여 후 8시간까지 I형 콜라겐의 가교 결합 텔로펩티드(CTX-1)의 혈청 수준을 45% 이상 감소시키는 데 효과적인 것인 방법.
측면 B-48: 측면 B-1 내지 B-47 중 어느 한 측면에 따라, 골 재흡수가 CTX-1에 대한 ELISA 검정법에 의해 측정되는 바, 피험체에서 억제되는 것인 방법.
측면 B-49: 측면 B-1 내지 B-48 중 어느 한 측면에 따라, CTX-1이 투여 후 30일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 50% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 B-50: 측면 B-1 내지 B-49 중 어느 한 측면에 따라, CTX-1이 투여 후 60일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 50% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 B-51: 측면 B-1 내지 B-50 중 어느 한 측면에 따라, CTX-1이 투여 후 90일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 50% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 B-52: 측면 B-1 내지 B-51 중 어느 한 측면에 따라, CTX-1이 투여 후 120일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 50% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 B-53: 측면 B-1 내지 B-52 중 어느 한 측면에 따라, CTX-1이 투여 후 150일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 50% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 B-54: 측면 B-1 내지 B-53 중 어느 한 측면에 따라, CTX-1이 투여 후 180일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 50% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 B-55: 측면 B-1 내지 B-54 중 어느 한 측면에 따라, CTX-1이 투여 후 30일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 60% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 B-56: 측면 B-1 내지 B-55 중 어느 한 측면에 따라, CTX-1이 투여 후 60일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 60% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 B-57: 측면 B-1 내지 B-56 중 어느 한 측면에 따라, CTX-1이 투여 후 90일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 60% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 B-58: 측면 B-1 내지 B-57 중 어느 한 측면에 따라, CTX-1이 투여 후 120일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 60% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 B-59: 측면 B-1 내지 B-58 중 어느 한 측면에 따라, CTX-1이 투여 후 150일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 60% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 B-60: 측면 B-1 내지 B-59 중 어느 한 측면에 따라, CTX-1이 투여 후 30일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 B-61: 측면 B-1 내지 B-60 중 어느 한 측면에 따라, CTX-1이 투여 후 60일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 B-62: 측면 B-1 내지 B-61 중 어느 한 측면에 따라, CTX-1이 투여 후 90일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 B-63: 측면 B-1 내지 B-62 중 어느 한 측면에 따라, CTX-1이 투여 후 120일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 B-64: 측면 B-1 내지 B-63 중 어느 한 측면에 따라, CTX-1이 투여 후 30일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 80% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 B-65: 측면 B-1 내지 B-64 중 어느 한 측면에 따라, CTX-1이 투여 후 60일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 80% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 B-66: 측면 B-1 내지 B-65 중 어느 한 측면에 따라, CTX-1이 투여 후 90일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 80% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 C-1: 측면 A-1 내지 A-25 중 어느 한 측면에 따라, 골 대사 마커가 I형 콜라겐의 N 말단 텔로펩티드(NTX-1)인 것인 방법.
측면 C-2: 측면 C-1에 따라, 투여되는 폴리펩티드의 양은, 투여 후 30, 60, 90, 120, 또는 180일 이상, 및/또는 10개월 이상, 또는 12개월 이상 동안, 뇨 중 NTX-1 : 크레아틴의 비로 측정되는 NTX-1을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소시키는 데 효과적인 것인 방법.
측면 C-3: 측면 C-2에 따라, 폴리펩티드가 약 0.01 mg/kg 내지 약 0.1 mg/kg인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 C-4: 측면 C-3에 따라, NTX-1의 수준이 투여 후 약 30일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 C-5: 측면 C-4에 따라, NTX-1의 수준이 투여 후 약 60일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 C-6: 측면 C-2에 따라, 폴리펩티드가 약 0.03 mg/kg 내지 약 0.3 mg/kg인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 C-7: 측면 C-6에 따라, NTX-1의 수준이 투여 후 약 90일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 C-8: 측면 C-2에 따라, 폴리펩티드가 약 0.1 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 C-9: 측면 C-8에 따라, NTX-1의 수준이 투여 후 약 120일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 C-10: 측면 C-2에 따라, 폴리펩티드가 약 1 mg/kg 내지 약 10 mg/kg인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 C-ll: 측면 C-10에 따라, NTX-1의 수준이 투여 후 약 180일(또는 6개월) 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 C-12: 측면 C-10에 따라, NTX-1의 수준이 투여 후 약 10개월 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 C-13: 측면 C-10에 따라, NTX-1의 수준이 투여 후 약 1년(12개월; 360일) 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 C-14: 측면 C-1에 따라, 투여되는 폴리펩티드의 양은 투여 후 30, 60, 90, 120, 180, 또는 210일 이상 및/또는 30일 내지 3개월, 3개월 내지 6개월, 또는 6개월 내지 1년 동안, 뇨 중 NTX-1 : 크레아틴의 비로 측정되는 NTX-1을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소시키는 데 효과적인 것인 방법.
측면 C-15: 측면 C-14에 따라, 폴리펩티드가 약 0.01 mg/kg 내지 약 3 mg/kg인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 C-16: 측면 C-15에 따라, 폴리펩티드가 약 0.01 mg/kg 내지 약 0.1 mg/kg인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 C-17: 측면 C-15 및 C-16 중 어느 한 측면에 따라, NTX-1의 수준이 투여 후 약 60일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 C-18: 측면 C-14에 따라, 폴리펩티드가 약 0.03 mg/kg 내지 약 0.3 mg/kg인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 C-19: 측면 C-18에 따라, NTX-1의 수준이 투여 후 약 60일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 C-20: 측면 C-14에 따라, 폴리펩티드가 약 0.01 mg/kg 내지 약 3 mg/kg인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 C-21: 측면 C-14에 따라, 폴리펩티드가 약 0.01 mg/kg 내지 약 0.3 mg/kg인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 C-22: 측면 C-14에 따라, 폴리펩티드가 약 0.03 mg/kg 내지 약 0.3 mg/kg인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 C-23: 측면 C-14에 따라, 폴리펩티드가 0.03 mg/kg 이하인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 C-24: 측면 C-20, C-21, C-22 및 C-23 중 어느 한 측면에 따라, NTX-1의 수준이 투여 후 약 30일 이상 내지 3개월 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 C-25: 측면 C-14에 따라, 폴리펩티드가 약 0.1 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 C-26: 측면 C-25에 따라, NTX-1의 수준이 투여 후 약 90일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 C-27: 측면 C-26에 따라, NTX-1의 수준이 투여 후 약 120일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 C-28: 측면 C-27에 따라, NTX-1의 수준이 투여 후 약 150일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 C-29: 측면 C-14에 따라, 폴리펩티드가 약 0.01 mg/kg 내지 약 3 mg/kg인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 C-30: 측면 C-14에 따라, 폴리펩티드가 약 0.3 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 C-31: 측면 C-14에 따라, 폴리펩티드가 0.3 mg/kg 이하인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 C-32: 측면 C-29, C-30 및 C-31 중 어느 한 측면에 따라, NTX-1이 투여 후 약 3개월 내지 6개월 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 C-33: 측면 C-14에 따라, 폴리펩티드가 약 1 mg/kg 내지 약 10 mg/kg인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 C-34: 측면 C-14에 따라, 폴리펩티드가 약 1 mg/kg 내지 약 3 mg/kg인 양으로 투여된다.
측면 C-35: 측면 C-14에 따라, 폴리펩티드가 1 mg/kg 이하인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 C-36: 측면 C-33, C-34 및 C-35 중 어느 한 측면에 따라, NTX-1의 수준이 투여 후 약 180일(또는 6개월) 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 C-37: 측면 C-33, C-34 및 C-35 중 어느 한 측면에 따라, NTX-1의 수준이 투여 후 약 210일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 C-38: 측면 C-33, C-34 및 C-35 중 어느 한 측면에 따라, NTX-1의 수준이 투여 후 약 6개월 이상 내지 1년 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 C-39: 측면 C-1에 따라, 투여되는 폴리펩티드의 양이 투여 후 약 30, 60, 90, 또는 120일 이상 동안 NTX-1을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소시키는 데 효과적인 것인 방법.
측면 C-40: 측면 C-39에 따라, 폴리펩티드가 약 0.1 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 C-41: C-40에 따라, NTX-1의 수준이 투여 후 약 30일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 C-42: 측면 C-39에 따라, 폴리펩티드가 약 0.3 mg/kg 내지 약 3 mg/kg인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 C-43: 측면 C-42에 따라, NTX-1의 수준이 투여 후 약 60일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 C-44: 측면 C-43에 따라, NTX-1의 수준이 투여 후 약 90일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 C-45: 측면 C-39에 따라, 폴리펩티드가 약 1 mg/kg 내지 약 10 mg/kg인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 C-46: 측면 C-45에 따라, NTX-1의 수준이 투여 후 약 120일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 C-47: 측면 C-1에 따라, 투여되는 폴리펩티드의 양이 투여 후 약 30, 60, 또는 90일 이상 동안 NTX-1을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 80% 이상만큼 감소시키는 데 효과적인 것인 방법.
측면 C-48: 측면 C-47에 따라, 폴리펩티드가 약 0.3 mg/kg 내지 약 3 mg/kg인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 C-49: 측면 C-47에 따라, 폴리펩티드가 약 0.3 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 C-50: 측면 C-47에 따라, 폴리펩티드가 약 0.1 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 C-51: 측면 C-48 및 C-49 중 어느 한 측면에 따라, NTX-1의 수준이 투여 후 약 30일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 80% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 C-52: 측면 C-49 및 C-50 중 어느 한 측면에 따라, NTX-1의 수준이 투여 후 약 30일 내지 3개월 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 80% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 C-53: 측면 C-47에 따라, 폴리펩티드가 약 1 mg/kg 내지 약 10 mg/kg인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 C-54: 측면 C-53에 따라, NTX-1의 수준이 투여 후 약 60일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 80% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 C-55: 측면 C-54에 따라, NTX-1의 수준이 투여 후 약 90일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 80% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 C-56: 측면 C-1 내지 C-55 중 어느 한 측면에 따라, NTX-1이 투여 후 90일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 20% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 C-57: 측면 C-1 내지 C-56 중 어느 한 측면에 따라, NTX-1이 투여 후 120일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 20% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 C-58: 측면 C-1 내지 C-57 중 어느 한 측면에 따라, NTX-1이 투여 후 150일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 20% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 C-59: 측면 C-1 내지 C-58 중 어느 한 측면에 따라, NTX-1이 투여 후 180일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 20% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 C-60: 측면 C-1 내지 C-59 중 어느 한 측면에 따라, 투여되는 폴리펩티드의 양이 투여 후 8시간까지 NTX-1의 뇨 수준을 45% 이상만큼 감소시키는 데 효과적인 것인 방법.
측면 C-61: 측면 C-1 내지 C-60 중 어느 한 측면에 따라, 피험체에서 뇨 중 NTX-1 : 크레아티닌의 비가 NTX-1에 대한 ELISA 검정법에 의해 측정되는 것인 방법.
측면 C-1 내지 C-61은 특히 측면 B-1 내지 B-66 중 어느 한 측면에 따른 방법일 수 있다.
측면 D-1: 측면 A-1 내지 A-25 중 어느 한 측면에 따라, 골 대사 마커가 타르트레이트 저항성 산성 포스파타제 이소형 5b(TRACP5b)인 것인 방법.
측면 D-2: 측면 D-1에 따라, 투여되는 폴리펩티드의 양이 투여 후 약 30, 60, 90 또는 120일 이상 동안 TRACP5b의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소시키는 데 효과적인 것인 방법.
측면 D-3: 측면 D-2에 따라, 폴리펩티드가 약 0.03 mg/kg 내지 약 0.3 mg/kg인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 D-4: 측면 D-3에 따라, TRACP5b의 혈청 수준이 투여 후 약 30일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 D-5: 측면 D-4에 따라, TRACP5b의 혈청 수준이 투여 후 약 60일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 D-6: 측면 D-2에 따라, 폴리펩티드가 약 0.1 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 D-7: 측면 D-6에 따라, TRACP5b의 혈청 수준이 투여 후 약 90일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 D-8: 측면 D-2에 따라, 폴리펩티드가 약 0.3 mg/kg 내지 약 3 mg/kg인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 D-9: 측면 D-8에 따라, TRACP5b의 혈청 수준이 투여 후 약 120일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 D-10: 측면 D-1에 따라, 투여되는 폴리펩티드의 양이 투여 후 약 30, 60, 또는 90일 이상 동안 TRACP5b의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소시키는 데 효과적인 것인 방법.
측면 D-11: 측면 D-10에 따라, 폴리펩티드가 약 0.1 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 D-12: 측면 D-11에 따라, TRACP5b의 혈청 수준이 투여 후 약 30일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 D-13: 측면 D-10에 따라, 폴리펩티드가 약 0.3 mg/kg 내지 약 3 mg/kg인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 D-14: 측면 D-13에 따라, TRACP5b의 혈청 수준이 투여 후 약 60일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 D-15: 측면 D-14에 따라, TRACP5b의 혈청 수준이 투여 후 약 90일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 D-1 내지 D-15는 특히 측면 B-1 내지 B-66 및/또는 C-1 내지 C-61 중 어느 한 측면에 따른 방법일 수 있다.
측면 E-1: 측면 A-1 내지 A-25 중 어느 한 측면에 따라, 골 대사 마커가 I형 프로콜라겐의 N 말단 프로펩티드(P1NP)인 것인 방법.
측면 E-2: 측면 E-1에 따라, 투여되는 폴리펩티드의 양이 투여 후 약 30, 60, 90, 또는 120일 이상 동안 P1NP의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소시키는 데 효과적인 것인 방법.
측면 E-3: 측면 E-2에 따라, 폴리펩티드가 약 0.003 mg/kg 내지 약 0.03 mg/kg인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 E-4: 측면 E-3에 따라, P1NP의 혈청 수준이 투여 후 약 30일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 E-5: 측면 E-4에 따라, P1NP의 혈청 수준이 투여 후 약 60일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 E-6: 측면 E-5에 따라, P1NP의 혈청 수준이 투여 후 약 90일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 E-7: 측면 E-2에 따라, 폴리펩티드가 약 0.01 mg/kg 내지 약 0.1 mg/kg인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 E-8: 측면 E-7에 따라, P1NP 1의 혈청 수준이 투여 후 약 120일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 E-9: 측면 E-1에 따라, 투여되는 폴리펩티드의 양이 투여 후 약 30, 60, 또는 90일 이상 동안 P1NP의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소시키는 데 효과적인 것인 방법.
측면 E-10: 측면 E-9에 따라, 폴리펩티드가 약 0.03 mg/kg 내지 약 0.3 mg/kg인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 E-11: 측면 E-10에 따라, P1NP의 혈청 수준이 투여 후 약 30일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 E-12: 측면 E-11에 따라, P1NP의 혈청 수준이 투여 후 약 60일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 E-13: 측면 E-12에 따라, P1NP의 혈청 수준이 투여 후 약 90일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 E-14: 측면 E-1에 따라, 투여되는 폴리펩티드의 양이 투여 후 약 30, 60, 또는 90일 이상 동안 P1NP의 혈청 수준을 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소시키는 데 효과적인 것인 방법.
측면 E-15: 측면 E-14에 따라, 폴리펩티드가 약 0.1 mg/kg 내지 약 1 mg/kg인 양으로 투여되는 것인 방법.
측면 E-16: 측면 E-15에 따라, P1NP의 혈청 수준이 투여 후 약 30일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 E-17: 측면 E-16에 따라, P1NP의 혈청 수준이 투여 후 약 60일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 E-18: 측면 E-17에 따라, P1NP의 혈청 수준이 투여 후 약 90일 이상 동안 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되는 것인 방법.
측면 E-1 내지 E-18은 특히 측면 B-1 내지 B-66, C-1 내지 C-61 및/또는 D-1 내지 D-15 중 어느 한 측면에 따른 방법일 수 있다.
SEQUENCE LISTING <110> Ablynx nv <120> Prolonged inhibition of bone resorption <130> P11-013-PCT-1 <150> US 61/491,066 <151> 2011-05-27 <160> 31 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR sequence <400> 1 Ser Tyr Pro Met Gly 1 5 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR sequence <400> 2 Ser Ile Thr Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 3 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR sequence <400> 3 Tyr Ile Arg Pro Asp Thr Tyr Leu Ser Arg Asp Tyr Arg Lys Tyr 1 5 10 15 <210> 4 <211> 126 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Nanobody sequence <400> 4 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Arg Ser Tyr 20 25 30 Pro Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val 35 40 45 Ala Ser Ile Thr Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg 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Claims (59)

  1. 폐경 후 여성에서 골 재흡수 또는 파골세포 활성을 억제시키기 위한, 핵 인자 카파 B 리간드의 수용체 활성화제(RANKL)에 특이적으로 결합하는 폴리펩티드를 포함하는 제약 조성물로서, 상기 폐경 후 여성에게 투여되는 폴리펩티드의 양은 투여 후 30일 이상 동안 I형 콜라겐의 가교 결합 텔로펩티드(CTX-1) 및 I형 콜라겐의 N 말단 텔로펩티드(NTX-1)로부터 선택되는 골 대사 및/또는 골 항상성의 하나 이상의 마커를 변화시키는 데 효과적이고,
    폴리펩티드는, RANKL에 특이적으로 결합하고 4개의 골격 영역(각각 FR1 내지 FR4) 및 3개의 상보성 결정 영역(각각 CDR1 내지 CDR3)으로 이루어진 2개 이상의 면역글로불린 단일 가변 도메인을 포함하며, 여기서, CDR1은 서열 번호 1로부터 선택되고, CDR2는 서열 번호 2로부터 선택되고, CDR3은 서열 번호 3으로부터 선택되며,
    - 폴리펩티드는 매달 0.003 mg/kg 내지 0.01 mg/kg의 양으로 투여되고, CTX-1의 혈청 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되며, CTX-1의 혈청 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소된 수준에서 전 치료 기간에 걸쳐 유지되거나;
    - 폴리펩티드는 매 2개월마다 0.01 mg/kg 내지 0.03 mg/kg의 양으로 투여되고, CTX-1의 혈청 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되며, CTX-1의 혈청 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소된 수준에서 전 치료 기간에 걸쳐 유지되거나;
    - 폴리펩티드는 매 3개월마다 0.01 mg/kg 내지 0.03 mg/kg의 양으로 투여되고, CTX-1의 혈청 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되며, CTX-1의 혈청 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소된 수준에서 전 치료 기간에 걸쳐 유지되거나;
    - 폴리펩티드는 매 4개월마다 0.01 mg/kg 내지 0.03 mg/kg의 양으로 투여되고, CTX-1의 혈청 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되며, CTX-1의 혈청 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소된 수준에서 전 치료 기간에 걸쳐 유지되거나;
    - 폴리펩티드는 매달 0.01 mg/kg 내지 0.03 mg/kg의 양으로 투여되고, CTX-1의 혈청 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되며, CTX-1의 혈청 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소된 수준에서 전 치료 기간에 걸쳐 유지되거나;
    - 폴리펩티드는 매 2개월마다 0.01 mg/kg 내지 0.03 mg/kg의 양으로 투여되고, CTX-1의 혈청 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되며, CTX-1의 혈청 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소된 수준에서 전 치료 기간에 걸쳐 유지되거나;
    - 폴리펩티드는 매 3개월마다 0.03 mg/kg 내지 0.1 mg/kg의 양으로 투여되고, CTX-1의 혈청 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되며, CTX-1의 혈청 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소된 수준에서 전 치료 기간에 걸쳐 유지되거나;
    - 폴리펩티드는 매 4개월마다 0.1 mg/kg 내지 0.3 mg/kg의 양으로 투여되고, CTX-1의 혈청 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되며, CTX-1의 혈청 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소된 수준에서 전 치료 기간에 걸쳐 유지되거나;
    - 폴리펩티드는 매달 0.03 mg/kg 내지 0.1 mg/kg의 양으로 투여되고, CTX-1의 혈청 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되며, CTX-1의 혈청 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소된 수준에서 전 치료 기간에 걸쳐 유지되거나;
    - 폴리펩티드는 매 2개월마다 0.1 mg/kg 내지 0.3 mg/kg의 양으로 투여되고, CTX-1의 혈청 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되며, CTX-1의 혈청 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소된 수준에서 전 치료 기간에 걸쳐 유지되거나;
    - 폴리펩티드는 매 3개월마다 0.1 mg/kg 내지 0.3 mg/kg의 양으로 투여되고, CTX-1의 혈청 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되며, CTX-1의 혈청 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소된 수준에서 전 치료 기간에 걸쳐 유지되거나;
    - 폴리펩티드는 매 4개월마다 0.1 mg/kg 내지 0.3 mg/kg의 양으로 투여되고, CTX-1의 혈청 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되며, CTX-1의 혈청 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소된 수준에서 전 치료 기간에 걸쳐 유지되거나;
    - 폴리펩티드는 매달 0.01 mg/kg 내지 0.03 mg/kg의 양으로 투여되고, NTX-1의 뇨 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되며, NTX-1의 뇨 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소된 수준에서 전 치료 기간에 걸쳐 유지되거나;
    - 폴리펩티드는 매 2개월마다 0.03 mg/kg 내지 0.1 mg/kg의 양으로 투여되고, NTX-1의 뇨 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되며, NTX-1의 뇨 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소된 수준에서 전 치료 기간에 걸쳐 유지되거나;
    - 폴리펩티드는 매 3개월마다 0.03 mg/kg 내지 0.1 mg/kg의 양으로 투여되고, NTX-1의 뇨 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되며, NTX-1의 뇨 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소된 수준에서 전 치료 기간에 걸쳐 유지되거나;
    - 폴리펩티드는 매 4개월마다 0.03 mg/kg 내지 0.1 mg/kg의 양으로 투여되고, NTX-1의 뇨 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소되며, NTX-1의 뇨 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 30% 이상만큼 감소된 수준에서 전 치료 기간에 걸쳐 유지되거나;
    - 폴리펩티드는 매달 0.01 mg/kg 내지 0.03 mg/kg의 양으로 투여되고, NTX-1의 뇨 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되며, NTX-1의 뇨 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소된 수준에서 전 치료 기간에 걸쳐 유지되거나;
    - 폴리펩티드는 매 2개월마다 0.03 mg/kg 내지 0.1 mg/kg의 양으로 투여되고, NTX-1의 뇨 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되며, NTX-1의 뇨 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소된 수준에서 전 치료 기간에 걸쳐 유지되거나;
    - 폴리펩티드는 매 3개월마다 0.1 mg/kg 내지 0.3 mg/kg의 양으로 투여되고, NTX-1의 뇨 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되며, NTX-1의 뇨 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소된 수준에서 전 치료 기간에 걸쳐 유지되거나;
    - 폴리펩티드는 매 4개월마다 0.1 mg/kg 내지 0.3 mg/kg의 양으로 투여되고, NTX-1의 뇨 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소되며, NTX-1의 뇨 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 45% 이상만큼 감소된 수준에서 전 치료 기간에 걸쳐 유지되거나;
    - 폴리펩티드는 매달 0.1 mg/kg 내지 0.3 mg/kg의 양으로 투여되고, NTX-1의 뇨 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되며, NTX-1의 뇨 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소된 수준에서 전 치료 기간에 걸쳐 유지되거나;
    - 폴리펩티드는 매 2개월마다 0.3 mg/kg 내지 1 mg/kg의 양으로 투여되고, NTX-1의 뇨 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되며, NTX-1의 뇨 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소된 수준에서 전 치료 기간에 걸쳐 유지되거나;
    - 폴리펩티드는 매 3개월마다 0.3 mg/kg 내지 1 mg/kg의 양으로 투여되고, NTX-1의 뇨 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되며, NTX-1의 뇨 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소된 수준에서 전 치료 기간에 걸쳐 유지되거나;
    - 폴리펩티드는 매 4개월마다 1 mg/kg 내지 3 mg/kg의 양으로 투여되고, NTX-1의 뇨 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소되며, NTX-1의 뇨 수준이 처리 이전 또는 정상 수준과 비교하여 70% 이상만큼 감소된 수준에서 전 치료 기간에 걸쳐 유지되는 것인 제약 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 폴리펩티드가 서열 번호 10 또는 서열 번호 12를 포함하거나 서열 번호 10 또는 서열 번호 12로 이루어지는 것인 제약 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 폴리펩티드가 피하 투여되는 것인 제약 조성물.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 폐경 후 여성이 골다공증이 있는 것인 제약 조성물.
  5. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 투여되는 폴리펩티드의 양이 투여 후 8시간까지 I형 콜라겐의 가교 결합 텔로펩티드(CTX-1)의 혈청 수준을 45% 이상만큼 감소시키는 데 효과적인 제약 조성물.
  6. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 투여되는 폴리펩티드의 양이 투여 후 8시간까지 NTX-1의 뇨 수준을 45% 이상만큼 감소시키는 데 효과적인 제약 조성물.
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