KR102063430B1 - Realtime quantitative PCR을 이용한 넙치 여윔증의 원인체인 점액포자충류 (Parvicapsula anisocaudata) 진단용 프라이머 세트 및 이를 이용한 진단 방법 - Google Patents
Realtime quantitative PCR을 이용한 넙치 여윔증의 원인체인 점액포자충류 (Parvicapsula anisocaudata) 진단용 프라이머 세트 및 이를 이용한 진단 방법 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 서열번호 1및 2의 염기서열을 포함하는 프라이머 세트로 이루어진 넙치 여윔증 원인체 (Parvicapsula anisocaudata) 진단용 프라이머 세트와 이를 이용한 넙치 여윔증 원인체 진단방법을 제공함으로써, 넙치 여윔증 감염 정도를 파악하고, 상기 원인체를 신속하고 정확하게 검출할 수 있는 검출용 프라이머, 검출방법 및 검출 키트와 상기 검출용 프라이머 제작에 사용될 수 있는 폴리뉴클레오티드를 제안함으로써 넙치 여윔증의 조기진단에 따른 신속한 조치 및 대책을 마련할 수 있는 효과가 있다.
Description
본 발명은 양식 넙치에 심각한 폐사를 일으키는 여윔증상의 원인체가 되는 점액포자충류의 한 종류인 Parvicapsula anisocaudata에 특이적으로 반응하는 프라이머 세트와 이를 이용한 Realtime quantitative PCR법을 수행하여 넙치 여윔증을 조기에 진단할 수 있는 방법에 관한 것이다.
국내의 양식 산업의 대표적 품종인 넙치(Olive flounder, Paralichthys olivaceus)는 연간 전체 양식어류 생산량인 4만 톤 중 약 50%를 차지하고 2016년 양식어류 생산량의 52%를 차지하고(41,636톤), 생산금액은 534,359(백만 원) (2016 통계청)으로 전체 59%를 차지하고 있다. 이 중 제주지역에서 양식 넙치의 생산량은 2만 톤 이상으로 전체 생산량의 절반 이상을 보이며 주요 양식어종으로 자리 잡고 있다.
넙치 양식은 육상 수조식 양식방법에 의한 밀식에 의해 병원체 의한 감염성 질병이 발생하여 양식어가에 많은 피해를 주고 있다. 특히, 2007년도부터 제주도 넙치 양식장에서 약 20 cm 전후 크기의 넙치에서 여위어가는 원인불명의 질병이 발생하여, 최초 발병증상을 보인 이후 1-3주 동안 발병하여 폐사가 발생하고 있다.
여윔증은 1990년 일본의 자주복 양식장에서 처음 발견되었으나, 최근 해산 양식어류인 참돔, 돌돔, 넙치에서도 여윔 증상을 보이는 질병이 확인되었다. 이 질병에 감염된 어류는 안구함몰, 두부돌출 및 어체중 감소 등의 증상을 나타내다가 폐사에 이르게 된다고 보고된다.
최근 넙치에서 여윔증의 원인으로 명확하게 밝혀지지 않았지만 점액포자충이 한 종 또는 두 종 이상이 감염되었을 때 동일한 증상이 나타나는 것으로 알려져 있다. 점액포자충문에 속하는 점액포자충류는 지금까지 1,300종 이상이 기재되어 있으며, 대부분이 어류를 숙주로 한다. 이들 대부분은 숙주인 어류에 해가 없으나 자연산 어류와 양식상 어류에 치명적인 영향을 주거나 식품 가치를 떨어뜨려 산업적으로 피해를 주는 경우가 있다.
여윔 증상을 나타내는 어류의 장에서 발견되는 점액포자충으로는 Parvicapsula anisocaudata, Enteromyxum fugu, Enteromyxum leei 및 Leptotheca fugu 등이 지목되었다. 이들 점액포자충에 감염된 어류의 조직병리학적 분석을 통해 장 상피세포에서 다량의 포자를 관찰하였고, 상피의 탈락 및 파괴를 초래하는 것으로 알려졌다.
이에 상기 점액 포자충에 대한 프라이머를 제작하고, PCR을 실시하여 원인체를 진단하는 노력이 실시하고 있으며, 양식어가에 발병 시 큰 피해를 줄 수 있는 여윔증의 원인균으로 지목되고 있는 점액포자충류인 Enteromyxum leei와 Parvicapsula anisocaudata를 Realtime quantitative PCR을 이용하여 보다 민감하고 정확하게 점액포자충을 검출 할 수 있는 방법이 필요하다.
국내 공개특허공보 제10-2017-0113983호에는 넙치 여윔병에 투여하기 위한 수산용 사료첨가제 조성물에 관한 것으로 본 발명에 따른 포자충 진단에 관한 구성이 개시되지 않고, 한국수산과학회지에는 "제주의 양식 넙치(Paralichthys olivaceus)를 대상으로 한 여윔증 모니터링(2010-2013)"에 관한 논문이 게재되어 있으나 본원 발명에 따른 Realtime quantitative PCR 분석을 통해 높은 감도로 Parvicapsula anisocaudata를 진단할 수 있는 프라이머 세트에 관하여 개시되지 않아 차이를 보인다.
이에 본 발명은 Realtime quantitative PCR은 Conventional PCR보다 민감도가 높고 검량선을 이용하여 측정하고자 하는 검체에 감염되어있는 병원체의 양을 측정할 수 있는 정량적 PCR방법을 제공하고자 한다.
본 발명은 여윔증의 원인체로 의심되는 점액포자충인 Parvicapsula anisocaudata를 민감도가 높고 정량분석이 가능한 Realtime quantitative PCR을 이용해 신속하게 분자생물학적으로 진단하고 감염정도를 확인하고자 한다.
상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명의 일 실시예에 따른 넙치 여윔증 원인체 점액포자충류 진단용 프라이머 세트는 서열번호 3 및 4의 염기서열을 포함하는 프라이머로 이루어진 것일 수 있다.
상기 프라이머 세트는 넙치 여윔증 원인체 점액포자충류 Parvicapsula anisocaudata 18S ribosomal RNA를 특이적으로 증폭시키는 것일 수 있다.
본 발명의 다른 일 실시예에 따른 넙치 여윔증 원인체 점액포자충류 진단방법은 상기넙치 여윔증 원인체 검출용 프라이머를 이용하여 Realtime quantitative PCR을 수행하여 넙치 여윔증 원인체를 탐지하는 단계를 포함하는 것일 수 있다.
또한 상기 넙치 여윔증 원인체 점액포자충류 진단 방법은 a) 넙치 시료를 수득하는 단계; b) 상기 수득한 시료 및 상기 넙치 여윔증 원인체 검출용 프라이머를 이용하여 Realtime quantitative PCR을 수행하는 단계; 및 c) 상기 b)단계에 따른 Realtime quantitative PCR 증폭산물을 분석하여 넙치 여윔증 원인체를 탐지하는 단계를 포함하는 것일 수 있다.
본 발명은 여윔증의 원인체인 점액포자충류 Parvicapsula anisocaudata를 진단하고 정량함으로서 여윔증 감염 정도를 파악하고, 상기 원인체를 신속하고 정확하게 검출할 수 있는 검출용 프라이머, 검출방법 및 검출 키트와 상기 검출용 프라이머 제작에 사용될 수 있는 폴리뉴클레오티드를 제안함으로써 넙치 여윔증의 조기진단에 따른 신속한 조치 및 대책을 마련할 수 있는 효과가 있다.
도 1은 Parvicapsula anisocaudata 18S ribosomal RNA realtime quantitative PCR 단계희석 결과를 나타내었다.
도 2는 Parvicapsula anisocaudata 18S ribosomal RNA Conventional PCR 단계희석 결과를 나타낸다.
도 3은 상기 정량 분석에 따른 Parvicapsula anisocaudata의 Real-time qPCR을 이용한 검량선을 나타낸다.
도 2는 Parvicapsula anisocaudata 18S ribosomal RNA Conventional PCR 단계희석 결과를 나타낸다.
도 3은 상기 정량 분석에 따른 Parvicapsula anisocaudata의 Real-time qPCR을 이용한 검량선을 나타낸다.
이하, 본 발명의 Realtime quantitative PCR을 이용한 넙치 여윔증의 원인체 점액포자충류(Parvicapsula anisocaudata) 진단 방법과 관련한 구체적인 실험예를 들어 설명하면 다음과 같다.
<실험예 1> Parvicapsula anisocaudata Cloning
1. 클로닝 프라이머 제작
하기의 표 1은 Parvicapsula anisocaudata 18S ribosomal RNA의 cloning용 primer를 나타낸다. Parvicapsula anisocaudata 18S ribosomal RNA 유전자의 클로닝 프라이머를 제작하기 위해 Parvicapsula anisocaudata 18S ribosomal RNA gene, partial sequence (GenBank: KY341924.1)의 유전정보를 이용하였다. 클로닝을 위한 프라이머는 Primer3Plus ( /primer3plus/primer3plus.cgi)를 이용하였다.
| No. | Primer Name | Sequence (5'-3') | Len. |
농도
(umol) |
| 1 | PA 18S F | TTAGATGTGCTGCGATCAGG | 20 | 0.02 |
| 2 | PA 18S R | AAAGCTCAATCCCAATCACG | 20 | 0.02 |
2. cDNA합성
여윔증에 감염 된 넙치에서 장과 체신에서 total RNA를 분리하여 P. anisocaudata 유전자 클로닝을 위한 주형 cDNA를 합성하였다. cDNA 합성에는 TOPscriptTM cDNA synthesis Kit (enzynomics)를 사용하여 5 ㎍의 total RNA를 nuclease-free water에 희석하여 총 부피 8 ㎕가 되게 하였다.
희석된 RNA에 1 ㎕의 oligo(dt)와 1 ㎕의 Randome hexamer를 더하여 70 ℃에서 5분간 반응한 후 10X buffer 2 ㎕, RTase 1 ㎕, dNTP 2 ㎕, RNase inhibitor 0.5 ㎕, nuclease-free water 4.5 ㎕를 더하여 50 ℃에서 1시간 반응 후 95 ℃에서 5분간 가열하여 cDNA합성을 중지시키고, 30 ㎕의 nuclease-free water를 더해 최종 부피 50 ㎕가 되게 희석하였다.
3. 클로닝
상기 합성 한 cDNA를 주형으로 P. anisocaudata의 클로닝용 프라이머를 사용하여 PCR로 유전자 증폭 한 후 1% agarose gel에 100volt에서 25분간 전기 영동하여 산물의 크기를 확인하고 HiGeneTM Gel&PCR Purification System(BIOFACT)를 이용하여 산물을 분리하였다.
분리 된 산물은 TOPclonerTM TA-Blunt Kit (enzynomics)를 이용하여 클로닝 하였다.분리 된 산물 4 ㎕에 vector 1 ㎕(10ng/㎕)와 6XT-Blunt buffer 1 ㎕를 더하여 4 ℃에서 overnignt하였다(Ligation).
Overnignt 한 Ligation 산물에 Competent cell (DH5α Chemically Competent E.coli, enzynomics) 50 ㎕를 더하여 얼음에 20분간 방치한 후 42 ℃에서 1분간 반응하고 얼음에서 5분간 안정화 하여 S.O.C broth 300 ㎕에 37.5 ℃, 200rpm에서 1시간 30분간 배양하였다.
배양한 Competent cell은 암피실린과 카나마이신, Xgal이 첨가 된 LB agar에 50 ㎕, 150 ㎕, 200 ㎕ 씩 37.5 ℃ 18시간 배양하였다. 18시간 후 LB agar에 자란 하얀색 콜로니를 골라 암피실린과 카나마이신이 첨가 된 5ml LB broth에 37.5 ℃ 10시간 배양하였다.
10시간 뒤 배양액은 Hybrid-QTM Plasmid (GeneAll)을 이용하여 plasmid DNA를 분리하여 염기서열을 분석하였다(제노텍). 염기서열이 확인 된 plasmid DNA는 NanoDrop 2000C (Thermo Scientific, USA)를 이용하여 정량하였으며, copy number를 계산 후 단계희석 하여 Realtime quantitative PCR을 이용한 검량선 제작에 사용하였다.
4. 클로닝 결과
표 2는 상기 클로닝에 따른 Parvicapsula anisocaudata 18S ribosomal RNA의 염기서열을 나타낸다.
| Parvicapsula anisocaudata 18S ribosomal RNA | TTAGATGTGCTGCGATCAGGGTAATCCAGTGTGACTCGGATACTAGACAGACAACCGGAGAACCAAGCCGGGGGAAGCGTGGCAATAACAGGTCTGTGATGCCCTTCGATGTTCTGGGCTGCACGCGCGCTACAATGGCAGTGACAGAAAGGAGCTTAGTCGAAAGACTCGGCCAAACTGGAATCGCTGTCGTGATTGGGATTGAGCTTT | 210 |
<실험예 2> Parvicapsula anisocaudata realtime quantitative PCR
1. Parvicapsula anisocaudata realtime quantitative PCR primer 정보
상기 실험예 1에 따른 Parvicapsula anisocaudata 18S ribosomal RNA 유전자를 증폭하고 Real-time qPCR primer를 제작하기 위한 유전 정보는 Parvicapsula anisocaudata 18S ribosomal RNA gene, partial sequence (GenBank: KY341924.1)를 사용하였다.
| No. | Primer Name | Sequence (5'-3') | Len. |
농도
(umol) |
서열번호 |
| 1 | PA 18S qPCR F | TTAGATGTGCTGCGATCAGG | 20 | 0.02 | 1 |
| 2 | PA 18S qPCR R | AAAGCTCAATCCCAATCACG | 20 | 0.02 | 2 |
Real-time qPCR을 위한 프라이머는 Primer3Plus (http://www.bioinformatics.nl/cgi-bin/primer3plus/primer3plus.cgi)를 이용하였다. 표 3은 Parvicapsula anisocaudata 18S ribosomal RNA의 Real-time qPCR용 primer 정보를 나타낸다.
2. Realtime quantitative PCR
Parvicapsula anisocaudata를 검출하기 위해 Realtime quantitative PCR은 Thermal Cycler Dice Real Time System TP850 (Takara, Japan)를 이용하여 수행하였다. 각 Realtime quantitative PCR 프라이머는 1 ㎕(10 pmol), SYBR 10 ㎕, nfH2O 4 ㎕ Parvicapsula anisocaudata의 plasmid DNA 각각 4 ㎕씩 사용하였다.
Realtime quantitative PCR 반응은 95 ℃에서 30초 pre-denaturation 후 95 ℃ 30초 Parvicapsula anisocaudata는 55 ℃ 30초씩 40 cycle 증폭시킨 뒤 95 ℃ 15초 50 ℃ 30초 95 ℃ 15초간 dissociation하였다. Realtime quantitative PCR 효율을 확인하기 위하여 genomic DNA를 각각 108, 107, 106, 105, 104, 103, 102, 101 까지 단계적으로 희석 하여 PCR을 수행하였다.
도 1은 Parvicapsula anisocaudata 18S ribosomal RNA realtime quantitative PCR 단계희석 결과를 나타내었다. 그 결과, 108부터 101까지 검출되어 본 발명에 따른 상기 프라이머 세트는 Parvicapsula anisocaudata 18S ribosomal RNA를 특이적으로 증폭할 수 있음을 확인하였다.
또한, 검출 효율을 비교하기 위하여 동일하게 희석하여 10 ㎕의 2X TOPsimple™ DyeMIX-nTaq Master Mix (Enzynomics, Korea) 프라이머는 각1 ㎕, nuclease free water 4 10 ㎕의 2X TOPsimple™ DyeMIX-nTaq Master Mix (Enzynomics, Korea) 주형 플라스미드 DNA 1 10 ㎕의 2X TOPsimple™ DyeMIX-nTaq Master Mix (Enzynomics, Korea) 총 20 ㎕의 볼륨으로 95 ℃에서 15분 간 pre-denaturation 후, 94 ℃에 30초 간 denaturation, Parvicapsula anisocaudata는 55 ℃에 1분간 annealing, 72 ℃에 40초 간 extension 과정을 50 cycle 반복하여 수행하였으며 conventional PCR하여 얻어진 PCR 산물을 1% agarose gel에서 100 bolt, 25분간 전기영동하여 결과를 확인하였다.
도 2는 Parvicapsula anisocaudata 18S ribosomal RNA Conventional PCR 단계희석 결과를 나타낸다. 108부터 101까지 검출되었다. 이전에 PCR을 이용해 Parvicapsula anisocaudata를 검출한 사례가 없기 때문에 이는 최초로 PCR을 이용하여 Parvicapsula anisocaudata를 검출한 것이다.
3. Parvicapsula anisocaudata의 정량분석결과
상기 실험예 1에 따라 클로닝한 plasmid DNA는 NanoDrop 2000C (Thermo Scientific, USA)를 이용해 농도를 구하고 Copy수를 계산하고 단계 희석하여 Real-time qPCR하였다. Copy수 계산은 URI Genomics & Sequencing Center의 Calculator for determining the number of copies of a template 프로그램을 이용하였다.
검량선 작성은 증폭곡선에서 얻은 Ct값과 Std/Res Column에 입력한 정량값을 토대로 작성하였다. 도출된 식은 y=3.3539x+84486이며 상관계수인 R2값은 0.98이상 나와야 하며 본 발명에서 작성된 검량선의 R2값은 0.99이다.
도 3은 상기 정량 분석에 따른 Parvicapsula anisocaudata의 Real-time qPCR을 이용한 검량선을 나타낸다. 본 발명은 넙치 여윔증의 원인체인 Parvicapsula anisocaudata를 검출하기 위한 것으로 넙치로부터 분리된 Parvicapsula anisocaudata 18S ribosomal RNA를 클로닝하여 염기서열을 분석하고, 상기 Parvicapsula anisocaudata 18S ribosomal RNA를 특이적으로 검출할 수 있는 프라이머를 제작하였으며, 상기 프라이머는 Parvicapsula anisocaudata 18S ribosomal RNA에 특이적임을 확인하였다.
본 발명은 높은 감도로 여윔증의 원인체인 Parvicapsula anisocaudata를 Realtime quantitative PCR로 검출하여 발병 초기에 질병 확산에 빠르게 대처할 수 있으므로 넙치 양식의 위험부담을 줄여주는 한편, 생산성을 높일 수 있어 양식 기반확대 및 수산분야의 발전에 기여한다고 판단됨으로 산업상 이용가능성이 있다.
<110> Solforto
<120> Realtime quantitative PCR primer set and methods for diagnosing
arvicapsula anisocaudata
<130> p18-0391121
<160> 2
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> PA 18S foward primer
<400> 1
ttagatgtgc tgcgatcagg 20
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> PA 18S reverse primer
<400> 2
aaagctcaat cccaatcacg 20
Claims (4)
- 서열번호 1 및 2의 염기서열을 포함하는 프라이머 세트로 이루어진 넙치 여윔증 원인체 점액포자충류 파비캡슐라 아니소카다타(Parvicapsula anisocaudata) 진단용 프라이머 세트
- 삭제
- 제1항의 넙치 여윔증 원인체 검출용 프라이머 세트를 이용하여 실시간 중합효소 연쇄반응(Realtime quantitative PCR)을 수행하여 넙치 여윔증 원인체를 탐지하는 단계를 포함하는 넙치 여윔증 원인체 점액포자충류 파비캡슐라 아니소카다타(Parvicapsula anisocaudata) 진단방법
- 제3항에 있어서, a) 넙치 시료를 수득하는 단계;
b) 상기 수득한 시료 및 상기 넙치 여윔증 원인체 검출용 프라이머 세트를 이용하여 실시간 중합효소 연쇄반응(Realtime quantitative PCR)을 수행하는 단계; 및
c) 상기 b)단계에 따른 실시간 중합효소 연쇄반응(Realtime quantitative PCR) 증폭산물을 분석하여 넙치 여윔증 원인체를 탐지하는 단계를 포함하는 넙치 여윔증 원인체 점액포자충류 파비캡슐라 아니소카다타(Parvicapsula anisocaudata) 진단 방법
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20220135829A (ko) * | 2021-03-31 | 2022-10-07 | 대한민국(관리부서:국립수산과학원) | SPF(specific pathogen free) 넙치 판정을 위한 감염성 기생충 검출 및 판별 방법 |
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Non-Patent Citations (7)
| Title |
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| GenBank accession No. KY341924.1 (2017.10.30.)* * |
| Sang Phil Shin et al., Aquaculture, 493, pp.18-25, 2018 April 23.* * |
| 국내 공개특허공보 제10-2017-0113983호에는 조성물의 주요특징은 당해 조성물이 포자충류 증식 억제를 위한 조성물로 라이조푸스 대사산물 및 라이조푸스균, 키토산, L-메티오딘, 베타인(Betein), 홍국균, 바실러스 스브틸러스균의 배합물을 함유하는 넙치 여윔병에 투여하기 위한 수산용 사료첨가제 조성물에 관하여 개시하고 있다. |
| 김승민 외 4명. "제주도 여윔증상 넙치(Paralichthys olivaceus)로부터 분리한 점액포자충의 특성 분석". 한국수산과학회지.337-345. |
| 김승민 외 5명. "제주의 양식 넙치(Paralichthys olivaceus)를 대상으로 한 여윔증 모니터링(2010-2013)". 한국수산과학회지. 719-724. |
| 김이경 외 6명. "여윔증 넙치, Paralichthys olivaceus의 증상에 대한 병태생리학적 고찰". 한국어병학회. 11-18. |
| 한국 등록특허공보 제 10-1744181호에는 바이러스성 출혈성 패혈증 바이러스(VHSV)의 정량 검출방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 실시간 중합효소 연쇄반응법을 이용하여 바이러스성 출혈성 패혈증 바이러스(VHSV)를 정량 분석함으로써 바이러스의 잠복성 및 감염 초기의 바이러스 질병을 신속하게 진단 가능할 수 있으며, 재현성이 높고, 민감도 및 특이도가 우수한 바이러스성 출혈성 패혈증 바이러스의 정량 검출방법에 관하여 개시하고 있다. |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20220135829A (ko) * | 2021-03-31 | 2022-10-07 | 대한민국(관리부서:국립수산과학원) | SPF(specific pathogen free) 넙치 판정을 위한 감염성 기생충 검출 및 판별 방법 |
| KR102511155B1 (ko) | 2021-03-31 | 2023-03-17 | 대한민국 | SPF(specific pathogen free) 넙치 판정을 위한 감염성 기생충 검출 및 판별 방법 |
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