KR101930311B1

KR101930311B1 - 실리마린을 함유하는 대기오염물질에 의한 피부손상 방지용 화장료 조성물

Info

Publication number: KR101930311B1
Application number: KR1020170115448A
Authority: KR
Inventors: 구성득
Original assignee: (주)퓨어셀코리아
Priority date: 2017-09-08
Filing date: 2017-09-08
Publication date: 2018-12-18

Abstract

본 발명은 실리마린을 함유하는 대기오염물질에 의한 피부손상 방지용 화장료 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 실리마린은 대표적인 다이옥신류인 2,3,7,8-테트라클로로디벤조-p-다이옥신에 의해 활성화된 아릴 탄화수소 수용체의 표적 유전자인 CYP1A1, COX-2의 발현을 억제한다. 따라서, 실리마린을 유효성분으로 함유하는 본 발명의 화장료 조성물은 대기오염에 의해 피부 손상을 방지하여 피부 보호 효과를 발휘할 수 있다.

Description

실리마린을 함유하는 대기오염물질에 의한 피부손상 방지용 화장료 조성물{Cosmetic composition containing Silymarin for the protection skin damage by air pollutants}

본 발명은 실리마린을 함유하는 대기오염물질에 의한 피부손상 방지용 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부는 외부 환경에 직접적으로 노출되는 신체 부위로서, 우리 몸의 중요한 기관들을 보호하는 보호막 역할을 할 뿐만 아니라 수분 증발을 조절하고 외부 감염으로부터 몸을 보호하는 역할을 한다. 과도한 자외선, 오염된 환경 등 외부로부터 받는 스트레스는 피부 자극을 유발하게 되고, 결국에는 피부 노화로 이어지게 된다.

이러한 외부 자극 중에서도 특히, 최근 중국의 산업화로 인해 발생하고 있는 대기오염은 피부 노화 및 피부 트러블의 주요 원인으로 인식되고 있다.

대기오염물질이 피부에 접촉했을 때 피부 세포 내로 유해신호를 전달하여 피부손상을 유도하는 핵심적인 수용체가 아릴 탄화수소 수용체(AhR, aryl hydrocarbon receptor)이다. PCDDs/Fs류(polychlorinated dibenzo-p-dioxins, polychlorinated dibenzo furans, PCDDs/DFs), 다이옥신 유사 폴리염화비페닐류(dioxin like PCBs, dl-PCBs)와 다환방향족탄소 (PAHs, polyaromatic hydrocarbons) 등은 인체에 노출되면 아릴 탄화수소 수용체(AhR, aryl hydrocarbon receptor)에 결합하여 스테로이드 호르몬처럼 세포핵으로 들어가서 독성기작을 일으킨다. 구체적으로 다이옥신이 세포 내로 들어가면 Hsp90, AhR 상호작용 단백질(AhR interaction protein)과 복합체를 이루고 있는 AhR과 결합한다. 다이옥신과 결합한 AhR은 Hsp90, AIP와 분리된 후 핵에서 이성질체인 다른 전사인자인 ARNT(AhR nuclear translocator)와 결합한다. 이후 AhR/ARNT 복합체는 다이옥신 반응 요소(DRE, Dioxin Responsive Element)와 결합되어 cytochrome P450 subfamily 유전자의 발현을 발현시킨다. Cytochrome P450은 내인성 물질은 물론 다양한 외인성 물질의 생체 내 변화에 관여하고 중요한 면역체계가 독성을 가진 외부무질에 대해서 방어하는 것에 도음을 주는데 P450은 화학변화에 따라 독성이나 발암성을 나타낸다.

이와 같이 다이옥신, 각종 화합물들은 이 수용체를 통해 피부손상을 일으키는데 이 수용체를 억제함으로써 피부손상을 방지할 수 있는 억제제 개발이 필요하다.

대한민국 공개특허 제10-2010-0065611호는 피부손상 방지용의 화장료 조성물에 관한 것으로, 서양현호색 추출물 및 레몬 추출물을 포함하는 혼합조성물이 대기환경오염의 주된 물질중의 하나인 오존에 의한 피부손상을 방지하는 효과가 있다가 개시하고 있다. 또한 대한민국 공개특허 제10-2017-0059615호는 아스파라거스(Asparagus Officinalis) 추출물이 TCDD에 의해 활성화된 아릴 탄화수소 수용체(Aryl hydrocarbon receptor)의 표적 유전자인 CYP1B1, COX-2의 발현을 억제함으로써, 대기오염에 의해 피부 손상을 방지하여 피부 보호 효능을 나타낸다고 개시하고 있다.

한편, 실리마린은 국화과에 속하는 1년 또는 2년생 식물인 엉겅퀴(Silybum marianum)의 열매에서 추출한 황색 물질이다. 실리마린은 약 2000년 전부터 사용되었고, 뱀독의 해독제, 황달의 치료, 간 독성에 대한 해독제로 사용되어 왔다. 실리마린은 플라보노이드(flavonoid)계 화합물로서, 실리빈은 약 60~70%를 차지하는 주요 활성 성분이며, 이외에도 실리크리스틴(silicristin) 약 20%, 실리디아닌(silidianine) 약 10%, 이소실리빈(isosilybin) 약 5% 등이 실리마린을 구성하고 있다. 현대에 와서도 실리마린은 간질환 치료의 보조요법제로서 이용되고 있으며, 최근에는 피부 미백, 방사선 및 자외선에 의한 피부 손상에도 효과가 있는 것으로 보고되고 있다.

대한민국 공개특허 제10-2010-0065611호 대한민국 공개특허 제10-2017-005961호

본 발명의 과제는 다이옥신류에 의해 활성화된 아릴 탄화수소 수용체의 활성을 억제함으로써 대기오염에 의해 피부 손상을 방지하여 피부 보호 효능을 나타낼 수 있는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

이를 위해 본 발명은

실리마린을 유효성분으로 함유하는 대기오염물질에 의한 피부손상 방지용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 실리마린은 대표적인 다이옥신류인 2,3,7,8-테트라클로로디벤조-p-다이옥신에 의해 활성화된 아릴 탄화수소 수용체의 표적 유전자인 CYP1A1, COX-2의 발현을 억제한다. 따라서, 실리마린을 유효성분으로 함유하는 본 발명의 화장료 조성물은 대기오염에 의해 피부 손상을 방지하여 피부 보호 효과를 발휘할 수 있다.

도 1은 실리마린을 인간 피부섬유아세포에 처리했을 때 2,3,7,8-테트라클로로디벤조-p-다이옥신에 의해 증가하는 아릴 탄화수소 수용체의 표적 유전자인 CYP1A1의 mRNA 발현정도를 측정한 그래프이다.
도 2는 실리마린을 인간 피부섬유아세포에 처리했을 때 2,3,7,8-테트라클로로디벤조-p-다이옥신에 의해 증가하는 아릴 탄화수소 수용체의 표적 유전자인 COX-2의 mRNA 발현정도를 측정한 그래프이다.

본 발명은 실리마린을 유효성분으로 함유하는 대기오염물질에 의한 피부손상 방지용 화장료 조성물을 제시한다.

본 발명에 따른 실리마린은 이의 염뿐만 아니라, 이의 이성질체 또는 이로부터 조될 수 있는 가능한 용매화물 또는 수화물을 모두 포함한다.

또한, 본 발명에 따른 실리마린은 시판되는 것을 사용하거나 유기합성분야에서 알려진 통상의 합성방법을 이용하여 합성된 것을 사용할 수 있다.

본 발명의 실리마린은 시중에서 구입하거나 민들레, 국화과의 엉겅퀴(Silybum marianum)의 열매 또는 씨로부터추출된 것을 포함한다.

본 발명에 따른 조성물 중 실리마린의 함량은 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.001 내지 30.0 중량% 범위가 바람직하다. 대기오염에 의해 피부 손상을 방지 효과를 달성할 수 있도록 실리마린의 함량은 상기 최소치 이상인 것이 바람직하며, 과량 첨가에 따른 사용감 저하 및 각종 제형에의 적용 가능성을 고려하여 실리마린의 함량은 상기 최대치 이하인 것이 바람직하다.

본 발명의 화장료 조성물은 실리마린 이외에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조할 수 있다. 유화 제형의 화장품으로는 영양화장수, 크림, 에센스 등이 있으며, 가용화 제형의 화장품으로는 유연화장수가 있다. 또한, 본 발명의 실리마린을 함유하는 화장료 조성물 이외에도 피부 과학적으로 허용 가능한 매질 또는 기제를 함유함으로써 피부 과학 분야에서 통상적으로 사용되는 국소 적용 또는 전신 적용할 수 있는 보조제 형태로 제조될 수 있다.

적합한 화장품의 제형으로는 예를 들면, 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱(conceal stick)의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 폼(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물은 실리마린 이외에 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온 봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 그리고 상기의 성분들은 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.

본 발명의 화장품의 구체적인 제형으로서는 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트리젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 프레스파우더, 루스파우더, 마스크팩, 아이섀도 등의 제형을 포함한다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 더욱 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.

실험예 1: AhR 발현 억제 확인

사람 피부 섬유아세포(Human dermal fibroblast)를 6 웰 플레이트에 씨딩(seeding)한 후 24hr 배양하여 세포를 플레이트에 부착시켰다. 배지를 제거하고 PBS로 세척하였다. 실리마린을 3 중량%로 희석된 배지와 TCDD 1 nM(sigma 2,3,7,8-테트라클로로디벤조-p-다이옥신 용액)를 세포에 처리하고 37 ℃ 5% CO₂ 인큐베이터에서 24시간 동안 배양하였다.

배양된 세포로부터 유전자 발현을 분석하기 위해 RNAzol B reagent를 이용 세포 내 total RNA를 추출하였다. 배양액을 모두 제거한 후 RNAzol B reagent를 500 ㎕ 첨가해 세포를 녹여 조직을 변성시킨 후 1.5 ml 튜브에 각각 옮기고 클로로포름 100 ㎕를 첨가한 후 20초가 볼텍싱하여 완전히 혼합되도록 하였다. 실온에서 15분 동안 반응 후 14000 rpm에서 20분간 원심 분리하여 상층액을 획득하였고 동량의 이소프로필알코올을 첨가하여 10분간 실온에서 정치하였다. 시료를 14000 rpm에서 15분간 원심 분리하여 RNA 펠렛을 얻고 70% RNA용 에탄올로 14000 rpm에서 10분간 원심 분리하여 세척한 후 아스피레이터를 이용해 5분간 건조하였다. 건조된 RNA 시료는 0.1 % 디에틸 파이로카보네이트로 처리된 증류수 25 ㎕을 첨가하고 55 ℃에서 10분간 반응시켜 펠렛을 녹인 후 cDNA 합성을 위한 시료로 사용하였다. cDNA 합성은 추출한 총 RNA 1 ug에 oligo-d(T) 프라이머(100pmol) 1 ㎕을 혼합하여 65 ℃ 10분간 반응시킨 후 급속 냉각시켰다. 이 템플레이트에 10mM dNTP, 0.1M DTT와 5x RT 버퍼(10mM Tris-Cl, 50 mM KCl, 2.5mM MgCl₂) 각 2 ㎕을 첨가하고 M-MLV RTase 100 unit을 첨가한 후 DEPC로 처리된 증류수를 이용하여 전체 양이 20 ㎕가 되도록 보정하였다. 시료는 25 ℃에서 5분, 42 ℃에서 1시간 합성 후 72 ℃에서 15분간 반응을 통해 역전사 반응을 불활성화시켰다.

합성된 cDNA와 각 유전자의 프라이머를 이용하여 RT-PCR을 수행하였다. PCR 반응의 내부 대조군으로 GAPDH를 사용하였다. GAPDH의 구체적인 프라이머 서열은 정?향 프라이머 5’-gaaggtgaaggtcggagtc-3’ 및 역방향 프라이머: 5'-gaagatggtgatgggatttc-3', Cox2 정?향 프라이머: 5’-tgaaacccactccaaacaca-3’ 및 역방향 프라이머: 5’-gagaaggcttcccagctttt-3, CYP1A1의 구체적인 프라이머 서열은 정?향 프라이머 5’-cttggacctctttggagctg-3’ 및 역방향 프라이머: 5'-atagcaccatcaggggtgag-3'이다. 구체적인 PCR 조건은 95 ℃15 min 후에 총 45cycles 로 95 ℃ 15s, 60℃ 45 s 로 하였다. 그 결과는 도 1 및 도 2에 나타내었다.

도 1 및 도 2를 참조하면, 실리마린을 1 wt%로 인간 피부 섬유아세포에 처리했을 때 TCDD에 의해 증가했던 CYP1A1, Cox2 유전자의 mRNA 발현이 모두 감소함을 알 수 있다. 이를 통해 아릴 탄화수소 수용체(Aryl hydrocarbon receptor)의 활성이 실리마린에 의해 억제됨을 알 수 있다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 제형예를 제시한다. 그러나 하기의 제형예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 제형예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.

제형예 1: 크림의 제조

하기의 표 1의 성분을 사용하여 실리마린을 함유하는 크림을 통상의 방법에 따라 제조하였다.

성분	함량 (중량%)
실리마린	5.0
밀납	5.0
폴리솔베이트 60	1.5
솔비탄세스퀴올레이트	0.5
유동 파라핀	10.0
스쿠알란	10.0
소르비탄 스테아레이트	1.0
글리세릴 스테아레이트/피이지-400 스테아레이트	1.0
친유성 모노스테아린산 글리세린	0.5
스테아린산	1.5
부틸렌글리콜	5.0
프로필렌글리콜	5.0
트리에탄올아민	0.2
방부제	미량
색소	미량
향료	미량
정제수	잔량
합계	100

Claims

실리마린을 유효성분으로 함유하는 대기오염물질인 2,3,7,8-테트라클로로디벤조-p-다이옥신에 의해 발생되는 염증에 의한 피부손상 방지용 화장료 조성물로서
전체 100 중량%를 만족하도록 실리마린 5.0 중량%, 밀납 5.0 중량%, 폴리솔베이트60 1.5 중량%, 솔비탄세스퀴올레이트 0.5 중량%, 유동 파라핀 10.0 중량%, 스쿠알란 10.0 중량%, 소르비탄 스테아레이트 1.0 중량%, 글리세릴 스테아레이트/피이지-400 스테아레이트 1.0 중량%, 친유성 모노스테아린산 글리세린 0.5 중량%,스테아린산 1.5 중량%, 부틸렌글리콜 5.0 중량%, 프로필렌글리콜 5.0 중량%, 트리에탄올아민 0.2 중량%, 방부제 미량, 색소 미량, 향료 미량, 및 정제수 잔부를 포함하는 대기오염물질인 2,3,7,8-테트라클로로디벤조-p-다이옥신에 의해 발생되는 염증에 의한 피부손상 방지용 크림 제형 화장료 조성물.
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