KR101904497B1

KR101904497B1 - 인간 ｓＣＤ１４―ＳＴ의 분석 방법

Info

Publication number: KR101904497B1
Application number: KR1020127022082A
Authority: KR
Inventors: 요시카츠 오카무라; 히로유끼 요코이
Original assignee: 가부시키가이샤 엘에스아이 메디엔스; 모찌다 세이야쿠 가부시끼가이샤
Priority date: 2010-01-29
Filing date: 2011-01-28
Publication date: 2018-10-04
Also published as: EP2530468B1; EP2530468A1; ES2693098T3; KR20120129924A; EP2530468A4; US20120309025A1; CN102713636B; JP5789520B2; CN102713636A; EP2530468B8; JPWO2011093459A1; WO2011093459A1

Abstract

전혈 검체를 이용한 경우에도 인간 sCD14-ST를 정확하게 측정할 수 있는 분석 방법을 제공한다. 상기 분석 방법은 전혈 검체의 채취로부터 6 시간 이내에 상기 검체 중의 인간 sCD14-ST를 분석한다.

Description

인간 ｓＣＤ１４―ＳＴ의 분석 방법{Human sCD14-ST assay method}

본 발명은, 패혈증 진단의 마커(マ-カ-)로서 알려져 있는 인간 sCD14-ST의 분석 방법에 관한 것이다.

또한, 본 명세서에서 「분석」에는, 분석 대상 물질인 인간 sCD14-ST의 존재 유무를 판정하는 「검출」과, 분석 대상 물질의 양을 정량적 또는 반정량적으로 결정하는 「측정」이 포함된다.

CD14 분자는, 단핵구 세포의 막 표면 상에 발현하는 당단백질을 인식하는 일군의 항체에 의해 동정(同定)되는 단백질로서 1986년에 제 3회 Leukocyte Typing Conference에서, 명명되었다. 1990년, Wright 등은 이 CD14 분자가, 엔도톡신인 LPS의 리셉터(レセプタ-; 수용체)인 것을 명확히 했다 (비특허 문헌 1). 이 CD14 분자는 분자량 53 ~ 55 kDa의 당단백질로서, mRNA는 약 1.4 kb의 사이즈로 356개의 아미노산으로 이루어진 것임이 cDNA의 해석으로부터 명확하게 되었다 (비특허 문헌 2).

인간 CD14 분자에는, 막 결합형 CD14 외에 가용형(可溶型) CD14가 있고, 혈중(血中)에는 분자량이 다른 복수의 가용형 CD14가 존재하는 것이 알려져 있다. 이와 같은 가용형 CD14로서는, 약 55 kDa와 49 kDa의 2종류의 가용형 CD14 (가용형 고분자량 CD14), 약 13 kDa의 가용형 저분자량 CD14 서브 타입 (이하, 인간 sCD14-ST로 칭한다)이 알려져 있으며, 인간 sCD14-ST가 패혈증의 진단 마커로서 임상(臨床)상, 유용하다 (특허 문헌 1).

이 인간 sCD14-ST에 관해서, 특허 문헌 1에는, 혈청 검체의 동결 융해를 반복하고, 장시간 실온에서 방치한 경우에, 혈청 검체 중의 인간 sCD14-ST가 분해하여, 측정할 수 없게 되는 경우가 상정되는 것, 혹은, 혈청 검체 중의 고분자량 CD14가, 인간 sCD14-ST 또는 그것에 가까운 구조로 분해되어, 측정 결과를 틀리는 경우가 상정되는 것이 개시되어 있다 (단락 [0151]). 한편, 특허 문헌 1에는, 인간 sCD14-ST가, 에라스타아제(エラスタ-ゼ) 등의 프로테아제(プロテア-ゼ)에 의해 전장(全長)의 CD14가 분해되어 생기는 것, 생긴 인간 sCD14-ST는, 적어도 생체 내(혈청 중)에서 검출될 수 있는 정도로는 안정하게 존재하고 있는 것도 개시되어 있다 (단락 [0126]).

이와 같이, 특허 문헌 1에는, 혈청 검체의 동결 융해나 장시간 실온 방치에 의해 측정 결과를 틀리는 경우를 상정하고 있으나, 일반적인 검체 보관 조건에 관한 내용에 있어서 특별한 취급을 환기할 기재는 없다. 특허 문헌 1에는, 오히려, 인간 sCD14-ST가 생체 내 혈청 중에서 안정한 것을 개시하는 것도 있다.

특허 문헌 1: 특허 제 4040666호 명세서

비특허 문헌 1: 「사이언스(science)」 (미국), 1990년, 제 249권, p. 1431-1433 비특허 문헌 2: 「뉴클레익 액시드 리서치(Nucleic Acids Research)」(영국), 1988년, 제 16권, p. 4173

이와 같이, 인간 sCD14-ST가 혈청 중에서 비교적 안정하게 존재하는 것이 알려져 있으나, 혈장 검체 혹은 전혈 검체를 포함하여, 인간 sCD14-ST의 보다 정확한 분석 방법을 예의 개발하는 도중에서, 본 발명자는, 의외로, 전혈 검체를 이용한 경우에 있어서, 인간 sCD14-ST의 측정값에 영향을 미치는 것을 발견하였다.

본 발명은, 이와 같은 상황을 감안하여 이루어진 것이며, 전혈 검체를 이용한 경우에서도, 인간 sCD14-ST를 정확히 측정할 수 있는 분석 방법을 제공하는 것을 과제로 하는 것이다.

상기 과제는, 본 발명에 따른, 전혈 검체의 채취로부터 6 시간 이내에 상기 검체 중의 인간 sCD14-ST를 분석하는 것을 특징으로 하는, 인간 sCD14-ST의 분석 방법에 의해 해결할 수 있다.

본 명세서에 있어서 「인간 sCD14-ST」(별칭으로서 프레셉신(プレセプシン:등록상표)이라고 칭함)로는, 특허 제 4040666호 명세서에 기재된 「제 1 양태의 가용성 CD14 항원」을 의미하고, 보다 구체적으로는, 하기의 1) ~ 3)의 성질을 가지는 가용성 CD14 항원이다.

1) 비환원 조건 하 SDS-PAGE에서는, 분자량 13±2 kDa,

2) N 말단 서열에 서열 번호 1의 아미노산 서열을 가지며, 그리고

3) 서열 번호 2에 기재된 16 아미노산 잔기로 이루어진 펩티드(ペプチド)를 항원으로 제작한 항체에 특이적으로 결합한다.

서열 번호 1

Thr Thr Pro Glu Pro Cys Glu Leu Asp Asp Glu

1 5 10

서열 번호 2

Arg Val Asp Ala Asp Ala Asp Pro Arg Gln Tyr Ala Asp Thr Val Lys

1 5 10 15

본 발명에 의하면, 혈청 검체 또는 혈장 검체 중에서는 안정하여도, 전혈 검체 중에서는 시간 경과에 의해 측정값이 변동하는 인간 sCD14-ST를, 혈청 검체 또는 혈장 검체를 조제함 없이, 전혈 검체를 이용해서 정확한 분석을 실시할 수 있다.

도 1은 헤파린 채혈관을 사용해서 조제한 전혈 검체 및 혈장 검체(검체 1)를 실온에서 소정 시간(0 시간, 1 시간, 2 시간, 3 시간, 4 시간, 5 시간, 6 시간, 8 시간, 10 시간) 정치(靜置) 보존한 후, 각 검체 중의 인간 sCD14-ST를 측정한 결과를 보여주는 그래프이다.
도 2는 헤파린 채혈관을 사용해서 조제한 전혈 검체 및 혈장 검체(검체 2)를 실온에서 소정 시간(0 시간, 1 시간, 2 시간, 3 시간, 4 시간, 5 시간, 6 시간, 8 시간, 10 시간) 정치(靜置) 보존한 후, 각 검체 중의 인간 sCD14-ST를 측정한 결과를 보여주는 그래프이다.
도 3은 헤파린 채혈관을 사용해서 조제한 전혈 검체 및 혈장 검체(검체 3)를 실온에서 소정 시간(0 시간, 1 시간, 2 시간, 3 시간, 4 시간, 5 시간, 6 시간, 8 시간, 10 시간) 정치(靜置) 보존한 후, 각 검체 중의 인간 sCD14-ST를 측정한 결과를 보여주는 그래프이다.
도 4는 EDTA 채혈관을 사용해서 조제한 전혈 검체 및 혈장 검체(검체 1)를 실온에서 소정 시간(0 시간, 1 시간, 2 시간, 3 시간, 4 시간, 5 시간, 6 시간, 8 시간, 10 시간) 정치(靜置) 보존한 후, 각 검체 중의 인간 sCD14-ST를 측정한 결과를 보여주는 그래프이다.
도 5는 EDTA 채혈관을 사용해서 조제한 전혈 검체 및 혈장 검체(검체 2)를 실온에서 소정 시간(0 시간, 1 시간, 2 시간, 3 시간, 4 시간, 5 시간, 6 시간, 8 시간, 10 시간) 정치(靜置) 보존한 후, 각 검체 중의 인간 sCD14-ST를 측정한 결과를 보여주는 그래프이다.
도 6은 EDTA 채혈관을 사용해서 조제한 전혈 검체 및 혈장 검체(검체 3)를 실온에서 소정 시간(0 시간, 1 시간, 2 시간, 3 시간, 4 시간, 5 시간, 6 시간, 8 시간, 10 시간) 정치(靜置) 보존한 후, 각 검체 중의 인간 sCD14-ST를 측정한 결과를 보여주는 그래프이다.
도 7은 혈청 검체 (검체 1 ~ 검체 3)를 실온에서 소정 시간(0 시간, 1 시간, 2 시간, 3 시간, 4 시간, 5 시간, 6 시간, 8 시간) 정치 보존한 후, 각 검체 중의 인간 sCD14-ST를 측정한 결과를 보여주는 그래프이다.
도 8은 전혈 검체의 불안정성의 요인을 검토하기 위해, 각종 조건(조건 1 ~ 조건 3)에서 정치 보존한 각 검체 중의 인간 sCD-ST를 측정한 결과를 보여주는 그래프이다.
도 9는 헤파린 채혈관을 사용해서 조제한 전혈 검체 (검체 1 ~ 검체 3)를 실온에서 소정 시간(0 시간, 2 시간, 4 시간, 8 시간) 정치 보존한 후, 각 검체 중의 CRP를 측정한 결과를 보여주는 그래프이다.
도 10은 EDTA 채혈관을 사용해서 조제한 전혈 검체 (검체 1 ~ 검체 3)를 실온에서 소정 시간(0 시간, 2 시간, 4 시간, 8 시간) 정치 보존한 후, 각 검체 중의 CRP를 측정한 결과를 보여주는 그래프이다.

본 발명의 분석 방법은, 피검 시료로서 전혈 검체를 사용하며, 그것의 채취로부터 6 시간 이내에 그것의 분석을 실시하는 것 이외는, 인간 sCD14-ST의 공지 분석 방법을 그대로 적용할 수 있다.

인간 sCD14-ST의 분석은, 단백질의 각종의 공지 분석 방법, 예를 들면, 항체를 이용하는 면역학적 분석 방법, 전기 영동(電氣泳動) 등의 생화학적 분석 방법에 의해 실시할 수 있으며, 임상 검사용의 자동 분석기를 사용할 수도 있다.

예를 들면, 특허 제 4040666호 명세서에는, 인간 sCD14-ST의 측정 방법, 보다 구체적으로는, 서열 번호 2에 기재된 16 아미노산 잔기로 이루어진 펩티드 (특허 제 4040666호 명세서에 기재된 S68 펩티드)를 항원으로 하여 제작한 폴리클론 항체 (S68 항체), 모노클론 항체(F1146-17-2 항체)와, 항CD14 항원 모노클론 항체(예를 들면, F1031-8-3 항체, F1106-13-3 항체 등)와의 조합을 이용한 샌드위치 EIA계 [특허 제 4040666호 명세서의 실시예 7-(1)]가 개시되어 있으며, 본 발명의 분석 방법에 적용할 수 있다.

또한, 후술하는 실시예에서는, 검체 중의 인간 sCD14-ST와 항sCD14-ST 마우스 모노클론 항체(F1106-13-3 항체) 감작 자성(磁性) 라텍스 및 ALP(알칼리 포스파타제) 표지 항sCD14-ST 토끼 폴리클론 항체(S68 항체)를 결합시켜서, 과잉의 ALP 표지 항sCD14-ST 토끼 폴리클론 항체를 제거한 후, 항원 항체 반응에 의해 형성된 면역 복합체의 ALP 효소 활성을, 발광 기질(CDP-Star: 트로픽(トロピックス) 사 제품)을 사용한 화학 발광 효소 면역 측정법(CLEIA:Chemiluminescent Enzyme Immunoassay)에 의해 측정하여, 검체 중의 인간 sCD14-ST 농도를 구하는 방법을 사용하고 있다.

본 발명의 분석 방법에서는, 피검 시료로서 전혈 검체를 사용한다. 본 명세서에 있어서 「전혈 검체를 사용한다」라는 것은, 전혈을 채혈하고나서 그 검체의 분석을 개시하기까지의 기간(이하, 채혈 후 보존 기간이라 칭한다) 또는 그의 대부분의 기간을 전혈 그대로 보존한 검체를 사용하는 것을 의미한다. 전혈 검체는, 통상의 채혈 조작에 의해, 즉, 항응고제(예를 들면, 헤파린, EDTA, 구연산)을 포함하는 채혈관에 의해 채취할 수 있다.

채혈관에 의해 채취한 전혈 검체는, 수회의 전도 혼화(轉倒混和) 등으로 교반한 후, 그대로 측정에 사용할 수도 있고, 혈장 분리해서 사용할 수도 있다. 혈장 리해해서 사용하는 것으로는, 원심 분리에 의해 혈장과 혈구를 2층으로 나눈 상태에서 혈장 성분을 사용하는 경우와, 더욱더 혈장 성분만을 분주(分注)해서 사용하는 경우를 포함한다. 본 발명의 분석 방법에서는, 피검 시료로서 전혈 검체를 사용하나, 채혈 후 보존 기간의 종료 후, 혈장을 분리해서 사용하는 경우도, 「전혈 검체를 사용한다」는 태양에 포함된다. 또한, 본 실시예를 포함하는 본 발명자의 지견(知見)으로부터, 전혈 검체 중의 인간 sCD14-ST를 측정하는 경우, 시간 경과에 의해 측정값이 변동하는 것이 있고, 검체를 조제할 때나 운송할 때의 과도한 물리적 충격이 측정값에 영향을 주는 요인으로 되는 경우가 있다.

본 발명의 분석 방법에서는, 전혈 검체를 채취하고나서 6시간 이내 (바람직하게는 4시간 이내)에 분석을 실시한다. 또한, 본 명세서에 있어서 「6시간 이내에 분석을 실시한다」라는 것은, 6시간 이내에 분석을 개시하는 것을 의미한다.

더욱 구체적으로는, EDTA 채혈관에 의해 전혈 검체를 채취한 경우에는 6시간 이내에 분석을 실시하는 것이 바람직하고, 헤파린 채혈관에 의해 전혈 검체를 채취하는 경우에는 4시간 이내에 분석을 실시하는 것이 바람직하다.

후술하는 실시예에서 구체적 데이터를 보여주는 것 같이, 혈장 검체 또는 혈청 검체에 있어서는 측정값에 변화가 인정되지 않고, 채혈로부터 6 ~ 8 시간 후의 측정이라도, 건강한 보통 사람의 전혈 검체에 있어서는 인간 sCD14-ST의 측정값의 상승이 인정되었다. 건강한 보통 사람과 패혈증 환자 사이에서는, 인간 sCD14-ST 측정값은 50배의 차이가 인정되는 것이 알려져 있고, 건강한 보통 사람의 혈중에 있어서는 인간 sCD14-ST 농도는 매우 낮다. 이것에 의해서, 적절한 컷오프(カットオフ)값을 설정함으로써, 높은 감도 및 특이성으로 패혈증을 진단하는 것이 가능하게 된다 (특허 문헌 1의 실시예 12). 그러나, 전혈 검체에 있어서, 건강한 보통 사람의 인간 sCD14-ST 측정값이 시간 경과와 함께 상승한 경우, 측정 시간에 의해서, 컷오프 값 보다 낮은 값인지 높은 값인지의 판단에 착오가 생겨 버리는 가능성이 있다. 이와 같은 상황하에서, 본 발명자들은 전혈 검체에서도 검체를 채취하고나서 6시간 이내(바람직하게는 4시간 이내)이면 인간 sCD14-ST의 측정값이 변동하지 않는 것을 발견한 것이며, 본 발명의 분석 방법에서는, 전혈 검체의 채취로부터 6시간 이내에 분석을 실시하기 때문에, 측정값 상승의 영향을 받는 것 없이, 정확한 인간 sCD14-ST의 측정을 실시할 수 있다.

[실시예]

이하, 실시예에 의해 본 발명을 구체적으로 설명하나, 이들은 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

《실시예 1: 검체 중의 인간 sCD14-ST의 측정 방법》

인간 sCD14-ST를 측정하기 위한 각 검체는, 인간 sCD14-ST 측정용의 시약을 사용해서 측정했다. 이 시약은, 제 1 항체 용액으로서 항sCD14-ST 마우스 모노클론항체(F1106-13-3 항체; 특허 제 4040666호 명세서) 감작 자성(磁性) 라텍스 용액, 제 2 항체 용액으로서 ALP(알카리 포스파타아제) 표지 항sCD14-ST 토끼 폴리클론 항체(S68 항체)용액, B/F 분리용 세정액, 기질 용액 등으로 이루어지고, 후술하는 자동 면역 발광 측정 장치에 등재(收載)되도록 카트리지에 봉입되어 있다.

측정에는, 특허 제 3115501호 공보 등에 개시되어 있는 것과 동일한 자성 입자를 사용한 면역 측정을 자동적으로 수행할 수 있는 자동 면역 발광 측정 장치(패쓰패스트(パスファ-スト):미쯔비시 가가쿠 메디엔스 가부시키 가이샤 제품)을 이용했다. 상기 장치는, 액체의 흡인·토출 라인으로서 배설된 칩(チップ) 내에서 자력에 의해 효과적으로 B/F 분리를 수행할 수 있어, 높은 세정 효율을 보인다. 상기 장치의 측정 스텝은 하기와 같다.

또한, 기질로서는, 화학 발광 기질 「CDP-Star」(트로픽(トロピックス) 사 제품)를 사용하고, 광전자 증배관(PMT)에 의해 검출된 발광 카운트를 측정 결과로 했다.

자동 측정용 카트리지에, 시료, 시료 희석액, 자성 입자 용액 (제 1 항체가 담지되어 있다), B/F 분리용 세정액, 제 2 항체 용액, 기질 용액 등을 충전(充塡)하고, 장치에 세트(セット)한다.

이하, 통상의 운전 방법에 따라서, 각 조작이 수행된다.

(1) 희석액을 사용하여 임의의 희석 배율로 조정된 시료 용액, 자성 입자 용액 및 제 2 항체 용액을 혼합하여, 항원 항체 반응을 수행시켜 면역 복합체를 생성시킨다.

(2) 미반응 물질을 제거하기 위해 B/F 분리를 수행한다. 먼저 액체 흡인 라인으로 설정(セット)된 칩을 통해서 반응액을 흡인하고, 자석을 칩 외벽면에 접촉시켜 자성 입자를 포집한다. 다음으로, 자성 입자가 칩 내벽면에 흡착 유지되는 상태에서 용액을 토출하여 분리를 수행한 후, 다른 반응 용기에 충전된 B/F 분리용 세정액을 흡인·토출해서 세정을 수행한다.

(3) 상기 칩 외벽면으로부터 자석을 이탈시켜 자력의 영향을 없앤 후에, 기질 용액을 흡인·토출해서, 칩 내벽면에 흡착 유지되는 자성 입자를 분산시켜서, 효소 반응을 수행한다.

(4) PMT에 의해 발광량을 측정한다.

《실시예 2: 전혈 검체, 혈장 검체, 혈청 검체를 단시간 보존한 경우의 측정값에 관한 검토》

전혈 검체, 혈청 검체, 혈장 검체에 있어서, 실온에서 소정 시간 정치(靜置) 보존한 후, 실시예 1의 측정 방법에 따라, 인간 sCD14-ST의 측정을 실시했다.

구체적으로는, 항응고제 (헤파린 또는 EDTA)를 포함하는 채혈관을 이용하여 건강한 보통 사람 3명으로부터 채취한 전혈 검체, 혈장 검체, 혈청 검체를 실온에서 0 시간, 1 시간, 2 시간, 3 시간, 4 시간, 5 시간, 6 시간, 8 시간 또는 10 시간 (전혈 검체 및 혈장 검체만) 정치 보존하고, 그때마다 측정을 수행하여 각 검체의 측정값의 경시 변화를 확인했다. 혈청 검체로서는, 플레인 채혈관 (테르모(テルモ) 사 제품)으로 채취한 후, 원심 혈청 분리한 시료를 이용해서 수행했다. EDTA 혈장 검체는 EDTA 채혈관 (테르모 사 제품)을 사용하고, 헤파린 혈장 검체는 헤파린 채혈관 (테르모 사 제품)를 사용하여 조제하였다. 전혈 검체에 대해서는 상기의 채혈관에서 채취한 후, 혈장 분리하지 않고 그대로 사용했다.

헤파린 채혈관을 사용하여 조제한 전혈 검체 및 혈장 검체의 결과를 도 1 ~ 도 3 (검체 1 ~ 검체 3)에, EDTA 채혈관을 사용하여 조제한 전혈 검체 및 혈장 검체의 결과를 도 4 ~ 도 6 (검체 1 ~ 검체 3)에 나타낸다. 각각, 채취하여 곧바로 처리한 후 측정한 검체의 값을 100 %로 해서, 그에 대한 증감을 %로 보여주었다. 또한 90 % ~ 110 % 이내의 값을 안정한 것으로 평가했다. 전혈 검체는 채혈 후 5 ~ 8 시간 이후부터 측정값이 상승하는 경향이 있고, 같은 조건에서 정치 보존한 혈장 검체의 측정값에는 변화가 발견되지 않았다. 또한, EDTA 채혈관으로 조제한 전혈 검체의 측정값은, 6 시간까지만 안정하고, 헤파린 채혈관으로 조정한 전혈 검체의 측정값은 4 시간까지만 안정하였다.

또한, 데이터가 나타나지 않으나, 전혈 검체에 과도한 물리적 충격, 예를 들면, 교반 조작을 실시하면, 측정값의 현저한 상승이 확인되었다.

혈청 검체의 결과를 도 7에 나타낸다. 같은 조건에서 정치 보존한 혈청 검체의 측정값에는 변화가 발견되지 않았다.

또한 데이터가 나타나지 않으나, 혈청 검체 및 혈장 검체의 측정값은 최소 24 시간까지 실온 정치했을 경우에 대해서도 충분한 안정성을 보여주는 것을 확인했다.

《실시예 3: 전혈 검체의 안정성의 검토》

전혈 검체의 측정값의 불안정성이 무엇에서 유래하는 것인가 검토했다.

조건 1 : 전혈 검체

조건 2 : 전혈 검체를 실온에서 각 시간 정치 보존하고, 측정 전에 혈장 분리를 실시한 혈장

조건 3 : 혈장 검체

검체의 조제 방법 및 측정 방법은, 모두 헤파린 채혈관을 사용하여 실시예 2에 따랐다. 결과를 도 8에 나타낸다. 실시예 1과 마찬가지로, 전혈 검체 (조건 1)는 4 시간 이후 측정값의 상승이 인정되었지만, 혈장 검체 (조건 3)는 8 시간까지 안정하였다. 한편, 조건 2에서 각 시간 보존한 전혈 검체로부터 분리한 혈장 검체는, 전혈 검체 (조건 1)와 동일하게 측정값의 상승이 확인되었다.

이상에 의해 측정값의 상승은, 혈장 성분 유래가 아니고 혈구 성분 유래임이 시사(示唆)되었다. 전혈 검체를 채취 후 4 시간 이내에 그대로 측정할 필요가 있는 것에 덧붙여서, 전혈 검체를 채취 후 4 시간 이내에 혈장 분리하지 않으면, 분리 후의 측정값의 상승이 확인되므로, 정확한 측정값을 얻기 위해서는 채취 후 4 시간 이내에 혈장 분리가 필요하다는 것을 알 수 있었다.

《참고예 1》

건강한 보통 사람 3명으로부터 항응고제 (헤파린 또는 EDTA)를 포함하는 채혈관을 이용하여 전혈 검체를 채취하여, 실온에서 0 시간, 2 시간, 4 시간, 8 시간 정치 보존하고, 그때마다 시판하는 CRP 측정 시약 (PATHFAST hs CRP 측정 시약; 미츠비시 가가쿠 메디엔스 가부시키가이샤 제품)를 사용하여, 측정값의 경시 변화를 확인했다. 검체의 조제 방법 및 측정 방법은, 시약이 CRP 측정 시약인 것을 제외하고 실시예 2와 동일하게 실시했다.

결과를 도 9 (헤파린 채혈관) 및 도 10 (EDTA 채혈관)에 나타낸다. 실시예 2의 인간 sCD14-ST의 경우와 같이, 채혈 후 4 시간 이후에 측정값이 상승하는 것 같은 경향은 없고, CRP는 전혈 검체 중에서 안정한 것이 확인됐다.

(산업상 이용 가능성)

본 발명의 분석 방법은 예를 들어, 패혈증의 진단에 이용할 수 있다.

이상, 본 발명을 특정의 태양에 따라 설명했지만, 당업자에게 자명한 변형이나 개량은 본 발명의 범위에 포함된다.

<110> Mitsubishi Chemical Medience Corporation Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. <120> Human sCD14-ST assay method <130> PI10368 <150> JP 2010-018340 <151> 2010-01-29 <160> 2 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Thr Thr Pro Glu Pro Cys Glu Leu Asp Asp Glu 1 5 10 <210> 2 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Arg Val Asp Ala Asp Ala Asp Pro Arg Gln Tyr Ala Asp Thr Val Lys 1 5 10 15

Claims

혈구 성분을 포함하는 전혈 검체의 채취로부터 6 시간 이내에 상기 검체 중의 인간 sCD14-ST를 분석하되,
EDTA 채혈관에 의해 전혈 검체를 채취한 경우에는 6시간 이내에 분석을 실시하고, 헤파린 채혈관에 의해 전혈 검체를 채취한 경우에는 4시간 이내에 분석을 실시하는 것을 특징으로 하는 인간 sCD14-ST의 분석 방법.
전혈 검체의 채취로부터 4 시간 이내에 상기 검체 중의 인간 sCD14-ST를 분석하는, 청구항 1에 기재된 인간 sCD14-ST의 분석 방법.
전혈 검체 그대로 분석을 실시하는, 청구항 1에 기재된 인간 sCD14-ST의 분석 방법.
전혈 검체 그대로 분석을 실시하는, 청구항 2에 기재된 인간 sCD14-ST의 분석 방법.
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