ES2693098T3 - Procedimiento de análisis de sCD14-ST humana - Google Patents
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Abstract
Un procedimiento para analizar sCD14-ST humana, caracterizado por analizar sCD14-ST humana en una muestra de sangre entera sin separación de plasma dentro de las 6 horas posteriores a la recolección de la muestra.
Description
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DESCRIPCION
Procedimiento de analisis de sCD14-ST humana Campo tecnico
La presente invencion se refiere a un procedimiento para analizar sCD14-ST humana, la cual es conocida como marcador para diagnostico de sepsis.
El termino "analisis" como se usa en este documento incluye una deteccion para juzgar la presencia o ausencia de sCD14-ST humana como sustancia a analizar, y una medicion para determinar cuantitativa o semicuantitativamente la cantidad de la sustancia a analizar.
Tecnica antecedente
La molecula CD14 fue citada como una protema identificada por una familia de anticuerpos que reconocen una glicoprotema expresada en la superficie de la membrana de monocitos en la Third Leukocyte Typing Conference in 1986. En 1990, Wright et al. elucido que la molecula CD14 era un receptor para una endotoxina, LPS (literatura diferente de patente 1). La molecula de CD14 es una glicoprotema que tiene un peso molecular de 53 a 55 kDa, y los analisis en ADNc revelaron que el ARNm de 1.4 kb tiene una secuencia codificante de 356 aminoacidos (literatura diferente de patente 2).
Las moleculas CD14 humanas incluyen CD14 soluble asf como CD14 unida a la membrana, y se sabe que en la sangre esta presente una pluralidad de subtipos CD14 solubles que tienen diferentes pesos moleculares. Dentro de estos subtipos CD14 solubles, se conocen dos CD14 solubles de aproximadamente 55 kDa y 49 kDa (cD14 soluble de alto peso molecular) y un subtipo CD14 soluble de bajo peso molecular de aproximadamente 13 kDa (en lo sucesivo denominada sCD14-ST humana), y la sCD14-ST humana es clmicamente util como marcador para diagnostico de sepsis (literatura de patentes 1)
Con respecto a la sCD14-ST humana, la literatura de patentes 1 revela que cuando las muestras de suero se congelan y descongelan repetidamente, o se dejan reposar a temperatura ambiente durante un tiempo prolongado, se asume que la sCD14-ST humana en las muestras de suero se descompone y no se puede medir en algunos casos, o se supone que la CD14 de alto peso molecular en las muestras de suero se descompone en sCD14-ST humana o sus estructuras similares y conduce a valores medidos incorrectos (parrafo [0151]). La literatura de patentes 1 tambien describe que la sCD14-ST humana se genera digiriendo la longitud total de CD14 con proteasas tales como elastasa, y que la generacion de sCD14-ST esta presente de manera estable en el cuerpo vivo (en suero) al menos en cantidades detectables (parrafo [0126]).
Como se describio anteriormente, los casos en que se obtienen valores medidos incorrectos cuando las muestras de suero se congelan y descongelan, o se dejan reposar a temperatura ambiente durante un tiempo prolongado, se asumen en la Literatura de patentes 1, pero es informacion general sobre las condiciones de almacenamiento de los espedmenes, y no advierte de ningun manejo especial. La literatura de patentes 1 describe mas bien que la sCD14- ST humana es estable en el cuerpo vivo y en suero.
Lista de citas Literatura no de patente
[Literatura no de patente 1] Science (Estados Unidos), 1990, vol. 249, p. 1431-1433 [Literatura node patente 2] Nucleic Acids Research (Reino Unido), 1988, vol. 16, p. 4173
Literatura de patentes
[Literatura de patentes 1] Patente Japonesa No. 4,040,666 Sumario de la invencion
Problema tecnico
En las circunstancias en las que se sabe que la sCD14-ST humana esta presente de forma relativamente estable en suero, los presentes inventores han llevado a cabo estudios intensivos para desarrollar un procedimiento mas preciso para analizar sCD14-ST humana contenida en muestras que incluyen muestras de plasma y sangre entera, y como resultado, inesperadamente se encontro que los valores medidos de sCD14-ST humana se vieron afectados cuando se usaron muestras de sangre entera.
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La presente invencion se ha realizado en base a este hallazgo. Un objeto de la presente invencion es proporcionar un procedimiento de analisis capaz de medir con precision la sCD14-ST humana, incluso cuando se usa una muestra de sangre entera.
Solucion al problema
El problema se puede resolver mediante la presente invencion, es decir, un procedimiento para analizar sCD14-ST humana, caracterizado por analizar sCD14-ST humana en una muestra de sangre entera dentro de las 6 horas posteriores a la recoleccion de la muestra.
El termino "sCD14-ST humana" (tambien denominada Presepsina (marca registrada)) como se usa en el presente documento significa el "antfgeno CD14 soluble del primer aspecto" descrito en la Patente Japonesa No. 4,040,666, y mas particularmente, es un antfgeno CD14 soluble que tiene las siguientes caractensticas:
1) Peso molecular de 13 ± 2 kDa, medido por SDS-PAGE en condiciones no reductoras;
2) Tiene la secuencia de aminoacidos de SEQ ID NO: 1 en la secuencia N-terminal; y
3) Union espedfica a un anticuerpo preparado usando un peptido que consiste en 16 residuos de aminoacidos de la SEQ ID NO: 2 como antfgeno.
SEQ ID NO: 1 :
Thr Thr Pro Glu Pro Cys Glu Leu Asp Asp Glu 1 5 10
SEQ ID NO: 2 :
Arg Val Asp Ala Asp Ala Asp Pro Arg Gin 15 10
Tyr Ala Asp Thr Val Lys
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Efectos ventajosos de la invencion
De acuerdo con la presente invencion, la sCD14-ST humana, que es estable en muestras de suero o plasma, pero cuyos valores medidos fluctuan con el transcurso del tiempo en muestras de sangre entera, puede analizarse con precision usando una muestra de sangre entera, sin preparar una muestra de suero o plasma de la muestra de sangre entera.
Breve descripcion de los dibujos
La FIG. 1 es un grafico que muestra los resultados de la medicion de sCD14-ST humana en muestras de sangre entera y muestras de plasma (especimen 1) que se prepararon utilizando tubos con heparina para recoleccion de sangre y se dejaron reposar a temperatura ambiente durante periodos de tiempo predeterminados (0, 1 hora, 2 horas, 3 horas, 4 horas, 5 horas, 6 horas, 8 horas y 10 horas).
La FIG. 2 es un grafico que muestra los resultados de la medicion de sCD14-ST humana en muestras de sangre entera y muestras de plasma (especimen 2) que se prepararon usando tubos con heparina para recoleccion de sangre y se dejaron reposar a temperatura ambiente durante periodos de tiempo predeterminados (0, 1 hora, 2 horas, 3 horas, 4 horas, 5 horas, 6 horas, 8 horas y 10 horas).
La FIG. 3 es un grafico que muestra los resultados de la medicion de sCD14-ST humana en muestras de sangre entera y muestras de plasma (especimen 3) que se prepararon usando tubos con heparina para recoleccion de sangre y se dejaron reposar a temperatura ambiente durante periodos de tiempo predeterminados (0, 1 hora, 2 horas, 3 horas, 4 horas, 5 horas, 6 horas, 8 horas y 10 horas).
La FIG. 4 es un grafico que muestra los resultados de la medicion de sCD14-ST humana en muestras de sangre entera y muestras de plasma (especimen 1) que se prepararon usando tubos con EDTA para recoleccion de sangre y se dejaron reposar a temperatura ambiente durante periodos de tiempo predeterminados (0, 1 hora, 2 horas, 3 horas, 4 horas, 5 horas, 6 horas, 8 horas y 10 horas).
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La FIG. 5 es un grafico que muestra los resultados de la medicion de sCD14-ST humana en muestras de sangre entera y muestras de plasma (especimen 2) que se prepararon usando tubos con EDTA para recoleccion de sangre y se dejaron reposar a temperatura ambiente durante periodos de tiempo predeterminados (0, 1 hora, 2 horas, 3 horas, 4 horas, 5 horas, 6 horas, 8 horas y 10 horas).
La FIG. 6 es un grafico que muestra los resultados de la medicion de sCD14-ST humana en muestras de sangre entera y muestras de plasma (especimen 3) que se prepararon usando tubos con EDTA para recoleccion de sangre y se dejaron reposar a temperatura ambiente durante periodos de tiempo predeterminados (0, 1 hora, 2 horas, 3 horas, 4 horas, 5 horas, 6 horas, 8 horas y 10 horas).
La FIG. 7 es un grafico que muestra los resultados de la medicion de sCD14-ST humana en muestras de suero (espedmenes 1 a 3) que se dejaron reposar a temperatura ambiente durante penodos de tiempo predeterminados (0, 1 hora, 2 horas, 3 horas, 4 horas, 5 horas, 6 horas y 8 horas).
La FIG. 8 es un grafico que muestra los resultados de la medicion de sCD14-ST humana en muestras que se dejaron en diversas condiciones (condiciones 1 a 3), con el fin de examinar los factores de inestabilidad de muestras de sangre entera.
La FIG. 9 es un grafico que muestra los resultados de la medicion de CRP en muestras de sangre entera (muestras 1 a 3) que se prepararon usando tubos con heparina para recoleccion de sangre y se dejaron reposar a temperatura ambiente durante periodos de tiempo predeterminados (0, 2 horas, 4 horas y 8 horas).
La FIG. 10 es un grafico que muestra los resultados de la medicion de CRP en muestras de sangre entera (muestras 1 a 3) que se prepararon usando tubos con EDTA para recoleccion de sangre y se dejaron reposar a temperatura ambiente durante periodos de tiempo predeterminados (0, 2 horas, 4 horas y 8 horas).
Descripcion de realizaciones
El procedimiento de analisis de la presente invencion se puede llevar a cabo de acuerdo con procedimientos de analisis conocidos para sCD14-ST humana, excepto que se usa una muestra de sangre entera como muestra para analizar, y que su analisis se lleva a cabo dentro de las 6 horas posteriores a la coleccion de la muestra.
La sCD14-ST humana se puede analizar usando diversos procedimientos de analisis conocidos para protemas, por ejemplo, procedimientos de analisis inmunologicos que usan uno o mas anticuerpos, o procedimientos bioqmmicos tales como electroforesis, y se puede usar un analizador automatico para ensayos clmicos.
Por ejemplo, la Patente Japonesa No. 4,040,666 describe un procedimiento para medir sCD14-ST humana, mas particularmente, un sistema EIA tipo sandwich [Ejemplo 7-(1) de la Patente Japonesa No. 4,040,666] usando la combinacion de un anticuerpo policlonal (anticuerpo S68) o un anticuerpo monoclonal (anticuerpo F1146-17-2) preparado usando un peptido (peptido S68 descrito en la Patente Japonesa No. 4,040,666) que consiste en 16 residuos de aminoacidos de la SEC ID No: 2 como antfgeno, y un antfgeno anti-CD14 anticuerpo monoclonal (por ejemplo, anticuerpo F1031-8-3 o anticuerpo F1106-13-3), y se puede aplicar al procedimiento de analisis de la presente invencion.
En el procedimiento de analisis utilizado en los Ejemplos descritos mas adelante, la sCD14-ST humana contenida en cada muestra se une a latex magnetico recubierto con un anticuerpo monoclonal de raton anti-sCD14-ST (anticuerpo F1106-13-3) y un anticuerpo policlonal de conejo anti-sCD14-ST (anticuerpo S68) marcado con ALP (fosfatasa alcalina) para formar un inmunocomplejo mediante una reaccion antfgeno-anticuerpo; el exceso de anticuerpo policlonal de conejo anti-sCD14-ST marcado con ALP se elimina del inmunocomplejo; y la actividad enzimatica de ALP del inmunocomplejo se mide mediante un inmunoensayo enzimatico quimioluminiscente (CLEIA) usando un sustrato luminiscente (CDP-Star; Tropix) para determinar la concentracion de sCD14-ST humana contenida en la muestra.
En el procedimiento de analisis de la presente invencion, se usa una muestra de sangre entera como muestra para analizar. La muestra de sangre entera puede recogerse mediante una operacion normal, es decir, usando un tubo de recoleccion de sangre que contiene un anticoagulante tal como heparina, EDTA o acido dtrico.
La muestra de sangre entera recogida usando un tubo de recoleccion de sangre puede ser agitada varias veces. De acuerdo con los hallazgos de los presentes inventores que incluyen los Ejemplos presentados mas adelante, cuando se mide sCD14-ST humana contenida en una muestra de sangre entera, los valores medidos pueden fluctuar con el transcurso del tiempo en algunos casos, y un choque ffsico excesivo al preparar la muestra o transportar la muestra puede ser un factor que afecte los valores medidos en algunos casos.
En el procedimiento de analisis de la presente invencion, el analisis se lleva a cabo dentro de las 6 horas (preferiblemente dentro de las 4 horas) posteriores a la recoleccion de la muestra. La expresion "el analisis se lleva a
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cabo dentro de las 6 horas" como se usa en el presente documento significa que el analisis comienza dentro de las 6 horas.
Mas particularmente, es preferible que cuando la muestra de sangre entera se recolecta usando un tubo con EDTA para recoleccion de sangre, el analisis se lleve a cabo dentro de las 6 horas, y es preferible que cuando la muestra de sangre entera se recolecte usando un tubo con heparina para recoleccion de sangre, el analisis se lleve a cabo dentro de las 4 horas.
Como se muestra en los datos experimentales concretos descritos en los Ejemplos que siguen, se observo un aumento en los valores medidos de sCD14-ST humana en muestras de sangre entera de personas sanas, incluso cuando la medicion fue despues de 6 a 8 horas desde la recoleccion de sangre, penodo en el cual no se observan cambios en los valores medidos en muestras de plasma o muestras de suero. Se sabe que el valor medido de sCD14-ST humana es 50 veces diferente entre personas sanas y pacientes con sepsis, y la concentracion de sCD14-ST humana contenida en la sangre de personas sanas es extremadamente baja. Esto permite diagnosticar la sepsis con alta sensibilidad y alta especificidad estableciendo un valor de corte apropiado (Ejemplo 12 de literatura de patentes 1). Sin embargo, cuando los valores medidos de sCD14-ST humana en personas sanas aumentan con la progresion del tiempo despues de recolectar una muestra de sangre total, existe la posibilidad de que el juicio de si el valor medido es mas bajo o mas alto que el valor de corte sea diferente dependiendo del tiempo de medicion. En estas circunstancias, los presentes inventores encontraron que los valores medidos de sCD14-ST humana en una muestra de sangre entera no fluctuaron dentro de las 6 horas (preferiblemente dentro de las 4 horas) de la recoleccion de una muestra. Dado que el procedimiento de analisis de la presente invencion se lleva a cabo dentro de las 6 horas posteriores a la recoleccion de una muestra de sangre entera, la sCD14-ST humana puede medirse con precision sin un aumento en los valores medidos.
Ejemplos
La presente invencion se ilustrara ahora adicionalmente mediante, pero sin limitarse de manera alguna a, los siguientes Ejemplos.
<< Ejemplo 1: Procedimiento de medicion de la sCD14-ST humana en muestras >>
Cada muestra para medir sCD14-ST humana se midio usando reactivos para medir sCD14-ST humana. Estos reactivos inclman una solucion de latex magnetico recubierto con un anticuerpo monoclonal de raton anti-sCD14-ST (anticuerpo F1106-13-3, Patente Japonesa No. 4,040,666) como primera solucion de anticuerpos, una solucion de un anticuerpo policlonal de conejo anti-sCD14-ST (anticuerpo S68) marcado con ALP (fosfatasa alcalina) como segunda solucion de anticuerpo, una solucion de lavado para separacion B/F, una solucion de sustrato y similares, y se envasaron en un cartucho aplicable a un inmunoanalizador luminiscente automatico descrito a continuacion.
Se uso para la medicion un inmunoanalizador luminiscente automatico (PATHFAST; Mitsubishi Chemical Medience Corporation), que es similar al descrito en la Patente Japonesa No. 3,115,501 y que puede realizar automaticamente un inmunoensayo usando partfculas magneticas. Este aparato es capaz de realizar eficientemente la separacion B/F por fuerza magnetica en una punta dispuesta como una unidad de succion y descarga de lfquido, y exhibe una alta eficiencia en el lavado. Los pasos de medicion del aparato son los siguientes.
Se utilizo un sustrato quimioluminiscente "CDP-Star" (Tropix) como sustrato, y los recuentos de emision detectados por un tubo fotomultiplicador (PMT) se consideraron como los resultados de la medicion.
Cada cartucho para una medicion automatica se lleno con cada muestra, una solucion diluyente de muestra, la solucion de partfculas magneticas (recubiertas con el primer anticuerpo), el lfquido de lavado para la separacion B/F, la solucion del segundo anticuerpo, la solucion de sustrato, y similares, y se cargo en el analizador automatizado. Los siguientes pasos se llevaron a cabo de acuerdo con el procedimiento normal:
(1) La solucion de muestra previamente ajustada a una relacion de dilucion predeterminada con una solucion diluyente de muestra, la solucion de partfculas magneticas y la solucion del segundo anticuerpo se mezclaron para generar un inmunocomplejo mediante una reaccion antfgeno-anticuerpo.
(2) Se llevo a cabo una separacion B/F para eliminar las sustancias sin reaccionar de la siguiente manera. La solucion de reaccion resultante se aspiro en la punta dispuesta como una unidad para aspirar una solucion, y las partfculas magneticas se atraparon por contacto con un iman en la pared exterior de la punta. La solucion se descargo de la punta mientras las partfculas magneticas quedaban atrapadas en la pared interna de la punta. Despues de la separacion, se aspiro el lfquido de lavado para la separacion B/F mantenida en otro recipiente de reaccion y se descargo para lavar las partfculas magneticas en la punta.
(3) El iman fue retirado de la pared externa de la punta. La solucion de sustrato se aspiro y se descargo para dispersar las partfculas magneticas atrapadas en la pared interna de la punta y llevar a cabo una reaccion enzimatica.
(4) La cantidad de luminiscencia se midio por PMT.
<< Ejemplo 2: Examen de los valores medidos en muestras de sangre entera, plasma y suero despues del almacenamiento a corto plazo >>
Se dejaron reposar muestras de sangre entera, muestras de suero y muestras de plasma a temperatura ambiente durante periodos de tiempo predeterminados, y luego se usaron para medir sCD14-ST humana de acuerdo con el 5 procedimiento de medicion descrito en el Ejemplo 1.
Mas particularmente, se dejaron reposar a temperatura ambiente durante 0, 1 hora, 2 horas , 3 horas, 4 horas, 5 horas, 6 horas, 8 horas o 10 horas, muestras de sangre entera, muestras de suero y muestras de plasma, que se habfan recolectado de tres personas sanas usando tubos de recoleccion de sangre que conteman un anticoagulante (heparina o EDTA), (solo para las muestras de sangre y las muestras de plasma), y cada medicion se llevo a cabo 10 de inmediato en cada punto de tiempo para confirmar el transcurso en el tiempo de los valores medidos para cada muestra. Como muestras de suero, se recogieron muestras de sangre entera utilizando tubos simples para extraccion de sangre (Terumo) y se centrifugaron y se separaron los sueros, y se usaron estas muestras de suero. Se prepararon muestras de plasma con EDTA usando tubos con EDTA para recoleccion de sangre (Terumo), y se prepararon muestras de plasma de heparina usando tubos con heparina para recoleccion de sangre (Terumo). Las 15 muestras de sangre entera se recogieron usando los tubos para extraccion de sangre anteriores, y se usaron directamente sin separacion de plasma.
Los resultados de las muestras de sangre entera y las muestras de plasma preparadas usando tubos con heparina para recoleccion de sangre se muestran en las Figuras 1 a 3 (muestras 1 a 3) y los resultados de las muestras de sangre entera y las muestras de plasma preparadas usando tubos con EDTa para recoleccion de sangre se 20 muestran en las Figuras 4 a 6 (muestras 4 a 6). Cuando el valor medido despues de que las muestras fueron recolectadas e inmediatamente tratadas se considero como 100 %, cada incremento o disminucion del valor inicial se indica como porcentaje en las Figuras 1 a 6. Los valores dentro del rango de 90 % a 110 % se evaluan como "estable". Los valores medidos en las muestras de sangre total tendieron a aumentar despues de 5 a 8 horas desde la recoleccion de la sangre, pero no se observaron cambios en los valores medidos en las muestras de plasma que 25 se habfan dejado reposar en las mismas condiciones. Los valores medidos en las muestras de sangre entera preparadas usando tubos con EDTA para recoleccion de sangre fueron estables durante 6 horas, y los valores medidos en las muestras de sangre entera preparadas usando tubos con heparina para recoleccion de sangre fueron estables durante 4 horas.
Ademas, cuando se aplicaba un choque ffsico excesivo, tal como agitacion, a las muestras de sangre entera, se 30 observo un aumento notable en los valores medidos (datos no mostrados).
Los resultados de las muestras de suero se muestran en La FIG. 7. No se detectaron cambios en las muestras de suero que se habfan dejado reposar en las mismas condiciones.
Ademas, se confirmo que los valores medidos eran suficientemente estables en las muestras de suero y las muestras de plasma, incluso cuando se habfan dejado reposar a temperatura ambiente durante al menos 24 horas 35 (datos no mostrados).
<< Ejemplo 3: Examen de estabilidad de muestras de sangre entera >>
Se examino la causa de la inestabilidad de los valores medidos de las muestras de sangre entera.
Condicion 1: Muestra de sangre entera
Condicion 2: Muestra de plasma preparada al permitir que la muestra de sangre entera permanezca a 40 temperatura ambiente durante periodos de tiempo predeterminados y se realice la separacion de plasma
antes de la medicion
Condicion 3: Muestra de plasma
La preparacion y la medicion de las muestras se llevaron a cabo utilizando tubos con heparina para recoleccion de sangre, de acuerdo con el Ejemplo 2. Los resultados se muestran en La FIG. 8. Los valores medidos en las 45 muestras de sangre entera (Condicion 1) aumentaron despues de 4 o mas horas despues de la recoleccion de sangre, como se muestra en el Ejemplo 1, mientras que los valores medidos en las muestras de plasma (Condicion 3) fueron estables durante 8 horas. Por el contrario, se observo un aumento en los valores medidos en las muestras de plasma de la Condicion 2, que se habfan separado de las muestras de sangre entera almacenadas durante periodos de tiempo predeterminados, de forma similar a las muestras de sangre entera (Condicion 1).
50 A partir de estos resultados, se sugirio que el aumento en los valores medidos fue causado por factores no de componentes del plasma, sino de componentes de las celulas sangumeas. Fue necesario medir una muestra de sangre entera directamente dentro de las 4 horas posteriores a la extraccion de sangre y, a menos que se realizara la separacion plasmatica dentro de las 4 horas posteriores a la extraccion de sangre de una muestra de sangre
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entera, se observo un aumento en los valores medidos despues de la separacion de plasma, y por lo tanto, se encontro que la separacion del plasma dentro de las 4 horas posteriores a la extraccion de sangre era necesaria para obtener valores medidos precisos.
<< Ejemplo de referencia 1 >>
Se tomaron muestras de sangre entera de tres personas sanas utilizando tubos de extraccion de sangre que conteman un anticoagulante (heparina o EDTA), y se dejaron reposar a temperature ambiente durante 0, 2 horas, 4 horas y 8 horas, y cada medicion se llevo a cabo inmediatamente. en cada punto de tiempo, utilizando un reactivo de medicion de CRP disponible en el mercado (reactivo de medicion PATHFAST hs CRP; Mitsubishi Chemical Medience Corporation) para confirmar el transcurso en el tiempo de los valores medidos para cada muestra. La preparacion y la medicion de las muestras se llevaron a cabo de acuerdo con el Ejemplo 2, excepto que se uso el reactivo de medicion de CRP.
Los resultados se muestran en La FIG. 9 (tubo con heparina para recoleccion de sangre) y La FIG. 10 (tubo con EDTA para recoleccion de sangre). A diferencia del caso de la sCD14-ST humana en el Ejemplo 2, los valores medidos no tienden a aumentar despues de 4 o mas horas desde la recoleccion de sangre, y se confirmo que la PCR era estable en muestras de sangre entera.
Aplicabilidad industrial
El procedimiento de analisis de la presente invencion se puede usar, por ejemplo, en el diagnostico de sepsis. Listado de secuencias
<110> Mitsubishi Chemical Medience Corporation Mochida Pharmaceutical Co., Ltd.
<120> Procedimiento de analisis de sCD14-ST humana
<130> MCM-870 <150> JP 2010-018340 <151> 2010-01-29
<160>2
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 11
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 1
Thr Thr Pro Glu Pro Cys Glu Leu Asp Asp Glu 15 10
<210> 2 <211> 16 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 2
Claims (4)
- REIVINDICACIONES1. Un procedimiento para analizar sCD14-ST humana, caracterizado por analizar sCD14-ST humana en una muestra de sangre entera sin separacion de plasma dentro de las 6 horas posteriores a la recoleccion de la muestra.
- 2. El procedimiento de acuerdo con la reivindicacion 1, en el que la sCD14-ST humana en la muestra de sangre 5 entera se analiza dentro de las 4 horas posteriores a la recoleccion de la muestra.
- 3. El procedimiento de acuerdo con la reivindicacion 1 o 2, en el que el analisis se lleva a cabo usando una muestra de sangre entera no tratada.
- 4. El procedimiento de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que la muestra de sangre entera se recoge utilizando un tubo con heparina para recoleccion de sangre o un tubo con EDTA para recoleccion10 de sangre.
imagen1 too%t specimen 1160%Sana re enters160%Plasma140%120%cl 80%60%40%Tiempo de almacenamiento (hora)Figura 2Tubo con he par in a para recoleccion de sanqretspedmen 2130%Sang re entera160%Plasma140%- 120%E. 100%00%60%40%Tiempo de aimacenamiento (hora)imagen2 120%Espedmen 3180%160%Sangre entersPlasma140%120%100%BQ%60%40%Tiempode almacenamiento [hora)Figura 4Tubo con edtA para recolecci6n de sangretsp^omen 11B0%160%Sangre entersD ™22 140%Plasma100%80%60%40%Tiempo de almacenamiento [hora)imagen3 —Sangre enieraPlasmaE specimen 2iao%160%Sangre wierePlasma140%120%100%60%40%Tiempo de almacenamiento (hora)Figura 6Tubo con EuTA para reco ettion de sangreEspetimen 3180%160%140%* 120%100%80%60%40%Tiempo de almacenamiento (hora)imagen4 imagen5 imagen6 Tubes con hepanna para recoleccibn de sang reieo%Espies mem160%-0-fcspedmen2-MHEZspecsmena140%v 120%100%B0%60%4C%Tiampo de alrnacenamienlo {hora)Figura 10Tuba con EDTA para recoleccion de sangre180%Espedmen 1160%-OE specimen 2140%120%100%eo%60%40%Tiempo de almacenamento (hora)
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