KR101891822B1 - 강낭콩 추출물을 함유하는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 강낭콩 추출물을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염 예방 또는 치료용 약제학적 조성물 및 기능성 식품에 관한 것이다. 본 발명은 강낭콩 추출물을 유효성분으로 함유하는 신규한 약제학적 조성물 및 기능성 식품을 제공함으로써, 아토피 피부염을 효과적으로 억제하고 치료할 수 있다.

Description

강낭콩 추출물을 함유하는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 조성물{Composition for Preventing or Treating Atopic Dermatitis Comprising Kidney Bean Extracts}

본 발명은 강낭콩 추출물을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염 예방 또는 치료용 약제학적 조성물, 또는 아토피 피부염 개선용 기능성 식품에 관한 것이다.

아토피 피부염(Atopic dermatitis; AD)은 흔하게 발생하는 만성적인 염증성 피부질환으로서, 종종 음식 알러지, 천식 또는 비염 등의 알러지 질환으로 진행되기도 한다. 아토피 피부염은 주기를 두고 발작적으로 가려움증이 나타나며, 이 가려움증으로 인하여 반성 구진, 습진성 병변, 태선화, 선상의 미란 등의 특징적인 피부 병변이 끊임없이 변화하면서 완화와 호전을 되풀이하는 것이 특징이다.

아토피 피부염은 만성 또는 재발성의 습진성 피부염으로 소양증을 특징으로 급성기에는 표피 내에 수포를 형성하며, 만성기에는 인설과 피부의 비후를 동반한다. 아토피 피부염은 주로 어린이에게 자주 나타나 환자의 건강과 삶의 질에 심각한 영향을 미칠 수 있는 질환이다.

아토피 피부염의 주된 면역학적 변화는 IgE의 증가와 T helper 유형1(Th1) 세포와 T helper 유형2(Th2) 세포의 불균형이다. 아토피 피부염 환자에서 Th1 세포는 활성이 감소하므로 Th1 세포에 의해 유도되는 사이토카인(cytokine)인 인터루킨(IL)-2, 인터페론(IFN)-γ는 감소하고, Th2세포는 활성이 증가하므로 이에 의해 유도되는 사이토카인인 IL-4, IL-5, IL-6 및 IL-10은 증가한다. 또한 피부 조직의 염증 및 손상에 의해 IL-3, Il-4, Il-5, IL-10, 및 과립구 대식세포 집단 자극 인자 (Granulocyte-macrophage colony stimulating factor, GM-CSF)의 과잉 발현이 일어나며, 염증성 사이토카인인 IL-8도 증가하게 된다.

이러한 급성 아토피성 피부염에 대한 표준 치료제로서 국소 코르티코스테로이드(corticosteroids)가 사용되고 있으나, 피부 유전자에 부작용을 야기하는 것이 보고되고 있어(Lubach D. et al., Dermatologica, 1989, 179, 67-72), 스테로이드를 포함하지 않고 오랜 기간 사용하여도 안전한 항염증 인자의 개발이 필요한 실정이다.

이와 관련하여, 현재는 국소 면역저해제인 타크로리무스(tacrolimus)가 아토피성 피부염의 치료에 사용되고 있다. 타크로리무스는 상대적으로 작은 분자 크기를 가짐에 따라 피부에 효과적으로 침투하므로, 국소 연고 제제의 형태로 사용되고 있다(Akhavan A. et al., Semin Cutan Med Surg., 2008, 27, 151-155). 타크로리무스는 코르티코스테로이드에 의한 부작용의 일종인 콜라겐 합성 또는 피부 경화증을 야기하지 않으며, 얼굴 또는 목 등과 같이 피부가 얇고 매우 취약한 부분에도 안전하게 사용할 수 있다. 그러나, 타크로리무스를 오랜 기간 사용하면 효과가 반감되며, 부작용이 발생할 수 있다는 연구가 보고되고 있음에 따라, 아토피성 피부염을 치료하기 위한 새로운 약제의 개발이 요구되고 있다.

한편, 강낭콩은 쌍떡잎식물 장미목 콩과의 한해살이 식물로서 식용으로 이용하는 것 외에 민간요법 다양한 질환의 개선을 위해 사용되고 있다. 대한민국 등록특허 제10-0574848호에서는 강낭콩 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물이 여성 호르몬으로 작용하여 피부 개선 효과가 있다는 것을 기재한 바 있다.

본 발명의 발명자들은 강낭콩 추출물이 아토피성 피부염의 예방 및 치료에 효과적이라는 것을 발견하고 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 강낭콩 추출물을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명의 목적은 강낭콩 추출물을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염 개선용 기능성 식품을 제공하는 것이다.

이와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 강낭콩 추출물을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물을 제공한다.

본 발명에 있어서, 상기 강낭콩 추출물은 강낭콩(Phaseolus vulgaris var. humilis ALEF)의 뿌리 및 덩굴강낭콩(Phaseolus vulgaris L.)의 줄기 추출물을 포함하는 것이 바람직하다.

본 발명에 있어서, 상기 추출물은 강낭콩의 뿌리 및 덩굴강낭콩의 줄기를 건조 및 분말화 하고, 상기 분말화된 강낭콩에 대해 추출 용매로서 물, 메탄올, 에탄올, 아세톤, 에틸아세테이트, 1,3-부틸렌 글리콜(Butylene glycol), 헥산(Hexane), 디에틸 에테르(Diethyl ether), 노말 프로판올(n-Propanol), 이소-프로판올(iso-propanol), 노말-부탄올(nButanol) 또는 이들의 혼합물을 사용해 추출할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 추출물은 강낭콩을 150 내지 200℃로 5 내지 10분간 로스팅한 후 추출한 것이 바람직하다.

본 발명에 있어서, 상기 강낭콩의 뿌리 및 덩굴강낭콩의 줄기는 1:1.5 내지 1:10 또는 10:1 내지 1.5:1의 질량비로 배합될 수 있다.

본 발명은 또한, 강낭콩 추출물을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염의 개선용 기능성 식품을 제공한다.

본 발명에서, 상기 강낭콩 추출물은 강낭콩(Phaseolus vulgaris var. humilis ALEF)의 뿌리 및 덩굴강낭콩(Phaseolus vulgaris L.)의 줄기 추출물을 포함하는 것이 바람직하다.

본 발명은 강낭콩 추출물을 유효성분으로 포함하는 신규한 약제학적 조성물 또는 기능성 식품을 제공함으로써, 아토피 피부염을 효과적으로 억제하고 치료할 수 있다. 특히, 강낭콩의 뿌리와 덩굴강낭콩의 줄기를 배합함으로써 독성이 없고 아토피 피부염 치료 효과가 우수한 신규한 치료제 및 기능성 식품을 제공할 수 있다.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 강낭콩 추출물 단독투여에 따른 실험쥐의 체중 변화를 나타낸 그래프이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 강낭콩 추출물 반복투여에 따른 실험쥐의 체중 변화를 나타낸 그래프이다.
도 3a는 실험쥐의 등 부위 털을 제모한 후 촬영한 이미지이다.
도 3b는 실험쥐의 등 부위에 DNCB 용액을 도포하여 접촉성 피부염을 유도한 이미지이다.
도 3c는 본 발명의 일 실시예에 따른 강낭콩 추출물을 30mg/kg 섭취한 실험쥐를 촬영한 이미지이다.
도 3d는 본 발명의 일 실시예에 따른 강낭콩 추출물을 150mg/kg 섭취한 실험쥐를 촬영한 이미지이다.
도 4는 본 발명의 추출물 투여 4일차의 가려움 행동 그래프이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른 실험쥐의 비장을 적출한 이미지이다.
도 6은 본 발명의 일 실시예에 따른 실험쥐의 비장의 무게를 측정한 결과를 나타낸다.
도 7은 본 발명의 일 실시예에 따른 실험쥐 혈청의 IgG 농도를 나타낸 그래프이다.
도 8은 본 발명의 일 실시예에 따른 실험쥐 혈청의 인터페론-감마의 농도를 나타낸 그래프이다.
도 9는 본 발명의 일 실시예에 따른 실험쥐 혈청의 IL-4의 농도를 나타낸 그래프이다.

이하, 본 발명의 구체적인 양태에 대해서 보다 상세히 설명한다. 다른 식으로 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 숙련된 전문가에 의해서 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 일반적으로, 본 명세서에서 사용된 명명법은 본 기술 분야에서 잘 알려져있고 통상적으로 사용되는 것이다.

본 발명은 강낭콩 추출물을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물에 관한 것이다.

강낭콩(Phaseolus vulgaris var. humilis)은 쌍떡잎식물 장미목 콩과의 한해살이 식물로서, 덩굴강낭콩(운편두, 용조두, 채두; Phaseolus vulgaris L.)과 붉은 강낭콩(홍화채두, 다화채두, 강낭콩, 땅콩; Phaseolus multiflorus WILLD), 강낭콩(Phaseolus vulgaris var. humilis ALEF), 흰강낭콩(Phaseolus multiflorus WILLD for. albus BAIKEY) 등이 있으며, 상기 강낭콩의 종자는 민간요법으로 통유, 종기, 이뇨, 단독, 부종 등에 사용되고 있다.

강낭콩의 잎, 줄기, 뿌리는 서로 상이한 물질 구성과 상이한 작용 기전을 가지며, 이들이 합해져서 하나의 대표성으로 나타난다. 특히 콩의 잎, 줄기, 뿌리는 구성 성분들의 차이가 크게 나타나며, 이들을 어떻게 조합하느냐에 따라 맛, 모양, 기능 등이 다양하게 발현된다. 또한, 동일한 종의 식물 내에서도 자연 농축의 결과물인 색의 차이는 증상 치료에 차이를 나타낸다.

본 발명에서는, 검은색을 나타내는 강낭콩(Phaseolus vulgaris var. humilis ALEF)의 뿌리와 흰색의 덩굴강낭콩(Phaseolus vulgaris L.)의 줄기가 매우 이상적인 조합으로서 아토피 피부염 치료에 매우 우수한 효과를 나타낸다는 것을 발견하였다. 동일한 강낭콩 내에서도 색은 물질의 방향성을 나타내는 중요한 표적인데, 흰 강낭콩은 아토피의 외부를 공격하고 검은 강낭콩은 내부를 표적으로 접근한다. 상기 강낭콩의 뿌리와 덩굴강낭콩의 줄기는 서로 길항적으로 작용하며, 뿌리 부분은 독성에 대한 제어 물질로도 동시에 작용하고, 전체적으로 아토피 피부염에 대한 치료 효능이 더욱 증진된다는 것을 확인하였다.

따라서, 본 발명은 강낭콩(Phaseolus vulgaris var. humilis ALEF)의 뿌리 및 덩굴강낭콩(Phaseolus vulgaris L.)의 줄기 추출물을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물에 관한 것이다.

본 발명에서 상기 추출물은 본 기술분야에서 일반적으로 사용되는 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 상기 강낭콩의 뿌리 및 덩굴강낭콩의 줄기를 건조 및 분말화 하고, 상기 분말화된 강낭콩에 대해 추출 용매로서 물, 저급 알코올(메탄올, 에탄올), 물과 저급 알코올의 혼합물, 아세톤, 에틸아세테이트, 1,3-부틸렌 글리콜(Butylene glycol), 헥산(Hexane), 디에틸 에테르(Diethyl ether), 노말 프로판올(n-Propanol), 이소-프로판올(iso-propanol), 노말-부탄올(nButanol)을 사용해 추출물을 제조할 수 있다. 본 발명에서 상기 추출물은 물을 추출용매로서 사용하여 3시간 내지 24시간 동안 추출하는 것이 가장 바람직하다.

상기 추출물은 강낭콩의 뿌리 및 덩굴강낭콩의 줄기에 대해서 각각 추출물을 제조한 후 혼합하여 사용할 수 있으며, 강낭콩의 뿌리 및 덩굴강낭콩의 줄기를 한번에 용매로 추출하여 사용하는 것도 가능하다.

상기 강낭콩의 뿌리 및 덩굴강낭콩의 줄기는 로스팅 배합하는 경우 더욱 약효가 증진될 수 있다. 상기 로스팅은 재료를 건조 상태에서 적당한 크기로(예를 들어 2cm 이하의 크기로) 분할한 후 150 내지 200℃로 5 내지 10분간 로스팅할 수 있다.

상기 강낭콩의 뿌리 및 덩굴강낭콩의 줄기는 1:1.5 내지 1:10 또는 10:1 내지 1.5:1의 질량비로 배합될 수 있으며, 1:1.5 내지 1:5의 질량비로 배합하는 것이 더욱 바람직하다. 상기 강낭콩의 뿌리와 덩굴강낭콩의 줄기는 1:1의 질량비일 때 가장 효능이 약하며, 1:2 또는 2:1의 질량비일 때 가장 효능이 좋고, 이후 비율이 증가할수록 서서히 약효가 감소되는 추세를 나타낸다. 또한, 뿌리보다 줄기가 더 많이 들어가는 것이 약효의 효능 면에서 더 바람직하다.

본 발명의 일 실시예에서는, 강낭콩의 뿌리 및 덩굴강낭콩의 줄기 추출물을 함유하는 조성물이 아토피 피부염 발현된 실험쥐의 피부 염증을 완화시킬 뿐만 아니라, 아토피 피부염에 영향을 주는 것으로 알려진 혈청 내 IgE, IL-4, IL-5, IL-6 및 IL-10의 농도에 유의미한 영향을 준다는 것을 확인하였다.

본 발명에 따른 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있다. 상기 약제학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 약제학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 약제학적으로 허용되는 담체 및 제제화에 관해서는 레밍턴의 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences (19th ed., 1995)]에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 성분에 따라 바람직하게 제제화할 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여 모두 가능하며, 비경구 투여는 정맥내 주입, 피하 주입, 근육 주입, 복강 주입, 경피 투여 등을 포함한다.

본 발명에 따른 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에 있어서, "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명에 따른 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

구체적으로, 본 발명에 따른 조성물의 유효량은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으며, 일반적으로는 체중 1kg 당 0.001 내지 150mg, 바람직하게는 0.01 내지 100mg을 매일 또는 격일 투여하거나 1일 1 내지 3회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나 투여 경로, 성별, 체중, 연령 등에 따라서 증감될 수 있으므로 상기 투여량이 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 약제학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.

본 발명의 조성물에서 유효 성분으로 이용되는 것은 강낭콩 추출물 자체뿐만 아니라, 그의 약제학적으로 허용 가능한 염, 수화물, 용매화물 또는 프로드러그이다.

본 발명은 또한, 강낭콩 추출물을 유효성분으로 함유하는 아토피 피부염 개선을 위한 기능성 식품에 관한 것이다.

상기 기능성 식품은 특별히 제한되지 않으며, 예를 들어서, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류일 수 있으며, 더욱 자세히는, 유제품, 제과물, 조미료, 음료 및 드링크제, 스낵, 캔디류, 젤리류, 아이스크림 및 냉동용 디저트, 아침 곡물류, 영양바, 스낵 바 초콜렛 제품, 가공 식품, 곡물 제품 및 파스타, 스프, 소스 및 드레싱, 과자 제품, 오일 및 지방 제품, 유제품 음료 (dairy drink) 및 우유 음료, 차, 두유 및 콩 유제품 (soy dairy-like product), 냉동식품, 조리 음식 및 대체 음식, 육류 제품, 치즈, 요구르트, 빵 및 롤빵, 케이크, 쿠키 및 크래커로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나일 수 있다.

또한, 상기 기능성 식품은 강낭콩 추출물을 포함하는 캡슐, 정제, 분말, 액상 현탁액, 환제 및 과립제 등의 제형으로 제조될 수 있다.

또한, 상기 기능성 식품은 강낭콩 추출물을 외에도 유효성분으로서 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 추가로 포함할 수 있다.

본 발명의 기능성 식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물 (전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제 (치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있으며, 과일주스나 야채 음료 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.

실시예

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

제조예: 강낭콩 뿌리 및 덩굴강낭콩 줄기 추출 분말 준비

덩굴강낭콩의 줄기 50g과 강낭콩 뿌리 25g을 건조 및 분쇄한 후, 추출기를 이용하여 100℃에서 증류수 6L를 이용하여 3시간씩 3회 반복 추출하고 여과하여 추출물을 수득하였다.

얻어진 추출물을 회전증발 감압농축기를 이용하여 60℃ 이하에서 농축한 후, 동결건조기로 건조시켜 강낭콩 뿌리 및 덩굴강낭콩 줄기 추출물 분말을 얻었다.

실험예 1: 독성 평가

1) 실험 준비

5주령의 수 ICR 마우스를 코아텍(주)에서 공급받아 1주일간의 실험실 순화 과정을 거친 후 6주령(수컷 23-25g)에 실험에 사용하였다. 동물은 마우스용 케이지에 5마리씩 수용하고, 실험동물용 고형사료와 음수를 자유로이 섭취하도록 하였다. 실험실 환경은 온도 23±2℃, 습도 50 - 60%, 12시간 명암 주기로 유지하였다.

2) 단독투여 독성 평가

수컷 마우스를 24시간 절식시킨 후 상기 제조예에서 제조된 추출물 분말을 생리 식염수에 적정 투여 용량(10 ml/kg)으로 500, 1,000 및 5,000mg/kg으로 일회 경구투여하고 14일간 관찰하였다. 동물을 14일간 매일 관찰하여 치사량, 일반 증상 체중 변화를 기록하고, 식 후 15일째에 부검하여 육안 해부 소견 병변이 관찰된 조직에 한하여 병리조직 소견을 분석하였다.

3) 반복투여 독성 평가

추출물 분말을 생리 식염수에 적정 투여 용량(10ml/kg)으로 녹여 수컷 마우스에 100, 500, 1,000 및 5,000mg/kg으로 28일간 1일 1회 경구투여하고, 절식 시킨 후 29일째에 부검하였다.

4) 평가 결과

도 1은 단독투여에 따른 실험쥐의 체중 변화를 나타낸 그래프이고, 도 2는 반복투여에 따른 실험쥐의 체중 변화를 나타낸 그래프이다. 두 그래프에서 모두 대조군과 유사한 체중 증가 그래프를 나타내었다.

또한, 단독투여 후 14일간의 관찰기간 및 반복 경구 투여한 후 28일간의 관찰기간 동안 시험물질 투여로 인한 일반 증상인 피부, 털, 호흡, 운동상태, 설사 등 대조군과 비교하여 이상 행동을 보이는 동물은 관찰되지 않았으며, 시험물질 투여군에서 사망 동물도 발생하지 않았다.

흉선, 폐, 심장, 비장, 간, 신장, 고환 등의 장기를 관찰한 결과 대조군과 비교하여 투여군에서 특이한 소견은 관찰되지 않았으며 5,000mg/kg투여군에서 비장 무게 감소 경향을 보였지만 유의한 변화는 없었다.

혈당, ALT, AST, 콜레스테롤, BUN, creatinine 등 혈액 생화학 분석결과 등에서도 대조군과 통계적으로 유의한 차이를 나타낸 실험군은 없었다

이상의 결과로부터, 본 발명의 추출물은 단회 경구 투여 및 반복투여에 대한 독성을 가지지 않는 것으로 판단하였다.

실험예 2: 아토피성 피부염 치료 효능 평가

1) 실험 준비

실험동물은 웅성 4주령 18-22g BALB/c mice를 사용하였으며 실험 기간동안 실험동물용 고형사료와 물을 자유롭게 섭취하도록 공급하였다.

아토피 피부염 유발 약물로서 2,4-디니트로클로로벤젠(dinitrochlorobenzene; DNCB)(sigma chemical Co, St. Louis, MO, USA)을 구입하여 사용하였으며 본 실험에 사용된 DNCB는 아세톤과 올리브오일이 3:1로 혼합된 용액에 2% 와 0.5%로 희석한 다음 사용하였다.

BALB/c mice를 마취한 후 등 부위를 이발기를 이용하여 제모한 후 털제모 연고 니크린 크림(일동제약 주식회사)을 사용하여 미세털을 모두 제거하였다(도 3a).

이후 2% DNCB 용액 150ul를 등 부위에 3일 간격으로 2회 도포하여 면역 반응을 유발한 후, 3주 동안 0.5% DNCB 용액 150 ul를 일주일 2회씩 등 부위에 도포하여 접촉성 피부염을 유도하였다(도 3b).

2) 약물 투여

약물 투여는 제조예에서 제조된 추출물 분말을 0.9% saline 용액에 녹인 후 각각 30 mg/kg 및 150 mg/kg의 함량으로 1일 2회 7일간 경구 투여하였으며, 대조군에는 0.9% saline을 1일 2회 7일간 경구투여 하였다.

3) 실험 결과 및 검토

실험 결과는 mean ± standard error mean(S.E.M)으로, 유의성 검정은 One way analysis of variance(ANOVA)로 처리하였으며, 통계적 유의성은 T-tests를 사용하였으며, p < 0.05 유의성 표시는 *, p < 0.01 유의성 표시는 ** 로 하였다.

피부 외형 관찰

도 3c 및 3d는 본 발명의 추출물을 각각 30mg/kg 및 150mg/kg로 섭취한 실험쥐의 피부 외형을 촬영한 이미지이다.

도 3c에서 본 발명의 추출물을 30mg/kg 섭취한 실험쥐는 피부의 염증이 감소한 것이 육안으로 식별 가능하였다. 또한, 도 3d에서 본 발명의 추출물을 150mg/kg 섭취한 실험쥐의 경우 피부의 염증이 육안으로는 발견할 수 없을 정도로 완화된 것이 확인되었다.

가려움 행동 관찰

최종 경구 투여 30분 후 실험 조건과 동일한 환경의 cage로 옮겨 30분간 적응 시켰으며 10분 단위로 30분간 3회 긁음 빈도수를 측정하여 각각의 평균값을 이용하였다. 추출물 투여 4일차 가려움 행동을 도 4에 나타내었다.

도 4에서, DNCB 투여군은 normal 군에 비하여 가려움 행동이 유의미하게 증가한 것을 확인할 수 있으나, DNCB + 추출물(30 mg/kg) 및 (150 mg/kg) 투여군 에서는 가려움증 정도는 유의적으로 감소된 것이 확인되었다.

장기 무게 변화 관찰

실험 종료 후 실험쥐를 개복하여 비장(spleen)을 적출하여 각각의 무게를 측정하였다. 비장의 외형과 무게 측정 결과를 도 5 및 도 6에 각각 나타내었다.

도 5 및 6에서 DNCB 투여군의 경우 비장의 크기 및 무게가 유의미하게 증가된 것이 확인되었으나, 본 발명의 추출물을 투여한 경우 비장의 크기 및 무게가 다시 감소한 것을 확인할 수 있다.

혈청 내 면역글로블린 및 사이토카인 농도 측정

실험 종료일에 실험쥐를 마취시켜서 복부를 개복한 후 주사기를 이용하여 복대동맥에서 채혈하였으며, 혈액은 헤파린 처리된 튜브에서 원심분리(3,000rpm, 4℃, 15분)하여 혈청을 분리하였다.

혈청에서의 IgE의 농도는 enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA) 방법을 이용하여 측정하였다. 96well plate 각 well에 혈청 100μL씩 분주하고 실온에서 30분간 반응시킨 후 3회 세척한 후 enzyme-antibody를 100 ul씩 각 well에 분주한 후 실온에서 30분간 반응 시킨 후 3회 wash buffer로 세척 후 TMB용액 100ul를 각 well에 넣은 후 10분 후 stop용액을 100ul넣은 ELISA reader 를 사용하여 450 nm에서 흡광도를 측정하였다. 그 결과를 도 7에 나타내었다.

또한, 인터페론-감마와 IL-4의 농도를 ELISA kit(BD Biosciences, CA, USA)를 이용하여 다음과 같이 측정하였다. 각 well에 혈청 50ul씩 분주하고 biotin-conjugated antibody(Pharmingen, CA, USA)를 50 ul씩 가하여 혼합한 후 2시간 동안 37℃에서 반응시키고 washing buffer를 이용하여 4회 세척하였다. 이를 다시 100 μL의 streptavidin-HRP working solution을 가하여 30분 동안 실온에서 반응시킨 후 washing buffer를 이용하여 4회 세척하였다. 100 ul의 stabilized chromogen을 가하여 암소에서 30분간 방치한 후 100 ul의 stop 용액을 처리하고 ELISA reader로 450 nm에서 흡광도를 측정하였다. 그 결과를 도 8 및 9에 나타내었다.

도 7에서, 혈청 IGE는 대조군에 비해 본 발명의 추출물 투여군에서 모두 유의적인 감소 현상을 나타내었으며, 억제율은 30 mg/kg 투여군과 150 mg/kg 투여군에 대하여 각각 18.83%와 26.28%를 나타내었다.

도 8에서, 혈청내 인터페론-감마는 대조군에서 유의미하게 감소하였으나, 본 발명의 추출물 투여군에서는 모두 유의미한 증가가 관측되었다.

도 9에서도, 혈청 IL-4는 대조군에서 크게 증가하였으나, 본 발명의 추출물 투여군에서는 유의미한 감소를 나타내었다.

이상 본 발명의 일부 구현 형태에 대해서 설명하였으나, 본 발명은 상술한 바와 같은 구현형태에 대해서만 한정되는 것이 아니라 본 발명의 요지를 벗어나지 않는 범위 내에서 수정 및 변형하여 실시할 수 있으며, 그러한 수정 및 변형이 가해진 형태 또한 본 발명의 기술적 사상에 속하는 것으로 이해되어야 한다.

Claims (7)

1. 강낭콩(Phaseolus vulgaris var. humilis ALEF)의 뿌리 및 덩굴강낭콩(Phaseolus vulgaris L.)의 줄기 추출물을 포함하는 강낭콩 추출물을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물.
2. 삭제
3. 제 1 항에 있어서,
   상기 추출물은 강낭콩의 뿌리 및 덩굴강낭콩의 줄기를 건조 및 분말화 하고, 상기 분말화된 강낭콩에 대해 추출 용매로서 물, 메탄올, 에탄올, 아세톤, 에틸아세테이트, 1,3-부틸렌 글리콜(Butylene glycol), 헥산(Hexane), 디에틸 에테르(Diethyl ether), 노말 프로판올(n-Propanol), 이소-프로판올(iso-propanol), 노말-부탄올(nButanol) 또는 이들의 혼합물을 사용해 추출한 것을 특징으로 하는, 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물.
4. 제 1 항에 있어서,
   상기 추출물은 강낭콩의 뿌리 및 덩굴강낭콩의 줄기를 150 내지 200℃로 5 내지 10분간 로스팅한 후 추출한 것을 특징으로 하는, 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물.
5. 제 1 항에 있어서,
   상기 강낭콩의 뿌리 및 덩굴강낭콩의 줄기가 1:1.5 내지 1:10 또는 10:1 내지 1.5:1의 질량비로 배합된 것을 특징으로 하는, 아토피 피부염의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물.
6. 강낭콩(Phaseolus vulgaris var. humilis ALEF)의 뿌리 및 덩굴강낭콩(Phaseolus vulgaris L.)의 줄기 추출물을 포함하는 강낭콩 추출물을 유효성분으로 포함하는 아토피 피부염의 개선용 기능성 식품.
7. 삭제

Images