KR101821712B1 - 삼칠근 추출물, 비누풀잎 추출물, 검정콩 잎 추출물, 녹두 잎 추출물 및 호랑이콩 잎 추출물을 포함하는 Ｔｈ2-매개 면역 질환 개선, 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents

삼칠근 추출물, 비누풀잎 추출물, 검정콩 잎 추출물, 녹두 잎 추출물 및 호랑이콩 잎 추출물을 포함하는 Ｔｈ2-매개 면역 질환 개선, 예방 또는 치료용 조성물 Download PDF

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Abstract

삼칠근(Panax notoginseug) 추출물, 비누풀잎(Saponaria Officinalis L.) 추출물, 검정콩 잎(Glycine max L.) 추출물, 녹두 잎(Phaseolus radiatus L.) 추출물 및 호랑이콩 잎(Phaseolus vulgaris L.) 추출물로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 추출물을 유효성분으로 포함하는 Th2-매개 면역 질환 개선, 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 조성물은 NO(Nitric Oxide), TNF-α(Tumor Necrosis Factor-alpha) 및 IgE의 생성을 감소시키는 활성을 제공하며, 천연물을 소재로 이용하여 저렴한 생산비용과 사용의 편이성을 제공할 수 있다.

Description

삼칠근 추출물, 비누풀잎 추출물, 검정콩 잎 추출물, 녹두 잎 추출물 및 호랑이콩 잎 추출물을 포함하는 Ｔｈ2-매개 면역 질환 개선, 예방 또는 치료용 조성물{Composition for Preventing, Improving or Treating of Ｔｈ2-Mediated Immune Disease Comprising Extracts from Panax notoginseug, Saponaria officinalis L. , Glycine max L., Phaseolus radiatus L., Phaseolus vulgaris L.}
본 발명은 삼칠근 추출물, 비누풀잎 추출물, 검정콩 잎 추출물, 녹두 잎 추출물 및 호랑이콩 잎 추출물을 포함하는 Ｔｈ2-매개 면역 질환 개선, 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
아토피의 어원은 "I burn"이라는 그리스 어원의 용어로 아토피안의 려움증을 한번에 대변할 수 있다. 아토피란 용어는 "이상한", ‘부적절한’이란 뜻을 가지고 있듯이 유아기에 주로 발생하여 태열의 형태로 나타나나 그 유발 원인은 확실히 밝혀진 바가 없다. 주로 각질층내의 세라마이드(ceramides)의 함량이 감소됨에 따라 발생하는 것으로서 각질층의 수분유지기능이 떨어짐에 따라 피부가 건조되어 각질이 쉽게 일어나며 피부장벽(skin barrier) 기능이 저하됨에 따라 자극유발물질이 각질층 내로 침입하여 자극을 유발시키고 정상피부에서는 침입하기 어려운 항원 단백질이 침입함에 따라 피부 알러지 등이 용이하게 발생하여 견디기 힘들만큼의 소양증 증상을 나타낸다. 그러므로 아토피 환자의 90% 이상이 포도상구균에 감염되어 있는데 이 균은 환자가 가려움을 참지 못해 긁어서 생기기도 하지만 최근의 보고에 의하면 이 세균의 외독소가 우리 몸의 면역체계를 자극하여 알레르기를 일으키는 화학물질을 나오게 하여 아토피를 악화시킨다고 한다. 즉, 이 세균 자체가 알레르겐으로 작용한다는 것이다.
세계적으로 아토피 피부가 증가되고 있으며 이로 인해 수분 보유력이 저하되고 피부보호기능이 상실되어 적은 자극에도 민감하게 반응하여 알러지가 발생하며, 활성산소에 의한 것으로 활성산소에 의해 과산화지질이 생성하게 되고 이것에 의해 아토피 피부가 발생한다. 또한 세균, 바이러스, 곰팡이에 감염되어 더욱 악화될 수 있다.
따라서, 이러한 아토피를 치료하기 위해서는 항균, 보습, 항염의 효과가 우수하며, 부작용이 없고 비용이 저렴한 물질의 개발 및 그 물질을 함유하는 사용이 용이한 화장료의 개발이 필수적이다.
현재 일반적으로 아토피 피부를 치료하기 위해서는 보습제 또는 타르제제를 사용하거나, 트리암시놀론(triamcinolone) 및 플루시놀론(fluocinolone)과 같은 스테로이드 제제 사용, 클린다마이신(clindamycin) 및 디클록사실린(dicloxacillin)과 같은 항생제, 항소양제 사용, 과망간산 칼륨(potassium permanganate), 세트리마이드(cetrimide), 클로르헥시딘(chlorhexidine), 클로록시제놀(chloroxylenol), 디브로로프로파미딘(dibromopropamidine), 폴리녹실린(polynoxylin), 포비돈-아이오딘(povidone iodine) 및 트리클로산(triclosan)와 같은 항균제, 면역 조절, 면역 억제, 면역 치료제, 식품, 향기, 한방 등의 방법을 사용하고 있다. 그러나 타르제제나 스테로이드 제제는 발진, 피부색 변화, 고혈압, 백내장 등의 부작용이 심각하며, 자외선 치료는 햇볕의 화상, 가려움증 유발, 색소 침착과 장기간 치료 시에는 피부의 조기 노화와 암의 위험이 높고, 항생제는 주로 내복약으로 사용해야하는 단점이 있다. 또한, 항균제는 농도에 따른 피부 자극이 있다. 면역조절, 억제제 등은 최근 가장 많이 사용되고 있으나 수두, 대상포진 등의 바이러스에 감염된 얼굴에 사용해서는 안 되는 등의 사용상의 어려움이 있다. 또한, 식품요법, 한방치료, 기타 향기요법 등은 사용상의 부작용은 없지만 그 효과가 미비한 경우가 많으며 피부도포용 화장품의 경우 수입에 의존하므로 그 가격이 비싸서 사용상에 그 한계가 있다. 따라서 국내산 자생식물을 이용한, 항균 작용 및 아토피 피부 개선 효과가 뛰어난 성분에 대한 연구가 시급한 것이 현실이다.
본 명세서 전체에 걸쳐 다수의 논문 및 특허문헌이 참조되고 그 인용이 표시되어 있다. 인용된 논문 및 특허문헌의 개시 내용은 그 전체로서 본 명세서에 참조로 삽입되어 본 발명이 속하는 기술 분야의 수준 및 본 발명의 내용이 보다 명확하게 설명된다.
본 발명자들은 알레르기와 같은 Th2 면역 반응에 의해 유발되는 질병, 질환 또는 상태를 예방 또는 치료할 수 있는 천연물 조성물을 개발하고자 노력하였다. 그 결과, 본 발명자들은 삼칠근(Panax notoginseug) 추출물, 비누풀잎(Saponaria Officinalis L.) 추출물, 검정콩 잎(Glycine max L.) 추출물, 녹두 잎(Phaseolus radiatus L.) 추출물 및 호랑이콩 잎(Phaseolus vulgaris L.) 추출물로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물이 NO(Nitric Oxide), TNF-α 및 IgE의 생성을 감소시키는 효과를 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
따라서, 본 발명의 목적은 Th2-매개 면역 질환의 개선, 예방 또는 치료용 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다.
본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 삼칠근(Panax notoginseug) 추출물, 비누풀잎(Saponaria Officinalis L.) 추출물, 검정콩 잎(Glycine max L.) 추출물, 녹두 잎(Phaseolus radiatus L.) 추출물 및 호랑이콩 잎(Phaseolus vulgaris L.) 추출물로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 추출물을 유효성분으로 포함하는 Th2-매개 면역 질환 개선, 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.
본 발명자들은 알레르기와 같은 Th2 면역 반응에 의해 유발되는 질병, 질환 또는 상태를 예방 또는 치료할 수 있는 천연물 조성물을 개발하고자 노력하였다. 그 결과, 본 발명자들은 삼칠근(Panax notoginseug) 추출물, 비누풀잎(Saponaria Officinalis L.) 추출물, 검정콩 잎(Glycine max L.) 추출물, 녹두 잎(Phaseolus radiatus L.) 추출물 및 호랑이콩 잎(Phaseolus vulgaris L.) 추출물로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 추출물을 유효성분으로 포함하는 조성물이 NO(Nitric Oxide), TNF-α 및 IgE의 생성을 감소시키는 효과를 확인하였다.
본 발명의 조성물에서 이용되는 삼칠근 추출물, 비누풀잎 추출물, 검정콩 잎 추출물, 녹두 잎 추출물 및 호랑이콩 잎 추출물에 추출용매를 처리하여 수득하는 경우에는, 다양한 추출용매가 이용될 수 있다. 바람직하게는, 극성 용매 또는 비극성 용매를 이용할 수 있다. 극성 용매로서 적합한 것은, (i) 물, (ii) 알코올(바람직하게는, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 노말-프로판올, 이소-프로판올, 노말-부탄올, 1-펜탄올, 2-부톡시에탄올 또는 에틸렌글리콜), (iii) 아세트산, (iv) DMFO(dimethyl-formamide) 및 (v) DMSO(dimethyl sulfoxide)를 포함한다. 비극성 용매로서 적합한 것은, 아세톤, 아세토나이트릴, 에틸 아세테이트, 메틸 아세테이트, 플루오로알칸, 펜탄, 헥산, 2,2,4-트리메틸펜탄, 데칸, 사이클로헥산, 사이클로펜탄, 디이소부틸렌, 1-펜텐, 1-클로로부탄, 1-클로로펜탄, o-자일렌, 디이소프로필 에테르, 2-클로로프로판, 톨루엔, 1-클로로프로판, 클로로벤젠, 벤젠, 디에틸 에테르, 디에틸 설파이드, 클로로포름, 디클로로메탄, 1,2-디클로로에탄, 어닐린, 디에틸아민, 에테르, 사염화탄소 및 THF를 포함한다.
보다 바람직하게는, 본 발명에서 이용되는 추출용매는 (a) 물, (b) 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올 (메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올 등), (c) 상기 저급 알코올과 물과의 혼합용매, (d) 아세톤, (e) 에틸 아세테이트, (f) 클로로포름, (g) 부틸아세테이트, (h) 1,3-부틸렌글리콜, (i) 헥산 및 (j) 디에틸에테르를 포함한다. 가장 바람직하게는, 본 발명의 추출물은 물, 에탄올 또는 이의 조합을 삼칠근, 비누풀잎, 검정콩 잎, 녹두 잎 및 호랑이콩 잎으로 구성된 군으로부터 선택되는 천연물에 처리하여 수득한 것이다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명의 삼칠근 추출물, 비누풀잎 추출물, 검정콩 잎 추출물, 녹두 잎 추출물 및 호랑이콩 잎 추출물은 에탄올, 물 또는 이의 조합으로 추출한 추출물이다.
본 명세서에서 사용되는 용어 ‘추출물’은 상술한 바와 같이 당업계에서 조추출물(crude extract)로 통용되는 의미를 갖지만, 광의적으로는 추출물을 추가적으로 분획(fractionation)한 분획물도 포함한다. 즉, 삼칠근 추출물, 비누풀잎 추출물, 검정콩 잎 추출물, 녹두 잎 추출물 및 호랑이콩 잎 추출물은 상술한 추출용매를 이용하여 얻은 것뿐만 아니라, 여기에 정제과정을 추가적으로 적용하여 얻은 것도 포함한다. 예컨대, 상기 추출물을 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 통과시켜 얻은 분획, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 분획도 본 발명의 삼칠근 추출물, 비누풀잎 추출물, 검정콩 잎 추출물, 녹두 잎 추출물 또는 호랑이콩 잎 추출물에 포함되는 것이다.
본 발명에서 이용되는 추출물은 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수 있다.
본 발명의 삼칠근 추출물, 비누풀잎 추출물, 검정콩 잎 추출물, 호랑이콩 잎 추출물 및 녹두콩 잎 추출물로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 추출물을 포함하는 조성물은 삼칠근 추출물 0.1 ppb -100 ppm, 0.1 ppb - 10 ppm 또는 0.1 ppb - 1 ppm, 비누풀잎 추출물 100-10000 ppm, 200-1800 ppm 또는 500-1500 ppm, 검정콩 잎 추출물 100-10000 ppm, 200-1800 ppm 또는 500-1500 ppm, 호랑이콩 잎 추출물 100-10000 ppm, 200-1800 ppm 또는 500-1500 ppm 및 녹두 콩 잎 추출물 100-10000 ppm, 200-1800 ppm 또는 500-1500 ppm의 농도 범위 내에서 선택될 수 있다.
본 명세서에서 용어 ‘유효성분으로 포함하는’이란 하기의 삼칠근 추출물, 비누풀잎 추출물, 검정콩 잎 추출물, 녹두 잎 추출물 및 호랑이콩 잎 추출물로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 추출물의 효능 또는 활성을 달성하는 데 충분한 양을 포함하는 것을 의미한다. 본 발명은 천연식물재료인 삼칠근, 비누풀잎, 검정콩 잎, 녹두 잎 및 호랑이콩 잎으로부터 추출한 조성물로서 과량 투여하여도 인체에 부작용이 없으므로 추출물이 본 발명의 조성물에 포함된 양적 상한은 당업자가 적절한 범위 내에서 선택하여 실시할 수 있다.
본 발명의 조성물은 다양한 Th2-매개 면역 질환, 질병 또는 상태의 예방 또는 치료에 이용될 수 있다.
본 명세서에서, 용어 “Th2-매개 면역 질환”은 알레르겐-특이 Th2 세포의 생성 및 활성에 의한 IgE 및 비만세포가 관여하는 질환을 의미한다.
본 명세서에서 용어 “Th2 세포”는 유전자 발현, 단백질 분비 및 기능적 활성 측면에서 특정되는 헬퍼 T 세포 림포사이트의 서브세트를 의미한다. 예를 들어, Th2 세포는 IL-4, IL-5, IL-10, 및 IL-13 사이토카인 발현 패턴을 나타낸다. Th2 세포는 체액성 면역반응에 관여한다.
본 발명의 조성물이 적용되는 Th2-매개 면역 질환은 특별하게 제한되지 않으며, 바람직하게는 알레르기 질환에 적용된다.
본 발명의 조성물이 적용되는 Th2-매개 면역 질환은 아토피 피부염, 아토피와 관련된 다른 피부학적 질환, 알레르기 비염(급성 또는 만성), 고초열 및 알레르기 기관지 천식을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 Th2-매개 면역 질환 개선, 예방 또는 치료용 조성물은 NO(Nitric Oxide) 생성을 억제하는 활성을 갖는다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명의 조성물은 Th2-매개 면역 질환 개선, 예방 또는 치료용 조성물은 대조군(LPS, 1 ㎍/㎖)과 비교하여 NO 생성을 10-50%, 11-49% 또는 12-48% 억제하는 활성을 갖는다.
본 발명의 Th2-매개 면역 질환 개선, 예방 또는 치료용 조성물은 TNF-α(Tumor Necrosis Factor-alpha)의 생성을 억제하는 활성을 갖는다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명의 조성물은 Th2-매개 면역 질환 개선, 예방 또는 치료용 조성물은 대조군(LPS, 1 ㎍/㎖)과 비교하여 TNF-α 생성을 20-50%, 25-50% 또는 30-50% 억제하는 활성을 갖는다.
본 발명의 Th2-매개 면역 질환 개선, 예방 또는 치료용 조성물은 IgE의 생성을 억제하는 활성을 갖는다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 본 발명의 조성물은 Th2-매개 면역 질환 개선, 예방 또는 치료용 조성물은 대조군(LPS, 2 ㎍/㎖)과 비교하여 IgE 생성을 30-60%, 35-55% 또는 40-50% 억제하는 활성을 갖는다.
본 발명의 조성물은 약제학적 조성물로 제조될 수 있다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 조성물은 (a) 상술한 본 발명의 삼칠근 추출물, 비누풀잎 추출물, 검정콩 잎 추출물, 녹두 잎 추출물 및 호랑이콩 잎 추출물로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 추출물의 약제학적 유효량; 및 (b) 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물이다. 본 명세서에서 용어 “약제학적 유효량”은 상술한 삼칠근 추출물, 비누풀잎 추출물, 검정콩 잎 추출물, 녹두 잎 추출물 및 호랑이콩 잎 추출물로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 추출물의 효능 또는 활성을 달성하는 데 충분한 양을 의미한다.
본 발명의 조성물이 약제학적 조성물로 제조되는 경우, 본 발명의 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 본 발명의 약제학적 조성물에 포함되는 약제학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약제학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 약제학적으로 허용되는 담체 및 제제는 Remington's Pharmaceutical Sciences (19th ed., 1995)에 상세히 기재되어 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여할 수 있으며, 바람직하게는 경구 비투여 방식으로 적용된다.
본 발명의 약제학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물의 일반적인 투여량은 성인 기준으로 0.001-100 ㎎/kg 범위 내이다.
본 발명의 약제학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액, 시럽제 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 산제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물은 식품 조성물로 제공될 수 있다. 본 발명의 삼칠근 추출물, 비누풀잎 추출물, 검정콩 잎 추출물, 녹두 잎 추출물 및 호랑이콩 잎 추출물로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 추출물을 유효성분 포함하는 Th2-매개 면역 질환의 개선, 예방 또는 치료용 조성물이 식품 조성물로 제조되는 경우, 유효성분으로서 삼칠근 추출물, 비누풀잎 추출물, 검정콩 잎 추출물, 녹두 잎 추출물 및 호랑이콩 잎 추출물로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 추출물뿐 만 아니라, 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함하며, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소, 조미제 및 향미제를 포함한다. 상술한 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스, 올리고당 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 사이클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 향미제로서 천연 향미제 [타우마틴, 스테비아 추출물 (예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등]) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 사용할 수 있다. 예컨대, 본 발명의 식품 조성물이 드링크제로 제조되는 경우에는 본 발명의 삼칠근 추출물, 비누풀잎 추출물, 검정콩 잎 추출물, 녹두 잎 추출물 및 호랑이콩 잎 추출물로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 추출물 이외에 구연산, 액상과당, 설탕, 포도당, 초산, 사과산, 과즙, 두충 추출액, 대추 추출액, 감초 추출액 등을 추가로 포함시킬 수 있다.
본 발명의 삼칠근 추출물, 비누풀잎 추출물, 검정콩 잎 추출물, 녹두 잎 추출물 및 호랑이콩 잎 추출물로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 추출물을 유효성분으로 포함하는 Th2-매개 면역 질환의 개선, 예방 또는 치료용 조성물은 기능성 식품 조성물로 제조될 수 있다. 본 발명의 조성물이 기능성 식품 조성물로 제조되는 경우, 식품 제조 시 통상적으로 첨가되는 성분을 포함하며, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소 및 조미제를 포함한다. 예컨대, 드링크제로 제조되는 경우에는 유효성분으로서 삼칠근 추출물, 비누풀잎 추출물, 검정콩 잎 추출물, 녹두 잎 추출물 및 호랑이콩 잎 추출물로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 추출물 이외에 향미제 또는 천연 탄수화물을 추가 성분으로 포함시킬 수 있다. 예를 들어, 천연 탄수화물은 모노사카라이드(예컨대, 글루코오스, 프럭토오스 등); 디사카라이드(예컨대, 말토스, 수크로오스 등); 올리고당; 폴리사카라이드(예컨대, 덱스트린, 시클로덱스트린 등); 및 당알코올(예컨대, 자일리톨, 소르비톨, 에리쓰리톨 등)을 포함한다. 향미제로서 천연 향미제(예컨대, 타우마린, 스테비아 추출물 등) 및 합성 향미제(예컨대, 사카린, 아스파르탐 등)을 이용할 수 있다.
본 발명의 조성물은 화장료 조성물로 제조될 수 있다. 본 발명의 삼칠근 추출물, 비누풀잎 추출물, 검정콩 잎 추출물, 녹두 잎 추출물 및 호랑이콩 잎 추출물로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 추출물을 유효성분으로 포함하는 Th2-매개 면역 질환의 개선, 예방 또는 치료용 조성물이 화장료 조성물로 제조되는 경우, 유효 성분으로서의 삼칠근 추출물, 비누풀잎 추출물, 검정콩 잎 추출물, 녹두 잎 추출물 및 호랑이콩 잎 추출물로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 추출물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.
본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 조성물에 화장료 조성물로 제조되는 경우에, 계면활성제-함유 클린싱으로 제조될 수 있다. 본 발명의 조성물 중 비누풀 잎 추출물은 천연 계면활성제로, 상기 계면활성제를 대체할 수 있다.
본 발명의 특징 및 이점을 요약하면 다음과 같다:
(a) 본 발명은 삼칠근(Panax notoginseug) 추출물, 비누풀잎(Saponaria Officinalis L.) 추출물, 검정콩 잎(Glycine max L.) 추출물, 녹두 잎(Phaseolus radiatus L.) 추출물 및 호랑이콩 잎(Phaseolus vulgaris L.) 추출물로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 추출물을 유효성분으로 포함하는 Th2-매개 면역 질환 개선, 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.
(b) 본 발명의 조성물은 NO(Nitric Oxide), TNF-α(Tumor Necrosis Factor-alpha) 및 IgE의 생성을 감소시키는 활성을 제공한다.
(c) 본 발명은 천연물을 소재로 이용하여 저렴한 생산비용과 사용의 편이성을 제공할 수 있다.
도 1은 삼칠근 추출물, 비누풀잎 추출물, 검정콩 잎 추출물, 호랑이콩 잎 추출물 및 녹두 잎 추출물로 구성된 혼합 추출물 1 내지 3의 IgE 생성 억제 활성에 대하여 확인한 결과를 나타낸다.
도 2는 비누풀잎 추출물 및 혼합 추출물의 기포력 시험 결과를 보여준다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.
실시예 1: 추출물의 제조
삼칠근 추출물의 제조
분말 형태의 삼칠근(Panax notoginsenge) 1 ㎏을 70 % 에탄올에 4일 동안 상온에서 1회 침지 하였다. 그 여액을 185 ㎜로 여과하고 감압농축하였다. 조추출물(crude extract)의 삼칠근 분말 141.9 g 을 수득하여 레진(DIAION)에 정제수에 교반한 뒤, 정제수:에탄올 순차적 용매분리(8:2, 5:5, 9:1)를 하였다. 정제과정을 거쳐 분획 1-3 삼칠근 추출물을 감압농축 및 동결건조하여 삼칠근 분말을 제조하였다.
비누풀잎 추출물의 제조
전처리 과정을 거친 비누풀잎(Saponaria Officinalis L.) 50g 을 세절하고 에탄올과 정제수 1:1 비율을 가하여 10% 비누풀잎 용액을 제조한 후 50℃에서 3시간 추출하고 메쉬(Mesh)로 1차 여과하였다. 비누풀잎 추출물 용액에 활성탄 2%를 30분 동안 반응 시킨 후, 와트만 여과지(whatman paper 5B)로 3회 여과하여 활성탄을 완전히 제거하였다. 감압농축을 하여 에탄올이 제거된 비누풀잎 추출물 용액을 제조 하였다.
검정콩잎 추출물의 제조
전처리 과정을 거친 검정콩잎(Glycine max L.) 30g 을 세절하고 정제수 270g 을 가하여 10 % 검정콩잎 용액을 제조한 후 121℃에서 15분 동안 열수 추출하였다. 추출액은 와트만 여과지(whatman paper 5A)로 2회 여과하여 검정콩잎 추출물 용액을 제조 하였다.
호랑이콩잎 추출물의 제조
상기 ‘검정콩잎 추출물의 제조’와 동일한 과정을 호랑이콩잎(Phaseolus vulgaris L.)에 적용하여 10% 호랑이콩잎 추출물 용액을 제조하였다.
녹두잎 추출물의 제조
상기 ‘검정콩잎 추출물의 제조’와 동일한 과정을 녹두잎(Phaseolus radiatus L.)에 적용하여 10% 녹두잎 추출물 용액을 제조하였다.
혼합 추출물 제조
20 ㎍/㎖ 삼칠근 분말, 검정콩잎 추출물 1000 ppm, 호랑이콩잎 추출물 1000 ppm, 녹두잎 추출물 1000 ppm 및 비누풀 추출물 1000 ppm을 혼합하여 혼합 추출물을 제조하였다.
실험예 1: 식물 추출물의 세포 독성 확인
상기 실시에 1에서 제조된 추출물을 동결 건조하여 이의 건조분말 제조 및 추출물을 이용하여 각 식물 추출물의 세포 독성을 확인 하였다.
실험 방법
세포 독성을 알아보기 위해 다음과 같은 방법으로 실시하였다:
염증관련 세포인 Raw 264.7 세포를 48웰 마이크로플레이트에 1×105 세포/웰로 분주하여 24시간 동안 항온반응기에서 배양하고, 추출물을 농도별로 처리하여 18 시간 배양하였다. 다음, 티아졸린 블루(Thiazoline blue)를 처리하고 4시간 동안 추가 배양하였다. 배양액을 제거하고 마이크로플레이트에 DMSO(Dimethyl Sulfoxide) 400 ㎕을 첨가하여 5분 동안 교반한 후, 570 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 대조군은 추출물 주입량만큼 10 % 우태아혈청(Fetal Bovine Serum, FBS)를 배지에 처리하여 세포 성장의 최적 조건으로 동시배양을 하였으며, 대조군의 세포증식 정도를 100%로 하고 시료 투입 실험군의 세포 증식율을 계산하였다.
실험결과
세포 생존율 결과를 하기 표 1 및 표 2에 나타내었다.
세포생존율(%)
대조군(FBS) 삼칠근 추출물
10% 1 ㎍/㎖ 5 ㎍/㎖ 10 ㎍/㎖ 20 ㎍/㎖
100 101.51 100.58 100.24 98.24
　세포생존율(%)
- 비누풀잎 추출물 검정콩잎 추출물 호랑이콩잎 추출물 녹두잎 추출물 혼합 추출물
대조군 100 100 100 100 100
0.1 ㎍/㎖ 100.2 98.21 101.2 97.12 100.68
0.01 ㎍/㎖ 101.5 100.57 100.2 100.29 102.64
0.05 ㎍/㎖ 100.48 100.87 101.24 101.26 103.14
0.001 ㎍/㎖ 100.24 101.2 105.4 100.14 100.32
상기 표 1 및 표 2 에 나타난 바와 같이, 세포 최적 조건에서의 세포 대조군은 100 % 하였을때, 삼칠근 추출물 1 ㎍/㎖ 내지 20 ㎍/㎖ , 비누풀잎 추출물 0.001 ㎍/㎖ 내지 0.1 ㎍/㎖, 검정콩잎 추출물 0.001 ㎍/㎖ 내지 0.1 ㎍/㎖, 호랑이콩잎 추출물 0.001 ㎍/㎖ 내지 0.1 ㎍/㎖, 녹두잎 추출물 0.001 ㎍/㎖ 내지 0.1 ㎍/㎖ 및 혼합 추출물 0.001 ㎍/㎖ 내지 0.1 ㎍/㎖에 대해 세포독성은 나타나지 않았다.
실험예 2: 산화질소( Nitric oxide ; NO ) 저해 활성 측정
Raw 264.7 세포를 24웰 플레이트에 1×105 세포/웰로 세포를 분주하고 24시간 동안 세포를 안정화 시킨 후 추출물 및 LPS(Lipopolysaccharide, 1 ㎍/㎖)를 동시에 대조군을 제외한 모든 웰에 처리하여 세포를 자극하였다. NO 생성율을 측정하기 위해, 18시간 배양한 후 상등액을 수득하였다. 그리스(Griess) 시약법(Sigma, 미국)을 이용하여 수득한 상등액 100 ㎕, 그리스 시약 100 ㎕을 혼합하여 1분 동안 반응 시킨 후 ELISA를 이용하여 570 ㎚ 흡광도를 측정하였다. 표준 NO(Sodium nitrite, 삼전, 대한민국)에 대한 표준 곡선의 r2 값은 0.9 이상이다.
NO(uM)
대조군(1 ㎍/㎖) 삼칠근 추출물
LPS(-) LPS(+) 1 ㎍/㎖ 5 ㎍/㎖ 10 ㎍/㎖ 20 ㎍/㎖
3.7 25.54 20.8 18.8 17.21 15.45
NO(%)
대조군 실험군
LPS
(-)		 LPS
(+)		 농도
(㎍/㎖)		 비누풀잎 추출물 검정콩잎 추출물 호랑이콩잎 추출물 녹두잎 추출물 혼합 추출물
0 100 0.1 65.9 70.63 65.3 59.23 53
0.01 76.2 76.32 70.7 69.3 62.3
0.05 83.3 80.17 72.2 70.7 65.1
0.001 87.3 82.3 75.58 71 70.2
상기 표 3 및 표 4에서 확인할 수 있듯이, LPS로 자극한 264.7 세포에서 삼칠근 추출물, 비누풀잎 추출물, 검정콩잎 추출물, 호랑이콩잎 추출물, 녹두잎 추출물 및 혼합 추출물이 농도 의존적으로 NO 생성을 억제 하는 것을 확인 할 수 있었다.
실험예 3: 상등액 중의 TNF -α 측정
혼합추출물에서 배양된 세포 배양액을 4000 rpm에서 10분 동안 원심분리를 실시한 후, 상층액을 분리하였다. ELISA 방법으로 분리된 상층액은 R&D systems kit로 TNF-α 농도를 분석하였다.
TNF-alpha(pg/㎖)
대조군 LPS 혼합 추출물
0.01 ㎎/㎖ 0.005 ㎎/㎖ 0.001 ㎎/㎖
15.3 1450.23 754.45 851.27 1005.36
상기 표 5에서 확인할 수 있듯이, 혼합 추출물을 다양한 농도로 LPS를 자극 시킨 RAW 264.7 세포에 처리한 결과, 아토피에 관련이 있는 사이토카인 TNF-α의 생성을 농도 의존적으로 감소시키는 것을 확인하였다.
실시예 2: 삼칠근 추출물의 농도를 달리한 혼합 추출물의 제조
삼칠근 추출물, 비누풀잎 추출물, 검정콩잎 추출물, 호랑이콩잎 추출물 및 녹두잎 추출물을 포함하는 혼합 추출물을 삼칠근 추출물의 농도를 달리하여 3종류로 제조하였다. 3종류의 혼합 추출물1 내지 혼합 추출물3에 대한 구성은 표 3과 같다.
　추출물 농도(㎍/㎖)
혼합 추출물1 혼합 추출물2 혼합 추출물3
삼칠근 추출물 10 ppm 5 ppm 1 ppm
비누풀잎 추출물 1000 ppm
검정콩잎 추출물 1000 ppm
호랑이콩잎 추출물 1000 ppm
녹두잎 추출물 1000 ppm
실험예 4: IgE 농도 측정
IgE를 분석하기 위해 다음과 같은 실험을 진행하였다:
U266B1(human B lymphocyte) 세포를 1×105 세포/웰 농도로 48웰 플레이트에 각각 분주하고 2시간 동안 항온배양기에서 배양하였다. 다음, 2 ㎍/㎖ LPS 및 검액을 농도별로 세포에 처리한 후 배양 조건에서 7일 동안 배양하였다. 이후 세포 배지를 수거하여 원심분리 한 후 상등액을 취해 IgE ELISA 키트를 이용하여 IgE 생성양을 측정하였다. 양성 대조군으로는 덱사메타손(Dexamethasone)을 처리한 세포의 상층액을 사용하였다.
도 1에 나타난 바와 같이, 혼합 추출물을 처리 했을 때, 농도 의존적으로 IgE의 생성이 감소하는 것을 확인하였다. 이러한 결과는 B 세포가 IgE를 생성하는데 있어 사이토카인이 중요한 작용을 한다는 사실을 고려할 때, 혼합 추출물을 처리에 의해 B 세포의 IgE 양이 감소하였다는 것을 알 수 있었다.
실험예 5: 기포력 분석
계면활성성분의 경우 물의 표면장력을 낮춰서 수용액 상에서 쉽게 거품을 내는 특징을 나타낸다. 따라서 기포력의 측정은 계면활성 능력을 외관상으로 확인할 수 있는 지표가 된다. 본 발명의 각 추출물에 대하여 하기와 같은 방법으로 기포력 분석을 수행하였다:
기포력(forming force) Ross-Miles 시험방법을 변형하여 평가하였다. 각 시료 10 % 수용액 200 ㎖을 자성 교반기를 이용하여 10분동안 교반한 뒤, 균질기를 이용하여 20초 또는 혼합한 후 글래스 실린더를 이용하여 거품의 양을 측정하였다. 대조군은 Tween 20 5 % 사용하였다.
시험시료 대조군 삼칠근 추출물 비누풀잎 추출물 검정콩잎 추출물 호랑이콩잎 추출물 녹두잎 추출물 혼합 추출물
기포정도 (mm) 80 12 76 19 12 8 65
상기 표 7에 나타나는 바와 같이, 본 발명의 각 추출물 및 혼합 추출물의 더불어 기포 발생을 확인한 결과, 혼합 추출물의 기포력이 대조군과 유사한 양상을 보였으며 우수한 기포력을 가짐을 알 수 있었다(도 2).
실험예 6: 식물 혼합 추출물의 계면활성 효과 확인
비누풀 추출물 및 혼합 추출물의 계면활성력을 측정하기 위하여 표면 장력을 한국산업 표준규격 표면장력 시험방법(KS M1071-4)과 표면장력측정기(KSV SIGMA 702)를 이용하여 Du Nouy Ring 법으로 표면장력을 측정하였다. 대조군은 10% TWEEN 20을 사용하였다.
시험명 비누풀잎 추출물 혼합 추출물 TWEEN 20(10%) 물
표면장력 41 43 35.91 72.75
표면장력 분석을 실시한 결과, 비누풀잎 추출물 및 혼합 추출물의 표면장력 감소 시키는 결과를 나타내었다. 비누풀잎 추출물 단일로도 효과적으로 표면장력을 감소시키는 바, 본 발명의 혼합 추출물 및 단일 추출물은 우수한 계면 확성력을 가짐을 확인 할 수 있다.
이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (8)

  1. 삼칠근(Panax notoginseng) 추출물, 비누풀잎(Saponaria Officinalis L.) 추출물, 검정콩 잎(Glycine max L.) 추출물, 녹두 잎(Phaseolus radiatus L.) 추출물 및 호랑이콩 잎(Phaseolus vulgaris L.) 추출물의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 알레르기 질환의 개선, 예방 또는 치료용 약제학적 조성물.
  2. 삭제
  3. 제 1 항에 있어서, 상기 알레르기 질환은 아토피인 것을 특징으로 하는 조성물.
  4. 제 1 항에 있어서, 상기 조성물은 NO(Nitric Oxide)의 생성을 10-50% 감소시키는 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 조성물.
  5. 삭제
  6. 제 1 항에 있어서, 상기 조성물은 IgE의 생성을 30-60% 감소시키는 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 조성물.
  7. 삼칠근(Panax notoginseng) 추출물, 비누풀잎(Saponaria Officinalis L.) 추출물, 검정콩 잎(Glycine max L.) 추출물, 녹두 잎(Phaseolus radiatus L.) 추출물 및 호랑이콩 잎(Phaseolus vulgaris L.) 추출물의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 알레르기 질환의 개선 또는 예방용 식품 조성물.
  8. 삼칠근(Panax notoginseng) 추출물, 비누풀잎(Saponaria Officinalis L.) 추출물, 검정콩 잎(Glycine max L.) 추출물, 녹두 잎(Phaseolus radiatus L.) 추출물 및 호랑이콩 잎(Phaseolus vulgaris L.) 추출물의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 알레르기 질환의 개선 또는 예방용 화장료 조성물.
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