KR101874605B1 - 새우란 추출물을 함유하는 피부 외용제 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 새우란(Calanthe discolor Lindl.) 추출물을 함유하는 피부 외용제 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 새우란 추출물을 함유함으로써 피부 노화 방지 효과를 제공할 수 있는 조성물에 관한 것이다.

Description

새우란 추출물을 함유하는 피부 외용제 조성물{Skin external composition containing Calanthe discolor Lindl. extract}

본 발명은 새우란(Calanthe discolor Lindl.) 추출물을 함유하는 피부 외용제 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 새우란 추출물을 함유함으로써 피부 노화 방지 효과를 제공할 수 있는 조성물에 관한 것이다.

인간의 피부는 나이가 들어감에 따라 여러 가지 내적, 외적 요인에 의해 변화를 겪는다. 즉, 내적으로는 신진대사를 조절하는 각종 호르몬의 분비가 감소하고, 면역 세포의 기능과 세포들의 활성이 저하되어 생체에 필요한 면역 단백질 및 생체 구성 단백질들의 생합성이 줄어들게 되며, 외적으로는 오존층 파괴로 인하여 태양 광선 중 지표에 도달하는 자외선의 함량이 증가하고 환경 오염이 더욱 심화됨에 따라 자유 라디칼 및 활성 유해 산소 등이 증가함으로써, 피부의 두께가 감소하고, 주름이 증가하며, 탄력이 감소될 뿐 아니라 피부 혈색도 칙칙해지고, 피부 트러블이 자주 발생하며, 기미와 주근깨 및 검버섯 또한 증가하는 등 여러 가지 변화를 일으키게 된다.

노화가 진행될수록 피부를 구성하는 물질인 콜라겐, 엘라스틴, 히알루론산 및 당단백질의 함유량 및 배열이 변하거나 감소하는 증상들이 나타나게 되고, 자유 라디칼 및 활성 유해 산소에 의한 산화적 스트레스를 받게 된다. 또한 노화가 진행되거나 자외선에 의해서, 피부를 구성하는 대부분의 세포에서는, 염증을 일으킨다고 알려져 있는 전염증성 사이토카인(proinflammatory cytokine)을 생성하는 효소인 사이클로옥시제나제-2(Cox-2, cyclooxygenase)의 생합성이 증가하고, 이들 염증성 인자에 의해 피부조직을 분해하는 효소인 매트릭스 메탈로프로테아제(MMP, Mztrix metalloproteinase)의 생합성이 증가하며, iNOS(inducible nitric oxide synthase)에 의한 NO(nitric oxide) 생성이 증가하는 것으로 알려져 있다. 즉 자연적으로 진행되는 내인성 노화에 따른 세포 활성의 감소 및 미세염증에 의해 기질물질의 생합성이 감소되고, 여러 가지 유해 환경에 의한 스트레스의 증가 및 태양 광선에 의한 활성 산호 종의 증가와 같은 외적 요인에 의해 분해 및 변성이 가속화되어 피부 기질이 파괴되고 얇아지면서 피부 노화의 제반 증상들이 나타나게 된다. 따라서, 이러한 노화의 현상들을 방지하고, 개선시킬 수 있는 활성성분에 대하여 많은 연구가 행하지고 있는 것이 현실이다.
본 발명의 새우란 추출물을 함유하는 피부 외용제 조성물에 관한 종래기술은 다수 존재한다(특허문헌 1-2).

일본 공개특허공보 특개2005-179219(2005.07.07.) 일본 공개특허공보 특개평11-193211(1999.07.21.)

이에 본 발명자들은 천연물 추출물 중에서 새우란 추출물이 항노화 효과를 제공할 수 있음을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서, 본 발명의 목적은 새우란 추출물을 함유하여 항노화 효과를 제공할 수 있는 피부 외용제 조성물을 제공하는 것이다.

상기한 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 새우란 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 새우란 추출물을 유효성분으로 함유하는 항노화용 피부 외용제 조성물을 제공한다.

본 발명의 조성물은 새우란 추출물을 함유함으로써 우수한 항노화 효과를 제공할 수 있다.

본 발명의 피부 외용제 조성물은 새우란(Calanthe discolor Lindl.) 추출물을 유효성분으로 함유한다.

새우란(Calanthe discolor Lindl.)은 난초목 난초과의 여러해살이풀로서, 높이는 30~50㎝이며, 잎은 월년초로 2~3장이 다발 모양으로 자라지만 다음해에는 옆으로 늘어진다. 도피침상의 긴 타원형으로 길이는 15~20㎝이며, 폭은 4~6㎝로 주름이 진다. 아시아 열대 지방과 온대 지방에 주로 분포하고 아프리카 남부 마다가스카르와 아메리카 열대 지방에서도 자라며, 난초과 식물 중 가장 넓게 퍼져 있다. 민간에서는 뿌리줄기를 강장제로 사용한다.

본 발명에서 사용되는 새우란 추출물은 새우란에서 침출, 전출하여 얻은 침출액 뿐만 아니라, 침출액을 다시 일부 또는 전부 농축하여 얻은 농축물 또는 상기 농축물을 다시 건조시켜 제조한 침체, 전제, 정기, 유동엑기스 및 새우란 중에 함유되어 주 효과를 발휘하는 화학 물질은 물론 식물 그 자체를 모두 포함한다. 또한 본 발명에서는 줄기, 뿌리, 잎, 꽃 등 새우란의 모든 부분으로부터의 추출물을 사용할 수 있으며, 어느 특정 부분의 추출물로 한정되지 않는다.

본 발명에서 사용되는 새우란 추출물의 제조방법으로는 공지의 방법을 사용하는 것이 가능하다. 예를 들면, 본 발명의 새우란 추출물을 세절하고 건조한 후 물 또는 유기용매를 넣고, 환류 추출하여 침적시킨 후 여과포 여과와 원심분리를 통해 잔사와 여액을 분리하고, 분리된 여액을 감압 농축하여 새우란 추출물을 얻을 수 있다. 본 발명에 사용 가능한 유기용매는 에탄올, 메탄올, 부탄올, 에테르, 에틸아세테이트, 클로로포름 또는 이들 유기용매와 물의 혼합용매에서 선택될 수 있으며, 원료의 안전성을 고려할 때 바람직하게는 100% 물, 70% 에탄올 또는 부틸렌 글리콜(Butylene Glycol)을 사용한다. 이때, 추출 온도는 물의 경우 18~80℃가 바람직하며, 70% 에탄올과 부틸렌 글리콜의 경우는 18~40℃가 바람직하며, 추출 시간은 6~168시간이 바람직하다. 상기 추출 온도 및 추출 시간을 벗어나면 추출 효율이 떨어지거나 성분의 변화가 생길 수 있다. 상기에서 용매를 이용하여 추출물을 얻은 이후 당업계에 알려진 통상적인 방법으로 상온에서 냉침, 가열 및 여과하여 액상물을 얻을 수 있으며, 또는 추가로 용매를 증발, 분무 건조 또는 동결 건조할 수 있다.

본 발명에 의한 피부 외용제 조성물은 상기 새우란 추출물을 조성물 총 중량에 대하여 0.001~50중량%로 함유할 수 있다. 상기 새우란 추출물의 함량이 0.001중량% 미만이면 상기 추출물에 의한 효능, 효과가 미약하고, 50중량%를 초과하면 피부 안전성 또는 제형상의 문제가 있기 때문이다.

본 발명의 조성물은 항노화용 피부 외용제 조성물로서 사용될 수 있으며, 이는 피부 탄력을 증진시키고 주름을 개선시키는 효과가 뛰어나다.

본 발명에 따른 조성물은 화장품학 또는 피부과학적으로 허용가능한 매질 또는 기제를 함유하여 제형화될 수 있다. 이는 국소적용에 적합한 모든 제형으로서, 예를 들면, 용액, 겔, 고체, 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀) 및 비이온형의 소낭 분산제의 형태로, 또는 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 또한 포말(foam)의 형태로 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 사용될 수 있다. 이들 조성물은 당해 분야의 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다.

또한 본 발명에 의한 조성물은 지방 물질, 유기용매, 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 상기 보조제는 화장품학 또는 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입된다.

또한, 본 발명의 조성물은 피부 노화 개선 효과를 증가시키기 위하여 피부 흡수 촉진 물질을 함유할 수 있다.

이하, 시험예 및 제형예를 들어 본 발명의 구성 및 효과를 보다 구체적으로 설명한다. 그러나 이들 시험예 및 제형예는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐 본 발명의 범주 및 범위가 하기 예에 의해 제한되는 것은 아니다.

[실시예 1] 새우란 추출물의 제조

세절하여 음건한 새우란을 추출용매로서 70% 에탄올 수용액을 사용하여 24시간씩 3회 환류 추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #5 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 45℃ 이하에서 감압농축 및 동결 건조하였다.

[시험예 1] 엘라스타아제 활성 억제 효능 측정

새우란 추출물의 엘라스타아제 활성 저해능을 포스포라미돈과 비교하여 측정하였다. 사용된 엘라스타아제와 기질은 미국 시그마알드리치 사로부터 상업적으로 구매하였고(Cat.No. E0127), 새우란 추출물은 상기 실시예 1의 것을 사용하였다.

하기의 시험방법으로 엘라스타아제 활성 저해작용을 시험하였다.

96웰 플레이트에서 10mg/L Tris-HCL 완충액(pH 8.0)으로 조제한 것에 상기 실시예 1의 새우란 추출물 10ppm이 되도록 20㎍/mL 엘라스타아제·타입 III 용액 50μL를 혼합하였다. 포스포라미돈 10ug/ml 양성 대조군으로 사용하였으며 음성 대조군인 비처리군은 증류수를 사용하였다. 그 후, 상기 완충액으로 조제한 0.4514㎎/mL N-SUCCINYL-ALA-ALA-ALA-p-NITROANILIDE 100μL를 첨가하고, 25℃에서 15분 반응시켰다. 반응종료 후, 파장 415㎚에 있어서의 흡광도를 측정하였다. 동일한 방법으로 공시험을 행하여 보정하였다.

엘라스타아제 활성 저해작용의 계산방법은 하기 수학식 1과 같으며, 결과는 하기 표 1에 나타내었다.

A: 시험물질 무첨가, 효소 첨가에서의 파장 415 ㎚에 있어서의 흡광도

B: 시험물질 무첨가, 효소 무첨가에서의 파장 415 ㎚에 있어서의 흡광도

C: 시험물질 첨가, 효소 첨가에서의 파장 415 ㎚에 있어서의 흡광도

D: 시험물질 첨가, 효소 무첨가에서의 파장 415 ㎚에 있어서의 흡광도

화합물	억제정도(%)
비처리군	0
포스포라미돈	35
실시예 1	25

상기 표 1에 나타낸 바와 같이, 새우난 추출물의 엘라스타아제 활성 억제 정도가 대조군인 비처리군에 비하여 유의적으로 억제되었으며, 엘라스타아제 활성 억제제로 알려져 있는 포스포라미돈과 비교하여서도 우수한 효과가 나타나 본 발명의 새우난 추출물의 엘라스타아제 활성 억제 효과가 우수함을 확인할 수 있다.

[시험예 2] 콜라게나아제(MMP-1) 저해능

본 발명의 새우란 추출물의 콜라게나아제(MMP-1, 기질 메탈로프로테아제-1) 생성 저해능을 레티노익산과 비교하여 측정하였다.

2.5%의 우태아 혈청이 함유된 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Media) 배지가 들어있는 96공 평판배양기(96-well microtiter plate)에 인간의 섬유아세포를 5,000 세포/공(well)이 되도록 넣고, 70~80% 정도 자랄 때까지 CO₂ 5%, 37℃ 배양기(incubator)에서 배양하였다. 새우란 추출물을 10㎍/ml 농도로 24시간 동안 처리한 다음, 세포배양액을 채취하였다. 또한 비교를 위하여 레티노익산을 동일 농도로 처리한 것을 사용하였다.

상업적으로 이용가능한 콜라게나아제 측정기구(미국 아머샴파마샤 사, Catalog #: RPN 2610)를 이용하여 채취한 세포배양액의 콜라게나아제 생성 정도를 측정하였다. 먼저 1차 콜라게나아제 항체가 균일하게 도포된 96-공 평판(96-well plate)에 채취한 세포 배양액을 넣고 3시간 동안 항원-항체 반응을 항온조에서 실시하였다. 3시간 후 발색단이 결합된 2차 콜라겐 항체를 96-공 평판(96-well plate)에 넣고 다시 15분간 반응시켰다. 15분 후 발색유발물질(3,3',5,5'-tetramethylbenzidine, sigma)을 넣어 실온에서 15분간 발색을 유발시키고, 다시 1M 황산을 넣어 발색반응을 중지시키면 반응액의 색깔은 노란색을 띠게 되며 반응 진행의 정도에 따라 노란색의 정도가 다르게 나타났다.

노란색을 띠는 96-공 평판(96-well plate)의 흡광도를 흡광계를 이용하여 405nm에서 측정하고, 하기 수학식 2에 의해 콜라게나아제의 합성 정도를 계산하였으며, 그 결과는 하기 표 2에 나타내었다. 이때 조성물을 처리하지 않은 군에서 채취한 세포 배양액의 반응 흡광도를 대조군으로 하였다.

화합물	발현정도(%)
비처리군	100
레티노익산	75
실시예 1	65

상기 표 2에 나타낸 바와 같이, 새우란 추출물의 콜라게나아제 발현 정도가 콜라게나아제 발현 저해제로 알려져 있는 레티노익산과 비교하여서도 콜라게나아제 발현 저해 효과가 비슷한 수준임을 알 수 있다.

이와 같은 결과를 통하여, 본 발명의 새우란 추출물은 기질 메탈로 프로테아제(MMP-1)를 저해시키는 효과를 가짐을 확인할 수 있다.

[참고예 1] 제형예 1 및 비교제형예 1의 제조

하기 표 3의 조성에 따라 통상적인 방법으로 영양크림을 제조하였다(단위: 중량%).

배합성분	제형예1	비교제형예1
정제수	To 100	To 100
새우란	0.1
식물성 경화유	1.50	1.50
스테아린산	0.60	0.60
글리세롤 스테아레이트	1.00	1.00
스테아릴 알코올	2.00	2.00
폴리글리세릴-10 펜타스테아레이트 & 베헤닐 알코올 &소디움 스테아로일 락틸에이트	1.00	1.00
아라키딜 베헤닐 알코올 &아라키딜글루코사이드	1.00	1.00
세틸아릴 알코올 & 세테아릴글루코사이드	2.00	2.00
PEG-100 스테아레이트 & 글리세롤올레이트 & 프로필렌글리콜	1.50	1.50
카프릴릭/카르릭 트리 글리세라이드	11.00	11.00
사이클로메디콘	6.00	6.00
방부제, 향	적량	적량
트리에탄올 아민	0.1	0.1

[시험예 3] 피부 탄력 향상 효능 확인

사람에서의 피부 탄력 향상 효과를 확인하기 위하여 상기 제형예 1과 비교제형예 1의 제형으로 다음과 같이 평가하였다.

30~40대의 건강한 여성 20명을 각각 제형예 1과 비교제형예 1의 2개 군에 대해 10명씩 2조로 나누어 영양크림을 매일 1회씩 12주간 안면에 도포하게 한 후, 피부탄력측정기(Cutometer SEM 575, C+K Electronic Co., Germany)를 이용하여 피부탄력을 측정하였다. 그 결과는 하기 표 4에 나타내었다. 표 4의 결과값은 Cutometer SEM 575의 ΔR8(R8(왼쪽)-R8(오른쪽)) 값으로 기재하였는데, R8 값은 피부 점탄성(viscoelasticity)의 성질을 나타낸다.

실험제품	피부탄력효과
제형예 1	0.17
비교제형예 1	0.10

상기 표 4에 나타난 바와 같이, 본 발명의 새우란 추출물이 함유된 제형예 1은 비교제형예 1을 도포한 군에 비하여 피부 탄력성이 더 증가되었다.

따라서, 본 발명의 새우란 추출물을 함유하는 조성물은 피부 탄력 향상에 매우 효과적임을 확인할 수 있다.

[시험예 4] 피부 주름 개선 효능 확인

본 발명의 조성물에 의한 사람에서의 주름 개선 효과를 확인하기 위하여 상기 제형예 1과 비교제형예 1을 이용하였다.

상기 제형예 1과 비교제형예 1의 주름 개선 효과를 확인하기 위하여 다음과 같이 평가하였다. 40대의 건강한 여성 20명을 각각 제형예 1과 비교제형예 1의 2개 군에 대해 10명씩 2조로 나누어 영양크림을 매일 1회씩 12주간 안면에 도포하게 한 후, 실리콘을 이용하여 레플리카를 떠서 주름의 상태를 피부측정기(visiometer, SV600, Courage+Khazaka electronic GmbH, Germany)로 측정하여 화상분석하였다. 그 결과는 하기 표 5에 나타내었다. 하기 표 5의 값은, 도포 12주 후의 각각의 변수(parameter)값에서 도포 전 변수값을 뺀 것의 평균을 나타낸 것이다.

사용 8주 후 임상 결과	R1	R2	R3	R4	R5
제형예 1	-0.31	-0.21	-0.14	-0.10	-0.12
비교제형예 1	0.05	0.03	0.03	-0.01	0.00

R1 : 주름 등고선의 최고치와 최저치의 차이값

R2 : 주름 등고선을 임의로 5칸씩 나눈 후 그 중 R1값 들의 평균

R3 : 5개씩 나눈 R1값 중 최고 값

R4 : 주름 등고선의 베이스라인(baseline)에서 각 각의 꼭대기와 계곡의 값을 뺀 평균값

R5 : 주름 등고선의 베이스라인(baseline)에서 각 각의 주름 윤곽을 뺀 값의 차이 값

상기 표 5에서 나타낸 바와 같이, 제형예 1의 외용제 조성물은 피부 주름 개선 효과가 아주 우수함을 알 수 있었다.

Claims (6)

1. 새우란(Calanthe discolor Lindl.) 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 탄력 향상 및 피부 주름 개선용 화장료 조성물.
2. 제1항에 있어서, 상기 새우란 추출물의 함량은 조성물의 총 중량을 기준으로 0.001~50중량%인 것을 특징으로 하는, 피부 탄력 향상 및 피부 주름 개선용 화장료 조성물.
3. 제1항에 있어서, 상기 새우란 추출물은 새우란을 유기용매, 물 또는 이들의 혼합물로 추출하여 수득한 것임을 특징으로 하는, 피부 탄력 향상 및 피부 주름 개선용 화장료 조성물.
4. 제3항에 있어서, 상기 유기용매는 에탄올, 메탄올, 부탄올, 에테르, 에틸아세테이트, 부틸렌 글리콜 및 클로로포름으로 구성된 군에서 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 하는, 피부 탄력 향상 및 피부 주름 개선용 화장료 조성물.
5. 제3항에 있어서, 상기 새우란 추출물은 새우란을 에탄올 수용액으로 18~40℃의 추출온도에서 추출하여 수득한 것임을 특징으로 하는, 피부 탄력 향상 및 피부 주름 개선용 화장료 조성물.
6. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 엘라스타아제의 활성을 억제시키고, 콜라게나아제의 생성을 저해시키는 것을 특징으로 하는, 피부 탄력 향상 및 피부 주름 개선용 화장료 조성물.