KR101681795B1 - 항메소텔린 면역접합체 및 그의 용도 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 메소텔린에 결합하고, 세포독성제, 예를 들면 메이탄신 또는 그의 유도체에 접합되고/되거나 하나 이상의 추가의 항암제와 동시-투여되거나 또는 제제화되는 항체, 예를 들면 모노클로날 항체 또는 항체 단편으로 구성된 면역접합체를 제공한다. 본 발명의 면역접합체는 암, 예를 들면 고형 종양을 치료하고/하거나 진단하고/하거나 관찰하기 위한 본 발명의 방법에서 사용될 수 있다. 면역접합체는 여러 종양, 예를 들면 췌장 및 난소 종양, 중피종 및 폐암 세포에서 과발현되는 막-앵커링된, 40 kDa 메소텔린 폴리펩티드에 대해 특이적인 상기 항원-결합 부위를 함유하는 항체 및 기능적 단편을 포함한다.

Description

항메소텔린 면역접합체 및 그의 용도 {ANTI-MESOTHELIN IMMUNOCONJUGATES AND USES THEREFOR}
본 발명은 메소텔린 단백질에 대해 특이성을 갖는 항체 또는 그의 단편 및 치료제를 포함하는 면역접합체를 제공한다. 이러한 면역접합체의 조성물은 메소텔린-관련 장애, 예를 들면 암의 치료, 예방 또는 진단에 사용될 수 있다.
본 발명의 배경
암의 발생은 가장 흔히 노화와 연관되며, 모든 신규한 사례의 암 중 65%는 65세 이상의 환자에 대해 기록된다. 암은 미국에서 두 번째로 주된 사망의 원인이고, 심장 질환만이 이를 능가한다. 실제로, 미국 암 학회 (American Cancer Society)는 현재의 사망율이 계속 고정될 것을 가정하면, 미국에서 사람 4명 중 1명은 암에 의해 사망할 것으로 추정하였다. 미국에서만, 1,437,180건의 신규한 암 사례 및 565,650건의 암에 의한 사망이 2008년에 추정된다.
항체-기반 요법은 고형 종양을 포함하는 다양한 암의 치료에 대해 매우 효과적인 것으로 입증되고 있다. 예를 들면, 허셉틴 (HERCEPTIN)(등록상표)은 유방암의 치료에 있어서 성공적으로 사용되어 왔다. 성공적인 항체-기반 요법의 개발에 있어서 중요한 것은 종양 세포에서 선택적으로 발현되는 것으로 밝혀진 세포-표면 단백질에 대한 항체의 단리이다. 메소텔린 전구체 폴리펩티드는 막-결합된, GPI-앵커링된 형태로 주로 발생하는, 단백질 가수분해에 의해 30 kDa N-말단 분비된 폴리펩티드 및 40 kDa C-말단 폴리펩티드로 분해되는 글리코포스파티딜이노시톨 (GPI)-앵커링된, 글리코실화된 세포 표면 단백질이고 (문헌 [Chang, K. and I. Pastan, Proc. Natl. Acad. Sci. U S A, (1996) 93(1):136]), 본원에서는 메소텔린이라고 한다. 메소텔린은 특정 종양 세포, 특히 중피종 세포, 췌장 종양 세포 및 난소 암종 세포에 의해 선택적으로 발현되며, 그의 발현은 정상 조직에서 제한되어, 종양 요법의 개발에 대해 좋은 표적이 된다 (문헌 [Argani, P. et al., Clin. Cancer Res. (2001) 7(12): 3862; Hassan, R., et al., Clin. Cancer Res. (2004) 10(12 Pt 1):3937]). 메소텔린의 기능은 알려지지 않았고, 메소텔린 유전자 발현이 결핍된 마우스에서 어떠한 명백한 생식적, 혈액학적 또는 해부학적 이상도 관찰되지 않았다 (문헌 [Bera, T.K. and I. Pastan, Mol. Cell. Biol. (2000) 20(8):2902]).
메소텔린-발현 암 세포에 대한 항체-기반, 표적 요법은 폐, 난소 및 췌장암의 치료를 위해 제안되었다. Mab K1은 문헌 [Chang, K., et al., Int. J. Cancer, (1992) 50(3):373]에 기재된, 막-결합 메소텔린 폴리펩티드에 대한 첫 번째 항체였다. Mab K1은 마우스를 면역시킴으로써 발생하였다. 낮은 친화도 및 항체의 좋지 못한 내재화 속도로 인해, 슈도모나스 (Pseudomonas) 외독소 A의 화학적으로 변형된 끝이 잘린 형태에 연결된 Mab K1로 이루어진 면역독소는 임상적 개발을 위해 적합하지 않은 것으로 여겨졌다 (문헌 [Hassan, R., et al., J. Immunother. (2000) 23(4):473]; 문헌 [Hassan, R., et al., Clin. Cancer Res. (2004) 10(12 Pt 1): 3937]). 후속적으로, 시험관내에서 종양 세포의 사멸 활성 (Hassan, R., et al., Clin. Cancer Res. (2002) 8(11): 3520) 및 인간 메소텔린-발현 종양의 뮤린 모델에서 효능 (Fan, D., et al., Mol. Cancer Ther. (2002) 1(8): 595)을 나타낸 SS1-(dsFv)-PE38을 포함하는, 더 높은 친화도를 갖는 단일-쇄 항체가 개발되었다. 이들 데이터는 메소텔린을 다발성 암의 치료를 위한 면역요법의 개발을 위한 좋은 표적으로서 입증한다. SS1-(dsFv)-PE38은 빠른 혈액 청소율을 갖는 것으로 나타났고, 융합 단백질을 페질화 (pegylate)함으로써 분자량을 증가시키기 위한 시도가 보고되고 있다 (문헌 [Filpula, D., et al., Bioconjugate Chem. (2007) 18(3): 773]).
MS-1, MS-2 및 MS-3은 그들의 인간 IgG1 동위원소로 인해 세포 표면에서 면역 이펙터 활성을 야기하는 메소텔린-결합 항체이고, 이는 메소텔린 발현 세포로 내재화된다 (WO 2006/099141 A2). 이들 항체 중 하나인 비접합된, 키메라 (마우스/인간) IgG1 항메소텔린 항체 MORAb 009는, 현재 췌장암의 치료에 대한 치료학적 효과에 대해 임상 시험에서 시험되고 있다. MORAb 009의 작용의 상정된 메카니즘은 면역 이펙터 기능, 예를 들면 ADCC 및 기능 차단의 유발이다.
악성 암, 예를 들면 난소, 췌장 및 폐암과 싸우기 위한 개선된 효능을 갖는 신규한 요법은 매우 바람직하고, 당업계에서 진전을 나타낼 것이다. 이에 따라, 본 발명은 메소텔린-관련 장애, 예를 들면 암의 치료, 예방 및/또는 진단에서 유용한 신규한 면역접합체 조성물을 개시한다.
본 발명의 요약
본 발명은 메소텔린에 결합하고, 세포독성제, 예를 들면 메이탄시노이드 또는 그의 유도체에 접합되고/되거나, 하나 이상의 추가의 항암제와 함께 동시-투여되거나 또는 제제화되는 항체, 예를 들면 모노클로날 항체, 또는 그의 단편을 포함하는 면역접합체에 관한 것이다. 본 발명의 면역접합체는 메소텔린-관련 장애, 예를 들면 암을 치료하고/하거나 진단하고/하거나 관찰하기 위해 사용될 수 있다.
메소텔린 전구체 폴리펩티드의 40 kDa, C-말단 세포외 부분에 대해 매우 선택적이고, 암 항원 125 (CA125; MUC16) 및 이펙터 잔기의 존재하에 메소텔린과 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 항체 단편, 또는 그의 변이체를 포함하는 면역접합체를 제공하는 것이 본 발명의 목적이다. 메소텔린 항체의 특정 특성은 PCT/EP2008/009756에 기재되었고, 본 발명의 한 측면에서, CA125의 존재하에 세포독성제, 예를 들면 메이탄시노이드와 조합되어 메소텔린과 특이적으로 면역반응하는 특정 능력의 조합, 접합은 메소텔린 결합에 대해 CA125와 경쟁하는 기능 차단 항체에 비해 개선된 효능을 제공한다.
한 측면에서, 본 발명의 항체 또는 그의 단편은 IgG 항체 또는 IgG 단편이다. 항체 또는 단편은 또한 IgG1, IgG2a, IgG2b, IgG3, IgM, IgD, IgE, IgA, 또는 IgM 항체, Fab 단편, F(ab')2 단편, scFv 단편, Fv 단편, 디아바디 (diabody), 선형 항체, 단일-쇄 항체, 생체특이적 (biospecific)인 항체, 다중특이적인 항체, 또는 키메라 항체 (예를 들면, 인간 또는 비-인간 항체 결합 영역에 이식된 인간 항체 골격, 또는 인간 또는 비-인간 항체 결합 영역에 이식된 비-인간 항체 골격을 포함함)일 수 있다. 키메라 항체는 예를 들면, 비-인간 공급원으로부터의 항체 골격 영역, 예를 들면 소, 마우스, 라마, 낙타 또는 토끼의 것을 포함할 수 있다. 더 나아가, 항체 공학에 대한 정보는 예를 들면, 문헌 [Holliger and Hudson, Nature Biotechnology, (Sep, 2005) 23: 1126-1136]에서 찾을 수 있고, 이는 본문에 참조로 포함된다. 상기 단편은 이뮤노글로불린으로부터 수득될 수 있거나, 적합한 수단, 예를 들면 재조합 발현에 의해 단편 형태로 생성될 수 있다.
본 발명의 항체 또는 항체 단편은 또한 인간화될 수 있고, 여기서 CDR 서열 또는 영역 (예를 들면, CDR1, CDR2, CDR3)은 비-인간, 예를 들면 뮤린의 것일 수 있다.
본 발명의 항체 또는 항체 단편, 또는 항체 또는 단편을 포함하는 조성물은, 항체 또는 그의 단편에 접합된 세포독성제를 포함할 수 있다. 한 측면에서, 세포독성제는 메이탄시노이드 또는 그의 유도체이지만, 예를 들면 아플리딘 (aplidin), 아우리스타틴, 아자리빈 (azaribine), 아나스트로졸, 아자시티딘, 블레오마이신, 보르테조밉, 브리오스타틴-1, 부술판, 칼리체아마이신 (calicheamycin), 캠토테신, 10-히드록시캠토테신, 카무스틴, 쎄레브렉스, 클로람부실, 시스플라틴, 이리노테칸 (CPT-I 1), SN-38, 카르보플라틴, 클라드리빈, 시클로포스파미드, 시타라빈, 다카바진, 도세탁셀, 닥티-파이-오마이신, 다우노마이신 글루쿠로니드, 다우노루비신, 덱사메타손, 디에틸스틸베스트롤, 독소루비신, 독소루비신 글루쿠로니드, 에피루비신 글루쿠로니드, 에티닐 에스트라디올, 에스트라머스틴, 에토포시드, 에토포시드 글루쿠로니드, 에토포시드 포스페이트, 플록스우리딘 (FUdR), 3',5'-O-디올레오일-FudR (FUdR-dO), 플루다라빈, 플루타미드, 플루오로우라실, 플루옥시메스테론, 젬시타빈, 히드록시프로게스테론 카프로에이트, 히드록시우레아, 아이다루비신, 이포스파마이드, L-아스파라기나제, 류코보린, 로무수틴, 메클로레타민, 메드로프로게스테론 (medroprogesterone) 아세테이트, 메게스트롤 아세테이트, 멜팔란, 메르캅토퓨린, 6-메르캅토퓨린, 메토트렉세이트, 마이토크산트론, 미트라마이신, 미토마이신, 마이토테인, 페닐 부티레이트, 프레드니손, 프로카바진, 파클리탁셀, 펜토스타틴, PSI-341, 세무스틴 (semustine) 스트렙토조신, 타목시펜, 탁산, 탁솔, 테스토스테론 프로피오네이트, 탈리도미드, 티오구아닌, 티오테파, 테니포시드 (테니포시드), 토포테칸, 우라실 머스터드, 벨케이드, 빈블라스틴, 비노렐빈, 빈크리스틴, 리신, 아브린, 리보미클레아제 (ribomiclease), 온코나제, rapLRI, DNase I, 포도구균 (Staphylococcal) 장독소-A, 억새풀 항바이러스성 단백질, 겔로닌, 디프테리아 독소, 또는 그의 조합물을 포함할 수 있는 다른 세포독성제가 또한 제공된다. 임의의 세포독성제는 또한 그의 기능적 유사체 또는 그의 유도체를 포함할 수 있다.
본 발명의 또다른 측면은, 약물 제제에 인간 또는 포유동물 B 세포 에피토프 또는 T 세포 에피토프를 제공함으로써 세포독성제가 비-면역원, 즉 모 항체의 면역원성을 증가시키지 않는 면역접합체를 제공한다.
본 발명의 조성물은 항체 및 단편 (상기 접합된 세포독성제를 갖거나 또는 갖지 않음)에 추가로 예를 들면, 블레오마이신, 도세탁셀 (탁소텔 (Taxotere)), 독소루비신, 에다트렉세이트, 엘로티닙 (타세바 (Tarceva)), 에토포시드, 피나스테라이드 (프로스카 (Proscar)), 플루타미드 (유렉신 (Eulexin)), 젬시타빈 (젬자 (Genzar)), 제니티닙 (genitinib) (엘레사 (Lrresa)), 고세렐린 아세테이트 (졸라덱스 (Zoladex)), 그라니세트론 (카이트릴 (Kytril)), 이마티닙 (글리벡 (Gleevec)), 이리노테칸 (캄프토/캄프토자 (Campto/Camptosar)), 온단세트론 (조프란 (Zogran)), 파클리탁셀 (탁솔 (Taxol)), 페가스파가제 (온카스파 (Oncaspar)), 필로카르핀 히드로클로라이드 (살라겐 (Salagen)), 포르피머 (porfimer) 나트륨 (포토프린 (Photofrin)), 인터류킨-2 (프로류킨 (Proleukin)), 리툭시맙 (리툭산 (Rituxan)), 토포테칸 (하이캄틴 (Hycamtin)), 트라스투주맙 (허셉틴), 트리아핀 (Triapine), 빈크리스틴, 및 비노렐빈 타르트레이트 (나벨빈 (Navelbine))를 포함할 수 있는 다양한 항암제, 또는 치료 항체 또는 그의 단편, 또는 항혈관신생제, 예를 들면 안지오스타틴, 베바시주맙 (아바스틴 (Avastin)(등록상표)), 소라페닙 (넥사바 (Nexavar)(등록상표)), 바쿨로스타틴 (baculostatin), 칸스타틴 (canstatin), 마스핀 (maspin), 항-VEGF 항체 또는 펩티드, 항태반 성장 인자 항체 또는 펩티드, 항-Flk-1 항체, 항-Fit-1 항체 또는 펩티드, 라미닌 펩티드, 피브로넥틴 펩티드, 플라스미노겐 활성화제 억제제, 조직 금속단백분해효소 억제제, 인터페론, 인터류킨 12, IP-IO, Gro-β, 트롬보스폰딘, 2-메톡시오에스트라디올, 프로리페린-관련 단백질, 카르복시아미도트리아졸, CMIO1, 마리마스타트 (Marimastat), 펜토산 폴리술페이트, 안지오포에틴 2, 인터페론-알파, 허비마이신 A, PNU145156E, 16K 프로락틴 단편, 리노미드, 탈리도미드, 펜톡시필린, 제니스테인, TNP-470, 엔도스타틴, 파클리탁셀, 아쿠틴 (accutin), 시도포비르 (cidofovir), 빈크리스틴, 블레오마이신, AGM-1470, 혈소판 인자 4 또는 미노사이클린을 포함할 수 있다.
본 발명은 또다른 측면에서, 치료 유효량의 본 발명의 면역접합체, 또는 본 발명의 면역접합체를 포함하는 본 발명의 조성물을 투여함으로써 메소텔린-관련 장애를 치료하는 방법을 추가로 제공한다. 메소텔린-관련 장애는 예를 들면, 암, 예를 들면 고형 종양 암을 포함할 수 있다. 고형 종양은 난소, 췌장, 호흡기도, 폐, 결장, 위, 식도, 경부, 간, 유방, 머리 및 목에 존재하거나 또는 그들로부터 발생될 수 있다.
이들 및 다른 실시양태는 하기 상세한 설명에 개시되거나 또는 그로부터 명백하고, 그에 의해 포함된다.
도면의 설명
도 1은 메소텔린 형질감염된 이종이식편 모델 (A) 및 비-형질감염된 대조군 종양 (B)에서의 메소텔린-형질감염된 인간 췌장 암종 세포에 대한 항메소텔린-면역접합체 MF-T-SPDB-DM4의 항종양 효능을 나타낸다.
도 2는 메소텔린을 내인적으로 발현하는 암종 세포를 갖는 HeLaMATU 이종이식편 모델에서 안정적이고 절단될 수 있으며, 극성 및 비극성인 링커를 갖는 항메소텔린 면역접합체의 항종양 효능을 나타낸다.
도 3은 메소텔린 형질감염된 이종이식편 모델 (A) 및 비-형질감염된 대조군 종양 (B)에서의 안정적이고 절단될 수 있으며, 극성 및 비극성인 링커를 갖는 항메소텔린 면역접합체의 항종양 효능을 나타낸다.
도 4는 메소텔린 양성 HelaMatu 세포에 대한 MF-T-SPDP-DM4 독성의 용량 반응 곡선의 예를 나타낸다.
본 발명의 상세한 설명
본 발명은 메소텔린에 대해 특이적이거나 또는 높은 친화도를 갖고, 대상체에게 치료학적 이득을 전달할 수 있는 신규한 면역접합체의 발견에 기반을 둔다. 본 발명의 면역접합체는 본원에 보다 완전히 기재된 여러 경우에 사용될 수 있다. 본원에 기재된 바와 같은 본 발명은, 항메소텔린 항체, 면역접합체, 치료 방법, 프로토콜, 세포주, 동물 종 또는 속, 구조물 및 기재된 시약을 포함하는 본 발명의 임의의 측면에 대해, 이들은 변화할 수 있기 때문에, 본원에 제시된 특정 세부 사항으로 제한되어서는 안된다는 것을 이해해야 한다. 또한 본원에 사용된 용어는 특정 실시양태만을 기재하기 위한 것이고, 본 발명의 범위에 제한하기 위한 의도는 아님을 이해해야 한다.
정의
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 발명이 속하는 당업계의 숙련자에 의해 일반적으로 이해되는 의미를 갖는다. 그러나 다음 참조는 본 발명에 관련된 당업자에게 본 발명에 사용된 여러 용어의 일반적인 정의를 제공할 수 있고, 이러한 정의가 당업계에서 일반적으로 이해되는 의미와 일치한다면 참조되고 사용될 수 있다. 상기 참조는 문헌 [Singleton et ah, Dictionary of Microbiology and Molecular Biology (2d ed. 1994)]; 문헌 [The Cambridge Dictionary of Science and Technology (Walker ed., 1988)]; 문헌 [Hale & Marham, The Harper Collins Dictionary of Biology (1991)]; 및 문헌 [Lackie et al., The Dictionary of Cell & Molecular Biology (3d ed. 1999)]; 및 문헌 [Cellular and Molecular Immunology, Eds. Abbas, Lichtman and Pober, 2nd Edition, W.B. Saunders Company]을 포함하지만, 이들로 한정되지는 않는다. 본원에 사용된 용어의 정의를 제공하고 당업계에서 일반적으로 이해되는 의미를 갖는, 당업자가 얻을 수 있는 임의의 추가의 기술적 자원은 참고될 수 있다. 본 발명의 목적을 위해, 하기 용어가 추가로 정의된다. 추가의 용어는 명세서의 다른 곳에 정의되어 있다. 본원에 사용된 바와 같이, 첨부된 청구항에서, 부정관사 (a), 및 (and), 및 정관사 (the)는 내용상 명백히 달리 지시되지 않는 한 복수 형태를 포함한다. 따라서, 예를 들면 "유전자"에 대한 인용은 하나 이상의 유전자에 관련되고, 당업자에게 공지된 그의 등가물 등을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "항체"는 자연으로부터 단리되거나 또는 재조합 방법에 의해 제조된 이뮤노글로불린 분자 (예를 들면, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 및 IgY를 포함하는 임의의 유형, 및/또는 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2를 포함하는 임의의 클래스)를 포함한다. 항체는 또한 무손상 이뮤노글로불린으로부터 제조되거나 또는 재조합 수단에 의해 제조된 항원-결합 항체 단편, 예를 들면 Fab, F(ab')2, scFv (단일 쇄 Fvs), Fv, 단일 쇄 항체, 디아바디, 디술피드-연결된 Fvs (sdFv), 및 VL 또는 VH 도메인을 포함하는 단편을 포함하는 의미이다.
본 발명의 항체 및/또는 항원-결합 항체 단편은 단일특이적 (예를 들면, 모노클로날), 이중특이적, 삼중특이적 또는 더 많은 다중특이적일 수 있다. 다중특이적 항체는 하나의 항원의 상이한 에피토프에 대해 특이적일 수 있거나, 또는 하나 초과의 항원의 에피토프에 대해 특이적일 수 있다. 예를 들면, 각각 본문에 참조로 포함된 WO 93/17715; WO 92/08802; WO 91/00360; WO 92/05793; 문헌 [Tutt, et al., 1991, J. Immunol. 147:60 69]; 미국 특허 제4,474,893호; 제4,714,681호; 제4,925,648호; 제5,573,920호; 제5,601,819호; 문헌 [Kostelny et al., 1992, J. ImmunoL 148:1547 1553]를 참조한다.
항원-결합 항체 단편은 가변 영역(들)을 단독으로 또는 힌지 영역, CH1, CH2, CH3 및 CL 도메인의 전부 또는 부분과의 조합으로 포함할 수 있다. 또한 본 발명에 포함된 것은, 가변 영역(들)과 힌지 영역, CH1, CH2, CH3 및 CL 도메인의 임의의 조합물을 포함하는 항원-결합 항체 단편이다.
바람직하게는, 항체 또는 항원-결합 항체 단편은 인간, 인간화, 뮤린 (예를 들면, 마우스 및 래트), 당나귀, 양, 토끼, 염소, 기니 피그, 낙타 (camelid), 말, 또는 닭의 것이다. 본원에 사용된 바와 같이, "인간" 항체는 인간 이뮤노글로불린의 아미노산 서열을 갖는 항체 및 인간 이뮤노글로불린 라이브러리, 인간 B 세포, 또는 하나 이상의 인간 이뮤노글로불린에 대해 트랜스제닉인 동물로부터 단리된 항체를 포함하고, 이는 하기 및 예를 들면, 쿠체르라파티 등 (Kucherlapati et al.)의 미국 특허 제5,939,598호에 기재된 바와 같다. 용어 항체는 또한, 항체 CDR 인서트를 천연 항체에서 발견된 것과 동일한 활성 결합 구조로 지향할 수 있어, 이들 키메라 단백질에서 관찰된 표적 항원의 결합이 CDR이 유도된 천연 항체의 결합 활성에 비해 유지되도록 하는 다른 단백질 골격으로 확대된다. 본원에 사용된 바와 같이, 비-인간 (예를 들면, 뮤린) 항체의 "인간화" 형태라는 용어는 비-인간 이뮤노글로불린으로부터 유도된 최소의 서열을 함유하는 키메라 항체이다. 대개, 인간화 항체는 수용자의 초가변 영역 잔기 (예를 들면, 상보성 결정 영역 "CDR")이 원하는 특이성, 친화도 및 수용력을 갖는 비-인간 종, 예를 들면 마우스, 래트, 토끼 또는 비인간 영장류로부터의 초가변 영역 잔기 (CDR) (공여 항체)에 의해 대체된 인간 이뮤노글로불린 (수용 항체)이다. 일부 예에서는, 인간 이뮤노글로불린의 프레임워크 영역 (FR) 잔기가 상응하는 비-인간 잔기에 의해 대체될 수 있다. 게다가, 인간화 항체는 수용 항체 또는 공여 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이러한 변형은 항체 성능을 더 개선시키기 위해 만들어진다. 일반적으로, 인간화 항체는 모든 또는 실질적으로 모든 초가변 영역이 비-인간 이뮤노글로불린의 초가변 영역에 상응하고, 모든 또는 실질적으로 모든 FR이 인간 이뮤노글로불린 서열의 FR인, 하나 이상 또는 전형적으로 2개의 가변 도메인 모두를 실질적으로 포함할 수 있다. 인간화 항체는 이뮤노글로불린 불변 영역 (Fc), 전형적으로 인간 이뮤노글로불린 불변 영역 (Fc)의 최소한 한 부분을 또한 임의로 포함할 수 있다. 검토를 위해, 문헌 [Jones, et al., (Nature 321:522-525, 1986)]; 문헌 [Reichmann, et al., (Nature 332:323-329, 1988)]; 및 문헌 [Presta, (Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596, 1992)]을 참조한다. 인간화 항체의 제조는 미국 특허 제7,049,135호, 제6,828,422호, 제6,753,136호, 제6,706,484호, 제6,696,248호, 제6,692,935호, 제6,667,150호, 제6,653,068호, 제6,300,064호, 제6,294,353호 및 제5,514,548호에서 찾을 수 있고, 이들 각각은 그 전문이 본원에 포함된다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "단일-쇄 Fv" 또는 "sFv" 항체 단편은 단일 폴리펩티드 쇄로 존재하는 항체의 VH 및 VL 도메인을 포함한다. 일반적으로, Fv 폴리펩티드는 VH 및 VL 도메인 사이에 폴리펩티드 링커를 추가로 포함하고, 이는 항원 결합을 위해 sFv가 원하는 구조를 형성할 수 있게 한다. 검토를 위해, 문헌 [Pluckthun (The Pharmacology of Monoclonal Antibodies. Vol. 113, Rosenburg and Moore eds. Springer-Verlag, New York, pp. 269-315, 1994)]를 참조한다. 상기 문헌의 전문은 본원에 참조로 포함된다
용어 "디아바디"는 2개의 항원-결합 부위를 갖는 작은 항체 단편을 가리키고, 이 단편은 동일한 폴리펩티드 쇄 (VH-VL)에서 경쇄 가변 도메인 (VL)에 연결된 중쇄 가변 도메인 (VH)을 포함한다. 동일한 쇄 상에서 2개의 도메인 사이의 쌍형성이 이루어지기에는 너무 짧은 링커를 사용함으로써, 도메인이 강제로 다른 쇄의 상보적 도메인과 쌍형성되고, 2개의 항원-결합 부위를 만들게 한다. 디아바디는 예를 들면, EP 404,097; WO 93/11161; 및 문헌 [Hollinger, et al., (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448, 1993)]에 더 자세히 기재되어 있고, 이들 각각은 참조로 포함된다.
표현 "선형 항체"는 당업계, 예를 들면 참조로 포함되는 문헌 [Zapata, et al., (Protein Eng. 8(10): 1057-1062, 1995)]에 기재된 항체를 가리킨다. 간단히 말하면, 상기 항체는 항원 결합 부위의 쌍을 형성하는 탠덤 (tandem) Fd 절편 (VH-CHI-VH-CHI)의 쌍을 포함한다. 선형 항체는 이중특이적 또는 단일특이적일 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "모노클로날 항체"는 실질적으로 균일한 항체의 집단으로부터 수득된 항체, 즉 적은 양으로 존재할 수 있는 가능한 자연 발생 돌연변이를 제외한 동일한 집단을 포함하는 개별 항체 10을 가리킨다. 모노클로날 항체는 매우 특이적이며, 즉 단일 항원 부위에 대해 지정된다. 게다가, 전형적으로 상이한 결정자 (에피토프)에 대해 지정된 상이한 항체를 포함하는 통상의 (폴리클로날) 항체 제제와 달리, 각각의 모노클로날 항체는 항원 상의 단일 결정자에 대해 지정된다. 수식어 "모노클로날"은 항체의 실질적으로 균일한 집단으로부터 수득되는 항체의 특성을 나타내고, 임의의 특정 방법에 의한 항체의 생성을 요구하는 것으로 해석되어서는 안된다. 예를 들면, 본 발명에 따라 사용되는 모노클로날 항체는 문헌 [Kohler, et al., (Nature 256:495, 1975)]에 처음 기재된 하이브리도마 방법에 의해 제조될 수 있거나, 또는 재조합 DNA 방법 (예를 들면, 미국 특허 제4,816,567호 참조)에 의해 제조될 수 있다. 모노클로날 항체는 예를 들면, 문헌 [Clackson, et al., (Nature 352:624-628, 1991)] 및 문헌 [Marks, et al., (J. Mol. Biol. 222:581-597, 1991)]에 기재된 기술을 사용하여 파지 항체 라이브러리로부터 또한 단리될 수 있다.
본원의 모노클로날 항체는 또한 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정 종으로부터 유도되거나 또는 특정 항체 클래스 또는 하위부류에 속하는 항체에서의 상응하는 서열과 동일하거나 또는 동종이고, 쇄(들)의 나머지가 다른 종으로부터 유도되거나 또는 다른 항체 클래스 또는 하위부류에 속하는 항체에서의 상응하는 서열과 동일하거나 또는 동종인 "키메라" 항체를 포함하고, 원하는 생물학적 활성 (예를 들면, 각각 참조로 포함된 미국 특허 제4,816,567호; 및 문헌 [Morrison, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-6855, 1984] 참조)을 나타내는 한 상기 항체의 단편을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, 본원에 사용된 바와 같은 용어 "생물학적 샘플" 또는 "환자 샘플"은 유기체 또는 유기체의 성분 (예를 들면, 세포)으로부터 수득된 샘플을 가리킨다. 샘플은 임의의 생물학적 조직 또는 유체일 수 있다. 샘플은 환자로부터 유도된 샘플인 "임상 샘플"일 수 있다. 이러한 샘플은 다른 체액 샘플 중 가래, 혈액, 혈청, 혈장, 혈액 세포 (예를 들면, 백색 세포), 조직 샘플, 생검 샘플, 요, 복막액 및 흉막액, 타액, 정액, 유방 삼출물, 뇌척수액, 눈물, 점액, 림프, 세포액, 복수, 양수, 방광 세척 및 세기관지폐포 세척 또는 그로부터의 세포를 포함하지만, 이들로 한정되지는 않는다. 환자 샘플은 신선하거나 또는 냉동일 수 있고, 헤파린, 시트레이트 또는 EDTA로 처리될 수 있다. 생물학적 샘플은 또한 조직학적 목적을 위해 채취된 조직의 절편, 예를 들면 냉동 절편을 포함할 수 있다.
용어 "암"은 고형 종양, 예를 들면 췌장, 유방, 호흡기도, 뇌, 생식 기관, 소화관, 요로, 눈, 간, 피부, 머리 및 목, 갑상선, 부갑상선의 암 및 이들의 원거리 전이를 포함하지만, 이들로 한정되지는 않는다. 용어는 또한 육종, 림프종, 백혈병 및 혈장 세포 골수종을 포함한다.
호흡기의 종양은 소-세포 및 비-소-세포 폐 암종, 및 기관지 선종 및 흉막폐 모세포종을 포함하지만, 이들로 한정되지는 않는다. 유방의 종양은 침윤성 유관 암종, 침윤성 소엽성 암종, 계내 (in situ) 유관 암종 및 계내 소엽성 암종을 포함하지만, 이들로 한정되지는 않는다. 뇌의 종양은 뇌 줄기 및 시상하부 신경교종, 소뇌 및 뇌성 별아교세포종, 속질모세포종, 뇌실막종, 및 신경외배엽 및 송과체 종양을 포함하지만, 이들로 한정되지는 않는다. 남성 생식 기관의 종양은 전립선 및 고환 암을 포함하지만, 이들로 한정되지는 않는다. 여성 생식 기관의 종양은 자궁내막, 자궁경부, 난소, 질 및 외음부 암, 및 자궁의 육종을 포함하지만, 이들로 한정되지는 않는다. 소화관의 종양은 항문, 결장, 결장직장, 식도, 담낭, 위, 췌장, 직장, 소장 및 침샘 암을 포함하지만, 이들로 한정되지는 않는다. 요로의 종양은 방광, 음경, 신장, 신우, 요관 및 요도 암을 포함하지만, 이들로 한정되지는 않는다. 눈 암은 안구내 흑색종 및 망막모세포종을 포함하지만, 이들로 한정되지는 않는다. 간의 종양은 간세포 암종 (섬유층판 변이체가 있거나 또는 없는 간 세포 암종), 쓸개관암종 (간내 담관 암종) 및 혼합 간세포 쓸개관암종을 포함하지만, 이들로 한정되지는 않는다. 피부암은 편평 세포 암종, 카포시 육종, 악성 흑색종, 메르켈 세포 피부암 및 비-흑색종 피부암을 포함하지만, 이들로 한정되지는 않는다. 머리-및-목 암은 후두 / 하인두 / 비강인두 / 입인두 암, 및 입술 및 구강 암을 포함하지만, 이들로 한정되지는 않는다. 림프종은 AIDS-관련 림프종, 비-호지킨 림프종, 피부 T-세포 림프종, 호지킨 질환 및 중추신경계의 림프종을 포함하지만, 이들로 한정되지는 않는다. 육종은 연질 조직의 육종, 골육종, 악성 섬유 조직구종, 림프육종 및 횡문근육종을 포함하지만, 이들로 한정되지는 않는다. 백혈병은 급성 골수성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 만성 림프성 백혈병, 만성 골수성 백혈병 및 모발상 세포 백혈병을 포함하지만, 이들로 한정되지는 않는다.
본 발명에 사용된 바와 같이, 용어 "에피토프"는 항원 결합 부위를 통해 항체가 결합하는 항원, 예를 들면 메소텔린 단백질에 대한 임의의 항원 결정자를 의미한다. 결정자 또는 항원 결정자는 대개 분자, 예를 들면 아미노산 또는 당 측쇄의 화학적 활성 표면 군으로 이루어지고, 대개 특정 삼차원 구조적 특징 및 특정 전하 특징을 갖는다.
용어 "특이적으로 면역반응성인"은 항체 및 항체의 항원 결합 부위에 의해 인식되는 에피토프를 갖는 단백질, 화합물 또는 항원 사이의 결합 반응을 가리킨다. 이 결합 반응은 단백질 및 다른 생물제제의 불균일 집단의 10 존재 중에서 인식된 에피토프를 갖는 단백질, 항원 또는 에피토프의 존재를 결정한다. 면역검정과 관련하여, 특이적으로 면역반응성인 항체는 인식된 에피토프를 갖는 단백질에 결합할 수 있고, 샘플에는 존재하는 에피토프가 없는 다른 단백질에, 결합한다 하더라도, 검출될 수 있는 더 낮은 정도로 결합한다. 생체내와 관련하여, "특이적으로 면역반응성인"은 동물에서 백신 또는 항원에 대해 면역 반응, 예를 들면 항원에 대한 체액성 반응 (면역학적 반응성 조건하에 백신, 단백질, 화합물 또는 항체에 제시된 항원에 대한 항체의 생성) 또는 세포-매개된 반응 (또한 본원서 "세포 면역 반응", 즉 백신, 단백질, 화합물 또는 T 림프구에 제시된 항원에 대한 T 림프구에 의해 매개된 반응)이 형성되는 조건을 가리킬 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "면역학적 반응성 조건"은, 예를 들면 온도, 염 농도, pH, 시약 및 그의 농도, 및 항원에 대해 특이적으로 면역반응성인 항원 및 동족 항체의 농도를 포함하는 반응의 물리적 조건이 제공되거나 또는 항원에 동족 항체가 결합될 수 있도록 조정된 면역검정 또는 시험관내 반응과 관련하여 사용된다. 면역학적 반응성 조건은 항체 결합 반응의 포맷에 좌우되고, 전형적으로 면역검정 프로토콜에서 이용되는 조건이다. 문헌 [Harlow and Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Publications, New York, for a description of immunoassay formats and conditions]을 참조한다. 본원에 사용된 바와 같이 용어 "환자" 또는 "대상체"는 포유동물 (예를 들면, 인간 및 동물)을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 메소텔린에 대한 특정 항체의 '불변성 결합'은 상이한 형태의 메소텔린을 발현하는 광범위한 메소텔린-발현 암 세포주에서 메소텔린에 결합하는 그의 능력을 가리킨다. 불변성 결합은, 항체 또는 그의 항원-결합 항체 단편, 또는 그의 변이체가 다른 세포외 항원, 예를 들면 메소텔린과 상호작용하는 암 항원 125 (CA125)에 의해 감추어지지 않는 메소텔린의 에피토프를 인식한다는 사실에 의해 야기될 수 있지만, 이에 제한되지는 않는다. 불변성으로 결합하는 항체에 대해, 2개의 별개의 암 세포주에 대한 FACS 역가측정에 의해 결정된 EC50 값은 10배 이하, 바람직하게는 5배, 가장 바람직하게는 1 내지 3배 차이가 날 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "면역접합체"는 바람직하게는 적합한 연결 기 또는 그의 전구체를 통해 세포독성제, 예를 들면 메이탄시노이드 또는 그의 유도체에 결합된 하나 이상의 항체 또는 그의 항원-결합 단편을 포함하는 접합체 분자를 가리킨다.
본 발명의 면역접합체
본 발명은 항메소텔린 면역접합체를 제공함으로써 메소텔린-양성 암 세포의 성장 및 신생물성 질환의 진행을 억제하는 방법을 제공한다. 제공된 면역접합체의 항체 잔기는 본원에서 '메소텔린'이라고 하는 메소텔린 전구체 폴리펩티드 (서열 36)의 40 kDa, C-말단 도메인에 대해 특이적으로 면역반응성이다.
본 발명의 한 측면에서, 발명의 항체, 항원-결합 항체 단편, 및 본 항체 및 단편의 변이체는 PCT/EP2008/009756에 기재되었고, 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역으로 이루어진다. 본 발명에 고려된 항체 또는 항원-결합 항체 단편의 변이체는 메소텔린에 대한 항체 또는 항원-결합 항체 단편의 결합 활성이 유지된 분자이다.
본 발명은 또한 (PCT/EP2008/009756)에 기재된 것과 상이하고, 화학요법제, 예를 들면 메이탄시노이드 또는 그의 유도체와 연관된 항메소텔린 항체, 항원-결합 항체 단편 및 본 발명의 항체 및 단편의 변이체로 이루어진 면역접합체에 관한 것이다.
본 발명에서 사용될 수 있는 메이탄시노이드는 당업계에 공지되어 있고, 공지된 방법에 따라 천연 공급원으로부터 단리될 수 있거나, 또는 공지된 방법에 따라 합성에 의해 제조될 수 있다.
적합한 메이탄시노이드의 예는, 메이타시놀 (메이타시놀) 및 메이타시놀 동족체를 포함한다. 적합한 메이타시놀 동족체의 예는, 변형된 방향족 고리를 갖는 것들 및 다른 위치에서 변형을 갖는 것들을 포함한다.
변형된 방향족 고리를 갖는 메이타시놀의 적합한 동족체의 구체적인 예는 다음을 포함한다:
(1) C-19-데클로로 (미국 특허 제4,256,746호) (안사미토신 P2의 LAH 환원에 의해 제조됨);
(2) C-20-히드록시 (또는 C-20-데메틸) +/-C-19-데클로로 (미국 특허 제4,361,650호 및 제4,307,016호) (스트렙토마이세스 (Streptomyces) 또는 악티노마이세스 (Actinomyces) 또는 LAH를 사용한 탈염소화를 사용한 데메틸화에 의해 제조됨); 및
(3) C-20-데메톡시, C-20-아실옥시 (-OCOR), +/-데클로로 (미국 특허 제4,294,757호) (아실 염화물을 사용한 아실화에 의해 제조됨).
다른 위치에서 변형을 갖는 메이타시놀의 적합한 동족체의 구체적인 예는 다음을 포함한다:
(1) C-9-SH (미국 특허 제4,424,219호) (메이타시놀과 H2S 또는 P2S5와의 반응에 의해 제조됨);
(2) C-14-알콕시메틸 (데메톡시/CH2OR) (미국 특허 제4,331,598호);
(3) C-14-히드록시메틸 또는 아실옥시메틸 (CH2OH 또는 CH2OAc) (미국 특허 제4,450,254호) (노카르디아 (Nocardia)로부터 제조됨);
(4) C-15-히드록시/아실옥시 (미국 특허 제4,364,866호) (스트렙토마이세스에 의한 메이타시놀의 전환에 의해 제조됨);
(5) C-15-메톡시 (미국 특허 제4,313,946호 및 제4,315,929호) (트레위아 누디프롤라 (Trewia nudiflora)로부터 단리됨);
(6) C-18-N-데메틸 (미국 특허 제4,362,663호 및 제4,322,348호) (스트렙토마이세스에 의한 메이타시놀의 데메틸화에 의해 제조됨); 및
(7) 4,5-데옥시 (미국 특허 제4,371,533호) (메이타시놀의 티타늄 트리클로라이드/LAH 환원에 의해 제조됨).
본 발명에 유용한 티올-함유 메이탄시노이드의 합성은 미국 특허 제5,208,020호, 제5,416,064호 및 제7,276,497호에 상세히 개시되어 있다.
C-3 위치, C-14 위치, C-15 위치 또는 C-20 위치에 티올 잔기를 갖는 메이탄시노이드는 모두 유용할 것으로 예상된다. C-3 위치가 바람직하고 메이타시놀의 C-3 위치가 특히 바람직하다. 또한 N-메틸-알라닌-함유 C-3 티올 잔기 메이탄시노이드 및 N-메틸-시스테인-함유 C-3 티올 잔기 메이탄시노이드 및 각각의 동족체가 바람직하다. 바람직한 메이탄시노이드는 미국 특허 제5,208,020호; 제5,416,064호; 제6,333,410호; 제6,441,163호; 제6,716,821호; 제RE39,151호 및 제7,276,497호에 기재된 것들이고, 이들 각각은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 바람직한 실시양태에서, 에스테르화된 메이타시놀은 N2'-데아세틸-N2'-(3-메르캅토-1-옥소프로필)-메이탄신 (maytansine) (DM1, CAS 등록 번호 139504-50-0), N2'-데아세틸-N2'-(4-메르캅토-1-옥소펜틸)-메이탄신 (DM3, CAS 등록 번호 796073-54-6) 및 N2'-데아세틸-N2'-(4-메틸-4-메르캅토-1-옥소펜틸)-메이탄신 (DM4 CAS 등록 번호 796073-69-3)으로부터 선택된다.
본 문서에 걸쳐, 본 발명의 대표적인 항체 "MF-J", "MOR06640", "MF-226" 및 "MF-T"가 언급된다. MF-J는 서열: 28 (DNA)/서열: 20 (단백질)에 상응하는 가변 중쇄 영역 및 서열: 32 (DNA)/서열: 24 (단백질)에 상응하는 가변 경쇄 영역을 갖는 항체를 나타낸다. MOR 06640은 서열: 29 (DNA)/서열: 21 (단백질)에 상응하는 가변 중쇄 영역 및 서열: 33 (DNA)/서열: 25 (단백질)에 상응하는 가변 경쇄 영역을 갖는 항체를 나타낸다. MF-226은 서열: 30 (DNA)/서열: 22 (단백질)에 상응하는 가변 중쇄 영역 및 서열: 34 (DNA)/서열: 26 (단백질)에 상응하는 가변 경쇄 영역을 갖는 항체를 나타낸다. MF-T는 서열: 31 (DNA)/서열: 23 (단백질)에 상응하는 가변 중쇄 영역 및 서열: 35 (DNA)/서열: 27 (단백질)에 상응하는 가변 경쇄 영역을 갖는 항체를 나타낸다. 본 발명은 본원에 예로서 사용된 이들 항체에 제한되지 않는다. 다른 유용한 항체는 예를 들면, PCT/EP2008/009756에 개시되어 있다.
한 측면에서, 본 발명은 암 항원 125 (CA 125/MUC 16)의 존재하에 메소텔린에 대해 특이적으로 면역반응성이고, 따라서 메소텔린 및 CA125 모두를 발현하는 암 세포, 예를 들면 OVCAR-3 세포를 효율적으로 표적으로 하는 면역접합체를 제공한다.
본 발명의 다른 측면에서, 본 발명은 항체 MOR 06640 또는 MF-T의 에피토프의 하나 이상의 아미노산에 대해 특이적으로 면역반응성인 면역접합체를 제공한다. 특정 측면에서, 상기 면역접합체는 항체 MOR 06640 또는 MF-T의 에피토프의 2개 이상, 3개 이상, 4개 이상, 5개 이상 또는 6개 이상의 아미노산에 대해 특이적으로 면역반응성이다. 특정 측면에서, 본 발명의 면역접합체는 항체 MOR 06640에 의해 인식되는 에피토프의 하나 이상의 아미노산에 대해 특이적으로 면역반응성이다. 또다른 측면에서, 본 발명의 항체는 항체 MF-T에 의해 인식되는 에피토프의 하나 이상의 아미노산에 대해 특이적으로 면역반응성이다.
본 발명의 또다른 측면에서, 본 발명은 메소텔린의 하나 이상의 영역에 대해 특이적으로 면역반응성이거나 또는 높은 친화도를 갖는, 아미노 산 서열이 서열: 36에 의해 묘사된 항원-결합 부위를 갖는 면역접합체를 제공한다. 면역접합체는 친화도 측정이 100 nM (Fab 단편의 1가 친화도) 이상인 경우, 항원에 대해 "높은 친화도"를 갖는다고 한다. 진보적인 면역접합체는 바람직하게는 약 100 nM 미만, 보다 바람직하게는 약 60 nM 미만, 더욱 보다 바람직하게는 약 30 nM 미만의 친화도로 메소텔린에 대해 특이적으로 면역반응성일 수 있다. 약 10 nM 미만, 보다 바람직하게는 약 3 nM 미만의 친화도로 메소텔린에 결합하는 항체가 더 바람직하다. 예를 들면, 메소텔린에 대한 본 발명의 항체의 친화도는 약 9.1 nM 또는 0.9 nM (IgG1 포맷의 1가 친화도)일 수 있다.
사용 방법
용어 "치료"는 인간을 포함하는 대상체 (또는 환자)에게 대상체의 상태를 직접적 또는 간접적으로 개선시키는 목적으로 의학적 도움이 제공되거나, 또는 대상체에서 상태 또는 장애의 진행을 늦추거나, 또는 치료하에 질환 또는 장애의 하나 이상의 증상을 완화시키는 임의의 방법, 작용, 적용, 요법 등을 포함한다.
용어 "조합 요법" 또는 "동시-요법"은 질환, 상태 및/또는 장애의 치료를 위한 2개 이상의 치료제의 투여를 의미한다. 이러한 투여는 실질적으로 동시적 방식, 예를 들면 활성 성분의 고정 비율을 갖는 단일 캡슐로 또는 각각의 억제제에 대해 다중의, 별도의 캡슐로 2개 이상의 치료제의 동시-투여를 포함한다. 또한, 상기 투여는 각각의 유형의 치료제를 순차적 방식으로 사용하는 것을 포함한다. 순차적으로 동시-투여되는 2개 이상의 치료제의 투여 순서는 제한되지 않는다. 구절 "치료 유효량"은 질환, 상태 및/또는 그의 장애 중증도 및/또는 증상의 개선의 목표를 달성하며, 주어진 치료학적 치료와 연관된 부작용을 방지하거나 또는 최소화하는 투여된 각각 제제의 양을 의미한다.
용어 "제약상 허용되는"은 대상 품목이 제약 생성물에서의 사용을 위해 적절하다는 것을 의미한다.
본 발명의 면역접합체는 치료제로서 가치있을 것으로 예상된다. 따라서, 본 발명의 실시양태는 표적 상태를 치료하는데 효과적인 양의 본 발명의 면역접합체를 함유하는 조성물을 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 상기 환자 (포유동물을 포함함)에서의 다양한 상태의 치료 방법을 포함한다.
본 발명의 면역접합체는 메소텔린 단백질과 연관된 질환 및/또는 거동의 치료 또는 예방에 사용될 수 있다. 이들 질환 및/또는 거동은 예를 들면, 암, 예를 들면 췌장, 난소, 위, 식도, 경부, 결장, 간, 호흡기도 및 폐의 암종을 포함한다. 본 발명은 또한 메소텔린이 상승되었거나 또는 다르게는 비정상적으로 발현되는 장애의 증상의 완화 방법에 관한 것이다. 이들 장애는 췌장, 난소, 위, 식도, 경부, 결장, 간, 호흡기도 및 폐의 암종 (예를 들면, 문헌 [Liao, Cancer Res. 57:2827-2831, 1997]; 문헌 [Turner, Hum. Pathol. 28:740-744, 1997]; 문헌 [Liao, et al., Am. J. Pathol. 145:598-609, 1994]; 문헌 [Saarnio, et al., Am. J. Pathol. 153:279-285, 1998]; 문헌 [Vermylen, et al., Eur. Respir. J. 14:806-811, 1999] 참조)을 포함하지만, 이들로 한정되지는 않는다. 본 발명의 한 실시양태에서, 본 발명의 면역접합체의 치료학적 유효량은 메소텔린이 상승된 장애를 갖는 환자에게 투여된다.
본 발명의 면역접합체는 단독으로 또는 하나 이상의 추가의 치료제와의 조합으로 투여될 수 있다. 조합 요법은 본 발명의 면역접합체 및 하나 이상의 추가의 치료제를 함유하는 단일 제약 투여 제제를 투여하는 것, 및 본 발명의 면역접합체 및 각각의 추가의 치료제를 그 자신의 별도의 제약 투여 제제로 투여하는 것을 포함한다. 예를 들면, 본 발명의 면역접합체 및 치료제는 환자에게 단일 경구 투여 조성물로 함께 투여될 수 있거나, 또는 각각의 제제는 별도의 경구 투여 제제로 투여될 수 있다.
별도의 투여량 제제가 사용된 경우, 본 발명의 면역접합체 및 하나 이상의 추가의 치료제는 본질적으로 같은 시간에 (예를 들면, 동시) 또는 별도로 간격을 두고 (예를 들면, 순차적으로) 투여될 수 있다. 제제의 투여의 순서는 제한되지 않는다.
예를 들면, 한 측면에서, 항메소텔린 면역접합체 또는 항암제(들) 중 하나, 또는 이들 모두의 효과를 증가시키기 위해 본 발명의 항메소텔린 면역접합체와 함께 하나 이상의 항암제를 동시-투여하는 것은, 메소텔린-관련 장애, 예를 들면 암의 치료에서의 사용을 위해 고려된다. 이러한 조합-요법은 또한 암의 예방, 암의 재발의 예방, 암의 확산 또는 전이의 예방, 또는 암과 연관된 증상의 감소 또는 완화를 위해 사용될 수 있다.
하나 이상의 항암제는 당업계에 공지된, 임의의 적합한 화합물, 예를 들면 화학제제, 다른 면역치료제, 암 백신, 항혈관신생제, 사이토킨, 호르몬 요법, 유전자 요법 및 방사선요법을 포함할 수 있다. 화학제제 (또는 "항암제" 또는 "항종양제" 또는 "암 치료제")는 암의 치료를 보조하는 임의의 분자 또는 화합물을 가리킨다. 본 발명에 의해 고려된 화학제제의 예는, 시토신 아라비노시드, 타크조이드 (taxoid) (예를 들면, 파클리탁셀, 도세탁셀), 항튜불린제 (예를 들면, 파클리탁셀, 도세탁셀, 에포틸론 B 또는 그의 동족체), 마크로리드 (예를 들면, 리조크신) 시스플라틴, 카르보플라틴, 아드리아마이신, 테노포시드 (tenoposide), 미토잔트론 (mitozantron), 디스코데르몰리드, 엘루테로빈 (eleutherobine), 2-클로로데옥시아데노신, 알킬화제 (예를 들면, 시클로포스파미드, 메클로레타민, 티오테파, 클로람부실, 멜팔란, 카무스틴 (BSNU), 로무수틴 (CCNU), 시클로토스파미드, 부술판, 디브로모만니톨, 스트렙토조토신, 미토마이신 C 및 시스-디클로로디아민 백금 (II) (DDP) 시스플라틴, 티오테파), 항생제 (예를 들면, 닥티노마이신 (예전에는 악티노마이신), 블레오마이신, 미트라마이신, 안트라마이신 (anthramycin)), 항대사물질 (예를 들면, 메토트렉세이트, 6-메르캅토퓨린, 6-티오구아닌, 시타라빈, 후라보피리돌, 5-플루오로우라실, 플루다라빈, 젬시타빈, 다카르바진, 테모졸라미드 (temozolamide)), 아스파라기나제, 바실러스 칼멧 (Bacillus Calmette) 및 구에린 (Guerin), 디프테리아 독소, 헥사메틸멜라민, 히드록시우레아, 라이소드렌.알티엠. (LYSODREN.RTM.), 뉴클레오시드 동족체, 식물 알칼로이드 (예를 들면, 탁솔, 파클리탁셀, 캠토테신, 토포테칸, 이리노테칸 (캄프토자, CPT-I 1), 빈크리스틴, 빈카 (vinca) 알칼로이드, 예를 들면 빈블라스틴), 포도필로독소 (예를 들면, 에피포도필로독소, VP-16 (에토포시드), VM-26 (테니포시드)을 포함하는 유도체), 시토칼라신 B, 콜킨, 그라미시딘 D, 에티디움 브로마이드, 에메틴, 미토마이신, 프로카바진, 메클로레타민, 안트라사이클린 (예를 들면, 다우노루비신 (예전에는 다우노마이신), 독소루비신, 독소루비신 리포솜), 디히드록시안트라신디온 (dihydroxyanthracindione), 마이토크산트론, 미트라마이신, 악티노마이신 D, 프로카인, 테트라카인, 리도카인, 프로프라놀롤, 푸로마이신, 항유사분열제, 아브린, 리신 A, 슈도모나스 (Pseudomonas) 외독소, 신경 성장 인자, 혈소판 유도된 성장 인자, 조직 플라스미노겐 활성화제, 알데스류킨, 알루타민 (allutamine), 아나스트로즐 (anastrozle), 비칼루타미드, 비아오마이신 (biaomycin), 부술판, 카페시타빈, 카르보플레인 (carboplain), 클로라부실 (chlorabusil), 클라드리빈, 실라라빈 (cylarabine), 다클리노마이신 (daclinomycin), 에스트라무신 (estramusine), 플로크수라이드 (floxuridhe), 감시타빈 (gamcitabine), 고세레인 (gosereine), 아이다루비신, 이토스파미드 (itosfamide), 라우프롤리드 (lauprolide) 아세테이트, 레바미솔, 로무슬린 (lomusline), 메클로레타민, 마게스트롤 (magestrol), 아세테이트, 메르캅토퓨리노, 메스나, 미토란크 (mitolanc), 페가스페르가제 (pegaspergase), 펜토슬라틴 (pentoslatin), 피카마인 (picamyein), 리우크슬맙 (riuxlmab), 캄파트-1, 스트라플로조신 (straplozocin), 티오구아닌, 트레티노인 (tretinoin), 비노렐빈, 또는 임의의 단편, 족 구성원, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 그의 유도체를 포함하지만, 이들로 한정되지는 않는다. 하나 이상의 화학제제 (예를 들면, FLAG, CHOP)를 포함하는 조성물은 또한 본 발명에 의해 고려된다. FLAG는 플루다라빈, 시토신 아라비노시드 (Ara-C) 및 G-CSF를 포함한다. CHOP는 시클로포스파미드, 빈크리스틴, 독소루비신 및 프레드니손을 포함한다.
화학제제는 항혈관신생제, 예를 들면 안지오스타틴, 베바시주맙 (아바스틴 (등록상표)), 소라페닙 (넥사바 (등록상표)), 바쿨로스타틴 (baculostatin), 칸스타틴 (canstatin), 마스핀 (maspin), 항-VEGF 항체 또는 펩티드, 항태반 성장 인자 항체 또는 펩티드, 항-Flk-1 항체, 항-Fit-1 항체 또는 펩티드, 라미닌 펩티드, 피브로넥틴 펩티드, 플라스미노겐 활성화제 억제제, 조직 금속단백분해효소 억제제, 인터페론, 인터류킨 12, IP-10, Gro-β, 트롬보스폰딘, 2-메톡시오에스트라디올, 프로리페린-관련 단백질, 카르복시아미도트리아졸, CMI01, 마리마스타트 (Marimastat), 펜토산 폴리술페이트, 안지오포에틴 2, 인터페론-알파, 허비마이신 A, PNU145156E, 16K 프로락틴 단편, 리노미드, 탈리도미드, 펜톡시필린, 제니스테인, TNP-470, 엔도스타틴, 파클리탁셀, 아큐틴 (accutin), 시도포비르 (cidofovir), 빈크리스틴, 블레오마이신, AGM-1470, 혈소판 인자 4 또는 미노사이클린일 수 있다.
한 측면에서, 상기 화학제제는 100 내지 1000 mg/m2/주기의 범위의 투여량의 젬시타빈이다. 한 실시양태에서, 상기 화학제제는 200 내지 4000 mg/m2/주기의 범위의 투여량의 다카르바진이다. 또다른 측면에서, 상기 투여량은 700 내지 1000 mg/m2/주기의 범위이다. 또한 또다른 측면에서, 상기 화학제제는 25 내지 50 mg/m2/주기의 범위의 투여량의 플루다라빈이다. 또다른 측면에서, 상기 화학제제는 200 내지 2000 mg/m2/주기의 범위의 투여량의 시토신 아라비노시드 (Ara-C)이다. 여전히 또다른 측면에서, 상기 화학제제는 1.5 내지 7.5 mg/kg/주기의 범위의 투여량의 도세탁셀이다. 또한 또다른 측면에서, 상기 화학제제는 5 내지 15 mg/kg/주기의 범위의 투여량의 파클리탁셀이다. 추가의 측면에서, 상기 화학제제는 5 내지 20 mg/kg/주기의 범위의 투여량의 시스플라틴이다. 여전히 추가의 측면에서, 상기 화학제제는 5 내지 20 mg/kg/주기의 범위의 투여량의 5-피우오로우라실이다. 또다른 측면에서, 상기 화학제제는 2 내지 8 mg/kg/주기의 범위의 투여량의 독소루비신이다. 또한 추가의 측면에서, 상기 화학제제는 40 내지 160 mg/kg/주기의 범위의 투여량의 에피포도필로독소이다. 또한 또다른 측면에서, 상기 화학제제는 50 내지 200 mg/kg/주기의 범위의 투여량의 시클로포스파미드이다. 추가의 측면에서, 상기 화학제제는 50 내지 150 mg/m2/주기의 범위의 투여량의 이리노테칸이다. 여전히 추가의 측면에서, 상기 화학제제는 3.7 내지 18.5 mg/m2/주기의 범위의 투여량의 빈블라스틴이다. 또다른 측면에서, 상기 화학제제는 0.7 내지 2 mg/m2/주기의 범위의 투여량의 빈크리스틴이다. 한 측면에서, 상기 화학제제는 3.3 내지 1000 mg/m2/주기의 범위의 투여량의 메토트렉세이트이다.
또다른 측면에서, 본 발명의 항메소텔린 면역접합체는 허셉틴 (등록상표), 레툭잔 (Retuxan)(등록상표), 오바렉스 (OvaRex), 파노렉스 (Panorex), BEC2, IMC-C225, 비탁진 (Vitaxin), 캄파트 I/H, 스마트 (Smart) MI95, 림포싸이드 (LymphoCide), 스마트 I D 10 및 온콜림 (Oncolym), 리툭산, 리툭시맙, 젬투주맙 또는 트라스투주맙을 포함하지만, 이들로 한정되지는 않는 하나 이상의 면역치료제, 예를 들면 항체 또는 면역조절제와 조합으로 투여된다.
본 발명은 또한 본 발명의 항메소텔린 면역접합체를 안지오스타틴, 탈리도미드, 크링글 5, 엔도스타틴, 세르핀 (세린 프로테아제 억제제) 항트롬빈, 피브로넥틴의 29 kDa N-말단 및 40 kDa C-말단 단백질 가수분해 단편, 프로락틴의 16 kDa 단백질 가수분해 단편, 혈소판 인자-4의 7.8 kDa 단백질 가수분해 단편, 혈소판 인자-4의 단편에 상응하는 β-아미노 산 펩티드 (문헌 [Maione et al., 1990, Cancer Res. 51:2077]), 콜라겐 I의 단편에 상응하는 14-아미노 산 펩티드 (문헌 [Tolma et al., 1993, J. Cell Biol. 122:497]), 트롬보스폰딘 I의 단편에 상응하는 19 아미노 산 펩티드 (문헌 [Tolsma et al., 1993, J. Cell Biol. 122:497]), SPARC의 단편에 상응하는 20-아미노 산 펩티드 (문헌 [Sage et al., 1995, J. Cell. Biochem. 57: 1329-]), 또는 임의의 단편, 족 구성원, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 그의 유도체를 포함하지만, 이들로 한정되지는 않는 하나 이상의 항혈관신생제와 함께 투여하는 것을 고려한다. 혈관신생을 억제하고, 라미닌, 피브로넥틴, 프로콜라겐 및 EGF의 단편에 상응하는 다른 펩티드는 또한 기재되었다 (리뷰 문헌 [Cao, 1998, Prog. Mol. Subcell. Biol. 20:161] 참조). RGD 단백질 (즉, 펩티드 모티프 Arg-Gly-Asp를 보유함)을 결합하는 특정 인테그린을 차단하는 모노클로날 항체 및 시클릭 펜타펩티드는 항혈관분포 활성을 갖는 것으로 입증되었다 (문헌 [Brooks et al., 1994, Science 264:569]; 문헌 [Hammes et al., 1996, Nature Medicine 2:529]). 게다가, 길항제에 의한 우로키나제 플라스미노겐 활성화제 수용체의 억제는 혈관신생, 종양 성장 및 전이를 억제한다 (문헌 [Min et al., 1996, Cancer Res. 56:2428-33; Crowley et aL, 1993, Proc Natl Acad. Sci. USA 90:5021]). 이러한 항혈관신생제의 용도는 또한 본 발명에 의해 고려된다.
또다른 측면에서, 본 발명의 항메소텔린 면역접합체는 방사선 요법과 조합되어 투여된다.
본 발명의 항메소텔린 면역접합체는 또한 림포카인, 종양 괴사 인자, 종양 괴사 인자-유사 사이토킨, 림프독소-α, 림프독소-β, 인터페론-β, 대식세포 염증성 단백질, 과립구 단핵세포 콜로니 자극 인자, 인터류킨 (인터류킨-1, 인터류킨-2, 인터류킨-6, 인터류킨-12, 인터류킨-15, 인터류킨-18을 포함하지만, 이들로 한정되지는 않음), OX40, CD27, CD30, CD40 또는 CD137 리간드, Fas-Pas 리간드, 4-IBBL, 내피 단핵세포 활성화 단백질 또는 임의의 단편, 족 구성원, 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 그의 유도체를 포함하지만, 이들로 한정되지는 않는 하나 이상의 사이토킨과 조합되어 투여될 수 있다.
본 발명의 항메소텔린 면역접합체는 또한 자가 세포 또는 조직, 비-자가 세포 또는 조직, 암배아 항원, 알파-태아단백질, 인간 융모성 생식샘자극호르몬, BCG 생백신, 멜라닌세포 직계성 단백질 (예를 들면, gp1OO, MART-1/MelanA, TRP-1 (gp75), 티로시나제, 널리 공유된 종양-연관된, 종양-특이적을 포함하는, 항원 (예를 들면, BAGE, GAGE-1, GAGE-2, MAGE-1, MAGE-3, N-아세틸글루코사미닐트랜스퍼라제-V (N-acetylglucosaminyltransferase-V), p15), 종양-연관된 돌연변이 항원 (β-카테닌, MUM-1, CDK4), 비흑색종 항원 (예를 들면, HER-2/neu (유방 및 난소 암종), 인간 5 유두종바이러스-E6, E7 (자궁경부 암종), MUC-1 (유방, 난소 및 췌장 암종)의 예를 포함하지만, 이들로 한정되지는 않는 암 백신과 조합으로 투여될 수 있다. T-세포에 의해 인식되는 인간 종양 항원에 대해서는, 일반적으로 문헌 [Robbins and Kawakami, 1996, Curr. Opin. Immunol. 8:628]을 참조한다. 암 백신은 정제된 제제이거나 또는 아닐 수 있다.
또다른 실시양태에서, 본 발명의 항메소텔린 면역접합체는 호르몬 치료와 연관되어 사용된다. 호르몬 치료학적 치료는 호르몬 효능제, 호르몬 길항제 (예를 들면, 플루타미드, 타목시펜, 류프롤리드 아세테이트 (LUPRON), LH-RH 길항제), 호르몬 생합성 및 가공의 억제제 및 스테로이드 (예를 들면, 덱사메타손, 레티노이드, 베타메타손, 코르티솔, 코르티손, 프레드니손, 데히드로테스토스테론, 글루코코르티코이드, 미네랄로코르티코이드, 에스트로겐, 테스토스테론, 프로게스틴), 항게스타겐 (예를 들면, 미페프리스톤, 오나프리스톤 (onapristone)) 및 항안드로겐 (예를 들면, 시프로테론 아세테이트)을 포함한다.
본 발명의 항메소텔린 면역접합체는 항-MDR (다중약물 내성) 표현형 제제와 예를 들면, 동시-투여되어 조합으로 사용될 수 있다. 여러 인간 암은, 각각의 약물 클래스가 상이한 구조 및 작용 메카니즘을 가짐에도 불구하고 여러 클래스의 항암 약물에 대해 내성을 동시에 본질적으로 표현하거나 또는 자발적으로 발달할 수 있다. 배양된 포유동물 세포에서 모방될 수 있는 이 현상은, 일반적으로 다중약물 내성 ("MDR") 또는 다중약물 내성 표현형이라고 한다. MDR 표현형은 인간 환자에서 암에 대한 성공적인 화학치료학적 치료에 의미있는 장애물을 제시한다. 다중 화학요법제에 대한 악성 종양의 내성은 치료 부전증의 주요 원인이다 (문헌 [Wittes et al., Cancer Treat. Rep. 70:105 (1986)]; 문헌 [Bradley, G. et al., Biochim. Biophys. Acta 948:87 (1988)]; 문헌 [Griswald, D. P. et al., Cancer Treat. Rep. 65(S2):51 (1981)]; 문헌 [Osteen, R. T. (ed.), Cancer Manual, (1990)]). 세포독성제에 대해 초기에 민감한 종양은 종종 재발하거나 또는 다중 화학치료학적 약물에 대해 반응이 없어진다 (문헌 [Riordan et al., Pharmacol. Ther. 28:51 (1985)]; 문헌 [Gottesman et al., Trends Pharmacol. Sci. 9:54 (1988)]; 문헌 [Moscow et al., J. Natl. Cancer Inst. 80:14 (1988)]; 문헌 [Croop, J. M. et al., J. Clin. Invest. 81:1303 (1988)]). 종양으로부터 수득되고, 선택적 세포독성 약물의 존재하에 배양된 세포 또는 조직에서, 그 클래스의 다른 약물 및 안트라사이클린, 빈카 알칼로이드 및 에피포도필로독소를 포함하지만, 이들로 한정되지는 않는 다른 클래스의 약물에 대한 교차-내성이 야기될 수 있다 (문헌 [Riordan et al., Pharmacol. Ther. 28:51 (1985)]; 문헌 [Gottesman et al., J. Biol. Chem. 263:12163 (1988)]). 따라서, 단일 약물에 대해 획득된 내성은 구조적 및 기능적으로 관련이 없는 다양한 군의 약물에 대한 동시 내성을 야기한다. 이러한 내성은 고체-형태 및 액체-형태 종양 (예를 들면, 혈액 또는 림프-기반 암) 모두에 대해 문제가 될 수 있다.
포유동물 세포에서의 다중약물 내성의 하나의 주요 메카니즘은 170 kDa 혈장 막 글리코단백질 펌프 시스템의 증가된 발현에 관여한다 (문헌 [Juranka et al., FASEB J 3:2583 (1989)]; 문헌 [Bradley, G. et al., Blochem. Biophys. Acta 948:87 (1988)]). 때로는 다중약물 수송체라고 하는 이 펌프 시스템을 코딩하는 유전자는 배양된 인간 세포로부터 클로닝되었고, 일반적으로 mdrl이라고 한다. 이 유전자는 여러 클래스의 정상 조직에서 발현되지만, 이들 조직에서 mdrl 유전자생성물에 대해 수송된 생리학상 기질은 확인되지 않았다. MDRl 생성물은 에너지-의존적 이출 기능을 갖는 단백질의 군인 ABC 수송체 단백질 상족의 구성원이다. 일반적으로 P-글리코단백질 ("P-170", "P-gp")로서 알려진 mdrl 유전자의 단백질 생성물은 상기 에너지-의존적 유출 펌프를 구성하는 170 kDa 트랜스-혈장 막 단백질이다. 세포 표면 상의 P-gp의 발현은, 여러 항암제를 포함하는 다중 세포독성 약물에 대해 세포가 내성이 생기게 하는데 충분하다. P-gp-매개된 MDR은 상이한 유형의 종양에서의 종양 내성의 중요한 임상적 요소인 것으로 보이고, mdrl 유전자발현은 상이한 유형의 암에서의 화학요법에 대한 내성과 연관성이 있다. mdrl 유전자의 뉴클레오티드 서열 (문헌 [Gros, P. et al., Cell 47:371 (1986)]; 문헌 [Chen, C. et al., Cell 47:381 (1986)])은 그가 P-글리코단백질과 유사하거나 또는 동일한 폴리펩티드를 코딩하고, 이들이 박테리아 수송체와 유사한 매우 보존된 클래스의 막 단백질의 구성원이고, 정상적인 생리학상 수송 절차에 관여한다는 것을 나타낸다. mdrl 유전자의 서열 분석은 Pgp는 2개의 동종 (43% 동일성) 절반 부분 사이에 분배된 1280개의 아미노산으로 이루어진다는 것을 나타낸다. 분자의 각각의 절반 부분은 6개의 소수성 막횡단 도메인을 갖고, 각각은 큰 세포질 루프 내에 ATP 결합 부위를 갖는다. 분자의 약 8% 만이 세포외이고, 탄수화물 잔기 (대략 30 kDa)는 이 영역의 부위에 결합된다.
따라서, "다중약물-내성" 또는 "다중약물-내성적" 표현형을 갖는 포유동물 세포는 세포내 환경으로부터 다수의 세포독성 물질 (예를 들면, 화학치료학적 약물)을 격리시키거나, 이출시키거나 또는 배출시키는 능력에 의해 특징지어진다는 것이 인정될 것이다. 세포는 단일 화학치료학적 약물 (선택 독소)에의 노출에 의해 가해진 선택 압력에 의해 이 표현형을 획득할 수 있다. 별법으로, 세포독성 물질의 이출은 세포 분비 생성물, 대사물 등의 정상적 이출과 같은 메카니즘에 관여할 수 있기 때문에, 세포는 독소에의 노출 전에 표현형을 나타낼 수 있다. 다중약물 내성은, 세포가 이전에 노출되지 않은 추가의 세포독소 (다른 화학치료학적 약물)를 이출하는 능력을 세포가 획득하기 때문에 선택 독소에 대해 단순하게 획득된 내성과 상이하다. 예를 들면, 문헌 [Mirski et al. (1987), 47 Cancer Res. 2594-2598]은 아드리아마이신 (독소루비신)의 선택 독소로서의 존재하에 인간 소 세포 폐 암종으로부터 유도된 H69 세포주의 배양에 의한 다중약물-내성 세포 집단의 단리를 기재한다. 생존하는 세포는 안트라사이클린 유사체 (예를 들면, 다우노마이신, 에피루비신, 메노가릴 (menogaril) 및 마이토크산트론), 아시비신 (acivicin), 에토포시드, 그라미시딘 D, 콜치신 및 빈카-유도된 알칼로이드 (빈크리스틴 및 빈블라스틴) 및 아드리아마이신의 세포독성 효과에 내성이 있는 것으로 밝혀졌다. 추가의 다중약물-내성 세포 집단을 생성하기 위해 유사한 선택 배양 기술이 적용될 수 있다. 따라서, 본 발명의 제약 조성물은 MDR 표현형 및/또는 MDR 표현형과 연관된 상태를 억제하는 활성을 갖는 화합물을 추가로 포함할 수 있다. 이러한 화합물은 당업계에 공지된 임의의 MDR 억제제 화합물, 예를 들면 MDR 성분에 대해 특이적인 항체 (예를 들면, 항-MDR 수송체 항체), 또는 구체적으로 다중약물 내성을 반전시키거나 또는 억제시키는 것으로 알려진 제제인 타목시펜, 베라파밀 및 시클로스포린 A를 포함하는 MDR 수송체의 소 분자 억제제를 포함할 수 있다 (본문에 참조로 포함된 문헌 [Lavie et al. J. Biol. Chem. 271: 19530-10536, 1996]). 상기 화합물은 미국 특허 제5,773,280호, 제6,225,325호 및 제5,403,574호에서 찾을 수 있고, 이들 각각은 본문에 참조로 포함된다. 상기 MDR 억제제 화합물은 화학치료학적 치료를 보조하거나 또는 개선하기 위한 MDR 표현형의 검출에 이은 MDR 표현형의 반전을 포함하는 다양한 목적을 위해 본 발명의 항메소텔린 면역접합체와 동시-투여될 수 있다. MDR 억제제, 예를 들면 타목시펜, 베라파밀 또는 시클로스포린 A는 MDR 표현형의 검출을 보조하기 위해 본 발명의 화합물과 함께 사용될 수 있다. 이 측면에 따라, 기질 도메인에 대해 이미징 (imaging) 화합물을 수송하거나 또는 "펌프 아웃 (pump out)"하는 MDR 수송 시스템의 수용력은 억제제의 존재하에 감소될 것이기 때문에, MDR 억제제는 MDR 암 세포에서 본 발명의 화합물의 흡수 및 축적을 증진시킬 수 있다.
또한 또다른 실시양태에서, 본 발명의 항메소텔린 면역접합체는 암의 치료에 대한 유전자 요법 프로그램과 연관되어 사용된다. 인터류킨-2를 분비하는 재조합 세포로의 유전자 요법은 암, 특히 유방암을 예방하거나 또는 치료하기 위해 진보적인 면역접합체와 조합되어 투여될 수 있다 (예를 들면, 문헌 [Deshmukh et ah, 2001, J. Neurosurg. 94:287] 참조).
암의 치료를 위해 특정 면역접합체의 치료학적으로 유용한 능력을 평가하기 위해, 예로서, 면역접합체는 마우스 이종이식편 종양 모델에서 생체내에서 시험될 수 있다. 치료학적 모델의 예는 실시예 1 및 2에 상세히 나타난다. 항체 활성은 실시예 3에 기재된 바와 같이, 또한 항체 의존적 세포-매개된 세포독성 검정을 사용하여 시험될 수 있다.
제약 조성물 및 투여량
본원에 기재된 면역접합체는 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물로 제공될 수 있다. 제약상 허용되는 담체는 비-발열성일 수 있다. 조성물은 단독으로 또는 염수, 완충된 염수, 덱스트로스 및 물을 포함하지만, 이들로 한정되지는 않는 임의의 멸균된, 생체적합한 제약 담체로 투여될 수 있는 하나 이상의 다른 제제, 예를 들면 안정화 화합물과 조합으로 투여될 수 있다. 염수, 글리신 등을 포함하지만, 이들로 한정되지는 않는 다양한 수성 담체가 사용될 수 있다. 이들 용액은 멸균되었고, 일반적으로 미립자 물질이 없다. 이들 용액은 통상의, 잘 알려진 멸균 기술 (예를 들면, 여과)에 의해 멸균될 수 있다.
일반적으로, 구절 "제약상 허용되는 담체"는 당업계에서 인정하고, 포유동물에게 본 발명의 화합물을 투여하기 위해 적합한 제약상 허용되는 물질, 조성물 또는 비히클을 포함한다. 담체는 대상체 제제를 하나의 기관, 또는 몸의 일부로부터 다른 기관, 또는 몸의 일부로 운반 또는 수송하는데 관여하는 액체 또는 고체 충전재, 희석제, 부형제, 용매 또는 압축 물질을 포함한다. 각각의 담체는 제제의 다른 성분과 호환성을 갖고, 환자에게 해를 주지 않는 의미에서 "허용" 되어야 한다. 제약상 허용되는 담체로서의 역할을 할 수 있는 물질의 일부 예는, 슈가, 예를 들면 락토스, 글루코스 및 수크로스; 전분, 예를 들면 옥수수 전분 및 감자 전분; 셀룰로스 및 그의 유도체, 예를 들면 나트륨 카르복시메틸 셀룰로스, 에틸 셀룰로스 및 셀룰로스 아세테이트; 분말화 트래거캔스; 맥아; 젤라틴; 활석; 부형제, 예를 들면 코코아 버터 및 좌제 왁스; 오일, 예를 들면 땅콩 오일, 목화씨 오일, 잇꽃 오일, 참기름, 올리브 오일, 옥수수 오일 및 대두 오일; 글리콜, 예를 들면 프로필렌 글리콜; 폴리올, 예를 들면 글리세린, 소르비톨, 만니톨 및 폴리에틸렌 글리콜; 에스테르, 예를 들면 에틸 올레에이트 및 에틸 라우레이트; 한천; 완충제, 예를 들면 마그네슘 히드록시드 및 알루미늄 히드록시드; 알긴산; 무-발열원 물; 등장성 염수; 링거 용액; 에틸 알콜; 포스페이트 완충제 용액; 및 제약 제제에서 사용되는 다른 비독성 호환성 물질을 포함한다. 습윤제, 유화제 및 윤활제, 예를 들면 나트륨 라우릴 술페이트 및 마그네슘 스테아레이트, 및 착색제, 방출제, 코팅제, 감미제, 향미제 및 향수제, 방부제 및 항산화제는 또한 본 발명의 면역접합체 조성물에 존재할 수 있다.
제약상 허용되는 항산화제의 예는, 물 가용성 항산화제, 예를 들면 아스코르브산, 시스테인 히드로클로라이드, 나트륨 비술페이트, 나트륨 메타비술피트, 나트륨 술피트 등; 오일-가용성 항산화제, 예를 들면 아스코빌 팔미테이트, 부틸화 히드록시아니솔 (BHA), 부틸화 히드록시톨루엔 (BHT), 레시틴, 프로필 살레이트, 알파-토코페롤 등; 및 금속 킬레이트제, 예를 들면 시트르산, 에틸렌디아민 테트라아세트산 (EDTA), 소르비톨, 타르타르산, 인산 등을 포함한다.
조성물은 생리학상 조건, 예를 들면 pH 조절 및 완충제 등을 비슷하게 하기 위해 요구되는 제약상 허용되는 보조제 물질을 함유할 수 있다. 상기 제약 제제에서의 본 발명의 면역접합체의 농도는 크게 다를 수 있고, 선택된 특정 투여 방식에 따라 주로 유체 부피, 점도 등을 기준으로 하여 선택될 수 있다. 원하는 경우, 하나 초과의 유형의 항체 또는 면역접합체가 제약 조성물에 포함될 수 있다 (예를 들면, 메소텔린 결합에 대해 상이한 Ka를 갖는 항체).
조성물은 환자에게 단독으로, 또는 다른 제제, 약물 또는 호르몬과 조합으로 투여될 수 있다. 활성 성분에 추가로, 이들 제약 조성물은 제약상 사용될 수 있는 제제로의 활성 화합물의 공정을 촉진시킬 수 있는 부형제 및 보조제를 포함하는 적합한 제약상 허용되는 담체를 함유할 수 있다. 본 발명의 제약 조성물은 경구, 정맥내, 근육내, 동맥내, 척수내, 경막내, 심실내, 경피, 피하, 복막내, 비강내, 비경구, 국소, 설하 또는 직장 투여를 포함하지만, 이들로 한정되지는 않는 임의의 수의 경로에 의해 투여될 수 있다.
본 발명의 조성물은 추가로 적합한 면역담체, 예를 들면 단백질, 폴리펩티드 또는 펩티드, 예를 들면 알부민, 헤모시아닌, 티로글로불린 및 그의 유도체, 특히 소 혈청 알부민 (BSA) 및 키홀 림펫 (keyhole limpet) 헤모시아닌 (KLH), 폴리사카리드, 탄수화물, 중합체 및 고체 상을 고려한다. 다른 단백질-유도된 또는 비-단백질 유도된 물질은 당업자에게 공지되어 있다.
백신, 예를 들면 본 발명의 항체와 함께 암 백신에 관한 측면에서, 본 발명의 조성물은 보조제와 함께 또는 없이 투여될 수 있다. 투여는 임의의 보조제-유도된 독성을 방지하기 위해 보조제 없이 수행될 수 있다. 본 발명과 관련된 당업자, 예를 들면 암 전문 의사는 보조제가 사용되어야 하거나 또는 사용되지 않아야 함을 확인하는 방법, 및 대상체의 병력, 가족 데이터, 독성 데이터, 알레르기-관련 시험 결과 등에 따라서 보조제가 사용될 수 있다는 것을 인정하고 이해할 것이다. 보조제가 사용된 실시양태에서, 보조제가 보호 항체, 예를 들면 보호 IgG 항체의 형성을 촉진하는 것이 유리하다. 당업자에게 공지된 임의의 적합한 보조제는 본 발명에 의해 고려되고, 본 발명에 대해 쉽게 개질된다. 동물에게 백신을 접종하는데 사용하기 위한 적합한 보조제는 알루미늄 히드록시드, 사포닌-및-그의 정제된 성분 큇 (Quit) A, 완전 프로인트 보조제 (CFA) 및 불완전 프로인트 보조제 (IFA)를 포함하지만, 이들로 한정되지는 않는다. 덱스트란 술페이트는 포도상구균 (staphylococcal) 세포 표면 항원에 대한 IgG2 항체의 강력한 자극제라는 것으로 나타났고, 또한 보조제로서 적합하다. 일부 보조제는 수의학적 적용을 위해 더 바람직할 수 있고, 반면 다른 보조제는 인간에서의 사용을 위해 바람직하고, 보조제 독성은 인간에게 화합물을 투여하기 전에 당업자에 의해 고려되어야 하는 사항이라는 것이 당업자에 의해 인정될 것이다.
비경구, 피하, 정맥내, 근육내 투여 등; 적합한 제약 담체; 및 제제 및 투여를 위한 기술을 위해 적합한 제제는 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다 (예를 들면, 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pa., 20th edition, 2000]). 경구 투여를 위한 본 발명의 화합물의 액체 투여 형태는 제약상 허용되는 에멀젼, 마이크로에멀젼, 용액, 현탁액, 시럽 및 엘렉시르 (elixir)를 포함한다. 활성 성분에 추가로, 액체 투여 형태는 당업계에서 흔히 사용되는 불활성 희석제, 예를 들면 물 또는 다른 용매, 가용화제 및 유화제, 예를 들면 에틸 알콜, 이소프로필 알콜, 에틸 카르보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알콜, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸렌 글리콜, 오일 (특히, 목화씨, 땅콩, 옥수수, 배아, 올리브, 피마자 오일 및 참기름), 글리세롤, 테트라히드로푸릴 알콜, 폴리에틸렌 글리콜 및 소르비탄의 지방산 에스테르 및 이들의 혼합물을 함유할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이 구절 "비경구 투여" 및 "비경구적으로 투여된"은 대체로 주사를 통해, 그리고 정맥내, 근육내, 동맥내, 경막내, 관절낭내, 안와내, 심장내, 진피내, 복막내, 경기관, 피하, 표피밑, 관절내, 피막밑, 지주막하, 척주내 및 흉골내 주사 및 투입을 포함하지만, 이들로 한정되지는 않는 소화관내 및 국소 투여와는 다른 투여 방식을 의미한다.
치료학적으로 효과적인 투여량의 결정은 당업자의 능력으로 충분히 할 수 있다. 치료학적으로 효과적인 투여량은 치료학적으로 효과적인 투여량 없이 나타나는 효능과 비교하여, 질환 (예를 들면, 암)을 효과적으로 치료하기 위해 사용될 수 있는 면역접합체의 양을 가리킨다.
치료학적으로 효과적인 투여량은 동물 모델 (예를 들면, 래트, 마우스, 토끼, 개 또는 돼지)에서 초기에 추정될 수 있다. 동물 모델은 또한 적절한 농도 범위 및 투여 경로를 결정하기 위해 사용될 수 있다. 상기 정보는 이어서 인간에서의 투여를 위한 유용한 투여량 및 경로를 결정하기 위해 사용될 수 있다. 면역접합체의 치료학적 효능 및 독성 (예를 들면, ED50 - 집단의 50%에서 치료학적으로 효과적인 투여량 및 LD50 - 집단의 50%에서 치명적인 투여량)은 세포 배양 또는 실험적 동물에서의 표준 제약 절차에 의해 결정될 수 있다. 독성 효과 대 치료학적 효과의 투여량 비율이 치료 지수이고, LD50/ED50의 비율로서 표현될 수 있다. 동물 연구로부터 수득된 데이터는 인간에서의 사용을 위한 투여량의 범위를 만드는데 사용될 수 있다. 상기 조성물에 함유된 투여량은 독성이 조금 있거나 또는 없는 ED50를 포함하는 순환 농도의 범위 내에 있을 수 있다. 투여량은 이 범위 내에서 사용된 투여 형태, 환자의 민감도 및 투여 경로에 따라서 달라진다.
정확한 투여량은 치료가 요구되는 환자에 관련된 인자를 고려하여, 의사에 의해 결정될 수 있다. 투여량 및 투여는 충분한 수준의 면역접합체를 제공하기 위해 또는 원하는 효과를 유지하기 위해 조정될 수 있다. 고려될 수 있는 인자는 질환 상태의 중증도, 대상체의 일반적인 건강, 연령, 몸무게 및 대상체의 성별, 식습관, 시간 및 투여의 빈도, 약물 조합물(들), 반응 민감도 및 요법에 대한 내성/반응을 포함한다. 본 발명의 면역접합체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 구축되어 트랜스페린-폴리캐티온-매개된 DNA 전달, 순수한 또는 압축된 핵산으로의 형질감염, 리포좀-매개된 세포 융합, DNA-코팅된 라텍스 비드 (bead)의 세포내 수송, 원형질체 융합, 바이러스 감염, 전기천공, "유전자 건 (gun)," 및 DEAE- 또는 칼슘 포스페이트-매개된 형질감염을 포함하지만, 이들로 한정되지는 않는 잘-확립된 기술을 사용하여 세포에 생체외 또는 생체내 중 하나로 도입될 수 있다.
면역접합체의 독소단 성분의 효과적인 생체내 투여량은 환자 체중 1 kg 당 약 5 μg 내지 약 500 μg의 범위이다. 본 발명의 면역접합체-함유 제약 조성물의 투여 방식은 항체를 숙주에게 전달하는 임의의 적합한 경로일 수 있다. 예로서, 본 발명의 제약 조성물은 비경구 투여 (예를 들면, 피하, 근육내, 정맥내 또는 비강내 투여)를 위해 유용할 수 있다. 본원에 인용된 모든 특허 및 특허 출원은 명확히 본문에 참조로 포함된다. 상기 본원은 일반적으로 본 발명을 설명한다. 더 완전한 이해는 아래 구체적인 실시예에 대한 참조에 의해 수득될 수 있고, 이는 단지 설명을 위한 목적을 위해 제공되고, 본 발명의 범위를 제한할 의도는 없다.
실시예
실시예 1: 메소텔린을 발현하는 인간 췌장 암종 이종이식편 마우스 모델에서의 면역접합체 효능
항메소텔린 면역접합체가 메소텔린 의존적 방식으로 종양의 성장을 감소시킬 수 있는지에 대해 분석하기 위해, 인간 췌장 암종 세포 (MiaPaCa-2)를 메소텔린으로 안정적으로 형질감염시키고, 이를 피하 성장하는 종양 마우스 모델을 확립하기 위해 사용하였다. 인간 결장 암종 세포주 HT29를 효능 연구 내의 메소텔린 음성 대조군 종양을 확립하기 위해 사용하였다. MiaPaCa 세포를 10% (v/v) FCS, 2.5% (v/v) 말 혈청, 1.5 g/l 나트륨비카르보네이트, 4.5 g/l 글루코스, 4 mM 글루타민 및 0.4 % (v/v) 히그로마이신으로 보충된 DMEM 배지 중에서 유착성 배양물로서 유지하였다. HT29 세포를 1.5 mM 글루타민, 2.2 g/l 나트륨비카르보네이트 및 10% (v/v) FCS 함유 멕코이 (McCoy's) 5a 배지 중에서 배양하였다. MiaPaCa-2 세포에서의 메소텔린 발현 및 HT29 세포 중에 메소텔린이 없음을 FACS에 의해 확인하였다 (본원에 나타나지 않음). 종양 세포의 생체내 성장을 평가하기 위해, 암컷 NMRI 누드 마우스에 50% 매트리겔 (Matrigel)(상표명) 및 50% 배지 중에 재현탁한 3 x 106 MiaPaCa-2 세포 또는 1 x 106 HT29 세포를 우측 옆구리로 피하 접종하였다. 항메소텔린 면역접합체로서, MF-J-SPDB-DM4, MF-T-SPDB-DM4, MF226-SPDB-DM4 및 MOR6640-SPDB-DM4를 0.01 mg/kg, 0.03 mg/kg, 0.05 mg/kg 및 0.2 mg/kg의 처리 투여량 (독소단의 양과 관련됨)에서 시험하였다. MF-J-SPDB-DM4, MF-T-SPDB-DM4, MF226-SPDB-DM4 및 MOR6640-SPDB-DM4를 다음 절차에 의해 생성하였다: 항메소텔린 항체를 4-[2-피리딜디티오]부탄산 N-히드록시숙신이미드 에스테르 (SPDB)로 변형하여 디티오피리딜 기를 도입하였다. 항체를 변형하기 위해 8 mg/mL 항체에서, ~6-배 몰 과량의 SPDB (EtOH 중의 ~20 mM 스톡 (stock) 용액)를 사용하였다. 변형된 항체를 티오피리딜에 비교하여 메이탄시노이드의 1.7-배 몰 과량의 유리 티올 형태로 반응시켰다. 반응을 2.5 mg/ml 항체에서, 3% 디메틸아세트아미드 (3% v/v)의 존재하에 20시간 동안 실온에서 수행하였다. 접합 반응 혼합물을 탈염 스파덱스 (Sephadex) G25 컬럼을 사용하여 반응하지 않은 약물 및 반응 부산물로부터 정제하였다. 항체 당 메이탄시노이드 분자의 수를, 280 nm에서 항체에 대해 224000 M-1 cm-1 및 DM4에 대해 5180 M-1 cm-1의 흡광 계수를 사용하여 252 nm 및 280 nm에서의 흡광도를 측정하여 계산하였다. 252 nm/280 nm 흡광도 비율은 항체에 대해 0.37 및 DM4에 대해 5.05이다.
처리를 종양 세포 접종 후 5 일차에 종양 확립 후에 개시하였고, 이어서 종양 세포 접종 후 8 일차 및 12 일차에 2회 추가 처리하였다. 대조군 마우스를 0.2 mg/kg의 비-표적 면역접합체 (항리소자임-SPDB-DM4) 또는 등가 부피의 비히클 단독 (10 mM 히스티딘, 130 mM 글리신, 5% (w/v) 수크로스, pH 5.5) 중 하나로 처리하였다. 처리는 정맥내 적용을 통해 100 μl/체중 10 g의 투여량 부피로 발생하였다. 군은 각각 6 마리의 동물로 이루어졌다. 마우스의 건강 상태를 매일 검사하였다. 피하 종양의 길이 및 너비를 전자 밀림자를 사용하여 1주일에 2회 측정하였다. 종양 면적을 다음 화학식에 의해 계산하였다: 종양 면적 [mm2] = 길이 [mm] x 너비 [mm]. 실험에 걸쳐 수득한 모든 데이터를 문서화하였다. 상이한 처리 투여량에서의 메소텔린-형질감염된 인간 췌장 암종 세포에 대한 항메소텔린 면역접합체 MF-T-SPDB-DM4의 항종양 효능의 예는 도 1에 나타난다. 암컷 NMRI 누드 마우스에 50% 매트리겔 (상표명)/50% 배지 중에 재현탁한 3 x 106 메소텔린 양성 MiaPaCa-2 인간 췌장 암종 세포 (A) 또는 1 x 106 메소텔린 음성 HT29 인간 결장 암종 세포 (B)를 그들의 우측 옆구리로 접종하였다. 종양 세포 접종 5, 8, 및 12일 후에, 마우스는 0.01, 0.03, 0.05, 0.2 mg/kg MF-T-SPDB-DM4 (모든 농도는 독소단의 양에 관련됨), 또는 비히클을 단독으로 투여받았다. 종양의 길이 및 너비를 1주일에 2회 측정하였고, 종양 면적을 너비 및 길이의 곱에 의해 계산하였다. 각각의 군에 대한 평균 값 및 표준 편차 및 측정 시점을 그래프로 나타내었다. 모두 n = 6이었다. 별표는 P-값 < 0.05을 나타낸다.
종양이 있는 마우스의 처리는 시험된 모든 항메소텔린 면역접합체가 생체내에서 메소텔린 양성 MiaPaCa-2 종양의 성장을 0.03 mg/kg, 0.05 mg/kg 및 0.2 mg/kg의 투여량으로 억제할 수 있다는 것을 밝혔다. MF-T-SPDB-DM4의 0.05 mg/kg 및 0.2 mg/kg의 투여량으로 132일의 관찰 기간의 종료까지 종양의 재성장 없이 완전한 종양 근치가 발생하였다. 0.05 mg/kg의 비-표적 대조군 항리소자임-SPDB-DM4는 메소텔린 양성 MiaPaCa 종양 성장 (표 1)에 대해 아무런 효과가 없었다. 처리되지 않은 종양 및 비히클 처리된 종양에 비교하여, 메소텔린 음성 HT29 종양의 성장은 가장 높은 투여량인 0.2 mg/kg MF-T-SPDB-DM4에 의해 의미있게 감소하지 않았다. 이는 MF-T-SPDB-DM4의 강한 종양 억제 효능은 종양 내의 메소텔린의 발현에 좌우된다는 것을 보여준다.
Figure 112011094027794-pct00001
실시예 2: 메소텔린을 내인성으로 발현하는 종양에서의 효능 및 상이한 링커의 비교
항메소텔린 면역접합체가 생체내에서 메소텔린을 내인성으로 발현하는 종양 세포의 성장을 억제시킬 수 있는지에 대해 시험하기 위해, 피하로 성장하는 인간 경부 암종 세포 (HeLaMATU)와 함께 이종이식편 모델을 사용하였다. HeLaMATU 세포를 10% (v/v) FCS, 2.5% (v/v) 말 혈청, 1% 나트륨 피루베이트, 및 1% (w/v) 글루타민으로 보충된 DMEM/HAMS12 배지 중의 유착성 배양물로서 유지시켰다. 메소텔린 발현을 시험관내 FACS 분석에 의해 확인하였다. 암컷 NMRI 누드 마우스에 50% 매트리겔 (상표명)/50% 배지 중에 재현탁한 1.5 x 106 HeLaMATU 세포를 우측 옆구리로 피하 접종하였다. 또한, 극성 (-술포-SPDB)에 의한, 안정적인 링커 (-SMCC)에 의한, 또는 극성 및 안정적인 링커 (-(PEG)4-말)에 의해 절단될 수 있는 SPDB-링커의 교환이 생체내에서 MOR6640-기반 면역접합체의 변경된 항종양 효능으로 이어지는지에 대해 다루었다. HeLaMATU 종양이 있는 마우스를 종양 세포 접종 후 5, 8, 및 12일 차에, 0.2 mg/kg의 MOR6640-SPDB-DM4, MOR6640-SMCC-DM1, MOR6640-술포-SPDB-DM4 또는 MOR6640-(PEG)4-말-DM1 (독소단의 양과 관련됨) 중 하나로 정맥내로 처리하였다. 대조군 마우스를 0.2 mg/kg의 비-표적 면역접합체 (항리소자임-SPDB-DM4) 또는 등가 부피의 비히클 단독 중 하나로 처리하였다. 군은 각각 6 마리의 동물로 이루어졌다. 마우스의 건강 상태의 일일 검사를 수행하였다. 피하 종양의 길이 및 너비를 전자 밀림자를 사용하여 1주일에 2회 측정하였다. 종양 면적을 다음 화학식에 의해 계산하였다: 종양 면적 [mm2] = 길이 [mm] x 너비 [mm]. 수득된 데이터는 도 2에 나타난다. 종양이 있는 마우스의 처리는 a) 항메소텔린 면역접합체는 내인성으로 메소텔린을 발현하는 종양의 성장을 생체내에서 억제하는데 효과적이었고, b) 절단될 수 있는 링커 (MOR6640-SPDB-DM4 및 MOR6640)를 갖는 접합체는 안정적인 링커 (MOR6640-SMCC-DM1 및 MOR6640-(PEG)4-말-DM1)를 갖는 접합체보다 더 높은 항종양 효능을 보인다는 것을 밝혔다. 특히, MOR6640-SPDB-DM4 및 MOR6640-술포-SPDB-DM4는 마지막 처리로부터 11일 후에 모든 처리된 동물의 종양의 근치로 이어진 반면, MOR6640-SMCC-DM1 및 MOR6640-(PEG)4-말-DM1로의 처리는 단지 종양 성장의 지연을 야기하였다. 그러나, 마지막 처리로부터 11일 후에 각각 MOR6640-SMCC-DM1 및 MOR6640-(PEG)4-말-DM1로 처리된 종양의 부위는, 비히클 또는 항리소자임-SPDB-DM4 처리된 종양과 비교하여 의미있게 작았다. 비-표적 대조군 접합체는 종양 성장에 대해 효과가 없었다. 제2 이종이식편 모델에서 상이한 링커의 항종양 효능을 비교하기 위해, 우리는 피하로 성장하는 벡터- 또는 메소텔린-형질감염된 (#37) MiaPaCa-2 세포 (인간 췌장 암종 세포)를 갖는 모델을 사용하였다. MiaPaCa-2-벡터 및 MiaPaCa-2#37 세포를 10% (v/v) FCS, 1% (w/v) 글루타민 및 0.1 mM 비-필수 아미노산으로 보충된 DMEM/HAMS12 배지 중의 유착성 배양물로서 유지하였다. 메소텔린 발현을 FACS 분석 및 생체 외에서 피하 종양의 면역조직화학적 분석에 의해 확인하였다. 암컷 NMRI 누드 마우스를 각각 50% 매트리겔 (상표명)/50% 배지 중에 재현탁한 3 x 106 MiaPaCa-2-벡터 및 MiaPaCa-2#37 세포로 우측 옆구리로 피하 접종하였다. 종양이 있는 마우스를 종양 세포 접종 후 5, 8, 및 12일 차에 0.05 mg/kg의 MOR6640-SPDB-DM4, MOR6640-SMCC-DM1, MOR6640-술포-SPDB-DM4, 또는 MOR6640-(PEG)4-말-DM1 (독소단의 양과 관련됨) 중 하나로 처리하였다. 대조군 마우스를 0.05 mg/kg의 비-표적 면역접합체 (항리소자임-SPDB-DM4) 또는 등가 부피의 비히클 단독 중 하나로 처리하였다. 군은 각각 6 마리의 동물로 이루어졌다. 마우스의 건강 상태의 일일 검사를 수행하였다. 피하 종양의 길이 및 너비를 전자 밀림자를 사용하여 1주일에 2회 측정하였다. 종양 면적을 다음 화학식에 의해 계산하였다: 종양 면적 [mm2] = 길이 [mm] x 너비 [mm]. 종양 성장 데이터는 도 3에 나타난다. 메소텔린을 발현하는 종양이 있는 마우스에서, MOR6640-SPDB-DM4 및 MOR6640-술포-SPDB-DM4로의 처리는 마지막 처리로부터 12일 후에 모든 처리된 동물의 종양의 근치로 이어졌다. 그러나, 이들 종양의 재-성장을 10일 후에 (도 3A) 수득하였다. MOR6640-SMCC-DM1, MOR6640-(PEG)4-말-DM1 및 항리소자임-SPDB-DM4로의 처리는 종양 성장에 의미있는 영향을 주지 않았다. 메소텔린을 발현하는 종양에 대조하여, 어떠한 처리도 생체내에서 벡터-형질감염된 MiaPaCa-2 세포 (도 3B)의 변경된 성장으로 이어지지 않았다.
실시예 3:항메소텔린 면역접합체의 시험관내 세포독성
항메소텔린 면역접합체의 세포독성을 평가하기 위해, 상이한 메소텔린을 발현하는 세포주를 80-90% 합류로 성장시키고, 트립신화 및 계수하였다. 이어서 세포를 웰당 25 μl의 부피로 800에서 모든 세포주에 대해 그들의 성장 배지에서 384-웰 넓적 바닥 플레이트로 시딩 (seed)하였다. 빈 감산 (blank subtraction)을 위해 배지만 있는 웰을 준비하였다. 시딩 24시간 후, MF-J-SPDB-DM4, MF-226-SPDB-DM4, MOR6640-SPDP-DM4, MF226-SPDP-DM4 및 항리소자임-SPDP-DM4를 0.01 내지 300 nM의 범위로 투여하였다. 각각의 희석을 위해 3벌을 준비하였다. 96시간 경과 후에 종말점 측정을 수행하였다. 세포 생존을 WST-1 검정 측정 (로슈 (Roche) 품목번호 1644807)에 의해 평가하였다. IC50 값은 표 2에 나타난다. HelaMatu 세포에 대한 MF-T-SPDP-DM4의 시험관내 세포독성을 보여주는 용량-반응 곡선은 도 4에 나타난다.
Figure 112011094027794-pct00002
Figure 112011094027794-pct00003
SEQUENCE LISTING <110> Bayer Healthcare <120> Anti-Mesothelin Antibodies and Uses Thereof <130> BHC 09 1 008 <160> 36 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr Trp Ile Gly 1 5 10 <210> 2 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Asn Tyr Ile Asn 1 5 10 <210> 3 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Trp Ile Gly 1 5 10 <210> 4 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Trp Met Gly Val Ile Met Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Arg Tyr Ser Pro 1 5 10 15 Ser Phe Gln Gly 20 <210> 5 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5 Trp Met Gly Ile Ile Asn Pro His Gly Gly Asp Thr Lys Tyr Ala Gln 1 5 10 15 Lys Phe Gln Gly 20 <210> 6 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Trp Met Gly Ile Ile Asp Pro Gly Asp Ser Arg Thr Arg Tyr Ser Pro 1 5 10 15 Ser Phe Gln Gly 20 <210> 7 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 7 Tyr Gly His Gly Met Tyr Gly Gly Ala Leu Asp Val 1 5 10 <210> 8 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 8 Trp His His Gly Thr Trp Ile Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 9 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 9 Gly Gln Leu Tyr Gly Gly Thr Tyr Met Asp Gly 1 5 10 <210> 10 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 10 Arg Ala Ser Gln Ser Val Arg Ser Ser Arg Leu Ala 1 5 10 <210> 11 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 11 Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr Val Ser 1 5 10 <210> 12 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 12 Thr Gly Thr Ser Ser Asp Ile Gly Gly Tyr Asn Ser Val Ser 1 5 10 <210> 13 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 13 Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Lys Arg Ala Thr 1 5 10 <210> 14 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 14 Leu Leu Ile Tyr Asn Asp Asn Gln Arg Pro Ser 1 5 10 <210> 15 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 15 Leu Met Ile Tyr Gly Val Asn Asn Arg Pro Ser 1 5 10 <210> 16 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 16 Gln Gln Tyr Tyr Asp Phe Pro Pro 1 5 <210> 17 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 17 Gln Gln Tyr Ser His Asp Pro Ser Gly 1 5 <210> 18 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 18 Ser Thr Tyr Asp Arg Arg Thr Phe Ser 1 5 <210> 19 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 19 Ser Ser Tyr Asp Ile Glu Ser Ala Thr Pro 1 5 10 <210> 20 <211> 121 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 20 Gln Val Glu Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Val Ile Met Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe 50 55 60 Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Gly His Gly Met Tyr Gly Gly Ala Leu Asp Val Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 21 <211> 121 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 21 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Val Ile Met Pro Ser Asp Ser Tyr Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe 50 55 60 Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Tyr Gly His Gly Met Tyr Gly Gly Ala Leu Asp Val Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 22 <211> 119 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 22 Gln Val Glu Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Asn 20 25 30 Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Asn Pro His Gly Gly Asp Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Trp His His Gly Thr Trp Ile Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 23 <211> 120 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 23 Gln Val Glu Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Asp Pro Gly Asp Ser Arg Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe 50 55 60 Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gly Gln Leu Tyr Gly Gly Thr Tyr Met Asp Gly Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 24 <211> 110 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 24 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Arg Ser Ser 20 25 30 Arg Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Lys Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Asp Phe Pro 85 90 95 Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr 100 105 110 <210> 25 <211> 111 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 25 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Arg Ser Ser 20 25 30 Arg Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Gly Ala Ser Lys Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80 Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser His Asp Pro 85 90 95 Ser Gly Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr 100 105 110 <210> 26 <211> 111 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 26 Asp Ile Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15 Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn 20 25 30 Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45 Ile Tyr Asn Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser 50 55 60 Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu Gln 65 70 75 80 Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Thr Tyr Asp Arg Arg Thr 85 90 95 Phe Ser Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln 100 105 110 <210> 27 <211> 224 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 27 Asp Ile Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Ile Gly Gly Tyr 20 25 30 Asn Ser Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Met Ile Tyr Gly Val Asn Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Asp Ile Glu 85 90 95 Ser Ala Thr Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 100 105 110 Gln Asp Ile Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly 115 120 125 Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser 130 135 140 Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu 145 150 155 160 Leu Ile Tyr Asn Asp Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe 165 170 175 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu 180 185 190 Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Thr Tyr Asp Arg Arg 195 200 205 Thr Phe Ser Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln 210 215 220 <210> 28 <211> 363 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 28 caggtggaat tggttcagag cggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcgaaag cctgaaaatt 60 agctgcaaag gttccggata ttcctttact aattattgga ttggttgggt gcgccagatg 120 cctgggaagg gtctcgagtg gatgggcgtt atcatgccgt ctgatagcta tacccgttat 180 tctccgagct ttcagggcca ggtgaccatt agcgcggata aaagcattag caccgcgtat 240 cttcaatgga gcagcctgaa agcgagcgat acggccatgt attattgcgc gcgttatggt 300 catggtatgt atggtggtgc tcttgatgtt tggggccaag gcaccctggt gacggttagc 360 tca 363 <210> 29 <211> 363 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 29 caggtgcaat tggttcagag cggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcgaaag cctgaaaatt 60 agctgcaaag gttccggata ttcctttact aattattgga ttggttgggt gcgccagatg 120 cctgggaagg gtctcgagtg gatgggcgtt atcatgccgt ctgatagcta tacccgttat 180 tctccgagct ttcagggcca ggtgaccatt agcgcggata aaagcattag caccgcgtat 240 cttcaatgga gcagcctgaa agcgagcgat acggccatgt attattgcgc gcgttatggt 300 catggtatgt atggtggtgc tcttgatgtt tggggccaag gcaccctggt gacggttagc 360 tca 363 <210> 30 <211> 357 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 30 caggtggaat tggttcagag cggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcgcgag cgtgaaagtg 60 agctgcaaag cctccggata tacctttact ggtaattata ttaattgggt ccgccaagcc 120 cctgggcagg gtctcgagtg gatgggcatt atcaatccgc atggtggcga tacgaagtac 180 gcgcagaagt ttcagggccg ggtgaccatg acccgtgata ccagcattag caccgcgtat 240 atggaactga gcagcctgcg tagcgaagat acggccgtgt attattgcgc gcgttggcat 300 catggtactt ggatttttga ttattggggc caaggcaccc tggtgacggt tagctca 357 <210> 31 <211> 360 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 31 caggtggaat tggttcagag cggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcgaaag cctgaaaatt 60 agctgcaaag gttccggata ttcctttact tcttattgga ttggttgggt gcgccaggcc 120 cctgggaagg gtctcgagtg gatgggcatt atcgatccgg gtgatagccg tacccgttat 180 tctccgagct ttcagggcca ggtgaccatt agcgcggata aaagcattag caccgcgtat 240 cttcaatgga gcagcctgaa agcgagcgat acggccatgt attattgcgc gcgtggtcag 300 ctttatggtg gtacttatat ggatggttgg ggccaaggca ccctggtgac ggttagctca 360 <210> 32 <211> 330 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 32 gatatcgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctgt ctccgggcga acgtgcgacc 60 ctgagctgca gagcgagcca gtctgttcgt tcttctcgtc tggcttggta ccagcagaaa 120 ccaggtcaag caccgcgtct attaatttat ggtgcttcta agcgtgcaac tggggtcccg 180 gcgcgtttta gcggctctgg atccggcacg gattttaccc tgaccattag cagcctggaa 240 cctgaagact ttgcgactta ttattgccag cagtattatg attttcctcc tacctttggc 300 cagggtacga aagttgaaat taaacgtacg 330 <210> 33 <211> 333 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 33 gatatcgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctgt ctccgggcga acgtgcgacc 60 ctgagctgca gagcgagcca gtctgttcgt tcttctcgtc tggcttggta ccagcagaaa 120 ccaggtcaag caccgcgtct attaatttat ggtgcttcta agcgtgcaac tggggtcccg 180 gcgcgtttta gcggctctgg atccggcacg gattttaccc tgaccattag cagcctggaa 240 cctgaagact ttgcggtgta ttattgccag cagtattctc atgatccttc tggtaccttt 300 ggccagggta cgaaagttga aattaaacgt acg 333 <210> 34 <211> 333 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 34 gatatcgtgc tgacccagcc gccttcagtg agtggcgcac caggtcagcg tgtgaccatc 60 tcgtgtagcg gcagcagcag caacattggt tctaattatg tgtcttggta ccagcagttg 120 cccgggacgg cgccgaaact tctgatttat aatgataatc agcgtccctc aggcgtgccg 180 gatcgtttta gcggatccaa aagcggcacc agcgcgagcc ttgcgattac gggcctgcaa 240 agcgaagacg aagcggatta ttattgctct acttatgatc gtcgtacttt ttctgtgttt 300 ggcggcggca cgaagttaac cgtcctaggt cag 333 <210> 35 <211> 339 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 35 gatatcgcac tgacccagcc agcttcagtg agcggctcac caggtcagag cattaccatc 60 tcgtgtacgg gtactagcag cgatgttggt ggttataatt atgtgtcttg gtaccagcag 120 catcccggga aggcgccgaa acttatgatt tattctgttt ctaagcgtcc ctcaggcgtg 180 agcaaccgtt ttagcggatc caaaagcggc aacaccgcga gcctgaccat tagcggcctg 240 caagcggaag acgaagcgga ttattattgc gctacttggg atcattctca gatgggtaag 300 gtgtttggcg gcggcacgaa gttaaccgtc ctaggtcag 339 <210> 36 <211> 327 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 36 Glu Val Glu Lys Thr Ala Cys Pro Ser Gly Lys Lys Ala Arg Glu Ile 1 5 10 15 Asp Glu Ser Leu Ile Phe Tyr Lys Lys Trp Glu Leu Glu Ala Cys Val 20 25 30 Asp Ala Ala Leu Leu Ala Thr Gln Met Asp Arg Val Asn Ala Ile Pro 35 40 45 Phe Thr Tyr Glu Gln Leu Asp Val Leu Lys His Lys Leu Asp Glu Leu 50 55 60 Tyr Pro Gln Gly Tyr Pro Glu Ser Val Ile Gln His Leu Gly Tyr Leu 65 70 75 80 Phe Leu Lys Met Ser Pro Glu Asp Ile Arg Lys Trp Asn Val Thr Ser 85 90 95 Leu Glu Thr Leu Lys Ala Leu Leu Glu Val Asn Lys Gly His Glu Met 100 105 110 Ser Pro Gln Val Ala Thr Leu Ile Asp Arg Phe Val Lys Gly Arg Gly 115 120 125 Gln Leu Asp Lys Asp Thr Leu Asp Thr Leu Thr Ala Phe Tyr Pro Gly 130 135 140 Tyr Leu Cys Ser Leu Ser Pro Glu Glu Leu Ser Ser Val Pro Pro Ser 145 150 155 160 Ser Ile Trp Ala Val Arg Pro Gln Asp Leu Asp Thr Cys Asp Pro Arg 165 170 175 Gln Leu Asp Val Leu Tyr Pro Lys Ala Arg Leu Ala Phe Gln Asn Met 180 185 190 Asn Gly Ser Glu Tyr Phe Val Lys Ile Gln Ser Phe Leu Gly Gly Ala 195 200 205 Pro Thr Glu Asp Leu Lys Ala Leu Ser Gln Gln Asn Val Ser Met Asp 210 215 220 Leu Ala Thr Phe Met Lys Leu Arg Thr Asp Ala Val Leu Pro Leu Thr 225 230 235 240 Val Ala Glu Val Gln Lys Leu Leu Gly Pro His Val Glu Gly Leu Lys 245 250 255 Ala Glu Glu Arg His Arg Pro Val Arg Asp Trp Ile Leu Arg Gln Arg 260 265 270 Gln Asp Asp Leu Asp Thr Leu Gly Leu Gly Leu Gln Gly Gly Ile Pro 275 280 285 Asn Gly Tyr Leu Val Leu Asp Leu Ser Met Gln Glu Ala Leu Ser Gly 290 295 300 Thr Pro Cys Leu Leu Gly Pro Gly Pro Val Leu Thr Val Leu Ala Leu 305 310 315 320 Leu Leu Ala Ser Thr Leu Ala 325

Claims (6)

  1. 세포독성제, 및 메소텔린 (서열: 36)에 대해 특이적인 항원-결합 부위를 포함하는 인간 또는 인간화 항체를 포함하며, 여기서 세포독성제는 메이탄시노이드이고, 상기 항체는 암 항원 125 (CA125)에 의해 감추어지지 않는 메소텔린의 에피토프를 인식하며, 항체 결합 부위는 CDR 1, CDR 2 및 CDR 3을 포함하고,
    여기서,
    a) HCDR1은 서열 3에 의해 나타내어 지고,
    b) HCDR2는 서열 6에 의해 나타내어 지고,
    c) HCDR3은 서열 9에 의해 나타내어 지고,
    d) LCDR1은 서열 12에 의해 나타내어 지고,
    e) LCDR2는 서열 15에 의해 나타내어 지고,
    f) LCDR3은 서열 19에 의해 나타내어 지는 것인,
    면역접합체.
  2. 제1항에 있어서, 항체 및 메이탄시노이드는 4-[2-피리딜디티오]부탄산 N-히드록시숙신이미드 에스테르(SPDB) 링커를 통해 연결된 것인 면역접합체.
  3. 제1항에 있어서, 메이탄시노이드가 N2'-데아세틸-N2'-(4-메틸-4-메르캅토-1-옥소펜틸)-메이탄신(DM4)인 면역접합체.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 따른 면역접합체 및 그의 제약상 허용되는 담체 또는 부형제를 포함하는, 암의 치료, 예방 또는 진단을 위한 제약 조성물.
  5. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 원하지 않는 메소텔린의 존재와 연관된 장애 또는 상태의 치료에 유용한 약제의 제조를 위한 면역접합체.
  6. 제4항에 있어서, 암이 난소암, 췌장암, 폐암 또는 중피종인 제약 조성물.
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