KR101629706B1 - 황사와 미세먼지에 의해 유발된 염증을 완화시키는 천연식물 추출물을 포함하는 조성물 - Google Patents

황사와 미세먼지에 의해 유발된 염증을 완화시키는 천연식물 추출물을 포함하는 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 황사와 미세먼지에 의해 유발된 염증을 완화시키는 천연식물 추출물을 포함하는 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 식물 추출물은 황사 및 미세먼지의 의해 유발된 NO 생성 및 염증성 사이토카인 발현을 억제하므로, 황사, 미세먼지 및 기타 유해물질에 의해 유발된 피부 염증의 예방 또는 개선에 우수한 효과가 있다

Description

황사와 미세먼지에 의해 유발된 염증을 완화시키는 천연식물 추출물을 포함하는 조성물{Composition containing natural plant extract for alleviating inflammation by yellow sand and fine dust}
본 발명은 황사와 미세먼지에 의해 유발된 염증을 완화시키는 천연식물 추출물을 포함하는 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로 진귤과피 추출물, 고사리삼 추출물 및 백기생 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 추출물을 유효성분으로 포함하는 대기의 유해환경으로부터 유발되는 피부 염증 완화용 조성물에 관한 것이다.
피부에서의 염증반응(inflammatory response)은 물리적 자극이나 화학 물질, 세균 등에 의해 피부손상이 유발될 때 이를 방어하기 위한 작용으로서 시작되며, 이에 대한 반응으로 keratinocyte(각질형성세포) 또는 Langerhans cell(랑게스한스 세포)에서는 다양한 종류의 cytokine을 내보냄으로써 염증반응이 시작되는데, 인터루킨-8(Interleukin-8;IL-8), 인터루킨-6(Interleukin-6;IL-6), 인터루킨-1(Interleukin-1;IL-1), 종양 괴사인자-α (Tumor necrosis factor-α; TNF-α) 등이 대표적이며, 이들로 인해 활성화된 대식세포(macrophage)는 일산화질소(nitricoxide;NO)나 프로스타글란딘 (prostaglandin) E2 (PGE2)를 과도하게 생성하여 염증 과정을 더욱 심화시킨다.
미세먼지는 입자크기 10㎛ 이하인 먼지를 통칭하고 PM10(Particulate Matter 10)으로 약칭하며, 2.5㎛이하의 초미세먼지인 PM2.5(Particulate Matter 2.5)로 구분된다. 주로 화석연료를 연소할 때 발생하며, 석탄의존도가 70%인 중국발 미세먼지가 상당부분을 차지한다. 또한, 황사는 중국이나 몽골 등 아시아 대륙의 중심부에 있는 사막과 황토 지대의 작은 모래나 황토 또는 먼지가 하늘에 떠다니다가 상층 바람을 타고 멀리까지 날아가 떨어지는 현상을 말하며 장거리 이동성 대기오염물질로 제주도까지 이동이 가능하다.
산업국가 질병의 약 25 ~ 33%가 환경위해요인에 의해 발생하며, 유럽에서는 오염된 공기로 연간 약 31만 명이 조기에 사망하는 것으로 추정되고 있으며, 미국 암학회에서는 초미세먼지가 m3당 10㎍ 증가할 경우 전체 사망률은 7% 증가한다는 연구결과가 발표되었다. 2013년 환경부의 공동연구 결과(Journal of Allergy and Clinical Immunology. 132(2), 2013, 495-498)에 따르면, 미세먼지 또는 대기오염물질의 농도가 상승할 시 피부염의 증상이 더욱 악화되는 것으로 나타났다. 미세먼지(PM10)가 1㎍/m3증가할 때마다 피부염의 증상이 평균 0.4% 증가하였고, 대기오염물질 중 하나인 총 휘발성유기화합물(TVOC)과 벤젠이 0.1ppb씩 증가할수록 증상이 각각 평균 2.59%, 2.74% 증가하였다. 또한 황사가 발생하면 흙먼지가 대기를 황갈색으로 오염시켜 대기의 먼지량이 평균 4배나 증가하여, 피부가 쉽게 지치고 생기를 잃기 쉽다. 또한 황사 먼지는 일반 먼지보다 입자가 작아 피부 모공 속에 깊숙이 들어가 피부 트러블을 일으킬 수 있으며, 피부 건조증, 자극성 피부염, 알레르기 피부염, 여드름, 기미, 주근깨 등 각종 증상을 더욱 악화시킨다. 따라서, 황사와 미세먼지에 의해 유발된 피부염 발생은 증가할 것으로 판단되며, 황사와 미세먼지에 의해 유발된 피부 염증 반응을 완화시킬 소재에 대한 필요성은 증가될 것이다.
피부 염증을 치료하기 위하여, 스테로이드제가 주로 이용되고 있지만 장기간 투여 시 피부의 위축이나 성장 지연 가능성 등 여러 가지 부작용을 일으키고 있어 최근에는 비-스테로이드제의 사용이 증가하고 있다. 그러나 비-스테로이드제 역시 홍반, 가려움 등의 증상과 면역력 약화 등의 부작용을 나타내고 있어 피부염의 원천적 치료가 어려운 실정이다. 따라서, 안전성이 입증된 천연물유래 소재로부터 치료효과가 높고 부작용이 적은 새로운 물질을 찾고자 하는 연구가 많이 이루어지고 있다. 대표적으로 마가목 추출물(등록특허 10-0563548), 오배자 추출물(등록특허 10-1309172), 스피루리나 추출물(공개특허 10-2009-0079468), 해방풍 추출물(등록특허 10-0919852) 등이 있으나, 황사와 미세먼지에 의해 유발되는 염증을 완화시켜주는 효과를 가진 추출물은 개발되지 않았다.
따라서, 안전성이 입증된 천연물 유래 소재로부터 치료효과가 높고 부작용이 적은 새로운 물질의 필요성이 증가되고 있으나, 아직 황사와 미세먼지에 의해 유발되는 염증을 완화시켜주는 효과를 가진 천연물 유래 소재에 관한 연구결과는 아직 보고된 바 없다.
이에 본 발명자들은 황사와 미세먼지에 의해 유발되는 염증을 완화시켜주며, 기존의 피부염 치료제가 가지는 문제점을 해결해줄 수 있는 천연물 유래 소재에 대한 예의 연구를 수행한 결과, 진귤과피 추출물, 고사리삼 추출물 및 백기생 추출물이 황사 또는 미세먼지에 의해 유발된 염증을 완화시켜주는 것을 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다.
따라서, 본 발명의 해결하려는 과제는 진귤과피 추출물, 고사리삼 추출물 및 백기생 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 추출물을 유효성분으로 포함하는 대기의 유해환경으로부터 유발되는 피부 염증 완화용 조성물을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명이 해결하려는 다른 과제는 상기 조성물을 사용하여 피부 염증을 완화시키는 방법을 제공하는 것이다.
상기 과제를 해결하고자, 본 발명은 진귤과피 추출물, 고사리삼 추출물 및 백기생 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 추출물을 유효성분으로 포함하는 대기의 유해환경으로부터 유발되는 피부 염증 완화용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 조성물을 사용하여 피부 염증을 완화시키는 방법을 제공하는 것이다.
이하, 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다.
본 발명은 진귤과피 추출물, 고사리삼 추출물 및 백기생 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 추출물을 유효성분으로 포함하는 대기의 유해환경으로부터 유발되는 피부 염증 완화용 조성물을 제공한다.
상기 진귤과피는 제주자생 재래귤인 진귤의 껍질을 의미하며, 진귤(Citrus sunki Hort. Tanaka)은 제주자생 재래귤 중 진귤을 의미하고 근래 대중적으로 사용되는 일본종 감귤(Citrus unshiu)과는 구별된다. 열매의 향과 맛이 독특하여 지난 날 임금에게 진상하던 제주도 지방 특산물 중에서도 상품에 속했다. 제주지역에서 산물로 불리는 것으로 다른 이름으로는 산귤로 불리기도 하며 쌍떡잎식물 쥐손이풀목 운향과에 속한다.
상기 고사리삼(Sceptridium ternatum or Botrychium ternatum)은 꽃고사리라고도 불리며 고사리삼목(Ophioglossales)의 고사리삼과(Ophioglossaceae)에 속하는 다년생 양치식물이다. 한국, 일본, 타이완, 중국의 산에 자생하며 전체에 털이 없고 높이가 15~40cm이다. 뿌리는 굵고 육질이며 사방으로 퍼지고 1개의 줄기가 나와 곧게 선다.
상기 백기생(Korthalsella japonica)은 동백나무에 기생하는 상록 반기생 관목으로, 상기생(뽕나무 겨우살이), 오기생(오리나무 겨우살이), 송라(소나무 겨우살이)와 함께 겨우살이과(Loranthaceae)에 속한다. 백기생은 우리나라 제주도 및 남부 지방의 일부의 섬에서 볼 수 있으며 길이는 6~15cm정도로 잎은 퇴화되어 마디 양 끝에 돌기 모양으로 달려 있고 가지는 녹색을 띈다.
상기 추출물은 물, C1 내지 C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합 용매로 추출하여 수득할 수 있으며, 상기 저급 알코올은 에탄올 또는 메탄올일 수 있고, 보다 구체적으로 에탄올일 수 있다.
본 발명의 일 구체예에서, 본 발명은 진귤과피 추출물을 유효성분으로 포함하는 대기의 유해환경으로부터 유발되는 피부 염증 완화용 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 구체예에서, 본 발명은 고사리삼 추출물을 유효성분으로 포함하는 대기의 유해환경으로부터 유발되는 피부 염증 완화용 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 구체예에서, 본 발명은 백기생 추출물을 유효성분으로 포함하는 대기의 유해환경으로부터 유발되는 피부 염증 완화용 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 구체예에서, 본발명은 백기생 추출물에 진귤과피 추출물 및 고사리삼 추출물로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상을 추가로 포함하는 피부 염증 완화용 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 구체예에서, 상기 추출물은 진귤과피 추출물, 고사리삼 추출물 및 백기생 추출물을 모두 혼합한 혼합물일 수 있다. 진귤과피, 고사리삼, 백기생 에탄올 추출물은 각 염증원인 물질 발현 억제에 있어 상대적인 효과 차이가 존재한다. 따라서, 진귤과피, 고사리삼, 백기생 에탄올 추출물을 모두 혼합한 혼합물을 이용하여 황사, 미세먼지 등 다양한 유해물질이 혼합된 대기의 유해환경에 의해 유발되는 피부 염증 완화에 상보적 효과를 부여할 수 있다.
본 발명의 일 구체예에서, 상기 대기의 유해환경은 황사 또는 미세먼지일 수 있다.
상기 대기의 유해환경은 대기 유해물질을 포함하는 것으로 중금속, 미세먼지 및 황사 등이 포함된 대기 환경을 말한다.
상기 황사는 장거리 이동성 대기오염물질로 중국이나 몽골 등 아시아 대륙의 중심부에 있는 사막과 황토 지대의 작은 모래나 황토 또는 먼지가 하늘에 떠다니다가 상층 바람을 타고 멀리까지 날아가 떨어지는 현상 또는 강하하는 모래먼지를 말한다.
본 발명의 일 구체예에서, 상기 미세먼지는 TSP, PM10 및 PM2.5로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 미세먼지를 포함할 수 있다.
본 발명의 일 구체예에서, 상기 황사 또는 미세먼지는 G-CSF, GM-CSF, GRO, GRO-α, IL-1α IL-2, IL-3, IL-5, L-5, IL-6, IL-8, IL-15, MCP-2 및 TNF-α로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 사이토카인의 발현량을 증가시키는 것을 특징으로 할 수 있다.
상기 미세먼지는 입자크기 10㎛ 이하인 먼지를 통칭하고 PM10(Particulate Matter 10)으로 약칭하며, 2.5㎛이하의 초미세먼지인 PM2.5(Particulate Matter 2.5)로 구분된다. 주로 화석연료를 연소할 때 발생하며, 석탄의존도가 70%인 중국발 미세먼지가 상당부분을 차지한다. 또한 총부유먼지(일반적으로 50 ㎛ 이하의 공기 중에 떠있는 모든 먼지, total suspended particle, TSP)도 넓게는 미세먼지에 포함된다.
본 발명의 일 구체예에서, 상기 추출물은 전염증성 매개인자인 NO 생성을 억제시킬 수 있다.
본 발명의 일 구체예에서, 상기 추출물은 염증성 사이토카인과 같은 생체 내 염증 반응과 관련된 인자의 발현량을 감소시킬 수 있다.
본 발명의 일 구체예에서, 상기 추출물은 대표적 염증성 사이토카인으로 IL-8 또는 TNF-α 발현량을 감소시킬 수 있다.
상기 염증성 사이토카인은 G-CSF(Granulocyte Colony stimulating factor), GM-CSF(Granulocyte-macrophage colony stimulating factor), GRO(growth-regulated protein), IL-1α(Interleukin-1α), IL-2(Interleukin-2), IL-3(Interleukin-3), IL-5(Interleukin-5), IL-6(Interleukin-6), IL-7(Interleukin-7), IL-8(Interleukin-8), IL-10(Interleukin-10), IL-13(Interleukin-13), IL-15(Interleukin-15), INF-γ(Interferon-γ), MCP-1(monocyte chemoattractant protein-1), MCP-2(monocyte chemoattractant protein-2), MCP-3(monocyte chemoattractant protein-3), CXCL9(Chemokine ligand 5;MIG), CCL5(Chemokine ligand 5;RANTES), TGF β1(Transforming growth factor β1), TNF-α(Tumor necrosis factor-α) 및 TNF β(Tumor necrosis factor β)일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다
본 발명의 일 구체예에서, 상기 진귤과피 추출물, 고사리삼 추출물 및 백기생 추출물은 하기의 단계들을 포함하는 제조방법에 의해 제조될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다:
1) 진귤과피, 고사리삼 또는 백기생에 추출용매를 가하여 각각 추출하는 단계;
2) 단계 1)의 추출물을 각각 여과하는 단계;
3) 단계 2)의 여과한 추출물을 각각 감압 농축한 후 건조하여 분말을 제조하는 단계.
상기 방법에 있어서, 단계 1)의 진귤과피, 고사리삼 또는 백기생은 재배한 것 또는 시판되는 것 등 제한 없이 사용할 수 있다.
상기 방법에 있어서, 추출 방법으로는 여과법, 열수 추출, 침지 추출, 환류냉각 추출, 초음파 추출, 초임계 추출 등 당업계의 통상적인 방법을 이용할 수 있고, 당업계에 공지된 통상적인 온도와 압력의 조건 하에서 제조될 수 있다. 또한, 추출용매는 물, C1 내지 C4의 저급 알코올, 또는 이들의 혼합 용매로 추출하여 수득할 수 있으며, 상기 저급 알코올은 에탄올 또는 메탄올일 수 있다. 상기 추출용매는 진귤과피, 고사리삼 또는 백기생 각각 분량의 1 내지 20 배 첨가하여 추출할 수 있고, 구체적으로 5 내지 15 배 첨가하여 추출할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 또한, 추출온도는 20 내지 70일 수 있고, 구체적으로 25 내지 65일 수 있으며, 보다 구체적으로 30 내지 60일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 또한, 추출시간은 1 내지 40 시간일 수 있고, 구체적으로 10 내지 30 시간일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 방법에 있어서, 단계 2)의 추출물을 1 내지 5회 여과할 수 있다. 또한, 여과방법으로는 체 여과, 흡인여과, 한외여과, 필터프레스 등 당업계의 통상적인 방법을 이용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 방법에 있어서, 단계 3)의 감압농축은 진공감압농축기 또는 진공회전증발기를 이용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 또한, 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무건조 또는 동결건조 하는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 일 구체예에서 상기 조성물은 화장료 조성물, 약학 조성물, 또는 건강기능식품 조성물일 수 있다.
상기 화장료 조성물은 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 일 예로 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.
상기 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있다. 일 구체예로 고점도 유화제형, 저점도 유화제형 및 가용화 제형으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 제형일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 제조하고자 하는 제형에 따라 발명이 속하는 기술 분야에서 통상적으로 사용되는 화장료 조성물 배합 성분을 포함할 수 있다. 일 예로 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 팩, 마사지크림 및 스프레이 등으로 제형화 될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 선로션, 선크림, 메이크업 베이스, 비비크림, 클렌징크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스틱상 제품, 밤(Balm) 타입 제품, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다. 제조하고자 하는 제형에 따라 추가로 수상성분, 유상성분, 계면활성제, 보습제, 저급알콜, 점증제, 킬레이트제, 방부제, 향료 등을 선택하여 배합 첨가할 수 있다.
상기 약학 조성물은 방부제, 안정화제, 수화제 또는 유화 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염 및/또는 완충제 등의 약제학적 보조제 및 기타 치료적으로 유용한 물질을 추가로 함유할 수 있으며, 통상적인 방법에 따라 다양한 경구 투여제 또는 비경구 투여제 형태로 제형화할 수 있다. 비경구 투여의 경우, 피부에 국소적으로 도포, 정맥 내 주입, 피하 주입, 근육 주입, 복강 주입, 경피 투여 등으로 투여할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 피부외용 제형일 수 있다. 상기 피부외용 제형은 파우더, 젤, 연고, 크림, 로션, 액제 또는 에어로졸 제형일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 건강기능식품 조성물은 제형이 특별히 한정되지 않으나, 예를 들어, 정제, 과립제, 드링크제, 캬라멜, 다이어트바 등으로 제형화될 수 있다. 각 제형의 건강기능식품 조성물은 유효 성분 이외에 해당 분야에서 통상적으로 사용되는 성분들을 제형 또는 사용 목적에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 다른 원료와 동시에 적용할 경우 상승 효과가 일어날 수 있다.
본 발명의 일 구체예에서, 상기 진귤과피 추출물, 고사리삼 추출물, 백기생 추출물 각각 또는 이들의 혼합물은 총 조성물 중량 대비 0.001 내지 30 중량%로 포함될 수 있다. 상기 진귤과피 추출물, 고사리삼 추출물, 백기생 추출물 각각 또는 이들의 혼합물이 총 조성물 중량 대비 0.001 중량% 미만인 경우에는 피부 염증 완화효과가 나타나지 않으며, 30 중량%를 초과하는 경우에는 함유량 증가에 대한 피부 염증 완화효과 증대 정도가 미미하고, 제형상의 안정성에 문제가 있으며, 경제적이지 않다.
본 발명의 일 구체예에서, 진귤과피 추출물, 고사리삼 추출물 및 백기생 추출물이 대기의 유해환경인 황사 또는 미세먼지에 의해 유발된 NO 생성 및 염증성 사이토카인의 발현을 억제하여 황사, 미세먼지 및 기타 유해물질에 의해 유발된 피부 염증 예방 및 개선에 우수한 효과를 나타냄을 확인하였다.
본 발명의 천연식물 추출물은 황사 및 미세먼지의 의해 유발된 NO 생성 억제 및 염증성 사이토카인의 발현을 억제하므로, 황사, 미세먼지 및 기타 유해물질에 의해 유발된 피부 염증의 예방 또는 개선에 우수한 효과가 있다.
도 1 내지 3은 진귤과피 에탄올 추출물(도 1), 고사리삼 에탄올 추출물(도 2), 백기생 에탄올 추출물(도 3)의 황사, TSP, PM10, PM2.5에 의해 유발된 NO 생성을 억제하는 효과를 나타낸 그래프이다.
도 4 내지 도 6은 진귤과피 에탄올 추출물(도 4), 고사리삼 에탄올 추출물(도 5), 백기생 에탄올 추출물(도 6)의 황사, PM2.5에 의해 의해 유발된 IL-8 생성을 억제하는 효과를 나타낸 그래프이다.
도 7 내지 도 9는 진귤과피 에탄올 추출물(도 7), 고사리삼 에탄올 추출물(도 8), 백기생 에탄올 추출물(도 9)의 황사, TSP, PM10, PM2.5에 의해 의해 유발된 TNF-α 생성을 억제하는 효과를 나타낸 그래프이다.
도 10 내지 도 12는 진귤과피 에탄올 추출물(도 10), 고사리삼 에탄올 추출물(도 11), 백기생 에탄올 추출물(도 12)을 HPLC-UVD로 분석한 크로마토그램이다.
도 13은 백기생 에탄올 추출물에서 분리한 3종의 플라보노이드 배당체의 황사 및 미세먼지에 의해 발현된 NO 생성, IL-8 및 TNF-α 생성 억제효과를 나타낸 그래프이다.
도 14는 황사 및 미세먼지의 종류에 따른 염증성 사이토카인의 발현여부를 알아보기 위해 실시한 사이토카인 array 실험결과이다.
이하, 실시예, 비교예 및 실험예를 통하여 본 발명을 보다 구체적으로 설명하고자 한다. 하기의 실시예 및 실험예는 단지 본 발명의 예시적인 기재일 뿐으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것은 아니다.
실시예 1. 진귤과피, 고사리삼, 백기생 추출물의 제조
건조 분쇄된 진귤과피, 고사리삼, 백기생 50g 각각에 정제수와 에탄올의 부피비 30:70으로 혼합한 70% 에탄올을 500ml가하고 상온에서 20시간 동안 진탕하며 추출하였다. 추출액을 여과하고 감압농축하여 에탄올을 제거한 다음 동결건조하여 진귤과피 에탄올 추출물을 17.9%, 고사리삼 에탄올 추출물을 18.3%, 백기생 에탄올 추출물을 15%의 수율로 수득하였다.
실시예 2. 황사 및 미세먼지 추출물의 제조
(1) 황사 및 미세먼지의 채취
2013년 3월 경기도 부천시에 설치된 low volume air sampler를 이용하였으며, 47mm 테프론 필터가 장착된 sampler에서 분당 16.7L의 유속으로 24시간 동안 채취한 샘플을 이용하였다. 필터의 종류에 따라 황사, TSP, PM10, PM2.5로 구분하여 채취하였다.
(2) 황사 및 미세먼지 추출물의 제조
약 1m2의 크기로 자른 필터에 증류수, 에탄올, 클로로포름을 각각 가하고 12시간 동안 교반하며 추출하였다. 추출액을 분리하고 추출잔사에 추출용매를 재차 가하여 다시 4시간 동안 초음파로 추출하였다. 추출액을 합하고 감압농축하여 추출용매를 증발시켜 제거한 다음 증류수, 에탄올로 추출한 샘플은 각각의 용매로 재용해하였고, 클로로포름으로 추출한 샘플은 DMSO에 용해하였다.
실험예 1. 황사 및 미세먼지 추출물의 염증유발능 평가
황사, TSP, PM10, PM2.5 추출물이 세포에서 염증을 유발하는 것을 확인하기 위해 아래와 같은 실험을 진행하였다.
(1) NO 생성유발 평가
NO는 전염증 매개 물질로 다양한 염증성 자극에 의해 생성되며, 연속적인 염증 반응을 유발하고 조직 손상에 기여하는 것으로 알려져 있다. 따라서 황사 및 미세먼지 추출물이 NO 생성을 유발하는지 확인하였다. Raw 264.7 cell을 96 well plate에 6 x 104 cells/well로 분주한 후, 24시간 동안 37, 5% CO₂2조건에서 배양하였다. 황사, TSP, PM10, PM2.5 시료를 농도별로 희석하여 처리한 후, 다시 24시간 동안 배양하였다. 그 후 세포 배양액을 Griess reagent와 1:1로 혼합하고 micro-plate reader로 540nm에서 흡광도를 측정하여 NO 생성을 측정하였고, 그 결과를 표 1에 나타내었다. NO 생성에 대한 양성대조군으로 리포폴리사카라이드(LPS) 1㎍/ml를 함께 처리하였다. 이 때, NO 생성을 유발하기 위한 샘플의 Raw 264.7 cell에 대한 세포독성은 발견되지 않았다.
하기 표 1에서 나타난 바와 같이, 황사, TSP, PM10, PM2.5 증류수 추출물이 피부 염증 반응을 유발하는 것을 확인하였다. 추출 용매 별로는 증류수로 추출하였을 때, NO 생성을 가장 많이 유발시키는 것으로 나타났다.
샘플 농도 NO 생성 (%)
황사 TSP PM10 PM2.5
Control 100.0±2.1
LPS 1㎍/ml 196.7±3.9
클로로포름
추출물		 500배 희석 122.6±3.2 114.3±5.4 110.5±3.9 46.8±2.0
100배 희석 83.9±2.2 86.3±2.8 79.4±2.7 74.3±12.4
에탄올
추출물		 500배 희석 126.0±8.5 130.4±3.0 123.9±1.0 134.2±19.1
100배 희석 134.1±11.3 120.07±4.9 129.2±2.0 199.7±13.3
증류수
추출물		 500배 희석 192.7±1.3 225.9±5.7 136.6±2.3 196.2±5.1
100배 희석 223.4±6.1 231.2±2.6 176.4±5.0 265.6±9.5
(2) 염증성 사이토카인 IL-8, TNF -α 생성유발 평가
IL-8과 TNF-α는 대표적인 염증성 사이토카인으로, 황사 및 미세먼지 추출물이 TNF-α와 IL-8의 생성을 유발하는 것을 확인하고자 다음 방법과 같이 수행하였다. 96 well plate에 HaCaT을 2.5x104cells/well로 분주한 후, 24시간 동안 37, 5% CO₂2조건에서 배양하였다. LPS 1㎍/ml와 황사, TSP, PM10, PM2.5 시료를 농도별로 희석하여 처리하고 24시간 후, 배양액을 취하여 IL-8, TNF-α의 정량에 대한 ELISA kit를 이용하여 이들 사이토카인 생성유발능을 평가하였으며, 이에 대한 결과는 표 2와 3에 나타내었다. 이 때, IL-8, TNF-α의 생성을 유발하기 위한 샘플의 HaCaT cell에 대한 세포독성은 발견되지 않았다.
하기 표 2와 3에서 나타난 바와 같이, 염증유발물질로 알려진 LPS에 의해 IL-8 및 TNF-α가 증가하는 것을 확인할 수 있었다. IL-8의 경우 황사 추출물과 PM2.5만이 생성을 유발시켰으며 증류수로 추출하였을 때 가장 많이 유발되었다. TNF-α의 경우 클로로포름으로 추출한 황사, TSP 및 PM10 추출물과 증류수로 추출한 PM2.5 추출물이 생성을 유발시키는 것임을 확인하였다.
샘플 농도 IL-8 생성 (%)
황사 TSP PM10 PM2.5
Control 100.0±8.6
LPS 1㎍/ml 254.3±4.9
클로로포름 추출물 500배 희석 155.8±3.6 58.3±5.0 45.8±9.0 88.0±1.9
100배 희석 118.8±11.1 55.5±11.1 41.2±5.7 84.0±2.2
에탄올
추출물		 500배 희석 181.8±7.6 62.6±2.0 67.1±6.0 98.8±4.0
100배 희석 148.2±9.1 71.3±4.0 53.0±3.0 89.5±0.4
증류수
추출물		 500배 희석 225.0±11.6 85.5±2.1 74.2±4.5 118.7±3.0
100배 희석 234.8±13.2 85.0±+9.4 84.8±7.7 127.4±5.5
샘플 농도 TNF-α 생성 (%)
황사 TSP PM10 PM2.5
Control 100.0±8.4
LPS 1㎍/ml 227.8±5.4
클로로포름 추출물 500배 희석 177.4±7.0 135.3±5.6 165.5±6.3 90.3±4.6
100배 희석 217.8±8.8 162.7±4.5 176.2±10.5 75.3±6.2
에탄올
추출물		 500배 희석 137.8±3.0 115.1±1.8 129.2±1.7 91.9±5.0
100배 희석 155.7±12.0 136.7±3.6 142.8±2.9 117.6±6.3
증류수
추출물		 500배 희석 98.1±5.0 146.7±4.0 124.1±1.3 115.9±6.1
100배 희석 119.1±3.3 108.1±4.2 134.0±5.2 146.3±4.4
실험예 2. 진귤과피 , 고사리삼, 백기생 추출물의 세포독성 확인
진귤과피, 고사리삼, 백기생 에탄올 추출물이 세포 독성이 있는지 여부를 확인하기 위하여 다음과 같은 방법으로 실험하였다. Raw 264.7 cell 및 HaCaT cell 을 6.0 x 104 cells/well, 2.5 x 104 cells/well로 분주한 후 24시간 동안 37℃, 5% CO₂조건에서 배양하였다. 진귤과피, 고사리삼, 백기생 에탄올 추출물을 50~1,600㎍/ml의 농도로 처리하고 24시간 후 WST-1 solution을 처리하고 반응시켜 micro-plate reader로 450nm에서 흡광도를 측정함으로써 세포생존율을 확인하였으며, 진귤과피, 고사리삼, 백기생 에탄올 추출물에 대한 결과를 하기 표 4 내지 6에 나타내었다.
하기 표 4 내지 6에 나타난 바와 같이, 진귤과피, 고사리삼, 백기생 에탄올 추출물은 50 내지 400 농도(㎍/ml)에서 세포 독성이 나타나지 않음을 확인하였다.
샘플 농도
(㎍/ml)		 Raw 264.7 세포
생존율 (%)		 HaCaT 세포
생존율 (%)
진귤과피 에탄올 추출물 Control 100.0±2.7 100.0±3.9
1,600 33.6±2.7 45.3±2.2
800 75.6±0.7 88.1±1.5
400 92.2±1.4 96.7±1.3
200 98.0±3.5 95.8±4.1
100 107.0±1.6 96.2±0.5
50 99.9±3.4 92.5±0.8
샘플 농도
(㎍/ml)		 Raw 264.7
세포 생존율 (%)		 HaCaT 세포
생존율 (%)
고사리삼 에탄올 추출물 Control 100.0±2.7 100.0±3.9
1,600 34.6±1.4 44.3±4.1
800 83.0±1.3 88.7±0.8
400 93.4±1.2 101.4±3.3
200 95.5±0.9 98.5±3.5
100 99.2±2.3 97.5±3.3
50 100.7±0.9 100.6±0.7
샘플 농도
(㎍/ml)		 Raw 264.7
세포 생존율 (%)		 HaCaT 세포
생존율 (%)
백기생 에탄올 추출물 Control 100.0±2.7 100.0±3.9
1,600 24.7±0.4 29.0±1.9
800 67.8±2.6 68.9±1.0
400 94.7±2.1 93.9±1.6
200 104.5±2.3 96.8±1.6
100 103.2±0.9 101.4±2.1
50 103.0±1.3 98.0±3.8
실험예 3. 진귤과피, 고사리삼, 백기생 추출물의 황사 및 미세먼지에 의해 유발된 염증 완화능 평가
(1) 진귤과피, 고사리삼, 백기생 에탄올 추출물의 NO 생성억제능 평가
상기 실험예 1에서 황사, TSP, PM10, PM2.5가 세포 내 NO 생성을 유발시키는 것을 확인하였으며, 그 결과 각 샘플에 대한 증류수 추출물이 가장 많이 NO 생성을 유발시켰기 때문에, 100배 희석한 증류수 추출물을 자극 유발제로 사용하고 진귤과피, 고사리삼, 백기생 추출물을 세포 독성이 없는 농도인 100~400㎍/ml로 처리하여 NO 생성억제능을 다음과 같은 방법으로 평가하였다. 일반적으로 피부를 진정시켜주고 항염작용이 뛰어난 것으로 알려진 마치현 추출물을 염증 완화효과에 대한 양성대조군으로 함께 처리하였다.
Raw 264.7 cell을 96 well plate에 6 x 104 cells/well로 분주한 후, 24시간 동안 37℃, 5% CO₂조건에서 배양하였다. 진귤과피, 고사리삼, 백기생 에탄올 추출물을 100, 200, 400㎍/ml의 농도로 처리하고 황사, TSP, PM10, PM2.5 증류수 추출물을 100배 희석하여 처리한 후, 다시 24시간 동안 배양하였다. 그 후 세포 배양액을 Griess reagent와 1:1로 혼합하고 micro-plate reader로 540nm에서 흡광도를 측정하여 NO 생성을 측정하였고, 진귤과피, 고사리삼, 백기생 에탄올 추출물에 대한 결과를 도 1 내지 3에 나타내었다.
도 1 내지 3에 나타낸 바와 같이, 진귤과피, 고사리삼, 백기생 에탄올 추출물은 농도 의존적으로 NO 생성 억제효과를 나타내었고 동일한 농도에서 마치현 추출물보다도 더 우수한 효과를 나타내었다. 이러한 결과를 통해 진귤과피, 고사리삼, 백기생 에탄올 추출물이 효과적으로 전염증성 매개인자인 NO를 억제할 수 있음을 확인하였다.
또한, NO 생성 억제 효과에 있어서 동일한 농도에서 각 염증원인에 따라, 황사 및 TSP에 대해서는 백기생 에탄올 추출물이, PM10에 대해서는 고사리삼 에탄올 추출물이, PM2.5에 대해서는 진귤과피 및 백기생 에탄올 추출물이 다른 추출물에 비해 상대적으로 우수함을 확인하였다.
(2) 진귤과피 , 고사리삼, 백기생 에탄올 추출물의 IL-8, TNF -α 생성억제능 평가
상기 실험예 1에서 나타난 바와 같이 IL-8의 경우 증류수로 추출한 황사 추출물과 PM2.5 추출물만이 생성을 유발시켰으며, TNF-α의 경우 클로로포름으로 추출한 황사, TSP 및 PM10 추출물과 증류수로 추출한 PM2.5 추출물이 생성을 유발시켰다. 따라서, 100배 희석한 황사 및 PM2.5 증류수 추출물을 IL-8에 대한 자극 유발제로, 100 배 희석한 황사, TSP 및 PM10 클로로포름 추출물과 100 배 희석한 PM2.5의 증류수 추출물을 TNF-α에 대한 자극 유발제로 사용하였다. 상기 진귤과피, 고사리삼, 백기생 에탄올 추출물을 100~400㎍/ml로 처리하여 염증성 사이토카인 생성억제능을 다음과 같이 평가하였다. 일반적으로 피부를 진정시켜주고 항염작용이 뛰어난 것으로 알려진 마치현 추출물을 염증 완화효과에 대한 양성대조군으로 함께 처리하였다.
96 well plate에 HaCaT을 2.5x104cells/well로 분주한 후, 24시간 동안 37℃, 5% CO₂조건에서 배양하였다. 진귤과피, 고사리삼, 백기생 에탄올 추출물을 100, 200, 400㎍/ml의 농도로 처리하고 황사 및 PM2.5 증류수 추출물과 황사, TSP, PM10 클로로포름 추출물 및 PM2.5 증류수 추출물을 100배 희석하여 처리한 후, 다시 24시간 동안 배양하였다. 그 후 배양액을 취하여 IL-8, TNF-α의 정량에 대한 ELISA kit를 이용하여 이들 사이토카인을 정량하였으며, 진귤과피, 고사리삼, 백기생 에탄올 추출물에 대한 결과를 도 4 내지 9에 나타내었다.
도 4 내지 9에 나타낸 바와 같이, 진귤과피, 고사리삼, 백기생 에탄올 추출물은 농도 의존적으로 IL-8 및 TNF-α 생성 억제효과를 나타내었고 동일한 농도에서 마치현 추출물 보다도 우수한 효과를 나타내었다. 이러한 결과를 통해 진귤과피, 고사리삼, 백기생 에탄올 추출물이 효과적으로 염증성 사이토카인인 IL-8 및 TNF-α를 억제할 수 있음을 확인하였다..
또한, IL-8 생성 억제 효과에 있어서 동일한 농도에서 각 염증원인에 따라, 황사에 대해서는 고사리삼 에탄올 추출물이, PM2.5에 대해서는 고사리삼 및 백기생 에탄올 추출물이 다른 추출물에 비해 상대적으로 우수함을 확인하였다. TNF-α 생성 억제 효과에 있어서 동일한 농도에서 각 염증원인에 따라, 황사에 대해서는 진귤과피 에탄올 추출물이, TSP, PM10, PM2.5에 대해서는 고사리삼 에탄올 추출물이 다른 추출물에 비해 상대적으로 우수함을 확인하였다.
실험예 4. 진귤과피, 고사리삼, 백기생 추출물의 활성물질 분리 및 동정
(1) 진귤과피 에탄올 추출물의 활성물질 분리 및 동정
실시예 1을 통해 수득한 진귤과피 에탄올 추출물을 아세토니트릴, 증류수의 농도구배 조건에서 지름 4.6mm, 길이 25cm의 C18 칼럼을 이용해 HPLC-UVD 280nm에서 분석한 크로마토그램을 도 10에 나타내었고, 4개의 major peak에 대해 HPLC-ESI-MS를 통한 분광학적 데이터를 분석하여 각각의 peak가 hesperidin(peak 번호 1), tetramethyl-o-isoscutellarein(peak 번호 2), nobiletin(peak 번호 3) 및 tangeretin(peak 번호 4)임을 확인하였다.
(2) 고사리삼 에탄올 추출물의 활성물질 분리 및 동정
실시예 1을 통해 수득한 고사리삼 에탄올 추출물을 메탄올, 증류수의 농도구배 조건에서 지름 4.6mm, 길이 10cm의 C18 칼럼을 이용해 HPLC-UVD 350nm에서 분석한 크로마토그램을 도 11에 나타내었고, 4개의 major peak에 대해 HPLC-ESI-MS를 통한 분광학적 데이터를 분석하여 플라보노이드 배당체를 동정하였으며, 하기의 표 7에 나타내었다.
Peak
No.		 Compound [M+H]+ Theoretical mass Observed mass Mass difference
1 quercetin-3-O-β-glucosyl(1→2)-α- rhamnoside-7-O-α-rhamnoside C33H41O20 757.2191 757.2241 5 mmu
2 quercetin-3-O-β-glucosyl(1→2)-α- rhamnoside-7-O-β-glucoside C33H41O21 773.2140 773.2181 4 mmu
3 Ternatumoside XI C48H57O27 1065.3087 1065.3270 18 mmu
4 Ternatumoside VI or Ternatumoside XII C57H63O29 1211.3455 1211.3664 20 mmu
(3) 백기생 에탄올 추출물의 활성물질 분리 및 동정
실시예 1을 통해 수득한 백기생 에탄올 추출물을 아세토니트릴, 증류수의 농도구배 조건에서 지름 3.9mm, 길이 30cm의 C18 칼럼을 이용해 HPLC-UVD 330nm에서 분석한 크로마토그램을 도 12에 나타내었고, 3개의 major peak에 대해 HPLC-ESI-MS, MS/MS를 통한 분광학적 데이터와 기존 문헌(Ferreres et al., 2003, Parejo et al., 2004)을 비교 분석하여 Lucenin-2(peak 번호 1), Vicenin-2(peak 번호 2), Stellarin-2(peak 번호 3)의 3가지 플라보노이드 배당체를 동정 및 분리하였으며 그 화학구조식을 화학식 1에 나타내었다.
Figure 112015087132348-pat00001
실험예 5. 백기생 에탄올 추출물로부터 분리한 활성물질의 황사 또는 미세먼지에 의해 유발된 염증 완화능 평가
백기생 에탄올 추출물로부터 분리한 3종의 플라보노이드 배당체가 이들 항염증 효과를 나타내는 주요성분인지를 확인하기 위해 다음과 같은 실험을 진행하였다.
Raw 264.7 cell과 HaCaT cell을 24시간 배양하고 각 물질을 세포독성이 나타나지 않는 농도 범위인 125~1000㎍/ml로 처리하였다. 이어서 황사 증류수 추출물과 황사 클로로포름 추출물을 100배 희석하여 처리하고 다시 24시간동안 배양하였다. 실험예 3과 같이 NO, IL-8 및 TNF-α 생성억제 효과를 측정하였고 그 결과를 도 13에 나타내었다.
도 13에서 나타낸 바와 같이, 백기생 에탄올 추출물로부터 분리한 3종의 플라보노이드 배당체는 농도 의존적으로 NO, IL-8 및 TNF-α 생성 억제효과를 나타내었다. 이러한 결과를 통해 백기생 에탄올 추출물로부터 분리한 3종의 플라보노이드 배당체가 효과적으로 NO, IL-8 및 TNF-α를 억제할 수 있음을 확인하였다.
실험예 6. 황사 및 미세먼지에 의한 기타 염증성 사이토카인 발현여부 확인
상기 실험예 1에서 확인한 황사 및 미세먼지에 의해 발현되는 염증성 사이토카인 외에 어떠한 사이토카인들이 추가로 발현되는지, 황사 및 미세먼지의 종류에 따라 어떻게 달라지는지 알아보기 위해 cytokine array 실험을 진행하였다. 6 well plate에 HaCaT을 2.0x105cells/well로 분주한 후, 24시간 동안 37, 5% CO₂2조건에서 배양하였다. 황사, TSP, PM2.5 증류수 추출물을 100배 희석하여 각각 처리하고 24시간 추가로 배양한 후 배양액을 취하고 Human cytokine antibody array kit (Raybiotech)을 이용하여 G-CSF(Granulocyte Colony stimulating factor), GM-CSF(Granulocyte-macrophage colony stimulating factor), GRO(growth-regulated protein), IL-1α(Interleukin-1α), IL-2(Interleukin-2), IL-3(Interleukin-3), IL-5(Interleukin-5), IL-6(Interleukin-6), IL-7(Interleukin-7), IL-8(Interleukin-8), IL-10(Interleukin-10), IL-13(Interleukin-13), IL-15(Interleukin-15), INF-γ(Interferon-γ), MCP-1(monocyte chemoattractant protein-1), MCP-2(monocyte chemoattractant protein-2), MCP-3(monocyte chemoattractant protein-3), CXCL9(Chemokine ligand 5), CCL5(Chemokine ligand 5), TGF-β1(Transforming growth factor-β1), TNF-α(Tumor necrosis factor-α) 및 TNF-β(Tumor necrosis factor-β)에 대한 발현량을 측정하였다.
황사, TSP, PM2.5 증류수 추출물이 처리되지 않은 대조군 대비 각 사이토카인의 발현률 결과를 표 8 과 도 14에 나타내었다. Positive control에는 실험이 잘 진행되었는지를 확인하기 위한 biotinylated antibody가 처리되어 있었으며, Negative control에는 response에 대한 baseline을 알아보기 위한 buffer만 처리되어 있었고, Blank에는 background response를 알아보기 위해 아무것도 처리되어 있지 않았다.
Figure 112015087132348-pat00002
* 상기표의 수치는 대조군 100 대비 각 사이토카인의 발현률을 나타냄
표 8 및 도 14에 나타난 바와 같이 황사 추출물은 G-CSF, GM-CSF, GRO, GRO-α, IL-6 및 IL-8의 발현량, TSP 추출물은 IL-1α, IL-2, IL-3, IL-5, IL-6, 및 IL-15의 발현량, PM2.5 추출물은 G-CSF, GM-CSF, GRO-α, IL-1α, IL-2, IL-3, IL-8, IL-15, MCP-2 및 TNF-α의 발현량을 대조군에서의 발현량에 비해 증가시키는 것으로 나타났다.
이를 통해 황사와 미세먼지의 종류에 따라 서로 다른 사이토카인의 발현이 일어나는 것으로 확인하였다. 이는 자극유발물질에 따라 성격이 다른 염증반응이 일어난다는 것을 말하며 황사 및 미세먼지에 의해 유발된 염증반응이 일반 염증반응과도 분명한 차이가 있음을 의미한다.
제조예 : 진귤과피 , 고사리삼, 백기생 에탄올 추출물을 포함하는 화장료 조성물
상기의 실험예를 근거로 하여, 하기 표 9 내지 20에서 기재된 조성대로 실시예 1에서 수득한 진귤과피, 고사리삼, 백기생 에탄올 추출물을 포함하는 여러 제형의 화장료 조성물을 제조하였다. 하기 제형예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 예시로, 본 발명이 하기 예시에만 한정되는 것은 아니다.
상기 실험예에서 확인하였듯이, 진귤과피, 고사리삼, 백기생 에탄올 추출물은 각 염증원인 물질에 따라 NO 생성 및 염증성 사이토카인 발현 억제에 있어 상대적인 효과의 차이가 존재한다. 따라서, 진귤과피, 고사리삼, 백기생 에탄올 추출물을 모두 혼합한 혼합물을 포함하는 화장료 조성물을 제조할 수 있다.
제형예 1. 고점도 유화 제형
실시예 1에서 얻은 진귤과피, 고사리삼, 백기생 에탄올 추출물을 각각 또는 모두 함유하는 혼합물의 고점도 유화 제형을 하기의 표 9 내지 12에 나타낸 조성 성분 및 조성비에 따라 통상적인 방법으로 제조하였다.
<고점도 유화 제형의 제조방법>
① 수상과 유상을 가온 하여 각각 균일하게 혼합 및 용해시켰다.
② 75에서 수상에 유상을 넣고 혼합시켜 가용화시켰다
③ 첨가상 I은 진귤과피, 고사리삼, 백기생 에탄올 추출물 각각 또는 모두 함유하는 혼합물을 용해시킨 상으로 50에서 투입하고 혼합시킨 후 첨가상 II를 혼합하였다.
상 성분 함량 (%)
수상 정제수 To 100
보습성분 10 ~ 25
점증제 적량
금속이온 봉쇄제 적량
유상 피이지-100스테아레이트 0.1 ~ 2
글리세릴스테아레이트 0.1 ~ 2
폴리소르베이트 60 0.1 ~ 2
스테아릭애씨드 0.1 ~ 2
세테아릴알코올 0.1 ~ 2
카프릭카프릴릭트리글리세라이드 10 ~ 30
토코페릴아세테이트 0.1 ~ 0.5
첨가 I 진귤과피 에탄올 추출물 0.25
첨가 II 향 적량
보존제 적량
기타 첨가제 적량
상 성분 함량 (%)
수상 정제수 To 100
보습성분 10 ~ 25
점증제 적량
금속이온 봉쇄제 적량
유상 피이지-100스테아레이트 0.1 ~ 2
글리세릴스테아레이트 0.1 ~ 2
폴리소르베이트 60 0.1 ~ 2
스테아릭애씨드 0.1 ~ 2
세테아릴알코올 0.1 ~ 2
카프릭카프릴릭트리글리세라이드 10 ~ 30
토코페릴아세테이트 0.1 ~ 0.5
첨가 I 고사리삼 에탄올 추출물 0.25
첨가 II 향 적량
보존제 적량
기타 첨가제 적량
상 성분 함량 (%)
수상 정제수 To 100
보습성분 10 ~ 25
점증제 적량
금속이온 봉쇄제 적량
유상 피이지-100스테아레이트 0.1 ~ 2
글리세릴스테아레이트 0.1 ~ 2
폴리소르베이트 60 0.1 ~ 2
스테아릭애씨드 0.1 ~ 2
세테아릴알코올 0.1 ~ 2
카프릭카프릴릭트리글리세라이드 10 ~ 30
토코페릴아세테이트 0.1 ~ 0.5
첨가 I 백기생 에탄올 추출물 0.25
첨가 II 향 적량
보존제 적량
기타 첨가제 적량
상 성분 함량 (%)
수상 정제수 To 100
보습성분 10 ~ 25
점증제 적량
금속이온 봉쇄제 적량
유상 피이지-100스테아레이트 0.1 ~ 2
글리세릴스테아레이트 0.1 ~ 2
폴리소르베이트 60 0.1 ~ 2
스테아릭애씨드 0.1 ~ 2
세테아릴알코올 0.1 ~ 2
카프릭카프릴릭트리글리세라이드 10 ~ 30
토코페릴아세테이트 0.1 ~ 0.5
첨가 I 진귤과피 에탄올 추출물 0.25
고사리삼 에탄올 추출물
백기생 에탄올 추출물
첨가 II 향 적량
보존제 적량
기타 첨가제 적량
제형예 2. 저점도 유화 제형
실시예 1에서 얻은 진귤과피, 고사리삼, 백기생 에탄올 추출물을 각각 또는 모두 함유하는 혼합물의 저점도 유화 제형을 하기의 표 13 내지 16에 나타낸 조성 성분 및 조성비에 따라 통상적인 방법으로 제조하였다.
<저점도 유화 제형의 제조방법>
① 수상과 유상을 가온 하여 각각 균일하게 혼합 및 용해시켰다.
② 75에서 수상에 유상을 넣고 혼합시켜 가용화시켰다
③ 첨가상 I은 진귤과피, 고사리삼, 백기생 에탄올 추출물 각각 또는 모두 함유하는 혼합물을 용해시킨 상으로 50에서 투입하고 혼합시킨 후 첨가상 II를 혼합하였다.
상 성분 함량 (%)
수상 정제수 To 100
세테아리스-6올리베이트 0.1 ~ 3
보습성분 10 ~ 25
점증제 적량
금속이온 봉쇄제 적량
유상 피이지-100스테아레이트 0.1 ~ 1
글리세릴스테아레이트 0.1 ~ 1
폴리소르베이트 60 0.1 ~ 1
세틸알코올 0.1 ~ 1
베헤닐알코올 0.1 ~ 1
스쿠알란 5 ~ 20
토코페릴아세테이트 0.1 ~ 0.5
첨가상 I 진귤과피 에탄올 추출물 0.25
첨가상 II 향 적량
보존제 적량
기타 첨가제 적량
상 성분 함량 (%)
수상 정제수 To 100
세테아리스-6올리베이트 0.1 ~ 3
보습성분 10 ~ 25
점증제 적량
금속이온 봉쇄제 적량
유상 피이지-100스테아레이트 0.1 ~ 1
글리세릴스테아레이트 0.1 ~ 1
폴리소르베이트 60 0.1 ~ 1
세틸알코올 0.1 ~ 1
베헤닐알코올 0.1 ~ 1
스쿠알란 5 ~ 20
토코페릴아세테이트 0.1 ~ 0.5
첨가상 I 고사리삼 에탄올 추출물 0.25
첨가상 II 향 적량
보존제 적량
기타 첨가제 적량
상 성분 함량 (%)
수상 정제수 To 100
세테아리스-6올리베이트 0.1 ~ 3
보습성분 10 ~ 25
점증제 적량
금속이온 봉쇄제 적량
유상 피이지-100스테아레이트 0.1 ~ 1
글리세릴스테아레이트 0.1 ~ 1
폴리소르베이트 60 0.1 ~ 1
세틸알코올 0.1 ~ 1
베헤닐알코올 0.1 ~ 1
스쿠알란 5 ~ 20
토코페릴아세테이트 0.1 ~ 0.5
첨가상 I 백기생 에탄올 추출물 0.25
첨가상 II 향 적량
보존제 적량
기타 첨가제 적량
상 성분 함량 (%)
수상 정제수 To 100
세테아리스-6올리베이트 0.1 ~ 3
보습성분 10 ~ 25
점증제 적량
금속이온 봉쇄제 적량
유상 피이지-100스테아레이트 0.1 ~ 1
글리세릴스테아레이트 0.1 ~ 1
폴리소르베이트 60 0.1 ~ 1
세틸알코올 0.1 ~ 1
베헤닐알코올 0.1 ~ 1
스쿠알란 5 ~ 20
토코페릴아세테이트 0.1 ~ 0.5
첨가상 I 진귤과피 에탄올 추출물 0.25
고사리삼 에탄올 추출물
백기생 에탄올 추출물
첨가상 II 향 적량
보존제 적량
기타 첨가제 적량
제형예 3. 가용화 제형
실시예 1에서 얻은 진귤과피, 고사리삼, 백기생 에탄올 추출물을 각각 또는 모두 함유하는 혼합물의 가용화 제형을 하기의 표 17 내지 20에 나타낸 조성 성분 및 조성비에 따라 통상적인 방법으로 제조하였다.
<가용화 제형의 제조방법>
① 수상과 가용화상을 각각 균일하게 혼합 및 용해시켰다.
② 수상에 가용화상을 넣고 혼합시켜 수중유형 유화를 얻었다.
③ 첨가 I은 진귤과피, 고사리삼, 백기생 에탄올 추출물을 각각 또는 모두 함유하는 혼합물을 용해시킨 상으로 가용화 한 후 투입하여 혼합시킨 후 첨가 II를 혼합하여 완료하였다.
상 성분 함량 (%)
수상 정제수 To 100
보습성분 10 ~ 25
점증제 적량
금속이온 봉쇄제 적량
가용화상 피이지-60하이드로제네이티드캐스터오일 0 ~ 2
피이지-40하이드로제네이티드캐스터오일 0 ~ 2
다가알코올 0 ~ 10
향료 적량
에탄올 0 ~ 20
첨가 I 진귤과피 에탄올 추출물 0.25
첨가 II 보존제 적량
기타 첨가제 적량
상 성분 함량 (%)
수상 정제수 To 100
보습성분 10 ~ 25
점증제 적량
금속이온 봉쇄제 적량
가용화상 피이지-60하이드로제네이티드캐스터오일 0 ~ 2
피이지-40하이드로제네이티드캐스터오일 0 ~ 2
다가알코올 0 ~ 10
향료 적량
에탄올 0 ~ 20
첨가 I 고사리삼 에탄올 추출물 0.25
첨가 II 보존제 적량
기타 첨가제 적량
상 성분 함량 (%)
수상 정제수 To 100
보습성분 10 ~ 25
점증제 적량
금속이온 봉쇄제 적량
가용화상 피이지-60하이드로제네이티드캐스터오일 0 ~ 2
피이지-40하이드로제네이티드캐스터오일 0 ~ 2
다가알코올 0 ~ 10
향료 적량
에탄올 0 ~ 20
첨가 I 백기생 에탄올 추출물 0.25
첨가 II 보존제 적량
기타 첨가제 적량
상 성분 함량 (%)
수상 정제수 To 100
보습성분 10 ~ 25
점증제 적량
금속이온 봉쇄제 적량
가용화상 피이지-60하이드로제네이티드캐스터오일 0 ~ 2
피이지-40하이드로제네이티드캐스터오일 0 ~ 2
다가알코올 0 ~ 10
향료 적량
에탄올 0 ~ 20
첨가 I 진귤과피 에탄올 추출물 0.25
고사리삼 에탄올 추출물
백기생 에탄올 추출물
첨가 II 보존제 적량
기타 첨가제 적량
실험예 6. 화장료 조성물의 제형 안정성(Stability)
상기 제형예 1, 2, 3의 화장료 조성물을 4℃, 30℃, 45℃, 일광의 조건에 12주 동안 보관하며, 육안평가와 관능평가를 통해 제형의 색, 취, 성상변화를 관찰하여 표 21 내지 23에 나타내었다.
표 21 내지 23에 나타난 바와 같이, 진귤과피, 고사리삼, 백기생 에탄올 추출물을 각각 또는 모두 함유하는 혼합물의 고점도 유화 제형, 저점도 유화 제형, 가용화 제형 화장료 조성물의 고온 및 일광조건에서 장기간 보관하여도 변색, 변취 및 성상 변화가 나타나지 않는 우수한 안정성을 확인하였다.
<안정성 평가 기준>
변화 무: ○
약간의 변화: △
유의적 변화: Ⅹ
경과시간 추출물 고점도 유화 제형
취 변화 색 변화 제형 변화
4℃ 30℃ 45℃ 일광 4℃ 30℃ 45℃ 일광 4℃ 30℃ 45℃ 일광
1주 진귤
과피		 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
2주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
4주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
8주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
12주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
1주 고사
리삼		 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
2주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
4주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
8주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
12주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
1주 백기생 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
2주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
4주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
8주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
12주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
1주 혼합물 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
2주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
4주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
8주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
12주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
경과시간 추출물 저점도 유화 제형
취 변화 색 변화 제형 변화
4℃ 30℃ 45℃ 일광 4℃ 30℃ 45℃ 일광 4℃ 30℃ 45℃ 일광
1주 진귤
과피		 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
2주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
4주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
8주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
12주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
1주 고사
리삼		 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
2주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
4주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
8주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
12주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
1주 백기생 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
2주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
4주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
8주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
12주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
1주 혼합물 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
2주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
4주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
8주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
12주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
경과시간 추출물 가용화 제형
취 변화 색 변화 제형 변화
4℃ 30℃ 45℃ 일광 4℃ 30℃ 45℃ 일광 4℃ 30℃ 45℃ 일광
1주 진귤
과피		 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
2주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
4주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
8주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
12주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
1주 고사
리삼		 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
2주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
4주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
8주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
12주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
1주 백기생 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
2주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
4주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
8주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
12주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
1주 혼합물 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
2주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
4주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
8주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○
12주 ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○ ○

Claims (11)

  1. 진귤(Citrus sunki)과피 추출물, 고사리삼(Sceptridium ternatum 또는 Botrychium ternatum) 추출물 및 백기생(Korthalsella japonica) 추출물로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 추출물을 유효성분으로 포함하는, 황사 또는 미세먼지로부터 유발되는 피부 염증 완화용 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 추출물은 백기생(Korthalsella japonica) 추출물인 것을 특징으로 하는 피부 염증 완화용 조성물.
  3. 제2항에 있어서, 진귤(Citrus sunki)과피 추출물 및 고사리삼(Sceptridium ternatum 또는 Botrychium ternatum) 추출물로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상을 추가로 포함하는, 피부 염증 완화용 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 추출물은 진귤(Citrus sunki)과피 추출물, 고사리삼(Sceptridium ternatum 또는 Botrychium ternatum) 추출물 및 백기생(Korthalsella japonica) 추출물을 혼합한 혼합물인 것을 특징으로 하는 피부 염증 완화용 조성물.
  5. 삭제
  6. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 황사 또는 미세먼지는 G-CSF, GM-CSF, GRO, GRO-α, IL-1α, IL-2, IL-3, IL-5, L-5, IL-6, IL-8, IL-15, MCP-2 및 TNF-α로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 사이토카인의 발현량을 증가시키는 것을 특징으로 하는 피부 염증 완화용 조성물.
  7. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 미세먼지는 TSP(total suspended particle), PM10(Particulate Matter 10) 및 PM2.5(Particulate Matter 2.5)로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 미세먼지를 포함하는 것을 특징으로 하는 피부 염증 완화용 조성물.
  8. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 추출물은 NO 생성을 억제시키는 것을 특징으로 하는 피부 염증 완화용 조성물.
  9. 제1항 내지 제 4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 추출물은 IL-8 또는 TNF-α 발현량을 감소시키는 것을 특징으로 하는 피부 염증 완화용 조성물.
  10. 제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 추출물은 총 조성물의 중량 대비 0.001 내지 30 중량%로 포함되는 것을 특징으로 하는 피부 염증 완화용 조성물.
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