KR100829729B1

KR100829729B1 - 병이소초 추출물을 주요 활성성분으로 함유하는 피부외용제 조성물

Info

Publication number: KR100829729B1
Application number: KR1020070008758A
Authority: KR
Inventors: 김진화; 나영; 심관섭; 이동환; 이근수; 장영학; 표형배
Original assignee: 한불화장품주식회사
Priority date: 2007-01-29
Filing date: 2007-01-29
Publication date: 2008-05-15

Abstract

본 발명은 병이소초 추출물 및 이를 주요 활성성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물에 관한 것으로서, 좀더 구체적으로는 고사리삼목 고사리삼과의 병이소초의 전초 추출물을 활성성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 육모 효과, 여드름방지효과, 항염효과, 자극완화 효과가 우수한 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.

병이소초 추출물, 육모효과, 여드름방지효과, 항염효과, 피부자극 완화 효과, 피부 외용제

Description

병이소초 추출물을 주요 활성성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물{SKIN AGENT COMPOSITION CONTAINING AN EXTRACT OF OPHIGLOSSUM VULGATUM}

본 발명은 병이소초 추출물 및 이를 주요 활성성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물에 관한 것으로서, 좀더 구체적으로는 고사리삼목 고사리삼과의 병이소초(Ophioglossum vulgatum)의 잎, 줄기와 근부의 천연물로부터 제조된 추출물을 활성성분으로 0.001 - 30.0중량%, 바람직하게는 0.01 - 5중량%를 함유하는 것을 특징으로 하는 육모효과, 여드름방지효과, 피부자극 완화 효과가 우수한 화장료 조성물에 관한 것으로 좀더 상세하게는 병이소초 천연물로부터 제조된 추출물로 육모방지, 여드름방지효과 및 자극완화 효과가 우수한 피부 외용제 조성물을 제공하는 것이다.

사람의 피부는 노화 과정에서 다양한 물리?화학적인 변화가 일어나며 그 원인으로는 크게 내적인 노화(intrinsic aging)와 광노화(photo-aging)로 구분되며 이에 관한 연구가 활발히 이루어져 왔다. 즉, 자외선, 질병상태, 환경인자, 상처, 나이가 들어감에 따라 다양한 스트레스로 세포 및 조직을 손상시켜 성인병 및 노화를 촉진하게 된다. 특히 피부노화는 피부의 결합조직인 콜라겐, 히알루론산, 엘라스틴, 프로테오글라이칸, 피브로넥틴 등이 절단되어 심한 과다 염증반응과 피부의 탄력에 지장을 주게 되고 이것이 더 심해질 경우 DNA의 변이에 의해 돌연변이, 암의 유발, 면역기능 저하의 사태에 이르게 된다.

노화에는 콜라겐 분해효소라는 효소가 관여하는데 생체 내에서 콜라겐과 같은 세포외 기질의 합성과 분해는 적절하게 조절되나 노화가 진행되면서 그 합성이 감소하며 콜라겐을 분해하는 효소인 기질 금속 단백질 분해효소(Matrix MetalloProtease; 본 발명의 명세서에서 "MMP"와 혼용함)의 발현이 촉진되어 피부의 탄력이 저하되고 주름이 형성된다. 또한 자외선 조사에 의해 이러한 분해효소가 활성화되기도 한다. 그러므로 세포 내에서 활성화가 유도되는 MMP 발현을 조절하거나 그 활성을 억제할 수 있는 물질의 개발이 요구되고 있다. 지금까지 화장품의 소재로서 사용된 원료들은 단순히 효소 활성만을 억제하는 것이 대부분이었다. 이에 본 발명자들은 세포 내 자연노화와 광노화에 의해 그 발현이 유도되는 MMP 발현량 및 활성을 조절하고 자외선 및 외부 오염물질로부터 피부를 보호할 수 있는 천연 소재를 개발하고자 하였다.

또한, 남성형 탈모증은 남성호르몬 의존적이어서 남성호르몬의 양에 직접적인 관계가 있으며, 이에 따라 최근 남성호르몬 활성억제를 통한 탈모의 예방 및 치료를 위한 많은 연구가 보고되고 있다. 한편, 남성호르몬의 분비상승에 의해 피지 선의 기능이 상승되면 생성된 과잉의 피지가 모낭벽의 과각화로 인하여 모낭내에 정체되면서 생기는 면포가 여드름의 초기단계이다. 남성호르몬에 의한 탈모 및 여드름의 기전을 설명하면, 5알파-리덕타아제(5α-Reductase)는 피지선, 모낭, 전립선, 부고환 등의 남성 호르몬 반응성 조직에서 존재하며 남성 호르몬들 중 하나로서, 테스토스테론(testosterone)을 디하이드로테스토스테론(dihydrotestosterone)으로 대사시키는데 관여하는 효소이며, 그 전환에는 NADPH를 필요로 한다. 또한, 테스토스테론은 남성 성충동, 골격근 증가, 남성외부생식기, 음낭성장, 정자형성 등에 관여하고, 디하이드로테스토스테론은 여드름, 피지 증가, 탈모 및 전립선 비대증 등의 해당 조직에서 관여 한다(Diane et al. J.I.D. 1995). 따라서, 이 효소의 억제제를 사용하여 피지 분비 억제제 및 탈모 방지제를 개발하려는 연구들이 활발히 진행되고 있다. 사춘기 이후에 남성 호르몬의 과량 분비는 여드름과 탈모를 유발하는데, 5알파-리덕타아제에 의하여 남성 호르몬의 활성형태인 디하이드로테스토스테론의 과량 생성을 막기 위해 5알파-리덕타아제 억제제를 사용하여 육모제 및 여드름방지제를 개발하려는 연구들이 활발이 진행되고 있다.

이러한 피부의 문제점을 해결하기 위하여, 최근 여러 화학물질 등에 의한 피부 자극을 줄이기 위해 천연물을 사용한 화장품이 많이 개발되고 있다. 천연 재료는 피부에 부작용이 적을 뿐 아니라, 최근 천연 재료를 이용한 화장품에 대한 소비자들의 호응이 높아짐에 따라 화장품 원료로서 개발가치가 한층 늘어나고 있다. 이에, 본 발명자들은 이제까지 알려지지 않은 여러 천연물에 있어서 화장품으로의 응용 가능성을 연구한 결과, 병이소초 천연물을 선정하고 이들로부터 추출물을 제조 하여, 항염 효과, MMP 저해효과, 육모효과, 여드름방지효과 및 피부자극완화 효과를 측정한 결과 우수한 화장품으로서의 효능을 기대할 수 있다는 것을 발견하게 되었다.

종래의 일본특허(특허 2005-89375)에 이미 Ophioglossum 속에 대한 세포활성, 미백, 항산화에 대한 내용이 개시되었으나, 기존에 밝혀진 효능효과와 달리 항염효과, MMP 저해효과, 콜라겐 합성효과, 주름개선, 육모 효과, 여드름 방지효과, 피부자극 완화효과 등을 새로이 밝혀 기존과 생리활성이 크게 다르다고 할 수 있다.

병이소초(Ophioglossum vulgatum)는 고사리삼목 고사리삼과의 다년초로서 근경은 짧고 원주상이며 매년 하나의 잎이 나온다. 영양엽은 광란형, 타원형 또는 광피침형으로 여러 가지이며 포자엽의 대를 영양엽의 밑부분이 감싼다. 영양엽은 길이 6-12㎝, 폭 3-7㎝이다. 포자낭은 잎보다 높게 자라며 선형으로서 줄칼같이 되고 길이 2-4㎝이다. 全草(전초)를 甁爾小草(병이소초)라고 하며 약용한다. 여름과 가을에 채취하여 깨끗이 씻어서 말리거나 또는 신선한 것을 사용한다. 약효로는 淸熱(청열), 凉血(양혈), 鎭痛(진통), 해독의 효능이 있으며, 肺熱咳嗽(폐열해수), 勞傷(노상), 토혈, 肺癰(폐옹), 황달, 위통, 사증으로 인한 복통, 淋濁(임탁), 癰腫瘡毒(옹종창독), 뱀이나 벌레에 의한 咬傷(교상), 타박상을 치료한다. 또 血(혈)을 돌게 하고, 肺火(폐화)를 맑게 하며 폐결핵, 心痛(심통, 신경성疼痛), 風氣(풍기, 감기), 傷力(상력), 咳嗽(해수), 喀血(객혈), 腫毒(종독)을 치료한다. 10-15g을 달이거나 또는 가루내어 복용하기도 하며, 외용시 짓찧어서 바르거나 또는 가루 를 조합해서 바른다.

본 발명은 여러 천연물들 중 고사리삼목 고사리삼과의 병이소초 추출물을 이용하여 천연물로부터 제조된 추출물을 선택하여, 피부 외용제의 원료로서의 효능을 확인하고, 그 사용 방법을 개발하고, 이 원료를 사용함으로써 소정의 기능성을 갖는 피부 외용제를 제조할 수 있는 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.

또한, 본 발명의 목적은 피부 화장료에 적용시 자외선 조사 등에 의한 세포보호 효과와 염증매개 물질에 의한 피부 자극 완화 효과를 나타내는 천연 추출물을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명의 목적은 우수한 탈모방지 효과 및 여드름방지 효과를 갖는 5알파-리덕타아제 억제 효과를 나타내는 천연 추출물을 포함하는 피부 외용제를 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 구성은 병이소초 천연물을 추출용매로서 정제수, 메탄올, 에탄올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디클로로메탄 및 헥산 중에서 선택된 1종 이상의 용매를 사용하여 추출한 것을 특징으로 하는 식물 추출물을 주요 활성성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.

또한, 본 발명은 병이소초 천연물을 10-95% 에탄올을 추출용매로 사용하여 추출하는 것을 특징으로 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.

또한, 본 발명은 상기 추출물이 상온에서 냉침, 가열 여과하여 얻어진 액상물, 추가로 용매를 감압농축 또는 동결 건조하여 얻은 것임을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.

또한, 본 발명은 병이소초 천연물의 함량이 피부 외용제 조성물 전체에 대해서 동결건조 중량 기준 0.001-30.0중량%인 것을 특징으로 하는 피부 외용제 조성물에 관한 것이다. 상기 추출물의 함량이 0.001중량% 미만인 경우에는 피부개선 효과가 거의 없으며, 30.0중량% 이상인 경우에는 함유량 증가에 대한 효과 증대 정도가 미미하여 경제적이지 못하다.

또한, 본 발명은 상기 피부 외용제 조성물이 화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 크림, 에센스, 수중유(O/W)형 및 유중수(W/O)형 제형의 화장료 또는 샴푸, 린스, 헤어컨디셔너, 비누, 연고 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 병이소초 추출물을 주요 활성성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.

병이소초 추출물은 캡슐제, 액상제, 연고제, 첩부제 또는 약학적으로 허용되는 담체를 이용한 서방화 제제 등의 약학 조성물로 제제화할 수 있으며, 약리학적으로 허용되는 기제, 운반제, 부형제, 결합제(예: 전분, 트래거캔스 고무, 젤라틴, 당밀, 폴리비닐 알콜, 폴리비닐에테르, 폴리비닐 피롤리돈, 히드록시프로필 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 에틸 셀룰로오스 및 카르복시메틸 셀룰로오스), 분쇄제(예: 한천, 전분, 젤라틴가루, 카르복시메틸 셀룰로오스 나트륨, 카르복시메틸 셀 룰로오스 칼슘, 결정 셀룰로오스, 탄산칼슘, 탄산수소나트륨 및 알긴산 나트륨), 윤활제(예: 스테아린산 마그네슘, 활석, 수첨 식물유) 및 착색제 등을 포함한다. 상기 운반제 및 부형제로는 젖당, 글루코오스, 수크로오스, 만니톨, 감자녹말, 옥수수녹말, 탄산칼슘, 인산칼슘 및 셀룰로오스 등을 사용한다. 상기 외에도 안정화제, 용해보조제, 경피 흡수 촉진제 등의 보조제 방향제, 방부제 등의 첨가제가 더 첨가될 수 있다.

본 발명에서 제공되는 병이소초 추출물은 필요에 따라서 산 부가염으로 할 수 있다. 산 부가염으로서는 예를 들면 염산, 브롬화 수소산, 황산, 인산 등의 무기산과의 염, 초산, 프로피온산, 시트르산, 락트산, 옥살산, 말레인산, 푸마르산, 숙신산, 타르타르산, 메탄설폰산 등의 유기산과의 염을 들 수 있다. 이러한 염은 통상의 방법에 의해 용이하게 제조할 수 있다.

본 발명의 병이소초 추출물은 우수한 발모촉진효과, 육모 효과를 갖는다. 따라서, 이것을 두피에 도포하면 탈모의 치료·개선, 탈모의 예방을 꾀할 수 있다.

본 발명의 병이소초 추출물은 남성형 탈모증과 남성 호르몬성 탈모라고도 불리는 머리카락이 적어지거나, 탈모 이외에 원형탈모증, 비강성(粃糠性) 탈모증, 지루성 탈모증 등의 병적 탈모증에 적용할 수 있다. 본 발명의 병이소초 추출물 사용량으로서는 성별, 연령, 탈모와 줄어드는 머리카락 등의 증상의 정도 등에 따라서 적절히 결정되는 것으로서, 통상 0.01∼20㎎/㎠를 성인 1인당 하루 1회 또는 수회로 나누어 두피에 도포한다.

또, 본 발명의 병이소초 추출물을 발모촉진, 육모 촉진, 탈모예방 등 양모효 과를 목적으로 한 의약품, 의약부외품 또는 화장품에 이용하는 경우, 그 제형은 본 발명의 효과를 발휘할 수 있는 제형이면 특별한 제한 없이 임의로 선택할 수 있으며, 예컨대 토닉, 로션, 유액(乳液), 크림, 연고, 젤, 스프레이, 무스 등을 들 수 있다.

그리고, 이러한 제제 중에는 본 발명에 관련된 병이소초 추출물 이외에 의약품, 의약부외품, 화장품의 분야에서 통상 양모제에 배합가능한 성분을 배합할 수 있다. 예를 들면 혈행촉진작용을 갖는 비타민 E 및 그 유도체 등의 약제, 항남성 호르몬작용을 갖는 에스트라디올, 에스트론과 같은 호르몬제 등을 들 수 있다.

또, 알콕시카르보닐피리딘 N-옥시드, 아세틸콜린 유도체 등의 혈관확장제; 세파란틴 등의 피부기능항진제; 헥사클로로펜, 운데실렌산, 트리클로로카르바니드, 비티오놀 등의 항균제; 아연 및 그 유도체; 락트산 또는 그 알킬에스테르; 시트르산 등의 유기산류; 트라네키사무산 등의 프로테아제 저해제 등을 배합할 수 있다.

또, 에탄올, 이소프로필알콜 등의 알콜류; 글리세린, 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 등의 다가알콜류; 고급 지방산, 고급 알콜, 탄화수소유, 천연유지, 에스테르유, 실리콘유 등의 유분; 계면활성제; 향료; 킬레이트제; 1,3-부틸렌글리콜, 히알루론산 및 그 유도체, 말티톨, 아테로콜라겐, 락트산나트륨 등의 보습제; 카복시비닐폴리머 등의 증점제; 산화방지제; 자외선 흡수제; 색소; 물; 안정화제 등 통상 양모제에 배합되는 성분을 본 발명의 효과를 손상하지 않는 범위에서 배합할 수 있다.

이하, 실시예를 통해 본 발명을 좀 더 구체적으로 설명한다. 단, 이들 실시예는 본 발명의 예시적인 기재일 뿐이며, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되는 것은 아니다.

실시예 1: 병이소초 추출물 제조

세절하여 음건한 병이소초를 95%(V/V) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #5 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50℃ 이하에서 감압농축 및 동결 건조하였다. 감압농축물 및 동결건조물이 0.001 - 30.0중량% 함유되게 정제수, 에탄올, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 중에서 선택된 1종 이상의 용매를 사용하여 분산/용해하여 병이소초 추출물을 제조하였다.

실시예 2: 염증유발관련 효소( hyaluronidase ) 활성 억제효과 측정

본 실시예는 실시예 1에서 수득한 병이소초 추출물의 항염증 효과를 확인하기 위해 염증유발관련 효소인 히아루로니디아제의 효소 활성을 측정하여 판단한 것이다.

히아루로니디아제(hyaluronidase)는 히아루론산을 가수분해하는 효소로 염증을 유발한다. 본 실시예에서는 이 효소의 활성을 억제하여 항염증효과를 측정하는 방법(Kakegawa Y., Japanese J. of Inflammantion, 4:437-438, 1984)을 응용해 항염증효과를 판정하였다.

컴프리, 시소, 삼백초, 유용성 감초 추출물, 병이소초 추출물을 시료로 사용 하여 히아루로니디아제 활성 억제 효과를 조사하였다.

각 시료들의 히아루로니디아제에 대한 저해활성은 다음과 같이 행하였다.시료 100㎕와 히아루로니디아제 용액(type Ⅳ-S, Sigma사, 400U/ml) 50㎕를 넣고 37℃에서 20분간 반응시킨 후, 효소활성화 용액(compound 48/80 CaCl₂·2H₂O, Sigma사, 0.1mg/ml) 100㎕를 첨가하고 다시 37℃에서 20분간 반응시킨다. 히알루론산 용액(0.4mg/ml)을 250㎕ 넣고 37℃에서 40분간 반응시키고, 0.4N NaOH 100㎕를 넣어 반응을 종결시킨다. 포타슘보레이트 용액을 100㎕ 첨가하여 95℃에서 3분간 반응시키고 냉각시킨 다음 ρ-디메틸아미노벤즈알데히드 용액을 3ml 넣고 다시 20분간 37℃에서 반응시켜 발색시켰다. 585nm에서 흡광도를 측정하여 히아루로니디아제에 대한 저해율을 측정하였다. 히아루로니디아제에 대한 저해율(%)은 수학식 1에 의하여 계산하였으며, IC₅₀값은 히아루로니디아제 효소 활성을 50% 저해하는 물질의 농도이다.

저해율(%) = [(A-B)/A] x 100

A : 시료를 첨가하지 않은 웰의 효소활성

B : 시료를 첨가한 웰의 효소 활성

히아루로니디이제 효소 활성 억제 효과를 시험한 결과 병이소초 추출물의 IC₅₀값은 0.28%로 나타나 히아루로니디아제 저해효과가 뛰어나다고 알려진 기존의 항염증제인 유용성 감초 추출물, 컴프리 추출물, 삼백초 추출물, 시소 추출물 등에 비해 우수하거나 유사한 효과를 나타내었다(표 1).

시료	히아루로니디아제 활성 억제효과(IC₅₀)
컴프리 추출물	0.22%
시소 추출물	0.58%
유용성 감초 추출물	0.18%
삼백초 추출물	0.43%
병이소초 추출물	0.28%

실시예 3: 자외선조사에 의한 세포독성 완화 효과

본 실시예는 실시예 1에서 수득한 병이소초 추출물의 자외선 조사에 의한 세포독성의 완화 효과를 평가하기 위하여 실시되었다. 섬유아세포(fibroblast)를 24-웰 시험 플레이트에 1x10⁵개씩 넣고 24시간 동안 부착시켰다. 각 웰을 PBS로 1회 세척하고 각 웰에 500㎕의 PBS를 넣었다. 이 섬유아세포에 자외선 B(UVB) 램프(Model : F15T8, UV B 15W, Sankyo Dennki사, Japan)를 이용하여 자외선 10mJ/㎠를 조사한 후 PBS를 덜어내고 세포배양 배지(DMEM에 10% FBS가 첨가된 것) 1㎖을 첨가하였다. 여기에 평가하고자 하는 병이소초 추출물을 처리한 후 24시간 동안 배양하였다. 24시간이 지나면 배지를 제거하고, 각 웰 당 세포배양 배지 500㎕ 배지와 MTT 용액(2.5㎎/㎖) 60㎕를 넣은 후 2시간 동안 37℃ CO₂ 배양기에서 배양하였다. 배지를 제거하고 이소프로판올-HCl(0.04 N)을 500㎕씩 넣어주었다. 5분간 진탕하여 세포를 용해시키고 상등액 100㎕씩을 96-웰 시험 플레이트에 옮긴 후, 마이크로플레이트 판독기에서 565nm 흡광도를 측정하였다. 수학식 2에 의해 세포생존율(%)을 측정하고 자외선에 의한 세포독성 완화율은 수학식 3에 의하여 계산하였다.

세포생존율(%) =〔(St-Bo)/(Bt-Bo)〕X 100

Bo : 세포 배양배지만을 발색 반응한 웰의 565nm 흡광도

Bt : 시료를 처리하지 않은 웰을 발색 반응한 웰의 565nm 흡광도

St : 시료를 처리한 웰을 발색 반응한 웰의 565nm 흡광도

자외선에 의한 세포독성 완화율(%) =〔1-(St-Bo)/(Bt-Bo)〕X 100

Bo : 자외선 조사하지 않고 시료 처리하지 않은 웰의 세포 생존율

Bt : 자외선 조사하고 시료를 처리하지 않은 웰의 세포 생존율

St : 자외선 조사하고 시료를 처리한 웰의 세포 생존율

실험결과 병이소초 추출물은 0.013% 농도에서 자외선에 의한 세포 독성을34% 완화하여 자외선에 의한 세포독성을 효과적으로 방어함을 알 수 있었다. 상기 실험을 통해 자외선에 의한 세포손상을 낮은 농도에서 효과적으로 방어함을 알 수 있다(표 2).

시료명	처리농도(%)	세포독성 완화율(%)
병이소초 추출물(실시예 1)	0.013	34
병이소초 추출물(실시예 1)	0.025	54.5

실시예 4: 자외선 조사에 의한 염증성 사이토카인 발현 억제효과 측정

본 실시예는 실시예 1에서 수득한 병이소초 추출물의 자외선 조사에 의해 발현되는 염증성 사이토카인 발현 억제효과를 평가하기 위하여 사람의 표피조직에서 분리한 섬유아세포(Fibroblast)를 24-웰 시험 플레이트에 5X10⁴개씩 넣고 24시간 동안 부착시켰다. 각 웰을 PBS로 1회 세척하고 각 웰에 500㎕의 PBS를 넣었다. 이 섬유아세포에 자외선B(UVB) 램프(Model : F15T8, UV B 15W, Sankyo Dennki사, Japan)를 이용하여 자외선 10mJ/㎠를 조사한 후 PBS를 덜어내고 세포배양 배지(DMEM에 FBS가 첨가되지 않은 배지) 350㎕를 첨가하였다. 여기에 평가하고자 하는 병이소초 추출물을 처리한 후 5시간 동안 배양하였다. 배양 상층액을 150㎕ 취하여 IL(interleukin)-1α를 정량함으로서 병이소초 추출물의 염증성 사이토카인 발현억제효과를 판단하였다. IL-1α의 양은 효소면역분석법 (Enzyme-linked Immunosorbent Assay)를 이용하여 정량화하였으며, IL-1α의 생성률은 수학식 4에 의해 계산하였다.

염증성 사이토카인 발현 억제율(%) =〔1-(St-Bo)/(Bt-Bo)〕X 100

Bo : 자외선 조사하지 않고 시료 처리하지 않은 웰의 IL-1α생성량

Bt : 자외선 조사하고 시료를 처리하지 않은 웰의 IL-1α생성량

St : 자외선 조사하고 시료를 처리한 웰의 IL-1α생성량

실험결과 병이소초 추출물은 0.013% 농도에서 자외선에 의한 염증성 사이토카인인 IL-1α의 생성을 25.6% 억제하여, 자외선에 의한 염증 발생을 낮은 농도에서도 효과적으로 방어함을 알 수 있다(표 3).

시료명	처리농도(%)	염증성 사이토카인 발현 억제율(%)
병이소초 추출물 (실시예 1)	0.013	25.6
병이소초 추출물 (실시예 1)	0.025	58

실시예 5: 항균력 시험( Paper Disc Test )

본 실시예는 실시예 1에서 수득한 병이소초 추출물의 여드름균에 대한 항균력을 확인하기 위한 페이퍼 디스크 테스트(Paper Disc Test)를 실시하였다. 먼저, 여드름 발생원인의 피부 상재균인 프로피오니박테리움 아크네(Propionibacterium acnes)를 활성화하기 위하여 BHI 액체배지(Brain-Heart Infusion Broth;3.7%)에서 48시간 전배양하였다. 이렇게 준비한 균 배양액을 BHI고체배지(Brain-Heart Infusion Broth;3.7%; agar1.5%)에 0.1㎖씩 도말한 후 건조시켰다. 실시예 1에서 수득한 병이소초 추출물을 95% 에탄올 수용액에 12%(W/v)로 희석하여 직경 8㎜의 페이퍼 디스크에 50 ㎕씩 점적한 후 앞서 준비한 고체배지 위에 올려놓고 이것을 35℃ 혐기 배양조에서 3일간 배양하였다. 페이퍼 디스크 주변에 생긴 균 성장 저지 영역을 관찰하고 저지환의 크기를 측정함으로써 항균력을 평가하였다. 그 결과, 병이소초 추출물 균 성장 저지환의 크기는 25㎜인 것으로 나타났다.

실시예 6: 병이소초 추출물의 5알파 - 리덕타아제 활성 억제력 평가

5알파-리덕타아제 활성억제 실험에 사용된 5알파-리덕타아제는 포피 유래의 섬유아세포가 생성하는 효소를 사용하였다.

섬유아세포를 마이크로플레이트 홀(microplate hole)마다 10,000개의 세포가 들어가도록 접종한 후 배양하였다. 각 홀마다 ³H(트리튬)으로 방사선 표지(radio labelling)된 테스토스테론을 0.1.mμ.Ci 첨가한 후에 배양하므로 섬유아세포가 이를 이용하는지 측정하였다. 병이소초 추출물이 들어가지 않은 것을 대조군으로 삼았다. 24시간 배양 후 상등액을 얻고 에틸아세테이트(ethyl acetate)-사이크로헥산(cyclohexane) (1:1) 추출용매 1㎖로 스테로이드(steroids)를 얻었다. 이 얻어진 스테로이드를 박막 크로마토그래피 판에 올려놓고 클로로포름/메탄올 혼합액(98/2 (v/v))로 전개시켰다. 테스토스테론과 디하이드로테스토스테론에 해당하는 점의 방사활성을 덴시토미터를 이용하여 측정하여 전환율을 계산하고, 그 결과를 대조군(추출물을 첨가하지 않았을 때의 전환율)과 비교하여 하기 수학식 5에 의해 5 알파-리덕타아제 저해능을 평가하였다.

저해능(%)=[A-B]/[A] × 100

A=테스토스테론에서 다이하이드로테스토스테론으로의 전환율(추출물 미첨가시)

B=테스토스테론에서 다이하이드로테스토스테론으로의 전환율(추출물 첨가시)

실험결과 병이소초 추출물은 낮은 농도에서도 5 알파-리덕타아제 저해함을 알 수 있다(표 4).

병이소초 추출물 농도(%)	1	0.1	0.05	0.01	0.005	0.001	0.0001
저해율(%)	100.0	94.5	91.0	75.5	73.2	51.5	32.0

실시예 7: 모발성장 효과 시험

본 실시예는 실시예 1에서 수득한 병이소초 추출물 2%(건조중량)를 함유하는 30% 함수 에탄올(ethanol) 용액을 제조하여 시험에 사용하였다. 모발성장 효과 시험은 마우스(ICR), 생후 47~53일 것을 사용하여 등 부위 털을 제거하고, 등 부위가 깨끗한 것을 골라 물질군마다 10 마리를 사용하여 다음날부터 매일 실시예의 시험물질을 개체당 100㎖씩 도포하였다. 시간 경과에 따른 모발의 길이 및 모발 성장 정도를 모 제거 후 복원 정도에 따라 점수를 부가하여 각각 비교하였다. 모발성장 정도를 비교하기 위하여, 대조군으로는 30% 알코올 용액을 각 개체에 도포하여 성장 상태를 관찰하였다.

실험결과, 병이소초 추출물이 우수한 모발성장 촉진 효과가 있음을 알 수 있다(표 5).

경과일수/시료	5	10	15
병이소초 추출물	0.28	0.91	1.52±0.41
대조군	0.08	0.24	0.95±0.24

실시예 8 및 비교예 1

본 실시예는 실시예 1에서 수득한 병이소초 추출물을 함유한 화장료를 제조하여 사람을 대상으로 피부 탄력 개선 효과를 비교예 1과 비교실험을 행하여 평가하였다.

비교실험에 사용된 화장료는 크림형태이고, 그 조성은 표 6에 나타낸 바와 같다. 우선 표 6에 기록되어 있는 나)상을 가열하여 70℃에 보존하였다. 이것에 가)상을 가하여 예비유화 후 호모믹서로 균일하게 유화하고 다음에 서서히 냉각하여 크림(실시예 8, 비교예 1)을 제조하였다. 실험자(20세-35세의 여성) 20명을 대상으로 얼굴 오른쪽 부위에는 실시예 8에서 제조된 크림을 얼굴 왼쪽 부위에는 비교예 1에서 제조된 크림을 각각 1일 2회씩 연속 3개월간 도포하였다.

실험완료 후 피부 탄력 개선 효과는 제품 사용 전과 2개월간 사용 후에 피부탄력측정기(cutometer SEM 575, C+K Electronic Co., Germany)를 이용하여 측정하였다. 실험결과는 하기 표10에 Cutometer SEM 575의 △R7값으로 기재하였는데 R7값은 피부의 점탄성(viscoelasticity)의 성질을 나타낸다. 표 6에서 나타난 바와 같이 병이소초 추출물을 함유한 크림을 도포한 실험자의 피부 탄력개선 효과가 우수함을 알 수 있다.

원료		실시예 8	비교예 1
가	스테아릴 알콜	8	8
	스테아린산	2	2
	스테아린산 콜레스테롤	2	2
	스쿠알란	4	4
	2-옥틸도데실알콜	6	6
	폴리옥시에틸렌(25몰 부가) 알콜에스테르	3	3
	글리세릴모노스테아린산아스테르	2	2
나	병이소초 추출물	1	-
	프로필렌 글리콜	5	5
	기타	적량	적량

실험제품	피부탄력효과(△R7)	비고
실시예 8	0.32
비교예 1	0.14

n=20, p＜0.05

실시예 9 및 비교예 2

본 실시예는 실시예 1에서 수득한 병이소초 추출물을 함유한 화장료를 제조하여 사람을 대상으로 피부 주름개선효과를 비교예 2과 비교실험을 행하여 평가하였다.

화장료는 크림형태로 제조하였고, 그 조성은 표 8에 나타낸 바와 같다. 우선 표 8에 기록되어 있는 나)상을 가열하여 70℃에 보존하였다. 이것에 가)상을 가하여 예비유화 후 호모믹서로 균일하게 유화하고 다음에 서서히 냉각하여 크림(실시예 9, 비교예 2)을 제조하였다.

원료		실시예 9	비교예 2
가	스테아릴 알콜	5	5
	스테아린산	2	2
	스테아린산 콜레스테롤	2	2
	스쿠알란	4	4
	2-옥틸도데실알콜	6	6
	폴리옥시에틸렌(25몰부 가)알콜에스테르	3	3
	글리세릴모노스테아린산 아스테르	2	2
나	병이소초 추출물	1	-
	프로필렌글리콜	5	5
	기타	적량	적량

주)단위; 중량%

본 실험은 실시예 9, 비교예 2에서 제조된 크림형태 화장료를 사람을 대상으로 적용하여 피부 잔주름 개선효과를 평가하였다. 실험자(20세-35세의 여성) 40명을 대상으로 얼굴 오른쪽부위에는 실시예 9에서 제조된 크림을 얼굴 왼쪽부위에는 비교예 2에서 제조된 크림을 각각 1일 2회씩 연속 2개월간 도포하였다.

실험완료 후 피부 잔주름 완화 효과는 제품 사용 전과 2개월간 사용 후에 안면 눈꼬리 주위의 주름을 실리콘 수지 복사물(레플리카)로 채취하고, 이것을 피부 미세 주름 장치와 피부 영상 분석기로 눈가 잔주름의 상태를 비교하였다.

표 9는 실시예 9에서 제조된 크림을 사용한 실험자의 눈가 평균 잔주름 깊이 및 주름 감소율을 비교예 2의 크림을 사용한 실험자와 비교한 것이다. 표 9에서 나타난 바와 같이 병이소초 추출물을 함유한 크림을 도포한 실험자의 안면 눈 주위 피부에서 피부 잔주름 개선 효과가 우수함을 알 수 있다.

	실시예 9		비교예 2
	사용 전	2개월 후	사용 전	2개월 후
평균 잔주름 깊이	0.258	0.185	0.234	0.225
사용전 대비 주름감소율(%)	28.3%		3.8%

n=40, p<0.01

실시예 10: SLS 에 의한 피부자극 완화 효과

본 실험예에서는 실시예 1에서 수득한 병이소초 추출물을 함유한 화장료의 자극 완화 효과를 인체 첩포 실험으로 평가하였다.

일반적 화장품 처방(크림, 로션, 스킨, 에센스)에 자극을 일으키는 SLS(sodium lauryl sulfate) 1%와 실시예 9에서 제조된 제품을 혼용하여 24시간, 48시간, 72시간 동안 첩포하여 자극 유발지수를 바탕으로 자극완화 효과를 평가한 것이다.

20-50세의 건강한 남녀 50명의 팔 상박 부위에 FINN CHAMBER(FINLAND)를 이용하여 각각의 제품을 0.3mg 씩 첩포하고, 24시간 후 급성 자극 지수를 평가하였다. 평가 후 재차 동일한 부위에 동량의 제품을 첩포하고 48시간 및 72시간 후의 지연성 자극 지수를 평가하였다.

시험 결과 SLS를 단독으로 첩포한 부분은 24시간 후부터 피부에 붉게 자극이 나타났으나, 병이소초 추출물을 함유하는 제품을 첩포하고 24시간, 48시간, 72시간 경과 후에도 아무런 피부 발작을 일으키지 않았다.

이 평가의 결과는 병이소초 추출물이 화장료에 혼용되었을 때 자극을 유발시키는 기재(계면 활성제, 향, 알콜)에 의한 피부 자극을 감소시킬 수 있는 유의한 효과가 있음을 나타낸다.

이하에 그 외의 실시예를 나타내었다. 즉, 실시예 1에서 수득한 병이소초 추출물을 함유한 화장수, 유액 및 미용액을 실시예 11 내지 13에서 제조하였다. 이들 병이소초 추출물을 함유한 화장수, 유액 및 미용액은 항염 효과, 육모 효과, 여드름방지효과, 피부자극 완화효과 등 피부개선에 우수한 효과를 나타내었다.

실시예 11: 실시예 1에서 수득한 병이소초 추출물을 함유한 화장수 제조

95% 에탄올 8g에 폴리피로리돈 0.05g, 올레일알콜 0.1g, 폴리옥시에틸렌모노올레이트 0.2g, 향료 0.2g, 파라옥시안식향산메틸에스테르 0.1g, 소량의 산화방지제, 소량의 색소를 혼합용해하였다. 실시예 1에서 수득한 병이소초 추출물 0.05g, 글리세린 5g을 정제수 85.33g에 용해한 것에 상기 혼합액을 첨가한 후 교반하여 피부개선효과가 있는 화장수를 얻었다.

실시예 12: 실시예 1에서 수득한 병이소초 추출물을 함유한 유액 제조

세틸알콜 1.2g, 스쿠알란 10g, 바세린 2g, 파라옥시안식향산에틸에스테르 0.2g, 글리세린모노에스테아레이드 1g, 폴리옥시에틸렌(20몰부가)모노올레이트 1g 및 향료 0.1g을 70℃에서 가열혼합용해하고, 실시예 1에서 수득한 병이소초 추출물 0.5g, 디프로필렌글리콜 5g, 폴리에틸렌글리콜-1500 2g, 트리에탄올아민 0.2g, 정제수 76.2g을 75℃로 가열해서 용해시켰다. 양자를 혼합하여 유화시킨 후 냉각하여 수중유(O/W)형의 피부개선효과가 있는 유액을 얻었다.

실시예 13: 실시예 1에서 수득한 병이소초 추출물을 함유한 미용액 제조

95% 에틸알콜 5g에 폴리옥시에틸렌솔비탄모노올레이트 1.2g, 키툴로오즈 0.3g, 히야론산나트륨 0.2g, 비타민 E-아세테이트 0.2g, 감초산 나트륨 0.2g, 파라옥시안식향산에틸에스테르 0.1g, 실시예 1에서 수득한 병이소초 추출물 1g 및 적량의 색소를 혼합하여 피부개선효과가 있는 미용액을 얻었다.

이상에서 설명한 바와 같이, 본 발명에 따른 병이소초 추출물은 항염 효과와 MMP 저해 효과와 자외선 조사에 의한 MMP 발현 조절효과, 콜라겐 합성효과, 잔주름 개선 효과 등 우수한 항노화 효과와 자외선 조사 후 야기되는 피부 자극을 완화시켜 주는 효과를 나타내었다.

또한, 병이소초 추출물은 우수한 탈모방지 효과와 여드름방지 효과를 갖는 여드름균 항균활성과 5알파-리덕타아제 억제 효과를 나타내었다.

따라서, 이러한 병이소초 추출물을 함유하는 화장수, 크림, 유액, 팩, 파우더 등의 화장료 조성물은 항염 효과, 육모, 탈모 방지, 여드름 방지 및 개선, 피부자극 완화효과 등 우수한 피부 외용제 효과를 가짐을 알 수 있다.

Claims

고사리삼목 고사리삼과의 병이소초(Ophioglossum vulgatum) 추출물을 주요 활성성분으로 함유하는 항염, 탈모 예방, 육모 및 여드름 예방·치료용 피부 외용제 조성물.
제1항에 있어서, 상기 병이소초 추출물은 조성물 전체에 대해서 0.001 - 30.0중량% 함유하는 것을 특징으로 하는, 병이소초 추출물을 주요 활성성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 추출용매로서 정제수, 메탄올, 에탄올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디클로로메탄 또는 헥산 중에서 선택된 1종 이상의 용매를 사용하는 것을 특징으로 하는, 병이소초 추출물을 주요 활성성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 추출물은 상온에서 냉침, 가열 여과하여 얻어진 액상물, 상기 액상물의 용매를 감압농축 또는 동결건조하여 얻은 것임을 특징으로 하는, 병이소초 추출물을 주요 활성성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 피부 외용제 조성물은 화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 크림, 에센스, 수중유(O/W)형 또는 유중수(W/O)형의 제형의 화장료 조성물 또는 샴푸, 린스, 헤어컨디셔너, 비누, 연고 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는, 병이소초 추출물을 주요 활성성분으로 함유하는 피부 외용제 조성물.