KR100975078B1 - 물개구리밥 추출물을 함유하는 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 물개구리밥 추출물을 함유하는 피부외용제 조성물에 관한 것으로서, 좀더 구체적으로는 고사리목 생이가래과의 물개구리밥의 전초(全草) 추출물을 활성성분으로 0.001 - 30.0중량%, 바람직하게는 0.01 - 5중량%를 함유하는 것을 특징으로 하며 활성산소 소거효과, 티로시나제 활성 억제효과와 멜라닌 생합성 억제효과, 피부 주름의 개선효과, 여드름 억제 효과 및 육모 효과가 우수한 피부외용제 조성물에 관한 것이다.

물개구리밥 추출물, 항노화용 피부외용제, 항산화, 주름 개선, 미백, 여드름 억제, 육모, 피부외용제

Description

물개구리밥 추출물을 함유하는 화장료 조성물{A Cosmetic composition containing Azolla imbricata extract}

본 발명은 물개구리밥 추출물을 주요 활성성분으로 함유하는 피부외용제 조성물에 관한 것으로서, 좀더 구체적으로는 물개구리밥 추출물 0.001 ~ 30.0 중량%를 함유하며 활성산소 소거효과, 티로시나제 활성 억제효과와 멜라닌 생합성 억제효과, 피부 주름의 개선효과, 여드름 억제 효과 및 육모 효과가 우수한 피부외용제 조성물에 관한 것이다.

사람의 피부는 나이를 먹으면서 피부 노화와 색소 침착에 의해 끊임없이 변한다. 이러한 피부색을 결정하는 인자에는 기본적으로 인종과 지역, 성별, 나이에 따른 차이를 배제하면 기미, 주근깨와 자외선 노출로 인한 태닝과 같은 부분, 또는 전체적인 색소침착, 그 외에 여드름 및 흉터, 각질의 분포 상태와 혈액 순환, 스트레스, 건강상태 등이 있다. 이상의 인자들 가운데에서도 가장 중요한 인자는 색소침착이다.

피부색에 영향을 주는 색소로는 멜라닌, 카로틴, 헤모글로빈 등이 있는데 이 중 가장 중요한 것은 멜라닌으로서, 멜라닌 생합성에 영향을 미치는 가장 큰 요인은 자외선과 체내 호르몬 분비이다. 멜라닌 생합성은 아미노산의 일종인 티로신이 멜라노사이트의 멜라노좀에서 티로시나제(tyrosinase)에 의해 산화되어 디하이드록시페닐알라닌(dihydroxy phenylalanine)으로 전환되는 것을 시작으로 계속되는 일련의 산화과정을 거쳐 갈색(pheomelanin), 흑색(eumelanin)의 중합체로 형성된다. 이러한 생합성 과정은 멜라노좀이라는 특수한 형태의 갈색 세포내 소기관에서 진행되며 멜라닌 과립을 포함한 멜라노좀은 핵 주변 부위에서 수지상 돌기 끝 부분으로 이동, 케라티노사이트의 식세포작용에 의해 세포질 내로 이동하고 이들은 케라티노사이트의 핵 주변에 축적된다. 멜라닌의 합성과 멜라노좀의 수, 주위의 케라티노사이트로의 이동은 일차적으로는 유전적 영향을 크게 받으며 부분적으로는 호르몬과 자외선 등에 영향을 받는다. 그 밖에 티로시나제의 발현 및 멜라닌의 합성, 전송에 관여하는 세포 내 조절인자인 싸이토카인(cytokine), 구리, 아연, 철 등의 금속 이온 및 인터페론, 프로스타글란딘, 히스타민 등이 관여하는 것으로 알려져 있다(박수남 : 대한화장품학회지, 25: 77-127, 1999). 따라서 피부색을 결정짓는 멜라닌의 합성을 억제하고 이에 관여하는 효소인 티로시나제의 활성을 억제하여 피부의 미백효과를 기대할 수 있다.

또, 피부색과 함께의 노화의 특징을 나타내는 인자는 주름의 생성과 탄력의 저하이다. 피부노화는 내인성 노화(intrinsic, chronological aging)와 광노화(photoaging) 두 가지로 나눌 수 있다[Gilchrest BA: J. Am. Acad. Dermatol.,21, 610-613(1989)]. 내인성 노화는 연령이 증가함에 따라 생체의 생리 적인 기능이 저하되어 자연적으로 유발되는 노화현상이다[Braverman IM 등: J. Invest. Dermatol., 78, 434-443(1982)]. 광노화는 피부가 광에 반복적으로 노출되어 피부의 외양 또는 기능이 변화되는 것을 의미한다[Ridder GM등: J. Am. Acad. Dermatol., 25, 751-760(1991)].

또한, 피부노화는 자외선, 스트레스, 질병상태, 환경인자, 상처, 나이가 들어감에 따라 활성산소종이 활성화되어 야기될 수 있으며, 이런 상태가 심화될 경우 생체 내에 존재하는 항산화 방어망을 파괴하고, 세포 및 조직을 손상시켜 성인병 및 노화를 촉진하게 된다. 좀 더 구체적으로 말하자면, 피부의 주요 구성 물질인 지질, 단백질, 다당류 및 핵산 등이 산화되어 피부세포 및 조직이 파괴되고, 결국 피부노화 현상이 생겨나는 것이다. 특히 단백질의 산화는 피부의 결합조직인 콜라겐(collagen), 히알루론산(hyaluronic acid), 엘라스틴(elastin), 프로테오글라이칸(proteoglycan), 피브로넥틴(fibronectin) 등이 절단되어 심한 과다 염증반응과 피부의 탄력에 지장을 주게 되고 이것이 더 심해질 경우 DNA의 변이에 의해 돌연변이, 암의 유발, 면역기능 저하의 사태에 이르게 된다. 그러므로 신체의 대사 과정 중 발생하는 활성산소종이나 자외선 조사, 염증반응에 의해 매개되는 활성산소종을 소거하여 세포막을 보호하고, 또 이미 손상된 세포는 활발한 신진대사에 의해 재생시켜서 세포를 증식시켜야 피부는 빠르게 회복되고 건강한 피부를 유지할 수 있다.

생체 내에서 콜라겐과 같은 세포외 기질의 합성과 분해는 적절하게 조절되나 노화가 진행되면서 그 합성이 감소하며 콜라겐을 분해하는 효소인 기질금속단백질 분해효소(matrixmetalloproteinase, 이하 ‘MMP’와 혼용함)의 발현이 촉진되어 피 부의 탄력이 저하되고 주름이 형성된다. 또한, 자외선 조사와 자유 라디칼에 의해 이러한 분해효소가 활성화되기도 한다. 기질 금속단백질 분해효소(MMP)는 사람 피부의 각질형성세포(keratinocyte)와 섬유아세포(fibroblast)를 비롯한 체내 다양한 세포로부터 분비되는데, 칼슘 및 아연 의존성 엔도펩티다제(Endopeptidase)로 중성 pH에서 작용하며 기질로써 여러 가지 세포외 기질을 이용한다. MMP는 그 기질특이성에 따라 MMP-1, MMP-2, MMP-9로 크게 분류되는데, MMP-1은 간질의 효소인 섬유아세포 타입 콜라게나제이며 기질로는 콜라겐타입 Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅶ,Ⅷ,Ⅹ 및 젤라틴이 있으며 원래 콜라겐 길이의 3/4이나 1/4 길이의 펩타이드로 잘라 비특이적인 효소(gelatinase)가 작용하기 용이하도록 한다. MMP-2는 72kD의 젤라티네이즈로서, 기질로는 젤라틴, 콜라겐 타입 Ⅳ,Ⅴ,Ⅶ,Ⅹ, 엘라스틴 및 피브로넥틴을 분해한다. 또한 메탈로엘라스타아제(Metalloelastase)는 MMP-13으로 엘라스틴을 분해한다. 사람 피부의 진피층 대부분을 차지하는 콜라겐 타입 Ⅰ과 Ⅲ, 엘라스틴, 피브로넥틴 등은 피부에 강도와 장력을 부여하는데 자외선과 자유 라디칼 등에 의해 비정상적으로 활성화된 MMP에 의해 단백질이 분해되면 주름과 탄력저하, 피부 처짐 등의 노화현상이 가속화된다. 특히 결합단백질 중 가장 큰 비율을 차지하는 타입Ⅰ콜라겐을 분해하는 MMP-1의 활성과 생합성을 억제함으로써 피부 결합단백질을 보호하여 주름생성과 탄력저하를 예방할 수 있다. 그러므로 자외선에 의해 세포 내에서 활성화가 유도되는 MMP 발현을 조절하거나 그 활성을 억제할 수 있는 물질의 개발이 요구되고 있다. 지금까지 피부 외용제의 소재로서 사용된 원료들은 단순히 MMP 효소 활성만을 억제하는 것이 대부분이었다.

또한, 남성형 탈모증은 남성호르몬 의존적이어서 남성호르몬의 양에 직접적인 관계가 있으며, 이에 따라 최근 남성호르몬 활성억제를 통한 탈모의 예방 및 치료를 위한 많은 연구가 보고되고 있다. 한편, 남성호르몬의 분비상승에 의해 피지선의 기능이 상승되면 생성된 과잉의 피지가 모낭벽의 과각화로 인하여 모낭 내에 정체되면서 생기는 면포가 여드름의 초기단계이다. 남성호르몬에 의한 탈모 및 여드름의 기전을 설명하면, 5 알파-리덕타아제(5α-Reductase)는 피지선, 모낭, 전립선, 부고환 등의 남성 호르몬 반응성 조직에 존재하며 남성 호르몬 중 하나로서, 테스토스테론(testosterone)을 디하이드로테스토스테론(dihydrotestosterone)으로 대사시키는데 관여하는 효소이며, 그 전환에는 NADPH가 필요하다. 또한, 테스토스테론(testosterone)은 골격근 증가, 남성외부생식기, 음낭성장, 정자형성 등에 관여하고, 디하이드로테스토스테론(dihydrotestosterone)은 여드름, 피지 증가, 탈모 및 전립선 비대증 등의 해당 조직에 관여한다(Diane et al. J.I.D. 1995). 특히, 사춘기 이후에 남성 호르몬의 과량 분비는 여드름과 탈모를 유발하는데, 5 알파-리덕타아제에 의한 디하이드로테스토스테론의 과량 생성을 막기 위해 5알파-리덕타아제 억제제를 사용하여 탈모방지 및 여드름 방지제를 개발하려는 연구들이 활발히 진행되고 있다.

최근 여러 화학물질 등에 의한 피부 자극을 줄이기 위해 천연 추출물로부터 얻어진 항산화, 주름완화, 미백 등의 기능을 가진 기능성 피부 외용제(functional cosmetics)에 많은 관심이 집중되고 있다. 천연 재료는 피부에 부작용이 적을 뿐 아니라, 최근 천연 재료를 이용한 피부 외용제에 대한 소비자들의 호응이 높아짐에 따라 피부 외용제 원료로서 개발가치가 한층 커지고 있다. 예를 들어, 미국 특허공보 US 5,972,341는 코미포라(Commiphora)속 식물, 특히, 코미포라 무쿨(Commiphora mukul) 추출물의 주름개선 효과에 관하여 기술하고 있다. 일본특허공개 평9-672662 는 히알우로니다제(Hyaluronidase) 억제 효능을 가지는 해초류 추출물들에 관하여 기술하고 있다. 일본특허공개 평10-85905은 와카메(Wakame)로부터 추출된 푸코이단(Fucoidan)의 피부감촉 개선효과에 관하여 기술하고 있다. 일본특허공개 평2-245087은 사르가숨(Sargassum)속 추출물의 항산화 효과에 관하여 기술하고 있다. 일본특허공개 평3-294384는 히지키아(Hizikia)속으로부터 추출된 항산화 조성물에 관하여 기술하고 있다. 일본특허공개 평7-10769는 수렴효과(astringent effect)가 있는 페오피시에강(Phaeophyceae) 추출물에 관하여 기술하고 있다.

따라서, 본 발명은 인체 유해성이 적은 천연물을 선발하여, 이의 피부 외용제로서의 효능을 확인하여 우수한 피부 외용제를 제공하려는 것을 목적으로 한다.

또한, 본 발명은 피부자극이 없으면서도 미백, 주름 개선 등 소정의 기능성 효과를 나타내는 피부 외용제를 제공하려는 것을 목적으로 한다.

즉, 본 발명의 목적은 피부에 적용 가능하고 피부 외용제에 함유시 멜라닌의 생성 및 이와 관련된 효소의 활성을 억제하여 우수한 미백효과를 나타내는 천연 추출물을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명의 목적은 피부 피부 외용제에 적용 가능하고 피부 외용제에 함유시 활성산소 소거효과, MMP-1 생합성 감소 및 타입 1 프로콜라겐 생합성 촉진효과, 피부 주름 개선효과 등 우수한 항노화 효과를 나타내는 천연 추출물을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명의 목적은 우수한 탈모 방지효과 및 여드름 방지효과를 갖는 5 알파-리덕타아제 억제 효과를 나타내는 천연 추출물을 제공하는 것이다.

이에, 본 발명자들은 이제까지 화장료나 피부 외용제로서 알려지지 않은 여러 천연물들에 대하여 피부외용제로의 응용 가능성을 연구한 결과, 고란초목 고사리과의 전초(全草)인 물개구리밥 천연물을 선정하고 이로부터 추출물을 제조하여, 활성산소 소거효과, 티로시나제 활성 억제효과와 멜라닌 생합성 억제효과로 인한 미백 효과, 피부 주름의 개선효과, 5 알파-리덕타아제 억제효과로 인한 여드름방지효과 및 탈모방지 및 육모 효과를 측정하여 만족한 결과를 얻어 피부외용제로서 응용할 수 있음을 발견하게 되었다.

본 발명의 피부 외용제 조성물은 피부자극이 없으면서도 멜라닌의 생성 및 이와 관련된 효소의 활성을 억제하여 우수한 미백효과를 나타내며, 활성산소 소거효과, MMP-1 생합성 감소 및 타입 1 프로콜라겐 생합성 촉진효과, 피부 주름 개선효과 등 우수한 항노화 효과를 나타내며, 우수한 탈모 방지효과 및 여드름 방지효과를 나타낸다.

본 발명의 조성물에 사용되는 원료인 물개구리밥(Azolla imbricata)은 양치식물 고사리목 생이가래과의 상록 여러해살이풀로서, 논이나 연못의 물 위에 떠서 자란다. 줄기는 깃꼴로 갈라져서 전체가 삼각형을 이루고 길이가 1∼1.5㎝이며, 실같이 가는 뿌리가 돋고 뿌리털이 있다. 잎은 잎자루가 없고 비늘 모양이며 2개로 갈라지고 잔 돌기가 있으며, 갈라진 조각은 가장자리가 막질(膜質:얇은 종이처럼 반투명한 것)이고 세모진 원 모양이며 끝이 둥글거나 뭉툭하다. 잎 표면은 여름에 녹색이지만 겨울에 붉은 색으로 변하는데, 그 빛깔이 짙기 때문에 물이 붉게 보이므로 만강홍(滿江紅)이라고도 한다. 포자낭은 옆으로 뻗은 가지의 첫 번째 잎 밑에 나고, 대포자낭 속에는 1개의 포자가 있으나, 소포자낭은 많은 포자가 있으며 둥근 포막에 싸여 있다. 한국·일본·타이완·중국·인도차이나 등지에 분포한다.

본 발명은 물개구리밥 추출물을 함유하는 피부외용제 조성물을 제공한다. 본 발명에서 "피부 외용제"라 함은 피부에 적용하여 주름 개선, 미백, 여드름 예방 및/또는 치료, 육모, 탈모 예방 및/또는 치료 등의 목적으로 사용되는 화장품, 기능성 화장품 및 의약품, 의약부외품을 포함하는 의미로 사용하였다.

본 발명의 물개구리밥 추출물은 추출용매로서 정제수, 메탄올, 에탄올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디클로로메탄 및 헥산 중에서 선택된 1종 이상의 용매를 사용하여 추출한 것을 특징으로 한다.

또한, 본 발명은 상기 추출물이 상온에서 냉침 또는 가열 여과하여 얻어진 액상물 또는 이 액상물을 추가로 용매를 감압농축 또는 동결건조하여 얻은 것임을 특징으로 한다.

또한, 본 발명은 상기 물개구리밥 추출물의 함량이 피부 외용제 조성물 전체에 대해서 건조 중량 기준 0.001~30.0중량%인 것을 특징으로 한다. 상기 추출물의 함량이 0.001중량% 미만인 경우에는 피부개선 효과가 거의 없으며, 30.0중량%을 초과하는 경우에는 함유량 증가에 대한 효과 증대 정도가 미미하여 경제적이지 못하다.

또한, 본 발명은 상기 피부외용제 조성물이 화장수, 젤, 수용성 리퀴드, 크림, 에센스, 수중유(O/W)형 및 유중수(W/O)형의 제형 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 물개구리밥 추출물을 주요 활성성분으로 함유하는 피부외용제 조성물을 제공한다.

뿐만 아니라, 본 발명은 상기 피부외용제 조성물이 화장료 조성물 또는 약학 조성물인 것을 특징으로 한다.

물개구리밥 추출물은 캡슐제, 액상제, 연고제, 첩부제 또는 약학적으로 허용되는 담체를 이용한 서방화제제 등의 약학 조성물로 제제화할 수 있으며, 약리학적으로 허용되는 기제, 운반제, 부형제, 결합제(예: 전분, 트래거캔스 고무, 젤라틴, 당밀, 폴리비닐 알콜, 폴리비닐에테르, 폴리비닐 피롤리돈, 히드록시프로필 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 에틸 셀룰로오스 및 카르복시메틸 셀룰로오스), 분쇄제(예: 한천, 전분, 벨라틴 가루, 카르복시메틸 셀룰로오스 나트륨, 카르복시메틸 셀룰로오스 칼슘, 결정 셀룰로오스, 탄산칼슘, 탄산수소나트륨 및 알긴산 나트륨), 윤활제(예: 스테아린산 마그네슘, 활석, 수첨 식물유) 및 착색제 등을 포함한다. 상기 운반제 및 부형제로는 젖당, 글루코오스, 수크로오스, 만니톨, 감자녹말, 옥수수녹말, 탄산칼슘, 인산칼슘 및 셀룰로오스 등을 사용한다. 상기 외에도 안정화제, 용해보조제, 경피흡수 촉진제 등의 보조제 방향제, 방부제 등의 첨가제가 더 첨가될 수 있다.

본 발명에서 제공되는 물개구리밥 추출물은 필요에 따라서 산 부가염으로 할 수 있다. 산 부가염으로서는 예를 들면 염산, 브롬화 수소산, 황산, 인산 등의 무기산과의 염, 초산, 프로피온산, 시트르산, 락트산, 옥살산, 말레인산, 푸마르산, 숙신산, 타르타르산, 메탄설폰산 등의 유기산과의 염을 들 수 있다. 이러한 염은 통상의 방법에 의해 용이하게 제조할 수 있다.

본 발명의 물개구리밥 추출물은 우수한 발모촉진효과, 육모 효과를 갖는다. 따라서, 이것을 두피에 도포하면 탈모의 치료·개선, 탈모의 예방을 꾀할 수 있다.

본 발명의 물개구리밥 추출물은 남성형 탈모증과 남성 호르몬성 탈모라고도 불리는 머리카락이 적어지거나, 탈모 이외에 원형탈모증, 비강성(粃糠性) 탈모증, 지루성 탈모증 등의 병적 탈모증에 적용할 수 있다. 본 발명의 물개구리밥 추출물 사용량으로서는 성별, 연령, 탈모와 줄어드는 머리카락 등의 증상의 정도 등에 따라서 적절히 결정되는 것으로서, 통상 0.01∼20㎎/㎠를 성인 1인당 하루 1회 또는 수회로 나누어 두피에 도포한다.

또, 본 발명의 물개구리밥 추출물을 발모촉진, 육모 촉진, 탈모예방 등 양모효과를 목적으로 한 의약품, 의약부외품 또는 화장품에 이용하는 경우, 그 제형은 본 발명의 효과를 발휘할 수 있는 제형이면 특별한 제한 없이 임의로 선택할 수 있으며, 예컨대 토닉, 로션, 유액(乳液), 크림, 연고, 젤, 스프레이, 무스 등을 들 수 있다.

그리고, 이러한 제제 중에는 본 발명에 관련된 물개구리밥 추출물 이외에 의약품, 의약부외품, 화장품의 분야에서 통상 양모제에 배합가능한 성분을 배합할 수 있다. 예를 들면 혈행촉진작용을 갖는 비타민 E 및 그 유도체 등의 약제, 항남성호르몬작용을 갖는 에스트라디올, 에스트론과 같은 호르몬제 등을 들 수 있다.

또, 알콕시카르보닐피리딘 N-옥시드, 아세틸콜린 유도체 등의 혈관확장제; 세파란틴 등의 피부기능항진제; 헥사클로로펜, 운데실렌산, 트리클로로카르바니드, 비티오놀 등의 항균제; 아연 및 그 유도체; 락트산 또는 그 알킬에스테르; 시트르산 등의 유기산류; 트라네키사무산 등의 프로테아제 저해제 등을 배합할 수 있다.

또, 에탄올, 이소프로필알콜 등의 알콜류; 글리세린, 프로필렌글리콜, 폴리 에틸렌글리콜, 등의 다가알콜류; 고급 지방산, 고급 알콜, 탄화수소유, 천연유지, 에스테르유, 실리콘유 등의 유분; 계면활성제; 향료; 킬레이트제; 1,3-부틸렌글리콜, 히알루론산 및 그 유도체, 말티톨, 아테로콜라겐, 락트산나트륨 등의 보습제; 카복시비닐폴리머 등의 증점제; 산화방지제; 자외선 흡수제; 색소; 물; 안정화제 등 통상 양모제에 배합되는 성분을 본 발명의 효과를 손상하지 않는 범위에서 배합할 수 있다.

이와 같이 제조되는 약학 조성물은 증상에 따라 일일 1회 내지 수회 피부에 적용할 수 있으며 증상의 호전 정도에 따라 적용을 조절할 수 있다.

이하, 실시예를 통해 본 발명을 좀더 구체적으로 설명한다. 단, 이들 실시예는 본 발명의 예시적인 기재일 뿐이며, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되는 것은 아니다.

실시예 1: 물개구리밥 추출물 제조

세절하여 음건한 물개구리밥 전초(全草)를 95% 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #5 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물은 50℃ 이하에서 감압농축 및 동결건조한 후 정제수, 에탄올, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 중에서 선택된 1종 이상의 용매에 용해하여 0.001~30중량% 범위의 물개구리밥 추출물을 제조하였다.

실시예 2: NBT 법을 이용한 항산화 효과 측정 실험

실시예 1에서 수득한 물개구리밥 추출물의 항산화 효과를 확인하기 위해 실험실 조건에서 항산화제로 잘 알려진 BHT(Butylated hydroxytoluene)를 비교샘플로 하고 NBT(Nitro Blue Tetrazolium)법을 이용하여 항산화 활성을 측정하였다.

항산화 효과를 측정하기 위해서 크산틴과 크산틴옥시다제에 의해 생성되는 활성산소를 NBT법에 의해 측정하고 피검물질이 활성산소를 제거하는 효과, 즉 활성산소 소거효과를 평가한다. 크산틴과 크산틴옥시다제에 의해 활성산소를 생성시킨다. 이 활성산소가 니트로블루테트라졸리움(Nitroblue Tetrazolium;NBT)과 반응하여 이것에 의해 생성되는 청색을 파장 560nm에서 측정하는 것으로 활성산소 소거율을 측정한다.

측정방법으로서 0.05M Na₂CO₃(2.4㎖, pH 10.2), 3mM 크산틴 용액(0.1㎖), 3mM EDTA 용액(0.1㎖), 우혈청 알부민(BSA 0.15%) 용액(0.1㎖), 0.72mM NBT(nitroblue tetrazolium) 0.75mM 용액(0.1㎖)를 가하고 여기에 시료용액 0.1㎖를 첨가하고 25℃에서 10분간 방치한다. 크산틴 옥시다제 용액(공시험의 흡광도가 0.2~0.23 범위에 들도록 즉, 흡광도가 A₅₆₀=0.3/20분이 되도록 함) 0.1㎖를 가하여 빨리 교반하고 25℃에서 20분간 배양한다. 그 후 6mM CuCl₂ 용액 0.1㎖을 가하여 반응을 정지시키고 560nm에서의 흡광도 St를 측정한다. 공시험은 시료용액 대신 증류수를 사용한 것을 상기와 똑같이 조작해 흡광도 Bt를 측정한다. 시료용액의 효소 무첨가시 반응 전 560nm 흡광도 So를 측정하고, 시료용액의 블랭크(Blank)는 상기 크산틴 옥시다제 용액 대신에 증류수를 사용해 똑같이 조작하여 흡광도 Bo를 측정한다. 각 농도별 물개구리밥 추출물은 상기 실시예 1에서 사용한 용매를 희석용매로 이용하여 제조하였다.

효과는 수학식 1에 의하여 산출하였으며, 그 결과는 표 1에 나타내었다.

억제율(%) = 〔1-(St-So)/(Bt-Bo)〕X 100

St : 시료용액의 효소 반응 후의 560nm에서의 흡광도

Bt : 공시험용액의 효소 반응 후의 560nm에서의 흡광도

So : 시료용액의 효소 무첨가시 반응전의 560nm에서의 흡광도

Bo : 공시험용액의 효소 무첨가시 반응전의 560nm에서의 흡광도

표 1에서 확인할 수 있듯이 물개구리밥 추출물은 BHT(Butylated hydroxytoluene)보다 우수한 항산화력을 갖고 있음이 확인되었다.

시료명	항산화효과(%)
물개구리밥 추출물 0.1중량%	92.2%
물개구리밥 추출물 0.01중량%	74.7%
물개구리밥 추출물 0.001중량%	27.6%
BHT(Butylated hydroxytoluene) 0.1중량%	89.3%

실시예 3: 자유라디칼 소거활성 측정 실험

실시예 1에서 수득한 물개구리밥 추출물의 자유라디칼 소거활성을 측정하기 위해 실험실 조건에서 BHT(Butylated hydroxytoluene)와 같은 항산화제를 비교샘플로 하고 DPPH법을 이용하여 자유라디칼 소거활성을 측정하였다.

DPPH법은 DPPH(2,2-Di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl free radical)라는 유리기를 사용하여 환원력에 의한 자유라디칼 소거활성을 측정한다. 피검물질에 의해 DPPH가 환원되어 흡광도가 감소하는 정도를 공시험액의 흡광도와 비교하여 파장 560nm에서 자유라디칼 소거율을 측정한다.

DPPH 자유라디칼 소거활성 측정을 위하여 0.1%, 0.01%, 0.001% 농도의 물개구리밥 추출물을 준비하였다. 각 농도별 물개구리밥 추출물은 상기 실시예 1에서 사용한 용매를 희석용매로 이용하여 제조하였다. 상기 농도의 추출물을 96웰 플레이트에 각각 넣고, 여기에 100uM 메탄올용액으로 제조된 DPPH를 첨가하여 용액의 총 부피가 200㎕가 되도록 하였다. 이것을 37℃에서 30분간 방치한 후 560nm에서 흡광도를 측정하였다. 자유라디칼 소거활성(%)은 다음의 수학식 2로 산출하였다.

자유라디칼 소거활성(%)= 100-(B/A)X100

A: 본 발명의 물개구리밥 추출물을 처리하지 않은 대조군 웰의 흡광도

B: 본 발명의 물개구리밥 추출물을 처리한 실험군 웰의 흡광도

표 2에서 확인할 수 있듯이 물개구리밥 추출물은 항산화제로 많이 이용되고 있는 BHT(Butylated hydroxytoluene)보다 우수한 자유라디칼 소거 활성을 나타냄을 알 수 있었다.

시료명	자유라디칼 소거활성(%)
물개구리밥 추출물 0.1중량%	94.4%
물개구리밥 추출물 0.05중량%	93.9%
물개구리밥 추출물 0.025중량%	88.9%
BHT(Butylated hydroxytoluene) 0.1중량%	81%

실시예 4: 티로시나제 억제효과 측정 실험

본 실시예는 실시예 1에서 수득한 물개구리밥 추출물의 미백효과를 확인하기 위해 티로시나제(tyrosinase)라는 효소의 기능이 억제되는 정도를 보고 미백효과를 판단한 것이다.

티로시나제는 생체내에서 티로신(tyrosine)이라는 물질의 산화과정을 촉진하여 멜라닌이 생성되게 도와주는 효소이다. 본 실시예에서는 이 효소의 기능을 억제하여 티로신이 산화되어 멜라닌이라는 흑색의 고분자를 형성하는 것을 억제하는 정도를 측정하는 방법(Pomerantz S. H.: J. Biochem ., 24: 161 - 168, 1996)을 응용하여 미백효과를 판정하였다.

각 시료들의 티로시나제에 대한 저해활성은 시료 15㎕를 96 웰 플레이트에 넣고, 50mM 인산 완충액(pH 6.5) 150㎕, 1.5mM L-티로신 용액 25㎕를 넣은 후, 머쉬룸 티로시나제(1,500units/㎖, Sigma사) 10㎕를 첨가하여 37℃에서 20분간 반응시킨 후, 마이크로플레이트 판독기(microplate reader, ELx800, 미국)를 사용하여 490nm에서 흡광도를 측정하여 티로시나제에 대한 저해율을 측정하였다. 티로시나제에 대한 저해율(%)은 수학식 3에 의하여 계산하였으며, IC₅₀ 값은 티로시나제 효소 활성을 50% 저해하는 물질의 농도이다.

저해율 (%) = [(D-C)-(B-A)]/(D-C)× 100

A : 시료를 넣은 웰의 반응전 흡광도

B : 시료를 넣은 웰의 반응후 흡광도

C : 시료를 넣지 않은 웰의 반응전 흡광도

D : 시료를 넣지 않은 웰의 반응후 흡광도

티로시나제 활성 억제효과를 시험한 결과, 표 3에서 확인할 수 있듯이 물개구리밥 추출물의 IC₅₀값은 0.11%로 나타나 기존에 알려진 미백제인 코직산, 유용성 감초추출물에 비해 낮지만 알부틴보다 우수한 티로시나제 활성 억제 효과를 나타내었다.

시료명	티로시나제 저해 효과(IC50)
물개구리밥 추출물	0.11%
코직산	0.04%
알부틴	0.47%
상백피 추출물	10.20%
유용성 감초 추출물	0.08%

실시예 5: B16F1 멜라노싸이트를 이용한 멜라닌 생성 억제효과 측정 실험

본 실시예는 실시예 1에서 수득한 물개구리밥 추출물의 미백효과를 확인하기 위해 B16F1 멜라노싸이트에 대한 멜라닌 생성 억제 정도를 보고 미백 효과를 판단한 것이다.

본 실시예에 사용된 B16F1 멜라노싸이트는 마우스에서 유래한 세포균주이며, 멜라닌이라는 흑색색소를 분비하는 세포이다. 이 세포의 인공배양중에 시료를 처리하여 멜라닌색소가 감소하는 정도를 비교 평가하였다. 본 실시예에 사용된 B16F1 멜라노싸이트는 ATCC(American Type Culture Collection, 기탁번호: 6323)로부터 분양받아 사용하였다.

B16F1 멜라노싸이트의 멜라닌 생합성 억제효과 측정은 다음과 같이 행하였다. B16F1 멜라노싸이트를 6 웰 플레이트에 각 웰당 2×10⁶ 농도로 분주하고 세포를 부착시킨 후 독성을 유발하지 않는 농도로 시료를 처리하여 72시간 동안 배양하였다. 72시간 배양 후 세포를 트립신-EDTA로 떼어낸 후 세포수를 측정한 다음 원심분리하여 세포를 회수하였다. 세포 내 멜라닌의 정량은 로탄(Lotan : Cancer Res ., 40: 3345-3350, 1980)의 방법을 약간 변형하여 실시하였다. 셀 펠릿을 PBS로 1회 세척한 후 균질화 버퍼액(50mM 소듐 포스페이트, pH 6.8, 1% Triton X-100, 2mM PMSF(phenylmethanesulphonylfluoride)) 1㎖를 첨가하여 5분간 와류하여 세포를 파쇄하였다. 원심분리(3,000rpm, 10분)하여 얻은 세포 여액에 1N NaOH{10% DMSO(Dimethyl sulfoxide) 포함}를 첨가하여 추출된 멜라닌을 용해한 후 마이크로 플레이트 판독기로 405nm에서 멜라닌의 흡광도를 측정한 다음 멜라닌을 정량하여 시료의 멜라닌 생성 저해율(%)을 측정하였다. B16F1 멜라노싸이트의 멜라닌 생성 저해율(%)은 수학식 4에 의하여 계산하였으며, IC₅₀값은 멜라닌 생성을 50% 저해하는 물질의 농도이다.

저해율 (%) = [(A-B)/A]×100

A: 시료를 첨가하지 않은 웰의 멜라닌 양

B: 시료를 첨가한 웰의 멜라닌 양

B16F1 멜라노싸이트의 멜라닌 생성 억제 효과를 시험한 결과, 표 4에서 확인할 수 있듯이 물개구리밥 추출물의 IC₅₀값은 0.2%로 나타나 기존의 미백제인 하이드로퀴논, 유용성 감초 추출물보다는 미약하지만, 알부틴보다 우수한 효과를 나타내었다.

시료명	멜라닌 합성 저해 효과(IC50)
물개구리밥 추출물	0.2%
하이드로퀴논(hydroquinone)	0.03%
알부틴(arbutin)	0.46%
상백피 추출물	5.32%
유용성 감초 추출물	0.04%

실시예 6: 인비트로 MMP -1 활성저해 실험

MMP-1 활성 저해 효과를 측정하기 위하여 형광 분석법을 이용하였다. 실험에 사용한 기질은 형광물질이 표지된 DQ^TM-콜라겐, 효소(collagenase)는 Molecular probe사(Eugene, OR, USA)에서 시판중인 제품을 사용하였으며, 반응완충액(0.5M Tris-HCl, 1.5M NaCl, 50mM CaCl₂, 2mM 소듐 아자이드, pH 7.6)은 10배 희석 후 사용하였다. 반응완충액 100㎕에 0.25㎎/㎖로 반응완충액에 용해한 DQ^TM 콜라겐 20㎕와 물개구리밥 추출물(0.01 ~ 0.1중량%) 40㎕을 첨가하고 0.5 단위(unit)로 희석한 콜라게나제 40㎕을 첨가한다. 암소, 실온에서 20분 경과 후 형광 분광광도계(Perkin Elmer, UK)를 이용하여 흡수파장 495nm, 방출파장 515nm로 형광값을 측정하며, 대조군으로서 효소액 대신 반응완충액을 효소와 동량 첨가하여 형광값을 측정하였으며 시료 자체의 형광값도 측정하여 효소활성 계산시 보정하였다. 각 농도별 물개구리밥 추출물은 상기 실시예 1에서 사용한 용매를 희석용매로 이용하여 제조하였다.

결과는 표 5에 나타냈으며 물개구리밥 추출물 0.025% 처리시 클로스트리디움 콜라게나제의 콜라겐 분해활성을 약 69% 억제하였으며 이는 녹차추출물의 저해 효과보다 우수한 결과이다.

시료명	콜라게나제 활성 저해율(%)
물개구리밥 추출물 0.1중량%	96.7%
물개구리밥 추출물 0.05중량%	82.6%
물개구리밥 추출물 0.025중량%	68.5%
녹차추출물 0.2중량%	70%

실시예 7: 자외선 조사 후 물개구리밥 추출물에 의한 MMP -1 발현억제 평가

실시예 1에서 수득한 물개구리밥 추출물의 UV 조사 및 시료 첨가 후 MMP-1 농도를 측정하기 위해서 효소면역 시험법(ELISA)을 실시하였다. UV 챔버를 이용하여 인간 진피 섬유아세포에 UVA를 6.3J/㎠의 에너지로 조사하였다. 자외선 조사량과 배양시간은 예비실험을 통하여 섬유아세포에서 MMP 발현량이 최대가 되는 조건을 확립하였다. 음성 대조군은 은박지로 싸서 UVA의 환경에 같은 시간 동안 유지시켰다. UVA 방출량은 UV 라디오미터를 이용하여 측정하였다. UVA가 조사되는 동안의 세포는 이전에 분주된 배지 그대로이고 UVA를 조사한 후 샘플이 들어간 배지로 교환하여 24시간 배양 후 배지를 회수하여 96웰에 코팅하였다. 일차항체(MMP-1 (Ab-5) 단일클론항체)를 처리하고 37℃에서 60분간 반응시켰다. 이차항체인 알칼라인 포스파타제 결합된 안티마우스 IgG(whole mouse, alkaline phosphatase conjugated)를 다시 60분 정도 반응시킨 후, 알칼라인 포스파타제 기질용액(다이에탄올아민 완충용액 내에 1㎎/㎖ ρ-나이트로페닐 포스페이트)을 상온에서 30분간 반응시키고 마이크로플레이트 판독기로 405nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조군으로는 시료를 첨가하지 않은 것을 사용하였다. 각 농도별 물개구리밥 추출물은 상기 실시예 1에서 사용한 용매를 희석용매로 이용하여 제조하였다.

결과는 표 6에 나타냈다. 시료를 처리하지 않은 대조군에 비하여 물개구리밥 추출물을 첨가한 경우에는 자외선 조사시 발현이 유도되는 MMP-1에 대하여 73% 이상의 억제율을 보였으며 이는 대조군으로 사용한 레티놀의 억제율과 유사한 결과를 나타내었다.

시험군	MMP-1 발현억제율(%)
대조군	-
물개구리밥 추출물 0.01중량%	73.6%
물개구리밥 추출물 0.005중량%	39.4%
레티놀 0.005중량%	38.0%

실시예 8: 타입 1 프로콜라겐 생합성 촉진 효과

본 실험예는 실시예 1에서 수득한 물개구리밥 추출물 첨가 후 피부기질 성분인 타입 1 프로콜라겐의 생합성을 촉진시키는 효과를 알아보기 위하여 프로콜라겐 분석(procollagen assay)을 하기와 같은 방법으로 실시하였다.

신생아의 포피조직에서 분리한 사람진피섬유아세포(human dermal fibroblast)는 Modern Tissue Technology(MTT, Korea)로부터 분양받아 DMEM/F-12(Dulbecco’s MEM : Ham’s Nutrient Mixture F-12) 3:1 배지에 10% 우태아혈청(Fetal Bovine Serum)을 첨가하여 1× 10⁴cell/㎠농도로 배양하였다. 70-80% 정도 자라면 1:3의 비율로 분주하여 계대 배양하였고, 3~4차 계대배양된 세포를 실험에 이용하였다.

프로콜라겐의 양을 측정하는 실험을 위해서 섬유아세포를 48웰 플레이트(well plate)에 90% 이상 배양한 후 물개구리밥 추출물을 0.01%(v/v), 0.05%(v/v), 0.001%(v/v) 농도로 가하고, 24시간 후에 배지 중에 유리된 프로콜라겐의 양을 프로콜라겐타입-1C-펩타이드 EIA 키트(procollagen type-1 C-peptide EIA kit)(MK101, Takara, Japan)를 사용하여 측정하였다. 각 농도별 물개구리밥 추출물은 상기 실시예 1에서 사용한 용매를 희석용매로 이용하여 제조하였다.

결과는 표 7에 나타냈으며 물개구리밥 추출물을 0.005%(v/v) 처리시 프로콜라겐의 생합성을 34.5% 촉진하였으며 이는 세포신호전달 물질인 TGF(Tissue Growth Factor)-β와 유사한 효과를 나타내었다.

시료명	프로콜라겐 생합성 촉진효과(%)
물개구리밥 추출물 0.005중량%	34.5%
물개구리밥 추출물 0.0025중량%	21.8%
물개구리밥 추출물 0.001중량%	12.4%
TGF-β 0.001중량%	35.2%

실시예 9: 여드름균에 대한 항균력 시험

본 실시예는 실시예 1에서 수득한 물개구리밥 추출물의 여드름균에 대한 항균력을 확인하기 위한 페이퍼 디스크 테스트(Paper Disc Test)를 실시하였다. 먼저, 여드름 발생원인의 피부 상재균인 프로피오니박테리움 아크네(Propionibacterium acnes)를 활성화시키기 위하여 BHI 액체배지(Brain-Heart Infusion Broth;3.7%)에서 48시간 전배양하였다. 이렇게 준비한 균배양액을 BHI고체배지(Brain-Heart Infusion Broth;3.7%; agar1.5%)에 0.1㎖씩 도말한 후 건조시켰다. 실시예 1에서 수득한 물개구리밥 추출물을 95% 에탄올 수용액에 12%(w/v)로 희석하여 직경 8㎜의 페이퍼디스크에 50㎕씩 점적하고, 앞서 준비한 고체배지 위에 올려놓은 후 이것을 35℃ 혐기 배양조에서 3일간 배양하였다. 페이퍼디스크 주변에 생긴 균 성장 저지 영역을 관찰하고 저지환의 크기를 측정함으로써 항균력을 평가하였다. 그 결과, 물개구리밥 추출물의 균 성장 저지환의 크기는 19㎜인 것으로 나타났다.

실시예 10: 물개구리밥 추출물의 5 알파- 리덕타아제 활성 억제력 평가실험

5 알파-리덕타아제 활성억제 실험에 사용된 5 알파-리덕타아제는 포피 유래의 섬유아세포가 생성하는 효소를 사용하였다.

섬유아세포를 마이크로플레이트 홀(microplate hole)마다 10,000개의 세포가 들어가도록 접종한 후 배양하였다. 각 홀마다 ³H(트리튬)으로 방사선표지(radiolabelling)된 테스토스테론을 0.1.mμ.Ci 첨가한 후에 배양하여 섬유아세포가 이를 이용하는지 측정하였다. 실시예 1에서 수득한 물개구리밥 추출물이 들어가지 않은 것을 대조군으로 삼았다. 24시간 배양 후 상등액을 얻고 에틸아세테이트(ethyl acetate)-사이클로헥산(cyclohexane) 1:1 추출용매 1㎖로 스테로이드(steroids)를 얻는다. 얻어진 스테로이드를 박막크로마토그래피 판에 올려놓고 클로로포름/메탄올 혼합액 98/2(v/v)로 전개시킨다. 테스토스테론과 디하이드로테스토스테론에 해당하는 점의 방사활성을 덴시토미터를 이용하여 측정하여 전환율을 계산하고, 그 결과를 대조군(추출물을 첨가하지 않았을 때의 전환율)과 비교하여 하기 수학식 5에 의해 5 알파-리덕타아제 저해능을 평가하였다.

저해능(%)=[A-B]/[A] × 100

A=테스토스테론에서 다이하이드로테스토스테론으로의 전환율(추출물 미첨가시)

B=테스토스테론에서 다이하이드로테스토스테론으로의 전환율(추출물 첨가시)

실험결과 물개구리밥 추출물은 5알파-리덕타아제 저해효과가 있음을 알 수 있다(표 8).

물개구리밥 추출물 농도(%)	1	0.1	0.05	0.025	0.01	0.005	0.0025
저해율(%)	100.0	97.5	92.1	88.7	72.4	63.3	42.3

실시예 11: 모발성장 효과 시험

본 실시예에서는 실시예 1에서 수득한 물개구리밥 추출물 2중량%를 함유하는 30% 함수 에탄올(ethanol) 용액을 제조하여 시험에 사용하였다. 모발성장 효과 시험은 마우스(ICR) 생후 47~53일인 것을 사용하여 등 부위 털을 제거하고 등 부위가 깨끗한 것을 골라 물질군마다 10마리를 사용하여 다음날부터 매일 실시예의 시험물질을 개체당 100㎖씩 도포하였다. 시간 경과에 따른 모발의 길이 및 모발 성장 정도를 모 제거 후 복원 정도에 따라 점수를 0에서 2까지 부가하여 각각 비교하였다. 모발성장 정도를 비교하기 위하여, 대조군으로는 30% 알코올 용액을 각 개체에 도포하여 성장 상태를 관찰하였다.

실험결과, 물개구리밥 추출물이 우수한 모발성장 촉진 효과가 있음을 알 수 있다(표 9).

경과일수/시료	5	10	15
물개구리밥 추출물	0.16±0.02	0.72±0.13	1.48±0.59
대조군	0.08±0.03	0.29±0.09	0.97±0.44

실시예 12 및 비교예 1

본 실시예에서는 실시예 1에서 수득한 물개구리밥 추출물을 함유한 화장료를 제조하여 사람을 대상으로 피부 탄력 개선 효과 및 주름 개선 효과를 비교예 1과 비교실험을 행하여 평가하였다.

비교실험에 사용된 화장료는 크림형태이고, 그 조성은 표 10에 나타낸 바와 같다. 우선 표 10에 기록되어 있는 나)상을 가열하여 70℃에 보존한다. 이것에 가)상을 가하여 예비유화 후 호모믹서로 균일하게 유화하고 다음에 서서히 냉각하여 크림(실시예 12, 비교예 1)을 제조한다. 실험자(20세-35세의 여성) 20명을 대상으로 얼굴 오른쪽 부위에는 실시예 12에서 제조된 크림을 얼굴 왼쪽 부위에는 비교예 1에서 제조된 크림을 각각 1일 2회씩 연속 2개월간 도포하였다.

실험완료 후 피부 탄력 개선 효과는 제품 사용 전과 2개월간 사용 후에 피부탄력측정기(cutometer SEM 575, C+K Electronic Co., Germany)를 이용하여 측정하였다. 실험결과는 하기 표 11에 Cutometer SEM 575의 △R7값으로 기재하였는데 R7값은 피부 점탄성(viscoelasticity)의 성질을 나타낸다. 표 11에서 나타난 바와 같이 물개구리밥 추출물을 함유한 크림을 도포한 실험자의 피부 탄력개선 효과가 우수함을 알 수 있다.

실시예 12			비교예 1
가) 상	스테아릴 알콜	8	8
	스테아린산	2	2
	스테아린산 콜레스테롤	2	2
	스쿠알란	4	4
	2-옥틸도데실알콜	6	6
	폴리옥시에틸렌(25몰부가)알콜에스테르	3	3
	글리세릴모노스테아린산아스테르	2	2
나) 상	물개구리밥 추출물	1	-
	프로필렌글리콜	5	5
	정제수	잔량	잔량

주) 단위: 중량%

실험제품	피부탄력효과(△R7)
실시예 12	0.31
비교예 1	0.14

n=20, p＜0.05

실험자(20세-35세의 여성) 20명을 대상으로 얼굴 오른쪽 부위에는 실시예 12에서 제조된 크림을 얼굴 왼쪽 부위에는 비교예 1에서 제조된 크림을 각각 1일 2회씩 연속 2개월간 도포하였다.

실험완료 후 피부 주름 개선 효과는 제품 사용 전과 2개월간 사용 후에 피부의 주름개선효과를 알아보기 위하여 실리콘 재질의 모사판(replica)을 제작하여 지정 부위의 주름의 상태를 화상분석기인 비지오미터(visiometer: SV60, C+K Electronic Co., Germany)로 측정하였다. 그 결과를 하기 표 12에서 나타내었으며, 이 결과는 2개월 후 각각의 파라미터(parameter) 값에서 2개월 전 파라미터 값을 뺀 것의 평균을 나타낸 것이다. 즉, 이 값이 음수가 나올수록 주름 개선 효과가 높다는 것을 의미한다. 따라서 표 12에서 나타나듯 물개구리밥 추출물을 함유한 실시예 12의 피부 주름 개선 효과가 크게 증진되었음을 확인할 수 있었다.

실험제품	R1	R2	R3
실시예 12	-0.27	-0.21	-0.10
비교예 1	-0.12	-0.10	-0.03

R1: 주름 등고선의 최고치와 최저치의 차이값

R2: 주름 등고선을 임의로 5칸씩 나눈 후 그 중 R1값들의 평균

R3: 5개씩 나눈 R1값 중 최고치

이하에 그 외의 실시예를 나타내었다. 즉, 실시예 1에서 수득한 물개구리밥 추출물을 함유한 화장수, 유액 및 미용액을 실시예 13 내지 15에서 제조하였다.

실시예 13: 물개구리밥 추출물을 함유한 화장수의 제조

95% 에탄올 8g에 폴리피로리돈 0.05g, 올레일알콜 0.1g, 폴리옥시에틸렌모노올레이트 0.2g, 향료 0.2g, 파라옥시안식향산메틸에스테르 0.1g, 소량의 산화방지제, 소량의 색소를 혼합 용해하였다. 실시예 1에서 수득한 물개구리밥 추출물 0.05g, 글리세린 5g을 정제수 85.33g에 용해한 것에 상기 혼합액을 첨가한 후 교반하여 피부개선효과가 있는 화장수를 얻었다.

실시예 14: 물개구리밥 추출물을 함유한 유액의 제조

세틸알콜 1.2g, 스쿠알란 10g, 바세린 2g, 파라옥시안식향산에틸에스테르 0.2g, 글리세린모노에스테아레이드 1g, 폴리옥시에틸렌(20몰부가)모노올레이트 1g 및 향료 0.1g을 70℃에서 가열 혼합용해하고, 실시예 1에서 수득한 물개구리밥 추출물 0.5g, 디프로필렌글리콜 5g, 폴리에틸렌글리콜-1500 2g, 트리에탄올아민 0.2g, 정제수 76.2g을 75℃로 가열해서 용해하였다. 양자를 혼합하여 유화시킨 후 냉각하여 수중유(O/W)형의 피부개선효과가 있는 유액을 얻었다.

실시예 15: 물개구리밥 추출물을 함유한 미용액의 제조

95% 에틸알콜 5g에 폴리옥시에틸렌솔비탄모노올레이트 1.2g, 키툴로오즈 0.3g, 히아루론산나트륨 0.2g, 비타민 E-아세테이트 0.2g, 감초산 나트륨 0.2g, 파라옥시안식향산에틸에스테르 0.1g, 실시예 1에서 수득한 물개구리밥 추출물 1g 및 적량의 색소를 혼합하여 피부개선효과가 있는 미용액을 얻었다.

상기 실시예 13 내지 15에서 얻어진, 물개구리밥 추출물을 함유한 화장수, 유액 및 미용액은 활성산소 소거효과, 티로시나제 활성 억제효과와 멜라닌 생합성 억제효과로 인한 미백 효과, 피부 주름의 개선효과, 5 알파-리덕타아제 억제효과로 인한 여드름방지효과 및 탈모방지 및 육모 효과 등 피부개선에 우수한 효과를 나타내었다.

Claims (6)

1. 물개구리밥 추출물을 함유하는 화장료 조성물.
2. 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부 주름개선 효과를 나타내는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
3. 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부 탄력개선 효과를 나타내는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
4. 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부 미백 기능을 나타내는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
5. 삭제
6. 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 탈모 방지 및 육모 효과를 나타내는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.