KR101606773B1 - 생약재 혼합 추출물을 포함하는 위장질환의 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents
생약재 혼합 추출물을 포함하는 위장질환의 예방 또는 치료용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 망초 및 북시호의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 위장질환의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 망초 및 북시호의 혼합 추출물은 위 점막 부위의 보호 효과 및 위 궤양 억제 효과가 우수하여, 위장질환의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
Description
본 발명은 망초 및 북시호의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 위장질환의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
위는 식도를 통하여 들어온 음식물을 저장하고 소화되기 쉽게 잘게 부수며, 십이지장으로 음식물을 보내는 것을 조절하여 췌장효소의 분비와 조화를 이루어 효율적인 소화와 흡수가 되도록 하는 장기이다. 위는 음식물이 들어오면 이를 소화시키기 위해 강한 산인 위산을 분비하는데, 이때 점막보호층이 위산에 의해 위 점막이 손상 받지 않도록 작용한다.
사람의 위장관계 기능에 악영향을 미치는 요인은 그 성질이 극히 다양하다. 이와 같은 장해는 상부 위장관, 하부 위장관 또는 두 부분 모두에서 발생할 수 있으며, 유전적, 생리학적, 환경적 및 정신적 요인을 포함하여 광범위한 위장 장애 요인이 있다. 상부 위 장관의 만성 질환 중에는 위염 및 위궤양이 포함되어 있으며, 여러 종류의 원인에 의해 위산의 분비가 항진되거나 위 점막 보호층이 손상되었을 때 염증이 생기게 된다. 이 염증성 병변이 위 점막에 한정되어 있을 때를 위염 (gastritis), 위 점막을 뚫고 점막하 조직과 근육층까지 궤양을 형성했을 때를 위궤양(gastric ulcer)이라 한다. 또한 십이지장에서의 궤양을 십이지장궤양(duodenal ulcer)이라고 하며, 위궤양과 십이지장궤양을 소화성 궤양(peptic ulcer)으로 통칭하고 있다.
위염 및 소화성 궤양의 주요 증상으로는 복통, 속쓰림, 더부룩함, 소화불량, 트림, 오심, 구토, 출혈 등이 있다. 이 중 가장 고통스러운 것은 복통으로 그 부위가 명치부위, 심와부와 우측 상복부이다.
위장질환의 원인은 다양하며, 이는 크게 위 점막층의 손상을 야기하는 물리적 및 화학적 공격인자와 이들로부터 위 점막 보호층을 방어하고 위 기능의 항상성을 유지하도록 작용하는 생체 내 방어인자의 불균형에 기인한다. 대표적인 공격인자로는 스트레스, 알코올, 위산, 담배, 아스피린과 같은 진통소염제, 스테로이드 제제, 자극적인 음식, 영양결핍, 헬리코박터 파일로리균의 감염 등이 있으며, 방어기전으로는 활성 산소종(reactive oxygen species, ROS)의 증가에 대한 항산화력의 약화, 위 점막을 보호하는 점액, 프로스타글란딘(prostaglandin)의 생성 저하 및 조직 재생능력, 혈행 개선능력의 감소가 병인과 밀접하게 관련된다. 상기 요인으로 인해 위 점막층이 손상되었을 때 미란, 발적, 출혈, 부종을 동반한 염증이 발생하게 되며, 손상이 심하여 위 점막을 뚫고 점막 하단 및 근육층까지 손상이 확대된 경우 위궤양으로 발전하게 된다. 또한 상기 요인에 의해 십이지장 점막이 손상되어 가장 표면에 있는 점막층보다 깊이 패이면서 점막근층 이상으로 손상이 진행되면 십이지장 궤양이 발생한다.
위염 또는 위궤양을 유발하는 인자들 중 특히 육체적 및 정신적 스트레스에 의한 위 점막의 급성 손상은 주로 시상 하부에 변화를 일으켜 위 점막의 미세순환 장애(microcirculary disturbance), 혈류량 감소 및 그로 인한 저혈압을 야기함으로써 유발된다. 허혈 부위에 혈액이 재공급되는 허혈성 재관류(ischemia reperfusion)에 의한 손상 및 이에 동반한 호중구의 침윤은 위 점막 조직 및 호중구 내에서 활성 산소종의 생성 및 잔틴-잔틴 옥시다아제(xanthine-xanthine oxidase) 시스템을 유도한다(Microcirc. Endothelium Lymphatics, 1991. 7:133-158). 결과적으로, 다량으로 생성된 활성산소 및 하이드록시 활성기가 위 조직 내 산소 장애를 일으킴으로써, 위 점막의 방어체계를 약화시키고, 위 상피세포에 침윤된 호중구가 위 조직에 미란, 궤양 등을 유발하는 위험인자로 작용한다.
아스피린 등과 같은 비스테로이드성 항염증제 또한 위 점막에 산화적 스트레스를 지속적으로 가하거나 생체 내 대사에 의해 산화적 라디칼을 형성하여 위궤양, 위염 및 위출혈을 유발시킨다. 또한, 생체실험에서 알코올에 의한 위 점막 세포의 손상은 산화적 스트레스가 주범이며(Hiraishi 등, 1991), 위 상피세포 내의 항산화 효소가 알코올에 의한 점막세포의 손상을 억제한다는 것이 보고된 바 있다 (Hiraishi 등, 1999). 헬리코박터 파일로리균에 기인한 위궤양의 경우에도, 세균의 점착에 대한 반응으로 분비된 인터루킨-8이 호중구를 활성화시켜 활성 산소 및 탈과립을 유발함으로써 활성 산소에 의한 점막 장애가 유발된다. 이와 같이, 다양한 공격 인자에 의한 위 점막 손상이 산화성 스트레스와 관련되며, 위 점막 세포의 항산화능 증대는 이러한 손상에 대한 주된 방어 기전으로 작용한다.
위 점막 조직을 구성하는 프로스타글란딘은 COX(cyclooxygenase) 효소 인자에 의해 합성되는 물질로서, 위산 분비를 억제하고 위 점액 분비와 위장 점막 세포의 성장을 촉진함으로써 위장의 항상성을 유지하는 역할을 한다. 스트레스나 알코올, 아스피린과 같은 비스테로이드성 소염제(NSAIDs)에 의한 프로스타글란딘의 합성 또는 분비의 감소는 위 점액질의 분비를 감소시키고, 상피세포의 재생을 둔화시키는 등 점막의 항염증 기능을 약화시킴으로써 위장관 내 독성을 유발하는 기전 중 하나로 알려져 있다 (J. Physiol. Pharmacol. 2005. 56 Suppl 5:33-55).
현재 대표적인 위염 및 위궤양 치료제는 위산 분비 억제의 효능을 지닌 H2 안타고니스트 및 프로톤 펌프 저해제(proton pump inhibitor)가 있으며, 이들은 임상에서 우수한 항궤양 효과가 입증되었다. 하지만 이러한 속효성의 위산분비 억제제들은 투약 종료 후 높은 재발률이 문제되며 (Drug Intell Clin Pharm 21: 493, 1987, Gut 30: 449, 1989 Yale J Biol Med 65: 649, 1992), 무기물질 투여에 의한 변비, 설사, 대사성 알칼로시스, 요로 결석증과 같은 부작용이 보고되고 있다. 따라서 위염 유발 인자의 재공격에 저항할 수 있도록 점막 조직의 기능을 정상화하고 재생을 촉진하는 효능을 지닌 점막 보호제는 위염 치료제의 중요한 부분이다. 이와 같은 위 점막의 보호는 상기 언급한 바와 같이 위장관내 허혈성 스트레스에 대한 저항능력의 향상 및 프로스타글란딘 생성 증가와 같은 방어인자의 강화를 통해 달성될 수 있다. 현재 위 점막 보호제로서 레바미파이드(rebamipide), 소팔콘(sofalcone) 등의 약물이 개발되어 사용되고 있으나, 일반적으로 속효성이 적고 복용량이 많으며, 비교적 장기간 복용해야 하는 단점이 있어 개선된 약물 개발이 필요하다.
한편, 망초는 학명이 "Erigeron Canadensis .L" 이며, 국화과의 두해살이풀로 잔꽃풀이라고도 한다. 꽃은 7~9월에 피며, 잎 및 줄기를 약재나 식용으로 사용하는데, 약재로는 꽃이 피기 전 (6월 중순 이전) 채취한 잎이 모두 사용 가능하며, 식용으로는 꽃이 피기 전의 어린 망초(잎 및 줄기 포함)를 사용하고 있다. 6월 중순 이후에 채취한 망초 (잎 및 줄기 포함)를 복용 시에는 위부팽만감, 트림 등의 부작용이 있어 사용 불가하다 또한, 망초의 전초 (꽃)는 호흡기 질환의 알레르기를 유발하여 사용이 불가하다.
또한, 북시호는 학명이 “Bupleurum chinense DC”이며, 미나리과의 여러해살이풀로, 중국산 시호이다. 북시호의 뿌리에 사포닌과 지방유 등이 들어 있어 한방에서 약재로 쓴다. 산지에 따라 효과에 다소 차이가 있는데, 이는 토양, 기후 등 생약의 재배환경에 따른 차이로 생각된다.
상기한 바와 같이, 망초 및 북시호는 안전한 생약재로서 한방에서 약재로 많이 사용되고 있으나, 망초 및 북시호의 혼합 생약재의 위염, 소화성 궤양 등의 위장질환의 예방 또는 치료 효과에 대해서는 아직까지 알려져 있지 않으며, 이에 대한 연구도 전무한 상태이다.
이에 본 발명자들은 생체 내 부작용이 없어 장기간 사용할 수 있으며, 위장 질환의 예방 또는 치료 효과가 있는 새로운 생약재를 찾기 위하여 연구를 계속한 결과, 망초 및 북시호의 혼합 추출물이 위 점막 부위의 보호 효과 및 위 궤양 억제 효과가 우수함을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 망초 및 북시호의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 위장질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 망초 및 북시호의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 위장질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 망초 및 북시호의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 위장질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한 본 발명은 망초 및 북시호의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 위장질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 망초 및 북시호의 혼합 추출물은 위 점막 부위의 보호 효과 및 위 궤양 억제 효과가 우수하여, 위장질환의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 망초와 개망초를 비교한 도이다 (좌 : 망초, 우 : 개망초).
도 2는 본 발명의 망초 및 북시호의 혼합 추출물의 세포 독성을 나타낸 도이다.
도 3은 본 발명의 망초 및 북시호의 혼합 추출물의 DPPH 소거능을 나타낸 도이다.
도 4 및 도 5는 본 발명의 망초 및 북시호의 혼합 추출물의 세포 내 ROS 생성 억제 활성을 나타낸 도이다.
도 6은 본 발명의 망초 및 북시호의 혼합 추출물이 IL-6 생성에 미치는 영향을 나타낸 도이다.
도 7은 본 발명의 망초 및 북시호의 혼합 추출물이 MCP-1 생성에 미치는 영향을 나타낸 도이다.
도 8은 본 발명의 망초 및 북시호의 혼합 추출물이 TNF-알파(TNF-α) 생성에 미치는 영향을 나타낸 도이다.
도 9는 본 발명의 망초 및 북시호의 혼합 추출물의 위장질환 치료 효과를 확인하기 위한 동물실험에 이용된 마우스의 위를 나타낸 도이다.
도 10은 본 발명의 망초 및 북시호의 혼합 추출물의 위장질환 치료 효과를 확인하기 위한 동물실험에서 마우스의 위를 H&E 염색하여 나타낸 도이다.
도 2는 본 발명의 망초 및 북시호의 혼합 추출물의 세포 독성을 나타낸 도이다.
도 3은 본 발명의 망초 및 북시호의 혼합 추출물의 DPPH 소거능을 나타낸 도이다.
도 4 및 도 5는 본 발명의 망초 및 북시호의 혼합 추출물의 세포 내 ROS 생성 억제 활성을 나타낸 도이다.
도 6은 본 발명의 망초 및 북시호의 혼합 추출물이 IL-6 생성에 미치는 영향을 나타낸 도이다.
도 7은 본 발명의 망초 및 북시호의 혼합 추출물이 MCP-1 생성에 미치는 영향을 나타낸 도이다.
도 8은 본 발명의 망초 및 북시호의 혼합 추출물이 TNF-알파(TNF-α) 생성에 미치는 영향을 나타낸 도이다.
도 9는 본 발명의 망초 및 북시호의 혼합 추출물의 위장질환 치료 효과를 확인하기 위한 동물실험에 이용된 마우스의 위를 나타낸 도이다.
도 10은 본 발명의 망초 및 북시호의 혼합 추출물의 위장질환 치료 효과를 확인하기 위한 동물실험에서 마우스의 위를 H&E 염색하여 나타낸 도이다.
이하 본 발명에 대하여 보다 상세히 설명한다.
본 발명은 망초 및 북시호의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 위장질환의 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.
상기 조성물은 약학적 조성물 또는 식품 조성물의 형태로 제공될 수 있다.
본 발명의 망초 및 북시호의 혼합 추출물은 하기와 같이 수득될 수 있다.
먼저, 망초 및 북시호를 물로 세척하여 이물질을 제거한 후 그늘에서 건조하고 분쇄한다. 망초 및 북시호는 재배한 것 또는 시판되는 것 등을 제한 없이 사용할 수 있다. 분쇄된 망초 분말 100 중량부에 대하여 북시호 분말 5 내지 15 중량부를 혼합한 후, 적당한 양의 용매를 첨가하여 완전히 침지되도록 한다. 망초 및 북시호의 혼합 분말은 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 또는 이들의 혼합용매로부터 선택된 용매를 이용하여 추출하며, 바람직하게는 에탄올로 추출한다. 추출 시 실온에서 함침하거나 가온할 수 있다. 상기 추출액을 여과하고, 농축하여 최종 추출물을 수득한다.
본 발명의 조성물에서, 상기 망초 및 북시호는 망초 100 중량부에 대하여 북시호 5 내지 15 중량부로 혼합하는 것이 바람직하다. 상기 혼합비율의 범위를 벗어나는 경우에는 망초 또는 북시호 추출물을 단독으로 사용한 경우와 비교할 때 위장질환의 치료 효과 면에서 큰 차이가 없으며, 약효 효능이 떨어지고, 부작용의 우려가 있다.
본 발명에서 망초 (Erigeron Canadensis .L)는 개망초 (Erigeron annuus (L.) PERS.)와는 상이한 종으로, 망초 대신 개망초를 이용할 경우 위장질환의 치료 효과가 낮아 부적합하다. 망초와 개망초의 외관 비교를 도 1에 나타내었다.
본 발명에서 북시호 (Bupleurum chinense DC)는 중국산 시호를 의미하는 것으로, 국내산 시호(Bupleurum falcatum L.)와는 상이한 종이다. 북시호 대신 시호를 이용할 경우 위장질환의 치료 효과가 낮아 부적합하다.
본 명세서에서 용어 "위장질환"은 그 발생 원인 및 기전과 무관하게 위 점막의 손상을 동반하거나, 손상을 야기할 가능성이 있는 모든 질환 및 병태를 포함하는 광범위한 의미로 사용된다. 상기 위장관 질환은 급성 위염, 만성 활동성 위염, 만성 위축성 위염과 같은 만성 위염, 십이지장염, 위 궤양, 십이지장 궤양, 위 천공, 위 출혈, 비스테로이드성 항염증 약물(NSAID)과 연관된 소화 장애, 비궤양성 소화불량증, 위 식도 역류 질환 (역류성 식도염), 급성 상부 위장 출혈, 스트레스 궤양화, 헬리코박터 파일로리 감염, 조린거-엘리슨 증후군 (Zollinger-Ellison syndrome, ZES), 베르너 증후군 (Werner's syndrome), 및 전신 비만세포증 및 상기 질환들로 인한 위 점막의 미란, 출혈, 발적 및 부종과 같은 증상을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 망초 및 북시호의 혼합 추출물을 포함하는 조성물의 효능은 위 점막의 보호 효과에 기초하므로, 특정한 원인 또는 기전으로 인한 위장질환에 국한되지 않는다. 이에 따라 상기 질환은 예를 들면, 알코올, 육체적 및 정신적 스트레스, 산화적 스트레스, 위산, 비스테로이드성 항염증 약물, 스테로이드 제제, 담배, 자극적인 음식, 헬리코박터 파일로리의 감염을 포함한, 다양한 원인 및 기전에 의해 발병한 것일 수 있다.
또한 본 발명의 조성물은 망초 및 북시호의 혼합 추출물을 단독으로 사용하거나 또는 다른 약학적 활성 화합물과의 결합체나 집합체의 형태로도 사용할 수 있다.
본 발명의 조성물의 유효성분인 망초 및 북시호의 혼합 추출물 외에, 다른 유용한 위장질환치료 약물과 혼합된 복합제제 형태로 제형화하여 투여할 수 있다.
본 발명의 조성물은 위장질환의 예방 또는 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
본 발명의 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 본 발명에 따른 약학적 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 당해 기술 분야에 알려진 적합한 제제는 문헌(Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA)에 개시되어 있는 것을 사용하는 것이 바람직하다. 본 발명의 약학적 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트, 수크로오스, 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글라이콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글라이콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어 "투여"는 임의의 적절한 방법으로 개체에게 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다.
본 발명의 약학적 조성물은 개체에게 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내(intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 성인의 경우, 본 발명의 조성물은 1회 투여량으로 1 내지 1000 mg/kg(체중)로 포함할 수 있다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 명세서에서 사용되는 "건강 기능성 식품"은 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 의미하며, "기능성"은 인체의 구조 및 기능에 대해 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미한다.
본 발명의 조성물을 식품 조성물로 사용할 경우, 상기 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합양은 사용 목적 (예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조 시에 본 발명의 조성물은 원료에 대하여 15중량 % 이하, 바람직하게는 10 중량 % 이하의 양으로 첨가된다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
본 발명의 식품 조성물은 당해 기술분야에 공지되어 있는 통상적인 건강기능성 식품의 제형으로 제제화될 수 있다. 상기 건강 기능성 식품 조성물은 예를 들어 산제, 과립제, 정제, 캅셀제, 현탁액, 에멀젼, 시럽제, 액제, 엑스제, 차, 젤리, 또는 음료 등으로 제조될 수 있다. 상기 식품학적으로 허용 가능한 보조첨가제로는 제조하고자 하는 제형의 제조에 당해 기술분야에서 사용 가능한 것으로 공지되어 있는 임의의 담체 또는 첨가제가 이용될 수 있다. 상기 외에 본 발명의 조각자 추출물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 착색제 및 증진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다.
본 발명의 건강 기능성 음료 조성물은 필수 성분으로서 상기 망초 및 북시호의 혼합 추출물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며, 통상의 음료와 같이 여러가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어 글루코오스, 프럭토오스 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토오스, 수크로오스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등; 당알코올, 예를 들면 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등을 포함한다. 향미제로서, 천연 향미제, 예를 들어 타우마린, 스테비아 추출물(레바우디오시드A, 글리시르히진 등); 및 합성 향미제, 예를 들어 사카린, 아스파르탐 등을 유리하게 사용할 수 있다.
이하 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예, 실험예 및 제조예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예, 실험예 및 제조예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예, 실험예 및 제조예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
실시예
1. 망초 및
북시호의
혼합 추출물의 제조
5월 중순에 채취하여 말린 망초 (잎 및 줄기 포함) 100g과, 북시호 8 ~ 13g을 각각 분말화한 후 혼합하였다. 상기 망초 및 북시호의 혼합 분말 3g에 70% 에탄올 100 mL를 넣은 후, 60분간 3회 초음파 추출하였다. 상기 추출물을 5,000 rpm에서 10분간 원심분리하고, 상층액을 분리하여 0.45 μm 멤브레인 필터로 여과하였다. 상기 여과액을 동결 건조하여 망초 (잎 및 줄기 포함) 및 북시호의 혼합 추출물을 제조하였다.
실험예
1. 세포 독성 확인
상기 실시예 1에서 제조한 망초 및 북시호의 혼합 추출물의 세포 독성을 확인하기 위하여, 하기와 같은 실험을 수행하였다. 보다 구체적으로는, Raw 264.7 세포를 이용하였으며, 상기 세포를 96 웰 플레이트에 104 cells/웰의 농도로 분주하고, 24시간 동안 배양(37℃, 5% CO2)하였다. 상기 세포에 망초 및 북시호의 혼합 추출물을 각각 100, 200, 300, 400㎍/㎖의 농도로 처리하고, 24시간 동안 배양(37℃, 5% CO2)하였다. 이후, 각 웰에 10㎕의 WST-1 (2-[4-iodophenyl]-3-[4-nitrophenyl]-5-[2,4-disulfophenyl]-2H-tetrazolium, monosodium salt) 용액을 첨가한 후 배양기 (37℃, 5% CO2)에서 30분간 반응시킨 후, 450nm에서 흡광도의 변화를 측정하였다. 시료를 처리하지 않은 정상군에 대한 세포 생존율을 백분율로 표시하였다. 그 결과를 표 1 및 도 2에 나타내었다.
실험군 | 백분율 (%) |
정상군 | 100 |
실험군 1 (망초 및 북시호의 혼합 추출물 100㎍/㎖) | 95 |
실험군 2 (망초 및 북시호의 혼합 추출물 200㎍/㎖) | 91 |
실험군 3 (망초 및 북시호의 혼합 추출물 300㎍/㎖) | 95 |
실험군 4 (망초 및 북시호의 혼합 추출물 400㎍/㎖) | 87 |
상기 표 1 및 도 2에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 망초 및 북시호의 혼합 추출물은 유의한 세포 독성이 없음을 확인하였다.
실험예
2.
DPPH
소거능
측정
상기 실시예 1에서 제조한 망초 및 북시호의 혼합 추출물의 항산화 효능을 확인하기 위하여, DPPH 소거능을 확인하기 위한 실험을 수행하였다. 보다 구체적으로는, 에탄올에 용해시킨 0.2mM의 DPPH 용액 150㎕와 다양한 농도의 망초 및 북시호의 혼합 추출물 (25, 50, 100, 200, 400 또는 800㎍/㎖) 100㎕ 를 각각 혼합하고, 37℃에서 30분간 반응시켰다. 이 후, 517nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조군은 시료 대신 증류수를 처리하였으며, DPPH 용액 대신 에탄올을 처리하여 보정값을 얻었다. 자유라디칼 소거율은 하기 수학식 1에 따라 계산하였으며, 자유라디칼을 50% 소거할 수 있는 농도(IC50)로 나타내었다. 그 결과를 도 3에 나타내었다.
[수학식 1]
도 3에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 망초 및 북시호의 혼합 추출물은 농도에 비례하는 DPPH 소거 활성을 가지고 있어, 우수한 항산화 효능이 있음을 확인하였다.
실험예
3. 세포 내
ROS
생성 측정
상기 실시예 1에서 제조한 망초 및 북시호의 혼합 추출물의 항산화 효능을 확인하기 위하여, 세포 내 ROS(reactive oxygen speies)의 생성을 확인하기 위한 실험을 수행하였다. 보다 구체적으로는, 48 웰 플레이트에 Raw 264.7 세포를 2×105/웰의 농도가 되게 분주하고, 24시간 동안 배양하였다. 상기 세포에 LPS(Lipopolysaccharide) 및 다양한 농도의 망초 및 북시호 혼합 추출물 (100, 200 또는 400 ㎍/㎖)을 첨가한 후, 24시간 동안 배양하고, 1,200 rpm에서 5분간 원심분리 하였다. 원심분리 후 모은 세포를 차가운 PBS로 2회 세척한 후 DCF-DA(2′,7′-dichlorofluorescin diacetate) 10 μM을 첨가하고, 15분 동안 빛이 차단된 상온에서 염색하였다. 염색 후 차가운 PBS를 넣고 1,200 rpm에서 5분간 원심분리한 후, 상층액을 제거하고 다시 PBS 400㎕를 첨가하였다. 이를 유세포 분석기 (Flow cytometer, BECTON Dickinson, Franklin Lakes, NJ USA)를 이용하여 형광강도의 세기를 측정하였다. 그 결과를 표 2, 도 4및 도 5에 나타내었다.
실험군 | 백분율 (%) |
정상군 | 13 |
대조군 (LPS 만 처리) | 100 |
실험군 1 (망초 및 북시호의 혼합 추출물 100㎍/㎖) | 76 |
실험군 2 (망초 및 북시호의 혼합 추출물 200㎍/㎖) | 66 |
실험군 3 (망초 및 북시호의 혼합 추출물 400㎍/㎖) | 57 |
표 2, 도 4 및 도 5에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 망초 및 북시호의 혼합 추출물은 세포 내 ROS의 생성을 억제하는 활성을 가지고 있어, 우수한 항산화 효능이 있음을 확인하였다.
실험예
4. 사이토카인 생성 측정
상기 실시예 1에서 제조한 망초 및 북시호의 혼합 추출물의 항염증 효능을 확인하기 위하여, 염증 관련 사이토카인의 생성을 확인하기 위한 실험을 수행하였다. 보다 구체적으로는, EOL-1세포를 5X105cell/㎖의 농도로 24 웰 플레이트에 분주하고, 24시간 동안 배양하였다. 상기 세포에 다양한 농도의 망초 및 북시호 혼합 추출물 (1 또는 10 ㎍/㎖)을 처리하였다. 4시간 후 PMA(Phorbol myristate acetage) 및 칼슘 이오노포어 (calcium ionophore) A23187을 각각 50ng/㎖의 농도로 처리하고, 24시간 동안 배양하였다. 이후, 배양액에 함유된 염증관련 사이토카인인 IL-6(Interleukin 6), MCP-1(monocyte chemoattractant protein-1), TNF-알파(Tumor Necrosis Factor-α)의 농도를 주문 제작한 3-plex cytokine Milliplex panel을 이용하여 측정하였다. 분석은 Milliplex analyst를 통해 이루어졌다. IL-6, MCP-1 및 TNF-알파의 농도를 각각 도 6 내지 8에 나타내었다.
도 6 내지 도 8에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 망초 및 북시호의 혼합 추출물은 LPS에 의해 증가된 사이토카인의 생성을 감소시키는 활성을 가지고 있어, 우수한 항염증 효능이 있음을 확인하였다.
실험예
5. 위장질환 치료 효과 검증
상기 실시예 1에서 제조한 망초 및 북시호의 혼합 추출물의 위장질환 치료 효능을 확인하기 위하여, 동물 실험을 수행하였다. 실험 동물로는4주령의 수컷 ICR 마우스 ((주)코아텍)를 이용하였으며, 일주일 간의 안정화기간을 거친 다음 실험을 수행하였다. 상기 마우스의 평균 몸무게는 25 g이었으며, 실험 전날 오후 6시부터 실험 당일 오전 9시까지 절식시켰다.
실험은 각 군별로 5마리씩의 마우스를 사용하였으며, 총 6가지 군으로 나누어 실시하였다. 각 시료는 위궤양 유발 한 시간 전에 투여하였으며, 정상군(A)과 위궤양 유발 대조군(B)의 경우에는 시료 대신 물을, 양성대조군(C)에는 위 점막 보호제인 수크랄페이트(Sigma, USA)를 100 mg/kg의 농도로 경구 투여하였다. 실험군인 D내지 F군에는 망초 및 북시호의 혼합 추출물을 1, 10 또는 100 mg/kg의 농도로 각각 경구 투여하였다. 수크랄페이트는 0.25% 카복시메틸셀룰로오스나트륨 (sodium carboxymethyl cellulose, Samchun Chemicals, Korea) 용액에 현탁시켜 사용하였으며, 망초 및 북시호의 혼합 추출물은 물에 현탁시켜 사용하였다. 시료 투여 한 시간 뒤, 150 mM 염산/에탄올을 각 마우스 당 0.2 mL씩 경구 투여하여 위궤양을 유발하였다. 한 시간 뒤 이산화탄소로 질식사시킨 다음 해부하였다.
마우스의 위를 대만곡(greater curvature) 방향으로 절개하고, 위 내부를 식염수로 씻어낸 후, 10% 포르말린 (neutral buffered formalin, Sigma, USA)용액에 담가 12시간 동안 고정시켰다. 고정된 위 조직을 파라핀으로 고정시킨 후, 8 μm 두께로 절단하여 위의 종단면 절편을 제작하였다. 절편에서 파라핀을 제거한 후 헤마톡실린 (heamatoxylin)과 에오신(eosin)을 사용하여 H&E 염색을 수행하고, 이를 현미경 하에서 관찰하였다. Isolution lite 프로그램을 사용하여 위 손상 부위의 면적을 측정하였다. 그 결과를 표 3, 도 9 및 도 10에 나타내었다.
실험군 | 위궤양발현면적(mm2) | 보호효과(%) |
정상군 (A) | - | - |
위궤양 유발 대조군(B) | 384.3 ± 13.7 | -` |
양성대조군 (수크랄페이트 100 mg/kg) (C) | 60.3 ± 5.5 | 84.3 ± 8.6 |
실험군 1 (망초 및 북시호의 혼합 추출물 1 mg/kg) (D) | 54.6 ± 10.2 | 85.8 ± 8. |
실험군 2 (망초 및 북시호의 혼합 추출물 10 mg/kg) (E) | 50.7 ± 2.0 | 86.8 ± 3.0 |
실험군 3 (망초 및 북시호의 혼합 추출물 100 mg/kg) (F) | 14.6 ± 1.5 | 96.2 ± 2.7 |
표 3, 도 9 및 도 10에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 망초 및 북시호의 혼합 추출물은 1 mg/kg의 낮은 농도에서도 양성대조군으로 사용한 수크랄페이트 100 mg/kg을 투여한 경우와 유사한 위궤양보호효과를 보였으며, 망초 및 북시호의 혼합 추출물을 100 mg/kg의 농도로 투여한 군에서는 약 96%의 위 궤양 보호 효과가 관찰되었다. 특히, 도 10에 나타낸 바와 같이, 위궤양 유발 대조군(B)의 경우 위 점막층의 출혈 정도가 심했으며, 점막하층까지 손상이 발생하였으나, 본 발명의 망초 및 북시호의 혼합 추출물을 투여한 군(D~F)의 경우, 이러한 위 점막층의 출혈 및 손상이 크게 완화되었음을 확인하였다. 따라서, 상기 실험 결과를 통하여 본 발명의 망초 및 북시호의 혼합 추출물은 위 점막 부위의 보호 효과 및 위 궤양 억제 효과가 우수하여, 위장질환의 우수한 치료 효능이 있음을 확인하였다.
이하 본 발명의 상기 조성물을 함유하는 약학적 조성물 및 식품 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
제제예
1 : 약학적 조성물의 제조
1.
산제의
제조
망초 및 북시호의 혼합 추출물 2g
유당 1g
상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
2. 정제의 제조
망초 및 북시호의 혼합 추출물100mg
옥수수전분 100mg
유당 100mg
스테아린산 마그네슘 2mg
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
3. 캡슐제의 제조
망초 및 북시호의 혼합 추출물 100mg
옥수수전분 100mg
유당 100mg
스테아린산 마그네슘 2mg
상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
제제예
2 ; 식품 조성물의 제조
1. 건강기능식품의 제조
망초 및 북시호의 혼합 추출물 100 mg
비타민 혼합물 적량
비타민 A 아세테이트 70 μg
비타민 E 1.0 mg
비타민 B1 0.13 mg
비타민 B2 0.15 mg
비타민 B6 0.5 mg
비타민 B12 0.2 μg
비타민 C 10 mg
비오틴 10 μg
니코틴산아미드 1.7 mg
엽산 50 μg
판토텐산 칼슘 0.5 mg
무기질 혼합물 적량
황산제1철 1.75 mg
산화아연 0.82 mg
탄산마그네슘 25.3 mg
제1인산칼륨 15 mg
제2인산칼슘 55 mg
구연산칼륨 90 mg
탄산칼슘 100 mg
염화마그네슘 24.8 mg
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.
2.
건강음료의
제조
망초 및 북시호의 혼합 추출물 100 mg
비타민 C 15 g
비타민 E(분말) 100 g
젖산철 19.75 g
산화아연 3.5 g
니코틴산아미드 3.5 g
비타민 A 0.2 g
비타민 B1 0.25 g
비타민 B2 0.3g
물 정량
통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85 ℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 l 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.
상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.
Claims (8)
- 망초 100 중량부에 대하여 북시호 5 ~ 15 중량부를 혼합한 망초 및 북시호의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 위염 또는 위궤양의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
- 제 1항에 있어서, 상기 망초는 잎 및 줄기를 포함하는 것을 특징으로 하는, 위염 또는 위궤양의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
- 삭제
- 제 1항에 있어서, 상기 망초 및 북시호의 혼합 추출물은 망초 및 북시호의 혼합 분말을 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 및 이들의 혼합용매로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 용매로 추출된 것을 특징으로 하는, 위염 또는 위궤양의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
- 제 1항에 있어서, 상기 위염 또는 위궤양은 알코올, 육체적 스트레스, 정신적 스트레스, 산화적 스트레스, 위산, 비스테로이드성 항염증 약물, 스테로이드 제제, 담배 및 헬리코박터 파일로리균 감염으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 원인에 의해 유발되는 것을 특징으로 하는, 위염 또는 위궤양의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
- 삭제
- 망초 100 중량부에 대하여 북시호 5 ~ 15 중량부를 혼합한 망초 및 북시호의 혼합 추출물을 유효성분으로 포함하는 위염 또는 위궤양의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
- 삭제
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
PCT/KR2012/002281 WO2012138076A2 (ko) | 2011-04-04 | 2012-03-28 | 생약재 혼합 추출물을 포함하는 위장질환의 예방 또는 치료용 조성물 |
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR1020110030581 | 2011-04-04 | ||
KR1020110030581A KR20110056459A (ko) | 2011-04-04 | 2011-04-04 | 치주질환의 예방 및 개선용 조성물 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
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