KR101151567B1 - 항알레르기 효능을 갖는 복합생약 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 길경(桔梗), 오미자(五味子), 의이인(薏苡仁)의 복합생약 추출물을 함유하는 조성물에 관한 것으로, 상세하게는 본 발명의 복합생약 추출물을 함유하며 항알레르기 효과를 갖는 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 복합생약 추출물은 PGD2, LTC4, IL-6의 발현 억제와 비만세포의 탈과립을 억제함으로써 우수한 항알레르기 효과를 나타내므로 각종 알레르기 관련 질환의 예방 및 치료를 위한 의약품 및 건강 기능 식품으로 이용될 수 있다.

길경, 오미자, 의이인, 항알레르기 효과, 알레르기

Description

항알레르기 효능을 갖는 복합생약 추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물 {Composition comprising the extract of mixed crude drug showing anti-allergic Effect}

본 발명은 길경(桔梗), 오미자(五味子), 의이인(薏苡仁)의 복합생약 추출물을 함유하는 조성물에 관한 것으로, 상세하게는 본 발명의 복합생약 추출물을 함유하며 항알레르기 효과를 갖는 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 오미자 추출물은 PGD2, LTC4, IL-6의 발현 억제와 비만세포의 탈과립을 억제함으로써 우수한 항알레르기 효과를 보였다.

[문헌 1] Murakami, M., Matsumoto, R., Austen, K. F., and Arm, J. P., J. Biol. Chem. 269, 22269, 1994.

[문헌 2] im H. P., Mani I., Iversen L., ZibohV. A., Prostaglandins Leukot. Es-sent. Fatty Acids, 58, 1724, 1998.

[문헌 3] 정보섭, 신민교저, 도해 향약대사전, 영림사, pp.212-213, 1998.

[문헌 4] 정보섭, 신민교저, 도해 향약대사전, 영림사, pp.1089-1090, 1998.

[문헌 5] 정보섭, 신민교저, 도해 향약대사전, 영림사, pp.471-473, 1998.

[문헌 6] Murakami M, Kambe T, Shimbara S, Kudo I., Functional coupling between various phospholipase A2s and cyclooxygenases in immediate and delayed prostanoid biosynthetic pathways. J Biol Chem. 1999 Jan 29;274(5):3103-3115.

[문헌 7] Starnes HF Jr, Pearce MK, Tewari A, Yim JH, Zou JC, Abrams JS. J Immunol. 1990 Dec 15;145(12):4185-91.

[문헌 8] Urade Y, Tanaka T, Eguchi N, Kikuchi M, Kimura H, Toh H, Hayaishi O. J Biol Chem. 1995 Jan 20;270(3):1422-8.

[문헌 9] Wilborn J, Bailie M, Coffey M, Burdick M, Strieter R, Peters-Golden M. J Clin Invest. 1996 Apr 15;97(8):1827-36.

[문헌 10] Jong Keun SON Biol. Pharm. Bull. 28(12) 21812184, 2005.

[문헌 11] Chae HS, Kang OH, Choi JG, Oh YC, Lee YS, Jang HJ, Kim JH, Park H, Jung KY, Sohn DH, Kwon DY. Biol Pharm Bull. 2009 Apr;32(4):553-557.

인체(人體)는 어떤 외래성 물질과 접하게 되면 항원항체반응(抗原抗體反應)에 의하여 생체 내에 급격한 반응 능력의 변화가 생기는데, 이를 알레르기라고 한다. 생체는 이종물질에 대해서는 그 항원(抗原)에 특이적으로 반응하는 항체(抗體)와 림프구를 생산하고 재차 항원과 접하면 여러 가지 면역반응을 일으킨다. 이 면역응답 또는 면역반응은 생체의 자기 보존을 위한 중요한 방어메커니즘의 하나인데, 보통 생체에 대해 보호적으로 작용하지만 때로는 이 메커니즘이 인체에 불리하게 작용하여 장애를 일으키는 경우가 있다.

알레르기 반응은 무해한 항원 즉 알레르겐(allergen)에 반응하여 생성된 IgE 항체를 지닌 개인이 계속하여 동일 알레르겐에 노출되었을 때 일어난다. 알레르겐은 이미 노출된 적이 있는 조직에 존재하는 IgE에 결합할 수 있는 비만세포(mast cell)를 활성화 시켜 알레르기(allergy)의 특징적인 반응들을 연속적으로 일어나게 한다. 경제적으로 낙후된 국가들에서 흔히 발생하는 기생충들에 대한 체내반응이 특징적인 방어면역이며, 선진국에서는 무해한 항원들에 대한 IgE 반응이 우세한데, 이러한 알레르기는 질병의 중요한 원인이 된다. 비록 생명을 위협하는 경우는 드물지만 이러한 이유로 괴로움을 겪고 학교와 직장에서 시간을 낭비하게 된다. 공업화된 사회에서는 알레르기의 의학적 중요성 때문에 IgE-매개 반응들에 대한 병태생리학적 지식이 보다 많이 알려져 있다.

비만세포는 호염구 및 호산구의 기원이 되는 골수성과는 다른 골수성 계에서 유래한다. 비만세포는 매우 특화된 세포로 침입하는 병원체들을 경계하기 위하여 적절히 배치되어 있다. 과립형성을 수반하는 최종분화는 비만세포들이 조직에 도착한 후에 일어난다. 비만세포의 주요 성장인자는 모세포 성장인자(stem cell factor, SCF)인데 이 성장인자는 세포표면 수용체인 c-Kit에 작용한다. c-Kit이 결핍된 마우스는 분화된 비만세포가 부족하며, 비록 IgE를 생성하지만, IgE-매개 염증반응들을 일으킬 수는 없다. 이는 그와 같은 면역반응들이 절대적으로 비만세포에 의존한다는 것을 보여준다 (Murakami, M., Matsumoto, R., Austen, K. F., and Arm, J. P., J. Biol. Chem. 269, 22269, 1994).

비만세포(Mast Cells)는 많은 생리활성 물질들을 생성하므로 알레르기 질환이나 염증 질환연구에 많이 이용되는 세포이다. 그 중 히스타민(Histamine) 이나 세로토닌(Serotonin)은 시클로옥시게나제 (Cyclooxygenase; COX)나 리포옥시게나제(Lipoxygenase; LOX)의 활성화에 의하여 분비되게 되며 COX나 LOX에 의한 프로스타글란딘(Prostaglandins; PGs)과 류코트리엔(Leukotriens; LTs)의 생성에 따른 염증이나 알레르기에 대한 연구는 많이 수행되어져 왔다 (im H. P., Mani I., Iversen L., ZibohV. A., Prostaglandins Leukot. Es-sent. Fatty Acids, 58, 1724, 1998).

의이인(薏苡仁)은 염주(Coix lachryma - jobi L.) 또는 율무(Coix lachryma - jobi var. Mayuen.) 및 동속 근연식물의 종인으로. 열대아시아 원산으로, 알려진 성분으로는 전분 50%, 탄수화물 79.17%, 비타민 B1, 아미노산, 코익솔(coixol), 코익세놀리드(coixenolide) 등의 성분이 알려져 있으며, 혈압강하, 장관운동억제 등 의 효능이 있는 것으로 알려져 있다 (정보섭, 신민교저, 도해 향약대사전, 영림사, pp.212-213, 1998).

길경(桔梗)은 도라지(Platycodin grandiflorum) 및 동속 근연식물의 뿌리로 한국 등에 자생하며, 알려진 성분으로는 사포닌(Saponin) 외에 폴리갈라식 산(Polygalacic acid), 플라코디게닌(Placodigenin), 스피나스테롤(spinasterol), 베툴린(betulin), 이눌린(inulin) 등의 성분이 알려져 있으며, 만성 기침 등에 효능이 있는 것으로 알려져 있다 (정보섭, 신민교저, 도해 향약대사전, 영림사, pp.1089-1090, 1998).

오미자는 오미자나무(Schisandra chinensis) 및 동속 근연식물의 과실로. 한국 일본 중국 등에 자생하며, 알려진 성분으로는 데옥시쉬잔드린(Deoxyschizandrin), 감마 쉬잔드린 (γ-schizandrin), 쉬잔드린 씨(Shizandrin C), 쉬잔드린 에이(Shizandrin A) 즉 쉬잔드린(Schizandrin), 쉬잔드롤 비(schizandrol B), 오미자 에스테르 에이, 에스테르 비 등의 성분이 알려져 있으며, 중추신경계의 흥분 및 기능을 활성화하는 효과, 혈압 강하작용 등의 효능이 있는 것으로 알려져 있다 (정보섭, 신민교저, 도해 향약대사전, 영림사, pp.471-473, 1998).

그러나, 상기 문헌의 어디에도 길경, 오미자, 의이인의 추출물이 알러지 질환에 효과가 있다는 어떠한 기재 또는 교시된 바가 없다.

이에 본 발명자들은 복합생약 추출물이 DPGD2, LTC4, IL-6의 발현 억제와 비만세포의 탈과립을 억제함으로써 우수한 항알레르기 효과를 확인하여 본 발명을 완 성하였다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 길경, 오미자, 의이인의 복합생약 추출물을 유효성분으로 함유하는 알러지 질환의 치료 및 예방용 약학조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 길경, 오미자, 의이인의 복합생약 추출물을 유효성분으로 함유하는 알러지 질환의 예방 및 개선용 건강기능식품을 제공한다.

또한, 본 발명은 알러지 질환 치료 효과를 가지는 길경, 오미자, 의이인의 복합생약 추출물을 유효성분으로 함유하는 경구투여용 피부 보호제 및 피부질환 개선제를 제공한다.

또한, 알러지 질환 치료 효과를 가지는 길경, 오미자, 의이인의 복합생약 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부도포용 피부 보호제 및 피부질환 개선제를 제공한다.

본원에서 정의되는 복합생약 추출물의 길경, 오미자, 의이인은 바람직하게는 한국산, 보다 바람직하게는, 진안군 재배산을 사용함이 바람직하고, 이들의 바람직한 건조중량 배합비는 0.1~10: 0.1~10: 1(w/w), 보다 바람직하게는 0.5~5: 0.5~5: 1(w/w), 보다 더 바람직하게는 0.5~3: 0.5~3: 1(w/w), 가장 바람직하게는 0.5~2: 0.5~2: 1(w/w)의 비로 배합됨을 특징으로 한다.

본원에서 정의되는 상기 추출물은 정제수를 포함한 물, C₁ 내지 C₄의 저급 알콜 또는 이들의 혼합용매, 바람직하게는 물, 에탄올 또는 이들의 혼합용매, 보다 바람직하게는 약 50 내지 90% 물 및 에탄올 혼합용매, 보다 더 바람직하게는, 약 60 내지 80% 물 및 에탄올 혼합용매에 가용한 추출물을 포함한다.

본원에서 정의되는 알러지 질환은 무좀, 완선, 건선, 단순포진/대상포진, 피부건조증, 주부습진, 여드름, 과민증, 알러지성 비염, 천식, 알러지성 결막염, 알러지성 피부염, 아토피성 피부염, 접촉성 피부염, 두드러기, 곤충 알러지, 식품 알러지 또는 약품 알러지, 바람직하게는 알러지성 비염, 천식, 알러지성 피부염, 아토피성 피부염, 접촉성 피부염, 두드러기, 식품 알러지 또는 약품 알러지, 보다 바람직하게는 아토피성 피부염 또는 접촉성 피부염을 포함한다.

이하, 본 발명의 추출물을 수득하는 방법을 상세히 설명한다.

본 발명의 추출물은 하기와 같은 제조공정으로 제조될 수 있다.

예를 들어, 건조시킨 길경, 오미자, 및 의이인을 적당한 배합비로 배합한 배합물 건조 중량의 약 1 내지 50배(w/v), 바람직하게는 약 1 내지 5배(w/v)의 정제수를 포함한 물, C₁ 내지 C₄의 저급 알콜 또는 이들의 혼합용매, 바람직하게는 물, 에탄올 또는 이들의 혼합용매, 보다 바람직하게는 약 50 내지 90% 물 및 에탄올 혼합용매, 보다 더 바람직하게는, 약 60 내지 80% 물 및 에탄올 혼합용매로, 약 0℃ 내지 100℃, 바람직하게는 약 20℃ 내지 80℃, 보다 바람직하게는 약 60℃의 온도에서 약 30분 내지 5시간, 바람직하게는 약 1시간 내지 3시간 동안, 교반추출, 열 수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출 또는 초음파 추출 등의 추출방법, 바람직하게는 환류 냉각 추출 방법으로 추출하는 제 1단계; 제 1단계의 추출액을 여과, 감압 농축 및 동결건조 등의 건조하는 제 2단계를 통하여 본 발명의 추출물을 수득할 수 있다.

본 발명의 복합생약 추출물은 마우스 골수-유래 비만세포(BMMC)를 이용한 IL-분비 억제 활성 실험, PGD2, LTC4 발현 억제 효과실험, 비만세포에서의 탈과립 효과 억제실험 등의 알러지 효과실험을 통하여 탁월한 억제효과를 확인하여, 알러지 질환의 치료 및 예방에 유용함을 확인하였다.

따라서, 본 발명은 상기의 제조방법으로 얻어진 길경, 오미자, 의이인의 복합생약 추출물을 유효성분으로 함유하는 알러지 질환의 예방 및 치료용 약학조성물을 제공한다.

본 발명의 길경, 오미자, 의이인의 복합생약 추출물을 함유하는 알러지 질환의 예방 및 치료를 위한 약학조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 추출물을 0.1 내지 50 중량% 포함한다.

그러나 상기와 같은 조성은 반드시 이에 한정되는 것은 아니고, 환자의 상태 및 질환의 종류 및 진행 정도에 따라 변할 수 있다.

본 발명의 오미자 추출물을 함유하는 약학조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

본 발명의 추출물의 약학적 투여 형태는 이들의 약학적 허용 가능한 염의 형태로도 사용될 수 있고, 또한 단독으로 또는 타약학적 활성 화합물과 결합뿐만 아니라 적당한 집합으로 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 오미자 추출물을 포함하는 약학 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 추출물을 포함하는 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화 할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형 제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 오미자 추출물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 추출물은 1일 0.0001 내지 100㎎/㎏으로, 바람직하게는 0.001 내지 10㎎/㎏으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 추출물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내(intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.

본 발명에 따른 상기 추출물을 함유하는 약학조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 본 발명의 상기 추출물을 함유하는 조성물에 함유될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로 는 락토오즈(lactose), 덱스트로즈, 수크로스(sucrose), 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여용 피부 보호제 및 피부질환 개선제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 피부도포용 피부 보호제 및 피부질환 개선제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 상기 추출물의 사용량은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으나, 0.1 내지 100mg/kg으로, 바람직하게는 1 내지 10mg/kg을 일일 1회 내지 수회 투여할 수 있다. 또한 그 투여량은 투여경로, 질병의 정도, 성별, 체중, 나이 등에 따라서 증감될 수 있다. 따라서 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

상기 약학조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내 주사에 의해 투여될 수 있다.

따라서, 본 발명은 상기의 제조방법으로 얻어진 길경, 오미자, 의이인의 복합생약 추출물을 유효성분으로 함유하는 알러지 질환의 예방 및 개선용 건강기능식품을 제공한다.

본 발명의 추출물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강 기능성 식품류 등이 있다.

또한, 알레르기 관련 질환의 예방 효과를 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다. 이 때, 식품 또는 음료 중의 상기 추출물의 양은 전체 식품 중량의 0.01 내지 15 중량%로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100 ㎖를 기준으로 0.02 내지 5 g, 바람직하게는 0.3 내지 1g의 비율로 가할 수 있다.

본 발명의 건강기능식품은 정제, 캡슐제, 환제, 액제 등의 형태를 포함한다.

본 발명의 건강 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 추출물을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한점이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등의 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등의 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 1 내지 20g, 바람직하게는 약 5 내지 12g이다.

상기 외에 본 발명의 추출물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 추출물은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

본 발명은 상기 추출물을 유효성분으로 함유하는 알러지 질환의 예방 및 개선용 건강기능식품을 제공한다. 이를 첨가할 수 있는 식품으로는, 각종 식품류, 분말, 과립, 정제, 캡슐, 시럽제, 음료, 껌, 차 비타민 복합제, 건강기능성 식품류 등이 있다.

본 발명의 상기 추출물 자체는 독성 및 부작용은 거의 없으므로 예방 목적으 로 장기간 복용 시에도 안심하고 사용할 수 있는 약제이다.

본 발명의 상기 추출물은 알러지 질환의 예방 및 개선을 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다. 이 때, 식품 또는 음료 중의 추출물의 양은 전체 식품 중량의 0.01 내지 15 중량%로 가할 수 있으며, 건강 기능성 음료 조성물은 100㎖를 기준으로 0.02 내지 10g, 바람직하게는 0.3 내지 1g의 비율로 가할 수 있다.

본 발명의 건강 기능성 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 왕겨탄 미세분말을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며, 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등)) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100㎖당 일반적으로 약 1 내지 20g, 바람직하게는 약 5 내지 12g이다.

상기 외에 본 발명의 오미자 추출물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 오미자 추출물은 천연 과일 쥬스 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하지는 않지만 본 발명의 오미자 추출물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

상기에서 설명한 바와 같이, 길경, 오미자, 의이인의 복합생약 추출물 은 PGD2, LTC4, IL-6의 발현 억제와 비만세포의 탈과립을 억제함으로써 우수한 항알레르기 효과를 나타내는바, 각종 알레르기 관련 질환의 예방 및 치료용 약학조성물 및 건강 기능 식품으로 유용하게 이용될 수 있다.

이하, 본 발명을 하기의 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 길경 , 오미자, 의이인의 복합생약 추출물의 제조

진안군 생산자로부터 길경(桔梗), 오미자(五味子), 의이인(薏苡仁)을 구입하 여 음건건조한 다음, 분쇄기로 분쇄하여 분말화하고 이를 표 1과 같은 조성으로 배합한 후에 배합시료 60 g에 70% 에탄올 500 ml를 가한 후 60℃에서 2시간 동안 환류 추출법으로 환류 추출한 다음에 진공여과에 의해 상층액을 회수하였다. 이 과정을 3회 반복하여 상층액을 모은 후, 감압 농축하여 길경(桔梗), 오미자(五味子), 및 의이인(薏苡仁) 에탄올 추출물 8.8 g(수득율 14.67 %)을 수득하여 하기 실험에의 시료로 사용하였다 (이하, “Miingil-E‘이라 함).

미인길(길경, 오미자, 의이인)의 에탄올 추출물(Miingil-E)의 조성

조성 약물명	생약명	용량	기타
길경	Platycodi Radix	20 g	전북 진안산
오미자	Schizandrae Fructus	20 g	전북 진안산
의이인	Cocis Semen	20 g	전북 진안산

참고예 1. 실험동물 준비

6주령 된 Balb/c 마우스를 다물사이언스에서 공급받아 약 1주간 실험실 순화과정을 거친 후 사용하였다. 마우스용 케이지 (220 x 200 x 145 mm)에 5마리씩 수용하였다. 동물실험실의 환경은 온도 21~25℃, 상대습도 45~65%, 환기횟수 12 회/시간, 조명주기 12시간, 조도 150 - 300 lux로 조절되었다. 실험동물용 펠렛(pellet)형 고형사료인 Purina Rat Chow�潁� SCF Co., Ltd. Korea. (Seoul, Korea)로부터 공급받아 급여하였으며, 음수는 멸균정제수를 자유롭게 섭취하도록 하였다.

참고예 2. 통계학적 분석

각각의 실험결과에 대한 분산의 동질성을 비교하기 위해 Dunnet's test(Chae HS, Kang OH, Choi JG, Oh YC, Lee YS, Jang HJ, Kim JH, Park H, Jung KY, Sohn DH, Kwon DY. Biol Pharm Bull. 2009 Apr;32(4):553-557.)를 실시하고, 분산이 동질성을 갖는 경우에, 일원배치분산분석 (one-way analysis of variance, ANOVA)를 실시하여 유의성이 관찰되면 대조군과의 유의적인 차이가 있는 시험군을 알아내기 위해 Dunnett's t-test를 실시하여, 유의차가 5% 미만 (p<0.05)일 때 통계적 유의성이 있는 것으로 판정하였다.

실험예 1. 마우스 골수-유래 비만세포( Mouse Bone Marrow - Derived Mast Cells ; BMMC ) 배양

실시예에서 수득한 추출물의 마우스 골수-유래 비만세포에서의 활성을 확인하기 위하여 문헌에 개시된 방법을 응용하여 하기와 같이 실험하였다 (Murakami M, Kambe T, Shimbara S, Kudo I., Functional coupling between various phospholipase A2s and cyclooxygenases in immediate and delayed prostanoid biosynthetic pathways. J Biol Chem. 1999 Jan 29;274(5):3103-3115).

상기 참고예 1에서 준비한 Balb/cJ 마우스에서 얻은 후, 50% 배양액(RPMI 1640: 2 mM L-glutamine, 0.1 mM nonessential amino acids, antibiotics, 및 10% fetal calf serum을 포함)과 50% WEHI 세포의 배양액을 이용하여 배양한다. 3주 후부터 98% BMMC세포가 만들어 진 것을 본 연구에 사용하였다.

실험예 2. 복합 생약 추출물의 IL -6 분비 억제에 대한 효과

실시예에서 수득한 복합생약 추출물들의 IL-6 분비 억제활성을 확인하기 위하여 문헌에 개시된 방법을 응용하여 하기와 같이 실험하였다(Starnes HF Jr, Pearce MK, Tewari A, Yim JH, Zou JC, Abrams JS. J Immunol. 1990 Dec 15;145(12):4185-91).

상기 실시예 1에서 수득한 복합생약 추출물에 의한 IL-6 분비 억제 효과를 측정하기 위해서, BMMC 세포를 배양 후 배양액에 분비된 IL-6을 정량하기 위해 ELISA kit(BD bioscience, California, USA)을 이용한다. 세포의 배양액을 수확하고 수확한 배양액을 각 well에 100 ㎕ 첨가한 후에 비오틴 콘쥬게이트(biotin conjugate;ELISA kit에 들어있음)를 50 ㎕ 첨가하여 실온에서 90분간 배양한다. 4번에 걸쳐 세척한 후에 Streptavidine-HRP working solution(ELISA kit에 들어있음)을 100 ㎕ 첨가하여 다시 30분간 정치시킨다. 여기에 정지용 용액(stop solution; 2N H₃PO₄)을 가한 후에 ELISA분석을 수행하였다.

BMMC 세포를 배양 0.5시간 후에 복합생약 추출물 시료를 처리하였으며, 0.5 시간 후에 PMA (Phorbol 12-myristate 13-acetate)와 A23187 (Sigma, USA)을 이용하여 자극 하였다. 그 후 6시간을 더 배양하였으며, 배양액만을 분리하여 얻었다.

BMMC 세포를 배양한 0.5 시간 후에 미인길(길경, 오미자, 의이인)의 에탄올 추출물 (Miingil-E)을 0.1 mg/ml로 전처리 하였으며, 0.5 시간 후에 PMA와 A23187을 이용하여 자극 하였다. 그 후 6시간을 더 배양하였으며, 배양액만을 분리하여 얻었다. PMA와 A23187로 자극하였을 때 정상상태의 세포보다 IL-6의 발현량이 증가하였으며 본 발명의 길경, 오미자, 의이인 에탄올 추출물(0.1 mg/ml)을 처리하였을 때 IL-6의 발현량이 감소함을 알 수 있었다 (도 1 참조).

실험예 3. 복합생약 추출물의 PGD2 , LTC4 발현 억제 효과

실시예에서 수득한 복합생약 추출물들의 PGD2, LTC4 발현 억제 활성을 확인하기 위하여 문헌에 개시된 방법을 응용하여 하기와 같이 실험하였다 (Urade Y, Tanaka T, Eguchi N, Kikuchi M, Kimura H, Toh H, Hayaishi O. J Biol Chem. 1995 Jan 20;270(3):1422-8. ,Wilborn J, Bailie M, Coffey M, Burdick M, Strieter R, Peters-Golden M. J Clin Invest. 1996 Apr 15;97(8):1827-36).

상기 실시예 1에서 수득한 복합생약 추출물의 PGD2, 및 LTC4 발현 억제 활성을 확인하기 위하여 BMMC 세포를 배양 후 배양액에서 분비된 PGD2, LTC4 정량하기 위해 EIA Kit (Cayman Chemical, Ann Arbor, MI, U.S.A.)를 이용하였다.

BMMC 세포를 배양 0.5시간 후 미인길(길경, 오미자, 의이인)의 에탄올 추출물(Miingil-E)을 처리하였으며, 0.5 시간 후 PMA와 A23187을 이용하여 자극 하였다. 그 후 6시간을 더 배양하였으며, 배양액만을 분리하여 얻었다. 정상상태의 세포보다 PGD2의 발현량이 증가하였으며 미인길(길경, 오미자, 의이인)의 에탄올 추출물(Miingil-E) (0.1 mg/ml)을 처리하였을 때 PGD2의 발현량이 감소함을 알 수 있었다 (도 2 참조).

세포의 배양액을 수확하고 수확한 배양액을 각 well에 50 ㎕ 첨가한 후 안티세럼(Antiserum; 전부 EIA kit 안에 들어있음)과 트레이서(Tracer;전부 EIA kit 안에 들어있음) 를 50 ㎕ 씩 첨가하여 실온에서 18시간 동안 배양한다. 5번에 걸쳐 세척한 후에 Ellman's solution (전부 EIA kit 안에 들어있음)을 200 ㎕ 첨가하여 다시 90분간 정치시킨다. 그 후 405 nm의 파장으로 흡광도를 측정한다. BMMC 세포를 배양 0.5시간 후에 상기 추출물을 처리하였으며, 0.5 시간 후 PMA와 A23187을 이용하여 자극 하였다. 그 후 6시간을 더 배양하였으며, 배양액만을 분리하여 얻었다.

BMMC 세포를 배양 0.5시간 후, 미인길(길경, 오미자, 의이인)의 에탄올 추출물(Miingil-E)을 처리하였으며, 0.5 시간 후 PMA와 A23187을 이용하여 자극 하였다. 그 후 6시간을 더 배양하였으며, 배양액만을 분리하여 얻었다. 정상상태의 세포보다 LTC4의 발현량이 증가하였으며 미인길(길경, 오미자, 의이인)의 에탄올 추출물(Miingil-E)(0.1 mg/ml)을 처리하였을 때 LTC4의 발현량이 감소함을 알 수 있었다 (도 3 참조).

실험예 4. 복합생약 추출물의 탈과립 억제 효과

실시예에서 수득한 복합생약 추출물들의 탈과립 억제활성을 확인하기 위하여 문헌에 개시된 베타 헥소사미니사아제 어세이(β-Hexosaminisase assay) 방법을 응용하여 하기와 같이 실험하였다 (Jong Keun SON Biol. Pharm. Bull. 28(12) 21812184, 2005).

비만 세포를 배양하여 자극원 (PMA+A23187)을 처리한 후에 p-나이트로페닐-2-아세트아미도-2-데옥시-β-D-글루코피라노사이드 가수분해물(hydrolysis)(N9376; Sigma Chemical Co.)을 기질로 이용하였다. 비만세포의 총 탈과립 양은 3번씩 냉동과 해동을 하여 측정하고 그것과 발현량을 비교하여 억제율을 측정한다. 배양액 25 ㎕와 β-Hex 기질 수용액 (1.3 mg/mL p-nitrophenyl-2-acetamido-2-deoxy-β-D-glucopyranoside) 50 ㎕을 서로 섞어 37℃에서 1시간 방치시킨다. 그 후 0.2M Glycine-NaOH (pH 10.7 0.2M Glycine을 제조 후 NaOH로 pH값 보정)를 이용하여 반응을 정지시킨 후 405nm에서 측정한다.

그 결과, 미인길(길경, 오미자, 의이인)의 에탄올 추출물(Miingil-E)은 탈과립을 30%까지 억제함을 알 수 있었다 (도 4 참조).

본 발명의 추출물을 포함하는 약학조성물의 제제 예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다. 상술한 바와 같이, 본 발명의 추출물은 항 알레르기 효과를 나타내므로, 알레르기 질환의 예방 및 치료를 위한 약학조성물 및 건강기능식품으로써 이용될 수 있다.

하기에 본 발명의 추출물을 포함하는 약학 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

제제예 1. 산제의 제조

Miingil-E 20 mg

유당 100 mg

탈크 10 mg

상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.

제제예 2. 정제의 제조

Miingil-E 10 mg

옥수수전분 100 mg

유당 100 mg

스테아린산 마그네슘 2 mg

상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.

제제예 3. 캅셀제의 제조

Miingil-E 10 mg

결정성 셀룰로오스 3 mg

락토오스 14.8 mg

마그네슘 스테아레이트 0.2 mg

통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.

제제예 4. 주사제의 제조

Miingil-E 10 mg

만니톨 180 mg

주사용 멸균 증류수 2974 mg

Na₂HPO_{4 ,}12H₂O 26 mg

통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당(2㎖) 상기의 성분 함량으로 제조한다.

제제예 5. 액제의 제조

Miingil-E 20 mg

이성화당 10 g

만니톨 5 g

정제수 적량

통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100㎖로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.

제제예 6. 건강 식품의 제조

Miingil-E 1000 ㎎

비타민 혼합물 적량

비타민 A 아세테이트 70 ㎍

비타민 E 1.0 ㎎

비타민 B1 0.13 ㎎

비타민 B2 0.15 ㎎

비타민 B6 0.5 ㎎

비타민 B12 0.2 ㎍

비타민 C 10 ㎎

비오틴 10 ㎍

니코틴산아미드 1.7 ㎎

엽산 50 ㎍

판토텐산 칼슘 0.5 ㎎

무기질 혼합물 적량

황산제1철 1.75 ㎎

산화아연 0.82 ㎎

탄산마그네슘 25.3 ㎎

제1인산칼륨 15 ㎎

제2인산칼슘 55 ㎎

구연산칼륨 90 ㎎

탄산칼슘 100 ㎎

염화마그네슘 24.8 ㎎

상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강기능식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.

제제예 7. 건강 음료의 제조

Miingil-E 1000 ㎎

구연산 1000 ㎎

올리고당 100 g

매실농축액 2 g

타우린 1 g

정제수를 가하여 전체 900 ㎖

통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 L 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.

상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 수요계층, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

도 1은 BMMC 세포에서 PMA와 A23187로 유도된 IL-6 억제에 대한 미인길(길경, 오미자, 의이인)의 에탄올 추출물(Miingil-E)의 효과를 나타낸 도이며,

도 2는 BMMC 세포에서 PMA와 A23187로 유도된 PGD2 억제에 대한 미인길(길경, 오미자, 의이인)의 에탄올 추출물(Miingil-E)의 효과를 나타낸 도이며,

도 3은 BMMC 세포에서 PMA와 A23187로 유도된 LTC4 억제에 대한 미인길(길경, 오미자, 의이인)의 에탄올 추출물(Miingil-E)의 효과를 나타낸 도이며,

도 4는 BMMC 세포에서 PMA와 A23187로 유도된 탈과립 억제에 대한 미인길(길경, 오미자, 의이인)의 에탄올 추출물(Miingil-E)의 효과를 나타낸 도이다.

Claims (9)

1. 한국산 길경, 오미자, 의이인의 복합생약의 건조중량 배합비가 0.5~2:0.5~2:1(w/w)인 50 내지 90% 에탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 아토피성 피부염, 접촉성 피부염의 치료 및 예방용 약학조성물.
2. 삭제
3. 삭제
4. 삭제
5. 삭제
6. 삭제
7. 삭제
8. 한국산 길경, 오미자, 의이인의 복합생약의 건조중량 배합비가 0.5~2:0.5~2:1(w/w)인 50 내지 90% 에탄올 추출물을 유효성분으로 함유하는 아토피성 피부염, 접촉성 피부염의 예방 및 개선용 건강기능식품.
9. 삭제

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