KR101522888B1 - 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템, 자기혈청 첨가 골수세포 배양방법 및 자기혈청 첨가 배양 골수세포를 유효성분으로 하는 의약조성물의 제조방법 - Google Patents

Abstract

(과제) 항응고약을 사용하지 않고 대상자로부터 채취된 골수세포를 배지를 사용하여 액밀상태에서 응고 억제 처리하여 배양하고, 액밀상태에서 조제한 상기 대상자의 혈청으로 더 배양하기 위한 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템 및 자기혈청 첨가 골수세포 배양방법 및 자기혈청 첨가 배양 골수세포를 유효성분으로 하는 의약조성물의 제조방법을 제공한다.
(해결수단) 항응고약을 사용하지 않고 대상자로부터 채취된 골수세포를 상기 대상자의 혈청으로 배양하기 위한 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템으로서, 골수세포 현탁액 수용 디바이스와, 채혈 수용 디바이스와, 자기혈청 취득 디바이스와, 골수세포 배양 디바이스를 구비하고 있다. 본 발명에 의하면, 뇌경색이나 척수손상, 탈수질환 등의 뇌신경질환의 치료에 관한 재생의료의 현장에 있어서, 골수세포를 청결, 안전, 확실 또한 고효율로 배양할 수 있다.

Description

자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템, 자기혈청 첨가 골수세포 배양방법 및 자기혈청 첨가 배양 골수세포를 유효성분으로 하는 의약조성물의 제조방법{AUTOSERUM-CONTAINING BONE MARROW CELL CULTURE SYSTEM, AUTOSERUM-CONTAINING BONE MARROW CELL CULTURE METHOD, AND METHOD FOR PRODUCING MEDICINAL COMPOSITION COMPRISING AUTOSERUM-CONTAINING CULTURED BONE MARROW CELLS AS ACTIVE INGREDIENT}

본 발명은, 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템(自己血淸 添加 骨髓細胞 培養 system), 자기혈청 첨가 골수세포 배양방법 및 자기혈청 첨가 배양 골수세포를 유효성분으로 하는 의약조성물(醫藥組成物)의 제조방법에 관한 것으로서, 더 상세하게는, 항응고약(抗凝固藥)을 사용하지 않고 대상자(對象者)로부터 채취된 골수세포를 상기 대상자의 혈청으로 배양하기 위한 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템 및 자기혈청 첨가 골수세포 배양방법, 및 항응고약을 사용하지 않고 대상자로부터 채취되어서 상기 대상자의 혈청으로 배양한 자기혈청 첨가 배양 골수세포를 유효성분으로 하는 의약조성물의 제조방법에 관한 것이다.

뇌경색(腦梗塞)이나 척수손상(脊髓損傷), 탈수질환(脫髓疾患) 등의 뇌신경질환(腦神經疾患)의 치료방법으로서, 환자의 골수로부터 얻어진 단핵세포 분획(mononuclear cell fractions)의 골수세포를 환자에게 정맥투여하는 방법이 재생의료(再生醫療)의 일환으로서 개발되어 있다(특허문헌1). 이 치료법은, 환부(患部)에 직접적으로 세포를 투여하지 않고 정맥에 투여하는 점에 있어서 처치가 용이하여 일반적인 의료현장에서 간편하게 행할 수 있다고 하는 이점이 있다.

이러한 치료방법에 있어서는, 환자에게 정맥투여하기에 충분한 골수세포를 확보하는 것이 중요하다. 그러한 기술로서는, 예를 들면, 골수세포를 환자로부터 채취하여 그대로 무균으로 또는 액밀(液密; liquid-tightly)하게 골수세포를 수집하여 그 환자에게 투여하는 시스템(특허문헌2)이나, 채취한 골수액에 포함되는 골수세포를 헤파린(heparin) 이나 인간혈청(human serum)을 포함하는 배지(培地)에서 배양하는 방법(특허문헌3) 등을 들 수 있다. 또 종래에 골수세포를 배양하는 경우에는, 골수세포의 도너(donor)인 환자의 혈청을 사용하는 것이 적합성 및 안전성의 관점에서 바람직하다고 하고 있다(특허문헌4, 특허문헌5 및 특허문헌6).

국제공개 ＷＯ2005/007176호 팸플릿 일본국 특표2008-538514호 공보 일본국 공개특허 특개2006-055106호 공보 일본국 공개특허 특개2009-065854호 공보 일본국 공개특허 특개2009-065884호 공보 국제공개 ＷＯ2009/034708호 팸플릿

환자로부터 채취한 골수액은 빠르게 응고되기 때문에, 응고 반응을 저지하기 위하여 헤파린 등의 항응고약이 사용되고 있다. 그러나 보통, 환자로부터 골수액을 채취하는 곳에서 의료종사자가 즉시 골수세포의 배양을 하는 것은 곤란하다. 또한 배양 골수세포의 효과와 안전성을 담보할 필요가 있기 때문에, 골수 채취 현장으로부터 떨어진 세포배양 장소인 세포조제 시설(Ｃｅｌｌ　Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ　Ｃｅｎｔｅｒ; ＣＰＣ)에서 골수세포의 배양이 이루어져, 항응고약의 사용은 피할 수 없는 것이었다. 그러나 헤파린 등의 항응고약이 세포증식에 대하여 현저하게 저해작용을 미친다고 하는 지견이 있다.

또한 최근, 뇌경색이나 척수손상, 탈수질환 등의 뇌신경질환의 치료에 관한 재생의료의 현장에 있어서, 골수세포를 청결, 안전, 확실 그리고 고효율로 배양하는 것이 요구되고 있지만, 종래에 그러한 요구를 만족시키는 듯한 시스템이나 방법은 존재하지 않았다.

본 발명은, 이러한 문제점을 해결하기 위하여 이루어진 것으로서, 항응고약을 사용하지 않고 대상자로부터 채취된 골수세포를 배지를 사용하여 액밀상태(液密狀態)에서 응고 억제 처리하여 배양하고, 액밀상태에서 조제한 상기 대상자의 혈청으로 더 배양하기 위한 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템, 자기혈청 첨가 골수세포 배양방법 및 자기혈청 첨가 배양 골수세포를 유효성분으로 하는 의약조성물의 제조방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.

본 발명자들은, 예의 연구를 한 결과, 대상자로부터 채취된 골수세포를 포함하는 골수액과 필요한 최저한의 배지를 혼합함으로써 응고 반응을 충분한 기간동안 억제할 수 있는 것을 찾아내었다. 또한 골수를 채취하는 현장에서 이들을 액밀상태로 혼합하여 응고 억제 처리된 골수세포 현탁액을 조제하고, 이것을 현탁액인채로 ＣＰＣ로 운반해 배양한 후, 액밀상태에서 조제한 상기 대상자의 자기혈청을 사용하여 배양하는 것, 또는 골수를 채취하는 현장에서 대상자로부터 채취된 골수세포를 포함하는 골수액과 배지를 액밀상태로 혼합하여 응고 억제 처리된 골수세포 현탁액을 조제하고, 그대로 골수세포를 배양하여 ＣＰＣ로 운반한 후, 액밀상태에서 조제한 상기 대상자의 자기혈청을 사용하여 더 배양함으로써, 골수세포를 청결, 안전, 확실 또한 고효율로 배양할 수 있는 것을 찾아내어 하기의 각 발명을 완성하였다.

(1)항응고약을 사용하지 않고 대상자로부터 채취된 골수세포를 상기 대상자의 혈청으로 배양하기 위한 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템으로서, 대상자로부터 채취된 골수세포를 포함하는 골수액을, 채취 현장에서 상기 골수액을 수용하는 골수액 수용 시린지로부터 액밀하게 실링 가능한 강성용기인 골수세포 현탁액 운반용기로 이동하여 배지를 혼합시킴으로써 응고 억제 처리하고, 상기 골수액에 상기 배지를 혼합시킴으로써 얻어지는 응고 억제 처리된 골수세포 현탁액을 상기 골수세포 현탁액 운반용기에 수용한 채 현탁상태에서 운반한 후, 세포배양 장소에 있어서 골수세포를 배양하는 골수세포 배양용기로 상기 골수세포 현탁액을 이동하여 배양을 시작하고, 소정의 배양기간 경과 후, 배양 상청을 제거하고, 상기 골수세포 배양용기 내에 배지 및 상기 대상자의 혈청을 가하여 더 배양을 하는 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템.

(2)하기 (a), (b), (c) 및 (d)의 적어도 어느 하나의 디바이스를 구비하는 (1)에 기재되어 있는 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템; (a)상기 골수액 수용 시린지와, 배지를 수용하는 배지 수용 시린지와, 상기 골수세포 현탁액을 수용하는 상기 골수세포 현탁액 운반용기와, 상기 골수액과 상기 배지가 유통 가능하며 상기 골수액 수용 시린지와 상기 배지 수용 시린지와 상기 골수세포 현탁액 운반용기를 액밀하게 접속 가능한 골수세포 현탁용 접속수단을 구비하는 골수세포 현탁액 수용 디바이스, (b)상기 대상자의 혈관을 찌르는 혈관 천자침과, 상기 대상자의 혈액을 수용해 액밀하게 실링 가능하며 원심처리 가능한 혈액 수용용기와, 혈액이 유통 가능하며 상기 혈관 천자침과 상기 혈액 수용용기를 액밀하게 접속 가능한 채혈용 접속수단을 구비하는 채혈 수용 디바이스, (c)상기 대상자의 혈액을 수용한 상기 혈액 수용용기를 원심처리하여 상기 대상자의 혈청을 취득하는 원심수단을 구비하는 자기혈청 취득 디바이스, (d)상기 골수세포 배양용기를 구비하는 골수세포 배양 디바이스.

(3)하기 (a), (b), (c) 및 (d)의 디바이스를 구비하는 (1)에 기재되어 있는 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템; (a)상기 골수액 수용 시린지와, 배지를 수용하는 배지 수용 시린지와, 상기 골수세포 현탁액을 수용하는 상기 골수세포 현탁액 운반용기와, 상기 골수액과 상기 배지가 유통 가능하며 상기 골수액 수용 시린지와 상기 배지 수용 시린지와 상기 골수세포 현탁액 운반용기를 액밀하게 접속 가능한 골수세포 현탁용 접속수단을 구비하는 골수세포 현탁액 수용 디바이스, (b)상기 대상자의 혈관을 찌르는 혈관 천자침과, 상기 대상자의 혈액을 수용해 액밀하게 실링 가능하며 원심처리 가능한 혈액 수용용기와, 혈액이 유통 가능하며 상기 혈관 천자침과 상기 혈액 수용용기를 액밀하게 접속 가능한 채혈용 접속수단을 구비하는 채혈 수용 디바이스, (c)상기 대상자의 혈액을 수용한 상기 혈액 수용용기를 원심처리하여 상기 대상자의 혈청을 취득하는 원심수단을 구비하는 자기혈청 취득 디바이스, (d)상기 골수세포 배양용기를 구비하는 골수세포 배양 디바이스.

(4)골수세포 현탁액 운반용기가 하기 (e) 및 (f)를 구비하고, 또한 골수세포 현탁용 접속수단이 하기 (g)를 구비하는 (2) 또는 (3)에 기재되어 있는 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템; (e)상기 골수세포 현탁용 접속수단과 상기 골수세포 현탁액 운반용기의 내부공간을 통하게 하는 운반용기 튜브, (f)상기 골수세포 현탁액 운반용기의 내부공간과 외부공간을 통하게 함과 아울러 선단에는 균을 통과시키지 않는 운반용기 통기구멍 필터가 설치되어 있는 운반용기 통기구멍, (g)현탁용 제1포트, 현탁용 제2포트 및 현탁용 제3포트의 3개의 접속구와, 이들 접속구를 선택적으로 통하게 하는 현탁용 콕을 구비하는 골수세포 현탁용 삼방활전.

(5)상기 혈액 수용용기가 하기 (h) 및 (i)를 구비하는 (2)부터 (4)의 어느 하나에 기재된 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템; (h)상기 채혈용 접속수단과 상기 혈액 수용용기의 내부공간을 통하게 하는 수용용기 튜브, (i)상기 혈액 수용용기의 내부공간과 외부공간을 통하게 함과 아울러 선단에는 균을 통과시키지 않는 수용용기 통기구멍 필터가 설치되어 있는 수용용기 통기구멍.

(6)채혈 수용 디바이스가, 상기 대상자의 혈관을 찌른 상태를 유지 가능한 채혈 바늘인 유치침과, 상기 유치침에 접속된 유치침 접속튜브와, 상기 대상자의 혈액을 수용해 액밀하게 실링 가능하며 원심처리 가능함과 아울러 하기 (j) 및 (k)를 구비하는 혈액 수용용기와, 상기 대상자에게서 액밀상태로 채혈하여 혈액을 수용 가능하며 압출 가능한 채혈용 시린지와, 혈액이 유통 가능하며 상기 유치침에 접속된 유치침 접속튜브와 상기 채혈용 시린지와 상기 혈액 수용용기를 액밀하게 접속 가능함과 아울러 하기 (l)을 구비하는 채혈용 삼방 접속수단을 구비하는 채혈 수용 디바이스인 (2)부터 (4)의 어느 하나에 기재된 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템; (j)상기 채혈용 삼방 접속수단과 상기 혈액 수용용기의 내부공간을 통하게 하는 수용용기 튜브, (k)상기 혈액 수용용기의 내부공간과 외부공간을 통하게 함과 아울러 선단에는 균을 통과시키지 않는 수용용기 통기구멍 필터가 설치되어 있는 수용용기 통기구멍, (l)채혈용 제1포트, 채혈용 제2포트 및 채혈용 제3포트의 3개의 접속구와, 이들 접속구를 선택적으로 통하게 하는 채혈용 콕을 구비하는 채혈용 삼방활전.

(7)상기 골수세포 배양용기로 상기 골수세포 현탁액을 이동할 때에 배지 및/또는 상기 대상자의 혈청을 가하여 배양을 시작하는 (1)부터 (6)의 어느 하나에 기재되어 있는 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템.

(8)항응고약을 사용하지 않고 대상자로부터 채취된 골수세포를 상기 대상자의 혈청으로 배양하기 위한 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템으로서, 대상자로부터 채취된 골수세포를 포함하는 골수액을, 채취 현장에서 상기 골수액을 수용하는 골수액 수용 시린지로부터, 상기 골수액에 배지를 혼합함으로써 얻어지는 응고 억제 처리된 골수세포 현탁액을 수용하여 골수세포의 배양을 시작하는 액밀하게 실링 가능한 강성용기인 골수세포 배양 운반용기로 이동하여 상기 배지를 혼합시킴으로써 응고 억제 처리함과 아울러 상기 골수세포의 배양을 시작하고, 상기 골수세포 배양 운반용기에 수용한 채 배양상태에서 운반한 후에, 소정의 배양기간 경과 후, 배양 상청을 제거하고, 세포배양 장소에 있어서 상기 골수세포 배양 운반용기 내에 배지 및 상기 대상자의 혈청을 가하여 더 배양을 하는 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템.

(9)하기 (i), (ｉｉ) 및 (ｉｉｉ)의 적어도 어느 하나의 디바이스를 구비하는 (8)에 기재되어 있는 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템; (i)상기 골수액 수용 시린지와, 배지를 수용하는 배지 수용 시린지와, 상기 골수세포 배양 운반용기와, 상기 골수액과 상기 배지가 유통 가능하며 상기 골수액 수용 시린지와 상기 배지 수용 시린지와 상기 골수세포 배양 운반용기를 액밀하게 접속 가능한 골수세포 현탁용 접속수단을 구비하는 골수세포 배양 디바이스, (ｉｉ)상기 대상자의 혈관을 찌르는 혈관 천자침과, 상기 대상자의 혈액을 수용해 액밀하게 실링 가능하며 원심처리 가능한 혈액 수용용기와, 혈액이 유통 가능하며 상기 혈관 천자침과 상기 혈액 수용용기를 액밀하게 접속 가능한 채혈용 접속수단을 구비하는 채혈 수용 디바이스, (ｉｉｉ)상기 대상자의 혈액을 수용한 상기 혈액 수용용기를 원심처리하여 상기 대상자의 혈청을 취득하는 원심수단을 구비하는 자기혈청 취득 디바이스.

(10)하기 (i), (ｉｉ) 및 (ｉｉｉ)의 디바이스를 구비하는 (8)에 기재되어 있는 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템; (i)상기 골수액 수용 시린지와, 배지를 수용하는 배지 수용 시린지와, 상기 골수세포 배양 운반용기와, 상기 골수액과 상기 배지가 유통 가능하며 상기 골수액 수용 시린지와 상기 배지 수용 시린지와 상기 골수세포 배양 운반용기를 액밀하게 접속 가능한 골수세포 현탁용 접속수단을 구비하는 골수세포 배양 디바이스, (ｉｉ)상기 대상자의 혈관을 찌르는 혈관 천자침과, 상기 대상자의 혈액을 수용해 액밀하게 실링 가능하며 원심처리 가능한 혈액 수용용기와, 혈액이 유통 가능하며 상기 혈관 천자침과 상기 혈액 수용용기를 액밀하게 접속 가능한 채혈용 접속수단을 구비하는 채혈 수용 디바이스, (ｉｉｉ)상기 대상자의 혈액을 수용한 상기 혈액 수용용기를 원심처리하여 상기 대상자의 혈청을 취득하는 원심수단을 구비하는 자기혈청 취득 디바이스.

(11)골수세포 배양 운반용기가 하기 (ｉｖ) 및 (ｖ)를 구비하고, 또한 골수세포 현탁용 접속수단이 하기 (ｖｉ)을 구비하는 (9) 또는 (10)에 기재되어 있는 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템; (ｉｖ)골수세포 현탁용 접속수단과 상기 골수세포 배양 운반용기의 내부공간을 통하게 하는 배양 운반용기 튜브, (ｖ)상기 골수세포 배양 운반용기의 내부공간과 외부공간을 통하게 함과 아울러 선단에는 균을 통과시키지 않는 배양 운반용기 통기구멍 필터가 설치되어 있는 배양 운반용기 통기구멍, (ｖｉ)현탁용 제1포트, 현탁용 제2포트 및 현탁용 제3포트의 3개의 접속구와, 이들 접속구를 선택적으로 통하게 하는 현탁용 콕을 구비하는 골수세포 현탁용 삼방활전.

(12)혈액 수용용기가 하기 (ｖｉｉ) 및 (ｖｉｉｉ)을 구비하는 (9)부터 (11)의 어느 하나에 기재된 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템; (ｖｉｉ)상기 채혈용 접속수단과 상기 혈액 수용용기의 내부공간을 통하게 하는 수용용기 튜브, (ｖｉｉｉ)상기 혈액 수용용기의 내부공간과 외부공간을 통하게 함과 아울러 선단에는 균을 통과시키지 않는 수용용기 통기구멍 필터가 설치되어 있는 수용용기 통기구멍.

(13)채혈 수용 디바이스가, 상기 대상자의 혈관을 찌른 상태를 유지 가능한 채혈 바늘인 유치침과, 상기 유치침에 접속된 유치침 접속튜브와, 상기 대상자의 혈액을 수용해 액밀하게 실링 가능하며 원심처리 가능함과 아울러 하기 (ｉｘ) 및 (ｘ)을 구비하는 혈액 수용용기와, 상기 대상자에게서 액밀상태로 채혈하여 혈액을 수용 가능하며 압출 가능한 채혈용 시린지와, 혈액이 유통 가능하며 상기 유치침에 접속된 유치침 접속튜브와 상기 채혈용 시린지와 상기 혈액 수용용기를 액밀하게 접속 가능함과 아울러 하기 (ｘｉ)을 구비하는 채혈용 삼방 접속수단을 구비하는 채혈 수용 디바이스인 (9)부터 (11)의 어느 하나에 기재된 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템; (ｉｘ)상기 채혈용 삼방 접속수단과 상기 혈액 수용용기의 내부공간을 통하게 하는 수용용기 튜브, (x)상기 혈액 수용용기의 내부공간과 외부공간을 통하게 함과 아울러 선단에는 균을 통과시키지 않는 수용용기 통기구멍 필터가 설치되어 있는 수용용기 통기구멍, (ｘｉ)채혈용 제1포트, 채혈용 제2포트 및 채혈용 제3포트의 3개의 접속구와, 이들 접속구를 선택적으로 통하게 하는 채혈용 콕을 구비하는 채혈용 삼방활전.

(14)항응고약을 사용하지 않고 대상자로부터 채취된 골수세포를 상기 대상자의 혈청으로 배양하는 방법으로서, 상기 대상자로부터 채취된 골수세포를 포함하는 골수액과 상기 골수액의 양에 대응하는 양의 배지를 상기 골수액의 채취 현장에서 액밀상태로 혼합함으로써 응고 억제 처리하고, 또한 항응고약이 첨가되지 않는 골수세포 현탁액을 조제하는 골수세포 현탁액 조제공정과, 상기 대상자로부터 채취되고 또한 항응고약이 첨가되지 않는 혈액을 원심처리 가능한 혈액 수용용기에 액밀상태로 수용하는 채혈 수용공정과, 상기 대상자의 혈액을 수용한 상기 혈액 수용용기를 원심처리하여 상기 대상자의 혈청을 취득하는 자기혈청 취득공정과, 상기 조제한 골수세포 현탁액에 포함되는 골수세포를 골수세포 배양용기에서 배양하는 골수세포 배양공정과, 상기 배양후의 골수세포가 부착된 상기 골수세포 배양용기로부터 부유세포를 포함하는 배양 상청을 제거하는 배양 상청 제거공정과, 상기 골수세포가 부착된 상기 골수세포 배양용기에 상기 취득한 상기 대상자의 혈청과 배지를 가하는 자기혈청 배지 첨가공정을 구비하는 상기 방법.

(15)항응고약을 사용하지 않고 대상자로부터 채취된 골수세포를 상기 대상자의 혈청으로 배양하는 방법으로서, 상기 대상자로부터 채취된 골수세포를 포함하는 골수액과 상기 골수액의 양에 대응하는 양의 배지를 상기 골수액의 채취 현장에서 액밀상태로 혼합함으로써 응고 억제 처리하고, 또한 항응고약이 첨가되지 않는 골수세포 현탁액을 조제하는 골수세포 현탁액 조제공정과, 상기 대상자로부터 채취되고 또한 항응고약이 첨가되지 않는 혈액을 원심처리 가능한 혈액 수용용기에 액밀상태로 수용하는 채혈 수용공정과, 상기 대상자의 혈액을 수용한 상기 혈액 수용용기를 원심처리하여 상기 대상자의 혈청을 취득하는 자기혈청 취득공정과, 상기 조제한 골수세포 현탁액과 배지 및/또는 상기 취득한 상기 대상자의 혈청을 혼합하여 혼합골수세포 현탁액을 조제하는 혼합골수세포 현탁액 조제공정과, 상기 조제한 혼합골수세포 현탁액에 포함되는 골수세포를 골수세포 배양용기에서 배양하는 골수세포 배양공정과, 상기 배양후의 골수세포가 부착된 상기 골수세포 배양용기로부터 부유세포를 포함하는 배양 상청을 제거하는 배양 상청 제거공정과, 상기 골수세포가 부착된 상기 골수세포 배양용기에 상기 취득한 상기 대상자의 혈청과 배지를 가하는 자기혈청 배지 첨가공정을 구비하는 상기 방법.

(16)상기 혼합골수세포 현탁액에 있어서 상기 골수액과 혼합한 배지의 양, 또는 상기 혼합골수세포 현탁액에 있어서 상기 골수액과 혼합한 배지의 양과 상기 골수액과 혼합한 상기 취득한 상기 대상자의 혈청의 양을 합한 양이, 상기 골수액의 4배량 내지 80배량인 (15)에 기재되어 있는 방법.

(17)상기 골수액의 양에 대응하는 양이 상기 골수액의 1.5배량 내지 6배량인 (14)부터 (16)의 어느 하나에 기재된 방법.

(18)상기 골수세포 현탁액 또는 상기 혼합골수세포 현탁액에 포함되는 골수세포를 골수세포 배양용기에서 4일 내지 7일간 배양하는 (14)부터 (17)의 어느 하나에 기재된 방법.

(19)항응고약을 사용하지 않고 대상자로부터 채취된 골수세포를 그대로 배양하여 상기 대상자의 혈청으로 더 배양하는 방법으로서, 상기 대상자로부터 채취된 골수세포를 포함하는 골수액과 상기 골수액의 양에 대응하는 양의 배지를 상기 골수액의 채취 현장에서 액밀상태의 골수세포 배양 운반용기중에서 혼합함으로써 응고 억제 처리하고, 또한 항응고약이 첨가되지 않는 골수세포 현탁액을 조제하는 골수세포 현탁액 조제공정과, 상기 조제한 골수세포 현탁액에 포함되는 골수세포를 상기 골수세포 배양 운반용기에서 배양시키면서 세포배양 장소로 운반하는 골수세포 배양 운반공정과, 상기 대상자로부터 채취되고 또한 항응고제가 첨가되지 않는 혈액을 원심처리 가능한 혈액 수용용기에 액밀상태로 수용하는 채혈 수용공정과, 상기 대상자의 혈액을 수용한 상기 혈액 수용용기를 원심처리하여 상기 대상자의 혈청을 취득하는 자기혈청 취득공정과, 상기 배양후의 골수세포가 부착된 상기 골수세포 배양 운반용기로부터 부유세포를 포함하는 배양 상청을 제거하는 배양 상청 제거공정과, 상기 골수세포가 부착된 상기 골수세포 배양 운반용기에 상기 대상자의 혈청과 배지를 가하는 자기혈청 배지 첨가공정을 구비하는 상기 방법.

(20)상기 골수세포 배양 운반용기가 세포배양 플라스크인 (19)에 기재되어 있는 방법.

(21)상기 골수액의 양에 대응하는 양이 상기 골수액의 2배량 내지 4배량인 (19) 또는 (20)에 기재되어 있는 방법.

(22)상기 조제한 골수세포 현탁액에 포함되는 골수세포를 상기 골수세포 배양 운반용기에서 4일 내지 7일간 배양하는 (19)부터 (21)의 어느 하나에 기재된 방법.

(23)상기 혈액 수용용기가 강성용기인 (14)부터 (22)의 어느 하나에 기재된 방법.

(24)항응고약을 사용하지 않고 대상자로부터 채취되어 상기 대상자의 혈청으로 배양한 골수세포를 유효성분으로 하는 의약조성물을 제조하는 방법으로서, 상기 대상자로부터 채취된 골수세포를 포함하는 골수액과 상기 골수액의 양에 대응하는 양의 배지를 상기 골수액의 채취 현장에서 액밀상태로 혼합함으로써 응고 억제 처리하고, 또한 항응고약이 첨가되지 않는 골수세포 현탁액을 조제하는 골수세포 현탁액 조제공정과, 상기 대상자로부터 채취되고 또한 항응고약이 첨가되지 않는 혈액을 원심처리 가능한 혈액 수용용기에 액밀상태로 수용하는 채혈 수용공정과, 상기 대상자의 혈액을 수용한 상기 혈액 수용용기를 원심처리하여 상기 대상자의 혈청을 취득하는 자기혈청 취득공정과, 상기 조제한 골수세포 현탁액에 포함되는 골수세포를 골수세포 배양용기에서 배양하는 골수세포 배양공정과, 상기 배양후의 골수세포가 부착된 상기 골수세포 배양용기로부터 부유세포를 포함하는 배양 상청을 제거하는 배양 상청 제거공정과, 상기 골수세포가 부착된 상기 골수세포 배양용기에 상기 취득한 상기 대상자의 혈청과 배지를 가하여 배양하는 자기혈청 배지 첨가 배양공정을 구비하는 상기 방법.

(25)항응고약을 사용하지 않고 대상자로부터 채취되어 상기 대상자의 혈청으로 배양한 골수세포를 유효성분으로 하는 의약조성물을 제조하는 방법으로서, 상기 대상자로부터 채취된 골수세포를 포함하는 골수액과 상기 골수액의 양에 대응하는 양의 배지를 상기 골수액의 채취 현장에서 액밀상태로 혼합함으로써 응고 억제 처리하고, 또한 항응고약이 첨가되지 않는 골수세포 현탁액을 조제하는 골수세포 현탁액 조제공정과, 상기 대상자로부터 채취되고 또한 항응고약이 첨가되지 않는 혈액을 원심처리 가능한 혈액 수용용기에 액밀상태로 수용하는 채혈 수용공정과, 상기 대상자의 혈액을 수용한 상기 혈액 수용용기를 원심처리하여 상기 대상자의 혈청을 취득하는 자기혈청 취득공정과, 상기 조제한 골수세포 현탁액과 배지 및/또는 상기 취득한 상기 대상자의 혈청을 혼합하여 혼합골수세포 현탁액을 조제하는 혼합골수세포 현탁액 조제공정과, 상기 조제한 혼합골수세포 현탁액에 포함되는 골수세포를 골수세포 배양용기에서 배양하는 골수세포 배양공정과, 상기 배양후의 골수세포가 부착된 상기 골수세포 배양용기로부터 부유세포를 포함하는 배양 상청을 제거하는 배양 상청 제거공정과, 상기 골수세포가 부착된 상기 골수세포 배양용기에 상기 취득한 상기 대상자의 혈청과 배지를 가하여 배양하는 자기혈청 배지 첨가 배양공정을 구비하는 상기 방법.

(26)항응고약을 사용하지 않고 대상자로부터 채취되어 그대로 배양하여 상기 대상자의 혈청으로 더 배양한 골수세포를 유효성분으로 하는 의약조성물을 제조하는 방법으로서, 상기 대상자로부터 채취된 골수세포를 포함하는 골수액과 상기 골수액의 양에 대응하는 양의 배지를 상기 골수액의 채취 현장에서 액밀상태의 골수세포 배양 운반용기중에서 혼합함으로써 응고 억제 처리하고, 또한 항응고약이 첨가되지 않는 골수세포 현탁액을 조제하는 골수세포 현탁액 조제공정과, 상기 조제한 골수세포 현탁액에 포함되는 골수세포를 상기 골수세포 배양 운반용기에서 배양시키면서 세포배양 장소로 운반하는 골수세포 배양 운반공정과, 상기 대상자로부터 채취되고 또한 항응고제가 첨가되지 않는 혈액을 원심처리 가능한 혈액 수용용기에 액밀상태로 수용하는 채혈 수용공정과, 상기 대상자의 혈액을 수용한 상기 혈액 수용용기를 원심처리하여 상기 대상자의 혈청을 취득하는 자기혈청 취득공정과, 상기 배양후의 골수세포가 부착된 상기 골수세포 배양 운반용기로부터 부유세포를 포함하는 배양 상청을 제거하는 배양 상청 제거공정과, 상기 골수세포가 부착된 상기 골수세포 배양 운반용기에 상기 대상자의 혈청과 배지를 가하여 배양하는 자기혈청 배지 첨가 배양공정을 구비하는 상기 방법.

본 발명에 의하면, 뇌경색이나 척수손상, 탈수질환 등의 뇌신경질환의 치료에 관한 재생의료의 현장에 있어서, 골수세포를 청결, 안전, 확실 또한 고효율로 채취하고 배양에 이바지하는 것 및 청결, 안전, 확실 또한 고효율로 채취하고 배양한 자기혈청 첨가 배양 골수세포를 유효성분으로 하는 의약조성물을 얻을 수 있다.

도1은, 본 발명에 관한 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템의 제1실시형태를 나타내는 도면이다.
도2는, 본 발명에 있어서의 제1실시형태의 골수세포 현탁액 수용 디바이스를 나타내는 도면이다.
도3은, 제1실시형태 및 제2실시형태에 있어서의 채혈 수용 디바이스를 나타내는 도면이다.
도4는, 제1실시형태 및 제2실시형태에 있어서의 채혈 수용 디바이스의 다른 실시형태를 나타내는 도면이다.
도5는, 본 발명에 관한 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템의 제2실시형태를 나타내는 도면이다.
도6은, 제2실시형태에 있어서의 골수세포 배양 디바이스를 나타내는 도면이다.
도7은, 본 발명에 관한 자기혈청 첨가 골수세포 배양방법의 제1실시형태를 나타내는 흐름도이다.
도8은, 제1실시형태의 자기혈청 첨가 골수세포 배양방법에 있어서 혼합골수세포 현탁액 조제공정(S7)을 더 구비하는 태양을 나타내는 흐름도이다. 도면 중의 파선 화살표는 선택이 가능한 것을 나타낸다.
도9는, 본 발명에 관한 자기혈청 첨가 골수세포 배양방법의 제2실시형태를 나타내는 흐름도이다.
도10은, 본 발명에 관한 자기혈청 첨가 배양 골수세포를 유효성분으로 하는 의약조성물의 제조방법의 제1실시형태를 나타내는 흐름도이다.
도11은, 제1실시형태의 자기혈청 첨가 배양 골수세포를 유효성분으로 하는 의약조성물의 제조방법에 있어서 혼합골수세포 현탁액 조제공정(S7)을 더 구비하는 태양을 나타내는 흐름도이다. 도면 중의 파선 화살표는 선택이 가능한 것을 나타낸다.
도12는, 본 발명에 관한 자기혈청 첨가 배양 골수세포를 유효성분으로 하는 의약조성물의 제조방법의 제2실시형태를 나타내는 흐름도이다.

이하, 본 발명에 관한 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템, 자기혈청 첨가 골수세포 배양방법 및 자기혈청 첨가 배양 골수세포를 유효성분으로 하는 의약조성물의 제조방법에 대하여 상세하게 설명한다. 본 발명에 관한 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템(1)의 제1실시형태는, 항응고약을 사용하지 않고 대상자로부터 채취된 골수세포를 상기 대상자의 혈청으로 배양하기 위한 자기혈청첨가 골수배양 시스템으로서, 대상자로부터 채취된 골수세포를 포함하는 골수액을, 채취 현장에서 상기 골수액을 수용하는 골수액 수용 시린지(骨髓液收容syringe)(21)로부터 액밀(液密)하게 실링(sealing) 가능한 강성용기(剛性容器)인 골수세포 현탁액 운반용기(23)로 이동하여 배지를 혼합시킴으로써 응고 억제 처리하고, 상기 골수액에 상기 배지를 혼합시킴으로써 얻어지는 응고 억제 처리된 골수세포 현탁액을 골수세포 현탁액 운반용기(23)에 수용한 채 현탁상태에서 운반한 후, 세포배양 장소에 있어서 골수세포를 배양하는 골수세포 배양용기(51)로 상기 골수세포 현탁액을 이동하여 배양을 시작하고, 소정의 배양기간 경과 후, 배양 상청(培養上淸; culture supernatant)을 제거하고, 골수세포 배양용기(51)내에 배지 및 상기 대상자의 혈청을 가하여 더 배양을 하는 시스템이다.

본 발명에 관한 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템(1)의 제1실시형태는, 골수세포 현탁액 수용 디바이스(2), 채혈 수용 디바이스(3), 자기혈청 취득 디바이스(4) 및 골수세포 배양 디바이스(5)의 적어도 어느 하나의 디바이스를 구비하는 것이 바람직하고, 이들 모든 디바이스를 구비하는 것이 더 바람직하다.

골수세포 현탁액 수용 디바이스(2)는, 주로 골수액 수용 시린지(21)와, 배지 수용 시린지(22)와, 골수세포 현탁액 운반용기(23)와, 골수세포 현탁용 접속수단(24)으로 구성되어 있다.

골수액 수용 시린지(21)는, 대상자에게서 골수세포를 포함하는 골수액을 액밀상태로 채취하여 수용하고 또한 압출(壓出)할 수 있는 것이면 특별하게 한정되지 않고, 예를 들면 의료분야에 있어서 보통 사용되는 것을 들 수 있다.

배지 수용 시린지(22)는, 배지를 액밀상태로 수용하여 압출할 수 있는 것이면 특별하게 한정되지 않고, 예를 들면 의료분야에 있어서 보통 사용되는 것을 들 수 있으며, 본 제1실시형태에 있어서는 골수액 수용 시린지(21)와 같은 것을 사용할 수 있다.

본 발명에 있어서, 배지는, 골수세포의 종류, 원하는 분화(分化)의 방향이나 레벨, 필요한 증식률 등에 따라 적절하게 선택할 수 있다. 예를 들면 신경계의 수복(修復)에 사용하기 위하여 골수간질세포 등의 간엽계 줄기세포(mesenchymal stem cell)를 증식시키는 경우에 바람직한 배지로서는, 이하에 나타내는 둘베코 변형 이글배지(ＤＭＥＭ(Dulbecco's modified eagle's medium))의 외에, 신경전구세포 표준배지(ＮＰＢＭ: Ｃｌｏｎｔｅｃｈ사), αＭＥＭ배지 등을 들 수 있지만, 이들에 한정되지 않는다.

ＤＭＥＭ의 조성 : <농도(ｍｇ/L）>

ＣａＣｌ₂(무수물)<160∼240>, ＫＣＬ<320∼480>, Ｆｅ(ＮＯ₃)₃·9Ｈ₂Ｏ<0.08∼1.2>, ＭｇＳＯ₄(무수물)<80∼120>, ＮａＣｌ<5120∼7680>, ＮａＨＣＯ₃<2960∼4440>, ＮａＨ₂ＰＯ₄·Ｈ₂Ｏ<100∼150>, D-글루코오스<3600∼5400>, 페놀 레드<12∼18>, 피루브산나트륨<88∼132>, L-아르기닌·ＨＣｌ<67∼101>, L-시스테인·2ＨＣｌ<50∼76>, L-히스티딘·ＨＣｌ·Ｈ₂Ｏ<34∼50>, L-이소류신<84∼126>, L-류신<84∼126>, L-리신·ＨＣｌ<117∼175>, L-메티오닌<24∼36>, L-페닐알라닌<53∼79>, L-세린<34∼50>, L-트레오닌<76∼114>, L-트립토판<13∼19>, L-티로신(2나트륨염)<83∼125>, L-발린<75∼113>, 염화콜린<3.2∼4.8>, D-Ｃａ-판토텐산<3.2∼4.8>, 엽산<3.2∼4.8>, i-이노시톨<5.8∼8.6>, 나이아신아미드<3.2∼4.8>, 피리독살·ＨＣｌ<3.2∼4.8>, 리보플라빈<0.3∼0.5>, 타아민·ＨＣｌ<3.2∼4.8>

또한 본 발명에 있어서, 배지에는, 필요에 따라 혈청이나 영양인자, 증식인자, 성장인자, 분화유도인자, 항생물질, 아미노산 등을 첨가하여도 좋다. 이들의 물질을 배지에 첨가하는 경우의 농도는, 골수세포의 원하는 분화의 방향이나 레벨, 필요한 증식률 등에 따라 적절하게 설정할 수 있다.

영양인자나 증식인자, 성장인자, 분화유도인자로서는, 구체적으로는, 예를 들면 아스코르브산 및 니코틴아미드 등의 비타민류, ＮＧＦ 및 ＢＤＮＦ 등의 신경영양인자, ＢＭＰ 등의 골형성인자, 상피세포 성장인자, 염기성 섬유아세포 성장인자, 인슐린 유사 성장인자, ＩＬ-2 등의 사이토카인(cytokine)을 들 수 있다.

또한 항생물질로서는, 예를 들면 페니실린이나 스트렙토마이신 등을 들 수 있고, 이들을 단독으로 배지에 첨가하여도 좋고 병용하여 첨가하여도 좋다. 항생물질을 첨가하는 경우의 농도로서는, 예를 들면 페니실린과 스트렙토마이신을 병용하여 첨가하는 경우에는, 각각이 배지 총량의 0.5∼2%(v/v), 바람직하게는 0.8∼1.2%(v/v)가 되도록 첨가할 수 있다.

또한 아미노산으로서는, 예를 들면 L-알라닌, L-아스파라긴산, L-시스테인, L-글루타민, L-이소류신, L-메티오닌, L-페닐알라닌, L-프롤린, L-세린, L-트레오닌, L-티로신, L-발린, L-아스코르브산, L-글루타민산 등을 들 수 있다. 아미노산을 첨가하는 경우의 농도로서, 간엽계 줄기세포를 신속하게 증식시키는 경우에는, 예를 들면 L-글루타민을 배지 총량의 0.1∼2%(w/v)가 되도록 첨가할 수 있다.

골수세포 현탁액 운반용기(23)는, 골수액에 배지를 혼합함으로써 얻어지는 응고 억제 처리된 골수세포 현탁액을 수용할 수 있고 또한 액밀하게 실링 가능한 강성용기이면 특별하게 한정되지 않는다. 그러한 구성으로서는, 예를 들면 도2에 나타나 있는 바와 같이, 골수세포 현탁액 운반용기(23)의 상단(上端)이 개구되어 있고, 그 개구에 운반용기 뚜껑(25)이 액밀하게 실링 가능한 정도로 나사 결합 되어 있고, 운반용기 뚜껑(25)에는 운반용기 튜브(26)와 운반용기 통기구멍(27)을 구비하는 구성 등을 들 수 있다. 운반용기 튜브(26)는, 골수세포 현탁용 접속수단(24)과 골수세포 현탁액 운반용기(23)의 내부공간을 통하게 하고 있고, 운반용기 통기구멍(27)은, 골수세포 현탁액 운반용기(23)의 내부공간과 외부공간을 통하게 하고 있다. 운반용기 통기구멍(27)의 선단에는 균을 통과시키지 않는 운반용기 통기구멍 필터(28)가 설치되어 있다.

본 발명에 있어서, 「배지」는 「배양액」과, 「응고 억제 처리」는 「항응고처리」, 「응고 정지 처리」 및 「응고 저지 처리」와 각각 바꿔 쓰는 경우가 있다.

본 발명에 있어서, 강성용기를 구성하는 소재로서는, 예를 들면 금속이나 글라스 등의 외에, 다소의 가요성(可撓性)을 구비하는 폴리프로필렌이나 폴리염화비닐, 폴리스티렌 등의 수지를 들 수 있다. 또한 운반용기 튜브(26)를 구성하는 소재로서는, 예를 들면 시판되는 열 실러(heat sealer)나 클립 등으로 실링 함으로써 액밀하게 실링 가능한 것을 들 수 있다. 또한 운반용기 통기구멍 필터(28)로서는, 예를 들면 필터 내부에서 균을 포착 가능한 뎁스·타입(depth·type)의 필터나, 필터 표면에서 균을 포착 가능한 스크린·타입(screen·type)의 필터 등을 들 수 있다.

골수세포 현탁용 접속수단(24)은, 골수액과 배지가 유통(流通) 가능하며, 골수액 수용 시린지(21)와 배지 수용 시린지(22)와 골수세포 현탁액 운반용기(23)를 액밀하게 접속 가능한 구성이나 기능을 구비하고 있으면 좋다. 그러한 구성으로서는, 예를 들면 도2에 나타나 있는 바와 같이, 골수세포 현탁용 삼방활전(骨髓細胞 懸濁用 三方活栓)(6)을 구비하는 구성을 들 수 있다. 골수세포 현탁용 삼방활전(6)은, 현탁용 제1포트(61), 현탁용 제2포트(62) 및 현탁용 제3포트(63)의 3개의 접속구(接續口)와, 이들 접속구를 선택적으로 통하게 하는 현탁용 콕(64)을 구비한다. 현탁용 콕(64)은, 적어도 현탁용 제1포트(61)와 현탁용 제2포트(62)를 통하게 한 자세와, 현탁용 제2포트(62)와 현탁용 제3포트(63)를 통하게 한 자세에서, 회전에 의하여 자세 변화시킬수 있다. 골수세포 현탁용 삼방활전(6)으로서는, 예를 들면 일반적인 Ｔ형의 의료용 삼방활전의 외에, 일본국 공개특허 특개2009-077879호 공보나 일본국 공개특허 특개2009-183583호 공보에 기재된 것을 사용할 수 있다.

본 제1실시형태에서는, 골수세포 현탁용 접속수단(24)으로서 골수세포 현탁용 삼방활전(6)을 예시하였지만, 이것에 한정되는 것은 아니고, 골수액 수용 시린지(21) 및 배지 수용 시린지(22)를 운반용기 튜브(26)에 선택적으로 착탈하여 통하게 하는 구성을 채용하여도 좋다.

채혈 수용 디바이스(3)는, 주로 혈관 천자침(血管穿刺針)(31)과, 혈액 수용용기(32)와, 채혈용 접속수단(33)으로 구성되어 있다.

혈관 천자침(31)은, 대상자의 혈관에 찔러서 혈액이 내부를 유통 가능한 것, 의료분야에 있어서 보통 사용되는 것이면 좋다.

혈액 수용용기(32)는, 대상자의 혈액을 수용해 액밀하게 실링 가능하며 원심처리 가능한 것, 의료분야에 있어서 보통 사용되는 것이면 특별하게 한정되지 않는다. 그러한 구성으로서는, 예를 들면 도3에 나타나 있는 바와 같이, 채혈용 접속수단(33)을 통하여 혈관 천자침(31)으로부터 혈액을 유입시켜서 액밀하게 실링 가능 또한 원심처리 가능한 것이며, 혈액 수용용기(32)의 상단이 개구되어 있고, 그 개구에 수용용기 뚜껑(7)이 액밀하게 실링 가능한 정도로 나사 결합 되어 있고, 상기 수용용기 뚜껑(7)에는 수용용기 튜브(71)와 수용용기 통기구멍(72)을 구비하는 구성 등을 들 수 있다. 수용용기 튜브(71)는, 채혈용 접속수단(33)과 혈액 수용용기(32)의 내부공간을 통하게 하고 있고, 수용용기 통기구멍(72)은, 혈액 수용용기(32)의 내부공간과 외부공간을 통하게 하고 있다. 수용용기 통기구멍(72)의 선단에는 균을 통과시키지 않는 수용용기 통기구멍 필터(73)가 설치되어 있다.

채혈용 접속수단(33)은, 혈액이 유통 가능하며 혈관 천자침(31)과 혈액 수용용기(32)를 액밀하게 접속 가능한 구성이나 기능을 구비하고 있으면 좋다.

또한 채혈 수용 디바이스(3)의 다른 실시형태로서는, 도4에 나타나 있는 바와 같이, 주로 유치침(留置針)(34)과, 유치침(34)에 접속된 유치침 접속튜브(35)와, 혈액 수용용기(32)와, 채혈용 시린지(36)와, 채혈용 삼방 접속수단(37)으로 구성되어 있다. 또 채혈 수용 디바이스(3)의 구성 중에서 상기한 구성과 동등 또는 상당하는 구성에 관해서는 동일한 부호를 붙이고, 다시 설명하는 것을 생략한다.

유치침(34)은, 대상자의 혈관을 찌른 상태를 유지 가능한 채혈 바늘이다. 유치침(34)은, 의료분야에서 보통 사용되는 것이면 특별하게 한정되지 않지만, 대상자의 사지 등에 고정하기 쉽다고 하는 관점에서 날개형상 바늘이 바람직하다. 날개형상 바늘로서는, 예를 들면 국제공개 공보 ＷＯ2006/123645호 팸플릿에 기재된 것을 들 수 있다.

유치침 접속튜브(35)의 일단(一端)에는 유치침(34)이 접속되어 있고, 또한 유치침 접속튜브(35)의 타단(他端)에는 채혈용 삼방 접속수단(37)이 접속되어 있다. 유치침 접속튜브(35)를 통하여 유치침(34)으로부터 채혈용 삼방 접속수단(37)에 혈액이 유통된다. 또 유치침 접속튜브(35)는 의료용의 튜브이면 특별하게 한정되지 않는다.

채혈용 시린지(36)는 대상자에게서 액밀상태로 채혈하여 수용하고 또한 압출할 수 있는 것이면 특별하게 한정되지 않고, 예를 들면 의료분야에 있어서 보통 사용되는 것을 들 수 있다.

채혈용 삼방 접속수단(37)은, 혈액이 유통 가능하며, 유치침(34)에 접속된 유치침 접속튜브(35)와 채혈용 시린지(36)와 혈액 수용용기(32)를 액밀하게 접속 가능한 구성이나 기능을 구비하고 있으면 좋다. 그러한 구성으로서는, 예를 들면 도4에 나타나 있는 바와 같이 채혈용 삼방활전(8)을 구비하는 구성을 들 수 있다. 채혈용 삼방활전(8)은, 채혈용 제1포트(81), 채혈용 제2포트(82) 및 채혈용 제3포트(83)의 3개의 접속구와, 이들 접속구를 선택적으로 통하게 하는 채혈용 콕(84)을 구비한다. 채혈용 콕(84)은, 적어도 채혈용 제1포트(81)와 채혈용 제2포트(82)를 통하게 한 자세와, 채혈용 제2포트(82)와 채혈용 제3포트(83)를 통하게 한 자세에서, 회전에 의하여 자세변화시킬 수 있다. 채혈용 삼방활전(8)으로서는, 예를 들면 상기한 골수세포 현탁용 삼방활전(6)과 같은 것을 사용할 수 있다.

본 제1실시형태에서는, 채혈용 접속수단(33)으로서, 혈액 수용용기(32)와 혈관 천자침(31)을 통하게 하는 구성과, 채혈용 삼방 접속수단(37)을 예시하였지만, 이것에 한정되는 것은 아니고 다른 구성을 채용하여도 좋다.

자기혈청 취득 디바이스(4)는 원심처리수단(41)으로 구성되어 있다. 원심처리수단(41)은, 대상자의 혈액을 수용한 혈액 수용용기(32)를 원심처리하여 상기 대상자의 혈청을 취득할 수 있는 것이면 특별하게 한정되지 않고, 예를 들면 보통 사용되는 원심분리기를 들 수 있다.

골수세포 배양 디바이스(5)는 골수세포 배양용기(51)로 구성되어 있다. 골수세포 배양용기(51)는, 상기 골수세포 현탁액을 이동시켜 골수세포를 배양하는 것이면 특별하게 한정되지 않고, 예를 들면 플라스틱제 샬레나 글라스제 샬레 등의 디시(dish), 용기 내에 고정된 글라스 플레이트, 웰 플레이트, 세포배양 시트, 세포배양 플라스크, 스피너 플라스크(spinner flask) 등을 들 수 있지만, 강성용기인 것이 바람직하다.

다음에 본 제1실시형태에 있어서의 골수세포 현탁액 수용 디바이스(2), 채혈 수용 디바이스(3), 자기혈청 취득 디바이스(4), 골수세포 배양 디바이스(5) 및 이들을 구비한 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템(1)의 작용, 자기혈청 첨가 골수세포 배양방법 및 자기혈청 첨가 배양 골수세포를 유효성분으로 하는 의약조성물의 제조방법에 대하여 설명한다.

골수세포 현탁액 수용 디바이스(2)에 있어서, 대상자로부터 채취된 골수액과 배지가 액밀하게 혼합되어서 응고 억제 처리된 골수세포 현탁액이 조제되어, 세포배양 장소인 세포조제 시설(Ｃｅｌｌ　Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ　Ｃｅｎｔｅｒ; ＣＰＣ)로 운반된다. 이하, 상세하게 설명한다.

대상자로부터 채취된 골수액은 골수액 수용 시린지(21)에 수용된다. 골수액은 대상자로부터 채취되지만, 대상자에게서 골수액을 채취하는 방법의 설명은 생략한다. 도2에 나타나 있는 바와 같이, 대상자로부터 채취된 골수세포를 포함하는 골수액을 수용한 골수액 수용 시린지(21)는, 채취 현장에서, 골수세포 현탁용 접속수단(24)인 골수세포 현탁용 삼방활전(6)의 현탁용 제1포트(61)에 접속된다. 그리고 현탁용 콕(64)을 돌려서 현탁용 제1포트(61)와 현탁용 제2포트(62)를 통하게 한 상태로 한다. 계속하여 골수액 수용 시린지(21)에 수용된 골수액이 골수액 수용 시린지(21)로부터 압출되면, 골수액은 현탁용 제1포트(61)로부터 현탁용 제2포트(62), 운반용기 튜브(26)를 통하여 골수세포 현탁액 운반용기(23)에 주입됨과 아울러, 운반용기 통기구멍(27)을 통하여 골수세포 현탁액 운반용기(23)의 내부공간으로부터 공기가 배출된다.

배지 수용 시린지(22)는, 골수액 수용 시린지(21)가 현탁용 제1포트(61)에 접속되기 전에 현탁용 제3포트(63)에 접속된다. 그리고 현탁용 콕(64)을 돌려서 현탁용 제2포트(62)와 현탁용 제3포트(63)를 통하게 한 상태로 절환한다. 계속하여 배지 수용 시린지(22)에 수용된 배지 중에서 골수액 수용 시린지(21)에 수용된 골수액에 대응하는 양의 배지가 배지 수용 시린지(22)로부터 압출되면, 배지는 현탁용 제3포트(63)로부터 현탁용 제2포트(62), 운반용기 튜브(26)를 통하여 골수세포 현탁액 운반용기(23)에 주입됨과 아울러, 운반용기 통기구멍(27)을 통하여 골수세포 현탁액 운반용기(23)의 내부공간으로부터 공기가 배출된다. 이에 따라 골수세포 현탁액 운반용기(23)에 있어서, 대상자로부터 채취된 골수액과 그 골수액의 양에 대응하는 양의 배지가 액밀하게 혼합되어서 응고 억제 처리된 골수세포 현탁액이 조제된다.

상기한 태양에서는, 배지 수용 시린지가 현탁용 제3포트(63)에 접속된 후에 골수액 수용 시린지(21)가 현탁용 제1포트(61)에 접속되고 있지만, 이들의 접속의 순서는 특별하게 한정되지 않고, 골수액 수용 시린지(21)가 현탁용 제1포트(61)에 접속된 후에 배지 수용 시린지가 현탁용 제3포트(63)에 접속되어도 좋고, 동시에 접속되어도 좋다. 또한 상기 골수액의 양에 대응하는 배지의 양은, 골수액 수용 시린지(21)에 수용된 골수액의 1.5배량 내지 6배량인 것이 바람직하고, 이를 위하여 배지 수용 시린지(22), 골수액 수용 시린지(21) 및 골수세포 현탁액 운반용기(23)의 적어도 어느 하나에 내용물의 용량을 눈대중하기 위한 눈금이 붙어 있는 것이 바람직하다.

그 후에 운반용기 튜브(26)를 열 실러나 클립에 의하여 액밀하게 실링한 후에 그 실링 장소와 현탁용 제2포트(62)의 사이에서 절단함으로써, 골수액 수용 시린지(21), 배지 수용 시린지(22) 및 골수세포 현탁용 접속수단(24)과, 골수세포 현탁액 운반용기(23)를 분리하여, 골수세포 현탁액 운반용기(23)에 수용된 골수세포 현탁액을 현탁상태로 ＣＰＣ로 운반한다.

한편 채혈 수용 디바이스(3)에 있어서, 대상자의 혈액이 혈액 수용용기(32)에 수용된다. 이하, 상세하게 설명한다.

혈관 천자침(31)을 대상자의 혈관에 찔러 채혈한다. 채혈된 혈액은, 채혈용 접속수단(33) 및 수용용기 튜브(71)를 통하여 혈액 수용용기(32)에 주입됨과 아울러, 수용용기 통기구멍(72)을 통하여 혈액 수용용기(32)의 내부공간으로부터 공기가 배출된다. 이에 따라 채혈된 혈액이 액밀하게 혈액 수용용기(32)에 수용된다.

그 후에 수용용기 튜브(71)를 열 실러나 클립에 의하여 액밀하게 실링한 후에 그 실링 장소와 채혈용 접속수단(33)과의 사이에서 절단함으로써, 혈관 천자침(31) 및 채혈용 접속수단(33)과, 대상자의 혈액을 수용한 혈액 수용용기(32)를 분리한다.

한편 상기한 채혈 수용 디바이스(3)의 다른 태양을 채용하는 경우, 유치침(34)은 대상자의 혈관을 찌른 상태에서 유치된다. 이에 따라 원하는 양의 혈액을 얻기 위하여 복수 회에 걸쳐서 대상자에게 채혈 바늘을 찌를 필요가 없다. 도4에 나타나 있는 바와 같이, 유치침(34)이 접속되어 있는 유치침 접속튜브(35)에 채혈용 삼방활전(8)의 채혈용 제1포트(81)가 접속된다. 이에 따라 유치침(34)으로부터 채혈용 삼방 접속수단(37)에 혈액이 유입 가능하게 된다. 채혈용 삼방활전(8)의 채혈용 콕(84)을 돌려서 채혈용 제1포트(81)와 채혈용 제2포트(82)를 통하게 한 상태로 한다. 이 상태에 있어서, 채혈용 시린지(36)의 채혈용 플런저(38)가 인출되어 대상자에게서 채혈된다. 이 채혈은, 시술자가 채혈용 플런저(38)를 계속하여 인출하고 있다고 하는 능동적인 동작에 의하여 계속된다.

채혈용 시린지(36)의 내부가 대상자의 혈액으로 채워지면, 채혈용 플런저(38)의 조작이 중단된다. 그리고 채혈용 삼방활전(8)의 채혈용 콕(84)이 채혈용 제2포트(82)와 채혈용 제3포트(83)를 통하게 한 상태로 절환된다. 다시 채혈용 플런저(38)가 조작되어서, 구체적으로는 채혈용 플런저(38)가 압입되어서 채혈용 시린지(36)로부터 혈액이 유출된다. 이 유출된 혈액은 채혈용 삼방활전(8)을 통하여 혈액 수용용기(32)에 유입된다. 채혈용 시린지(36)의 혈액이 전부 혈액 수용용기(32)에 주입되면 채혈용 플런저(38)의 조작이 종료된다. 혈액이 주입된 혈액 수용용기(32)는, 수용용기 튜브(71)를 열 실러나 클립에 의하여 액밀하게 실링한 후에 그 실링 장소와 채혈용 제3포트(83)와의 사이에서 절단함으로써, 유치침(34), 유치침 접속튜브(35), 채혈용 시린지(36) 및 채혈용 삼방 접속수단(37)과, 대상자의 혈액을 수용한 혈액 수용용기(32)를 분리한다.

계속하여 자기혈청 취득 디바이스(4)에 있어서 대상자의 혈액으로부터 혈청이 취득된다. 대상자의 혈액을 수용한 혈액 수용용기(32)가 원심처리수단(41)에 있어서 원심처리된 후, 상청을 회수하여 대상자의 혈청을 취득한다.

또한 골수세포 배양 디바이스(5)에 있어서, 골수세포 현탁액에 포함되는 골수세포가 배양되고, 골수세포 배양용기(51)로부터 부유세포를 포함하는 배양 상청이 제거된 후, 취득된 대상자의 혈청과 새로운 배지가 첨가되어서 더 배양된다. 이하, 상세하게 설명한다.

ＣＰＣ로 운반된 골수세포 현탁액을 골수세포 배양용기(51)로 이동하고, 이 골수세포 현탁액에 포함되는 골수세포를 소정의 배양기간 배양한다. 또 당해 소정의 배양기간은 4일 내지 7일간이 바람직하다.

배양후에 골수세포 배양용기(51)로부터 부유세포를 포함하는 배양 상청을 제거하고, 취득된 대상자의 혈청과 새로운 배지를 첨가하여 더 배양이 이루어진다.

또, ＣＰＣ로 운반된 골수세포 현탁액을 골수세포 배양용기(51)로 이동할 때에 새로운 배지 및 취득된 대상자의 혈청의 적어도 어느 하나를 첨가하여 골수세포를 소정의 배양기간 배양하여도 좋다. 상기 대상자의 혈청을 첨가하지 않고 새로운 배지를 첨가하는 경우에는, 골수액과 혼합한 배지의 양의 토털(total), 즉 골수액의 채취 현장에서 골수액과 혼합한 배지의 양과 당해 첨가하는 새로운 배지의 양과의 토털이, 골수액 수용 시린지(21)에 수용된 골수액의 4배량 내지 80배량이 되도록 첨가하는 것이 바람직하다. 또한 취득된 대상자의 혈청만을 첨가하는 경우에는, 골수액과 혼합한 배지 및 취득된 대상자의 혈청의 양의 토털, 즉 골수액의 채취 현장에서 골수액과 혼합한 배지의 양과 당해 첨가하는 취득된 대상자의 혈청의 양과의 토털이, 골수액 수용 시린지(21)에 수용된 골수액의 4배량 내지 80배량이 되도록 첨가하는 것이 바람직하다. 또한 새로운 배지 및 취득된 대상자의 혈청을 모두 첨가하는 경우에는, 골수액과 혼합한 배지 및 취득된 대상자의 혈청의 양의 토털, 즉 골수액의 채취 현장에서 골수액과 혼합한 배지의 양과 당해 첨가하는 새로운 배지의 양과 당해 첨가하는 취득된 대상자의 혈청의 양과의 토털이, 골수액 수용 시린지(21)에 수용된 골수액의 4배량 내지 80배량이 되도록 첨가하는 것이 바람직하다.

다음에 본 제1실시형태에 있어서 자기혈청 첨가 골수세포 배양방법은, 도7에 나타나 있는 바와 같이 골수세포 현탁액 조제공정(S1)과, 채혈 수용공정(S2)과, 자기혈청 취득공정(S3)과, 골수세포 배양공정(S4)과, 배양 상청 제거공정(S5)과, 자기혈청 배지 첨가공정(S6)을 구비하고 있어, 골수액을 채취 현장에서 골수액 수용 시린지(21)로부터 골수세포 현탁액 운반용기(23)로 이동하여 배지를 혼합시킴으로써 응고 억제 처리하고, 골수세포 현탁액을 골수세포 현탁액 운반용기(23)에 수용한 채 현탁상태에서 운반한 후, ＣＰＣ에 있어서 골수세포 현탁액을 골수세포 배양용기(51)로 이동하여 배양을 시작하고, 소정의 배양기간 경과 후, 부유세포를 포함하는 배양 상청을 제거하고, 골수세포 배양용기(51)내에 새로운 배지 및 대상자의 혈청을 가하여 더 배양을 하는 방법이다. 또 본 제1실시형태에 있어서의 자기혈청 첨가 골수세포 배양방법의 발명 특정사항 중에서, 상기한 본 제1실시형태에 있어서의 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템(1)에 있어서의 각 구성과 동등 또는 상당하는 구성에 관해서는 동일한 부호를 붙이고, 다시 설명하는 것을 생략한다.

골수세포 현탁액 조제공정(S1)은, 골수세포 현탁액 수용 디바이스(2)에 있어서의 공정으로서, 대상자로부터 채취된 골수세포를 포함하는 골수액과 그 골수액의 양에 대응하는 양의 배지를, 상기 골수액을 채취한 현장에서 신속하게 액밀상태로 혼합함으로써 응고 억제 처리하고, 또한 항응고약이 첨가되지 않는 골수세포 현탁액을 조제하는 공정이다. 또, 골수액의 양에 대응하는 양이 상기 골수액의 1.5배량 내지 6배량인 것이 바람직하다.

여기에서 본 발명에 있어서, 「항응고약」이란, 약물이나 약제로서 혈액성분 등의 생체성분의 응고를 방지하고 응괴형성을 예방하는 것, 예를 들면 헤파린나트륨, 헤파린칼슘 등의 헤파린, 달테파린나트륨(dalteparin sodium), 파르나파린나트륨(parnaparin sodium), 레비파린나트륨(reviparin sodium) 등의 저분자 헤파린, 메실산나파모스타트(nafamostat mesilate), 메실산가벡세이트(gabexate mesilate), 구연산, ＣＰＤ액(Ｃｉｔｒａｔｅ-Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ-Ｄｅｘｔｒｏｓｅ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ), ＡＣＤ-Ａ액(Ａｃｉｄ-Ｃｉｔｒａｔｅ-Ｄｅｘｔｒｏｓｅ-Ａ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ), 와르파린(warfarin), 쿠마린(coumarin), 디쿠마롤(dicoumarol), 펜프로쿠몬(phenprocoumon), 아세노쿠마롤(acenocoumarol), 에틸 비스쿠마세테이트(ethyl biscoumacetate), 인데인다이온 유도체(indanedione derivatives) 등을 말하지만, 본 발명에서 사용되는 세포배지와 같이, 결과적으로는 응고를 억제하지만, 원래 약물이나 약제로서 혈액성분 등의 생체성분의 응고를 방지하고 응괴형성을 예방하는 것은 아닌 것을 포함하지 않는 취지이다. 즉 「항응고약」은, 「세포배지를 제외한 항응고제」, 「배지를 제외한 항응고제」와 바꿔 쓰는 경우가 있다.

채혈 수용공정(S2)은, 채혈 수용 디바이스(3)에 있어서의 공정으로서, 대상자로부터 채취된, 항응고약이 첨가되어 있지 않은 혈액을 원심처리 가능한 혈액 수용용기(32)에 액밀상태로 수용하는 공정이다. 또, 혈액 수용용기(32)는 원심처리 가능한 강성용기인 것이 바람직하다.

자기혈청 취득공정(S3)은, 자기혈청 취득 디바이스(4)에 있어서의 공정으로서, 대상자의 혈액을 수용한 혈액 수용용기(32)를 원심처리하여 상기 대상자의 혈청을 취득하는 공정이다.

골수세포 배양공정(S4)은, 골수세포 배양 디바이스(5)에 있어서의 공정으로서, 조제한 골수세포 현탁액에 포함되는 골수세포를 골수세포 배양용기(51)에서 배양하는 공정이다. 또 골수세포 배양공정(S4)에 있어서는, 골수세포의 배양은 정치상태(靜置狀態)에서의 배양이 바람직하고, 또 상기한 바와 같이 골수세포 현탁액에 포함되는 골수세포를 4일 내지 7일간 배양하는 것이 바람직하다.

배양 상청 제거공정(S5)은, 골수세포 배양 디바이스(5)에 있어서의 공정으로서, 배양후의 골수세포가 부착된 골수세포 배양용기(51)로부터 부유세포를 포함하는 배양 상청을 제거하는 공정이다.

자기혈청 배지 첨가공정(S6)은, 골수세포 배양 디바이스(5)에 있어서의 공정으로서, 골수세포가 부착된 골수세포 배양용기(51)에 상기 취득한 상기 대상자의 혈청과 배지를 가하는 공정이다.

본 제1실시형태에 있어서의 자기혈청 첨가 골수세포 배양방법은, 도8에 나타나 있는 바와 같이 후술하는 혼합골수세포 현탁액 조제공정(S7)을 더 구비하여도 좋다. 이 경우에, 골수세포 배양공정(S4)에 있어서의 「골수세포 현탁액」은, 「혼합골수세포 현탁액」이라고 바꿔 읽을 수 있다.

혼합골수세포 현탁액 조제공정(S7)은, 골수세포 배양 디바이스(5)에 있어서의 공정으로서, 조제한 골수세포 현탁액과 배지 및/또는 상기 취득한 상기 대상자의 혈청을 혼합하여 혼합골수세포 현탁액을 조제하는 공정, 즉 골수세포 현탁액을 골수세포 배양용기(51)로 이동할 때에 새로운 배지 및 취득된 대상자의 혈청의 적어도 어느 하나를 첨가하여 혼합골수세포 현탁액을 조제하는 공정이다. 상기 대상자의 혈청을 첨가하지 않고 새로운 배지를 첨가하는 경우에는, 혼합골수세포 현탁액에 있어서의 배지의 양의 토털, 즉 골수세포 현탁액 조제공정(S1)에서 골수액과 혼합한 배지의 양과 당해 혼합골수세포 현탁액 조제공정(S7)에서 첨가하는 새로운 배지의 양과의 토털이, 골수세포 현탁액 조제공정(S1)에 있어서 대상자로부터 채취된 골수세포를 포함하는 골수액의 4배량 내지 80배량이 되도록 첨가하는 것이 바람직하다. 또한 취득된 대상자의 혈청만을 첨가하는 경우에는, 골수액과 혼합한 배지 및 취득된 대상자의 혈청의 양의 토털, 즉 골수세포 현탁액 조제공정(S1)에서 골수액과 혼합한 배지의 양과 당해 혼합골수세포 현탁액 조제공정(S7)에서 첨가하는 취득된 대상자의 혈청의 양과의 토털이, 골수세포 현탁액 조제공정(S1)에 있어서 대상자로부터 채취된 골수세포를 포함하는 골수액의 4배량 내지 80배량이 되도록 첨가하는 것이 바람직하다. 또한 새로운 배지 및 취득된 대상자의 혈청을 모두 첨가하는 경우에는, 골수액과 혼합한 배지 및 혈청의 양의 토털, 즉 골수세포 현탁액 조제공정(S1)에서 골수액과 혼합한 배지의 양과 당해 혼합골수세포 현탁액 조제공정(S7)에서 첨가하는 새로운 배지의 양과 당해 혼합골수세포 현탁액 조제공정(S7)에서 첨가하는 취득된 대상자의 혈청의 양과의 토털이, 골수세포 현탁액 조제공정(S1)에 있어서 대상자로부터 채취된 골수세포를 포함하는 골수액의 4배량 내지 80배량이 되도록 첨가하는 것이 바람직하다.

다음에 본 제1실시형태에 있어서의 자기혈청 첨가 배양 골수세포를 유효성분으로 하는 의약조성물의 제조방법은, 도10에 나타나 있는 바와 같이, 골수세포 현탁액 조제공정(S1)과, 채혈 수용공정(S2)과, 자기혈청 취득공정(S3)과, 골수세포 배양공정(S4)과, 배양 상청 제거공정(S5)과, 자기혈청 배지 첨가 배양공정(S9)을 구비하고 있어, 골수액을 채취 현장에서 골수액 수용 시린지(21)로부터 골수세포 현탁액 운반용기(23)로 이동하여 배지를 혼합시킴으로써 응고 억제 처리하고, 골수세포 현탁액을 골수세포 현탁액 운반용기(23)에 수용한 채 현탁상태에서 운반한 후, ＣＰＣ에 있어서 골수세포 현탁액을 골수세포 배양용기(51)로 이동하여 배양을 시작하고, 소정의 배양기간 경과 후, 부유세포를 포함하는 배양 상청을 제거하고, 골수세포 배양용기(51)내에 새로운 배지 및 대상자의 혈청을 가하여 더 배양을 하는 방법이다. 또 본 제1실시형태에 있어서의 자기혈청 첨가 배양 골수세포를 유효성분으로 하는 의약조성물의 제조방법의 발명 특정사항 중에서, 상기한 본 제1실시형태에 있어서의 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템(1) 및 자기혈청 첨가 골수세포 배양방법의 각 구성 및 각 발명 특정사항과 동등 또는 상당하는 구성 및 발명 특정사항에 관해서는 동일한 부호를 붙이고, 다시 설명하는 것을 생략한다.

자기혈청 배지 첨가 배양공정(S9)은, 골수세포 배양 디바이스(5)에 있어서의 공정으로서, 골수세포가 부착된 골수세포 배양용기(51)에 상기 취득한 상기 대상자의 혈청과 배지를 가하여 더 배양을 하는 공정이다.

또, 본 제1실시형태에 있어서의 자기혈청 첨가 배양 골수세포를 유효성분으로 하는 의약조성물의 제조방법은, 도11에 나타나 있는 바와 같이 상기한 혼합골수세포 현탁액 조제공정(S7)을 더 구비하여도 좋다. 이 경우에, 골수세포 배양공정(S4)에 있어서의 「골수세포 현탁액」은, 「혼합골수세포 현탁액」이라고 바꿔 읽을 수 있다.

이상과 같은 본 제1실시형태에 있어서의 골수세포 현탁액 수용 디바이스(2), 채혈 수용 디바이스(3), 자기혈청 취득 디바이스(4), 골수세포 배양 디바이스(5) 및 이들을 구비한 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템(1), 자기혈청 첨가 골수세포 배양방법 및 자기혈청 첨가 배양 골수세포를 유효성분으로 하는 의약조성물의 제조방법에 의하면, 이하와 같은 효과를 얻을 수 있다.

1.대상자로부터 채취된 골수액에 포함되는 골수세포를 액밀상태로 청결하고 또한 간편하게 응고 억제 처리할 수 있고, 골수세포를 효율적으로 취득할 수 있다.

2.상기 대상자의 혈액을 액밀상태로 청결하고 또한 간편하게 수용하고, 그 혈청을 효율적으로 취득할 수 있다.

3.자기혈청을 사용하여 대상자의 골수세포를 배양함으로써 골수세포를 효율적으로 증식시켜 재생의료에 사용할 수 있다.

4.대상자로부터 채취된 골수액에 포함되는 골수세포가 소량인 경우에도, 간편하고 또한 확실하게 증식시켜 재생의료에 사용할 수 있다.

다음에 본 발명에 관한 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템(1)의 본 제2실시형태에 대하여 상세하게 설명한다. 본 발명에 관한 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템(1)의 제2실시형태는, 항응고약을 사용하지 않고 대상자로부터 채취된 골수세포를 상기 대상자의 혈청으로 배양하기 위한 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템으로서, 대상자로부터 채취된 골수세포를 포함하는 골수액을, 채취 현장에서 상기 골수액을 수용하는 골수액 수용 시린지(21)로부터, 상기 골수액에 배지를 혼합함으로써 얻어지는 응고 억제 처리된 골수세포 현탁액을 수용하여 골수세포의 배양을 시작하는 액밀하게 실링 가능한 강성용기인 골수세포 배양 운반용기(52)로 이동하여, 상기 배지를 혼합시킴으로써 응고 억제 처리함과 아울러 상기 골수세포의 배양을 시작하고, 골수세포 배양 운반용기(52)에 수용한 채 배양상태에서 운반한 후, 소정의 배양기간 경과 후, 배양 상청을 제거하고, 세포배양 장소에 있어서 골수세포 배양 운반용기(52)내에 배지 및 상기 대상자의 혈청을 가하여 더 배양을 하는 시스템이다.

본 발명에 관한 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템(1)의 본 제2실시형태는, 채혈 수용 디바이스(3), 자기혈청 취득 디바이스(4) 및 골수세포 배양 디바이스(5)의 적어도 어느 하나의 디바이스를 구비하는 것이 바람직하고, 이들 모든 디바이스를 구비하는 것이 더 바람직하다. 또 본 제2실시형태에 있어서의 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템(1)의 구성 중에서, 상기한 제1실시형태에 있어서의 각 구성과 동등 또는 상당하는 구성에 관해서는 동일한 부호를 붙이고, 다시 설명하는 것을 생략한다.

본 제2실시형태에 있어서의 골수세포 배양 디바이스(5)는, 주로 골수액 수용 시린지(21)와, 배지 수용 시린지(22)와, 골수세포 배양 운반용기(52)와, 골수세포 현탁용 접속수단(24)으로 구성되어 있다.

골수세포 배양 운반용기(52)는, 골수액에 배지를 혼합함으로써 얻어지는 응고 억제 처리된 골수세포 현탁액을 수용하여 골수세포를 배양할 수 있고 또한 액밀하게 실링 가능한 강성용기이면 특별하게 한정되지 않는다. 그러한 구성으로서는, 예를 들면 도6에 나타나 있는 바와 같이 골수세포 배양 운반용기(52)의 상단이 개구되어 있고, 그 개구에 배양 운반용기 뚜껑(53)이 액밀하게 실링 가능한 정도로 나사 결합 되어 있고, 배양 운반용기 뚜껑(53)에는 배양 운반용기 튜브(54)와 배양 운반용기 통기구멍(55)을 구비하는 구성 등을 들 수 있다. 배양 운반용기 튜브(54)는, 배양 운반용기 뚜껑(53)을 관통하여 골수세포 현탁용 접속수단(24)과 골수세포 배양 운반용기(52)의 내부공간을 통하게 하고 있고, 배양 운반용기 통기구멍(55)은, 배양 운반용기 뚜껑(53)을 관통하여 골수세포 배양 운반용기(52)의 내부공간과 외부공간을 통하게 하고 있다. 배양 운반용기 통기구멍(55)의 선단에는 균을 통과시키지 않는 배양 운반용기 통기구멍 필터(56)가 설치되어 있다. 배양 운반용기 튜브(54)를 구성하는 소재 및 배양 운반용기 통기구멍 필터(56)는, 각각 운반용기 튜브(26) 및 운반용기 통기구멍 필터(28)와 같은 것을 사용할 수 있다.

본 제2실시형태에 있어서, 골수세포 현탁용 접속수단(24)은, 골수액과 배지가 유통 가능하며 골수액 수용 시린지(21)와 배지 수용 시린지(22)와 골수세포 배양 운반용기(52)를 액밀하게 접속 가능한 구성이나 기능을 구비하고 있으면 좋다. 그러한 구성으로서는, 예를 들면 도6에 나타나 있는 바와 같이 골수세포 현탁용 삼방활전(6)을 구비하는 구성을 들 수 있다. 또 본 제2실시형태에 있어서의 골수세포 현탁용 삼방활전(6)의 구성은, 본 제1실시형태와 같다.

다음에 본 제2실시형태에 있어서의 골수세포 배양 디바이스(5), 채혈 수용 디바이스(3), 자기혈청 취득 디바이스(4) 및 이들을 구비한 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템(1)의 작용, 자기혈청 첨가 골수세포 배양방법 및 자기혈청 첨가 배양 골수세포를 유효성분으로 하는 의약조성물의 제조방법에 대하여 설명한다.

골수세포 배양 디바이스(5)에 있어서, 대상자로부터 채취된 골수액과 배지가 액밀하게 혼합되어서 응고 억제 처리된 골수세포 현탁액이 조제되어, 이것에 포함되는 골수세포가 배양됨과 아울러 ＣＰＣ로 운반된다. 이하, 상세하게 설명한다.

상기 응고 억제 처리되어서 조제된 골수세포 현탁액의 골수세포 배양 운반용기(52)에 대한 수용은, 제1실시형태에 있어서 골수세포 현탁액을 골수세포 현탁액 운반용기(23)에 수용하는 경우와 마찬가지이다. 또 본 제2실시형태에 있어서는, 골수세포 배양 운반용기(52)가 배양을 시작함과 아울러 배양된 골수세포를 부착시킬 수 있는 구성을 구비하고 있기 때문에, 골수세포 현탁액을 조제하고 또한 이것에 포함되는 골수세포의 배양이 시작되고, 배양된 골수세포가 골수세포 배양 운반용기(52)에 부착된다.

즉 골수세포 배양 운반용기(52)는, 배양을 시작함과 아울러 배양된 골수세포를 부착시킬 수 있는 용기이면 특별하게 한정되지 않지만, 세포배양 플라스크인 것이 바람직하다. 또 제2실시형태에 있어서 배지 수용 시린지(22)에 수용된 배지의 양은, 골수액 수용 시린지(21)에 수용된 골수액의 2배량 내지 4배량인 것이 바람직하다.

골수세포 배양 운반용기(52)에 수용된 골수세포는, 배양상태에서 ＣＰＣ로 운반된 후에 소정의 배양기간 경과 후, 상기 골수세포 배양 운반용기(52)로부터 부유세포를 포함하는 배양 상청이 제거된 후에, 당해 대상자의 자기혈청과 새로운 배지가 첨가되어서 더 배양된다. 또 본 제2실시형태에 있어서의 채혈 수용 디바이스(3) 및 자기혈청 취득 디바이스(4)에 관한 작용은 제1실시형태와 같다. 또한 배양상태에서 ＣＰＣ로 운반된 후의 골수세포의 배양은 정치상태에서의 배양이 바람직하고, 당해 소정의 배양기간은 4일 내지 7일간이 바람직하다.

다음에 본 제2실시형태에 있어서의 자기혈청 첨가 골수세포 배양방법은, 항응고약을 사용하지 않고 대상자로부터 채취된 골수세포를 그대로 배양하고, 그 후에 상기 대상자의 혈청을 사용하여 더 배양하는 방법이다. 구체적으로는, 도9에 나타나 있는 바와 같이 골수세포 현탁액 조제공정(S1)과, 골수세포 배양 운반공정(S8)과, 채혈 수용공정(S2)과, 자기혈청 취득공정(S3)과, 배양 상청 제거공정(S5)과, 자기혈청 배지 첨가공정(S6)을 구비하고 있어, 골수액을 채취 현장에서 골수액 수용 시린지(21)로부터 골수세포 배양 운반용기(52)로 이동하여 배지를 혼합시킴으로써 응고 억제 처리함과 아울러 골수세포의 배양을 시작하고, 골수세포 배양 운반용기(52)에 수용한 채 배양상태에서 운반한 후에, 소정의 배양기간 경과 후, 부유세포를 포함하는 배양 상청을 제거하고, ＣＰＣ에 있어서 골수세포 배양 운반용기(52)내에 새로운 배지 및 대상자의 혈청을 가하여 더 배양을 하는 방법이다. 또 본 제2실시형태에 있어서의 자기혈청 첨가 골수세포 배양방법의 발명 특정사항 중에서, 상기한 제1실시형태 혹은 본 제2실시형태에 있어서의 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템(1), 자기혈청 첨가 골수세포 배양방법 및 자기혈청 첨가 배양 골수세포를 유효성분으로 하는 의약조성물의 제조방법의 각 구성 및 각 발명 특정사항과 동등 또는 상당하는 구성 및 발명 특정사항에 관해서는 동일한 부호를 붙이고, 다시 설명하는 것을 생략한다.

골수세포 배양 운반공정(S8)은, 골수세포 배양 디바이스(5)에 있어서의 공정으로서, 조제한 골수세포 현탁액에 포함되는 골수세포를 골수세포 배양 운반용기(52)에서 배양하는 공정으로, 원격지에서 조제한 골수세포 현탁액을 골수세포 배양 운반용기(52)에 수용하고 그대로 배양상태에서 운반하는 공정이다. 또한 상기한 바와 같이, 골수세포 배양 운반용기(52)는 세포배양 플라스크인 것이 바람직하고, 또한 골수세포 현탁액 조제공정(S1)에 있어서 골수액의 양에 대응하는 배지의 양이 골수액의 2배량 내지 4배량인 것이 바람직하고, 또한 골수세포 배양 운반공정(S8)에 있어서 골수세포를 골수세포 배양 운반용기(52)에서 4일 내지 7일간 배양하는 것이 바람직하다.

다음에 본 제2실시형태에 있어서의 자기혈청 첨가 배양 골수세포를 유효성분으로 하는 의약조성물의 제조방법은, 항응고약을 사용하지 않고 대상자로부터 채취된 골수세포를 그대로 배양하고, 그 후에 상기 대상자의 혈청을 사용하여 더 배양하는 방법이다. 구체적으로는, 도12에 나타나 있는 바와 같이 골수세포 현탁액 조제공정(S1)과, 골수세포 배양 운반공정(S8)과, 채혈 수용공정(S2)과, 자기혈청 취득공정(S3)과, 배양 상청 제거공정(S5)과, 자기혈청 배지 첨가 배양공정(S9)을 구비하고 있어, 골수액을 채취 현장에서 골수액 수용 시린지(21)로부터 골수세포 배양 운반용기(52)로 이동하여 배지를 혼합시킴으로써 응고 억제 처리함과 아울러 골수세포의 배양을 시작하고, 골수세포 배양 운반용기(52)에 수용한 채 배양상태에서 운반한 후에, 소정의 배양기간 경과 후, 부유세포를 포함하는 배양 상청을 제거하고, ＣＰＣ에 있어서 골수세포 배양 운반용기(52)내에 새로운 배지 및 대상자의 혈청을 가하여 더 배양을 하는 방법이다. 또 본 제2실시형태에 있어서의 자기혈청 첨가 배양 골수세포를 유효성분으로 하는 의약조성물의 제조방법의 발명 특정사항 중에서, 상기한 제1실시형태 혹은 본 제2실시형태에 있어서의 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템(1) 및 자기혈청 첨가 골수세포 배양방법의 각 구성 및 각 발명 특정사항과 동등 또는 상당하는 구성 및 발명 특정사항에 관해서는 동일한 부호를 붙이고, 다시 설명하는 것을 생략한다.

이상과 같은 본 제2실시형태에 있어서의 골수세포 배양 디바이스(5), 채혈 수용 디바이스(3), 자기혈청 취득 디바이스(4) 및 이들을 구비한 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템(1), 자기혈청 첨가 골수세포 배양방법 및 자기혈청 첨가 배양 골수세포를 유효성분으로 하는 의약조성물의 제조방법에 의하면, 이하와 같은 효과를 얻을 수 있다.

1.대상자로부터 채취된 골수액에 포함되는 골수세포를 액밀상태로 청결하고 또한 간편하게 응고 억제 처리할 수 있고, 골수세포를 효율적으로 취득할 수 있다.

2.상기 대상자의 혈액을 액밀상태로 청결하고 또한 간편하게 수용하고, 그 혈청을 효율적으로 취득할 수 있다.

3.자기혈청을 사용하여 대상자의 골수세포를 배양함으로써 골수세포를 효율적으로 증식시켜 재생의료에 사용할 수 있다.

4.대상자로부터 채취된 골수액에 포함되는 골수세포가 소량인 경우에도, 간편하고 또한 확실하게 증식시켜 재생의료에 사용할 수 있다.

5.원격지에 있어서 대상자로부터 채취된 골수액에 포함되는 골수세포여도, 확실하게 배양하고 증식시켜 재생의료에 사용할 수 있다.

1 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템
2 골수세포 현탁액 수용 디바이스
3 채혈 수용 디바이스
4 자기혈청 취득 디바이스
5 골수세포 배양 디바이스
6 골수세포 현탁용 삼방활전
7 수용용기 뚜껑
8 채혈용 삼방활전
21 골수액 수용 시린지
22 배지 수용 시린지
23 골수세포 현탁액 운반용기
24 골수세포 현탁용 접속수단
25 운반용기 뚜껑
26 운반용기 튜브
27 운반용기 통기구멍
28 운반용기 통기구멍 필터
31 혈관 천자침
32 혈액 수용용기
33 채혈용 접속수단
34 유치침
35 유치침 접속튜브
36 채혈용 시린지
37 채혈용 삼방 접속수단
38 채혈용 플런저
41 원심수단
51 골수세포 배양용기
52 골수세포 배양 운반용기
53 배양 운반용기 뚜껑
61 현탁용 제1포트
62 현탁용 제2포트
63 현탁용 제3포트
64 현탁용 콕
71 수용용기 튜브
72 수용용기 통기구멍
73 수용용기 통기구멍 필터
81 채혈용 제1포트
82 채혈용 제2포트
83 채혈용 제3포트
84 채혈용 콕
S1 골수세포 현탁액 조제공정
S2 채혈 수용공정
S3 자기혈청 취득공정
S4 골수세포 배양공정
S5 배양 상청 제거공정
S6 자기혈청 배지 첨가공정
S7 혼합골수세포 현탁액 조제공정
S8 골수세포 배양 운반공정
S9 자기혈청 배지 첨가 배양공정

Claims (26)

1. 항응고약(抗凝固藥)을 사용하지 않고 대상자(對象者)로부터 채취된 골수세포를 상기 대상자의 혈청으로 배양하기 위한 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템(自己血淸 添加 骨髓細胞 培養 system)으로서,
   대상자로부터 채취된 골수세포를 포함하는 골수액과 배지(培地)를 채취 현장에서 액밀상태로 혼합하는 디바이스로서, 상기 골수액과 상기 배지를 혼합시킴으로써 얻어지는 응고 억제 처리된 골수세포 현탁액을 수용하는 골수세포 현탁액 수용 디바이스
   를 구비하는 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템.
   
2. 제1항에 있어서,
   상기 골수세포 현탁액 수용 디바이스로부터 이동된 상기 골수세포 현탁액에 포함되는 골수세포를 배양하는 골수세포 배양 디바이스
   를 구비하는 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템.
   
3. 제2항에 있어서,
   하기 (a), (b), (c) 및 (d)의 적어도 어느 하나의 디바이스를 구비하는 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템;
   (a)골수액 수용 시린지(骨髓液收容syringe)와, 배지를 수용하는 배지 수용 시린지와, 상기 골수세포 현탁액을 수용하는 골수세포 현탁액 운반용기와, 상기 골수액과 상기 배지가 유통(流通) 가능하며 상기 골수액 수용 시린지와 상기 배지 수용 시린지와 상기 골수세포 현탁액 운반용기를 액밀하게 접속 가능한 골수세포 현탁용 접속수단을 구비하는 골수세포 현탁액 수용 디바이스,
   (b)상기 대상자의 혈관을 찌르는 혈관 천자침(血管穿刺針)과, 상기 대상자의 혈액을 수용해 액밀하게 실링 가능하며 원심처리 가능한 혈액 수용용기와, 혈액이 유통 가능하며 상기 혈관 천자침과 상기 혈액 수용용기를 액밀하게 접속 가능한 채혈용 접속수단을 구비하는 채혈 수용 디바이스,
   (c)상기 대상자의 혈액을 수용한 상기 혈액 수용용기를 원심처리하여 상기 대상자의 혈청을 취득하는 원심수단을 구비하는 자기혈청 취득 디바이스,
   (d)골수세포 배양용기를 구비하는 골수세포 배양 디바이스.
   
4. 제3항에 있어서,
   골수세포 현탁액 운반용기가 하기 (e) 및 (f)를 구비하고, 또한 골수세포 현탁용 접속수단이 하기 (g)를 구비하는 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템;
   (e)상기 골수세포 현탁용 접속수단과 상기 골수세포 현탁액 운반용기의 내부공간을 통하게 하는 운반용기 튜브,
   (f)상기 골수세포 현탁액 운반용기의 내부공간과 외부공간을 통하게 함과 아울러 선단(先端)에는 균을 통과시키지 않는 운반용기 통기구멍 필터가 설치되어 있는 운반용기 통기구멍,
   (g)현탁용 제1포트, 현탁용 제2포트 및 현탁용 제3포트의 3개의 접속구(接續口)와, 이들 접속구를 선택적으로 통하게 하는 현탁용 콕을 구비하는 골수세포 현탁용 삼방활전(骨髓細胞 懸濁用 三方活栓).
   
5. 제1항에 있어서,
   상기 골수세포 현탁액 수용 디바이스가, 상기 골수세포 현탁액을 수용하여 골수세포의 배양을 하는 골수세포 배양 디바이스인 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템.
   
6. 제5항에 있어서,
   하기 (i), (ｉｉ) 및 (ｉｉｉ)의 적어도 어느 하나의 디바이스를 구비하는 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템;
   (i)골수액 수용 시린지와, 배지를 수용하는 배지 수용 시린지와, 골수세포 배양 운반용기와, 상기 골수액과 상기 배지가 유통 가능하며 상기 골수액 수용 시린지와 상기 배지 수용 시린지와 상기 골수세포 배양 운반용기를 액밀하게 접속 가능한 골수세포 현탁용 접속수단을 구비하는 골수세포 배양 디바이스,
   (ｉｉ)상기 대상자의 혈관을 찌르는 혈관 천자침과, 상기 대상자의 혈액을 수용해 액밀하게 실링 가능하며 원심처리 가능한 혈액 수용용기와, 혈액이 유통 가능하며 상기 혈관 천자침과 상기 혈액 수용용기를 액밀하게 접속 가능한 채혈용 접속수단을 구비하는 채혈 수용 디바이스,
   (ｉｉｉ)상기 대상자의 혈액을 수용한 상기 혈액 수용용기를 원심처리하여 상기 대상자의 혈청을 취득하는 원심수단을 구비하는 자기혈청 취득 디바이스.
   
7. 제6항에 있어서,
   골수세포 배양 운반용기가 하기 (ｉｖ) 및 (ｖ)를 구비하고, 또한 골수세포 현탁용 접속수단이 하기 (ｖｉ)을 구비하는 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템;
   (ｉｖ)골수세포 현탁용 접속수단과 상기 골수세포 배양 운반용기의 내부공간을 통하게 하는 배양 운반용기 튜브,
   (ｖ)상기 골수세포 배양 운반용기의 내부공간과 외부공간을 통하게 함과 아울러 선단에는 균을 통과시키지 않는 배양 운반용기 통기구멍 필터가 설치되어 있는 배양 운반용기 통기구멍,
   (ｖｉ)현탁용 제1포트, 현탁용 제2포트 및 현탁용 제3포트의 3개의 접속구와, 이들 접속구를 선택적으로 통하게 하는 현탁용 콕을 구비하는 골수세포 현탁용 삼방활전.
   
8. 제3항, 제4항, 제6항 및 제7항 중의 어느 하나의 항에 있어서,
   혈액 수용용기가 하기 (ｖｉｉ) 및 (ｖｉｉｉ)을 구비하는 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템;
   (ｖｉｉ)상기 채혈용 접속수단과 상기 혈액 수용용기의 내부공간을 통하게 하는 수용용기 튜브,
   (ｖｉｉｉ)상기 혈액 수용용기의 내부공간과 외부공간을 통하게 함과 아울러 선단에는 균을 통과시키지 않는 수용용기 통기구멍 필터가 설치되어 있는 수용용기 통기구멍.
   
9. 제3항, 제4항, 제6항 및 제7항 중의 어느 하나의 항에 있어서,
   채혈 수용 디바이스가, 상기 대상자의 혈관을 찌른 상태를 유지 가능한 채혈 바늘인 유치침과, 상기 유치침에 접속된 유치침 접속튜브와, 상기 대상자의 혈액을 수용해 액밀하게 실링 가능하며 원심처리 가능함과 아울러 하기 (ｉｘ) 및 (ｘ)을 구비하는 혈액 수용용기와, 상기 대상자에게서 액밀상태로 채혈하여 혈액을 수용 가능하며 압출 가능한 채혈용 시린지와, 혈액이 유통 가능하며 상기 유치침에 접속된 유치침 접속튜브와 상기 채혈용 시린지와 상기 혈액 수용용기를 액밀하게 접속 가능함과 아울러 하기 (ｘｉ)을 구비하는 채혈용 삼방 접속수단을 구비하는 채혈 수용 디바이스인 자기혈청 첨가 골수세포 배양 시스템;
   (ｉｘ)상기 채혈용 삼방 접속수단과 상기 혈액 수용용기의 내부공간을 통하게 하는 수용용기 튜브,
   (ｘ)상기 혈액 수용용기의 내부공간과 외부공간을 통하게 함과 아울러 선단에는 균을 통과시키지 않는 수용용기 통기구멍 필터가 설치되어 있는 수용용기 통기구멍,
   (ｘｉ)채혈용 제1포트, 채혈용 제2포트 및 채혈용 제3포트의 3개의 접속구와, 이들 접속구를 선택적으로 통하게 하는 채혈용 콕을 구비하는 채혈용 삼방활전.
   
10. 항응고약을 사용하지 않고 대상자로부터 채취된 골수세포를 상기 대상자의 혈청으로 배양하는 방법으로서,
    상기 대상자로부터 채취된 골수세포를 포함하는 골수액과 상기 골수액의 양에 대응하는 양의 배지를 상기 골수액의 채취 현장에서 액밀상태로 혼합함으로써 응고 억제 처리하고, 또한 항응고약이 첨가되지 않는 골수세포 현탁액을 조제하는 골수세포 현탁액 조제공정과,
    상기 대상자로부터 채취된, 항응고약이 첨가되어 있지 않은 혈액을 원심처리 가능한 혈액 수용용기에 액밀상태로 수용하는 채혈 수용공정과,
    상기 대상자의 혈액을 수용한 상기 혈액 수용용기를 원심처리하여 상기 대상자의 혈청을 취득하는 자기혈청 취득공정
    을 구비하는 상기 방법.
    
11. 제10항에 있어서,
    상기 조제한 골수세포 현탁액에 포함되는 골수세포를 골수세포 배양용기에서 배양하는 골수세포 배양공정과,
    상기 배양후의 골수세포가 부착된 상기 골수세포 배양용기로부터 부유세포를 포함하는 배양 상청(培養上淸)을 제거하는 배양 상청 제거공정과,
    상기 골수세포가 부착된 상기 골수세포 배양용기에 상기 취득한 상기 대상자의 혈청과 배지를 가하는 자기혈청 배지 첨가공정
    을 구비하는 상기 방법.
    
12. 제10항에 있어서,
    상기 조제한 골수세포 현탁액과 배지 및/또는 상기 취득한 상기 대상자의 혈청을 혼합하여 혼합골수세포 현탁액을 조제하는 혼합골수세포 현탁액 조제공정과,
    상기 조제한 혼합골수세포 현탁액에 포함되는 골수세포를 골수세포 배양용기에서 배양하는 골수세포 배양공정과,
    상기 배양후의 골수세포가 부착된 상기 골수세포 배양용기로부터 부유세포를 포함하는 배양 상청을 제거하는 배양 상청 제거공정과,
    상기 골수세포가 부착된 상기 골수세포 배양용기에 상기 취득한 상기 대상자의 혈청과 배지를 가하는 자기혈청 배지 첨가공정
    을 구비하는 상기 방법.
    
13. 제10항에 있어서,
    상기 골수세포 현탁액 조제공정에 있어서, 상기 골수액과 상기 배지의 혼합이 액밀상태의 골수세포 배양 운반용기중에서 이루어지는 것으로서,
    상기 조제한 골수세포 현탁액에 포함되는 골수세포를 상기 골수세포 배양 운반용기에서 배양시키면서 세포배양 장소로 운반하는 골수세포 배양 운반공정과,
    상기 배양후의 골수세포가 부착된 상기 골수세포 배양 운반용기로부터 부유세포를 포함하는 배양 상청을 제거하는 배양 상청 제거공정과,
    상기 골수세포가 부착된 상기 골수세포 배양 운반용기에 상기 대상자의 혈청과 배지를 가하는 자기혈청 배지 첨가공정
    을 구비하는 상기 방법.
    
14. 제10항에 있어서,
    상기 골수액의 양에 대응하는 양이 상기 골수액의 1.5배량 내지 6배량인 상기 방법.
    
15. 항응고약을 사용하지 않고 대상자로부터 채취되어 상기 대상자의 혈청으로 배양한 골수세포를 유효성분으로 하는 의약조성물을 제조하는 방법으로서,
    제10항 내지 제14항 중의 어느 하나의 항에 기재된 방법에 의하여 골수세포를 배양하는 공정
    을 구비하는 상기 방법.
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