KR101325272B1 - 인돌 화합물을 포함하는 약제학적 조성물 - Google Patents

인돌 화합물을 포함하는 약제학적 조성물 Download PDF

Info

Publication number
KR101325272B1
KR101325272B1 KR1020100104175A KR20100104175A KR101325272B1 KR 101325272 B1 KR101325272 B1 KR 101325272B1 KR 1020100104175 A KR1020100104175 A KR 1020100104175A KR 20100104175 A KR20100104175 A KR 20100104175A KR 101325272 B1 KR101325272 B1 KR 101325272B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
alkyl
formula
atoms
compound
halogen
Prior art date
Application number
KR1020100104175A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20110046321A (ko
Inventor
김순하
김형진
박희술
구선영
곽효신
박두희
김효수
조현재
김지현
김주영
박광민
Original Assignee
주식회사 엘지생명과학
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 주식회사 엘지생명과학 filed Critical 주식회사 엘지생명과학
Priority to KR1020100104175A priority Critical patent/KR101325272B1/ko
Publication of KR20110046321A publication Critical patent/KR20110046321A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101325272B1 publication Critical patent/KR101325272B1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/54—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one sulfur as the ring hetero atoms, e.g. sulthiame
    • A61K31/541—Non-condensed thiazines containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
    • A61K31/404—Indoles, e.g. pindolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4164—1,3-Diazoles
    • A61K31/4184—1,3-Diazoles condensed with carbocyclic rings, e.g. benzimidazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/425—Thiazoles
    • A61K31/427—Thiazoles not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/496—Non-condensed piperazines containing further heterocyclic rings, e.g. rifampin, thiothixene or sparfloxacin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/4965—Non-condensed pyrazines
    • A61K31/497—Non-condensed pyrazines containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/49—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds
    • A61K8/4906—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds with one nitrogen as the only hetero atom
    • A61K8/4913—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds with one nitrogen as the only hetero atom having five membered rings, e.g. pyrrolidone carboxylic acid
    • A61K8/492—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing heterocyclic compounds with one nitrogen as the only hetero atom having five membered rings, e.g. pyrrolidone carboxylic acid having condensed rings, e.g. indol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/18—Antioxidants, e.g. antiradicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/08—Plasma substitutes; Perfusion solutions; Dialytics or haemodialytics; Drugs for electrolytic or acid-base disorders, e.g. hypovolemic shock
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/06—Antiarrhythmics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D413/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/40—Chemical, physico-chemical or functional or structural properties of particular ingredients
    • A61K2800/52—Stabilizers
    • A61K2800/522—Antioxidants; Radical scavengers

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Pulmonology (AREA)

Abstract

본 발명은 하기 화학식 (1), 화학식 (2) 또는 화학식 (3)의 화합물을 포함하는, 산화 스트레스, 미토콘드리아 비기능, 저산소 손상, 세포괴사 및/또는 허혈성 재관류 손상에 관련된 질병의 예방 및 치료용 약제학적 조성물 및 항산화 효과를 가지는 화장품 조성물에 관한 것이다.
[화학식 1]
Figure 112010068982648-pat00018

[화학식 2]
Figure 112010068982648-pat00019

[화학식 3]
Figure 112010068982648-pat00020

상기 화학식 (1), 화학식 (2) 및 화학식 (3)에서 각 치환기는 명세서에서 정의한 바와 같다.

Description

인돌 화합물을 포함하는 약제학적 조성물{PHARMACEUTICAL COMPOSITION COMPRISING INDOLE COMPOUND}
본 발명은 인돌 화합물을 포함하는, 산화 스트레스, 미토콘드리아 비기능, 저산소 손상, 세포괴사 및/또는 허혈성 재관류 손상에 관련된 질병의 예방 및 치료용 약제학적 조성물, 및 인돌 화합물을 포함하며 항산화 효과를 가지는 화장품 조성물에 관한 것이다.
인간을 포함한 생물은 호흡이라는 과정을 통하여 에너지를 얻고 신진 대사를 하는 과정에서 흡입된 산소의 약 2%를 “산소독”이라 불리는 활성산소(Reactive Oxygen Species, ROS)로 변환시켜 지니고 있게 된다. 활성 산소는 자유 래디칼(Free Radical; 유리기의 전자를 가지는 원자나 분자의 총칭)을 가진 산소를 의미하며 광범위하게는 리피드 퍼옥사이드(lipid peroxide), 리피드 퍼옥시 래디칼(lipid peroxy radical), 퍼옥시니트라이트(peroxynitrite) 등이 포함된다. 이러한 활성산소는 불안정한 성격을 띠고 있으며, 따라서 주위의 물질과 반응성이 아주 강해 세포 내 단백질이나 지질분자는 물론이고 유전 정보를 함유한 DNA에까지도 산화적 손상을 입히며 결과적으로는 세포에 치명적인 피해를 입히는 것으로 알려져 있다. 반면, 대식세포(macrophage)나 중성구(neutrophil)와 같은 면역계 세포에 있어서는 오히려 활성산소의 생성을 유발시킴으로써 외부로부터 침입한 병원균을 죽이는 유용한 역할도 하고 있다. 그러나 이러한 경우와 최근 새롭게 인식되고 있는 활성산소의 세포 내 신호전달에 있어서의 중요한 역할 수행을 제외하고는 대개의 경우, 전술한 바와 같이 활성산소는 세포에 여러 가지 손상을 유발해 생명체에 해를 주는 것으로 일반적으로 인식되고 있다. 그러므로 이러한 경우에 대비하여, 세포 자신도 항산화제 성분(예로 비타민 C, 비타민 E, 글루타티온(glutathione)과 같은 작은 펩티드(small peptide))이나 항산화 효소(예로 카탈라아제(catalase), 슈퍼옥사이드 디스뮤타제 (superoxide dismutase, SOD), 글루타티온-의존성 퍼옥시다아제(glutathione-dependent peroxidase, GPX) 등)을 가지고 있어 “산소독”으로부터 세포를 보호하고 있다.
지금까지 알려진 활성산소(ROS)나 항산화효소(antioxidant enzyme)가 관여되는 질병이나 대사과정의 예를 들어보면 다음과 같다.
1. 인슐린 의존성 당뇨병의 경우는 ROS의 이상 발현으로 말미암아 췌장 베타-세포 (pancreatic beta-cell)가 손상되어 발생한다.
2. 현재 임상적으로 많은 관심을 갖는 다운증후군은 21번 염색체의 이상으로 초래됨이 알려져 있는데, 이 경우 21번 염색체에 위치하고 있는 SOD (superoxide dismutase)라고 하는 항산화효소가 비정상적으로 발현된다.
3. 조로증 (progeria)의 경우엔 환자 세포에서 측정되는 항산화 효소 (catalase, glutathione-dependent peroxidase)가 낮은 효소 활성을 보인다.
4. 정상세포가 암세포화 되는 과정에 있어서도, 여러 가지 암유발 물질 투여 혹은 조사시 세포에서 ROS가 왕성하게 생성된다.
5. 그 밖에도 ROS는 동맥경화, 알쯔하이머병, 허혈성 질환 등에 관여하는 것으로 알려져 있다.
정상적인 세포에서도 대사과정 중 어느 정도의 자유 래디칼과 기타 활성 산소 및 과산화물이 생성되고 있으나, 생체 내에서는 이들에 대한 방어기구로서 슈퍼옥사이드 디스뮤타제 (SOD), 카탈라아제, 퍼옥시다아제 등의 항산화 효소와 함께 비타민 E, 비타민 C, 글루타티온, 유비퀴논 (ubiquinone), 요산 등과 같은 항산화 물질이 존재하여 스스로를 보호 하고 있다. 그러나 이와 같은 생체방어기구에 이상이 초래되거나 각종 물리적, 화학적 요인들에 의하여 활성산소의 생성이 생체 방어계의 용량을 초과하게 될 경우 산화적 스트레스 (oxidative stress)가 야기된다. 만약 사람의 질환이 생체 내의 산화적 스트레스와 항산화성 방어 기전의 불균형과 관계가 있으면, 이론적으로 항산화성 물질을 추가하면 산화성 피해를 제한하거나 질환들의 추가 진행을 제한할 수가 있는 것이다. 따라서 이와 같은 활성 산소를 소거할 수 있는 화합물 (free radical scavengers)또는 과산화물 생성 억제물질과 같은 항산화성 생체 기능물질들은 현재 고분자, 식품, 화장품 등 여러 분야에서 널리 사용되고 있으며, 최근 여러 질병과 관련된 생리현상에서 활성산소가 관여한다는 사실이 밝혀짐에 따라서 이들 산화물들에 기인하는 노화 및 각종 질환의 억제 또는 치료제로서 기대되며, 이를 이용한 치료제의 개발도 점차 관심이 증가하는 추세에 있고 실제로 미국의 경우 건강 보조 식품으로 인기리에 판매되고 있다.
산화적 스트레스가 노화를 비롯하여 각종 질환을 일으키는 중요한 원인임이 입증됨으로써 활성산소 소거활성을 갖는 항산화성 생체 기능 물질의 노화 억제 및 질환의 치료제로서 가능성이 크게 부각되고 있어, 산화적 스트레스에 의한 노화 및 각종 질병의 치료제 기능을 지닐 수 있는 새로운 항산화성 생체기능물질 개발이 요구되고 있다.
또한 많은 항산화제들이 있지만 대부분이 미토콘드리아에까지 효율적으로 전달되지 않아서 그 효능이 미약하거나 잘 나타나지 않고 있으므로 항산화제로써 미토콘드리아에까지 전달되는 것은 상기 명시된 여러 질환을 치료하는 데 있어서 아주 중요하다고 볼 수 있다. Mito Q와 같은 화합물의 경우도 마찬가지로 coenzyme Q10을 미토콘드리아까지 타겟팅 (targeting)되는 펩티드와 컨쥬게이션 (conjugation)을 시켜서 치료제로써의 가능성을 열어 주었다.
한편, 이러한 산화 스트레스는 허혈성 재관류 손상의 주 작용기전으로 보고되어 있다. 허혈성 질환은 절제술, 장기 이식 그리고 색전술 및 심근경색이나 뇌졸중 등을 포함한다.
본 발명은 산화 스트레스, 미토콘드리아 비기능, 저산소 손상, 세포괴사 및/또는 허혈성 재관류 손상에 관련된 질병의 예방 및 치료용으로 유용한 약제학적 조성물, 및 항산화 효과를 가지는 화장품 조성물을 제공하는 것을 그 기술적 과제로 한다.
본 발명은, 활성성분으로 치료학적 유효량의 하기 화학식 (1), 화학식 (2) 또는 화학식 (3) 의 화합물, 그의 약제학적으로 허용되는 염 또는 그의 이성체, 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는, 산화적 스트레스와 관련된 질환의 예방 및 치료용 약제학적 조성물을 제공한다:
[화학식 1]
Figure 112010068982648-pat00001
상기 화학식 1에서 각 치환기는 국제출원공개 WO 2009/025477에서 구체적으로 정의되어 있으며, 다음과 같다:
상기 화학식 1에서,
na은 0 내지 3의 수이고,
Aa는 각각 N, O 및 S 원자 중에서 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 포함하는 5원 헤테로아릴 또는 헤테로사이클을 나타내며,
R1a은 R5a-Xa-Ba-X`a- 이고,
Ba는 직접결합을 나타내거나, 각각 N, O 및 S 원자 중에서 선택된 1 내지 4개의 헤테로원자를 포함하는 3 내지 10원 헤테로사이클 또는 헤테로아릴을 나타내며,　
Xa 및 X`a는 각각 독립적으로 직접결합을 나타내거나, -NR6a-, -CO-, -CONR6a-, -CO2-, -OC(O)-, -S(O)ma-, -O-(CH2)ma-, -(CH2)ma-O-, -(CH2)ma-, -NR6aCO-, -(R6aO)2P(O)- 및 -NHCO2- 로 이루어진 그룹에서 선택되고, ma은 0 내지 3의 수이며, R6a는 수소, 알킬 또는 사이클로알킬을 나타내고,
R5a는 수소, 니트릴, 하이드록시, 알킬, 알콕시, 사이클로알킬 또는 아릴을 나타내거나, 각각 N, O 및 S 원자 중에서 선택된 1 또는 3개의 헤테로원자를 포함하며 임의로 옥소 또는 알킬에 의해 치환된 단일 또는 융합환의 3 내지 10원 헤테로사이클 또는 헤테로아릴을 나타내거나,
R5a 및 R6a는 함께 결합되어 4 내지 8원 환을 형성할 수 있으며,
R2a는 -(CR8aR9a)pa-Ya-R7a을 나타내고,
pa는 0 내지 2의 수이며,
R8a 및 R9a는 각각 독립적으로 수소 또는 알킬을 나타내거나, 함께 결합되어 4 내지 8원 환을 형성할 수 있고,
Ya는 직접결합을 나타내거나, -O-, -S-, -NR6a-, -NR6aC(O)-, -CO2-, -C(O)-, -C(O)NR6a-, -S(O)qa-, 및 -S(O)qaNR6a-로 이루어진 그룹에서 선택되며, qa는 0 내지 2의 수이고,
R7a은 수소, 할로겐, 시아노, 하이드록시, 니트로, 알킬, 사이클로알킬 또는 아릴을 나타내거나, 각각 N, S 및 O 중에서 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 포함하며 임의로 옥소를 포함하는 3 내지 10원 헤테로사이클 또는 헤테로아릴을 나타내며,
R3a는 수소, 알킬, -(CH2)qa-사이클로알킬 또는 -(CH2)qa-헤테로사이클을 나타내고,
R4a는 -(CH2)pa-Da-R10a을 나타내며,
Da는 직접결합을 나타내거나, 임의로 옥소를 포함하는 사이클로알킬을 나타내거나, 아릴을 나타내거나, 각각 N, S 및 O 중에서 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 포함하는 3 내지 10원 헤테로사이클 또는 헤테로아릴을 나타내며,
R10a은 수소, 할로겐, 아미노, 시아노, 니트로, 하이드록시, 알킬, 알킬카보닐, 알킬설포닐 또는 -(CH2)pa-NR8aR9a를 나타내고,　
상기에서, 알킬, 알콕시, 아릴, 사이클로알킬, 헤테로사이클 및 헤테로아릴은 임의로 치환될 수 있으며, 치환체는 하이드록시, 할로겐, 니트릴, 아미노, 알킬아미노, 디알킬아미노, 알킬, 할로알킬, 알킬설포닐, 카복시알킬, 알킬카보닐옥시, 알킬티오, 알킬옥시카보닐, 알킬아미노카보닐, 아릴알콕시 및 옥소로 이루어진 그룹에서 선택되는 하나 이상이다.
[화학식 2]
Figure 112010068982648-pat00002
상기 화학식 2에서 각 치환기는 국제출원공개 WO 2009/025478에서 구체적으로 정의되어 있으며, 다음과 같다:
상기 화학식 2에서,
nb은 1 내지 3의 수이고,
mb은 0 또는 1이며,
Ab는 직접결합을 나타내거나, 페닐을 나타내거나, 질소원자를 1 내지 2개 포함하는 6원 헤테로아릴을 나타내고,
Xb는 C 또는 N을 나타내며, 단 Xb가 N일 경우 mb은 0이고 Xb가 C일 경우 mb은 1이고,
R1b은 수소, 알킬, -(CH2)rbNR7bR8b, 또는 -(CH2)rbCO2H를 나타내며, 여기에서 rb은 1 내지 5의 수이고, R7b 및 R8b은 각각 독립적으로 수소, 알킬 또는 알킬카보닐을 나타내거나, 함께 임의로 하나의 메틸렌이 N 원자에 의해 대체되며 알킬에 의해 임의로 치환된 알킬렌쇄를 형성할 수 있으며,
R2b는 수소, 할로겐, 시아노, 니트로, 하이드록시, 알킬, 알콕시 또는 트리알킬실릴을 나타내거나, -(CH2)pbCO2R7b, -(CH2)pbOR7b, -(CH2)pbNR7bR8b, -NHR10b, -N(H)S(O)2R7b, -NHC(O)R10b, -(CH2)pbS(O)2R7b 또는 (CH2)pb-헤테로사이클-R10b을 나타내고, 여기에서 pb는 0 내지 3의 수이며, R7b 및 R8b은 앞에서 정의한 바와 같고, R10b은 수소, 옥소, 알킬설포닐, 알킬카보닐, 알킬옥시카보닐, 알킬아미노카보닐, 알콕시, 알킬 또는 헤테로사이클을 나타내고,
R3b는 수소, 시아노, 할로겐, 알킬 또는 페닐을 나타내거나, -(CH2)nb-헤테로사이클 또는 -(CH2)nb-아릴을 나타내고, nb은 1 내지 3의 수이며,
R4b는 -YbR11b을 나타내고, 여기서 Yb는 직접결합이거나 -(CR7bR8b)pbY`b-을 나타내며, pb는 0 내지 3의 수이고, R7b 및 R8b은 앞에서 정의한 바와 같으며,
Ｙ`b는 -O-, -S-, -NR12b-, -NR12bC(O)-, -C(O)-, -C(O)O-, -C(O)NR12b-, -S(O)qb-, 및 -S(O)qbNR12b- 로 구성된 그룹에서 선택되고, R12b는 수소, 알킬, 아릴 또는 헤테로아릴을 나타내며, qb는 0 내지 2의 수이고, R11b은 수소, 시아노, 할로겐, 하이드록시, 티올, 카복시, 알킬 및 -(CH2)tbBb-R13b로 구성된 그룹에서 선택되며, tb는 0 내지 3의 수이고, Bb는 헤테로사이클, 헤테로아릴 또는 아릴을 나타내며, R13b은 수소, 시아노, 할로겐, 하이드록시, 옥소, 티올, 카복시, 카복시알킬, 알킬카보닐옥시, 알킬, 알콕시, 알킬티오, 알킬카보닐 또는 알킬설포닐을 나타내고,
R5b는 수소, 알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클 또는 헤테로사이클릴알킬을 나타내고,
R6b는 -(CR7bR8b)pb-Zb-Db-Wb-R14b를 나타내며, Zb는 직접결합을 나타내거나 -C(O)-, -C(O)O-, -C(O)NR12b-, -S(O)yb- 로 구성된 그룹으로부터 선택되고, yb는 1 또는 2의 수이며, Db는 직접결합을 나타내거나, 사이클로알킬, 헤테로아릴 또는 헤테로사이클을 나타내고, Wb는 직접결합을 나타내거나 -NR7b-. -C(O)-, -C(O)O-, -C(O)NR12b-, -S(O)yb-, -S(O)ybNR12b- 또는 -NR12bS(O)yb-을 나타내며, R14b는 수소, 하이드록시, 알킬, 알콕시, 헤테로사이클, 헤테로아릴, 아릴 또는 아르알킬을 나타내거나,
R5b 및 R6b는 함께 알킬렌쇄를 나타내고,
상기에서, 알킬, 알콕시, 아릴, 사이클로알킬, 헤테로사이클 및 헤테로아릴은 임의로 치환될 수 있으며, 치환체는 하이드록시, 할로겐, 니트릴, 아미노, 알킬아미노, 디알킬아미노, 카복시, 알킬, 알콕시, 카복시알킬, 알킬카보닐옥시, 알킬티오, 알킬옥시카보닐, 알킬아미노카보닐, 아릴알콕시 및 옥소로 이루어진 그룹에서 선택되는 하나 이상이다.
[화학식 3]
Figure 112010068982648-pat00003
상기 화학식 3에서,
Bc는 아릴 혹은 N, O 및 S 원자로부터 선택되는 1 내지 2개의 헤테로 원자를 포함하는 4 내지 8원의 헤테로사이클 혹은 헤테로아릴을 나타내고,
R7c은 수소, 할로겐, 하이드록시, 나이트릴, 나이트로, 알콕시를 나타내며,
R8c은 C1-C6-알킬, C3-C8-사이클로알킬, 헤테로사이클릭, 아릴, 아릴알킬, 사이클로알킬-알킬, 헤테로사이클릭-알킬을 나타내고,
R9c은 수소, 할로겐, 하이드록시, 나이트릴, 나이트로, 알콕시, 알릴옥시, 알킬아미노, 아릴 아미노를 나타내며,
상기에서, 알킬, 알콕시, 아릴, 사이클로알킬, 헤테로사이클 및 헤테로아릴은 임의로 치환될 수 있으며, 치환체는 하이드록시, 할로겐, 니트릴, 아미노, C1-C6-알킬아미노, 디(C1-C6-알킬)아미노, 카복시, C1-C6-알킬, 할로게노-C1-C6-알킬, C1-C6-알콕시, 아릴-C1-C6-알콕시 및 옥소로 이루어진 그룹에서 선택되는 하나 이상이다.
본 발명에 따른 화학식 (1), (2) 또는 (3) 화합물의 치환기에 대한 정의에서, 용어 ‘알킬’은 지방족 탄화수소 래디칼을 의미한다. 알킬은 알케닐이나 알키닐 부위를 포함하지 않는 “포화 알킬(saturated alkyl)”이거나, 적어도 하나의 알케닐 또는 알키닐 부위를 “불포화 알킬(unsaturated alkyl)”일 수 있다. “알케닐(alkenyl)”은 적어도 하나의 탄소-탄소 이중결합을 포함하는 그룹을 의미하며, “알키닐(alkynyl)”은 적어도 하나의 탄소-탄소 삼중 결합을 포함하는 그룹을 의미한다. 알킬은 단독으로 또는 알콕시와 같이 조합하여 사용되는 경우에 각각 분지형 또는 직쇄형일 수 있다.
알킬 그룹은 별도로 정의되지 않는 한 1 내지 20 개의 탄소원자를 가질 수 있다. 알킬 그룹은 1 내지 10 개의 탄소원자들을 가지는 중간 크기의 알킬일 수도 있다. 알킬 그룹은 1 내지 6 개의 탄소원자들을 가지는 저급 알킬일 수도 있다. 전형적인 알킬 그룹에는 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, t-부틸, 펜틸, 헥실, 에테닐, 프로페닐, 부테닐 등이 포함되지만, 이들 만으로 한정되는 것은 아니다. 예를 들어, C1-C4-알킬은 알킬쇄에 1 내지 4 개의 탄소원자를 가지며, 메틸, 에틸, 프로필, 이소-프로필, n-부틸, 이소-부틸, sec-부틸 및 t-부틸로 이루어진 그룹에서 선택된다.
용어 ‘알콕시’는 별도로 정의되지 않는 한 1 내지 10 개의 탄소원자를 가지는 알킬옥시를 의미한다.
용어 ‘사이클로알킬’은 별도로 정의되지 않는 한 포화 지방족 3~10원 환을 의미한다. 전형적인 사이클로알킬 그룹에는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실 등이 포함되지만, 이들 만으로 한정되는 것은 아니다.
용어 ‘아릴(aryl)’은 공유 파이 전자계를 가지는 적어도 하나의 환을 포함하며, 예를 들어 모노사이클릭 또는 융합환 폴리사이클릭(즉, 탄소원자들의 인접한 쌍들을 나눠 가지는 링들) 그룹을 포함한다. 즉, 본 명세서에서 아릴은 별도로 정의되지 않는 한 페닐, 나프틸 등을 포함하는 4~10원, 바람직하게는 6~10원 방향족 모노사이클릭 또는 멀티사이클릭환을 의미한다.
용어 ‘헤테로아릴’은 별도로 정의되지 않는 한 N, O 및 S 원자로 이루어진 그룹에서 선택된 1 내지 3 개의 헤테로 원자를 포함하고, 벤조 또는 C3-C8 사이클로알킬과 융합될 수 있는 방향족 3~10원, 바람직하게는 4~8원, 더욱 바람직하게는 5~6원 환을 의미한다. 모노사이클릭 헤테로아릴의 예로는 티아졸, 옥사졸, 티오펜, 퓨란, 피롤, 이미다졸, 이소옥사졸, 이소티아졸, 피라졸, 트리아졸, 트리아진, 티아디아졸, 테트라졸, 옥사디아졸, 피리딘, 피리다진, 피리미딘, 피라진 및 이와 유사한 그룹을 들 수 있으나 이들로 제한되는 것은 아니다. 비사이클릭 헤테로아릴의 예로는 인돌, 인돌린, 벤조티오펜, 벤조퓨란, 벤즈이미다졸, 벤족사졸, 벤즈이속사졸, 벤즈티아졸, 벤즈티아디아졸, 벤즈트리아졸, 퀴놀린, 이소퀴놀린, 퓨린, 퓨로피리딘 및 이와 유사한 그룹을 들 수 있으나 이들로 제한되는 것은 아니다.
용어 ‘헤테로사이클’은 별도로 정의되지 않는 한 N, O 및 S 원자로 이루어진 그룹에서 선택된 1 내지 3개의 헤테로 원자를 포함하며, 벤조 또는 C3-C8-사이클로알킬과 융합될 수 있고, 포화되거나 1 또는 2 개의 이중결합을 포함하는 3~10원, 바람직하게는 4~8원, 더욱 바람직하게는 5~6원 환을 의미한다. 헤테로사이클의 예로는 피롤린, 피롤리딘, 이미다졸린, 이미다졸리딘, 피라졸린, 피라졸리딘, 피란, 피페리딘, 몰포린, 티오몰포린, 피페라진, 하이드로퓨란 등을 들 수 있지만, 이들만으로 한정되는 것은 아니다.
기타 본 명세서에서 사용된 용어와 약어들은 달리 정의되지 않는 한 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자에게 통상적으로 이해되는 의미로서 해석될 수 있다.
본 발명의 화학식 (1) 또는 화학식 (2)의 화합물의 바람직한 구체예로는 다음의 것들을 들 수 있다.
화합물 1: [(S)-2-(7-사이클로펜틸아미노-5-메틸-1H-인돌-2-일)-4,5-디하이드로-티아졸-4-일]-아세트산
화합물 2: {(S)-2-[5-메틸-7-(테트라하이드로피란-4-일아미노)-1H-인돌-2-일]-4,5-디하이드로-티아졸-4-일}-아세트산
화합물 3: [(S)-2-(7-사이클로펜틸아미노-5-메틸-1H-인돌-2-일)-4,5-디하이드로-옥사졸-4-일]-아세트산
화합물 4: [(S)-2-(7-사이클로펜틸아미노-1H-인돌-2-일)-4,5-디하이드로-티아졸-4-일]-아세트산
화합물 5: [(S)-2-(7-사이클로펜틸아미노-5-페녹시-1H-인돌-2-일)-4,5-디하이드로-티아졸-4-일]-아세트산
화합물 6: 4-{2-[(S)-2-(7-사이클로펜틸아미노-5-페녹시-1H-인돌-2-일)-4,5-디하이드로-티아졸-4-일]-에틸}-피페라진-2-온
화합물 7: 사이클로펜틸-(2-{(S)-4-[2-(3-메틸-5,6-디하이드로-8H-[1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피라진-7-일)-에틸]-4,5-디하이드로-티아졸-4-일}-5-페녹시-1H-인돌-7-일)-아민
화합물 8: ((S)-2-{7-[(테트라하이드로피란-4-일메틸)-아미노]-1H-인돌-2-일}-4,5-디하이드로-티아졸-4-일)-아세트산
화합물 9: (테트라하이드로피란-4-일)-[2-페닐-5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-1H-인돌-7-일]-아민
화합물 10: [5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-2-페닐-1H-인돌-7-일]-(테트라하이드로피란-4-일)메틸-아민
화합물 11: [5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-2-페닐-1H-인돌-7-일]-비스-[(테트라하이드로피란-4-일)메틸]-아민
화합물 12: {4-[5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-2-페닐-1H-인돌-7-일아미노]-피페리딘-1-일}-(테트라하이드로피란-3-일)메타논
화합물 13: [5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-2-페닐-1H-인돌-7-일]-(1-메틸설폰닐-피페리딘-4-일)-아민
화합물 14: ((S)-2-{5-메틸-7-[(테트라하이드로피란-4-일메틸)-아미노]-1H-인돌-2-일}-4,5-디하이드로-티아졸-4-일)-아세트산
본 발명에 따른 화학식 (3)의 화합물 중에서도 바람직한 화합물은, 상기 화학식 (3)의 치환기 정의에서 다음을 만족시키는 것들이다:
Bc는 아릴 혹은 N, O 및 S 원자로부터 선택되는 1 내지 2개의 헤테로 원자를 포함하는 5 내지 6원의 헤테로사이클 혹은 헤테로아릴을 나타내고,
R7c은 수소, 할로겐, 나이트릴, 알콕시를 나타내며,
R8c은 C1-C6-알킬, C3-C8-사이클로알킬, 헤테로사이클릭, 아릴알킬, 사이클로알킬-알킬, 헤테로사이클릭-알킬을 나타내며,
R9c은 수소, 할로겐, 나이트릴, 알콕시, 알릴록시, 알킬아미노, 아릴 아미노를 나타낸다.
본 발명에 따른 화학식 (3)의 화합물에서 Bc는 더욱 바람직하게는 페닐 혹은 피리딘을 나타낸다.
치환기 R7c은 더욱 바람직하게는 수소 또는 할로겐을 나타내거나, 알콕시를 나타내고 가장 바람직하게는 수소를 나타낸다.
치환기 R8c은 더욱 바람직하게는 C1-C6-알킬 또는 헤테로사이클릭 혹은 사이클로알킬-알킬, 헤테로사이클릭-알킬, 아릴-알킬을 나타내고, 가장 바람직하게는 사이클로펜틸 혹은 테트라하이드로 피란을 나타낸다.
치환기 R9c은 더욱 바람직하게는 수소, 할로겐 또는 알콕시를 나타내며, 가장 바람직하게는 수소를 나타낸다.
본 발명에 따른 화학식 (3)의 대표적인 화합물에는 하기 화합물들이 포함된다:
사이클로펜틸-(2-페닐-3H-벤조이미다졸-4-일)-아민
(2-페닐-3H-벤즈이미다졸-4-일)-(테트라하이드로-피란-4-일)-아민
사이클로펜틸-(2-피리딘-2-일-3H-벤조이미다졸-4-일)-아민
본 발명의 약제학적 조성물은 산화적 스트레스에 의한 질환의 예방 및 치료에 효율적으로 사용될 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 활성 산소종(ROS. reactive oxygen species) 또는 활성 질소종(RNS, reactive nitrogen species)에 의해 매개되는 산화적 스트레스에 의한 질환의 예방 및 치료에 효율적으로 사용될 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 허혈성 재관류 손상을 억제할 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 저산소 손상(hypoxic injury)에 의해 매개되는 질환의 예방 및 치료에 효율적으로 사용될 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 세포 괴사(necrotic cell death)에 의해 매개되는 질환의 예방 및 치료에 효율적으로 사용될 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 미토콘드리아 기능 장애를 억제할 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 미토콘드리아 기능 장애로 인한 MELAS (Mitochondrial myophthy, encephalopathy, lactic acidosis and stroke like episodes), MERRF 증후군(Myoclonus epilepsy with ragged-red fibers) 또는 컨스-세이어 증후군(Kearns-Sayre syndrome)의 예방 및 치료에 효율적으로 사용될 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 HMGB1 (High motility group box 1)를 분비하는 세포의 괴사를 억제할 수 있다.
또한 본 발명의 약제학적 조성물은 HMGB1에 의해 매개되는 질환, 특히 염증에 의하여 매개되거나 염증 관련 질환을 예방 및/또는 치료할 수 있고, 이러한 질환은 예를 들면 패혈증, 류마티스성 관절염, 골관절염, 간경화, 출혈성 질환, 여러 괴사성 질환, 바이러스 감염 또는 박테리아 감염 질환 등이 있다.
본 발명에 따라 예방되거나/되고 치료되는 질환은 예를 들면 간질환, 심장질환, 혈관질환, 퇴행성 뇌질환, 허혈성 재관류 손상으로 유래되는 질환 및 바이러스 또는 박테리아로 인한 감염질환; 간이식, 간절제술, 간색전술, 간섬유증, 간경변, 알코홀성/비알코홀성 지방간, 및 바이러스 또는 약물 (예. 항암제, 아세트아미노펜 등)로 인한 간염; 부정맥, 심장마비, 심근경색 등의 심장 및 심혈관 질환; 루게릭병, 뇌졸중, 치매, 파킨스씨병 및 헌팅톤 병 등의 퇴행성 뇌질환; 허혈성 재관류 손상에 유래하는 당뇨성 복합증, 동맥경화, 심근경색, 뇌졸중; 인플루엔자, HBV, HCV, HIV 등의 여러 바이러스 감염 또는 여러 박테리아 감염에 의해 유도되는 질환 등이 있다.
본 발명에 있어서, 간질환은 간이식, 간절제술, 간색전술, 간섬유증, 간경변, 알코홀성/비알코홀성 지방간, 및 바이러스 또는 약물 (예. 항암제, 아세트아미노펜 등)로 인한 간염 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있다.
본 발명에 있어서, 심장 또는 심혈관 질환은 부정맥, 심장마비, 심근경색, 심부전증 및 협심증으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 허혈성 재관류 손상으로 유래된 간질환, 심장 또는 심혈관 질환의 예방 및 치료에 효율적으로 사용될 수 있으며, 여기서 허혈성 재관류 손상은 미토콘드리아 기능저하, 저산소 손상 및/또는 세포 괴사에 의한 것일 수 있다.
본 발명에 있어서, 허혈성 재관류 손상으로 유래된 당뇨성 복합증, 동맥경화 및 뇌졸중으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있다.
본 발명의 화학식(1) 또는 화학식(2)의 화합물의 구체적인 합성예는 국제출원공개 WO 2009/025477 및 국제출원공개 WO 2009/025478에 각각 개시되어 있다.
본 발명은 또한 상기 화학식 (3)의 화합물 및 그를 제조하는 방법을 제공한다. 이하에서는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 화학식 (3) 화합물의 제조방법을 예시적인 반응식에 기초하여 설명하지만, 본 발명이 속한 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 화학식 (3)의 구조를 바탕으로 다양한 방법에 의해 화학식 (3)의 화합물을 제조할 수 있으며, 이러한 방법들은 모두 본 발명의 범주에 포함되는 것으로 해석되어야 한다. 즉, 본 명세서에 기재되거나 선행기술에 개시된 여러 합성법들을 임의로 조합하여 화학식 (3)의 화합물을 제조할 수 있으며, 이는 본 발명의 범위 내에 속하는 것으로 이해되고, 화학식 (3) 화합물의 제조방법이 하기 설명된 것으로 제한되는 것은 아니다.
먼저, 화학식 (3)의 화합물은 하기 반응식 (1)의 방법에 따라 화합물 (4)의 니트로기를 환원시켜 화합물 (5)의 아민 화합물을 제조한 다음, 형성된 아민기에 대해 화합물(6)과 함께 환원성 아미노화 반응을 수행하여 합성할 수 있다.
[반응식 1]
Figure 112010068982648-pat00004
상기 반응식 1에서
Bc, R7c, R8c, R9c 는 앞서 화학식 3에서 정의한 바와 같고, R10c은 알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클릭, 헤테로아릴, 아릴을 나타내고, R11c은 수소, 알킬을 나타내며, R10c 및 R11c 은 고리화를 이루어 사이클로알킬 혹은 헤테로사이클을 이룰 수 있다.
화합물(5)은 화합물(4)을 환원시켜 제조할 수 있다. 환원 반응은 산 촉매와 금속을 사용하거나, 수소가스 존재하에 금속 촉매를 사용하여 진행할 수 있다.
산 촉매와 금속을 이용하는 환원 반응에서 사용할 수 있는 산은, 예를 들면, 염산, 황산, 질산, 인산 등과 같은 무기산, 아세트산, 트라이플루오로아세트산 등과 같은 유기카본산, 암모늄클로라이드와 같은 아민산염, 바람직하게는 염산, 아세트산 또는 암모늄클로라이드 등이다. 산의 사용량은 화합물(4) 1 당량에 대하여, 통상 0.01 ~ 10 당량이고, 선호하는 것은 0.1~5 당량이다. 사용할 수 있는 금속은, 예를 들면, 철, 아연, 리튬, 소듐, 틴(통상적으로, 틴클로라이드) 등이며, 특히 바람직하게는 철, 아연, 틴클로라이드 등이다. 금속의 사용량은 화합물(4) 1 당량에 대하여, 통상 1 ~ 20 당량이고, 선호하는 것은 1~10 당량이다. 산 촉매 존재하의 금속 반응은 불활성 용매 중에서 진행할 수 있다. 불활성 용매로는, 예를 들면, 메탄올, 에탄올 등의 알킬 알코올, 테트라하이드로퓨란, 디에틸에테르 등의 에테르, 에틸아세테이트와 같은 알킬에스터 등이고, 바람직하게는 메탄올, 에탄올, 테트라하이드로퓨란, 에틸아세테이트 등이다. 반응온도는 통상 -10~200℃이고, 선호하는 것은 25~120℃이며, 반응시간은 통상 10분~60시간, 선호하는 것은 10분~12시간이다.
수소가스 존재하에 금속 촉매를 이용하는 환원 반응에서 사용할 수 있는 금속 촉매는 팔라듐, 니켈, 플레티늄(platinum), 류테늄(ruthenium), 로듐(rhodium) 등이며, 특히 바람직하게는 팔라듐, 니켈 등이다. 금속 촉매의 사용량은 화합물(2) 1 당량에 대하여, 통상 0.001~2 당량이고, 선호하는 것은 0.01~1 당량이다. 수소가스의 압력은 통상 1~10 기압이고, 선호하는 것은 1~3 기압이다. 반응은 불활성 용매, 예를 들면, 메탄올, 에탄올 등의 알킬알코올, 테트라하이드로푸란, 디에틸에테르 등의 에테르, 메틸아세테이트, 에틸아세테이트 등의 알킬아세테이트 등, 바람직하게는 메탄올, 에탄올, 에틸아세테이트 등에서 진행할 수 있다. 금속 촉매를 이용한 반응의 온도는 통상 -10~200℃이고, 선호하는 것은 25~50℃이며, 반응 시간은 통상 10분~60시간, 선호하는 것은 10분~12시간이다.
화합물(6)은 상업적으로 구입가능하며 화합물(5)의 아민기에 대한 환원성 아미노화 [RA: reductive amination] 반응을 통해 제조할 수 있다.
환원성 아미노화 반응은 환원제를 사용해서 알데하이드 또는 케톤과의 반응을 통해 수행할 수 있고 필요에 따라 산 촉매를 사용할 수 있다. 알데하이드 또는 케톤의 양은 화합물(5) 1 당량에 대하여 통상 1~10 당량이고, 선호하는 것은 1~3 당량이다. 사용할 수 있는 환원제는 소듐보로하이드라이드, 소듐시아노보로하이드라이드 (NaBH3CN), 소듐트라이아세톡시-보로하이드라이드 {NaBH(OAc)3} 등이다. 환원제 사용량은 화합물(5) 1 당량에 대하여, 통상 1~10 당량이고, 선호하는 것은 1~3 당량이다. 사용할 수 있는 산 촉매는, 예를 들면, 염산, 황산, 질산, 인산 등과 같은 무기산, 아세트산, 트리플루오로아세트산 등과 같은 유기카본산, 암모늄클로라이드와 같은 아민산염 등이고, 특히 바람직하게는 염산, 아세트산 등이다. 산의 사용량은 화합물(5) 1 당량에 대하여 통상 0.1~10 당량이고, 선호하는 것은 1~5 당량이다. 반응은 불활성 용매, 예를 들면, 테트라하이드로퓨란, 디에틸에테르 등의 에테르, 디클로로메탄, 클로로포름, 디클로로에탄 등과 같은 클로로알칸, 바람직하게는 디클로로에탄, 클로로포름 등에서 진행할 수 있다. 반응 온도는 통상 -10~100℃이고, 선호하는 것은 -10~50℃이며, 반응 시간은 통상 10분~60시간, 선호하는 것은 10분~12시간이다.
화합물(4)는 하기 반응식 (2)에서와 같이 화합물(7)의 알데히드 화합물을 화합물(8)과 연결 반응 및 고리화 반응을 통하여 얻을 수 있다.
[반응식 2]
Figure 112010068982648-pat00005
상기 반응식 2에서
Bc, R7c, R9c 는 앞서 화학식 3에서 정의한 바와 같다.
먼저, 화합물 (7)과 같은 상업적으로 구입 가능한 알데히드와 상업적으로 구입가능한 화합물 (8) 과 같은 디아민 화합물을 가열 교반하면, 고리화가 이루어지고, 여기에 산을 촉매로 하여 가열하면 화합물 (4)와 같은 화합물을 얻을 수 있다. 사용할 수 있는 산 촉매는, 예를 들면, 염산, 황산, 질산, 인산 등과 같은 무기산, 아세트산, 트리플루오로아세트산 등과 같은 유기카본산, 암모늄클로라이드와 같은 아민산염 등이고, 특히 바람직하게는 염산, 아세트산 등이다. 산의 사용량은 화합물(5) 1 당량에 대하여 통상 0.1~10 당량이고, 선호하는 것은 1~5 당량이다. 또한 경우에 따라서 아세트산과 같은 유기산을 용매로 사용하여 반응할 수도 있다.
본 명세서에서 ‘약제학적으로 허용되는 염’은 약제학적으로 허용되는 음이온을 함유하는 무독성 산부가염을 형성하는 산, 예를 들어, 황산, 염산, 질산, 인산, 브롬화수소산, 요오드화수소산 등과 같은 무기산; 타타르산, 포름산, 시트르산, 아세트산, 트리클로로아세트산, 트리플루오로아세트산, 글루콘산, 벤조산, 락트산, 푸마르산, 말레인산, 살리실산 등과 같은 유기 카본산; 메탄설폰산, 에탄설폰산, 벤젠설폰산, p-톨루엔설폰산, 나프탈렌설폰산 등과 같은 설폰산 등에 의해 형성된 산 부가염이 포함된다. 또한, 약제학적으로 허용되는 염기 부가염, 예를 들어, 리튬, 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘 등에 의해 형성된 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염; 라이신, 아르기닌, 구아니딘 등의 아미노산 염; 디사이클로헥실아민, N-메틸-D-글루카민, 트리스(하이드록시메틸)메틸아민, 디에탄올아민, 콜린, 트리에틸아민 등과 같은 유기염 등이 포함된다. 본 발명에 따른 화학식 (1), 화학식 (2) 및 화학식 (3)의 화합물은 통상적인 방법에 의해 그의 염으로 전환될 수 있으며, 염의 제조는 별도의 설명이 없이도 상기 화학식 (1), 화학식 (2) 및 화학식 (3)의 구조를 바탕으로 당업자에 의해 용이하게 수행될 수 있다.
본 명세서에서 ‘이성체(isomer)’는 동일한 화학식 또는 분자식을 가지지만 광학적 또는 입체적으로 다른 화합물 또는 그의 염을 의미한다. 본 발명에 따른 화학식 (1), 화학식 (2) 및 화학식 (3)의 화합물은 비대칭 탄소중심을 가질 수 있으므로, 광학 이성체(R 또는 S 이성체), 라세미체, 부분 입체 이성체 혼합물, 개개 부분 입체 이성체 등으로 존재할 수 있으며, 이중결합을 가지는 경우, 기하 이성체(트랜스, 시스형 이성체)도 존재할 수 있다. 이들 모든 이성체 및 그의 혼합물 역시 본 발명의 범위에 포함된다.
이하에서 별도의 설명이 없는 한, 각각의 화학식 (1), 화학식 (2) 및 화학식 (3)의 화합물에는 약제학적으로 허용되는 그의 염 및 이성체가 포함되며, 이들은 모두 본 발명의 범주에 포함되는 것으로 해석되어야 한다. 설명의 편의를 위하여, 본 명세서에서는 이들을 각각 화학식 (1), 화학식 (2) 및 화학식 (3)의 화합물로 간단히 표현한다.
상기 “약제학적 조성물(pharmaceutical composition)”은 본 발명의 화합물과 함께 필요에 따라 약제학적으로 허용되는 담체, 희석제, 부형제, 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. 약제학적 조성물은 생물체 내로 화합물이 투여되는 것을 용이하게 한다. 화합물을 투여하는 다양한 기술들이 존재하며, 여기에는 경구, 주사, 에어로졸, 비경구 및 국소 투여 등이 포함되지만, 이들 만으로 한정되는 것은 아니다.
본 명세서에서 “담체(carrier)”란 세포 또는 조직 내로 화합물의 부가를 용이하게 하는 물질을 의미한다. 예를 들어, 디메틸설폭사이드 (DMSO)는 생물체의 세포 또는 조직 내로 많은 유기 화합물의 투입을 용이하게 하는데 통상 사용되는 담체이다.
본 명세서에서 “희석제(diluent)”란 대상 화합물의 생물학적 활성 형태를 안정화시킬 뿐아니라, 화합물을 용해시키는 물에서 희석되는 물질로 정의된다. 버퍼 용액에 용해되어 있는 염은 당해 분야에서 희석제로 사용된다. 통상 사용되는 버퍼 용액은 인간 용액의 염 형태를 모방하고 있는 포스페이트 버퍼 식염수이다. 버퍼 염은 낮은 농도에서 용액의 pH를 제어할 수 있기 때문에, 버퍼 희석제가 화합물의 생물학적 활성을 변형하는 일은 드물다.
본 명세서에서 “약제학적으로 허용되는(pharmaceutically acceptable)”이란 화합물의 생물학적 활성과 물성을 손상시키지 않는 성질을 의미한다.
본 발명의 화합물은 목적하는 바에 따라 다양한 약제학적 투여 형태로 제형화될 수 있다. 본 발명에 따른 약제학적 조성물을 제조함에 있어서, 활성성분, 구체적으로, 화학식 (1), 화학식 (2) 또는 화학식 (3)의 화합물, 그의 약제학적으로 허용되는 염 또는 이성체를 제조하고자 하는 제형에 따라 선택될 수 있는 다양한 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 혼합한다. 예를 들어, 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 목적하는 바에 따라 주사용 제제, 경구용 제제 등으로 제형화될 수 있다.
본 발명의 화합물은 공지된 제약용 담체와 부형제를 이용하는 공지의 방법으로 제제화되어 단위 용량 형태 또는 다용량 용기에 내입될 수 있다. 제제의 형태는 오일 또는 수성 매질 중의 용액, 현탁액 또는 유화액 형태일 수 있으며, 통상의 분산제, 현탁제 또는 안정화제를 함유할 수 있다. 또한, 예를 들어, 사용 전에 무균, 발열물질이 제거된 물에 녹여 사용하는 건조 분말의 형태일 수도 있다. 본 발명의 화합물은, 또한, 코코아버터 또는 기타 글리세리드와 같은 통상의 좌약 기제를 이용하여 좌약형으로 제제될 수도 있다. 경구 투여용 고체투여 형태는 캅셀제, 정제, 환제, 산제 및 입제가 가능하고, 특히 캅셀제와 정제가 유용하다. 정제 및 환제는 장피제로 제조하는 것이 바람직하다. 고체투여 형태는 본 발명의 화합물을 수크로오즈, 락토오즈, 전분 등과 같은 하나 이상의 불활성 희석제 및 마그네슘 스테아레이트와 같은 윤활제, 붕해제, 결합제 등과 같은 담체와 혼합시킴으로써 제조할 수 있다.
본 발명은 또한, 활성성분으로 상기 화학식 (1), 화학식 (2) 또는 화학식 (3)의 화합물, 그의 약제학적으로 허용되는 염 또는 그의 이성체, 및 허용 가능한 담체를 포함하는, 항산화 효과를 가지는 화장품 조성물을 제공한다.
본 발명의 약제학적 조성물은 뛰어난 항산화 활성을 가짐으로써 다양한 산화적 스트레스에 기인하는 질환들을 효율적으로 예방하거나 치료할 수 있다.
또한, 본 발명의 약제학적 조성물은 심근 세포의 미토콘드리아 비기능, 저산소 손상, 괴사 및 허혈성 재관류 손상을 억제함으로써 심장 및 심혈관 질환들을 효율적으로 예방하거나 치료할 수 있다. 또한 관동맥 우회술, 관동맥 경피 성형술 등의 수술 요법 또는 혈전용해제 등을 이용한 약물 요법과 같은 재관류 요법 시술 시에 심장보호제로 사용될 수 있다.
도 1은 (테트라하이드로피란-4-일)-[2-페닐-5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-1H-인돌-7-일]-아민(화합물 9)의 세포 내에서의 항산화 효능을 DHR123 probe를 사용하여 평가한 결과이다.
도 2는 화합물 9의 세포 내에서의 항산화 효능을 MitoSOX red probe를 사용하여 평가한 결과이다.
도 3은 화합물 9를 처리한 군과 처리하지 않은 군과의 좌엽의 전체적인 간 모식도를 비교한 결과이다.
도 4는 화합물 9를 각 농도 별로 처리했을 때와 처리하지 않았을 때의 허혈성 재관류 손상 후의 ALT와 AST 수치를 비교한 그래프이다.
도 5는 화합물 9를 13 mg/kg 투여한 군과 투여하지 않은 군의 시간 별 조직염색 비교 결과이다.
도 6은 화합물 9를 농도 별로 투여한 군과 투여하지 않은 군의 현미경상 비교 결과이다 (hepatocytic degeneration, sinusoidal congestion, 염증세포 침착)
도 7은 화합물 9를 4.5 mg/kg 투여한 군과 허혈 및 재관류 손상 대조군과 HMGB1 level을 비교한 그래프이다.
도 8은 화합물 9를 처리한 그룹과 처리하지 않은 그룹에서 허혈성 재관류 손상 후 mitochondrial complex I activity를 비교 평가한 결과이다.
도 9은 화합물 9 처리 후 HMGB1 release를 측정한 결과이다.
도 10은 tBOOH 처리 후 화합물 9에 의한 ATP 양의 변화를 측정한 결과이다.
도 11은 화합물 9의 H9C2 세포에서 세포 괴사 (necrotic cell death)에 대한 보호 효과를 보이고자, FDA와 PI 이중염색법으로 염색하여 형광 현미경으로 다른 시험 화합물들과 비교 평가한 결과이다.
도 12는 화합물 9의 세포 괴사에 대한 보호 효과를 보이고자, 각각의 시험 화합물 별로 직접 세포 수를 측정하여 비교 평가한 결과이다.
도 13은 화합물 9의 세포 괴사에 대한 보호 효과를 보이고자, FACS 분석을 통해 다른 시험 화합물들과 비교 평가한 결과이다. .
도 14는 미토콘드리아가 부풀어 오르는 것에 대한 화합물 9의 억제 효과를 다른 시험 화합물들과 비교하여 나타낸 결과이다.
도 15는 화합물 9의 미토콘드리아 보호 효과를 형광 현미경을 통하여 다른 시험 화합물들과 비교하여 나타낸 결과이다.
도 16은 허혈성 재관류 손상(I/R) 모델에서 좌심실 팽창에 대한 화합물 9의 억제 효과를 나타낸 결과이다.
도 17은 I/R 손상 후 좌심실의 분획 단축에 대한 화합물 9의 억제 효과를 나타낸 결과이다.
도 18은 I/R 손상 후 심장을 떼내어 MT(Masson-Trichrome) 염색하는 것에 의하여, 심장 섬유화 정도에 대해 화합물 9와 CsA를 비교 분석한 결과이다.
도 19는 실험예 2에서 간 수술절차를 보여주는 사진들이다.
본 발명은 하기 실시예에 의해 더욱 구체적으로 설명되지만, 본 발명의 범주가 이들에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 사이클로펜틸 -(2- 페닐 -3H- 벤조이미다졸 -4-일)- 아민의 제조
단계 A: 4-니트로-2- 페닐 -2,3- 디하이드로 -1H- 벤조이미다졸
3-니트로-벤젠-1,2-디아민 1.0g(6.5mmol)을 메탄올(10mL)에 녹인 후, 벤즈알데하이드 0.69g(6.7mmol)을 첨가하고 80℃에서 2일 동안 교반하였다. 반응 완결 후 감압하여 용매를 제거하고 관 크로마토그래피를 사용하여 표제화합물 1.1g(수율 70%)을 얻었다.
1H-NMR (500HMz, DMSO); δ 8.68(s, 1H), 7.43~7.31 (m, 5H), 7.18(s, 1H), 6.95(d, 1H), 6.44(s, 1H), 6.36(t, 1H), 6.29(d, 1H)
단계 B: 7-니트로-2- 페닐 -1H- 벤조이미다졸
단계 A에서 얻은 4-니트로-2-페닐-2,3-디하이드로-1H-벤조이미다졸 1.1g(4.6mmol)을 아세트산(10mL)에 녹이고 80℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 완결 후, 물을 넣고 에틸 아세테이트를 사용하여 추출하고 1N-수산화 나트륨을 이용하여 씻어 주었다. 무수 마그네슘설페이트로 건조한 다음 필터한 여액을 감압증류하여 관 크로마토그래피를 사용하여 표제 화합물 0.91(수율 83%)을 얻었다.
1H-NMR (400HMz, DMSO); δ 13.3(br s, 1H), 8.37(d, 2), 8.15(d, 2H), 7.65~7.56(m, 3H), 7.46(t, 1H)
단계 C: 2- 페닐 -3H- 벤조이미다졸 -4- 일아민
단계 B에서 얻은 7-니트로-2-페닐-1H-벤조이미다졸 0.137g(0.57mmol) 을 테트라하이드로퓨란(5mL), 메탄올(5mL)과 물(5mL)를 사용하여 녹였다. 철가루 0.40g(7.2mmol)와 암모늄 클로라이드 0.39g(7.2mmol)을 첨가하고 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 완결 후 물을 넣고 에틸 아세테이트를 사용하여 추출하였다. 무수 마그네슘설페이트로 건조한 다음 필터한 여액을 감압증류하여 관 크로마토그래피를 사용하여 표제 화합물 0.12g(수율 79%)을 얻었다.
1H-NMR (500HMz, DMSO); δ 12.5(s, 1H), 8.10(d, 2H), 7.55~7.45(m, 3H), 6.87(t, 1H), 6.67(d, 1H), 6.32(d, 1H), 5.21(s, 2H)
단계 D: 사이클로펜틸 -(2- 페닐 -3H- 벤조이미다졸 -4-일)-아민
단계 C에서 얻은 2-페닐-3H-벤조이미다졸-4-일아민 0.040g(0.19 mmol)를 디클로로에탄(5mL)에 녹이고, 아세트산 0.012mg(0.19mmol), 사이클로펜탄온 0.048g(0.57mmol)과 소듐트리아세톡시보로하이드라이드 0.049mg(0.23mmol)을 넣고 상온에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 완결 후 물을 넣고 디클로로메탄으로 추출하고, 포화 소듐클로라이드 용액으로 씻어 주었다. 무수 마그네슘설페이트로 건조한 다음 필터한 여액을 감압증류하여 관 컬럼크로마토그래피로 분리하여 표제의화합물 0.026mg(수율 49%)을 수득하였다.
1H-NMR (40HMz, CDCl3); δ 9.36(br s, 1H), 8.02(m, 2H), 7.56~7.45(m, 3H), 7.17(t, 1H), 6.83(d, 1H), 6.47(d, 1H) 5.06(br s, 1H), 4.02(m, 1H), 2.13(m, 2H), 1.82(m, 2H), 1.69(m, 4H)
실시예 2: (2- 페닐 -3H- 벤즈이미다졸 -4-일)-( 테트라하이드로 - 퓨란 -4-일)- 아민의 제조
실시예 1의 단계 C에서 얻은 2-페닐-3H-벤조이미다졸-4-일아민 0.040g(0.19mmol)과 테트라하이드로-퓨란-4-카바알데하이드 0.026g(0.23 mmol)을 이용하여 실시예 1의 단계 D와 같은 방법으로 표제의 화합물 0.030mg(수율 51%)을 수득하였다.
1H-NMR (40HMz, CDCl3); δ 8.02(m, 2H), 7.56~7.45(m, 3H), 7.17(t, 1H), 6.85(d, 1H), 6.44(d, 1H) 4.05(dd, 1H), 3.45(td, 2H), 3.27(d, 2H), 2.02(m, 1H), 1.85(m, 2H), 1.45(m, 2H)
실시예 3: 사이클로펜틸 -(2- 페닐 -2-일-3H- 벤조이미다졸 -4-일)-아민
피리딘 2- 카복시 알데히드와 3-니트로-벤젠-1,2-디아민 및 사이클로펜타논을 이용하여 실시예 1과 같은 방법으로 수행하여 표제의 화합물을 수득하였다.
1H-NMR (40HMz, CDCl3); δ 1.64(m, 6H), 2.10(m, 2H), 4.14(s, 1H), 6.38~6.34(d, 1H), 6.69~ 6.71(d, 1H), 7.09~7.13(t, 1H), 7.25~7.26(m, 1H), 7.75~7.79(m, 1H), 8.40~8.41(d, 1H), 8.54~8.55(m, 1H).
이하에서 본 발명의 구체적인 효능을 실험예로서 예시한다. 실험예에 사용된 화합물은 다음과 같다.
화합물 1: [(S)-2-(7-사이클로펜틸아미노-5-메틸-1H-인돌-2-일)-4,5-디하이드로-티아졸-4-일]-아세트산
화합물 2: {(S)-2-[5-메틸-7-(테트라하이드로피란-4-일아미노)-1H-인돌-2-일]-4,5-디하이드로-티아졸-4-일}-아세트산
화합물 3: [(S)-2-(7-사이클로펜틸아미노-5-메틸-1H-인돌-2-일)-4,5-디하이드로-옥사졸-4-일]-아세트산
화합물 4: [(S)-2-(7-사이클로펜틸아미노-1H-인돌-2-일)-4,5-디하이드로-티아졸-4-일]-아세트산
화합물 5: [(S)-2-(7-사이클로펜틸아미노-5-페녹시-1H-인돌-2-일)-4,5-디하이드로-티아졸-4-일]-아세트산
화합물 6: 4-{2-[(S)-2-(7-사이클로펜틸아미노-5-페녹시-1H-인돌-2-일)-4,5-디하이드로-티아졸-4-일]-에틸}-피페라진-2-온
화합물 7: 사이클로펜틸-(2-{(S)-4-[2-(3-메틸-5,6-디하이드로-8H-[1,2,4]트리아졸로[4,3-a]피라진-7-일)-에틸]-4,5-디하이드로-티아졸-4-일}-5-페녹시-1H-인돌-7-일)-아민
화합물 8: ((S)-2-{7-[(테트라하이드로피란-4-일메틸)-아미노]-1H-인돌-2-일}-4,5-디하이드로-티아졸-4-일)-아세트산
화합물 9: (테트라하이드로피란-4-일)-[2-페닐-5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-1H-인돌-7-일]-아민
화합물 10: [5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-2-페닐-1H-인돌-7-일]-(테트라하이드로피란-4-일)메틸-아민
화합물 11: [5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-2-페닐-1H-인돌-7-일]-비스-[(테트라하이드로피란-4-일)메틸]-아민
화합물 12: {4-[5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-2-페닐-1H-인돌-7-일아미노]-피페리딘-1-일}-(테트라하이드로피란-3-일)메타논
화합물 13: [5-(1,1-디옥소-티오몰포린-4-일)메틸-2-페닐-1H-인돌-7-일]-(1-메틸설폰닐-피페리딘-4-일)-아민
화합물 14: ((S)-2-{5-메틸-7-[(테트라하이드로피란-4-일메틸)-아미노]-1H-인돌-2-일}-4,5-디하이드로-티아졸-4-일)-아세트산
실시예 1: 사이클로펜틸-(2-페닐-3H-벤조이미다졸-4-일)-아민
실시예 2: (2-페닐-3H-벤즈이미다졸-4-일)-(테트라하이드로-퓨란-4-일)-아민
실험예 1: 괴사 저해제들의 항산화 효과 ( anti - oxidant effect )
각 화합물들에 대한 항산화 효능을 측정하였다. 이를 위해서 다음의 실험들이 실시되었다. 총 항산화 효능을 측정할 수 있는 DPPH 방법, Dihydrorhodamine 123을 이용한 항산화 효능 측정법, tBOOH (t-butyl hydroperoxide)라는 세포에 산화적 스트레스 (oxidative stress)를 일으키는 물질 처리 후 괴사 저해 효능 평가법, 그리고 ONOO- (peroxynitrite)의 제거능 평가법 및 각 화합물들의 H2O2 (hydrogen peroxide) 및 tBOOH에 대한 직접적인 항산화 효능 평가법의 여러 방법들을 사용하였다.
실험예 1-1: DPPH 를 이용한 항산화 효능 측정
DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl)는 안정한 자유 래디칼로 색깔이 보라색이다. DPPH가 화합물에 의해 환원이 되면 색깔이 노란색으로 전환되는 원리를 이용하여 특정 화합물의 항산화 효능을 평가하였다. DPPH는 517 nm에서 강한 흡수를 보이며 환원이 되면 색깔이 노란색으로 전환되며 517 nm에서의 흡수되는 정도가 줄어든다. 이때 원래의 흡수를 50 % 정도로 감소시키는 화합물의 농도를 IC50 값이라 하였다. 측정 방법은 DMSO에 200 μM의 DPPH 용액을 만들어 96 well plate에 180 μL를 옮겨 놓고 2000 μM 부터 두 배씩 연속희석하여 놓은 화합물들을 20 μL씩을 DPPH가 들어 있는 플레이트에 넣어 잘 섞은 후 상온에 30분 동안 방치하였다. 30 분이 지나면 spectraMAX ELISA reader에 가서 517 nm에 파장을 맞추고 517 nm에서 O.D. 값을 읽었다. 실험결과는 표 1과 같다.
[표 1]
Figure 112010068982648-pat00006
실험예 1-2 Dihydrorhodamine 123 ( DHR123 )을 이용한 항산화 효능 측정
Dihydrorhodamine 123은 형광을 띄지 않는 화합물로서 일단 ROS (활성산소)나 RNS에 의해서 산화가 되면 rhodamine 123으로 전환되어 강한 형광을 나타낸다. 이러한 원리를 이용하여 세포 내에서 또는 in vitro에서 화합물들의 항산화 정도를 평가하였다. H9C2 세포를 96 well plate에 1.5 × 104 cells/100μL/well로 깔고 다음날 각 화합물들을 최고 농도부터 3 배 연속희석하여 1 시간 동안 전처리하였다. 그 후 DHR123 12.5 μM stock 용액을 10 μL 처리 (최종 농도 1.25 μM)하여 30 분 동안 37℃ 배양기에서 배양하였다. 30분이 지나면 바로 tBOOH 400μM을 처리하여 2 시간 동안 배양하였다. 2 시간 후에 spectraMAX Gemini microplate reader로 480 nm로 excitation하여 538 nm에서 emission되어 나오는 형광을 읽었다. IC25라 함은 tBOOH를 처리하였을 때 산화 스트레스가 증가하여 DHR123이 산화되면서 형광이 올라가는데 2 시간 후의 이 값을 100 %로 할 때 이것의 25 %를 저해해주는 화합물의 농도를 말한다. 실험 결과는 표 2와 같다. 또한 실제로 세포 내에서 항산화 효능이 있는지를 알아보기 위해 96 well plate에서 assay가 끝난 후 4% 포름알데하이드로 세포를 고정하여 PBS로 3 번 정도 세척 후 PBS 100μL를 다시 넣고 immunofluorescence microscopy (Olympus)로 각 cell의 형광을 측정 (DHR123이 각 세포에 들어가 있어서 산화 되는 정도에 따라 형광을 나타냄)하였다. 결과는 도 1에 나타내었다. 또한 MitoSOX red probe (최종 농도 5μM)를 사용하여 같은 방법으로 superoxide의 생성 정도를 저해하는지를 측정하였다.
[표 2] DHR123을 이용한 항산화 효능 결과
Figure 112010068982648-pat00007
실험예 1-3 tBOOH 에 의해 유도되는 산화 스트레스에 대한 세포 보호 효과
Tertiary-butylhydroperoxide (tBOOH)는 다양한 세포에서 산화 스트레스를 유발하여 세포 사멸을 유도하는 것으로 알려져 있다. 이에 tBOOH를 H9C2세포에 처리하여 항산화 효능에 의하여 세포사멸을 저해하는지 살펴보았다. 실험 방법은 일단 H9C2를 96 well plate에 1.5 × 104 cells/100μL/well로 깔고 다음날 화합물을 한 시간 동안 전 처리하고 tBOOH를 최종적으로 400 μM 농도로 처리하여 2 시간 동안 배양하였다. 포름알데하이드 50 μL를 각 well에 넣어 세포를 고정하였다. 30 분 동안 세포를 고정하고 증류수로 3 회 정도 세척하였다. 그 후 50℃ dry oven에서 plate를 완전히 말리고 SRB solution을 넣어 남아 있는 총 단백질 양을 염색하였다. 다시 1% acetic acid 용액으로 완전히 씻어 내고 플레이트를 말린 후 10 mM Tris 용액 100 μL를 넣어 dye를 우려 낸 후 spectraMAX Elisa reader로 590 nm와 650 nm에서 O.D.를 측정 후 IC50를 계산하였다. IC50라 함은 tBOOH를 처리시 세포의 사멸을 50 %를 막아주는 화합물의 농도를 말한다. 실험 결과는 다음의 표 3과 같다.
[표 3] tBOOH에 대한 세포 보호 효능
Figure 112010068982648-pat00008
실험예 1-4 Dihydrorhodamine 123을 이용한 ONOO - ( peroxynitrite ) 제거능 측정
RNS의 일종으로 알려진 ONOO-는 산화 스트레스에서 매우 중요한 역할을 하고 있다. 따라서 괴사 저해제들의 ONOO- 제거능을 평가하는 것은 매우 중요하다. DHR123 probe는 ONOO-에 의해 산화가 된다는 것은 잘 알려져 있다. 따라서 각 화합물들의 효능을 평가하고자 하였다. 일단 각 화합물들을 50 μM 부터 3 배씩 연속 희석하여 10 μl를 96 well plate에 넣었다. 그 후 assay mixture (10 μM DHR123, 1 × PBS, 100 μM DPTA without ONOO-) 170 μL를 각 well에 넣었다. 마지막으로 ONOO- 용액 (최종 1μM) 20 μL을 넣어 반응을 시작하였다. IC50라 함은 ONOO-에 의해서 DHR123이 산화되는 정도를 50% 저해하는 화합물의 농도를 말한다.
여러 화합물들의 ONOO- 제거능의 구조-활성 연관성 (structure-activity relationship, SAR) 연구 결과는 표 4에 나타내었다.
[표 4] 여러 화합물들의 ONOO- 제거능 효과
Figure 112010068982648-pat00009
실험예 1-5: H 2 O 2 및 tBOOH 에 대한 직접적인 항산화 효과
인돌구조를 가진 괴사 저해제들의 항산화 효과를 알아보고자 특정한 ROS인 H2O2 (hydrogen peroxide)와 tBOOH에 대해 직접적인 항산화 효과가 있는지 평가하였다.
먼저 DMEM complete media 100 μL에 각 화합물들을 희석하여 10 μL씩 처리한 후 DHR123 probe를 1.25 μM이 되게 10 μL를 처리하였다. H2O2나 tBOOH를 아래 표 5와 같은 농도가 되게 하여 처리 2시간 후에 480 nm (ex)/538 nm (em) 파장에서 fluorescence를 측정하였다. 기기는 spectraMax gemini를 사용하였다. 여기서 IC25라 함은 H2O2나 tBOOH에 의해 DHR123 probe가 산화되어 나오는 형광을 100 %로 가정하고 이 변화되는 정도를 25 % 막아주는 화합물의 농도를 말한다.
[표 5] H2O2 및 tBOOH에 대한 direct antioxidant effect
Figure 112010068982648-pat00010
실험예 2: 화합물 9의 Beagle Dog 에서 허혈 및 재관류에 의한 간 손상에 대한 보호 효과 실험.
실험 디자인: 8.5 ~ 11.5kg의 27 마리의 건강한 Beagle Dog을 실험을 위해 선정되었다. 이 실험은 아산 병원 윤리 위원회에 승인을 받아 수행되었다. 간에 글라이코겐의 축척을 최소화하기 위해 24 시간 동안 fasting을 하였으며 수술 전에 면도를 하여 털을 제거 하였다. 그리고 대조군 A (n=9)와 실험군 B (n=6), C (n=6), D (n=6)로 무작위 군 분리를 하였다. Beagole Dog의 기관 내 삽관이 되었고 zoletil과 2.5 % enflurane으로 일반적인 마취를 수행하였다. Cefazolin과 ketorolac은 윤리 위원회에서 승인된 절차에 따라 항생제와 진통제로써 각각 사용되었다.
수술 절차: 개들을 따뜻한 담요가 놓여 있고 좌, 우측에 따뜻한 물병들이 있는 수술대 위에 반듯하게 눕혔다. 외쪽 외부 jugular vein과 오른쪽 긴 saphenous vein은 21 gauge IV 카테터로 개방된 approach를 통해 cannulation을 하였다. 오른쪽 내부 carotid artery를 절개하고 수술 동안 혈류 동태를 잘 파악하기 우회 cannulation하였다. 완전한 intravenous 접근이 얻어진 후에 마취가 2.5 % enflurane의 흡입에 의해 유지되었다. Crytalloid 용액은 15 mL/kg/hr의 속도로 주입하였다.
약물 처치군인 B, C, 그리고 D group은 IV로 좌측 hepatic inflow occlusion 20 분 전에 각각 13 mg/kg, 4.5 mg/kg, 1.5 mg/kg의 약물을 투여 받았다. Concurrent 용량 및 infusion은 Cmax 12.5 mg/mL(at 20 min)가 Css 5 mg/mL이도록 제공되었다. 모든 개들은 수술하는 동안 매 15 분 마다 혈압, 심장 박동수, 호흡률 및 arterial oxygen saturation을 점검하면서 모니터링을 받았다. 수술은 reverse T incision에 의해 수행되었다. Hepatoduodenal ligament는 lesser omentum을 나눈 후에 isolation되었다. 담낭과 간의 4 번째 엽을 확보하고 부드럽게 hilar 구조를 따라 위쪽으로 되집어 갔다. 도 19의 a는 간의 좌엽과 우엽을 나타내며 이들은 Cantlie 선을 따라 나눠져 있다. 도 19의 b는 전형적인 hilar 구조를 보여주고 있다. 인간에서는 우측 pedicle이 총 간 볼륨의 60 - 70 %를 차지한다. 좌측 hepatic inflow를 90 분 동안 occlusion (폐색) 하여 허혈 손상 (ischemic injury)을 유도 후에 clamp를 떼내어 60 분 동안 재관류 손상 (reperfusion injury)을 유도하였다(도 19의 c). 그래서 현 모델은 90 분 허혈 손상과 60분 재관류 손상을 이용하는 시스템이다. 수술 후 복강과 피부를 closing하였다.
혈액 샘플링과 생검: Full 혈액 카운트 (FBE;Hb, WCC, HCT, Plt, MCR, MCH 및 MCHC), 간기능 테스트 (LFT;AST, ALT, LDH, 및 총 빌리루빈), urea 그리고 전해질( U&E; BUN과 크레아틴), 간 생검 (조직병리 및 H&E 염색), HMGB1 측정을 포함한 혈액 샘플림 및 간 생검 등이 기 정해진 간격에 따라 수행되었다. Light 및 electron micrograph가 간세포의 모양을 분석하기 위해 사용되었다. Beagle Dog들은 계속적인 진통제 투여 및 soft 그리고 high-protein diet를 제공함으로써 수술 후 따뜻하고 깨끗한 환경에서 유지되었다. 그리고 절차에 따라 48 시간 후에 sacrifice 하였다. 결과는 도 3, 4 및 5에 나타내었다.
IR injury후 Histological 분석: 간 생검체를 고정과 탈수 후에 paraffin embedding을 거쳐 4 μm 두께로 자른 다음 Mayers hematoxylin-eosin 방법을 통해 염색하였고 광학 현미경으로 관찰하였다. 모든 샘플들은 무작위 분배되었고 blind로 분석되었다. 샘플들은 간세포 degeneration과 괴사, sinusoidal 및 portal vein congestions, 그리고 염증세포 침착을 위해 분석되었다. 조직 관찰은 이전 보고 된 방법 (Hafez T et al. Journal of Surgical Research 2007;138:88-99)에 따라서 정량적인 방법으로 등급화 - (0 (0%, none), 1 (1-25%, mild), 2 (26-50%, moderate), or 3 (51-100%, marked) - 하였다. 결과는 도 6에 나타내었다.
HMGB1 측정: HMGB1 ELISA assay kit를 사용하여 protocol에 따라 측정하였다. 결과는 도 7에 나타내었다.
Mitochondrial complex I activity측정: 간 조직들은 ice-cold 버퍼 A (320mm sucrose, 1 mM EDTA, 10 mM Tris (pH 7.5))로 2 회 세척하였다. 잘 게 썰고 1 g당 4 mL AT 버퍼 (75 mM sucrose, 225 mM mannitol, 1 mM EGTA 및 0.01 % BSA, pH 7.4)를 glass-teflon homogenizer에 넣어 갈았다. homogenate를 4℃에서 5 분 동안 1000 g에서 원심분리를 하였고 supernatant를 다시 2 회 13000g에서 원심분리하였다. 미토콘드리아가 enrich된 덩어리를 미토콘드리아 complex I 활성을 측정하는데 사용하였다. Complex I activity (NADH:CoQ oxidoreductase)는 decylubiquinone 존재 하에 NADH의 rotenone-sensitive하게 줄어드는 것을 340 nm에서 모니터링하여 측정하였다. 결과는 도 8에 나타내었다.
실험예 3. tBOOH 처리 후 화합물 9에 의한 HMGB1 release 억제 효능 실험.
세포의 괴사가 일어날 때 HMGB1이 release가 되는 것은 잘 알려져 있다. 따라서 산화적 스트레스를 주는 tBOOH를 400 μM 농도로 처리하여 시간 별로 HMGB1이 release되는 것을 막아주는지를 보고자 하였다. 먼저 H9C2 세포를 1.5 ×104cells/100μL/well로 깔고 다음 날 화합물 9를 30 분 동안 10 μM 농도로 처리하였다. tBOOH를 최종 400 μM 농도로 처리하여 시간 별로 supernatant 50 μL를 취하여 HMGB1 ELISA를 사용하여 HMGB1의 level을 측정하였다. 결과는 도 9에 나타내었다.
실험예 4. tBOOH 처리 후 total ATP 양의 변화 관찰 실험
세포는 괴사로 사멸하는 과정에서 ATP 양이 감소하는 현상을 나타낸다. ATP 양이 유지되는 것은 세포의 생존에 매우 중요하다. 따라서 tBOOH를 처리 후 ATP 양의 변화를 관찰하고자 하였다. 먼저 H9C2 세포를 1.5 × 104 cells/100 μL/well로 깔고 다음 날 화합물 9를 30 분 동안 10 μM 농도로 처리하였다. 그 후 tBOOH를 최종 400 μM이 되게 처리하여 시간 별로 ATP의 양을 ATP를 재는 Kit (PerkinElmer Life Sciences)를 사용하여 세포 내 남아 있는 양을 측정하여 그 결과를 도 10에 나타내었다.
실험예 5: 화합물 9의 in vitro 허혈성 재관류 손상 후 세포의 괴사에 대한 보호 효과 실험
화합물 9의 허혈성 재관류 손상 후 H9C2 세포의 괴사에 대한 보호 효능을 측정하였다. 이를 위해서 다음의 실험들이 실시되었다. 첫째는 FDA와 PI 이중 염색법, 두번째는 세포수 측정법, 세번째는 FACS 분석법, 마지막으로 미토콘드리아 확장 측정법을 실시하였다.
세포 배양 및 저산소 손상 조건: H9C2세포를 FBS와 항생제가 들어간 DMEM 배지에서 배양하였다. 배양은 80-90 % 단층을 이루게 하여 실험에 사용하였다. 실험 24 시간 전에 H9C2세포를 35 mm 용기와 150 mm 용기에 심었다. 세포의 단층 형성이 대략 80% 정도가 되었을 때 0.5 % FBS와 항생제가 들어간 DMEM 배지로 교체해 주고 실험에 사용하였다. 세포들은 24 시간 동안 hypoxic chamber에 넣어 두었다. 23.5시간에 hypoxic chamber 내에서 여러 실험군의 약제 [0.01% DMSO, 화합물 9 (20 μM), vitamin C (10 μM), 그리고 z-VAD-fmk (20 μM))]들로 세포를 처리하였다. 37℃ 배양기로 옮겨 재배양 직전에 400 μM의 H2O2로 세포를 처리하였다. 재산소첨가 (Reoxygenation)는 1.5 시간 동안 진행하였다.
실험예 5-1: H9C2 에서 허혈성 재관류 손상 후 FDA 와 PI 이중 염색을 통한 보호 효능 실험
35 mm 형광용 용기에서 배양된 H9C2 세포를 FDA/PI 이용하여 이중염색하였다. FDA (Fluorescein diacetate, 씨그마)와 PI (propidium iodide) 원액을 준비하였다. 실험세포를 PBS로 세척하고 4.5 μL의 FDA 용액 (5 mg/mL)과 4 μL의 PI 용액 (2 mg/mL)을 1.5 mL 세포배지에 첨가하였다. 형광 현미경을 통하여 FDA/PI 염색된 이미지를 얻었다. 실험의 결과는 도 11에 나타내었다.
실험예 5-2: H9C2 에서 허혈성 재관류 손상 후 FDA 와 PI 이중 염색 후 직접 세포수를 세어 보호 효과를 측정하는 실험
상기 실험예 5-1에서 형광 현미경을 통하여 FDA/PI 염색된 이미지를 얻은 후에 살아있는 세포와 죽은 세포의 숫자를 Image Pro를 사용하여 측정하였다. 실험결과는 도 12에 나타내었다.
실험예 5-3: H9C2 에서 허혈성 재관류 손상 후 Annexin V와 PI 이중염색하여 FACS 분석을 이용한 보호 효과 측정 실험
자가 사멸되거나 (apoptotic) 또는 괴사된 (necrotic) 세포를 FITC와 Annexin V 자가사멸 분석 kit 을 사용하여 염색 후, 유세포 분석기를 이용하여 분석하였다. 35 mm 용기에서 배양된 세포는 PI와 Annexin V-FITC의 무처리, 단독 그리고 이중염색을 위해 사용되었다. 재산소첨가 후에 수집된 세포를 10 분 동안 4℃, 2000 rpm에서 원심분리하였다. 상등 배지를 제거하고 Annexin V-결합 완충용액으로 다시 부유한 세포를 5 μL PI와 5 μL Annexin V-FITC로 15 분 동안 빛이 차단된 조건에서 염색 후에 FACS 분석을 하였다. 실험결과는 도 13에 나타내었다.
실험예 5-4: H9C2 에서 허혈성 재관류 손상 후 미토콘드리아 팽창 억제 효능 측정 실험
150 mm 용기에서 배양된 H9C2 세포를 미토콘드리아 팽창 측정을 위해 사용하였다. O.05 % Trypsin을 사용하여 세포들을 모았고 4 ℃ 에서 2000 rpm으로 10 분 동안 원심분리하였다. 상층액을 제거하고 세포를 PBS로 세척하였다. 2000 rpm, 4 ℃ 에서 10 분 동안 재원심분리한 후에 상등액을 버리고 얻은 세포 덩어리를 500μL의 filtrated isolating buffer (300 mM Mannitol, 0.2 mM EDTA, 5 mM Tris-HCl pH 7.4, 1 % Bovine Serum Albumin)에 넣어 다음 실험에 사용하였다. syringe로 파쇄된 세포를 Trypan Blue 염색액으로 점검하였다. 대부분의 세포들이 깨졌을 때 즉시 4 분 동안 2000 rpm으로 원심분리하였다. 미토콘드리아가 있는 상등액을 모아서 10 분 동안 4 ℃ 13000 rpm에서 원심분리 후, 상등액을 버리고 얻은 미토콘드리아 덩어리를 100μL incubation buffer (150 mM KCl, 20 mM Tris-HCl pH 7.4)에 다시 잘 풀었다. 단백질 농도는 단백질 정량 kit으로 정량하였다. 분리된 미토콘드리아 단백질의 일정량을 96 공 배양 플레이트에 넣어서 Spectrophotometer를 사용하여 513 nm에서 측정하였다. 실험결과는 도 14에 나타내었다.
실험예 5-5: H9C2 에서 허혈성 재관류 손상 후 Mitotracker 와 PI 이중염색을 이용한 미토콘드리아 현탁도 및 핵 괴사 측정 실험
미토콘드리아 시각화 및 3D 이미지: 35 mm 형광 용기에 배양된 H9C2세포의 미토콘드리아를 시각화 하기 위하여, DMSO에 녹인 1 mM MitoTracker Green FM을 준비하였다. 세포를 배지로 세척 후 0.5 mM MitoTracker Green FM과 4 μL PI용액을 사용하여 이중염색하였다. 1 시간 후에 세포를 형광 현미경으로 분석하였다. Imaris 프로그램을 사용하여 3D 이미지를 얻었다.
전자 현미경: 용기의 바닥에 커버슬립이 있는 24 공 플레이트에 배양된 H9C2 세포를 사용하였다. 세포를 2 % glutaraldehyde를 포함하는 0.1 M sodium phosphate 완충용액 (pH7.4)를 사용하여 고정하였다. 세포를 PBS 완충용액으로 2 회 세척 후, 상온에서 1 % OsO4 및 1.5 % potassium으로 1 시간 동안 후고정을 하였다. PBS 완충용액과 증류수로 2 회 연속으로 세척하였다. Filtrated 0.5 % uranyl acetate를 사용하여 4℃에서 overnight으로 세포를 배양하였다. 증류수로 2 회 세척하고 에탄올을 사용하여 탈수하였고 2 회에 걸쳐 각각 1 시간 동안 Epon에 넣었다. 세포를 60℃ 온도에서 2 일 동안 Epon 내에서 폴리머화하여 전자현미경 분석을 시행하였다.
형광 면역염색: OCT-embedded 조직 단편을 차가운 0.05 % TBST로 3 회에 걸쳐 10 분씩 세척하였다. 조직 단편을 1 % BSA가 들어간 blocking 용액으로 1 시간 동안 상온에서 처리하였다. Heavy chain cardiac myosin 면역 형광 염색을 위해서 조직 단편을 1차 항체인 마우스 anti-heavy chain cardiac myosin (1: 100, Abcam)을 미리 처리하여 준비하였다. 조직 단편들을 PBS-Tween 20으로 2 회 세척하고 2 차 항체인 donkey anti-mouse 633 IgM (Invitrogen)으로 염색을 한 후, PBS-Tween 20으로 2 회 세척하였다. Wheat Germ Agglutinin 염색을 위해서는 조직 단편들은 Alexa Fluor 555 Wheat Germ Agglutinin (Invitrogen)를 사용하여 10 분 동안 37℃에서 배양하였다. Alpha-sarcomeric actin 면역형광염색을 위해서는 조직 절편을 1 차 항체, anti-alpha sarcomeric actin을 처리하여 4 ℃에서 24 시간 동안 배양하였다. 조직 절편을 0.05 % TBST로 2회 세척 후, 2차 항체인 Alexa Fluor 555 donkey anti-mouse IgG (Invitrogen)로 염색을 하였다. 조직 절편을 핵 염색을 위해 5 초 간 hematoxylin (Sigma)으로 염색하였다. 조직 절편을 mounting한 후에 이미지를 형광 현미경으로 찍었다. 실험결과는 도 15에 나타내었다.
실험예 6: 화합물 9의 SD rat 에서 심장 및 허혈성 재관류 손상 유도 후 보호 효과 실험.
동물 관리: 270 - 360 g 정도의 male SD rat을 서울대학교 동물센터에서 구입 하였다. 쥐를 12 시간 주기로 빛이 나갔다 들어오는 조건과 온도는 22 ℃ 가 유지되며 습도는 55 %로 유지되는 semi-specific pathogen free 상태에서 유지하였다. 표준 solid rodent chow 및 tap water를 제한 없이 공급하였다. 모든 실험 동물들은 실험수행 전 1 주일 동안 적응기간을 가졌으며 서울대학교 병원의 IACUC의 승인하여 진행되었다.
수술 준비: 1 주일의 적응기간 후에 쥐를 ketamine (100mg/kg, Yuhan Corp., Seoul, Korea)과 xylazine (10mg/kg, Bayer, Shawnee Mission, Kansas)을 혼합하여 복강 주입을 통해 마취를 하였다. 적당한 마취와 기본 echocardiographic 평가 후에 모든 동물들은 100% 산소가 주입되도록 하였다.
실험적인 허혈성 재관류 모델은 45 분 동안 LAD를 일시적으로 묶어 유도하였다. LAD는 동맥 위로 폴리에틸렌 10 tubing이 있는 8-0 Ethilon (Ethicon)을 사용하여 45분 동안 묶었다. 허혈은 myocardium과 ventricular tachyarrhythmia의 표백에 의해 육안으로 확인하였다.
대조군 (5 mL of 0.9 % saline), cyclosporine 처리군 (25 mg/kg in 5 mL of 0.9 % saline), 그리고 화합물 9를 처리한 그룹 (30 mg/kg in 5 mL of 5 % dextrose)의 세 그룹으로 분류하여 실험하였다. 약물 주입은 동물 infusion pump를 사용하여 꼬리 정맥을 통해 20 분간 계속해서 주입해 주었다.
묶는 것을 제거하고 그리고 폴리에틸렌-10 튜빙을 제거함으로써 재관류를 시작하었고 처음 몇 분 동안에 손상된 myocardium의 전형적인 hyperemic 변화에 의한 특징으로 재관류를 규정지었다. 느슨하게 된 봉합 조각은 termination동안 허혈 구역을 정하기 위해 남겨 놓았다.
수술 후 화합물 9를 처리한 그룹은 3 일 동안 하루에 한번씩 같은 양으로 입을 통해 약을 투여하였다. 나머지 그룹 역시 동일 용량으로 투여하였다.
Echocardiography에 의한 경색된 쥐 심장의 기능 분석: 마취하에서 왼쪽 hemithorax의 털을 깎고 transthoracic echocardiography는 coronary ligation 직전에 수행되었고 Linear-array transducer가 장착된 Doppler echocariographic 시스템을 사용하여 data를 수집하였다. 심장은 parasternal long-axia and short-axis view의 2 차원 모드를 사용하여 이미지화하였다. Papillary muscle을 포함한 short-axis view는 interventricular septum과 LV posterior wall에 수직으로 M-mode cursor를 positioning을 위해 사용하였다. 훈련 기간 동안 얻어진 이미지들은 기록하지 않았다. Left ventricular end-diastolic (LVEDD) 및 end-systolic dimensions (LVESD)은 American Society of Echocardiography의 leading-edge의 방법에 따라 측정하였다. LV의 퍼센트 (%) fractional shortening은 100 × (LVEDD-LVESD)/LVEDD 공식을 이용하여 계산하였다.
경색된 쥐 심장의 조직 분석: 심근 허혈 후 3 일 째에 쥐를 마취시켰다. 경색의 크기를 평가하기 위해 paraffin에 embedding된 대표 LV 절편을 4 μm 슬라이스로 절단하였다. Neutrophil (호중구)은 hematoxylin 과 eosin으로 염색을 하였고 광학현미경으로 관찰하였다. 각 절편의 1 mm2 면적 내의 염증 세포의 숫자를 측정하였다. 이미지 분석 시스템 (Image Pro version 4.5; MediaCybernetics, Bethesda, Maryland)을 이용하여 Masson’s trichrome 염색된 섬유화 면적을 분석하였다. 섬유화 면적은 각 심장에서 2 개의 독립된 절편을 가지고 수행하였고 수치 분석을 위해 평균값이 사용되었다.
면역 조직학 염색과 분석을 위해서는 쥐 심장들을 8 μm 절편들을 가진 OCT-compound (Tissue-Teck, Sakura, Torrance, California)에 넣어 급속 냉각보관하였다. 염색은 동물당 (n=3) 10 개의 임의의 HPF 내에 양성 세포수를 측정하여 정량하였다. 자가 사멸 (apoptosis)을 평가하기 위해 TUNEL assay (Chemicon S7100 kit, Chemicon, Temecula, California)와 Caspase-3에 대한 면역조직 염색법이 수행되었다. TUNEL 또는 capase-3 에 대한 양성 세포들은 각 동물당 최소한 3 개의 다른 절편들에 대해 10 개의 다른 현미경 구역을 정하여 측정하였다.
면역형광 염색은 anti-cardiac troponin I (Santa Cruz Biotechnology)으로 수행하였다. 즉, green FITC가 결합된 goat anti-rabbit IgG 항체 (Molecular Probes)로 검출할 수 있다. 빨간 PI 염색은 핵을 나타내기 위해, Alexa Fluro 350에 의한 파란 alexa HMGB1염색은 핵을 나타내기 위해 염색하였다. 빨간색 Dil-labeled MSC와 녹색 connexin-43 또는 cardiac troponin I 발현의 colocalization은 형광 현미경 (LSM 510 META, Carl Zeiss, Peabody, Massachusetts)으로 관찰하였다.
경색 크기 측정 (Infarct Size Measurement): 심근의 허혈성 재관류 손상 (I/R) 72 시간 후에 결정된 경색의 크기는 AAR (area at risk) 퍼센티지로 평가하었다. LV (left ventricle)에 대한 AAR의 비율이 I/R이 수행된 심근 조직의 정도를 측정하는 방법이다. IS/AAR 비율은 손상된 myocardium 내에 IS를 결정하기 위한 정확한 방법으로 약물 처리 효능을 평가할 수 있는 primary end point이다. AAR을 결정하기 위해, 좌측 coronary artery를 다시 묶었고 4 % Evans Blue dye를 retrograde 방법으로 thoracic aorta를 통해 주입하였다. 신속히 심장을 떼어서 0.9 % saline에 넣고 세척 후 냉동고 (- 20 ℃)에 넣었다. 심장을 5 개의 1mm cross 절편으로 잘랐다. 심장 절편들은 다시 포름 알데하이드에 넣기 전 15분 동안 37℃ 에서 1% triphenyltetrazolium chloride에 보관하였다. 정상 조직은 빨갛게 염색되고 경색된 조직은 하얗게 염색되었다. 심장 절편을 digital 방식으로 현미경 하에서 사진을 찍었으며 (Canon EOS 400D), IS, AAR, 그리고 전체 LV 면적은 ImagePro software (version 1.34)를 사용해 측정하였다.
수치 분석: 모든 데이터는 means (SE)으로 표현하였다. 계속된 변수들은 Student-t test로 비교하였고, 다중 비교는 Bonferroni post hoc correction을 가진 variance 분석법으로 수행하였다. P < 0.05 값을 통계적으로 유의성 있는 것으로 판단하였으며, 모든 분석은 SPSS version 17.0 (SPSS, Chicago, Illinois)을 사용하여 수행하였다.
허혈성 재관류 손상(I/R) 모델에서 좌심실 팽창에 대한 화합물 9의 억제 효과를 도 16에, I/R 손상 후 좌심실의 분획 단축에 대한 화합물 9의 억제 효과를 도 17에, 그리고 I/R 손상 후 심장을 떼내어 MT (Masson-Trichrome) 염색하는 것에 의하여, 심장 섬유화 정도에 대해 화합물 9와 CsA를 비교 분석한 결과를 도 18에 각각 나타내었다.

Claims (25)

  1. 활성성분으로 치료학적 유효량의 하기 화학식 (1), 화학식 (2) 또는 화학식 (3) 의 화합물, 그의 약제학적으로 허용되는 염 또는 그의 이성체, 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는, 산화적 스트레스와 관련된 간질환, 심장질환, 혈관질환, 퇴행성 뇌질환, 미토콘드리아 기능 장애로 인한 질환, 염증성 질환, 허혈성 재관류 손상으로 유래되는 질환, 또는 바이러스 또는 박테리아로 인한 감염 질환의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물.
    [화학식 1]
    Figure 112013017855723-pat00011

    상기 화학식 1에서,
    na은 0 내지 3의 정수이고,
    Aa는 각각 N, O 및 S 원자 중에서 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 포함하는 5원 헤테로아릴 또는 헤테로사이클을 나타내며,
    R1a은 R5a-Xa-Ba-X`a- 이고,
    Ba 및 X`a는 각각 직접결합을 나타내고,
    Xa는 -CO-, -OC(O)- 또는 -(CH2)ma이고, ma은 0 내지 3의 수이며,
    R5a는 수소, 니트릴, 하이드록시, C1-C6-알킬, C3-C10-사이클로알킬, 페닐 또는 할로페닐을 나타내거나, 각각 N, O 및 S 원자 중에서 선택된 1 또는 3개의 헤테로원자를 포함하며 옥소 또는 C1-C6-알킬에 의해 치환될 수 있는 단일 또는 융합환의 3 내지 10원 헤테로사이클 또는 헤테로아릴을 나타내고,
    R2a는 수소, C1-C6-알킬 또는 페녹시를 나타내고,
    R3a는 수소 또는 C1-C6-알킬을 나타내고,
    R4a는 할로겐 및 C1-C6-알킬 중에서 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 치환체에 의해 치환될 수 있고 옥소를 포함할 수 있는 C3-C6-사이클로알킬을 나타낸다;
    [화학식 2]
    Figure 112013017855723-pat00012

    상기 화학식 2에서,
    nb은 1 내지 3의 정수이고,
    mb은 0 또는 1이며,
    Ab는 페닐을 나타내고,
    Xb는 C 또는 N을 나타내며,
    R1b은 수소 또는 C1-C6-알킬을 나타내며,
    R2b는 수소, 할로겐, 시아노, 니트로, 하이드록시 또는 C1-C6-알콕시를 나타내고,
    R3b는 수소, 할로겐 또는 C1-C6-알킬을 나타내고,
    R4b는 -(CH2)tbBb-R13b이고, tb는 0 내지 3의 수이고, Bb는 N, S 및 O 원자 중에서 선택된 1 또는 2 개의 헤테로원자를 포함하며 5 내지 6원인 헤테로사이클을 나타내거나 C6-C10-아릴을 나타내며, R13b은 수소, 시아노, 할로겐, 하이드록시, 옥소 또는 티올을 나타내고, 단, Xb가 N인 경우 R4b는 수소 또는 C1-C6-알킬을 나타내며,
    R5b는 수소 또는 헤테로사이클릴-C1-C6-알킬을 나타내고, 여기서 헤테로사이클은 N 및 O 원자 중에서 선택된 1 내지 3개의 헤테로 원자를 포함하는 3 내지 8원 환이고, 단, Xb가 N인 경우 R5b는 수소이며,
    R6b는 -(CH2)pb-Zb-Db-Wb-R14b를 나타내며, 여기에서 Zb는 직접결합을 나타내고, Db는 직접결합을 나타내거나, 1 또는 2개의 N 원자를 포함하는 5 내지 6원 헤테로사이클을 나타내거나, N, O 및 S 원자 중에서 선택된 1 또는 2개의 헤테로원자를 포함하는 5 내지 6원 헤테로사이클을 나타내고, Wb는 직접결합을 나타내거나 -C(O)-, -C(O)O- 또는 -S(O)yb를 나타내며, 여기에서 yb는 1 또는 2의 정수이고, R14b는 수소, 하이드록시, C1-C6-알킬, N, S 및 O 원자 중에서 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 포함하는 5 내지 6원 헤테로사이클, 또는 C6-C10-아르-C1-C6-알킬을 나타내고, 단, Xb가 N인 경우 R6b는 C4-C6-사이클로알킬을 나타내거나, N, O 및 S 원자 중에서 선택된 1 또는 2개의 헤테로 원자를 포함하는 5 내지 6원 헤테로사이클을 나타낸다;
    [화학식 3]
    Figure 112013017855723-pat00013

    상기 화학식 3에서,
    Bc는 페닐 또는 피리딘을 나타내고,
    R7c은 수소, 할로겐 또는 하이드록시를 나타내며,
    R8c은 C3-C8-사이클로알킬, C3-C8-헤테로사이클릭 또는 C3-C8-사이클로알킬-C1-C6-알킬을 나타내고,
    R9c은 수소, 할로겐, C1-C6-알콕시 또는 알릴옥시를 나타낸다.
  2. 제 1 항에 있어서, 산화적 스트레스가 활성 산소종(ROS. reactive oxygen species) 또는 활성 질소종(RNS, reactive nitrogen species)에 의해 매개되는 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
  3. 삭제
  4. 제 1 항에 있어서, 허혈성 재관류 손상은 미토콘드리아 기능 저하에 의한 것임을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
  5. 제 1 항에 있어서, 미토콘드리아 기능 장애로 인한 질환이 MELAS (Mitochondrial myophthy, encephalopathy, lactic acidosis and stroke like episodes), MERRF 증후군(Myoclonus epilepsy with ragged-red fibers) 또는 컨스-세이어 증후군(Kearns-Sayre syndrome)인 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
  6. 제 1 항에 있어서, 허혈성 재관류 손상은 저산소 손상(hypoxic injury)에 의한 것임을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
  7. 제 1 항에 있어서, 허혈성 재관류 손상은 세포괴사에 의한 것임을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
  8. 제 7 항에 있어서, 세포괴사가 HMGB1(High motility group box 1)를 분비하는 세포의 괴사인 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
  9. 삭제
  10. 삭제
  11. 제 1 항에 있어서, 패혈증, 류마티스성 관절염, 골관절염, 간경화, 출혈성 질환, 괴사성 질환, 바이러스 감염 또는 박테리아 감염 질환의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물.
  12. 삭제
  13. 제 1 항에 있어서, 허혈성 재관류 손상으로 유래되는 질환으로서 간이식, 간절제술, 간색전술, 간섬유증, 간경변, 알코올성/비알코올성 지방간, 및 바이러스 또는 약물로 인한 간염의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물.
  14. 제 1 항에 있어서, 부정맥, 심장마비 또는 심근경색의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물.
  15. 제 1 항에 있어서, 루게릭병, 뇌졸중, 치매, 파킨스씨병 또는 헌팅톤 병의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물.
  16. 제 1 항에 있어서, 인플루엔자, HBV, HCV, HIV 바이러스 감염 또는 박테리아 감염에 의해 유도되는 질환의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물.
  17. 삭제
  18. 삭제
  19. 삭제
  20. 하기 화학식 3의 화합물, 그의 약제학적으로 허용되는 염 또는 그의 이성체:
    [화학식 3]
    Figure 112013017855723-pat00014

    상기 화학식 3에서,
    Bc는 페닐 또는 피리딘을 나타내고,
    R7c은 수소, 할로겐 또는 하이드록시를 나타내며,
    R8c은 C3-C8-사이클로알킬, C3-C8-헤테로사이클릭 또는 C3-C8-사이클로알킬-C1-C6-알킬을 나타내고,
    R9c은 수소, 할로겐, C1-C6-알콕시 또는 알릴옥시를 나타낸다.
  21. 삭제
  22. 제 20 항에 있어서,
    R7c은 수소 또는 할로겐을 나타내고,
    R8c은 C3-C8-헤테로사이클릭 또는 C3-C8-사이클로알킬-C1-C6-알킬이며,
    R9c은 수소, 할로겐 또는 C1-C6-알콕시인 화합물.
  23. 제20항에 있어서,
    R8c은 사이클로펜틸이거나 테트라하이드로피란인 화합물.
  24. 제20항에 있어서, 하기 그룹으로부터 선택되는 화합물:
    사이클로펜틸-(2-페닐-3H-벤조이미다졸-4-일)-아민
    (2-페닐-3H-벤즈이미다졸-4-일)-(테트라하이드로-퓨란-4-일)-아민
    사이클로펜틸-(2-피리딘-2-일-3H-벤조이미다졸-4-일)-아민.
  25. 활성성분으로 하기 화학식 (1), 화학식 (2) 또는 화학식 (3)의 화합물, 그의 약제학적으로 허용되는 염 또는 그의 이성체, 및 허용 가능한 담체를 포함하는, 항산화 효과를 가지는 화장품 조성물:
    [화학식 1]
    Figure 112013017855723-pat00015

    상기 화학식 1에서,
    na은 0 내지 3의 정수이고,
    Aa는 각각 N, O 및 S 원자 중에서 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 포함하는 5원 헤테로아릴 또는 헤테로사이클을 나타내며,
    R1a은 R5a-Xa-Ba-X`a- 이고,
    Ba 및 X`a는 각각 직접결합을 나타내고,
    Xa는 -CO-, -OC(O)- 또는 -(CH2)ma이고, ma은 0 내지 3의 수이며,
    R5a는 수소, 니트릴, 하이드록시, C1-C6-알킬, C3-C10-사이클로알킬, 페닐 또는 할로페닐을 나타내거나, 각각 N, O 및 S 원자 중에서 선택된 1 또는 3개의 헤테로원자를 포함하며 옥소 또는 C1-C6-알킬에 의해 치환될 수 있는 단일 또는 융합환의 3 내지 10원 헤테로사이클 또는 헤테로아릴을 나타내고,
    R2a는 수소, C1-C6-알킬 또는 페녹시를 나타내고,
    R3a는 수소 또는 C1-C6-알킬을 나타내고,
    R4a는 할로겐 및 C1-C6-알킬 중에서 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 치환체에 의해 치환될 수 있는 C3-C6-사이클로알킬을 나타낸다;
    [화학식 2]
    Figure 112013017855723-pat00040

    상기 화학식 2에서,
    nb은 1 내지 3의 수이고,
    mb은 0 또는 1이며,
    Ab는 페닐을 나타내고,
    Xb는 C 또는 N을 나타내며,
    R1b은 수소 또는 C1-C6-알킬을 나타내며,
    R2b는 수소, 할로겐, 시아노, 니트로, 하이드록시 또는 C1-C6-알콕시를 나타내고,
    R3b는 수소, 할로겐 또는 C1-C6-알킬을 나타내고,
    R4b는 -(CH2)tbBb-R13b이고, tb는 0 내지 3의 수이고, Bb는 N, S 및 O 원자 중에서 선택된 1 또는 2 개의 헤테로원자를 포함하며 5 내지 6원인 헤테로사이클을 나타내거나 C6-C10-아릴을 나타내며, R13b은 수소, 시아노, 할로겐, 하이드록시, 옥소 또는 티올을 나타내고, 단, Xb가 N인 경우 R4b는 수소 또는 C1-C6-알킬을 나타내며,
    R5b는 수소 또는 헤테로사이클릴-C1-C6-알킬을 나타내고, 여기서 헤테로사이클은 N 및 O 원자 중에서 선택된 1 내지 3개의 헤테로 원자를 포함하는 3 내지 8원 환이고, 단, Xb가 N인 경우 R5b는 수소이며,
    R6b는 -(CH2)pb-Zb-Db-Wb-R14b를 나타내며, 여기에서 Zb는 직접결합을 나타내고, Db는 직접결합을 나타내거나, 1 또는 2개의 N 원자를 포함하는 5 내지 6원 헤테로사이클을 나타내거나, N, O 및 S 원자 중에서 선택된 1 또는 2개의 헤테로원자를 포함하는 5 내지 6원 헤테로사이클을 나타내고, Wb는 직접결합을 나타내거나 -C(O)-, -C(O)O- 또는 -S(O)yb를 나타내며, 여기에서 yb는 1 또는 2의 정수이고, R14b는 수소, 하이드록시, C1-C6-알킬, N, S 및 O 원자 중에서 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 포함하는 5 내지 6원 헤테로사이클, 또는 C6-C10-아르-C1-C6-알킬을 나타내고, 단, Xb가 N인 경우 R6b는 C4-C6-사이클로알킬을 나타내거나, N, O 및 S 원자 중에서 선택된 1 또는 2개의 헤테로 원자를 포함하는 5 내지 6원 헤테로사이클을 나타낸다;
    [화학식 3]
    Figure 112013017855723-pat00041

    상기 화학식 3에서,
    Bc는 페닐 또는 피리딘을 나타내고,
    R7c은 수소, 할로겐 또는 하이드록시를 나타내며,
    R8c은 C3-C8-사이클로알킬, C3-C8-헤테로사이클릭 또는 C3-C8-사이클로알킬-C1-C6-알킬을 나타내고,
    R9c은 수소, 할로겐, C1-C6-알콕시 또는 알릴옥시를 나타낸다.
KR1020100104175A 2009-10-26 2010-10-25 인돌 화합물을 포함하는 약제학적 조성물 KR101325272B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020100104175A KR101325272B1 (ko) 2009-10-26 2010-10-25 인돌 화합물을 포함하는 약제학적 조성물

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020090101978 2009-10-26
KR20090101978 2009-10-26
KR1020100098511 2010-10-08
KR20100098511 2010-10-08
KR1020100104175A KR101325272B1 (ko) 2009-10-26 2010-10-25 인돌 화합물을 포함하는 약제학적 조성물

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20110046321A KR20110046321A (ko) 2011-05-04
KR101325272B1 true KR101325272B1 (ko) 2013-11-05

Family

ID=43922791

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020100104175A KR101325272B1 (ko) 2009-10-26 2010-10-25 인돌 화합물을 포함하는 약제학적 조성물

Country Status (12)

Country Link
US (2) US20120214804A1 (ko)
EP (1) EP2493469A4 (ko)
JP (1) JP5820813B2 (ko)
KR (1) KR101325272B1 (ko)
CN (1) CN102596198B (ko)
AR (1) AR078775A1 (ko)
BR (1) BR112012009894A2 (ko)
MX (1) MX338807B (ko)
RU (1) RU2557243C2 (ko)
TR (1) TR201204895T1 (ko)
TW (2) TW201119651A (ko)
WO (1) WO2011052950A2 (ko)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022039506A1 (ko) 2020-08-19 2022-02-24 주식회사 미토이뮨테라퓨틱스 Ｍabc-r 감염에 의한 병적 염증 치료제로서의 미토콘드리아 표적 항산화제
WO2022220519A1 (ko) 2021-04-12 2022-10-20 주식회사 미토이뮨테라퓨틱스 5-[(1,1-디옥시도-4-티오몰포리닐)메틸]-2-페닐-n-(테트라하이드로-2h-피란-4-일)-1h-인돌-7-아민의 신규 결정형
WO2022220518A1 (ko) 2021-04-12 2022-10-20 주식회사 미토이뮨테라퓨틱스 5-[(1,1-디옥시도-4-티오몰포리닐)메틸]-2-페닐-n-(테트라하이드로-2h-피란-4-일)-1h-인돌-7-아민 황산염 및 이의 신규 결정형
WO2023182840A1 (ko) * 2022-03-25 2023-09-28 주식회사 미토이뮨테라퓨틱스 항바이러스용 약학적 조성물 및 이의 용도

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101304772B1 (ko) * 2011-04-11 2013-09-05 인제대학교 산학협력단 ＮｅｃｒｏＸ―５를 유효성분으로 포함하는 미토콘드리아 기능 조절용 조성물
KR101400346B1 (ko) * 2012-01-31 2014-05-30 인제대학교 산학협력단 ＮｅｃｒｏＸ를 함유하는 암 전이 억제용 조성물
WO2013115457A1 (ko) * 2012-01-31 2013-08-08 인제대학교 산학협력단 ＮｅｃｒｏＸ를 함유하는 암 전이 억제용 조성물
MX369571B (es) * 2014-04-18 2019-11-12 Lg Chemical Ltd Composicion para prevenir o tratar enfermedades del higado graso.
CA2953387C (en) * 2014-06-30 2023-11-28 The Regents Of The University Of California Ketobutyrate compounds and compositions for treating age-related symptoms and diseases
KR101633703B1 (ko) * 2014-12-30 2016-06-27 한국원자력의학원 necro X-5를 유효성분으로 포함하는 방사선 조사에 의한 세포손상 예방 또는 치료용 조성물
CN107434819B (zh) * 2017-02-15 2020-03-17 河北医科大学第二医院 吲哚-tempo缀合物及其在保护远隔器官对抗缺血再灌注损伤中的用途
WO2019033330A1 (en) * 2017-08-17 2019-02-21 Xw Laboratories, Inc. PREPARATION AND USES OF DERIVATIVES TRACERS OF OXYGEN REACTIVE SPECIES
ES2947741T3 (es) 2017-09-04 2023-08-17 Xwpharma Ltd Preparación y uso de un barredor de especies reactivas de oxígeno
US11795147B2 (en) 2019-08-26 2023-10-24 Boehringer Ingelheim International Gmbh Modulators of complex I

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20090018594A (ko) * 2007-08-17 2009-02-20 주식회사 엘지생명과학 세포괴사 저해제로서의 인돌 화합물

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6420429B1 (en) * 1997-12-23 2002-07-16 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Brain targeted low molecular weight hydrophobic antioxidant compounds
CA2302402C (en) * 1997-09-05 2008-12-02 Lead Chemical Co., Ltd. Stereoisomeric indole compounds, process for the preparation of the same, and use thereof
JP2002530396A (ja) * 1998-11-25 2002-09-17 イッサム・リサーチ・ディベロップメント・カンパニー・オブ・ザ・ヘブルー・ユニバーシティ・オブ・エルサレム スカベンジャー化合物
IL130169A (en) * 1999-05-27 2006-08-20 Neurim Pharma 1991 Indole derivatives, and pharmaceutical preparations, skin protection preparations, and cosmetics containing them
TWI324064B (en) * 2002-04-03 2010-05-01 Novartis Ag Indolylmaleimide derivatives
DE10217006A1 (de) * 2002-04-16 2003-11-06 Merck Patent Gmbh Substituierte Indole
US8957070B2 (en) 2005-04-20 2015-02-17 Takeda Pharmaceutical Company Limited Glucokinase activator compounds, methods of activating glucokinase and methods of treating diabetes and obesity
AU2006238888A1 (en) * 2005-04-21 2006-11-02 Glenn A. Goldstein N-acetylcysteine amide (NAC amide) for the treatment of diseases and conditions associated with oxidative stress
US20070161609A1 (en) * 2006-01-10 2007-07-12 Charles Buck Use of mitochondrially targeted antioxidant in treatment and prevention of drug-induced liver disease
CN101896483B (zh) * 2007-12-20 2013-11-20 株式会社Lg生命科学 葡糖激酶激活剂和包含其作为活性成分的药物组合物
CN101952281B (zh) 2008-01-04 2014-04-02 株式会社Lg生命科学 具有细胞、组织及器官保存效果的吲哚及吲唑衍生物

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20090018594A (ko) * 2007-08-17 2009-02-20 주식회사 엘지생명과학 세포괴사 저해제로서의 인돌 화합물
KR20090018593A (ko) * 2007-08-17 2009-02-20 주식회사 엘지생명과학 세포괴사 저해제로서의 인돌 및 인다졸 화합물

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022039506A1 (ko) 2020-08-19 2022-02-24 주식회사 미토이뮨테라퓨틱스 Ｍabc-r 감염에 의한 병적 염증 치료제로서의 미토콘드리아 표적 항산화제
WO2022220519A1 (ko) 2021-04-12 2022-10-20 주식회사 미토이뮨테라퓨틱스 5-[(1,1-디옥시도-4-티오몰포리닐)메틸]-2-페닐-n-(테트라하이드로-2h-피란-4-일)-1h-인돌-7-아민의 신규 결정형
WO2022220518A1 (ko) 2021-04-12 2022-10-20 주식회사 미토이뮨테라퓨틱스 5-[(1,1-디옥시도-4-티오몰포리닐)메틸]-2-페닐-n-(테트라하이드로-2h-피란-4-일)-1h-인돌-7-아민 황산염 및 이의 신규 결정형
WO2023182840A1 (ko) * 2022-03-25 2023-09-28 주식회사 미토이뮨테라퓨틱스 항바이러스용 약학적 조성물 및 이의 용도

Also Published As

Publication number Publication date
JP5820813B2 (ja) 2015-11-24
TW201414473A (zh) 2014-04-16
CN102596198B (zh) 2016-01-27
CN102596198A (zh) 2012-07-18
EP2493469A4 (en) 2013-05-29
US10322135B2 (en) 2019-06-18
US20170165272A1 (en) 2017-06-15
JP2013508452A (ja) 2013-03-07
MX2012004504A (es) 2012-09-07
TWI535440B (zh) 2016-06-01
TW201119651A (en) 2011-06-16
EP2493469A2 (en) 2012-09-05
TR201204895T1 (tr) 2013-01-21
US20120214804A1 (en) 2012-08-23
RU2012121815A (ru) 2013-12-10
MX338807B (es) 2016-05-02
AR078775A1 (es) 2011-11-30
RU2557243C2 (ru) 2015-07-20
KR20110046321A (ko) 2011-05-04
BR112012009894A2 (pt) 2016-11-29
WO2011052950A2 (en) 2011-05-05
WO2011052950A3 (en) 2011-11-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101325272B1 (ko) 인돌 화합물을 포함하는 약제학적 조성물
US7273885B2 (en) Inhibitors of serine proteases, particularly HCV NS3-NS4A protease
CN114057702B (zh) 一种新型冠状病毒主蛋白酶的抑制剂及其制备方法和用途
JP2014524442A (ja) Ｈｃｖプロテアーゼ阻害剤の結晶形態
CN101848898A (zh) 作为parp-1的抑制剂的酞嗪酮衍生物
CN115960088A (zh) 一种新型冠状病毒主蛋白酶的抑制剂及其制备方法和用途
DK2292227T3 (en) Pyrazole derivatives as modulators of hepatocyte growth factor (scatter factor) activity
Tilekar et al. Structure guided design and synthesis of furyl thiazolidinedione derivatives as inhibitors of GLUT 1 and GLUT 4, and evaluation of their anti-leukemic potential
CN108948002A (zh) 五元并六元氮杂芳环类化合物、其制备方法、药用组合物及其应用
US20170281611A1 (en) Quinolines and their use for treating endoplasmic reticulum stress-caused diseases
CN101484436A (zh) 作为parp抑制剂的2-氧基杂芳基酰胺衍生物
KR101511771B1 (ko) 세포괴사 저해제로서의 인돌 및 인다졸 화합물
CN105658625B (zh) 作为细胞坏死阻碍剂的吲哚酰胺化合物
US20220016108A1 (en) Quinolines that modulate serca and their use for treating disease
US20030119793A1 (en) CAK inhibitors and uses thereof
AU2016364624B2 (en) Carbon monoxide releasing norbornenone compounds
CN105189469B (zh) 2-氨基-3,4-二氢喹唑啉衍生物及其作为组织蛋白酶d抑制剂的用途
KR101986580B1 (ko) 세포괴사 저해제로서의 인돌 화합물
US10064843B2 (en) Bis-amide derivative and use thereof
KR101127600B1 (ko) 신규 나린제닌 유도체, 7-트리메틸 아세토-나린제닌 및 그 화합물의 항암제로서의 용도
KR100891943B1 (ko) 신규 오보바톨 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한염, 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 암 치료및 예방용 약학적 조성물
EP4221753A1 (en) Compositions and methods of treating kidney disease and fibrosis

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20160912

Year of fee payment: 4

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20170919

Year of fee payment: 5

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20181016

Year of fee payment: 6