CN101848898A - 作为parp-1的抑制剂的酞嗪酮衍生物 - Google Patents

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格莱姆·卡梅伦·默雷·史密斯
戴维·艾伦·拉奇
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Abstract

一种式(I)的化合物：其中：R表示稠合环己烯环上一个或多个任选的取代基；X可以是NRX或CRXRY；如果X＝NRX，则n是1或2，如果X＝CRXRY，则n是1；如果X＝NRX，则RX选自H、任选取代的C1-20烷基、任选取代的C5-20芳基、任选取代的C3-20杂环基、任选取代的酰氨基、任选取代的硫代酰氨基、任选取代的酯、任选取代的酰基和任选取代的磺酰基；如果X＝CRXRY，则RX选自H、任选取代的C1-20烷基、任选取代的C5-20芳基、任选取代的C3-20杂环基、任选取代的酰氨基、任选取代的硫代酰氨基、任选取代的磺酰氨基、任选取代的醚、任选取代的酯、任选取代的酰基、任选取代的酰基氨基和任选取代的磺酰基，RY选自H、羟基、任选取代的氨基，或者RX和RY可以一起形成任选取代的螺-C3-7环烷基或杂环基；RC1和RC2都是氢，或者当X是CRXRY时，RC1、RC2、RX和RY与它们所连接的碳原子一起可以形成任选取代的稠合芳环；R1选自H和卤素。所述化合物作为聚(APD-核糖)合成酶PARP-1的抑制剂。

Description

作为PARP-1的抑制剂的酞嗪酮衍生物
本发明涉及酞嗪酮衍生物和它们作为药物的用途。具体而言，本发明涉及这些化合物抑制酶聚(ADP-核糖)聚合酶-1活性的用途，该酶也被称为聚(ADP-核糖)合成酶和聚ADP-核糖基转移酶，通常被称为PARP-1。
哺乳动物酶PARP-1(一种113-kDa的多结构域蛋白质)通过其识别和快速结合DNA单链或双链断裂的能力而与DNA损伤的信号传导有关(D′Amours，等，Biochem.J.，342，249-268(1999))。
聚(ADP-核糖)聚合酶家族现在包括大约18种蛋白质，它们的催化结构域都显示一定水平的同源性，但它们的细胞功能不同(Ame，等，Bioessays.，26(8)，882-893(2004))。在该家族中，PARP-1(创始成员)和PARP-2是迄今为止仅有的催化活性被发生DNA链断裂激活的酶，这使得它们在家族中非常独特。
目前已知PARP-1参与各种DNA相关功能，包括基因扩增、细胞分裂、分化、细胞凋亡、DNA碱基切除修复以及对端粒长度和染色体稳定性的作用(d′Adda di Fagagna，等，Nature Gen.，23(1)，76-80(1999))。
对PARP-1调节DNA修复和其它过程的机制的研究已经证实其在细胞核内在聚(ADP-核糖)链形成中的重要性(Althaus，F.R.和Richter，C.，ADP-Ribosylation of Proteins：Enzymology and Biological Significance，Springer-Verlag，Berlin(1987))。与DNA结合的、活化的PARP-1利用NAD+在各种核靶蛋白质，包括拓扑异构酶、组蛋白和PARP自身上合成聚(ADP-核糖)(Rhun，等，Biochem.Biophys.Res.Commun.，245，1-10(1998))。
聚(ADP-核糖基)化还与恶性转化有关。例如，PARP-活性在分离的SV40-转化的成纤维细胞的细胞核内更高，而白血病和结肠癌细胞都显示比相当的正常粒细胞和结肠粘膜更高的酶活性(Miwa，等，Arch.Biochem.Biophys.，181，313-321(1977)；Burzio，等，Proc.Soc.Exp.Biol.Med.，149，933-938(1975)；以及Hirai，等，Cancer Res.，43，3441-3446(1983))。最近已经证实与良性前列腺细胞相比，在恶性前列腺肿瘤中活性PARP(主要是PARP-1)水平的显著升高与更高水平的遗传不稳定性有关(McNealy，等，Anticancer Res.，23，1473-1478(2003))。
许多低分子量的PARP-1抑制剂已经用于阐释聚(ADP-核糖基)化在DNA修复中的功能性作用。在用烷化剂处理的细胞中，PARP的抑制导致DNA-链断裂和细胞死亡的显著增加(Durkacz，等，Nature，283，593-596(1980)；Berger，N.A.，Radiation Research，101，4-14(1985))。
后来，这种抑制剂被证实通过抑制潜在致死性损伤的修复而增强放射应答的作用(Ben-Hur，等，British Journal of Cancer，49(Suppl.VI)，34-42(1984)；Schlicker，等，Int.J.Radiat.Bioi.，75，91-100(1999))。据报道，PARP抑制剂在放射致敏的低氧肿瘤细胞中有效(US 5,032,617；US 5,215,738和US 5,041,653)。在某些肿瘤细胞系中，PARP-1(和PARP-2)活性的化学抑制还与对非常低剂量放射的显著敏感化有关(Chalmers，Clin.Oncol.，16(1)，29-39(2004))。
此外，PARP-1敲除(PARP-/-)的动物对烷化剂和γ-放射响应而表现出基因组不稳定性(Wang，等，Genes Dev.，9，509-520(1995)；Menissier de Murcia，等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，94，7303-7307(1997))。最近的数据表明PARP-1和PARP-2在保持基因组稳定性上具有重叠和非重复功能，这使得它们都成为令人感兴趣的靶点(Menissier de Murcia，等，EMBO.J.，22(9)，2255-2263(2003))。
近来还报道PARP抑制作用具有抗血管生成作用。在VEGF剂量依赖性还原和基本的成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导的增殖中，报道了HUVES的迁移和血管形成(Rajesh，等，Biochem.Biophys.Res.Comm.，350，1056-1062(2006))。
在某些血管疾病、脓毒性休克，缺血性损伤和神经毒性中也证实了PARP-1的作用(Cantoni，等，Biochim.Biophys.Acta，1014，1-7(1989)；Szabo，等，J.Clin.Invest.，100，723-735(1997))。如PARP-1抑制剂研究所证实的，导致随后被PARP-1识别的DNA链断裂的氧自由基DNA损伤是这种疾病状态的主要诱因(Cosi，等，J.Neurosci.Res.，39，38-46(1994)；Said，等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，93，4688-4692(1996))。最近，已证实PARP在出血性休克的发病中起作用(Liaudet，等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，97(3)，10203-10208(2000))，eye(Occular)related oxidative damage as in Macular Degeneration(AMD)andretinitis pigmentosis(Paquet-Durand，等，J.Neuroscience，27(38)，10311-10319(2007)，as well as in transplant rejection of organs like lung，heart and kidney(O’Valle，等，Transplant.Proc.，39(7)，2099-2101(2007)。此外，已经证实使用PARP抑制剂治疗可以减轻PARP发挥作用的机理导致的急性疾病，例如胰腺炎及其相关的肝和肺损伤(Mota，等，Br.J.Pharmacol.，151(7)，998-1005(2007)。
还证实可以通过抑制PARP-1活性来阻止哺乳动物细胞有效的逆转录病毒感染。已证实重组逆转录病毒载体感染的这种抑制作用在各种不同的细胞类型中发生(Gaken，等，J.Virology，70(6)，3992-4000(1996))。因此，PARP-1的抑制剂已被研发用于抗病毒治疗和癌症治疗(WO 91/18591)。
此外，推测PARP-1抑制作用可以延缓人类成纤维细胞中老化特征的开始(Rattan和Clark，Biochem.Biophys.Res.Comm.，201(2)，665-672(1994))和例如动脉粥样硬化的年龄相关疾病(Hans，等，Cardiovasc.Res.，(Jan 31，2008))的发生。这可能与PARP在控制端粒功能中所起的作用相关(d′Adda di Fagagna，等，Nature Gen.，23(1)，76-80(1999))。
还认为PARP抑制剂与炎性肠病(Szabo C.，Role of Poly(ADP-Ribose)Polymerase Activation in the Pathogenesis of Shock and Inflammation，In PARPas a Therapeutic Target；Ed J.Zhang，2002 by CRC Press；169-204)、溃疡性结肠炎(Zingarelli，B，等，Immunology，113(4)，509-517(2004))和克罗恩氏病(Jijon，H.B.，等，Am.J.Physiol.Gastrointest.Liver Physiol.，279，G641-G651(2000)的治疗相关。
本发明人中一些发明人以前已经描述过(WO 2004/080976)一类用作PARP抑制剂的1(2H)-酞嗪酮化合物。该化合物具有以下通式：
Figure G2008800223002D00041
其中：
A和B一起表示任选取代的稠合芳环；
X可以是NRX或CRXRY；
如果X＝NRX，则n是1或2，如果X＝CRXRY，则n是1；
RX选自H、任选取代的C1-20烷基、C5-20芳基、C3-20杂环基、酰氨基、硫代酰氨基、磺酰氨基、酯、酰基和磺酰基；
RY选自H、羟基、氨基；
或RX和RY可以一起形成形成螺-C3-7环烷基或杂环基；
RC1和RC2都是氢，或者当X是CRXRY时，RC1、RC2、RX和RY与它们所连接的碳原子一起可以形成任选取代的稠合芳环；和
R1选自H和卤素。
本发明人现已发现当化合物中-A-B-表示的稠合芳环被稠合环己烯环替代时，化合物会显示PARP活性抑制作用的水平，和/或肿瘤细胞对放射治疗和各种化学治疗的增效作用的水平令人惊讶的增加，和/或化合物溶解度(在水性介质和/或磷酸盐缓冲液中)的令人惊讶的增加-提高的溶解度在配制化合物用于例如通过IV途径给药或供儿科使用的口服制剂(例如，液体和小片形式)中是有用的。可以提高本发明化合物的口服生物利用度。该化合物对细胞中MDR1的作用也可能较不敏感。
因此，本发明的第一方面提供式(I)化合物：
Figure G2008800223002D00051
其中：
R表示稠合环己烯环上一个或多个任选的取代基；
X可以是NRX或CRXRY；
如果X＝NRX，则n是1或2，如果X＝CRXRY，则n是1；
如果X＝NRX，则RX选自H、任选取代的C1-20烷基、任选取代的C5-20芳基、任选取代的C3-20杂环基、任选取代的酰氨基、任选取代的硫代酰氨基、任选取代的酯、任选取代的酰基和任选取代的磺酰基；
如果X＝CRXRY，则RX选自H、任选取代的C1-20烷基、任选取代的C5-20芳基、任选取代的C3-20杂环基、任选取代的酰氨基、任选取代的硫代酰氨基、任选取代的磺氨基(sulfonamino)、任选取代的醚、任选取代的酯、任选取代的酰基、任选取代的酰基酰氨基和任选取代的磺酰基，RY选自H、羟基、任选取代的氨基，或者RX和RY可以一起形成任选取代的螺-C3-7环烷基或杂环基；
RC1和RC2都是氢，或者当X是CRXRY时，RC1、RC2、RX和RY与它们所连接的碳原子一起可以形成任选取代的稠合芳环；和
R1选自H和卤素。
因此，如果X是CRXRY，则n是1，该化合物是式(Ia)化合物：
Figure G2008800223002D00052
如果X是NRX，并且n是1，则该化合物是式(Ib)化合物：
Figure G2008800223002D00061
如果X是NRX，并且n是2，则该化合物是式(Ic)化合物：
Figure G2008800223002D00062
本发明的第二方面提供含有第一方面的化合物和药学可接受的载体或稀释剂的药物组合物。
本发明的第三方面提供用于人体或动物体治疗方法中的第一方面的化合物。
本发明的第四方面提供本发明第一方面定义的化合物在制备药物中的用途，所述药物用于：
(a)通过抑制细胞PARP(PARP-1和/或PARP-2)的活性预防聚(ADP-核糖)链形成；
(b)治疗血管疾病；脓毒性休克；脑血管和心血管缺血性损伤；脑血管和心血管再灌注损伤；神经毒性，包括对中风和帕金森氏病的急性和慢性治疗；出血性休克；与眼有关的氧化损伤；移植排斥；炎性疾病，例如关节炎、炎性肠病、溃疡性结肠炎和克罗恩氏病；多发性硬化症；糖尿病的继发效应；以及心血管手术后的细胞毒性的急性治疗；胰腺炎；动脉粥样硬化；或者通过抑制PARP活性而改善的疾病；
(c)在癌症治疗中用作辅助剂或用于增强电离放射或化学治疗剂对肿瘤细胞的治疗作用。
具体而言，本发明第一方面定义的化合物可以与烷化剂一起用于抗癌联合治疗(或者作为辅助剂)，所述烷化剂例如甲磺酸甲酯(MMS)、替莫唑胺和达卡巴嗪(DTIC)，以及拓扑异构酶-I抑制剂，例如托泊替康、依立替康、卢比替康、依沙替康、勒托替康、吉马替康、二氟替康(高喜树碱)；以及7-取代的non-silatecans；7-甲硅烷基喜树碱类、BNP 1350；和非喜树碱拓扑异构酶-I抑制剂，例如吲哚并咔唑类，以及拓扑异构酶-I和II双重抑制剂，例如苯并吩嗪类、XR 11576/MLN 576和苯并吡啶并吲哚类。这种组合可以根据特定药物的优选施用方法通过例如作为静脉内制剂或通过口服施用。
本发明的其他方面提供通过抑制PARP而缓解的疾病的治疗，包括向需要治疗的受试者施用治疗有效量的第一方面中定义的化合物，优选以药物组合物的形式施用，以及提供癌症的治疗，包括向需要治疗的受试者施用治疗有效量的第一方面中定义的化合物与放射治疗(电离辐射)或化学治疗剂的组合，其中第一方面中定义的化合物优选以药物组合物的形式施用，与放射治疗或化学治疗剂同时或先后施用。
在本发明的其他方面，所述化合物可以用于制备治疗同源重组(HR)依赖性DNA双链断裂(DSB)修复活性缺失的癌症的药物或者用于治疗患有HR依赖性DNA DSB修复活性缺失的癌症的患者，包括向所述患者施用治疗有效量的所述化合物。
HR依赖性DNA DSB修复途径通过同源性机制修复DNA中的双链断裂(DSBs)以重新形成连续的DNA螺旋(K.K.Khanna和S.P.Jackson，Nat.Genet.27(3)：247-254(2001))。HR依赖性DNA DSB修复途径的组分包括但不限于ATM(NM_000051)、RAD51(NM_002875)、RAD51L1(NM_002877)、RAD51C(NM_002876)、RAD51L3(NM_002878)、DMC1(NM_007068)、XRCC2(NM_005431)、XRCC3(NM_005432)、RAD52(NM_002879)、RAD54L(NM_003579)、RAD54B(NM_012415)、BRCA1(NM_007295)、BRCA2(NM_000059)、RAD50(NM_005732)、MRE11A(NM_005590)和NBS1(NM_002485)。与HR依赖性DNA DSB修复途径有关的其他蛋白质包括调节因子，例如EMSY(Hughes-Davies，等，Cell，115，pp523-535)。HR组分也描述于Wood，等，Science，291，1284-1289(2001)中。
HR依赖性DNA DSB修复缺失的癌症可能包括或由一种或多种癌细胞组成，相对于正常细胞，它们通过该途径修复DNA DSBs的能力降低或丧失，即在一种或多种癌细胞中HR依赖性DNA DSB修复途径的活性降低或丧失。
在患有HR依赖性DNA DSB修复缺失的癌症的个体的一个或多个癌细胞中，HR依赖性DNA DSB修复途径的一种或多种组分的活性可能丧失。HR依赖性DNA DSB修复途径的组分在本领域中已经进行了充分表征(参见例如Wood，等，Science，291，1284-1289(2001))，并且包括上文列出的组分。
在一些优选的实施方案中，所述癌细胞可能具有BRCA1和/或BRCA2缺失表型，即在癌细胞中BRCA1和/或BRCA2活性降低或丧失。具有该表型的癌细胞可能是BRCA1和/或BRCA2缺失的，即在癌细胞中BRCA1和/或BRCA2的表达和/或活性可能降低或丧失，例如通过核酸编码中突变或多态性，或通过编码调节因子的基因例如编码BRCA2调节因子的EMSY基因的扩增、突变或多态性(Hughes-Davies，等，Cell，115，523-535)，或者通过遗传机制，例如基因启动子甲基化。
BRCA1和BRCA2是已知的肿瘤抑制基因，它们的野生型等位基因在杂合子携带者的肿瘤中常常缺失(Jasin M.，Oncogene，21(58)，8981-93(2002)；Tutt，等，Trends Mol Med.，8(12)，571-6，(2002))。BRCA1和/或BRCA2突变与乳腺癌的联系在本领域中进行了充分表征(Radice，P.J.，Exp.Clin.Cancer Res.，21(3Suppl)，9-12(2002))。还已知编码BRCA2结合因子的EMSY基因的扩增也与乳腺癌和卵巢癌有关。
BRCA1和/或BRCA2突变的携带者也处于患卵巢癌、前列腺癌和胰腺癌的高风险中。
在一些优选的实施方案中，所述个体就BRCA1和/或BRCA2或其调节因子的一种或多种变异如突变和多态性而言是杂合的。BRCA1和BRCA2中变异的检测是本领域熟知的，例如描述于EP 699754，EP 705903，Neuhausen，S.L.和Ostrander，E.A.，Genet.Test，1，75-83(1992)；Janatova M.，等，Neoplasma，50(4)，246-50(2003)。BRCA2结合因子EMSY扩增的测定描述于Hughes-Davies，等，Cell，115，523-535中。
与癌症有关的突变和多态性可以在核酸水平通过检测变异核酸序列的存在或者在蛋白质水平通过检测变异(即突变或等位基因变型)多肽的存在而检测。
定义
本文所用的术语“芳环”在一般意义上是指环状芳香族结构，即，具有离域π电子轨道的环状结构。
烷基：本文所用的术语“烷基”涉及从具有1-20个碳原子的烃类化合物的碳原子上除去氢原子得到的一价基团(除非另有说明)，其可以是脂肪族或脂环族的，并且可以是饱和或不饱和的(例如部分不饱和的、完全不饱和的)。因此，术语“烷基”包括下文所述的亚类烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基等。
在烷基中，前缀(例如，C1-4、C1-7、C1-20、C2-7、C3-7等)表示碳原子数或碳原子数的范围。例如，本文所用的术语“C1-4烷基”涉及具有1-4个碳原子的烷基。烷基的实例包括C1-4烷基(“低级烷基”)、C1-7烷基和C1-20烷基。注意第一前缀可以根据其他限定而变化；例如，对于不饱和烷基，第一前缀必须至少是2；对于环状烷基，第一前缀必须至少是3；等等。
(未取代的)饱和烷基的实例包括但不限于甲基(C1)、乙基(C2)、丙基(C3)、丁基(C4)、戊基(C5)、己基(C6)、庚基(C7)、辛基(C8)、壬基(C9)、癸基(C10)、十一基(C11)、十二基(C12)、十三基(C13)、十四基(C14)、十五基(C15)和二十基(C20)。
(未取代的)饱和直链烷基的实例包括但不限于甲基(C1)、乙基(C2)、正丙基(C3)、正丁基(C4)、正戊基(戊基)(C5)、正己基(C6)和正庚基(C7)。
(未取代的)饱和支链烷基的实例包括异丙基(C3)、异丁基(C4)、仲丁基(C4)、叔丁基(C4)、异戊基(C5)和新戊基(C5)。
烯基：本文所用的术语“烯基”涉及具有一个或多个碳-碳双键的烷基。烯基组的实例包括C2-4烯基、C2-7烯基、C2-20烯基。
(未取代的)不饱和烯基的实例包括但不限于乙烯基(乙烯基，-CH＝CH2)、1-丙烯基(-CH＝CH-CH3)、2-丙烯基(烯丙基，-CH-CH＝CH2)、异丙烯基(1-甲基乙烯基，-C(CH3)＝CH2)、丁烯基(C4)、戊烯基(C5)和己烯基(C6)。
炔基：本文所用的术语“炔基”涉及具有一个或多个碳-碳叁键的烷基。炔基组的实例包括C2-4炔基、C2-7炔基、C2-20炔基。
(未取代的)不饱和炔基的实例包括但不限于乙炔基(乙炔基，-C≡CH)和2-丙炔基(炔丙基，-CH2-C≡CH)。
环烷基：本文所用的术语“环烷基”涉及也是环状基团的烷基；也就是，从碳环化合物碳环的脂环族环原子上除去氢原子得到的一价基团，碳环可以是饱和或不饱和的(例如，部分不饱和的、完全不饱和的)，该基团具有3-20个碳原子(除非另有说明)，包括3-20个环原子。因此，术语“环烷基”包括亚类环烯基和环炔基。优选地，每个环具有3-7个环原子。环烷基组的实例包括C3-20环烷基、C3-15环烷基、C3-10环烷基、C3-7环烷基。
环烷基的实例包括但不限于从下列化合物衍生的基团：
饱和单环烃类化合物：环丙烷(C3)、环丁烷(C4)、环戊烷(C5)、环己烷(C6)、环庚烷(C7)、甲基环丙烷(C4)、二甲基环丙烷(C5)、甲基环丁烷(C5)、二甲基环丁烷(C6)、甲基环戊烷(C6)、二甲基环戊烷(C7)、甲基环己烷(C7)、二甲基环己烷(C8)、薄荷烷(C10)；
不饱和单环烃类化合物：环丙烯(C3)、环丁烯(C4)、环戊烯(C5)、环己烯(C6)、甲基环丙烯(C4)、二甲基环丙烯(C5)、甲基环丁烯(C5)、二甲基环丁烯(C6)、甲基环戊烯(C6)、二甲基环戊烯(C7)、甲基环己烯(C7)、二甲基环己烯(C8)；
饱和多环烃类化合物：苧烷(C10)、蒈烷(C10)、蒎烷(C10)、莰烷(C10)、降蒈烷(C7)、原蒎烷(C7)、降莰烷(C7)、金刚烷(C10)、萘烷(十氢萘)(C10)；
不饱和多环烃类化合物：莰烯(C10)、柠檬烯(C10)、蒎烯(C10)；
具有芳环的多环烃类化合物：茚(C9)、二氢化茚(例如，2，3-二氢-1H-茚)(C9)、四氢萘(1，2，3，4-四氢萘)(C10)、苊(C12)、芴(C13)、非那烯(C13)、醋菲(C15)、醋蒽(C16)、胆蒽(C20)。
杂环基：本文所用的术语“杂环基”涉及从杂环化合物的环原子上除去氢原子得到的一价基团，该基团具有3-20个环原子(除非另有说明)，其中1-10个是环杂原子。优选地，每个环具有3-7个环原子，其中1-4个是环杂原子。
在这种情况中，前缀(例如，C3-20、C3-7、C5-6等)是指环原子数，或环原子数的范围，无论是碳原子或杂原子。例如，本文所用的术语“C5-6杂环基”涉及具有5或6个环原子的杂环基。杂环基组的实例包括C3-20杂环基、C5-20杂环基、C3-15杂环基、C5-15杂环基、C3-12杂环基、C5-12杂环基、C3-10杂环基、C5-10杂环基、C3-7杂环基、C5-7杂环基和C5-6杂环基。
单环杂环基的实例包括但不限于从下列化合物衍生的基团：
N1：氮丙啶(C3)、吖丁啶(C4)、吡咯烷(四氢吡咯)(C5)、吡咯啉(例如，3-吡咯啉、2，5-二氢吡咯)(C5)、2H-吡咯或3H-吡咯(异吡咯、异噁唑)(C5)、哌啶(C6)、二氢吡啶(C6)、四氢吡啶(C6)、氮杂卓(C7)；
O1：环氧乙烷(C3)、氧杂环丁烷(C4)、氧杂环戊烷(四氢呋喃)(C5)、氧杂环戊二烯(二氢呋喃)(C5)、噁烷(四氢吡喃)(C6)、二氢吡喃(C6)、吡喃(C6)、氧杂卓(C7)；
S1：硫杂环丙烷(C3)、硫杂环丁烷(C4)、硫杂环戊烷(四氢噻吩)(C5)、硫杂环己烷(四氢噻喃)(C6)、硫杂环庚烷(C7)；
O2：二氧戊烷(C5)、二噁烷(C6)和二氧杂环庚烷(C7)；
O3：三噁烷(C6)；
N2：咪唑烷(C5)、吡唑烷(diazolidine)(C5)、咪唑啉(C5)、吡唑啉(二氢吡唑)(C5)、哌嗪(C6)；
N1O1：四氢噁唑(C5)、二氢噁唑(C5)、四氢异噁唑(C5)、二氢异噁唑(C5)、吗啉(C6)、四氢噁嗪(C6)、二氢噁嗪(C6)、噁嗪(C6)；
N1S1：噻唑啉(C5)、噻唑烷(C5)、硫吗啉(C6)；
N2O1：噁二嗪(C6)；
O1S1：氧硫杂环戊烯(C5)和氧硫杂环环己烷(噻噁烷)(C6)；和
N1O1S1：噁噻嗪(C6)。
取代的(非芳族)单环杂环基的实例包括从环状形式的糖类衍生的基团，例如呋喃糖(C5)，例如阿拉伯呋喃糖、呋喃来苏糖、呋喃核糖和呋喃木糖，和吡喃糖(C6)，例如别吡喃糖(allopyranose)、阿卓吡喃糖、吡喃葡萄糖、吡喃甘露糖、吡喃古洛糖、吡喃艾杜糖、吡喃半乳糖和吡喃塔罗糖。
螺-C3-7环烷基或杂环基：本文所用的术语“螺-C3-7环烷基或杂环基”是指与另一个环通过两个环共用的单个原子连接的C3-7环烷基或C3-7杂环烷基。
C5-20芳基：本文所用的术语“C5-20芳基”涉及从C5-20芳香化合物的芳环原子上除去氢原子得到的一价基团，所述化合物具有一个环，或者两个或多个环(例如，稠合的)，并且具有5-20个环原子，其中至少一个所述环是芳香环。优选地，每个环具有5-7个环原子。
环原子可以都是碳原子，如在“碳芳基”的情况中，该基团可以合适地称为“C5-20碳芳基”。
不具有环杂原子的C5-20芳基(即C5-20碳芳基)的实例包括但不限于从苯(即苯基)(C6)、萘(C10)、蒽(C14)、菲(C14)和芘(C16)衍生的基团。
或者，在“杂芳基”中，环原子可以包括一个或多个杂原子，包括但不限于氧、氮和硫。在这种情况下，该基团可以合适地称为“C5-20杂芳基”，其中“C5-20”是指环原子，无论是碳原子或杂原子。优选地，每个环具有5-7个环原子，其中0-4个是环杂原子。
C5-20杂芳基的实例包括但不限于从下列化合物衍生的C5杂芳基：呋喃(氧杂环戊二烯)、噻吩(硫杂环戊二烯)、吡咯(氮二烯五环)、咪唑(1，3-二唑)、吡唑(1，2-二唑)、三唑、噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、噁二唑、四唑和噁三唑；和从下列化合物衍生的C6杂芳基：异噁嗪、吡啶(吖嗪)、哒嗪(1，2-二嗪)、嘧啶(1，3-二嗪；例如，胞嘧啶、胸腺嘧啶、尿嘧啶)、吡嗪(1，4-二嗪)和三嗪。
杂芳基可以通过碳原子或杂环原子键合。
含有稠环的C5-20杂芳基的实例包括但不限于衍生自苯并呋喃、异苯并呋喃、苯并噻吩、吲哚、异吲哚的C9杂芳基；衍生自喹啉、异喹啉、苯并二嗪、吡啶并吡啶的C10杂芳基；衍生自吖啶和氧杂蒽的C14杂芳基。
上述烷基、杂环基和芳基无论是单独还是作为另一取代基的一部分，其自身可以任选被一个或多个选自它们自身和以下所列的其他取代基所取代。
卤素：-F、-Cl、-Br、和-I。
羟基：-OH。
醚：-OR，其中R是醚取代基，例如C1-7烷基(也称为C1-7烷氧基)、C3-20杂环基(也称为C3-20杂环基氧基)或C5-20芳基(也称为C5-20芳基氧基)，优选C1-7烷基。
硝基：-NO2。
氰基(腈、腈)：-CN。
酰基(酮)：-C(＝O)R，其中R是酰基取代基，例如H、C1-7烷基(也称为C1-7烷基酰基或C1-7烷酰基)、C3-20杂环基(也称为C3-20杂环基酰基)或C5-20芳基(也称为C5-20芳基酰基)，优选C1-7烷基。酰基的实例包括但不限于-C(＝O)CH3(乙酰基)、-C(＝O)CH2CH3(丙酰基)、-C(＝O)C(CH3)3(丁酰基)和-C(＝O)Ph(苯甲酰基、苯甲酮)。
羧基(羧酸)：-COOH。
酯(羧酸根、羧酸酯、氧基羰基)：-C(＝O)OR，其中R是酯取代基，例如，C1-7烷基、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选C1-7烷基。酯基的实例包括但不限于-C(＝O)OCH3、-C(＝O)OCH2CH3、-C(＝O)OC(CH3)3和-C(＝O)OPh。
酰氨基(氨基甲酰基、氨甲酰基、氨基羰基、甲酰胺)：-C(＝O)NR1R2，其中R1和R2独立地是氨基取代基，如对氨基所定义的。酰氨基的实例包括但不限于-C(＝O)NH2、-C(＝O)NHCH3、-C(＝O)N(CH3)2、-C(＝O)NHCH2CH3和-C(＝O)N(CH2CH3)2，以及R1和R2与它们连接的氮原子一起形成杂环结构的酰氨基，例如哌啶基羰基、吗啉基羰基、硫代吗啉基羰基和哌嗪基羰基中的酰氨基。
氨基：-NR1R2，其中R1和R2独立地是氨基取代基，例如氢、C1-7烷基(也称为C1-7烷基氨基或二-C1-7烷基氨基)、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选H或C1-7烷基，或在“环状”氨基的情况中，R1和R2与它们连接的氮原子一起形成具有4-8个环原子的杂环。氨基的实例包括但不限于-NH2、-NHCH3、-NHCH(CH3)2、-N(CH3)2、-N(CH2CH3)2和-NHPh。环状氨基的实例包括但不限于氮杂环丙烷基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶子基、哌嗪基、全氢二氮杂卓基、吗啉代基和硫吗啉代基。环状氨基可以在其环上被本文定义的任何取代基取代，例如羧基、羧酸根和酰氨基。
酰基酰氨基(酰基氨基)：-NR1C(＝O)R2，其中R1是酰胺取代基，例如氢、C1-7烷基、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选H或C1-7烷基，最优选H，R2是酰基取代基，例如C1-7烷基、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选C1-7烷基。酰基酰氨基的实例包括但不限于-NHC(＝O)CH3、-NHC(＝O)CH2CH3和-NHC(＝O)Ph。R1和R2可以一起形成环状结构，例如在琥珀酰亚氨基、马来酰亚氨基和邻苯二酰亚氨基中：
Figure G2008800223002D00141
琥珀酰亚氨基      马来酰亚氨基     邻苯二酰亚氨基
脲基：-N(R1)CONR2R3，其中R2和R3独立地是氨基取代基，如对氨基所定义的，R1是脲基取代基，例如氢、C1-7烷基、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选氢或C1-7烷基。脲基的实例包括但不限于-NHCONH2、-NHCONHMe、-NHCONHEt、-NHCONMe2、-NHCONEt2、-NMeCONH2、-NMeCONHMe、-NMeCONHEt、-NMeCONMe2、-NMeCONEt2和-NHC(＝O)NHPh。
酰氧基(反酯)：-OC(＝O)R，其中R是酰氧基取代基，例如C1-7烷基、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选C1-7烷基。酰氧基的实例包括但不限于-OC(＝O)CH3(乙酰氧基)、-OC(＝O)CH2CH3、-OC(＝O)C(CH3)3、-OC(＝O)Ph、-OC(＝O)C6H4F和-OC(＝O)CH2Ph。
巯基：-SH。
硫醚(硫化物)：-SR，其中R是硫醚取代基，例如，C1-7烷基(也称为C1-7烷硫基)、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选C1-7烷基。C1-7烷硫基的实例包括但不限于-SCH3和-SCH2CH3。
亚砜(亚磺酰基)：-S(＝O)R，其中R是亚砜取代基，例如，C1-7烷基、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选C1-7烷基。亚砜的实例包括但不限于-S(＝O)CH3和-S(＝O)CH2CH3。
磺酰基(砜)：-S(＝O)2R，其中R是砜取代基，例如C1-7烷基、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选C1-7烷基。砜基的实例包括但不限于-S(＝O)2CH3(甲磺酰基、甲磺酰)、-S(＝O)2CF3、-S(＝O)2CH2CH3和4-甲基苯磺酰基(甲苯磺酰基)。
硫代酰氨基(硫代氨甲酰基)：-C(＝S)NR1R2，其中R1和R2独立地是氨基取代基，如对氨基所定义的。酰氨基的实例包括但不限于-C(＝S)NH2、-C(＝S)NHCH3、-C(＝S)N(CH3)2和-C(＝S)NHCH2CH3。
磺酰氨基：-NR1S(＝O)2R，其中R1是氨基取代基，如对氨基所定义的，R是磺酰氨基取代基，例如C1-7烷基、C3-20杂环基或C5-20芳基，优选C1-7烷基。磺酰氨基的实例包括但不限于-NHS(＝O)2CH3、-NHS(＝O)2Ph和-N(CH3)S(＝O)2C6H5。
如上所述，形成上述所列取代基的基团，例如C1-7烷基、C3-20杂环基和C5-20芳基，本身可以被取代。因此，上述定义涵盖被取代的取代基。
其他实施方案
只要适用，下列实施方案可以应用于本发明的每个方面。
在一些实施方案中，如果X＝CRXRY，则RX选自H、任选取代的C1-20烷基、任选取代的C5-20芳基、任选取代的C3-20杂环基、任选取代的酰氨基、任选取代的硫代酰氨基、任选取代的磺酰氨基、任选取代的醚、任选取代的酯、任选取代的酰基和任选取代的磺酰基，RY选自H、羟基、任选取代的氨基、或RX和RY可以一起形成任选取代的螺-C3-7环烷基或杂环基。
稠合环己烯环可以在任何适当的环位置具有一个或多个取代基。这些取代基选自卤素、硝基、羟基、醚、巯基、硫醚、氨基、C1-7烷基，C3-20杂环基和C5-20芳基。稠合环己烯环也可以具有共同形成环的一个或多个取代基。具体而言这些可以是式-(CH2)m-或-O-(CH2)p-O-，其中m是2、3、4或5，p是1、2或3。特定取代基包括卤素、羟基和氨基(例如NH2)。
如果稠合环己烯环具有唯一的取代基，该化合物可以是下式化合物：
Figure G2008800223002D00161
在一些实施方案中，R1选自H、Cl和F。在其他实施方案中，R1是F。
在一些实施方案中，RC1和RC2都是氢。
当n是2时，X是NRX。在这些实施方案中，RX可以选自：H；任选取代的C1-20烷基；任选取代的C5-20芳基；任选取代的酯基，其中酯取代基优选是C1-20烷基；任选取代的酰基；任选取代的酰氨基；任选取代的硫代酰氨基和任选取代的磺酰基。在其他实施方案中，RX可以选自：H；任选取代的C1-20烷基；任选取代的C5-20芳基和任选取代的酯基，其中酯取代基可以仅为C1-20烷基。
当n是1时，X可以是NRX或CRXCRY。
在X是NRX的实施方案中，RX可以选自H；任选取代的C1-20烷基(例如任选取代的C1-7或C1-4烷基)；任选取代的C5-20芳基(例如C5-6芳基)；任选取代的酰基和任选取代的磺酰基。RX也可以选自任选取代的酯。
在X是NRX的实施方案中，当RX是任选取代的烷基时，所述取代基可以选自羟基和C1-4烷氧基(例如甲氧基)。当RX是芳基时，它可以是杂芳基(例如，三嗪基、嘧啶基、吡啶基)，在一些实施方案中其可以是未取代的。如果芳基是取代的，所述取代基可以选自C1-4烷基(例如，甲基、三氟甲基)和氰基。当RX是任选取代的酰基时，所述酰基取代基可以是C1-7烷基(例如环丙基)或C3-20杂环基，或者C3-7杂环基(例如四氢呋喃基)。当RX是任选取代的磺酰基时，砜取代基可以是C1-7烷基(例如甲基、乙基、丙基)。如果RX是酯，所述酯基可以是C1-4烷基(例如叔丁基)，并且可以是未取代的。
在X是CRXRY的实施方案中，RY可以是H。RX可以选自：H；任选取代的C3-20杂环基、更优选C3-7杂环基；任选取代的醚和任选取代的磺酰氨基。RX也可以是任选取代的酰氨基或任选取代的酰基氨基。
在X是CRXRY的实施方案中，当RX是杂环基时，其可以含有1个氮环原子，例如，吡咯烷基。当RX是醚时，所述醚取代基可以是：C5-7芳基(例如苯基、吡啶基)，其自身可以被取代(例如被氯或甲氧基取代)；C1-7烷基(例如，甲基、乙基、丙基、丁基、环戊基、环丙基乙基)，其自身可以被取代，例如被甲氧基取代。当RX是磺酰氨基时，所述氨基取代基可以是C1-7烷基，例如甲基、环丙基，所述磺酰氨基取代基可以是C1-7烷基(例如环丙基)或C5-7芳基，例如苯基，其自身可以被取代(例如被氯取代)。当RX是酰氨基时，第一氨基取代基可以选自H和C1-4烷基(例如甲基)，第二氨基取代基可以是C1-7烷基(例如，甲基、环丙基甲基、丁基、环丁基)，其自身可以被C5-6芳基(例如苯基)或氨基(例如二甲氨基)取代。当RX是酰氨基时，所述氨基取代基可以与氮原子一起形成环，例如RX是哌啶羰基或哌嗪羰基，其自身可以被C1-4烷基(例如甲基)或磺酰氨基(例如环丙基磺酰基甲基氨基)取代。当RX是酰基氨基时，所述酰氨取代基可以是H和C1-4烷基(例如甲基)，所述酰基取代基可以是C1-7烷基(例如乙基)或C5-7芳基(例如苯基)。
在一些实施方案中，RX是H，RY是氨基。当RY是氨基时，所述氨基取代基可以选自H和C1-7烷基，或C1-4烷基，这样氨基可以是二甲氨基或所述氨基取代基可以形成环，这样RY是，例如，吡咯烷基。
本发明的其他方面是下文实施例的化合物。
在适当的情况下，上述实施方案可以互相组合。
特别感兴趣的化合物是n是1，X是CRXRY，RY是H并且RX是C1-7烷基醚(例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丁氧基、叔丁氧基、环戊氧基、环丙基乙氧基)的化合物，其中C1-7烷基可以被取代，例如，被C1-4烷氧基(例如甲氧基)取代。在这些实施方案中，R1可以是F，环己烯环可以没有取代基。
包括其他形式
上文包括这些取代基的熟知的离子、盐、溶剂化物和被保护形式。例如，在提及羧酸(-COOH)时也包括阴离子(羧酸根)形式(-COO-)、其盐或溶剂化物以及常规被保护形式。类似地，所指的氨基包括质子化形式(-N+HR1R2)、氨基的盐或溶剂化物，例如盐酸盐以及氨基的常规被保护形式。类似地，所指的羟基也包括阴离子形式(-O-)，其盐或溶剂化物以及羟基的常规被保护形式。
异构体、盐、溶剂化物、被保护形式和前药
某些化合物可以以一种或多种特定的几何异构体、光学异构体、对映异构体、非对映异构体、差向异构体、立体异构体、互变异构体、构象异构体或端基异构体形式存在，包括但不限于顺式(cis)-与反式(trans )-型；E-与Z-型；c-、t-与r-型；内-与外-型；R-、S-与内消旋-型；D-与L-型；d-与l-型；(+)与(-)型；酮-、烯醇-与烯醇化物-型；顺(syn)-与反(anti)-型；顺错(synclinal)-与反错(anticlinal)-型；α-与β-型；轴向与平伏型；船式-、椅式-、扭曲式-、信封式-与半椅式-型；及其组合，以下统称为“异构体”(或“异构型”)。
如果化合物是结晶形式，则它可以以多种不同的多晶型存在。
注意，除了下文讨论的互变异构形式外，特别要从本文所用的术语“异构体”中排除的是结构(或组成)异构体(即原子之间的连接不同而不仅仅是原子的空间位置不同的异构体)。例如，所指的甲氧基-OCH3不能解释为是指其结构异构体，即羟甲基-CH2OH。类似地，所指的邻氯苯基不能解释为是指其结构性异构体，间氯苯基。但是，所指的一类结构则可以包括在该类型内的结构性异构体形式(例如，C1-7烷基包括正丙基和异丙基；丁基包括正-、异-、仲-和叔丁基；甲氧基苯基包括邻-、间-和对-甲氧基苯基)。
上述的排除不涉及互变异构体形式，例如酮、烯醇和烯醇化物形式，例如下面的互变异构体对：酮/烯醇、亚胺/烯胺、酰胺/亚氨基醇、脒/脒、亚硝基/肟、硫酮/烯巯基、N-亚硝基/羟基偶氮基和硝基/酸式硝基。
与本发明特别相关的是下文所示的互变异构体对：
Figure G2008800223002D00191
注意，特别包括在术语“异构体”内的是具有一个或多个同位素取代的化合物。例如，H可以是任何的同位素形式，包括1H、2H(D)和3H(T)；C可以是任何的同位素形式，包括12C、13C和14C；O可以是任何的同位素形式，其包括16O和18O等。
除非另有说明，所指的特定化合物包括所有这样的异构体形式，包括(全部或部分地)外消旋形式及其其它的混合物。所述异构体形式的制备(例如不对称合成)和分离(例如分步结晶和色谱方法)方法是本领域已知的，或者很容易按照已知方式通过对本文所教导的方法或已知方法进行适应性修改而获得。
除非另有说明，所指的特定化合物还包括其离子和盐形式，例如如下所讨论的。
除非另有说明，所指的特定化合物还包括其溶剂化物形式，例如如下所讨论的。
除非另有说明，所指的特定化合物还包括其前药形式，例如如下所讨论的。
除非另有说明，所指的特定化合物还包括其被保护形式，例如如下所讨论的。
除非另有说明，所指的特定化合物还包括其不同的多晶型，例如如下所讨论的。
可以方便地或者合意地制备、纯化和/或处理活性化合物的相应的盐，例如药学可接受的盐。药学可接受的盐的实例讨论于Berge等，“PharmaceuticallyAcceptable Salts”，J.Pharm.Sci.，66，1-19(1977)中。
例如，如果化合物是阴离子的，或者具有可以是阴离子的官能团(例如，-COOH可以是-COO-)，则可以与适合的阳离子生成盐。适合的无机阳离子的实例包括但不限于碱金属离子例如Na+和K+，碱土金属阳离子例如Ca2+和Mg2+，和其他阳离子例如Al3+。适合的有机阳离子的实例包括但不限于铵离子(即NH4 +)和取代的铵离子(例如NH3R+、NH2R2 +、NHR3 +、NR4 +)。某些适合的取代的铵离子的实例是从下列衍生的那些：乙胺、二乙胺、二环己胺、三乙胺、丁胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪、苄胺、苯基苄胺、胆碱、葡甲胺和氨丁三醇，以及氨基酸，例如赖氨酸和精氨酸。常见季铵离子的实例是N(CH3)4 +。
如果化合物是阳离子性的，或者具有可以是阳离子的官能团(例如-NH2可以是-NH3 +)，则可以与适合的阴离子生成盐。适合的无机阴离子的实例包括但不限于从下列无机酸衍生的那些：盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、亚硫酸、硝酸、亚硝酸、磷酸和亚磷酸。适合的有机阴离子的实例包括但不限于从下列有机酸衍生的那些：乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、硬脂酸、棕榈酸、乳酸、苹果酸、扑酸、酒石酸、柠檬酸、葡糖酸、抗坏血酸、马来酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、天冬氨酸、苯甲酸、肉桂酸、丙酮酸、水杨酸、对氨基苯磺酸、2-乙酰氧基苯甲酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙磺酸、乙二磺酸、草酸、羟乙磺酸、戊酸和葡糖酸。适合的聚合阴离子的实例包括但不限于从下列聚合酸衍生的那些：鞣酸、羧甲基纤维素。
可以方便地或者合意地制备、纯化和/或处理活性化合物的相应的溶剂化物。本文中所用的术语“溶剂化物”在常规意义上是指溶质(例如活性化合物、活性化合物的盐)和溶剂的复合物。如果溶剂是水，则溶剂化物被方便地称作水合物，例如一水合物、二水合物、三水合物等。
可以方便地或者合意地制备、纯化和/或处理化学保护形式的活性化合物。本文所用的术语“化学保护形式”涉及其中的一个或多个反应性官能团被保护免于不希望的化学反应，即化合物为被保护或保护基(也称作被掩蔽或掩蔽基团或被封闭或封闭基团)的形式。通过保护反应性官能团，可以进行涉及其它未保护的反应性官能团的反应，而不影响被保护的基团；保护基通常在随后的步骤中除去，而基本不影响分子的剩余部分。参见，例如，“Protective Groups in OrganicSynthesis”(T.Green和P.Wuts；3rd Edition；John Wiley and Sons，1999)。
例如，羟基可以被保护为醚(-OR)或酯(-OC(＝O)R)，例如，叔丁基醚；苄基、二苯甲基(二苯基甲基)或三苯甲基(三苯基甲基)醚；三甲基甲硅烷基或叔丁基二甲基甲硅烷基醚；或乙酰基酯(-OC(＝O)CH3、-OAc)。
例如，醛或酮基团可以分别被保护为缩醛或缩酮，其中羰基(＞C＝O)通过与例如伯醇反应转化为二醚(＞C(OR)2)。在酸的存在下醛基或酮基很容易通过使用大量过量的水水解而再生。
例如，胺基团可以被保护为例如酰胺或尿烷，例如甲酰胺(-NHCO-CH3)；苄氧基酰胺(-NHCO-OCH2C6H5、-NH-Cbz)；叔丁氧基酰胺(-NHCO-OC(CH3)3、-NH-Boc)；2-联苯-2-丙氧基酰胺(-NHCO-OC(CH3)2C6H4C6H5、-NH-Bpoe)；9-芴基甲氧基酰胺(-NH-Fmoc)；6-硝基藜芦氧基酰胺(-NH-Nvoc)；2-三甲基甲硅烷基乙氧基酰胺(-NH-Teoc)；2，2，2-三氯乙氧基酰胺(-NH-Troc)；烯丙氧基酰胺(-NH-Alloc)；(2-苯磺酰基)乙氧基酰胺(-NH-Psec)；或者在适合的情况下，为N-氧化物(＞NO·)。
例如，羧酸基团可以被保护为酯，例如C1-7烷基酯(例如甲基酯、叔丁基酯)；C1-7卤代烷基酯(例如C1-7三卤烷基酯)；三C1-7烷基甲硅烷基-C1-7烷基酯；C5-20芳基-C1-7烷基酯(例如苄基酯、硝基苄基酯)；或酰胺，例如甲基酰胺。
例如，巯基可以被保护为硫醚(-SR)，例如苄基硫醚；乙酰氨基甲基醚(-S-CH2NHC(＝O)CH3)。
可以方便地或者合意地制备、纯化和/或处理前药形式的活性化合物。本文所用的术语“前药”是指当进行代谢(例如在体内)时能生成希望的活性化合物的化合物。通常，前药是无活性的，或者其活性低于活性化合物，但可以提供有利的操作、给药或代谢特性。
例如，某些前药是活性化合物的酯(例如生理上可接受的代谢不稳定的酯)。在代谢过程中，酯基(-C(＝O)OR)裂解生成活性药物。所述的酯可以通过例如将母体化合物中的任何一个羧酸基团(-C(＝O)OH)的酯化而形成，在适当的情况下，可先将母体化合物中存在的任何其它反应性基团进行保护，然后再根据需要脱保护。这种代谢不稳定的酯的实例包括以下酯类，即其中R是C1-20烷基(例如-Me、-Et)；C1-7氨基烷基(例如氨基乙基、2-(N，N-二乙基氨基)乙基、2-(4-吗啉基)乙基)和酰氧基-C1-7烷基(例如酰氧基甲基、酰氧基乙基，例如新戊酰氧基甲基、乙酰氧基甲基、1-乙酰氧基乙基、1-(1-甲氧基-1-甲基)乙基-羰基氧基乙基、1-(苯甲酰氧基)乙基、异丙氧基-羰基氧基甲基、1-异丙氧基-羰基氧基乙基、环己基-羰基氧基甲基、1-环己基-羰基氧基乙基、环己基氧基-羰基氧基甲基、1-环己基氧基-羰基氧基乙基、(4-四氢吡喃基氧基)羰基氧基甲基、1-(4-四氢吡喃基氧基)羰基氧基乙基、(4-四氢吡喃基)羰基氧基甲基和1-(4-四氢吡喃基)羰基氧基乙基)的酯。
其它适合的前药形式包括膦酸酯和羟乙酸盐。具体而言，羟基(-OH)可以通过与氯代二苄基亚磷酸酯反应，然后氢化形成膦酸酯基团-O-P(＝O)(OH)2制备成膦酸酯前药。这种基团在代谢过程中可以通过磷酸酯酶清除而生成具有羟基的活性药物。
另外，某些前药被酶催化活化生成活性化合物，或是经进一步的化学反应而生成活性化合物的化合物。例如，前药可以是糖衍生物或其它的糖苷结合物，或者可以是氨基酸酯衍生物。
首字母缩略词
为方便起见，许多化学基团用熟知的缩写表示，包括但不限于甲基(Me)、乙基(Et)、正丙基(nPr)、异丙基(iPr)、正丁基(nBu)、叔丁基(tBu)、正己基(nHex)、环己基(cHex)、苯基(Ph)、联苯基(biPh)、苄基(Bn)、萘基(naph)、甲氧基(MeO)、乙氧基(EtO)、苯甲酰基(Bz)和乙酰基(Ac)。
为方便起见，许多化合物用熟知的缩写表示，包括但不限于甲醇(MeOH)、乙醇(EtOH)、异丙醇(i-PrOH)、甲乙酮(MEK)、乙醚(Et2O)、乙酸(AcOH)、二氯甲烷(二氯甲烷，DCM)、三氟乙酸(TFA)、二甲基甲酰胺(DMF)、四氢呋喃(THF)和二甲基亚砜(DMSO)。
合成
本发明化合物可以通过以下方式合成：将式1化合物，
Figure G2008800223002D00231
其中R和R1如前文所定义，与式2化合物：
Figure G2008800223002D00232
其中n、RC1、RC2和X如前文所定义，在偶联试剂系统例如2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸盐、2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐或(二甲基氨基丙基)乙基碳二酰亚胺盐酸盐/羟基苯并三唑的存在下，在碱例如二异丙基乙基胺的存在下，在溶剂如二甲基乙酰胺或二氯甲烷中，在0℃至所用溶剂沸点的温度范围内反应。
或者，本发明化合物可以使用熟知的方法，通过将式1化合物转化为活性物种，例如酰氯或活性酯如N-羟基琥珀酰亚胺酯，并与式2化合物的活性物种反应来合成。
式1化合物可以通过将式3化合物：
其中R和R1如前文所定义，或式4化合物：
Figure G2008800223002D00242
其中R和R1如前文所定义，或者式3化合物与式4化合物的混合物，与肼源例如水合肼，任选在碱例如三乙胺的存在下，任选在溶剂例如工业用甲基化酒精的存在下，在0℃至所用溶剂沸点的温度范围内反应来合成。
式3或式4化合物或其混合物可以通过使式5化合物：
Figure G2008800223002D00243
其中R和R1如前文所定义，与能够水解腈基团的试剂例如氢氧化钠，在溶剂例如水的存在下，在0℃至所用溶剂沸点的温度范围内反应来合成。
式5化合物可以通过将式6化合物：
其中R1如前文所定义，与式7化合物：
Figure G2008800223002D00245
其中R如前文所定义，在碱例如甲氧基钠的存在下，在溶剂例如甲醇中，任选在水清除剂例如丙酸乙酯的存在下，在0℃至所用溶剂沸点的温度范围内反应来合成。
式1化合物还可以通过将式8化合物：
Figure G2008800223002D00251
其中R和R1如前文所定义，与能够水解腈基团的试剂例如氢氧化钠，在溶剂例如水的存在下，在0℃至所用溶剂沸点的温度范围内反应，然后通过将生成的中间体与肼源例如水合肼，在0℃至所用溶剂沸点的温度范围内反应来合成。
式8化合物可以通过将式9化合物：
其中R如前文所定义，Ra是C1-4烷基，与式6化合物在碱例如三乙胺或六甲基二硅烷胺化锂的存在下，在溶剂例如四氢呋喃存在下，在-80℃至所用溶剂沸点的温度范围内反应来合成。
式9化合物可以通过与WO02/26576中描述的方法类似的方法来合成。
式1化合物还可以通过与上述方法类似的方法来合成，其中所有通式中腈基被能够生成羧酸的其他基团例如酯或甲酰胺基团，或腈的前体(例如溴基)替代。
式2化合物是可商业获得的或者可以通过化学文献中报道的方法来合成。
X是CRXRY，其中RX或RY之一是酰氨基，并且可以用式10表示的本发明化合物：
Figure G2008800223002D00261
其中R、n、RC1、RC2、R1和RX如前文所定义，RN1和RN2各自独立地选自H、任选取代的C1-20烷基、C5-20芳基、C3-20杂环基，或可以一起形成任选取代的C3-7环烷基或杂环基，可以通过使式11化合物：
Figure G2008800223002D00262
其中R、n、RC1、RC2、R1和RX如前文所定义，与式HNRN1RN2化合物，其中RN1和RN2如前文所定义，在偶联试剂系统例如2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸盐、2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐或(二甲基氨基丙基)乙基碳二酰亚胺盐酸盐/羟基苯并三唑的存在下，在碱例如二异丙基乙基胺的存在下，在溶剂如二甲基乙酰胺或二氯甲烷中，在0℃至所用溶剂沸点的温度范围内反应来合成。
或者，式10化合物可以使用熟知的方法，通过将式11化合物转化为活性物种，例如酰氯或活性酯如N-羟基琥珀酰亚胺酯，并与式HNRN1RN2化合物的活性物种反应来合成。
式11化合物可以通过将被保护形式的式11化合物，例如式12化合物：
其中R、n、RC1、RC2、R1和RX如前文所定义，R01是C1-4烷基，使用熟知的方法例如碱-催化水解，在氢氧化物源例如氢氧化钠和氢氧化锂存在下，在溶剂例如水和/或四氢呋喃存在下，在0℃至所用溶剂沸点的温度范围内脱保护来合成。
式12化合物可以通过前文描述的方法由式1化合物合成。
式HNRN1RN2化合物是可商业获得的或者可以通过化学文献中报道的方法来合成。
X是NH并且可以用式13表示的本发明化合物：
Figure G2008800223002D00272
其中R、n、RC1、RC2和R1如前文所定义，可以通过被保护形式的式13化合物，例如式14化合物：
Figure G2008800223002D00273
其中n、RC1、RC2和R1如前文所定义，使用熟知的方法例如酸-催化裂解，在酸例如三氟乙酸和盐酸存在下，在溶剂例如二氯甲烷或乙醇和/或水存在下，在0℃至所用溶剂沸点的温度范围内脱保护来合成。
式14化合物可以通过前文描述的方法由式1化合物合成。
X是NRX，其中RX是酰基基团，并且可以用式15表示的本发明化合物：
Figure G2008800223002D00281
其中R、n、RC1、RC2和R1如前文所定义，RC3选自任选取代的C1-20烷基、C5-20芳基和C3-20杂环基，可以通过将式13化合物与式RC3COX化合物，其中RC3如前文所定义，X是适合的离去基团例如卤素如氯，任选在碱例如吡啶、三乙胺或二异丙基乙胺存在下，任选在溶剂例如二氯甲烷存在下，在0℃至所用溶剂沸点的温度范围内反应来合成。
式RC3COX化合物是可商业获得的或者可以通过化学文献中报道的方法来合成。
式15化合物还可以通过将式13化合物与式RC3CO2H化合物，其中RC3如前文所定义，在偶联试剂系统例如2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲四氟硼酸盐、2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐或(二甲基氨基丙基)乙基碳二酰亚胺盐酸盐/羟基苯并三唑的存在下，在碱例如二异丙基乙基胺的存在下，在溶剂如二甲基乙酰胺或二氯甲烷中，在0℃至所用溶剂沸点的温度范围内反应来合成。
式RC3CO2H化合物是可商业获得的或者可以通过化学文献中报道的方法来合成。
X是NRX，其中RX是酰氨基或硫代酰氨基基团，并且可以用式16表示的本发明化合物：
Figure G2008800223002D00291
其中R、n、RC1、RC2和R1如前文所定义，Y是O或S，RN3选自任选取代的C1-20烷基、C5-20芳基和C3-20杂环基，可以通过将式13化合物与式RN3NCY化合物，其中Y和RN3如前文所定义，在溶剂例如二氯甲烷存在下，在0℃至所用溶剂沸点的温度范围内反应来合成。
式RN3NCY化合物是可商业获得的或者可以通过化学文献中报道的方法来合成。
X是NRX，其中RX是磺酰基基团，并且可以用式17表示的本发明化合物：
Figure G2008800223002D00292
其中R、n、RC1、RC2和R1如前文所定义，RS1选自任选取代的C1-20烷基、C5-20芳基和C3-20杂环基，可以通过将式13化合物与式RS1SO2Cl化合物，其中RS1如前文所定义，任选在碱例如吡啶、三乙胺或二异丙基乙胺存在下，在溶剂例如二氯甲烷存在下，在0℃至所用溶剂沸点的温度范围内反应来合成。
式RS1SO2Cl化合物是可商业获得的或者可以通过化学文献中报道的方法来合成。
X是NRX，其中RX选自任选取代的C1-20烷基或C3-20杂环基，并且可以用式18表示的本发明化合物：
Figure G2008800223002D00301
其中R、n、RC1、RC2和R1如前文所定义，RC4和RC5各自独立地选自H、任选取代的C1-20烷基、C5-20芳基、C3-20杂环基，或者可以一起形成任选取代的C3-7环烷基或杂环基，可以通过将式13化合物与式RC4CORC5化合物，其中RC4和RC5如前文所定义，在还原剂例如氰基硼氢化钠和三乙酰氧基硼氢化钠存在下，在溶剂例如甲醇存在下，任选在酸催化剂例如乙酸的存在下，在0℃至所用溶剂沸点的温度范围内反应来合成。
式RC4CORC5化合物是可商业获得的或者可以通过化学文献中报道的方法来合成。
X是CRXRY，其中RX是任选取代的磺酰氨基，RY是H，可以用式19表示的本发明化合物：
Figure G2008800223002D00302
其中R、RC1、RC2和R1如前文所定义，RN4选自任选取代的C1-20烷基，C5-20芳基和C3-20杂环基，RS2选自任选取代的C1-20烷基，C5-20芳基和C3-20杂环基，可以通过将式20化合物：
与式RS2SO2Cl化合物，其中RS2如前文所定义，任选在碱例如吡啶、三乙胺或二异丙基乙胺存在下，在溶剂例如二氯甲烷存在下，在0℃至所用溶剂沸点的温度范围内反应来合成。式20化合物可以如上述合成。
用途
本发明提供了活性化合物，具体是抑制PARP活性的活性化合物。
本文使用的术语“活性”涉及能够抑制PARP活性的化合物，具体包括具有内在活性的化合物(药物)以及这样的化合物的前药，所述前药本身可以显示很少或不显示内在活性。
为了评价特定化合物提供的PARP抑制作用，下文实施例描述了一种可以方便使用的测定法。
本发明还提供了抑制细胞中PARP活性的方法，包括使所述细胞与有效量的活性化合物接触，所述活性化合物优选是药学可接受的组合物形式。这种方法可以在体外或体内实施。
例如，可以使细胞样品在体外生长并将活性化合物与所述细胞接触，观察化合物对这些细胞的作用。作为“作用”的实例，可以测定某一时间内实现DNA修复的量。当发现活性化合物对细胞产生影响时，可将其在治疗携带相同细胞类型的细胞的患者的方法中用作活性化合物的功效的预后或诊断的标志。
就治疗病症而言，本文所用的术语“治疗”通常涉及对于人类或动物(例如在兽医应用中)获得某些期望的治疗效果的治疗或疗法，所述期望的治疗效果例如抑制病症进展，包括进展速率的下降、进展速率的停止，病症的改善和病症的治愈。还包括作为预防措施的治疗(即预防)。
本文使用的术语“辅助的”是指活性化合物与已知治疗手段联合应用。这种手段包括用于治疗不同癌症类型时的药物细胞毒性方案和/或电离辐射。具体而言，已知活性化合物可以增强多种癌症化学治疗的作用，其中包括用于治疗癌症的拓扑异构酶类的毒性药物(例如托泊替康、依立替康和卢比替康)、大多数已知的烷化剂(例如DTIC、替莫唑胺)和铂类药物(例如卡铂、顺铂)。
活性化合物也可以用作细胞培养添加剂以抑制PARP，例如为了使细胞在体外对已知的化学治疗剂或电离辐射治疗更加敏感。
活性化合物也可以用作体外测定法的一部分，例如为了确定候选宿主是否可能从受试化合物治疗中受益。
给药
活性化合物或包含活性化合物的药物组合物可以通过任何适宜的给药途径给予受试者，无论全身性/外周性还是在期望的作用部位，包括但不限于口服(例如通过食入)；局部(包括例如透皮、鼻内、眼内、口腔和舌下)；肺(例如，使用例如气雾剂通过例如口或鼻的吸入或吹入疗法，)；直肠；阴道；胃肠外，例如通过注射，包括皮下、皮内、肌内、静脉内、动脉内、心内、鞘内、脊柱内、囊内、囊下、眼眶内、腹膜内、气管内、表皮下、关节内、蛛网膜下和胸骨内；通过植入药库，例如皮下或肌内。
受试者可以是真核生物、动物、脊椎动物、哺乳动物、啮齿动物(例如豚鼠、仓鼠、大鼠、小鼠)、鼠科动物(例如小鼠)、犬科动物(例如狗)、猫科动物(例如猫)、马科动物(例如马)、灵长类、类人猿(例如猴或猿)、猴类(例如绒猴、狒狒)、猿类(例如大猩猩、黑猩猩、猩猩、长臂猿)或人类。
制剂
尽管可能单独施用活性化合物，但优选其作为含有如上所述的至少一种活性化合物与一种或多种药学可接受的载体、辅剂、赋形剂、稀释剂、填充剂、缓冲剂、稳定剂、防腐剂、润滑剂或其他本领域技术人员熟知的物质以及任选的其他治疗剂或预防剂的药物组合物(如制剂)。
因此，本发明还提供如上所定义的药物组合物，和制备药物组合物的方法，其包括将至少一种以上定义的活性化合物与一种或多种药学可接受的载体、赋形剂、缓冲剂、辅剂、稳定剂或本文描述的其他物质混合。
本文所用的术语“药学可接受的”涉及在合理医学判断的范围内适合用于与受试者(例如人类)组织接触而没有过度毒性、刺激性、过敏反应或其他问题或并发症的化合物、物质、组合物和/或剂型，其同时具有合理的受益/风险比。每种载体、赋形剂等也必须在与制剂的其他成分相容的意义上是“可接受的”。
合适的载体、稀释剂、赋形剂等可以在标准药学课本中找到。参见，例如“Handbook of Pharmaceutical Additives”，第2版(M.Ash和I.Ash编)，2001(Synapse Information Resources，Inc.，Endicott，New York，USA)，“Remington′s Pharmaceutical Sciences”，第20版，Lippincott，Williams&Wilkins出版，2000；和“Handbook of Pharmaceutical Excipients”，第2版，1994。
制剂可以方便地采用单元剂型的形式，并且可以通过药学领域熟知的任何方法制备。这种方法包括将活性化合物与构成一种或多种辅助成分的载体组合的步骤。一般而言，制剂的制备可以通过将活性化合物与液体载体或细碎的固体载体或与两者一起均匀、充分地混合，然后如果需要使产品成型。
制剂可以是液体、溶液剂、混悬剂、乳剂、酏剂、糖浆剂、片剂、锭剂、颗粒剂、散剂、胶囊剂、扁囊剂、丸剂、针剂、栓剂、阴道栓剂、软膏剂、凝胶剂、糊剂、乳膏剂、喷雾剂、气雾剂、泡沫剂、洗剂、油剂、大丸剂、药糖剂或气溶胶。
适合于口服给药(例如通过食入)的制剂可以是离散单元，例如胶囊剂、扁胶囊或片剂，每个含有预定量的活性化合物；散剂或颗粒剂；在水性液体或非水性液体中的溶液剂或混悬剂；或水包油型液体乳剂或油包水型液体乳剂；大丸剂；药糖剂；或糊剂。
片剂可以通过常规方法，例如压片或模制任选与一种或多种辅助成分一起制备。压制的片剂可以通过在适合的机器中将自由流动形式例如粉末或颗粒形式的活性化合物，任选与一种或多种粘合剂(如聚维酮、明胶、阿拉伯胶、山梨糖醇、西黄耆胶、羟丙基甲基纤维素)；填充剂或稀释剂(如乳糖、微晶纤维素、磷酸氢钙)；润滑剂(如硬脂酸镁、滑石粉、二氧化硅)；崩解剂(如淀粉羟乙酸钠、交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠)；表面活性剂或分散剂或湿润剂(如月桂基硫酸钠)；和防腐剂(如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、山梨酸)混合压制来制备。模制片剂可以通过在合适的机器中模制用惰性液体稀释剂湿润的粉状化合物的混合物来制备。片剂可以任选包衣或压痕，并且可以配制以提供活性化合物的缓释或控释，例如使用不同比例的羟丙基甲基纤维素以提供期望的释放性质。片剂可以任选具有肠溶包衣以提供在肠道部分释放而不在胃部释放。
适合于局部给药的制剂(例如透皮、鼻内、眼内、口腔和舌下)可以制备为软膏剂、乳膏剂、混悬剂、洗剂、散剂、溶液剂、糊剂、凝胶剂、喷雾剂、气溶胶或油剂。或者，制剂可以含有贴片或敷料例如浸有活性化合物和任选一种或多种赋形剂或稀释剂的绷带或粘性硬膏剂。
适合于口内局部给药的制剂包括锭剂，其在矫味的基质通常为蔗糖和阿拉伯胶或西黄蓍胶中包含活性化合物；软锭剂，其在惰性基质例如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶中包含活性化合物；和漱口剂，在适合的液体载体中包含活性化合物。
适合用于眼部局部给药的制剂还包括滴眼液，其中活性化合物溶于或混悬于合适的载体中，特别是用于活性化合物的水性溶剂中。
其中的载体是固体的适用于经鼻给药的制剂包含颗粒尺寸为例如约20-约500微米的粗粉末，其以经鼻吸入方式给药，即将装有粉末的容器靠近鼻子通过鼻道快速吸入。其中载体是液体的用于例如鼻腔喷雾、滴鼻剂给药或通过喷雾器以气雾剂给药的合适的制剂包含活性化合物的水性或油性溶液剂。
适合于通过吸入给药的制剂包括从加压包装中产生喷雾剂的制剂，使用合适的气雾喷射剂如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他合适的气体。
适合于经皮肤局部给药的制剂包括软膏剂、乳膏剂和乳剂。当配制在软膏剂中时，活性化合物任选与石蜡或与水混溶的软膏基质一起使用。或者，活性化合物可以用水包油型乳膏基质配制成乳膏剂。如果需要的话，乳膏基质的水相可以包含例如至少约30％w/w的多元醇，即具有两个或多个羟基的醇如丙二醇、丁-1，3-二醇、甘露醇、山梨醇、甘油和聚乙二醇及其混合物。局部制剂可以期望地包含增强活性化合物通过皮肤或其他病患区域的吸收或渗透的化合物。这样的皮肤渗透促进剂的实例包括二甲基亚砜和相关类似物。
当制备为局部乳剂时，油相可以任选仅包含乳化剂(另外称作利泄剂)，或者其可以包含至少一种乳化剂与脂肪或油或脂肪和油的混合物。优选地，包含亲水性乳化剂以及用作稳定剂的亲脂性乳化剂。还优选包含油和脂肪。总体而言，含有稳定剂或不含有稳定剂的乳化剂组成所谓的乳化蜡，该蜡与油和/或脂肪一起组成所谓的乳化软膏基质，其构成了乳膏剂的油分散相。
合适的利泄剂和乳剂稳定剂包括吐温60、司盘80、鲸蜡硬脂醇、肉豆蔻醇、单硬脂酸甘油酯和月桂基硫酸钠。适合于制剂的油或脂肪的选择基于实现所需的美容性质，因为活性化合物在大多数可能用在药物乳剂的油中的溶解度可能非常低。因此乳膏剂应该优选是非油腻、不染色和可以洗掉的产品，其具有适当的粘稠度以避免从管或其他容器中渗漏。可以使用直链或支链一元或二元烷基酯例如二异己二酸酯、异鲸蜡醇硬脂酸酯、椰子脂肪酸丙二醇二酯、肉豆蔻酸异丙酯、油酸癸酯、棕榈酸异丙酯、硬脂酸丁酯、棕榈酸2-乙基己基酯或称作Crodamol CAP的支链酯的混合物，最后三个是优选的酯。这些可以单独使用或根据所需性质组合使用。或者，可以使用高熔点脂质如白软石蜡和/或液体石蜡或其他矿物油。
适用于直肠给药的制剂可以是具有合适基质的栓剂的形式，合适的基质含有例如可可脂或水杨酸酯。
适于阴道给药的制剂可以是含有除活性化合物外还含有本领域已知的合适载体的阴道栓剂、棉球、乳膏、凝胶、糊剂、泡沫剂或喷雾剂的形式。
适用于胃肠外给药的制剂(例如通过注射，包括皮内、皮下、肌内、静脉内和真皮内)包括水性和非水性的等渗、无热原的无菌注射溶液剂，其可以含有抗氧化剂、缓冲剂、防腐剂、稳定剂、抑菌剂和使制剂与受试者的血液等渗的溶质；水性和非水性无菌混悬剂，其可以包括助悬剂和增稠剂，以及脂质体或设计用于使化合物靶向血液组分或一种或多种器官的其他微粒系统。用于这种制剂的合适的等渗载体的实例包括氯化钠注射液、林格溶液、林格乳酸盐溶液。通常，活性化合物在溶液中的浓度为约1ng/ml-约10μg/ml，例如约10ng/ml-约1μg/ml。制剂可以是单位剂量或多剂量密封容器的形式，例如安瓿和小瓶，并且可以储存于冷冻干燥(冻干)条件下，只需要在使用前加入无菌液体载体例如注射用水即可。可以从无菌粉末、颗粒和片剂制备临场的注射溶液和混悬液。制剂可以是脂质体或设计用于使活性化合物靶向于血液组分或一种或多种器官的其他微粒系统的形式。
剂量
应当理解，活性化合物和含有活性化合物的组合物的合适剂量可以因患者而异。确定最佳剂量通常涉及在治疗利益水平与本发明治疗的任何风险或者有害副作用之间进行权衡。所选的剂量水平通常取决于各种因素，包括但不限于具体化合物的活性、给药途径、给药时间、化合物的排泄速率、治疗的持续时间、组合使用的其他药物、化合物和/或物质，以及患者的年龄、性别、体重、病症、一般健康状况和病史。化合物的量和给药途径最终由医生决定，但是通常剂量会获得作用位点处的局部浓度以实现期望的效果，而不引起实质的有害或有毒副作用。
体内施用可以以单剂量在整个疗程中的连续或间歇(例如在适当的间隔以分开的剂量)进行。确定最给药的有效方式和剂量的方法对于本领域技术人员是熟知的，并且会随着用于治疗的制剂、治疗目的、所治疗的靶细胞、所治疗的受试者而变化。可以进行单剂量或多剂量给药，剂量水平和模式由治疗医生选择。
一般而言，活性化合物的合适剂量为每kg受试者体重每日约100μg-约250mg。如果活性化合物是盐、酯、前药等，施用的量以母体化合物为基础计算，因此所用的实际重量会成比例地增加。
实施例
实施例1和2的一般实验方法
制备型HPLC
仪器：Waters ZMD LC-MS系统，编号LD352，电喷射离子化模式下运行。
流动相A：0.1％甲酸水溶液
流动相B：0.1％甲酸的乙腈溶液
柱：Genesis C18 4μm 50×4.6mm
梯度：
  时间(分钟)   ％B
  0   5
  7   95
  9   95
  9.5   5
  时间(分钟)   ％B
  13   5
流量：1.0ml/min。
PDA扫描范围：210-400nm。
替代的制备型HPLC(在有+指示时使用)
仪器：Waters Acquity UPLC/Wtaers SQD，电喷射离子化模式下运行。
流动相：0.1％甲酸水溶液
流动相B：0.1％甲酸的乙腈溶液
柱：Acquity UPLC BEH C181.7μm 50×2.1mm
梯度：
  时间(分钟)   ％B
  0   5
  0.2   5
  2.5   95
  3.0   95
流量：0.6ml/min.
PDA扫描范围：210-400nm.
ELSD条件：漂移管50C雾化器20℃(30％)，气体50psi
实施例1
(a)3-(3-氧代-4，5，6，7-四氢-3H-异苯并呋喃-1-亚基甲基)-苄腈(2)
使用‘Wood’s Alloy’浴将4，5，6，7-四氢-异苯并呋喃-1，3-二酮(1)(3.043g，20.0mmol)和3-氰基苯乙酸(3.15g，19.8mmol)在醋酸钠(20.1mg，0.243mmol)存在下加热至240℃。一旦反应达到240℃，加入额外量的醋酸钠(20.1mg，0.243mmol)。然后将反应混合物再加热40分钟，之后冷却至80℃。向浓稠胶状物中加入乙醇(20ml)，混合物打浆20分钟。将得到的悬浮液冷却至室温并过滤。固体用额外的冷乙醇(2×4ml)进一步洗涤，干燥得到所需的产物，为几何异构体混合物。LC-MS主峰，(3.5g，纯度94％)并且无需进一步纯化；m/z(LC-MS，ESP)，RT＝4.75分钟(未观测到电离作用)。
(b)3-(4-氧代-3，4，5，6，7，8-六氢-酞嗪-1-基甲基)-苄腈(3)
使用水合肼(1.0ml，20.0mmol)滴加处理3-(3-氧代-4，5，6，7-四氢-3H-异苯并呋喃-1-亚基甲基)-苄腈(2)(3.5g，13.9mmol)的水(20ml)悬浮液，然后加热回流8小时。混合物冷却至约5℃，过滤得到的悬浮液并使用水(4ml)和乙醚(4ml)洗涤。然后真空干燥得到的物质。LC-MS主峰，(1.8g，纯度91％)并且无需进一步纯化；m/z(LC-MS，ESP)，RT＝3.24分钟(M+H 266)。
(c)3-(4-氧代-3，4，5，6，7，8-六氢-酞嗪-1-基甲基)-苯甲酸(4)
向3-(4-氧代-3，4，5，6，7，8-六氢-酞嗪-1-基甲基)-苄腈(3)(1.31g，4.93mmol)的水(10ml)悬浮液中加入氢氧化钠(987mg，24.7mmol)，在90℃下加热4小时。然后冷却混合物，使用硫酸调节pH至2(约6ml 4N)。过滤分离得到的膏状沉淀物并干燥。LC-MS单峰，(1.1g，纯度99％)并且无需进一步纯化；m/z(LC-MS，ESN)，RT＝3.10分钟(M+H 283.4)。
(d)库合成(5a-h)
向3-(4-氧代-3，4，5，6，7，8-六氢-酞嗪-1-基甲基)-苯甲酸(4)(20mg，0.07mmol)的DCM(1ml)溶液中加入HBTU(53mg，0.140mmol)、三乙胺(20μL，0.140mol)和胺(0.140mmol)。反应混合物在室温下搅拌18小时，真空浓缩。将粗样品进行制备型HPLC纯化。
Figure G2008800223002D00391
Figure G2008800223002D00401
Figure G2008800223002D00411
实施例2
Figure G2008800223002D00412
(a)3-(3-溴-4-氟-苯亚甲基)-4，5，6，7-四氢-3H-异苯并呋喃-1-酮(6)
使用‘Wood’s Alloy’浴将4，5，6，7-四氢-异苯并呋喃-1，3-二酮(1)(16.7g，109.7mmol)和3-溴-4-氟苯乙酸(15.0g，64.37mmol)在醋酸钠(0.259g，3.160mmol)存在下在210℃加热4.5小时。然后将反应混合物倒入坩埚中，冷却得到晶状固体。使用研钵和研棒磨细固体，并用乙醇(20ml)研磨。然后过滤得到悬浮液并用额外的乙醇(10ml)洗涤。然后干燥固体得到所需的产物，为几何异构体混合物。LC-MS主峰，(20.78g，纯度94％)并且无需进一步纯化；m/z(LC-MS，ESP)，RT＝4.74分钟(未观测到电离作用)。
(b)4-(3-溴-4-氟-苄基)-5，6，7，8-四氢-2H-酞嗪-1-酮(7)
向悬浮于水(150ml)中的3-(3-溴-4-氟-苯亚甲基)-4，5，6，7-四氢-3H-异苯并呋喃-1-酮(6)(顺式/反式混合物)(20.78g，64.3mmol)中加入水合肼(12.5ml，257.2mmol)。反应在85℃加热18小时，然后冷却至室温。过滤分离浅褐色悬浮液，使用水(1×50ml)、己烷(1×50ml)和醚(1×25ml)洗涤，然后在真空干燥箱内干燥过夜。LC-MS主峰，(19.1g，纯度91％)并且无需进一步纯化；m/z(LC-MS，ESP)，RT＝3.92分钟(M+H 337&339)。
(c)2-氟-5-(4-氧代-3，4，5，6，7，8-六氢-酞嗪-1-基甲基)-苄腈(8)
向4-(3-溴-4-氟-苄基)-5，6，7，8-四氢-2H-酞嗪-1-酮(7)(9.53g，28.2mmol)的无水DMF溶液中加入一份氰化铜(I)(3.5g，42.3mmol)。混合物在160℃加热18小时。然后冷却反应，通过硅藻土过滤，使用乙醇(30ml)洗涤。真空浓缩滤液得到褐色油。LC-MS主峰，(8.01g，纯度66％)粗产物进行下一步转化；m/z(LC-MS，ESP)，RT＝3.50分钟(M+H 284.3)。
(d)2-氟-5-(4-氧代-3，4，5，6，7，8-六氢-酞嗪-1-基甲基)-苯甲酸(9)
将粗2-氟-5-(4-氧代-3，4，5，6，7，8-六氢酞嗪-1-基甲基)苄腈(9.9g，34.9mmol)悬浮于水(245ml)中，使用氢氧化钠(6.98g，174mmol)处理。混合物在60℃加热18小时。然后反应冷却至5℃，逐滴加入浓硫酸直至形成沉淀(约10ml，pH2)。混悬液在5℃搅拌10分钟，过滤。使用水(2×8ml)洗涤分离的固体，使用DCM(20ml)研磨，然后进行干燥。LC-MS单峰，(4.48g，纯度98％)无需进一步纯化即可用于下一步；m/z(LC-MS，ESN)，RT＝1.96分钟(M-H 301.3)。
(e)库合成(10a-m)
向2-氟-5-(4-氧代-3，4，5，6，7，8-六氢-酞嗪-1-基甲基)-苯甲酸(22mg，0.07mmol)的DMA(1ml)溶液中加入HBTU(53mg，0.140mmol)、三乙胺(20μL，0.140mol)和胺(0.140mmol)。粗反应混合物在室温下搅拌18小时，然后进行制备型HPLC纯化。
Figure G2008800223002D00431
Figure G2008800223002D00432
Figure G2008800223002D00441
Figure G2008800223002D00451
Figure G2008800223002D00461
实施例3-8的一般实验方法
分析型LC-MS
LC-MS数据由系统产生，其中HPLC组件通常包含Agilent 1100、WatersAlliance HT(2790&2795)仪或HP1100泵和具有CTC自动采样器的二极管阵列，在Phenomenex Gemini C185mm，50×2mm柱(或类似的)上运行，使用酸性洗脱液(例如，在4分钟内使用梯度为0-95％的水/乙腈与5％的1％甲酸的50∶50水∶乙腈(v/v)溶液的混合物；或使用甲醇代替乙腈的等同溶剂系统)，或碱性洗脱液(例如，在4分钟内使用梯度为0-95％水/乙腈与5％的0.1％ 880氨的乙腈溶液的混合物)洗脱；MS组件通常包括在合适质量范围内扫描的WatersZQ质谱仪。生成电喷射色谱图(ESI)的正和负基峰强度和220-300nm的UV总吸收色谱图，并给出m/z值；通常，仅报告表示母体质量的离子，除非另有说明，所述值正离子模式下为(M+H)+，负离子模式下为(M-H)-。
NMR光谱
给出的NMR数据使用例如Bruker DPX-400光谱仪在400MHz下测定，其形式为主要的特征质子的δ值，以每百万分之一份(ppm)表示。除非另有说明，所用的溶剂为CDCl3(使用四甲基硅烷(TMS)作为内标)或DMSO-d6；使用下列缩写：s，单峰；d，双重峰；t，三重峰；q，四重峰；m，多重峰；br，宽峰。
实施例3
Figure G2008800223002D00471
(a)4-(N-甲基环丙烷磺酰氨基)哌啶-1-羧酸叔丁基酯(12)
向4-(甲氨基)哌啶-1-羧酸叔丁基酯(11)(2g，9.33mmol)的二氯甲烷(40ml)溶液中加入三乙胺(2.60ml，18.67mmol)。然后在2分钟内逐滴加入环丙烷磺酰氯(1.188ml，11.67mmol)。在室温下将得到的溶液搅拌20小时。然后加入饱和的碳酸氢钠水溶液(～50mL)，混合物搅拌5分钟。然后分离有机层，使用硫酸镁干燥，过滤并干燥得到粗的所需产物(3.40g，＞100％)，为静置固化的琥珀色油状物；1H NMR(400.132MHz，CDCl3)δ0.95-1.00(2H，m)，1.17-1.21(2H，m)，1.32-1.38(1H，m)，1.47(9H，s)，1.58-1.77(3H，m)，2.26-2.32(1H，m)，2.71-2.80(2H，m)，2.81(3H，s)，3.83-3.91(1H，m)，4.17-4.26(2H，m)。将其直接使用而没有进一步纯化，假定产率100％。
(b)N-甲基-N-(哌啶-4-基)环丙烷磺酰胺(13)
使用三氟乙酸(7.16mL，93.00mmol)处理4-(N-甲基环丙烷磺酰氨基)哌啶-1-羧酸叔丁基酯(12)(2.96g，9.3mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液。得到的溶液在室温下搅拌4小时，然后直接倒在SCX-2柱(50g)上。使用DCM(200mL)和甲醇(150mL)依次洗脱柱筒，然后使用2M NH3/MeOH(200mL)从柱上洗脱所需产物，蒸干得到所需化合物，为蜡状黄色固体(1.800g，89％)；1H NMR(400.132MHz，DMSO)δ0.91-0.96(4H，m)，1.55-1.64(4H，m)，2.44-2.52(2H，m)，2.55-2.62(1H，m)，2.72(3H，s)，2.94-3.00(2H，m)，3.55-3.65(1H，m)。
(c)N-(1-(2-氟-5-((4-氧代-3，4，5，6，7，8-六氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌啶-4-基)-N-甲基环丙烷磺酰胺(14)
使用三乙胺(0.250ml，1.79mmol)和N-甲基-N-(哌啶-4-基)环丙烷磺酰胺(13)(150mg，0.69mmol)处理2-氟-5-((4-氧代-3，4，5，6，7，8-六氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酸(9)(200mg，0.66mmol)的N，N-二甲乙酰胺(6ml)溶液。然后加入O-苯并三唑-1-基-N，N，N′，N′-四-甲基脲六氟磷酸盐(344mg，0.91mmol)，反应混合物在室温下在氮气中搅拌6小时。然后将反应混合物倒入水(50mL)中，过滤得到的固体得到粗产物，为粘性暗褐色固体。通过加入2M HCl调节滤液pH至4-5，用DCM(2×75mL)萃取。合并后的萃取物与上述滤得的固体合并，混合物使用盐水洗涤，使用硫酸镁干燥，过滤，蒸发得到粗产物，其通过制备型HPLC纯化(Waters XBridge Prep C18 OBD柱，5μ二氧化硅，直径19mm，长度100mm)，使用水(含有1％NH3)和MeCN的极性递减的混合物作为洗脱剂。合并含有所需化合物的部分，然后蒸干和冻干得到胶状产物。用最少量的二氯甲烷将其再溶解，放置使其蒸发，在65℃下真空干燥4小时得到所需化合物，为黄褐色泡沫(128mg，产率38.5％，LC-MS测定纯度100％)；1H NMR(399.902MHz，DMSO)δ0.96(4H，d)，1.54-1.80(8H，m)，2.35-2.40(4H，m)，2.60-2.66(1H，m)，2.73(3H，s)，2.80-2.91(1H，m)，3.11-3.20(1H，m)，3.36-3.42(1H，m)，3.84-3.93(1H，m)，3.93(2H，s)，4.56-4.62(1H，m)，7.19-7.33(3H，m)，12.62(1H，s)；m/z(LC-MS，ESI+)，RT＝1.70(M+H 503.5)。
实施例4
Figure G2008800223002D00491
(a)1-(2-氟-5-((4-氧代-3，4，5，6，7，8-六氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌啶-4-羧酸乙酯(15)
使用4-哌啶甲酸乙酯(1.9ml，12.34mmol)和三乙胺(3.5ml，25.11mmol)处理2-氟-5-((4-氧代-3，4，5，6，7，8-六氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酸(9)(3g，9.92mmol)的N，N-二甲基乙酰胺(90ml)溶液。然后在5分钟期间分批加入O-苯并三唑-1-基-N，N，N′，N′-四-甲基脲六氟磷酸盐(4.89g，12.90mmol)。反应混合物然后在室温下在氮气中搅拌过夜，然后倒入水中(～500mL)。通过逐滴加入2M HCl将混合物的pH从pH11-12调节至pH7。通过抽滤收集得到的固体得到粗产物，为褐色粘性胶状物，将其在DCM(～200mL)中再溶解，使用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，蒸发得到褐色油/胶状物。还使用DCM(500mL)萃取滤液，有机萃取物用硫酸镁干燥，蒸发得到深琥珀色胶状物。合并两种粗产物并通过快速硅胶层析纯化，使用0-20％ MeOH 的DCM溶液梯度洗脱。蒸干含有产物的部分，通过快速硅胶层析再次纯化，使用0-10％MeOH的EtOAc溶液梯度洗脱。蒸干纯的部分得到所需化合物，为浅黄色胶状物(1.900g，43.4％)；1H NMR(400.132MHz，CDCl3)δ1.26(3H，t)，1.66-1.89(7H，m)，2.00-2.06(1H，m)，2.33-2.40(2H，m)，2.52-2.61(3H，m)，3.03-3.16(2H，m)，3.51-3.58(1H，m)，3.88(2H，s)，4.16(2H，q)，4.49-4.55(1H，m)，7.03(1H，t)，7.17-7.21(2H，m)，10.64(1H，s)；m/z(LC-MS，ESI+)，RT＝1.92(M+H442.5)。
(b)1-(2-氟-5-((4-氧代-3，4，5，6，7，8-六氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌啶-4-羧酸(16)
使用氢氧化锂一水合物(0.397g，9.47mmol)的水(7.50mL)溶液处理1-(2-氟-5-((4-氧代-3，4，5，6，7，8-六氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌啶-4-羧酸乙酯(15)(1.9g，4.30mmol)的乙醇(30mL)溶液。得到的溶液在室温下搅拌19小时。蒸干得到的混合物，将残留物再溶解于水(50mL)中，用DCM(～20mL)洗涤，在搅拌下通过逐滴加入2M HCl将水溶液调节至pH3。通过抽滤收集得到的沉淀物，在60℃下真空干燥2小时得到所需化合物，为黄褐色固体(1.000g，56.2％)；1HNMR(400.132MHz，CDCl3)δ1.66-1.92(7H，m)，2.05-2.13(1H，m)，2.29-2.69(5H，m)，3.10-3.18(2H，m)，3.54-3.60(1H，m)，3.86-3.96(2H，m)，4.45-4.52(1H，m)，7.01-7.12(2H，m)，7.21-7.26(1H，m)，12.58-12.98(1H，brs)[假定OH不存在/被交换]；m/z(LC-MS，ESI+)，RT＝0.82(M+H 414.5)。
(c)库合成
将1-(2-氟-5-((4-氧代-3，4，5，6，7，8-六氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌啶-4-羧酸(16)(896mg，2.17mmol)溶解于N，N-二甲乙酰胺(18mL)中，使用三乙胺(0.8mL，5.74mmol)和O-苯并三唑-1-基-N，N，N′，N′-四-甲基脲六氟磷酸盐(1.1g，2.90mmol)处理溶液。得到的黄色溶液在室温下搅拌25分钟得到母液。向各种所需的胺(0.41-0.46mmol)中加入2.35mL母液，反应混合物在室温下搅拌过夜。过滤粗反应混合物，然后通过制备型HPLC(Waters XBridge Prep C18 OBD柱，5μ二氧化硅，直径19mm，长度100mm)纯化，使用水(含有1％NH3)和MeCN的极性递减的混合物作为洗脱剂。蒸干含有所需化合物的部分，冻干并真空干燥得到所需化合物。
17a：-N-苄基-1-[2-氟-5-[(4-氧代-5，6，7，8-四氢-3H-酞嗪-1-基)甲基]苯甲酰基]哌啶-4-甲酰胺；1H NMR(399.902MHz，DMSO)δ1.36-1.65(7H，m)，1.73-1.80(1H，m)，2.28-2.33(4H，m)，2.72-2.84(2H，m)，2.93-3.03(1H，m)，3.31-3.37(1H，m)，3.85(2H，s)，4.14-4.25(2H，m)，4.38-4.44(1H，m)，7.09-7.34(8H，m)，8.28(1H，t)，12.53(1H，s)。
17b：-N-环丁基-1-[2-氟-5-[(4-氧代-5，6，7，8-四氢-3H-酞嗪-1-基)甲基]苯甲酰基]哌啶-4-甲酰胺；1H NMR(399.902MHz，DMSO)δ1.38-1.53(2H，m)，1.58-1.66(7H，m)，1.73-1.79(1H，m)，1.81-1.91(2H，m)，2.09-2.18(2H，m)，2.33-2.42(4H，m)，2.76-2.90(2H，m)，2.98-3.08(1H，m)，3.36-3.43(1H，m)，3.93(2H，s)，4.17(1H，sextet)，4.43-4.50(1H，m)，7.15-7.30(3H，m)，8.03(1H，d)，12.60(1H，s)。
17c：-N-(环丙基甲基)-1-[2-氟-5-[(4-氧代-5，6，7，8-四氢-3H-酞嗪-1-基)甲基]苯甲酰基]哌啶-4-甲酰胺；1H NMR(399.902MHz，DMSO)δ0.13-0.17(2H，m)，0.38-0.42(2H，m)，0.84-0.94(1H，m)，1.42-1.57(2H，m)，1.59-1.68(5H，m)，1.75-1.82(1H，m)，2.36-2.44(5H，m)，2.83(1H，td)，2.95(2H，t)，3.00-3.09(1H，m)，3.38-3.44(1H，m)，3.94(2H，s)，4.44-4.52(1H，m)，7.17-7.31(3H，m)，7.88(1H，t)，12.61(1H，s)。
17d：-1-[2-氟-5-[(4-氧代-5，6，7，8-四氢-3H-酞嗪-1-基)甲基]苯甲酰基]-N-(2-甲基丙基)哌啶-4-甲酰胺；1H NMR(399.902MHz，DMSO)δ0.83(6H，d)，1.41-1.57(2H，m)，1.59-1.72(6H，m)，1.75-1.81(1H，m)，2.35-2.44(5H，m)，2.77-2.89(3H，m)，2.99-3.08(1H，m)，3.37-3.44(1H，m)，3.93(2H，s)，4.44-4.50(1H，m)，7.16-7.30(3H，m)，7.79(1H，t)，12.60(1H，s)。
17e：-4-[[4-氟-3-[4-(吗啉-4-羰基)哌啶-1-羰基]苯基]甲基]-5，6，7，8-四氢-2H-酞嗪-1-酮；1H NMR(399.902MHz，DMSO)δ1.41-1.68(7H，m)，1.71-1.78(1H，m)，2.35-2.42(4H，m)，2.84-2.97(2H，m)，3.06-3.14(1H，m)，3.36-3.61(9H，m)，3.93(2H，s)，4.45-4.51(1H，m)，7.17-7.30(3H，m)，12.61(1H，s)。
17f：-4-[[4-氟-3-[4-(2-甲基哌啶-1-羰基)哌啶-1-羰基]苯基]甲基]-5，6，7，8-四氢-2H-酞嗪-1-酮；1H NMR(399.902MHz，DMSO)复杂的NMR，由于假定的旋转异构体。
17g：-N-(2-二甲氨基乙基)-1-[2-氟-5-[(4-氧代-5，6，7，8-四氢-3H-酞嗪-1-基)甲基]苯甲酰基]-N-甲基哌啶-4-甲酰胺；1H NMR(399.902MHz，DMSO)复杂的NMR。
17h：-N-[1-[1-[2-氟-5-[(4-氧代-5，6，7，8-四氢-3H-酞嗪-1-基)甲基]苯甲酰基]哌啶-4-羰基]哌啶-4-基]-N-甲基环丙烷磺酰胺；1H NMR(399.902MHz，DMSO)复杂的NMR。
实施例5
Figure G2008800223002D00531
(a)4-(4-氟-3-(4-(2-甲氧基乙氧基)哌啶-1-羰基)苄基)-5，6，7，8-四氢酞嗪-1(2H)-酮(18a)
使用4-(2-甲氧基乙氧基)哌啶盐酸盐(103mg，0.53mmol)和三乙胺(0.212mL，1.52mmol)处理2-氟-5-((4-氧代-3，4，5，6，7，8-六氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酸(9)(153mg，0.51mmol)的N，N-二甲乙酰胺(4mL)溶液。加入O-苯并三唑-1-基-N，N，N′，N′-四-甲基脲六氟磷酸盐(253mg，0.67mmol)，得到的溶液在室温下搅拌3小时。过滤粗反应混合物，滤液通过制备型HPLC(Waters XBridge Prep C18 OBD柱，5μsilica，直径19mm，长度100mm)纯化，使用水(含有1％NH3)和MeCN的极性递减的混合物作为洗脱剂。蒸干含有所需化合物的部分，冻干得到胶状物，使用小量的乙醚和DCM吸收胶状物，蒸发，然后在55℃下真空干燥2小时，得到所需化合物，为白色泡沫(112mg，产率49.9％；LC-MS检测纯度100％)；1HNMR(400.132MHz，DMSO)δ1.30-1.50(2H，m)，1.59-1.66(4H，m)，1.72-1.79(1H，m)，1.84-1.90(1H，m)，2.35-2.40(4H，m)，3.03-3.10(1H，m)，3.25(3H，s)，3.26-3.36(2H，m)，3.44(2H，t)，3.53-3.59(3H，m)，3.90-4.00(3H，m)，7.18-7.30(3H，m)，12.60(1H，s)；m/z(LC-MS，ESI+)，RT＝1.46(M+H 444.1)。
(b)使用上述方法的产物(18b-e)
使用类似(a)中描述的过程，使2-氟-5-((4-氧代-3，4，5，6，7，8-六氢酞嗪-1-基)甲)苯甲酸(9)与合适的哌啶过夜反应得到以下所述的化合物。
Figure G2008800223002D00541
Figure G2008800223002D00542
18b：-4-(4-氟-3-(4-(4-甲氧基苯氧基)哌啶-1-羰基)苄基)-5，6，7，8-四氢酞嗪-1(2H)-酮；1H NMR(400.132MHz，DMSO)δ1.48-1.66(6H，m)，1.80-1.88(1H，m)，1.92-2.00(1H，m)，2.35-2.40(4H，m)，3.14-3.20(1H，m)，3.35-3.50(2H，m)，3.70(3H，s)，3.90-4.01(3H，m)，4.47-4.52(1H，m)，6.83-6.87(2H，m)，6.91-6.95(2H，m)，7.20-7.30(3H，m)，12.60(1H，s)。
18c：-4-(4-氟-3-(4-(3-甲氧基苯氧基)哌啶-1-羰基)苄基)-5，6，7，8-四氢酞嗪-1(2H)-酮；1H NMR(400.132MHz，DMSO)δ1.49-1.68(6H，m)，1.84-1.92(1H，m)，1.96-2.04(1H，m)，2.34-2.41(4H，m)，3.16-3.25(1H，m)，3.36-3.52(2H，m)，3.73(3H，s)，3.92(2H，s)，3.94-4.03(1H，m)，4.62-4.67(1H，m)，6.50-6.59(3H，m)，7.15-7.30(4H，m)，12.60(1H，s)。
18d：-4-(4-氟-3-(4-(2-甲氧基苯氧基)哌啶-1-羰基)苄基)-5，6，7，8-四氢酞嗪-1(2H)-酮；1H NMR(400.132MHz，DMSO)δ1.52-1.69(6H，m)，1.80-1.88(1H，m)，1.92-2.00(1H，m)，2.35-2.40(4H，m)，3.13-3.21(1H，m)，3.38-3.51(2H，m)，3.76(3H，s)，3.90-4.02(3H，m)，4.49-4.54(1H，m)，6.85-7.05(4H，m)，7.20-7.31(3H，m)，12.60(1H，s)。
18e：-4-(4-氟-3-(4-丙氧基哌啶-1-羰基)苄基)-5，6，7，8-四氢酞嗪-1(2H)-酮；1HNMR(400.132MHz，DMSO)δ0.87(3H，t)，1.30-1.54(4H，m)，1.57-1.66(4H，m)，1.71-1.78(1H，m)，1.83-1.90(1H，m)，2.34-2.40(4H，m)，3.03-3.11(1H，m)，3.28-3.40(4H，m)，3.49-3.55(1H，m)，3.89-3.99(3H，m)，7.17-7.29(3H，m)，12.59(1H，s)。
实施例6
Figure G2008800223002D00551
(a)N-(1-(2-氟-5-((4-氧代-3，4，5，6，7，8-六氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酰基)哌啶-4-基)苯酰胺(19)
使用N-哌啶-4-基-苯酰胺(157mg，0.77mmol)和三乙胺(0.250ml，1.79mmol)处理2-氟-5-((4-氧代-3，4，5，6，7，8-六氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酸(9)(212mg，0.70mmol)的N，N-二甲基乙酰胺(7ml)的部分溶液。然后加入O-苯并三唑-1-基-N，N，N′，N′-四-甲基脲六氟磷酸盐(356mg，0.94mmol)，反应混合物在室温下在氮气中搅拌2小时。通过0.45μm注射器式过滤器过滤反应混合物，滤液通过制备型HPLC(Waters XBridge Prep C18 OBD柱，5μ silica，直径19mm，长度100mm)纯化，使用water(含有1％NH3)和MeCN的极性递减的混合物作为洗脱剂。合并含有所需化合物的部分，通过制备型HPLC(Waters XBridge PrepC18 OBD column，5μ silica，直径19mm，长度100mm)进一步纯化，使用水(含有0.1％TFA)和MeCN的极性递减的混合物作为洗脱剂。将含有所需化合物的部分进行离子交换层析，蒸干并冻干得到所需化合物，为白色固体(67.0mg，产率19.6％，LC-MS测定纯度100％)；1H NMR(400.132MHz，DMSO)δ1.40-1.66(6H，m)，1.76-1.83(1H，m)，1.88-1.95(1H，m)，2.35-2.40(4H，m)，2.93-3.00(1H，m)，3.12-3.21(1H，m)，3.38-3.45(1H，m)，3.93(2H，s)，4.04-4.14(1H，m)，4.43-4.50(1H，m)，7.16(1H，dd)，7.22-7.32(2H，m)，7.44-7.55(3H，m)，7.82-7.86(2H，m)，8.27-8.32(1H，m)，12.61(1H，s)；m/z(LC-MS，ESI+)，RT＝1.88(M+H 489.6)。
实施例7
Figure G2008800223002D00561
(a)4-(4-氟-3-(4-异丙氧基哌啶-1-羰基)苄基)-5，6，7，8-四氢酞嗪-1(2H)-酮(20)
在室温下，将4-异丙氧基哌啶盐酸盐(119mg，0.66mmol)和三乙胺(0.203mL，1.46mmol)的DMF(2mL)溶液一份加入到搅拌的2-氟-5-((4-氧代-3，4，5，6，7，8-六氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酸(9)(200mg，0.66mmol)、三乙胺(0.203mL，1.46mmol)和O-苯并三唑-1-基-N，N，N′，N′-四-甲基脲六氟磷酸盐(376mg，0.99mmol)的DMF(2mL)溶液中。得到的溶液搅拌4小时。然后通过制备型HPLC(Waters XBridge PrepC18 OBD柱，5μ silica，直径30mm，长度100mm)纯化粗混合物，使用水(含有1％ NH3)和MeCN的极性递减的混合物作为洗脱剂。蒸干和冻干含有所需化合物的部分，得到所需化合物，为胶状物(87mg，产率30.8％，LC-MS测定纯度98.5％)；1H NMR(399.902MHz，DMSO)δ1.08(6H，dd)，1.26-1.46(2H，m)，1.59-1.67(6H，m)，1.68-1.75(1H，m)，1.80-1.87(1H，m)，2.32-2.43(4H，m)，3.03-3.12(1H，m)，3.25-3.29(1H，m)，3.60-3.66(1H，m)，3.70(1H，quintet)，3.92(2H，s)，7.19(1H，dd)，7.23(1H，d)，7.26-7.30(1H，m)，12.61(1H，s)；m/z(LC-MS，ESI+)，RT＝1.89(M+H 428.5)。
实施例8
Figure G2008800223002D00571
(a)4-(3-(4-异丙氧基哌啶-1-羰基)苄基)-5，6，7，8-四氢酞嗪-1(2H)-酮(21)
将4-异丙氧基哌啶盐酸盐(126mg，0.70mmol)和三乙胺(0.216mL，1.55mmol)的DMF(2mL)溶液按一份加入到搅拌的3-((4-氧代-3，4，5，6，7，8-六氢酞嗪-1-基)甲基)苯甲酸(4)(200mg，0.70mmol)、三乙胺(0.216mL，1.55mmol)和O-苯并三唑-1-基-N，N，N′，N′-四-甲基脲六氟磷酸盐(400mg，1.06mmol)的DMF(2mL)溶液中。得到的溶液在室温下搅拌4小时。然后通过制备型HPLC(Waters XBridge PrepC18 OBD柱，5μ silica，直径30mm，长度100mm)纯化粗混合物，使用水(含有1％NH3)和MeCN的极性递减的混合物作为洗脱剂。蒸干并冻干含有所需化合物的部分，得到所需化合物，为胶状物(184mg，产率63.9％，LC-MS测定纯度99.2％)；1H NMR(399.902mHz，DMSO)δ1.08(6H，t)，1.26-1.46(2H，m)，1.58-1.65(6H，m)，1.68-1.88(2H，m)，2.33-2.42(4H，m)，3.04-3.27(2H，m)，3.59-3.65(1H，m)，3.71(1H，quintet)，3.95(2H，s)，7.16-7.19(1H，m)，7.25(2H，dd)，7.38(1H，t)，12.62(1H，s)；m/z(LC-MS，ESI+)，RT＝1.93(M+H 410.6)。
实施例9
抑制作用
为了评价化合物的抑制作用，使用以下测定法确定IC50值。
将从Hela细胞核提取物中分离的哺乳动物PARP用Z缓冲液(25mMHepes(Sigma)；12.5mM MgCl2(Sigma)；50mM KCl(Sigma)；1mM DTT(Sigma)；10％Glycerol(Sigma)0.001％NP-40(Sigma)；pH7.4)在96孔FlashPlates(商标)(NEN，UK)中培养，加入不同浓度的所述抑制剂。将所有化合物在DMSO中稀释，使最终分析浓度在10至0.01μM之间，DMSO的最终浓度为每孔1％。每孔的总测定体积为40μl。
在30℃下培养10分钟后，加入10μl含有NAD(5μM)、3H-NAD和30mer双链DNA-寡聚体的反应混合物引发反应。指定的阳性和阴性反应孔与化合物孔(未知)组合进行处理以计算酶活性％。然后将平板振摇2分钟，在30℃下培养45分钟。
培养后，向每孔中加入50μl 30％的乙酸终止反应。然后将平板在室温下振摇1小时。
将平板转移至TopCount NXT(商标)(Packard，UK)上进行闪烁计数。记录值为对每孔计数30秒后的每分钟的计数(cpm)。
然后使用下列方程计算每种化合物的酶活性％：
Figure G2008800223002D00581
计算IC50值(抑制50％酶活性时的浓度)，其是在不同浓度范围内测定的，通常从10μM至0.001μM。将这种IC50值作为比较值以鉴别增加的化合物功效。
所有受试化合物具有小于0.1μM的平均IC50。
本发明化合物的平均IC50结果如下所列：
 平均IC50(μM)
  5a   0.0048
  5b   0.0052
  5c   0.0041
  5d   0.0035
  5e   0.0073
 平均IC50(μM)
  5f   0.0055
  5g   0.0180
  5h   0.0058
  5i   0.003
  5j   0.003
  5k   0.005
  5l   0.006
  10a   0.0029
  10b   0.0073
  10c   0.0027
  10d   0.0033
  10e   0.0053
  10f   0.0032
  10g   0.0022
  10h   0.0046
  10i   0.0058
  10j   0.0042
  10k   0.0059
  10l   0.0054
  10m   0.052
  10o   0.004
  10q   0.0051
 平均IC50(μM)
  10r   0.002
  10s   0.002
  10t   0.003
  10u   0.004
  10v   0.004
  10x   0.004
  10z   0.003
  10aa   0.004
  10ab   0.004
  10ac   0.006
  10ad   0.003
  10ae   0.006
  10af   0.003
  14   0.005
  17a   0.003
  17b   0.002
  17c   0.007
  17d   0.006
  17e   0.007
  17f   0.004
  17g   0.009
  17h   0.003
 平均IC50(μM)
  18a   0.005
  18b   0.005
  18c   0.006
  18d   0.002
  18e   0.003
  19   0.005
  20   0.003
  21   0.008
增效因子
化合物的增效因子(PF50)计算为对照细胞生长的IC50除以加入PARP抑制剂后细胞生长的IC50的比值。对照组细胞和化合物处理的细胞的生长抑制曲线都是在烷化剂甲磺酸甲酯(MMS)的存在下测定的。使用固定浓度为0.2微摩尔的受试化合物。MMS的浓度范围为0-10μg/ml。
使用磺基罗丹明B(SRB)测定法(Skehan，P.，等，(1990)New colorimetriccytotoxicity assay for anticancer-drug screening.J.Natl.Cancer Inst.82，1107-1112.)评价细胞生长。将2,000个HeLa细胞以100μl的体积接种于平底96孔微量滴定板的每个孔中，在37℃下培养6小时。使用单独的培养液或含有最终浓度为30nM或200nM的PARP抑制剂的培养液更换细胞。使细胞再生长1小时，然后向未处理的细胞或用PARP抑制剂处理的细胞中加入各种浓度的MMS(通常为0、1、2、3、5、7和10μg/ml)。使用单独的PARP抑制剂处理的细胞用于评价PARP抑制剂的生长抑制作用。
将细胞再放置16小时，然后更换培养液，并使细胞在37℃再生长72小时。然后移去培养液，用100μl冰冷的10％(w/v)三氯乙酸固定细胞。将平板在4℃下培养20分钟，然后用水洗涤四次。然后用100μl 0.4％(w/v)SRB的1％乙酸溶液染色每孔中的细胞20分钟，然后用1％乙酸洗涤四次。然后使平孔板在室温下干燥2小时。向每孔中加入100μl的10mM Tris碱溶解被染色细胞中的染料。轻轻振摇平板，在室温下放置30分钟，然后在564nM下在Microquant微量滴定板读数器上测量光密度。
下列化合物在200nM下具有至少2的平均PF50：5a、5c-f、5h、5k、5l、10a-j、10l-10m、10o、10r、10ab-10ae。
下列化合物在30nM下具有至少2的平均PF50：5i-5k、10o、10q、10s-x、10z、10aa、14、17c、17d、17f、18a-e、19、20、21。
溶解度测定
可以用于评价本发明化合物溶解度的典型测定法如下所示。在水和pH7.4的磷酸缓冲盐溶液(pbs)中评价化合物的溶解度。在室温下使样品在溶剂中(振摇)平衡20小时。在该阶段后，目测样品以确定未溶解的固体存在或不存在。必要时，离心或过滤样品以除去不溶物，分析溶液以测定DS的溶解度，使用DMSO将水和DMSO样品稀释至相似的浓度。将通过HPLC(使用二极管阵列检测器)得到的样品峰面积与由DMSO溶液(稀释到与样品相同的浓度)得到的峰面积进行比较，根据用于初始溶解的样品的重量进行定量。假定样品在用于测试的水平下完全溶解于DMSO中。
通过比较峰面积的比例，并且已知初始样品的浓度，可以计算溶解度。
样品的制备
在4-ml玻璃小瓶中精密称取约1mg的样品，通过移液管向其中加入1.0ml的水、水缓冲剂或DMSO。每个小瓶超声2分钟以帮助固体溶解。在室温下保持样品20小时，使用定轨振荡器振摇。在该阶段后检查小瓶以确定未溶解的固体存在或不存在。必要时，离心或通过0.45μm过滤器过滤样品，以除去不溶物，使用DMSO合适地稀释所有样品后，分析滤液以测定溶液中化合物的浓度。使用下文所示方法将20μl注入到HPLC中，平行两份注射所有样品。使用该方法可以测定的最大溶解度是1.0mg/ml，溶解度为重量除以所用溶剂的体积。
分析技术
使用Waters Micromass ZQ仪(或等同物)将样品进行LC/MS，试验参数通常如下所示。
Waters Micromass ZQ阳离子模式。
从m/z 100至800进行扫描
流动相A-0.1％甲酸的水溶液
流动相B-0.1％甲酸的乙腈溶液
柱-Jones Chromatography Genesis 4μC18柱，4.6×50mm
流量2.0ml/min
注射体积30μl注入到20μl环中
梯度-从95％A/5％B起始，4分钟后升至95％B，保持4分钟，然后回到起始条件(为了获得更好的峰分离，如果必要，可以进行调整)
PDA检测从210至400nm进行扫描
样品的定量
含有水稀释剂的样品瓶的初始检查显示化合物在该浓度下在该缓冲剂中是否能够溶解。如果其不能溶解，将表现在通过HPLC/MS得到的溶液的浓度上。如果溶液是澄清的，则水溶剂中的浓度与DMSO中的浓度是相似的，除非发生化合物降解。这在色谱图上应该是可见的。
假定样品在DMSO中将完全溶解，因此由该样品得到的峰尺寸会表现100％的溶解度。假定所有样品的稀释是相同的，则溶解度(mg/ml)＝(pbs溶液的面积/DMSO溶液的面积)×(DMSO溶液/稀释液中的初始重量)。
多药耐药细胞中的活性测定
该试验测量受试化合物在KBA1细胞中的作用，KBA1细胞是子宫颈来源的多药耐药性Hela细胞，其表达MDR1(P-糖蛋白，其为负责减少药物蓄积的ATP依赖性药物流出泵)，并且对依托泊苷高度耐药。在该测定中，这些细胞与KB31非-MDR1表达细胞配对。因此，该测定通过与不表达MDR1的KB31细胞相比，测定在KBA1细胞中MDR1对受试化合物效力的作用。然后维拉帕米用于在KBA1细胞中逆转MDR1介导的任何作用。
方法
将100μl的KBA1 PgP表达细胞和/或KB31配对的非-Pgp表达细胞以每孔2×104/ml播种于96孔组织培养平板上，使其附着4-6小时，使最终浓度为每孔2000细胞。向孔中加入10μl维拉帕米的细胞培养液(使最终浓度为10μM)或10μl的正常培养液，然后在37℃培养30分钟。
然后加入10μl的受试化合物使最终浓度为50、40、30、20、10和5μM。使用依托泊苷(VP16)作为阳性对照。处理KBA1细胞使最终浓度为2、1、0.5、0.25、0.1、0.05μg/ml，处理KB31细胞使最终浓度为0.25、0.1、0.05、0.025、0.01、0.005μg/ml，以确保对两种细胞系充足的细胞杀死。使用培养液和等量的DMSO处理对照组细胞，其最终浓度不超过1％。得到的平板在37℃培养72小时。
在培养结束时，使用PBS洗涤细胞，然后用SRB染色(磺基罗丹明B)给出总的蛋白水平，在UV/vis读板仪上读数。该数据可以随后用于计算受试化合物在KBA1和KB31细胞系中的IC50，比较这些值以显示MDR1对受试化合物的作用。

Claims (21)

1.一种式(I)的化合物：
Figure F2008800223002C00011
其中：
R表示稠合环己烯环上一个或多个任选的取代基；
X可以是NRX或CRXRY；
如果X＝NRX，则n是1或2，如果X＝CRXRY，则n是1；
如果X＝NRX，则RX选自H、任选取代的C1-20烷基、任选取代的C5-20芳基、任选取代的C3-20杂环基、任选取代的酰氨基、任选取代的硫代酰氨基、任选取代的酯、任选取代的酰基和任选取代的磺酰基；
如果X＝CRXRY，则RX选自H、任选取代的C1-20烷基、任选取代的C5-20芳基、任选取代的C3-20杂环基、任选取代的酰氨基、任选取代的硫代酰氨基、任选取代的磺酰氨基、任选取代的醚、任选取代的酯、任选取代的酰基、任选取代的酰基氨基和任选取代的磺酰基，RY选自H、羟基、任选取代的氨基，或者RX和RY可以一起形成任选取代的螺-C3-7环烷基或杂环基；
RC1和RC2都是氢，或者当X是CRXRY时，RC1、RC2、RX和RY与它们所连接的碳原子一起可以形成任选取代的稠合芳环；和
R1选自H和卤素。
2.根据权利要求1所述的化合物，其为式Id化合物：
Figure F2008800223002C00021
3.根据权利要求1或权利要求2所述的化合物，其中R选自卤素、硝基、羟基、醚、巯基、硫醚、氨基、C1-7烷基、C3-20杂环基和C5-20芳基。
4.根据权利要求1至3任意一项所述的化合物，其中R1选自H，Cl和F。
5.根据权利要求1至4任意一项所述的化合物，其中RC1和RC2都是氢。
6.根据权利要求1至5任意一项所述的化合物，其中n是2，X是NRX，RX选自：H、任选取代的C1-20烷基、任选取代的C5-20芳基、任选取代的酯基、任选取代的酰基、任选取代的酰氨基、任选取代的硫代酰氨基和任选取代的磺酰基。
7.根据权利要求1至5任意一项所述的化合物，其中n是1，X是NRX，RX选自：H、任选取代的C1-20烷基、任选取代的C5-20芳基、任选取代的酰基和任选取代的磺酰基。
8.根据权利要求1至5任意一项所述的化合物，其中n是1，X是CRXRY，RY是H，RX选自：H、任选取代的C3-20杂环基、任选取代的氨基、任选取代的酯和任选取代的磺酰氨基。
9.一种药物组合物，包含根据权利要求1至8任意一项的化合物和药学可接受的载体或稀释剂。
10.用于人体或动物体治疗方法中的根据权利要求1至8任意一项所述的化合物。
11.根据权利要求1至8任意一项所述的化合物在制备用于抑制PARP活性的药物中的用途。
12.根据权利要求1至8任意一项所述的化合物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗：血管疾病、脓毒性休克、缺血性损伤、神经毒性、出血性休克、病毒感染或者通过抑制PARP活性而改善的疾病。
13.根据权利要求1至8任意一项所述的化合物在制备药物中的用途，所述药物用作癌症治疗的辅助剂或者用于增强电离放射或化学治疗剂对肿瘤细胞的治疗作用。
14.根据权利要求1至8所述的化合物在制备用于在个体中治疗癌症的药物中的用途，其中所述癌症是HR依赖性DNA DSB修复途径缺陷的。
15.根据权利要求14所述的用途，其中所述癌症包含一种或多种相对于正常细胞而言通过HR修复DNA DSB的能力降低或丧失的癌细胞。
16.根据权利要求15所述的用途，其中所述癌细胞具有BRCA1或BRCA2缺陷的表型。
17.根据权利要求16所述的用途，其中所述癌细胞是BRCA1或BRCA2缺陷的。
18.根据权利要求14至17任意一项所述的用途，其中所述个体就编码HR依赖性DNA DSB修复途径组分的基因的突变而言是杂合的。
19.根据权利要求18所述的用途，其中所述个体就BRCA1和/或BRCA2中的突变而言是杂合的。
20.根据权利要求14至19任意一项所述的用途，其中所述癌症是乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌或前列腺癌。
21.根据权利要求14至20任意一项所述的用途，其中所述治疗进一步包括施用电离放射或化学治疗剂。
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