KR101153759B1 - 고밀도 리포 단백질 중의 콜레스테롤의 측정 방법 - Google Patents

고밀도 리포 단백질 중의 콜레스테롤의 측정 방법 Download PDF

Info

Publication number
KR101153759B1
KR101153759B1 KR1020077024676A KR20077024676A KR101153759B1 KR 101153759 B1 KR101153759 B1 KR 101153759B1 KR 1020077024676 A KR1020077024676 A KR 1020077024676A KR 20077024676 A KR20077024676 A KR 20077024676A KR 101153759 B1 KR101153759 B1 KR 101153759B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
reagent
cholesterol
group
measuring
kit
Prior art date
Application number
KR1020077024676A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20080012854A (ko
Inventor
유키 가타야마
마유미 후지나카
Original Assignee
교와 메덱스 가부시키가이샤
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 교와 메덱스 가부시키가이샤 filed Critical 교와 메덱스 가부시키가이샤
Publication of KR20080012854A publication Critical patent/KR20080012854A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101153759B1 publication Critical patent/KR101153759B1/ko

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/60—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving cholesterol
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
    • C12Q1/44—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving esterase
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/92—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving lipids, e.g. cholesterol, lipoproteins, or their receptors

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

간편하고, 또한, 정확한 측정을 가능하게 하는 HDL 콜레스테롤의 측정 방법, 측정용 시약 및 측정용 키트를 제공한다. 검체와, i) 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소 및 콜레스테롤 산화 효소, 또는, ⅱ) 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소, 산화형 보효소 및 콜레스테롤 탈수소 효소를, 아민 또는 암모늄염의 구조를 갖는 특정의 질소 함유 계면 활성제 및 폴리음이온을 함유하는 수성 매체 중에서 반응시켜, 생성된 과산화수소 또는 환원형 보효소를 측정하는 것을 특징으로 하는 검체 중의 고밀도 리포 단백질 중의 콜레스테롤의 측정 방법.

Description

고밀도 리포 단백질 중의 콜레스테롤의 측정 방법{METHOD FOR DETERMINATION OF CHOLESTEROL IN HIGH-DENSITY LIPOPROTEIN}
본 발명은, 검체 중의 고밀도 리포 단백질 중의 콜레스테롤의 측정 방법, 측정용 시약 및 측정용 키트에 관한 것이다.
생체 중 리포 단백질은, 그 비중에 의해 고밀도 리포 단백질 (이하, HDL 로 약기 한다), 저밀도 리포 단백질 (이하, LDL 로 약기한다), 초저밀도 리포 단백질 (이하, VLDL 로 약기한다), 카이로 미크론 (이하, CM 으로 약기한다) 으로 분류되어 있고, 각각 주로 아포 단백질의 종류가 상이함에 따라 생체 중에서의 작용이 크게 상이하고, 지질 조성도 다양하다. 그 중에서, HDL 은, 동맥벽을 포함한 각 조직으로부터 콜레스테롤을 받아들이기 때문에 세포 내에 축적된 콜레스테롤의 제거 작용에 관계하고, 관동맥 경화증을 비롯한 각종 동맥 경화증의 위험 예방 인자이며, 그 혈장 레벨은 동맥 경화성 질환의 발증 예지의 유용한 지침이 되는 것이 알려져 있다.
종래의 HDL 중의 콜레스테롤 (이하, HDL 콜레스테롤로 약기한다) 의 측정법은, 초원심법, 면역 화학적 방법, 전기 영동법, 침전법 등에 의한 분획 조작과 콜레스테롤 정량 조작의 2 단계로 이루어진다. 그러나, 분획 조작은, 조작이 번 잡하고, 장시간을 필요로 하는 것이고, 또, 안전성의 점에서도 문제가 있었다. 따라서, 이들 분리 조작을 수반하는 측정법은 매우 효율이 나빠, 실용화에 적합하지 않는 방법이었다.
최근, 상기의 문제를 해결하기 위해서, 여러 가지의 측정법이 보고되고 있다. 예를 들어, 혈청 또는 혈장을, 콜레스테롤 에스테라아제, 콜레스테롤 옥시다아제, 및, 담즙산염 또는 담즙산 유도체 또는 디옥틸술포숙시네이트를 함유하는 완충액 중에서 당해 효소와 반응시켜, VLDL 및 LDL 중의 콜레스테롤을 HDL 콜레스테롤에 먼저 반응시켜, 생성된 과산화수소를 측정한 후, 비이온계의 폴리옥시에틸렌옥시드기 함유 계면 활성제를 반응액에 첨가하고, HDL 콜레스테롤과 당해 효소를 반응시켜, HDL 콜레스테롤을 특이적으로 분별 정량하는 방법 (특허 문헌 1 참조), 혈청을, 특정의 pH 및 특정의 온도하, 췌장 유래의 콜레스테롤 에스테라아제, 콜레스테롤옥시다아제, 담즙산군의 계면 활성제, 및, 비이온계 계면 활성제를 함유하는 완충액 중에서 당해 효소와 반응시킴으로써 HDL 콜레스테롤을 측정하는 방법 (특허 문헌 2 참조) 이 알려져 있다. 특허 문헌 2 에 기재된 측정법에서는, 먼저, LDL 콜레스테롤과 당해 효소의 반응이 진행되고, 이어서, HDL 콜레스테롤과 당해 효소의 반응이 진행되어, HDL 콜레스테롤을 측정할 수 있게 된다. 그러나, 이들의 측정법은, 측정에 장시간을 필요로 하고, 또, 반드시, HDL 콜레스테롤에 특이적인 측정법은 아니었다.
HDL 이외의 리포 단백질을 응집시켜 HDL 콜레스테롤을 측정하는 방법으로는, 예를 들어 덱스트란 황산 등의 HDL 이외의 리포 단백질을 응집시키는 시약, 2 가의 금속염, 및, 화학적으로 수식된 효소를 사용하는 측정법 (특허 문헌 3 참조), 폴리 음이온 등의 HDL 이외의 리포 단백질과 복합체를 형성하는 시약과, 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 축합물 등의 리포 단백질을 용해하지 않는 계면 활성제를 사용하는 측정법 (특허 문헌 4 참조), 덱스트란 황산 등의 폴리음이온, 2 가의 금속염, 특정의 비이온성 계면 활성제 및 시료 유래의 알부민과는 다른 알부민을 사용하는 측정법 (특허 문헌 5 참조), 혈청 또는 혈장을, 리포 단백질 분획제 (덱스트란 황산 등의 폴리음이온과 마그네슘 이온 등의 2 가 양이온의 조합) 를 함유하는 용액으로 처리하고, 얻어진 혼합액을 고체 및 액체의 분리 처리하지 않고, 음이온성 계면 활성제 (알킬술폰산 또는 담즙산 혹은 그 유도체) 의 존재 하에, 콜레스테롤 에스테라아제 및 콜레스테롤 옥시다아제와 반응시켜, 생성된 과산화수소를 측정하는 것을 특징으로 하는 혈청 또는 혈장 중의 HDL 콜레스테롤을 측정하는 방법 (특허 문헌 6 참조) 등이 알려져 있다.
그러나, 이들의 HDL 이외의 리포 단백질을 응집시키는 HDL 콜레스테롤 측정법에 있어서는, 종래의 기준법과 양호한 상관성이 있지만, 반응에서 생성되는 응집물에 의한 탁함에서 기인하는 부정확성, 반응 셀의 알칼리 세정시에, 반응액 중의 금속염과의 반응에서 생성되는 금속 수산화물의 석출에 의한 자동 분석 장치에 대한 과도한 부하 등의 문제가 있다.
HDL 이외의 리포 단백질을 응집시키지 않고 HDL 콜레스테롤을 측정하는 방법으로는, 예를 들어 생체 시료와, 췌장 유래의 콜레스테롤 에스테라아제 및 콜레스테롤 옥시다아제를, 담즙산 혹은 그 염 및 알부민 존재 하에 반응시켜, 당해 효소 반응에 의해 소비 또는 생성되는 화합물을 측정하는 것에 의한 생체 시료 중의 HDL 콜레스테롤의 측정 방법 (특허 문헌 7 참조), HDL 분획에 대해서 반응 선택성을 가지는 HLB 치가 16 이상인 비이온성 계면 활성제의 존재 하에, 검체와, HDL 분획에 우선적으로 작용하는 리포프로테인리파아제 및/또는 콜레스테롤 에스테라아제 그리고 콜레스테롤 산화 효소를 반응시켜, 검체 중의 HDL 콜레스테롤을 측정하는 방법 (특허 문헌 8 참조) 등이 알려져 있다. 또, 아실 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르에 의해 HDL 이외의 리포 단백질 중의 콜레스테롤을 우선적으로 과산화수소로 변환시키고, 생성된 과산화수소를 소거한 후, 폴리옥시에틸렌알킬 에테르의 첨가에 의해, HDL 콜레스테롤을 효소적으로 측정하는 방법 (특허 문헌 9 참조) 도 알려져 있다.
그러나, 이들의 HDL 이외의 리포 단백질을 응집시키지 않는 HDL 콜레스테롤의 측정법에 있어서는, HDL 이외의 리포 단백질 중 콜레스테롤의 불완전한 소거나, HDL 이외의 리포 단백질 중의 콜레스테롤에 대한 비특이 반응에서 기인하는 측정치의 부정확성이 문제가 되는 경우가 있다.
또, HDL 이외의 리포 단백질을 응집시키지 않는 HDL 콜레스테롤의 측정법으로서, 검체와, i) 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소 및 콜레스테롤 산화 효소, 또는, ⅱ) 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소, 산화형 보효소 및 콜레스테롤 탈수소 효소를, 비이온성 계면 활성제, 폴리음이온 및 알부민을 함유하는 수성 매체 중에서 반응시켜, 생성된 과산화수소 또는 환원형 보효소를 측정하는 것을 특징으로 하는 검체 중의 HDL 콜레스테롤의 측정 방법 (특허 문헌 10 참조) 이나, 검체 와, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소 및 콜레스테롤 산화 효소, 또는, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소, 산화형 보효소 및 콜레스테롤 탈수소 효소를, 담즙산 유도체를 함유하는 수성 매체 중에서 반응시켜, 생성된 과산화수소 또는 환원형 보효소를 측정하는 것을 특징으로 하는 HDL 콜레스테롤의 측정 방법 (특허 문헌 11 참조) 이 알려져 있다.
특허 문헌 1 : 일본 공개특허공보 소62-69999호
특허 문헌 2 : 일본 공개특허공보 소63-126498호
특허 문헌 3 : 일본 공개특허공보 평8-131197호
특허 문헌 4 : 일본 공개특허공보 평8-201393호
특허 문헌 5 : 일본 공개특허공보 평9-285298호
특허 문헌 6 : 일본 공개특허공보 평8-116996호
특허 문헌 7 : 국제공개공보 제97/40376호 팜플렛
특허 문헌 8 : 국제공개공보 제00/52480호 팜플렛
특허 문헌 9 : 일본 공개특허공보 평9-299호
특허 문헌 10 : 국제공개공보 제2004/035816호 팜플렛
특허 문헌 11 : 국제공개공보 제2004/035817호 팜플렛
발명의 개시
발명이 해결하고자 하는 과제
본 발명의 목적은, 간편하고, 또한, 정확한 측정을 할 수 있는 HDL 콜레스테롤의 측정 방법, 측정용 시약 및 측정용 키트를 제공하는 것에 있다.
과제를 해결하기 위한 수단
본 발명의 발명자는, 상기 과제를 해결하기 위하여 예의 검토하여, 아민 또는 암모늄염의 구조를 갖는 특정의 질소 함유 계면 활성제 및 폴리음이온의 공존 하, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소 및 콜레스테롤 산화 효소 혹은 콜레스테롤 탈수소 효소가 HDL 에 특이적으로 작용한다는 지견을 알아내어, 본 발명을 완성시켰다.
즉, 본 발명은, 하기 (1)～(13) 에 관한 것이다.
(1) 검체와, i) 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소 및 콜레스테롤 산화 효소, 또는, ⅱ) 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소, 산화형 보효소 및 콜레스테롤 탈수소 효소를, 일반식 (I)
[화학식 1]
Figure 112007076761873-pct00001
(식 중, R1 은, 직사슬 또는 분지형의 탄소수 6～30 의 알킬기 또는 알케닐기를 나타내고, R2 는, 직사슬 또는 분지형의 탄소수 1～30 의 알킬기 또는 탄소수 2～30 의 알케닐기를 나타내고, R3 및 R4 는, 동일 또는 상이하며, 각각 직사슬 또는 분지형의 탄소수 1～6 의 알킬기 또는 탄소수 2～6 의 알케닐기를 나타내고, X 는 음이온을 나타낸다) 로 표시되는 물질, 및, 일반식 (Ⅱ)
[화학식 2]
Figure 112007076761873-pct00002
(식 중, R5 는, 직사슬 또는 분지형의 탄소수 6～30 의 알킬기 또는 알케닐기를 나타내고, R6 및 R7 은, 동일 또는 상이하며, 각각 수소 원자, 직사슬 또는 분지형의 탄소수 1～30 의 알킬기 또는 탄소수 2～30 의 알케닐기를 나타낸다) 로 표시되는 물질로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 물질, 그리고, 폴리음이온을 함유하는 수성 매체 중에서 반응시켜, 생성된 과산화수소 또는 환원형 보효소를 측정하는 것을 특징으로 하는 검체 중의 고밀도 리포 단백질 중의 콜레스테롤의 측정 방법.
(2) 수성 매체가, 추가로 알부민, 폴리옥시에틸렌알킬아민 및 폴리옥시에틸렌알케닐아민으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 물질을 함유하는 상기 (1) 기재의 방법.
(3) 폴리음이온이 덱스트란 황산 또는 그 염인 상기 (1) 또는 (2) 기재의 방법.
(4) 일반식 (I)
[화학식 3]
Figure 112007076761873-pct00003
(식 중, R1 은, 직사슬 또는 분지형의 탄소수 6～30 의 알킬기 또는 알케닐기를 나타내고, R2 는, 직사슬 또는 분지형의 탄소수 1～30 의 알킬기 또는 탄소수 2～30 의 알케닐기를 나타내고, R3 및 R4 는, 동일 또는 상이하며, 각각 직사슬 또는 분지형의 탄소수 1～6 의 알킬기 또는 탄소수 2～6 의 알케닐기를 나타내고, X 는 음이온을 나타낸다) 로 표시되는 물질, 및, 일반식 (Ⅱ)
[화학식 4]
Figure 112007076761873-pct00004
(식 중, R5 는, 직사슬 또는 분지형의 탄소수 6～30 의 알킬기 또는 알케닐기를 나타내고, R6 및 R7 은, 동일 또는 상이하며, 각각 수소 원자, 직사슬 또는 분지형의 탄소수 1～30 의 알킬기 또는 탄소수 2～30 의 알케닐기를 나타낸다) 로 표시되는 물질로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 물질, 폴리음이온, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소, 콜레스테롤 산화 효소, 및, 과산화수소 측정용 시약을 함유하는 것을 특징으로 하는 고밀도 리포 단백질 중의 콜레스테롤 측정용 시약.
(5) 일반식 (I)
[화학식 5]
Figure 112007076761873-pct00005
(식 중, R1 은, 직사슬 또는 분지형의 탄소수 6～30 의 알킬기 또는 알케닐기를 나타내고, R2 는, 직사슬 또는 분지형의 탄소수 1～30 의 알킬기 또는 탄소수 2～30 의 알케닐기를 나타내고, R3 및 R4 는, 동일 또는 상이하며, 각각 직사슬 또는 분지형의 탄소수 1～6 의 알킬기 또는 탄소수 2～6 의 알케닐기를 나타내고, X 는 음이온을 나타낸다) 로 표시되는 물질, 및, 일반식 (Ⅱ)
[화학식 6]
Figure 112007076761873-pct00006
(식 중, R5 는, 직사슬 또는 분지형의 탄소수 6～30 의 알킬기 또는 알케닐기를 나타내고, R6 및 R7 은, 동일 또는 상이하며, 각각 수소 원자, 직사슬 또는 분지형의 탄소수 1～30 의 알킬기 또는 탄소수 2～30 의 알케닐기를 나타낸다) 로 표시되는 물질로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 물질, 폴리음이온, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소, 콜레스테롤 탈수소 효소, 및, 산화형 보효소를 함유하는 것을 특징으로 하는 고밀도 리포 단백질 중의 콜레스테롤 측정용 시약.
(6) 추가로 환원형 보효소 측정용 시약을 함유하는 상기 (5) 기재의 시약.
(7) 추가로 알부민, 폴리옥시에틸렌알킬아민 및 폴리옥시에틸렌알케닐아민으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 물질을 함유하는 상기 (4)～(6) 중 어느 하나에 기재된 시약.
(8) 폴리음이온이 덱스트란 황산 또는 그 염인 상기 (4)～(7) 중 어느 하나에 기재된 시약.
(9) 제 1 시약 및 제 2 시약을 함유하는 고밀도 리포 단백질 중의 콜레스테롤 측정용 키트로서, 일반식 (I)
[화학식 7]
Figure 112007076761873-pct00007
(식 중, R1 은, 직사슬 또는 분지형의 탄소수 6～30 의 알킬기 또는 알케닐기를 나타내고, R2 는, 직사슬 또는 분지형의 탄소수 1～30 의 알킬기 또는 탄소수 2～30 의 알케닐기를 나타내고, R3 및 R4 는, 동일 또는 상이하며, 각각 직사슬 또는 분지형의 탄소수 1～6 의 알킬기 또는 탄소수 2～6 의 알케닐기를 나타내고, X 는 음이온을 나타낸다) 로 표시되는 물질, 및, 일반식 (Ⅱ)
[화학식 8]
Figure 112007076761873-pct00008
(식 중, R5 는, 직사슬 또는 분지형의 탄소수 6～30 의 알킬기 또는 알케닐기를 나타내고, R6 및 R7 은, 동일 또는 상이하며, 각각 수소 원자, 직사슬 또는 분지형의 탄소수 1～30 의 알킬기 또는 탄소수 2～30 의 알케닐기를 나타낸다) 로 표시되는 물질로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 물질, 및, 폴리음이온을 제 1 시약에 함유하고, 콜레스테롤 산화 효소를 제 2 시약에 함유하며, 과산화수소 측정용 시약을 제 1 시약, 제 2 시약 중 어느 하나 또는 양방에 함유하고, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소를 제 1 시약, 제 2 시약 중 어느 하나 또는 양방에 함유하는 것을 특징으로 하는 키트.
(10) 제 1 시약 및 제 2 시약을 함유하는 고밀도 리포 단백질 중의 콜레스테롤 측정용 키트로서, 일반식 (I)
[화학식 9]
Figure 112007076761873-pct00009
(식 중, R1 은, 직사슬 또는 분지형의 탄소수 6～30 의 알킬기 또는 알케닐기를 나타내고, R2 는, 직사슬 또는 분지형의 탄소수 1～30 의 알킬기, 또는, 탄소수 2～30 의 알케닐기를 나타내고, R3 및 R4 는, 동일 또는 상이하며, 각각 직사슬 또는 분지형의 탄소수 1～6 의 알킬기 또는 탄소수 2～6 의 알케닐기를 나타내고, X 는 음이온을 나타낸다) 로 표시되는 물질, 및, 일반식 (Ⅱ)
[화학식 10]
Figure 112007076761873-pct00010
(식 중, R5 는, 직사슬 또는 분지형의 탄소수 6～30 의 알킬기 또는 알케닐기를 나타내고, R6 및 R7 은, 동일 또는 상이하며, 각각 수소 원자, 직사슬 또는 분지형의 탄소수 1～30 의 알킬기 또는 탄소수 2～30 의 알케닐기를 나타낸다) 로 표시되는 물질로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 물질, 및, 폴리음이온을 제 1 시약에 함유하고, 콜레스테롤 탈수소 효소를 제 2 시약에 함유하며, 산화형 보효소를 제 1 시약, 제 2 시약 중 어느 하나 또는 양방에 함유하고, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소를 제 1 시약, 제 2 시약 중 어느 하나 또는 양방에 함유하는 것을 특징으로 하는 키트.
(11) 추가로 환원형 보효소 측정용 시약을, 제 1 시약, 제 2 시약 중 어느 하나 또는 양방에 함유하는 상기 (10) 기재의 키트.
(12) 추가로 알부민, 폴리옥시에틸렌알킬아민 및 폴리옥시에틸렌알케닐아민으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 물질을 제 1 시약, 제 2 시약 중 어느 하나 또는 양방에 함유하는 상기 (9)～(11) 중 어느 하나에 기재된 키트.
(13) 폴리음이온이 덱스트란 황산 또는 그 염인 상기 (9)～(12) 중 어느 하나에 기재된 키트.
발명의 효과
본 발명에 의해, 간편하고, 또한, 정확한 HDL 콜레스테롤의 측정 방법, 측정용 시약, 및, 측정용 키트가 제공된다.
발명을 실시하기 위한 최선의 형태
본 발명의 HDL 콜레스테롤의 측정 방법은, HDL 이외의 리포 단백질 중의 콜레스테롤을 소거하지 않고, 또한, HDL 이외의 리포 단백질 중의 콜레스테롤을 응집시키지 않고, HDL 콜레스테롤을 측정하는 방법이다.
본 발명의 측정 방법에 있어서 사용되는 검체로는, 예를 들어 전혈, 혈장, 혈청, 골수액, 타액, 양수, 뇨, 땀, 췌액 등을 들 수 있지만, 혈장 및 혈청이 바람직하다.
본 발명에 있어서의 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소로는, 콜레스테롤 에스테르를 가수 분해하는 능력을 갖는 효소이면 특별히 한정은 없고, 예를 들어 동물, 식물 또는 미생물 유래의 콜레스테롤 에스테라아제, 리포프로테인 리파아제 외, 유전자 공학적인 수법에 의해 제조되는 콜레스테롤 에스테라아제, 리포프로테인 리파아제 등도 사용할 수 있다.
콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소로는, 비수식(修飾)의 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소도, 화학적으로 수식된 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소도 사용할 수 있다. 또, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소로는 시판품을 사용할 수도 있다.
시판되고 있는 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소로는, 콜레스테롤 에스테라아제 "Amano" 2(CHE2 ; 아마노 엔자임사 제조), 콜레스테롤 에스테라아제 "Amano" 3(CHE3 ; 아마노 엔자임사 제조), 리포프로테인 리파아제 (LPL311 ; 토요 방제사 제조), 리포프로테인 리파아제 "Amano" 3(LPL3 ; 아마노 엔자임사 제조), 43kDa 에스테라아제 (아마노 엔자임사 제조), 40kDa 에스테라아제 (아마노 엔자임사 제조), EST "Amano" 2(아마노 엔자임사 제조), 콜레스테롤 에스테라아제 [COE313 (화학적으로 수식된 콜레스테롤 에스테라아제) ; 토요 방적사 제조] 등을 들 수 있다. 또, 본 발명에 있어서는, 2 종류 이상의 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소를 조합하여 사용할 수도 있다.
콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소의 화학 수식에 있어서 당해 효소를 수식하는 기 (화학 수식기) 로는, 예를 들어 폴리에틸렌글리콜을 주성분으로 하는 기, 폴리프로필렌 글리콜을 주성분으로 하는 기, 폴리프로필렌 글리콜과 폴리에틸렌글리콜의 공중합체를 갖는 기, 수용성 다당류를 함유하는 기, 술포프로필기, 술포부틸기, 폴리우레탄기, 킬레이트 기능을 갖는 기 등을 들 수 있지만, 폴리에틸렌글리콜을 주성분으로 하는 기가 바람직하다. 수용성 다당류로는, 예를 들어 덱스트란, 풀루란, 가용성 전분 등을 들 수 있다.
콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소를 화학적으로 수식하기 위한 시약 (화학 수식제) 으로는, 상기의 화학 수식기와, 효소의 아미노기, 카르복실기, 술프히드릴기 등과 반응할 수 있는 관능기 또는 구조를 겸비하는 화합물 등을 들 수 있다. 효소 중의 아미노기와 반응할 수 있는 관능기 또는 구조로는, 예를 들어 카르복실기, 활성 에스테르기 (N-히드록시숙신이미드기 등), 산무수물, 산염화물, 알데히드, 에폭사이드기, 1,3-프로판술톤, 1,4-부탄술톤 등을 들 수 있다. 효소 중의 카르복실기와 반응할 수 있는 관능기 또는 구조로는, 예를 들어 아미노기 등을 들 수 있다. 효소 중의 술프히드릴기와 반응성이 있는 기 또는 구조로는, 예를 들어 말레이미드기, 디술파이드, α-할로 에스테르 (α-요오드 에스테르 등) 등을 들 수 있다.
화학 수식제로서, 시판품을 사용할 수도 있다. 시판되고 있는 화학 수식제로는, 폴리에틸렌글리콜을 주성분으로 하는 기와 N-히드록시숙신이미드기를 갖는 산브라이트 VFM-4101, 산브라이트 ME-050AS, 산브라이트 DE-030AS (모두 닛폰 유지사 제조), 폴리알킬렌글리콜을 주성분으로 하는 기와 산무수물 구조를 갖는 산브라이트 AKM 시리즈 (예를 들어, 산브라이트 AKM-1510 등), 산브라이트 ADM 시리즈, 산브라이트 ACM 시리즈 (모두 닛폰 유지사 제조), 폴리에틸렌글리콜을 주성분으로 하는 기와 에폭사이드기를 갖는 EPOX-3400, M-EPOX-5000 (모두 SheawaterPolymers 사 제조), 킬레이트 기능을 갖는 기와 산무수물 구조를 갖는 디에틸렌트리아민-N,N,N', N", N"-펜타 무수 2 아세트산 (DTPA anhydride ; 도진도(同仁) 화학사 제조) 등을 들 수 있다.
콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소의 화학 수식은, 예를 들어 이하의 방법으로 실시할 수 있지만, 본 방법에 한정되는 것은 아니다. 먼저, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소를 pH 8.0 이상의 완충액 (예를 들어 HEPES 완충액) 에 용해하고, 0～55℃ 에서 0.01～500 배 몰량의 화학 수식제를 첨가하여, 5 분간～5 시간 교반한다. 실제의 효소 반응에 있어서는, 화학적으로 수식된 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소로서, 이 반응액 그 자체뿐만 아니라, 필요에 따라 한외 여과막 등에 의해 미반응의 화학 수식제 등을 제거한 것도, 사용할 수도 있다.
본 반응의 방법에 사용되는 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소의 농도로는, 본 발명의 HDL 콜레스테롤의 측정을 가능하게 하는 농도이면 특별히 제한은 없지만, 반응액 중에서 0.01～400U/mL 의 농도인 것이 바람직하고, 0.02～200U/mL 인 것이 보다 바람직하다.
본 발명에 있어서의 콜레스테롤 산화 효소로는, 콜레스테롤을 산화시켜 과산화수소를 생성하는 능력을 갖는 효소이면 특별히 제한은 없고, 예를 들어 동물, 식물 또는 미생물 유래의 콜레스테롤 옥시다아제 외, 유전자 공학적인 수법에 의해 제조되는 콜레스테롤 옥시다아제 등도 사용할 수 있고, 콜레스테롤 옥시다아제 "Amano" 1(CHOD1 ; 아마노 엔자임사 제조), 콜레스테롤 옥시다아제 (CHOPE ; 키코망사 제조), 콜레스테롤 옥시다아제 (COO321 ; 토요 방적사 제조), 콜레스테롤 옥시다아제 쿄와 (쿄와 발효사 제조) 등의 시판품을 사용할 수도 있다. 또, 본 발명에 있어서는, 2 종류 이상의 콜레스테롤 산화 효소를 조합하여 사용할 수도 있다.
콜레스테롤 산화 효소는, 비수식의 효소이어도 되고, 화학적으로 수식된 효소이어도 된다. 화학적으로 수식된 콜레스테롤 산화 효소는, 예를 들어 상기 서술한 화학 수식제를 사용하여, 전술한 화학 수식 방법에 의해 제조할 수 있다.
본 반응의 방법에서 사용되는 콜레스테롤 산화 효소의 농도로는, 본 발명의 HDL 콜레스테롤의 측정을 가능하게 하는 농도이면 특별히 제한은 없지만, 반응액 중에서 0.01～400U/mL 의 농도인 것이 바람직하고, 0.02～200U/mL 의 농도인 것이 보다 바람직하다.
본 발명에 있어서의 콜레스테롤 탈수소 효소로는, 산화형 보효소의 존재 하에 콜레스테롤을 산화시켜 환원형 보효소를 생성하는 능력을 갖는 효소이면 특별히 제한은 없고, 예를 들어 동물, 식물 또는 미생물 유래의 콜레스테롤 데히드로게나아제 외, 유전자 공학적인 수법에 의해 제조되는 콜레스테롤 데히드로게나아제 등도 사용할 수 있다. 콜레스테롤 데히드로게나제 "Amano" 5(CHDH5 ; 아마노 엔자임사 제조) 등의 시판품을 사용할 수도 있다. 또, 본 발명에 있어서는, 2 종류 이상의 콜레스테롤 탈수소 효소를 조합하여 사용할 수도 있다. 콜레스테롤 탈수소 효소는, 비수식의 효소이어도 되고, 화학적으로 수식된 효소이어도 된다. 화학적으로 수식된 콜레스테롤 탈수소 효소는, 예를 들어 전술한 화학 수식제를 사용하여, 전술한 화학 수식 방법에 의해 제조할 수 있다.
본 반응의 방법에서 사용되는 콜레스테롤 탈수소 효소의 농도로는, 본 발명의 HDL 콜레스테롤의 측정을 가능하게 하는 농도이면 특별히 제한은 없지만, 반응액 중에서 0.01～400U/mL 의 농도인 것이 바람직하고, 0.02～200U/mL 의 농도인 것이 보다 바람직하다.
본 발명의 콜레스테롤 탈수소 효소를 사용한 측정법에 있어서는, 산화형 보효소가 사용된다. 산화형 보효소로는, 예를 들어 NAD, NADP, thio-NAD, thio-NADP 등을 들 수 있다.
본 발명에 있어서는, 폴리음이온과 함께, 일반식 (I)
[화학식 11]
Figure 112007076761873-pct00011
(식 중, R1 은, 직사슬 또는 분지형의 탄소수 6～30 의 알킬기 또는 알케닐기를 나타내고, R2 는, 직사슬 또는 분지형의 탄소수 1～30 의 알킬기 또는 탄소수 2～30 의 알케닐기를 나타내고, R3 및 R4 는, 동일 또는 상이하며, 각각 직사슬 또는 분지형의 탄소수 1～6 의 알킬기 또는 탄소수 2～6 의 알케닐기를 나타내고, X 는 음이온을 나타낸다) 로 표시되는 물질 [이하, 화합물 (I) 이라고 한다], 또는, 일반식 (Ⅱ)
[화학식 12]
Figure 112007076761873-pct00012
(식 중, R5 는, 직사슬 또는 분지형의 탄소수 6～30 의 알킬기 또는 알케닐기를 나타내고, R6 및 R7 은, 동일 또는 상이하며, 각각 수소 원자, 직사슬 또는 분지형의 탄소수 1～30 의 알킬기 또는 탄소수 2～30 의 알케닐기를 나타낸다) 로 표시되는 물질 [이하, 화합물 (Ⅱ) 라고 한다] 이 사용된다.
화합물 (I) 및 화합물 (Ⅱ) 에 있어서의 직사슬 또는 분지형의 탄소수 6～30 의 알킬기로는, 예를 들어 헥실, 헵틸, 옥틸, 이소옥틸, 노닐, 데실, 운데실, 도데실 (라우릴), 트리데실, 테트라데실 (미리스틸), 펜타데실, 헥사데실 (세틸), 헵타데실, 옥타데실 (스테아릴), 노나데실, 이코실, 헤네이코실, 도코실 (베헤닐), 트리코실, 테트라코실, 펜타코실, 헥사코실, 헵타코실, 옥타코실, 노나코실, 트리아콘실 등의 기를 들 수 있고, 탄소수 8～24 의 알킬기인 것이 바람직하고, 탄소수 10～18 의 알킬기인 것이 보다 바람직하다.
화합물 (I) 및 화합물 (Ⅱ) 에 있어서의 직사슬 또는 분지형의 탄소수 6～30 의 알케닐기로는, 예를 들어 헥세닐, 헵테닐, 옥테닐, 노네닐, 데세닐, 시트로네릴, 운데세닐, 도데세닐, 트리데세닐, 테트라데세닐, 펜타데세닐, 헥사데세닐, 헵타데세닐, 올레일, 노나데세닐, 에이코세닐, 헨에이코세닐, 도코세닐, 트리코세닐, 테트라코세닐, 펜타코세닐, 헥사코세닐, 헵타코세닐, 옥타코세닐, 노나코세닐, 트리아콘테닐 등을 들 수 있고, 탄소수 8～24 의 알케닐기인 것이 바람직하고, 탄소수 10～18 의 알케닐기인 것이 보다 바람직하다.
화합물 (I) 및 화합물 (Ⅱ) 에 있어서의 직사슬 또는 분지형의 탄소수 1～30 의 알킬기로는, 예를 들어 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸, 헥실, 헵틸, 옥틸, 이소옥틸, 노닐, 데실, 운데실, 도데실 (라우릴), 트리데실, 테트라데실 (미리스틸), 펜타데실, 헥사데실 (세틸), 헵타데실, 옥타데실 (스테아릴), 노나데실, 이코실, 헤네이코실, 도코실 (베헤닐), 트리코실, 테트라코실, 펜타코실, 헥사코실, 헵타코실, 옥타코실, 노나코실, 트리아콘실 등을 들 수 있고, 탄소수 1～24 의 알킬기인 것이 바람직하고, 탄소수 1～18 의 알킬기인 것이 보다 바람직하다.
화합물 (I) 및 화합물 (Ⅱ) 에 있어서의 직사슬 또는 분지형의 탄소수 1～6 의 알킬기로는, 예를 들어 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸, 헥실 등을 들 수 있고, 메틸, 에틸, 프로필기 중 어느 하나인 것이 바람직하고, 메틸기인 것이 보다 바람직하다.
화합물 (I) 및 화합물 (Ⅱ) 에 있어서의 직사슬 또는 분지형의 탄소수 2～30 의 알케닐기로는, 예를 들어 비닐, 프로페닐, 알릴, 부테닐, 펜테닐, 헥세닐, 헵테닐, 옥테닐, 노네닐, 데세닐, 시트로넬릴, 운데세닐, 도데세닐, 트리데세닐, 테트라데세닐, 펜타데세닐, 헥사데세닐, 헵타데세닐, 올레일, 노나데세닐, 에이코세닐, 헨에이코세닐, 도코세닐, 트리코세닐, 테트라코세닐, 펜타코세닐, 헥사코세닐, 헵타코세닐, 옥타코세닐, 노나코세닐, 트리아콘테닐 등을 들 수 있고, 탄소수 2～24 의 알케닐기인 것이 바람직하고, 탄소수 2～18 의 알케닐기인 것이 보다 바람직하다.
화합물 (I) 및 화합물 (Ⅱ) 에 있어서의 직사슬 또는 분지형의 탄소수 2～6 의 알케닐기로는, 예를 들어 비닐, 프로페닐, 알릴, 부테닐, 펜테닐, 헥세닐 등을 들 수 있고, 비닐, 프로페닐기 중 어느 하나인 것이 바람직하고, 비닐기인 것이 보다 바람직하다.
화합물 (I) 에 있어서의 음이온으로는, 예를 들어 수산 이온, 할로겐 이온, 무기산 유래의 음이온, 유기산 유래의 음이온 등을 들 수 있다. 할로겐 이온으로는, 불소 이온, 염소 이온, 브롬 이온, 요오드 이온 등을 들 수 있다. 무기산 유래의 음이온으로는, 예를 들어 질산 이온, 황산 이온, 인산 이온, 탄산 이온 등을 들 수 있다. 유기산 유래의 음이온으로는, 예를 들어 포름산 이온, 아세트산 이온, 락트산 이온, 시트르산 이온, 글루타민산 이온 등의 카르복실산 이온 등을 들 수 있다.
또한, 일반식 (I) 에 있어서, R1 은, 직사슬 또는 분지형의 탄소수 6～30 의 알킬기 또는 알케닐기를 나타내고, R2 는, 직사슬 또는 분기상의 탄소수 1～30 의 알킬기 또는 탄소수 2～30 의 알케닐기를 나타내고, R3 및 R4 가 모두 메틸을 나타내고, X 는 음이온을 나타내는 화합물이 바람직하다.
화합물 (I) 의 구체예 (제품) 로는, 예를 들어 양이온 AB, 양이온 BB, 양이온 2ABT, 양이온 2DB-500E, 양이온 2-OLR (모두 닛폰 유지사 제조) 등을 들 수 있다. 화합물 (Ⅱ) 의 구체예 (제품) 로는, 예를 들어 아민 BB, 아민 AB, 아민 2-OLR, 3 급 아민 BB, 3 급 아민 FB (모두 닛폰 유지사 제조) 등을 들 수 있다.
화합물 (I) 또는 화합물 (Ⅱ) 의 농도로는, 본 발명의 HDL 콜레스테롤의 측정을 가능하게 하는 농도이면 특별히 제한은 없지만, 반응액 중의 농도가 0.0001～1% 인 것이 바람직하고, 0.001～0.1% 가 보다 바람직하다.
본 발명에 있어서 사용되는 폴리음이온으로는, 본 발명의 HDL 콜레스테롤의 측정을 가능하게 하는 폴리음이온이면 특별히 제한은 없고, 예를 들어 덱스트란 황산 혹은 그 염, 헤파린 혹은 그 염, 인 텅스텐산 또는 그 염, 황산화 시클로덱스트린 또는 그 염, 황산화 올리고당 또는 그 염 등을 들 수 있는데, 덱스트란 황산 혹은 그 염이 바람직하다. 덱스트란 황산으로는, 예를 들어 분자량이 4만, 8만, 20만, 50만, 100만, 200만 등의 덱스트란 황산을 들 수 있다. 황산화 올리고당으로는, 예를 들어 황산화 아가로오스, 황산화 트레할로오스, 콘드로이틴 황산 등을 들 수 있다. 염으로는, 예를 들어 나트륨염, 칼륨염, 리튬염, 암모늄염, 마그네슘염 등을 들 수 있다. 또, 본 발명에 있어서는, 폴리음이온을 2 종 이상 사용해도 된다. 본 발명의 HDL 콜레스테롤의 측정에 있어서의 폴리음이온의 농도로는, 본 발명의 HDL 콜레스테롤의 측정을 가능하게 하는 농도이면 특별히 제한은 없지만, 반응액 중의 농도가 0.001～10% 인 것이 바람직하고, 0.01～1% 가 보다 바람직하다.
본 발명에 있어서 사용되는 알부민으로는, 본 발명의 HDL 콜레스테롤의 측정을 가능하게 하는 알부민이면 특별히 한정은 없고, 예를 들어 소, 말, 양, 인간 유래의 알부민 등을 들 수 있는데, 소 혈청 알부민 (BSA) 이 바람직하다. 또, 유전자 공학적인 수법에 의해 제조된 알부민도 사용할 수 있다. 본 발명에 있어서는, 2 종류 이상의 알부민을 조합하여 사용할 수도 있다. 본 발명의 HDL 콜레스테롤의 측정에 있어서의 알부민의 농도로는, 본 발명의 HDL 콜레스테롤의 측정을 가능하게 하는 농도이면 특별히 제한은 없지만, 반응액 중의 농도가 0.001～10% 인 것이 바람직하고, 0.01～1% 가 보다 바람직하다.
본 발명에 있어서 사용되는 폴리옥시에틸렌알킬아민 또는 폴리옥시에틸렌알케닐아민으로는, 예를 들어 일반식 (Ⅲ)
[화학식 13]
Figure 112007076761873-pct00013
[식 중, R8 은 직사슬 또는 분기상의 알킬기 또는 알케닐기를 나타내고, R9 는 수소 원자 또는 (CH2CH2O)nH 를 나타내고, m 및 n 은 동일 또는 상이하고, 1～100 의 정수를 나타내고, m＋n 은 2～200 의 정수이다] 로 표시되는 화합물 [이하, 화합물 (Ⅲ) 이라고 한다] 을 들 수 있다. 화합물 (Ⅲ) 에 있어서의 알킬기 및 알케닐기로는, 각각, 예를 들어 전술한 직사슬 또는 분지형의 탄소수 6～30 의 알킬기, 상기 서술한 직사슬 또는 분지형의 탄소수 6～30 의 알케닐기 등을 들 수 있고, 탄소수 8～24 의 알킬기 또는 알케닐기인 것이 바람직하고, 탄소수 10～18 의 알킬기 또는 알케닐기인 것이 보다 바람직하다.
폴리옥시에틸렌알킬아민 또는 폴리옥시에틸렌알케닐아민의 구체예 (제품) 로서는, 예를 들어 나이민 L201 (옥시에틸렌도데실아민 ; 닛폰 유지사 제조), 나이민 L207 (폴리옥시에틸렌도데실아민 ; 닛폰 유지사 제조), 나이민 S204, 나이민 S210 (폴리옥시에틸렌옥타데실아민 ; 닛폰 유지사 제조), 뉴 콜 OD420 (폴리옥시에틸렌옥타데실아민 ; 닛폰 유화제사 제조), 파이오닌 D3104 (폴리옥시에틸렌라우릴아민 ; 타케모토 유지사 제조), 파이오닌 D3110 (폴리옥시에틸렌라우릴아민 ; 타케모토 유지사 제조), 파이오닌 D3605 [폴리옥시에틸렌알킬(대두)아민 ; 타케모토 유지사 제조], 파이오닌 D3615T [폴리옥시에틸렌알킬 (우지)아민 ; 타케모토 유지사 제조], BLAUNON O209 (폴리옥시에틸렌올레일아미노 에테르 ; 타케모토 유지사 제조), BLAUNON L205 (폴리옥시에틸렌라우릴아미노 에테르 ; 타케모토 유지사 제조) 등을 들 수 있다.
폴리옥시에틸렌알킬아민 및 폴리옥시에틸렌알케닐아민에 있어서의 옥시에틸렌사슬의 중합도는, 바람직하게는 1～100, 보다 바람직하게는 1～60 이다. 본 발명에 있어서는, 폴리옥시에틸렌알킬아민 및 폴리옥시에틸렌알케닐아민을 2 종류 이상 사용해도 된다. 폴리옥시에틸렌알킬아민 및 폴리옥시에틸렌알케닐아민의 농도로는, 본 발명의 HDL 콜레스테롤의 측정을 가능하게 하는 농도이면 특별히 제한은 없지만, 반응액 중의 농도가 0.0001～1% 인 것이 바람직하고, 0.001～0.1% 가 보다 바람직하다.
본 발명의 HDL 콜레스테롤 측정 방법에 있어서 사용되는 수성 매체로는, 예를 들어 탈이온수, 증류수, 완충액 등을 들 수 있는데, 완충액이 바람직하다. 완충액에 사용하는 완충제로는, 예를 들어 트리스(히드록시메틸)아미노메탄 완충제, 인산 완충제, 붕산 완충제, 굿 완충제(Good's buffer) 등을 들 수 있다.
굿 완충제로는, 예를 들어 2-모르폴리노에탄술폰산 (MES), 비스(2-히드록시에틸)이미노트리스(히드록시메틸)메탄(Bis-Tris), N-(2-아세토아미드)이미노 2 아세트산 (ADA), 피페라진-N,N'-비스(2-에탄술폰산)(PIPES), N-(2-아세토아미드)-2 아미노에탄술폰산 (ACES), 3-모르폴리노-2-히드록시프로판술폰산 (MOPSO), N,N-비스(2-히드록시에틸)-2-아미노에탄술폰산 (BES), 3-모르폴리노프로판술폰산 (MOPS), N-〔트리스(히드록시메틸)메틸〕-2-아미노에탄술폰산 (TES), 2-〔4-(2-히드록시에틸)-1-피페라지닐〕에탄술폰산 (HEPES), 3-〔N,N-비스(2-히드록시에틸)아미노〕-2-히드록시프로판술폰산 (DIPSO), N-〔트리스(히드록시메틸)메틸〕-2-히드록시-3-아미노프로판술폰산 (TAPSO), 피페라진-N,N'-비스(2-히드록시프로판술폰산)(POPSO), 3-〔4-(2-히드록시에틸)-1-피페라지닐〕-2-히드록시프로판술폰산 (HEPPSO), 3-〔4-(2-히드록시에틸)-1-피페라지닐〕프로판술폰산〔(H)EPPS〕, N-〔트리스(히드록시메틸)메틸〕글리신 (Tricine), N,N-비스(2-히드록시에틸)글리신 (Bicine), N-트리스(히드록시메틸)메틸-3-아미노프로판술폰산 (TAPS), N-시클로헥실-2-아미노에탄술폰 산 (CHES), N-시클로헥실-3-아미노-2-히드록시프로판술폰산 (CAPSO), N-시클로헥실-3-아미노프로판술폰산 (CAPS) 등을 들 수 있다. 완충액의 농도는 측정에 적절한 농도이면 특별히 제한은 되지 않지만, 0.001～2.0mol/L 가 바람직하고, 0.005～1.0mol/L 가 보다 바람직하다.
이하에, 본 발명의 HDL 콜레스테롤의 측정 방법, 측정용 시약 및 측정용 키트를 구체적으로 설명한다.
(HDL 콜레스테롤의 측정 방법)
본 발명의 HDL 콜레스테롤의 측정 방법으로는, 예를 들어 이하의 양태 방법을 들 수 있다.
측정 방법
(1) 검체와, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소 및 콜레스테롤 산화 효소, 또는, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소, 산화형 보효소 및 콜레스테롤 탈수소 효소를, 화합물 (I) 혹은 화합물 (Ⅱ) 및 폴리음이온을 함유하고, 필요에 따라 알부민, 폴리옥시에틸렌알킬아민 및 폴리옥시에틸렌알케닐아민으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 물질을 함유하는 수성 매체 중에서 반응시켜, 과산화수소 또는 환원형 보효소를 생성시키고,
(2) 생성된 과산화수소 또는 환원형 보효소를 측정하고,
(3) (2) 에서 측정한 값과, 미리 작성한 검량선으로부터, 검체 중의 HDL 콜레스테롤 농도를 산출함으로써, 검체 중의 HDL 콜레스테롤을 측정할 수 있다.
본 측정법에 있어서는, (1) 의 반응은, 예를 들어 10～50℃ 에서, 바람직하게는 20～40℃ 에서, 1～60 분간, 바람직하게는 2～30 분간 실시한다.
생성된 과산화수소의 양은, 예를 들어 직접 과산화수소 전극으로 측정할 수도 있지만, 과산화수소 측정용 시약에 의해 측정할 수도 있다. 과산화수소 측정용 시약은, 생성된 과산화수소를 검출할 수 있는 물질로 변환시키기 위한 시약이다. 검출할 수 있는 물질로는, 예를 들어 색소, 발광 등을 들 수 있지만, 색소가 바람직하다. 검출할 수 있는 물질이 색소인 경우에는, 과산화수소 측정용 시약은, 산화 발색형 색원체 및 퍼옥시다아제 등의 과산화 활성 물질을 함유한다. 산화 발색형 색원체로는, 예를 들어 후술하는 산화 발색형 색원체를 들 수 있다. 검출할 수 있는 물질이 발광인 경우에는, 과산화수소 측정용 시약은, 화학 발광 물질을 함유한다. 화학 발광 물질로는, 예를 들어 루미놀, 이소루미놀, 루시게닌, 아크리디늄 에스테르 등을 들 수 있다.
과산화수소 측정용 시약으로서, 산화 발색형 색원체 및 퍼옥시다아제 등의 과산화 활성 물질을 함유하는 시약을 사용하는 경우에는, 과산화수소는, 과산화 활성 물질의 존재 하에 산화 발색형 색원체와 반응하여 색소를 생성하고, 생성된 색소를 정량함으로써, 과산화수소를 정량할 수 있다. 또, 화학 발광 물질을 함유하는 과산화수소 측정용 시약을 사용하는 경우에는, 과산화수소는, 화학 발광 물질과 반응시켜 포톤을 발생시키고, 발생된 포톤을 정량함으로써, 과산화수소를 정량할 수 있다.
산화 발색형 색원체로는, 예를 들어 로이코형 색원체, 산화 커플링 발색형 색원체 등을 들 수 있다.
로이코형 색원체는, 과산화수소 및 퍼옥시다아제 등의 과산화 활성 물질의 존재 하, 단독으로 색소로 변환되는 물질이다. 구체적으로는, 10-N-카르복시메틸카르바모일-3,7-비스(디메틸아미노)-10H-페노티아진 (CCAP), 10-N-메틸카르바모일-3,7-비스(디메틸아미노)-10H-페노티아진 (MCDP), N-(카르복시메틸아미노카르보닐)-4,4'-비스(디메틸아미노)디페닐아민나트륨염 (DA-64), 4,4'-비스(디메틸아미노)디페닐아민, 비스〔3-비스(4-클로로페닐)메틸-4-디메틸아미노페닐〕아민 (BCMA) 등을 들 수 있다.
산화 커플링 발색형 색원체는, 과산화수소 및 퍼옥시다아제 등의 과산화 활성 물질의 존재 하, 2 개의 화합물이 산화적 커플링하여 색소를 생성하는 물질이다.
2 개의 화합물의 조합으로는, 커플러와 아닐린류의 조합, 커플러와 페놀류의 조합 등을 들 수 있다. 커플러로는, 예를 들어 4-아미노안티피린 (4-AA), 3-메틸-2-벤조티아졸리논히드라진 등을 들 수 있다. 아닐린류로는, N-(3-술포프로필)아닐린, N-에틸-N-(2-히드록시-3-술포프로필)-3-메틸아닐린 (TOOS), N-에틸-N-(2-히드록시-3-술포프로필)-3,5-디메틸아닐린 (MAOS), N-에틸-N-(2-히드록시-3-술포프로필)-3,5-디메톡시아닐린 (DAOS), N-에틸-N-(3-술포프로필)-3-메틸아닐린 (TOPS), N-(2-히드록시-3-술포프로필)-3,5-디메톡시아닐린 (HDAOS), N,N-디메틸-3-메틸아닐린, N,N-디(3-술포프로필)-3,5-디메톡시아닐린, N-에틸-N-(3-술포프로필)-3-메톡시아닐린, N-에틸-N-(3-술포프로필)아닐린, N-에틸-N-(3-술포프로필)-3,5-디메톡시아닐린, N-(3-술포프로필)-3,5-디메톡시아닐린, N-에틸-N-(3-술포프로필)-3,5-디메틸아닐린, N-에틸-N-(2-히드록시-3-술포프로필)-3-메톡시아닐린, N-에틸-N-(2-히드록시-3-술포프로필)아닐린, N-에틸-N-(3-메틸페닐)-N'-숙시닐에틸렌디아민 (EMSE), N-에틸-N-(3-메틸페닐)-N'-아세틸에틸렌디아민, N-에틸-N-(2-히드록시-3-술포프로필)-4-플루오로-3,5-디메톡시아닐린 (F-DAOS) 등을 들 수 있다. 페놀류로는, 페놀, 4-클로로페놀, 3-메틸페놀, 3-히드록시-2,4,6-트리요오드벤조산 (HTIB) 등을 들 수 있다.
과산화수소의 측정에 있어서, 과산화 활성 물질의 농도는, 측정에 적절한 농도이면 특별히 제한은 없지만, 과산화 활성 물질로서 퍼옥시다아제를 사용하는 경우에는, 1～100kU/L 가 바람직하다. 또, 산화 발색형 색원체의 농도는, 측정에 적절한 농도이면 특별히 제한은 없지만, 0.01～10g/L 가 바람직하다.
환원형 보효소의 측정 방법으로는, 예를 들어 생성된 환원형 보효소의 흡광도를 측정하는 방법, 환원형 보효소 측정용 시약을 사용하는 방법 등을 들 수 있다. 환원형 보효소의 흡광도를 측정하는 방법에 있어서의 흡광도로는, 300～500nm 가 바람직하고, 330～400nm 가 보다 바람직하며, 340nm 부근이 특히 바람직하다. 환원형 보효소 측정용 시약은, 생성된 환원형 보효소를 검출할 수 있는 물질로 변환하기 위한 시약이다. 검출할 수 있는 물질로는, 예를 들어 색소 등을 들 수 있다. 검출할 수 있는 물질이 색소인 경우의 환원형 보효소 측정용 시약으로는, 예를 들어 디아포라아제, 전자 캐리어 및 환원 발색형 색원체를 함유하는 시약을 들 수 있다. 전자 캐리어로는, 예를 들어 1-메톡시-5-메틸페나듐메틸술페이트 등을 들 수 있다. 환원형 보효소 측정용 시약으로서, 디아포라아제, 전자 캐리어 및 환원 발색형 색원체를 함유하는 시약을 사용하는 경우에는, 환원 발색형 색원체가 변환되어, 생성된 색소를 정량함으로써, 환원형 보효소를 정량할 수 있다.
환원 발색형 색원체로는, 예를 들어 3-(4,5-디메틸-2-티아졸릴)-2,5-디페닐-2H-테트라졸륨 브로마이드 (MTT), 2-(4-요오드페닐)-3-(4-니트로페닐)-5-(2,4-디술포페닐)-2H-테트라졸륨 모노나트륨염 (WST-1), 2-(4-요오드페닐)-3-(2,4-디니트로페닐)-5-(2,4-디술포페닐)-2H-테트라졸륨 모노나트륨염 (WST-3) 등을 들 수 있다.
(HDL 콜레스테롤 측정용 시약)
본 발명의 HDL 콜레스테롤 측정용 시약은, 화합물 (I) 및 화합물 (Ⅱ) 로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 물질, 폴리음이온, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소, 콜레스테롤 산화 효소 및 과산화수소 측정용 시약을 함유하고, 필요에 따라, 알부민, 폴리옥시에틸렌알킬아민 및 폴리옥시에틸렌알케닐아민으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 물질을 함유한다.
그 측정용 시약으로는, 화합물 (I) 및 화합물 (Ⅱ) 로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 물질, 폴리옥시에틸렌알킬아민 및 폴리옥시에틸렌알케닐아민 으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 물질, 폴리음이온, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소, 콜레스테롤 산화 효소 및 과산화수소 측정용 시약을 함유하는 시약이나, 화합물 (I) 및 화합물 (Ⅱ) 로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 물질, 폴리음이온, 알부민, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소, 콜레스테롤 산화 효소 및 과산화수소 측정용 시약을 함유하는 시약이 바람직하다.
또, 그 측정용 시약으로는, 화합물 (I) 및 화합물 (Ⅱ) 로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 물질, 폴리옥시에틸렌알킬아민 및 폴리옥시에틸렌알케닐아민으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 물질, 폴리음이온, 알부민, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소, 콜레스테롤 산화 효소 및 과산화수소 측정용 시약을 함유하는 시약이 특히 바람직하다.
본 발명의 HDL 콜레스테롤 측정용 시약은, 화합물 (I) 및 화합물 (Ⅱ) 로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 물질, 폴리음이온, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소, 콜레스테롤 탈수소 효소 및 산화형 보효소를 함유하고, 필요에 따라, 환원형 보효소 측정용 시약, 알부민, 폴리옥시에틸렌알킬아민 및 폴리옥시에틸렌알케닐아민으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 물질을 함유한다.
그 측정용 시약으로는, 화합물 (I) 및 화합물 (Ⅱ) 로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 물질, 폴리옥시에틸렌알킬아민 및 폴리옥시에틸렌알케닐아민으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 물질, 폴리음이온, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소, 콜레스테롤 탈수소 효소, 산화형 보효소 및 환원형 보효소 측정용 시약을 함유하는 시약이나, 화합물 (I) 및 화합물 (Ⅱ) 로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 물질, 폴리음이온, 알부민, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소, 콜레스테롤 탈수소 효소, 산화형 보효소 및 환원형 보효소 측정용 시약을 함유하는 시약이 바람직하다.
또, 그 측정용 시약으로는, 화합물 (I) 및 화합물 (Ⅱ) 로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 물질, 폴리옥시에틸렌알킬아민 및 폴리옥시에틸렌알케닐아민으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 물질, 폴리음이온, 알부민, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소, 콜레스테롤 탈수소 효소, 산화형 보효소 및 환원형 보효소 측정용 시약을 함유하는 것이 특히 바람직하다.
본 발명의 HDL 콜레스테롤 측정용 시약으로는, 예를 들어 이하 양태의 시약을 들 수 있지만 이들은 본 발명의 범위를 조금도 한정하는 것은 아니다. 또한, 편의상, 화합물 (I) 및 화합물 (Ⅱ) 로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 물질을 이하 「화합물 A」라고 하고, 알부민, 폴리옥시에틸렌알킬아민 및 폴리옥시에틸렌알케닐아민으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 물질을 이하 「화합물 B」라고 한다. 본 발명의 측정용 시약에 있어서는, 화합물 A 를 1 개 또는 복수 사용할 수 있고, 화합물 B 를 1 개 또는 복수 사용할 수 있다.
시약 1
화합물 A, 폴리음이온, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소, 콜레스테롤 산화 효소 및 과산화수소 측정용 시약을 함유하는 시약.
시약 2
화합물 A, 폴리음이온, 화합물 B, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소, 콜레스테롤 산화 효소 및 과산화수소 측정용 시약을 함유하는 시약.
시약 3
화합물 A, 폴리음이온, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소, 산화형 보효소 및 콜레스테롤 탈수소 효소를 함유하는 시약.
시약 4
화합물 A, 폴리음이온, 화합물 B, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소, 산화형 보효소 및 콜레스테롤 탈수소 효소를 함유하는 시약.
시약 5
화합물 A, 폴리음이온, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소, 산화형 보효소, 콜레스테롤 탈수소 효소 및 환원형 보효소 측정용 시약을 함유하는 시약.
시약 6
화합물 A, 폴리음이온, 화합물 B, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소, 산화형 보효소, 콜레스테롤 탈수소 효소 및 환원형 보효소 측정용 시약을 함유하는 시약.
(HDL 콜레스테롤 측정용 키트)
본 발명의 HDL 콜레스테롤 측정용 시약은, 키트의 형태로 보존, 유통 및 사용되어도 된다. 키트의 형태로는, 특별히 제한은 없고, 2 시약계, 3 시약계 등의 어느 하나이어도 되지만, 2 시약계가 바람직하다.
제 1 시약과 제 2 시약으로 이루어지는 2 시약계의 HDL 콜레스테롤 측정용 키트에 있어서는, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소와, 콜레스테롤 산화 효소 또는 콜레스테롤 탈수소 효소는, 제 1 시약과 제 2 시약에 따로 따로 함유되어도 되고, 제 2 시약에 함께 함유되어도 되지만, 제 1 시약과 제 2 시약에 따로 따로 함유되는 경우에는, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소가 제 1 시약에, 콜레스테롤 산화 효소 또는 콜레스테롤 탈수소 효소가 제 2 시약에 함유되는 양태가 바람직하다. 콜레스테롤 탈수소 효소를 사용한 측정법에 있어서 사용되는 산화형 보효소는, 제 1 시약, 제 2 시약 중 어느 하나 또는 양방에 함유되어도 된다.
화합물 (I) 및 화합물 (Ⅱ) 로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 물질 (화합물 A) 은, 제 1 시약, 제 2 시약 중 어느 하나 또는 양방에 함유되어도 되지만, 제 1 시약에 함유되는 것이 바람직하다. 폴리음이온은, 제 1 시약, 제 2 시약 중 어느 하나 또는 양방에 함유되어도 되지만, 제 1 시약에 함유되는 것이 바람직하다.
알부민, 폴리옥시에틸렌알킬아민 및 폴리옥시에틸렌알케닐아민으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 물질 (화합물 B) 은, 제 1 시약, 제 2 시약 중 어느 하나 또는 양방에 함유되어도 된다.
과산화수소 측정용 시약은, 제 1 시약, 제 2 시약 중 어느 하나 또는 양방에 함유되어도 되지만, 당해 시약이 산화 커플링형 색원체를 함유하는 경우에는, 산화 커플링형 색원체 각각의 화합물은 다른 시약에 함유되는 양태, 즉, 과산화수소 측정용 시약이 제 1 시약 및 제 2 시약의 양방에 함유되는 양태가 바람직하다. 환원성 보효소 측정용 시약은, 제 1 시약, 제 2 시약 중 어느 하나 또는 양방에 함유되어도 되지만, 제 1 시약, 제 2 시약의 양방에 함유되는 것이 바람직하다.
본 발명의 HDL 콜레스테롤 측정용 키트로는, 예를 들어 이하의 양태의 키트를 들 수 있는데, 이들은 본 발명의 범위를 조금도 한정하는 것은 아니다.
키트 1
제 1 시약
화합물 A, 폴리음이온, 과산화수소 측정용 시약, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소
제 2 시약
과산화수소 측정용 시약, 콜레스테롤 산화 효소
키트 2
제 1 시약
화합물 A, 폴리음이온, 과산화수소 측정용 시약
제 2 시약
과산화수소 측정용 시약, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소, 콜레스테롤 산화 효소
키트 3
제 1 시약
화합물 A, 화합물 B, 폴리음이온, 과산화수소 측정용 시약, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소
제 2 시약
과산화수소 측정용 시약, 콜레스테롤 산화 효소
키트 4
제 1 시약
화합물 A, 화합물 B, 폴리음이온, 과산화수소 측정용 시약
제 2 시약
과산화수소 측정용 시약, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소, 콜레스테롤 산화 효소
키트 5
제 1 시약
화합물 A, 폴리음이온, 과산화수소 측정용 시약, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소
제 2 시약
화합물 B, 과산화수소 측정용 시약, 콜레스테롤 산화 효소
키트 6
제 1 시약
화합물 A, 폴리음이온, 과산화수소 측정용 시약
제 2 시약
화합물 B, 과산화수소 측정용 시약, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소, 콜레스테롤 산화 효소
키트 7
제 1 시약
화합물 A, 폴리음이온, 산화형 보효소, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소
제 2 시약
콜레스테롤 탈수소 효소
키트 8
제 1 시약
화합물 A, 폴리음이온, 산화형 보효소
제 2 시약
콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소, 콜레스테롤 탈수소 효소
키트 9
제 1 시약
화합물 A, 화합물 B, 폴리음이온, 산화형 보효소, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소
제 2 시약
콜레스테롤 탈수소 효소
키트 10
제 1 시약
화합물 A, 화합물 B, 폴리음이온, 산화형 보효소
제 2 시약
콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소, 콜레스테롤 탈수소 효소
키트 11
제 1 시약
화합물 A, 폴리음이온, 산화형 보효소, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소
제 2 시약
화합물 B, 콜레스테롤 탈수소 효소
키트 12
제 1 시약
화합물 A, 폴리음이온, 산화형 보효소
제 2 시약
화합물 B, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소, 콜레스테롤 탈수소 효소
키트 13
제 1 시약
화합물 A, 폴리음이온, 산화형 보효소, 환원형 보효소 측정용 시약, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소
제 2 시약
콜레스테롤 탈수소 효소
키트 14
제 1 시약
화합물 A, 폴리음이온, 산화형 보효소, 환원형 보효소 측정용 시약
제 2 시약
환원형 보효소 측정용 시약, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소, 콜레스테롤 탈수소 효소
키트 15
제 1 시약
화합물 A, 화합물 B, 폴리음이온, 산화형 보효소, 환원형 보효소 측정용 시약, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소
제 2 시약
환원형 보효소 측정용 시약, 콜레스테롤 탈수소 효소
키트 16
제 1 시약
화합물 A, 화합물 B, 폴리음이온, 산화형 보효소, 환원형 보효소 측정용 시약
제 2 시약
환원형 보효소 측정용 시약, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소, 콜레스테롤 탈수소 효소
키트 17
제 1 시약
화합물 A, 폴리음이온, 산화형 보효소, 환원형 보효소 측정용 시약, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소
제 2 시약
화합물 B, 환원형 보효소 측정용 시약, 콜레스테롤 탈수소 효소
키트 18
제 1 시약
화합물 A, 폴리음이온, 산화형 보효소, 환원형 보효소 측정용 시약
제 2 시약
화합물 B, 환원형 보효소 측정용 시약, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소, 콜레스테롤 탈수소 효소
본 발명의 HDL 콜레스테롤 측정용 시약 및 측정용 키트에 있어서는, 전술한 본 발명의 HDL 콜레스테롤의 측정 방법에 있어서 들 수 있는, 화합물 (Ⅰ), 화합물 (Ⅱ), 폴리음이온, 알부민, 폴리옥시에틸렌알킬아민, 폴리옥시에틸렌알케닐아민, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소, 콜레스테롤 산화 효소, 콜레스테롤 탈수소 효소, 산화형 보효소, 과산화 수소 측정용 시약, 환원형 보효소 측정용 시약을 사용할 수 있다.
본 발명의 HDL 콜레스테롤 측정용 시약 및 측정용 키트에는, 필요에 따라, 수성 매체, 안정화제, 방부제, 영향 물질 소거제, 반응 촉진제 등이 함유되어도 된다. 수성 매체로는, 예를 들어 전술한 수성 매체 등을 들 수 있다. 안정화제로는, 예를 들어 에틸렌디아민 4 아세트산 (EDTA), 슈크로오스, 염화 칼슘 등을 들 수 있다. 방부제로는, 예를 들어 아지화 나트륨, 항생 물질 등을 들 수 있다. 영향 물질 소거제로는, 예를 들어 아스코르브산의 영향을 소거하기 위한 아스코르브산 옥시다아제 등을 들 수 있다. 반응 촉진제로는, 예를 들어 콜리파아제, 포스폴리파아제 등의 효소, 황산 나트륨, 염화 나트륨 등의 염류 등을 들 수 있다.
본 발명의 HDL 콜레스테롤 측정용 시약 및 측정용 키트는, 동결 건조된 상태여도 되고, 수성 매체에 용해된 상태여도 된다. 동결 건조된 상태의 시약을 사용하여 검체 중의 HDL 콜레스테롤을 측정하는 경우에는, 당해 시약은 수성 매체에 용해시켜 사용된다.
본 발명의 HDL 콜레스테롤 측정용 시약 및 측정용 키트에 있어서의 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소, 콜레스테롤 산화 효소, 콜레스테롤 탈수소 효소의 함량으로는, 수성 매체에 의해 용해된 상태에서의 농도가 0.01～1200U/mL 가 되는 함량이 바람직하고, 0.02～600U/mL 가 되는 함량이 보다 바람직하다.
본 발명의 HDL 콜레스테롤 측정용 시약 및 측정용 키트에 있어서의 화합물 (Ⅰ) 또는 화합물 (Ⅱ) 의 함량으로는, 수성 매체에 의해 용해된 상태에서의 농도가 0.0001～3% 가 되는 함량이 바람직하고, 0.001～0.3% 가 되는 함량이 보다 바람직하다. 본 발명의 HDL 콜레스테롤 측정용 시약 및 측정용 키트에 있어서의 폴리음이온의 함량으로는, 수성 매체에 의해 용해된 상태에서의 농도가 0.001～30% 가 되는 함량이 바람직하고, 0.01～3% 가 되는 함량이 보다 바람직하다.
본 발명의 HDL 콜레스테롤 측정용 시약 및 측정용 키트에 있어서의 알부민의 함량으로는, 수성 매체에 의해 용해된 상태에서의 농도가 0.001～30% 가 되는 함량이 바람직하고, 0.01～3% 가 되는 함량이 보다 바람직하다.
본 발명의 HDL 콜레스테롤 측정용 시약 및 측정용 키트에 있어서의 폴리옥시 에틸렌알킬아민 또는 폴리옥시에틸렌알케닐아민의 함량으로는, 수성 매체에 의해 용해된 상태에서의 농도가 0.0001～3% 가 되는 함량이 바람직하고, 0.001～0.3% 가 되는 함량이 보다 바람직하다.
이하, 실시예에 의해 본 발명을 보다 상세하게 설명하는데, 이들은 본 발명의 범위를 조금도 한정하는 것은 아니다. 또한, 본 실시예에 있어서는, 하기 메이커의 시약 및 효소를 사용하였다.
HEPES (BDH Laboratory 사 제조), EMSE (다이토 케믹스사 제조), 황산 나트륨 (칸토 화학사 제조), 아민 BB (도데실아민 ; 닛폰 유지사 제조), 3 급 아민 BB (도데실디메틸아민 ; 닛폰 유지사 제조), 양이온 BB (도데실트리메틸암모늄클로라이드 ; 닛폰 유지사 제조), 덱스트란 황산 나트륨 (분자량 50 만)(팔마시아사 제조), 소 혈청 알부민 (BSA ; 프로라이언트사 제조), 4-아미노안티피린 (사이쿄 화성사 제조), 퍼옥시다아제 (토요 방적사 제조), 43kDa 에스테라아제 (콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소 ; 아마노 엔자임사 제조), CHOPE (콜레스테롤 산화 효소 ; 키코망사 제조), BLAUNON L205 (폴리옥시에틸렌라우릴아미노에테르 ; 아오키 유지사 제조).
실시예 1
이하의 제 1 시약 (시약 A) 및 제 2 시약 (시약 a) 으로 이루어지는 HDL 콜레스테롤 측정용 키트를 조제하였다.
제 1 시약 (시약 A)
HEPES (pH 7.5) 10mmol/L
EMSE 0.3g/L
황산 나트륨 5.0g/L
아민 BB 0.1g/L
덱스트란 황산 나트륨 1.0g/L
제 2 시약 (시약 a)
HEPES (pH 7.0) 10mmol/L
4-아미노안티피린 0.3g/L
퍼옥시다아제 20kU/L
43kDa 에스테라아제 100kU/L
CHOPE 1.2kU/L
실시예 2
이하의 제 1 시약 (시약 B) 및 제 2 시약 (시약 a) 으로 이루어지는 HDL 콜 레스테롤 측정용 키트를 조제하였다.
제 1 시약 (시약 B)
HEPES (pH 7.5) 10mmol/L
EMSE 0.3g/L
황산 나트륨 5.0g/L
3 급 아민 BB 0.03g/L
덱스트란 황산 나트륨 1.0g/L
제 2 시약 (시약 a)
HEPES (pH 7.0) 10mmol/L
4-아미노안티피린 0.3g/L
퍼옥시다아제 20kU/L
43kDa 에스테라아제 100kU/L
CHOPE 1.2kU/L
실시예 3
이하의 제 1 시약 (시약 C) 및 제 2 시약 (시약 a) 으로 이루어지는 HDL 콜레스테롤 측정용 키트를 조제하였다.
제 1 시약 (시약 C)
HEPES (pH 7.5) 10mmol/L
EMSE 0.3g/L
황산 나트륨 5.0g/L
양이온 BB 0.14g/L
덱스트란 황산 나트륨 1.0g/L
제 2 시약 (시약 a)
HEPES (pH 7.0) 10mmol/L
4-아미노안티피린 0.3g/L
퍼옥시다아제 20kU/L
43kDa 에스테라아제 100kU/L
CHOPE 1.2kU/L
실시예 4
이하의 제 1 시약 (시약 D) 및 제 2 시약 (시약 a) 으로 이루어지는 HDL 콜레스테롤 측정용 키트를 조제하였다.
제 1 시약 (시약 D)
HEPES (pH 7.5) 10mmol/L
EMSE 0.3g/L
황산 나트륨 5.0g/L
양이온 BB 0.14g/L
덱스트란 황산 나트륨 1.0g/L
BSA 2.0g/L
제 2 시약 (시약 a)
HEPES (pH 7.0) 10mmol/L
4-아미노안티피린 0.3g/L
퍼옥시다아제 20kU/L
43kDa 에스테라아제 100kU/L
CHOPE 1.2kU/L
실시예 5
이하의 제 1 시약 (시약 C) 및 제 2 시약 (시약 b) 으로 이루어지는 HDL 콜레스테롤 측정용 키트를 조제하였다.
제 1 시약 (시약 C)
HEPES (pH 7.5) 10mmol/L
EMSE 0.3g/L
황산 나트륨 5.0g/L
양이온 BB 0.14g/L
덱스트란 황산 나트륨 1.0g/L
제 2 시약 (시약 b)
HEPES (pH 7.0) 10mmol/L
4-아미노안티피린 0.3g/L
퍼옥시다아제 20kU/L
43kDa 에스테라아제 100kU/L
CHOPE 1.2kU/L
BLAUNON L205 0.16g/L
실시예 6
이하의 제 1 시약 (시약 D) 및 제 2 시약 (시약 b) 으로 이루어지는 HDL 콜레스테롤 측정용 키트를 조제하였다.
제 1 시약 (시약 D)
HEPES (pH 7.5) 10mmol/L
EMSE 0.3g/L
황산 나트륨 5.0g/L
양이온 BB 0.14g/L
덱스트란 황산 나트륨 1.0g/L
BSA 2.0g/L
제 2 시약 (시약 b)
HEPES (pH 7.0) 10mmol/L
4-아미노안티피린 0.3g/L
퍼옥시다아제 20kU/L
43kDa 에스테라아제 100kU/L
CHOPE 1.2kU/L
BLAUNON L205 0.16g/L
비교예 1
이하의 제 1 시약 (시약 E) 및 제 2 시약 (시약 a) 으로 이루어지는 HDL 콜레스테롤 측정용 키트를 조제하였다.
제 1 시약 (시약 E)
HEPES (pH 7.5) 10mmol/L
EMSE 0.3g/L
황산 나트륨 5.0g/L
덱스트란 황산 나트륨 1.0g/L
제 2 시약 (시약 a)
HEPES (pH 7.0) 10mmol/L
4-아미노안티피린 0.3g/L
퍼옥시다아제 20kU/L
43kDa 에스테라아제 100kU/L
CHOPE 1.2kU/L
실시예 7
실시예 1 의 키트를 사용하여, 인간 혈청 30 검체 중의 HDL 콜레스테롤을 측정하였다. (1) 검량선의 작성
표준액으로서, 생리 식염수 (HDL 콜레스테롤 농도 : 0.0mg/dL) 및 혈청 (HDL 콜레스테롤 농도 : 80.0mg/dL) 을, 실시예 1 의 키트를 사용하여, 히타치 7170S 형 자동 분석 장치에 의해, HDL 콜레스테롤 농도와 「흡광도」사이의 관계를 나타내는 검량선을 작성하였다.
여기서의 「흡광도」란, 이하의 반응에서 측정된 2 개의 흡광도 (E1 및 E2) 를 기초로, E2 에서 E1 를 뺌으로써 얻어진 값을 나타낸다.
반응 셀에 표준액 (2μL) 과 제 1 시약 (0.15mL) 을 첨가하여, 37℃ 에서 5 분간 가온시키고, 반응액의 흡광도 (E1) 를 주파장 600nm, 부파장 700nm 에서 측정하고, 이어서, 이 반응액에 제 2 시약 (0.05mL) 을 첨가하여, 다시 37℃ 에서 5 분 가온시키고, 반응액의 흡광도 (E2) 를 주파장 600nm, 부파장 700nm 에서 측정하였다.
(2) 인간 혈청 검체와 실시예 1 의 키트의 반응에 의한 당해 검체에 있어서의 「흡광도」의 산출
(1) 의 검량선의 작성에 있어서 사용한 표준액 대신에 인간 혈청 검체를 사용하는 것 이외에는, (1) 의 「흡광도」의 산출 방법과 동일한 방법에 의해, 당해 검체에 있어서의 「흡광도」를 산출하였다.
(3) 인간 혈청 검체 중의 HDL 콜레스테롤 농도의 측정
(2) 에서 산출한 「흡광도」와, (1) 에서 작성한 검량선으로부터, 각 검체 중의 HDL 콜레스테롤 농도를 측정하였다.
실시예 8
실시예 1 의 키트 대신에 실시예 2 의 키트를 사용하는 것 이외에는 실시예 7 의 측정법과 동일하게 하여, 히타치 7170 형 자동 분석 장치에 의해 인간 혈청 30 검체 중의 HDL 콜레스테롤을 측정하였다.
실시예 9
실시예 1 의 키트 대신에 실시예 3 의 키트를 사용하는 것 이외에는 실시예 7 의 측정법과 동일하게 하여, 히타치 7170 형 자동 분석 장치에 의해 인간 혈청 30 검체 중의 HDL 콜레스테롤을 측정하였다.
실시예 10
실시예 1 의 키트 대신에 실시예 4 의 키트를 사용하는 것 이외에는 실시예 7 의 측정법과 동일하게 하여, 히타치 7170 형 자동 분석 장치에 의해 인간 혈청 30 검체 중의 HDL 콜레스테롤을 측정하였다.
실시예 11
실시예 1 의 키트 대신에 실시예 5 의 키트를 사용하는 것 이외에는 실시예 7 의 측정법과 동일하게 하여, 히타치 7170 형 자동 분석 장치에 의해 인간 혈청 30 검체 중의 HDL 콜레스테롤을 측정하였다.
실시예 12
실시예 1 의 키트 대신에 실시예 6 의 키트를 사용하는 것 이외에는 실시예 7 의 측정법과 동일하게 하여, 히타치 7170 형 자동 분석 장치에 의해 인간 혈청 30 검체 중의 HDL 콜레스테롤을 측정하였다.
비교예 2
실시예 1 의 키트 대신에 비교예 1 의 키트를 사용하는 것 이외에는 실시예 7 의 측정법과 동일하게 하여, 히타치 7170 형 자동 분석 장치에 의해 인간 혈청 30 검체 중의 HDL 콜레스테롤을 측정하였다.
다음으로, 실시예 7～12 및 비교예 2 의 측정에 있어서 사용한 인간 혈청 30 검체를 사용하여, 클리니컬 케미스트리 제45권, 10호 (1999년) 에 기재된 DCM법 (Designated Comparison Method) 에 의해 당해 검체 중의 HDL 콜레스테롤을 측정하 고, 각 실시예 및 비교예에서의 측정치와 비교하였다. 각 실시예 및 비교예 각각의 측정과, DCM 법에 따른 측정의 상관 계수를 표 1 에 나타낸다.
측정법
 측정 키트
상관 계수
제 1 시약 제 2 시약
비교예 2 비교예 1
0.191
시약 E 시약 a
실시예 7
 실시예 1
0.792
시약 A 시약 a
실시예 8
 실시예 2
0.892
시약 B 시약 a
실시예 9
 실시예 3
0.826
시약 C 시약 a
실시예 10
 실시예 4
0.973
시약 D 시약 a
실시예 11 실시예 5
0.900
시약 C 시약 b
실시예 12
 실시예 6
0.991
시약 D 시약 b
표 1 의 비교예 2 와 실시예 7～12 의 비교로부터, 화합물 (I) 또는 화합물 (Ⅱ) 과 폴리음이온을 함유하는 키트를 사용한 측정에 있어서, DCM 와의 양호한 상관 관계가 확인되는 것이 판명되었다. 또한 실시예 9 와 실시예 10～12 의 비교로부터, 화합물 (I) 또는 화합물 (Ⅱ) 과 폴리음이온 외에, 알부민 또는 폴리옥시에틸렌알킬아민을 공존시킴으로써 DCM 와의 상관 계수가 보다 향상되는 것이 판명되었다.
본 발명에 의해, 동맥 경화 등의 질환 진단에 유용한 HDL 콜레스테롤의 측정 방법, 측정용 시약 및 측정용 키트가 제공된다.

Claims (15)

  1. 검체와, i) 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소 및 콜레스테롤 산화 효소, 또는, ⅱ) 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소, 산화형 보효소 및 콜레스테롤 탈수소 효소를, 도데실트리메틸암모늄클로라이드 및 도데실디메틸아민으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 물질 및 폴리음이온을 함유하는 수성 매체 중에서 반응시켜, 생성된 과산화수소 또는 환원형 보효소를 측정하는 것을 특징으로 하는 검체 중의 고밀도 리포 단백질 중의 콜레스테롤의 측정 방법.
  2. 제 1 항에 있어서,
    수성 매체가, 추가로 알부민, 폴리옥시에틸렌알킬아민 및 폴리옥시에틸렌알케닐아민으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 물질을 함유하는 방법.
  3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    폴리음이온이 덱스트란 황산 또는 그 염인 방법.
  4. 도데실트리메틸암모늄클로라이드 및 도데실디메틸아민으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 물질, 폴리음이온, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소, 콜레스테롤 산화 효소, 및, 과산화수소 측정용 시약을 함유하는 것을 특징으로 하는 고밀도 리포 단백질 중의 콜레스테롤 측정용 시약.
  5. 도데실트리메틸암모늄클로라이드 및 도데실디메틸아민으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 물질, 폴리음이온, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소, 콜레스테롤 탈수소 효소, 및, 산화형 보효소를 함유하는 것을 특징으로 하는 고밀도 리포 단백질 중의 콜레스테롤 측정용 시약.
  6. 제 5 항에 있어서,
    추가로 환원형 보효소 측정용 시약을 함유하는 시약.
  7. 제 4 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
    추가로 알부민, 폴리옥시에틸렌알킬아민 및 폴리옥시에틸렌알케닐아민으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 물질을 함유하는 시약.
  8. 제 4 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
    폴리음이온이 덱스트란 황산 또는 그 염인 시약.
  9. 제 7 항에 있어서,
    폴리음이온이 덱스트란 황산 또는 그 염인 시약.
  10. 제 1 시약 및 제 2 시약을 함유하는 고밀도 리포 단백질 중의 콜레스테롤 측정용 키트로서,
    도데실트리메틸암모늄클로라이드 및 도데실디메틸아민으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 물질 및 폴리음이온을 제 1 시약에 함유하고, 콜레스테롤 산화 효소를 제 2 시약에 함유하며, 과산화수소 측정용 시약을 제 1 시약, 제 2 시약 중 어느 하나 또는 양방에 함유하고, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소를 제 1 시약, 제 2 시약 중 어느 하나 또는 양방에 함유하는 것을 특징으로 하는 키트.
  11. 제 1 시약 및 제 2 시약을 함유하는 고밀도 리포 단백질 중의 콜레스테롤 측정용 키트로서,
    도데실트리메틸암모늄클로라이드 및 도데실디메틸아민으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 물질 및 폴리음이온을 제 1 시약에 함유하고, 콜레스테롤 탈수소 효소를 제 2 시약에 함유하며, 산화형 보효소를 제 1 시약, 제 2 시약 중 어느 하나 또는 양방에 함유하고, 콜레스테롤 에스테르 가수 분해 효소를 제 1 시약, 제 2 시약 중 어느 하나 또는 양방에 함유하는 것을 특징으로 하는 키트.
  12. 제 11 항에 있어서,
    추가로 환원형 보효소 측정용 시약을, 제 1 시약, 제 2 시약 중 어느 하나 또는 양방에 함유하는 키트.
  13. 제 10 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서,
    추가로 알부민, 폴리옥시에틸렌알킬아민 및 폴리옥시에틸렌알케닐아민으로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 물질을 제 1 시약, 제 2 시약 중 어느 하나 또는 양방에 함유하는 키트.
  14. 제 10 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서,
    폴리음이온이 덱스트란 황산 또는 그 염인 키트.
  15. 제 13 항에 있어서,
    폴리음이온이 덱스트란 황산 또는 그 염인 키트.
KR1020077024676A 2005-04-27 2006-04-27 고밀도 리포 단백질 중의 콜레스테롤의 측정 방법 KR101153759B1 (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JPJP-P-2005-00129319 2005-04-27
JP2005129319 2005-04-27
PCT/JP2006/308850 WO2006118199A1 (ja) 2005-04-27 2006-04-27 高密度リポ蛋白中のコレステロールの測定方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20080012854A KR20080012854A (ko) 2008-02-12
KR101153759B1 true KR101153759B1 (ko) 2012-06-13

Family

ID=37307997

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020077024676A KR101153759B1 (ko) 2005-04-27 2006-04-27 고밀도 리포 단백질 중의 콜레스테롤의 측정 방법

Country Status (13)

Country Link
US (1) US7811780B2 (ko)
EP (1) EP1876243B1 (ko)
JP (1) JP5112861B2 (ko)
KR (1) KR101153759B1 (ko)
CN (1) CN101166831B (ko)
AU (1) AU2006241793B2 (ko)
BR (1) BRPI0610378A2 (ko)
CA (1) CA2605329C (ko)
ES (1) ES2396143T3 (ko)
HK (1) HK1109916A1 (ko)
RU (1) RU2007143970A (ko)
TW (1) TWI372783B (ko)
WO (1) WO2006118199A1 (ko)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008143159A1 (ja) * 2007-05-18 2008-11-27 Kyowa Medex Co., Ltd. 低密度リポ蛋白中のコレステロールの測定方法及び測定用キット
AU2008311676B2 (en) * 2007-10-10 2014-05-29 Denka Company Limited Method and kit for quantitatively determining small, dense LDL cholesterol
JP5313537B2 (ja) * 2008-04-10 2013-10-09 富士フイルム株式会社 高密度リポ蛋白コレステロール測定用乾式分析素子
WO2011136316A1 (ja) * 2010-04-30 2011-11-03 協和メデックス株式会社 低密度リポ蛋白中のコレステロールの測定方法、測定用試薬及び測定用キット
US9493433B2 (en) * 2010-08-11 2016-11-15 Kyowa Medex Co., Ltd. Method for preserving aqueous solution containing leuco chromogen
WO2012124340A1 (ja) 2011-03-16 2012-09-20 協和メデックス株式会社 Ｈｄｌ亜分画中のコレステロールの測定方法、測定用試薬及び測定用キット
TWI456199B (zh) 2011-12-29 2014-10-11 Univ Nat Chiao Tung 生物檢測裝置及檢測方法
US9670525B2 (en) 2012-08-31 2017-06-06 Kyowa Medex Co., Ltd. Method for measuring cholesterol in high-density lipoprotein
WO2015030236A1 (ja) 2013-08-30 2015-03-05 積水メディカル株式会社 高比重リポ蛋白中のコレステロール測定方法および該方法に用いる試薬
US20160282367A1 (en) * 2013-11-25 2016-09-29 University of Washington Through its Center for Co mmercialization Methods for calibrated ion mobility analysis and uses thereof
JP6582388B2 (ja) * 2014-10-23 2019-10-02 東洋紡株式会社 高密度リポ蛋白コレステロールの測定方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004035816A1 (ja) 2002-10-16 2004-04-29 Kyowa Medex Co., Ltd. 高密度リポ蛋白中のコレステロールの測定方法および試薬

Family Cites Families (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3533288A1 (de) 1985-09-18 1987-03-26 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren und reagenz zur spezifischen bestimmung von hdl-cholesterin im serum
DE3636851A1 (de) 1986-10-29 1988-05-11 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren und reagenz zur spezifischen bestimmung des cholesterins der hdl-fraktion
JP2600065B2 (ja) * 1994-03-08 1997-04-16 協和メデックス株式会社 高密度リポ蛋白中のコレステロールの定量法
JP2653755B2 (ja) * 1994-03-08 1997-09-17 協和メデックス株式会社 高密度リポ蛋白中のコレステロールの定量法
JPH08116996A (ja) 1994-10-26 1996-05-14 Toyobo Co Ltd 血清または血漿中のｈｄｌ−コレステロールを測定する方法
JP2799835B2 (ja) 1995-01-31 1998-09-21 第一化学薬品株式会社 コレステロールの定量方法
JP3614514B2 (ja) 1995-06-21 2005-01-26 国際試薬株式会社 高比重リポ蛋白分画中のコレステロールの定量方法及び定量用試薬キット
EP0754948B1 (en) * 1995-07-21 2001-10-17 Wako Pure Chemical Industries, Ltd Method for measuring the amount of constituent contained in specific lipotrotein
JP3058602B2 (ja) * 1996-04-15 2000-07-04 デンカ生研株式会社 低密度リポ蛋白中のコレステロールの定量方法
JPH09285298A (ja) * 1996-04-22 1997-11-04 Iatron Lab Inc Ｈｄｌ−コレステロールの測定方法及び測定用試薬
WO1997040376A1 (fr) 1996-04-22 1997-10-30 Iatron Laboratories, Inc. Procede specifique de dosage du cholesterol des lphd et composition utilisee pour le dosage.
JP3193634B2 (ja) * 1996-05-29 2001-07-30 第一化学薬品株式会社 Ｌｄｌコレステロールの定量方法
CN1232496A (zh) * 1996-08-12 1999-10-20 藤泽药品工业株式会社 制备生物反应器的方法
US5925534A (en) * 1998-06-08 1999-07-20 Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Method for measuring LDL-cholesterol
DE60039418D1 (de) 1999-03-01 2008-08-21 Sysmex Corp Verfahren zum austesten biologischer probenkomponenten
JP2000325097A (ja) * 1999-05-21 2000-11-28 Showa Denko Kk リポ蛋白質コレステロールの測定方法及び測定試薬
JP4519239B2 (ja) * 2000-02-17 2010-08-04 デンカ生研株式会社 低密度リポ蛋白中のコレステロールの定量方法
JP4708531B2 (ja) * 2000-06-07 2011-06-22 シスメックス株式会社 Ｈｄｌ亜画分中のコレステロールの測定法
JP3686326B2 (ja) * 2000-11-08 2005-08-24 アークレイ株式会社 高密度リポタンパク質（ｈｄｌ）コレステロール測定用試験片
AU2003301324A1 (en) 2002-10-16 2004-05-04 Kyowa Medex Co., Ltd. Method and reagent for measuring cholesterol in high-density lipoproteins
KR101079386B1 (ko) * 2002-12-06 2011-11-02 덴카 세이켄 가부시키가이샤 소립자 저비중 리포단백질의 정량 방법

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004035816A1 (ja) 2002-10-16 2004-04-29 Kyowa Medex Co., Ltd. 高密度リポ蛋白中のコレステロールの測定方法および試薬
KR20050052542A (ko) * 2002-10-16 2005-06-02 교와 메덱스 가부시키가이샤 고밀도 리포 단백질 중의 콜레스테롤의 측정 방법 및 시약

Also Published As

Publication number Publication date
US20090280514A1 (en) 2009-11-12
EP1876243A4 (en) 2010-06-30
BRPI0610378A2 (pt) 2016-11-08
EP1876243A1 (en) 2008-01-09
TWI372783B (en) 2012-09-21
US7811780B2 (en) 2010-10-12
WO2006118199A1 (ja) 2006-11-09
RU2007143970A (ru) 2009-06-10
JP5112861B2 (ja) 2013-01-09
CA2605329C (en) 2014-08-05
CA2605329A1 (en) 2006-11-09
CN101166831A (zh) 2008-04-23
HK1109916A1 (en) 2008-06-27
AU2006241793B2 (en) 2011-03-24
AU2006241793A1 (en) 2006-11-09
CN101166831B (zh) 2011-07-20
EP1876243B1 (en) 2012-10-17
TW200720436A (en) 2007-06-01
JPWO2006118199A1 (ja) 2008-12-18
KR20080012854A (ko) 2008-02-12
ES2396143T3 (es) 2013-02-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101046898B1 (ko) 고밀도 리포 단백질 중의 콜레스테롤의 측정 방법 및 시약
KR101153759B1 (ko) 고밀도 리포 단백질 중의 콜레스테롤의 측정 방법
KR101326476B1 (ko) 렘난트형 리포단백질 (ｒｌｐ) 중의 콜레스테롤의 정량방법, 시약 및 키트
KR20090079887A (ko) 소입자 저밀도 리포단백질 중의 콜레스테롤의 정량 방법
JP4796489B2 (ja) 高密度リポ蛋白中のコレステロールの測定方法
KR20110102303A (ko) 저밀도 리포 단백 중의 콜레스테롤의 측정 방법, 측정용 시약 및 측정용 키트
KR20140001996A (ko) Hdl 소분획 중의 콜레스테롤의 측정 방법, 측정용 시약 및 측정용 키트
CN107267594B (zh) 高密度脂蛋白中的胆固醇的测定方法

Legal Events

Date Code Title Description
AMND Amendment
A201 Request for examination
AMND Amendment
E902 Notification of reason for refusal
AMND Amendment
E601 Decision to refuse application
J201 Request for trial against refusal decision
AMND Amendment
B701 Decision to grant
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20150908

Year of fee payment: 4

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20160427

Year of fee payment: 5

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20170504

Year of fee payment: 6

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20180427

Year of fee payment: 7

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20190515

Year of fee payment: 8