KR101125392B1 - 아로니아 추출물을 포함하는 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명에 따른 화장료 조성물은 아로니아(Aronia mandschurica) 추출물을 유효성분으로써 포함하는 것을 특징으로 한다.

아로니아, 블랙 초크베리(Black Chokeberry), 블랙 로원베리(Black Rowanberry), 항산화, 주름방지, 여드름방지, 항염증 효과

Description

아로니아 추출물을 포함하는 화장료 조성물{Cosmetic Composition comprising Extracts of Aronia mandschurica}

본 발명은 화장료 조성물에 관한 것이다. 보다 구체적으로 본 발명은 아로니아 추출물을 활성 성분으로 함유함으로써, 항산화 효과, 잔주름 개선효과, 여드름방지효과, 항염증효과, 미백효과 등을 갖는 화장료 조성물에 관한 것이다.

인간의 피부는 노화 과정에서 다양한 물리ㅇ화학적인 변화가 일어나는데, 그 원인으로는 크게 내적인 노화(intrinsic aging)와 광노화(photo-aging)로 구분되며 이에 관한 연구가 활발히 이루어지고 있다. 즉, 피부노화는 자외선, 스트레스, 질병상태, 환경인자, 상처, 나이가 들어감에 따른 프리라디칼의 활성화 등으로부터 야기될 수 있으며, 이런 상태가 심화될 경우 생체 내에 존재하는 항산화 방어망을 파괴하고, 세포 및 조직을 손상시켜 성인병 및 노화를 촉진하게 된다. 보다 구체적으로는 피부의 주요 구성물질인 지질, 단백질, 다당류 및 핵산 등이 산화되어 피부세포 및 조직이 파괴되고, 결국 피부노화 현상이 생겨나는 것이다. 특히 단백질의 산화는 피부의 결합조직인 콜라겐, 히아루론산, 엘라스틴, 프로테오글리칸, 피브로넥틴등이 절단되어 심한 과다 염증반응과 피부의 탄력에 지장을 주게 되고 이것이 더 심해질 경우 DNA의 변이에 의해 돌연변이, 암의 유발, 면역기능 저하의 사태에 이르게 된다.

그러므로 신체의 대사 과정 중 발생하는 프리라디칼이나 자외선 조사, 염증반응에 의해 매개되는 프리라디칼을 소거하여 세포막을 보호하고, 또한 이미 손상받은 세포는 활발한 신진대사에 의해 재생화시켜서 세포를 증식시켜야 피부를 빠르게 회복시키고 건강한 피부를 유지할 수 있다.

한편, 노화에는 프리라디칼 뿐만 아니라 MMP라는 효소가 관여하는데, 생체 내에서 콜라겐과 같은 세포외기질의 합성과 분해는 적절하게 조절되나 노화가 진행되면서 그 합성이 감소하며 콜라겐을 분해하는 효소인 기질 금속단백질 분해효소(MMP)의 발현이 촉진되어 피부의 탄력이 저하되고 주름이 형성된다. 또한 이러한 분해효소는 자외선 조사에 의해 활성화되기도 한다. 그러므로 세포내에서 활성화가 유도되는 MMP 발현을 조절하거나 그 활성을 억제할 수 있는 물질의 개발이 요구되고 있다.

다음으로, 색소 침착에 의한 피부노화를 들 수 있는데 피부색에 영향을 주는 색소로는 멜라닌, 멜라조이드, 카로틴, 헤모글로빈 등이 있다. 이중 가장 중요한 것은 멜라닌으로 생합성에 영향을 미치는 가장 큰 요인은 자외선과 체내 호르몬 분비 정도이다. 멜라닌은 자외선을 흡수 또는 산란시켜 자외선으로부터 피부가 손상되는 것을 방지하는데 큰 역할을 하는데, 특별한 최대흡수파장이 없으며 전 영역의 빛을 흡수한다. 또한 활성산소종을 제거하는 기능이 탁월하나, 때로는 멜라닌 자체가 활성산소를 발생시키기도 하며, 멜라닌 구조내의 카테콜이나 퀴논에 의하여 다른 물질을 환원시키거나 산화시키고, 멜라닌 자체가 자유라디칼의 성질을 나타내기도 한다.

멜라닌의 생합성은 아미노산의 일종인 티로신이 멜라노사이트의 멜라노좀에서 티로시나제에 의해 산화되어 디하이드록시 페닐알라닌(dihydroxy phenylalanine)으로 전환되는 것을 시작으로 계속되는 일련의 산화과정을 거쳐 갈색(pheomelanin), 흑색(eumelanin)의 중합체로 형성된다. 이러한 생합성 과정은 멜라노좀이라는 특수한 형태의 갈색 세포내 소기관에서 진행되며 멜라닌 과립을 포함한 멜라노좀은 핵 주변 부위에서 수지상 돌기 끝부분으로 이동, 케라티노사이트의 식세포작용에 의해 세포질 내로 이동하고 이들은 케라티노사이트의 핵 주변에 축적된다.

이미 아스코르빈산(일본특허공개 평4-9320호), 하이드로퀴논(일본특허공개 평6-192062호), 코직산(일본특허공개 소56-7710호), 알부틴(일본특허공개 평4-93150호) 및 일부의 추출물 등이 티로시나제 저해 활성을 가지고 있어 미백 화장료로 이용되고 있으나 화장품 제형 중에서의 안정성이 나빠 분해되어 착색되거나, 이취의 발생, 생체 레벨에서의 효능, 효과의 불분명 및 안전성 문제 등으로 그 사용이 제한되고 있는 실정이다.

또한, 남성형 탈모증은 남성호르몬 의존적이어서 남성호르몬의 양에 직접적인 관계가 있으며, 이에 따라 최근 남성호르몬 활성억제를 통한 탈모의 예방 및 치 료를 위한 많은 연구가 보고되고 있다. 한편, 남성호르몬의 분비상승에 의해 피지선의 기능이 상승되면 생성된 과잉의 피지가 모낭벽의 과각화로 인하여 모낭내에 정체되면서 생기는 면포가 여드름의 초기단계이다. 남성호르몬에 의한 탈모 및 여드름의 기전을 설명하면, 5알파-리덕타아제(5α-Reductase)는 피지선, 모낭, 전립선, 부고환 등의 남성 호르몬 반응성 조직에서 존재하며 남성 호르몬들 중 하나로서, 테스토스테론(testosterone)을 디하이드로테스토스테론 (dihydrotestosterone)으로 대사시키는데 관여하는 효소이며, 그 전환에는 NADPH를 필요로 한다. 또한, 테스토스테론(testosterone)은 남성 성충동, 골격근 증가, 남성외부생식기, 음낭성장, 정자형성 등에 관여하고, 디하이드로테스토스테론 (dihydrotestosterone)은 여드름, 피지증가, 탈모 및 전립선비대증 등의 해당 조직에서 관여한다(Diane et al. J.I.D. 1995). 따라서, 이 효소의 억제제를 사용하여 피지분비 억제제 및 탈모 방지제를 개발하려는 연구들이 활발히 진행되고 있다. 사춘기 이후에 남성 호르몬의 과량 분비는 여드름과 탈모를 유발하는데, 5알파-리덕타아제에 의하여 남성 호르몬의 활성형태인 디하이드로테스토스테론의 과량 생성을 막기 위해 5알파-리덕타아제 억제제를 사용하여 육모제 및 여드름방지제를 개발하려는 연구들이 활발이 진행되고 있다.

이제까지 화장품의 소재로서 사용된 원료들은 단순히 효소 활성만을 억제하는 것이 대부분이었으며 효소의 발현양은 조절하지 못하는 문제점이 있었다. 또한 최근 소비자들은 점차 특수한 조성에 따른 고품질의 기능적 특성을 가짐과 동시에 피부보호, 자극억제, 염증억제, 일광차단 등의 최소한의 부작용을 갖는 화장품의 사용을 요구하고 있고, 피부자극을 최소화하기 위해 종래의 화학물질 원료를 사용하는 대신에 천연재료를 이용한 화장품에 대한 소비자의 호응이 높아짐에 따라 천연재료를 화장품의 원료로써 개발할 필요성이 한층 제기되고 있다.

본 발명은 상술한 문제점들을 해결하기 위하여 안출된 것으로, 본 발명의 목적은 여러 천연물 중 장미과의 낙엽관목인 아로니아 추출물의 천연물로부터 제조된 추출물을 선택하여, 화장료의 원료로서의 효능을 확인하고, 그 사용 방법을 개발하여, 이 원료를 사용함으로써 소정의 기능성을 갖는 화장료를 제조할 수 있는 방법을 제공하는 것이다.

즉, 본 발명의 목적은 피부 화장료에 적용 가능하고 화장료에 함유시 항산화효과, 피부 잔주름 방지효과 등 우수한 항노화 효과를 나타내는 천연 추출물을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명의 목적은 화장료에 적용 시 여드름을 개선하고 항염증 효과를 나타내는 천연 추출물을 제공하는 것이다.

본 발명의 상기 및 기타의 목적들은 하기 설명되는 본 발명에 의하여 모두 달성될 수 있다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 아로니아(Aronia mandschurica) 추출물을 유효성분으로써 포함하는 것을 특징으로 한다.

본 발명은 항산화 효과와 MMP 저해 효과와 자외선 조사에 의한 MMP 발현 조절효과, 항산화 효과, 콜라겐 분해효소 활성 조절 효과, 피부 잔주름 개선 효과 등 우수한 항노화 효과와 자외선 조사 후 야기되는 항염증 효과를 나타내는 화장료 조성물을 제공하게 된다. 또한, 아로니아 추출물은 기미, 주근깨 및 피부 색소 침착의 원인이 되는 물질인 멜라닌 생성억제 효과 등의 미백작용을 나타낼 뿐 아니라 여드름방지 효과를 갖는 여드름균 항균활성 효과를 제공한다.

이하 본 발명의 내용을 상세히 설명한다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 아로니아 추출물을 주요 활성성분으로 함유하는 것을 특징으로 한다.

최근 여러 화학물질 등에 의한 피부 자극을 줄이기 위해 천연물을 사용한 화장품이 많이 개발되고 있다. 천연 재료는 피부에 부작용이 적을 뿐 아니라, 최근 천연 재료를 이용한 화장품에 대한 소비자들의 호응이 높아짐에 따라 화장품 원료로서 개발가치가 한층 늘어나고 있다. 이에, 본 발명자들은 이제까지 알려지지 않은 여러 천연물들에 있어서 화장품으로의 응용 가능성을 연구한 결과, 장미과 (Rosaceae)의 낙엽관목인 아로니아 천연물을 선정하고 이들로부터 추출물을 제조하여, 피부 항산화 효과, 콜라겐 합성효과, 피부 잔주름 완화효과, 여드름 방지효과 및 염증완화 효과를 측정한 결과 우수하므로 화장품으로서의 효능을 기대할 수 있다는 것을 발견하게 되었다.

아로니아는 블랙 초크베리(Black Chokeberry), 혹은 블랙 로원베리(Black Rowanberry) 라고도 불리우며 장미과인 Rosaceases과에 속하는 베리류의 식물 열매로 학명은 Aronia mandschurica이다. 원래는 북부 아메리카 지역 영하 20도의 추위와 5개월간의 강렬한 자외선 등 가혹한 환경에서 자생한다. 꽃은 산수유, 매실, 앵두와 같이 11~20일 정도 지속되고 9~11월 붉은 열매를 맺으며, 열매가 맛과 향이 좋아 과즙을 음료로 사용하는 등 다양한 식자재로서의 가치가 높다. 아로니아는 보통 한 가지당 약 10~15 kg 정도의 열매를 수확할 수 있다.

아로니아의 활성성분으로 각종 항산화 활성의 지표가 되는 안토시아닌과 탄닌, 클로로제닌산, 네오클로로제닌산 등이 함유 되어 있음이 이미 학계에 발표되었다. 특히 폴리페놀 및 안토시아닌의 함량이 매우 높아 항산화력(ORAC 기준) 역시 매우 우수한 것으로 보고된 적도 하다. 아로니아 안토시아닌은 자연계에 현존하는 천연물 중 가장 높은 안토시아닌을 함유하고 있는 것으로 나타났다. 포도의 80~180배, 바나나의 1,000~2,000배, 복분자, 크랜베리의 20~40배에 달하는 고함량과 활성력이 보고 된 바 있다.

아로니아의 경우 여타 허브류들, 특히 항산화활성이 높다고 알려져 있는 다양한 베리류들 중에서도 특이하게 높은 항산화활성을 발현하고 있다는 사실에 기인 하여 다양한 천연물들 중 아로니아를 선정하게 되었다.

본 발명에 사용된 아로니아 추출물은 아로니아로부터 침출, 전출하여 얻은 침출액, 또는 그 침출액을 다시 일부 또는 전부 농축하여 얻은 농축물, 또는 다시 그 농축물을 건조시켜 제조한 추출 엑기스 및 추출액 중에 함유되고 있는 주효과를 발휘하는 화학물질 그 자체를 포함한다.

한편, 본 발명에 따른 아로니아 추출물의 함량은 화장료 조성물 전체에 대하여 동결건조중량 기준 0.001 내지 30.0 중량%인 것이 바람직하다. 상기 추출물의 함량이 0.001 중량% 미만인 경우에는 피부개선 효과가 거의 없으며, 30.0 중량% 이상인 경우에는 함유량 증가에 대한 효과 증대 정도가 미미하여 경제적이지 못하기 때문이다.

또한 본 발명에 따른 화장료 조성물은 상기의 추출물 외에 본 발명이 목적으로 하는 주효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 바람직하게는 주효과에 상승효과를 줄 수 있는 다른 성분 등을 함유하는 것도 무방하다.

상기 아로니아 추출물은 조성물 전체에 대하여 동결건조중량기준 0.001 내지 30.0 중량% 로 조성물 내에 존재할 수 있다.

만약 상기 식물추출물이 추출물을 함유하는 용액의 형태로 존재한다면 당업자는 상기 농도 범위 내에서 본 발명에 따른 조성물 내에 이 용액의 양을 조절할 수 있을 것이다.

또한 본 발명에 따른 아로니아 추출물은 건조된 아로니아를 70 내지 85℃에서 10-95 %(V/V) 에탄올 수용액으로 추출하고 냉침하고 상기 결과 현탁액을 여과하 여 얻어진 여액을 50℃이하에서 감압농축하고 감압농축물을 동결건조하여 제조된다.

본 발명인 화장료 조성물은 추출용매로서 정제수, 메탄올, 에탄올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디클로로메탄, 헥산 및 그의 혼합물로부터 선택된 것을 사용한다.

또한 본 발명의 주제는 피부 미백제, 노화방지제, 여드름 개선 및 염증 완화제로 사용되는 화장료 조성물의 용도이다.

본 발명의 조성물은 수성, 수성-알콜성 또는 오일성 용액, 수중유 또는 유증수 또는 다중 에멀전, 수성 또는 오일성 겔, 액체, 페이스트성 또는 고체 무수 생성물, 소구체를 사용한 수성 상에서의 오일분산물의 형태일 수 있으며 보다 바람직하게는 이온성 및/또는 비이온성 형태의 지질 소포체의 형태일 수 있다.

본 조성물은 다소 유체일 수 있으며, 백색 또는 유색크림, 연고, 밀크로션, 유액(serum), 에센스, 페이스트 또는 무스의 외관을 가질 수 있다. 이는 선택적으로 에어로졸 형태로 피부에 적용될 수도 있고, 고체 형태 예컨대, 스틱의 형태일 수도 있다. 이는 피부용 케어 제품 및/또는 메이크업 제품으로서 사용될 수도 있다.

공지된 방식으로 본 발명에 따른 조성물은 또한 화장 분야에서 통상적인 보조제, 예컨대 친수성 또는 친지성 겔화제, 친수성 또는 친지성 활성제, 보존제, 항산화제, 용매, 방향제, 충전제, 차단제, 안료, 흡취제 및 염료를 함유할 수 있다. 이들 다양한 보조제의 양은 당해 분야에서 통상적으로 사용되는 양이며, 예컨대 조 성물 총중량에 대해 0.01 중량% 내지 20중량 %이다. 그 성질에 따라 이러한 보조제는 지방상, 수성상, 지질 소포체 및/또는 나노 입자에 도입될 수 있다.어떠한 경우라도 보조제 및 그 비율은 본 발명에 따른 화장료 조성물의 바람직한 성질에 악영향을 미치지 않도록 선택될 것이다.

본 발명은 아래 설명하는 실시예에 의하여 보다 구체화될 것이다. 그러나, 아래 실시예는 본 발명의 실시 형태에 대한 구체적인 예시에 불과할 뿐, 본 발명의 보호범위를 한정하거나 제한하고자 하는 것은 아니다.

실시예

실시예 1: 아로니아 추출물 제조

세절하여 음건한 아로니아를 95%(V/V) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #5 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50℃ 이하에서 감압농축 및 동결 건조하였다. 감압농축물 및 동결건조물이 0.001내지 30.0중량% 함유되게 정제수, 에탄올, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 중에서 선택된 1종 이상의 용매를 사용하여 분산/용해하여 아로니아 추출물을 제조하였다.

실시예 2: NBT법을 이용한 항산화 효과 측정 실험

실시예 2는 실시예 1에서 수득한 아로니아 추출물의 항산화 효과를 측정하기 위해 실험실 조건에서 레티놀과 BHT와 같은 항산화제를 비교샘플로 하여, NBT법을 이용, 항산화 활성을 측정하였다.

항산화 효과를 측정하기 위해서 크산틴과 크산틴옥시다제에 의해 생성되는 활성산소를 NBT법에 의해 측정하고 피검물질이 활성산소를 제거하는 효과, 즉 활성산소 소거효과를 평가한다. 크산틴과 크산틴옥시다제에 의해 활성산소를 생성시키고, 이 활성산소가 니트로블루테트라졸리움(Nitro Blue Tetrazolium;NBT)과 반응하여 생성되는 청색을 파장 560nm에서 측정하는 것으로 활성산소 소거율을 측정한다.

측정방법으로서,

1. 0.05M Na2CO3 ------------------------------------ 2.4ml

2. 3mM 크산틴 용액---------------------------------- 0.1ml

3. 3mM EDTA 용액------------------------------------ 0.1ml

4. BSA 용액----------------------------------------- 0.1ml

5. 0.72mM NBT 용액---------------------------------- 0.1ml

6. 크산틴 옥시다제 용액----------------------------- 0.1ml

7. 6mM CuCl2 용액----------------------------------- 0.1ml

① 바이엘병에 1,2,3,4,5를 가하고 여기에 시료용액 0.1ml을 첨가하고 25℃에서 10분간 방치한다.

② 6을 가하여 빨리 교반하고 25℃에서 20분간의 배양을 개시한다.

③ 그 후 7을 가하여 반응을 정지시키고 560nm에서의 흡광도 St를 측정한다.

④ 공시험은 시료용액 대신에 증류수를 사용한 것을 상기와 똑같이 조작해 흡광도 Bt를 측정한다.

⑤ 역시, 시료용액의 블랭크(Blank)는 6대신에 증류수를 사용해 똑같이 조작 하여 흡광도 Bo를 측정한다.

효과의 결과는 수학식 1에 의하여 산출하였으며, 결과는 표 1과 같다.

억제율(%) = 〔1-(St-So)/(Bt-Bo)〕X 100

상기 수학식1에서 St는 시료용액의 효소 반응 후의 560nm에서의 흡광도, Bt는 공시험용액의 효소 반응 후의 560nm에서의 흡광도, So는 시료용액의 효소 무첨가시 반응 전의 560nm에서의 흡광도, Bo는 공시험용액의 효소 무첨가시 반응 전의 560nm에서의 흡광도이다.

시험결과 표 1과 같이 0.1% 처리농도에서 시험한 시료 모두에서 우수한 항산화 효과를 확인할 수 있었고, 아로니아 추출물은 레티놀 및 BHT과 비슷한 우수한 항산화 효과가 있음이 확인되었다.

실시예 3: DPPH법을 이용한 항산화 효과 측정 실험

실시예 3은 실시예 1에서 수득한 아로니아 추출물의 항산화 효과를 측정하기 위해 실험실 조건에서 녹차추출물과 비타민 E와 같은 항산화제를 비교 샘플로 하여 DPPH법을 이용, 항산화 활성을 측정하였다.

DPPH법은 2,2-Di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl free radical (DPPH)라는 유리기를 사용하여 환원력에 의한 항산화 활성을 측정한다. 피검물질에 의해 DPPH가 환원되어 흡광도가 감소하는 정도를 공시험액의 흡광도와 비교하여 파장 560nm에서 자유라디칼 소거율을 측정한다.

사용한 시약으로서는 2,2-Di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl free radical (Aldrich Chem. Co., MW=618.76) 0.1mM 용액으로서 61.88mg을 메탄올에 용해하여 100ml로 한다.

측정방법으로서

① 96-웰 플레이트에 0.1mM DPPH 용액 0.15ml에 시료용액 0.15ml를 가하여 빨리 교반하고 25℃에서 10분간의 배양을 개시한다.

② 그 후 560nm에서의 흡광도 St를 측정한다.

③ 공시험은 시료용액 대신에 증류수를 사용한 것을 상기와 똑같이 조작해 흡광도 Bt를 측정한다.

④ 역시, 시료용액의 블랭크(Blank)는 0.1mM DPPH 용액 대신에 메탄올을 사용해 똑같이 조작하여 흡광도 Bo를 측정한다.

효과의 결과는 수학식 2에 의하여 산출하였으며, 결과는 표 2에 나타내었다.

억제율(%) = 〔1-(St-So)/(Bt-Bo)〕X 100

상기 수학식 2에서 St는 시료용액의 자유라디칼 소거 후의 560nm에서의 흡광 도, Bt는 공시험용액의 자유라디칼 소거 후의 560nm에서의 흡광도, So는 시료용액의 자유라디칼 무첨가시 반응 전의 560nm에서의 흡광도, Bo는 공시험용액의 자유라디칼 무첨가시 반응 전의 560nm에서의 흡광도이다.

표 2에 나타난 바와 같이 아로니아 추출물은 0.01% 농도에서 녹차추출물과 비타민E 보다 우수한 항산화 효과를 가지고 있었다.

실시예 4: in vitro MMP-1 inhibition assay

기질 금속단백질분해효소(MMP-1) 저해 활성은 생화학적 모델에서 측정하였는데 이는 정제된 콜라게나제 및 이의 기질인 플루오레세인에 접합된 콜라겐과 젤라틴의 이용을 기초로 한다(EnzChek(상표명) 젤라티나제/콜라게나제 키트, 몰큘라 프루브). 클로스트리디움 히스토리티컴으로부터 정제된 콜라게나제를 상기 EnzChek (상표명)젤라티나제/콜라게나제 키트내에 공급하였다. 돼지 피부로부터 정제하고 플로오레세인에 접합된 DQ-콜라겐과 0.05M 트리스-HCl, 0.15M NaCl, 5mM CaCl2 및 0.2mM 나트륨 아지드(pH 7.6)로 이루어지는 반응 완충액은 EnzChek(상표명) 젤라티나제/콜라게나제 키트(몰큘라 프로브스)를 이용하였다. 아로니아 추출물은 상기 반응 완충액 내에 용해시켰다. 이는 4; 2; 0.4; 0.2; 0.1%(w/v)에서 테스트하였다. 테스트 추출물의 희석액은 25ug/ml의 DQ-콜라겐 및 0.1U/ml의 콜라게나제와 함께 실온에서 15분, 45분, 120분 동안 항온처리하였다.

각각의 실험조건에서 콜라게나제와 DQ-콜라겐 혼합물에 상응하는 대조용 혼합물 (control)도 동일하게 항온처리하였다.

또한 각각의 실험 조건에서 Blank, 이하 '효소 비함유 blank'이라 칭하는 샘플은 DQ-콜라겐의 존재 및 콜라게나제의 부재하에서 항온처리하였다. 각각의 실험은 3회 수행하였다.

15분, 45분, 120분 경과 후 DQ-콜라겐의 분해에 상응하는 신호는 형광측정기(여기:485nm, 방출 505nm)로 측정하였다.

'효소 비함유 blank' 형광값을 기준으로 하여 각각의 샘플의 형광값을 측정하였다. 결과는 샘플당 형광 단위 및 대조군에 대한 변이율(%)로 나타냈다.

결론적으로 선택된 실험 조건하에서 0.04 내지 4%(v/v)에서 테스트된 아로니아 추출물은 투여량 의존성으로 항콜라게나제/젤라티나제 활성을 보유하였다.

결과는 표 3에 나타난 바와 같이 아로니아 추출물은 0.04% 처리시 클로스트리디움 콜라게나제의 콜라겐 분해활성의 81%를 억제하였으며 이는 녹차추출물의 저해 효과보다 우수한 것으로 확인되었다.

실시예 5: 자외선 조사 후 아로니아 추출물에 의한 MMP-1 발현억제 평가

본 실시예는 실시예 1에서 수득한 아로니아 추출물의 UV 조사 및 시료 첨가 후 MMP-1 농도를 측정하기 위해서 ELISA를 실시하였다.

UV 챔버를 이용하여 인간 진피 섬유아세포에 UVA를 5J/㎠의 에너지로 조사한다. 자외선 조사량과 배양시간은 예비 실험을 통하여 섬유아세포에서 MMP 발현량이 최대가 되는 조건을 확립하였다. 음성 대조군은 은박지로 싸서 UVA의 환경에 같은 시간 유지하였다. UVA 방출량은 UV 라디오미터를 이용하여 측정하였다. UVA가 조사되는 동안의 세포는 이전에 분주된 배지 그대로이고 UVA를 조사 한 후 샘플이 들어간 배지로 교환하여 24시간 배양 후 배지를 회수하여 96-웰 플레이트에 코팅한다. 일차항체(MMP-1 (Ab-5) 단일클론항체와 MMP-2(Ab-3) 단일클론항체)를 처리하고 37℃ 에서 60분 반응시킨다. 이차항체인 안티마우스 IgG(whole mouse, alkaline phosphatase conjugated)를 다시 60분 정도 반응시킨 후, 알카린 포스파타제 기질 용액(1mg/mlρ-nitrophenyl phosphate in diethanolamine 완충용액)을 상온에서 30분간 반응시키고 마이크로플레이트 리더로 405nm 에서 흡광도를 측정한다. 대조군으로는 시료를 첨가하지 않은 것을 사용한다.

결과는 표 4에 나타난 바와 같이, 자외선 조사시에 발현이 유도되는 MMP-1에 대하여, 시료를 처리하지 않은 대조군에 비하여 아로니아 추출물은 20% 이상의 억제율을 보였으며 이는 대조군으로 사용한 레티놀의 억제율보다 우수한 결과이다.

실시예 6: 자외선 조사에 의한 염증성 사이토카인 발현 억제효과

본 실시예는 실시예 1에서 수득한 아로니아 추출물의 항염증효과를 확인하기 위해 자외선 조사에 의해 발현되는 염증성 사이토카인 발현 억제정도를 평가한 것이다.

사람의 표피조직에서 분리한 섬유아세포(Fibroblast)를 24-웰 시험 플레이트에 5X10⁴개씩 넣고 24시간동안 부착시켰다. 각 웰을 PBS로 1회 세척하고 각 웰에 500㎕의 PBS를 넣었다. 이 섬유아세포에 자외선B(UVB) 램프(Model : F15T8, UV B 15W, Sankyo Dennki사, Japan)를 이용하여 자외선 10mJ/㎠를 조사한 후 PBS를 덜어내고 세포배양 배지(DMEM에 FBS가 첨가되지 않은 배지) 350㎕를 첨가하였다. 여기에 평가하고자 하는 아로니아 추출물을 처리한 후 5시간동안 배양하였다. 배양 상층액을 150㎕취하여 IL-1α를 정량함으로서 아로니아 추출물의 염증성 사이토카인 발현억제효과를 판단하였다. IL-1α의 양은 효소면역분석법(Enzyme-linked Immunosorbent Assay;ELISA)을 이용하여 정량화하였으며, IL-1α의 생성율은 수학식 3에 의해 계산하였다.

염증성 사이토카인 발현 억제율(%) =〔1-(St-Bo)/(Bt-Bo)〕X 100

상기 수학식 3에서 Bo는 자외선 조사하지 않고 시료 처리하지 않은 웰의 IL-1α 생성량, Bt는 자외선 조사하고 시료를 처리하지 않은 웰의 IL-1α 생성량, St는 자외선 조사하고 시료를 처리한 웰의 IL-1α 생성량이다.

실험결과 아래 표 5에 나타난 바와 같이 아로니아 추출물은 자외선에 의한 염증성 사이토카인인 IL-1α의 생성을 0.01% 농도에서 56% 억제하여, 자외선에 의한 염증 발생을 낮은 농도에서 효과적으로 방어함을 알 수 있다.

실시예 7: 항균력 시험(Paper Disc Test)

본 실시예 7은 실시예 1에서 수득한 아로니아 추출물의 여드름균에 대한 항균력을 확인하기 위한 페이퍼 디스크 테스트(Paper Disc Test)를 실시하였다.

먼저, 여드름 발생원인의 피부상세균인 프로피오니박테리움 아크네 (Propionibacterium acnes)를 활성화시키기 위하여 BHI액체배지(Brain-Heart Infusion Broth;3.7%)에서 48시간 전배양하였다. 이렇게 준비한 균배양액을 BHI고체배지(Brain-Heart Infusion Broth;3.7%;agar1.5%)에 0.1㎖씩 도말한 후 건조시켰다. 실시예 1에서 수득한 아로니아 추출물을 95% 에탄올 수용액에 12%(W/v)로 희석하여 직경 8㎜의 paper disc에 50㎕씩 점적한 후 앞서 준비한 고체배지 위에 올려 놓은 후 이것을 35℃ 혐기 배양조에서 3일간 배양하였다.

Paper disc 주변에 생긴 균 성장 저지 영역을 관찰하고 저지환의 크기를 측정함으로써 항균력을 평가하였다. 그 결과, 아로니아 추출물의 균 성장 저지환의 크기는 21㎜인 것으로 나타났다.

실시예 8 및 비교예 1: 피부 탄력개선 효과

본 실시예 8은 실시예 1에서 수득한 아로니아 추출물을 함유한 화장료를 제조하여 사람을 대상으로 피부 탄력개선 효과를 비교예 1과 비교실험을 행하여 평가하였다.

비교실험에 사용된 화장료는 크림형태이고, 그 조성은 표 6에 나타낸 바와 같다. 우선 표 7에 기록되어 있는 나)상을 가열하여 70℃ 에 보존한다. 이것에 가)상을 가하여 예비유화 후 호모믹서로 균일하게 유화하고 다음에 서서히 냉각하여 크림(실시예 8, 비교예 1)을 제조한다. 실험자(20세-35세의 여성) 15명을 대상으로 얼굴 오른쪽 부위에는 실시예 8에서 제조된 크림을 얼굴 왼쪽 부위에는 비교예 1에서 제조된 크림을 각각 1일 2회씩 연속 3개월간 도포하였다.

실험완료 후 피부 탄력 개선 효과는 제품 사용 전과 2개월간 사용 후에 피부탄력측정기(cutometer SEM 575, C+K Electronic Co., Germany)를 이용하여 측정하였다. 실험결과는 하기 표 8에 Cutometer SEM 575의 ΔR8값으로 기재하였는데 R8값은 피부의 점탄성(viscoelasticity)의 성질을 나타낸다.

표 7에서 나타난 바와 같이 아로니아 추출물을 함유한 크림을 도포한 실험자의 피부 탄력개선 효과가 우수함을 알 수 있다.

주)단위: 중량%

n=15, p＜0.05

실시예 9 및 비교예 2

본 실시예는 실시예 1에서 수득한 아로니아 추출물을 함유한 화장료를 제조하여 사람을 대상으로 피부 미백효과를 비교예 2와 비교실험을 행하여 평가하였다.

비교실험에 사용된 화장료는 크림형태이고, 그 조성은 표 8에 나타낸 바와 같다. 우선 표 8에 기록되어 있는 나)상을 가열하여 70℃에 보존한다. 이것에 가)상을 가하여 예비유화 후 호모믹서로 균일하게 유화하고 다음에 서서히 냉각하여 크림(실시예 9, 비교예 2)을 제조한다. 실험자 (20세-35세의 여성) 15명을 대상으로 얼굴 오른쪽 부위에는 실시예 9에서 제조된 크림을, 얼굴 왼쪽 부위에는 비교예 2에서 제조된 크림을 각각 1일 2회씩 연속 2개월간 도포하였다. 시험 완료 후 얼굴 좌우 양편의 도포 부위 피부를 화상분석기 및 피부색의 변화를 크로마메타 (Minolta CR300)를 이용하여 색의 밝기 변화(ΔL)를 측정하고, 복수의 숙련자에 의한 객관적 육안 관찰과 피검자에 의한 주관적 육안관찰을 실시하여 하기 등급 분류에 따라 효과를 측정하였다. 그 결과를 하기 표 9에 나타내었다. 이때 미백효능 정도를 다음의 7등급으로 분류하여 평가하였다.

미백효능 평가 기준

-3: 매우 악화 -2: 악화 -1: 약간 악화 0: 변화 없음

1: 약간 개선 2: 개선 3: 매우 개선

표 9에서 나타낸 바와 같이 아로니아 추출물을 함유한 크림을 도포한 실험자의 안면 피부에서 미백효과가 우수함을 알 수 있다.

주)단위: 중량%

아래 특허청구범위에 기재된 본 발명의 균등 범위의 변형 내지 변경은 이 분야의 통상의 지식을 가진 자에 의하여 용이하게 이용될 수 있으며, 이러한 변형이나 변경은 모두 본 발명의 영역에 포함되는 것으로 볼 수 있다.

Claims (4)

1. 건조된 아로니아를 70 ~ 85 ℃ 에서 용매 추출하고, 추출된 용액을 냉침하여 현탁액을 얻고, 상기 현탁액을 여과하여 감압농축한 다음 동결건조하여 제조된 아로니아(Aronia mandschurica) 추출물 1 중량부; 및

   상기 아로니아 추출물 1 중량부에 대하여,

   프로필렌 글리콜 5 중량부;

   스테아릴 알콜 8 중량부;

   스테아린산 2 중량부;

   스쿠알란 4 중량부;

   2-옥틸도데실알콜 6 중량부;

   폴리옥시에틸렌 알콜에스테르 3 중량부; 및

   글리세릴모노스테아린산 아스테르 2 중량부;

   로 이루어지는 것을 특징으로 하는 아로니아 화장료 조성물.
2. 제1항에 있어서, 상기 용매 추출에서 사용되는 용매는 정제수, 메탄올, 에탄올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디클로로메탄 및 헥산으로부터 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는 아로니아 화장료 조성물.
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