KR100997174B1 - 혈관 신생 억제제 - Google Patents

Abstract

본 발명은 혈관 신생 관련 장애의 치료 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 혈관 신생 관련 장애를 가진 대상에게 하기 화학식 (I)로 표시되는 화합물 유효량을 투여하는 단계를 포함한다:

(화학식 (I))

(상기 화학식 (I)에서,

Ar₁, Ar₂ 및 Ar₃는 각각 독립적으로 페닐, 티에닐, 푸릴, 피롤릴, 피리디닐 또는 피리미디닐이고, R₁, R₂, R₃, R₄, R₅ 및 R ₆는 각각 독립적으로 R, 니트로, 할로겐, C(O)OR, C(O)SR, C(O)NRR', (CH₂)_mOR, (CH₂)_mSR, (CH₂ )_mNRR', (CH₂)_mCN, (CH₂)_mC(O)OR, (CH₂)_mCHO, (CH₂)_mCH=NOR이거나; 또는 R₁ 및 R₂가 함께, R₃ 및 R₄가 함께, 또는 R₅ 및 R₆가 함께 O(CH₂)_mO이되, R 및 R'은 각각 독립적으로 H 또는 C₁∼C₆의 알킬이고, m은 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고, n은 0, 1, 2 또는 3임).

융합 피라졸릴 화합물, 혈관 신생, 암, 치료 방법

Description

혈관 신생 억제제 {ANGIOGENESIS INHIBITORS}

본 발명은 융합 피라졸릴 화합물(fused pyrazolyl compound)을 이용한 혈관 신생 억제 방법에 관한 것이다.

혈관 신생(angiogenesis)이란, 새로운 혈관을 형성하는 것으로서, 상처의 치유, 또는 부상을 당한 후에 손상된 조직에서의 혈류 회복을 위해 건강한 신체에서 진행되는 작용이다. 이러한 혈관 신생 과정은 다양한 양성 및 음성 조절 인자들에 의해 치밀하게 조절된다. 그러나, 각종 질환 상태에서는 이러한 신생 혈관 형성에 대한 신체의 조절 능력을 상실하게 된다.

과도한 신생 혈관의 성장은 암(cancer), 연령 관련 황반 변성(age-related macular degeneration), 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis), 건선(psoriasis)과 같은 병리 상태에 의해 유발된다. 이 같은 과도한 혈관 성장으로 인해, 질환이 있는 조직에 신생 혈관이 공급되어 정상 조직들이 파괴된다. 암의 경우에는 신생 혈관들이 종양 세포를 순환시켜 다른 조직에 기생하게 한다.

신생 혈관의 형성은 혈관벽을 형성하는 내피 세포의 이동 및 분열 단계를 포함하는 일련의 순차적인 단계를 통해 일어난다. 내피 세포의 성장 및 이동을 활성화하는 단백질로는 약 15종이 알려져 있다. 따라서, 산생 혈관의 형성은, 예를 들 면, 안지오게닌(angiogenin), 표피 성장 인자, 에스트로겐, 섬유 모세포 성장 인자, 인터루킨(inerleukin) 8, 프로스타글란딘 E1 및 E2, 종양 괴사 인자, 혈관 내피 성장 인자 또는 과립구 집락 자극 인자(granulocyte colony-stimulating factor) 등과 같은 활성화 단백질을 억제하는 억제제에 의해 억제될 수 있다.

과도한 혈관 신생 관련 장애로는 암(고형 종양 및 혈액 종양 둘 다 포함됨), 심장 혈관 질환(예를 들면, 죽상경화증(atherosclerosis)), 만성 염증(예를 들면, 류마티스 관절염 또는 크론병(Crohn's disease)), 당뇨병(예를 들면, 당뇨망막병증), 건선, 자궁내막증(endometriosis) 및 비만증(adiposity)이 포함된다. 이에 대해서는 예를 들면, Pharmacological Reviews 52; 237-268, 2001을 참조한다. 이러한 장애를 치료 또는 방지하기 위한 약제로서, 혈관의 신생을 효과적으로 억제하는 화합물이 필요한 실정이다.

본 발명의 일면으로서, 혈관 신생 관련 장애(예를 들면, 심장 혈관 질환, 만성 염증, 당뇨병, 건선, 자궁내막증 또는 비만증)의 치료 방법이 제공된다. 상기 방법은 혈관 신생 관련 장애를 가진 대상에게 하기 화학식으로 표시되는 화합물 유효량을 투여하는 단계를 포함한다:

(화학식)

(상기 화학식에서,

Ar₁, Ar₂ 및 Ar₃는 각각 독립적으로 페닐, 티에닐, 푸릴, 피롤릴, 피리디닐 또는 피리미디닐이고,

R₁, R₂, R₃, R₄, R₅ 및 R₆는 각각 독립적으로 R, 니트로, 할로겐, C(O)OR, C(O)SR, C(O)NRR', (CH₂)_mOR, (CH₂)_mSR, (CH₂) _mNRR', (CH₂)_mCN, (CH₂)_mC(O)OR, (CH₂)_mCHO, (CH₂)_mCH=NOR이거나; 또는 R₁ 및 R ₂가 함께, R₃ 및 R₄가 함께, 또는 R₅ 및 R₆가 함께 O(CH₂)_mO이되,

R 및 R'은 각각 독립적으로 H 또는 C₁∼C₆의 알킬이고,

m은 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고,

n은 0, 1, 2 또는 3임).

상기 화학식에서, (CH₂)_m은 분지형 또는 선형일 수 있다. 그리고, 전술한 임의의 치환기에서의 좌측 원자가 상기 융합 피라졸릴환에 더 근접해 있음을 유의 해야 한다. 아울러, 상기 융합 피라졸릴 화합물에 1개 이상의 R 또는 (CH₂)_m 모이어티가 존재하는 경우에는 상기 R 또는 (CH₂)_m 모이어티가 서로 동일할 수도 있고 상이할 수도 있다.

상기 화합물의 한 하부집합은 상기 화학식에서 Ar₁, Ar₂ 및 Ar₃가 각각 페닐 또는 푸릴인 화합물이다. 또한, 상기 화합물의 다른 하부집합은 상기 화학식에서 각각의 R₁, R₂, R₅ 및 R₆가 H이고, n이 1인, 이를테면, 1-벤질-3-(5'-하이드록시메틸-2'-푸릴)인다졸(화합물 1)이다.

본 명세서에 사용된 용어 "Ar"은 아릴기 및 헤테로아릴기 모두를 칭한다. 상기 아릴기는 적어도 1개의 방향족환을 갖는 탄화수소환 시스템으로서, 그 예로서 페닐기를 들 수 있다. 상기 헤테로아릴기는 O, N 또는 S와 같은 적어도 1개의 헤테로원자를 함유하는 적어도 1개의 방향족환을 갖는 탄화수소환 시스템이다. 이 헤테로아릴기를 예시하면 티에닐, 푸릴, 피롤릴, 피리디닐 및 피리미디닐을 들 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. "Ar"은 그 환(ring)에 1개, 2개, 3개 또는 그 이상의 치환체를 포함할 수 있다. 상기 화학식에서 R₁, R₂, R₃, R₄ , R₅ 및 R₆으로서 지정된 것(전술한 것을 참조) 이외에도, 상기 치환체가 또한 니트로, C₂∼C₆의 알케닐, C₂∼C₆의 알키닐, 아릴, 헤테로아릴, 사이클릴 또는 헤테로사이클릴일 수 있다. 본 명세서에 사용된 바와 같이, 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 아릴, 헤테로아릴, 사이클릴 및 헤테로사이클릴은 선택적으로 C₁∼C₆의 알킬, 할로겐, 아미노, 하이드 록시, 메르캅토(mercapto), 시아노 또는 니트로로 치환된다. 또한, 용어 "알킬"은 선형 알킬과 분지형 알킬 모두를 칭하는 것임에 유의한다.

전술한 바와 같은 융합 피라졸릴 화합물은 상기 화합물 자체뿐만 아니라, 적용 가능한 경우, 그의 염 및 전구약물을 포함한다. 상기 염은 예를 들면, 융합 피라졸릴 화합물 상의 음전하를 띄는 치환체(예: 카르복실레이트)와 양이온 사이의 상호 작용에 의해 형성될 수 있다. 상기 양이온으로서 적절한 것을 예시하면 소듐 이온, 칼륨 이온, 마그네슘 이온, 칼슘 이온, 및 테트라메틸암모늄 이온과 같은 암모늄 이온을 들 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 이와 유사한 방법으로, 양전하를 띄는 치환체(예: 아미노)와 음전하를 띄는 대이온(counterion)을 반응시켜 상기 염을 형성할 수도 있다. 상기 대이온으로서 적절한 것을 예시하면 클로라이드, 브로마이드, 이오다이드(iodide), 설페이트, 니트레이트, 포스페이트 또는 아세테이트를 들 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 상기 화합물의 전구약물을 예시하면 에스테르 및 기타 약학적으로 허용 가능한 유도체를 들 수 있으며, 이러한 전구약물은 대상에 투여 시에 전술한 융합 피라졸릴 화합물을 제공할 수 있는 것들이다.

또한, 전술한 화합물은 암(예: 폐암)의 치료에도 이용될 수 있다. 이를 보다 상세하게 설명하면, 치료를 위해 1종 이상의 상기 화합물을 암 질환이 있는 대상에게 유효량으로 투여하는 것이다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, "암(cancer)"이란 세포 종양을 칭한다. 암 세포는 자율적인 성장 능력이 있어, 급속한 세포 증식을 특징으로 하는 비정상 상태 또는 상황을 초래한다. 용어 "암"은 병리 조직학적 유형이나 침입 단계와 무 관하게, 모든 유형의 암성 성장(cancerous growth) 또는 종양 발생 과정(oncogenic process), 전이성 조직(metastatic tissue) 또는 악성 형질 전환된 세포(malignantly transformed cell), 조직, 또는 기관을 포함하는 의미이다. 이러한 암을 예시하면, 백혈병, 육종, 골육종, 림프종, 멜라닌종, 난소암, 피부암, 고환암, 위암, 췌장암, 신암, 유방암, 전립선암, 결장직장암, 두경부암(cancer of head and neck), 뇌종양(brain cancer), 식도암, 방광암, 부신피질암(adrenal cortical cancer), 폐암, 기관지암, 자궁내막암, 비인두암(nasopharyngeal cancer), 자궁경부암 또는 간암, 또는 원발 부위 불명암(cancer of unknown primary site)과 같은 암종 및 육종을 들 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

또한, 전술한 질환의 치료용, 및 전술한 치료를 위한 약제 제조용 조성물과 같은 용도에 적용하기 위한, 전술한 1종 이상의 융합 피라졸릴 화합물을 포함하는 조성물 역시 본 발명의 범위 내에 포함된다.

본 발명의 기타 특징, 목적 및 이점은 본 발명의 상세한 설명 및 청구의 범위에 명백하게 나타날 수 있다.

본 발명의 방법을 수행하는데 사용되는 융합 피라졸릴 화합물은 동 기술 분야의 당업자들에게 공지된 방법에 따라 제조될 수 있다(예를 들면, 미국특허 제5,574,168호를 참조). 상기 융합 피라졸릴 화합물의 제조 방법은 하기의 방법을 포함한다. 상기 융합 피라졸릴 화합물을 제조하기 위해 먼저, 아릴카르보닐 클로라이드를 또 다른 아릴 화합물과 커플링시켜 아릴아릴케톤을 제조한다. 상기 아릴 화합물 중 하나는 선택적으로 단일 치환 또는 다중 치환된다. 그런 다음, 아릴기 가 선택적으로 단일 치환 또는 다중 치환되어 있는 아릴알킬히드라진과 상기 케톤을 반응시켜, 3개의 아릴기를 함유하는 히드라존을 형성한다. 이어서, 히드라존기가 알킬렌 링커에 의해 융합 피라졸릴 코어로 전환되고, 또 다른 아릴기는 상기 피라졸릴 코어의 4번 위치 탄소 및 5번 위치 탄소에서 융합되며, 세 번째 아릴기는 상기 피라졸릴 코어의 3번 위치 탄소에 직접 연결된다. 그리고, 상기 아릴기 중 임의의 아릴기 상의 치환체를 변형시켜 융합 피라졸릴 화합물의 유도체를 얻을 수 있다.

전술한 합성 경로에 사용된 화학 물질을 예시하면, 용매, 반응제, 촉매, 보호기 및 탈보호기 시약을 들 수 있다. 나아가, 최종적으로 상기 융합 피라졸릴 화합물의 합성을 가능하게 하기 위해, 전술한 방법은 특히 본 명세서에 기재한 단계 이전 또는 이후에 적절한 보호기를 첨가 또는 제거하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 한편, 다양한 합성 단계들을 교호적 순서 또는 차례로 수행하여 목적 화합물을 제공할 수 있다. 적용 가능한 융합 피라졸릴 화합물의 합성에 유용한 합성 화학 전환 및 보호기 방법론(보호 및 탈보호)은 동 기술 분야에 공지되어 있으며, 예를 들면, R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers(1989); T.W. Greene 및 P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2d. Ed., John Wiley and Sons(1991); L. Fieser 및 M. Fieser, Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons(1994); 및 L. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons(1995) 및 그 후속판에 기재된 것을 들 수 있다.

전술한 바와 같이 합성된 융합 피라졸릴 화합물은 칼럼 크로마토그래피, 고압 액체 크로마토그래피(HPLC: high pressure liquid chromatography) 또는 재결정 등의 방법에 의해 추가로 정제될 수 있다.

본 발명은 혈관 신생 관련 장애(예를 들면, 암 또는 안구 질환)의 치료 방법을 제공한다. 본 발명의 방법은 혈관 신생 관련 장애를 가진 대상에게 1종 이상의 융합 피라졸릴 화합물 및 약학적으로 허용 가능한 담체 유효량을 투여하는 단계를 포함한다. 상기 용어 "치료(treating)"란, 혈관 신생 관련 질환, 상기 질환의 증상 또는 상기 질환에 대한 소인을 치유, 처치, 경감, 완화, 변화(altering), 해소, 개선, 개량 또는 억제하기 위해, 상기 질환이 있는 대상, 또는 이 같은 질환의 증상이나 상기 질환에 대한 소인이 나타나는 대상에게 상기 융합 피라졸릴 화합물을 포함하는 조성물을 적용 또는 투여하는 것으로서 정의된다. 또한, "유효량"이란, 필요 대상에게 상기 융합 피라졸릴 화합물의 투여 시에, 상기 대상에 대해 치료 효과를 나타내는데 필요한 상기 융합 피라졸릴 화합물의 양으로서 정의된다. 융합 피라졸릴 화합물의 유효량은 약 1 ㎎/㎏ 내지 약 100 ㎎/㎏의 범위일 수 있다. 아울러, 이 유효 투여량은 동 기술 분야의 당업자들에게 알려진 바와 같이, 투여 방법, 부형제 사용 여부, 및 혈관 신생 관련 장애를 치료하기 위한 기타 시약과의 공용 가능성에 따라 달라질 수 있다.

본 발명의 방법을 수행하기 위해, 상기 융합 피라졸릴 화합물은 경구, 비경구, 흡입 스프레이를 통해, 또는 이식된 저장소(implanted reservoir)를 통해 투여될 수 있다. 본 명세서에 사용된 용어 "비경구"는 피하, 피내, 정맥내, 근육내, 관절내, 동맥내, 활맥낭내(inrasynovial), 흉골내, 경막내, 병변내 및 두개내 주사 또는 주입 기술을 포함한다.

경구 투여용 조성물은 정제, 캡슐, 에멀젼 및 수성 현탁액, 분산액 및 용액을 포함하는, 경구로 투여 가능한 임의의 제형일 수 있으나, 전술한 바에 제한되지 않는다. 경구 투여용 정제의 경우, 통상적으로 사용되는 담체로서 락토오스 및 옥수수 전분이 포함된다. 일반적으로, 정제에는 마그네슘 스테아레이트와 같은 윤활제도 첨가된다. 경구 투여용 캡슐형의 경우에는 유용한 희석제로서 락토오스 및 건조 옥수수 전분이 포함된다. 상기 수성 현탁액 또는 에멀젼을 경구 투여하는 경우에는 유화제 또는 현탁제와 결합된 오일상에 활성 성분을 현탁 또는 용해시킬 수 있다. 바람직한 경우에는 해당 향미제, 감미제 또는 착색제를 첨가할 수 있다.

또한, 적절한 분산제 또는 습윤제(예를 들어, Tween 80) 및 현탁화제를 사용하여 동 기술 분야에 공지된 기술에 따라 무균 주사용 조성물(예를 들면, 수성 또는 유성 현탁액)을 제제화할 수 있다. 아울러, 무균 주사용 조제는 예를 들면, 1,3-부탄디올 내의 용액과 같은, 비경구 투여가 가능한 비독성 희석제 또는 용매 내의, 무균의 주사 가능한 용액 또는 현탁액일 수 있다. 사용될 수 있는, 허용 가능한 비히클(vehicle) 및 용매로는 만니톨, 물, 링거 용액 및 등장성 염화나트륨 용액이 포함된다. 이 외에도, 통상적으로 용매 또는 현탁 매질(예를 들면, 합성 모노글리세라이드 또는 합성 디글리세라이드)로서, 무균의 불휘발성유(fixed oil)를 사용할 수 있다. 또한, 올레산 및 그의 글리세라이드 유도체와 같은 지방산이 주사용 조제에 있어서 유용하며, 올리브 오일 또는 피마자유, 특히 이들의 폴리옥 시에틸레이트화된 것 등의 약학적으로 허용 가능한 천연 오일도 유용하다. 아울러, 이러한 오일 용액 또는 현탁액은 장쇄 알코올 희석제 또는 분산제, 또는 카르복시메틸 셀룰로오즈 또는 이와 유사한 분산제를 포함할 수 있다.

흡입 조성물은 약학 제제 분야에 공지된 기술에 따라 제조될 수 있으며, 벤질 알코올 또는 기타 적절한 방부제, 생체 내 이용 효율을 증대시키기 위한 흡수 촉진제, 플루오로카본 및/또는 동 기술 분야에 공지된 기타 용액화제 또는 분산제를 사용하여 식염수 내의 용액으로 제조할 수 있다.

약학적 조성물에서 담체는, 제제의 활성 성분과 상용성이 있고(아울러, 바람직하게는 상기 성분을 안정화시키며) 치료 대상에 유해하지 않다는 의미에서 "허용 능한" 것이어야 한다. 예를 들어, (융합 피라졸릴 화합물과 특정하고 보다 가용성이 큰 착물을 형성하는) 사이클로덱스트린과 같은 용해화제가 융합 피라졸릴 화합물의 전달을 위한 약학적 부형제로서 사용될 수 있다. 다른 담체를 예시하면, 콜로이드성 이산화규소, 마그네슘 스테아레이트, 셀룰로오즈, 소듐 라우릴 설페이트 및 D&C Yellow #10를 들 수 있다.

섬유 모세포 성장 인자(FGF: fibroblast growth factor) 또는 혈관 내피 성장 인자(VEGF: vascular endothelial growth factor)의 활성 억제에 있어서 융합 피라졸릴 화합물의 효능을 사전에 평가하기 위해 적절한 체내 분석을 이용할 수 있다. 아울러, 효능이 있는 융합 피라졸릴 화합물을 선별하기 위해 동 기술 분야에 공지된 이하의 방법에 따라 체내 분석을 수행할 수 있다. 이에 대해서는 하기 실시예를 참조한다.

추가의 설명 없이도, 상기 기재에 의해 본 발명을 적절하게 구현할 수 있다. 따라서, 하기 실시예들은 단순히 설명을 위한 것으로 이해되어야 하며, 어떠한 방식으로든 나머지 기재된 것들을 한정하고자 하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 특허를 포함하여, 본 명세서에서 인용된 모든 문헌들이 참조 문헌으로서 그 전문이 본 명세서에 병합된다.

도 1은 150 ng/㎖의 VEGF 또는 bFGF(basic fibroblast growth factor)를 함유하는 Matrigel 플러그와 함께 누드 마우스에 투여된 화합물 1의 효과를 도시한 도면.

도 2는 A549 폐종양 세포를 이식한 누드 마우스에서의 화합물 1의 효과를 도시한 도면.

1- 벤질 -3-(5'- 하이드록시메틸 -2'- 푸릴 ) 인다졸 (화합물1)의 합성

먼저, 무수 THF (20 ㎖) 내에서 무수 칼슘 클로라이드 (88.8 ㎎, 0.8 mmole)를 소듐 보로하이드라이드 (60 ㎎, 1.6 mmole)와 함께 4시간 동안 교반하여 칼슘 보로하이드라이드를 제조하였다. 그런 다음, 30±2℃의 온도에서 상기 칼슘 보로하이드라이드 용액에, 88.0 ㎎의 1-벤질-3-(5'-메톡시카르보닐-2'-푸릴)-인다졸 (0.27 mmole)을 함유하는 30 ㎖의 THF 용액을 적가하였다. 상기 혼합물을 6시간 동안 가열하여 환류시킨 다음, 냉각시키고 분쇄 얼음으로 켄칭(quenching)한 다음, 감압 하에 두어 THF를 제거하고, 이를 여과하여 고체 생성물을 수득하였다. 상기 고체를 디클로로메탄으로 추출하였다. 상기 추출물을 50 ㎖로 농축하고 페트롤륨 에테르를 첨가하여 고체를 석출하였다. 상기 석출물을 수집하고 칼럼 크로마토그래피 (실리카겔-벤젠)를 이용하여 정제하고, 70.0 ㎎의 1-벤질-3-(5'-하이드록시메틸-2'-푸릴)-인다졸을 수율 87%로 수득하였다.

DNA 합성 억제

화합물 1(기초 및 대조군)의 부재 하에, 또는 (0.1 μM, 0.03 μM, 0.1 μM, 0.3 μM 또는 1 μM의 농도로) 화합물 1의 존재 하에, 인간의 배꼽 정맥 내피 세포(HUVECs: human umbilical vein endothelial cells)를 배양하였다. VEGF 또는 bFGF를 첨가하여(기초군에 대해서는 첨가하지 않음), [³H]티미딘에 근거하여 검출되는 DNA의 합성을 유도하였다. 이에 대한 결과를 통해, 화합물 1이 농도에 의존하여 VEGF의 유도 및 bFGF의 유도에 의한 HUVECs 세포의 증식을 억제함을 확인할 수 있다. 예상 밖으로, VEGF 및 bFGF에 있어서 화합물 1의 IC₅₀ 수치는 각각 9.0×10^-8 M 및 1.4×10^-7 M이었다.

또한, 추가로 23개의 융합 피라졸릴 화합물을 테스트하였다. 이들 모두 VEGF의 유도에 의한 HUVECs 세포의 증식을 억제하였으며, 화합물 1에서와 같은 효과를 나타내었다.

튜브 생성 억제

Matrigel(10 ㎎/㎖)로 미리 코팅한 체임버슬라이드에 HUVECs를 배양하였다. 화합물 1을 이용하지 않고 세포를 처리하거나(대조군), 또는 화합물 1(10 μM)을 이용하여 세포를 처리하였다. 그런 다음, VEGF(10 ng/㎖) 또는 bFGF(10 ng/㎖)를 첨가하여, 튜브의 생성을 유도하였다. 그리고, 100X 배율로 사진 촬영하였다. 그 결과, 화합물 1이 VEGF에 의해 유도 및 bFGF에 의해 유도되는 연장된 내피 세포 네트워크의 생성을 억제함을 확인하였다.

혈관 신생 효과의 억제

150 ng/㎖ VEGF 또는 bFGF를 함유하는 Matrigel 플러그를 누드 마우스들에 대해 피하 주사하였다. 상기 마우스들에게 비히클 또는 화합물 1을 7일간 경구 투여(p.o.)하였다(1 ㎎/㎏/일, 3 ㎎/㎏/일, 10 ㎎/㎏/일, 30 ㎎/㎏/일 또는 100 ㎎/㎏/일). 그런 다음, 상기 마우스의 투명한 피부를 통해 혈관 신생 반응을 육안으로 모니터링 하였다. Matrigel 그 자체로서는 혈관 신생 반응을 유도하지 않음을 확인하였다. 그리고 7일 후에 상기 마우스를 치사시키고, Matrigel 플러그를 제자리에서 관찰하고, 혈관의 내증식을 정량화하였다. 이어서, 상기 플러그를 제거하고 4%의 포름알데히드로 고정하여 파라핀에 적층하고, 조직 분석을 위해 5 ㎛의 두께로 절단한 다음, 헤마톡실린-에오신 염색법에 의해 혈관 성장을 정량화하였다. 모든 사진을 40X 배율로 촬영하였다. 그 결과, 화합물 1을 7일간 경구 투여한 경우에, VEGF에 의해 유도된 또는 bFGF에 의해 유도된 혈관 신생 효과를 상기 화합물 1의 투여량에 의존하여 효과적으로 억제할 수 있음을 확인하였다.

혈관 신생 효과에 대한 정량 분석으로, 누드 마우스를 전술한 바와 같이 처리하고, 플러그를 제거한 다음 용해시켰다. 헤모글로빈 검출 키트(Sigma Chem. Co. 제조)를 이용하여, 혈관 신생의 지표로서 헤모글로빈 농도를 측정하였다. 평균±표준 오차(S.E.)(n=3)를 확인할 수 있다(도 1 참조). 도에서, "***" 표시는 대조군과 비교하여 P＜0.001임을 나타낸다. 그 결과를 통해, 화합물 1이 VEGF에 의해 유도된 또는 bFGF에 의해 유도된 혈관 신생 효과를 효과적으로 억제할 수 있음을 확인할 수 있다.

항종양 활성

누드 마우스의 흉막 공간에 10⁶ A549 폐종양 세포를 도입했다. 그런 다음, 상기 마우스에 화합물 1을 경구 투여하였다(10 ㎎/㎏/일). 화합물 1로 처리한 마우스의 생존률과 대조군 마우스의 생존률을 비교하였다(도 2 참조). %T/C 수치[(처리군의 평균 생존 시간/대조군의 평균 생존 시간)×100]를 분석한 바에 따르면, 화합물 1로 처리한 처리군 마우스의 수명이 대조군 마우스의 수명에 비해 약 1.8배 길었다.

기타 구현예

본 명세서에 기재된 모든 특징들은 임의의 조합으로 조합될 수 있다. 본 명 세서에 기재된 각각의 특징은 그와 동일하고 등가의 또는 유사한 목적을 제공하는 다른 특징으로 대체될 수 있다. 따라서, 별도의 언급이 없는 한, 본 명세서에 기재된 각각의 특징은 등가의 또는 유사한 특징의 실시예일 뿐이다.

전술한 바와 같이, 동 기술 분야의 당업자들이라면 본 발명의 본질적인 특징을 확인하여, 본 발명의 정신 및 범위를 벗어나지 않는 한도 내에서 다양한 투여량 및 조건을 적용하여 본 발명의 다양한 변화 및 변형이 가능하다. 예를 들어, 본 발명을 수행하는데 융합 피라졸릴 화합물과 구조적으로 유사한 화합물을 이용할 수 있다. 따라서, 기타 구현예 또한 본 발명의 특허청구범위 내에 포함된다.

Claims (43)

1. 활성 성분으로서 1-벤질-3-(5'-하이드록시메틸-2'-푸릴)인다졸 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염을 포함하는, 자궁내막증, 만성 염증, 당뇨병, 건선, 비만증(adiposity) 및 암으로 구성되는 군으로부터 선택되는 혈관 신생 관련 질병의 치료를 위한 약학 조성물.
2. 제1항에 있어서, 상기 질병이 암인 혈관 신생 관련 질병의 치료를 위한 약학 조성물.
3. 제2항에 있어서, 상기 암이 폐암인 혈관 신생 관련 질병의 치료를 위한 약학 조성물.
4. 인간을 제외한 포유 동물에 있어서, 1-벤질-3-(5'-하이드록시메틸-2'-푸릴)인다졸 또는 약학적으로 허용가능한 그의 염을 사용하는, 자궁내막증, 만성 염증, 당뇨병, 건선, 비만증(adiposity) 및 암으로 구성되는 군으로부터 선택되는 혈관 신생 관련 질병의 치료 방법.
5. 제4항에 있어서, 상기 질병이 암인 혈관 신생 관련 질병의 치료 방법.
6. 제5항에 있어서, 상기 암이 폐암인 혈관 신생 관련 질병의 치료 방법.
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