KR100961487B1 - 다이벤조에이에이취안트라센 노출 여부 확인용 바이오마커및 이를 이용한 확인 방법 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 다환 방향족 탄화수소류 중의 하나인 다이벤조에이에이취안트라센(dibenzo[a,h]anthracene)에 대한 노출 여부 확인용 바이오마커 및 이를 이용한 확인 방법에 관한 것으로, 구체적으로 다이벤조에이에이취안트라센에 의해 특이적으로 유전자 발현이 증가 또는 감소하는 바이오마커 및 이를 이용한 다이벤조에이에이취안트라센에 대한 노출 여부를 확인하는 방법에 관한 것이며, 본 발명의 바이오마커는 DNA 마이크로어레이 칩을 통하여 선별된 반응 유전자들을 바이오마커로 이용하여 환경 시료에서 다이벤조에이에이취안트라센의 오염을 모니터링 및 판정하는데 유용하게 사용될 수 있으며, 다이벤조에이에이취안트라센에 의해 유발되는 독성 작용 기작을 규명하는 도구로 이용될 수 있다.
다이벤조에이에이취안트라센, 다환 방향족 탄화수소, 바이오마커, 마이크로 어레이
Description
본 발명은 다이벤조에이에이취안트라센(dibenzo[a,h]anthracene)에 대한 노출 여부 확인용 바이오마커 및 이를 이용한 확인 방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 다이벤조에이에이취안트라센에 의해 유전자 발현이 증가 또는 감소하는 바이오마커 및 이를 이용한 다이벤조에이에이취안트라센에 대한 노출 여부를 확인하는 방법에 관한 것이다.
다환 방향족 탄화수소류 중에서 다이벤조에이에이취안트라센은 화재로부터 자연적으로 발생하거나, 트럭, 선반 등에서 연소된 기체로부터 발생하며, 그 외에도 토탄 침전물에서 발견되어진다. 다이벤조에이에이취안트라센은 상업적으로 생산되는 물질은 아니지만 주로 연구목적으로 생산되어진다.
다이벤조에이에이취안트라센은 휘발성이 없어서 토양 중 이동성이 아주 미미 하며, 토양중 반감기는 약 400일 정도이다. 물표면에서의 휘발성도 거의 없어서, 주로 저질과 부유물질에 흡착되어지고, 수중에서의 가수분해반응은 일어나지 않으며 수생생물 중 생물농축이 매우 높은 것으로 알려져 있다. 대기 중에서는 입자 상태로만 존재하여 주로 물리적인 방법으로 제거되어질 수 있다. 또한 태양광에 강하게 흡착하여 환경 중에서 직접적인 광분해반응이 일어난다. 국내 식품 중 다환방향족 탄화수소류의 오염도 조사연구에서 전국 9개 도시에서 유통되는 육류, 육류 가공품 및 유지류의 다이벤조에이에이취안트라센의 함량을 조사한 결과 훈연제품, 가금류 식품, 육류에서 0.022~0.046 ㎍/㎏으로 검출되었고(김명철 등, 식품의약품안전청 2001년도 내분비계 장애물질 연구보고서, 2001), 식용유지에서 평균 0.16 ㎍/㎏으로 조사되었다(이종옥 등, 식품의약품안전청 연구보고서 제6권, 790, 2002).
동물실험에서 다이벤조에이에이취안트라센은 경구를 통하여 흡수되어지고, 피부를 통한 흡수는 매우 느리며, 흡수된 대부분은 분변으로 배출되어지는 것으로 보고되고 있다(ASTDR, 1990). 또한 다이벤조에이에이취안트라센은 사이토크롬(cytochromes) P450에 의해 반응성이 있는 다이올-에폭사이드(diol-epoxide) 유도체와 산화물로 대사되어 DNA와 histones에 공유결합체를 형성할 수 있으며, 궁극적으로 유전독성 및 발암성을 일으키는 것으로 보고되어지고 있다(HSDB).
다환방향족 탄화수소류의 발암성 정도와 유전자 발현 변화에 대한 연구는 일부 보고되고 있지만, 대표적인 다환방향족 탄화수로류로 알려진 벤조에이파이 렌(Benzo[a]pyrene)에 대한 연구에 거의 국한되어 있다. 이처럼 다이벤조에이에이취안트라센의 인간에 대한 발암 가능성에도 불구하고 인체에서의 위해도 평가 데이터가 충분하지 않고, 노출에 대한 검색 방법 역시 GC-MS(Gas Chromatography-Mass Spectrometer) 또는 HPLC(High Performance Liquid Chromatography) 등의 고전적인 방법에 국한되어 있다. GC-MS 또는 HPLC 방법 등을 이용하면 정량은 가능하나 분석을 위한 적정 조건을 설정하여야 하며 고가의 장비 등이 필요하다. 그러므로 보다 빠르고 간편한 스크리닝(screening) 방법, 예를 들면 프라이머(primer)를 이용하는 실시간(real-time) PCR(Real-time reverse transcript polymerase chain reaction)또는 DNA 마이크로어레이 칩 등으로 신속한 위해성 평가를 통해 인체에서의 독성작용을 탐색할 수 있는 분자적 지표를 발굴하고 활용하여 다이벤조에이에이취안트라센의 노출에 대한 적절한 대책 및 관리를 수행하는 것이 중요한 과제라 하겠다.
포유류 6종, 미생물 292종 등 여러 종의 게놈(genome) 염기서열 프로젝트가 완성되어 NCBI(National Center for Biotechnology Information)에 보고되었다. 이렇게 얻어진 막대한 양의 데이터를 기본으로 유전자의 기능을 연구하기 위하여 게놈-와이드 익스프레션(genome-wide expression) 연구가 이루어지고 있다. 한번의 실험으로 수천 개의 유전자의 발현을 분석하기 위하여 DNA 마이크로어레이(microarray) 분석을 수행한다(Schena, M., et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA 93:10614-10619, 1996).
마이크로어레이는 cDNA(complementary DNA)나 20 - 25 염기쌍(base pair) 길이의 올리고뉴클레오티드(oligonucleotide)들의 세트를 유리에 집적화한 것이다. cDNA 마이크로어레이는 학교 내의 연구실 또는 Agilent, Genomic Solutions 등의 회사에서 칩 위에 cDNA 수집물을 기계적으로 고정화 하거나 잉크젯(ink jetting) 방법을 이용하여 생산하고 있다(Sellheyer K. et. al., J. Am . Acad . Dermatol. 51:681-692, 2004). 올리고뉴클레오티드 마이크로어레이는 Affymetrix사에서 사진 식각 공정(photolithography)을 이용하여 칩 위에서 직접 합성하는 방법에 의해 만들어 지고 있으며, Agillent사 등에는 합성된 올리고뉴클레오티드를 고정화하는 방법으로 생산하고 있다(Sellheyer, K. et. al., J. Am . Acad . Dermatol. 51:681-692, 2004).
유전자의 발현을 분석을 위해서는 조직 등 시료에서 RNA를 얻어 DNA 마이크로어레이에 있는 올리고뉴클레오티드와 교잡반응을 수행한다. 얻어진 RNA는 형광이나 동위원소로 표지화하며 cDNA로 전환시킨다. 올리고 마이크로어레이는 주로 두개의 다른 형광(예: Cye3 및 Cye5)으로 대조군과 실험군을 각각 표지화하여 같은 칩 상에서 동시에 교잡 반응을 수행한 후 광학적으로 이미지를 스캔하여 형광의 세기를 얻고 그 결과를 분석한다. 두개의 형광 세기의 비율에 따라 유전자의 발현 여부를 결정한다(Somasundaram, K. et al., Genomics Proteomics I:1-10, 2002).
최근 DNA 마크로어레이 기술을 이용한 첨단 기법인 독성 유전체학(Toxicogenomics) 연구 등과 접목하여 대량(high throughput)으로 의약품 및 신의약 후보물질은 물론 대표적인 환경오염물질을 비롯해 모든 화학물질에 의한 특정 조직이나 세포주에서 발현되는 유전자들의 발현 패턴의 분석, 양적 분석이 가능해졌다. 이에 따라 특정 세포 내에서 특정 유전자의 발현 빈도를 분석함으로써 약물의 부작용 및 환경오염물질의 유해작용과 관련된 유전자의 발굴이 가능하며, 이를 통하여 환경오염물질의 유해작용과 약물의 작용 및 부작용에 따른 분자적 메커니즘을 이해하게 될 것이며 나아가 독성 및 부작용을 유발하는 물질의 검색 및 확인이 가능하게 될 것이다.
이에 본 발명자들은 인간 유전자 4만 4천개가 집적된 올리고마이크로어레이를 이용하여 다이벤조에이에이취안트라센의 유전자 발현 프로파일을 인간 간암 세포인 HepG2 세포주에서 관찰 및 분석함으로써 다이벤조에이에이취안트라센에 의해 과발현 또는 저발현 되는 유전자를 발굴하고, 실시간(real-time) RT-PCR 방법에 의해 상기 유전자들의 발현 양상을 확인함으로써 다이벤조에이에이취안트라센을 검출할 수 있는 바이오마커 및 이를 이용한 노출 여부를 확인하는 방법을 확립하여 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 다이벤조에이에이취안트라센의 노출에 의해 과발현 또는 저발현되는 바이오마커 및 상기 바이오마커를 이용한 다이벤조에이에이취안트라센에 대한 노출 여부를 확인하는 방법을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 다이벤조에이에이취안트라센(dibenzo[a,h]anthracene)의 노출에 의해 발현 변화를 일으키는 것을 특징으로 하는 다이벤조에이에이취안트라센에 대한 노출 여부 확인용 바이오마커를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 바이오마커 유전자 서열의 전부 또는 일부를 포함하는 올리고뉴클레오티드 또는 이의 상보가닥 분자가 집적된 다이벤조에이에이취안트라센에 대한 노출 여부 확인용 DNA 마이크로어레이 칩을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 바이오마커를 이용한 다이벤조에이에이취안트라센에 대한 노출 여부를 확인하는 방법을 제공한다.
아울러, 본 발명은 다이벤조에이에이취안트라센에 대한 노출 여부 확인용 검색 키트를 제공한다.
본 발명의 다이벤조에이에이취안트라센에 대한 노출 여부 확인용 바이오마커 및 이를 이용한 확인방법은 DNA 마이크로어레이 칩을 통하여 선별된 반응 유전자들을 바이오마커로 이용하여 다이벤조에이에이취안트라센의 모니터링 및 위해성을 판정하는데 유용하며, 다이벤조에이에이취안트라센에 의해 야기되는 독성 작용 기작을 규명하는 도구로 이용할 수 있다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 다이벤조에이에이취안트라센의 노출에 의해 발현 변화를 일으키는 것을 특징으로 하는 다이벤조에이에이취안트라센에 대한 노출 여부 확인용 바이오마커를 제공한다.
상기 바이오마커는 2배 이상 발현이 증가 또는 감소한 유전자로써, 세포 주기(cell cycle), 핵산 결합(nucleic acid binding), 금속원소 결합(metal binding), 산화 환원 효소 활성(Oxidoreductase activity), I-kappaB 키나아제(kinase)/NF-kappaB 캐스케이드(cascade), 암(Cancer), 외부 자극에 대한 반응(Response to external stimulus), 세포골격 단백질 결합(Cytoskeletal protein binding), 칼슘 이온 결합(Calcium ion binding), 소낭-매개 수송(Vesicle-mediated transport), 징크-핑거(Zinc-finger), 뉴클레오티드 결합(Nucleotide binding), 유기산 대사(Organic acid metabolism), 보체 및 응고 캐스케이 드(Complement and coagulation cascades), 알코올 대사(Alcohol metabolism), MAPKKK 캐스케이드(cascade), GTPase 조절 활성(regulator activity), 아팝토시스(apoptosis), 단백질 전달(protein transport), 형태 형성(morphogenesis), 면역반응(immune response), 세포 증식(cell proliferation), 지방산 대사(lipid metabolism), 화학물질 자극 반응(response to chemical stimulus) 또는 DNA 손상 반응(response to DNA damage stimulus) 등의 관련 유전자로 구성되어 있다.
본 발명은 하기와 같이 구성된 군에서 선택되어지는 것을 특징으로 하는 바이오마커를 제공한다:
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M75106(CPB2,Carboxypeptidase B2(plasma, carboxypeptidase U)), 유전자 등록번호(Genebank) NM_000893(KNG1,Kininogen 1), 유전자 등록번호(Genebank) AK055619(GNAQ,Guanine nucleotide binding protein(G protein), q polypeptide), 유전자 등록번호(Genebank) AL832747(GNAQ,Guanine nucleotide binding protein(G protein), q polypeptide), 유전자 등록번호(Genebank) CR596712(IL17D,Interleukin 17D), 유전자 등록번호(Genebank) AK000972(C9orf40,Chromosome 9 open reading frame 40), 유전자 등록번호(Genebank) AK023675(UTRN,Utrophin(homologous to dystrophin)), 유전자 등록번호(Genebank) AK026095(SNTB1,Syntrophin, beta 1(dystrophin-associated protein A1, 59kDa, basic component 1)), 유전자 등록번호(Genebank) AL117472(SORBS1,Sorbin and SH3 domain containing 1), 유전자 등록번호(Genebank) NM_018728(MYO5C,Myosin VC), 유전자 등록번호(Genebank) XM_371116(MYO5B,Myosin VB), 유전자 등록번호(Genebank) BC026320(OGDHL,Oxoglutarate dehydrogenase-like), 유전자 등록번호(Genebank) BC033391(PP1665,Glycerophosphodiester phosphodiesterase domain containing 5), 유전자 등록번호(Genebank) BC042421(GK,Glycerol kinase), 유전자 등록번호(Genebank) M15943(ADH4,Alcohol dehydrogenase 4(class II), pi polypeptide), 유전자 등록번호(Genebank) NM_000671(ADH5,Alcohol dehydrogenase 5(class III), chi polypeptide), 유전자 등록번호(Genebank) NM_002610(PDK1,Pyruvate dehydrogenase kinase, isozyme 1), 유전자 등록번호(Genebank) AK026927(MGC5297,Hypothetical protein MGC5297), 유전자 등록번호(Genebank) AK127326(PHF17,PHD finger protein 17), 유전자 등록번호(Genebank) BC039110(SMNDC1,Survival motor neuron domain containing 1), 유전자 등록번호(Genebank) BC041849(ROCK1,Rho-associated, coiled-coil containing protein kinase 1), 유전자 등록번호(Genebank) BX537500(PDCD4,Programmed cell death 4(neoplastic transformation inhibitor)), 유전자 등록번호(Genebank) CR596268(ITGB3BP,Integrin beta 3 binding protein(beta3-endonexin)), 유전자 등록번호(Genebank) NM_004938(DAPK1,Death-associated protein kinase 1), 유전자 등록번호(Genebank) NM_012238(SIRT1,Sirtuin(silent mating type information regulation 2 homolog) 1(S. cerevisiae)), 유전자 등록번호(Genebank) NM_130837(OPA1,Optic atrophy 1(autosomal dominant)), 유전자 등록번호(Genebank) NM_148957(TNFRSF19,Tumor necrosis factor receptor superfamily, member 19), 유전자 등록번호(Genebank) AB208919(FGFR1,Fibroblast growth factor receptor 1(fms-related tyrosine kinase 2, Pfeiffer syndrome)), 유전자 등록번호(Genebank) AB209601(TIZ,Zinc finger protein 675), 유전자 등록번호(Genebank) AK125150(MAPK8,Mitogen-activated protein kinase 8), 유전자 등록번호(Genebank) BC027881(AFP,Alpha-fetoprotein), 유전자 등록번호(Genebank) NM_020995(HPR,Haptoglobin-related protein), 유전자 등록번호(Genebank) AF167706(CRIM1,Cysteine rich transmembrane BMP regulator 1(chordin-like)), 유전자 등록번호(Genebank) BC045655(MAC30,Hypothetical protein MAC30), 유전자 등록번호(Genebank) BX537509(NET1,Neuroepithelial cell transforming gene 1), 유전자 등록번호(Genebank) BX640958(YEATS4,YEATS domain containing 4), 유전자 등록번호(Genebank) BX647757(Homo sapiens sex comb on midleg-like 1(Drosophila)(SCML1), mRNA [NM_006746],sex comb on midleg-like 1(Drosophila)), 유전자 등록번호(Genebank) NM_006548(IMP-2,IGF-II mRNA-binding protein 2), 유전자 등록번호(Genebank) AY376439(ECT2,Epithelial cell transforming sequence 2 oncogene), 유전자 등록번호(Genebank) AY596970(GARNL1,GTPase activating Rap/RanGAP domain-like 1), 유전자 등록번호(Genebank) BC050630(RAB3-GAP150,RAB3 GTPase activating protein subunit 2(non-catalytic)), 유전자 등록번호(Genebank) NM_001001132(ITSN1,Intersectin 1(SH3 domain protein)), 유전자 등록번호(Genebank) NM_016340(KIAA1961,KIAA1961 gene), 유전자 등록번호(Genebank) NM_145290(GPR125,G protein-coupled receptor 125), 유전자 등록번호(Genebank) NM_003574(VAPA,VAMP(vesicle-associated membrane protein)-associated protein A, 33kDa), 유전자 등록번호(Genebank) M28016(cytochrome b,Human mitochondrial cytochrome b gene, partial cds.), 유전자 등록번호(Genebank) NM_013277(RACGAP1,Rac GTPase activating protein 1), 유전자 등록번호(Genebank) AB096248(SNF1LK2,SNF1-like kinase 2), 유전자 등록번호(Genebank) NM_001698(AUH,AU RNA binding protein/enoyl-Coenzyme A hydratase), 유전자 등록번호(Genebank) AB091343(C10orf3,Centrosomal protein 55kDa).
1) 상기 바이오마커 중에서 다이벤조에이에이취안트라센의 노출에 의해 발현이 증가하는 바이오마커 유전자는 하기와 같다:
유전자 등록번호(Genebank) AB209605(SKIV2L, Superkiller viralicidic activity 2-like(S. cerevisiae)), 유전자 등록번호(Genebank) AI200373(HIST1H2AL, Histone 1, H2al), 유전자 등록번호(Genebank) AK001594(AKAP8L, A kinase(PRKA) anchor protein 8-like), 유전자 등록번호(Genebank) AK057577(IRF3, Interferon regulatory factor 3), 유전자 등록번호(Genebank) AL832659(FLJ22833, Hypothetical protein FLJ22833), 유전자 등록번호(Genebank) BC034487(HIST1H2AK, Histone 1, H2ak), 유전자 등록번호(Genebank) BC034569(ZNF337, Zinc finger protein 337), 유전자 등록번호(Genebank) BC038432(RARA, Retinoic acid receptor, alpha), 유전자 등록번호(Genebank) BC067782(HIST1H2AG, Histone 1, H2ag), 유전자 등록번호(Genebank) BC069193(HIST2H2BE, Histone 2, H2be), 유전자 등록번호(Genebank) BC071638(HIST2H2BE, Histone 2, H2be), 유전자 등록번호(Genebank) BC082232(HIST1H2BG, Histone 1, H2bg), 유전자 등록번호(Genebank) BC101655(HIST1H2BI, Histone 1, H2bi), 유전자 등록번호(Genebank) BE741093(HIST1H2AE ,Histone 1, H2ae), 유전자 등록번호(Genebank) BE973853(HIST1H4J, Histone 1, H4j), 유전자 등록번호(Genebank) BM752802(HIST1H2BM, Histone 1, H2bm), 유전자 등록번호(Genebank) BM919305(POLR2L, Polymerase(RNA) II(DNA directed) polypeptide L, 7.6kDa), 유전자 등록번호(Genebank) BU603483(HIST1H1E, Histone 1, H1e), 유전자 등록번호(Genebank) BX436525(HIST1H2BH, Histone 1, H2bh), 유전자 등록번호(Genebank) BX647290(HIST1H2BO, Histone 1, H2bo), 유전자 등록번호(Genebank) CB529694(HIST2H2BE, Histone 2, H2be), 유전자 등록번호(Genebank) CD710576(HIST2H2AC, Histone 2, H2ac), 유전자 등록번호(Genebank) CK000930(HIST1H2AI, Histone 1, H2ai), 유전자 등록번호(Genebank) CR608156(HIST1H2AC, Histone 1, H2ac), 유전자 등록번호(Genebank) NM_002515(NOVA1, Neuro-oncological ventral antigen 1), 유전자 등록번호(Genebank) NM_003516(HIST2H2AA, Histone 2, H2aa), 유전자 등록번호(Genebank) NM_003519(HIST1H2BL, Histone 1, H2bl), 유전자 등록번호(Genebank) NM_003670(BHLHB2, Basic helix-loop-helix domain containing, class B, 2), 유전자 등록번호(Genebank) NM_004660(DDX3Y, DEAD(Asp-Glu-Ala-Asp) box polypeptide 3, Y-linked), 유전자 등록번호(Genebank) NM_005319(HIST1H1C, Histone 1, H1c), 유전자 등록번호(Genebank) NM_005320(HIST1H1D, Histone 1, H1d), 유전자 등록번호(Genebank) NM_005524(HES1, Hairy and enhancer of split 1,(Drosophila)), 유전자 등록번호(Genebank) NM_006442(DRAP1, DR1-associated protein 1(negative cofactor 2 alpha)), 유전자 등록번호(Genebank) NM_021035(KIAA1404, KIAA1404 protein), 유전자 등록번호(Genebank) U86136(TEP1, Telomerase-associated protein 1), 유전자 등록번호(Genebank) AB209586(MAPK13, Mitogen-activated protein kinase 13), 유전자 등록번호(Genebank) AK074652(SERTAD1, SERTA domain containing 1), 유전자 등록번호(Genebank) AK122829(GAS2L1, Growth arrest-specific 2 like 1), 유전자 등록번호(Genebank) AK129595(GADD45B, Growth arrest and DNA-damage-inducible, beta), 유전자 등록번호(Genebank) BC018266(CDC42, Cell division cycle 42(GTP binding protein, 25kDa)), 유전자 등록번호(Genebank) BC041022(SCAND1, SCAN domain containing 1), 유전자 등록번 호(Genebank) BM904612(S100A6, S100 calcium binding protein A6(calcyclin)), 유전자 등록번호(Genebank) BM913048(TIMP1, TIMP metallopeptidase inhibitor 1), 유전자 등록번호(Genebank) CR612719(GADD45A, Growth arrest and DNA-damage-inducible, alpha), 유전자 등록번호(Genebank) NM_001007271(DUSP13, Dual specificity phosphatase 13), 유전자 등록번호(Genebank) NM_001015053(HDAC5, Histone deacetylase 5), 유전자 등록번호(Genebank) NM_001953(ECGF1, Endothelial cell growth factor 1(platelet-derived)), 유전자 등록번호(Genebank) NM_003255(TIMP2, TIMP metallopeptidase inhibitor 2), 유전자 등록번호(Genebank) NM_005072(SLC12A4, Solute carrier family 12(potassium/chloride transporters), member 4), 유전자 등록번호(Genebank) NM_005343(HRAS, V-Ha-ras Harvey rat sarcoma viral oncogene homolog), 유전자 등록번호(Genebank) NM_005736(ACTR1A, ARP1 actin-related protein 1 homolog A, centractin alpha(yeast)), 유전자 등록번호(Genebank) NM_007065(CDC37, CDC37 cell division cycle 37 homolog(S. cerevisiae)), 유전자 등록번호(Genebank) NM_078467(CDKN1A, Cyclin-dependent kinase inhibitor 1A(p21, Cip1)), 유전자 등록번호(Genebank) U68019(SMAD3, SMAD, mothers against DPP homolog 3(Drosophila)), 유전자 등록번호(Genebank) X02812(TGFB1, Transforming growth factor, beta 1(Camurati-Engelmann disease)), 유전자 등록번호(Genebank) AB033060(PDCD6, Aryl-hydrocarbon receptor repressor), 유전자 등록번호(Genebank) AB209361(FAS, Fas(TNF receptor superfamily, member 6)), 유전자 등록번호(Genebank) AF332558(BBC3, BCL2 binding component 3), 유전자 등록번호(Genebank) AY028896(CARD10, Caspase recruitment domain family, member 10), 유전자 등록번호(Genebank) BC063507(HSPA1B, Heat shock 70kDa protein 1B), 유전자 등록번호(Genebank) BM557864(HSPB1, Heat shock 27kDa protein 1), 유전자 등록번호(Genebank) NM_001003940(BMF ,Bcl2 modifying factor), 유전자 등록번호(Genebank) NM_001165(BIRC3, Baculoviral IAP repeat-containing 3), 유전자 등록번호(Genebank) NM_001197(BIK, BCL2-interacting killer(apoptosis-inducing)), 유전자 등록번호(Genebank) NM_002305(LGALS1, Lectin, galactoside-binding, soluble, 1(galectin 1)), 유전자 등록번호(Genebank) NM_003311(PHLDA2, Pleckstrin homology-like domain, family A, member 2), 유전자 등록번호(Genebank) NM_003639(IKBKG, Inhibitor of kappa light polypeptide gene enhancer in B-cells, kinase gamma), 유전자 등록번호(Genebank) NM_003820(TNFRSF14, Tumor necrosis factor receptor superfamily, member 14(herpesvirus entry mediator)), 유전자 등록번호(Genebank) NM_003897(IER3, Immediate early response 3), 유전자 등록번호(Genebank) NM_004401(DFFA, DNA fragmentation factor, 45kDa, alpha polypeptide), 유전자 등록번호(Genebank) NM_016639(TNFRSF12A, Tumor necrosis factor receptor superfamily, member 12A), 유전자 등록번호(Genebank) BC048334(MT1G, Metallothionein 1G), 유전자 등록번호(Genebank) BC053882(MT1X, Metallothionein 1X), 유전자 등록번호(Genebank) BI488702(MT1K, Metallothionein 1M), 유전자 등록번호(Genebank) NM_005947(MT1B, Metallothionein 1B(functional)), 유전자 등록번호(Genebank) AK055088(CYP2J2, Cytochrome P450, family 2, subfamily J, polypeptide 2), 유전자 등록번호(Genebank) AK094474(RHOC, Ras homolog gene family, member C), 유전자 등록번호(Genebank) BC015041(VAT1, Family with sequence similarity 82, member C), 유전자 등록번호(Genebank) NM_000499(CYP1A1, Cytochrome P450, family 1, subfamily A, polypeptide 1), 유전자 등록번호(Genebank) NM_004881(TP53I3, Tumor protein p53 inducible protein 3), 유전자 등록번호(Genebank) NM_201397(GPX1, Glutathione peroxidase 1), 유전자 등록번호(Genebank) XM_498018(LOC391827, Similar to Keratin, type I cytoskeletal 18(Cytokeratin 18)(K18)(CK 18)), 유전자 등록번호(Genebank) AF524864(AKR1B10, Aldo-keto reductase family 1, member B10(aldose reductase)), 유전자 등록번호(Genebank) AL833205(ETFB, Electron-transfer-flavoprotein, beta polypeptide), 유전자 등록번호(Genebank) BC034763(FDXR, Ferredoxin reductase), 유전자 등록번호(Genebank) CR610878(AKR1B1, Aldo-keto reductase family 1, member B1(aldose reductase)), 유전자 등록번호(Genebank) NM_003330(TXNRD1, Thioredoxin reductase 1), 유전자 등록번호(Genebank) NM_004199(P4HA2, Procollagen-proline, 2-oxoglutarate 4-dioxygenase(proline 4-hydroxylase), alpha polypeptide II), 유전자 등록번호(Genebank) NM_004753(DHRS3, Dehydrogenase/reductase(SDR family) member 3), 유전자 등록번호(Genebank) NM_031226(CYP19A1, Cytochrome P450, family 19, subfamily A, polypeptide 1), 유전자 등록번호(Genebank) NM_032468(ASPH, Aspartate beta-hydroxylase), 유전자 등록번호(Genebank) AB209112(SLC2A8, Solute carrier family 2,(facilitated glucose transporter) member 8), 유전자 등록번호(Genebank) BC011409(UGT1A6, UDP glucuronosyltransferase 1 family, polypeptide A9), 유전자 등록번호(Genebank) H18681(C20orf139, Sulfiredoxin 1 homolog(S. cerevisiae)), 유전자 등록번호(Genebank) NM_002658(PLAU, Plasminogen activator, urokinase), 유전자 등록번호(Genebank) NM_005064(CCL23, Chemokine(C-C motif) ligand 23), 유전자 등록번호(Genebank) NM_032965(CCL14, Chemokine(C-C motif) ligand 15), 유전자 등록번호(Genebank) Y11307(CYR61, Cysteine-rich, angiogenic inducer, 61), 유전자 등록번호(Genebank) AB209808(AP1M1, Adaptor-related protein complex 1, mu 1 subunit), 유전자 등록번호(Genebank) AK074154(SYTL1, Synaptotagmin-like 1), 유전자 등록번호(Genebank) AK098475(GRPEL1, GrpE-like 1, mitochondrial(E. coli)), 유전자 등록번호(Genebank) AK123405(GDI1, GDP dissociation inhibitor 1), 유전자 등록번호(Genebank) BC000786(ARFGAP1, ADP-ribosylation factor GTPase activating protein 1), 유전자 등록번호(Genebank) BC042390(VTI1B, Vesicle transport through interaction with t-SNAREs homolog 1B(yeast)), 유전자 등록번호(Genebank) BG036385(RAMP1, Receptor(calcitonin) activity modifying protein 1), 유전자 등록번호(Genebank) BX648781(GABARAPL1, GABA(A) 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등록번호(Genebank) AB033073(SULF2, Sulfatase 2), 유전자 등록번호(Genebank) AB208949(LRDD, Leucine-rich repeats and death domain containing), 유전자 등록번호(Genebank) AK022712(FLJ12650, Family with sequence similarity 77, member C), 유전자 등록번호(Genebank) AK095363(AQP3, Aquaporin 3), 유전자 등록번호(Genebank) AY368150(CHR2SYT, Family with sequence similarity 62(C2 domain containing) member B), 유전자 등록번호(Genebank) BU587578(RGS10, Regulator of G-protein signalling 10), 유전자 등록번호(Genebank) BU945318(MT2A, Hypothetical gene supported by X97260; BC070289), 유전자 등록번호(Genebank) NM_001013632(LOC343521, Similar to hypothetical protein 4833401D15), 유전자 등록번호(Genebank) NM_006426(DPYSL4, Dihydropyrimidinase-like 4), 유전자 등록번호(Genebank) NM_133493(CD109, CD109 antigen(Gov platelet alloantigens)), 유전자 등록번호(Genebank) NM_145256(LRRC25, Leucine rich repeat containing 25).
2) 상기 바이오마커 중에서, 다이벤조에이에이취안트라센의 노출에 의해 발현이 감소하는 바이오마커 유전자는 하기와 같다:
유전자 등록번호(Genebank) AB033337(MPHOSPH1,M-phase phosphoprotein 1), 유전자 등록번호(Genebank) AB208875(Septin 10,Septin 10), 유전자 등록번호(Genebank) AF053305(BUB1,BUB1 budding uninhibited by benzimidazoles 1 homolog(yeast)), 유전자 등록번호(Genebank) AF053306(BUB1B,BUB1 budding uninhibited by benzimidazoles 1 homolog beta(yeast)), 유전자 등록번호(Genebank) AF345347(SPAG5,Sperm associated antigen 5), 유전자 등록번 호(Genebank) AK222819(NUSAP1,Nucleolar and spindle associated protein 1), 유전자 등록번호(Genebank) AY367065(ASPM,Asp(abnormal spindle)-like, microcephaly associated(Drosophila)), 유전자 등록번호(Genebank) BC004352(KIF22,Kinesin family member 22), 유전자 등록번호(Genebank) BC010607(IGF1R,Insulin-like growth factor 1 receptor), 유전자 등록번호(Genebank) BC011000(CDCA5,Cell division cycle associated 5), 유전자 등록번호(Genebank) BC013326(GAS2,Growth arrest-specific 2), 유전자 등록번호(Genebank) BC032677(UBE2C,Ubiquitin-conjugating enzyme E2C), 유전자 등록번호(Genebank) BC040991(TFDP2,Transcription factor Dp-2(E2F dimerization partner 2)), 유전자 등록번호(Genebank) BC050384(SUPT3H,Suppressor of Ty 3 homolog(S. cerevisiae)), 유전자 등록번호(Genebank) BC068483(RINT-1,Rad50-interacting protein 1), 유전자 등록번호(Genebank) BQ278454(CKS1B,CDC28 protein kinase regulatory subunit 1B), 유전자 등록번호(Genebank) BX647885(STMN1,Stathmin 1/oncoprotein 18), 유전자 등록번호(Genebank) CR604810(CCNA2,Cyclin A2), 유전자 등록번호(Genebank) CR933728(CDC2,Cell division cycle 2, G1 to S and G2 to M), 유전자 등록번호(Genebank) D42045(DCLRE1A,DNA cross-link repair 1A(PSO2 homolog, S. cerevisiae)), 유전자 등록번호(Genebank) NM_00089(HK2,Hexokinase 2), 유전자 등록번호(Genebank) NM_001005414(ZWINT,ZW10 interactor antisense), 유전자 등록번호(Genebank) NM_001018159(APPBP1,Amyloid beta precursor protein binding protein 1), 유전자 등록번호(Genebank) NM_001239(CCNH,Cyclin H), 유전자 등록번호(Genebank) NM_001790(CDC25C,Cell division cycle 25C), 유전자 등록번호(Genebank) NM_001827(CKS2,CDC28 protein kinase regulatory subunit 2), 유전자 등록번호(Genebank) NM_002431(MNAT1,Menage a trois 1(CAK assembly factor)), 유전자 등록번호(Genebank) NM_002467(MYC,V-myc myelocytomatosis viral oncogene homolog(avian)), 유전자 등록번호(Genebank) NM_002709(PPP1CB,Protein phosphatase 1, catalytic subunit, beta isoform), 유전자 등록번호(Genebank) NM_002737(PRKCA,Protein kinase C, alpha), 유전자 등록번호(Genebank) NM_002894(RBBP8,Retinoblastoma binding protein 8), 유전자 등록번호(Genebank) NM_003318(TTK,TTK protein kinase), 유전자 등록번호(Genebank) NM_003478(CUL5,Cullin 5), 유전자 등록번호(Genebank) NM_003981(PRC1,Protein regulator of cytokinesis 1), 유전자 등록번호(Genebank) NM_004064(CDKN1B,Cyclin-dependent kinase inhibitor 1B(p27, Kip1)), 유전자 등록번호(Genebank) NM_004354(CCNG2,Cyclin G2), 유전자 등록번호(Genebank) NM_004365(CETN3,Centrin, EF-hand protein, 3(CDC31 homolog, yeast)), 유전자 등록번호(Genebank) NM_004523(KIF11,Kinesin family member 11), 유전자 등록번호(Genebank) NM_004701(CCNB2,Cyclin B2), 유전자 등록번호(Genebank) NM_005504(BCAT1,Branched chain aminotransferase 1, cytosolic), 유전자 등록번호(Genebank) NM_005915(MCM6,MCM6 minichromosome maintenance deficient 6(MIS5 homolog, S. pombe)(S. cerevisiae)), 유전자 등록번호(Genebank) NM_006101(KNTC2,Kinetochore associated 2), 유전자 등록번호(Genebank) NM_006265(RAD21,RAD21 homolog(S. pombe)), 유전자 등록번호(Genebank) NM_014750(DLG7,Discs, large homolog 7(Drosophila)), 유전자 등록번호(Genebank) NM_014751(MTSS1,Metastasis suppressor 1), 유전자 등록번호(Genebank) NM_016343(CENPF,Centromere protein F, 350/400ka(mitosin)), 유전자 등록번호(Genebank) NM_018492(PBK,PDZ binding kinase), 유전자 등록번호(Genebank) NM_018685(ANLN,Anillin, actin binding protein(scraps homolog, Drosophila)), 유전자 등록번호(Genebank) NM_019001(XRN1,5'-3' exoribonuclease 1), 유전자 등록번호(Genebank) NM_019063(EML4,Echinoderm microtubule associated protein like 4), 유전자 등록번호(Genebank) NM_020242(KNSL7,Kinesin family member 15), 유전자 등록번호(Genebank) U65410(MAD2L1,MAD2 mitotic arrest deficient-like 1(yeast)), 유전자 등록번호(Genebank) AB096175(SP5,Sp5 transcription factor), 유전자 등록번호(Genebank) AB209086(ZNF493,Zinc finger protein 493), 유전자 등록번호(Genebank) AB209334(SP3,Sp3 transcription factor), 유전자 등록번호(Genebank) AB209892(ZFX,Zinc finger protein, X-linked), 유전자 등록번호(Genebank) AF279145(ANTXR1,Anthrax toxin receptor 1), 유전자 등록번호(Genebank) AK095600(FLJ38281,Zinc finger protein 564), 유전자 등록번호(Genebank) AK123010(RRM2,Ribonucleotide reductase M2 polypeptide), 유전자 등록번호(Genebank) AK126180(DTYMK,Deoxythymidylate kinase(thymidylate kinase)), 유전자 등록번호(Genebank) AK130071(HSPC063,BTB(POZ) domain containing 15), 유전자 등록번호(Genebank) AK131420(ZNF66,Zinc finger protein 66), 유전자 등록번호(Genebank) AK131472(Homo sapiens cDNA FLJ16640 fis, clone TESTI4028938, moderately similar to Zinc finger protein 85. 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M75106(CPB2,Carboxypeptidase B2(plasma, carboxypeptidase U)), 유전자 등록번호(Genebank) NM_000893(KNG1,Kininogen 1), 유전자 등록번호(Genebank) AK055619(GNAQ,Guanine nucleotide binding protein(G protein), q polypeptide), 유전자 등록번호(Genebank) AL832747(GNAQ,Guanine nucleotide binding protein(G protein), q polypeptide), 유전자 등록번호(Genebank) CR596712(IL17D,Interleukin 17D), 유전자 등록번호(Genebank) AK000972(C9orf40,Chromosome 9 open reading frame 40), 유전자 등록번호(Genebank) AK023675(UTRN,Utrophin(homologous to dystrophin)), 유전자 등록번호(Genebank) AK026095(SNTB1,Syntrophin, beta 1(dystrophin-associated protein A1, 59kDa, basic component 1)), 유전자 등록번호(Genebank) AL117472(SORBS1,Sorbin and SH3 domain containing 1), 유전자 등록번호(Genebank) NM_018728(MYO5C,Myosin VC), 유전자 등록번호(Genebank) XM_371116(MYO5B,Myosin VB), 유전자 등록번호(Genebank) BC026320(OGDHL,Oxoglutarate dehydrogenase-like), 유전자 등록번호(Genebank) BC033391(PP1665,Glycerophosphodiester phosphodiesterase domain containing 5), 유전자 등록번호(Genebank) BC042421(GK,Glycerol kinase), 유전자 등록번호(Genebank) M15943(ADH4,Alcohol dehydrogenase 4(class II), pi polypeptide), 유전자 등록번호(Genebank) NM_000671(ADH5,Alcohol dehydrogenase 5(class III), chi polypeptide), 유전자 등록번호(Genebank) NM_002610(PDK1,Pyruvate dehydrogenase kinase, isozyme 1), 유전자 등록번호(Genebank) AK026927(MGC5297,Hypothetical protein MGC5297), 유전자 등록번호(Genebank) AK127326(PHF17,PHD finger protein 17), 유전자 등록번호(Genebank) BC039110(SMNDC1,Survival motor neuron domain containing 1), 유전자 등록번호(Genebank) BC041849(ROCK1,Rho-associated, coiled-coil containing protein kinase 1), 유전자 등록번호(Genebank) BX537500(PDCD4,Programmed cell death 4(neoplastic transformation inhibitor)), 유전자 등록번호(Genebank) CR596268(ITGB3BP,Integrin beta 3 binding protein(beta3-endonexin)), 유전자 등록번호(Genebank) NM_004938(DAPK1,Death-associated protein kinase 1), 유전자 등록번호(Genebank) NM_012238(SIRT1,Sirtuin(silent mating type information regulation 2 homolog) 1(S. cerevisiae)), 유전자 등록번호(Genebank) NM_130837(OPA1,Optic atrophy 1(autosomal dominant)), 유전자 등록번호(Genebank) NM_148957(TNFRSF19,Tumor necrosis factor receptor superfamily, member 19), 유전자 등록번호(Genebank) AB208919(FGFR1,Fibroblast growth factor receptor 1(fms-related tyrosine kinase 2, Pfeiffer syndrome)), 유전자 등록번 호(Genebank) AB209601(TIZ,Zinc finger protein 675), 유전자 등록번호(Genebank) AK125150(MAPK8,Mitogen-activated protein kinase 8), 유전자 등록번호(Genebank) BC027881(AFP,Alpha-fetoprotein), 유전자 등록번호(Genebank) NM_020995(HPR,Haptoglobin-related protein), 유전자 등록번호(Genebank) AF167706(CRIM1,Cysteine rich transmembrane BMP regulator 1(chordin-like)), 유전자 등록번호(Genebank) BC045655(MAC30,Hypothetical protein MAC30), 유전자 등록번호(Genebank) BX537509(NET1,Neuroepithelial cell transforming gene 1), 유전자 등록번호(Genebank) BX640958(YEATS4,YEATS domain containing 4), 유전자 등록번호(Genebank) BX647757(Homo sapiens sex comb on midleg-like 1(Drosophila)(SCML1), mRNA [NM_006746],sex comb on midleg-like 1(Drosophila)), 유전자 등록번호(Genebank) NM_006548(IMP-2,IGF-II mRNA-binding protein 2), 유전자 등록번호(Genebank) AY376439(ECT2,Epithelial cell transforming sequence 2 oncogene), 유전자 등록번호(Genebank) AY596970(GARNL1,GTPase activating Rap/RanGAP domain-like 1), 유전자 등록번호(Genebank) BC050630(RAB3-GAP150,RAB3 GTPase activating protein subunit 2(non-catalytic)), 유전자 등록번호(Genebank) NM_001001132(ITSN1,Intersectin 1(SH3 domain protein)), 유전자 등록번호(Genebank) NM_016340(KIAA1961,KIAA1961 gene), 유전자 등록번호(Genebank) NM_145290(GPR125,G protein-coupled receptor 125), 유전자 등록번호(Genebank) NM_003574(VAPA,VAMP(vesicle-associated membrane protein)-associated protein A, 33kDa), 유전자 등록번호(Genebank) M28016(cytochrome b,Human mitochondrial cytochrome b gene, partial cds.), 유전자 등록번호(Genebank) NM_013277(RACGAP1,Rac GTPase activating protein 1), 유전자 등록번호(Genebank) AB096248(SNF1LK2,SNF1-like kinase 2), 유전자 등록번호(Genebank) NM_001698(AUH,AU RNA binding protein/enoyl-Coenzyme A hydratase), 유전자 등록번호(Genebank) AB091343(C10orf3,Centrosomal protein 55kDa).
본 발명자들은 다이벤조에이에이취안트라센에 대한 노출 여부 확인용 바이오마커를 발굴하기 위하여, 다이벤조에이에이취안트라센을 인간 간암 세포주(HepG2)에 처리하여 세포 독성을 확인하였다. 그 결과, 상기 다이벤조에이에이취안트라센은 인간 간암 세포주에 독성을 가짐이 확인되었고(도 1 참조), 상기 실험을 바탕으로 다이벤조에이에이취안트라센의 농도를 결정하였다. 이후 상기 결정된 농도로 다이벤조에이에이취안트라센을 인간 간암 세포주에 처리하고, 상기 물질을 처리한 세포주에서 mRNA를 분리하여 cDNA를 합성하면서 형광물질(Cy5)로 표지하였으며, 약물을 처리하지 않은 대조군의 경우 Cy3로 표지하였다. 상기 형광표지된 cDNA를 44 k 올리고마이크로어레이 칩 Human whole genome microarray(Agilent, USA)와 혼성화하였고, 형광 이미지를 스캔하여 유전자 발현 양상의 차이를 분석하였다(도 2 참조). 분석시 Cy5/Cy3 비율이 2.0배 이상인 경우 발현 증가된 유전자로 분류하였고, 0.5배 이하인 경우 발현 감소된 유전자로 분류하였다. 분석 결과, 발현 증가된 유전자는 0.39%(44,000개의 유전자 중 170개) 발현이 감소된 유전자는 0.77%(44,000개의 유전자 중 338개)임을 확인하였다. 이때, 다이벤조에이에이취안트라센에 의해 2배 이상 과발현 혹은 저발현 되는 유전자들을 분류한 기능별로 분류하면, 세포 주기(cell cycle), 핵산 결합(nucleic acid binding), 금속원소 결합(metal binding), 산화 환원 효소 활성(Oxidoreductase activity), I-kappaB 키나아제(kinase)/NF-kappaB 캐스케이드(cascade), 암(Cancer), 외부 자극에 대한 반응(Response to external stimulus), 세포골격 단백질 결합(Cytoskeletal protein binding), 칼슘 이온 결합(Calcium ion binding), 소낭-매개 수송(Vesicle-mediated transport), 징크-핑거(Zinc-finger), 뉴클레오티드 결합(Nucleotide binding), 유기산 대사(Organic acid metabolism), 보체 및 응고 캐스케이드(Complement and coagulation cascades), 알코올 대사(Alcohol metabolism), MAPKKK 캐스케이드(cascade), GTPase 조절 활성(regulator activity), 아팝토시스(apoptosis), 단백질 전달(protein transport), 형태 형성(morphogenesis), 면역반응(immune response), 세포 증식(cell proliferation), 지방산 대사(lipid metabolism), 화학물질 자극 반응(response to chemical stimulus) 또는 DNA 손상 반응(response to DNA damage stimulus) 등의 관련 유전자들이었다(표 2 및 표 3참조). 상기 유전자들은 본 발명에서 사용한 다이벤조에이에이취안트라센을 처리했을 때, 인간 간암 세포에서 독성과 관련이 있다는 보고는 없다.
본 발명자들은 상기 유전자 중 과발현된 유전자 30종과 저발현된 유전자 18종을 분리하여 실시간 RT-PCR(real-time reverse transcript polymerase chain reaction) 방법으로 발현 양상을 조사하였다. 그 결과, 30종의 과발현 유전자들과 18종의 저발현 유전자의 발현 양상이 올리고마이크로어레이 칩 결과와 유사하게 나타남을 확인하였다(표 5 참조). 이들 유전자들은 유전자 등록번호(Genebank) BM913048(TIMP metallopeptidase inhibitor 1), 유전자 등록번호(Genebank) NM_004864(Growth differentiation factor 15), 유전자 등록번호(Genebank) AK095363(Aquaporin 3), 유전자 등록번호(Genebank) NM_003516(Histone 2, H2aa), 유전자 등록번호(Genebank) NM_001013632(Similar to hypothetical protein 4833401D15), 유전자 등록번호(Genebank) Y11307(Cysteine-rich, angiogenic inducer, 61), 유전자 등록번호(Genebank) NM_001769 (CD9 antigen(p24)), 유전자 등록번호(Genebank) AY368150(Family with sequence similarity 62(C2 domain containing) member B), 유전자 등록번호(Genebank) NM_000499(Cytochrome P450, family 1, subfamily A, polypeptide 1), 유전자 등록번호(Genebank) BC035124 (MSFL2541), 유전자 등록번호(Genebank) AK097009(phospholipid transfer protein), 유전자 등록번호(Genebank) NM_000596(Insulin-like growth factor binding protein 1), 유전자 등록번호(Genebank) NM_006426(Dihydropyrimidinase-like 4), 유전자 등록번호(Genebank) NM_021603(FXYD domain containing ion transport regulator 2), 유전자 등록번호(Genebank) AB033073(Sulfatase 2), 유전자 등록번호(Genebank) NM_004881(Tumor protein p53 inducible protein 3), 유전자 등록번호(Genebank) NM_001553(Insulin-like growth factor binding protein 7), 유전자 등록번호(Genebank) NM_032872(Synaptotagmin-like 1), 유전자 등록번 호(Genebank) BU945318(Hypothetical gene supported by X97260; BC070289 (metallothionein 2A )), 유전자 등록번호(Genebank) X02812(Transforming growth factor, beta 1(Camurati-Engelmann disease)), 유전자 등록번호(Genebank) NM_003897(Immediate early response 3), 유전자 등록번호(Genebank) NM_145256(Leucine rich repeat containing 25), 유전자 등록번호(Genebank) BU587578(Regulator of G-protein signalling 10), 유전자 등록번호(Genebank) NM_133493(CD109 antigen (Gov platelet alloantigens)), 유전자 등록번호(Genebank) NM_005319(Histone 1, H1c), 유전자 등록번호(Genebank) BG036385(Receptor(calcitonin) activity modifying protein 1), 유전자 등록번호(Genebank) NM_012396(Pleckstrin homology-like domain, family A, member 3), 유전자 등록번호(Genebank) AB208949(Leucine-rich repeats and death domain containing), 유전자 등록번호(Genebank) BU603483(Histone 1, H1e), 유전자 등록번호(Genebank) Y12692(Wingless-type MMTV integration site family, member 11), 유전자 등록번호(Genebank) BC022255(Spindle pole body component 25 homolog (S. cerevisiae)), 유전자 등록번호(Genebank) AB013380(ATP-binding cassette, sub-family B(MDR/TAP), member 10), 유전자 등록번호(Genebank) AB046861 (KIAA1641), 유전자 등록번호(Genebank) BX640965(Solute carrier family 22(extraneuronal monoamine transporter), member 3), 유전자 등록번호(Genebank) XM_291202(Zinc finger protein 479), 유전자 등록번호(Genebank) NM_018492(PDZ binding kinase), 유전자 등록번호(Genebank) NM_145697(Cell division cycle associated 1), 유전자 등록번호(Genebank) NM_017768(Leucine rich repeat containing 40), 유전자 등록번호(Genebank) BX640888(Glypican 6), 유전자 등록번호(Genebank) U65410 (MAD2 mitotic arrest deficient-like 1(yeast)), 유전자 등록번호(Genebank) CR600021 (High-mobility group box 2), 유전자 등록번호(Genebank) AK074377(Chromosome 19 open reading frame 31), 유전자 등록번호(Genebank) NM_180991(Solute carrier organic anion transporter family, member 4C1), 유전자 등록번호(Genebank) NM_006101 (Kinetochore associated 2), 유전자 등록번호(Genebank) AB091343(Centrosomal protein 55kDa), 유전자 등록번호(Genebank) NM_001067(Topoisomerase (DNA) II alpha 170kDa), 유전자 등록번호(Genebank) NM_003318(TTK protein kinase), 유전자 등록번호(Genebank) NM_032117(GAJ protein)이다.
또한, 본 발명은 상기 바이오마커 유전자 서열의 전부 또는 일부를 포함하는 올리고뉴클레오티드 또는 그의 상보 가닥 분자가 집적된 다이벤조에이에이취안트라센에 대한 노출 여부 확인용 DNA 마이크로어레이 칩을 제공한다.
상기 올리고 뉴클레오티드 또는 이의 상보가닥 분자는 상기 바이오마커 유전자의 18 내지 30개의 핵산을 포함하고, 바람직하게는 20 내지 25개의 핵산을 포함한다.
본 발명의 다이벤조에이에이취안트라센 검색용 DNA 마이크로어레이 칩은 당업자에게 알려진 방법으로 제작할 수 있다. 상기 마이크로어레이 칩을 제작하는 방법은 하기와 같다. 상기 탐색된 바이오마커를 탐침 DNA 분자로 이용하여 DNA 칩의 기판상에 고정화시키기 위해 파이조일렉트릭(piezoelectric) 방식을 이용한 마이크로피펫팅(micropipetting)법 또는 핀(pin) 형태의 스폿터(spotter)를 이용한 방법 등을 사용하는 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니며, 본 발명의 바람직한 실시예에서는 핀 형태의 스폿터인 마이크로어레이를 이용하였다. 상기 DNA 마이크로어레이 칩의 기판은 아미노-실란(amino-silane), 폴리-L-라이신(poly-L-lysine) 및 알데히드(aldehyde)로 이루어진 군에서 선택되는 하나의 활성기가 코팅된 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 상기 기판은 슬라이드 글래스, 플라스틱, 금속, 실리콘, 나일론 막, 및 니트로셀룰로스 막(nitrocellulose membrane)으로 이루어진 군에서 선택될 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니며, 본 발명의 바람직한 실시예에서는 아미노-실란이 코팅된 슬라이드 글래스를 이용하였다.
또한, 본 발명은 상기 바이오마커를 이용한 다이벤조에이에이취안트라센에 대한 노출 여부를 확인하는 방법을 제공한다.
본 발명은 하기와 같은 과정을 포함하는 다이벤조에이에이취안트라센에 대한 노출 여부를 확인하는 방법을 제공한다:
1) 인간 체세포에 피검화합물을 처리하는 단계;
2) 단계 1)의 피검 화합물을 처리한 실험군 세포와 피검화합물을 처리하지 않은 대조군 세포에서 RNA를 분리하는 단계;
3) 단계 2)의 실험군과 대조군의 RNA를 cDNA로 합성하면서 실험군과 대조군을 각기 다른 형광물질을 표지하는 단계;
4) 단계 3)의 각기 다른 형광물질로 표지된 cDNA를 DNA 마이크로어레이칩과 혼성화시키는 단계;
5) 단계 4)의 반응한 DNA 마이크로어레이 칩을 분석하는 단계; 및
6) 단계 5)의 분석한 데이터에서 본 발명의 바이오마커의 발현 정도를 대조군과 비교하여 확인하는 단계,
상기 노출 여부를 확인하는 방법에 있어서, 단계 1)의 체세포는 인간 간암 세포주(HepG2)를 사용하는 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니며, 인간의 간 또는 간암의 세포 및 조직에서 유래한 세포라면 모두 사용 가능하다.
상기 노출 여부를 확인하는 방법에 있어서, 단계 3)의 형광물질은 Cy3, Cy5, FITC(poly L-lysine-fluorescein isothiocyanate), RITC(rhodamine-B-isothiocyanate) 및 로다민(rhodamine)으로 이루어진 군으로부터 선택되어지는 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니며, 당업자에게 알려진 형광물질은 모두 사용 가능하다.
상기 노출 여부를 확인하는 방법에 있어서, 단계 5)의 DNA 마이크로어레이 칩은 Whole Human Genome Oligo Microarray(Agilent, USA)등을 사용하는 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니며, 인간 게놈 중 본 발명에서 상기 공통적으로 과발현 또는 저발현 유전자(표 2 및 포 3 참조)가 탑재된 마이크로어레이 칩이라면 사용 가능하고, 상기 본 발명자가 제작한 DNA 마이크로어레이 칩을 사용하는 것이 가장 바람직하다. 또한, 단계 5)의 분석 방법은 GenePix 4.1 소프트웨어(Axon Instruments, USA)를 사용하는 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니며, 당업자에게 알려진 분석 소프트웨어를 사용하여도 무방하다.
또한, 본 발명은 하기와 같은 과정을 포함하는 다이벤조에이에이취안트라센에 대한 노출 여부를 확인하는 방법을 제공한다:
1) 인간 체세포에 피검화합물을 처리하는 단계;
2) 단계 1)의 피검화합물을 처리한 실험군 세포와 피검화합물을 처리하지 않은 대조군 세포에서 RNA를 분리하는 단계;
3) 단계 2)의 RNA를, 본 발명의 바이오마커 유전자에 상보적이고 바이오마커 유전자를 증폭할 수 있는 프라이머를 사용하여 실시간 RT-PCR(Real-time reverse transcript polymerase chain reaction)을 수행하는 단계; 및
4) 단계 3)의 유전자 산물을 대조군과 비교하여 발현 정도를 확인하는 단계,
상기 노출 여부를 확인하는 방법에 있어서, 단계 1)의 체세포는 인간 간암 세포주(HepG2)를 사용하는 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니며, 인간의 간 또는 간암의 세포 및 조직에서 유래한 세포라면 모두 사용 가능하다.
상기 노출 여부를 확인하는 방법에 있어서, 단계 3)의 프라이머는 본 발명에서 탐색된 바이오마커 유전자와 상보적이고, 바이오마커를 증폭할 수 있는 프라이머라면 모두 사용가능하다. 본 발명에서는 서열번호 1 내지 50으로 기재되는 정방향 및 역방향의 프라이머 25쌍을 제시하였으나 이에 한정되는 것은 아니다.
또한, 본 발명은 다이벤조에이에이취안트라센에 대한 노출 여부 확인용 키트를 제공한다.
본 발명은 상기 본 발명에서 제작한 DNA 마이크로어레이 칩을 포함하는 다이벤조에이에이취안트라센에 대한 노출 여부 확인용 키트를 제공한다.
상기 확인용 키트에 추가적으로 인간 간세포를 포함하는 다이벤조에이에이취안트라센에 대한 노출 여부 확인용 키트를 제공한다. 상기 인간 간세포는 HepG2를 사용하는 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니며, 인간의 간 또는 간암의 세포 및 조직에서 유래한 세포라면 모두 사용 가능하다.
상기 키트에 추가적으로 형광물질을 포함할 수 있으며, 상기 형광물질은 스트렙아비딘-알칼리 탈인화효소 접합물질(strepavidin-like phosphatease conjugate), 화학형광물질(chemiflurorensce) 및 화학발광물질(chemiluminescent)로 이루어진 군으로부터 선택되는 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니며, 본 발명의 바람직한 실시예에서는 Cy3와 Cy5를 사용하였다.
상기 키트에 추가적으로 반응 시약을 포함시킬 수 있으며, 상기 반응 시약은 혼성화에 사용되는 완충용액, RNA로부터 cDNA를 합성하기 위한 역전사효소, cNTPs 및 rNTP(사전 혼합형 또는 분리 공급형), 형광 염색제의 화학적 유도제와 같은 표식시약, 세척 완충용액 등으로 구성될 수 있으나 이에 한정된 것은 아니며, 당업자에게 알려진 DNA 마이크로어레이 칩의 혼성화 반응에 필요한 반응 시약은 모두 포함시킬 수 있다.
아울러, 본 발명은 상기 바이오마커 유전자에 상보적이고, 바이오마커 유전자를 증폭할 수 있는 프라이머를 포함하는 다이벤조에이에이취안트라센에 대한 노출 여부 확인용 키트를 제공한다.
상기 확인용 키트의 프라이머는 서열번호 1 내지 96으로 기재되는 서열로 구성된 군으로부터 선택되는 2개 이상의 정방향 및 역방향의 프라이머를 사용하는 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니며, 상기 바이오마커 유전자에 상보적이며, 바이오마커 유전자를 증폭할 수 있으며 증폭산물이 100 내지 300bp가 되도록 설계된 정방향 및 역방향 프라이머쌍은 모두 사용 가능하다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1> 세포 배양 및 화학물질 처리
<1-1> 세포배양
인간 간암 세포주인 HepG2 세포(한국 세포주 은행)를 10% FBS가 첨가된 DMEM 배지(Gibro-BRL, USA)를 이용하여 100 ㎜ 디쉬(dish)에서 80% 정도 자랄 때까지 배양하였다. 본 발명자들은 기존의 연구와 보고를 통해 다환방향족 탄화수소류의 하나로서 발암성을 가지고 있는 물질인 다이벤조에이에이취안트라센을 선정하였으며, DMSO에 용해시켰다. 매질(vehicle) 농도는 모든 실험에서 0.1% 이하였다.
<1-2> 세포 독성 실험(
MTT
assay
) 및 화학 물질 처리
Mossman 등(J. Immunol. Methods, 65, 55-63, 1983)의 방법으로 HepG2 세포주를 이용한 MTT 실험을 수행하였다. 세포는 24-웰 플레이트에 4× 105/웰 세포수로 DMEM 배지(Gibro-BRL, USA)에서 DMSO에 용해된 다이벤조에이에이취안트라센을 처리하고 48시간 후에 MTT(3-4,5-dimethylthiazol-2,5-diphenyltetra zolium bromide) 5 ㎎/㎖을 혼합하여 튜브에 가하여 37℃에서 3 시간 동안 배양하였다. 이 후 배지를 제거하고 형성된 포르마잔 크리스탈(formazan crystal)을 DMSO 500 ㎕에 용해하였다. 96-웰 플레이트로 옮겨 분주(aliquot)하고 흡광도 540 nm에서 O.D.값을 측정하였다.
HepG2 세포주에서 다이벤조에이에이취안트라센의 세포독성을 살펴본 결과, 20% 생존율을 보이는 농도(IC20)는 3.79 uM 이었으며(도 1 참조), 상기 농도들로 결정하여 마이크로어레이 실험을 수행하였다.
<실시예 2> 마이크로어레이 실험
<2-1> 표적
RNA
의 분리 및 형광 물질 표지
6 × 106 cell/㎖ 농도로 100 mm 디쉬에 HepG2 세포를 분주한 후, 실시예 1-2에서 결정된 다이벤조에이에이취안트라센의 농도를 48 시간 동안 처리하였다. 이 후, 상기 처리한 세포에서 트리졸(trizol) 시약(Invitrogen life technologies, USA)을 사용하여 제조사의 방법대로 전체 RNA를 분리하고, RNeasy mini kit(Qiagen, USA)를 사용하여 정제하였다. 게놈 DNA는 RNA 정제 동안 RNase-free DNase set(Qiagen, USA)를 사용하여 제거하였다. 각 전체 RNA 시료의 양은 분광광도계로 측정하였고, 농도는 Agilent 2100 Bioanalyzer(Agilent Technologies, USA)와 아가로스 젤 전기영동으로 확인하였다.
<2-2>
표지된
cDNA
제조
올리고 마이크로어레이 분석을 위하여 실시예 2-1에서 수득한 다이벤조에이에이취안트라센 처리군의 전체 RNA를 사용하여 cDNA를 제조하였다. 상기 수득한 전체 RNA 30 ㎍과 올리고(dT) 프라이머 2 ㎍(1 ㎍/㎕)과 혼합하고 65℃에서 10분간 반응시킨 후 바로 얼음에 넣어 어닐링(annealing)시켰다. 상기 어닐링된 RNA의 역전사(Reverse Transcript) 반응을 위해 표 1과 같이 시약을 혼합하였다.
구성 | 부피(㎕) |
5X first strand buffer | 6 |
dNTPs | 0.6 |
0.1 M DDT | 3 |
SuperScript II enzyme | 3 |
Cy-3 or Cy-5 dUTP | 2 |
대조군인 HepG2 세포주에서 분리한 전체 RNA는 Cy3-dUTP(녹색)로 표지화하였고, 다이벤조에이에이취안트라센을 처리한 HepG2 세포주로부터 분리한 RNA는 Cy5-dUTP(적색)로 표지화하였다. 이때 두 시료는 Microcon YM-30 컬럼(Millipore, USA)을 사용하여 혼합, 정제되었다.
<2-3>
혼성화
반응
혼성화 및 세척 과정은 지노첵(주)의 지시방법에 따라 수행되었다. 혼성화는 12시간 동안 62℃ 오븐에서 수행되었다. DNA 마이크로어레이 칩으로는 44 k Whole Human Genome Oligo Microarray(Agilent, USA)를 이용하였다. 세척(2분간 2× SSC/0.1% SDS에 세척, 3분간 1× SSC, 2분간 0.2× SSC에 세척) 후 슬라이드는 3분간 800 rpm으로 원심분리하여 건조하였다.
<2-4> 형광 이미지 획득
슬라이드 상의 혼성화 이미지는 Genepix 4000B(Axon Instruments, USA)로 스캔하였다. 결합하지 않은 유전자를 세척한 칩은 레이저 광 스캐너(laser fluorescence scanner)를 사용하여 형광 이미지를 획득하였다. 이때 녹색 형광 이미지는 대조군에서, 적색 형광 이미지는 실험군에서만 특이하게 발현되는 유전자의 활성정도를 나타내게 되며, 노란색 형광 이미지는 녹색과 적색의 보색으로 두 군의 발현이 큰 차이가 없음을 의미한다. 스캔한 이미지들은 유전자 발현 비율을 얻기 위하여 GenePix 4.1 소프트웨어(Axon Instruments, USA)로 분석하였다. 이렇게 하여 얻어진 데이터로부터 다이벤조에이에이취안트라센에 대한 마커 유전자를 선별하였다(도 2 참조).
그 결과, 올리고 칩 상에 존재하는 대략 4만 4천 개의 유전자 중에서 다이벤조에이에이취안트라센에 의해 Cy5/Cy3의 비율이 2.0배 이상으로 유전자 발현 증가를 보이는 유전자는 0.39%(44,000개의 유전자 중 170개) 발현이 감소된 유전자는 0.77%(44,000개의 유전자 중 338개)임을 확인하였다.
이때, 다이벤조에이에이취안트라센에 의해 2배 이상 과발현 혹은 저발현 되는 유전자들을 기능별로 분류한 결과, 세포 주기(cell cycle), 핵산 결합(nucleic acid binding), 금속원소 결합(metal binding), 산화 환원 효소 활성(Oxidoreductase activity), I-kappaB 키나아제(kinase)/NF-kappaB 캐스케이드(cascade), 암(Cancer), 외부 자극에 대한 반응(Response to external stimulus), 세포골격 단백질 결합(Cytoskeletal protein binding), 칼슘 이온 결합(Calcium ion binding), 소낭-매개 수송(Vesicle-mediated transport), 징크-핑거(Zinc-finger), 뉴클레오티드 결합(Nucleotide binding), 유기산 대사(Organic acid metabolism), 보체 및 응고 캐스케이드(Complement and coagulation cascades), 알코올 대사(Alcohol metabolism), MAPKKK 캐스케이드(cascade), GTPase 조절 활성(regulator activity), 아팝토시스(apoptosis), 단백질 전달(protein transport), 형태 형성(morphogenesis), 면역반응(immune response), 세포 증식(cell proliferation), 지방산 대사(lipid metabolism), 화학물질 자극 반응(response to chemical stimulus) 또는 DNA 손상 반응(response to DNA damage stimulus)등의 관련 유전자로 선별되었다(표 2 및 3). 상기 유전자들은 본 발명에서 사용한 다이벤조에이에이취안트라센을 처리 했을 때, 인간 간암 세포에서 독성과 관련이 있다는 보고는 없다.
등록번호 | 유전자 약어 | 유전자 명 | 중간값의 비 |
(a) 핵산 결합(Nucleic acid binding) | |||
AB209605 | SKIV2L | Superkiller viralicidic activity 2-like(S. cerevisiae) | 2.1018 |
AI200373 | HIST1H2AL | Histone 1, H2al | 2.6235 |
AK001594 | AKAP8L | A kinase (PRKA) anchor protein 8-like | 2.013 |
AK057577 | IRF3 | Interferon regulatory factor 3 | 2.0647 |
AL832659 | FLJ22833 | Hypothetical protein FLJ22833 | 2.1329 |
BC034487 | HIST1H2AK | Histone 1, H2ak | 2.2726 |
BC034569 | ZNF337 | Zinc finger protein 337 | 2.1349 |
BC038432 | RARA | Retinoic acid receptor, alpha | 2.3764 |
BC067782 | HIST1H2AG | Histone 1, H2ag | 2.3385 |
BC069193 | HIST2H2BE | Histone 2, H2be | 2.6107 |
BC071638 | HIST2H2BE | Histone 2, H2be | 2.0728 |
BC082232 | HIST1H2BG | Histone 1, H2bg | 2.9674 |
BC101655 | HIST1H2BI | Histone 1, H2bi | 2.497 |
BE741093 | HIST1H2AE | Histone 1, H2ae | 2.5171 |
BE973853 | HIST1H4J | Histone 1, H4j | 2.0269 |
BM752802 | HIST1H2BM | Histone 1, H2bm | 2.3956 |
BM919305 | POLR2L | Polymerase(RNA) II(DNA directed) polypeptide L, 7.6kDa | 2.0152 |
BU603483 | HIST1H1E | Histone 1, H1e | 2.9078 |
BX436525 | HIST1H2BH | Histone 1, H2bh | 2.6528 |
BX647290 | HIST1H2BO | Histone 1, H2bo | 2.4361 |
CB529694 | HIST2H2BE | Histone 2, H2be | 2.5292 |
CD710576 | HIST2H2AC | Histone 2, H2ac | 2.4817 |
CK000930 | HIST1H2AI | Histone 1, H2ai | 3.0403 |
CR608156 | HIST1H2AC | Histone 1, H2ac | 2.7116 |
NM_002515 | NOVA1 | Neuro-oncological ventral antigen 1 | 2.0559 |
NM_003516 | HIST2H2AA | Histone 2, H2aa | 3.6687 |
NM_003519 | HIST1H2BL | Histone 1, H2bl | 2.6713 |
NM_003670 | BHLHB2 | Basic helix-loop-helix domain containing, class B, 2 | 2.0858 |
NM_004660 | DDX3Y | DEAD(Asp-Glu-Ala-Asp) box polypeptide 3, Y-linked | 2.3166 |
NM_005319 | HIST1H1C | Histone 1, H1c | 4.5371 |
NM_005320 | HIST1H1D | Histone 1, H1d | 3.8704 |
NM_005524 | HES1 | Hairy and enhancer of split 1,(Drosophila) | 2.3072 |
NM_006442 | DRAP1 | DR1-associated protein 1(negative cofactor 2 alpha) | 2.1632 |
NM_021035 | KIAA1404 | KIAA1404 protein | 2.0244 |
U86136 | TEP1 | Telomerase-associated protein 1 | 3.7357 |
(b) 세포 주기(Cell cycle) | |||
AB209586 | MAPK13 | Mitogen-activated protein kinase 13 | 2.2308 |
AK074652 | SERTAD1 | SERTA domain containing 1 | 4.1847 |
AK122829 | GAS2L1 | Growth arrest-specific 2 like 1 | 2.5182 |
AK129595 | GADD45B | Growth arrest and DNA-damage-inducible, beta | 2.467 |
BC018266 | CDC42 | Cell division cycle 42(GTP binding protein, 25kDa) | 2.1073 |
BC041022 | SCAND1 | SCAN domain containing 1 | 2.4581 |
BM904612 | S100A6 | S100 calcium binding protein A6(calcyclin) | 4.1794 |
BM913048 | TIMP1 | TIMP metallopeptidase inhibitor 1 | 7.1451 |
CR612719 | GADD45A | Growth arrest and DNA-damage-inducible, alpha | 2.2517 |
NM_001007271 | DUSP13 | Dual specificity phosphatase 13 | 2.8862 |
NM_001015053 | HDAC5 | Histone deacetylase 5 | 2.3742 |
NM_001953 | ECGF1 | Endothelial cell growth factor 1(platelet-derived) | 2.3631 |
NM_003255 | TIMP2 | TIMP metallopeptidase inhibitor 2 | 3.1992 |
NM_005072 | SLC12A4 | Solute carrier family 12(potassium/chloride transporters), member 4 | 2.2653 |
NM_005343 | HRAS | V-Ha-ras Harvey rat sarcoma viral oncogene homolog | 2.1944 |
NM_005736 | ACTR1A | ARP1 actin-related protein 1 homolog A, centractin alpha(yeast) | 2.4131 |
NM_007065 | CDC37 | CDC37 cell division cycle 37 homolog(S. cerevisiae) |
2.0448 |
NM_078467 | CDKN1A | Cyclin-dependent kinase inhibitor 1A(p21, Cip1) | 3.5264 |
U68019 | SMAD3 | SMAD, mothers against DPP homolog 3(Drosophila) | 2.0341 |
X02812 | TGFB1 | Transforming growth factor, beta 1(Camurati-Engelmann disease) | 2.4116 |
(c) 세포자살(Apoptosis) | |||
AB033060 | PDCD6 | Aryl-hydrocarbon receptor repressor | 2.6041 |
AB209361 | FAS | Fas(TNF receptor superfamily, member 6) | 2.6084 |
AF332558 | BBC3 | BCL2 binding component 3 | 2.2627 |
AY028896 | CARD10 | Caspase recruitment domain family, member 10 | 2.1468 |
BC063507 | HSPA1B | Heat shock 70kDa protein 1B | 2.4005 |
BM557864 | HSPB1 | Heat shock 27kDa protein 1 | 2.545 |
NM_001003940 | BMF | Bcl2 modifying factor | 2.7805 |
NM_001165 | BIRC3 | Baculoviral IAP repeat-containing 3 | 2.7928 |
NM_001197 | BIK | BCL2-interacting killer (apoptosis-inducing) | 2.8576 |
NM_002305 | LGALS1 | Lectin, galactoside-binding, soluble, 1(galectin 1) | 2.6899 |
NM_003311 | PHLDA2 | Pleckstrin homology-like domain, family A, member 2 | 2.8112 |
NM_003639 | IKBKG | Inhibitor of kappa light polypeptide gene enhancer in B-cells, kinase gamma | 2.162 |
NM_003820 | TNFRSF14 | Tumor necrosis factor receptor superfamily, member 14 (herpesvirus entry mediator) | 2.2911 |
NM_003897 | IER3 | Immediate early response 3 | 2.8608 |
NM_004401 | DFFA | DNA fragmentation factor, 45kDa, alpha polypeptide | 2.3177 |
NM_016639 | TNFRSF12A | Tumor necrosis factor receptor superfamily, member 12A | 2.3277 |
(d) 금속원소 결합(Heavy metal binding) | |||
BC048334 | MT1G | Metallothionein 1G | 3.2779 |
BC053882 | MT1X | Metallothionein 1X | 2.8043 |
BI488702 | MT1K | Metallothionein 1M | 2.6922 |
NM_005947 | MT1B | Metallothionein 1B(functional) | 3.1209 |
(e) 산화환원효소 활성(Oxidoreductase activity) | |||
AK055088 | CYP2J2 | Cytochrome P450, family 2, subfamily J, polypeptide 2 | 2.0164 |
AK094474 | RHOC | Ras homolog gene family, member C | 3.1809 |
BC015041 | VAT1 | Family with sequence similarity 82, member C | 2.2805 |
NM_000499 | CYP1A1 | Cytochrome P450, family 1, subfamily A, polypeptide 1 | 28.795 |
NM_004881 | TP53I3 | Tumor protein p53 inducible protein 3 | 6.0758 |
NM_201397 | GPX1 | Glutathione peroxidase 1 | 2.1404 |
XM_498018 | LOC391827 | Similar to Keratin, type I cytoskeletal 18 (Cytokeratin 18)(K18)(CK 18) | 2.5927 |
AF524864 | AKR1B10 | Aldo-keto reductase family 1, member B10(aldose reductase) | 3.2966 |
AL833205 | ETFB | Electron-transfer-flavoprotein, beta polypeptide | 3.7522 |
BC034763 | FDXR | Ferredoxin reductase | 2.9951 |
CR610878 | AKR1B1 | Aldo-keto reductase family 1, member B1(aldose reductase) | 2.3323 |
NM_003330 | TXNRD1 | Thioredoxin reductase 1 | 2.3735 |
NM_004199 | P4HA2 | Procollagen-proline, 2-oxoglutarate 4-dioxygenase(proline 4-hydroxylase), alpha polypeptide II | 2.5157 |
NM_004753 | DHRS3 | Dehydrogenase/reductase(SDR family) member 3 | 2.6155 |
NM_031226 | CYP19A1 | Cytochrome P450, family 19, subfamily A, polypeptide 1 |
2.836 |
NM_032468 | ASPH | Aspartate beta-hydroxylase | 1.68479 |
(f) 화학적 자극에 대한 반응(Response to chemical stimulus) | |||
AB209112 | SLC2A8 | Solute carrier family 2,(facilitated glucose transporter) member 8 | 2.441 |
BC011409 | UGT1A6 | UDP glucuronosyltransferase 1 family, polypeptide A9 | 2.1735 |
H18681 | C20orf139 | Sulfiredoxin 1 homolog(S. cerevisiae) | 2.1976 |
NM_002658 | PLAU | Plasminogen activator, urokinase | 2.7515 |
NM_005064 | CCL23 | Chemokine(C-C motif) ligand 23 | 2.0562 |
NM_032965 | CCL14 | Chemokine(C-C motif) ligand 15 | 2.0322 |
Y11307 | CYR61 | Cysteine-rich, angiogenic inducer, 61 | 3.2156 |
(g) 단백질 전달(Protein transport) | |||
AB209808 | AP1M1 | Adaptor-related protein complex 1, mu 1 subunit | 2.3253 |
AK074154 | SYTL1 | Synaptotagmin-like 1 | 3.9072 |
AK098475 | GRPEL1 | GrpE-like 1, mitochondrial(E. coli) | 2.1853 |
AK123405 | GDI1 | GDP dissociation inhibitor 1 | 2.1693 |
BC000786 | ARFGAP1 | ADP-ribosylation factor GTPase activating protein 1 | 2.0762 |
BC042390 | VTI1B | Vesicle transport through interaction with t-SNAREs homolog 1B(yeast) | 1.95158 |
BG036385 | RAMP1 | Receptor(calcitonin) activity modifying protein 1 | 4.7724 |
BX648781 | GABARAPL1 | GABA(A) receptor-associated protein like 1 | 2.1622 |
NM_001013839 | EXOC7 | Exocyst complex component 7 | 2.088 |
NM_002926 | RGS12 | Regulator of G-protein signalling 12 | 2.2091 |
NM_007097 | CLTB | Clathrin, light polypeptide(Lcb) | 2.1413 |
NM_013336 | SEC61A1 | Sec61 alpha 1 subunit(S. cerevisiae) | 2.1386 |
NM_024101 | MLPH | Melanophilin | 2.2274 |
NM_032872 | SYTL1 | Synaptotagmin-like 1 | 3.4809 |
(h) 형태형성(Morphogenesis) | |||
NM_000596 | IGFBP1 | Insulin-like growth factor binding protein 1 | 2.439 |
NM_001553 | IGFBP7 | Insulin-like growth factor binding protein 7 | 2.616 |
NM_001712 | CEACAM1 | Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 1(biliary glycoprotein) | 2.1461 |
NM_012396 | PHLDA3 | Pleckstrin homology-like domain, family A, member 3 | 4.6884 |
Y12692 | WNT11 | Wingless-type MMTV integration site family, member 11 | 5.0306 |
(i) 세포증식(Cell proliferation) | |||
BC014470 | AZGP1 | Alpha-2-glycoprotein 1, zinc | 2.5654 |
BQ683841 | S100A11 | S100 calcium binding protein A11 (calgizzarin) | 2.9892 |
NM_002337 | LRPAP1 | Low density lipoprotein receptor-related protein associated protein 1 | 2.6062 |
(j) I-kappaB 키나아제(kinase)/NF-kappaB 캐스케이드(cascade) | |||
AF059617 | PLK2 | Polo-like kinase 2(Drosophila) | 2.1412 |
AK128553 | ZZANK1 | Mindbomb homolog 2(Drosophila) | 2.5443 |
(k) 암(Cancer) | |||
BX649164 | PAI; PAI1; PAI-1; PLANH1 |
serpin peptidase inhibitor, clade E(nexin, plasminogen activator inhibitor type 1), member 1 | 4.6911 |
NM_000602 | SERPINE1 | Serpin peptidase inhibitor, clade E(nexin, plasminogen activator inhibitor type 1), member 1 | 8.5352 |
(l) 외부자극에 대한 반응(Response to external stimulus) | |||
BI767815 | GP9 | Glycoprotein IX(platelet) | 2.0392 |
BM918324 | LY96 | Lymphocyte antigen 96 | 2.1091 |
NM_006404 | PROCR | Protein C receptor, endothelial(EPCR) | 3.6959 |
(m) 면역반응(Immune response) | |||
AF031469 | MR1 | Major histocompatibility complex, class I-related | 2.9106 |
BF569086 | NK4 | Interleukin 32 | 2.5263 |
BG564326 | SAA4 | Serum amyloid A4, constitutive | 2.2077 |
NM_001633 | AMBP | Alpha-1-microglobulin/bikunin precursor | 2.2539 |
NM_005532 | IFI27 | Interferon, alpha-inducible protein 27 | 2.2559 |
NM_017670 | OTUB1 | OTU domain, ubiquitin aldehyde binding 1 | 2.2528 |
(n) 세포골격 단백질 결합(Cytoskeletal protein binding) | |||
AK130130 | CAPG | Capping protein(actin filament), gelsolin-like | 3.3376 |
BX648190 | WDR1 | WD repeat domain 1 | 2.1051 |
CF552540 | TNNI2 | Troponin I type 2(skeletal, fast) | 2.1365 |
NM_001006946 | SDC1 | Syndecan 1 | 2.1352 |
NM_007284 | PTK9L | PTK9L protein tyrosine kinase 9-like(A6-related protein) | 2.3582 |
NM_015990 | KLHL5 | Kelch-like 5(Drosophila) | 2.479 |
(o) 칼슘 이온 결합(Calcium ion binding) | |||
BM467105 | CIB1 | Calcium and integrin binding 1(calmyrin) | 2.0355 |
CF553054 | TNNC1 | Troponin C type 1(slow) | 2.9244 |
NM_006384 | CIB1 | Calcium and integrin binding 1(calmyrin) | 2.3827 |
NM_080388 | S100A16 | S100 calcium binding protein A16 | 2.3956 |
(p) 소낭 매개 수송(Vesicle-mediated transport) | |||
NM_005817 | M6PRBP1 | Mannose-6-phosphate receptor binding protein 1 | 2.1146 |
NM_006555 | YKT6 | SNARE protein Ykt6 | 2.1196 |
(q) 지질 대사(Lipid metabolism) | |||
AK093461 | ISYNA1 | Myo-inositol 1-phosphate synthase A1 | 2.8845 |
AK097009 | PLTP | phospholipid transfer protein | 4.6286 |
BC030207 | NR0B2 | Nuclear receptor subfamily 0, group B, member 2 | 2.3831 |
BC035124 | UNQ2541 | MSFL2541 | 5.2427 |
NM_145323 | OSBPL3 | Oxysterol binding protein-like 3 | 2.6902 |
(r) DNA 손상 자극에 대한 반응(Response to DNA damage stimulus) | |||
BC050455 | DDB2 | LIM homeobox 3 | 3.3294 |
BC068535 | TP53AP1 | TP53 activated protein 1 | 2.959 |
NM_016440 | VRK3 | Vaccinia related kinase 3 | 2.3471 |
(o) 기타(The others) | |||
NM_001124 | ADM | Adrenomedullin | 2.0398 |
NM_170707 | LMNA | Lamin A/C | 2.2057 |
NM_004633 | IL1R2 | Interleukin 1 receptor, type II | 3.0836 |
NM_004864 | GDF15 | Growth differentiation factor 15 | 11.09 |
NM_017572 | MKNK2 | MAP kinase interacting serine/threonine kinase 2 | 1.58373 |
AA669162 | AMPD3 | Transcribed locus | 1.913 |
AB033073 | SULF2 | Sulfatase 2 | 3.4281 |
AB208949 | LRDD | Leucine-rich repeats and death domain containing | 3.9501 |
AK022712 | FLJ12650 | Family with sequence similarity 77, member C | 4.5136 |
AK095363 | AQP3 | Aquaporin 3 | 5.8311 |
AY368150 | CHR2SYT | Family with sequence similarity 62(C2 domain containing) member B | 2.6018 |
BU587578 | RGS10 | Regulator of G-protein signalling 10 | 6.7772 |
BU945318 | MT2A | Hypothetical gene supported by X97260; BC070289 | 8.259 |
NM_001013632 | LOC343521 | Similar to hypothetical protein 4833401D15 | 3.0766 |
NM_006426 | DPYSL4 | Dihydropyrimidinase-like 4 | 5.4307 |
NM_133493 | CD109 | CD109 antigen(Gov platelet alloantigens) | 6.7343 |
NM_145256 | LRRC25 | Leucine rich repeat containing 25 | 9.5677 |
등록번호 | 유전자 약어 | 유전자명 | 중간값의 비 |
(a)세포주기(cell cycle) | |||
AB033337 | MPHOSPH1 | M-phase phosphoprotein 1 | 0.35083 |
AB208875 | Septin 10 | Septin 10 | 0.30327 |
AF053305 | BUB1 | BUB1 budding uninhibited by benzimidazoles 1 homolog (yeast) |
0.25368 |
AF053306 | BUB1B | BUB1 budding uninhibited by benzimidazoles 1 homolog beta(yeast) |
0.45169 |
AF345347 | SPAG5 | Sperm associated antigen 5 | 0.30751 |
AK222819 | NUSAP1 | Nucleolar and spindle associated protein 1 | 0.3951 |
AY367065 | ASPM | Asp(abnormal spindle)-like, microcephaly associated(Drosophila) |
0.23212 |
BC004352 | KIF22 | Kinesin family member 22 | 0.47112 |
BC010607 | IGF1R | Insulin-like growth factor 1 receptor | 0.25685 |
BC011000 | CDCA5 | Cell division cycle associated 5 | 0.20335 |
BC013326 | GAS2 | Growth arrest-specific 2 | 0.32771 |
BC032677 | UBE2C | Ubiquitin-conjugating enzyme E2C | 0.25278 |
BC040991 | TFDP2 | Transcription factor Dp-2(E2F dimerization partner 2) |
0.37376 |
BC050384 | SUPT3H | Suppressor of Ty 3 homolog(S. cerevisiae) | 0.35169 |
BC068483 | RINT-1 | Rad50-interacting protein 1 | 0.45673 |
BQ278454 | CKS1B | CDC28 protein kinase regulatory subunit 1B | 0.44541 |
BX647885 | STMN1 | Stathmin 1/oncoprotein 18 | 0.37073 |
CR604810 | CCNA2 | Cyclin A2 | 0.23777 |
CR933728 | CDC2 | Cell division cycle 2, G1 to S and G2 to M | 0.25818 |
D42045 | DCLRE1A | DNA cross-link repair 1A(PSO2 homolog, S. cerevisiae) |
0.49745 |
NM_000189 | HK2 | Hexokinase 2 | 0.33861 |
NM_001005414 | ZWINT | ZW10 interactor antisense | 0.27438 |
NM_001018159 | APPBP1 | Amyloid beta precursor protein binding protein 1 | 0.46513 |
NM_001239 | CCNH | Cyclin H | 0.47653 |
NM_001790 | CDC25C | Cell division cycle 25C | 0.41502 |
NM_001827 | CKS2 | CDC28 protein kinase regulatory subunit 2 | 0.4783 |
NM_002431 | MNAT1 | Menage a trois 1 (CAK assembly factor) | 0.45264 |
NM_002467 | MYC | V-myc myelocytomatosis viral oncogene homolog (avian) | 0.38625 |
NM_002709 | PPP1CB | Protein phosphatase 1, catalytic subunit, beta isoform | 0.42171 |
NM_002737 | PRKCA | Protein kinase C, alpha | 0.33806 |
NM_002894 | RBBP8 | Retinoblastoma binding protein 8 | 0.37474 |
NM_003318 | TTK | TTK protein kinase | 0.1978 |
NM_003478 | CUL5 | Cullin 5 | 0.41795 |
NM_003981 | PRC1 | Protein regulator of cytokinesis 1 | 0.42662 |
NM_004064 | CDKN1B | Cyclin-dependent kinase inhibitor 1B(p27, Kip1) | 0.33302 |
NM_004354 | CCNG2 | Cyclin G2 | 0.35756 |
NM_004365 | CETN3 | Centrin, EF-hand protein, 3(CDC31 homolog, yeast) |
0.46383 |
NM_004523 | KIF11 | Kinesin family member 11 | 0.4094 |
NM_004701 | CCNB2 | Cyclin B2 | 0.42882 |
NM_005504 | BCAT1 | Branched chain aminotransferase 1, cytosolic | 0.3646 |
NM_005915 | MCM6 | MCM6 minichromosome maintenance deficient 6 (MIS5 homolog, S. pombe)(S. cerevisiae) | 0.41193 |
NM_006101 | KNTC2 | Kinetochore associated 2 | 0.18429 |
NM_006265 | RAD21 | RAD21 homolog(S. pombe) | 0.45906 |
NM_014750 | DLG7 | Discs, large homolog 7(Drosophila) | 0.20256 |
NM_014751 | MTSS1 | Metastasis suppressor 1 | 0.24565 |
NM_016343 | CENPF | Centromere protein F, 350/400ka(mitosin) | 0.14607 |
NM_018492 | PBK | PDZ binding kinase | 0.08077 |
NM_018685 | ANLN | Anillin, actin binding protein(scraps homolog, Drosophila) | 0.35749 |
NM_019001 | XRN1 | 5'-3' exoribonuclease 1 | 0.43747 |
NM_019063 | EML4 | Echinoderm microtubule associated protein like 4 | 0.45829 |
NM_020242 | KNSL7 | Kinesin family member 15 | 0.42706 |
U65410 | MAD2L1 | MAD2 mitotic arrest deficient-like 1(yeast) | 0.16576 |
(b) 금속원소 결합(Metal-binding) | |||
AB096175 | SP5 | Sp5 transcription factor | 0.43665 |
AB209086 | ZNF493 | Zinc finger protein 493 | 0.35698 |
AB209334 | SP3 | Sp3 transcription factor | 0.45764 |
AB209892 | ZFX | Zinc finger protein, X-linked | 0.34865 |
AF279145 | ANTXR1 | Anthrax toxin receptor 1 | 0.13875 |
AK095600 | FLJ38281 | Zinc finger protein 564 | 0.47841 |
AK123010 | RRM2 | Ribonucleotide reductase M2 polypeptide | 0.36556 |
AK126180 | DTYMK | Deoxythymidylate kinase (thymidylate kinase) | 0.46911 |
AK130071 | HSPC063 | BTB(POZ) domain containing 15 | 0.31855 |
AK131420 | ZNF66 | Zinc finger protein 66 | 0.46657 |
AK131472 | cDNA FLJ16640 fis |
CDNAFLJ16640fis,cloneTESTI4028938,moderately similar to Zinc finger protein 85 |
0.47933 |
AK131527 | ZNF15L1 | Zinc finger protein 708(KOX8) | 0.32805 |
AK160373 | DKFZp547K1113 | Zinc finger protein 710 | 0.47176 |
AL832422 | ZNF430 | Zinc finger protein 430 | 0.43256 |
AY269786 | ZNF429 | Zinc finger protein 429 | 0.38464 |
BC035579 | ZNF100 | Zinc finger protein 100 | 0.44054 |
BC036394 | ZNF85 | Zinc finger protein 85(HPF4, HTF1) | 0.41513 |
BM466459 | DGKI | Diacylglycerol kinase, iota | 0.38696 |
BX537574 | FREM1 | FRAS1 related extracellular matrix 1 | 0.44186 |
BX537987 | TRIM59 | Tripartite motif-containing 59 | 0.31892 |
BX648469 | ATF2 | Activating transcription factor 2 | 0.36978 |
CR608275 | CBLL1 | Cas-Br-M(murine) ecotropic retroviral transforming sequence-like 1 |
0.46609 |
CR749233 | ZNF626 | Zinc finger protein 626 | 0.3024 |
CR749832 | IMPDH1 | IMP(inosine monophosphate) dehydrogenase 1 | 0.39193 |
CR936615 | MATR3 | Matrin 3 | 0.33445 |
NM_000946 | PRIM1 | Primase, polypeptide 1, 49kDa | 0.43898 |
NM_001123 | ADK | Adenosine kinase | 0.47858 |
NM_002317 | LOX | Lysyl oxidase | 0.46107 |
NM_002655 | PLAG1 | Pleiomorphic adenoma gene 1 | 0.4595 |
NM_003423 | ZNF43 | Zinc finger protein 43(HTF6) | 0.2872 |
NM_005180 | PCGF4 | Polycomb group ring finger 4 | 0.49357 |
NM_014615 | KIAA0182 | KIAA0182 protein | 0.47799 |
NM_014919 | WHSC1 | Wolf-Hirschhorn syndrome candidate 1 | 0.46408 |
NM_015040 | PIP5K3 | Phosphatidylinositol-3-phosphate/phosphatidylinositol 5-kinase, type III | 0.45376 |
NM_015387 | PREI3 | Preimplantation protein 3 | 0.49481 |
NM_015905 | TIF1 | Tripartite motif-containing 24 | 0.46345 |
NM_016513 | ICK | Intestinal cell(MAK-like) kinase | 0.41575 |
NM_016626 | RKHD2 | Ring finger and KH domain containing 2 | 0.36216 |
NM_018660 | ZNF395 | Zinc finger protein 395 | 0.44342 |
NM_021129 | PP | Pyrophosphatase(inorganic) 1 | 0.44413 |
NM_025074 | FRAS1 | Fraser syndrome 1 | 0.35988 |
NM_173694 | ATP11C | ATPase, Class VI, type 11C | 0.43951 |
NM_176869 | PPA2 | Pyrophosphatase(inorganic) 2 | 0.37773 |
NM_182851 | CCNB1IP1 | Cyclin B1 interacting protein 1 | 0.49948 |
NM_199040 | NUDT4 | Nudix(nucleoside diphosphate linked moiety X)-type motif 4 pseudogene 2 |
0.41525 |
(c) 징크-핑거(Zinc-finger) | |||
AK122869 | LOC148213 | Zinc finger protein 681 | 0.39314 |
BC042500 | MGC42493 | Hypothetical protein MGC15634 | 0.43879 |
BC043147 | ZNF539 | Zinc finger protein 254 | 0.40677 |
BC044060 | ZNF650 | Zinc finger protein 650 | 0.444 |
BC050340 | ZNF230 | Zinc finger protein 230 | 0.35756 |
CR749800 | ZNFN1A5 | Zinc finger protein, subfamily 1A, 5 | 0.49461 |
CR936695 | ZNF468 | Zinc finger protein ZNF468 | 0.44479 |
NM_001009881 | ZCCHC11 | Zinc finger, CCHC domain containing 11 | 0.48634 |
NM_003441 | ZNF141 | Zinc finger protein 141(clone pHZ-44) | 0.35726 |
NM_006526 | ZNF217 | Zinc finger protein 217 | 0.47237 |
NM_007146 | ZNF161 | Zinc finger protein 161 | 0.48107 |
NM_015336 | ZDHHC17 | Zinc finger, DHHC-type containing 17 | 0.4429 |
NM_016220 | ZNF588 | Zinc finger protein 588 | 0.31565 |
NM_017742 | ZCCHC2 | Zinc finger, CCHC domain containing 2 | 0.36862 |
NM_021994 | ZNF277 | Zinc finger protein 277 | 0.48077 |
NM_024733 | FLJ14345 | Zinc finger protein 665 | 0.42934 |
NM_032367 | ZBED3 | Zinc finger, BED-type containing 3 | 0.49746 |
NM_033114 | MADP-1 | MADP-1 protein | 0.42341 |
NM_133473 | ZNF431 | Zinc finger protein 431 | 0.3817 |
NM_152626 | ZNF92 | Zinc finger protein 92 (HTF12) | 0.40656 |
NM_178558 | FLJ90430 | Zinc finger protein 680 | 0.37727 |
NM_198893 | ZNF160 | Zinc finger protein 160 | 0.34776 |
XM_047550 | ZNF492 | Zinc finger protein 492 | 0.39769 |
XM_290865 | LOC163233 | Similar to Zinc finger protein 93 (Zinc finger protein HTF34) | 0.33875 |
XM_371174 | ZNF283 | Zinc finger protein 283 | 0.42254 |
AB023141 | ZNF652 | Zinc finger protein 652 | 0.38855 |
(d) 핵산결합(Nucleic acid binding) | |||
AB209245 | HMGN1 | High-mobility group nucleosome binding domain 1 | 0.46859 |
AB209389 | GTF2IRD1 | GTF2I repeat domain containing 1 | 0.46581 |
AB209562 | HNRPK | Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K | 0.43357 |
AB209753 | RBM7 | RNA binding motif protein 7 | 0.45083 |
AF136171 | EAP; HBP15; HBP15/L22 |
ribosomal protein L22 | 0.43009 |
AK001230 | POT1 | POT1 protection of telomeres 1 homolog(S. pombe) |
0.42858 |
AK022942 | LOC58486 | Transposon-derived Buster1 transposase-like protein gene |
0.48768 |
AK025758 | NFATC2 | Nuclear factor of activated T-cells, cytoplasmic, calcineurin-dependent 2 |
0.20576 |
AK056803 | H2AFZ | H2A histone family, member Z | 0.44917 |
AK074119 | ZZZ3 | Zinc finger, ZZ-type containing 3 | 0.44405 |
AK091927 | SFRS3 | Splicing factor, arginine/serine-rich 3 | 0.27547 |
AK095937 | GC20 | Translation factor sui1 homolog | 0.45945 |
AK124178 | EIF3S6 | Eukaryotic translation initiation factor 3, subunit 6 48kDa |
0.43123 |
AL110212 | H2AFV | H2A histone family, member V | 0.37667 |
BC010266 | HNRNPA1; MGC102835 |
Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A1 | 0.20509 |
BM464978 | HMGN2 | High-mobility group nucleosomal binding domain 2 | 0.4533 |
BM800367 | RPL21 | Ribosomal protein L21 | 0.20394 |
BU677381 | RPL21 | Ribosomal protein L21 | 0.47154 |
BX647205 | HNRPH1 | Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein H1 (H) | 0.37271 |
BX647217 | HNRPA3 | Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A3 | 0.33904 |
CR625990 | PC4 | SUB1 homolog (S. cerevisiae) | 0.41044 |
CR627133 | LOC342892 | Hypothetical protein LOC342892 | 0.48311 |
NM_000947 | PRIM2A | Primase, polypeptide 2A, 58kDa | 0.40011 |
NM_000983 | RPL22 | Ribosomal protein L22 | 0.42025 |
NM_001015886 | HMGA2 | High mobility group AT-hook 2 | 0.3027 |
NM_001017430 | RBM3 | RNA binding motif (RNP1, RRM) protein 3 | 0.34016 |
NM_001018067 | PAI-RBP1 | SERPINE1 mRNA binding protein 1 | 0.42513 |
NM_001412 | EIF1AX | Eukaryotic translation initiation factor 1A, X-linked |
0.35067 |
NM_001809 | CENPA | Centromere protein A, 17kDa | 0.1957 |
NM_002139 | RBMX | RNA binding motif protein, X-linked | 0.32546 |
NM_002568 | PABPC1 | Poly(A) binding protein, cytoplasmic 1 | 0.49316 |
NM_003972 | BTAF1 | BTAF1 RNA polymerase II, B-TFIID transcription factor-associated, 170kDa (Mot1 homolog, S. cerevisiae) | 0.40919 |
NM_004454 | ETV5 | Ets variant gene 5(ets-related molecule) | 0.41338 |
NM_005463 | HNRPDL | Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein D-like | 0.36726 |
NM_006047 | CPNE1 | RNA binding motif protein 12 | 0.36365 |
NM_006345 | SLC30A9 | Solute carrier family 30(zinc transporter), member 9 |
0.4804 |
NM_006451 | PAIP1 | Poly(A) binding protein interacting protein 1 | 0.48198 |
NM_006546 | IMP-1 | IGF-II mRNA-binding protein 1 | 0.37468 |
NM_006716 | ASK | DBF4 homolog(S. cerevisiae) | 0.11298 |
NM_006775 | QKI | Quaking homolog, KH domain RNA binding(mouse) | 0.40179 |
NM_007080 | LSM6 | LSM6 homolog, U6 small nuclear RNA associated (S. cerevisiae) | 0.41973 |
NM_007208 | MRPL3 | Mitochondrial ribosomal protein L3 | 0.47143 |
NM_012207 | HNRPH3 | Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein H3(2H9) | 0.34741 |
NM_014321 | ORC6L | Origin recognition complex, subunit 6 homolog-like(yeast) |
0.3882 |
NM_014393 | STAU2 | Staufen, RNA binding protein, homolog 2 (Drosophila) | 0.47307 |
NM_014892 | RBM16 | RNA binding motif protein 16 | 0.48739 |
NM_015361 | R3HDM | R3H domain containing 1 | 0.42412 |
NM_015975 | TAF9L | TAF9-like RNA polymerase II, TATA box binding protein (TBP)-associated factor, 31kDa |
0.41956 |
NM_016200 | LSM8 | LSM8 homolog, U6 small nuclear RNA associated (S. cerevisiae) |
0.48447 |
NM_017437 | CPSF2 | Cleavage and polyadenylation specific factor 2, 100kDa | 0.32274 |
NM_018048 | FLJ10292 | Mago-nashi homolog | 0.4658 |
NM_018237 | CCAR1 | Cell division cycle and apoptosis regulator 1 | 0.35634 |
NM_031157 | HNRPA1 | Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A1 | 0.47976 |
NM_032390 | MKI67IP | MKI67(FHA domain) interacting nucleolar phosphoprotein |
0.3859 |
NM_033222 | PSIP1 | PC4 and SFRS1 interacting protein 1 | 0.35558 |
NM_054016 | FUSIP1 | FUS interacting protein(serine/arginine-rich) 1 | 0.4603 |
NM_145018 | FLJ25416 | Hypothetical protein FLJ25416 | 0.48266 |
NM_153333 | TCEAL8 | Transcription elongation factor A(SII)-like 8 | 0.33758 |
NM_203463 | LASS6 | LAG1 longevity assurance homolog 6 (S. cerevisiae) |
0.41492 |
NM_206866 | BACH1 | BTB and CNC homology 1, basic leucine zipper transcription factor 1 |
0.45049 |
U38847 | TARBP1 | TAR(HIV) RNA binding protein 1 | 0.49161 |
XM_371470 | LOC388907 | Similar to ribosomal protein L5; 60S ribosomal protein L5 | 0.27342 |
XM_372050 | LOC389674 | Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A1 pseudogene 4 |
0.40131 |
XM_372396 | LOC390158 | Olfactory receptor, family 8, subfamily K, member 1 |
0.39598 |
XM_496355 | LOC440577 | Similar to nucleophosmin 1; nucleolar phosphoprotein B23; numatrin; nucleophosmin/nucleoplasmin family, member 1 |
0.28714 |
XM_498328 | LOC392345 | Similar to PRED65 | 0.20701 |
XM_499298 | FLJ46189 | similar to Zinc finger protein 479(Zinc finger protein Kr19)(HKr19) | 0.41898 |
XM_499343 | PEG10 | Paternally expressed 10 | 0.41285 |
(e) 뉴클레오티드 결합(Nucleotide binding) | |||
AB013380 | ABCB10 | ATP-binding cassette, sub-family B(MDR/TAP), member 10 |
0.2796 |
AB018342 | MYO10 | Myosin X | 0.21488 |
AK025258 | UMP-CMPK | Cytidylate kinase | 0.48114 |
AK098205 | AK3L1 | Adenylate kinase 3 | 0.38833 |
AK122685 | GLUD1 | Glutamate dehydrogenase 1 | 0.35885 |
AK122695 | RRM1 | Ribonucleotide reductase M1 polypeptide | 0.34601 |
AK126343 | STK39 | Serine threonine kinase 39 (STE20/SPS1 homolog, yeast) | 0.48759 |
BC051861 | SPATA5L1 | Spermatogenesis associated 5-like 1 | 0.49716 |
BC064610 | SEPHS1 | Selenophosphate synthetase 1 | 0.43461 |
BX640965 | SLC22A3 | Solute carrier family 22(extraneuronal monoamine transporter), member 3 |
0.17225 |
D86550 | DYRK1A | Dual-specificity tyrosine-(Y)-phosphorylation regulated kinase 1A |
0.38409 |
NM_006343 | MERTK | C-mer proto-oncogene tyrosine kinase | 0.37529 |
NM_012073 | CCT5 | Chaperonin containing TCP1, subunit 5(epsilon) | 0.4626 |
NM_020326 | ABCD4 | ATP-binding cassette, sub-family D(ALD), member 4 | 0.46371 |
NM_030752 | TCP1 | T-complex 1 | 0.36356 |
NM_030919 | C20orf129 | Chromosome 20 open reading frame 129 | 0.27822 |
NM_182964 | NAV2 | Neuron navigator 2 | 0.42524 |
(f) 유기산 대사(Organic acid metabolism) | |||
AF020038 | IDH1 | Isocitrate dehydrogenase 1(NADP+), soluble | 0.3914 |
AK093311 | ACAA2 | Acetyl-Coenzyme A acyltransferase 2 (mitochondrial 3-oxoacyl-Coenzyme A thiolase) | 0.35663 |
BC008366 | DDC | Dopa decarboxylase(aromatic L-amino acid decarboxylase) |
0.28733 |
BC012616 | BHMT | Betaine-homocysteine methyltransferase | 0.36307 |
BC015062 | MTHFD2 | Methylenetetrahydrofolate dehydrogenase (NADP+ dependent) 2, methenyltetrahydrofolate cyclohydrolase |
0.46088 |
BC033320 | TAF9 | TAF9 RNA polymerase II, TATA box binding protein(TBP)-associated factor, 32kDa | 0.39469 |
BC033517 | ACOX2 | Acyl-Coenzyme A oxidase 2, branched chain | 0.41712 |
BC034481 | BCKDHB | Branched chain keto acid dehydrogenase E1, beta polypeptide(maple syrup urine disease) | 0.16833 |
BC035654 | NR1H4 | Nuclear receptor subfamily 1, group H, member 4 | 0.44821 |
BC042453 | MCCC1 | Methylcrotonoyl-Coenzyme A carboxylase 1 (alpha) | 0.42271 |
BC045541 | LOC200895 | Dihydrofolate reductase-like 1 | 0.31755 |
CR609484 | KYNU | Kynureninase(L-kynurenine hydrolase) | 0.49324 |
CR749593 | GLS | Glutaminase | 0.47179 |
NM_000016 | ACADM | Acyl-Coenzyme A dehydrogenase, C-4 to C-12 straight chain |
0.40371 |
NM_000277 | PAH | Phenylalanine hydroxylase | 0.21519 |
NM_001801 | CDO1 | Cysteine dioxygenase, type I | 0.35959 |
NM_002860 | ALDH18A1 | Aldehyde dehydrogenase 18 family, member A1 | 0.49858 |
NM_004169 | SHMT1 | Serine hydroxymethyltransferase 1(soluble) | 0.42905 |
NM_004457 | ACSL3 | Acyl-CoA synthetase long-chain family member 3 | 0.18036 |
NM_005589 | ALDH6A1 | Aldehyde dehydrogenase 6 family, member A1 | 0.47126 |
NM_013261 | PPARGC1A | Peroxisome proliferative activated receptor, gamma, coactivator 1, alpha |
0.40314 |
NM_018122 | FLJ10514 | Aspartyl-tRNA synthetase 2(mitochondrial) | 0.46997 |
NM_080820 | HARS2 | Histidyl-tRNA synthetase 2 | 0.44851 |
U73338 | MTR | 5-methyltetrahydrofolate-homocysteine methyltransferase |
0.39435 |
(g) 단백질 전달(Protein transport) | |||
AK001676 | NUP133 | Nucleoporin 133kDa | 0.45633 |
AK002165 | DKFZP564O123 | Chromatin modifying protein 2B | 0.48863 |
AK023143 | C10orf119 | Chromosome 10 open reading frame 119 | 0.36833 |
AK094603 | cDNA FLJ37284 fis |
unnamed protein product; Homo sapiens cDNA FLJ37284 fis, clone BRAMY2013590. |
0.30009 |
AK124768 | TNPO1 | Transportin 1 | 0.41733 |
BC000100 | SNX5 | Sorting nexin 5 | 0.41291 |
BC039468 | NUP50 | Nucleoporin 50kDa | 0.45122 |
BC064351 | SRP9 | Signal recognition particle 9kDa | 0.36359 |
BX091259 | UNQ9438 | TIMM9 | 0.40479 |
BX641063 | DEK | DEK oncogene(DNA binding) | 0.38383 |
BX648363 | SNX10 | Sorting nexin 10 | 0.34063 |
CR618609 | NOP5/NOP58 | Nucleolar protein NOP5/NOP58 | 0.46573 |
NM_002156 | HSPD1 | Heat shock 60kDa protein 1(chaperonin) | 0.48055 |
NM_006380 | APPBP2 | Amyloid beta precursor protein(cytoplasmic tail) binding protein 2 |
0.4494 |
NM_007214 | SEC63 | SEC63-like(S. cerevisiae) | 0.45993 |
NM_012460 | TIMM9 | Translocase of inner mitochondrial membrane 9 homolog(yeast) |
0.45449 |
NM_014765 | TOMM20 | Translocase of outer mitochondrial membrane 20 homolog(yeast) | 0.43137 |
NM_020401 | NUP107 | Nucleoporin 107kDa | 0.44206 |
NM_021807 | SEC8L1 | Exocyst complex component 4 | 0.2995 |
NM_031296 | RAB33B | RAB33B, member RAS oncogene family | 0.47666 |
NM_145261 | TIM14 | DnaJ(Hsp40) homolog, subfamily C, member 19 | 0.37623 |
NM_173827 | FLJ38991 | Mitochondrial COX18 | 0.4202 |
(h) 세포증식(Cell proliferation) | |||
AL162068 | NAP1L1 | Nucleosome assembly protein 1-like 1 | 0.38412 |
AL834186 | CDCA7 | Cell division cycle associated 7 | 0.29749 |
BC065520 | TCFL5 | Transcription factor-like 5(basic helix-loop-helix) |
0.46382 |
CR620626 | FGG | Fibrinogen gamma chain | 0.47156 |
M58569 | FGA | fibrinogen, A alpha polypeptide(FGA), transcript variant alpha-E, mRNA[NM_000508] | 0.17861 |
NM_002291 | LAMB1 | Laminin, beta 1 | 0.44392 |
NM_005141 | FGB | Fibrinogen beta chain | 0.46828 |
NM_005746 | PBEF1 | Pre-B-cell colony enhancing factor 1 | 0.455 |
(i) DNA 손상 자극에 대한 반응(Response to DNA damage stimulus) | |||
AK002156 | WDR33 | WD repeat domain 33 | 0.43947 |
AK074377 | UHRF1 | Chromosome 19 open reading frame 31 | 0.12854 |
AK122825 | HMGB1 | High-mobility group box 1 | 0.4148 |
BC032617 | POLI | Polymerase(DNA directed) iota | 0.45243 |
CR600021 | HMGB2 | High-mobility group box 2 | 0.13676 |
NM_001067 | TOP2A | Topoisomerase(DNA) II alpha 170kDa | 0.21539 |
NM_002916 | RFC4 | Replication factor C(activator 1) 4, 37kDa | 0.35857 |
NM_003368 | USP1 | Ubiquitin specific peptidase 1 | 0.19537 |
NM_006904 | PRKDC | Protein kinase, DNA-activated, catalytic polypeptide |
0.47732 |
NM_138271 | ATRX | Alpha thalassemia/mental retardation syndrome X-linked(RAD54 homolog, S. cerevisiae) |
0.35765 |
(j) 지질대사(Lipid metabolism) | |||
AF285167 | ABCA1 | ATP-binding cassette, sub-family A(ABC1), member 1 |
0.31344 |
AK124635 | PCSK9 | Proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 | 0.24201 |
NM_000236 | LIPC | Lipase, hepatic | 0.4137 |
AF062341 | CTNND1 | Catenin(cadherin-associated protein), delta 1 | 0.37072 |
AF480883 | PPAP2B | Phosphatidic acid phosphatase type 2B | 0.46324 |
BC035638 | LSS | Lanosterol synthase (2,3-oxidosqualene-lanosterol cyclase) |
0.37438 |
BX648473 | PIGK | Phosphatidylinositol glycan, class K | 0.48693 |
NM_001444 | FABP5 | Fatty acid binding protein 5 (psoriasis-associated) |
0.4684 |
NM_003129 | SQLE | Squalene epoxidase | 0.44559 |
NM_003580 | NSMAF | Neutral sphingomyelinase (N-SMase) activation associated factor |
0.4804 |
NM_018361 | AGPAT5 | 1-acylglycerol-3-phosphate O-acyltransferase 5(lysophosphatidic acid acyltransferase, epsilon) | 0.49121 |
NM_020918 | GPAM | Glycerol-3-phosphate acyltransferase, mitochondrial |
0.45135 |
(k) 보체 및 응고 캐그케이드(Complement and coagulation cascades) | |||
AB209031 | C5 | Complement component 5 | 0.49907 |
AF130100 | SERPINC1 | Serpin peptidase inhibitor, clade C (antithrombin), member 1 | 0.40884 |
AK122686 | IF | I factor(complement) | 0.47413 |
BC022312 | C4BPA | Complement component 4 binding protein, alpha | 0.22948 |
M75106 | CPB2 | Carboxypeptidase B2(plasma, carboxypeptidase U) | 0.35102 |
NM_000893 | KNG1 | Kininogen 1 | 0.36195 |
(l) 외부 자극에 대한 반응(Response to external stimulus) | |||
AK055619 | GNAQ | Guanine nucleotide binding protein(G protein), q polypeptide | 0.45748 |
AL832747 | GNAQ | Guanine nucleotide binding protein(G protein), q polypeptide | 0.48938 |
CR596712 | IL17D | Interleukin 17D | 0.49352 |
(m) 세포골격 단백질 결합(Cytoskeletal protein binding) | |||
AK000972 | C9orf40 | Chromosome 9 open reading frame 40 | 0.38933 |
AK023675 | UTRN | Utrophin(homologous to dystrophin) | 0.37953 |
AK026095 | SNTB1 | Syntrophin, beta 1(dystrophin-associated protein A1, 59kDa, basic component 1) |
0.47558 |
AL117472 | SORBS1 | Sorbin and SH3 domain containing 1 | 0.45976 |
NM_018728 | MYO5C | Myosin VC | 0.31417 |
XM_371116 | MYO5B | Myosin VB | 0.46988 |
(n) 알코올 대사(Alcohol metabolism) | |||
BC026320 | OGDHL | Oxoglutarate dehydrogenase-like | 0.4185 |
BC033391 | PP1665 | Glycerophosphodiester phosphodiesterase domain containing 5 | 0.39065 |
BC042421 | GK | Glycerol kinase | 0.48211 |
M15943 | ADH4 | Alcohol dehydrogenase 4(class II), pi polypeptide |
0.30316 |
NM_000671 | ADH5 | Alcohol dehydrogenase 5(class III), chi polypeptide |
0.38633 |
NM_002610 | PDK1 | Pyruvate dehydrogenase kinase, isozyme 1 | 0.37971 |
(o) 세포자살(Apoptosis) | |||
AK026927 | MGC5297 | Hypothetical protein MGC5297 | 0.4803 |
AK127326 | PHF17 | PHD finger protein 17 | 0.34712 |
BC039110 | SMNDC1 | Survival motor neuron domain containing 1 | 0.4466 |
BC041849 | ROCK1 | Rho-associated, coiled-coil containing protein kinase 1 |
0.34207 |
BX537500 | PDCD4 | Programmed cell death 4(neoplastic transformation inhibitor) |
0.43392 |
CR596268 | ITGB3BP | Integrin beta 3 binding protein(beta3-endonexin) | 0.31379 |
NM_004938 | DAPK1 | Death-associated protein kinase 1 | 0.42302 |
NM_012238 | SIRT1 | Sirtuin(silent mating type information regulation 2 homolog) 1(S. cerevisiae) |
0.43658 |
NM_130837 | OPA1 | Optic atrophy 1(autosomal dominant) | 0.48227 |
NM_148957 | TNFRSF19 | Tumor necrosis factor receptor superfamily, member 19 |
0.48094 |
(p) MAPKKK 캐스케이드(cascade) | |||
AB208919 | FGFR1 | Fibroblast growth factor receptor 1(fms-related tyrosine kinase 2, Pfeiffer syndrome) | 0.43928 |
AB209601 | TIZ | Zinc finger protein 675 | 0.37144 |
AK125150 | MAPK8 | Mitogen-activated protein kinase 8 | 0.40237 |
(q) 면역반응(Immune response) | |||
BC027881 | AFP | Alpha-fetoprotein | 0.34995 |
NM_020995 | HPR | Haptoglobin-related protein | 0.30212 |
(r) 형태형성(Morphogenesis) | |||
AF167706 | CRIM1 | Cysteine rich transmembrane BMP regulator 1 (chordin-like) |
0.18947 |
BC045655 | MAC30 | Hypothetical protein MAC30 | 0.41153 |
BX537509 | NET1 | Neuroepithelial cell transforming gene 1 | 0.49711 |
BX640958 | YEATS4 | YEATS domain containing 4 | 0.40387 |
BX647757 | SCML | sex comb on midleg-like 1 (Drosophila) | 0.43273 |
NM_006548 | IMP-2 | IGF-II mRNA-binding protein 2 | 0.47429 |
(s) GTPase 조절 활성(regulator activity) | |||
AY376439 | ECT2 | Epithelial cell transforming sequence 2 oncogene | 0.3374 |
AY596970 | GARNL1 | GTPase activating Rap/RanGAP domain-like 1 | 0.48022 |
BC050630 | RAB3-GAP150 | RAB3 GTPase activating protein subunit 2 (non-catalytic) | 0.37313 |
NM_001001132 | ITSN1 | Intersectin 1(SH3 domain protein) | 0.45115 |
NM_016340 | KIAA1961 | KIAA1961 gene | 0.43039 |
NM_145290 | GPR125 | G protein-coupled receptor 125 | 0.43894 |
(t) 기타(The others) | |||
NM_003574 | VAPA | VAMP(vesicle-associated membrane protein)-associated protein A, 33kDa |
0.37631 |
M28016 | cytochrome b | Human mitochondrial cytochrome b gene, partial cds. |
0.40699 |
NM_013277 | RACGAP1 | Rac GTPase activating protein 1 | 0.19767 |
AB096248 | SNF1LK2 | SNF1-like kinase 2 | 0.41851 |
NM_001698 | AUH | AU RNA binding protein/enoyl-Coenzyme A hydratase |
0.4893 |
AB091343 | C10orf3 | Centrosomal protein 55kDa | 0.18222 |
<
실시예
3> 실시간
RT
-PCR(
Real
-
time
reverse
transcriptase
polymerase
chain
reaction) 정량
다이벤조에이에이취안트라센에 의해 발현 유도된 상기 실시예 2의 2배 이상 과발현 및 저발현된 유전자 중 다이벤조에이에이취안트라센에 의해 과발현되는 유전자 30종과 저발현 되는 유전자 18종을 선별하였다. 이들 유전자들은 유전자 등록번호(Genebank) BM913048(TIMP metallopeptidase inhibitor 1), 유전자 등록번호(Genebank) NM_004864(Growth differentiation factor 15), 유전자 등록번호(Genebank) AK095363(Aquaporin 3), 유전자 등록번호(Genebank) NM_003516(Histone 2, H2aa), 유전자 등록번호(Genebank) NM_001013632(Similar to hypothetical protein 4833401D15), 유전자 등록번호(Genebank) Y11307(Cysteine-rich, angiogenic inducer, 61), 유전자 등록번호(Genebank) NM_001769(CD9 antigen(p24)), 유전자 등록번호(Genebank) AY368150(Family with sequence similarity 62(C2 domain containing) member B), 유전자 등록번호(Genebank) NM_000499(Cytochrome P450, family 1, subfamily A, polypeptide 1), 유전자 등록번호(Genebank) BC035124(MSFL2541), 유전자 등록번호(Genebank) AK097009(phospholipid transfer protein), 유전자 등록번호(Genebank) NM_000596(Insulin-like growth factor binding protein 1), 유전자 등록번호(Genebank) NM_006426(Dihydropyrimidinase-like 4), 유전자 등록번호(Genebank) NM_021603(FXYD domain containing ion transport regulator 2), 유전자 등록번호(Genebank) AB033073(Sulfatase 2), 유전자 등록번호(Genebank) NM_004881(Tumor protein p53 inducible protein 3), 유전자 등록번호(Genebank) NM_001553(Insulin-like growth factor binding protein 7), 유전자 등록번호(Genebank) NM_032872(Synaptotagmin-like 1), 유전자 등록번호(Genebank) BU945318(Hypothetical gene supported by X97260; BC070289(metallothionein 2A )), 유전자 등록번호(Genebank) X02812(Transforming growth factor, beta 1(Camurati-Engelmann disease)), 유전자 등록번호(Genebank) NM_003897(Immediate early response 3), 유전자 등록번호(Genebank) NM_145256(Leucine rich repeat containing 25), 유전자 등록번호(Genebank) BU587578(Regulator of G-protein signalling 10), 유전자 등록번호(Genebank) NM_133493(CD109 antigen(Gov platelet alloantigens)), 유전자 등록번호(Genebank) NM_005319(Histone 1, H1c), 유전자 등록번호(Genebank) BG036385(Receptor(calcitonin) activity modifying protein 1), 유전자 등록번호(Genebank) NM_012396(Pleckstrin homology-like domain, family A, member 3), 유전자 등록번호(Genebank) AB208949(Leucine-rich repeats and death domain containing), 유전자 등록번호(Genebank) BU603483(Histone 1, H1e), 유전자 등록번호(Genebank) Y12692(Wingless-type MMTV integration site family, member 11), 유전자 등록번호(Genebank) BC022255(Spindle pole body component 25 homolog(S. cerevisiae)), 유전자 등록번호(Genebank) AB013380(ATP-binding cassette, sub-family B(MDR/TAP), member 10), 유전자 등록번호(Genebank) AB046861(KIAA1641), 유전자 등록번호(Genebank) BX640965(Solute carrier family 22(extraneuronal monoamine transporter), member 3), 유전자 등록번호(Genebank) XM_291202(Zinc finger protein 479), 유전자 등록번호(Genebank) NM_018492(PDZ binding kinase), 유전자 등록번호(Genebank) NM_145697(Cell division cycle associated 1), 유전자 등록번호(Genebank) NM_017768(Leucine rich repeat containing 40), 유전자 등록번호(Genebank) BX640888(Glypican 6), 유전자 등록번호(Genebank) U65410(MAD2 mitotic arrest deficient-like 1(yeast)), 유전자 등록번호(Genebank) CR600021(High-mobility group box 2), 유전자 등록번호(Genebank) AK074377(Chromosome 19 open reading frame 31), 유전자 등록번호(Genebank) NM_180991(Solute carrier organic anion transporter family, member 4C1), 유전자 등록번호(Genebank) NM_006101(Kinetochore associated 2), 유전자 등록번호(Genebank) AB091343(Centrosomal protein 55kDa), 유전자 등록번호(Genebank) NM_001067(Topoisomerase(DNA) II alpha 170kDa), 유전자 등록번호(Genebank) NM_003318(TTK protein kinase), 유전자 등록번호(Genebank) NM_032117(GAJ protein)이다.
상기 유전자들의 발현변화 정도를 조사 및 정량하기 위해 My IQ 실시간 PCR(My IQ Real-time PCR)(Bio-rad, USA)을 이용하여 정량적인 실시간 RT-PCR을 실시하였다.
구체적으로, 올리고 dT 프라이머와 Superscript kit(Omniscipt™ kit, Qiagen, Co., USA)를 이용하여 역전사반응을 수행하여 cDNA를 합성하였다. PCR 산물을 정량하기 위하여 사이버그린(SYBR Green) I 염색(Bio-rad, USA)으로 염색하였다. 사이버그린 I 염색은 이중나선 DNA에 결합하는 염색법으로서, PCR 과정 동안 이중나선 DNA가 생성될수록 형광강도(fluroscense intensity)가 증가하게 된다. 먼저 PCR에 이용한 표적 유전자와 내재성(endogenous) 대조군(GAPDH)에 대한 프라이머를 사이버그린 마스터 믹스(Master mix)에 첨가하여 PCR을 실시한 후, 적절한 농도를 선택하는 프라이머 적합화(primer optimization) 과정을 수행하였다. 합성된 cDNA 시료와 각각의 프라이머(표 4)를 혼합하고, 사이버그린 마스터 믹스를 첨가한 후 PCR를 수행하였고, 정량 소프트웨어(software)를 사용하여 분석하였다(표 5 참조).
등록번호 | 유전자명 | PCR 프라이머 서열 | |
BM913048 | Homo sapiens TIMP metallopeptidase inhibitor 1(TIMP1), mRNA. |
센스 (서열번호1) |
GATACTTCCACAGGTCCCACAAC |
안티센스 (서열번호2) |
GCAAGAGTCCATCCTGCAGTT | ||
NM_004864 |
Growth differentiation factor 15 |
센스 (서열번호3) |
CCTGAGACACCCGATTCCT |
안티센스 (서열번호4) |
ACAGTTCCATCAGACCAGCC | ||
AK095363 |
Aquaporin 3(Gill blood group) |
센스 (서열번호5) |
TTCACGATCCACCCTTTCAGGCTA |
안티센스 (서열번호6) |
ACACATACCTGCTGCCCATTCTCT | ||
NM_003516 |
Histone 2, H2aa |
센스 (서열번호7) |
GAACTGAACAAGCTGCTGGGCAAA |
안티센스 (서열번호8) |
TCTCCGTCTTCTTAGGGAGCAGTA | ||
NM_001013632 |
Similar to hypothetical protein 4833401D15 |
센스 (서열번호9) |
GACTACTCCAATAAGTTCGGCTTTG |
안티센스 (서열번호10) |
CATATGTGTGCCATCGTTGAAGA | ||
Y11307 |
Cysteine-rich, angiogenic inducer, 61 |
센스 (서열번호11) |
ATTGTAGAAAGGAAGCCTTGCTCAT |
안티센스 (서열번호12) |
TCCAATCGTGGCTGCATTAG | ||
NM_001769 |
CD9 molecule |
센스 (서열번호13) |
GCACCAAGTGCATCAAATACCTGC |
안티센스 (서열번호14) |
AGCCATAGTCCAATGGCAAGGACA | ||
AY368150 |
Family with sequence similarity 62(C2 domain containing) member B |
센스 (서열번호15) |
GGAAAACACACGTGTCAAAGAA |
안티센스 (서열번호16) |
TTCTTCACGGCAACGTCA | ||
NM_000499 |
Homo sapiens cytochrome P450, family 1, subfamily A, polypeptide 1(CYP1A1), mRNA. |
센스 (서열번호17) |
CACCATCCCCCACAGCAC |
안티센스 (서열번호18) |
ACAAAGACACAACGCCCCTT | ||
BC035124 |
MSFL2541 |
센스 (서열번호19) |
TTCGCCGTCCTTTACATCTAC |
안티센스 (서열번호20) |
AGAGCCTGGGGACTCACAT | ||
AK097009 |
Phospholipid transfer protein |
센스 (서열번호21) |
TGCCACAGAGAAGACGGGATTTGA |
안티센스 (서열번호22) |
AGGTGGTGGACGGACTGTAATTGA | ||
NM_000596 |
Homo sapiens insulin-like growth factor binding protein 1(IGFBP1), transcript variant 1, mRNA. |
센스 (서열번호23) |
ATCATTCCATCCTTTGGGACGCCA |
안티센스 (서열번호24) |
TGTCTCCTGTGCCTTGGCTAAACT | ||
NM_006426 |
Homo sapiens dihydropyrimidinase-like 4(DPYSL4), mRNA. |
센스 (서열번호25) |
TGGGAAGATGGACGAGAATGAGTTCG |
안티센스 (서열번호26) |
ACTCCACTCCCTCGAAGATGTTGT | ||
NM_021603 |
FXYD domain containing ion transport regulator 2 |
센스 (서열번호27) |
GGCAATAAGAAGCGCAGGCAAATC |
안티센스 (서열번호28) |
AAGGTCTAAAGCCCAGGGAAGAAG | ||
AB033073 |
Homo sapiens sulfatase 2(SULF2), transcript variant 1, mRNA. |
센스 (서열번호29) |
TGCGGATATGGACGGGAAATCCAT |
안티센스 (서열번호30) |
TCTCTTGTGTAGCAGCTTGCCTCT | ||
NM_004881 |
Tumor protein p53 inducible protein 3 |
센스 (서열번호31) |
AGGGTGAAGTCCTCCTGAAGGT |
안티센스 (서열번호32) |
GTGGGTCATACTGGCCTTGTCT | ||
NM_001553 |
Insulin-like growth factor binding protein 7 |
센스 (서열번호33) |
ACTTGAGCTGTGAGGTCATCGGAA |
안티센스 (서열번호34) |
ATACCAGCACCCAGCCAGTTACTT | ||
NM_032872 |
Synaptotagmin-like 1 |
센스 (서열번호35) |
GGCGGTGAAGAAACGGAATCTGAA |
안티센스 (서열번호36) |
GAAAGATGTTGCGACCCAGGCTTT | ||
BU945318 |
Metallothionein 2A |
센스 (서열번호37) |
CTCTAGCCGCCTCTTCAGC |
안티센스 (서열번호38) |
ACTCTTTGCATTTGCAGGAAC | ||
X02812 |
Transforming growth factor, beta 1(Camurati-Engelmann disease) |
센스 (서열번호39) |
GCAGCACGTGGAGCTGTA |
안티센스 (서열번호40) |
CAGCCGGTTGCTGAGGTA | ||
NM_003897 |
Immediate early response 3 |
센스 (서열번호41) |
AGCCCTTTAATCTGACTTCGGAGC |
안티센스 (서열번호42) |
CAGGTACGCCTGGTGTTTCTTTGT | ||
NM_145256 |
Leucine rich repeat containing 25 |
센스 (서열번호43) |
CCACTCCCGACTATGAGAACA |
안티센스 (서열번호44) |
TTGTCCTCTGAAGGGTGAGC | ||
BU587578 |
Regulator of G-protein signalling 10 |
센스 (서열번호45) |
CCGTGCCGGGTTTATCATTGCTTT |
안티센스 (서열번호46) |
TCGACGTGTCCAGTGTTGAAGGAA | ||
NM_133493 |
CD109 molecule |
센스 (서열번호47) |
GCCAAGATTTACCACGTTTGCCCA |
안티센스 (서열번호48) |
TGAAGGACCAGAACTGAGCCACAT | ||
NM_005319 |
Histone 1, H1c |
센스 (서열번호49) |
ACCAAACCTAAGAAGCCAGTTG |
안티센스 (서열번호50) |
TAGCGCTCTTCTTCGGAGTT | ||
BG036385 |
Receptor(calcitonin) activity modifying protein 1 |
센스 (서열번호51) |
AAGAAGAGCTCACAGGAGTCCAGA |
안티센스 (서열번호52) |
ACCCTTTCCAGAGGTAAGTCAAGG | ||
NM_012396 |
Pleckstrin homology-like domain, family A, member 3 |
센스 (서열번호53) |
CTACCCACCACCTCAGTGCT |
안티센스 (서열번호54) |
CTCGTCCATTCCTTCAGCTC | ||
AB208949 |
Leucine-rich repeats and death domain containing |
센스 (서열번호55) |
GGGGTGACCTGGAGACCTAC |
안티센스 (서열번호56) |
CTGGCAGTGAGCCCAGAG | ||
BU603483 |
Histone 1, H1e |
센스 (서열번호57) |
ACCCCAAAGAAGGCGAAG |
안티센스 (서열번호58) |
GCCTTTTTCGGGCTTTTC | ||
Y12692 |
Wingless-type MMTV integration site family, member 11 |
센스 (서열번호59) |
TTCACTTGGAAGCCACCAGGAACA |
안티센스 (서열번호60) |
TGGCCCTGAAAGGTCAAGTCTGTA | ||
BC022255 |
Spindle pole body component 25 homolog(S. cerevisiae) |
센스 (서열번호61) |
GAATGGTTGAGATGTTTCTGGA |
안티센스 (서열번호62) |
GCAATCAATTTTAACAAGTTATCCTTT | ||
AB013380 |
ATP-binding cassette, sub-family B(MDR/TAP), member 10 |
센스 (서열번호63) |
TCAGCCTTTCCATTCCGTCAGGAT |
안티센스 (서열번호64) |
TTTGGATCTCAGCCACACTGGGTT | ||
AB046861 |
KIAA1641 |
센스 (서열번호65) |
AAGGAGGGACAACAATCTGGGACA |
안티센스 (서열번호66) |
TCACTTGTAGCCTTTGAGGGTGGT | ||
BX640965 |
Solute carrier family 22(extraneuronal monoamine transporter), member 3 |
센스 (서열번호67) |
GCCCTGTTCCAGCAATAAGA |
안티센스 (서열번호68) |
GAGAGCCAAAAATGTCCCAA | ||
XM_291202 |
Zinc finger protein 479 |
센스 (서열번호69) |
ATGGTAGCCAAACACCCAGT |
안티센스 (서열번호70) |
TGAATCTTTGATGCCCTGCT | ||
NM_018492 |
PDZ binding kinase |
센스 (서열번호71) |
TCTGGACTGAGAGTGGCTTTCACA |
안티센스 (서열번호72) |
AGCCAAGCTTCTGCATAAACGGAG | ||
NM_145697 |
Cell division cycle associated 1 |
센스 (서열번호73) |
TGCCTTCATGTCAGTTGGAAGTGC |
안티센스 (서열번호74) |
TTTGGTCCTCCAAGTTCAGGCTCT | ||
NM_017768 |
Leucine rich repeat containing 40 |
센스 (서열번호75) |
TGCCGCAGTGTGTCTGGAGAATAA |
안티센스 (서열번호76) |
TGCTCCCACCATCTTTCAGTAGCA | ||
BX640888 |
Glypican 6 |
센스 (서열번호77) |
ACACTGACCAGCTCAAGCCATTTG |
안티센스 (서열번호78) |
GACAAAGGTCCTGGCAGCAATGAA | ||
U65410 |
MAD2 mitotic arrest deficient-like 1(yeast) |
센스 (서열번호79) |
ACTTAAATATCTCCCTACCTATACTGAGTCAA |
안티센스 (서열번호80) |
TAGTAACTGTAGATGGAAAAACTTGTGCTA | ||
CR600021 |
High-mobility group box 2 |
센스 (서열번호81) |
CTTGGCACGATATGCAGCAA |
안티센스 (서열번호82) |
CAGCCAAAGATAAACAACCATATGA | ||
AK074377 |
Ubiquitin-like, containing PHD and RING finger domains, 1 |
센스 (서열번호83) |
CTGGTACGACGCGGAGAT |
안티센스 (서열번호84) |
CGACAGTCGTTCAGAGAATCA | ||
NM_180991 |
Solute carrier organic anion transporter family, member 4C1 |
센스 (서열번호85) |
CCAGCTTCGCAGCTACTCTT |
안티센스 (서열번호86) |
CCACCTAAAATTTGACCGAGAG | ||
NM_006101 |
Kinetochore associated 2 |
센스 (서열번호87) |
TGCTACACATGTTGGGTCTGTA |
안티센스 (서열번호88) |
CCGAGAGATCTTCTGACATGC | ||
AB091343 |
Centrosomal protein 55kDa |
센스 (서열번호89) |
GCTGTGCATTTCTCTTGGCAGTGA |
안티센스 (서열번호90) |
TAGACGCTGCTCACCACATTCTGT | ||
NM_001067 |
Topoisomerase(DNA) II alpha 170kDa |
센스 (서열번호91) |
CTAGTTAATGCTGCGGACAACA |
안티센스 (서열번호92) |
CATTTCGACCACCTGTCACTT | ||
NM_003318 |
TTK protein kinase |
센스 (서열번호93) |
TCATGCCCATTTGGAAGAGTCCCA |
안티센스 (서열번호94) |
AGGCACAACCAAATCTCGGCATTC | ||
NM_032117 |
Meiotic nuclear divisions 1 homolog(S. cerevisiae) |
센스 (서열번호95) |
TTCGAGACCAAAGGGAACAG |
안티센스 (서열번호96) |
CTTTGGCTACTTTATTTGCTTGG |
등록번호 | 유전자명 | 약어 |
마이크로어레이
( Cy3 / Cy5 비율) |
실시간
PCR
(상대적 배율) |
과발현 유전자 | ||||
BM913048 | TIMP metallopeptidase inhibitor 1 | TIMP1 | 7.15 | 5.57 |
NM_004864 | Growth differentiation factor 15 | GDF15 | 11.09 | 10.24 |
AK095363 | Aquaporin 3 | AQP3 | 5.88 | 174.85 |
NM_003516 | Histone 2, H2aa | HIST2H2AA | 3.67 | 2.28 |
NM_001013632 | Similar to hypothetical protein 4833401D15 | LOC343521 | 3.08 | 2.36 |
Y11307 | Cysteine-rich, angiogenic inducer, 61 | CYR61 | 3.79 | 3.52 |
NM_001769 | CD9 antigen(p24) | CD9 | 2.56 | 6.56 |
AY368150 | Family with sequence similarity 62 (C2 domain containing) member B |
CHR2SYT | 2.60 | 2.72 |
NM_000499 | Cytochrome P450, family 1, subfamily A, polypeptide 1 |
CYP1A1 | 28.79 | 344.10 |
BC035124 | MSFL2541 | UNQ2541 | 5.24 | 15.67 |
AK097009 | phospholipid transfer protein | PLTP | 4.63 | 8.07 |
NM_000596 | Insulin-like growth factor binding protein 1 | IGFBP1 | 2.44 | 4.81 |
NM_006426 | Dihydropyrimidinase-like 4 | DPYSL4 | 5.43 | 7.08 |
NM_021603 | FXYD domain containing ion transport regulator 2 | FXYD2 | 4.51 | 10.17 |
AB033073 | Sulfatase 2 | SULF2 | 3.43 | 5.60 |
NM_004881 | Tumor protein p53 inducible protein 3 | TP53I3 | 6.08 | 8.34 |
NM_001553 | Insulin-like growth factor binding protein 7 | IGFBP7 | 2.62 | 7.30 |
NM_032872 | Synaptotagmin-like 1 | SYTL1 | 3.48 | 4.30 |
BU945318 | Hypothetical gene supported by X97260; BC070289(metallothionein 2A) | MT2A | 7.12 | 8.59 |
X02812 | Transforming growth factor, beta 1(Camurati-Engelmann disease) | TGFB1 | 2.41 | 2.66 |
NM_003897 | Immediate early response 3 | IER3 | 2.86 | 4.29 |
NM_145256 | Leucine rich repeat containing 25 | LRRC25 | 9.57 | 80.08 |
BU587578 | Regulator of G-protein signalling 10 | RGS10 | 6.78 | 31.38 |
NM_133493 | CD109 antigen(Gov platelet alloantigens) | CD109 | 6.73 | 24.14 |
NM_005319 | Histone 1, H1c | HIST1H1C | 4.54 | 3.40 |
BG036385 | Receptor(calcitonin) activity modifying protein 1 | RAMP1 | 4.77 | 12.32 |
NM_012396 | Pleckstrin homology-like domain, family A, member 3 | PHLDA3 | 4.69 | 3.69 |
AB208949 | Leucine-rich repeats and death domain containing | LRDD | 3.95 | 49.12 |
BU603483 | Histone 1, H1e | HIST1H1E | 3.92 | 10.98 |
Y12692 | Wingless-type MMTV integration site family, member 11 |
WNT11 | 5.03 | 8.06 |
저발현 유전자 | ||||
BC022255 | Spindle pole body component 25 homolog(S. cerevisiae) | Spc25 | 0.19 | 0.10 |
AB013380 | ATP-binding cassette, sub-family B(MDR/TAP), member 10 | ABCB10 | 0.28 | 0.50 |
AB046861 | KIAA1641 | KIAA1641 | 0.17 | 0.19 |
BX640965 | Solute carrier family 22 (extraneuronal monoamine transporter), member 3 |
SLC22A3 | 0.17 | 0.28 |
XM_291202 | Zinc finger protein 479 | ZNF479 | 0.34 | 0.28 |
NM_018492 | PDZ binding kinase | PBK | 0.08 | 0.10 |
NM_145697 | Cell division cycle associated 1 | CDCA1 | 0.13 | 0.09 |
NM_017768 | Leucine rich repeat containing 40 | LRRC40 | 0.41 | 0.59 |
BX640888 | Glypican 6 | GPC6 | 0.06 | 0.13 |
U65410 | MAD2 mitotic arrest deficient-like 1(yeast) | MAD2L1 | 0.17 | 0.08 |
CR600021 | High-mobility group box 2 | HMGB2 | 0.14 | 0.06 |
AK074377 | Chromosome 19 open reading frame 31 | UHRF1 | 0.13 | 0.08 |
NM_180991 | Solute carrier organic anion transporter family, member 4C1 | SLCO4C1 | 0.21 | 0.54 |
NM_006101 | Kinetochore associated 2 | KNTC2 | 0.18 | 0.06 |
AB091343 | Centrosomal protein 55kDa | C10orf3 | 0.18 | 0.12 |
NM_001067 | Topoisomerase(DNA) II alpha 170kDa | TOP2A | 0.22 | 0.08 |
NM_003318 | TTK protein kinase | TTK | 0.20 | 0.09 |
NM_032117 | GAJ protein | GAJ | 0.15 | 0.17 |
그 결과, 30종의 과발현 유전자들 및 18종의 저발현 유전자의 유전자 발현 양상은 다이벤조에이에이취안트라센에 의한 유전자 발현을 조사한 올리고 마이크로어레이 결과와 매우 유사하게 나타남을 확인하였다.
도 1은 다이벤조에이에이취안트라센(dibenzo[a,h]anthracene)의 인간 간암 세포주에서의 세포 독성을 조사한 그래프이고,
도 2는 마이크로어레이 칩을 이용한 다이벤조에이에이취안트라센을 처리한 인간 간암 세포주의 유전자 발현 양상을 분석한 결과를 나타내는 그림이다.
<110> Korea Institute of Science and Technology
<120> Biomarker for identification of exposure to dibenzo[a,
h]anthracene and the method of identification using thereof
<130> 7p-08-66
<160> 96
<170> KopatentIn 1.71
<210> 1
<211> 23
<212> DNA
<213> Homo sapiens TIMP metallopeptidase inhibitor 1 sense primer
<400> 1
gatacttcca caggtcccac aac 23
<210> 2
<211> 21
<212> DNA
<213> Homo sapiens TIMP metallopeptidase inhibitor 1 antisense primer
<400> 2
gcaagagtcc atcctgcagt t 21
<210> 3
<211> 19
<212> DNA
<213> Growth differentiation factor 15 sense primer
<400> 3
cctgagacac ccgattcct 19
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> Growth differentiation factor 15 antisense primer
<400> 4
acagttccat cagaccagcc 20
<210> 5
<211> 24
<212> DNA
<213> Aquaporin 3(Gill blood group) sense primer
<400> 5
ttcacgatcc accctttcag gcta 24
<210> 6
<211> 24
<212> DNA
<213> Aquaporin 3(Gill blood group) antisense primer
<400> 6
acacatacct gctgcccatt ctct 24
<210> 7
<211> 24
<212> DNA
<213> Histone 2, H2aa sense primer
<400> 7
gaactgaaca agctgctggg caaa 24
<210> 8
<211> 24
<212> DNA
<213> Histone 2, H2aa antisense primer
<400> 8
tctccgtctt cttagggagc agta 24
<210> 9
<211> 25
<212> DNA
<213> Similar to hypothetical protein 4833401D15 sense primer
<400> 9
gactactcca ataagttcgg ctttg 25
<210> 10
<211> 23
<212> DNA
<213> Similar to hypothetical protein 4833401D15 antisense primer
<400> 10
catatgtgtg ccatcgttga aga 23
<210> 11
<211> 25
<212> DNA
<213> Cysteine-rich, angiogenic inducer, 61 sense primer
<400> 11
attgtagaaa ggaagccttg ctcat 25
<210> 12
<211> 20
<212> DNA
<213> Cysteine-rich, angiogenic inducer, 61 antisense primer
<400> 12
tccaatcgtg gctgcattag 20
<210> 13
<211> 24
<212> DNA
<213> CD9 molecule sense primer
<400> 13
gcaccaagtg catcaaatac ctgc 24
<210> 14
<211> 24
<212> DNA
<213> CD9 molecule antisense primer
<400> 14
agccatagtc caatggcaag gaca 24
<210> 15
<211> 22
<212> DNA
<213> Family with sequence similarity 62(C2 domain containing) member B sense primer
<400> 15
ggaaaacaca cgtgtcaaag aa 22
<210> 16
<211> 18
<212> DNA
<213> Family with sequence similarity 62(C2 domain containing) member B antisense primer
<400> 16
ttcttcacgg caacgtca 18
<210> 17
<211> 18
<212> DNA
<213> Homo sapiens cytochrome P450, family 1, subfamily A, polypeptide 1 sense primer
<400> 17
caccatcccc cacagcac 18
<210> 18
<211> 20
<212> DNA
<213> Homo sapiens cytochrome P450, family 1, subfamily A, polypeptide 1 antisense primer
<400> 18
acaaagacac aacgcccctt 20
<210> 19
<211> 21
<212> DNA
<213> MSFL2541 sense primer
<400> 19
ttcgccgtcc tttacatcta c 21
<210> 20
<211> 19
<212> DNA
<213> MSFL2541 antisense primer
<400> 20
agagcctggg gactcacat 19
<210> 21
<211> 24
<212> DNA
<213> Phospholipid transfer protein sense primer
<400> 21
tgccacagag aagacgggat ttga 24
<210> 22
<211> 24
<212> DNA
<213> Phospholipid transfer protein antisense primer
<400> 22
aggtggtgga cggactgtaa ttga 24
<210> 23
<211> 24
<212> DNA
<213> Homo sapiens insulin-like growth factor binding protein 1 sense primer
<400> 23
atcattccat cctttgggac gcca 24
<210> 24
<211> 24
<212> DNA
<213> Homo sapiens insulin-like growth factor binding protein 1 antisense primer
<400> 24
tgtctcctgt gccttggcta aact 24
<210> 25
<211> 26
<212> DNA
<213> Homo sapiens dihydropyrimidinase-like 4 sense primer
<400> 25
tgggaagatg gacgagaatg agttcg 26
<210> 26
<211> 24
<212> DNA
<213> Homo sapiens dihydropyrimidinase-like 4 antisense primer
<400> 26
actccactcc ctcgaagatg ttgt 24
<210> 27
<211> 24
<212> DNA
<213> FXYD domain containing ion transport regulator 2 sense primer
<400> 27
ggcaataaga agcgcaggca aatc 24
<210> 28
<211> 24
<212> DNA
<213> FXYD domain containing ion transport regulator 2 antisense primer
<400> 28
aaggtctaaa gcccagggaa gaag 24
<210> 29
<211> 24
<212> DNA
<213> Homo sapiens sulfatase 2, transcript variant 1 sense primer
<400> 29
tgcggatatg gacgggaaat ccat 24
<210> 30
<211> 24
<212> DNA
<213> Homo sapiens sulfatase 2, transcript variant 1 antisense primer
<400> 30
tctcttgtgt agcagcttgc ctct 24
<210> 31
<211> 22
<212> DNA
<213> Tumor protein p53 inducible protein 3 sense primer
<400> 31
agggtgaagt cctcctgaag gt 22
<210> 32
<211> 22
<212> DNA
<213> Tumor protein p53 inducible protein 3 antisense primer
<400> 32
gtgggtcata ctggccttgt ct 22
<210> 33
<211> 24
<212> DNA
<213> Insulin-like growth factor binding protein 7 sense primer
<400> 33
acttgagctg tgaggtcatc ggaa 24
<210> 34
<211> 24
<212> DNA
<213> Insulin-like growth factor binding protein 7 antisense primer
<400> 34
ataccagcac ccagccagtt actt 24
<210> 35
<211> 24
<212> DNA
<213> Synaptotagmin-like 1 sense primer
<400> 35
ggcggtgaag aaacggaatc tgaa 24
<210> 36
<211> 24
<212> DNA
<213> Synaptotagmin-like 1 antisense primer
<400> 36
gaaagatgtt gcgacccagg cttt 24
<210> 37
<211> 19
<212> DNA
<213> Metallothionein 2A sense primer
<400> 37
ctctagccgc ctcttcagc 19
<210> 38
<211> 21
<212> DNA
<213> Metallothionein 2A antisense primer
<400> 38
actctttgca tttgcaggaa c 21
<210> 39
<211> 18
<212> DNA
<213> Transforming growth factor, beta 1 sense primer
<400> 39
gcagcacgtg gagctgta 18
<210> 40
<211> 18
<212> DNA
<213> Transforming growth factor, beta 1 antisense primer
<400> 40
cagccggttg ctgaggta 18
<210> 41
<211> 24
<212> DNA
<213> Immediate early response 3 sense primer
<400> 41
agccctttaa tctgacttcg gagc 24
<210> 42
<211> 24
<212> DNA
<213> Immediate early response 3 antisense primer
<400> 42
caggtacgcc tggtgtttct ttgt 24
<210> 43
<211> 21
<212> DNA
<213> Leucine rich repeat containing 25 sense primer
<400> 43
ccactcccga ctatgagaac a 21
<210> 44
<211> 20
<212> DNA
<213> Leucine rich repeat containing 25 antisense primer
<400> 44
ttgtcctctg aagggtgagc 20
<210> 45
<211> 24
<212> DNA
<213> Regulator of G-protein signalling 10 sense primer
<400> 45
ccgtgccggg tttatcattg cttt 24
<210> 46
<211> 24
<212> DNA
<213> Regulator of G-protein signalling 10 antisense primer
<400> 46
tcgacgtgtc cagtgttgaa ggaa 24
<210> 47
<211> 24
<212> DNA
<213> CD109 molecule sense primer
<400> 47
gccaagattt accacgtttg ccca 24
<210> 48
<211> 24
<212> DNA
<213> CD109 molecule antisense primer
<400> 48
tgaaggacca gaactgagcc acat 24
<210> 49
<211> 22
<212> DNA
<213> Histone 1, H1c sense primer
<400> 49
accaaaccta agaagccagt tg 22
<210> 50
<211> 20
<212> DNA
<213> Histone 1, H1c antisense primer
<400> 50
tagcgctctt cttcggagtt 20
<210> 51
<211> 24
<212> DNA
<213> Receptor(calcitonin) activity modifying protein 1 sense primer
<400> 51
aagaagagct cacaggagtc caga 24
<210> 52
<211> 24
<212> DNA
<213> Receptor(calcitonin) activity modifying protein 1 antisense primer
<400> 52
accctttcca gaggtaagtc aagg 24
<210> 53
<211> 20
<212> DNA
<213> Pleckstrin homology-like domain, family A, member 3 sense primer
<400> 53
ctacccacca cctcagtgct 20
<210> 54
<211> 20
<212> DNA
<213> Pleckstrin homology-like domain, family A, member 3 antisense primer
<400> 54
ctcgtccatt ccttcagctc 20
<210> 55
<211> 20
<212> DNA
<213> Leucine-rich repeats and death domain containing sense primer
<400> 55
ggggtgacct ggagacctac 20
<210> 56
<211> 18
<212> DNA
<213> Leucine-rich repeats and death domain containing antisense primer
<400> 56
ctggcagtga gcccagag 18
<210> 57
<211> 18
<212> DNA
<213> Histone 1, H1e sense primer
<400> 57
accccaaaga aggcgaag 18
<210> 58
<211> 18
<212> DNA
<213> Histone 1, H1e antisense primer
<400> 58
gcctttttcg ggcttttc 18
<210> 59
<211> 24
<212> DNA
<213> Wingless-type MMTV integration site family, member 11 sense primer
<400> 59
ttcacttgga agccaccagg aaca 24
<210> 60
<211> 24
<212> DNA
<213> Wingless-type MMTV integration site family, member 11 antisense primer
<400> 60
tggccctgaa aggtcaagtc tgta 24
<210> 61
<211> 22
<212> DNA
<213> Spindle pole body component 25 homolog(S. cerevisiae) sense primer
<400> 61
gaatggttga gatgtttctg ga 22
<210> 62
<211> 27
<212> DNA
<213> Spindle pole body component 25 homolog(S. cerevisiae) antisense primer
<400> 62
gcaatcaatt ttaacaagtt atccttt 27
<210> 63
<211> 24
<212> DNA
<213> ATP-binding cassette, sub-family B(MDR/TAP), member 10 sense primer
<400> 63
tcagcctttc cattccgtca ggat 24
<210> 64
<211> 24
<212> DNA
<213> ATP-binding cassette, sub-family B(MDR/TAP), member 10 antisense primer
<400> 64
tttggatctc agccacactg ggtt 24
<210> 65
<211> 24
<212> DNA
<213> KIAA1641 sense primer
<400> 65
aaggagggac aacaatctgg gaca 24
<210> 66
<211> 24
<212> DNA
<213> KIAA1641 antisense primer
<400> 66
tcacttgtag cctttgaggg tggt 24
<210> 67
<211> 20
<212> DNA
<213> Solute carrier family 22(extraneuronal monoamine transporter), member 3 sense primer
<400> 67
gccctgttcc agcaataaga 20
<210> 68
<211> 20
<212> DNA
<213> Solute carrier family 22(extraneuronal monoamine transporter), member 3 antisense primer
<400> 68
gagagccaaa aatgtcccaa 20
<210> 69
<211> 20
<212> DNA
<213> Zinc finger protein 479 sense primer
<400> 69
atggtagcca aacacccagt 20
<210> 70
<211> 20
<212> DNA
<213> Zinc finger protein 479 antisense primer
<400> 70
tgaatctttg atgccctgct 20
<210> 71
<211> 24
<212> DNA
<213> PDZ binding kinase sense primer
<400> 71
tctggactga gagtggcttt caca 24
<210> 72
<211> 24
<212> DNA
<213> PDZ binding kinase antisense primer
<400> 72
agccaagctt ctgcataaac ggag 24
<210> 73
<211> 24
<212> DNA
<213> Cell division cycle associated 1 sense primer
<400> 73
tgccttcatg tcagttggaa gtgc 24
<210> 74
<211> 24
<212> DNA
<213> Cell division cycle associated 1 antisense primer
<400> 74
tttggtcctc caagttcagg ctct 24
<210> 75
<211> 24
<212> DNA
<213> Leucine rich repeat containing 40 sense primer
<400> 75
tgccgcagtg tgtctggaga ataa 24
<210> 76
<211> 24
<212> DNA
<213> Leucine rich repeat containing 40 antisense primer
<400> 76
tgctcccacc atctttcagt agca 24
<210> 77
<211> 24
<212> DNA
<213> Glypican 6 sense primer
<400> 77
acactgacca gctcaagcca tttg 24
<210> 78
<211> 24
<212> DNA
<213> Glypican 6 antisense primer
<400> 78
gacaaaggtc ctggcagcaa tgaa 24
<210> 79
<211> 32
<212> DNA
<213> MAD2 mitotic arrest deficient-like 1(yeast) sense primer
<400> 79
acttaaatat ctccctacct atactgagtc aa 32
<210> 80
<211> 30
<212> DNA
<213> MAD2 mitotic arrest deficient-like 1(yeast) antisense primer
<400> 80
tagtaactgt agatggaaaa acttgtgcta 30
<210> 81
<211> 20
<212> DNA
<213> High-mobility group box 2 sense primer
<400> 81
cttggcacga tatgcagcaa 20
<210> 82
<211> 25
<212> DNA
<213> High-mobility group box 2 antisense primer
<400> 82
cagccaaaga taaacaacca tatga 25
<210> 83
<211> 18
<212> DNA
<213> Ubiquitin-like, containing PHD and RING finger domains, 1 sense primer
<400> 83
ctggtacgac gcggagat 18
<210> 84
<211> 21
<212> DNA
<213> Ubiquitin-like, containing PHD and RING finger domains, 1 antisense primer
<400> 84
cgacagtcgt tcagagaatc a 21
<210> 85
<211> 20
<212> DNA
<213> Solute carrier organic anion transporter family, member 4C1 sense primer
<400> 85
ccagcttcgc agctactctt 20
<210> 86
<211> 22
<212> DNA
<213> Solute carrier organic anion transporter family, member 4C1 antisense primer
<400> 86
ccacctaaaa tttgaccgag ag 22
<210> 87
<211> 22
<212> DNA
<213> Kinetochore associated 2 sense primer
<400> 87
tgctacacat gttgggtctg ta 22
<210> 88
<211> 21
<212> DNA
<213> Kinetochore associated 2 antisense primer
<400> 88
ccgagagatc ttctgacatg c 21
<210> 89
<211> 24
<212> DNA
<213> Centrosomal protein 55kDa sense primer
<400> 89
gctgtgcatt tctcttggca gtga 24
<210> 90
<211> 24
<212> DNA
<213> Centrosomal protein 55kDa antisense primer
<400> 90
tagacgctgc tcaccacatt ctgt 24
<210> 91
<211> 22
<212> DNA
<213> Topoisomerase(DNA) II alpha 170kDa sense primer
<400> 91
ctagttaatg ctgcggacaa ca 22
<210> 92
<211> 21
<212> DNA
<213> Topoisomerase(DNA) II alpha 170kDa antisense primer
<400> 92
catttcgacc acctgtcact t 21
<210> 93
<211> 24
<212> DNA
<213> TTK protein kinase sense primer
<400> 93
tcatgcccat ttggaagagt ccca 24
<210> 94
<211> 24
<212> DNA
<213> TTK protein kinase antisense primer
<400> 94
aggcacaacc aaatctcggc attc 24
<210> 95
<211> 20
<212> DNA
<213> Meiotic nuclear divisions 1 homolog(S. cerevisiae) sense primer
<400> 95
ttcgagacca aagggaacag 20
<210> 96
<211> 23
<212> DNA
<213> Meiotic nuclear divisions 1 homolog(S. cerevisiae) antisense primer
<400> 96
ctttggctac tttatttgct tgg 23
Claims (15)
- 유전자 등록번호(Genebank) NM_001633(AMBP, Alpha-1-microglobulin/bikunin precursor) 유전자의 핵산서열의 전부 또는 18 내지 30개의 핵산 서열로 구성되는 상기 유전자의 단편인 올리고뉴클레오티드 또는 그의 상보가닥 분자가 집적된, 다이벤조에이에이취안트라센에 대한 노출 여부 확인용 DNA 마이크로어레이 칩.
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 1) 인간 체세포에 피검화합물을 처리하는 단계;2) 단계 1)의 피검화합물을 처리한 실험군 세포와 피검화합물을 처리하지 않은 대조군 세포에서 RNA를 분리하는 단계;3) 단계 2)의 실험군 및 대조군의 RNA를 cDNA로 합성하면서 실험군과 대조군을 각기 다른 형광물질로 표지하는 단계;4) 단계 3)의 각기 다른 형광물질로 표지된 cDNA를 제 1항의 DNA 마이크로어레이칩과 혼성화시키는 단계;5) 반응한 DNA 마이크로어레이칩을 분석하는 단계; 및6) 분석한 데이터에서 제 1항의 DNA 마이크로어레이칩에 집적된 유전자의 발현 정도를 대조군과 비교하여 확인하는 단계를 포함하는 다이벤조에이에이취안트라센에 대한 노출 여부를 확인하는 방법.
- 제 5항에 있어서, 단계 1)의 인간 체세포는 인간의 간 세포 또는 인간 간암 세포인 것을 특징으로 하는 다이벤조에이에이취안트라센에 대한 노출 여부를 확인하는 방법.
- 제 6항에 있어서, 상기 인간 간암 세포는 HepG2인 것을 특징으로 하는 다이벤조에이에이취안트라센에 대한 노출 여부를 확인하는 방법.
- 제 5항에 있어서, 단계 3)의 형광물질은 Cy3, Cy5, FITC(poly L-lysine-fluorescein isothiocyanate), RITC(rhodamine-B-isothiocyanate) 및 로다민(rhodamine)으로 이루어진 군으로부터 선택하여 사용하는 것을 다이벤조에이에이취안트라센에 대한 노출 여부를 확인하는 방법.
- 삭제
- 삭제
- 삭제
- 제 1항의 DNA 마이크로어레이 칩을 포함하는 것을 특징으로 하는 다이벤조에이에이취안트라센에 대한 노출 여부 확인용 키트.
- 제 12항에 있어서, 인간 간 세포 또는 간암 세포를 추가적으로 포함하는 것 을 특징으로 하는 다이벤조에이에이취안트라센에 대한 노출 여부 확인용 키트.
- 삭제
- 삭제
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KR1020070099135A KR100961487B1 (ko) | 2007-10-02 | 2007-10-02 | 다이벤조에이에이취안트라센 노출 여부 확인용 바이오마커및 이를 이용한 확인 방법 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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KR1020070099135A KR100961487B1 (ko) | 2007-10-02 | 2007-10-02 | 다이벤조에이에이취안트라센 노출 여부 확인용 바이오마커및 이를 이용한 확인 방법 |
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KR20090034011A KR20090034011A (ko) | 2009-04-07 |
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Family
ID=40760065
Family Applications (1)
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KR1020070099135A KR100961487B1 (ko) | 2007-10-02 | 2007-10-02 | 다이벤조에이에이취안트라센 노출 여부 확인용 바이오마커및 이를 이용한 확인 방법 |
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KR (1) | KR100961487B1 (ko) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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KR101460530B1 (ko) | 2013-03-26 | 2014-11-10 | 한국과학기술연구원 | 퍼플루오르옥탄술폰산 노출 특이적 메틸화 마커 유전자 및 이를 이용한 퍼플루오르옥탄술폰산 노출 여부 확인 방법 |
Families Citing this family (3)
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US10370712B2 (en) | 2012-09-24 | 2019-08-06 | Duke University | Signatures of radiation response |
CN106924758B (zh) * | 2017-04-24 | 2020-07-10 | 陈霞 | 一种用于多发性骨髓瘤的生物标志物 |
-
2007
- 2007-10-02 KR KR1020070099135A patent/KR100961487B1/ko not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (4)
Title |
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Arch. Toxicol., Vol. 76, No. 5-6, pp. 287~298 |
Carcinogenesis, Vol. 27, No. 3, pp. 646~655 |
Carcinogenesis, Vol. 28, No. 12, pp. 2632~2640 |
Mutagenesis, Vol. 22, No. 1, pp. 55~62 |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR101460530B1 (ko) | 2013-03-26 | 2014-11-10 | 한국과학기술연구원 | 퍼플루오르옥탄술폰산 노출 특이적 메틸화 마커 유전자 및 이를 이용한 퍼플루오르옥탄술폰산 노출 여부 확인 방법 |
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