KR100903243B1

KR100903243B1 - 세포증식 및 세포사를 조절하기 위한 방법 및 조성물

Info

Publication number: KR100903243B1
Application number: KR1020017015591A
Authority: KR
Inventors: 제시 엘. 에스. 에이유; 엠. 길롬므 벤테스
Original assignee: 제시 엘. 에스. 에이유; 엠. 길롬므 벤테스
Priority date: 1999-06-03
Filing date: 2000-06-05
Publication date: 2009-06-17
Also published as: WO2000074634A3; AU780454B2; AU5790300A; EP1206234A4; IL146872A0; CA2377385A1; KR20020019924A; WO2000074634A9; JP2003503313A; US7625860B2; US20040010001A1; WO2000074634A2; EP1206234A2; IL146872A; US6599912B1

Abstract

본 발명에서는 항암제에 대한 악성 및 정상 세포의 감수성에 영향을 미치는 FGF의 효과를 조절하는 방법 및 조성물이 제공된다. 구체적으로는, 고형 및 연조직 종양, 전이된 부위, 백혈병 및 림프종에서의 넓은 스펙트럼의 항암제에 대한 FGF-유도 저항성을 저해하는 방법 및 조성물이 제공된다. 바람직하게는, 조성물은 예를 들면, 항마이크로튜불 제제, 토포아이소머라제 I 저해제, 토포아이소러마제 II 저해제, 항대사물 제제, 세포분열 저해제, 알킬화 제제, 삽입 제제, 신호전달 경로를 방해할 수 있는 제제(예를 들면, 단백질 키나제 C 저해제, 항-호르몬 제, 성장인자 수용체에 대한 항체), 아폽토시스 및/또는 괴사를 촉진하는 제제, 인터페론, 인터루킨, 종양 괴사 인자 및 방사선과 같은 세포독성 제제와 조합된 적어도 하나의 FGF 저해제를 포함한다. 다른 실시예에서는, 예를 들면 세포독성 제제에 의하여 야기되는 하나 또는 그 이상의 세포사, 성장 또는 분열 또는 다른 손상으로부터 대상에 존재하는 세포를 방어하는 방법 및 조성물이 제공된다. 바람직하게는, 방법은 대상에게 적어도 하나의 FGF 길항제를 효과적인 양으로 투여하는 것을 포함하며, 그로 인하여 상기 세포독성 제제에 의하여 야기되는 분열하는 세포의 손상을 방어하거나 또는 감소시켜서 세포를 치료한다.

Description

세포증식 및 세포사를 조절하기 위한 방법 및 조성물{Methods and compositions for modulating cell proliferation and cell death}

본 출원은 '세포증식 조절'이라는 명칭으로 1999년 12월 23일자로 출원된 미국 가출원 No. 60/172,031; '전이된 부위에서 FGF-의존적 또는 FGF-유도 화학저항성을 진단, 예방 및 극복하는 방법'이라는 명칭으로 1999년 6월 3일자로 출원된 미국 가출원 No. 60/137,345; '가역적 넓은 스펙트럼 항암제 저항성을 제공하는 유전자 및 유전자 산물 및 그를 저해하는 법'이라는 명칭으로 1999년 11월 17일자로 출원된 미국 가출원 No. 60/165,983 및 '세포증식 및 세포사를 조절하기 위한 방법 및 조성물'이라는 명칭으로 2000년 3월 7일자로 출원된 미국 가출원 No. 60/187,445에 우선권을 두고 있다. 하기의 모든 내용은 상기 건들을 참고로 하여 통합되었다.

암 치료에 대한 종양의 저항, 전이성 질환에서의 암 치료 효능의 한계 및 암 치료로 인한 원하지 않는 숙주 독성 등 세 가지가 환자 치료에 있어서 중요한 제약들이다.

전임상(preclinical) 연구에서 관찰되는 화학요법에 있어서의 일반적인 저항 메커니즘은 약물 분출 단백질의 과발현이다(Lum, B. L. et al. Cancer 72, 1993, 3502-3514; Barrand, M. A. et al. Gen. Pharmacol. 1997, 28, 639-645; Fidler, I. J. Cancer Chemother. Pharmacol. 1999, 43:S3-S10.). 그러나, 적어도 몇몇 임상 연구에서는 약물 분출 단백질의 저해가 환자들의 화학요법 효과를 현저하게 개선시키지는 않음을 보여줌으로써(Ferry, D. R., et al. Eur. J. Cancer, 1996, 32, 1070-1081; Broxterman, H. J., et al. Eur. J. Cancer. 1996, 32, 1024-1033), 다른 저항 메커니즘들이 존재함을 암시하고 있다.

화학요법 및 방사선 치료 등의 암 치료는 분열하는 세포를 대상으로 하여, 위장내의 관 및 모낭의 라이닝에 위치하는 세포인 조형세포를 포함하여 끊임없이 소생하는 정상 숙주 조직에 원하지 않는 독성을 일으키게 된다. 적어도 부분적으로는 암 치료에 의해 유도되는 골수 억제를 에리트로포이에틴, 과립구, 콜로니-자극 인자 및 과립구-마크로파지 콜로니 자극 인자 등을 포함하는 조혈 성장 인자들의 사용으로 극복할 수 있다(Gabrilove, J. L. and Goldie, D. W. In : Cancer, Principles & Practice of Oncology, 1993 (eds. DeVita, V. T. et al., J. B. Lippincott Co., Philadelphia)). 반면에, 위장 내의 독성 및 항암제에 의해 유도되는 탈모증을 극복할 수 있는 치료법은 없다.

따라서, 종양 및 정상 세포들이 항암제의 세포독성을 제거하는 새로운 메커니즘을 개발하고, 종양의 저항성을 극복할 수 있는 방법 및 약품을 개발하며, 정상 host 조직들을 암 치료로 인한 원하지 않는 독성으로부터 보호하기 위하여 상기 저 항 메커니즘들을 이용할 필요가 있다.

발명의 요약

최소한 부분적으로는, 본 발명은 넓은 스펙트럼 저항의 유도 과정에서 bFGF가 다수의 종양 및 전이성 장애에 대해 갖는 역할 및 aFGF가 bFGF-유도 저항성을 증대시키는 데 갖는 역할에 대한 설명에 기반을 두고 있다. aFGF/bFGF 저해제들은 시험관내(in vitro) 혹은 생체 내(in vivo)에서의 항암제의 활성을 증가시켜서 폐 전이 및 마우스에 있어서의 피하의 종양을 포함하는 인간 이종 조직이식 종양들의 수축 및 박멸을 야기한다. 본 발명은 항암제의 항암 효과를 증가시키기 위해 FGF 길항제(antagonist)를 사용한다. aFGF 및 bFGF와 같은 FGF 작용제(agonist)들은 항암제의 세포독성을 일반 비-종양성 내장 상피 세포의 수준으로 낮춘다. 본 발명은 항생제의 세포독성 효과들로부터 정상 세포들을 보호하기 위해 FGF 작용제를 사용한다.

그리하여, 총체적으로 본 발명은 일예로 과증식세포, 악성종양세포 혹은 양성 과증식세포와 같은 세포의 분열을 감소 또는 저해시키고 상기 세포들의 죽음을 촉진하는 등의 원하지 않는 세포의 성장 및 분열을 저해하는 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 세포를 최소 한 개의 세포독성 제제 및 세포사의 원인이 되는 제제와 같은 세포독성 제제 및 최소 한 개의 FGF 길항제를 세포 분열을 효과적으로 감소 또는 저해시키거나 세포사를 효과적으로 유도할 만큼 접촉시키는 것을 포함한다. 바람직하게는, 원하지 않는 세포는 확립된 종양이다.

또한, 본 발명은 대상 내에서 세포독성 제제와 같은 제제의 효능을 향상시키는 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 대상에 최소 한 개의 세포독성 제제와 같은 제제를 투여하는 것 및 대상에 최소 한 개의 FGF 길항제를 투여하는 것을 포함한다. 상기 FGF 길항제는 FGF 길항제가 없을 때의 세포독성 제제의 효과에 비례하여 세포독성 제제와 같은 제제의 효능을 향상시킨다.

바람직한 실시예에서, 상기 FGF 길항제는 확립된 종양과 같이 암에 대항하는 세포독성 제제의 효능을 향상시킨다.

또한, 본 발명은 대상 내에 있는 과증식세포와 같은 원하지 않는 세포, 즉 확립된 종양 또는 양성 과증식세포 등의 성장 및 분열을 저해하고 상기 세포의 죽음을 유도하는 방법을 제시한다. 상기 방법은 대상 내에서 불필요한 세포 성장 또는 분열을 특징으로 하는 질환을 치료하거나 예방하기 위하여 사용될 수 있다. 상기 방법은 대상에 세포사의 원인이 되는 제제인 세포독성 제제와 같은 최소 한 개의 세포독성 제제 및 최소 한 개의 FGF 길항제를 세포 분열을 치료 차원으로 또는 예방 차원으로 효과적으로 감소 또는 저해시키거나 세포사를 효과적으로 유도할 만큼 투여하는 것을 포함한다. 바람직하게는, 원하지 않는 세포는 확립된 종양이다.

바람직한 실시예에서 FGF 길항제는 넓은 세포독성 제제 스펙트럼으로 FGF-유도 저항성을 저해 또는 감소시킨다. 상기 세포독성 제제들은 항마이크로튜불 제제, 토포아이소머라제 I 저해제, 토포아이소머라제 II 저해제, 항대사물 제제, 분 열 저해제, 알킬화 제제, 삽입제제, 단백질 키나제 C 저해제, 항-호르몬, 성장인자수용체에 대항하는 항체 등의 신호전달경로를 방해할 수 있는 제제, 아폽토시스 또는 괴사를 촉진하는 제제, 인터페론, 인터루킨, 종양괴사인자 및 방사선을 포함하여 다양한 구조 및 활성 메커니즘을 지니고 있으며 여기에 제한되어 있는 것도 아니다.

바람직한 실시예에서, 상기 FGF 길항제는 bFGF 저해제를 포함한다.

바람직한 실시예에서, 상기 FGF 길항제는 aFGF 저해제를 포함한다.

바람직한 실시예에서, 상기 FGF 길항제는 최소 한 개의 bFGF 저해제 및 최소 한 개의 aFGF 저해제를 포함한다.

바람직한 실시예에서, aFGF 저해제는 bFGF 저해제의 활성을 증가시킨다.

바람직한 실시예에서, FGF 길항제는 FGF 분자 및 그것의 수용체 사이의 결합을 저해하도록 세포 밖에서 작용한다.

바람직한 실시예에서, FGF 길항제는 FGF 수용체의 세포내 도메인과 상호 작용하고 FGF 의 세포내 효과를 저해하도록 세포 내에서 작용한다.

바람직한 실시예에서, FGF 길항제는 FGF 분자 또는 FGF 수용체에 결합될 수 있고, FGF가 수용체에 결합되는 것을 막기도 하고, FGF와 수용체의 결합을 용이하게 해주는 FGF와 분자간의 상호 작용을 막기도 하고, FGF 수용체의 활성을 저하시킨다. 바람직하게는, FGF 분자는 bFGF 또는 aFGF이다.

바람직한 실시예에서. FGF 길항제는 수라민 외의 다른 것이다.

바람직한 실시예에서, FGF 길항제는 FGF 또는 FGF 수용체에 대항하는 항체 외의 다른 것이다.

바람직한 실시예에서, FGF 길항제는 aFGF 또는 bFGF와 같이 FGF에 의해 유도되는 생체 밖 조건하의 배양된 종양에서의 항암제의 저항력을 저해 또는 역전시킨다. 배양된 세포에서의 효과는 실시예 15에 설명되어 있는 시스템을 사용하여 결정할 수 있다.

바람직한 실시예에서, FGF 길항제는 FGF 길항제가 없을 때의 세포독성 제제의 효과에 비례하여 대상 내에서의 세포독성 제제와 같은 제제의 효능을 향상시킨다. 바람직하게는, FGF 길항제는 확립된 종양에 대항하는 세포독성 제제의 효능을 향상시킨다.

바람직한 실시예에서, FGF 길항제는 bFGF 또는 aFGF 등의 FGF 활성을 차단시키기에 충분한 만큼 존재하지만, 다음중 하나 또는 그 이상의 원인이 될 만큼 충분히 존재하지는 않는다. i) 현저한 세포분열 저해, ii) 인간 또는 동물 종양에서의 현저한 세포사, iii) 인간 대상과 같은 대상 내에서의 현저한 항종양 효과, iv) 현저한 세포 주기 정지. 배양된 세포에서의 효과는 예15에 설명되어 있는 시스템을 사용하여 결정할 수 있다.

바람직한 실시예에서, FGF 길항제는 세포독성 제제가 약물 활성 농도로 혈장 내에 존재할 때 현존하는 FGF 길항제의 혈장 농도가 다음 중 하나 또는 그 이상의 결과를 초래하지 않을 만큼 투여된다. i) 현저한 세포 주기 정지, ii) 현저한 세포사, iii) 현저한 세포 성장 저해. 즉, 동일한 농도의 FGF 길항제가 최소 10개, 더 바람직하게는 최소 25개, 더 바람직하게는 최소 50개, 더 바람직하게는 최소 70 개, 더 바람직하게는 최소 80개, 더 바람직하게는 최소 90개 그리고 가장 바람직하게는 최소 99%가 배양된 세포에 처리된다면, 혈장 농도는 다음 중 하나 또는 그 이상과 연관을 갖는다. i) 순환하는(cycling) 세포들은 세포 주기를 따라서 계속 진행한다. ii) 세포들은 계속 존속한다, iii) FGF 길항제를 처리한 후에도 세포들은 계속 분열을 할 수 있다. 배양된 세포에서의 효과는 실시예 15에 설명되어 있는 시스템을 사용하여 결정할 수 있다.

바람직한 실시예에서, FGF 길항제는 상기 경우에서 처럼 현저한 세포 주기 정지, 현저한 세포사, 또는 현저한 세포 성장 저해의 결과를 야기시킬 정도로는 아니더라도, 종양이 세포독성 제제 치료 항원에 민감해질 정도로 투여된다. 바람직하게는, FGF 길항제의 수준은 FGF에 의해 조정되는 세포독성 제제에 대한 종양의 저항과 같이 현저한 FGF-매개 화학저항 저해의 결과를 낳는다. 바람직하게는, FGF 길항제는 최소 10개, 더 바람직하게는 최소 25개, 더 바람직하게는 최소 50개, 더 바람직하게는 최소 70개, 더 바람직하게는 최소 80개, 더 바람직하게는 최소 90개, 그리고 가장 바람직하게는 99%의 FGF-매개 화학저항성을 저해시킨다. 배양된 세포에서의 효과는 예15에 설명되어 있는 시스템을 사용하여 결정할 수 있다.

바람직한 실시예에서 FGF 길항제가 투여되거나 FGF 길항제가 건강 유지에 도움이 되는 수준을 유지하는 시간, 즉 세포독성 제제의 세포독성 효과를 향상시키기에 충분한 혈장 농도는 180일 이하, 더 바람직하게는 90일 이하, 더 바람직하게는 60일 이하, 그리고 가장 바람직하게는 30일 이하이다.

바람직한 실시예에서 FGF 길항제가 투여되거나 FGF 길항제가 건강 유지에 도 움이 되는 수준을 유지하는 시간, 즉 세포독성 제제의 세포독성 효과를 향상시키기에 충분한 혈장 농도는 세포독성 제제가 투여되거나 세포독성 제제가 건강 유지에 도움이 되는 수준을 유지하는 기간 보다 실제로 일찍 시작되지도 늦게 끝나지도 않는다.

바람직한 실시예에서 FGF 길항제가 투여되거나 FGF 길항제가 건강 유지에 도움이 되는 수준을 유지하는 시간, 즉 세포독성 제제의 세포독성 효과를 향상시키기에 충분한 혈장 농도는 세포독성 제제가 투여된 최종일 또는 세포독성 제제가 건강 유지에 도움이 되는 수준을 유지하는 최종일로부터 180일 이하, 더 바람직하게는 90일 이하, 더 바람직하게는 60일 이하, 그리고 가장 바람직하게는 30일 이하 이후에 끝난다.

바람직한 실시예에서 FGF 길항제가 투여되거나 FGF 길항제가 건강 유지에 도움이 되는 수준을 유지하는 시간, 즉 세포독성 제제의 세포독성 효과를 향상시키기에 충분한 혈장 농도는 세포독성 제제가 투여되는 첫 날 또는 세포독성 제제가 건강 유지에 도움이 되는 수준을 유지하기 시작하는 첫 날의 180일 이하, 더 바람직하게는 90일 이하, 더 바람직하게는 60일 이하, 그리고 가장 바람직하게는 30일 이하 전이다.

바람직한 실시예에서, FGF 길항제인 단백질 또는 펩타이드는 단일클론 항체, 설치류 항체 또는 인간 항체, 또는 그것의 항원-결합 절편 등과 같은 항체이다. 바람직하게는, 단일클론 항체는 인간 항체이다. 항체들은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 등의 IgG, IgM, IgA1, IgA2, IgD 및 IgE 등을 포함하는 다양한 이소형태(isotype) 일 수 있다. 항체는 IgG1 또는 IgG4 항체처럼 완전한 길이일 수도 있고, Fab, F(ab')2, Fv 또는 단일 사슬 Fv 절편처럼 항원-결합 절편만 포함할 수도 있다.

바람직한 실시예에서, FGF 길항제는 키메라 또는 인간화 항체와 같은 재조합형의 항체이거나 나머지 부분들이 인체에 남아있는 동안, 설치류와 같은 비-인간 항체로부터 형성되는 다양한 부위들 또는 최소 한 개의 CDR을 구비하는 그것의 항원결합절편이다.

바람직한 실시예에서, FGF 길항제는 FGF 분자의 절편이다. 바람직하게는, FGF 절편은 수용체와 결합하기 위해서 FGF 분자와 경쟁한다.

바람직한 실시예에서. FGF 길항제는 결합 라이브러리에서 선택되어진 작은 분자이다.

바람직한 실시예에서, FGF 길항제는 수라민, 수라민의 구조 유사체, 항-FGF 항체, 항-FGF 수용체 항체, 펜토산 폴리설페이트, 스코폴라민, 앤지오스태틴, 스프라우티, 에스트라디올, 카르복시메틸벤질아민 덱스트란(CMDB7), 수라디스타, 인슐린-유사 성장인자 결합 단백질-3, 에탄올, 6-O-디설페이트 헤파린과 같은 헤파린, 저분자량 헤파린, 헤파란 설페이트, 프로타민 설페이트, TGF-β(transforming growth factor beta), 사이클로스포린 A 또는 bFGF에 대한 RNA 리간드 bFGF 등과 가운데서 선택되어진다.

바람직한 실시예에서, FGF 길항제는 헤파린이다.

바람직한 실시예에서, FGF 길항제는 저분자량 헤파린이다.

바람직한 실시예에서, FGF 길항제는 헤파린 설페이트이다.

바람직한 실시예에서, FGF 길항제는 항-FGF 항체이다.

바람직한 실시예에서, FGF 길항제는 수라민이다.

바람직한 실시예에서, FGF 길항제는 수라민이고, 상기 수라민은 bFGF 또는 aFGF 등의 FGF에 의해 유도되는 항암제에 대한 저항성을 차단하기에 충분한 농도로 존재하지만, 다음 중 하나 또는 그 이상을 생산하기에 충분할 정도로 존재하지는 않는다. i) 현저한 세포분열 저해, ii) 인간 또는 동물 종양에서의 현저한 세포사, iii) 인간 대상과 같은 대상 내에서의 현저한 항종양 효과, iv) 현저한 세포 주기 정지. 배양된 세포에서의 효과는 예15에 설명되어 있는 시스템을 사용하여 결정할 수 있다.

바람직한 실시예에서, FGF 길항제는 수라민이고, 이는 세포독성 제제가 약물 활성 농도로 혈장 내에 존재할 때 현존하는 FGF 길항제의 혈장 농도가 다음 중 하나 또는 그 이상의 결과를 초래하지 않을 만큼 투여된다. i) 현저한 세포 주기 정지, ii) 현저한 세포사, iii) 현저한 세포 성장 저해. 즉, 동일한 농도의 수라민이 최소 10개, 더 바람직하게는 최소 25개, 더 바람직하게는 최소 50개, 더 바람직하게는 최소 70개, 더 바람직하게는 최소 80개, 더 바람직하게는 최소 90개 그리고 가장 바람직하게는 최소 99%가 배양된 세포에 처리된다면, 혈장 농도는 다음 중 하나 또는 그 이상과 연관을 갖는다. i) 세포들은 세포 주기를 따라서 계속 진행한다. ii) 세포들은 계속 존속한다. iii) FGF 길항제를 처리한 후에도 세포들은 계속 분열을 할 수 있다. 배양된 세포에서의 효과는 실시예 15에 설명되어 있는 시스템을 사용하여 결정할 수 있다.

바람직하게는 수라민은 약 0.1 내지 100 ㎍/㎖, 더 바람직하게는 약 5 내지 60 ㎍/㎖, 더 바람직하게는 약 10 내지 50 ㎍/㎖, 그리고 가장 바람직하게는 약 15 내지 45 ㎍/㎖ 의 농도에 이르도록 투여된다. 수라민의 약물동력학은 5.5 시간, 4.1일 그리고 78일마다 반으로 감소되는 삼단계 농도 감퇴를 특징으로 한다. 총 체내 제거율은 0.0095 liter/hour/㎡이다(Jodrell et al., J Clin Oncol, 1994, 12, 166-175). 약물동력학에 기초하여, 당업자들은 혈장 농도를 96 시간 동안 90 ㎍/㎖ (63 μM)에서 18 ㎍/㎖ (13 μM)로 낮추기 위해서 대략 240 ㎎/㎡ 정도의 첫 번째 복용량이 일반 환자에게 투여되어야함을 계산할 수 있다. 일반적으로 사용되는 많은 세포독성 제제들이 96시간이 지난 뒤에 상기와 같은 건강 유지에 도움이 되는 수준에 도달하기 때문에 96시간이 일 예로 선택된 것이다. 다른 바람직한 치료 기간들 보다 바람직한 수라민 혈장 농도를 제공하기 위기 위한 유사한 계산들이 최초 수라민 복용량을 판단하기 위해서 수행될 수 있다. 나중의 치료 주기를 위한 혈장 농도 조절을 위한 유지 복용량 또한 유사한 방법으로 계산될 수 있다.

바람직한 실시예에서, 총 수라민 노출은 바람직하게는 96 시간 동안 800 μM-일 이하, 더 바람직하게는 96시간 동안 600 μM-일 이하, 더 바람직하게는 96 시간 동안 500 μM-일 이하, 더 바람직하게는 96 시간 동안 400 μM-일 이하, 더 바람직하게는 96 시간 동안 300 μM-일 이하, 더 바람직하게는 96 시간 동안 252 μM-일 이하, 더 바람직하게는 96 시간 동안 200 μM-일 이하, 더 바람직하게는 96 시간 동안 100 μM-일 이하, 그리고 가장 바람직하게는 96 시간 동안 52 μM-일 이하이다. μM-일로 표시되어 있는 총 수라민 노출은 24시간 동안 평균 마이크로몰농 도와 같이 약물 혈장 농도의 산물을 μM-일로 그리고 치료 날짜를 날로 표시한 것이다. 일 예로, 4일 동안 13 μM의 수라민을 처리한 대상은 96시간 동안 총 52 μM-일 만큼 약물에 노출되어 있게 된다.

바람직하게는, 수라민은 100μM 이하, 더 바람직하게는 80μM 이하, 더 바람직하게는 50 μM 이하, 더 바람직하게는 25 μM 이하, 더 바람직하게는 15 μM 이하, 그리고 가장 바람직하게는 10 μM 이하의 혈장 농도 정도로 투여된다. 바람직하게는, 상기 혈장 농도는 20일 이하, 더 바람직하게는 15일 이하, 더 바람직하게는 12일 이하, 더 바람직하게는 10일 이하, 더 바람직하게는 8일 이하, 그리고 가장 바람직하게는 5일 이하 동안 유지되어 세포독성 제제의 건강 유지에 도움이 되는 농도가 유지되는 시간을 넘어서게 된다.

바람직한 실시예에서 FGF 길항제는 수라민이고, 수라민이 투여되거나 FGF-매개 저항성을 저해 또는 역전시키고, 세포독성 제제의 효능을 향상시키기에 충분한 혈장 농도가 유지되는 시간은 180일 이하, 더 바람직하게는 90일 이하, 더 바람직하게는 60일 이하, 그리고 가장 바람직하게는 30일 이하이다.

바람직한 실시예에서, 수라민은 즉시 투여되거나, 세포독성 제제가 투여되기 3, 2, 또는 1일 이전 내로 투여되어 세포독성 제제의 혈장 농도가 건강 유지에 도움이 되는 수준 이하로 떨어지자마자 끝난다.

바람직한 실시예에서 FGF 길항제는 수라민이고, 수라민이 투여되거나 FGF-매개 저항성을 저해 또는 역전시키고, 세포독성 제제의 효능을 향상시키기에 충분한 혈장 농도가 유지되는 시간은 세포독성 제제가 투여되거나 세포독성 제제가 건강 유지에 도움이 되는 수준을 유지하는 기간 보다 실제로 일찍 시작되지도 늦게 끝나지도 않는다.

바람직한 실시예에서 FGF 길항제는 수라민이고, 수라민이 투여되거나 FGF-매개 저항성을 저해 또는 역전시키고, 세포독성 제제의 효능을 향상시키기에 충분한 혈장 농도가 유지되는 시간은 세포독성 제제가 투여된 최종일 또는 세포독성 제제가 건강 유지에 도움이 되는 수준을 유지하는 최종일로부터 180일 이하, 더 바람직하게는 90일 이하, 더 바람직하게는 60일 이하, 그리고 가장 바람직하게는 30일 이하 이후에 끝난다.

바람직한 실시예에서 FGF 길항제는 수라민이고, 수라민이 투여되거나 FGF-매개 저항성을 저해 또는 역전시키고, 세포독성 제제의 효능을 향상시키기에 충분한 혈장 농도가 유지되는 시간은 세포독성 제제가 투여되는 첫 날 또는 세포독성 제제가 건강 유지에 도움이 되는 수준을 유지하기 시작하는 첫 날의 180일 이하, 더 바람직하게는 90일 이하, 더 바람직하게는 60일 이하, 그리고 가장 바람직하게는 30일 이하 전이다.

하기에 설명되는 방법들은 수라민이 표 2에서 설명되는 제제와 같은 세포독성 제제의 항종양 효과를 향상시키는 데에 사용된다. 상기 수라민 복용량은 약물 활성 농도의 혈장 내에 세포독성 제제가 존재하는 동안에 포유동물에서 100 ㎍/㎖ 이하, 더 바람직하게는 75 ㎍/㎖ 이하, 그리고 가장 바람직하게는 50 ㎍/㎖ 이하의 혈장 농도를 전달하도록 선택되어졌다. 수라민 복용량은 최소 한 개의 항암제가 투여되기 이전에, 또는 그와 동시에, 또는 그 이후에 투여된다. 하기에 제시되어 있는 동물 실험들은 3주 동안 10 ㎎/㎏의 정맥내 거환 수라민을 2주간 투여하여 마우스를 치료하는 것이 파클리탁셀, 독소루비신 등의 항암제의 항종양 효과를 향상시키기는 하지만 추가적인 체중 감소를 일으키지는 않는다. 상기 복용량은 복용량을 투여한 후, 72시간 동안 약 10 μM(-14 ㎍/㎖)의 혈장 수라민 농도로 계산된다(실시예 9, 표 4 및 도 7 참조). 상기 기술의 방법들은 단독으로 또는 세포독성 제제와 결합시킨 고투여량 수라민을 사용한다. 이 때, 인간 대상에서 현저한 항종양 효과를 나타내려면 150 내지 300 ㎍/㎖의 혈장 수라민 농도를 유지하여야 한다 (Eisenberger et al., J. Clin. Oncol., 1995, 13, 2174-2186). 150 내지 300 ㎍/㎖의 수라민 혈장 농도를 유지하는 것을 목표로 하는 전형적인 수라민 투여량 스케쥴은 첫째 주의 첫 투여를 2100 ㎎/㎡로 하고 이어서는 베이시안 약동학 방법으로 복용량을 조절하면서 6개월 또는 그 이상 동안 매 28일마다 계속 복용량을 투여하도록 되어 있다(Dawson et al., Clin. Cancer. Res., 1998, 4, 37-44, Falcone et al., Cancer, 1999, 86, 470-476). 게다가, 수라민을 다른 세포독성 제제와 결합시켜 사용하는 기술의 방법들은 다른 세포독성 제제들의 주기 및 치료 지속기간 보다 주기 스케쥴 또는 더긴 지속기간을 필요로 한다. 일예로, 안드로겐-비의존적 전리선암을 치료하기 위한 수라민 및 독소루비신의 결합에 있어서 독소루비신 치료 기간은 20주에 다다랐던 반면, 수라민 치료 기간은 45주에 달하였다(Tu et al., Clin. Cancer Res., 1998, 4, 1193-1201). 일예로, 호르몬-저항 전립선암\을 치료하기 위한 수라민 및 마이토마이신 C의 결합에 있어서, 수라민은 매주 투약된 반면에, 마이토마이신 C는 매 5주마다 투약될 뿐이었다(Rapoport et al., Ann. Oncol., 1993, 4, 567-573). 상기와 같은 복용량 및 장기간에 걸친 치료에 있어서, 수라민은 인간 환자들에게 아드레날 부족, 응혈이상증, 말초 신경병 및 근근육약화와 같은 독성의 원인이 된다(Dorr and Von Hoff, Cancer Chemotherapy Handbook, 1994, 859-866). 상기 독성들의 발병률 및 혹독함은 cumulated 복용량과 정의 관계에 있으며 상기에 설명되어 있는 방법으로 최소화된다.

바람직한 실시예에서, FGF 길항제는 항-FGF 항체이다. 바람직하게는, 항-FGF 항체는 bFGF 또는 aFGF 등의 FGF에 의해 유도되는 항암제에 대한 저항성을 막기에는 충분하지만 다음 중 하나 또는 그 이상을 생산하기에는 충분하지 않을 정도의 농도로 존재한다. i) 현저한 세포분열 저해, ii) 인간 또는 동물 종양에서의 현저한 세포사, iii) 인간 대상과 같은 대상 내에서의 현저한 항종양 효과, iv) 현저한 세포 주기 정지.

바람직한 실시예에서, FGF 길항제는 항-FGF 항체이며 항-FGF 항체는 세포독성 제제가 약물 활성 농도로 혈장 내에 존재할 때 현존하는 FGF 길항제의 혈장 농도가 다음 중 하나 또는 그 이상의 결과를 초래하지 않을 만큼 투여된다. i) 현저한 세포 주기 정지, ii) 현저한 세포사, iii) 현저한 세포 성장 저해. 즉, 동일한 농도의 수라민이 최소 10개, 더 바람직하게는 최소 25개, 더 바람직하게는 최소 50개, 더 바람직하게는 최소 70개, 더 바람직하게는 최소 80개, 더 바람직하게는 최소 90개 그리고 가장 바람직하게는 최소 99%가 배양된 세포에 처리된다면, 혈장 농도는 다음 중 하나 또는 그 이상과 연관을 갖는다. i) 세포들은 세포 주기를 따라서 계속 진행한다. ii) 세포들은 계속 존속한다, iii) FGF 길항제를 처리한 후에도 세포들은 계속 분열을 할 수 있다. 배양된 세포에서의 효과는 예15에 설명되어 있는 시스템을 사용하여 결정할 수 있다.

바람직한 실시예에서 FGF 길항제는 항-FGF 항체이며, 항-FGF 항체가 투여되거나 FGF-매개 저항성을 저해 또는 역전시키고, 세포독성 제제의 효능을 향상시키기에 충분한 혈장 농도가 유지되는 시간은 180일 이하, 더 바람직하게는 90일 이하, 더 바람직하게는 60일 이하, 그리고 가장 바람직하게는 30일이다.

바람직한 실시예에서 FGF 길항제는 항-FGF 항체이며, 항-FGF 항체가 투여되거나 FGF-매개 저항성을 저해 또는 역전시키고, 세포독성 제제의 효능을 향상시키기에 충분한 혈장 농도가 유지되는 시간은 세포독성 제제가 투여되거나 세포독성 제제가 건강 유지에 도움이 되는 수준을 유지하는 시간 보다 실제로 일찍 시작되지도 늦게 끝나지도 않는다.

바람직한 실시예에서 FGF 길항제는 항-FGF 항체이며, 항-FGF 항체가 투여되거나 FGF-매개 저항성을 저해 또는 역전시키고, 세포독성 제제의 효능을 향상시키기에 충분한 혈장 농도가 유지되는 시간은 세포독성 제제가 투여된 최종일 또는 세포독성 제제가 건강 유지에 도움이 되는 수준을 유지하는 최종일로부터 180일 이하, 더 바람직하게는 90일 이하, 더 바람직하게는 60일 이하, 그리고 가장 바람직하게는 30일 이하 이후에 끝난다.

바람직한 실시예에서 FGF 길항제는 항-FGF 항체이며, 항-FGF 항체가 투여되거나 FGF에 의해 매개되는 저항성을 저해 또는 역전시키고, 세포독성 제제의 효능을 향상시키기에 충분한 혈장 농도가 유지되는 시간은 세포독성 제제가 투여되는 첫 날 또는 세포독성 제제가 건강 유지에 도움이 되는 수준을 유지하기 시작하는 첫 날의 180일 이하, 더 바람직하게는 90일 이하, 더 바람직하게는 60일 이하, 그리고 가장 바람직하게는 30일 이하 전이다.

바람직한 실시예에서, 상기 방법은 고형종양세포, 연조직세포, 전이종양세포, 백혈병세포 및 림프종세포로 구성된 군으로부터 선택되는 과증식세포의 증식을 저해하거나 사멸을 촉진한다.

바람직한 실시예에서, 상기 방법은 섬유종에서 과증식세포의 증식을 저해하거나 사멸을 촉진한다.

바람직한 실시예에서, 상기 질환은 암(예, 육종(sarcoma), 악성종양(carcinoma), 선암종(adenocarconoma), 림프종 또는 백혈병)이다.

바람직한 실시예에서, 상기 질환은 확립된 종양을 포함하는 암이다.

바람직한 실시예에서, 상기 질환은 고형종양을 포함하는 암이다.

바람직한 실시예에서, 상기 질환은 전이성 병변(metastatic lesion)을 포함하는 암이다.

바람직한 실시예에서, 상기 질환은 백혈병을 포함하는 암이다.

바람직한 실시예에서, 상기 질환은 림프종을 포함하는 암이다.

바람직한 실시에에서, 상기 질환은 섬유육종(fibrosarcoma), 근육종(myosarcoma), 지방육종(liposarcoma), 연골육종(chondrosarcoma), 골원성육종(osteogenic sarcoma), 척삭종(chordoma), 맥관육종(angiosarcoma), 내피육종(endotheliosarcoma), 림프관육종(lymphangiosarcoma), 림프관내피아세포 종(lymphangioendotheliosarcoma), 활막종(synovioma), 중피종(mesothelioma), 유윙종양(Ewing's tumor), 평활근육종(leiomyosarcoma), 횡문근육종(rhabdomyosarcoma), 위암(gastric cancer), 식도암(esophageal cancer), 결장종양(colon carcinoma), 직장암(rectal cancer), 췌장암(panreatic cancer), 유방암(breast cancer), 난소암(ovarian cancer), 전립선암(prostate cancer), 자궁암(uterine cancer), 머리와 목 암, 피부암(skin cancer), 뇌암(brain cancer), 인상세포종양(squamous cell carcinoma), 피지선종양(sebaceous gland carcinoma), 유두상종양(papillary carcinoma), 유두선종(papillary adenocarcinoma), 낭포선암(cystadenocarcinoma), 수질종양(medullary carcinoma), 기관지원성종양(bronchogenic carcinoma), 신장세포종양(renal cell carcinoma), 간암(hepatoma), 담즙선종양(bile duct carcinoma), 융모암(choriocarcinoma), 정상피종(seminoma), 태아종(embryonal carcinoma), 빌름스종양(Wilm's tumor), 자궁경부암(cervical cancer), 고환암(testicular cancer), 폐종양(lung carcinoma), 소세포폐종양(small cell lung carcinoma), 비소세포폐종양(non-small cell lung carcinoma), 방광종양(bladder carcinoma), 상피종(epithelial carcinoma), 신경교종(glioma), 성상세포종(astrocytoma), 수아세포종(medulloblastoma), 두개인두종(craniopharyngioma), 뇌실상의세포종(ependymoma), 송과체종(pinealoma), 혈관아세포종(hemangioblastoma), 청음신경종(acoustic neuroma), 회돌기교종(oligodendroglioma), 수악종(meningioma), 흑색종(melanoma), 신경아세포종(neuroblastoma), 망막아세포종(retinoblastoma), 백혈병(leukemia), 림프종(lymphoma) 또는 카포시육종(Kaposi sarcoma)과 같은 암이다.

바람직한 실시예에서, 상기 질환은 FGF 분자가 발현되는, 바람직하게는 FGF 분자가 많이 발현되는 조직 또는 aFGF, bFGF 및/또는 FGF-생산 세포 또는 조직과 접촉하거나 노출된 세포로부터 형성된 세포(예; 종양 또는 전이세포)를 포함하는 암을 포함한다.

바람직한 실시예에서, 상기 질환은 유방, 전립선, 신장, 방광, 간, 폐, 림프절, 결장, 직장, 피부, 뇌, 췌장, 경부, 난소, 후두, 인두, 경부점막, 머리 또는 목의 암, 혈액 유래의 암 또는 림프시스템의 암에서 형성된 세포(예; 전이 세포)를 포함하는 암을 포함한다.

바람직한 실시예에서, 상기 질환은 확립된 종양(적어도 일주일 동안, 바람직하게는 2주 동안, 바람직하게는 1개월 동안, 바람직하게는 2개월 동안, 보다 바람직하게는 3개월 동안, 보다 바람직하게는 6개월 동안, 가장 바람직하게는 6개월 이상 피검체에서 성장한 종양)이다.

바람직하게는 확립된 종양은 임상적으로 진단된다.

바람직하게는 확립된 종양은 진단 매체(X-선, CAT 스캔 또는 MRI)상에서 보여진다.

바람직하게는 확립된 종양은 종양마커(예; 전립선암에 대한 전립선 특이 항원, 특정 유방암에 대한 Her2/neu, 난소암에 대한 CA125 또는 유전적 변경)의 검출 에 의해 진단될 수 있다.

바람직하게는 확립된 종양은 병리학적 변화(예; 폐암에 대한 객담에서 혈액, 결장암에 대한 대변에서 혈액, 방광암에 대한 소변에서 혈액, 유방암에 대한 유방에서 혹, 고통 또는 두통)의 검출에 의해 진단될 수 있다.

바람직하게는 확립된 종양은 환자 샘플(환자의 객담, 대변, 소변 등)의 생화학적 분석에 의해 진단될 수 있다.

바람직하게는 확립된 종양은 피검체에서 유래한 세포의 형태학적 분석(예; 형태학적 비정상, 비정상적인 핵-세포질 비, 비정상적인 조직 구조, 비정상적인 조직 구성 또는 비정상적인 조직 조성)에 의해 진단될 수 있다.

바람직하게는 확립된 종양은 눈에 보이는, 촉진 가능하고 검시 또는 부검 동안에 관찰되는 것이다.

바람직한 실시예에서, 질환은 암(예; 폐암, 직장암, 신경교종, 흑색종, 또는 화학요법이 어려운 암), 화학저항성이 있는 전이암(예; 화학요법에 적게 또는 거의 반응이 없는)을 포함한다.

바람직한 실시예에서, 상기 과증식세포는 양성병변에서 관찰된다.

바람직한 실시예에서, 상기 질환은 건선(psoriasis), 낭포(systs), 양성전립선과형성(benign prostatic hyperplasia) 및 자궁내막증(endometriosis)로 구성되는 군으로부터 선택된다.

바람직한 실시예에서, 상기 질환은 양성 과형성 질환(benign hyperplastic disease) 군으로부터 선택된다. 양성 과형성 질환의 예로는 구강유두종(oral papillomas), 입 또는 인두(pharynx)의 중앙거대세포육아종(central giant cell granulomas), 구강의 양성백아질아세포증(benign cementoblastomas), 구강플라키아(oral plakia), 위폴립(gastric polyps), 위선종(gastric adenomas), 소장선종(small intestinal adenomas), 소장육아종(small intestinal granulomas) , 소장유두종(small intestinal papillomas), 소장종양세포종(small intestinal oncocytomas), 소장신경초종(small intestinal Schwannomas), 결장폴립(colonic polyps), 결장선종(colonic adenomas), 크론병(Crohn's disease), 간선종(hepatic adenoma), 간경변(hepatic cirrhosis), 담당유두종증(biliary papillomatosis), 췌장선종(pancreatic adenomas), 췌장관증식(pancreatic ductal hyperplasia), 신장종양세포증(renal oncocytomas), 신장유두종(renal papillomas), 방광선종(adenomas of bladder), 방광말라코플라키아(malakoplakia of the bladder), 방광가육종(pseudosarcomas of the bladder), 자궁내막증, 양성전립선과형성, 음경의 홍색비후증(erythroplasia of penis), 외음문(vulva), 질(vagina) 또는 경부(cervix)의 폴립 및 유두종, 자궁내막폴립(endometrial polyps), 선종(adenomas), 유두종(papillomas), 레이미오마(leimyomas), 난소낭포(ovarian cysts), 유방의 섬유낭포성질환(fibrocystic disease of the breast), 유방의 지방종(lipoma), 경화성선증(sclerosing adenosis), 혈관종(hemangioma), 유방의 관과형성(ductal hyperplasia of the breast), 섬유선종(fibroadenomas), 선평활근상피종(adenomyoepitheliomas), 과오종(hamartoma), 피부의 모반(nevus of the skin), 유전성피부질환(genodermatoses), 골섬유증(fibrosis of the bone), 섬유성이형성 증(fibrous dysplasia), 연골발육부전(chondrodysplasisa), 경화성골이형성증(sclerosing bone dysplasia), 축성골연화증(axial osteomalacia), 불완전섬유원증(fibrogenesis imperfecta), 골종(osteomas), 골양골종(osteoid osteomas), 골아세포종(osteoblstomas), 골연골종(osteochondomas), 내연골종(enchondromas), 연골류점액섬유종(chondromyxoid fibromas), 연골아세포종(chondroblastomas), 활액지방종(synovial lipomas), 내분비기관의 선종(adenomas of endocrine organs), 갑상선종(goiter), 그레이브스병(Graves' disease), 부신과형성(adrenal hyperplasia), 부신선종(adrenal adenomas), 부신 MEN I 증후군(adrenal MEN I syndrome) 및 부신골수지방종(adrenal myelolipomas)이 있다.

바람직한 실시예에서, 상기 피검체는 포유동물(예; 인간)이다. 예를 들어, 피검체는 환자(예; 암환자)이다. 피검체는 비소세포폐암을 앓고 있고, 파클리탁셀, 카르보플라틴 및 FGF 길항제(예; 수라민)의 조합으로, 또는 겜시타빈, 시스플라틴 및 FGF 길항제(예; 수라민)이 조합으로 치료하고 있는 환자일 수 있다. 피검체는 호르몬 불응 전리선암을 앓고 있고, 데스트라무스틴 포스페이트, 택소티어 및 FGF 길항제(예; 수라민)의 조합으로 또는 독소루비신, 케토코나졸 및 FGF 길항제(예; 수라민)의 조합으로 치료하고 있는 환자일 수 있다. 피검체는 전이유방암을 앓고 있고, 사이클로포스파미드, 독소루비신, 5-플루오로우라실 및 FGF 길항제(예; 수라민)의 조합으로 또는 독소루비신, 택소티어 및 FGF 길항제(예; 수라민)의 조합으로 치료하고 있는 환자일 수 있다. 피검체는 HER2/neu 종양유전자를 과발현하는 진행된 유방암을 앓고 있고, 파클리탁셀 또는 시스플라틴을 사용하거나 사용하지 않고 HER2/neu 저해제(예; HER2/eu 항체) 및 FGF 길항제(예; 수라민)로 치료하고 있는 환자일 수 있다. 피검체는 진행된 또는 전이 결장직장암을 앓고 있고, 이리노테칸 및 FGF 길항제(예; 수라민)의 조합으로 치료하고 있는 환자일 수 있다. 피검체는 진행된 결장암을 앓고 있고, 5-플루오로우라실, 루코보린 및 FGF 길항제(예; 수라민)의 조합으로 치료하고 있는 환자일 수 있다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 항마이크로듀블(antimicrotubule) 제제, 토포아이소머라제(topoisomerase) I 저해제, 토포아이소머라제 Ⅱ 저해제, 항대사물 제제(antimetabolite), 분열저해제(mitotic inhibitor), 알킬화(alkylating) 제제, 삽입(intercalating) 제제, 신호 전달 경로를 방해할 수 있는 제제(예, 단백질 키나제 C 저해제, 항-호르몬, 성장 인자 수용체에 대한 항체), 아폽토시스(apoptosis) 및/또는 세포괴사(necrosis)를 촉진하는 제제, 인터페론, 인터루킨, 종양괴사인자(tumor necrosis factor) 및 방사선으로 구성된 군으로부터 선택되는 것이다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 항마이크로튜불 제제, 토포아이소머라제 Ⅱ 저해제, 항대사물 제제, 분열 저해제, 알킬화 제제, 삽입 제제, 신호 전달 경로를 방해할 수 있는 제제(예, 단백질 키나제 C 저해제, 항-호르몬, 성장 인자 수용체에 대한 항체), 인터페론, 인터루킨, 종양괴사인자 및 방사선으로 구성된 군으로부터 선택되는 것이다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 항마이크로튜불 제제, 토포아이 소머라제 I 저해제, 항대사물 제제, 분열 저해제, 알킬화 제제, 삽입 제제, 신호 전달 경로를 방해할 수 있는 제제(예, 단백질 키나제 C 저해제, 항-호르몬, 성장 인자 수용체에 대한 항체), 인터페론, 인터루킨, 종양괴사인자 및 방사선으로 구성된 군으로부터 선택되는 것이다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 항마이크로튜불 제제, 토포아이소머라제 I 저해제, 토포아이소머라제 Ⅱ 저해제, 분열 저해제, 삽입 제제, 알킬화 제제, 신호 전달 경로를 방해할 수 있는 제제(예, 단백질 키나제 C 저해제, 항-호르몬, 성장 인자 수용체에 대한 항체), 인터페론, 인터루킨, 종양괴사인자 및 방사선으로 구성된 군으로부터 선택되는 것이다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 항마이크로튜불 제제, 토포아이소머라제 I 저해제, 토포아이소머라제 Ⅱ 저해제, 항대사물 제제, 분열 저해제, 신호 전달 경로를 방해할 수 있는 제제(예, 단백질 키나제 C 저해제, 항-호르몬, 성장 인자 수용체에 대한 항체), 인터페론, 인터루킨, 종양괴사인자 및 방사선으로 구성된 군으로부터 선택되는 것이다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 항마이크로튜불 제제, 토포아이소머라제 I 저해제, 토포아이소머라제 Ⅱ 저해제, 항대사물 제제, 분열 저해제, 알킬화 제제, 삽입 제제, 신호 전달 경로를 방해할 수 있는 제제(예, 단백질 키나제 C 저해제, 항-호르몬, 성장 인자 수용체에 대한 항체), 인터페론, 인터루킨 및 방사선으로 구성된 군으로부터 선택되는 것이다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 항마이크로튜불 제제, 토포아이 소머라제 I 저해제, 토포아이소머라제 Ⅱ 저해제, 항대사물 제제, 분열 저해제, 알킬화 제제, 삽입 제제, 신호 전달 경로를 방해할 수 있는 제제(예, 단백질 키나제 C 저해제, 항-호르몬, 성장 인자 수용체에 대한 항체), 인터루킨, 종양괴사인자 및 방사선으로 구성된 군으로부터 선택되는 것이다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 항마이크로튜불 제제, 분열 저해제, 신호 전달 경로를 방해할 수 있는 제제(예, 단백질 키나제 C 저해제, 항-호르몬, 성장 인자 수용체에 대한 항체), 인터루킨 및 방사선으로 구성된 군으로부터 선택되는 것이다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 하기 기술된 것으로부터 선택된다. 세포독성 제제는 파클리탁셀(paclitaxel), 빈크리스틴(vincristine), 빈블래스틴(vinblastine), 빈데신(vindesine), 빈노렐빈(vinorelbin), 택소티어(taxotere, 예; 도세택셀(Docetaxel)), 캄프토테신(camptothecin), 토포테칸(topotecan), 이리노테칸 하이드로클로라이드(irinotecan hydrochloride, 예; 캄프토사르(Camptosar)), 독소루비신(doxorubicin), 에토포시드(etoposide), 미톡산트론(mitoxantrone), 다우노루비신(daunorubicin), 이다루비신(idarubicin), 테니포시드(teniposide), 암사크린(amsacrine), 에피루비신(epirubicin), 메르바론(merbarone), 피로잔트론 하이드로클로라이드(piroxantrone hydrochloride), 5-플루오로우라실(5-fluorouracil), 메토트렉세이트(methotrexate), 6-머캡토퓨린(6-mercaptopurine), 6-티오구아닌(6-thioguanine), 플루다라빈 포스페이트(fludarabine phosphate), 시타라빈(cytarabine, Ara-C), 트리메트렉세이트(trimetrexate), 겜시타빈(gemcitabine), 아시비신(acivicin), 아라노신(alanosine), 피라조푸린(pyrazofurin), N-포스포아세틸-L-아스파레이트(N-phosphoracetyl-L-Asparate, PALA), 펜토스태틴(pentostatin), 5-아자시티딘(5-azacitidine), 5-아자C(5-Aza-C) 5-아자-2-디옥시시티딘(5-Aza-2'-deoxyxytidine), 아데노신 아라비노시드(adenosine arabinoside, Ara-A), 크라드리빈(cladribine), 프토라푸르(ftorafur), UFT(conbination of uracil and ftorafur), 5-플루오로-2'-디옥시우리딘(5-fluoro-2'-deoxyruidine), 5-플루오로우리딘(5-fluorouridine), 5'-디옥시-5-플루오로우리딘, 하이드록시우레아, 디하이드로렌클로람부실(dihydrolenchlorambucil), 티아조푸린(tiazofurin), 시스플라틴(cisplatin), 카르보플라틴(carboplatin), 옥살리플라틴(oxaliplatin), 마이토마이신 C, BCNU(예, 카르무스틴(Carmustine)), 멜파란(melphalan), 티오테파(thiotepa), 부설판(busulfan), 클로람부실(chlorambucil), 플리카마이신(plicamycin), 다카바진(dacabazine), 이포스파미드 포스페이트(ifosfamide phosphate), 사이클로포스파미드(chclophosphamide), 니트로젠 무스타드(nitrogen mustard), 우라실 무스타드(uracil mustard), 피포브로만(pipobroman), 4-이포미놀(4-ipomeanol), 디하이드로렌페론(dihydrolenperone), 스피로무스틴(spiroustine), 겔데나마이신(geldenamycin), 사이토칼라신스(cytochalasins), 뎁시펩타이드(depsipeptide), 루프론(Lupron), 루프로리드(leuprolide, 예; 루프론(Lupron)), 케토코나졸(ketoxonazole), 타목시펜(tamoxifen), 고세레린(goserelin, 예; 조라덱스(Zoladex)), 플루타미드(flutamide), 4'-사이아노-3-(4-플루오로페닐설포닐)-2-하이드록시-2-메틸-3'(트리플루오로메틸)프로피오나니리드(4-cyano-3-(4-fluorophenylsulphonyl)-2-hydroxy-2-methyl3'-(trifluoromethyl)propionanilide), 항-Her2/neu 항체(예; 헤르셉틴(Herceptin)), 항-CD20 항체(예; 리투산(Rituxan)), 인터페론 알파, 인터페론 베타, 인터페론 감마, 인터루킨 2, 인터루킨 4, 인터루킨 12, 종양괴사인자 및 방사선을 포함한다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 하기 기술된 것으로부터 선택된다. 세포독성 제제는 파클리탁셀, 빈크리스틴, 빈블래스틴, 빈데신, 빈노렐빈, 택소티어(예; 도세택셀), 토포테칸, 이리노테칸 하이드로클로라이드(예; 캄프토사르), 독소루비신, 에토포시드, 미톡산트론, 다우노루비신, 이다루비신, 테니포시드, 암사크린(예; 도세택셀), 에피루비신, 메르바론, 피로잔트론 하이드로클로라이드, 5-플루오로우라실, 메토트렉세이트, 6-머캡토퓨린, 6-티오구아닌, 플루다라빈 포스페이트, 시타라빈(Ara-C), 트리메트렉세이트, 겜시타빈, 아시비신, 아라노신, 피라조푸린, N-포스포아세틸-L-아스파레이트(PALA), 펜토스태틴, 5-아자시티딘, 5-아자-2-디옥시시티딘, 아데노신 아라비노시드(Ara-A), 크라드리빈, 프토라푸르, UFT(우라실 및 프토라푸르의 조합), 5-플루오로-2'-디옥시우리딘, 5-플루오로우리딘, 5'-디옥시-5-플루오로우리딘, 하이드록시우레아, 디하이드로렌클로람부실, 티아조푸린, 카르보플라틴, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 마이토마이신 C, BCNU(예, 카르무스틴), 멜파란, 티오테파, 부설판, 클로람부실, 플리카마이신, 다카바진, 이포스파미드 포스페이트, 사이클로포스파미드, 니트로젠 무스타드, 우라실 무스타드, 피포브로만, 4-이포미놀, 디하이드로렌페론, 스피로무스틴, 겔데나마이신, 사이토칼라신스, 뎁시펩타이드, 루프로리드(예; 루프론), 케토코나졸, 타목시펜, 고세레린(예; 조라덱스), 플루타미드, 4'-사이아노-3-(4-플루오로페닐설포닐)-2-하이드록시-2-메틸-3'(트리플루오로메틸)프로피오나니리드, 항-Her2/neu 항체(예; 헤르셉틴), 항-CD20 항체(예; 리투산), 인터페론 알파, 인터페론 베타, 인터페론 감마, 인터루킨 2, 인터루킨 4, 인터루킨 12, 종양괴사인자 및 방사선을 포함한다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 하기 기술된 것으로부터 선택된다. 세포독성 제제는 파클리탁셀, 빈크리스틴, 빈블래스틴, 빈데신, 빈노렐빈, 택소티어 암사크린(예; 도세택셀), 캄프토테신, 토포테칸, 이리노테칸 하이드로클로라이드(예; 캄프토사르), 에토포시드, 미톡산트론, 다우노루비신, 에피루비신, 메르바론, 피로잔트론 하이드로클로라이드, 메토트렉세이트, 6-머캡토퓨린, 6-티오구아닌, 플루다라빈 포스페이트, 시타라빈(Ara-C), 트리메트렉세이트, 겜시타빈, 아시비신, 아라노신, 피라조푸린, N-포스포아세틸-L-아스파레이트(PALA), 펜토스태틴, 5-아자시티딘, 5-아자-2-디옥시시티딘, 아데노신 아라비노시드(Ara-A), 이다루비산, 테니포시드, 암사크린, 5-플루오로우라실, 크라드리빈, 프토라푸르, UFT(우라실 및 프토라푸르의 조합), 5-플루오로-2'-디옥시우리딘, 5-플루오로우리딘, 5'-디옥시-5-플루오로우리딘, 하이드록시우레아, 디하이드로렌클로람부실, 티아조푸린, 카르보플라틴, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 마이토마이신 C, BCNU(예, 카르무스틴), 멜파란, 티오테파, 부설판, 클로람부실, 플리카마이신, 다카바진, 이포스파미드 포스페이트, 사이클로포스파미드, 니트로젠 무스타드, 우라실 무스타드, 피포브로만, 4-이포미놀, 디하이드로렌페론, 스피로무스틴, 겔데나마이신, 사이토칼라신스, 뎁시펩타이드, 루프로리드(예; 루프론), 케토코나졸, 타목시펜, 고세레린(예; 조라덱스), 플루타미드, 4'-사이아노-3-(4-플루오로페닐설포닐)-2-하이드록시-2-메틸-3'(트리플루오로메틸)프로피오나니리드, 항-Her2/neu 항체(예; 헤르셉틴), 항-CD20 항체(예; 리투산), 인터페론 알파, 인터페론 베타, 인터페론 감마, 인터루킨 2, 인터루킨 4, 인터루킨 12, 종양괴사인자 및 방사선을 포함한다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 하기 기술된 것으로부터 선택된다. 세포독성 제제는 파클리탁셀, 빈크리스틴, 빈블래스틴, 빈데신, 빈노렐빈, 택소티어(예; 도세택셀), 캄프토테신, 토포테칸, 이리노테칸 하이드로클로라이드(예; 캄프토사르), 독소루비신, 에토포시드, 미톡산트론, 다우노루비신, 이다루비신, 테니포시드, 암사크린, 에피루비신, 메르바론, 피로잔트론 하이드로클로라이드, 메토트렉세이트, 6-머캡토퓨린, 6-티오구아닌, 플루다라빈 포스페이트, 시타라빈(Ara-C), 트리메트렉세이트, 겜시타빈, 아시비신, 아라노신, 피라조푸린, N-포스포아세틸-L-아스파레이트(PALA), 펜토스태틴, 5-아자시티딘, 5-아자-2-디옥시시티딘, 아데노신 아라비노시드(Ara-A), 크라드리빈, 프토라푸르, UFT(우라실 및 프토라푸르의 조합), 5-플루오로-2'-디옥시우리딘, 5-플루오로우리딘, 5'-디옥시-5-플루오로우리딘, 하이드록시우레아, 디하이드로렌클로람부실, 티아조푸린, 카르보플라틴, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 마이토마이신 C, BCNU(예, 카르무스틴), 멜파란, 티오테파, 부설판, 클로람부실, 플리카마이신, 다카바진, 이포스파미드 포스페이트, 사이클로포스파미드, 니트로젠 무스타드, 우라실 무스타드, 피포브로만, 4-이포미놀, 디하이드로렌페론, 스피로무스틴, 겔데나마이신, 사이토칼라신스, 뎁시펩타이드, 루프로리드(예; 루프론), 케토코나졸, 타목시펜, 고세레린(예; 조라덱스), 플루타미드, 4'-사이아노-3-(4-플루오로페닐설포닐)-2-하이드록시-2-메틸-3'(트리플루오로메틸)프로피오나니리드, 항-Her2/neu 항체(예; 헤르셉틴), 항-CD20 항체(예; 리투산), 인터페론 알파, 인터페론 베타, 인터페론 감마, 인터루킨 2, 인터루킨 4, 인터루킨 12, 종양괴사인자 및 방사선을 포함한다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 하기 기술된 것으로부터 선택된다. 세포독성 제제는 파클리탁셀, 빈크리스틴, 빈블래스틴, 빈데신, 빈노렐빈, 택소티어(예; 도세택셀), 캄프토테신, 토포테칸, 이리노테칸 하이드로클로라이드(예; 캄프토사르), 독소루비신, 에토포시드, 미톡산트론, 다우노루비신, 이다루비신, 테니포시드, 암사크린, 에피루비신, 메르바론, 피로잔트론 하이드로클로라이드, 5-플루오로우라실, 메토트렉세이트, 6-머캡토퓨린, 6-티오구아닌, 플루다라빈 포스페이트, 시타라빈(Ara-C), 트리메트렉세이트, 겜시타빈, 아시비신, 아라노신, 피라조푸린, N-포스포아세틸-L-아스파레이트(PALA), 펜토스태틴, 5-아자시티딘, 5-아자-2-디옥시시티딘, 아데노신 아라비노시드(Ara-A), 크라드리빈, 프토라푸르, UFT(우라실 및 프토라푸르의 조합), 5-플루오로-2'-디옥시우리딘, 5-플루오로우리딘, 5'-디옥시-5-플루오로우리딘, 하이드록시우레아, 디하이드로렌클로람부실, 티아조푸린, 카르보플라틴, 옥살리플라틴, 마이토마이신 C, BCNU(예, 카르무스틴), 멜파란, 티오테파, 부설판, 클로람부실, 플리카마이신, 다카바진, 이포스파미드 포스페이트, 사이클로포스파미드, 니트로젠 무스타드, 우라실 무스타드, 피포브로만, 4-이포미놀, 디하이드로렌페론, 스피로무스틴, 겔데나마이신, 사이토칼라신스, 뎁시펩타이드, 루프로리드(예; 루프론), 케토코나졸, 타목시펜, 고세레린(예; 조라덱스), 플루타미드, 4'-사이아노-3-(4-플루오로페닐설포닐)-2-하이드록시-2-메틸-3'(트리플루오로메틸)프로피오나니리드, 항-Her2/neu 항체(예; 헤르셉틴), 항-CD20 항체(예; 리투산), 인터페론 알파, 인터페론 베타, 인터페론 감마, 인터루킨 2, 인터루킨 4, 인터루킨 12, 종양괴사인자 및 방사선을 포함한다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 하기 기술된 것으로부터 선택된다. 세포독성 제제는 파클리탁셀, 빈크리스틴, 빈블래스틴, 빈데신, 빈노렐빈, 택소티어(예; 도세택셀), 캄프토테신, 토포테칸, 이리노테칸 하이드로클로라이드(예; 캄프토사르), 독소루비신, 에토포시드, 미톡산트론, 다우노루비신, 이다루비신, 테니포시드, 암사크린, 에피루비신, 메르바론, 피로잔트론 하이드로클로라이드, 5-플루오로우라실, 메토트렉세이트, 6-머캡토퓨린, 6-티오구아닌, 플루다라빈 포스페이트, 시타라빈(Ara-C), 트리메트렉세이트, 겜시타빈, 아시비신, 아라노신, 피라조푸린, N-포스포아세틸-L-아스파레이트(PALA), 펜토스태틴, 5-아자시티딘, 5-아자-2-디옥시시티딘, 아데노신 아라비노시드(Ara-A), 크라드리빈, 프토라푸르, UFT(우라실 및 프토라푸르의 조합), 5-플루오로-2'-디옥시우리딘, 5-플루오로우리딘, 5'-디옥시-5-플루오로우리딘, 하이드록시우레아, 디하이드로렌클로람부실, 티아조푸린, 시스플라틴, 카르보플라틴, 옥살리플라틴, 마이토마이신 C, BCNU(예, 카르무스틴), 멜파란, 티오테파, 부설판, 클로람부실, 플리카마이신, 다카바진, 이포스파미드 포스페이트, 사이클로포스파미드, 니트로젠 무스타드, 우라실 무스타드, 피포브로만, 4-이포미놀, 디하이드로렌페론, 스피로무스틴, 겔데나마이신, 사이토칼라신스, 뎁시펩타이드, 루프로리드(예; 루프론), 케토코나졸, 타목시펜, 고세레린(예; 조라덱스), 플루타미드, 4'-사이아노-3-(4-플루오로페닐설포닐)-2-하이드록시-2-메틸-3'(트리플루오로메틸)프로피오나니리드, 항-Her2/neu 항체(예; 헤르셉틴), 항-CD20 항체(예; 리투산), 인터페론 알파, 인터페론 베타, 인터페론 감마, 인터루킨 2, 인터루킨 4, 인터루킨 12 및 방사선을 포함한다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 하기 기술된 것으로부터 선택된다. 세포독성 제제는 파클리탁셀, 빈크리스틴, 빈블래스틴, 빈데신, 빈노렐빈, 택소티어(예; 도세택셀), 캄프토테신, 토포테칸, 이리노테칸 하이드로클로라이드(예; 캄프토사르), 독소루비신, 에토포시드, 미톡산트론, 다우노루비신, 이다루비신, 테니포시드, 암사크린, 에피루비신, 메르바론, 피로잔트론 하이드로클로라이드, 5-플루오로우라실, 메토트렉세이트, 6-머캡토퓨린, 6-티오구아닌, 플루다라빈 포스페이트, 시타라빈(Ara-C), 트리메트렉세이트, 겜시타빈, 아시비신, 아라노신, 피라조푸린, N-포스포아세틸-L-아스파레이트(PALA), 펜토스태틴, 5-아자시티딘, 5-아자-2-디옥시시티딘, 아데노신 아라비노시드(Ara-A), 크라드리빈, 프토라푸르, UFT(우라실 및 프토라푸르의 조합), 5-플루오로-2'-디옥시우리딘, 5-플루오로우리딘, 5'-디옥시-5-플루오로우리딘, 하이드록시우레아, 디하이드로렌클로람부실, 티아조푸린, 시스플라틴, 카르보플라틴, 옥살리플라틴, 마이토마이신 C, BCNU(예, 카르무스틴), 멜파란, 티오테파, 부설판, 클로람부실, 플리카마이신, 다카바진, 이포스파미드 포스페이트, 사이클로포스파미드, 니트로젠 무스타드, 우라실 무스타드, 피포브로만, 4-이포미놀, 디하이드로렌페론, 스피로무스틴, 겔데나마이신, 사이토칼라신스, 뎁시펩타이드, 루프로리드(예; 루프론), 케토코나졸, 타목시펜, 고세레린(예; 조라덱스), 플루타미드, 4'-사이아노-3-(4-플루오로페닐설포닐)-2-하이드록시-2-메틸-3'(트리플루오로메틸)프로피오나니리드, 항-Her2/neu 항체(예; 헤르셉틴), 항-CD20 항체(예; 리투산), 인터페론 베타, 인터페론 감마, 인터루킨 2, 인터루킨 4, 인터루킨 12, 종양괴사인자 및 방사선을 포함한다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 하기 기술된 것으로부터 선택된다. 세포독성 제제는 파클리탁셀, 빈크리스틴, 빈블래스틴, 빈데신, 빈노렐빈, 택소티어(예; 도세택셀), 토포테칸, 이리노테칸 하이드로클로라이드(예; 캄프토사르), 독소루비신, 에토포시드, 미톡산트론, 다우노루비신, 이다루비신, 테니포시드, 암사크린, 에피루비신, 메르바론, 피로잔트론 하이드로클로라이드, 메토트렉세이트, 6-머캡토퓨린, 6-티오구아닌, 플루다라빈 포스페이트, 시타라빈(Ara-C), 트리메트렉세이트, 겜시타빈, 아시비신, 아라노신, 피라조푸린, N-포스포아세틸-L-아스파레이트(PALA), 펜토스태틴, 5-아자시티딘, 5-아자-2-디옥시시티딘, 아데노신 아라비노시드(Ara-A), 크라드리빈, 프토라푸르, UFT(우라실 및 프토라푸르의 조합), 5-플루오로-2'-디옥시우리딘, 5-플루오로우리딘, 5'-디옥시-5-플루오로우리딘, 하이드록시우레아, 디하이드로렌클로람부실, 티아조푸린, 카르보플라틴, 옥살리플라틴, 마이토마이신 C, BCNU(예, 카르무스틴), 멜파란, 티오테파, 부설판, 클로람부실, 플리카마이신, 다카바진, 이포스파미드 포스페이트, 사이클로포스파미드, 니트로젠 무스타드, 우라실 무스타드, 피포브로만, 4-이포미놀, 디하이드로렌페론, 스피로무스틴, 겔데나마이신, 사이토칼라신스, 뎁시펩타이드, 루프로리드(예; 루프론), 케토코나졸, 타목시펜, 고세레린(예; 조라덱스), 플루타미드, 4'-사이아노-3-(4-플루오로페닐설포닐)-2-하이드록시-2-메틸-3'(트리플루오로메틸)프로피오나니리드, 항-Her2/neu 항체(예; 헤르셉틴), 항-CD20 항체(예; 리투산), 인터페론 베타, 인터페론 감마, 인터루킨 2, 인터루킨 4, 인터루킨 12 및 방사선을 포함한다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 하기 기술된 것으로부터 선택된다. 세포독성 제제는 파클리탁셀, 빈크리스틴, 빈블래스틴, 빈데신, 빈노렐빈, 택소티어(예; 도세택셀), 독소루비신, 에토포시드, 미톡산트론, 다우노루비신, 이다루비신, 테니포시드, 암사크린, 에피루비신, 메르바론, 피로잔트론 하이드로클로라이드, 메토트렉세이트, 6-머캡토퓨린, 6-티오구아닌, 플루다라빈 포스페이트, 시타라빈(Ara-C), 트리메트렉세이트, 겜시타빈, 아시비신, 아라노신, 피라조푸린, N-포스포아세틸-L-아스파레이트(PALA), 펜토스태틴, 5-아자시티딘, 5-아자-2-디옥시시티딘, 아데노신 아라비노시드(Ara-A), 크라드리빈, 프토라푸르, UFT(우라실 및 프토라푸르의 조합), 5-플루오로-2'-디옥시우리딘, 5-플루오로우리딘, 5'-디옥시-5-플루오로우리딘, 하이드록시우레아, 디하이드로렌클로람부실, 티아조푸린, 시스플라틴, 카르보플라틴, 옥살리플라틴, 마이토마이신 C, BCNU(예, 카르무스틴), 멜파란, 티오테파, 부설판, 클로람부실, 플리카마이신, 다카바진, 이포스파미드 포스페이트, 사이클로포스파미드, 니트로젠 무스타드, 우라실 무스타드, 피포브로만, 4-이포미놀, 디하이드로렌페론, 스피로무스틴, 겔데나마이신, 사이토칼라신스, 뎁시펩타이드, 루프로리드(예; 루프론), 케토코나졸, 타목시펜, 고세레린(예; 조라덱스), 플루타미드, 4'-사이아노-3-(4-플루오로페닐설포닐)-2-하이드록시-2-메틸-3'(트리플루오로메틸)프로피오나니리드, 항-Her2/neu 항체(예; 헤르셉틴), 항-CD20 항체(예; 리투산), 인터페론 알파, 인터페론 베타, 인터페론 감마, 인터루킨 2, 인터루킨 4, 인터루킨 12, 종양괴사인자 및 방사선을 포함한다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 하기 기술된 것으로부터 선택된다. 세포독성 제제는 파클리탁셀, 빈크리스틴, 빈블래스틴, 빈데신, 빈노렐빈, 택소티어(예; 도세택셀), 캄프토테신, 토포테칸, 이리노테칸 하이드로클로라이드(예; 캄프토사르), 5-플루오로우라실, 메토트렉세이트, 6-머캡토퓨린, 6-티오구아닌, 플루다라빈 포스페이트, 시타라빈(Ara-C), 트리메트렉세이트, 겜시타빈, 아시비신, 아라노신, 피라조푸린, N-포스포아세틸-L-아스파레이트(PALA), 펜토스태틴, 5-아자시티딘, 5-아자-2-디옥시시티딘, 아데노신 아라비노시드(Ara-A), 크라드리빈, 프토라푸르, UFT(우라실 및 프토라푸르의 조합), 5-플루오로-2'-디옥시우리딘, 5-플루오로우리딘, 5'-디옥시-5-플루오로우리딘, 하이드록시우레아, 디하이드로렌클로람부실, 티아조푸린, 시스플라틴, 카르보플라틴, 옥살리플라틴, 마이토마이신 C, BCNU(예, 카르무스틴), 멜파란, 티오테파, 부설판, 클로람부실, 플리카마이신, 다카바진, 이포스파미드 포스페이트, 사이클로포스파미드, 니트로젠 무스타드, 우라실 무스타드, 피포브로만, 4-이포미놀, 디하이드로렌페론, 스피로무스틴, 겔데나마이신, 사이토칼라신스, 뎁시펩타이드, 루프로리드(예; 루프론), 케토코나졸, 타목시펜, 고세레린(예; 조라덱스), 플루타미드, 4'-사이아노-3-(4-플루오로페닐설포닐)-2-하이드록시-2-메틸-3'(트리플루오로메틸)프로피오나니리드, 항-Her2/neu 항체(예; 헤르셉틴), 항-CD20 항체(예; 리투산), 인터페론 알파, 인터페론 베타, 인터페론 감마, 인터루킨 2, 인터루킨 4, 인터루킨 12, 종양괴사인자 및 방사선을 포함한다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 하기 기술된 것으로부터 선택된다. 세포독성 제제는 파클리탁셀, 빈크리스틴, 빈블래스틴, 빈데신, 빈노렐빈, 택소티어(예; 도세택셀), 캄프토테신, 토포테칸, 이리노테칸 하이드로클로라이드(예; 캄프토사르), 독소루비신, 에토포시드, 미토잔트론, 다우노루비신, 이다루비신, 테니포시드, 암사크린, 에피루비신, 메르바론, 피로잔트론 하이드로클로라이드, 시스플라틴, 카르보플라틴, 옥살리플라틴, 마이토마이신 C, BCNU(예, 카르무스틴), 멜파란, 티오테파, 부설판, 클로람부실, 플리카마이신, 다카바진, 이포스파미드 포스페이트, 사이클로포스파미드, 니트로젠 무스타드, 우라실 무스타드, 피포브로만, 4-이포미놀, 디하이드로렌페론, 스피로무스틴, 겔데나마이신, 사이토칼라신스, 뎁시펩타이드, 루프로리드(예; 루프론), 케토코나졸, 타목시펜, 고세레린(예; 조라덱스), 플루타미드, 4'-사이아노-3-(4-플루오로페닐설포닐)-2-하이드록시-2-메틸-3'(트리플루오로메틸)프로피오나니리드, 항-Her2/neu 항체(예; 헤르셉틴), 항-CD20 항체(예; 리투산), 인터페론 알파, 인터페론 베타, 인터페론 감마, 인터루킨 2, 인터루킨 4, 인터루킨 12, 종양괴사인자 및 방사선을 포함한다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 하기 기술된 것으로부터 선택된다. 세포독성 제제는 파클리탁셀, 빈크리스틴, 빈블래스틴, 빈데신, 빈노렐빈, 택소티어(예; 도세택셀), 독소루비신, 에토포시드, 미톡산트론, 다우노루비신, 이다루비신, 테니포시드, 암사크린, 에피루비신, 메르바론, 피로잔트론 하이드로클로라이드, 5-플루오로우라실, 메토트렉세이트, 6-머캡토퓨린, 6-티오구아닌, 플루다라빈 포스페이트, 시타라빈(Ara-C), 트리메트렉세이트, 겜시타빈, 아시비신, 아라노신, 피라조푸린, N-포스포아세틸-L-아스파레이트(PALA), 펜토스태틴, 5-아자시티딘, 5-아자-2-디옥시시티딘, 아데노신 아라비노시드(Ara-A), 크라드리빈, 프토라푸르, UFT(우라실 및 프토라푸르의 조합), 5-플루오로-2'-디옥시우리딘, 5-플루오로우리딘, 5'-디옥시-5-플루오로우리딘, 하이드록시우레아, 디하이드로렌클로람부실, 티아조푸린, 스피로무스틴, 겔데나마이신, 사이토칼라신스, 뎁시펩타이드, 루프로리드(예; 루프론), 케토코나졸, 타목시펜, 고세레린(예; 조라덱스), 플루타미드, 4'-사이아노-3-(4-플루오로페닐설포닐)-2-하이드록시-2-메틸-3'(트리플루오로메틸)프로피오나니리드, 항-Her2/neu 항체(예; 헤르셉틴), 항-CD20 항체(예; 리투산), 인터페론 알파, 인터페론 베타, 인터페론 감마, 인터루킨 2, 인터루킨 4, 인터루킨 12, 종양괴사인자 및 방사선을 포함한다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 하기 기술된 것으로부터 선택된다. 세포독성 제제는 파클리탁셀, 빈크리스틴, 빈블래스틴, 빈데신, 빈노렐빈, 택소티어(예; 도세택셀), 캄프토테신, 토포테칸, 이리노테칸 하이드로클로라이드(예; 캄프토사르), 독소루비신, 에토포시드, 미톡산트론, 다우노루비신, 이다루비신, 테니포시드, 암사크린, 에피루비신, 메르바론, 피로잔트론 하이드로클로라이드, 5-플루오로우라실, 메토트렉세이트, 6-머캡토퓨린, 6-티오구아닌, 플루다라빈 포스페이트, 시타라빈(Ara-C), 트리메트렉세이트, 겜시타빈, 아시비신, 아라노신, 피라조푸린, N-포스포아세틸-L-아스파레이트(PALA), 펜토스태틴, 5-아자시티딘, 5-아자-2-디옥시시티딘, 아데노신 아라비노시드(Ara-A), 크라드리빈, 프토라푸르, UFT(우라실 및 프토라푸르의 조합), 5-플루오로-2'-디옥시우리딘, 5-플루오로우리딘, 5'-디옥시-5-플루오로우리딘, 하이드록시우레아, 디하이드로렌클로람부실, 티아조푸린, 시스플라틴, 카르보플라틴, 옥살리플라틴, 마이토마이신 C, BCNU(예, 카르무스틴), 멜파란, 티오테파, 부설판, 클로람부실, 플리카마이신, 다카바진, 이포스파미드 포스페이트, 사이클로포스파미드, 니트로젠 무스타드, 우라실 무스타드, 피포브로만, 4-이포미놀, 디하이드로렌페론, 스피로무스틴, 겔데나마이신, 사이토칼라신스, 뎁시펩타이드, 루프로리드(예; 루프론), 케토코나졸, 타목시펜, 고세레린(예; 조라덱스), 플루타미드, 4'-사이아노-3-(4-플루오로페닐설포닐)-2-하이드록시-2-메틸-3'(트리플루오로메틸)프로피오나니리드, 항-Her2/neu 항체(예; 헤르셉틴), 항-CD20 항체(예; 리투산), 인터루킨 2, 인터루킨 4, 인터루킨 12, 종양괴사인자 및 방사선을 포함한다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 하기 기술된 것으로부터 선택된다. 세포독성 제제는 파클리탁셀, 빈크리스틴, 빈블래스틴, 빈데신, 빈노렐빈, 택소티어(예; 도세택셀), 스피로무스틴, 겔데나마이신, 사이토칼라신스, 뎁시펩타이드, 루프로리드(예; 루프론), 케토코나졸, 타목시펜, 고세레린(예; 조라덱스), 플루타미드, 4'-사이아노-3-(4-플루오로페닐설포닐)-2-하이드록시-2-메틸-3'(트리플루오로메틸)프로피오나니리드, 항-Her2/neu 항체(예; 헤르셉틴), 항-CD20 항체(예; 리투산), 인터루킨 2, 인터루킨 4, 인터루킨 12 및 방사선을 포함한다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 파클리탁셀, 인터페론 알파, 겜시타빈, 플루다라빈, 이리노테칸, 카르보플라틴, 시스플라틴, 택소티어, 독소루비신, 에피루비신, 5-플루오로우라실, UFT, 타목시펜, 고세렐린, 케토코나졸, 항-Her2/neu 항체(예; 헤르셉틴), 항-CD-20, 루프로이드(예; 루프론) 및 플루타미드이다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 파클리탁셀, 겜시타빈, 플루다라빈, 이리노테칸, 카르보플라틴, 시스플라틴, 택소티어, 독소루비신, 에피루비신, 5-플루오로우라실, UFT, 타목시펜, 고세렐린, 케토코나졸, 항-Her2/neu 항체(예; 헤르셉틴), 항-CD20 항체, 루프로이드(예; 루프론) 및 플루타미드이다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 파클리탁셀, 인터페론 알파, 겜시타빈, 플루다라빈, 이리노테칸, 카르보플라틴, 택소티어, 독소루비신, 에피루비신, 5-플루오로우라실, UFT, 타목시펜, 고세렐린, 케토코나졸, 항-Her2/neu 항체(예; 헤르셉틴), 항-CD20 항체, 루프로리드(예; 루프론) 및 플루타미드이다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 파클리탁셀, 인터페론 알파, 겜시타빈, 플루다라빈, 이리노테칸, 카르보플라틴, 시스플라틴, 택소티어, 에피루비신, 5-플루오로우라실, UFT, 타목시펜, 고세렐린, 케토코나졸, 항-Her2/neu 항체(예; 헤르셉틴), 항-CD-20, 루프로리드(예; 루프론) 및 플루타미드이다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 파클리탁셀, 인터페론 알파, 겜시타빈, 플루다라빈, 이리노테칸, 카르보플라틴, 시스플라틴, 택소티어, 독소루비 신, 에피루비신, UFT, 타목시펜, 고세렐린, 케토코나졸, 항-Her2/neu 항체(예; 헤르셉틴), 항-CD-20, 루프로리드(예; 루프론) 및 플루타미드이다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 파클리탁셀, 인터페론 알파, 겜시타빈, 플루다라빈, 이리노테칸, 카르보플라틴, 시스플라틴, 택소티어, 5-플루오로우라실, UFT, 타목시펜, 고세렐린, 케토코나졸, 항-Her2/neu 항체(예; 헤르셉틴), 항-CD-20, 루프로리드(예; 루프론) 및 플루타미드이다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 파클리탁셀, 인터페론 알파, 겜시타빈, 플루다라빈, 이리노테칸, 택소티어, 독소루비신, 에피루비신, 5-플루오로우라실, UFT, 타목시펜, 고세렐린, 케토코나졸, 항-Her2/neu 항체(예; 헤르셉틴), 항-CD-20, 루프로리드(예; 루프론) 및 플루타미드이다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 파클리탁셀, 인터페론 알파, 겜시타빈, 플루다라빈, 이리노테칸, 카르보플라틴, 시스플라틴, 택소티어, 독소루비신, 에피루비신, 타목시펜, 고세렐린, 케토코나졸, 항-Her2/neu 항체(예; 헤르셉틴), 항-CD-20, 루프로리드(예; 루프론) 및 플루타미드이다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 파클리탁셀, 겜시타빈, 플루다라빈, 이리노테칸, 택소티어, 타목시펜, 고세렐린, 케토코나졸, 항-Her2/neu 항체(예; 헤르셉틴), 항-CD-20, 루프로리드(예; 루프론) 및 플루타미드이다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 종래 화학요법에서 사용되던 양과 동일하거나 낮은 수치로 존재한다. 일예로, FGF 길항제를 파클리탁셀 및 카르보프라틴과 조합하는 경우, 파클리탁셀의 복용량은 225 ㎎/㎡ 이하이고, 카르보플 라틴의 양은 이전에 치료받은 적이 없는 환자들에 있어서는 6-7 ㎎/㎖·min 이하가 되고 이전에 화학요법을 받은 적이 있는 환자들에 있어서는 4-5 ㎎/㎖·min 이하의 전체 농도-시간 산물에 도달하도록 선택된다. 상기 치료는 매 3주마다 반복된다. 일예로, FGF 길항제를 에스트라무스틴 포스페이트 및 택소티어와 조합하는 경우, 에스트라므스틴의 1일 경구 투여량은 1400 ㎎ 이하이고 택소티어의 복용량은 1시간 동안 70 ㎎/㎡ 이하이다. 상기 치료는 매 3주마다 반복된다. 일예로, FGF 길항제를 독소루비신 및 케토코나졸과 조합하는 경우, 독소루비신의 1주 복용량은 24시간 동안의 주입으로 20 ㎎/㎡ 이하이고 케토코나졸의 총 1일 경구 투여량은 1200 ㎎ 이하이다. 일예로, FGF 길항제를 사이클로포스파미드, 독소루비신 및 5-플루오로우라실과 조합하는 경우, 정맥내 사이클로포스파미드의 복용량은 500 ㎎/㎡ 이하이고, 독소루비신의 복용량은 50 ㎎/㎡ 이하이고, 5-플루오로우라실의 복용량은 500 ㎎/㎡ 이하이다. 상기 치료는 매 4주마다 반복된다(독소루비신 및 사이클로포스파미드의 복용량은 매 4주마다 매번 투여되는 반면, 5-플루오로우라실의 복용량은 첫 2주간만 매주 투여된다). 일예로, FGF 길항제를 헤르셉틴 및 시스플라틴과 조합하는 경우, 헤르셉틴 복용량은 0 일에는 250 ㎎ 이하이고, 이후 9주간은 100 ㎎ 이하이고, 시스플라틴은 1, 29, 57 일에 75 ㎎/㎡ 이하이다. 상기 치료 주기는 4주간 약을 복용한 뒤 2주간은 중단하는 형태이다. 일예로, FGF 길항제를 이리노테칸과 조합하는 경우, 이리노테칸의 복용량은 매 3주간 350 ㎎/㎡이다. 일예로, FGF 길항제를 5-플루오로우라실 및 루코보린과 조합하는 경우, 5일간의 5-플루오로우라실 정맥내 거환 복용량은 425 ㎎/㎡ 이하이다. 상기 치료 주기는 1주간 약을 복용한 뒤 4주간 끊는 형태이다. 일예로, FGF 길항제를 겜시타빈 및 시스플라틴과 조합하는 경우, 2일에 투여되는 단독 시스플라틴 복용량은 100 ㎎/㎡ 이하이다. 상기 치료는 매 4주마다 반복된다.

바람직한 실시예에서, 본 방법은 동일한 또는 상이한 세포독성 제제의 반복적인 투약 또한 포함한다.

바람직한 실시예에서, 본 방법은 동일한 또는 상이한 FGF 길항제의 반복적인 투약 또한 포함한다.

바람직한 실시예에서, 세포독성 제제 및 FGF 길항제는 동시에 또는 중복되는 시간에 투여된다; 제제 및 FGF 길항제는 다른 시간에 투여된다; 제제가 먼저 투여되고 이어서 FGF 길항제가 투여된다, FGF 길항제가 먼저 투여되고 이어서 제제가 투여된다.

바람직한 실시예에서, 세포독성 제제는 전신 또는 국부 투여된다. 일예로, 제제는 비경구, 즉 피하, 정맥내, 근육내, 복강내, 피내, 초내 또는 비뇨방광처럼 방광내 또는 전립선내, 입, 비측, 직장, 국소적, 경피적으로 투여될 수 있다.

바람직한 실시예에서, FGF 길항제는 전신 또는 국부 투여된다. 일예로, FGF 길항제는 비경구, 즉 피하, 정맥내, 근육내, 복강내, 피내, 초내 또는 비뇨방광처럼 방광내 또는 전립선내, 입, 비측, 직장, 국소, 경피적으로 투여될 수 있다.

바람직한 실시예에서, 상기 설명되는 본 방법은 치료 전 또는 치료 중 대상의 a-FGF 또는 b-FGF 등의 FGF 수준을 모니터하는 것 또한 포함한다. 바람직하게는, 대상에 투여되는 FGF 길항제의 양은 대상에 현존하는 FGF 수준을 기준으로 결 정된다. 즉, 대상 내에 FGF 농도가 낮으면 FGF가 조절하는 화학저항성을 극복하기 위해 요구되는 FGF 길항제의 복용량이 감소한다.

다른 관점에서, 본 발명은 세포사를 저해하거나 분열 세포, 바람직하게는 빠르게 분열하는 세포의 분열 능력을 보호하여 세포를 치료하는 방법, 즉 대상 내에서 빠르게 분열하는 세포를 죽음, 세포독성 제제 및 세포사의 원인이 되는 제제 등의 세포독성 제제에 의한 성장 및 분열 저해 또는 다른 손상 중 하나 또는 그 이상으로부터 보호하는 방법을 제시한다. 본 방법은 대상에 최소 한 개의 FGF 작용제를 효과적인 양으로 투여하여 상기 세포독성 제제로부터 분열 세포의 손상을 보호 또는 감소시킴으로써 세포를 치료하는 것을 포함한다.

바람직한 실시예에서, 세포는 위장 또는 식도관과 같이 신체 표면 또는 공동(cavity)에 있는 세포, 모낭세포, 조혈간세포와 같은 조혈세포이다.

바람직한 실시예에서, 세포는 위장관 또는 식도관의 라이닝의 한 부분이다.

바람직한 실시예에서, 본 방법은 머리 숱의 감소를 저해하고, 무게의 감소를 저해하고, 위장 기능의 감소를 저해하고, 혈액생성 감소를 저해한다.

바람직한 실시예에서, 본 방법은 세포독성 제제 및 세포사의 원인이 되는 제제와 같은 세포독성 제제, 즉 항증식 제제, 항암제, 방사선, 인터페론, 인터루킨, 종양 괴사 요인을 상기 대상에 최소 한 개 투여하는 것 또한 포함한다.

바람직한 실시예에서, 세포독성 제제는 방사선과는 다른, 투여된 화합물이다.

바람직한 실시예에서, 세포독성 제제는 항대사물 제제와는 다른 화합물이다.

바람직한 실시예에서, FGF 작용제는 입 또는 국부 즉, 국소 또는 생체외 투여된다. 일예로, FGF 작용제는 모낭을 치료하기 위해서 국소 적용될 수 있다. 다른 실시예들에서 골수 세포와 같은 세포는 생체에서 치료될 수 있다.

바람직한 실시예에서, FGF 작용제는 위장관, 골수, 피부 등의 부위에 국소적으로 투여된다.

바람직한 실시예에서, FGF 작용제는 골수 안으로 직접 주입된다.

바람직한 실시예에서, FGF 작용제는 국소, 즉 외부에서 머리 가죽까지 적용된다.

바람직한 실시예에서, FGF 작용제의 적용이 전신 순환으로의 현저한 흡수 및 대상 내의 종양의 분열을 증가시키기에 충분한 혈액 또는 혈장 농도를 낳지는 않는다.

바람직한 실시예에서, FGF 작용제는 현저한 전신 투여 또는 FGF 작용제의 현저한 전신 수준, 즉 종양의 화학저항성을 촉진하는 FGF 작용제 혈액 수준의 증가 등의 결과를 초래하지 않는 방법으로 대상에 투여된다. 전신 투여 또는 FGF 작용제의 수준은 그것이 대상에 투여되기 전후의 혈액 내 FGF 작용제의 수준을 결정함으로써 판단할 수 있다. 그 뒤, 상기 두 수준은 생체 밖에서 실험되어 종양에 대항하는 세포독성 제제의 조정을 받는 항종양 효과에 대한 그들의 효과를 비교할 수 있다. 바람직하게는, 투여 후, FGF 작용제의 혈액 수준을 대상에 FGF 작용제를 투여하기 이전의 FGF 작용제 혈액 수준에 존재하는 세포독성 제제의 IC50과 비교했을 때, 세포독성 제제의 IC50은 30% 이하, 더 바람직하게는 20% 이하, 더 바람직하게 는 10% 이하, 더 바람직하게는 5% 이하, 그리고 가장 바람직하게는 1% 이하로 증가하여야 한다. 배양된 세포에서의 효과는 예15에 설명되어 있는 시스템을 사용하여 결정할 수 있다.

바람직한 실시예에서, 대상은 포유 동물, 즉 인간이다. 즉, 대상은 암 환자와 같은 환자이다. 일예로, 대상은 작지 않은 종양을 지닌 폐암 환자로써, 파클리탁셀, 카르보플라틴 또는 수라민과 같은 FGF 길항제 중 둘 또는 그 이상의 조합 또는 겜시타빈, 시스플라틴 또는 수라민과 같은 FGF 길항제 중 둘 또는 그 이상의 조합으로 치료를 받는다. 일예로, 환자는 호르몬 불응 전립선암 암환자로써, 에스트라무스틴 포스페이트, 택소티어 또는 수라민과 같은 FGF 길항제 중 둘 또는 그 이상의 조합 또는 독소루비신, 케토코나졸 또는 수라민과 같은 FGF 길항제 중 둘 또는 그 이상의 조합으로 치료를 받는다. 일예로, 환자는 전이성 유방암 환자로써, 사이클로포스파미드, 독소루비신, 5-플루오로우라실 또는 수라민과 같은 FGF 길항제 중 둘 또는 그 이상의 조합으로 치료를 받는다. 일예로, 환자는 HER2/neu 종양유전자를 과다 표현하는 진행된 유방암 환자로써, 파클리탁셀 또는 시스플라틴을 포함하거나 포함하지 않는 헤르셉틴과 수라민으로 치료를 받는다. 일예로, 환자는 진행된 또는 전이성 결장직장암 환자로써, 이리노테칸 또는 수라민과 같은 FGF 길항제 중 하나 또는 그 이상으로 치료를 받는다. 일예로, 환자는 진행된 결장암 환자로써, 5-플루오로우라실, 루코보린 또는 수라민과 같은 FGF 길항제 중 둘 또는 그 이상의 조합으로 치료를 받는다.

바람직한 실시예에서, 상기 치료는 상기 세포독성 치료에서의 세포성색전, 세포사, 머리 숱 감소와 같은 세포독성 효과 등의 효과로부터 상기 세포를 보호한다.

바람직한 실시예에서, FGF 작용제는 bFGF, aFGF, bFGF 와 aFGF 또는 그것들의 절편이나 유사체로 이루어져있다. bFGF와 aFGF가 조합되었을 때, 이들은 부가적인 효과를 낸다. 바람직하게는, 이것은 상승 효과이다. FGF 작용제는 상기 세포독성 치료에서의 세포성색전(cytostasis), 세포사, 머리 숱 감소와 같은 세포독성 효과 등의 효과로부터 상기 세포를 보호하기에 충분한 농도에 도달하도록 투여된다. FGF 작용제의 투여는 상기 세포독성 치료 과정 동안 또는 세포독성 제제의 혈장 농도가 세포독성 효과를 내기에 충분하기 남아있는 동안 보호를 제공하기 위하여 반복될 수 있다.

바람직한 실시예에서, FGF 작용제가 투여되거나 FGF 작용제가 건강 유지에 도움이 되는 수준을 유지하는 시간, 즉 세포독성 제제의 세포독성 효과로부터 세포를 보호하기에 충분한 혈장 농도는180일 이하, 더 바람직하게는 90일 이하, 더 바람직하게는 60일 이하, 그리고 가장 바람직하게는 30일이다.

바람직한 실시예에서, FGF 작용제가 투여되거나 FGF 작용제가 건강 유지에 도움이 되는 수준을 유지하는 시간, 즉 세포독성 제제의 세포독성 효과로부터 세포를 보호하기에 충분한 혈장 농도는 세포독성 제제가 투여되거나 세포독성 제제가 건강 유지에 도움이 되는 수준을 유지하는 기간 보다 실제로 일찍 시작되지도 늦게 끝나지도 않는다.

바람직한 실시예에서, FGF 작용제가 투여되거나 FGF 작용제가 건강 유지에 도움이 되는 수준을 유지하는 시간, 즉 세포독성 제제의 세포독성 효과로부터 세포를 보호하기에 충분한 혈장 농도는 세포독성 제제가 투여된 최종일 또는 세포독성 제제가 건강 유지에 도움이 되는 수준을 유지하는 최종일로부터 180일 이하, 더 바람직하게는 90일 이하, 더 바람직하게는 60일 이하, 그리고 가장 바람직하게는 30일 이하 이후에 끝난다.

바람직한 실시예에서, FGF 작용제가 투여되거나 FGF 작용제가 건강 유지에 도움이 되는 수준을 유지하는 기간, 즉 세포독성 제제의 세포독성 효과로부터 세포를 보호하기에 충분한 혈장 농도는 세포독성 제제가 투여되는 첫 날 또는 세포독성 제제가 건강 유지에 도움이 되는 수준을 유지하기 시작하는 첫 날의 180일 이하, 더 바람직하게는 90일 이하, 더 바람직하게는 60일 이하, 그리고 가장 바람직하게는 30일 이하 전이다.

바람직한 실시예에서, FGF 작용제는 펩타이드 또는 작은 분자이다.

바람직한 실시예에서, FGF 작용제는 비단백질성이다.

바람직한 실시예에서, 본 발명에서 기재된 방법에 사용되는 세포독성 제제는 항마이크로튜불 제제, 토포아이소머라제 I 저해제, 토포아이소머라제 Ⅱ 저해제, 항대사물 제제, 분열저해제, 알킬화 제제, 삽입 제제, 신호 전달 경로를 방해할 수 있는 제제(예, 단백질 키나제 C 저해제, 항-호르몬, 성장 인자 수용체에 대한 항체), 아폽토시스 및/또는 세포괴사를 촉진하는 제제, 인터페론, 인터루킨, 종양괴사인자 및 방사선으로 구성된 군으로부터 선택되는 것이다.

바람직한 실시예에서, 본 발명에서 기재된 방법에 사용되는 세포독성 제제는 항마이크로튜불 제제, 토포아이소머라제 I 저해제, 토포아이소머라제 Ⅱ 저해제, 분열저해제, 알킬화 제제, 삽입 제제, 신호 전달 경로를 방해할 수 있는 제제(예, 단백질 키나제 C 저해제, 항-호르몬, 성장 인자 수용체에 대한 항체), 인터페론, 인터루킨, 종양괴사인자 및 방사선으로 구성된 군으로부터 선택되는 것이다.

바람직한 실시예에서, 본 발명에서 기재된 방법에 사용되는 세포독성 제제는 항마이크로튜불 제제, 토포아이소머라제 I 저해제, 토포아이소머라제 Ⅱ 저해제, 항대사물 제제, 분열저해제, 알킬화 제제, 삽입 제제, 신호 전달 경로를 방해할 수 있는 제제(예, 단백질 키나제 C 저해제, 항-호르몬, 성장 인자 수용체에 대한 항체), 인터페론, 인터루킨 및 종양괴사인자로 구성된 군으로부터 선택되는 것이다.

바람직한 실시예에서, 본 발명에서 기재된 방법에 사용되는 세포독성 제제는 항마이크로튜불 제제, 토포아이소머라제 I 저해제, 토포아이소머라제 Ⅱ 저해제, 분열저해제, 알킬화 제제, 삽입 제제, 신호 전달 경로를 방해할 수 있는 제제(예, 단백질 키나제 C 저해제, 항-호르몬, 성장 인자 수용체에 대한 항체), 인터페론, 인터루킨 및 종양괴사인자로 구성된 군으로부터 선택되는 것이다.

바람직한 실시예에서, 본 발명에서 기재된 방법에 사용되는 세포독성 제제는 하기 기술된 것으로부터 선택된다. 세포독성 제제는 파클리탁셀, 빈크리스틴, 빈블래스틴, 빈데신, 빈노렐빈, 택소티어(예; 도세택셀), 토포테칸, 캄프토테신, 이리노테칸 하이드로클로라이드(예; 캄프토사르), 독소루비신, 에토포시드, 미톡산트론, 다우노루비신, 이다루비신, 테니포시드, 암사크린, 에피루비신, 메르바론, 피로잔트론 하이드로클로라이드, 5-플루오로우라실, 메토트렉세이트, 6-머캡토퓨린, 6-티오구아닌, 플루다라빈 포스페이트, 트리메트렉세이트, 겜시타빈, 아시비신, 아라노신, 피라조푸린, N-포스포아세틸-L-아스파레이트(PALA), 펜토스태틴, 5-아자시티딘, 5-아자-2-디옥시시티딘, 아데노신 아라비노시드(Ara-A), 크라드리빈, 프토라푸르, UFT(우라실 및 프토라푸르의 조합), 5-플루오로-2'-디옥시우리딘, 5-플루오로우리딘, 5'-디옥시-5-플루오로우리딘, 하이드록시우레아, 디하이드로렌클로람부실, 티아조푸린, 카르보플라틴, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 마이토마이신 C, BCNU(예, 카르무스틴), 멜파란, 티오테파, 부설판, 클로람부실, 플리카마이신, 다카바진, 이포스파미드 포스페이트, 사이클로포스파미드, 니트로젠 무스타드, 우라실 무스타드, 피포브로만, 4-이포미놀, 디하이드로렌페론, 스피로무스틴, 겔데나마이신, 사이토칼라신스, 뎁시펩타이드, 루프로리드(예; 루프론), 케토코나졸, 타목시펜, 고세레린(예; 조라덱스), 플루타미드, 4'-사이아노-3-(4-플루오로페닐설포닐)-2-하이드록시-2-메틸-3'(트리플루오로메틸)프로피오나니리드, 항-Her2/neu 항체(예; 헤르셉틴), 항-CD20 항체(예; 리투산), 인터페론 알파, 인터페론 베타, 인터페론 감마, 인터루킨 2, 인터루킨 4, 인터루킨 12, 종양괴사인자 및 방사선을 포함한다.

바람직한 실시예에서, 본 발명에서 기재된 방법에 사용되는 세포독성 제제는 하기 기술된 것으로부터 선택된다. 세포독성 제제는 파클리탁셀, 빈크리스틴, 빈블래스틴, 빈데신, 빈노렐빈, 택소티어(예; 도세택셀), 토포테칸, 캄프토테신, 이리노테칸 하이드로클로라이드(예; 캄프토사르), 피라조푸린, 독소루비신, 에토포시드, 미톡산트론, 다우노루비신, 이다루비신, 테니포시드, 암사크린, 에피루비신, 메르바론, 피로잔트론 하이드로클로라이드, 5-플루오로우라실, 메토트렉세이트, 6-머캡토퓨린, 6-티오구아닌, 플루다라빈 포스페이트, 시타라빈(Arc-C), 트리메트렉세이트, 겜시타빈, 아시비신, 아라노신, 피라조푸린, N-포스포아세틸-L-아스파레이트(PALA), 펜토스태틴, 5-아자시티딘, 5-아자-2-디옥시시티딘, 아데노신 아라비노시드(Ara-A), 크라드리빈, 프토라푸르, UFT(우라실 및 프토라푸르의 조합), 5-플루오로-2'-디옥시우리딘, 5-플루오로우리딘, 5'-디옥시-5-플루오로우리딘, 하이드록시우레아, 디하이드로렌클로람부실, 티아조푸린, 카르보플라틴, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 마이토마이신 C, BCNU(예, 카르무스틴), 멜파란, 티오테파, 부설판, 클로람부실, 플리카마이신, 다카바진, 이포스파미드 포스페이트, 사이클로포스파미드, 니트로젠 무스타드, 우라실 무스타드, 피포브로만, 4-이포미놀, 디하이드로렌페론, 스피로무스틴, 겔데나마이신, 사이토칼라신스, 뎁시펩타이드, 루프로리드(예; 루프론), 케토코나졸, 타목시펜, 고세레린(예; 조라덱스), 플루타미드, 4'-사이아노-3-(4-플루오로페닐설포닐)-2-하이드록시-2-메틸-3'(트리플루오로메틸)프로피오나니리드, 항-Her2/neu 항체(예; 헤르셉틴), 항-CD20 항체(예; 리투산), 인터페론 알파, 인터페론 베타, 인터페론 감마, 인터루킨 2, 인터루킨 4, 인터루킨 12 및 종양괴사인자를 포함한다.

바람직한 실시예에서, 본 발명에서 기재된 방법에 사용되는 세포독성 제제는 하기 기술된 것으로부터 선택된다. 세포독성 제제는 파클리탁셀, 빈크리스틴, 빈블래스틴, 빈데신, 빈노렐빈, 택소티어(예; 도세택셀), 토포테칸, 캄프토테신, 이리노테칸 하이드로클로라이드(예; 캄프토사르), 독소루비신, 에토포시드, 미톡산트론, 다우노루비신, 이다루비신, 테니포시드, 암사크린, 에피루비신, 메르바론, 피로잔트론 하이드로클로라이드, 카르보플라틴, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 마이토마이신 C, BCNU(예, 카르무스틴), 멜파란, 티오테파, 부설판, 클로람부실, 플리카마이신, 다카바진, 이포스파미드 포스페이트, 사이클로포스파미드, 니트로젠 무스타드, 우라실 무스타드, 피포브로만, 4-이포미놀, 디하이드로렌페론, 스피로무스틴, 겔데나마이신, 사이토칼라신스, 뎁시펩타이드, 루프로리드(예; 루프론), 케토코나졸, 타목시펜, 고세레린(예; 조라덱스), 플루타미드, 4'-사이아노-3-(4-플루오로페닐설포닐)-2-하이드록시-2-메틸-3'(트리플루오로메틸)프로피오나니리드, 항-Her2/neu 항체(예; 헤르셉틴), 항-CD20 항체(예; 리투산), 인터페론 알파, 인터페론 베타, 인터페론 감마, 인터루킨 2, 인터루킨 4, 인터루킨 12, 종양괴사인자 및 방사선을 포함한다.

바람직한 실시예에서, 본 발명에서 기재된 방법에 사용되는 세포독성 제제는 하기 기술된 것으로부터 선택된다. 세포독성 제제는 파클리탁셀, 빈크리스틴, 빈블래스틴, 빈데신, 빈노렐빈, 택소티어(예; 도세택셀), 토포테칸, 캄프토테신, 이리노테칸 하이드로클로라이드(예; 캄프토사르), 독소루비신, 에토포시드, 미톡산트론, 다우노루비신, 이다루비신, 테니포시드, 암사크린, 에피루비신, 메르바론, 피로잔트론 하이드로클로라이드, 카르보플라틴, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 마이토마이신 C, BCNU(예, 카르무스틴), 멜파란, 티오테파, 부설판, 클로람부실, 플리카마이신, 다카바진, 이포스파미드 포스페이트, 사이클로포스파미드, 니트로젠 무스타드, 우라실 무스타드, 피포브로만, 4-이포미놀, 디하이드로렌페론, 스피로무스틴, 겔데나마이신, 사이토칼라신스, 뎁시펩타이드, 루프로리드(예; 루프론), 케토코나졸, 타목시펜, 고세레린(예; 조라덱스), 플루타미드, 4'-사이아노-3-(4-플루오로페닐설포닐)-2-하이드록시-2-메틸-3'(트리플루오로메틸)프로피오나니리드, 항-Her2/neu 항체(예; 헤르셉틴), 항-CD20 항체(예; 리투산), 인터페론 알파, 인터페론 베타, 인터페론 감마, 인터루킨 2, 인터루킨 4, 인터루킨 12 및 종양괴사인자를 포함한다.

바람직한 실시예에서, 세포독성 제제는 파클리탁셀, 인터페론 알파, 겜시타빈, 플루다라빈, 이리노테칸, 카르보플라틴, 시스플라틴, 택소티어, 독소루비신, 에피루비신, 5-플루오로우라실, UFT, 타목시펜, 고세레린, 케토코나졸, 항-Her2/neu 항체(예; 헤르셉틴), 항-CD20 항체, 루프로리드(루프론) 및 플루타미드이다.

또한, 본 발명은 하나 이상의 FGF 길항제, 하나 이상의 세포독성 제제(예; 세포활동 억제제, 예; 아폽토시스를 일으키는 제제) 및 약학적 허용 가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다. 여기서, 상기 FGF 길항제는 세포독성의 효과를 촉진시키고, 과증식세포의 증식을 감소 또는 저해하거나, 사멸을 촉진시킬 수 있는 양이 있다.

바람직한 실시예에서, 상기 약학적 조성물은 본 발명에서 기술한 방법을 실행할 수 있는 사용법을 포함한다.

바람직한 실시예에서, 상기 약학적 조성물은 bFGF의 저해제; aFGF의 저해제; 또는 bFGF 저해제 및 aFGF 저해제를 포함한다.

바람직한 실시예에서, 상기 FGF 길항제는 시험과 조건하에서 배양된 종양세 포에서 FGF(예; aFGF 및/또는 bFGF)에 의해 유도되는 항암제에 대한 저항성을 저해하거나 반대가 되게 한다. 배양 세포에서 효과의 결정은 실시예 15에서 기술한 시스템으로 결정되어진다.

바람직한 실시예에서, 상기 FGF 길항제는 세포독성 제제의 넓은 스펙트럼에 대한 종양세포의 저항성을 저해 또는 감소시킨다.

바람직한 실시예에서, 상기 FGF 길할제는 FGF 분자 또는 FGF 수용체와의 결합이 가능하고; FGF와 수용체와의 결합을 억제하고; FGF와 수용체와의 결합을 촉진하는 분자와 FGF와의 상호작용을 억제하고; FGF 수용체 활동을 낮추고; 단백질 또는 펩타이드이고; 항체(예 단일클론, 디아바디(diabody), 설치류 항체, 인간항체, 인간화 또는 키메라 항체, 또는 그들의 항원-결합 절편(예; Fab, F(ab')₂, Fv 또는 단일사슬 Fv 절편))이고; 잘려진 FGF 분자 또는 그들의 절편이다.

바람직한 실시예로, 상기 FGF 길항제는 세포외에서 작용한다(예; FGF 수용체의 세포외 도메인과 FGF 분자가 결합하는 것을 저해한다).

바람직한 실시예에서, 상기 FGF 길항제는 FGF 분자가 FGF 수용체의 세포내 도메인과의 결합을 방해하는 것 같이 세포내에서 작용한다.

바람직한 실시예에서, 상기 FGF 길항제는 FGF의 세포내 효과를 방해하는 것 같이 세포내에서 작용한다.

바람직한 실시예에서, 상기 FGF 길항제는 FGF 분자가 FGF 수용체에 결합하는 것을 방해하는 것 같이 세포외에서 작용한다.

바람직한 실시예에서, 상기 FGF 길항제는 수라민, 수라민의 구조 유사체, 항-FGF 항체, 항-FGF 수용체 항체, 펜토산 폴리설페이트(pentosan polysulfate), 스코포라민(scopolamine), 스코포라민(scopolamine), 앤지오스태틴(angiostatin), 스프라우티(sprouty), 에스트라디올(estradiol), 카복실메틸벤질아민 덱스트란(carboxymethylbenzylamine dextran, CMDB7), 스라디스타(suradista), 인슐린-유사 성장 인자 결합 단백질-3, 에탄올, 헤파린(예, 6-O-desulfated heparin), 저분자 헤파린, 헤파란 설페이트(heparan sulfate), 프로타민 설페이트(protamine sulfate), TGF-β(transforming growth factor beta), 사이크로스포린 A(cyclosporin A) 또는 bFGF에 대한 RNA 리간드로부터 선택된다.

바람직한 실시예에서, 상기 FGF 길항제는 수라민이다.

바람직한 실시예에서, 상기 FGF 길항제는 수용체에 대한 결합에 대해 FGF 분자와 경합하는 FGF 분자의 절편이다. FGF 길항제는 저분자이다.

바람직한 실시예에서, 상기 FGF 길항제는 작은 분자로, 조합 라이브러리(combinatorial library)로부터 선택된다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 항마이크로튜불 제제, 토포아이소머라제 I 저해제, 토포아이소머라제 Ⅱ 저해제, 항대사물 제제, 분열저해제, 알킬화 제제, 삽입 제제, 신호 전달 경로를 방해할 수 있는 제제(예, 단백질 키나제 C 저해제, 항-호르몬, 성장 인자 수용체에 대한 항체), 아폽토시스 및/또는 세포괴사를 촉진하는 제제, 인터페론, 인터루킨, 종양 괴사 인자 및 방사선으로 구성된 군으로부터 선택되는 것이다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 항마이크로튜불 제제, 토포아이소머라제 I 저해제, 항대사물 제제, 분열 저해제, 알킬화 제제, 삽입 제제, 신호 전달 경로를 방해할 수 있는 제제(예, 단백질 키나제 C 저해제, 항-호르몬, 성장 인자 수용체에 대한 항체), 인터페론, 인터루킨, 종양 괴사 인자 및 방사선으로 구성된 군으로부터 선택되는 것이다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 항마이크로튜불 제제, 토포아이소머라제 Ⅱ 저해제, 항대사물 제제, 분열 저해제, 알킬화 제제, 삽입 제제, 신호 전달 경로를 방해할 수 있는 제제(예, 단백질 키나제 C 저해제, 항-호르몬, 성장 인자 수용체에 대한 항체), 인터페론, 인터루킨, 종양 괴사 인자 및 방사선으로 구성된 군으로부터 선택되는 것이다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 항마이크로튜불 제제, 토포아이소머라제 I 저해제, 토포아이소머라제 Ⅱ 저해제, 분열 저해제, 알킬화 제제, 삽입 제제, 신호 전달 경로를 방해할 수 있는 제제(예, 단백질 키나제 C 저해제, 항-호르몬, 성장 인자 수용체에 대한 항체), 인터페론, 인터루킨, 종양 괴사 인자 및 방사선으로 구성된 군으로부터 선택되는 것이다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 항마이크로튜불 제제, 토포아이소머라제 I 저해제, 토포아이소머라제 Ⅱ 저해제, 항대사물 제제, 분열 저해제, 신호 전달 경로를 방해할 수 있는 제제(예, 단백질 키나제 C 저해제, 항-호르몬, 성장 인자 수용체에 대한 항체), 인터페론, 인터루킨, 종양 괴사 인자 및 방사선으로 구성된 군으로부터 선택되는 것이다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 항마이크로튜불 제제, 토포아이소머라제 I 저해제, 토포아이소머라제 Ⅱ 저해제, 항대사물 제제, 분열 저해제, 알킬화 제제, 삽입 제제, 신호 전달 경로를 방해할 수 있는 제제(예, 단백질 키나제 C 저해제, 항-호르몬, 성장 인자 수용체에 대한 항체), 인터루킨, 종양 괴사 인자 및 방사선으로 구성된 군으로부터 선택되는 것이다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 하기 기술된 것으로부터 선택된다. 세포독성 제제는 파클리탁셀, 빈크리스틴, 빈블래스틴, 빈데신, 빈노렐빈, 택소티어(예; 도세택셀), 캄프토테신, 토포테칸, 이리노테칸 하이드로클로라이드(예; 캄프토사르), 독소루비신, 에토포시드, 미톡산트론, 다우노루비신, 이다루비신, 테니포시드), 암사크린, 에피루비신, 메르바론, 피로잔트론 하이드로클로라이드, 5-플루오로우라실, 메토트렉세이트, 6-머캡토퓨린, 6-티오구아닌, 플루다라빈 포스페이트, 시타라빈, 트리메트렉세이트, 겜시타빈, 아시비신, 아라노신, 피라조푸린, N-포스포아세틸-L-아스파레이트PALA), 펜토스태틴, 5-아자시티딘, 5-아자-2-디옥시시티딘, 아데노신 아라비노시드(Ara-A), 크라드리빈, 프토라푸르, UFT(conbination of uracil and ftorafur), 5-플루오로-2'-디옥시우리딘, 5-플루오로우리딘, 5'-디옥시-5-플루오로우리딘, 하이드록시우레아, 디하이드로렌클로람부실, 티아조푸린, 시스플라틴, 카르보플라틴, 옥살리플라틴, 마이토마이신 C, BCNU(예, 카르무스틴), 멜파란, 티오테파, 부설판, 클로람부실, 플리카마이신, 다카바진, 이포스파미드 포스페이트, 사이클로포스파미드, 니트로젠 무스타드, 우라실 무스타드, 피포브로만, 4-이포미놀, 디하이드로렌페론, 스피로무스틴, 겔데나마이신, 사이토칼라신스, 뎁시펩타이드, 루프로리드(예; 루프론), 케토코나졸), 타목시펜), 고세레린(예; 조라덱스(Zoladex)), 플루타미드, 4'-사이아노-3-(4-플루오로페닐설포닐)-2-하이드록시-2-메틸-3'(트리플루오로메틸)프로피오나니리드, 항-Her2/neu 항체(예; 헤르셉틴), 항-CD20 항체(예; 리투산), 인터페론 알파, 인터페론 베타, 인터페론 감마, 인터루킨 2, 인터루킨 4, 인터루킨 12, 종양 괴사 인자 및 방사선을 포함한다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 하기 기술된 것으로부터 선택된다. 세포독성 제제는 파클리탁셀, 빈크리스틴, 빈블래스틴, 빈데신, 빈노렐빈, 택소티어(예; 도세택셀), 토포테칸, 이리노테칸 하이드로클로라이드(예; 캄프토사르), 독소루비신, 에토포시드, 미톡산트론, 다우노루비신, 이다루비신, 테니포시드, 암사크린, 에피루비신, 메르바론, 피로잔트론 하이드로클로라이드, 5-플루오로우라실, 메토트렉세이트, 6-머캡토퓨린, 6-티오구아닌, 플루다라빈 포스페이트, 시타라빈(Ara-C), 트리메트렉세이트, 겜시타빈, 아시비신, 아라노신, 피라조푸린, N-포스포아세틸-L-아스파레이트(PALA), 펜토스태틴, 5-아자시티딘, 5-아자-2-디옥시시티딘, 아데노신 아라비노시드(Ara-A), 크라드리빈, 프토라푸르, UFT(conbination of uracil and ftorafur), 5-플루오로-2'-디옥시우리딘, 5-플루오로우리딘, 5'-디옥시-5-플루오로우리딘, 하이드록시우레아, 디하이드로렌클로람부실, 티아조푸린, 시스플라틴, 카르보플라틴, 옥살리플라틴, 마이토마이신 C, BCNU(예, 카르무스틴), 멜파란, 티오테파, 부설판, 클로람부실, 플리카마이신, 다카바진, 이포스파미드 포스페이트, 사이클로포스파미드, 니트로젠 무스타드, 우라실 무스타드, 피포브로만, 4-이포미놀, 디하이드로렌페론, 스피로무스틴, 겔데나마이신, 사이토칼라신스, 뎁시펩타이드, 루프로리드(예; 루프론), 케토코나졸, 타목시펜, 고세레린(예; 조라덱스), 플루타미드, 4'-사이아노-3-(4-플루오로페닐설포닐)-2-하이드록시-2-메틸-3'(트리플루오로메틸)프로피오나니리드, 항-Her2/neu 항체(예; 헤르셉틴), 항-CD20 항체(예; 리투산), 인터페론 알파, 인터페론 베타, 인터페론 감마, 인터루킨 2, 인터루킨 4, 인터루킨 12, 종양 괴사 인자 및 방사선을 포함한다.

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바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 하기 기술된 것으로부터 선택된다. 세포독성 제제는 파클리탁셀, 빈크리스틴, 빈블래스틴, 빈데신, 빈노렐빈, 택소티어(예; 도세택셀), 캄프토테신, 토포테칸, 이리노테칸 하이드로클로라이드(예; 캄프토사르), 5'-플루오로우라실, 메토트렉세이트, 6-머캡토퓨린, 6-티오구아닌, 플루다라빈 포스페이트, 시타라빈(Ara-C), 트리메트렉세이트, 겜시타빈, 아시비신, 아라노신, 피라조푸린, N-포스포아세틸-L-아스파레이트(PALA), 펜토스태틴, 5-아자시티딘, 5-아자-2-디옥시시티딘, 아데노신 아라비노시드(Ara-A), 크라드리빈, 프토라푸르, UFT(conbination of uracil and ftorafur), 5-플루오로-2'-디옥시우리딘, 5-플루오로우리딘, 5'-디옥시-5-플루오로우리딘, 하이드록시우레아, 디하이드로렌클로람부실, 티아조푸린, 시스플라틴, 카르보플라틴, 옥살리플라틴, 마이토마이신 C, BCNU(예, 카르무스틴), 멜파란, 티오테파, 부설판, 클로람부실, 플리카마이신, 다카바진, 이포스파미드 포스페이트, 사이클로포스파미드, 니트로젠 무스타드, 우라실 무스타드, 피포브로만, 4-이포미놀, 디하이드로렌페론, 스피로무스틴, 겔데나마이신, 사이토칼라신스, 뎁시펩타이드, 루프로리드(예; 루프론), 케토코나졸, 타목시펜, 고세레린(예; 조라덱스), 플루타미드, 4'-사이아노-3-(4-플루오로페닐설포닐)-2-하이드록시-2-메틸-3'(트리플루오로메틸)프로피오나니리드, 항-Her2/neu 항체(예; 헤르셉틴), 항-CD20 항체(예; 리투산), 인터페론 알파, 인터페론 베타, 인터페론 감마, 인터루킨 2, 인터루킨 4, 인터루킨 12, 종양 괴사 인자 및 방사선을 포함한다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 하기 기술된 것으로부터 선택된다. 세포독성 제제는 파클리탁셀, 빈크리스틴, 빈블래스틴, 빈데신, 빈노렐빈, 택소티어(예; 도세택셀), 캄프토테신, 토포테칸, 이리노테칸 하이드로클로라이드(예; 캄프토사르), 독소루비신, 에토포시드, 미톡산트론, 다우노루비신, 이다루비신, 테니포시드, 암사크린, 에피루비신, 메르바론, 피로잔트론 하이드로클로라이드, 5'-플루오로우라실, 메토트렉세이트, 6-머캡토퓨린, 6-티오구아닌, 플루다라빈 포스페이트, 시타라빈(Ara-C), 트리메트렉세이트, 겜시타빈, 아시비신, 아라노신, 피라조푸린, N-포스포아세틸-L-아스파레이트(PALA), 펜토스태틴, 5-아자시티딘, 5-아자-2-디옥시시티딘, 아데노신 아라비노시드(Ara-A), 크라드리빈, 프토라푸르, UFT(conbination of uracil and ftorafur), 5-플루오로-2'-디옥시우리딘, 5-플루오로우리딘, 5'-디옥시-5-플루오로우리딘, 하이드록시우레아, 디하이드로렌클로람부실, 티아조푸린, 스피로무스틴, 겔데나마이신, 사이토칼라신스, 뎁시펩타이드, 루프로리드(예; 루프론), 케토코나졸, 타목시펜, 고세레린(예; 조라덱스), 플루타미드, 4'-사이아노-3-(4-플루오로페닐설포닐)-2-하이드록시-2-메틸-3'(트리플루오로메틸)프로피오나니리드, 항-Her2/neu 항체(예; 헤르셉틴), 항-CD20 항체(예; 리투산), 인터페론 알파, 인터페론 베타, 인터페론 감마, 인터루킨 2, 인터루킨 4, 인터루킨 12, 종양 괴사 인자 및 방사선을 포함한다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 하기 기술된 것으로부터 선택된다. 세포독성 제제는 파클리탁셀, 빈크리스틴, 빈블래스틴, 빈데신, 빈노렐빈, 택소티어(예; 도세택셀), 캄프토테신, 토포테칸, 이리노테칸 하이드로클로라이드(예; 캄프토사르), 독소루비신, 에토포시드, 미톡산트론, 다우노루비신, 이다루비신, 테니포시드, 암사크린, 에피루비신, 메르바론, 피로잔트론 하이드로클로라이드, 5'-플루오로우라실, 메토트렉세이트, 6-머캡토퓨린, 6-티오구아닌, 플루다라빈 포스페이트, 시타라빈(Ara-C), 트리메트렉세이트, 겜시타빈, 아시비신, 아라노신, 피라조푸린, N-포스포아세틸-L-아스파레이트(PALA), 펜토스태틴, 5-아자시티딘, 5-아자-2-디옥시시티딘, 아데노신 아라비노시드(Ara-A), 크라드리빈, 프토라푸르, UFT(conbination of uracil and ftorafur), 5-플루오로-2'-디옥시우리딘, 5-플루오로우리딘, 5'-디옥시-5-플루오로우리딘, 하이드록시우레아, 디하이드로렌클로람부실, 티아조푸린, 시스토플라틴, 카르보플라틴, 옥살리플라틴, 마이토마이신 C, BCNU(예, 카르무스틴), 멜파란, 티오테파, 부설판, 클로람부실, 플리카마이신, 다카바진, 이포스파미드 포스페이트, 사이클로포스파미드, 니트로젠 무스타드, 우라실 무스타드, 피포브로만, 4-이포미놀, 디하이드로렌페론, 스피로무스틴, 겔데나마이신, 사이토칼라신스, 뎁시펩타이드, 루프로리드(예; 루프론), 케토코나졸, 타목시펜, 고세레린(예; 조라덱스), 플루타미드, 4'-사이아노-3-(4-플루오로페닐설포닐)-2-하이드록시-2-메틸-3'(트리플루오로메틸)프로피오나니리드, 항-Her2/neu 항체(예; 헤르셉틴), 항-CD20 항체(예; 리투산), 인터페론 알파, 인터페론 베타, 인터페론 감마, 인터루킨 2, 인터루킨 4, 인터루킨 12 및 방사선을 포함한다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 하기 기술된 것으로부터 선택된다. 세포독성 제제는 파클리탁셀, 빈크리스틴, 빈블래스틴, 빈데신, 빈노렐빈, 택소티어(예; 도세택셀), 캄프토테신, 토포테칸, 이리노테칸 하이드로클로라이드(예; 캄프토사르), 독소루비신, 에토포시드, 미톡산트론, 다우노루비신, 이다루비신, 테니포시드, 암사크린, 에피루비신, 메르바론, 피로잔트론 하이드로클로라이드, 5'-플루오로우라실, 메토트렉세이트, 6-머캡토퓨린, 6-티오구아닌, 플루다라빈 포스페이트, 시타라빈(Ara-C), 트리메트렉세이트, 겜시타빈, 아시비신, 아라노신, 피라조푸린, N-포스포아세틸-L-아스파레이트(PALA), 펜토스태틴, 5-아자시티딘, 5-아자-2-디옥시시티딘, 아데노신 아라비노시드(Ara-A), 크라드리빈, 프토라푸르, UFT(conbination of uracil and ftorafur), 5-플루오로-2'-디옥시우리딘, 5-플루오로우리딘, 5'-디옥시-5-플루오로우리딘, 하이드록시우레아, 디하이드로렌클로람부실, 티아조푸린, 시스토플라틴, 카르보플라틴, 옥살리플라틴, 마이토마이신 C, BCNU(예, 카르무스틴), 멜파란, 티오테파, 부설판, 클로람부실, 플리카마이신, 다카바진, 이포스파미드 포스페이트, 사이클로포스파미드, 니트로젠 무스타드, 우라실 무스타드, 피포브로만, 4-이포미놀, 디하이드로렌페론, 스피로무스틴, 겔데나마이신, 사이토칼라신스, 뎁시펩타이드, 루프로리드(예; 루프론), 케토코나졸, 타목시펜, 고세레린(예; 조라덱스), 플루타미드, 4'-사이아노-3-(4-플루오로페닐설포닐)-2-하이드록시-2-메틸-3'(트리플루오로메틸)프로피오나니리드, 항-Her2/neu 항체(예; 헤르셉틴), 항-CD20 항체(예; 리투산), 인터루킨 2, 인터루킨 4, 인터루킨 12, 종양 괴사 인자 및 방사선을 포함한다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 하기 기술된 것으로부터 선택된다. 세포독성 제제는 파클리탁셀, 빈크리스틴, 빈블래스틴, 빈데신, 빈노렐빈, 택소티어(예; 도세택셀), 스피로무스틴, 겔데나마이신, 사이토칼라신스, 뎁시펩타이드, 루프로리드(예; 루프론), 케토코나졸, 타목시펜, 고세레린(예; 조라덱스), 플루타미드, 4'-사이아노-3-(4-플루오로페닐설포닐)-2-하이드록시-2-메틸-3'(트리플루오로메틸)프로피오나니리드, 항-Her2/neu 항체(예; 헤르셉틴), 항-CD20 항체(예; 리투산), 인터페론 알파, 인터페론 베타, 인터페론 감마, 인터루킨 2, 인터루킨 4, 인터루킨 12 및 방사선을 포함한다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 파클리탁셀, 인터페론 알파, 겜시타빈, 플루다라빈, 이리노테칸, 카르보플라틴, 시스토플라틴, 택소티어, 독소루비신, 에피루비신, 5'-플루오로우라실, UFT, 타목시펜, 고세렐린, 케토코나졸, 항-Her2/neu 항체(예; 헤르셉틴), 항-CD20 항체 및 플루타미드이다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 파클리탁셀, 겜시타빈, 플루다라빈, 이리노테칸, 카르보플라틴, 시스토플라틴, 택소티어, 독소루비신, 에피루비신, 5'-플루오로우라실, UFT, 타목시펜, 고세렐린, 케토코나졸, 항-Her2/neu 항체(예; 헤르셉틴), 항-CD20 항체 및 플루타미드이다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 파클리탁셀, 인터페론 알파, 겜시타빈, 플루다라빈, 이리노테칸, 카르보플라틴, 택소티어, 독소루비신, 에피루비신, 5'-플루오로우라실, UFT, 타목시펜, 고세렐린, 케토코나졸, 항-Her2/neu 항체(예; 헤르셉틴), 항-CD20 항체, 루프로리드(예, 루프론) 및 플루타미드이다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 파클리탁셀, 인터페론 알파, 겜시타빈, 플루다라빈, 이리노테칸, 카르보플라틴, 시스토플라틴, 택소티어, 에피루비신, 5'-플루오로우라실, UFT, 타목시펜, 고세렐린, 케토코나졸, 항-Her2/neu 항체(예; 헤르셉틴), 항-CD20 항체, 루프로리드(예, 루프론) 및 플루타미드이다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 파클리탁셀, 인터페론 알파, 겜시타빈, 플루다라빈, 이리노테칸, 카르보플라틴, 시스토플라틴, 택소티어, 독소루비신, 에피루비신, UFT, 타목시펜, 고세렐린, 케토코나졸, 항-Her2/neu 항체(예; 헤르셉틴), 항-CD20 항체, 루프로리드(예, 루프론) 및 플루타미드이다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 파클리탁셀, 인터페론 알파, 겜시타빈, 플루다라빈, 이리노테칸, 카르보플라틴, 시스토플라틴, 택소티어, 5'-플루오로우라실, UFT, 타목시펜, 고세렐린, 케토코나졸, 항-Her2/neu 항체(예; 헤르셉틴), 항-CD20 항체, 루프로리드(예, 루프론) 및 플루타미드이다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 파클리탁셀, 인터페론 알파, 겜시타빈, 플루다라빈, 이리노테칸, 택소티어, 독소루비신, 에피루비신, 5'-플루오로우라실, UFT, 타목시펜, 고세렐린, 케토코나졸, 항-Her2/neu 항체(예; 헤르셉틴), 항-CD20 항체, 루프로리드(예, 루프론) 및 플루타미드이다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 파클리탁셀, 인터페론 알파, 겜시타빈, 플루다라빈, 이리노테칸, 카르보플라틴, 시스플라틴, 택소티어, 독소루비신, 에피루비신, 타목시펜, 고세렐린, 케토코나졸, 항-Her2/neu 항체(예; 헤르셉틴), 항-CD20 항체, 루프로리드(예, 루프론) 및 플루타미드이다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 파클리탁셀, 겜시타빈, 플루다라빈, 이리노테칸, 택소티어, 타목시펜, 고세렐린, 케토코나졸, 항-Her2/neu 항체(예; 헤르셉틴), 항-CD20 항체, 루프로리드(예, 루프론) 및 플루타미드이다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포독성 제제는 기존의 화학요법에서 사용한 것과 같은 양 또는 적은 양이 있다.

바람직한 실시예에서, 상기 과증식세포(hyperproliferative cell)는 암세포이다.

바람직한 실시예에서, 상기 과증식세포는 양성병변(benign lesion)에서 관찰된다.

바람직한 실시예에서, 상기 질환은 건선(psoriasis), 낭포(systs), 양성전립선과형성(benign prostatic hyperplasia) 및 자궁내막증(endometriosis)으로 구성되는 군으로부터 선택된다.

바람직한 실시예에서, 상기 질환은 양성 과형성 질환 군으로부터 선택된다. 양성 과형성 질환의 예로는 구강유두종, 입 또는 인두의 중앙거대세포육아종, 구 강의 양성백아질아세포증, 구강플라키아, 위폴립, 위선종, 소장선종, 소장육아종, 소장유두종, 소장종양세포종, 소장신경초종, 결장폴립, 결장선종, 크론병, 간선종, 간경변, 담당유두종증, 췌장선종, 췌장관증식, 신장종양세포증, 신장유두종, 방광선종, 방광말라코플라키아, 방광가육종, 자궁내막증, 양성전립선과형성, 음경의 홍색비후증, 외음문, 질 또는 경부의 폴립 및 유두종, 자궁내막폴립, 선종, 유두종, 레이미오마, 난소낭포, 유방의 섬유낭포성질환, 유방의 지방종, 경화성선증, 혈관종, 유방의 관과형성, 섬유선종, 선평활근상피종, 과오종, 피부의 모반, 유전성피부질환, 골섬유증, 섬유성이형성증, 연골발육부전, 경화성골이형성증, 축성골연화증, 불완전섬유원증, 골종, 골양골종, 골아세포종, 골연골종, 내연골종, 연골류점액섬유종, 연골아세포종, 활액지방종, 내분비기관의 선종, 갑상선종, 그레이브스병, 부신과형성, 부신선종), 부신 MEN I 증후군 및 부신골수지방종이 있다.

또한, 본 발명은 적어도 하나의 FGF 길항제를 포함하는 약학적 조성물 및 약학적 허용가능한 담체에 관한 것이다. 여기서 FGF 길항제는 상기 세포독성 제제로부터 세포, 예를 들어 빨리 분열하는 세포를 효과적으로 방어하는 즉, 손상을 줄일 수 있는 양을 포함한다.

바람직한 실시예에서, 약학적 조성물은 본 발명에서 기술한 방법을 실행할 수 있는 사용법을 포함한다.

바람직한 실시예에서, 상기 FGF 길항제는 bFGF; aFGF; 또는 bFGF 및 aFGF, 또는 그들의 절편 또는 유사체를 포함한다.

바람직한 실시예에서, 상기 FGF 길항제는 bFGF 또는 그들의 절편 또는 유사체를 포함한다.

바람직한 실시예에서, 상기 FGF 길항제는 펩타이드 또는 작은 분자이다.

바람직한 실시예에서, 상기 FGF 길항제는 비단백질성(nonproteinaceous)이다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포는 몸 표면 또는 공동(cavity)의 세포이다. 예를 들어, 위장관(gastrointestinal) 또는 식도관(esophageal tract), 털주머니(hair follicle) 세포, 조혈세포(hematopoietic cell) 예를 들어 조혈간세포(hematopoietic stem cell)이 있다.

바람직한 실시예에서, 상기 세포는 위장관 또는 식도관의 라이닝(lining)의 일부에 있다.

또한, 본 발명은 다른 세포독성 제제를 갖는 FGF 길항제/agonist의 조합된 투여를 수행하기 위한 키트에 관한 것이다. 실시예에서, 키트는 약학적 담체로 제형화된 FGF 길항제/agonist를 포함하고, 하나 또는 하나 이상의 다른 약학적 조제로 제형화된 세포독성 제제를 하나 이상 포함한다.

바람직한 실시예에서, 상기 키트는 본 발명에서 기술한 방법을 실행할 수 있는 사용법을 포함한다.

또한, 본 발명은 FGF 폴리펩타이드 또는 FGF 수용체-유래 폴리펩타이드 또는 FGF가 그의 수용체에 결합하는 것을 촉진하는 프로티오글리칸(proteoglycan)의 절편 및 약학적 허용 가능한 담체를 종양질환에 대한 피검자(subject)를 면역화시키기에 효과적인 양으로 포함하는 백신에 관한 것이다. 종양질환에 대한 면역화는 부분 또는 전체이다. 상기 백신은 암환자를 치료하기 위해서 또는 하나 또는 그이상의 종양질환: 종양질환의 발생, 종양질환의 recidivism 및/또는 종양질환의 물질대사를 방지하기 위하여 사용된다. 예를 들어, 상기 백신은 종양의 재발을 방지하기 위하여 암을 외과적으로 제거한 환자에게 투여할 수 있다.

바람직한 실시예에서, 상기 피검자는 동물, 예를 들면 인간이다.

바람직한 실시예에서, 상기 피검자는 암 환자가 아니다.

바람직한 실시예에서, 상기 피검자는 정상 조직의 양성 증식에 의해 생긴 병을 앓는 환자이다.

바람직한 실시예에서, 상기 피검자는 환자, 예를 들어 암 환자이다. 예를 들어, 피검자는 차도가 있는 환자일 수 있고, 또는 치료를 받고 있는 암 환자일 수 있다(예를 들어, 일반적 화학요법, 단일 또는 조합, 본 발명에서 기술한 방법). 예를 들어, 피검자는 비-소세포폐암을 앓고 있고, 파클리탁셀, 카르보플라틴 또는 FGF 길항제(예; 수라민)의 둘 또는 그 이상의 조합, 겜시파빈, 시스플라틴 또는 FGF 길항제(예; 수라민)의 둘 또는 둘 이상의 조합으로 치료하는 환자일 수 있다. 피 실험자는 호르몬 불응 전립선암을 앍고 있고, 에스트라무스틴 포스페이트, 택소티어 또는 FGF 길항제(예, 수라민)의 둘 또는 그 이상의 조합, 독소루비신, 케토코나졸 또는 FGF 길항제(예, 수라민)의 둘 또는 그 이상의 조합으로 치료하는 환자일 수 있다. 피검자는 전이유방암을 앓고 있고, 사이클로포스파미드, 독소루비신, 5'-플루오로우라실 또는 FGF 길항제(예, 수라민)의 둘 또는 그 이상의 조합, 독소루비신, 택소티어, FGF 길항제(예, 수라민)의 둘 또는 그 이상의 조합으로 치료하는 환자일 수 있다. 피검자는 HER2/neu 종양유전자를 과발현하는 진전된 유방암을 앓고 있고, HER2/neu 저해제(예; HER2/neu 항체) 및/또는 FGF 길항제(예; 수라민)으로 치료하고 있고, 파클리탁셀 또는 시스플라틴을 사용하거나 사용하지 않고 치료하는 환자일 수 있다. 피검자는 진전된 또는 전이된 결장직장암(colorectal cancer)을 앓고 있고, 이리노테칸 또는 FGF 길항제(수라민)의 하나 또는 그 이상으로 치료하는 환자일 수 있다. 피검자는 진전된 결장암을 앓고 있고, 5'-플루오로우라실, 루코보린 또는 FGF 길항제(수라민)의 하나 또는 그 이상으로 치료하는 환자일 수 있다. 피검자는 차도가 있으나 재발이 쉬운 암(예; 성인 백형병, 초기 전이 전립선암)을 앓고 있는 환자일 수 있다.

또한, 본 발명은 화합물의 효과(예; 증식 질환, 악성 질환과 같은 질환의 치료를 위한, 또는 세포독성 제제로부터 세포를 보호하기 위한)를 평가를 위한 방법에 관한 것이다. 상기 방법은

aFGF 또는 bFGF와 같은 FGF를 갖는 화합물과 접촉하는 단계; 및

질환의 치료의 효과와 관련된 저해 및 세포 보호와 관련된 촉진인 FGF 활성의 저해 또는 촉진을 위한 화합물의 능력을 평가하는 단계로 구성되어 있다.

바람직한 실시예에서, 상기 방법은 또한 세포를 죽이거나 혹은 세포 성장을 저해할 수 있는 제제(예; 항암제) 효력을 화합물이 조정(예; 증가)할 수 있는지 결정하는 테스트를 포함한다. 이것은 화합물 및 제제를 함께 또는 따로 테스트 세포 또는 개체에 투여하여 수행된다.

바람직한 실시예에서, 상기 방법은 FGF(예; bFGF 및/또는 aFGF)의 존재하에서 세포를 죽이거나 혹은 세포 성장을 저해할 수 있는 제제(예; 항암제) 효력을 화합물이 조정(예; 증가)할 수 있는지 결정하는 테스트를 포함한다. 이것은 화합물, 제제 및 FGF를 함께 또는 따로 테스트 세포 또는 개체에 투여하여 수행된다.

바람직한 실시예에서, 상기 방법은 세포를 죽이거나 혹은 세포 성장을 저해하는 제제(예; 세포독성 제제 또는 항암제)로부터 화합물이 세포를 보호할 수 있는지 결정하는 테스트를 포함한다. 이것은 화합물 및 제제를 함께 또는 따로 테스트 세포 또는 개체에 투여하여 수행된다.

바람직한 실시예에서 상기 방법은

세포(예; 배양된 세포, 형질전환된 세포, 암으로부터의 세포) 또는 테스트 개체를 제공하는 단계;

상기 화합물을 상기 세포(또는 테스트 개체)에 투여하고, FGF 활성, 세포 증식, 세포 사멸, 또는 종양 성장(예; 전이 종양 성장)을 특정하는 단계를 포함한다.

바람직한 실시예에서, 질환은 육종(sarcoma), 악성종양(carcinoma), 선암종(adenocarcinoma), 림프종(lymphoma) 또는 백혈병(leukemia)를 포함하는 암이다.

바람직한 실시예에서, 상기 질환은 전이 병변(metastatic lesion)을 포함하는 암이다.

바람직한 실시예에서, 상기 질환은 FGF 분자가 발현되는 세포(예; 전이 세포), 또는 aFGF, bFGF 및/또는 FGF-생산 세포 또는 조직에 접촉 또는 노출되어 있는 세포를 포함하는 암이다.

바람직한 실시예에서, 상기 질환은 유방, 전립선, 신장, 방광, 간, 폐, 림프절, 결장, 직장, 피부, 뇌, 췌장, 경부, 난소, 후두, 인두, 구강점막, 머리와 목 암, 혈액유래의 암 또는 림프시스템의 암의 조직으로부터 생긴 세포(예; 전이세포)를 포함하는 암을 포함한다.

바람직한 실시예에서, 상기 질환은 섬유육종(fibrosarcoma), 근육종(myosarcoma), 지방육종(liposarcoma), 연골육종(chondrosarcoma), 골원성육종(osteogenic sarcoma), 척삭종(chordoma), 맥관육종(angiosarcoma), 내피육종(endotheliosarcoma), 활막종(synovioma), 중피종(mesothelioma), 유윙종양(Ewing's tumor), 평활근육종(leiomyosarcoma), 횡문근육종(rhabdomyosarcoma), 위암(gastric cancer), 식도암(esophageal cancer), 결장종양(colon carcinoma), 직장암(rectal cancer), 췌장암(panreatic cancer), 유방암(breast cancer), 난소암(ovarian cancer), 전립선암(prostate cancer), 자궁암(uterine cancer), 머리와 목 암, 피부암(skin cancer), 뇌암(brain cancer), 인상세포종양(squamous cell carcinoma), 피지선종양(sebaceous gland carcinoma), 유두상종양(papillary carcinoma), 유두선종(papillary adenocarcinoma), 낭포선암(cystadenocarcinoma), 수질종양(medullary carcinoma), 기관지원성종양(bronchogenic carcinoma), 신장세포종양(renal cell carcinoma), 간암(hepatoma), 담즙선종양(bile duct carcinoma), 융모암(choriocarcinoma), 정상피종(seminoma), 태아종(embryonal carcinoma), 빌름스종양(Wilm's tumor), 자궁경부암(cervical cancer), 고환암(testicular cancer), 폐종양(lung carcinoma), 소세포폐종양(small cell lung carcinoma), 비소세포폐종양(non-small cell lung carcinoma), 방광종양(bladder carcinoma), 상피종(epithelial carcinoma), 신경교종(glioma), 성상세포종(astrocytoma), 수아세포종(medulloblastoma), 두개인두종(craniopharyngioma), 뇌실상의세포종(ependymoma), 송과체종(pinealoma), 혈관아세포종(hemangioblastoma), 청음신경종(acoustic neuroma), 회돌기교종(oligodendroglioma), 수악종(meningioma), 흑색종(melanoma), 신경아세포종(neuroblastoma), 망막아세포종(retinoblastoma), 백혈병(leukemia), 림프종(lymphoma) 또는 카포시육종(Kaposi sarcoma)와 같은 암이다.

바람직한 실시예로서, 상기 질환은 양성 과형성 질환(benign hyperplastic disease) 군으로부터 선택된다. 양성 과형성 질환의 예로는 구강유두종, 입 또는 인두의 중앙거대세포육아종, 구강의 양성백아질아세포증, 구강플라키아, 위폴립, 위선종, 소장선종, 소장육아종, 소장유두종, 소장종양세포종, 소장신경초종, 결장 폴립, 결장선종, 크론병, 간선종, 간경변, 담당유두종증, 췌장선종, 췌장관증식, 신장종양세포증, 신장유두종, 방광선종, 방광말라코플라키아, 방광가육종, 자궁내막증, 양성전립선과형성, 음경의 홍색비후증, 외음문, 질 또는 경부의 폴립 및 유두종, 자궁내막폴립, 선종, 유두종, 레이미오마, 난소낭포, 유방의 섬유낭포성질환, 유방의 지방종, 경화성선증, 혈관종, 유방의 관과형성, 섬유선종, 선평활근상피종, 과오종, 피부의 모반, 유전성피부질환, 골섬유증, 섬유성이형성증, 연골발육부전, 경화성골이형성증, 축성골연화증, 불완전섬유원증, 골종(osteomas), 골양골종, 골아세포종, 골연골종, 내연골종, 연골류점액섬유종, 연골아세포종, 활액지방종, 내분비기관의 선종, 갑상선종, 그레이브스병, 부신과형성, 부신선종, 부신 MEN I 증후군, 부신골수지방종이 있다.

바람직한 실시예로서, 상기 화합물은 단백질 또는 펩타이드이다.

바람직한 실시예로서, 상기 화합물은 소분자 같은 화학물이다(예; 조합 라이브러리의 요소).

바람직한 실시예로서, 상기 세포독성 제제는 항마이크로튜불 제제, 토포아이소머라제 I 저해제, 토포아이소머라제 Ⅱ 저해제, 항대사물 제제, 분열 저해제, 알킬화 제제, 삽입 제제, 신호 전달 경로를 방해할 수 있는 제제(예, 단백질 키나제 C 저해제, 항-호르몬, 성장 인자 수용체에 대한 항체), 아폽토시스 및/세포괴사를 촉진하는 제제, 인터페론, 인터루킨, 종양 괴사 인자 및 방사선으로 구성된 군으로부터 선택되는 것이다.

바람직한 실시예로서, 상기 세포독성 제제는 하기 기술된 것으로부터 선택된다. 세포독성 제제는 파클리탁셀, 빈크리스틴, 빈블래스틴, 빈데신, 빈노렐빈, 택소티어(예; 도세택셀), 토포테칸, 캄프토테신, 이리노테칸 하이드로클로라이드(예; 캄프토사르), 독소루비신, 에토포시드, 미톡산트론, 다우노루비신, 이다루비신, 테니포시드, 암사크린, 에피루비신, 메르바론, 피로잔트론 하이드로클로라이드, 5-플루오로우라실, 메토트렉세이트, 6-머캡토퓨린, 6-티오구아닌, 플루다라빈 포스페이트, 시타라빈(Ara-C), 트리메트렉세이트, 겜시타빈, 아시비신, 아라노신, 피라조푸린, N-포스포아세틸-L-아스파레이트(PALA), 펜토스태틴, 5-아자시티딘, 5-아자-2-디옥시시티딘, 아데노신 아라비노시드(Ara-A), 크라드리빈, 프토라푸르, UFT(conbination of uracil and ftorafur), 5-플루오로-2'-디옥시우리딘, 5-플루오로우리딘, 5'-디옥시-5-플루오로우리딘, 하이드록시우레아, 디하이드로렌클로람부실, 티아조푸린, 시스플라틴, 카르보플라틴, 옥살리플라틴, 마이토마이신 C, BCNU(예, 카르무스틴), 멜파란, 티오테파, 부설판, 클로람부실, 플리카마이신, 다카바진, 이포스파미드 포스페이트, 사이클로포스파미드, 니트로젠 무스타드, 우라실 무스타드, 피포브로만, 4-이포미놀, 디하이드로렌페론, 스피로무스틴, 겔데나마이신, 사이토칼라신스, 뎁시펩타이드, 루프로리드(예; 루프론), 케토코나졸, 타목시펜, 고세레린(예; 조라덱스), 플루타미드, 4'-사이아노-3-(4-플루오로페닐설포닐)-2-하이드록시-2-메틸-3'(트리플루오로메틸)프로피오나니리드, 헤르셉틴, 항-CD20 항체(예; 리투산), 인터페론 알파, 인터페론 베타, 인터페론 감마, 인터루킨 2, 인터루킨 4, 인터루킨 12, 종양 괴사 인자 및 방사선을 포함한다.

바람직한 실시예로, 상기 세포독성 제제는 파클리탁셀, 인터페론 알파, 겜시타빈, 플루다라빈, 이리노테칸, 카르보플라틴, 시스플라틴, 고세렐린, HER2/neu 항체(예; 헤르셉틴), 항-CD20 항체, 루프로리드(루프론) 및 플루타미드이다.

바람직한 실시예로, 상기 세포는 빨리 분열하는 세포, 위장관 세포, 털주머니 세포 또는 조혈세포(예; 조혈간세포)이다.

또한, 본 발명은 항암제에 대한 종양 저항의 수준을 측정하는 것과 같은 샘플을 분석하는 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 하나 또는 하나 이상의 FGF 유전자 또는 유전자 산물을 평가하는 것이다. 여기서 하나 또는 하나 이상의 FGF 유전자 또는 유전자 산물의 수준은 대조군과 상대적으로 증가 또는 감소한 것이고, 항암제에 대한 항암 저항성이 있다는 것을 나타낸다.

바람직한 실시예로서, 상기 샘플(예; 샘플은 피검자를 형성한다)은 원하지 않는 증식을 갖는 조직의 샘플이다. 예를 들면, 양성 과형성조직의 샘플, 일차종양의 샘플, 전이종양 또는 백혈병이 있다.

바람직한 실시예로서, 상기 FGF 유전자 또는 유전자 산물의 발현은 bFGF, aFGF, TSC22, VEGF, GAFA1, GAFA2, GAFA3(미국 가특허 출원번호 60/137,345에서는 FSC1, FSC2, FSC3으로 표기됨) 및 TFⅡ-I으로 구성된 군으로부터 선택되는 것이다.

바람직한 실시예로서, 포유동물로부터의 샘플, 인간 피검체로부터의 샘플; 암환자로부터의 샘플; 치료 의사 결정의 부분으로서; 타겟 FGF를 얻은 개체가 약물 또는 다른 치료를 받을 것인지 결정하기 위하여; 질환에 대한 또는 치료에 대한 저항에 대한 소인을 진단하기 위하여, 질환 또는 질환을 단계화하기 위하여, 상기 방 법을 수행한다.

바람직한 실시예로서, 상기 방법은 또한 예를 들어, 특정 항암 치료(예; FGF 발현의 수준에 기초한 특정 FGF 길항제 또는 그들의 투여량(dosage))와 같은 치료 모달리티(modality)를 선택하는 것을 포함한다.

몇가지 실시예로서, 세포 또는 샘플로부터의 핵산(또는 단백질)을 위치적 어레이(positional arrays, 예; DNA-칩 어레이)에서 분석된다. 따라서, 바람직한 실시예로서, 상기 방법은 또한:

포착 프로브의 복수의 어레이를 제공하여 샘플을 분석하는 단계; 여기서 포착 프로브 각각은 어레이에서 복수의 다른 포착 프로브와 위치적으로 구별되어 있고, 각각의 위치적으로 구별 가능한 포착 프로브는 독특한 시약(예; FGF 유전자 또는 유전자 산물을 밝힐 수 있는 항체 또는 핵산 프로브)을 포함한다.

포착 프로브의 어레이를 샘플로 혼성화하는 단계를 포함한다. 이 단계에서 샘플 서열을 분석한다.

또한, 방법은 피검체에서 질환(예; 증식 질환, 예; 양성과증식질환, 예; 악성질환)의 단계를 구분하는 방법을 포함한다. 상기 방법은:

상기 피검체로부터의 샘플(예; 암샘플, 예; 조직, 신체상의 유체, 예; 소변, 혈액 또는 CSF, 생검)을 제공하는 단계;

하나 또는 하나 이상의 FGF 유전자의 발현(예; 상기 암 샘플이 하나 또는 하나 이상의 FGF 유전자 산물을 선별적으로 혼성화하는 핵산 프로브와 접촉에 의해) 을 평가하는 단계;

여기서 상기 하나 또는 하나 이상의 FGF 유전자 또는 유전자 산물의 수준은 대조군과 비교하여 증가할 때, 이는 질환(예; 악성 질환)에서 한 단계라는 것을 나타낸다.

바람직한 실시예로, FGF 유전자 또는 유전자 산물은 bFGF, aFGF, TSC22, VEGF, GAFA1, GAFA2, GAFA3(미국 가특허 출원번호 60/137,345에서는 FSC1, FSC2, FSC3으로 표기됨) 및 TFⅡ-I으로 구성된 군으로부터 선택되는 것이다.

바람직한 실시예로, 포유동물로부터의 샘플, 인간 피검체로부터의 샘플(예; 양성 과형성 질환을 앓고 있는 환자의 샘플, 암환자로부터의 샘플)에서; 타겟 핵산 또는 단백질을 얻은 개체가 약물 또는 다른 치료를 받아야 하는지에 대한 결정; 질환에 대한 또는 치료에 대한 저항에 대한 소인을 진단하기 위하여, 질환 또는 질환을 단계화하기 위하여, 상기 방법을 수행한다.

바람직한 실시예로서, 상기 방법은 또한 예를 들어, FGF 발현의 수준에 기초한 특정 항암 치료와 같은 치료 모달리티(modality), 그의 투여량을 선택하는 것을 포함한다.

바람직한 실시예로서, FGF 유전자의 발현은 대조군 또는FGF 유전자 대조군 요소(예; 프로모터)에 의해 조절되는 신호 실체의 발현(예; 녹색 형광 단백질 또는 다른 마커 단백질)을 측정하여 평가한다.

몇가지 실시예에서, 세포 또는 샘플에서 핵산(또는 단백질)은 위치적 어레이(예; DNA-칩 어레이)에서 분석된다. 따라서, 바람직한 실시예로 상기 방법 은 또한,

또한, 본 발명은 피검체에서 질환(예; 증식 질환, 예; 악성 질환, 예 양성 과형성 질환)을 진단하는 방법에 관한 것이다. 상기 방법은

상기 환자로부터의 샘플(예; 암샘플, 예; 조직, 신체상의 유체(예; 혈액, 소변, 객담, CSF), 생검)을 제공하는 단계;

하나 또는 하나 이상의 FGF 유전자의 발현(예; 하나 또는 하나 이상의 FGF 유전자를 선별적으로 혼성화하는 핵산 프로브 또는 하나 또는 하나 이상의 FGF 유전자 산물과 특이적으로 결합하는 항체와 상기 샘플과의 접촉에 의해)을 평가하는 단계;

여기서 상기 하나 또는 하나 이상의 FGF 유전자 또는 유전자 산물의 수준은 대조군과 비교하여 증가 또는 감소는 질환(예; 악성 질환)의 유무를 나타낸다.

바람직한 실시예로, FGF와 관련된 유전자 또는 유전자 산물은 bFGF, aFGF, TSC22, VEGF, GAFA1, GAFA2, GAFA3(미국 가특허 출원번호 60/137,345에서는 FSC1, FSC2, FSC3으로 표기됨) 및 TFⅡ-I으로 구성된 군으로부터 선택되는 것이다.

바람직한 실시예로서, FGF 유전자의 발현은 대조군 또는 FGF 유전자 대조군 요소(예; 프로모터)에 의해 조절되는 신호 실체의 발현(예; 녹색 형광 단백질 또는 다른 마커 단백질)을 측정하여 평가한다.

몇 가지 실시예에서, 세포 또는 샘플에서 핵산(또는 단백질)은 위치적 어레이(예; DNA-칩 어레이)에서 분석된다. 따라서, 바람직한 실시예로서 상기 방법은 또한,

또한, 본 발명은 환자에서 질환(예; 증식성 질환, 예; 악성질환)의 치료 효과를 평가하기 위한 방법에 관한 것으로, 상기 방법은:

하나 또는 하나 이상의 FGF 유전자의 발현(예; 하나 또는 하나 이상의 FGF 유전자를 선별적으로 혼성화하는 핵산 프로브 또는 하나 또는 하나 이상의 FGF 유 전자 산물과 특이적으로 결합하는 항체와 상기 암샘플과의 접촉에 의한)을 측정하는 단계;

여기서 치료 후의 얻은 샘플에서 상기 하나 또는 하나 이상의 FGF 유전자 또는 유전자 산물의 수준에서 치료 전의 발현 수준과 비교할 때 변화(예; 증가, 감소)는 상기 질환의 치료 효과를 나타낸다.

바람직한 실시예로서, 상기 방법은 또한 예를 들어, FGF 발현의 수준에 기초한 특정 항암 치료와 같은 치료 모달리티(modality) 또는 그의 투여량을 선택하는 것을 포함한다.

바람직한 실시예로서, FGF 유전자의 발현은 대조군 또는 FGF 유전자 대조군 요소(예; 프로모터)에 의해 조절되는 신호 실체의 발현(예; 녹색 형광 단백질 또는 다른 마커 단백질)을 측정함으로써 측정한다.

몇 가지 실시예에서, 세포 또는 샘플에서 핵산(또는 단백질)은 위치적 어레이(예; DNA-칩 어레이)에서 분석된다. 따라서, 바람직한 실시예로 상기 방법은 또한,

포착 프로브의 복수의 어레이를 제공하여 샘플을 분석하는 단계; 여기서 포착 프로브 각각은 어레이에서 복수의 다른 포착 프로브와 위치적으로 구별되어 있고, 각각의 위치적으로 구별 가능한 포착 프로브는 독특한 시약(예; FGF 유전자 또 는 유전자 산물을 밝힐 수 있는 항체 또는 핵산 프로브)을 포함한다.

또한, 본 발명은 질환(예; 증식성 질환, 예; 악성질환)에 대한 치료를 위하여 치료(예; 화합물의 투여)효과를 측정하기 위한 방법에 관한 것이다. 상기 방법은:

세포(예; 배양 세포, 형질전환된 세포, 암으로부터의 세포) 또는 테스트 생물을 제공하는 단계;

상기 세포(또는 테스트 생물)에 상기 치료를 투여하고, 하나 또는 하나 이상의 FGF 유전자의 발현(예; 하나 또는 하나 이상의 FGF 유전자와 선별적으로 혼성화하는 핵산 프로브 또는 하나 또는 하나 이상의 FGF 유전자 산물과 특이적으로 결합하는 항체를 상기 세포(또는 테스트 생물)로부터의 샘플로 접촉에 의한)을 특정하는 단계;

여기서 상기 치료를 한 샘플에서 상기 하나 또는 하나 이상의 FGF 유전자 또는 유전자 산물의 수준(예; 치료를 하지 않은 발현 수준에 비하여)의 변화(예; 감소)는 상기 질환을 치료하기 위한 화합물의 효과를 나타낸다.

몇가지 실시예에서, 세포 또는 샘플에서 핵산(또는 단백질)은 위치적 어레이(예; DNA-칩 어레이)에서 분석된다. 따라서, 바람직한 실시예로 상기 방법은 또한,

본 발명에서 다른 특징 및 장점은 하기 자세한 설명과 청구항에서 명백해 질 것이다.

도면의 간단한 설명

도 1은 종양 배양에서 얻은 조건배지(CM)를 사용하여 랫트 MAT-LyLu 종양세포의 단면 배양에서 파클리탁셀, 독소루비신 및 5-플루오로우라실에 대한 저항의 유도를 나타낸 그래프이다. 약물 저하의 유도는 대조군에 비해 처리한 샘플에서 브로모디옥시우리딘(BrdU) 함입을 측정하여 증식성 활성에서 변화로 측정하였다. 윗 패널: 일차 종양의 CM, 중간 패널: 림프절 전이의 CM, 아래 패널: 폐전이의 CM. 각각의 패널: CM 없는 대조군(빈 원); 조직배양 CM의 첨가(채워진 원), 초기 단면 배양의 CM 추가(진행 0, 빈 사각), 후기 단면배양의 CM 추가(진행 3, 채워진 역삼각), 일차 종양 배양 및 후기 단면 전이 종양배양의 CM에 대한 곡선은 대조군 곡선과 겹친다. 비슷한 결과를 인간 PC3 종양세포에서 얻었다.

도 2의 A 및 도2의 B는 aFGF/bFGF를 저해 또는 제거하여 CM-유도 저항의 역을 보여주는 프래프이다.

도 2의 A는 aFGF 또는 bFGF에 대한 단일클론항체를 이용하여 CM-유도 저항의 역(대조군 샘플에 대한 처리 샘플에서 BrdU 함입의 변화를 측정하여 랫트 MAT-LyLu 세포의 증식성 활성에서 변화로 측정)을 나타낸 그래프이다. CM의 출처는 FGF 실험을 위한 폐 조직배양 및 bFGF 실험을 위한 초기 단면 폐 배양이다. 본 연구는 4개의 대조군을 사용하였다: CM 없음(왼쪽 두꺼운 곡선, 빈 원); 5 ㎍/㎖의 aFGF 또는 bFGF 항체를 추가(채워진 역삼각, 왼쪽 대조군 곡선과 겹침), CM 추가(오른쪽 두꺼운 곡선, 빈 사각); CM 및 비특이적 항체(5 ㎍/㎖의 IgG)의 추가(채워진 마름모, 오른쪽 CM-대조군 곡선과 겹침). 오른쪽으로부터 왼쪽으로의 점곡선; 0.05 ㎍/㎖ 농도의 aFGF 또는 bFGF 항체를 첨가(채워진 원), 0.1 ㎍/㎖(채워진 사각); 1 또는 0.5 ㎍/㎖(채워진 삼각) 및 5 ㎍/㎖(빈 역삼각). 비슷한 결과가 독소루비신, 파클리탁셀 및 5-플루오로우라실에서 나왔다. 비슷한 결과는 인간 PC3 전립선종양세포에서 나왔다.

도 2의 B의 (a)는 면역침전을 통한 aFGF 및/또는 bFGF를 제거하여 독소루비신에 대한 CM-유도 저항의 역을 나타낸 것이고, (b)는 인간 재조합 단백질(0.16 ng/㎖ r-aFGF 및/또는 0.9 ng/㎖ r-aFGF)을 사용하여 FGF-면역침전 CM을 재구성하여 저항의 복원을 나타낸 것이다. CM-유도 저항에서 역은 대조군에 비하여 처리한 샘플에서 BrdU 함입의 변화를 측정하여 검출된다. CM의 출처는 aFGF 및 bFGF 실험을 위한 폐 조직배양이다. 본 연구에서는 2개의 대조군을 사용하였다: CM 없음(왼쪽 두꺼운 곡선, 빈 원); CM(오른쪽 두꺼운 곡선, 빈 사각). 위왼쪽: CM - bFGF(채원진 사각); CM - aFGF + r-aFGF(채워진 원, 오른쪽 CM-대조군 곡선과 겹침). 위오른쪽: CM - bFGF(채워진 사각, 왼쪽 대조군 곡선과 겹침), CM - bFGF + r-bFGF(채워진 원, 오른쪽 CM 대조군 곡선과 겹침). 아래왼쪽: CM - aFGF - bFGF(채워진 사각), CM - aFGF - bFGF + aFGF(채워진 사각, 왼쪽 대조군 곡선과 겹침). 아래중앙: CM - aFGF - bFGF(채워진 사각, 왼쪽 대조군 곡선과 겹침); CM - aFGF - bFGF + r-bFGF(채워진 원). 아래오른쪽: CM - aFGF - bFGF(채워진 사각, 왼쪽 대조군 곡선과 겹침); CM - aFGF - bFGF + r-aFGF + r-bFGF(채워진 원, 오른쪽 CM-대조군 곡선과 겹침).

도 3은 CM 없이 r-aFGF 단독, r-bFGF 단독 또는 r-aFGF 및 r-bFGF의 조합을 사용하여 인간 전립선 PC3 종양세포에서 파클리탁셀, 독소루비신 및 5-플루오로우라실에 대한 저항의 유도를 나타낸 그래프이다. 본 연구에서는 인간 전립선 PCR 종양세포 및 팻트 MAT-LyLu 종양세포를 사용하여 수행하였다. FGF에 의한 저항의 유도는 대조군 샘플에 비교하여 처리한 샘플에서 BrdU 함입의 변화를 측정하여 검 출하였다. 본 연구에서는 2개의 대조군을 사용하였다: CM 없음(왼쪽 두꺼운 곡선, 빈 원); 폐 조직배양의 CM(오른쪽 두꺼운 곡선, 빈 사각). 위패널: r-aFGF의 첨가: 1 ng/㎖(채워진 원), 10 ng/㎖(채워진 사각), 50 ng/㎖(채워진 역삼각). 모든 3개의 점곡선은 왼쪽 대조군 곡선과 겹친다. 중앙 패널: r-bFGF의 첨가. 왼쪽에서 오른쪽으로 점곡선: 1 ng/㎖(채워진 원, 왼쪽 대조군 곡선과 겹침), 10 ng/㎖(채워진 사각), 50 ng/㎖(채워진 역삼각, 오른쪽 CM-대조군 곡선과 겹침). 아래 패널: r-aFGF/r-bFGF 조합의 첨가. 왼쪽으로부터 오른쪽으로 점곡선: 0.04 및 1 ng/㎖(채워진 사각, 왼쪽 대조군 곡선과 겹침); 0.08 및 1 ng/㎖(빈 마름모); 0.16 및 1 ng/㎖(채워진 역삼각); 0.32 및 1 ng/㎖(채워진 마름모); 0.64 및 1 ng/㎖(채워진 원); 및 각각 1 ng/㎖(빈 역삼각). 비슷한 결과가 랫트 MAT-LyLu 종양세포에서 얻을 수 있었다.

도 4는 독소루비신 처리에 의한 세포 사멸에 대한 FGF 유도 저항성을 나타낸 그래프이다. PC3 세포에서 약물-유도 세포 사멸은 배양배지에 락테이트 디하이드로지나제(LDH)를 분비하여 알아보았다. 결과는 처리한 샘플의 대조군에 대한 비로 나타내었다. 대조군 샘플의 값은 10% 미만에서 다양하였다. 위부터 아래로 곡선: CM 또는 FGF 없음(빈 원); 0.9 ng/㎖ aFGF 첨가(채워진 역삼각, 위 대조군 곡선과 겹침), 0.9 ng/㎖ bFGF 첨가(채워진 원); 0.16 ng/㎖ aFGF + 0.9 ng/㎖ bFGF 첨가(채워진 마름모); 폐종양 조직배양의 CM(빈 사각); 0.9 ng/㎖ aFGF + 0.9 ng/㎖ bFGF(채워진 사각). 비슷한 결과가 파클리탁셀 및 5-플루오로우라실에서 관찰되었다.

도 5는 랫트 MAT-LyLu 종양세포, 인간 전립선 PC3 및 PC3-LN 종양세포에서 수라민 농도 증가의 세포독성을 나타낸 그래프이다. 상기 결과는 수라민이 1-15 마이크로몰라 농도에서 측정할 수 있는 세포독성(즉, BrdU 함입에서 10% 미만의 감소)을 나타내지 못한다. 대응하는 IC₅₀ 값(즉, BrdU 함입에서 50% 감소를 나타낼 수 있는데 필요한 수라민 농도)은 랫트 종양세포에서 235 마이크로몰라이고, PC3 세포에서 93 마이크로몰라 및 PC3-LN 세포에서 98 마이크로몰라이다.

도 6은 시험관(in vitro) 조건하에서, 수라민을 사용하여 독소루비신, 파클리탁셀 및 5-플루오로우라실의 세포독성의 증가를 나타낸 3개의 그래프이다. 본 연구에서는 랫트 MAT-LyLu 종양세포 및 인간 전립선 PC3 및 PC3-LN 종양세포를 사용하여 수행하였다. 세포독성 효과는 대조군과 비교하여 처리한 샘플에서 BrdU 함입에서 변화를 측정하여 검출하였다. 본 연구에서는 2개의 대조군을 사용하였다: CM 및 수라민 없음(왼쪽 두꺼운 곡선); 폐 조직배양의 CM, 수라민 없음(오른쪽 두꺼운 곡선, 빈 사각). 오른쪽부터 왼쪽까지 점곡선, 5 uM 수라민 첨가(채워진 원); 10 uM(채워진 사각); 및 15 uM(채워진 역삼각). 비슷한 결과를 PC3 및 PC3-LN 세포에서 얻을 수 있다.

도 7의 A 및 도 7의 B는 피하의 부피가 큰 인간 전립선 PC3 이종조직이식 종양을 갖고 있는 면역결핍 마우스에서 독소루비신 활성의 수라민 매개 증가를 나타낸 2개의 그래프이다.

도 7의 A는 지속적인 치료에 대한 종양무게(처음 무게에 비하여 실험상의 무 게)의 변화를 나타낸 것이다.

도 7의 B는 지속적인 치료에 대한 동물 몸무게의 변화를 나타낸 것이다.

발명의 구체적인 설명

본 발명은 정상 비종양성 내장상피 뿐만 아니라 수많은 고형 및 연조직 종양, 전이 병변에서 bFGF가 항암제에 대한 넓은 스펙트럼(spectrum) 저항성을 유도한다는 발견에 근거한 것이다. 실시예에서, 본 발명은 aFGF/bFGF의 저해제가 화학요법의 시험관 및 생체내 활성을 증가시키고, 그 결과 마우스에서 잘 확립된 인간 폐 전이 및 인간 피하 이종조직이식 종양의 축소 및 박멸되었다. 따라서, 본 발명은 부분적으로, 항암제에 대한 FGF-유도 저항성을 저해하기 위한 방법 및 조성물을 제공하는 것이다. 실시예에서, FGF 저해제를 다른 세포독성 제제와 함께 투여하였다. 세포독성 제제의 예로는 항마이크로튜불 제제, 토포아이소머라제 I 저해제, 토포아이소머라제 Ⅱ 저해제, 항대사물 제제, 분열 저해제, 알킬화 제제, 삽입 제제, 신호 전달 경로를 방해할 수 있는 제제(예, 단백질 키나제 C 저해제, 항-호르몬, 성장 인자 수용체에 대한 항체), 아폽토시스 및/또는 세포괴사를 촉진하는 제제, 인터페론, 인터루킨, 종양 괴사 인자 및 방사선이 있다. 항암제(예; 파클리탁셀, 인터페론 알파, 겜시타빈, 플루다라빈, 이리노테칸, 카르보플라틴, 시스플라틴, 택소티어, 독소루비신, 에피루비신, 5-플루오로우라실, UFT, 타목시펜, 고세렐린, 헤르셉틴, 항-CD20 항체, 루프로리드(루프론) 및 플루타미드)와 함께 FGF 저해제(예; 수라민, 예; FGF 항체)의 증가된, 때때로 시너지 효과는 상기 항암제의 효과를 증가시킬 뿐만 아니라, 상기 항암제의 적은 투여량의 투여를 가능하게 하고, 따라서 피검체(예; 환자)에서 부작용의 유도를 줄인다. 예를 들어, 피검체가 비-소세포폐암을 앓고 있고, 파클리탁셀, 카르보플라틴 및 수라민으로 또는 겜시타빈, 시스플라틴 및 수라민의 조합으로 치료하고 있는 환자이다. 예를 들어, 환자는 호르몬 불응 전립선암을 앓고 있고, 에스트라무스틴 포스페이트, 택소티어 및 수라민의 조합으로 또는 독소루비신, 케토코나졸 및 수라민의 조합으로 치료하고 있는 환자이다. 예를 들어, 환자는 전이 유방암을 앓고 있고, 사이클로포스파미드, 독소루비신, 5-플루오로우라실 및 수라민의 조합으로 치료하고 있는 환자이다. 예를 들어, 환자는 HER/neu 종양유전자를 과발현하는 진행된 유방암을 앓고 있고, Her2/neu 항체(예; 헤르셉틴) 및 수라민으로 파클리탁셀 또는 시스플라틴을 사용하거나 또는 사용하지 않고 치료하는 환자이다. 예를 들어, 환자는 진행된 또는 전이 결장직장암을 앓고 있고, 이리노테칸 및 수라민의 조합으로 치료하고 있는 환자이다. 예를 들어, 환자는 진행된 결장암을 앓고 있고, 5-플루오로우라실, 루코보린 및 수라민의 조합으로 치료하고 있는 세포이다.

고형, 연조직 암 및 전이종양의 조건배지(이하 "CM"이라 약칭한다)는 인간 및 설치류 종양세포에서 많은 항암제에 대한 저항성을 유도한다. 상기 CM은 증가된 수준의 aFGF 및 bFGF를 포함하고 있다(실시예 2 및 실시예 3 참조). bFGF-특이 단일클론항체를 이용한 bFGF의 저해 및 면역침전에 의한 bFGF의 제거는 항암제에 대한 CM-유도 저항성이 완전히 바뀌는 결과는 낳고, 반면에 aFGF의 저해/제거는 부분적으로 바뀐 결과는 낳는다(실시예 4 참조). aFGF 및/또는 bFGF가 완전히 고갈 되고, 인간 재조합 단백질에 대한 재구성된 CM을 사용하면, aFGF가 아닌 bFGF가 저항성을 유도하는 것으로 나타났다. aFGF는 bFGF 효과를 증폭하는 것으로 나타났다. aFGF 및 bFGF는 CM 효과에 대하여, 상기 단백질이 항암제 저항의 유도 및 유지에 관여하고 있다는 것을 설명하고 있다(실시예 4 참조). FGF-유도 저항성은 감소된 세포내 약물 축적에 의한 것이 아니고, 세포 증식을 변경하지 않고(실시예 7 참조), 따라서 새로운 후성 저항 메카니즘을 나타낸다.

활성 CM에서 발견된 증가된 수준의 aFGF 및 bFGF는 작용이 다른 메카니즘을 갖는 적어도 58 항암제에 대한 넓은 스펙트럼 저항성을 유도한다. 항암제는 항튜블린/항마이크로튜불 제제, 토포아이소머라제 I 저해제, 토포아이소머라제 Ⅱ 저해제, 항대사물 제제, 알킬화 제제, 삽입 제제, 신호 전달 경로를 방해할 수 있는 제제(예, 단백질 키나제 C 저해제), 아폽토시스 및/또는 세포괴사를 촉진하는 제제이다(실시예 2 및 실시예 7 참조). 파클리탁셀(항마이크로튜불 제제), 독소루비신(토로이소머라제 I 저해제) 및 5-플루오로우라실(항대사물 제제)에 대한 저항의 aFGF/bFGF 유도는 약물유출 단백질, 즉 p-당단백질을 암호화하는 mdr1 유전자의 안정적 형질전환으로부터 유래된 인간 유방암 세포주 뿐만 아니라 전립선, 폐, 인두, 결장 및 유방을 포함하는 서로 다른 인간 고형종양으로부터 유래된 많은 암세포주에서 검출되었다(실시예 8 참조). aFGF/bFGF는 또한 플루다라빈(항대사물 제제)에 대한 인간 백혈병세포의 저항성을 유도한다(실시예 8 참조).

FGF 항체 및 수라민을 포함하는 FGF의 저해제, aFGF/bFGF를 포함하는 많은 성장인자의 저해제는 FGF 유도 저항성을 바꾸고, 항암제의 시험과 화성을 촉진시킨 다. 상기 항암제는 항튜블린/항마이크로튜불 제제, 토포아이소머라제 I 저해제, 토포아이소머라제 Ⅱ 저해제, 항대사물 제제, 알킬화 제제, 삽입 제제, 신호 전달 경로를 방해할 수 있는 제제(예, 단백질 키나제 C 저해제) 및 아폽토시스 및/또는세포괴사를 촉진하는 제제를 포함하는 서로 다른 작용 메카니즘을 갖는 58 이상의 항암제를 포함한다(실시예 5 및 실시예 7 참조). FGF 유도 저항의 반전은 시험관 조건 하에서 측정할 만한 세포독성을 나타내지 않는 수라민 농도에 이른다(실시예 6 참조). 생체내 조건하에서, 측정할 만한 항종양 활성 또는 숙주 독성을 내지 못하는 투여량의 수라민 첨가는 화학요법의 치료효과를 촉진시켜, 화학요법의 숙주 촉성 촉진 없이 마우스에서 잘 확립된 인간 폐 전이를 수축 및 박멸시키고, 마우스에서 피하에서 부피가 큰 인간 전립선 이성조직이식의 수축을 일으킨다(실시예 9 참조).

첨부한 실시예에서는 또한 (a) 종양세포의 존재가 숙주 조직에서 세포외 bFGF의 수준을 향상시키고, (b) 조양에서 bFGF 수준이 종양의 위치 및 크기에 의해 결정되고, (c) bFGF 수준이 항암제에 대한 인간 환자 종양의 반응성을 결정하는 것을 증명하였다(실시예 10 참조). 또한, 첨부한 실시예에서는 인간 전립선 세포를 다양한 구조 및 작용 메카니즘을 갖는 여러 항암제(예; 항튜블린/항마이크로튜불제제, 토포아이소머라제 I 저해제, 토포아이소머라제 Ⅱ 저해제, 알킬화 제제 및 항대사물 제제)를 가지고 치료하면 세포외 bFGF의 수준을 급격히 증가시킨다는 것을 보여준다(실시예 11). 정확하게는, 상기 실시예는 (a) 종양세포의 존재를 검출하기 위한 FGF 발현 및 수준의 용도, (b) 저항의 한도를 결정하기 위한 종양에서의 FGF 발현 및 수준의 용도, (c) FGF 저해제의 투여량을 결정하기 위한 종양에서의 FGF 발현 및 수준의 용도, (d) 화학요법을 기존에 받고 있는 환자는 화학 저항성을 나타내기 쉽다는 것에 대하여 나타냈다. 후자는 암치료에 실패하고 재발성 종양을 앓고 있는 환자는 FGF 저해제를 사용하여 치료해야 한다는 필요성을 나타내었다.

첨부한 실시예는 FGF 길항제(예; 수라민, 예; 헤파린, 예; 저분자량 헤파린, 헤파란 설페이트)가 bFGF와 그의 결합 위치의 결합을 저해한다는 것을 증명한다(실시예 16).

첨부한 실시예는 FGF 작용제(예; aFGF, bFGF)가 항암제(예; 파클리탁셀 및 독소루비신)의 독성을 비종양성 내장상피까지 감소시킨다는 것을 증명한다(실시예 14 참조). 따라서, 본 발명은 또한 aFGF 및 bFGF를 단독 또는 조합으로 사용하여 항암제의 원하지 않는 숙주 독성을 치료 또는 방지하기 위한 방법 및 조성물을 제공하는 것이다.

요약하면, 본 발명에서는 특히, (a) 암세포가 세포독성 상해를 피하기 위하여 고형 종양 및 전이의 독특한 미세환경을 사용한 새로운 후성 메카니즘, (b) 항암제에 대한 종양 반응성에서 세포외 성장 인자의 중요한 역할, (c) aFGF/bFGF 저해제를 갖고 항암제의 조합을 사용한 새로운 암 치료 패러다임, (d) 정상 비종양성 숙주 세포가 항암제의 원하지 않는 독성으로부터 보호되는 새로운 메카니즘 및 방법, (e) 개객의 환자에 대한 치료의사결정을 위하여 bFGF 수준을 사용하는 방법을 증명하였다.

본 발명의 자세히 기술하기 전에, 편의를 위해 본 명세서, 실시예 및 청구항에서 사용한 특정 용어를 하기에 모았다.

펩타이드, 단백질 및 폴리펩타이드는 본 명세서에서 상호교환하여 사용하였다.

본 명세서에서 사용한, "섬유아세포성장인자(fibroblast growth factor)" 또는 "FGF"는 증식, 분화, 이동, 형태변화, 조직 유지 및 상처 치유 및 회복에서 여러 가지 세포 작용의 영향력 있는 조절자인 폴리펩타이드의 패밀리의 요소를 일컫는다(Clarke et al. J. Cell Sci., 1993, 106, 121-133; Cuevas et al. Biochem. Biophys. Res. Commun., 1988, 156, 611-618; Burgess, W.H. and Maciag, T, Ann. Rev. Biochem., 1989, 58, 575-606; Rifkin, D.B. and Moscatelli, D. J. Cell Biol., 1989, 109, 1-6). FGF 패밀리는 일반적으로 각각 산성 또는 염기성 FGF, FGF-1 및 FGF-2; int2(FGF-3); hst(FGF-4); FGF-5; hst2(FGF-6); 케라티노사이트 성장인자(FGF-9); FGF-10-19를 포함하는 19개 이상의 구조적, 기능적으로 관련된 단백질이다(Galzie, Z. et al. Biochem. Cell Biol., 1997, 75, 669-685; Yamasaki, M. et al. J. Biol. Chem., 1996, 271, 15918-15921; Smallwood, P.M. et al. Proc. natl. Acad. Sci USA, 1996, 93, 9850-9857; McWhirter, J.R. et al. Development, 1997, 124, 3221-3232; Hoshikawa, M. et al. Biochem. Biophys, Res. Comm., 1998, 244, 187-191; Hu, M.C.T et al. Mol. Cell. Biol., 1998, 18, 6063-6074; 및 Nishimura, T. et al. Biochim. Biophy. Acta, 1999, 1444, 148-151). 바람직하게는 FGF는 각각 산성 및 염기성 FGF, FGF-1 및 FGF-2를 일컫는다(reviewed in (Galzie, Z. et al. Biochem. Cell Biol., 1997, 75, 669-685 and Burgess, W.H. and Maciag, T, Ann. Rev. Biochem. 1989, 58, 575-606).

본 명세서에서 사용한, "FGF 수용체(FGF receptor)" 또는 "FGFR"은 세포외 기질에서 내부 티로신 키나제 활성 또는 헤파란 설페이트 프로티오글리칸을 갖는 FGF-결합 폴리펩타이드를 일컫는다. 티로신 키나제 수용체에 대해서, 일반적으로 FGF 수용체(FGFR-1, FGFR-2, FGFR-3 및 FGFR-4)를 인코딩하는 4개의 알려진 유전자가 있고, 이는 교대(alternative) RNA 스플라이싱을 통해 여러가지 단백질 이소폼(isoforms)이 생길 수 있다(Galzie, Z. et al. Biochem. Cell Biol., 1997, 75, 669-685). FGFR의 구조는 3개의 면역글로블린-유사 도메인을 갖는 세포외 부위, 막관통 부위 및 리간드가 결합하였을 때 활성화되는 세포질 티로신 키나제 도메인으로 구성되어 있다. FGF 결합은 수용체가 이량체가 되게 하고, 티로신 잔기에서 수용체 자가인산화 및 세포내 신호 전달 캐스캐이드의 활성을 일으킨다. "FGFR"은 또한 FGF의 작용(성장인자의 단백질분해 방지, 위치, 저장 및 내부화)을 매개하는 세포외 기질에 있는 헤파란 설페이트 프로티오글리칸을 포함한다(Faham, S. et al. Curr. Opin. Struct. Biol., 1998, 8, 578-586). 헤파란 설페이트 프로티오글리칸은 FGF를 동질의 FGFR에 나타내기 위하여 및/또는 수용체 올리고화를 촉진하기 위하여 낮은 친화성 FGF 수용체를 제공할 것이다(Galzie, Z. et al. Biochem. Cell. Biol., 1997, 75, 669-685).

본 명세서에서 사용한 "FGF 길항제(FGF antagonist)"는 FGF 분자의 활성, 생산, 안정성을 완전히 또는 부분적으로 저해하는 제제을 일컫는다. 바람직하게는 FGF 길항제는 세포외 또는 세포내에 작용한다(예; FGF 분자가 FGF 수용체의 세포외 또는 세포내 도메인과 결합하는 것을 방해한다. 예; FGF 수용체의 활성에 의해 시작되는 세포내 신호를 억제한다). 예를 들어 저해제는 FGF 수용체의 세포내 도메인과 결합하고 또는 FGF 수용체의 활성의 결과인 하류 작용을 억제한다. 반면에, "FGF 작용제(FGF agonist)"는 FGF 분자의 활성, 생산, 안정성을 촉진하고 또는 FGF 수용체를 활성화시킨다.

본 명세서에서 사용한 "FGF 특이 저해제(specific inhibitor of FGF)"는 수라민 이외의 FGF 길항제를 일컫는다.

본 명세서에서 사용한 "세포독성 제제(cytotoxic agent)", "항암제(anticancer agent)" 및 "항종양제(antitumor agent)"는 본 명세서에서 상호교환하여 사용하였고, 성장 또는 증식을 억제하고(예; 세포활동 억제제) 또는 과증식세포의 사멸을 유도하는 성질을 갖고 있는 제제를 일컫는다. 바람직하게는, 세포독성 제제는 고형종양, 연조직 종양, 전이 병변, 림프종 또는 백혈병 같은 신생물(neoplasm)의 발육 및 진행을 저해하거나 또는 반전시키고, 또는 세포독성 제제는 양성 과형성 성장의 발육 및 진행을 저해하거나 또는 반전시킨다.

본 명세서에서 사용한 FGF 길항제 및 세포독성 제제의 "치료유효용량(therapeutically effective amount)"은 제제이 조합을 피검체(예; 환자)에 단일 또는 다중 투여량으로 투여하였을 때, 성장 또는 증식을 저해하고 또는 과증식세포의 사멸을 유도하는 효과가 있는 상기 제제의 양을 일컫는다. 상기 정상 저해 또는 사멸은 피검체 생존의 연장(예; 상기 치료를 하지 않았을 때 예상 되는 것보다 긴) 또는 상기 치료를 하지 않았을 때에 비하여 피검체의 예후가 향상된 것으로 반영된다. FGF 작용제에 적용하면, 상기 기술한 것은 약제(예; 세포독성 제제)에 의해 손상된 피검체(예; 환자)에서 세포를 보호하기 위하여, 단일 또는 다중 투여량으로 투여하였을 때, 효과적인 제제의 양을 일컫는다.

본 명세서에서 사용한 FGF 길항제 및 세포독성 제제의 "예방유효용량(prophylactically effective amount)"은 제제의 조합을 피검체(예; 환자)에 단일 또는 다중 투여량으로 투여하였을 때, 신생질환상태의 시작 또는 재발의 발생을 예방 또는 지연을 일으키는 효과가 있는 상기 제제의 양을 일컫는다. 이를 FGF 작용제에 적용하면, 상기 기술한 것은 약제(예; 세포독성 제제)에 의한 피검체(예; 환자)의 손상을 예방하거나 지연하기 위하여, 단일 또는 다중 투여량으로 투여하였을 때, 효과적인 제제의 양을 일컫는다.

본 명세서에서 사용한 언어 "피검자(subject)"는 인간 또는 인간이 아닌 동물을 포함한다. 바람직한 인간 동물은 과증식 세포의 이상 활성에 의해 특정되는 질환을 갖는 인간 환자를 포함한다. 본 발명에서 "인간이 아닌 동물(non human animals)"은 모든 척추동물(예; 인간이 아닌 영장류, 양, 개, 고양이, 말, 소, 닭, 양서류, 파충류 등과 같은 포유류 및 포유류가 아닌 척추동물)이다. 바람직하게는 피검체는 인간 환자(예; 암환자, 예; 양성 과형성 질환을 앓고 있는 환자)이다.

본 명세서에서 사용한 과증식세포(예; 신생세포, 예; 양성 과형성세포)의 "성장 또는 증식을 저해(inhibiting the growth or proliferation)"는 그의 성장 및 전이를 늦추거나, 방해하거나, 저지하거나 또는 막는 것을 일컫고, 반드시 신생 성 장의 전체적인 제거를 가리키는 것은 아니다.

본 명세서에서 사용한 과증식세포(예; 신생세포, 예; 양성 과형성세포)의 "사멸 유도(inducing the killing)"는 상기 세포의 부분 또는 완전한 제거를 일컫고, 반드시 신생 성장의 완전한 제거를 가리키는 것은 아니다.

"유도(induce)", "저해(inhibit)", "강화(potentiate)", "향상(elevate)", "증가(increase)", "감소(decrease)" 또는 이와 유사한 용어는 두 상태에서 양적인 변화를 나타내고, 두 상태에서 적어도 통계적으로 매우 큰 변화가 있음을 일컫는다. 예를 들어, "과증식세포의 성장을 억제하기 위한 유효용량"은 세포의 성장속도가 적어도 처리하지 않은 세포에 비하여 적어도 통계적으로 매우 큰 변한 것을 의미한다. 상기 용어는 예를 들어 세포증식 속도에서도 적용된다.

본 명세서에서 사용한 "과증식(hyperproliferative)", "과형성(hyperplastic)", "악성(malignant)" 및 "신생(neoplastic)"은 상호교환하여 사용하였고, 비정상적인 상태 또는 급성 증식 또는 신생물에 의해 특징지어지는 조건에서 이러한 세포들을 일컫는다. 상기 용어는 침윤의 조직병리학적 형태 또는 단계를 고려하지 않더라도, 과증식 성장, 과형성 성장, 암성 성장 또는 종양유전적 진행, 전이성 조직 또는 악성 형질전환 세포, 조직 또는 기관의 모든 형태를 포함한다. "병리적 과증식(pathologic hyperproliferative)" 세포는 악성종양 성장에 의해 특정되는 질환 상태 또는 양성과증식 또는 과형성 세포에 의해 특정되는 질환 상태에서 생긴다.

"신생물(neoplasia)"의 일반적 의학적 의미는 정상 성장 대조군(예; 신생 세 포 성장)에 대한 반응이 감소되는 "새로운 세포의 성장"을 일컫는다. "과형성(hyperplasia)"는 세포가 비정상적으로 빠른 성장속도로 진행되는 세포를 일컫는다. 그러나, 본 명세서에서는 상기 신생물 및 과형성을 상호교환하여 사용하였고, 그들의 문맥이 일반적으로 비정상적인 세포성장 속도를 경험하는 세포를 일컫는 것을 나타낸다. 신생물 및 과형성은 양성, 전악성 또는 악성의 "종양(tumors)"을 포함한다.

"악성종양(carcinoma)"은 이 분야의 당업자에 의해 인식되어 있고, 호흡 시스템 악성종양, 위장 시스템 악성종양, 비뇨생식기 시스템 악성종양, 고환 악성종양, 유방 악성종양, 전립선 악성종양, 내분비 시스템 악성종양 및 흑색종을 포함하는 상피 또는 내분비 조직의 악성을 일컫는다. 악성종양의 예로는 경부, 폐, 전립선, 유방, 머리 및 목, 결장 및 난소의 조직으로부터 형성된 것들을 포함한다. 상기 용어는 또한 육종암(예; 암종 및 육종 조직으로 구성된 악성종양을 포함하는)을 포함한다. "선암(adenocarcinoma)"는 선조직 또는 인식 가능한 선구조를 형성하는 종양세포에서 유래한 악성종양이다.

"육종(sarcoma)"는 이 분야의 당업자에 의해 인식되어 있고, 간충질 유래의 악성종양을 일컫는다.

본 명세서에서 사용한 "백혈병(leukemia)" 또는 "백혈병암(leukemic cancer)"은 조혈 및 면역 시스템(혈액 및 림프 시스템)의 모든 암 또는 신생물을 일컫는다. 상기 용어는 혈액 및 골수에서 백혈구 및 그들의 전구체이 잘못된 증식 및 발생에 의해 표지되는 혈관형성 기관의 진행되는 악성 질환을 일컫는다. 골수 종은 혈액, 골수세포의 다른 형태를 일컫는다. 림프종은 림프 조직의 악성종양을 일컫는다. 본 명세서에서 사용한 "면역글로블린(immunoglobulin)" 및 "항체(antibody)"는 이중황결합에 의해 적어도 2개의 중쇄(H) 및 2개의 경쇄(L) 상호연결로 이루어진 당단백질을 일컫는다. 각각의 중쇄는 중쇄가변영역(이하 HCVR 또는 VH라 약칭한다) 및 중쇄불변영역으로 이루어져 있다. 중쇄불변영역은 CH1, CH2 및 CH3 3개의 도메인으로 구성되어 있다. 각각의 경쇄는 경쇄가변영역(이하 LCVR 또는 VL이라 약칭한다) 및 경쇄불변영역으로 이루어져 있다. 경쇄불변영역은 CL 하나의 도메인으로 이루어져 있다. VH 및 VL 부위는 다시 CDR(complementarity determining region)이라 부르는 과변이 부위로 세분되고, FG(framework regions)이라 부르는 더욱 보존된 부위에 점재되어 있다. 각각의 VH 및 VL은 3개의 CDRs 및 4개의 FRs로 구성되어 있고, 아미노-말단부터 카르복시-말단의 순서로 배열되어 있다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 중쇄 및 경쇄의 가변영역은 항원과 상호작용하는 결합도메인을 포함한다. 항체의 불변영역은 면역 시스템의 여러세포(예; 효과세포) 및 전통적 상보 시스템의 처음 요소(Clq)를 포함하며, 면역글로블린과 숙주 조직 또는 인자와의 결합을 매개한다.

본 명세서에서 사용한 항체의 "항원-결합 부위(antigen-binding portion)"(또는 간단히 "항체 부위(antibody portion)")는 항원(예; 타겟 항원)과의 특이적 결합능력을 유지하는 항체의 하나 또는 하나 이상의 절편을 일컫는다. 항원의 "항원-결합 부위"에 포함되는 결합 절편의 예로는 (a) VL, VH, CL 및 CH1 도메인으로 구성된 1가 절편, 즉 Fab 절편; (b) 경첩 부위에서 이중황결합에 dlm해 연결된 2개 의 Fab 절편으로 이루어진 이가 절편, 즉 F(ab')2 절편; (c) VH 및 CH1 도메인으로 구성된 Fd 절편; (d) 항체의 단일 팔의 VL 및 VH 도메인으로 구성된 Fv 절편; (e) VH 도메인으로 구성된 dAb 절편(Ward et al., (1989) Nature 341:544-546); 및 (f) 분리된 CDR(complementarity determining region)을 포함한다. 또한, Fv 절편의 2개의 도메인, VL 및 VH는 분리된 유전자에 의해 암호화되어 있고, VL 및 VH 부위가 1가 분자로 형성되는 짝을 이루는 단일 단백질 사슬(단일 사슬 Fv(scFv); 예; Birdet al. Science, 1988, 242, 423-426; 및 Huston et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1988, 85, 5879-5883)로 만들 수 있는 연결체에 의해 재조합 방법을 사용하여 연결된다. 사기 단일사슬 항체는 항체의 "항원-연결 부위"에 포함된다. 이러한 항체 절편은 당업자에게 알려진 전통적인 방법을 사용하여 얻을 수 있고, 절편은 동일한 방법에서 사용을 위해 완전한 항체로 스크리닝된다.

본 명세서에서 사용된 "단일클론항체(monoclonal antibody)"는 단일분자 조성의 항체 분자를 일컫는다. 단일클론항체조성은 특정 에피토프(epitope)에 대한 단일결합 특이성 및 친화성으로 나타난다. 따라서, "인간 단일클론항체(human monoclonal antibody)"는 인간 배선(germline) 면역글로블린 서열에서 유래한 가변영역 및 불변영역을 갖고 있는 단일 결합 특이성을 나타내는 항체를 일컫는다. 실시예에서, 인간 단일클론항체는 불멸세포에서 인간 중쇄형질전환유전자 및 경쇄형질전환유전자가 결합되어 구성되는 지놈을 갖는 형질전환 비-인간 동물(예; 형절전환 마우스)로부터 얻은 B 세포를 포함하는 하이브리도마에 의해 생산된다.

본 명세서에서 사용한 "재조합 인간 항체(recombinant human antibody)"는 인간 면역글로블린 유전자에 형질전환된 동물(예 마우스)에서 분리한 항체; 숙주세포에 형질전환된 재조합 발현벡터를 사용하여 발현되는 항체; 재조합 즉, 조합 인간항체 라이브러리에서 분리한 항체, 또는 인간 면역글로블린 유전자 서열을 다른 DNA 서열에 스플라이싱하는 것을 포한하는 다른 방법에 의해 제조, 발현, 생성 또는 분리되는 항체와 같은 재조합 방법에 의해 제조, 발현, 생성 또는 분리된 모든 인간항체를 포함한다. 사기 재조합 인간항체는 인간 배선 면역글로블린 서열로부터 유래된 가변영역 및 불변영역을 갖고 있다. 그러나, 실시예에서 상기 인간항체는 시험관 돌연변이생성(또는 인간 Ig 서열에 대한 동물 형질전환 항체를 사용할 때는 생체내 체세포 돌연변이생성)에 속하고, 재조합 항체의 VH 및 VL 부위의 아미노산 서열은, 인간 배선 VH 및 VL 서열로부터 유래되고 관련되어 있으나 생체내 인간항체 배선 레퍼터리에는 자연적으로 존재하지 않는다.

과증식세포 활성을 저해하기 위한 방법

또한 본 발명은 세포를 하나 이상의 세포독성 제제 및 하나 이상의 FGF 길항제와 접촉시켜 증식을 억제 및/또는 과증식 세포의 사멸을 촉진하는 방법에 관한 것이다. 일반적으로 상기 방법은 하나 이상의 세포독성 제제 및 하나 이상의 FGF 길항제가 조합으로 세포의 증식을 감소 또는 방해하거나 세포 사명을 유도하는 유효용량으로 병리적 과증식세포에 접촉하는 단계를 포함한다. 본 방법은 배양에서 세포상에서 수행하거나(시험관 또는 생체외), 또는 피검체에 있는 세포에 수행한다(예; 생체내 치료 프로토콜의 일부분). 치료 양생법(regimen)은 인간 또 는 다른 동물 피검체에서 수행할 수 있다. 본 발명의 조합 치료의 촉진된 치료효과는 항암제의 전통적으로 높은 독성 양생법을 대체할 수 있다는 것을 나타낸다.

FGF 길항제가 단독으로 사용할 수 있는 반면, 상기 방법은 바람직하게는 다른 항암제와 결합한다. 상기 항암제의 예로는 항마이크로튜불 제제, 토포아이소머라제 I 저해제, 토포아이소머라제 Ⅱ 저해제, 항대사물 제제, 분열저해제, 알킬화 제제, 삽입 제제, 신호 전달 경로를 방해할 수 있는 제제(예, 단백질 키나제 C 저해제, 항-호르몬, 성장 인자 수용체에 대한 항체), 아폽토시스 및/또는 세포 괴사를 촉진하는 제제, 인터페론, 인터루킨, 종양괴사인자 및 방사선이 있다. 항암제(예; 파클리탁셀, 인터페론 알파, 겜시타빈, 플루다라빈, 이리노테칸, 카르보플라틴, 시스플라틴, 택소티어, 독소루비신, 에피루비신, 5-플루오로우라실, UFT, 타목시펜, 고세레린, 케토코나졸, 헤르셉틴, 항-CD20 항체, 루프로이드(루프론) 및 플루타미드)를 함께 사용한 FGF 저해제(예; 수라민, 예; FGF 항체)의 촉진된 및 때때로 시너지 효과는 상기 항암제의 효과를 증진시키고, 상기 항암제의 낮은 투여량의 투여를 허용하여, 피검체에서 부작용의 유도를 줄인다.

상기 방법은 대부분의 결장암, 직장암, 신장세포종양, 전립선암 및/또는 고환암과 같은 악성종양을 포함하는 선종양, 폐의 비소세포종양, 소장암, 식도암 뿐만 아니라 폐, 유방, 림프, 위장(예; 결장) 및 비뇨기관(예; 전립선), 인두에 영향을 주는 여러 기관과 같은 여러 기관 시스템의 악성을 치료하는데 사용될 수 있다. 치료할 수 있는 고형암의 예로는 섬유육종(fibrosarcoma), 근육종(myosarcoma), 지방육종(liposarcoma), 연골육종(chondrosarcoma), 골원성육종(osteogenic sarcoma), 척삭종(chordoma), 맥관육종(angiosarcoma), 내피육종(endotheliosarcoma), 림프관육종(lymphangiosarcoma), 림프관내피아세포종(lymphangioendotheliosarcoma), 활막종(synovioma), 중피종(mesothelioma), 유윙종양(Ewing's tumor), 평활근육종(leiomyosarcoma), 횡문근육종(rhabdomyosarcoma), 위암(gastric cancer), 식도암(esophageal cancer), 결장종양(colon carcinoma), 직장암(rectal cancer), 췌장암(panreatic cancer), 유방암(breast cancer), 난소암(ovarian cancer), 전립선암(prostate cancer), 자궁암(uterine cancer), 머리와 목 암, 피부암(skin cancer), 뇌암(brain cancer), 인상세포종양(squamous cell carcinoma), 피지선종양(sebaceous gland carcinoma), 유두상종양(papillary carcinoma), 유두선종(papillary adenocarcinoma), 낭포선암(cystadenocarcinoma), 수질종양(medullary carcinoma), 기관지원성종양(bronchogenic carcinoma), 신장세포종양(renal cell carcinoma), 간암(hepatoma), 담즙선종양(bile duct carcinoma), 융모암(choriocarcinoma), 정상피종(seminoma), 태아종(embryonal carcinoma), 빌름스종양(Wilm's tumor), 자궁경부암(cervical cancer), 고환암(testicular cancer), 폐종양(lung carcinoma), 소세포폐종양(small cell lung carcinoma), 비소세포폐종양(non-small cell lung carcinoma), 방광종양(bladder carcinoma), 상피종(epithelial carcinoma), 신경교종(glioma), 성상세포종(astrocytoma), 수아세포종(medulloblastoma), 두개인두종(craniopharyngioma), 뇌실상의세포종(ependymoma), 송과체종(pinealoma), 혈관아세포종(hemangioblastoma), 청음신경종(acoustic neuroma), 회돌기교종(oligodendroglioma), 수악종(meningioma), 흑색종(melanoma), 신경아세포종(neuroblastoma), 망막아세포종(retinoblastoma), 백혈병(leukemia), 림프종(lymphoma) 또는 카포시육종(Kaposi sarcoma)을 포함한다.

상기 방법은 또한 증식을 저해하거나 조혈 기원의 과형성/신생세포(예; 골수, 림프 또는 적혈구 유래에서 기원한, 또는 그들의 전구세포)의 사멸을 유도하는데 사용된다. 예를 들어, 본 발명은 APML(acute promyeloid leukemia), AML(acute myelogenous leukemia) 및 CML(chronic myelogenous leukemia)를 포함하고 여기에 제한되는 것은 아닌 여러 골수 질환을 치료할 수 있다(reviewed in Vaickus, L. Crit. Rev. Oncol. Hemotol., 1991, 11, 267-97). 상기 방법에 의해 치료할 수 있는 림프악성종양은 B-계통 ALL 및 T-계통 ALL, CLL(chronic lymphocytic leukemia), PLL(prolymphocytic leukemia), HLL(hairy cell leukemia) 및 WM(Waldenstom's macroglobulinemia)를 포함하는 ALL(acute lymphoblastic leukemia)을 포함하고 여기에 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 방법에 의해 치료가능한 악성림프종의 추가적인 형태는 비-호지킨 림프종 및 그의 변이체, 말초 T-세포 림프종, 성인 T-세포 백혈병/림프종(ATL), 피부 T-세포 림프종(CTCL), LGF(large granular lymphocytic leukemia) 및 호지킨병을 포함하며 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 방법은 또한 증식을 저해하거나 양성 과형성증식의 사멸을 유도하는데 사용된다.

FGF 길항제

본 발명의 방법 및 조성물에 사용되는 FGF 길항제는 화학물(예; 단백질 또는 펩타이드) 또는 소분자가 될 수 있다. 바람직하게는 FGF 길항제는 bFGF, aFGF의 저해제 똔느 상기 두 FGF의 저해제이다. 예를 들어, FGF 길항제는 FGF 분자, FGF와 수용체의 결합을 촉진하는 분자 또는 FGF 수용체에 결합할 수 있고, FGF 분자가 수용체(예; 티로신 키나제 수용체 및/또는 헤파란 설페이트 프로티오글리칸)에 결합하는 것을 억제할 수 있다. FGF 길항제는 FGF 수용체 작용을 하향조절한다(예; FGF 수용체의 활성에 의해 시작되는 세포내 신호를 억제한다). 예를 들어, 저해제는 FGF 수용체의 세포내 도메인에 결합하고, FGF 수용체 활성의 결과인 하류 작용을 억제한다.

FGF 작용을 길항작용하는 화학물의 예로는 수라민, 수라민의 구조적 유사체, 펜토산 폴리설페이트, 스코폴라민, 앤지오스태틴, 스프라우티, 에스트라디올, 카르복시메틸벤질아민 덱스트란(CMDB7), 수라디스카, 인슐린-유사 성장인자 결합 단백질-3, 에탄올, 헤파린(예; 6-O-디설페이트 헤파린), 저분자 헤파린, 프로타민 설페이트, 사이클로스포린 A, 또는 bFGF에 대한 RNA 리간드를 포함한다. FGF 길항제는 또한, 저분자(예조합 라이브러리의 요소)가 될 수 있다.

바람직한 FGF 길항제는 수라민이다. 바람직하게는 수라민은 FGF(예; bFGF 및/또는 aFGF)에 의해 유도되는 항암제에 대한 저항성을 충분히 억제할 수 있으나, 인간 및/또는 동물 종양세포에 현저한 세포독성(예; 세포 증식의 현저한 저해, 예; 현저한 세포 사멸)을 내기에 충분치 않고, 현저한 세포주기 정지를 나타내기에 충분치 않고 및/또는 피검체(예; 인간 피검체)에서 측정할 만한 항종양 효과를 내기에 충분치 않은 농도로 존재한다. 바람직하게는 수라민은 혈장 농도 범위가 혈장 농도의 0.1 내지 100 ㎍/㎖, 바람직하게는 1 내지 85 ㎍/㎖, 보다 바람직하게는 5 내지 60 ㎍/㎖, 가장 바람직하게는 15 내지 45 ㎍/㎖이 되는 양을 투여한다.

FGF 활성을 길항작용하는 단백질 또는 펩타이드의 예로는 하기의 항체(예; 단일클론항체 또는 그들의 항원 절편)를 포함한다. 대신하여서는 FGF 길항제는 FGF 분자의 절편이다. 바람직하게는 FGF 절편은 FGF 분자가 수용체와 결합하는 것을 경쟁한다. FGF 길항제는 또한 TGF-β(transforming growth factor beta) 또는 그들의 절편일 수 있다.

면역글로블린

FGF 활성을 길항작용하는 단백질 또는 펩타이드의 예로는 항체(예; 단일클론 항체, 쥐 항체 또는 인간 항체) 또는 그들의 항원 결합 절편을 포함한다. 바람직하게는 단일클론항체는 인간항체이다. 예를 들어, 인간항체는 형질전환 비-인간 동물(예; 불멸세포에 인간 중쇄 형질전환유전자 및 경쇄 형질전환 유전자가 결합되어 구성되는 지놈을 갖는 형질전환 마우스)로부터 얻은 B-세포를 포함하는 하이브리도마로부터 생산될 수 있다. 항체는 IgG(예; IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), IgM, IgA1, IgA2, IgD 또는 IgE를 포함하는 여러 이소형태가 될 수 있다. 바람직하게는 항체는 IgG 이소형태이다. 항체는 완전한 길이(예; IgG1 또는 IgG4 항체)가 될 수 있고, 또는 단지 항원-결합 절편(예; Fab, F(뮤')2, Fv 또는 단일사슬 Fv 절편)을 포함할 수도 있다.

bFGF 및 FGF에 대한 여러 항체는 상품화되어 있어 구입할 수 있고, 본 발명의 방법 및 조성물에 쉽게 사용할 수 있다. 구입할 수 있는 bFGF에 대한 항체의 예로는 (a) Sigma F9666, 항-인간, 단일클론, 클론 no.FA-88, 숙주: 마우스, 타입:IgG2a; (b) Sigma F 5521, 다클론, 숙주: 토끼; 및 (c) 종양유전자 PC316L, 항-소 + 항-인간 다클론, 숙주:토끼, 형태:IgG를 포함한다.

구입할 수 있는 aFGF에 대한 항체의 예로는 (a) Sigma F6162, 항-인간, 단일클론, 클론 no. FB-8, 숙주:마우스, 형태: IgG1; (b) Sigma F5537, 항-인간, 다클론, 숙주: 토끼, 형태: IgG; (c) SigmaF3393, 항-소, 폴리클로날, 숙주: 토끼; (d) 종양유전자 PC15, 항-인간, 다클론, AB-1, 숙주: 토끼, 형태: IgG; (e) 종양유전자 PC16, 항-인간, 다클론, AB-2, 숙주:토끼, 형태: IgG; (f) 종양유전자 GF22, 항-인간, 단일클론, 크론 no.3H3, AB-3, 숙주:마우스, 형태: IgG1; (g) 종양유전자 GF23L, 항-인간, 단일클론, 클론 no.98, AB-4, 숙주:마우스, 형태:IgG1; (h) 종양유전자 GF24, 항-인간, 단일클론, 클론 no.52, AB-5, 숙주:마우스, 형태:IgG2b; 및 (i) 종양유전자 pC194L, 항-인간, 다클론, AB-6, 숙주: 염소, 형태:IgG를 포함한다.

대신하여서는, 항-FGF 항체는 당업자에게 알려진 방법으로 만들 수 있다. 예를 들어, 항-FGF 항체는 전통적인 단일클론항체 제조방법(예; 일반적인 체세포 혼성화 기술(Kohler and Milstein, Nature, 1975, 256, 2495))을 포함한 여러 기술에 의해 생산될 수 있다. 단일클론항체를 생산하기 위하여 다른 기술(예; B 임파구의 바이러스 또는 종양유전자 형질전환)보다는 원칙적으로 체세포 혼성 방법이 더 낳다. 하이브리도마를 제조하기 위하여 바람직한 동물 시스템은 쥐 시스템이다. 마우스에서 하이브리도마 생산은 잘 확립되어 있는 방법이다. 융합을 위한 면역화 비세포의 분리를 위한 면역 프로토콜 및 기술은 당업자에게 잘 알려져 있다. 융합 파트너(예; 쥐 골수종 세포) 및 융합 방법도 또한 잘 알려져 있다.

인간 단백질에 대한 인간 단일클론항체(mAbs)는 마우스 시스템보다는 완전 인간 면역 시스템을 갖는 형질전환마우스를 사용하여 만들어진다. 원하는 항원으로 면역화된 상기 형질전환 마우스의 비세포는 인간 단백질로부터의 에피토프에 대한 특정 친화를 갖는 인간 mABs를 분비하는 하이브리도마를 생산하는데 사용된다(see, 예; Wood et al. International Application WO 91/00906, Kucherlapati et al. PCT publication WO 91/10741; Lonberg et al. International Application WO 92/03918; Kay et al. International Application 92/03917; Lonberg, N. et al. Nature, 1994, 368, 856-859; Green, L.L. et al. Nature Genet., 1994, 7, 13-21; Morrison, S.L. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1994, 91, 6851-6855; Bruggeman et al. Year Immunol, 1993, 7, 33-40; Tuaillin et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1993, 90, 3720-3724; Bruggeman et al. Eur J. Immunol, 1991, 21, 1323-1326).

단일클론항체는 또한 재조합 DNA 기술의 당업자에게 잘 알려진 다른 방법에 의해 만들어진다. "조합 항체 표시(combinatorial antibody display)" 방법으로 부르는 다른 방법은 특정 항원 특이성을 갖는 항원 절편을 확인 및 분리하기 위하여 발전되어 왔고, 단일클론항체를 생산하는데 사용될 수 있다(조합 항체 표시의 설명, see 예; Sastry et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86, 5728; Huse et al. Science, 1989, 246, 1275; and Orlandi et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86, 3833; Larrick et al., Biotechniques, 1991, 11, 152-156; Larrick et al. Methods:companion to Methods in Enzymology, 1991, 2, 106-110).

비교예에서, RNA는 일반적 프로토콜을 사용하여 B 임파구(예; 말초혈액세포, 골수 또는 췌장 제조)에서 분리되었다(예; U.S. Patent No. 4,683202; Orlandi, et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86, 3833-3837; Sastry et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1989, 86, 5728-5732; 및 Huse et al. Science, 1989, 246, 1275-1281). 신호서열에 대한 프라이머 뿐만 아니라, 중쇄 불변영역 및 κ 및 λ 경쇄의 각각에 대한 특정 프라이머를 사용하여 일차가닥 cDNA를 합성하였다. 가변영역 PCR 프라이머를 사용하여, 각각 단독 또는 조합으로 중쇄 및 경쇄의 가변영역을 증폭하였고, 표시 팩키지를 만드는데 조작을 위하여 적정 벡터에 연결하였다. 증폭 프로토콜에 사용한 올리고뉴클레오티드 프라이머는 독특하거나 변성되었고, 변성 위치에서 이노신을 삽입한다. 제한효소 인식서열은 발현을 위한 기결정 리딩 플레임에서 벡터에 증폭된 절편을 클로닝을 위하여 프라이머에 삽입하였다.

면역-유래 항체 레퍼토리로부터 클론된 V-유전자 라이브러니는 표시 패키지의 집합에서 발현되어지고, 바람직하게는 필라멘토스 파지에서 유래하고, 항체 표 시 라이브러리를 형성한다. 이상적으로는 표시 패키지는 매우 큰 다양한 항체 표시 라이브러리의 샘플링, 각각 친화 분리 후의 빠른 분류 및 정제된 표시 패키지로부터 항체 유전자의 쉬운 분리를 위한 시스템을 포함한다. 파지 표시 라이브러리에 대한 구입 가능한 키트(예; Pharmacia Recombinant Phage Antibody System, catalog no. 27-9400-01; 및 Stratagene SurfZAP phage display kit, catalog no.240612)외에도, 다양한 항체 표시 라이브러리를 생산하는 사용에 특히 수정가능한 방법 및 시약의 예가 있다(예; Ladner et al. U.S. Patent No. 5,223,409; Kang et. International Publication No. WO92/18619; Dower et al. International Publication No. WO91/17271; Winter et al. International Publication WO92/20791; Markland et al. Interantional Publication No. WO 92/15679; Brreitling et al. International Publication WO 93/01288; McCarrerty et al. International Publication No. WO 92/01047; Garrard et al. International Publication No. WO 92/09690; Ladner et al. International Publication No. WO 90/02809; Fuchs et al. Bio/Technology, 1991, 9, 1370-1372; hay et al, Hum Antibody Hybridomas, 1992, 3, 81-85; Huse et al. Science, 1989, 246, 1275-1281; Griffiths et al. EMBO J, 1993, 12:725-734; Hawkins et al. J Mol Biol, 1992, 226, 889-896; Clackson et al. Nature, 1991, 352, 624-628; Gram et al. Proc Natl. Acad. Sci USA, 1992, 89, 3576-3580; Garrad et al., Bio/Technology, 1991, 9, 1373-1377; Hoogenboom et al. Nuc Acid Res, 1991, 19, 4133-4137; and Barbas et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1991, 88, 7978-7982).

특정 실시예에서, 중쇄 및 경쇄의 V 부위 도메인은 같은 샘플 폴리펩타이드상에서 발현될 수 있고, 유연성 있는 연결체로 연결되어 단일 사슬 Fv 절편을 형성하고, scFV 유전자는 결과적으로 원하는 발현벡터 또는 파지 지놈에 클로닝된다. 일반적으로(McCafferty et al. Nature, 1990, 348, 552-554), 항체의 완전한 VH 및 VL 도메인은 유연성 (Gly4-Ser)3 연결체에 의해 연결되고, 항원 친화성에 근거하여 분리 가능한 표시 패키지를 만드는 단일 사슬 항체를 생산하기 위하여 사용된다. 항원에 대한 분리된 scFV 항체 면역반응은 결과적으로 상기 방법에서 사용하기 위하여 약학적 조제로 제형된다.

표시 패키지(예; 필라멘터스 파지)의 표면에 표시되면, 타겟 항원에 대한 특이성을 갖는 항체를 발현하는 패키지를 밝히고 분리하기 위하여, 타켓 항원 또는 그들의 펩타이드 절편으로 항체라이브러리가 스크리닝된다. 선별된 항체를 인코딩하는 핵산은 파지 패키지(예; 파지 지놈으로부터)로부터 회수할 수 있고, 일반적인 재조합 DNA 기술에 의해 다른 발현벡터에 서브클로닝된다.

표면 단백질에 대해 고친화성을 갖는 특정 항체 분자는 당업자에게 알려진 방법(예; 라이브러리의 스크리닝에 관계된 방법; Ladner, R.C., et al., U.S. Patent 5,223409; Ladner, R.C., et al., U.S. Patent 5,403,484)에 따라 만들어진다. 또한, 상기 라이브러리의 방법은 항체의 구조 결정요인의 모방인 결합 결정요인을를 얻기 위한 스크리닝에 사용된다.

특히, 특정 항체의 Fv 결합 표면은 단백질-단백질 상호작용의 원리에 따라 그의 타겟 리간드와 상호작용하고, 따라서 VH 및 VL(후자는 κ또는 λ 사슬형태)에 대한 서열 데이터 당업자에게 알려진 단백질 엔지니어링 기술에 기본이 된다. 결합 결정요인을 포함하는 단백질 표면의 상세한 것은 NMR 연구 및 결정학 데이터로부터 얻은 다른 항체로부터 이전에 결정된 3차원 구조를 이용한 모델링 방법에 의해, 항체 서열 정보로부터 얻어진다(Bajorath, J. and S. Sheriff, Proteins:Struct., Funct., and Genet. 1996, 24, 152-157; Webster, D.M. and A.R. Rees, "Molecular modeling of antibody-combining sites" in S. Paul, Ed., Methods in Molecular Biol. 51, Antibody Engineering Protocols, Humana Press, Totowa, NJ, 1995, 17-49; and Johnson, G. et al. "Seqhunt:A program to screen aligned nucleotide and amino acid sequences," in Methods in Molecular Biol. 1995, 51 op.cit., pp1-15).

실시예에서, 다양한 펩타이드 라이브러리는 펩타이드 표시 라이브러리를 형성하기 위하여 표시 패키지의 집합에 의해 발현된다. 이상적으로, 표시 패키지는 매우 큰 다양한 펩타이드 표시 라이브러리의 샘플링, 각각의 친화 분리후의 빠른 분류 및 정제된 표시 패키지로부터 펩타이드-인코딩 유전자를 쉽게 분리하는 시스템을 포함한다. 펩타이드 표시 라이브러리는 예를 들면 원핵생물 및 바이러스에 있을 수 있고, 이들은 빨리 증폭되고, 상대적으로 쉽게 조작할 수 있고, 대량의 클론 생산을 가능케 한다. 표시 패키지는 바람직하게는 무성 박테리아 세포 및 박테리아 스포어를 가장 바람직하게는 박테리아바이러스(특히 DNA 바이러스)를 포함한다. 그러나, 본 발명은 유력한 표시 패키지로 효모, 그들의 스포어를 포함하는 진핵세포의 용도를 고찰한다. 파지 표시 라이브러리는 하기에 표기하였다.

"변형(modified)" 또는 "재조합(recombinant)" 항체는 또한 항체의 결실, 첨가 똔느 대체 부위에 의해 변형되어진 단일클론항체, 키메라항체 및 인간화항체와 같은 항체를 포함한다. 예를 들어, 항체는 경첩 부위를 결실시켜 변형되어 1가 항체를 생성한다. 항체가 하나 이상의 특정 항원 결합 부위를 갖고 있는 한 본 발명의 범위내에서의 변형이다.

키메라 마우스-인간 단일클론항체(즉, 키메라 항체)는 당업자에게 알려진 재조합 DNA 기술에 의해 생산되어진다(see Robinson et al., International Patent Publication PCT/US86/02269; Akira, et al., European Patent Application 184, 187; Taniguchi, M., European Patent Application 171, 496; Morrison et al., European Patent Application 173, 494; Neuberger et al., International Application WO 86/01533; Cabilly et al. U.S. Patent No. 4,816,567; cabilly et al., European Patent Application 125, 023; Better et al. Science, 1988, 240, 1041-1043; Liu et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1987, 84, 3439-3443; Liu et al. J. Immunol. 1987, 139, 3521-3526; Sun et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1987, 84, 214-218; Nishimura et al. Canc. REs. 1987, 47, 99901005; Wood et al. Nature, 1985, 314, 446-449; and Shaw et al J. Natl Cancer Inst. 1988, 80, 1553-1559).

키메라 항체는 인간 Fv 가변영역으로부터 같은 서열과 항원결합하는데 직접적으로 관여하지 않는 Fv 가변영역의 서열을 치환하여 더욱 인간화하였다. 인간화 키메라 항체의 일반적인 것은 모리슨 등에 의해 제공된다(Morrison, SlL. Science, 1985, 229, 1202-1207 and Oi et al. BioTechniques, 1986, 4, 214). 상기 방법은 적어도 하나 이상의 중쇄 또는 경쇄로부터 면역글로블린 Fv 가변영역의 전체 또는 일부를 인코딩하는 핵산 서열을 분리, 조작 및 발현하는 것을 포함한다. 상기 핵산의 원천은 당업자에게 잘 알려져 있고, 예를 들어 하이브리도마를 생산하는 7E3, 항-FPⅡbⅢa 항체로부터 얻어진다. 키메라 항체 또는 그들의 절편을 인코딩하는 재조합 DNA는 적정 발현 벡터에 클로닝되었다. 적합한 인간화 항체는 CDR 교체에 의해 대체적으로 생산되어진다(U.S. Patent 5,225,539; Jones et al. Nature, 1986, 321:552-525; Verhoeyan et al. Science, 1988, 239:1534; and Beidler et al. J. Immunol. 1988, 141:4053-4060).

특정 인간 항체의 모든 CDRs은 적어도 하나 이상의 비-인간 CDR로 대체될 수 있고, 또는 CDR의일부분만 비-인간 CDRs로 대체되어 진다. 인간화 항체가 Fc 수용체에 결합하는데 필요한 수많은 CDRs을 대치하는게 필요하다.

비-인간 항체에서 유래한 CDR을 갖고 인간 항체의 CDR의 하나 이상의 부분을 대체할 수 있는 방법에 의해 항체가 인간화될 수 있다. 윈터는 본 발명의 인간화 항체를 제조하는데 사용한 방법을 기술하였다(UK Patent Application GB 2188638). 인간 CDRs은 올리고뉴클레오티드 위치-지시된 돌연변이생성을 사용하여 비-인간 CDRs로 대체되었다.

또한, 본 발명의 범위 내에서는 특정 아미노산이 치환, 결실 또는 첨가됨 키메라 및 인간화 항체이다. 특히, 바람직한 인간화 항체는 항원과의 결합을 향상시키기 위한 것과 같이 골격 부위에서 아미노산 치환을 갖고 있다. 예를 들어, 마우 스 CDRS을 갖고 있는 인간화 항체에서, 아미노산은 인간 골격 부위에 위치한 아미노산은 마우스 항체에서 대응되는 자리에 있다. 상기 치환은 몇몇 경우에 인간화 항체가 항원에 결합하는 것을 향상시키는 것으로 알려졌다. 아미노산이 첨가, 결실 또는 치환된 항체는 본 명세서에서 변형된 항체 또는 변경된 항체로 불린다.

세포독성 제제

FGF 길항제는 바람직하게는 하나 이상의 세포독성 제제가 조합으로 투여된다. 상기 구절에서 "조합으로(in combination)"는 제제들을 같이 또는 차례로, 실질적으로 동시에 주어진다. 만일 차례로 주어지면, 두 번째 화합물의 추여 시점은 두 화합물의 처음은 바람직하게는 치료효과가 바람직한 위치에서 유효 농도로 여전히 검출된다.

예를 들어, FGF 길항제는 전통적인 암 화학요법으로 조합치료에 사용된다. 백혈병 및 다른 종양에 대한 전통적인 치료 양생법은 방사선, 항종양 제제, 인터페론, 인터루킨, 종양괴사인자 또는 둘 이상의 제제의 조합을 포함한다.

예를 들어, 상기 방법은 하나 이상의 FGF 저해제의 사용 외에도, 하나 이사의 다른 항종양 제제를 포함한다. 조합 치료의 예로는 상기 제제(하기 표 2에 기재되 있고 여기에 한정되는 것은 아니다. 항튜블린/항마이크로튜불 제제, 예; 파클리탁셀, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈데신, 빈노렐린, 택소티어(예; 도세탁셀); 토포아이소머라제 I 저해제, 토포테칸, 캄프토테신, 이리노테칸 하이드로클로라이드(예 캄프코사르); 토포아이소머라제 Ⅱ 저해제, 예; 독소루비신, 에토포시드, 미톡산트론, 다우노푸비신, 이다루비신, 테니포시드, 암사크린, 에피루비신, 메르바론, 피로잔트론 하이드로클로라이드; 항대사물 제제, 예; 5-플루오로우라실, 메토트렉세이트, 6-머캡토퓨린, 6-티오구아닌, 플루다라빈 포스페이트, 시타라빈(Ara-C), 트리메트렉세이트, 겜시타빈, 아시비신, 아리노신, 피라조푸린, N-포스포아세틸-L-아스파레이트(PaLA), 펜토스태틴, 5-아자시티딘, 5-아자-2'디옥시시티딘, 아데노신 아라비노시드(Ara-A), 클라드리빈, 프토라푸르, UFT(우라실 및 푸토라푸르 조합), 5-플루오로-2'-디옥시우리딘, 5'-디옥시-5-플루오로우리딘, 티아조푸린; 알킬화 제제, 예; 시스플라틴, 카르보플라틴, 옥살리플라틴, 미토마이신 C, BCNU(예; 카르무스틴), 멜파란, 티오테파, 부설판, 클로람부실, 플리카마이신, 다카바진, 이포스파미드 포스페이트, 사이클로포스파미드, 니트로젠 무스타드, 우라실 무스타드, 피포브로만, 4-이포미놀; 신호전달경로 및/또는 아직 모르는 작용 메카니즘을 저해하는 것을 통해 작용하는 제제, 예; 디하이드로렌페론, 스피로무스틴, 겔다나마이신, 사이토칼라신스, 뎁시펩타이드; 항-호르몬, 예; 프루타미드, 4'-사이아노-3-(4-플루오로페닐설포닐)-2-하이드록시-2-메틸-3'-(트리플루오로메틸) 프로피오나니리드; 성장인자가 성장인자 수용체에 결합하는 것을 저해하는 제제; 예; 헤르셉틴, 항-CD20 항체(리투산); 인터페론, 예; 인터페론 알파, 인터페론 베타, 인터페론 감마; 인터루킨, 예; 인터루킨 2, 인터루킨 4, 인터루킨 12; 종양괴사인자; 및 방사선을 포함한다.

FGF 저해제를 갖고 조합으로 사용되는 추가적인 제제의 예는 하이드록시우레아, 아자티오프린, 아미노프테린, 트리메토프린, 피리메타민, 피리트렉심, DDMO(2,4 디아미노-5(3',4'디클로로페닐)6메틸피리미딘), 5,10-디에아자테트라하이드로폴레이트, 10-프로파길-5,8 디데아자폴레이트(CB3717), 10-에틸-10-데아자-아미노프테린, 디옥시시티딘, 5-아자-시토신 아라비노시드, N-4-팔미토일-아라 C, 2'-아지도-2'디옥시-아라C, N4-베헤노일-아라 C, CCNU(로무스틴), 에스트라무스틴, MeCCNU, 트리에틸렌 메라민, 트레니몬, 디메틸 부설판, 스트렙토조토신, 클로로조토신, 프로카르바진, 헥사메틸메라민(알트레타민), 펜타메틸메라민(PMM), 테트라플라틴, 옥살리플라틴, 플라티넘-DACH, 아지리디닐벤조퀴논(AZQ), 블레오마이신, 탤리소마이신 S₁₀ ^b, 리블로마이신, 페플레오마이신, 아스파라가나제(엘스파르), 페마스파라가느(온카스파르), 클라드르빈(루스태틴), 로프리메르 소듐(포도프린), 아모노피드, 디옥시스퍼구아린, 디하이드로렌페론, 플라본 아세트산, 갈리엄 니트레이트 및 헥사메틸렌 비스아세타민(HMBA)을 포함한다.

세포제제의 특정 조합은 치료할 과증식질환의 형태에 다라 사용된다. 예를 들어, 급성 백혈병을 치료하기 위하여 방사선에 더하여 보통 조합으로 하기 약제가 사용된다. 빈크리스틴, 프레드니손, 메토트렉세이트, 메프카프토푸린 사이클로포스파미드 및 시타라빈. 예를 들어, 만성적 백형병에는 플루다라빈, 부설판, 멜파란 및 클로람부실이 조합으로 사용된다. 폐암의 경우에는 파클리탁셀 및 카르보플라틴의 조합으로 또는 겜시타빈 및 시스플라틴의 조합으로 사용된다. 호르몬 불응 전립선암의 경우에는 에스트라무스틴 포스페이트 및 택소티어의 조합으로 또는 독소루비신 및 케토코나졸의 조합으로 사용된다. 전이성 유방암의 경우에는 사이클 로포스파미드, 독소루비신 및 5-플루오로우라실의 조합으로 사용된다. HER2/neu 종양유전자를 과발현하는 진행된 유방암의 경우에는 5-플루오로우라실 및 루코보린의 조합으로 사용된다. 모든 전통적인 항암약제는 독성이 크고, 치료하는 동안 환자를 매우 아프게 한다; 강력한 치료는 모든 암세포가 파괴되지 않는다면 나머지 세포는 증폭되고 따라서 재발될 것이라는 전제하에서 수행된다. 세포독성 제제는 양성 과형성 질환의 치료을 위해서도 사용된다. 예를 들어, 건선은 5-플루오로우라실을 갖고 치료한다.

치료는 약제의 적정 투여량 미만의 작은 투여량으로 시작할 수 있다. 그후, 적정 효과가 나타날 때까지 투여량을 조금씩 증가시킨다. 편의를 위해 전체 투여량을 날짜로 나눠서, 원하는 날짜 동안 일부분씩 투여한다. FGF 저해제 또는 세포독성 제제의 항종양 치료유효용량 및 예방유효용량은 약 0.1 ㎎/㎏/day 내지 100 ㎎/㎏/day이다.

동물(예; 개, 쥐)에서 종양의 예방 또는 치료 또는 양성과증식질환의 예방 또는 치료에 효과적인 화합물은 또한 인간에서 종양의 치료에 사용될 수 있다. 인간에서 종양을 치료하는 당업자는 동물연구에서 얻은 데이터를 기초로 하여 인간에게 투여할 화합물의 투여량과 루트를 안다. 보통 인간에서 투여량과 루트는 신체 표면에 적용할 때는 동물의 것과 비슷한 것으로 예상된다.

FGF 저해제 및 세포독성 제제의 항종양 치료유효용량 및 예방유효용량의 결정은 외과의사나 수의사(소속 임상의학자)에 의해 쉽게 정할 수 있다. 투여량은 치료하는 조건의 정도난 특정 제제의 사용과 같은 환자의 필요에 따라 달라질 수 있다. 투여량의 결정에서, 소속 임상의학자에 의해 수많은 인자가 고려된다. 여기에는 하기의 것들을 포함하고 여기에 한정되는 것은 아니다. 특정 과형성/신생 세포는; 특정 제제의 약효성질 및 투여의 양상 및 루트; 치료하는 시간, 포유동물의 종, 크기, 나이 및 일반적 건강상태를 포함한다. 특정 질환은 질환의 정도; 개개의 환자의 반응; 특정 화합물 투여; 투여 양상; 투여량 양생번 선택; 동시 치료의 종류, 및 다른 관련된 상황을 포함한다. 예를 들어, 미국 특허 5,427,916은 개개의 환자에서 항-신생 치료의 효과을 예상하는 방법을 기술하였다. 실시예에서 본 발명은 bFGF 수준이 항암제에 대한 종양 반응성을 결정하고, 종양에서 치료 모달리티(예; FGF 발현의 수준에 근거한 특정 항암 치료 또는 그의 투여량)의 선백을 포함하는 치료의사결정에 대한 bFGF의 용도를 나타내고 있다.

또한, 본 발명은 다른 치료 화합물을 갖고 FGF 길항제/작용제의 조합 투여를 수행할 수 있는 키트에 관한 것이다. 실시예에서, 키트는 약학적 담체에서 제형화된 FGF 길항제/작용제 및 하나 이상의 분리된 약학적 조제에서 적당히 제형화된 하나 이상의 세포독성 제제를 포함한다.

약학적 조성물

또한 본 발명은 약학적으로 허용가능한 담체에서 하나 이상의 세포독성 제제로 혹은 없이 제형화된 하나 이상의 FGF 길항제/작용제의 치료 유효용량을 포함하는 약학적 허용가능한 조성물을 제공한다.

바람직한 실시예에서, 본 발명의 약학적 조성물은 고형 또는 액체 형태로 투 여를 하기 위하여 특별히 제형화 되어 있고 하기의 적용할 수 있는 것들을 포함한다: (a) 경구투여, 예; 음약(액성-또는 비액성 용액 또는 현탁액), 정제, 거환, 분말, 과립, 이고제, 함수제, 하이드로젤; (b) 비경구적 투여, 예; 피하, 근육내 또는 정맥 주사 예; 멸균된 용액 또는 현탁액; (c) 동내 투여, 예; 복강내 점적주입, 방관내(즉, 비뇨방광) 점적주입, 초내 투여; (d) 기관내투여, 예; 전립선내 투여; (e) 국소적 적용, 예; 피부에 적용되는 크림, 연고제 또는 스프레이; (f) 질내 또는 직장내 투여, 예; 페서리, 크림, 포말, 관장, 좌약; 또는 (g) 분무약, 예; 액성 분무약, 리포좀 제조 또는 제제를 함유하는 고형 입자.

실시예에서 기술한 시험관 분석 및 동물 실험 또는 이들과 비슷한 분석(예; 사용되는 세포 또는 동물이 다른 경우)은 FGF 길항제/작용제 및/또는 세포독성 제제 또는 이들의 조합의 "유효용량"을 결정하기 위하여 사용될 수 있다. 당업자는 상기 분석 또는 유사한 분석에서 용도를 위해 조합에서 각각 화합물의 적정 양을 선별한다. 세포 활성 또는 세포 증식에서 변화는 선택된 용량이 화합물의 특정 조합에 "유효용략"인지를 결정하는데 사용할 수 있다. 투여의 양생법은 유효용량을 구성하는 것에 영향을 줄 수 있다. FGF 길항제/작용제는 다른 세포독성 제제의 투여에 앞서, 동시에 또는 후에 피검체에 투여할 수 있다. 또한, 시차적 투여량 뿐만 아니라 나눠진 투여량은 매일 또는 연속적으로 투여할 수 있고, 투여량은 치료 상태의 긴급성에 의해 나타나는 것에 따라 점차적으로 증가 또는 감소할 수 있다.

본 명세서에서 사용한 "약학적 허용가능한(pharmaceutically accptable)"은 상기 FGF 길항제/작용제 및/또는 세포독성 제제, 상기 화합물을 함유하는 조성물, 및/또는 적당한 의학 판단 범위내에서 과독성, 자극, 알레르기 반응 또는 다름 문제, 합병증, 동연의 합당한 비를 갖는 이익/위험 비율 없이 인간 또는 동물의 조직에 접촉하는 용도에 적합한 투여 형태를 일컫는다.

본 명세세에서 사용한 "약학적 허용가능한 담체(phamaceutically-acceptable carrier)"는 특정 화학물을 기관, 신체 일부로부터 다른 기관 또는 신체 일부로 전달하거나 이동하는데 관여하는 액체 또는 고형 주입기, 희석제, 부형제, 용매 또는 캡슐화된 물질과 같은 약학적 허용가능한 물질, 조성물 또는 부형약을 의미한다. 각각의 담체는 제형의 다른 첨가물와 대응하는 점에서 허용가능해야하고, 환자에게 상해를 주지 ??아야 한다. 약학적 혀용가능한 담체로서 물질의 예로는 (a) 락토스, 글루코스 및 수크로스와 같은 당질; (b) 옥수수 녹말 및 감자 녹말 같은 녹말; (c) 소듐 카르복실메틸 셀루로스, 에틸 셀룰로스 및 셀룰로스 아세테이트와 같은 셀룰로스 및 그의 유래물; (d) 분말 트래거캔스; (e) 맥아; (f) 젤라틴; (g) 탈크; (h) 코코아 버퍼 및 좌약 왁스와 같은 부형제; (i) 땅콩 오일, 면실유, 잇꽃 오일, 참깨 오일, 올리브유, 옥수수유, 대두유와 같은 오일; (j) 프로필렌 플리콜 같은 프리콜; (k) 글리세린, 소르비톨 마니톨 및 폴리에틸렌 글리콜 같은 폴리올; (l) 에틸 오리에이트 및 에틸 라오레이트와 같은 에스테르; (m) 한천; (n) 마그네슘 아이드록싣 및 알루미늄 하이드록시드 와 같은 버퍼제; (o) 알긴산; (p) 피로젠 없는 물; (q) 등장 생리식염수; (r) 링거용액; (s) 에틸 알코올; (t)포스페이트 버퍼 요액; 및(u) 약학적 제형에 사용되는 다른 비독성 적합 물질. 색제, 분비제, 코팅제, 감미, 조미 또는 향기제, 보존제 및 항산화제뿐만 아니라 소듐 라우릴 설페이 트 및 마그네슘 스테아레이트와 같은 습윤제, 에멀젼제 및 윤활제는 조성물에 들어갈 수 있다.

약학적 허용가능한 항산화제의 예로는 (a) 아스코르브산, 시스틴 하이드로클로라이드, 소듐 비설페이트, 소듐 메타비설피트, 소듐 설피트 및 그 유사체와 같은 수용성 항산화제; (b) 아스코르빌 팔미테이트, 부틸레이트 하이드록시아니솔(BHA), 부틸레이트 하이드록시톨루엔(BHT), 레시틴, 프로필 갈레이트, 알파-토코페롤 및 그 유사체와 같은 오일용해성 항산화제; 및 (c) 시트리산, 에틸렌디아민 테트라아세트산(EDTA), 소르비톨, 타르타르산, 포스포르산 및 그 유사체와 같은 금속 킬레이팅제를 포함한다.

본 발명의 FGF 길항제/작용제 및/또는 세포독성 제제를 함유하는 조성물은 편리하게 단일투여형태로 제공될 수 있다. 단일투여형태를 생산하는 담체 물질과 함께 결합된 활성 첨가제의 양은 처리하는 숙주, 투여의 특정 양상에 따라 달라진다. 보통, 100%에서 상기 투여는 활성 첨가제의 1 내지 약 99% 범위이고, 바람직하게는 5 내지 70% 범위이고, 가장 바람직하게는 10 내지 30% 범위이다.

경구투여에 적합한 본 발명의 조성물은 캡슐, 카세, 환제, 정제, 함당정제(향미 기본으로 사용하여, 보통 수크로스 및 아카시아 또는 트라가칸스), 분말, 과립, 하이드로젤, 또는 액성 또는 비액성 액체에서 용액 또는 현탁액으로, 또는 오일이 물속의 오일, 오일속의 물 같은 액체 이멀젼, 또는 엘릭시르 또는 시럼 또는 정제(젤라틴 및 글리세린, 또는 스쿠로스 및 아키시아와 같은 비활성 염기를 사용하여), 및/또는 구강세척 및 그의 유사체일 수 있고, 각각은 활성 첨가제로 FGF/길 항제 및/또는 세포독성 제제를 미리 정한 양을 함유한다. 화합물은 거환, 연약 또는 이고제로 투여될 수 있다.

경구투여(캡슐, 정제, 환제, 당제, 분말, 과립, 하이드로젤 및 그의 유사체)를 위하여 본 발명의 고형투여형태에서는, 활성 첨가제가 소듐 시트레이트 또는 디칼슘 포스페이트와 같은 하나 이상의 약학적 허용가능한 담체와 혼합한다. 캡슐, 정제 및 환제의 경우에 약학적 조성물은 버퍼제를 포함한다. 유사 형태의 고형 조성물은 고분자 폴리에틸렌 글리콜 및 그 유사체 뿐만 아니라 락토스 또는 젖당을 부형제로 사용하여 연한 또는 단단히 채워진 젤라틴 캡슐로 사용된다.

당의정, 캡슐, 알약, 과립 및 하이드로겔(hydrogel) 등과 같은 본 발명의 약학적 조성물의 정제 및 다른 고형 형태는 선택적으로 약학적 제형 분야에서 잘 아려진 장용 코팅(enteric coating) 및 다른 코팅 등과 같은 코팅 및 껍질(shell)로 준비될 수 있다. 이들은 또한 원하는 방출 속도를 제공하기 위한 다양한 비율의 하이드록시프로필메틸 셀룰로스, 다른 폴리머 매트릭스(matrix), 리포좀, 나노입자, 하이드로겔 및/또는 미세구(microsphere) 등을 사용하여 활성 성분의 방출을 느리게 하거나 또는 조절하기 위하여 제제화될 수 있다. 이들은 또한 예를 들면, 세균을 여과하는(bacteria-retaining) 필터를 사용하여 여과시키거나 또는 멸균된 물에 용해될 수 있는 멸균된 고형 조성물 형태의 멸균용 제제를 첨가하거나 또는 사용하기 직전에 어떤 다른 멸균된 주사용 물질을 사용함으로써 멸균될 수 있다. 상기 조성물들은 또한 선택적으로 불투명 물질을 함유할 수 있으며, 소화기의 특정한 부분에서 선택적으로 지연된 형태로(delayed manner) 활성 물질(들) 만을 또는 우세하게 방출할 수 있는 조성물일 수 있다. 사용될 수 있는 함입 조성물(embedding composition)의 예에는 폴리머 물질과 왁스를 포함한다. 활성물질은 또한 미세캡슐화된 형태일 수 있으며, 적절하게는 하나 또는 그 이상의 상기에서 기술된 부형제를 포함할 수 있다.

본 발명의 FGF 길항제/작용제 및/또는 세포독성 제제의 경구투여를 위한 액체 형태에는 약학적으로 허용 가능한 유탁액(emulsioin), 미세유탁액, 용액, 현탁액, 시럽 및 엘릭시르(elixir)를 포함한다. 상기 활성 성분에 더하여, 상기 액상 제제는 물 또는 다른 용매와 같이 이 분야에 통상적으로 사용되고 있는 비활성 희석제(diluents); 에탄올, 이소프로필알콜, 에틸카보네이트, 에틸아세테이트, 벤질알콜, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸렌 글리콜, 면실유, 땅콩유, 옥수수유, 검류, 올리브뷰, 캐스터 오일 및 참기름과 같은 오일, 글레세롤, 테트라하이드로푸릴 알콜, 폴리에틸렌 글리콜 및 솔비탄의 지방산 에스터 및 이들의 혼합물과 같은 통상적인 용매화제 및 계면활성제;를 포함한다.

활성 FGF 길항제/활성제 및/또는 세포독성 제제가 첨가된 현탁액은 에톡시화된 이소스테어릴 알콜(etoxylated isostearyl alcohol), 폴리옥시에틸렌 소르비톨(polyoxyethylene sorbitol) 및 소르비탄 에스터(sorbitan esters), 미세결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타하이드록사이드(aluminum metahydroxide), 벤토나이트(bentonite), 아가-한천(agr-agar) 및 트래거캔거스(tragacanth) 및 이들의 혼합물과 같은 현탁제제(suspending agents)를 포함한다.

본 발명의 직장 또는 질(vaginal) 투여용 약학적 조성물은 좌제(suppository)로 이루어지며, 하나 또는 그 이상의 FGF 길항제/활성제 및/또는 세포독성 제제를 코코아 버터, 폴리에틸렌 글리콜, 좌제 왁스 또는 살리실레이트(salicylate)와 같은 적절한 저작극성 부형제 또는 담체와 혼합하여 제조되며, 상온에서는 고형화 상태이나 인체 온도에서는 액상으로, 직장 또는 질 내에서 용해되어 상기 활성 제제가 방출된다.

또한 본 발명의 바람직한 질 투여용 조성물은 이 분야에서 적절하다고 공지된 담체가 함유된 페서리(pessaries), 탐폰(tampons), 크림, 겔, 페이스트, 폼 또는 스프레이 제제를 포함한다.

FGF 길항제/활성제 및/또는 세포독성 제제가 함유된 국소 투여 또는 경피 투여용 제제는 분말, 스프레이, 연고, 페이스트, 크림, 로션, 겔, 용액, 패치 및 흡입제(inhalants)를 더욱 포함한다. 상기 활성의 FGF 길항제/활성제 및/또는 세포독성제제는 무균 상태에서 약학적으로 허용가능한 담체와 혼합한 다음, 필요한 경우 보존제, 완충액 또는 추진제(propellant)와 혼합한다.

상기 FGF 길항제/활성제 및/또는 세포독성 제제가 함유된 연고, 페이스트, 크림 및 겔은 동물 및 식물 지방산, 오일, 왁스, 파라핀, 녹말, 트래거캔스, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 규산(silicic acid), 탈크, 산화 아염 또는 이들의 혼합물과 같은 부형제를 더욱 포함한다.

FGF 길항제/활성제 및/또는 세포독성 제제는 선택적으로 에어로졸(aerosol) 형태로 투여될 수 있다. 이는 상기 제제가 함유된 수용성 에어로졸, 리포좀 제조 또는 고형 입자의 제조함으로써 이루어진다. 플루오로카본 추진제와 같은 비수용 성 현탁액이 사용가능하다. 음속 분사기(sonic nebulizer)는 상기 추진체가 상기 제제를 분해를 유발할 수 있는 전단 응력(shear)에 대한 노출을 최소화함에 따라 바람직하다.

경피용 패치는 인체에 대한 FGF 길항제/활성제 및/또는 세포독성 제제의 조절 방출(controlled delivery)을 제공할 수 있는 잇점이 있다. 이러한 제형은 적절한 매질(medium)에 상기 제제를 용해 또는 분산시켜 제조할 수 있다. 또한 흡수 강화제(absorption enhancer)는 피부응 통과하는 펩티도미메틱(peptidomemetic) 유속을 증가시키는데 사용 가능하다. 상기 유속은 속도 조절막(rate controlling membrane)을 사용하거나 또는 고분자 기질 또는 겔 내에 펨티도미메틱을 분산시킴으로써 조절될 수 있다.

또한 눈 연고, 분말, 용액 및 이와 같은 안액제(ophthalmic formulation)는 본 발명의 범위 내에서 고려된다.

본 발명의 적절한 비경구 및/또는 강내(intracavity) 투여용 약학적 조성물은 하나 또는 그 이상의 FGF 길항제/활성제 및/또는 세포독성 제제를 하나 또는 그 이상의 약학적으로 허용가능한 무균 상태의 등장성 수용액 또는 등장성 비수용액, 분산액, 현탁액 또는 에멀젼, 또는 무균 분말과 혼합하고, 종래에 사용된 무균 상태의 주사가능한 용액 또는 분산액으로 다시 제조하고, 항산화제(antioxidants), 완충용액, 세균발육 저지제(bacteriostats), 용질(solute)을 포함하여 임의의 수용체 또는 현탁제제 또는 점도조절제의 혈액이 포함된 등장액 형태로 제조된다.

몇몇 경우에 있어, 약리 효과를 장기화하기 위하여, 피하 또는 근육내 주사 를 통하여 상기 제제의 흡수를 바람직하게 늦출 수 있다. 이는 물에 대한 낮은 용해도를 나타내는 결정성 또는 비결정성 재료의 액상 현탁액을 사용함으로써 이루어진다. 상기 제제의 흡수 속도는 용해 속도, 결정립의 크기 및 결정 형태에 의존한다. 선택적으로, 비경구 투여 제제의 흡수 지연은 오일 부형액(oil vehicle)내 함유된 제제를 용해 또는 분산시킴으로써 이루어진다.

폴리락타이드-폴리글리콜라이드와 같은 생분해성 고분자에 FGF 길항제/활성제 및/또는 세포독성 제제를 마이크로 캡슐, 실리더 및 디스크 형태의 매트릭스를 형성하여 주사가능한 또는 주입가능한 데포우(depot) 형태로 제조한다. 상기 약물 장출 속도는 제제 대 고분자의 비, 사용된 고분자의 특성에 의존하여 조절될 수 있다. 일예로 상기 생분해성 고분자는 폴리(오르소에스터) 및 폴리(언하이드라이드)를 포함한다. 또한 주사가능한 데포우 제제는 상기 약물을 생체적합성 있는 리포좀 또는 마이크로에멀젼에 포집시켜 제조한다. 또한 데포우 제제는 방광, 복강내 캐비티, 뇌 조직의 척수강내 등의 종양- 조직 및/또는 그 캐비티 내에 직접 투여가 가능하여, FGF 길항제/활성제 및/또는 세포독성 제제의 국부 이송을 이룰 수 있다.

"투여"는 의도한 바의 기능을 수행하기 위하여 FGF 길항제/활성제 및/또는 세포독성 제제를 주입하는 주입 방법을 의미한다. 상기 투여 방법은 피하, 정맥내, 비경구, 복강내, 척수강내 등에 주입하고; 방광을 통한 방광내 주사; 전립선 내; 경구; 흡입; 직장 및 경피로 주입하는 방법을 포함한다. 또한 약학적인 제제는 적절한 투여 방식에 따라 이루어진다. 예를들면, 상기 제제는 주사, 흡입, 점안액, 연고, 좌제 등 정제 또는 캡슐제로 투여된다.

또는 캡슐 형태, 주사제, 흡입제, 점안액, 연고, 좌제 등에 의한. 주사제는 대형환제 또는 연속주사에 의해 할 수 있다. FGF 길항물질/작용물질 및/또는 세포독성제는 단독 또는 상기 기술된 다른 약제 또는 약학적으로 허용가능한 담체를 단독 또는 혼합한 것을 포함한 주사제로 투여할 수 있다. FGF 길항물질/작용물질 및/또는 세포독성제는 다른 약제의 투여전에, 약제와 동시에 또는 약제의 투여 후에 투여할 수 있다. 더욱이, FGF 길항물질/작용물질 및/또는 세포독성제는 그것의 활성화된 대사물질 또는 인체내에서 더욱 활성화된 대사물질로 변형된 프로폼으로 투여할 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 "비경구 투여" 및 "비경구적으로 투여된"은 소화관내투여 및 전형적인 투여 이외의 투여의 형태를 의미하는 것으로, 대개 주사에 의한 투여 및 한정됨이 없이, 정맥내, 근육내, 동맥내, 척수강내, 피막내, 안와내, 심장내, 피내, 복강내, 경기관, 피하, 표피하, 관절내, 피막하, 지주막하, 척수내 및 흉골내 주사 및 주입을 포함한다.

본 명세서에서 사용되는 "전신 투여", "전신으로 투여된", "말초 투여" 및 "말초로 투여된"은 환자의 체계에 들어가는 것과 같이, FGF 길항물질/작용물질 및/또는 세포독성제의 투여를 의미하는 것으로, 물질대사 및 다른 과정을 수행한다.

선택된 투여 루트에 관계없이, 본 발명의 적당한 하이드레이트 형태를 사용한 FGF 길항물질/작용물질 및/또는 세포독성제 및/또는 약학적 조성물은 본 명세서의 기술들에 대해 이미 알려진 통상적인 방법에 의해 약학적으로 허용가능한 유효 량 형태로 나타낸다.

백신

본 발명은 또한 면역성의 FGF 폴리펩타이드, 또는 그들의 단편; FGF 수용체-유도 폴리펩타이드(FGFR 폴리펩타이드), 또는 그들의 단편, 또는 그들의 수용체와 주제를 면역시키기에 효과적인 양을 가진 생리학적으로 허용한 비독성 매개물에 분산된 FGF의 결합을 촉진하는 프로테오글리칸(PG)의 단편을 포함한 백신에 관한 것이다. FGF 또는 FGFR 폴리펩타이드, 또는 PG는 재조합 또는 그 외 다른 생물학적으로 제조 또는 합성하여 단일체 또는 다중체 형태의 FGF 또는 FGFR 폴리펩타이드, 또는 PG의 하나 또는 그 이상의 항원결정인자로 대응되는 하나 또는 그 이상의 아미노산 서열을 포함한다. 상기 폴리펩타이드는 보호 항체를 유도할 수 있는 백신을 포함하고 있다. 각 폴리펩타이드의 항원성을 향상시키기 위한 기술은 다합체의 구조를 혼입, 높은 항원성 단백질 담체를 결합, 예를 들어, 키홀 림페트 헤모시아닌(KLH), 또는 디프테리아 유독소(toxoid), 및 보조약 또는 면역 반응의 다른 향상체를 함유한 조합을 투여함을 포함한다.

단일체 또는 다중체 형태의 FGF 폴리펩타이드의 에피토프와 대응하는 아미노산 서열은 또한 화학적 합성 방법 또는 유전자적으로 변형된 미생물 또는 그들의 배양액을 포함한 생물학적 소스로부터 정제에 의해 얻어진다[Lerner, "Synthetic Vaccines", Sci. Am., 1983, 248(2), 66∼74]. 폴리펩타이드는 아미노산 서열과 다른 단백질의 단편을, 예를 들어 용융 단백질로서 합성되었을 때 또는 합성적 또 는 생물학적 기원의 다른 항원 또는 비항원 폴리펩타이드와 연결된 단백질의 단편을 포함한 다른 단백질/폴리펩타이드이 결합되어 있다. 어떤 경우에는, FGF 또는 FGFR 폴리펩타이드, 또는 PG, 예를 들어 면역원성의 및/또는 항원성의 단백질 또는 펩타이드를 백신의 효능을 증가시키기 위해 용융하는 것이 바람직하다.

"FGF 또는 FGFR 폴리펩타이드, 또는 PG의 에피토프"는 어떤 경우에 있어서, 단백질 또는 폴리펩타이드에서 자연적으로 발생한 아미노산 서열 변화는 항원성을 나타내며, 종양성질환 및/또는 항-종양형성 효과에 대항한 보호 항체를 형성하는 있는 실제적인 가능성을 포함하기 위한 것으로 해석할 수 있다. 가능한 서열 변형은 제한없이, 아미노산 치환, 늘림, 제거, 선단의 절단, 삽입 및 그들의 조합을 포함한다. 본 발명의 관찰된 범위내의 각 변형은 이러한 변형을 포함한 폴리펩타이드가 백신으로써 주사될 때 보호 항체 및 /또는 항-종양형성 활성도를 제공하기 위해 충분히 범위의 FGF 폴리펩타이드를 자연적으로 나타낸 면역체 및 항체인 것을 제공한다. 각 백신 조성물은 프라우드의 컴플리트 보강제와 같은 통상적으로 사용된 보강제와 같은 면역학적으로 허용가능한 현탁액을 포함한 생리적으로 허용가능한 배양액, 사포미니움, 알룸 등등을 조합할 수 있다. 투여는 면역학적으로 FGF 또는 FGFR 폴리펩타이드, 또는 PG의 유효한 양을 사용하며, 바람직하게는 수용자의 몸무게의 1 ㎏당 면역학적으로 활성 FGF 또는 FGFR 폴리펩타이드, 또는 PG의 0.01∼10.0 ㎍을 1회분으로 제공한다. 전체 보호된 투여량은 항원의 0.1∼100 ㎍이다.

투여 루트, 항원 투여량, 주사의 횟수는 본 발명의 일반적인 기술의 범위 내에 있는 모든 최적화한 것이다.

FGF 또는 FGFR 폴리펩타이드, 또는 PG인 항유전형 항체는 또한 백신으로써 유용하고 유사하게 형성될 수 있다는 것을 더욱 알 수 있다.

상기에서 일반적으로 기술된 본 발명은 하기 실시예에 의하여 보다 즉각적으로 이해될 수 있을 것이다. 그러나, 하기 실시예는 본 발명의 어떤 바람직한 실시예를 추가로 설명하기 위한 것일 뿐 본 발명을 제한하려는 것은 아니다.

이후의 실시예에서 사용되는 시약들과 실험 프로토콜들을 간단하게 하기에 기술한다.

화합물 및 시약

마우스 항-인간 aFGF 및 bFGF 단일클론 항체는 Sigma 사에서 구입하였다; LDH(lactate dehydrogenase) 분석, BrdU(bromodeoxyuridine) ELISA 및 인간 재조합 r-aFGF 및 r-bFGF는 Boehringer Mannheim으로부터 구입하였다. 항-aFGF 항체는 자연적으로 생성되는 aFGF 및 인간 재조합 aFGF와 반응하며, bFGF와는 교차반응(cross-react)하지 않는다(Ichimori, Y. et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 1991, 175, 229-235). r-aFGF 및 r-bFGF는 단량체 펩타이드이며, 아미노 말단의 추가적인 메티오닌 잔기를 제외하고는 14 kDa 인간 aFGF 또는 18 kDA 인간 bFGF와 동일하다(Jaye, M. et al., Science, 1986, 233, 541-545; Bohlen, P. et al., FEBS Letters, 1985, 18, 177-181).

종양 및 배양

인간 전립선 PC3 종양세포 및 래트 정상 소장 상피 IEC6 세포는 ATCC(American Type Culture Collection)으로부터 구입하였다. 래트 MAT-LyLu 종양세포 및 PC3-LN 세포는 각각 John Isaacs 및 Joy Ware 박사로부터 제공받았다.

수컷 Copenhagen 래트의 뒷다리에 이식되는 래트 MAT-LyLu 종양세포의 최초 클론은 이식된 부위에서 일차 종양을 생성하였으며, 일차 종양의 크기가 0.5 g 과 같거나 더 클 때 50%의 동물에서 서혜(inguinal) 림프절에 최초로 전이되었으며 추가적으로 폐에 전이되었다(Isaacs, J.T. et al., Invest. Urol., 1981, 19, 20-23). 림프절과 폐에 전이된 종양을 순차적인 재이식함으로써, 본 발명자들은 100%의 동물에서 더 빠르게 전이되는 써브클론(subclone)을 획득하였다(림프절의 경우에는 n=24, 폐 전이 종양의 경우에는 n=12).

한쌍의 일차 및 전이 종양은 동일한 숙주로부터 외과적으로 분리되었다. 비-괴사(non-necrotic) 부위의 절편은 조직배양으로 배양되었다. 단일세포 부유물(>95% 생존)은 종양 절편(~ 1 g)을 콜라게나제, EDTA 및 트립신과 함께 배양함으로서 획득하였다. 조직배양(~ 1 ㎣의 종양 절편) 및 단층 배양은 9%의 열에 의해 비활성화된 FBS(fetal bovine serum)를 포함하는 배지에서 배양하였다(Yen, W.C. et al., Pharm. Rs., 1996, 13, 1305-1312).

조건 배지에서의 단백질의 수집(collection) 및 분석

조건 배지(conditioned medium, CM)는 혈청이 포함되지 않은 배지에서 24시간동안 배양한 후 종양 조직배양(50 내지 100 ㎎의 종양 절편당 50 ㎖) 및 단층배양(8×10⁷ 세포당 40 ㎖)으로부터 수집된다(Cavanaugh, P.G. & Nicolson, G.L., Cancer Res., 1989, 49, 3928-3933). CM의 당량(aliquot)은 동결건조 후 0.1 mM 페닐메틸설포닐 플루오라이드 수용액에서 재구성함으로써 10,000배 농축되었으며, 15% SDS-PAGE(85 V에서 2.5 시간)에서 분석되었다. 단백질 밴드는 은염색(silver stain) 시약을 사용하여 시각화하였다. 웨스턴 블롯(Western blot)을 수행하기 위하여, 단백질은 전기영동에 의하여 폴리아크릴아마이드 겔에서 니트로셀룰로스 여과지로 전달되었으며, 100 mM Tris/150 mM NaCl/0.1% Tween 20(pH 7.6)에 용해된 5% 비지방 건조 우유와 5 ㎍/㎖ 농도의 aFGF 또는 bFGF 단일클론 항체와 순차적으로 배양하였다. 항체-면역활성 밴드는 화학발광(chemiluminescence) 블롯을 사용하여 시각화하였다.

농축된 CM에서의 aFGF와 bFGF의 수준(level)은 웨스턴 블롯에서의 밴드의 강도를 r-aFGF 및 r-bFGF의 표준 곡선 시료로부터 얻은 밴드의 강도와 비교함으로써 정량화하였다. 표준 곡선은 3 내지 100 ng의 r-aFGF 및 1 내지 160 ng의 r-bFGF 사이에서 직선을 이루었다.

CM 및 재조합 r-bFGF/r-aFGF의 전처리(pretreatment)

약제를 처리하기 전에, 종양 CM 및 1% FBS를 포함하는 r-aFGF 및/또는 r- bFGF를 포함하는 배지(최종 단백질 농도를 2 ㎎/㎖로 맞춤)로 세포를 4일동안 배양하였다. 배지는 이틀 간격으로 교체하였다.

시험관내 항-종양 활성 측정

조직배양에서의 약제의 항분열 효과는 자가방사선사진에 의해 정량화된 ³H-티미딘 함입(incorporation)의 저해로서 측정하였고(yen, W.C. et al., Pharm. Res., 1996, 13, 1305-1312), 단층 배양의 경우에는 설포로다민 B 분석(sulforhodamine B assay)에 의한 BrdU 함입의 저해 또는 전체 단백질의 감소로서 측정하였다(Au, J.L.-S. et al., Cancer Res., 1998, 58, 2141-2148). 단층 배양의 경우에, 두 가지 분석 방법은 질적으로 유사한 결과를 나타내었다. 96시간의 약제 처리 결과로 유도되는 세포사(cell kill)는 배양 배지로 방출되는 LDH에 의하여 관찰되었다. LDH 활성은 (490 nm의 파장에서) 테트라졸리움(tetrazolium)이 포르마잔(formazan)으로 변화되는 것으로써 측정하였다.

면역침전에 의한 CM으로부터의 aFGF와 bFGF의 제거

aFGF 또는 bFGF는 단백질 G PLUS/단백질 A 아가로즈(Oncogene)의 존재 하에서 각각의 단일클론 항체(1 ㎍/㎖)를 사용하여 면역침전되었다. 상기 과정은 최초(original) CM에서의 bFGF 농도(level)를 ELISA(Oncogene)에 의한 검출한계인 5 pg/㎖ 이하로 감소시켰으며, 농축된 CM에서의 aFGF 농도를 웨스턴 블롯에 의한 검출한계 이하로 감소시켰다.

<실시예 1> 종양의 환경과 종양의 위치가 항암제에 대한 저항성에 미치는 영향

본 실시예는 a) 고형 및 전이 종양에 존재하는 비유전적(epigenetic) 인자에 의해 매개되는 넓은 스펙트럼 화학저항성의 신규한 비유전적 메카니즘(epigenetic mechanism), 및 b) 종양을 전이된 부위에서부터 제거하거나 및/또는 종양의 미세환경을 파괴함으로써 야기되는 상기 인자들의 제거(loss)를 보여주는 세 가지 연구에 대하여 기술한다. 이러한 결론을 지지하는 상기 결과들은 하기 표 1에 나타내었다. 연구들은 파클리탁셀(paclitaxel, 항-마이크로튜뷸 제제), 독소루비신(doxorubicin, 토포아이소머라제 II 저해제) 및 5-플루오로우라실(항대사물질제)을 포함하는 다양한 구조와 작용 메카니즘을 가지는 항암제를 사용하여 수행되었다.

첫 번째 연구에서는 이형의 세포 유형들과 삼차원적 구조의 고형 종양들이 유지되는 래트의 일차 및 전이 종양의 조직배양에서의 화학감수성(chemosensitivity)을 동일한 종양을 트립신 처리하여 획득한 대응하는 단층배양 세포들의 화학감수성과 비교하였다. 조직배양에서의 2- 내지 40배나 낮은 화학감수성은 고형 종양에서의 유일한(unique) 환경이 화학저항성에 있어서 역할을 한다는 것을 나타낸다. 두 번째 연구에서는 폐 전이 종양의 조직배양 및 초기 단층배양이 림프절 전이 종양보다 저항성이 크며, 이것은 다시 피하 일차 종양보다 저항성이 크다는 것을 보여주는데, 이로부터 종양의 위치가 화학저항성의 정 도를 결정한다는 것을 알 수 있다. 세 번째 연구에서는 폐 및 림프절 전이 종양으로부터 유래되는 단층 배양세포가 세 번의 계대배양 후에 화학저항성을 잃어버리며, 모든 계대배양동안 화학저항성이 동일하게 유지되는 일차 종양의 단층 세포와 동일한 정도로 약제에 민감성을 나타내는 것을 보여준다. 상기 결과는 전이된 환경으로부터 세포가 벗어났을 때 전이된 종양에서의 화학저항성이 반전(reversal)되는 것을 나타낸다.

전이된 종양의 개별화(disaggregation) 및 단층배양에서의 계대배양에 aFGF 및 bFGF가 미치는 약제 저항성의 제거. 래트의 일차 및 전이 종양 쌍들은 조직배양 또는 단층배양으로 배양되었다. 조직배양의 경우에, 종양은 파클리탁셀로 24시간동안 처리하였고(12쌍의 일차 및 림프절 종양 및 2쌍의 일차민 폐종양), 독소루비신(3쌍의 일차 및 림프절 종양) 및 5-플루오로우라실(2쌍의 일차 및 폐종양)로 96시간동안 처리하였다. 일차배양의 경우, 96시간동안 약제를 세포에 처리하였고, 약제의 효과는 BrdU 함입의 저해로서 측정하였다. NM은 측정하지 않은 경우를 나타낸다. 조직배양의 경우^*, 10,000 nM 농도의 파클리탁셀은 <50% 저해를 나타내었으며, 나타낸 데이터는 30% 저해시의 농도이다. 일차 및 전이 종양간의 차이^†는 two-tailed Student t-검사 결과 p<0.05를 나타내었다.

	50% 저해를 보여주는 농도			pg/㎖ in CM
배지 조건	파클리탁셀, nM	독소루비신, nM	5-플루오로우라실, μM	aFGF	bFGF
조직배양* 일차 림프절 폐	>14±5 >227±94^† >1804±487^†	18±11 165±66 NM	33±12 NM 122±25^†	62±4 195±23^† 269±12^†	130±13 660±26^† 845±147^†
단층배양(계대 0) 일차 림프절 폐	10.7±0.5 32.9±3.6^† 92.4±6.9^†	8.0±0.5 31.0±2.3^† 77.0±2.9^†	0.79±0.04 1.90±0.06^† 2.84±0.24^†	62±7 100±8^† 118±13^†	93±23 243±39^† 302±41^†
단층배양(계대 1) 일차 림프절 폐	10.5±0.5 21.8±0.9^† 28.1±0.7^†	8.6±0.5 17.9±1.2^† 31.7±8.9^†	0.85±0.03 1.29±0.06^† 1.52±0.08^†	NM NM NM	NM NM NM
단층배양(계대 2) 일차 림프절 폐	10.3±0.8 15.0±0.9^† 21.5±3.7^†	8.0±0.4 11.0±0.4^† 16.6±1.0^†	0.79±0.06 1.09±0.04^† 1.20±0.04^†	NM NM NM	NM NM NM
단층배양(계대 3) 일차 림프절 폐	10.0±0.2 11.7±0.3 11.4±0.7	8.0±0.2 7.8±0.5 8.0±0.5	0.78±0.04 0.83±0.10 0.81±0.04	54±4 51±3 58±2	95±9 89±10 103±12

<실시예 2> 고형 및 전이된 종양에서 세포외(extracellular) 인자에 의한 항암제 저항성의 유도

본 실시예은 전이된 종양에서 세포외 인자에 의한 화학저항성의 유도를 확인하고, 전이된 종양세포가 단층으로 계대배양되는 동안의 상기 인자의 점진적인 제거를 보여주는 실험에 대하여 기술한다.

래트 종양 배양액 유래의 CM을 수집하고 그것의 효과를 화학감수성으로 측정하였다. 본 실험 및 이후의 실험들은 래트의 일차 종양세포와 인간의 전립선 종양세포를 사용하여 수행되었다. 양쪽 세포 유형 모두에 있어서 질적으로 유사한 결과들이 얻어졌으며, 이것은 관찰시의 일반적인 성질을 나타낸다(도 1). 조직 배양 및 전이된 종양의 초기 단층배양 유래의 CM(활성형의 전이된 종양 CM으로 나타냄)은 약제에 대한 3 내지 10배의 저항성을 유도한 반면에(p<0.05), 전이된 종양의 후기 단층배양 유래의 CM 및 일차 종양 유래의 CM(비활성형의 CM으로 나타냄)은 효과가 없었다.

<실시예 3> 항암제에 대한 저항성을 유도하는 몇가지 세포외 인자로서의 bFGF 및 aFGF의 동정

본 실시예는 종양세포 유래의 조건 배지(CM)에 존재하는 증가된 농도의 aFGF 및 bFGF의 존재를 보여주는 실험에 대하여 기술한다.

종양세포가 항암제에 대한 저항성을 가지도록 야기시키는 세포외 인자의 동정은 활성형 및 비활성형 CM에 존재하는 단백질을 비교함으로써 확립되었다(표 1). 간략하게 설명하면, 일차 종양, 림프절 종양 및 폐종양의 조직배양 및 동일한 종양의 초기 단층배양(계대 0)에서 수집한 활성형 CM을 동일한 종양의 후기 단층배양(계대 3)에서 수집한 비활성형 CM과 비교하였다. 비교를 위하여 r-aFGF(20 ng) 또는 r-bFGF(5 ng)을 함유하는 대조군 레인(lane)을 처리하였다.

활성형 CM은 두가지 단백질의 농도가 2 내지 7배 높았는데, 면역블롯에 의하여 각각 aFGF(약 14 kDa) 및 bFGF(약 18 kDa)로 동정되었다. 몇몇 관찰 결과는 이들 단백질과 저항성 사이에 원인-및-결과 관계가 있음을 제시한다. 첫 번째로, 다른 종양 배양 시스템의 CM에 존재하는 aFGF/bFGF 농도의 순위(rank order)는 이러한 배양액에서의 화학저항성의 순위와 일치하였다. 두 번째로, 전이된 종양을 단 층으로 계대배양할 때 상기 단백질들이 점진적으로 제거되는 것은 상기 단층배양 CM이 화학저항성을 유도하는 능력의 감소와 일치하였다. 세 번째로, 전이된 종양의 단층배양(계대 3)에서의 단백질의 수준은 일차 종양의 단층배양에서와 동일한 수준으로 감소되었고, 양쪽 배양액 모두에 있어서 동일한 약제 저항성이 나타났다. 네 번째로, 단층배양의 경우, CM에서의 aFGF/bFGF 농도는 상대적인 화학저항성과 의미있는 정도로 연관되었다(Pearson 시험결과 p<0.0001).

<실시예 4> 항암제에 대한 저항성에 있어서의 세포외 aFGF 및 bFGF의 역할

본 실시예는 a) 세포외 aFGF 및 bFGF가 항암제에 대한 넓은 스펙트럼의 저항성을 유도하고 지속시키는데 관여하고 있음을 보여주고; b) 저항성을 유도하는데는 aFGF가 아니라 bFGF가 필요한 반면에 aFGF는 bFGF의 효과를 증폭시키는데 관여하고 있음을 보여주는 여섯 가지의 연구에 대하여 기술한다.

첫 번째 연구에서는 세포외 aFGF 및 bFGF에 특이적인 저해제, 즉, 단일클론 항체를 사용하였다(도 2의 A). 활성형의 CM 존재하에서 항체를 aFGF 또는 bFGF에 처리할 경우 약제의 활성을 변화시키지 않았는데, 이것은 항체가 기준(baseline) 화학감수성에 대하여 영향을 미치지 않음을 보여준다. 활성형의 CM 존재하에서, bFGF 항체는 CM에 의해 유도되는 화학저항성의 농도-의존적인 반전(reversal)을 보여주었는데, 5 ㎍/㎖ 항체에 의해서 완전하게 반전된 반면에 비특이적 항체(즉, 비-면역성 토끼 IgG)의 경우에는 효과가 없었다. aFGF의 경우에는, 항체를 처리함으로써 CM에 의해 유도되는 저항성을 부분적으로 반전시켰다; 최대 반전의 경우 약 60% 였는데 이것은 1 ㎍/㎖ 농도의 항체를 사용하였을 때 획득되었으며, 상기 농도보다 5배 높은 농도에서도 추가적으로 의미있는 반전은 나타나지 않았다. 두 번째 연구에서는 면역침전에 의하여 활성형의 CM으로부터 aFGF 및/또는 bFGF를 제거한 경우의 효과에 대하여 나타내었다. bFGF를 제거한 경우에는 저항성이 완전히 사라진 반면에 aFGF를 제거한 경우에는 단지 부분적으로만 CM의 효과를 반전시켰다. 상기 두가지 연구는 aFGF 및 bFGF 모두 저항성에 관여하지만 서로 다른 역할을 하고 있음을 나타낸다.

세 번째 연구에서는 aFGF 및/또는 bFGF가 저항성을 위하여 요구되는지 여부를 결정하였다. 내인성(endogenous) aFGF 및/또는 bFGF는 면역침전에 의하여 활성형의 CM으로부터 제거되었고, 이후에 재조합 단백질을 사용하여 CM을 재구성하였다. 내인성 aFGF 또는 bFGF가 CM으로부터 제거되었을 때, 각각에 상응하는 재조합 단백질을 내인성 단백질의 농도 정도로 첨가함으로써 저항성이 완전하게 회복되었다(도 2의 B). CM으로부터 두가지 단백질이 모두 제거되었을 때, a) r-aFGF를 첨가하는 경우에는 저항성을 유도하지 않은 반면에 r-bFGF를 첨가하면 농도 의존적으로 저항성이 유도되었는데, 이것은 aFGF가 아니라 bFGF가 저항성에 필요하다는 것을 나타내고, b) 저항성을 회복하기 위하여 요구되는 외인성(exogeneous) r-bFGF의 농도는 자연적인 CM의 경우 또는 내인성 aFGF가 존재하는 경우에는(즉, 50 ng/㎖ vs 약 0.9 ng/㎖) 내인성 bFGF의 농도보다 55배 높았다. 나중의 결과는 aFGF에 의한 bFGF의 증폭을 의미한다. 상기 사실은 네 번째 연구에서 확인되는데, 여기에서는 aFGF/bFGF가 고갈된 CM이 r-aFGF 및 r-bFGF를 이용하여 내인성 단백질의 생리적 인 농도로 재구성되었을 때 화학저항성이 완전하게 복구되는 것을 보여준다. 다섯 번째 연구에서는 저항성을 유도하기 위하여 단지 r-aFGF 및 r-bFGF만을 사용함으로써(즉, 면역침전된 CM 없이), aFGF 및 bFGF가 화학저항성의 주된 원인이라는 것을 확인하였다(도 3). 단독으로 사용될 경우에는, r-aFGF는 효과가 없는 반면에 r-bFGF는 농도-의존적인 저항성을 유도하였다. r-aFGF/r-bfGF를 CM에서의 내인성 단백질의 농도정도로 조합한 경우에는(즉, 0.16 및 0.32 ng/㎖ r-aFGF와 1 ng/㎖ r-bFGF 사이), CM의 경우와 동일한 정도의 저항성을 유도하였으며, 높은 단백질 농도에서는 훨씬 증가된 저항성이 나타났다.

상기에서 관찰되는 화학저항성은 일차적으로는 항증식성 약제 효과로서 측정되었다. 여섯 번째 연구에서는 약제의 세포사 효과를 측정하였다. 유사한 발견이 관찰되었는데, 즉, 활성형 전이 종양 CM 및 r-bFGF는 약제에 의한 세포사에 대한 저항성을 유도한 반면에 r-aFGF는 저항성을 유도하지 않고 r-bFGF의 효과를 향상시켰다(도 4). 따라서, FGF에 의해 유도되는 저항성은 항증식성 및 세포사 효과 모두를 나타낸다.

<실시예 5> 항암제에 대한 종양세포의 감수성 증가에 관한 aFGF 및 bFGF의 저해제를 사용한 시험관내 데이터

본 실시예는 aFGF 및/또는 bFGF의 저해제가 항암제에 대한 종양의 감수성을 증가시키는 것을 보여준다.

도 2의 A는 단일클론 항체를 사용하여 aFGF 및/또는 bFGF를 저해함으로써 인 간 및 설치류의 종양세포에 대한 파클리탁셀, 독소루비신 및 5-플루오로우라실의 세포독성이 증가되는 것을 보여준다. 이와 마찬가지로, 도 2의 B는 세포 배양 배지로부터 aFGF 및/또는 bFGF를 제거하기 위하여 항-aFGF 단일클론 항체 및/또는 항-bFGF 단일클론 항체를 사용하였을 때 동일한 결과가 나타나는 것을 보여준다. 본 발명자들은 추가로 aFGF 및 bFGF의 다른 저해제, 즉 수라민(suramin) 역시 FGF에 의해 유도되는 저항성을 반전시키고 시험관내 및/또는 생체내 조건 하에서 적어도 58가지의 항암제 활성을 증가시키는 것을 보여준다(실시예 8 참조).

수라민은 음전하를 띄는 분자이며, aFGF 및 bFGF를 포함하는 다양한 성장 인자의 작용을 저해한다(Middaugh, C.R. et al., Biochem., 1992, 31, 9016-9024). 도 5는 수라민을 첨가함으로써 래트 MAT-LyLu 종양세포, 인간 전립선 PC3 종양세포 및 PC3의 전이된 세포, 즉 PC3-LN 세포에서의 CM에 의해 유도되는 파클리탁셀, 독소루비신 및 5-플루오로우라실에 대한 저항성을 농도-의존적으로 반전시키는 시험관내 실험 결과를 보여준다. 완전한 반전은, 실시예 6에서 나타난 바와 같이, 10 내지 15 μM 농도의 수라민을 사용하였을 때 나타났으며, 단독으로 사용된 경우에는 항종양 효과를 나타내지 않았다.

<실시예 6> 의미있는 정도의 세포독성을 나타내지는 않는 낮은 농도의 수라민을 사용한 경우의 항암제 활성의 향상에 대한 시험관내 데이터

본 실시예는 수라민에 의한 항암제 활성의 향상이 FGF에 의해 유도되는 화학저항성을 저해하기에는 충분하지만 의미있는 정도의 세포독성을 나타내기에는 충분 하지 않은 정도의 낮은 수라민 농도에서 일어나는 것을 보여준다.

도 6은 실시예 5 및 실시예 7에서 기술된 연구에서 사용된 종양세포주에 대한 수라민의 농도-반응 곡선을 보여준다. BrdU 함입의 50% 감소효과를 일으키기 위하여 요구되는 수라민의 농도(즉, IC₅₀)는 단독으로 사용되는 경우에는 래트 MAT-LyLu 종양세포에 있어서는 235 μM, 인간 전립선 PC3 종양세포에 있어서는 93 μM 및 인간 전립선 PC3-LN 종양세포에 있어서는 98 μM 이었다. 이러한 IC₅₀ 수치는 FGF에 의해 유도되는 저항성을 완전하게 반전시키기 위하여 요구되는 농도(1 내지 15 μM, 실시예 5 및 실시예 7 및 표 2 참조)보다 6 내지 200배 높은 것이다. 1 내지 15 μM 농도에서는, 수라민은 측정할만한 세포독성을 나타내지 않았다(즉, <10%의 세포수의 감소 및/또는 증식 지수). 따라서, 수라민에 의한 항암제의 항종양 효과의 향상은 비독성을 나타내는 수라민의 농도에서 일어난다.

두 번째 연구에서는 FGF에 의해 유도되는 항암제에 대한 저항성을 억제하기 위하여 충분한 정도의 농도에서 수라민이 bFGF가 그의 수용체에 결합하는 것을 완전히 저해하는지 여부를 결정하였다. 본 연구는 래트 MAT-LyLu 종양세포를 모델 종양세포로 사용하고 독소루비신 및 파클리탁셀을 모델 항암제로 사용하여 수행되었다. 저항성을 유도하기 위하여 사용된 CM은 폐 전이 세포의 조직배양으로부터 수집되었다(표 1 참조). 5 ㎍/㎖ 농도의 항-bFGF 항체가 첨가되었다. 상기 결과는 1.6 μM 농도의 수라민 존재하에서 독소루비신 및 파클리탁셀의 IC₅₀는 항체의 존재 여부에 상관없이 각각 13 및 14 nM로서 변하지 않았음을 보여준다. 상기 결 과는 수라민 및 bFGF 항체는 동일한 작용 메카니즘을 공유하며, 수라민 단독으로는 1 내지 2 μM 농도에서 bFGF에 의해 유도되는 저항성을 완전하게 억제한다는 것을 나타낸다.

<실시예 7> 다양한 스펙트럼의 항암제가 수라민에 의해 반전되는 aFGF/bFGF에 의해 유도되는 저항성을 나타낸다.

본 실시예는 하기 표 2에 요약되는데, 이것은 항튜불린/항마이크로튜불 제제, 토포아이소머라제 I 저해제, 토포아이소머라제 II 저해제, 항대사물질 제제, 알킬화 제제 및 신호 전달 경로를 방해하는 물질을 포함하는 다양한 작용 메카니즘의 스펙트럼을 가지는 적어도 58가지의 항암제에 대한 저항성을 aFGF 및 bFGF가 유도하는 것을 보여준다.

실험 조건은 아래에 간략하게 기술되어 있다. 인간 전립선 PC3 종양세포를 aFGF 및 bFGF로 96시간동안 전처리한 후, 15 μM 농도의 수라민이 첨가되거나 첨가되지 않은 조건에서 96시간동안 약제를 처리하였다. 전체 단백질 농도를 측정하는 설포로다민 B 분석을 사용하여 세포수를 측정하였다. 표 2에 나열된 모든 약제는 a) aFGF 및 bFGF에 의해 유도되는 저항성(즉, 높은 IC₅₀), 및 b) 수라민의 처리에 의한 저항성의 반전(즉, 수라민을 처리함으로써 FGF 처리하지 않았을 때의 최초 수치로 IC₅₀을 감소시켰다)을 나타낸다. FGF에 의해 유도되는 저항성은 FGF 농도에 의존적이었으며, FGF의 농도가 증가할수록 저항성도 증가되었다.

aFGF/bFGF에 의해 유도되는 저항성을 보이고, 수라민을 처리함으로써 FGF에 의해 유도되는 저항성의 반전을 보이는 항암제의 종류

약제 종류/이름	50%의 저해를 나타내기위하여 요구되는 약제의 농도, IC₅₀
	대조군 (약제만 처리함)		aFGF 0.3 ng/㎖ + bFGF 1 ng/㎖			aFGF 1 ng/㎖ + bFGF 3 ng/㎖
	수라민 비처리	수라민 15 μM	수라민 비처리	저항성, 배수	수라민 처리	수라민 비처리	저항성, 배수	수라민, 처리
항튜불린/항마이크로튜불 제제
Paclitaxel, nM (NSC 125973)	2.16	2.13	6.53	3.02	1.88	12.08	5.59	2.01
Vincristine, nM (NSC 67574)	6.58	6.82	26.30	4.00	6.68	44.55	6.77	7.14
Vinblastine, nM (NSC 49842)	0.33	0.40	0.45	1.36	0.42	0.78	2.36	0.35
Vindesine, nM	0.39	0.35	0.53	1.36	0.37	0.82	2.10	0.43
Vinorelbin, nM	3.99	3.29	5.25	1.32	3.60	9.01	2.26	3.84
Taxotere, nM (NSC 628505)	2.29	2.02	2.53	1.11	2.24	3.46	1.51	2.16
토포아이소머라제 I 저해제
Topotecan, nM (NSC 609699)	22.16	21.67	31.09	1.40	20.78	53.88	2.43	21.01
Camptothecin, nM (NSC 94600)	5.03	4.80	11.38	2.26	5.40	17.20	3.42	5.78
토포아이소머라제 II 저해제
Doxorubicin, nM (NSC 123127)	27.79	35.86	145.21	5.23	29.84	281.06	10.11	27.93
Etoposide, μM (NSC 141540)	1.84	1.75	2.34	1.27	1.60	3.40	1.85	1.61
Mitoxantrone, μM (NSC 301739)	0.18	0.16	0.33	1.83	0.18	0.53	2.94	0.18
Daunorubicin, nM (NSC 82151)	29.45	29.10	97.44	3.31	26.54	156.85	5.33	30.24
Idarubicin, nM (NSC 256439)	4.45	5.05	11.88	2.67	4.45	31.21	7.01	4.30
Teniposide, μM (NSC 122819)	0.40	0.42	1.14	2.85	0.39	1.98	4.95	0.36
Amsacrine, μM (NSC 249992)	0.71	0.68	1.321	1.85	0.74	1.90	2.66	0.67
Epirubicin, nM (NSC 256942)	102.45	119.54	166.64	1.63	122.06	281.63	2.75	136.66
Merbarone, μM (NSC 336628)	22.99	28.63	46.66	1.67	24.87	80.77	2.89	29.45
Piroxantrone Hydrochloride, μM	0.34	0.32	0.81	2.38	0.33	1.28	3.77	0.28

약제 종류/이름	50%의 저해를 나타내기위하여 요구되는 약제의 농도, IC₅₀
	대조군 (약제만 처리함)		aFGF 0.3 ng/㎖ + bFGF 1 ng/㎖			aFGF 1 ng/㎖ + bFGF 3 ng/㎖
	수라민 비처리	수라민 15 μM	수라민 비처리	저항성, 배수	수라민 처리	수라민 비처리	저항성, 배수	수라민, 처리
항대사물 제제
5-fluorouracil, μM (NSC 19893)	2.21	2.39	5.05	2.29	2.16	12.61	5.71	2.14
Methotrexate, μM (NSC 740)	32.11	28.84	60.55	1.89	30.60	80.55	2.51	33.69
6-mercaptopurine, μM (NSC 755)	1.57	1.67	2.99	1.90	1.70	5.50	3.50	1.55
6-thioguanine, μM	0.28	0.32	0.96	3.43	0.32	1.44	5.14	0.30
Fludarabine, μM (NSC 321887)	5.15	5.20	13.45	2.61	4.69	21.91	4.25	5.85
Cytarabine/Ara-C, μM (NSC 63878)	0.39	0.46	1.27	3.26	0.42	3.26	8.41	0.45
Trimetrexate, nM (NSC 352122)	33.60	33.12	54.01	1.61	30.59	95.90	2.85	28.89
Gemcitabine, nM (NSC 613327)	6.84	6.95	9.61	1.41	6.12	13.09	1.91	5.99
Acivicin, μM (NSC 163501)	1.58	1.28	3.34	2.11	1.65	5.52	3.49	1.63
Alanosine, μM (NSC 153353)	2.06	2.15	4.18	2.03	2.40	7.08	3.44	2.12
Pyrazofurin, μM (NSC 143095)	3.38	3.83	4.07	1.20	3.65	11.06	3.27	3.80
PALA, μM (NSC 224131)	240.84	249.28	254.54	1.06	236.32	291.74	1.21	201.38
Pentostatin, μM (NSC 218321)	336.31	310.39	365.68	1.09	305.84	458.71	1.36	417.26
5-azacitidine, μM (NSC 102816)	6.09	6.94	13.80	2.27	6.45	26.37	4.33	7.32
5-aza-2'-deoxycytidine, μM (NSC102816)	6.63	6.14	14.03	2.12	6.54	26.28	3.96	6.39
Adenosine arabinoside (Ara-A), μM	21.51	22.66	33.60	1.56	18.97	45.73	2.13	20.97
Cladribine, μM (NSC 105014)	0.35	0.36	0.46	1.31	0.35	0.65	1.86	0.34
5-fluorouridine, μM (NSC 519273)	0.28	0.28	0.44	1.57	0.33	0.70	2.50	0.29
5-fluorodoeoxyuridine, nM (NSC 27640)	5.88	7.11	9.03	1.54	6.60	12.30	2.09	5.75
Tiazofurin, μM (NSC 286193)	7.50	7.90	14.57	1.94	7.25	19.24	2.57	6.15

약제 종류/이름	50%의 저해를 나타내기위하여 요구되는 약제의 농도, IC₅₀
	대조군 (약제만 처리함)		aFGF 0.3 ng/㎖ + bFGF 1 ng/㎖			aFGF 1 ng/㎖ + bFGF 3 ng/㎖
	수라민 비처리	수라민 15 μM	수라민 비처리	저항성, 배수	수라민 처리	수라민 비처리	저항성, 배수	수라민, 처리
알킬화 제제/삽입(intercalating) 제제
Cisplatin, μM (NSC 119875)	2.76	2.69	4.85	1.76	3.09	10.19	3.69	3.01
Carboplatin, μM (NSC 241240)	2.25	2.11	3.79	1.68	2.29	9.10	4.04	2.31
Mitomycin C, μM (NSC 26980)	1.61	1.53	3.06	1.90	1.69	4.70	3.92	1.60
BCNU, μM (NSC 409962)	33.51	34.23	52.24	1.56	36.52	75.64	2.26	33.33
Melphalan, μM (NSC 8806)	4.19	4.02	12.85	3.07	4.48	24.61	5.87	3.97
Thiotepa, μM (NSC 6396)	3.85	4.07	19.08	4.96	4.09	33.16	8.61	4.17
Busulfan, μM (NSC 750)	86.21	89.20	97.85	1.14	101.83	127.45	1.48	82.77
Chlorambucil, μM (NSC 3088)	31.92	33.11	53.45	1.67	44.44	88.33	2.77	37.55
Plicamycin, nM (NSC 24559)	204.00	184.42	344.62	1.69	182.37	459.78	2.25	216.64
Dacarbazine, μM (NSC 45388)	36.63	37.61	53.69	1.47	32.41	107.94	2.95	39.68
Ifosfamide, μM (NSC 10924)	2.66	2.23	5.01	1.88	2.22	8.12	3.05	2.55
Cyclophosphamide, μM (NSC 26271)	0.51	0.48	1.11	2.18	0.57	1.53	3.00	0.50
Nitrogen Mustard, μM (NSC 762)	0.49	0.47	1.13	2.31	0.42	2.17	4.43	0.54
Uracil Mustard, μM (NSC 34462)	30.02	38.21	42.40	1.41	37.59	67.14	2.24	34.60
Pipobroman, μM (NSC 25154)	136.14	93.99	193.88	1.42	125.26	183.54	1.35	108.89
4-ipomeanol, μM (NSC349438)	4105.59	4507.00	3775.76	0.92	5040.69	5133.55	1.25	3929.73
다른 작용 메카니즘
Dihydrolenperone, μM (NSC 343513)	24.59	28.11	44.53	1.81	26.06	82.92	3.37	23.90
Spiromustine, μM (NSC 172112)	25.32	24.45	54.52	2.15	25.41	87.62	3.46	26.65
Depsipeptide, nM (NSC 630276)	1.12	1.03	1.55	1.38	1.16	2.16	1.93	1.16

<실시예 8> aFGF/bFGF에 의해 유도되는 항암제에 대한 저항성은 다양한 암 세포주에서 발견된다.

본 실시예는 표 3에 요약되어 있는데, 전립선, 폐, 인두, 대장, 유방 및 혈액을 포함하는 다양한 인간 및 동물 기관에서 유래된 다양한 암 세포주 및 약제의 방출에 관여하는 p-글리코단백질을 코딩하는 mdr1 유전자로 안정하게 형질전환된 인간 유방암 세포주에서 aFGF 및 bFGF가 파클리탁셀, 독소루비신, 5-플루오로우라실 및/또는 플루다라빈에 대한 저항성을 유도하는 데이터가 아래에 기재되어 있다.

실험 조건은 아래에 간략하게 기재되어 있다. 세포를 인간 재조합 r-aFGF 및/또는 r-bFGF로 96시간 동안 전처리한 후 약제를 96시간 동안 처리하였다. 인간 전립선, 폐, 인두, 대장 및 유방암 세포주에서 유래된 세포에 대한 연구에서는, BrdU 함입의 저해에 의하여 약제의 방출을 결정하였다. 인간 백혈병 세포에 대한 연구에서는, 대사적으로 활성적인 세포의 수를 측정하는 MTT 분석에 의하여 약제의 방출을 측정하였다(Alley, M.C. et al., Cancer Res., 1988, 48, 589-601).

고형 종양에서 유래된 세포주의 경우에는, 실험 결과로부터 5가지 세포주(전립선암 세포주 PC3, 유방암 세포주 MCF7, mdr-1에 의해 형질전환된 유방암 세포주 BC19, 폐암 세포주 A549, 대장암 세포주 MAT-LyLu)에서 aFGF 단독으로는 저항성을 유도하지 않는 반면에 bFGF 단독으로는 저항성을 유도하며, 두가지 세포주(인두암 세포주 FaDu, 대장암 세포주 HT29)의 경우에는 영향이 없음을 알 수 있다. 그러나, r-aFGF 및 r-bFGF를 조합한 경우에는 상기 모든 7가지 세포주에서 저항성을 유도하였다. 이것은 세포주가 다르면 aFGF 및 bFGF에 대한 요구도 달라진다는 것을 나타낸다. 실험결과는 r-aFGF는 r-bFGF의 효과를 50배 이상 증폭시킨다는 것을 추가로 보여준다(즉, 1 ng/㎖의 r-aFGF와 1 ng/㎖의 r-bFGF의 조합은 50 ng/㎖의 r- bFGF를 단독으로 처리한 경우보다 더 큰 저항성을 유도하였다).

인간 백혈병 세포주, 즉 CCRF-CEM 세포주의 경우에는 r-aFGF(1 ng/㎖) 및 r-bFGF(3 ng/㎖)의 조합이 플루다라빈(fludarabine)에 대한 저항성을 유도하였다; 96시간 동안 처리하면, 50%를 생성하기 위하여 요구되는 플루다라빈의 농도가 FGF가 존재하지 않는 경우에는 4 μM 이었고 FGF가 존재하는 경우에는 6 μM 이었다.

FGF에 의해 유도되는 저항성은 다양한 인간 및 설치류 종양세포주에서 발생한다.Pac=paclitaxel; Dox=doxorubicin; 5-FU=5-fluorouracil. BC19 세포주는 mdr1으로 형질전환된 MCF7 세포주이다. *은 대조군과 비교해서 p<0.05 임을 뜻한다.

암세포주

r-bFGF ng/㎖

50% 저해를 나타내기 위하여 요구되는 약제의 농도, nM

r-aFGF ng/㎖

50% 저해를 나타내기 위하여 요구되는 약제의 농도, nM

r-aFGF + r-bFGF ng/㎖

50% 저해를 나타내기 위하여 요구되는 약제의 농도, nM

Pac

Dox

5-FU

Pac

Dox

5-FU

Pac

Dox

5-FU

인간 전립선 PC3

0 1 10 50

1.2 1.2 2.1* 3.3*

8.1 8.5 23.8* 50.8*

741 846 2409* 4303*

0 1 10 50

1.2 1.2 1.1 1.2

8.2 8.3 8.1 8.4

810 815 695 732

0 0.04+1 0.08+1 0.16+1 0.32+1 0.64+1 1+1

1.2 1.2 2.1* 3.1* 4.7* 5.8* 6.9*

8.2 8.5 15.2* 35.3* 62.2* 84.8* 107*

810 761 1147* 1636* 2542* 3772* 5738*

인간 폐 A549

0 1 10 50

0.87 0.9 1.07 1.22

119 118 238* 285*

870 1008 1375 1708*

0 1 10 50

NM

122 120 123 118

NM

0 0.04+1 0.08+1 0.16+1 0.32+1 0.64+1 1+1

NM

122 118 159* 238* 309* 386* 582*

862 908 995* 1009 1625* 2090* 3633*

인간 인두 FaDu

0 1 10 50

0.77 0.79 0.74 0.82

14.2 13.9 14.1 13.7

4336 4561 4794 4250

0 1 10 50

0.82 0.80 0.82 0.83

13.5 13 13.7 14.0

5750 5503 5448 5248

0 0.04+1 0.08+1 0.16+1 0.32+1 0.64+1 1+1

0.82 0.84 0.82 0.81 0.84 2.01* 3.50*

13.5 13.5 14.0 13.7 14.1 27.5* 54.0*

5750 5444 5438 5471 5557 9694* 15193*

인간 대장 HT-29

0 1 10 50

2.1 2.0 1.9 2.0

24.1 24.4 24.5 26.1

2093 2362 2226 2252

0 1 10 50

2.1 2.0 1.9 2.0

30.2 32.1 30.3 30.0

1643 1625 1578 1634

0 0.04+1 0.08+1 0.16+1 0.32+1 0.64+1 1+1

2.2 2.0 2.0 2.1 3.5* 6.2* 10.8*

30.2 29.1 30.0 30.5 48.1* 72.7* 131.4*

1643 1764 1550 1608 2766* 5211* 7070*

인간 유방 MCF7

0 0.01 0.1 1

0.32 0.45* 0.84* 1.3*

16.9 21.3 37.6* 59.5*

991 1028 1369 1507

측정하지 않음

인간 유방 BC19

0 0.01 0.1 1

59.6 112* 183* 236*

128 150 270* 407*

975 1068 1373 1514*

측정하지 않음

래트 전립선 MAT-LyLu

0 1 10 50

12.7 16.3 47.8* 214*

10.3 18.3* 54.0* 238*

746 1050* 1990* 2154*

측정하지 않음

<실시예 9> 세포독성을 나타내지 않는 정도의 수라민을 사용한 경우에 있어서의 잘-확립된 종양에 대한 항암제 활성의 향상에 관한 생체내 데이터

본 실시예는 몇 가지 인간 이종이식(xenograft) 종양을 가지는 면역이 결핍된 마우스를 이용하여 수라민에 의한 파클리탁셀 및 독소루비신의 항암 효과 향상에 대한 추가적인 데이터를 제공하는 네 가지의 연구에 대하여 기술한다.

수라민을 처리하거나 처리하지 않은 경우의 파클리탁셀 및 독소루비신의 활성이 면역결핍 마우스에서 조사되었다(수컷 Balb/c nu/nu 마우스, 6 내지 8 주령). 동물의 사육은 오하이오 주립 대학교의 지침에 따라 실시하였다. 몇 가지 인간 종양 모델이 사용되었으며, 여기에는 a) 인간 PC3-LN 종양세포를 정맥주사한 폐 전이 모델, b) 인간 PC3 세포주를 폐에 직접 주입한 폐종양, 및 c) 피하에 이식된 PC3 종양을 포함한다. 네 가지 연구가 수행되었다. 모든 연구에 있어서, 약제의 투입은 종양이 확립된 후에 꼬리정맥을 통하여 정맥으로 주입되었다. 첫 번째와 두 번째 연구에서는 정맥주입된 PC3-LN 폐 전이 모델을 사용하였다. 간략하게 설명하면, 인간 PC3-LN 세포(0.1 ㎖ 생리식염수에 10⁶ 세포)가 면역결핍 마우스의 꼬리정맥을 통하여 정맥주사되었다. 그 결과, 100%의 동물에서 폐에 전이가 되었다(Ware, J.L. et al., Exp. Cell Biol., 1985, 53, 163-169). 4주가 경과한 후, 종양의 확립은 두 마리의 무작위로 선별된 동물의 폐를 조사하여 결정하였고, 남아있는 동물에 대한 약제의 투여는 상기 두 마리의 동물에서 적어도 5개의 약 1 ㎜ 직경의 종양 덩어리(nodule)가 생길 때 시작하였다. 마우스는 200 ㎕의 생리식염수, 화학요법제를 포함하는 생리식염수, 10 ㎎/㎏ 수라민 또는 화학요법제와 수 라민의 조합으로 정맥주사되었다(1분 이상). 화학요법제로는 첫 번째 연구에서는 독소루비신(5 ㎎/㎏)을 사용하였고, 두 번째 연구에서는 파클리탁셀(택솔, 15 ㎎/㎏)을 사용하였다. 투여는 매주 2번씩 3주동안 실시하였다. 설치류에서의 예비 약학동역학(preliminary pharmacokinetic) 데이터 결과 상기 양(dose)을 투여한 후 72시간에 독소루비신의 경우에는 약 10 nM, 파클리탁셀의 경우에는 5 내지 7 nM, 수라민의 경우에는 10 μM의 혈장 농도를 가진다는 것을 나타낸다. 실시예 6에서 알 수 있는 바와 같이, 수라민의 농도는 FGF에 의해 유도되는 화학저항성을 반전시키기에 충분하였다. 독소루비신 및 파클리탁셀의 농도는 PC3-LN 세포의 단층 배양의 경우에는 각각의 IC₅₀ 수치와 거의 같거나 그 이상이었다(즉, 독소루비신의 경우 17 nM, 파클리탁셀의 경우 8 nM). 선별된 수라민의 투여량은 다른 마우스 종양에 대해서는 생체내 항암 활성을 나타내지 않았다(Chahinian, A.P. et al., J. Surg. Oncol., 1998, 67, 104-111; Shin, R., et al., Scand., J. Gastroenterol., 1997, 32, 824-828). 약제의 처리가 완료된 후 3일째에 동물을 안락사시키고 폐를 적출하였으며, 종양 덩어리(nodule)를 시각화하기 위하여 Bouin 용액에서 고정시킨 후 조직학적 검사를 실시하였다. 표면으로부터 수직으로 200 내지 300 ㎛ 깊이에 있고 5개의 폐엽(lobe)을 가지는 조직 절편(5 ㎛ 두께)을 획득하였다. 종양이 차지한 폐의 표면적(픽셀의 수로 계수함)은 Adobe PhotoShop 프로그램을 사용하여 전체 폐의 표면적에 대한 분획(fraction)으로 계산되었다. 잔존하는(residual) 종양에 있어서의 종양세포의 수 및 각각의 종양에 있어서의 아폽토시스 세포의 분획을 현 미경을 사용하여 결정하였다. 아폽토시스 세포는 시간이 지남에 따라 사라지기 때문에, 아폽토시스의 정도를 측정하기 위한 두 번째 방법으로 잔존하는 종양에 있어서의 비-아폽토시스 세포의 밀도를 측정하였다. 이것은 400배 배율의 현미경 상에서 무작위로 선별된 비-아폽토시스 종양세포를 계수함으로써 결정하였다. 평균적으로, 대조군 및 수라민 군에 있어서는 동물당 10개의 판(field) 또는 >1,500 세포가 계수되었고, 독소루비신 군에 있어서는 >600 세포가 계수되었다. 동물당 5개 이하의 종양 덩어리가 존재하는 경우의 조합 치료(combination therapy)에 있어서는, 모든 잔존하는 세포들(동물당 20 내지 600 세포)이 계수되었다.

두가지 연구 결과, 수라민은 잘-확립된 인간 폐 전이 세포를 가지는 마우스에서 약제의 생체내 항종양 효과를 향상시킨다는 것을 알 수 있다.

표 4는 독소루비신에 대한 결과를 보여준다. 수라민 단독으로는 의미있는 항종양 효과 뿐만 아니라 세포독성도 나타내지 않았다. 독소루비신 단독으로는 종양을 박멸하지 못했으나, 잔존하는 종양에 있어서 종양의 크기를 약 80% 정도까지 감소시켰고 아폽토시스 세포의 분획은 3배, 비-아폽토시스 세포의 밀도는 절반으로 감소시켰으며, 또한 약 20%의 체중 감소를 야기시켰다. 대조군 및 단일 약제군(single agent group)의 모든 동물들은 폐의 아래 위 부분(ventral and dorsal) 표면에서 종양이 관찰된 반면, 독소루비신/수라민 조합 군에 있어서는 단지 40%의 동물만이 폐의 표면에 종양이 관찰되었다. 폐 조직의 조직학적 관찰 결과, 대조군 및 단일 약제군의 모든 동물에 있어서 현미경적 종양 부위가 발견되었으나, 독소루비신/수라민 군의 동물에 있어서는 단지 58%만이 현미경적 종양 부위 가 발견되었다. 따라서, 독소루비신 치료에 있어서 수라민을 첨가하면 항종양 효과를 의미있게 향상시켰으며, a) 42%의 동물에서 종양이 박멸되었고, 및 b) 잔존하는 종양을 가지는 나머지 58%의 동물에서의 추가적인 종양 크기의 감소(추가적으로 10배), 비-아폽토시스 종양세포의 밀도 감소(추가적으로 4배) 및 아폽토시스 세포 분획의 향상(추가적으로 3배)을 야기시켰다. 독소루비신에 수라민을 첨가하는 것은 체중의 감소를 증가시키지는 않았는데, 이것은 수라민이 독소루비신의 숙주에 대한 독성을 향상시키지는 않음을 나타낸다.

수라민은 종양세포의 정맥주사에 의하여 확립된 인간 폐 전이 종양을 가지는 마우스에서의 독소루비신의 생체내 항암효과를 향상시킨다. 네 개의 군에 있어서 투여전(pretreatment) 평균 체중은 21 내지 22 g 이었다. 눈으로 보았을 때 폐 표면에서 종양이 보이지 않고 5개의 무작위적인 조직 단편을 현미경으로 보았을 때에도 종양이 보이지 않는 동물들은 종양이 없다고 간주된다. 평균±SD.^* 대조군 및 수라민 군과 비교하였을 때 p<0.05 임을 나타낸다.^†모든 다른 군과 비교하였을 때 p<0.05 임을 나타낸다.

투여(n)	종양이 없는 동물의 %	종양이 차지하는 폐의 표면적 %	종양당 아폽토시스 세포 %	잔존하는 종양에서의 비-아폽토시스 세포의 밀도, cells/field	최종적인 체중, 투여전 수치의 %
생리식염 대조군 (10)	0	9±4	9±6	157±37	104±5
수라민, 10 ㎎/㎏ (10)	0	7±3	10±7	139±30	101±10
독소루비신, 5 ㎎/㎏ (10)	0	2±1^*	29±16^*	77±17^*	82±4^*
독소루비신 + 수라민 (12)	42^†	0.2±0.3^*	77±12^*	22±14^†	84±8^*

파클리탁셀에 대한 수라민의 효과에 관한 유사한 발견들이 관찰되었다. 표 5는 수라민 단독으로는 의미있는 항종양 효과뿐만 아니라 세포독성도 가질 수 없음을 보여준다. 파클리탁셀 단독으로는 비-아폽토시스 세포의 밀도를 약 70% 정도 감소시켰고, 아폽토시스 세포의 분획을 13배 증가시켰으며, 약 7%의 체중 감소를 야기시켰다. 파클리탁셀 치료에 수라민을 첨가하는 것은 항종양 효과를 의미있게 향상시켰는데, 이것은 비-아폽토시스 종양세포의 밀도를 추가로 감소시키고(추가적으로 30배) 아폽토시스 세포의 분획을 거의 두배 증가시키는 결과를 가져왔다. 파클리탁셀 치료에 수라민을 첨가하는 것은 체중의 감소를 증가시키지는 않았는데, 이것은 수라민이 파클리탁셀의 숙주에 대한 독성을 향상시키지는 않는다는 것을 나타낸다.

수라민은 종양세포의 정맥주사에 의하여 확립된 인간 폐 전이 종양을 가지는 마우스에서의 파클리탁셀의 생체내 항암효과를 향상시킨다. 네 개의 군에 있어서 투여전 평균 체중은 21 내지 22 g 이었다. 평균±SD.^* 대조군 및 수라민 군과 비교하였을 때 p<0.05 임을 나타낸다.^†모든 다른 군과 비교하였을 때 p<0.05 임을 나타낸다.

투여(n)	종양당 아폽토시스 세포 %	잔존하는 종양에서의 비-아폽토시스 세포의 밀도, cells/field	최종적인 체중, 투여전 수치의 %
생리식염 대조군 (4)	4±2	171±35	96±11
수라민, 10 ㎎/㎏ (4)	4±3	185±104	101±5
파클리탁셀, 15 ㎎/㎏ (4)	53±24^*	49±35^*	93±11
파클리탁셀 + 수라민 (4)	98±7^†	1.6±6^†	92±8

세 번째 연구는 기관 내부에 직접 종양을 주사하여 확립된 폐종양에서의 독소루비신 활성의 향상을 보여준다. 간략하게 설명하면, PC3 세포를 면역결핍 마우스의 폐에 직접 주입하였다(폐 당 2.5×10⁶ 세포). 종양의 확립은(5일째) 무작위로 선별된 동물을 시각적으로 조사하여 확인하였다. 남아있는 동물은 독소루비신 단독의 경우(5, 8 및 11일째에 각각 10 ㎎/㎏씩 투여), 수라민 단독의 경우(20 ㎎/㎏씩 3회 투여) 및 두가지 약제의 조합의 경우로 나누어 정맥내 볼루스(bolus) 주입을 하였다. 동물들은 12일째에 안락사시켰다. 폐를 적출한 후 잔존하는 종양을 시각적으로 조사하였다. 처음 두가지 연구에서 기재된 것과 같이 조직 절편을 얻은 후 현미경으로 검사하였다. 투여되지 않은 대조군(n=4) 및 수라민 군(n=3)에서는 종양이 없어진 동물이 한 마리도 없었지만 독소루비신 군(n=4)에서는 종양이 없 어진 동물이 한 마리 있었고(25%), 독소루비신/수라민 조합군(n=5)에서는 모든 동물에서 종양이 없어졌다(100%). 조합군과 다른 세가지 군의 차이는 의미있는 정도였다(p<0.04). 상기 데이터는 수라민이 독소루비신의 항종양 활성을 증가시킨다는 것을 보여준다.

네 번째 연구에서는 피하의 부피가 큰(bulky) 종양에서 수라민이 독소루비신의 항종양 효과를 증가시킨다는 것을 보여준다. 간략하게 설명하면, PC3 세포(5×10⁶ 세포)는 피하에 주사되었다. 약제의 처리(수라민 10 ㎎/㎏, 독소루비신 5 ㎎/㎏ 또는 이들의 조합을 3주동안 주당 2회 투여)는 종양이 확립된 후 시작되었다. 평균적인 종양의 크기는 최초 처리할 당시에 150 ㎎이었다.

도 7의 A는 a) 처리되지 않은 대조군과 수라민 군에서 종양의 크기가 3 내지 4배 증가하였는데 이것은 수라민 단독으로는 항종양 활성이 없음을 나타내고, b) 독소루비신 단독으로는 종양의 성장은 감소시키지만 종양의 수축(regression)을 야기시키지는 않았고, c) 독소루비신 + 수라민의 조합은 첫주 동안에는 종양의 성장을 감소시켰고 3주간의 투여가 끝날 때까지 종양의 수축을 일으켰음을 보여준다. 동물의 체중에 대한 결과(도 7의 B)는 a) 수라민 단독으로는 체중의 감소를 일으키지 않았고, b) 독소루비신은 17%의 체중 감소를 일으켰고, 및 c) 수라민을 독소루비신에 첨가하는 것은 체중의 감소를 향상시키지는 않았음을 보여준다.

<실시예 10> 항암제에 대한 종양, 종양의 크기 및 종양의 감수성에 있어서의 aFGF 및 bFGF의 농도(level) 사이의 상관관계

본 실시예는 종양 및 조양의 크기에 있어서의 aFGF 및 bFGF 농도의 상관관계 및 항암제에 대한 종양 및 종양의 감수성에 있어서의 bFGF 농도의 상관관계를 설명한다.

첫 번째 연구에서는 종양세포가 조직에서의 세포외 bFGF 농도에 미치는 영향에 대하여 조사하였다. 간략하게 설명하면, 인간 전립선 PC3 종양세포는 면역결핍 마우스에 진피내(intradermally) 이식되거나 폐에 직접적으로 이식되었다. 종양을 동물로부터 적출한 후 약 10 ㎎을 조직배양하였다. 24시간에 배양 배지를 수집하였고 bFGF에 대하여 분석하였다. bFGF의 농도는 PC3 세포에서는 2 pg/106 세포(대략 2 pg/㎎), 정상 폐 조직에 있어서는 0.13 pg/㎎, 정상 피부 조직에 있어서는 0.62 pg/㎎, PC3를 포함하는 폐종양에 있어서는 3.2 pg/㎎ 및 PC3를 포함하는 피부 종양에 있어서는 11.3 pg/㎎ 이었다. 따라서, 종양을 가지는 조직에서의 bFGF의 농도는 종양세포와 정상 조직에서의 bFGF 농도의 합을 상회하는데, 이것은 종양세포의 존재가 bFGF 농도를 증가시켰다는 것을 의미한다. 증가된 폭은 폐의 경우에는 25배, 피부의 경우에는 18배였다. 비교를 위하여, 마우스의 뇌 조직은 0.027 pg/㎎의 bFGF를 포함하였고, 간 조직은 0.636 pg/㎎의 bFGF를 포함하였다. 상기 결과로부터, a) 조직이 다르면 bFGF의 농도가 다르고, 및 b) 종양세포의 존재가 bFGF 농도를 의미있게 증가시킨다는 것을 알 수 있다.

두 번째 연구에서는 세포외 bFGF 농도와 종양의 크기와의 상관관계에 대하여 조사하였다. 인간 전립선 PC3 종양세포는 면역결핍 마우스에 피하 이식되었다. 피하이식된 종양은 1 내지 7주 후 숙주동물로부터 적출되었고, 약 200 ㎎이 조직배양되었다. 배양 배지는 24시간에 수집되었고 ELISA를 사용하여 bFGF의 농도를 분석하였다. bFGF의 농도는 시간이 지남에 따라 증가되었는데, 1주째 종양의 경우에는 27 pg/㎖, 2주째 종양의 경우에는 56 pg/㎖, 3주째 종양의 경우에는 77 pg/㎖, 그리고 4 내지 7주째 종양의 경우에는 80 내지 87 pg/㎖ 사이의 일정한 농도에 도달하였다. 1, 2 및 3주째의 bFGF 농도간의 차이는 통계학적으로 의미가 있다. 이것은 bFGF 농도와 종양의 크기사이에 양의 상관관계가 있음을 나타낸다.

세 번째 연구에서는 인간 종양 및 종양의 감수성에 있어서 항암제에 대한 aFGF 및 bFGF 농도 사이의 상관관계를 조사하였다. 이번 연구는 인간 환자로부터 얻은 96개의 종양을 사용하여 수행되었는데, 여기에는 방광, 유방, 머리와 목, 난소 및 전립선 종양을 포함한다. 파클리탁셀을 모델 약제로 사용하였다. 간략하게 설명하면, 방광 종양의 조직배양은 2시간 동안 파클리탁셀로 처리하였고 나머지 종양들은 96시간동안 처리하였다. 약제-유도성 항증식은 DNA 전구체 함입의 저해에 의하여 측정되었고, 아폽토시스는 형태학적인 변화 및 닉(nicked) DNA의 표지에 의하여 측정되었다. aFGF, bFGF 및 약제 저항성에 기여한다고 알려진 다른 단백질들(즉, mdr1 p-글리코단백질, p53 및 bcl-2)은 면역조직화학(immunohistochemical) 염색에 의하여 검출되었다.

61%의 종양(61/96)에서 bFGF 염색이 양성을 나타내었다. aFGF는 방광 종양에서 높게 발현되었다. 난소 및 전립선 종양은 중간정도의 aFGF 농도를 나타내었고 머리와 목 및 유방 종양에서는 낮은 양성 반응을 나타내었다. aFGF는 단지 세 포질에서만 발견되었다. 파클리탁셀은 84%의 종양에서 항증식 작용을 나타내었고 96%의 종양에서 아폽토시스를 유도하였다. bFGF의 발현은 파클리탁셀-유도성 항증식에 대한 저항성(p<0.001) 및 파클리탁셀-유도성 아폽토시스(p=0.13)와 연관이 있었다. 다중회귀분석(multiple regression) 및 Akaike Information Criterion을 사용한 통계학적 분석 결과, 종양의 단계, 등급, 분열 지수 및 bFGF, p-글리코단백질, p53 및 bcl-2 단백질의 발현을 포함하는 병리생화학적 인자들 중에서 bFGF의 발현이 인간 환자로부터 얻은 종양에 있어서의 파클리탁셀의 항증식 효과 및 전체적인 세포독성(즉, 항증식 + 아폽토시스)에 대한 저항성의 가장 적합한 지표였다(하기의 표 6 참조). aFGF를 bFGF에 첨가하면 연관성이 증대된다(표 6).

전체적으로, 이러한 결과들은 종양에서의 aFGF 및 bFGF의 농도는 종양의 위치와 종양의 크기에 의해서 결정되며, 다음으로 aFGF/bFGF 농도는 항암제에 대한 종양의 감수성을 결정한다는 것을 나타낸다. 종양에서의 다양한 FGF 농도는 개개의 환자에 있어서 치료방법을 결정하는데 FGF의 농도가 사용될 수 있음을 뜻한다.

병리생화학적인 인자와 화학감수성간의 상관관계. 높은 r² 수치(다중회귀분석으로부터) 및 낮은 AIC 수치(Akaike Information Criterion analysis로부터)는 더 나은 예측 수치를 나타낸다. 다중인자의 조합에 있어서, 가장 좋은 예상 지표는 가장높은 r² 수치 뿐만 아니라 가장 낮은 AIC 수치를 보이는 것이다. 통계학적인 분석은 REG 소프트웨어를 사용한 선형회귀분석(linear regression analysis)으로 수행되었다. 0.05보다 작은 p 수치는 통계학적인 의미를 가진다.

항증식성, 최대 효과(%)	r²	AIC	p 수치
bFGF	0.16	595	<0.001
종양의 단계	0.14	596	<0.001
p-글리코단백질(Pgp)	0.11	600	0.001
증식 지수(PI)	0.08	603	0.006
종양의 등급	0.07	604	0.01
p53	0.06	605	0.02
bcl-2	0.05	606	0.03
AFGF	0.03	608	0.1
bFGF + 단계	0.26	584	<0.001
bFGF + aFGF	0.23	588	<0.001
bFGF + 단계 + bcl-2	0.30	581	<0.001
bFGF + 단계 + bcl-2 + p53	0.33	579	<0.001
bFGF + 단계 + bcl-2 + p53 + PI	0.34	579	<0.001
bFGF + 단계 + bcl-2 + p53 + PI + Pgp	0.34	581	<0.001
bFGF + 단계 + bcl-2 + p53 + PI + Pgp + 등급	0.35	582	<0.001
전체적인 효과(항증식성 + 아폽토시스)	r²	AIC	p 수치
bFGF	0.12	587	<0.001
증식 지수(PI)	0.11	588	0.001
종양의 단계	0.10	589	0.001
p53	0.08	591	0.004
bcl-2	0.03	596	0.10
p-글리코단백질(Pgp)	0.03	596	0.10
aFGF	0.03	600	0.1
종양의 등급	0.03	597	0.11
bFGF + PI	0.20	580	<0.001
bFGF + aFGF	0.18	582	<0.001
bFGF + aFGF + PI	0.24	577	<0.001
bFGF + aFGF + PI + p53	0.28	574	<0.001
bFGF + aFGF + PI + p53 + Bcl-2	0.30	573	<0.001
bFGF + aFGF + PI + p53 + Bcl-2 + 단계	0.30	574	<0.001
bFGF + aFGF + PI + p53 + Bcl-2 + 단계 + Pgp	0.31	575	<0.001

<실시예 11> 항암제를 처리한 암세포는 세포외 bFGF 농도가 증가되었다.

본 실시예는 표 7에 요약되어 있는데, 인간 전립선 PC3 종양세포에 다양한 작용 메카니즘과 화학구조를 가지는(즉, 항마이크로튜불, 토포아이소머라제 I 저해제, 토포아이소머라제 II 저해제, DNA 알킬화 제제) 적어도 7가지의 항암제를 처리하면 세포외 bFGF의 농도가 의미있게 증가되는 것을 보여주는 데이터이다.

실험 조건은 아래에 간략하게 기술되어 있다. 인간 전립선 PC3 종양세포를 약제로 72시간 동안 처리하였다. 처리가 끝난 후 남아있는 세포를 Coulter 계수기로 계수하였다. 세포외 bFGF의 농도는 ELISA를 사용하여 측정하였다. 세포외 배양 배지로 방출되는 LDH(lactate dehydrogenase)는 세포사(cell death)를 나타내는 것이며, 배양 배지 속으로의 세포 내용물의 방출을 측정한다. 만일 세포외 bFGF 농도의 증가가 세포사 및 용혈에 의한 bFGF의 방출로부터 기인한다면, bFGF의 증가는 동일한 정도로 LDH의 증가와 동반할 것이다. 이것은 더 높은 bFGF 농도 및 일정한 bFGF-대-LDH 비(ratio)를 나타낼 것이다. 다른 한편으로, 세포외 bFGF의 증가가 증가된 bFGF의 생산 및 세포 용혈 이외의 다른 요인에 의한 세포로부터의 bFGF의 방출에 기인한다면 더 높은 bFGF 농도 및 더 높은 bFGF-대-LDH 비를 나타낼 것이다.

표 7의 결과로부터, 모든 시험된 약제를 처리하면 3 내지 30배 높은 세포외 bFGF 농도가 나타남을 알 수 있다(p<0.05). 이러한 높은 bFGF 농도는 세포 수가 80% 감소함에도 불구하고 나타났는데, 이것은 처리되지 않은 대조군과 비교하였을 때 세포의 기준에서 약제가 처리된 세포에서 훨씬 더 많은 bFGF의 생산이 일어났음을 뜻한다. bFGF 농도의 증가는 높은 bFGF-대-LDH 비와 동반되었는데, 이것은 세포외 bFGF 농도의 증가가 적어도 부분적으로는 살아있는 세포로부터의 증가된 bFGF의 생산 및 방출에 기인함을 뜻한다.

약제의 처리로부터 야기되는 종양세포에서의 세포외 bFGF 농도의 증가는 화학요법으로 치료된 환자가 화학저항성을 나타낼 수 있음을 뜻한다. 이것은 다시 말하면 암 치료에 실패하고 종양이 재발한 환자에 있어서 FGF의 저해제를 사용할 필요가 있음을 말해준다.

약제의 처리는 bFGF의 생산과 세포외 공간으로의 방출을 증가시킨다.

약제의 농도 nM	72시간에 남아있는 세포의 수 ×10⁶ (대조군에 대한 %)	세포외의 농도
약제의 농도 nM	72시간에 남아있는 세포의 수 ×10⁶ (대조군에 대한 %)	bFGF, pg/㎖	bFGF, 대조군에 대한 %	LDH, 대조군에 대한 %	bFGF:LDH 비율
Paclitaxel 0 2.5 5 10	2.3(100%) 2.0(87%) 1.0(43%) 0.5(22%)	5.62 19.5 76.3 164	100 347 1358 2917	100 225 437 705	1.00 1.54 3.11 4.14
Doxorubicin 0 20 60 200	2.5(100%) 2.1(84%) 1.2(48%) 0.4(16%)	4.72 5.87 11.3 21.8	100 124 239 461	100 119 173 316	1.00 1.05 1.38 1.46
Vinblastine 0 0.5 1 2	2.3(100%) 1.7(74%) 1.0(43%) 0.4(17%)	8.76 59.1 94.0 179	100 675 1073 2046	100 263 326 513	1.00 2.57 3.29 3.99
5-fluorouracil 0 2000 6000 20000	2.5(100%) 2.2(88%) 1.4(56%) 0.6(24%)	6.00 8.37 11.35 17.8	100 139 189 296	100 121 158 202	1.00 1.15 1.20 1.46
Cisplatin 0 2000 6000 20000	2.2(100%) 1.9(86%) 1.0(45%) 0.4(18%)	6.14 5.87 95.9 101	100 267 1561 1641	100 169 534 563	1.00 1.58 2.92 2.88
Camptothecin 0 2 6 20	2.4(100%) 2.0(83%) 1.2(50%) 0.5(21%)	6.27 9.08 13.9 17.5	100 145 221 279	100 137 182 219	1.00 1.06 1.22 1.28

<실시예 12> 항암제에 대한 FGF-유도 저항성은 변경된(altered) 약제의 축적 또는 변경된 세포의 증식에 기인하는 것이 아니다.

본 실시예는 항생제에 대한 FGF-유도성 저항성이 약제의 방출과 변경된 세포 증식을 포함하는 알려진 화학저항성 메카니즘과는 다른 신규한 메카니즘이라는 것에 대하여 설명한다.

실험조건은 아래에 간략하게 기재되어 있다. 인간 전립선 PC3 종양세포 및 래트 MAT-LyLu 종양세포는 폐 전이의 조직배양으로부터 수집된 활성형 CM을 첨가하거나 첨가하지 않고 r-bFGF를 첨가하여 ³H-파클리탁셀(인간 PC3 세포의 경우 1 nM, 래트 종양세포의 경우 10 nM), ¹⁴C-독소루비신(각각에 대하여 50 및 100 nM) 및 ³H-5-플루오로우라실(각각에 대하여 500 nM)을 처리하였다(Au, J.L.-S. et al., 1998, supra). 인간 및 래트 세포에서의 세포외 약제의 농도는 각각의 IC₅₀(50% 저해 농도) 수치에 기초해서 선택되었다. PC3 세포주의 경우에는 모든 세가지 약제에 대하여 4시간 후에 세포외 약제의 농도가 평행(plateau)을 이루었고, 래트 세포의 경우에는 1시간(독소루비신 및 5-플루오로우라실) 및 4시간(파클리탁셀)에 평행을 이루었다.

상기 결과는 이러한 약제의 처리가 종양세포에서의 약제의 축척을 변경시키지는 않는다는 것을 보여준다; 파클리탁셀, 독소루비신 및 5-플루오로우라실의 세포외 농도는 인간 PC3 종양세포에서 각각 약 0.5, 40 및 0.1 pmol/10⁶ 세포로 변화 되지 않았다; 그리고 래트 종양세포의 경우에는 각각 약 1, 80 및 24 pmol/10⁶ 세포였다(각각의 경우에 n=6). 따라서, FGF-유도 화학저항성은 약제의 축적을 감소시키는데 기여하는 것이 아니며, 이것은 이전에 보고된 약제 방출 단백질의 과발현에 의한 것과는 다르다(Lum, B.L. et al., Cancer, 1993, 72, 3502-3514; Barrand, M.A. et al., Gen. Pharmacol, 1997, 28, 639-645; Fidler, I.J., Cancer Chemother. Pharmacol., 1999, 43, S3-S10).

CM 또는 r-bFGF를 처리하는 것은 또한 지수적으로(exponentially) 성장하는 세포의 배가시간(doubling time)을 변경하지는 않았는데, 즉 래트 및 PC3 종양세포에 대하여 각각 17 및 24시간으로 변하지 않고 남아있었다. 그러므로, FGF-유도 화학저항성은 변경된 세포 증식으로부터 기인하는 것은 아니다.

<실시예 13> FGF는 항암제에 대한 넓은 스펙트럼 저항성의 신규한 비유전적(epigenetic) 메카니즘을 유도한다.

여기에서 기술된 발견들은 a) 고형 종양 및 전이된 종양이 세포독성 상해(insult)를 제거하기 위하여, 암 세포가 유일한 미세환경(unique microenvironment)을 이용하는 신규한 비유전적 메카니즘을 설명하고, b) 화학요법에 대한 종양의 감수성에 있어서의 세포외 성장 인자의 중요한 역할을 확립하고, 및 c) aFGF/bFGF 저해제를 조합한 화학요법을 사용하는 새로운 치료 범례(paradigm)를 기술한다.

이러한 결과들은 세포외 aFGF/bFGF에 의해 일차적으로 매개되고 세포내 약제 축적의 의미있는 변화나 세포의 증식을 포함하지는 않는 넓은 스펙트럼의 항암제 저항성의 신규한 메카니즘을 확립한다. 세포외 aFGF/bFGF의 저해에 의한 저항성의 반전은 수용체에 대한 이러한 단백질의 결합을 포함하는 메카니즘을 제시한다.

세포외 aFGF/bFGF 농도, 종양의 위치, 전이된 종양의 분해(disaggregation)에 있어서의 상기 단백질의 점진적인 제거 및 분해된 세포의 단층으로의 계대배양 사이의 연관성으로부터 aFGF/bFGF 농도와 종양의 성장 환경 사이의 상관관계가 있음을 알 수 있다. 일차 종양과 비교하였을 때 전이된 종양에서의 높은 bFGF 농도를 가지는 것은 국소 종양과 비교하였을 때 전이된 종양을 가지는 환자의 소변에서 발견되는 높은 bFGF 농도와도 일치한다(Huang, A. et al., Exp. Cell Res., 1994, 213, 335-339). 활성형의 전이된 종양 CM과 환자의 경우에서 발견되는 정도의 aFGF/bFGF 농도에서 유도되는 의미있는 저항성으로부터(Huang, A. et al., 1994, supra) 이러한 저항성 메카니즘의 중요성 및 임상적인 관련성을 알 수 있고, 전이된 종양에서의 증가된 aFGF/bFGF 농도가 전이된 종양에 대한 화학요법의 효능을 제한하는 중요한 메카니즘임을 제시한다. 생체내에서의 화학저항성의 정도는 CM에 의해서 유도되는 3 내지 10배의 저항성보다는 큰데, 이것은 고형 종양내에 있는 국소 환경에서의 aFGF/bFGF 농도가 수집되는 동안에 500 내지 1000배정도 희석되는 CM에서의 농도를 상회할 수 있기 때문이다.

<실시예 14> 항암제의 세포독성으로부터 FGF에 의한 소화기 세포의 보호

본 실시예는 비-종양성의 소화기 상피세포에 aFGF 및 bFGF을 처리하면 상기 세포가 파클리탁셀 및 독소루비신과 같은 항암제의 독성으로부터 보호된다는 것을 보여준다.

간략하게 설명하면, 래트의 정상 소화기 상피 세포(IEC6)가 사용되었다. 상기 세포는 정상의 비-종양성 소화기 상피로부터 유래되었다. 세포를 1 ng/㎖의 aFGF와 3 ng/㎖의 bFGF로 96시간동안 처리한 후 24시간동안 독소루비신 또는 파클리탁셀을 처리하였다. 약제의 효과는 처리되지 않은 대조군에 대한 상대적인 BrdU 함입의 감소로서 측정되었다. 그 결과, 독소루비신에 대한 IC50은 aFGF 및 bFGF가 없는 경우의 292 nM에서 aFGF 및 bFGF가 존재하는 경우에는 544 nM로 증가하였고, 파클리탁셀의 경우에는 491 nM에서 1446 nM로 증가하였다. 이러한 사실은 aFGF/bFGF를 처리함으로써 항암제의 독성으로부터 정상 소화기 세포가 보호된다는 것을 의미한다.

<실시예 15> 세포 배양 시스템

세포 배양 분석 실험은 래트 전립선 MAT-LyLu 종양세포 및 인간 전립선 PC3 종양세포 또는 그것이 전이된 세포주인 PC3-LN 세포에서 수행될 수 있다. 만약 본 발명에서 요구하는 사항이 상기 세가지 세포주중 어느 한가지와 부합된다면, FGF 길항제의 선택 및 투여량은 본 발명에서 사용되는데 적합하다. 바람직하게는 PC3 세포주가 사용된다.

인간 전립선 PC3 종양세포는 ATCC(American Type Culture Collection)으로부 터 구입할 수 있다. 래트 MAT-LyLu 종양세포 및 PC3-LN 세포는 John Isaacs 박사(Johns Hopkins 대학) 및 Joy Ware 박사(Virginia 대학)로부터 각각 제공받았다. PC3 및 PC3-LN 세포의 배가시간은 대략 24시간이며, MAT-LyLu 세포의 경우에는 약 15 내지 17시간이다. 모든 세가지 세포주는 5% CO₂와 95%의 공기를 가지는 습한 환경에서 37℃의 온도로 단층배양되어야 한다. PC3 세포 및 PC3-LN 세포는 열에 의해 불활성화된 9% FBS, 2 mM의 1-글루타민, 100 ㎍/㎖의 글루타미신 및 95 ㎍/㎖의 세포탁심(cefotaxime)을 포함하는 RPMI 1640 배지에서 유지된다. MAT-LyLu 세포는 100 ㎍/㎖의 젠타미신, 95 ㎍/㎖의 세포탁심 및 열에 의해 불활성화된 9%의 FBS를 포함하는 MAT-LyLu 세포에서 유지된다.

세포는 아포화된(subconfluent) 배양 세포로부터 트립신을 사용하여 수확되고 플레이트에 도말하기 전에 신선한 배지로 재부유된다. 트립판 블루 배제법(trypan blue exclusion)에 의하여 >90%의 생존율을 가지는 세포가 FGF 길항제, 즉 수라민의 세포독성을 측정하기 위하여 사용된다. 세포는 약제 처리 기간이 끝날 때까지 포화상태로는 자라지 않은 정도의 농도로 96-웰 플레이트에 분주된다. 세포는 약제가 포함되지 않은 배지에서 20 내지 24시간동안 성장시킴으로써 플레이트의 표면에 부탁된다. 다음으로, 세포는 FGF 길항제를 포함하는(예를 들면, 0.2 ㎖의 수라민을 포함하는), 적어도 4 log 범위에 걸쳐 있는 농도의 배양 배지에서 배양된다. 약제의 효과는 BrdU 합입의 저해로서, 예를 들면 세포 증식 ELISA BrdU(Boehringer Mannheim)에 의하여 측정된다.

<실시예 16> FGF 수용체에 대한 FGF 결합의 저해

본 실시예는 FGF 길항제에 의한 FGF 수용체에 대한 FGF 결합의 저해에 대하여 기술한다.

인간 전립선암 PC3 세포 및 인간 유방암 MCF7 세포에서 FGF 수용체에 대한 ¹²⁵I-bFGF 결합에 몇몇 FGF 길항제(즉, 수라민, 헤파린, 저분자 혜파린, 헤파란 설페이트)가 미치는 효과에 대하여 연구하였다. 간략하게 설명하면, 세포를 24-웰 플레이트에서 16 ㎜ 지름의 웰 당 1×10⁵ 세포씩 분주하고 결합 실험 전에 48시간동안 배양하였다. 실험하는 날에는, 0.15% 젤라틴을 포함하는 혈청이 첨가되지 않은 DMEM 배지에서 세포를 37℃로 2시간동안 배양하였다. 다음으로, 세포를 얼음으로 냉각시킨(ice-cold) PBS 2차례 세척하였다. 냉각된 DMEM 결합 버퍼(100 ㎕, 25 mM HEPES, 0.15% 젤라틴, pH 7.5를 포함함)에 용해된 다양한 농도의 bFGF 길항제의 당량(aliquot) 및 동일한 버퍼에 용해된 다양한 농도의 ¹²⁵I-bFGF(100 ㎕)가 각각의 웰에 첨가되었다. 배양이 끝난 후, 세포는 1 ㎖의 얼음으로 냉각된 PBS로 3차례 세척하거나 또는 얼음으로 냉각된 PBS로 2차례 및 1 ㎖의 2 M NaCl(25 mM HEPES, pH 7.5에 용해됨)로 한차례 세척하였다. 세포를 0.25 ㎖의 0.5% 트리톤 X-100을 사용하여 추출한 후, 추출물의 방사능을 감마 섬광 계수기(gamma scintillation counter)를 사용하여 결정하였다.

그 결과, 표 8에서 알 수 있는 바와 같이, FGF 길항제는 PC3 및 MCF7 세포에 서의 높은 친화도 및 ¹²⁵I-bFGF의 전체 결합을 억제하였다.

FGF 길항제에 의한 FGF 수용체에 대한 ¹²⁵ I-bFGF의 결합 저해

FGF 길항제	높은 친화도 결합에 대한 IC₅₀		전체 결합에 대한 IC₅₀
FGF 길항제	PC3	MCF7	PC3	MCF7
수라민	87 ㎍/㎖	21 ㎍/㎖	87 ㎍/㎖	17 ㎍/㎖
헤파린	<0.001 ㎍/㎖	--	0.001 ㎍/㎖	--
저분자량 헤파린	--	10 ㎍/㎖	--	0.5 ㎍/㎖
헤파란 설페이트	--	1 ㎍/㎖	--	5 ㎍/㎖

<실시예 17> 세포외 bFGF에 의해 유도되는 유전자 변화

bFGF-유도 다중약제 저항성에 관여하는 하부(down-stream) 유전자를 동정하기 위하여 차등 디스플레이(differential display)가 사용되었다. 상기 유전자들은 상기 유전자의 발현에 bFGF가 미치는 영향을 bFGF-유도 화학저항성을 나타내는 세포주(즉, 인간 전립선암 PC3 세포)와 bFGF-유도 화학저항성을 나타내지 않는 세포주(즉, 인간 머리와 목 종양인 FaDu 세포주)에서 비교함으로써 동정되었다. 이러한 방법으로, bFGF 처리에 의하여 PC3 세포에서는 변경되었지만 FaDu 세포에서는 변경되지 않은 유전자가 동정되었다. 동정된 유전자는 bFGF-유도 다중약제 저항성과 연관되어 있다고 생각할 수 있다.

차등 디스플레이를 위하여, 전체 RNA를 세포로부터 분리하였고 역전사를 실시하여 단일가닥 cDNA를 제조하였다. 한쌍의 T 및 P 프라이머를 사용하여 PCR을 수행하였다. 한쌍의 프라이머에서 50 내지 100개의 밴드가 나타났다. 90개의 T 및 P 프라이머 조합을 사용하여 약 6,000개의 cDNA 밴드가 나타났다. 14개의 밴드는 bFGF 처리 후에 PC3 세포주에서 강도가 증가하거나 또는 감소하였다. 이들 중 5개는 PC3 세포주에서 반복적으로 변경되었으나 FaDu 세포주에서는 변경되지 않았다. 이러한 밴드를 젤에서 잘라낸 후 재증폭시키고 pGEM-T 벡터로 클로닝하였다. 9개의 다른 클론이 동정되어 서열이 분석되었다. 유전자의 서열은 NCBI GenBank의 데이터와 비교하였다. 비교 결과, 5개의 클론에서는 이전에 보고된 서열과 일치하였으나, 4개의 클론에서는 아직 발표되지 않은, 즉 잠재적으로는 신규한 유전자이었다. 약제 저항성 암 세포에 대한 프라이머들이 합성되었다. 9개의 클론 중에서, 5개는 bFGF 처리에 의하여 반복적으로 변경되었으나, 나머지 4개의 클론에서는 효과가 없었다. 알려진 유전자 중에서 2개의 유전자, 즉 TSC22 및 VEGF의 발현은 20 내지 40% 증가한 반면에, 3개의 신규한 유전자(일시적으로 FSC-1, FSC-2 및 FSC-3이라 명명함)의 발현은 각각 65%, 300% 및 40% 증가하였다. TSC22 및 VEGF는 bFGF에 의해서 조절된다고 알려져 있지 않다.

또한, 전사 인자인 TFII-I의 발현은 세포외 bFGF에 의하여 상부조절(upregulated) 되는 것으로 동정되었다. 차등 디스플레이, 클로닝 및 서열분석 기술을 사용하여, 인간 PAC 및 BAC 클론에서 몇몇 단편과 단지 부분적으로만 일치하는(즉, 약 60%) 다른 cDNA(256 bp)가 동정되었는데, 이것은 상기 단편이 아직 보고되지 않은 유전자임을 나타낸다.

<동등한 것들(equivalents)>

당업자는 일상적인 실험방법을 사용하여 상기에 기술된 특정한 실시예의 다른 많은 동등한 것들을 인식하거나 또는 확인할 수 있다. 그러한 동등한 것들은 하기 청구항에 의하여 포함시키고자 한다.

Claims

항마이크로튜불 제제, 토포아이소머라제 I 저해제, 토포아이소머라제 Ⅱ 저해제, 항대사물 제제, 분열저해제, 알킬화 또는 삽입 제제, 타목시펜, 고세레린, 케토코나졸, 항-Her2/neu 항체, 항-CD20 항체, 루프로리드(루프론), 플루타미드, 인터페론, 인터루킨, 종양괴사인자 및 방사선으로 구성된 군으로부터 선택되는 세포독성제제(cytotoxic agent) 및 투여시 혈장 농도가 1 내지 85 ㎍/ml로 유지될 수 있는 농도의 수라민(suramin)을 유효성분으로 함유하는 항암제에 있어서,

상기 항마이크로튜블 제제는 파클리탁셀(paclitaxel), 빈크리스틴(vincristine), 빈블래스틴(vinblastine), 빈데신(vindesine), 빈노렐빈(vinorelbin) 또는 택소티어(taxotere)이고,

상기 토포아이소머라제 I 저해제는 캄프토테신(camptothecin), 토포테칸(topotecan) 또는 이리노테칸 하이드로클로라이드(irinotecan hydrochloride)이며,

상기 토포아이소머라제 II 저해제는 독소루비신(doxorubicin),에토포시드(etoposide), 미톡산트론(mitoxantrone), 다우노루비신(daunorubicin), 이다루비신(idarubicin), 테니포시드(teniposide), 암사크린(amsacrine), 에피루비신(epirubicin), 메르바론(merbarone) 또는 피로잔트론 하이드로클로라이드(piroxantrone hydrochloride)이고,

상기 항대사물 제제는 5-플루오로우라실(5-fluorouracil), 메토트렉세이트(methotrexate), 6-머캡토퓨린(6-mercaptopurine), 6-티오구아닌(6-thioguanine), 플루다라빈 포스페이트(fludarabine phosphate), 시타라빈(cytarabine, Ara-C), 트리메트렉세이트(trimetrexate), 겜시타빈(gemcitabine), 아시비신(acivicin), 아라노신(alanosine), 피라조푸린(pyrazofurin), N-포스포아세틸-L-아스파레이트(N-phosphoracetyl-L-Asparate, PALA), 펜토스태틴(pentostatin), 5-아자시티딘(5-azacitidine), 5-아자C(5-Aza-C) 5-아자-2-디옥시시티딘(5-Aza-2'-deoxyxytidine), 아데노신 아라비노시드(adenosine arabinoside, Ara-A), 크라드리빈(cladribine), 프토라푸르(ftorafur), UFT(우라실 및 프토라푸르의 조합) 또는 5-플루오로-2'-디옥시우리딘(5-fluoro-2'-deoxyruidine), 5-플루오로우리딘(5-fluorouridine), 5'-디옥시-5-플루오로우리딘, 하이드록시우레아, 디하이드로렌클로람부실(dihydrolenchlorambucil) 또는 티아조푸린(tiazofurin)이며, 및

상기 알킬화 또는 삽입 제제는 시스플라틴(cisplatin), 카르보플라틴(carboplatin), 옥살리플라틴(oxaliplatin), 마이토마이신 C, 카르무스틴(Carmustine), 멜파란(melphalan), 티오테파(thiotepa), 부설판(busulfan), 클로람부실(chlorambucil), 플리카마이신(plicamycin), 다카바진(dacabazine), 이포스파미드 포스페이트(ifosfamide phosphate), 사이클로포스파미드(chclophosphamide), 니트로젠 무스타드(nitrogen mustard), 우라실 무스타드(uracil mustard), 피포브로만(pipobroman) 또는 4-이포미놀(4-ipomeanol)인 것을 특징으로 하는 항암제.
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제 1항에 있어서, 상기 수라민에 대한 총노출량은 96시간에 걸쳐 800 μM/일보다 적은 것을 특징으로 하는 항암제.
제 1항에 있어서, 상기 수라민에 대한 총노출량은 252 μM/일보다 적은 것을 특징으로 하는 항암제.
제 1항에 있어서, 상기 수라민에 대한 투여기간은 상기 세포독성 제제가 투여된 마지막날 이후 180일 미만의 기간일 것을 특징으로 하는 항암제.
제 1항에 있어서, 상기 수라민에 대한 투여기간은 상기 세포독성 제제의 투여 첫날 전 180일 미만 이내에 시작되는 것을 특징으로 하는 항암제.
제 1항에 있어서, 상기 항암제는 섬유육종, 근육종, 지방육종, 연골육종, 골원성육종, 척삭종, 맥관육종, 내피육종, 림프관육종, 림프관내피아세포종, 활막종, 중피종, 유윙(Ewing) 종양, 평활근육종, 횡문근육종, 위암, 식도암, 결장종양, 직장암, 췌장암, 유방암, 난소암, 전립선암, 자궁암, 머리와 목 암, 피부암, 뇌암, 인상세포종양, 피지선종양, 유두상종양, 유두선종, 낭포선암, 수질종양, 기관지원성종양, 신장세포종양, 간암, 담즙선종양, 융모암, 정상피종, 태아종, 빌름스(Wilm's) 종양, 자궁경부암, 고환암, 폐종양, 소세포폐종양, 비소세포폐종양, 방광종양, 상피종, 신경교종, 성상세포종, 수아세포종, 두개인두종, 뇌실상의세포종, 송과체종, 혈관아세포종, 청음신경종, 회돌기교종, 수악종, 흑색종, 신경아세포종, 망막아세포종, 백혈병, 림프종 및 카포시(Kaposi) 육종으로 구성된 군으로부터 선택되는 종양에 대해 사용되는 것을 특징으로 하는 항암제.
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제 1항에 있어서, 상기 세포독성제제는 파클리탁셀, 인터페론, 겜시타빈, 플루다라빈, 이리노테칸, 카르보플라틴, 시스플라틴, 택소티어, 독소루비신, 에피루비신, 5-플루오로우라실, UFT(우라실 및 프토라푸르의 조합), 타목시펜, 고세레린, 케토코나졸, 항-Her2/neu 항체, 항-CD20 항체, 루프로리드(루프론) 및 플루타미드로 구성된 군으로부터 선택되어 지는 것을 특징으로 하는 항암제.
제 1항에 있어서, 상기 수라민과 세포독성 제제는 사전에 혼합되어 제형화 되거나, 별도로 제형화 되는 것을 특징으로 하는 항암제.
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제 1항에 있어서, 상기 수라민과 세포독성제제는 비경구, 경구, 부위한정(locoregionally), 비측, 직장, 국소 또는 경피적으로 투여되는 것을 특징으로 하는 항암제.
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bFGF, aFGF 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 FGF 작용제를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항마이크로튜불 제제, 토포아이소머라제 I 저해제, 토포아이소머라제 Ⅱ 저해제, 항대사물 제제, 알킬화 또는 삽입 제제, 타목시펜, 고세레린, 케토코나졸, 항-Her2/neu 항체, 항-CD20 항체, 루프로리드(루프론), 플루타미드, 인터페론, 인터루킨, 종양괴사인자 및 방사선으로 구성된 군으로부터 선택되는 세포독성제제(cytotoxic agent)의 부작용 억제용 약학적 조성물에 있어서,

상기 항마이크로튜블 제제는 파클리탁셀(paclitaxel), 빈크리스틴(vincristine), 빈블래스틴(vinblastine), 빈데신(vindesine), 빈노렐빈(vinorelbin) 또는 택소티어(taxotere)이고,

상기 토포아이소머라제 I 저해제는 캄프토테신(camptothecin), 토포테칸(topotecan) 또는 이리노테칸 하이드로클로라이드(irinotecan hydrochloride)이며,

상기 토포아이소머라제 II 저해제는 독소루비신(doxorubicin),에토포시드(etoposide), 미톡산트론(mitoxantrone), 다우노루비신(daunorubicin), 이다루비신(idarubicin), 테니포시드(teniposide), 암사크린(amsacrine), 에피루비신(epirubicin), 메르바론(merbarone) 또는 피로잔트론 하이드로클로라이드(piroxantrone hydrochloride)이고,

상기 항대사물 제제는 5-플루오로우라실(5-fluorouracil), 메토트렉세이트(methotrexate), 6-머캡토퓨린(6-mercaptopurine), 6-티오구아닌(6-thioguanine), 플루다라빈 포스페이트(fludarabine phosphate), 시타라빈(cytarabine, Ara-C), 트리메트렉세이트(trimetrexate), 겜시타빈(gemcitabine), 아시비신(acivicin), 아라노신(alanosine), 피라조푸린(pyrazofurin), N-포스포아세틸-L-아스파레이트(N-phosphoracetyl-L-Asparate, PALA), 펜토스태틴(pentostatin), 5-아자시티딘(5-azacitidine), 5-아자C(5-Aza-C) 5-아자-2-디옥시시티딘(5-Aza-2'-deoxyxytidine), 아데노신 아라비노시드(adenosine arabinoside, Ara-A), 크라드리빈(cladribine), 프토라푸르(ftorafur), UFT(우라실 및 프토라푸르의 조합) 또는 5-플루오로-2'-디옥시우리딘(5-fluoro-2'-deoxyruidine), 5-플루오로우리딘(5-fluorouridine), 5'-디옥시-5-플루오로우리딘, 하이드록시우레아, 디하이드로렌클로람부실(dihydrolenchlorambucil) 또는 티아조푸린(tiazofurin)이며, 및

상기 알킬화 또는 삽입 제제는 시스플라틴(cisplatin), 카르보플라틴(carboplatin), 옥살리플라틴(oxaliplatin), 마이토마이신 C, 카르무스틴(Carmustine), 멜파란(melphalan), 티오테파(thiotepa), 부설판(busulfan), 클로람부실(chlorambucil), 플리카마이신(plicamycin), 다카바진(dacabazine), 이포스파미드 포스페이트(ifosfamide phosphate), 사이클로포스파미드(chclophosphamide), 니트로젠 무스타드(nitrogen mustard), 우라실 무스타드(uracil mustard), 피포브로만(pipobroman) 또는 4-이포미놀(4-ipomeanol)인 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
제 23항에 있어서, 국소적으로 투여하기 위한 약학적 제제로 구성된 것을 특징으로 하는 세포독성제제(cytotoxic agent)의 부작용 억제용 약학적 조성물.
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약학적 담체 중 제형화 된, 투여시 1 내지 85 ㎍/ml의 혈장 농도가 유지될 수 있는 수라민(suramin)과, 적절한 경우 하나 이상의 별도의 약학적 제제로 제형화 되고 항마이크로튜불 제제, 토포아이소머라제 I 저해제, 토포아이소머라제 Ⅱ 저해제, 항대사물 제제, 알킬화 또는 삽입 제제, 타목시펜, 고세레린, 케토코나졸, 항-Her2/neu 항체, 항-CD20 항체, 루프로리드(루프론), 플루타미드, 인터페론, 인터루킨, 종양괴사인자 및 방사선으로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 세포독성제제(cytotoxic agent)로 구성되는 것을 특징으로 하는 세포독성 제제와 수라민의 조합 투여 수행용 키트에 있어서,

상기 항마이크로튜블 제제는 파클리탁셀(paclitaxel), 빈크리스틴(vincristine), 빈블래스틴(vinblastine), 빈데신(vindesine), 빈노렐빈(vinorelbin) 또는 택소티어(taxotere)이고,

상기 토포아이소머라제 I 저해제는 캄프토테신(camptothecin), 토포테칸(topotecan) 또는 이리노테칸 하이드로클로라이드(irinotecan hydrochloride)이며,

상기 토포아이소머라제 II 저해제는 독소루비신(doxorubicin),에토포시드(etoposide), 미톡산트론(mitoxantrone), 다우노루비신(daunorubicin), 이다루비신(idarubicin), 테니포시드(teniposide), 암사크린(amsacrine), 에피루비신(epirubicin), 메르바론(merbarone) 또는 피로잔트론 하이드로클로라이드(piroxantrone hydrochloride)이고,

상기 항대사물 제제는 5-플루오로우라실(5-fluorouracil), 메토트렉세이트(methotrexate), 6-머캡토퓨린(6-mercaptopurine), 6-티오구아닌(6-thioguanine), 플루다라빈 포스페이트(fludarabine phosphate), 시타라빈(cytarabine, Ara-C), 트리메트렉세이트(trimetrexate), 겜시타빈(gemcitabine), 아시비신(acivicin), 아라노신(alanosine), 피라조푸린(pyrazofurin), N-포스포아세틸-L-아스파레이트(N-phosphoracetyl-L-Asparate, PALA), 펜토스태틴(pentostatin), 5-아자시티딘(5-azacitidine), 5-아자C(5-Aza-C) 5-아자-2-디옥시시티딘(5-Aza-2'-deoxyxytidine), 아데노신 아라비노시드(adenosine arabinoside, Ara-A), 크라드리빈(cladribine), 프토라푸르(ftorafur), UFT(우라실 및 프토라푸르의 조합) 또는 5-플루오로-2'-디옥시우리딘(5-fluoro-2'-deoxyruidine), 5-플루오로우리딘(5-fluorouridine), 5'-디옥시-5-플루오로우리딘, 하이드록시우레아, 디하이드로렌클로람부실(dihydrolenchlorambucil) 또는 티아조푸린(tiazofurin)이며, 및

상기 알킬화 또는 삽입 제제는 시스플라틴(cisplatin), 카르보플라틴(carboplatin), 옥살리플라틴(oxaliplatin), 마이토마이신 C, 카르무스틴(Carmustine), 멜파란(melphalan), 티오테파(thiotepa), 부설판(busulfan), 클로람부실(chlorambucil), 플리카마이신(plicamycin), 다카바진(dacabazine), 이포스파미드 포스페이트(ifosfamide phosphate), 사이클로포스파미드(chclophosphamide), 니트로젠 무스타드(nitrogen mustard), 우라실 무스타드(uracil mustard), 피포브로만(pipobroman) 또는 4-이포미놀(4-ipomeanol)인 것을 특징으로 하는 세포독성 제제와 수라민의 조합 투여 수행용 키트.
약학적 담체 중 제형화 된 bFGF, aFGF 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 FGF 작용제와, 적절한 경우 하나 이상의 별도의 약학적 제제로 제형화 되고 항마이크로튜불 제제, 토포아이소머라제 I 저해제, 토포아이소머라제 Ⅱ 저해제, 항대사물 제제, 알킬화 또는 삽입 제제, 타목시펜, 고세레린, 케토코나졸, 항-Her2/neu 항체, 항-CD20 항체, 루프로리드(루프론), 플루타미드, 인터페론, 인터루킨, 종양괴사인자 및 방사선으로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 세포독성제제(cytotoxic agent)로 구성되는 것을 특징으로 하는, 하나 이상의 세포독성 제제와 FGF 작용제의 조합 투여 수행용 키트에 있어서,

상기 항마이크로튜블 제제는 파클리탁셀(paclitaxel), 빈크리스틴(vincristine), 빈블래스틴(vinblastine), 빈데신(vindesine), 빈노렐빈(vinorelbin) 또는 택소티어(taxotere)이고,

상기 토포아이소머라제 I 저해제는 캄프토테신(camptothecin), 토포테칸(topotecan) 또는 이리노테칸 하이드로클로라이드(irinotecan hydrochloride)이며,

상기 토포아이소머라제 II 저해제는 독소루비신(doxorubicin),에토포시드(etoposide), 미톡산트론(mitoxantrone), 다우노루비신(daunorubicin), 이다루비신(idarubicin), 테니포시드(teniposide), 암사크린(amsacrine), 에피루비신(epirubicin), 메르바론(merbarone) 또는 피로잔트론 하이드로클로라이드(piroxantrone hydrochloride)이고,

상기 항대사물 제제는 5-플루오로우라실(5-fluorouracil), 메토트렉세이트(methotrexate), 6-머캡토퓨린(6-mercaptopurine), 6-티오구아닌(6-thioguanine), 플루다라빈 포스페이트(fludarabine phosphate), 시타라빈(cytarabine, Ara-C), 트리메트렉세이트(trimetrexate), 겜시타빈(gemcitabine), 아시비신(acivicin), 아라노신(alanosine), 피라조푸린(pyrazofurin), N-포스포아세틸-L-아스파레이트(N-phosphoracetyl-L-Asparate, PALA), 펜토스태틴(pentostatin), 5-아자시티딘(5-azacitidine), 5-아자C(5-Aza-C) 5-아자-2-디옥시시티딘(5-Aza-2'-deoxyxytidine), 아데노신 아라비노시드(adenosine arabinoside, Ara-A), 크라드리빈(cladribine), 프토라푸르(ftorafur), UFT(우라실 및 프토라푸르의 조합) 또는 5-플루오로-2'-디옥시우리딘(5-fluoro-2'-deoxyruidine), 5-플루오로우리딘(5-fluorouridine), 5'-디옥시-5-플루오로우리딘, 하이드록시우레아, 디하이드로렌클로람부실(dihydrolenchlorambucil) 또는 티아조푸린(tiazofurin)이며, 및

상기 알킬화 또는 삽입 제제는 시스플라틴(cisplatin), 카르보플라틴(carboplatin), 옥살리플라틴(oxaliplatin), 마이토마이신 C, 카르무스틴(Carmustine), 멜파란(melphalan), 티오테파(thiotepa), 부설판(busulfan), 클로람부실(chlorambucil), 플리카마이신(plicamycin), 다카바진(dacabazine), 이포스파미드 포스페이트(ifosfamide phosphate), 사이클로포스파미드(chclophosphamide), 니트로젠 무스타드(nitrogen mustard), 우라실 무스타드(uracil mustard), 피포브로만(pipobroman) 또는 4-이포미놀(4-ipomeanol)인 것을 특징으로 하는 하나 이상의 세포독성 제제와 FGF 작용제의 조합 투여 수행용 키트.
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