KR20210070301A - 종양 치료제와 조합한 항-ssea-4 항체를 사용하는 병용 요법 - Google Patents

종양 치료제와 조합한 항-ssea-4 항체를 사용하는 병용 요법 Download PDF

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Abstract

본 개시는 일반적으로, 항-SSEA-4 항체를 단독으로 또는 치료 효능을 향상시키기 위한 종양학에서 첨가제 및/또는 다른 치료제와의 상승적 조합물과 함께 투여하는 것을 포함하는 치료 방법 및 조성물로서, 이에 의해 상호작용이 인간 Siglec-9 또는 포유류 Siglec-9를 포함하는 Siglec-9 단백질의 에피토프 결합을 변경시키며, 이러한 항-SSEA-4 조성물의 사용이 암을 갖는 개체를 예방하거나, 위험을 감소시키거나, 치료하는 데 효과적인, 치료 방법 및 조성물에 관한 것이다.

Description

종양 치료제와 조합한 항-SSEA-4 항체를 사용하는 병용 요법
본 출원은 2018년 10월 2일에 출원된 미국특허출원 제62/740,373호의 혜택을 주장하며, 이러한 문헌의 개시는 전문이 본원에 참고로 포함된다.
분야
본 개시는 일반적으로, 항-SSEA-4 항체, 예를 들어, 단일 클론, 키메라, 인간화된 항체, 항체 단편, 등을 단독으로, 또는 다른 종양 치료제와 조합하여 포함하는 치료 방법 및 조성물에 관한 것이다. 상기 방법 및 조성물은 Siglec-9 단백질, 예를 들어, 인간 Siglec-9 또는 포유류 Siglec-9의 결합을 상승적으로 조절할 수 있으며, 상기 치료 방법 및 조성물의 사용은 개체가 암을 예방하거나, 암에 걸릴 위험성을 감소시키거나, 암을 치료하는 데 유용하다.
SSEA-4(발생단계 특이적 태아성 항원-4), 육탄당(Neu5Acα2-3Galβ1-3GalNAcβ1-3Galα1-4Galβ1-4Glcβ)은 다능성 인간 배아 줄기 세포에 대한 세포 표면 마커로서 일반적으로 사용되고 있다. 이는 또한, 중간엽 줄기 세포를 단리하고 신경 전구 세포를 풍부하게 하기 위해 사용된다[Kannagi et al. (1983) EMBO J. 2: 2355-236]. 최근 연구에서는 SSEA-4가 암 세포의 침윤 및 전이와 같은 암의 악성 종양과 관련이 있음을 나타낸다[Kavitha et al. (2015 Glycobiology 25: 902-917；Lou et al. (2014) Proc Natl Acad Sci USA. 111: 2482-2487].
SSEA-4의 발현은 폐, 신장, 유방 및 구강암의 전이 가능성의 증가 및 불량한 예후와 관련이 있다[Kataguri et al. (2001) Glycoconj J. 18:347-353； Gottschling et al. (2013) Eur Respir J. 41:656-663；Hung et al. (2013) J Am Chem Soc. 135:5934-5937]. 그러나, 정상 조직에서, SSEA-4는 적혈구 및 여러 선상 조직의 상피 세포 상에서 작은 GSL로서 표현되는 것으로 보고되었다[Kannagi et al. (1983) EMBO J. 2: 2355-236]. 이의 특성으로 인해, SSEA-4는 암 면역요법에 대한 유망한 고유 타겟으로서 역할을 할 수 있다.
Siglec(시알산-결합 면역글로불린-타입 렉틴)은 시알산에 결합하고 주로 면역 세포 상에서 발견되는 세포 표면 단백질의 패밀리(family)이다. 14개의 상이한 포유류 Siglecs가 존재하며, 이는 세포 표면 수용체-리간드 상호작용을 기초로 하여 다양한 상이한 기능을 제공한다[Pillai et al. (2012) Annual Review of Immunology. 30: 357-92]. 대부분의 Siglec는 이의 ITIM-함유 세포질 영역으로 인해 면역 세포 활성화를 억제한다. Siglec는 이의 리간드에 결합할 때 이의 ITIM 도메인을 통해 SHP 포스파타아제와 같은 억제성 단백질을 동원하며[Avril et al. (2004) Journal of Immunology. 173 (11): 6841-9], 이는 면역 세포를 비활성화시킨다. 이에 따라, Siglec과 이의 리간드 간의 상호작용을 방해하여 항-종양 면역력을 증진시킬 수 있다.
시알산-결합 면역글로불린(Ig)-유사 렉틴, 또는 SIGLEC(예를 들어, CD33)는 대부분 조혈 세포에서, 각각 독특한 발현 패턴을 갖는 1형 막관통 단백질의 패밀리이다. 19q13.3-q13.4에 국한된 SIGLEC의 CD33-유사 하위그룹은 2개의 보존된 세포질 티로신-기반 모티프, 즉, 면역수용체 티로신-기반 억제 모티프, 또는 ITIM 및 SLAM-관련 단백질(SAP)과 결합을 매개하는 신호전달 림프구 활성화 분자(SLAM)에서 식별된 것과 상동성인 모티프를 갖는다.
시알산-결합 Ig-유사 렉틴-9(Siglec-9)는 단핵구, 대식세포, 수지상 세포, 호중구, 및 미세아교세포와 같은 미성숙 및 성숙 골수 세포를 포함하는 면역 및 조혈 세포뿐만 아니라 자연 살해 세포, B 세포 및 CD9+ T 세포의 서브세트와 같은 림프구 세포 상에서 발현된 1형, 면역글로불린-유사, 막관통 단백질이다[Crocker et al. (2007) Nat Rev Immunol. 7:255-266; O'Reilly and Paulson (2009) Trends in Pharm. Sci. 30:5:240-248; 및 Macauley et al. (2014) Nat. Rev. Imm. 14: 653-666]. Siglec-9는 글리코단백질 및 글리코지질의 시알산 잔기에 결합하는 렉틴의 Siglec 패밀리의 구성원이다. Siglec 단백질에 대한 하나의 잠재적인 결합 타겟은 강글리오사이드, 즉, 시알릴화된 글리칸에 결합된 세라마이드로 이루어진 글리코지질이다. 대부분의 강글리오사이드는 공통 락토-세라마이드 코어 및 하나 이상의 시알산 잔기를 공유한다. Siglec 리간드의 다양성은 분지된 또는 말단의 상이한 연결에서의 다른 중성 당 및 시알산의 첨가, 및 시알산 자체의 개질에 의해 발생된다.
인간에서 14개의 Siglec 단백질이 동정되고, 마우스에서 9개의 Siglec 단백질이 동정되었으며, 이는 시알산-결합 부위를 함유한 아미노-말단 V-세트 도메인을 포함하는 2 내지 17개의 세포외 Ig 도메인을 포함한다. 시알산-결합 영역은 V-세트 Ig-유사 도메인 상에 위치되어 있으며, 이는 모든 Siglec에서 고도로 보존된 2개의 방향족 잔기 및 하나의 아르기닌 모티프를 함유한다[Crocker et al. (2007) Nat Rev Immunol. 7:255-266; McMillan and Crocker (2008) Carbohydr Res. 343:2050-2056; Von Gunten and Bochner (2008) Ann NY Acad Sci. 1143:61-82; May et al. (1998) Mol Cell. 1:719-728; Crocker et al. (1999) Biochem J. 341:355-361; 및 Crocker and Varki (2001) Trends Immunol. 2:337-342]. 시알릴화된 리간드에 대한 결합 부위는 리간드가 결합된 및 리간드가 결합되지 않은 결정 구조에 의해 맵핑되었다[Attrill et al. (2006) J. Biol. Chem.281 32774-32783; Alphey et al. (2003) J. Biol. Chem. 278:5 3372-3377; Varki et al., Glycobiology, 16 pp. 1R-27R; 및 May et al. (1998) Mol. Cell 1:5:719-728]. 세포막은 시알산이 풍부하기 때문에, Siglec에 의한 리간드 결합은 시스 및 트랜스에서 발생할 수 있으며, 둘 모두는 이의 기능적 특성에 영향을 미친다. 각 Siglec는 포유류 세포의 표면 상에서 발견된 다양한 타입의 시알릴화된 글리칸에 결합하는 것에 대한 뚜렷한 선호도를 갖는다[Crocker et al. (2007) Nat Rev Immunol. 7:255-266; 및 Crocker et al. (2007) Nat Rev Immunol. 7:255-266]. Siglec-9를 포함하는 대부분의 Siglec 단백질은 이의 세포질 테일에서 하나 이상의 면역수용체 티로신-기반 억제 모티프(ITIM) 서열을 함유하며, 이는 티로신 포스파타아제 SHP1 및 SHP2의 동원을 통해 면역 기능의 억제 수용체 및 음성 조절제로서 사용할 수 있다[Crocker et al. (2007) Nat Rev Immunol. 7:255-266; McMillan and Crocker (2008) Carbohydr Res. 343:2050-2056; 및 Von Gunten and Bochner (2008) Ann NY Acad Sci. 1143:61-82]. 특정의 Siglec는 세포질 테일에 면역수용체 티로신-기반 활성 모티프(ITAM) 서열을 함유하며, 이는 비장 티로신 키나아제(Syk)의 예측된 동원을 통해 면역 기능의 활성화 수용체 및 양성 조절제로서 작용할 수 있다[Macauley SM. et al. (2014) Nature Reviews Immunology 14, 653-666]. Siglec 단백질 패밀리는 자가면역, 감염에 대한 감수성, 림프종, 백혈병 및 급성 골수성 백혈병을 포함하는 여러 타입의 암, 전신 홍반 루푸스, 류마티스 관절염, 신경퇴행성 장애, 천식, 알레르기, 패혈증, 만성 폐색성 폐 질환, 이식편 대 숙주병, 호산구 증가증, 및 골다공증을 포함하는 다수의 인간 질병과 관련이 있다[Macauley SM. et al. (2014) Nature Reviews Immunology 14, 653-666].
Siglec-9는 2000년에 말초 혈액 단핵 세포에서 클로닝되었으며[Angata and Varki (2000) J. Biol. Chem. 275:29: 22127-22135], 선택적 발현은 과립구 및 단핵구 상에서 검출되었다. 독립 그룹은 HL-60(인간 전골수성 백혈병) 세포로부터 Siglec-9를 단리시키고, 단핵구, 호중구, NK 세포, B 세포 및 CD8+ T 세포의 작은 서브세트에서 발현을 나타내었다[Zhang et al. (2000) J. Biol. Chem. 275:29 22121-22126].
Siglec-9는 세포외 N-말단 Ig-유사(면역글로불린-유사) V-타입 도메인, 2개의 Ig-유사 C2-세트 도메인뿐만 아니라 이의 세포질 도메인에 2개의 공통 ITIM 모티프를 함유한다. COS 세포에서 Siglec-9의 발현은 a2-3 또는 a2-6 시알산 연결에 의해 매개되는, 적혈구의 시알산-의존 결합을 나타내었다[Angata and Varki (2000) J. Biol. Chem. 275: 22127-22135, Zhang et al. (2000) J. Biol. Chem. 275:29 22121-22126]. Siglec-9가 내인성 세포 시알산에 의해 마스킹되고 세포의 시알리다아제 처리시에만 외인성 말단 a2-3 또는 a2-6 시알산 프로브에 결합한다는 것이 추가로 확인되었다[Yamaji (2002) J. Biol. Chem. 277:8 6324-6332]. Siglec-9의 N-말단 V-세트 Ig-유사 도메인 내에서의 리간드 특이성은 Siglec-7을 Siglec-9로 교체하고 그 반대로 교체함으로써, 작은 영역, Asn70-Lys75에 맵핑되었다. 이러한 아미노산 잔기 내에서의 개개 Siglec 리간드 특이성의 획득은 리간드 특이성이 가변 C-C' 루프에서 상호작용에 의해 지시된다는 개념을 지지한다[Yamaji (2002) J. Biol. Chem. 277:8 6324-6332]. 병원체는 그룹 B 스트렙토코쿠스가 인간 호중구 상에서 Siglec-9에 결합하여 병원성이거나 공생적일 수 있는 박테리아에 대한 면역 반응을 감소시킬 수 있다고 보고되었기 때문에 시알산을 "자기" 시스템으로서 명백하게 전복시켰다[Carlin et al (2009) Blood 113: 3333-3336]. 생체내 Siglec-9 시알산 리간드의 다른 공급원은 종양-분비된 뮤신, 예를 들어, MUC1, MUC2, MUC16이며, Siglec-9은 암 환자의 혈청으로부터의 뮤신에 결합하는 것으로 나타났다[Ohta et al. (2010) Biochem. and Biophys. Res. Comm. 402: 663-669; Belisle et al. (2010) Mol. Cancer 9:118].
Siglec-9는 티로신 키나아제, 예를 들어, c-Src 또는 Lck에 의한 Tyr-433, 및 Tyr-456의 포스포릴화를 겪고, 억제 수용체로서 기능한다[Avril et al. (2004) J. Imm. 173: 6841-6849]. ITIM 도메인의 근위 Tyr-433에서의 포스포릴화 후에, Siglec-9는 SHP-2/PTPN11 및 SHP-1/PTPN6에 결합한다. 막 원위 ITIM 모티프는 돌연변이가 티로신 포스포릴화 또는 Siglec-9의 억제 기능을 배제하지 않기 때문에 크게 기여하지 않는 것으로 보인다. Siglec-9는 래트 호기성 백혈병 세포에서 FcERI-매개 활성을 억제하는 것으로 나타났으며, 이는 종래에 KIR(살해 Ig-유사 수용체)로 불리워지는 NK 세포 상에서 발현되는 억제 수용체 부류를 특징분석하기 위해 사용된 것이다[Avril et al. (2004) J. Imm. 173: 6841-6849].
포스파타아제 활성은 추가적으로 세포내 칼슘 이동 감소 및 여러 단백질 상에서 티로신 포스포릴화의 감소[Ulyanova, T., et al. (1999) Eur J lmmunol 29, 3440-3449; Paul, S.P., et al. (2000). Blood 96, 483-490]뿐만 아니라 부분적으로, ITAM 모티프, 패턴 인식 수용체, Toll-유사 수용체 및 손상-관련 분자 패턴(DAMP) 수용체를 함유하는 것을 포함하는, 인접한 활성화 수용체 상에서의 신호전달 분자의 탈포스포릴화를 통한, 신호 전달 및 면역 반응의 차단과 관련이 있다. ITIM-함유 Siglec 수용체와 활성화 수용체 사이의 연관성이 이러한 수용체에 결합하고 이를 브릿징하는 세포외 리간드에 의해 매개될 수 있다는 것이 제안되었다[Macauley SM. et al. (2014) Nature Reviews Immunology 14, 653-666]. 모두는 아니지만, 일부의 Siglec 리간드는 수용체 하향조절을 유도한다[Macauley SM. et al. (2014) Nature Reviews Immunology 14, 653-666]. 리간드-유도 수용체 퇴화는 티로신 키나아제 수용체[Monsonego-Oran et al. (2002) Febs letters 528, 83-89; 및 Fasen et al. (2008) Cell & Molecular Biology 9. 251-266]뿐만 아니라 스테로이드 수용체[Callige et al. (2005) Mol. Cell. Biol. 25. 4349-4358; 및 Pollenz et al. (2006) Chemico-Biological Interactions. 164. 49-59]에 대해 보고되었다. Siglec-9는 급성 골수성 백혈병(AML) 세포에서 구성적으로 재순환되는 것으로 생각되고, 이러한 세포 상에서 항-Siglec-9 단일 클론 항체의 빠른 엔도시토시스를 매개하는 것으로 나타났다[Biedermann et al. (2007) Leuk. Res. 31:2:211-220]. 그러나, AML 또는 정상 1차 면역 세포에서 Siglec-9의 세포 수준의 감소가 보고된 적이 없다. 마찬가지로, 임의의 타입의 1차 세포에서도 수용체 재순환 또는 항체-의존 수용체 하향 조절이 보고된 바가 없다. 세포 표면 상에서 Siglec-9의 발현은 과발현 시스템에서 수행된 돌연변이 분석에 따르면 부분적으로 막 근위 ITIM 모티프에 의존적이지만, 원위 모티프에는 의존하지 않는다[Biedermann et al. (2007) Leuk. Res. 31:2:211-220].
본 개시는 발생단계 특이적 태아성 항원 4(SSEA-4)가 Siglec-9에 선택적으로 결합하고 이에 의해 면역 세포에 대한 종양 제시를 조절할 수 있다는 놀라운 발견을 기반으로 한다. 상세하게는, 본 개시는 SSEA-4-Siglec-9 상호작용을 조절하기 위한 SSEA-4 항체를 포함하는 방법 및 조성물을 제공하며, 이에 의해 종양 면역 제시가 향상되며, NK-세포 매개 세포독성이 개선된다.
일 양태에서, 본 개시는 SSEA-4 및 Siglec-9 결합을 조절할 수 있는 SSEA-4에 대해 특이적인 항체 또는 이의 결합 단편을 특징으로 한다. 항-SSEA-4 항체는 Neu5Acα2→ 3Galβ1→ 3GalNAcβ1→ 3Galα1→ 4Galβ1→ 4Glcβ1에 결합한다.
일 양태에서, 본 개시는 SSEA-4 항원을 발현시키는 종양 세포를 갖는 대상체를 치료하는 방법으로서, 대상체에 유효량의 항-SSEA-4 항체 또는 이의 단편을 포함하는 약제 조성물을 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다.
일 구현예에서, 종양 세포에 대한 항-SSEA-4 항체의 결합은 SSEA-4와 Siglec-9 간의 결합 상호작용을 감소시킨다.
일 구현예에서, SSEA-4와 Siglec-9 간의 결합 상호작용의 감소는 종양 세포에 대한 Siglec-9의 결합을 감소시킨다. 일 구현예에서, 종양 세포에 대한 Siglec-9의 결합 감소는 Siglec-9/SSEA-4 관여에 의해 유지된 면역억제(면역-마스킹)의 방출(release)을 유도한다.
일 구현예에서, 항-SSEA-4 항체의 투여는 세포독성 면역 세포의 활성을 증가시킨다. 일 구현예에서, 세포독성 면역 세포는 NK 세포이다.
특정 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은
(a) 전체 면역글로불린 분자;
(b) scFv;
(c) Fab 단편;
(d) F(ab')2; 또는
(e) 디설파이드 결합 Fv로부터 선택된다.
특정 구현예에서, 항체는 인간화된 항체이다.
특정 구현예에서, 항체는 IgG 또는 IgM이다.
특정 구현예에서, 약제 조성물은 적어도 하나의 추가 치료제를 추가로 포함한다.
일 양태에서, 본 개시는 암 세포의 증식을 억제하는 방법으로서, 이를 필요로 하는 대상체에 유효량의 예시적인 약제 조성물을 투여하는 것을 포함하며, 암 세포의 증식이 억제되는 방법을 제공한다. SSEA-4를 발현시키는 암은 육종, 백혈병, 림프종, 교아종, 폐암, 유방암, 폐암, 식도암, 직장결장암, 담도암, 간암, 협측암, 위암, 결장암, 비인두암, 구인두암, 후두암, 식도암, 위암, 간암, 담관암, 담낭암, 방광암, 장암, 신장암, 전립선암, 난소암, 자궁경부암, 자궁내막암, 췌장암, 고환암, 방광암, 두경부암, 구강암, 신경 내분비암, 부신암, 갑상선 암, 골암, 피부암, 기저 세포 암종, 편평 세포 암종, 흑색종, 또는 뇌종양을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다.
특정 구현예에서, 본 개시는 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공한다. 본 방법은 이를 필요로 하는 대상체에 유효량의 본원에 기술된 예시적인 항체를 투여하는 것을 포함한다.
본 발명의 하나 이상의 구현예의 세부사항은 하기 설명에 기술되어 있다. 본 발명의 다른 특징 및/또는 장점은 도면, 여러 구현예의 상세한 설명, 및 또한 첨부된 청구범위로부터 명백해질 것이다.
본 발명의 더욱 완전한 이해는 후속하는 상세한 설명과 함께 고려할 때 첨부된 도면을 참조하여 얻어질 수 있다. 도면에 예시된 구현예는 오로지 본 발명을 예시하기 위해 의도된 것으로서, 본 발명을 예시된 구현예으로 제한하는 것으로서 해석되어서는 안된다.
도 1. Siglec-9 및 SSEA-4 세라마이드의 ELISA 결합 검정.
도 2. 외인성 SSEA-4 세라마이드에 의한 폐암 세포주(A549) 상에서의 Siglec-9 결합의 증가.
도 3. 예시적인 항-SSEA-4 Fab(OBI-898)의 첨가에 의한 유방암 세포주(MDA-MB 231) 상에서의 Siglec-9 결합의 감소.
도 4는 유방암 세포주(MDA-MB 231) 상에서 항-SSEA-4 Fab(OBI-898)에 의한 SSEA-4의 결합은 인간 PBMC의 세포 독성을 향상시킴.
도 5. 난소암 세포주(SKOV-3) 상에서 항-SSEA-4 Fab(OBI-898)에 의한 SSEA-4의 결합은 인간 PBMC의 세포독성을 향상시킴.
도 6. 난소암 세포주(SKOV-3) 상에서 항-SSEA-4 Fab(OBI-898)에 의한 SSEA-4의 결합은 티센트릭의 세포 독성을 향상시킴.
도 7. 면역억제를 방출하는 Siglec-9와의 항-SSEA-4 항체(OBI-898)의 작용 메커니즘의 도식.
도 8. 발생단계 특이적 태아성 항원 4(SSEA-4)의 구조.
도 9. 인간 시알산-결합 면역글로불린-타입 렉틴(Siglec)의 글리칸 결합 특이성.
도 10. 시알산-결합 Ig-유사 렉틴-9(Siglec-9)의 예시적인 리간드.
본 개시는 발생단계 특이적 태아성 항원 4(SSEA-4)가 Siglec-9에 선택적으로 결합할 수 있고, 이에 의해 면역 세포에 대한 종양 제시를 조절할 수 있다는 놀라운 발견을 기초로 한 것이다. 상세하게는, 본 개시는 SSEA-4-Siglec-9 상호작용을 조절하기 위한 SSEA-4 항체를 포함하는 방법 및 조성물을 제공하며, 이에 의해 종양 면역 제시는 향상되며, NK-세포 매개 세포 독성은 개선된다.
본 개시는 암 면역요법에서 새로운 면역 관문 차단 치료법으로서 항-SSEA-4 항체의 용도를 기술한다. SSEA-4는 최초로, Siglec-9에 대한 새로운 종양 관련 탄수화물 리간드인 것으로 입증되었다. 항-SSEA-4 항체는 Siglec-9와 SSEA-4 간의 상호작용을 차단한다는 것을 발견하였다. 시험관내 검정은 항-SSEA-4 항체가 NK 세포에서 Siglec-9의 억제 기능을 강력하게 역전시켜 후속한 종양 세포 사멸을 초래한다는 것을 나타내었다. 본원의 개시는 종양 세포에서 SSEA-4를 타겟화하는 것이 SSEA-4와 Siglec-9 간의 관여를 차단함으로써 면역 세포 활성을 방출시킬 수 있다는 것을 지지한다. 이에 따라, SSEA-4 항체는 면역 관문 차단제로서 단독으로 또는 종양학을 위해 사용되는 다른 시약과 조합하여 사용될 수 있다.
일 양태에서, 본 개시는 암 환자를 치료하기 위한 종양 치료제와 조합한 항-SSEA-4 항체의 용도에 관한 것이다. 특정 구현예에서, 항체는 OBI-898(항-SSEA-4 단일 클론 항체)이다. 예시적인 OBI-898은 PCT 특허 공개문(WO2017172990A1), 미국특허 공개문(US2018339061A1) 특허 출원에 기술된 바와 같으며, 이러한 문헌 각각의 내용은 전문이 참고로 포함된다. 일 양태에서, 본 개시는 암에서 SSEA-4가 면역 세포에서 Siglec과 상호작용하여 면역 세포의 비활성화를 초래할 수 있다는 발견을 기초로 한 것이다. SSEA-4와 Siglec 간의 관여를 차단하기 위한 항-SSEA-4 항체의 첨가는 면역 세포의 세포 독성을 방출할 수 있다. 종양 치료제는 종양에 대한 면역 세포 세포독성을 증가시키기 위해 항-SSEA-4 항체와 조합될 수 있다.
일 양태에서, 본 발명은 종양학을 위해 사용되는 치료제(예를 들어, 치료 항체 및/또는 화학치료제)와 조합된 항-SSEA-4 항체에 관한 것이다. 본 개시는 항암 효능을 개선시키기 위해 SSEA-4 및 Siglec 관여에 의해 유도된 면역 세포 비활성화를 구제하기 위해 항-SSEA-4 항체를 투여하는 근거에 기초로 한 예를 제공하였다.
Siglec-9는 시토카인 생산에 대한 면역조절 효과를 갖는 것으로서 기술되었다. 대식 세포 세포주에서 Siglec-9의 과발현 및 수반되는 TLR 자극은 전염증성 시토카인 TNF-알파 및 IL-6의 생산 감소뿐만 아니라 IL-10의 상향조절과 관련이 있는 것으로 나타났다[Ando et al. (2008) Biochem. And Biophys. Res. Comm. 369:878-883]. 또한, 종양-생산 뮤신이 Siglec-9뿐만 아니라 미성숙 DC에 결합하는 것으로 나타났다[Ohta et al. (2010) Biochem. and Biophys. Res. Comm. 402: 663-669]. LPS 및 뮤신의 존재 하에서, 미성숙 DC는 IL-12를 덜 생산하였지만, IL-10 생산은 유지되었다. 이는 Siglec-9가 전염증에서 항염증으로 시토카인 생산을 왜곡하여, 유해한 병원체, 암 또는 다른 병리의 제거와는 상반되게 면역학적 내성 상태를 유지함을 시사한다.
Siglec-9의 억제 역할은 자연 살해 세포의 기능 및 림프구 세포, 예를 들어, T 세포 및 호중구의 조절에서 추가로 특징되었다[Crocker et al. (2012) Ann. N Y Acad. Sci. 1253, 102-111; Pillai et al. (2012) Annu. Rev. Immunol. 30, 357-392; von Gunten and Bochner (2008) Ann. N Y Acad. Sci. 1143, 61-82; Jandus et al. (2014) J. Clin. Invest. 124(4) 1810-1820; Ikehara et al. (2004) J. Biol. Chem. 279:41 43117-43125; 및 von Gunten et al. (2005) Blood 106(4) 1423-1431]. 자연 살해 세포에서의 기능성 연구는, 시알산 리간드에 결합하는 Siglec-9를 발현시키는 종양 세포가 NK 세포 활성화 및 종양 세포 사멸을 억제한다는 것을 입증하였다. 많은 인간 종양은 면역 회피 및 암 진행을 가능하게 하는 Siglec-9에 결합하는 시알산 리간드를 강력하게 상향조절한다[Jandus et al. (2014) J. Clinic. Invest. 124:4: 1810-1820]. 종양에 대한 시알산 상향조절이 자연 살해 세포 면역감시를 강력하게 억제하는 '초자아(super self)'의 상태를 촉진한다고 생각된다[Macauley and Paulson (2014) Nat. Chem. Biol. 10:1: 7-8]. 림프구 계통 세포에서, Siglec-9는 ITIM 티로신 포스포릴화 및 SHP-1 결합을 통해 T 세포 수용체 신호전달을 부정적으로 조절한다는 것으로 나타났다. 다운스트림 TCR 신호전달 분자 ZAP-70은 Tyr319에 대한 포스포릴화 감소 및 NFAT 전사 활성 감소를 나타내었다. TCR 신호전달에 대한 Siglec-9의 억제 효과는 시알산 리간드-결합 도메인에서 보존 아르기닌 잔기의 돌연변이 시에 감소되었다[Ikehara et al. (2004) J. Biol. Chem. 279:41 43117-43125]. 호중구에서, Siglec-9 관여는 아폽토스성 및 비-아폽토스성 메커니즘을 통해 세포 사멸을 매개한다. 비-장애 또는 류마티스 관절염 및 급성 패혈성 쇼크 환장에서 유래한 호중구는 항체 가교에 의해 입증된 Siglec-9 의존 사멸을 겪었다. 패혈증 또는 RA-환자-유래 호중구는 Siglec-9 결찰 시에 상당히 더 큰 세포 사멸을 나타내었다. 이러한 증가는 전염증성 시토카인과의 단기 사전-인큐베이션으로 모방될 수 있는데, 이는 염증이 Siglec-9 사멸 경로의 프라이밍(priming)으로 이어진다는 것을 시사한다[Belisle et al. (2010) Mol. Cancer 9:118].
Siglec-9의 뮤린 동족체는 Siglec-E로서, 이는 53% 유사하다. Siglec-E는 시알산 의존 방식으로 인간 적혈구 세포에 결합하는 것으로 나타났으며, 기능적으로 유사한 Siglec-9는 면역 세포에서 억제 신호전달을 매개하기 위해 ITIM을 통해 SHP-1 및 SHP-2를 동원한다[Yu et al Biochem. J. (2001) 353,483-492]. 마우스에서, Siglec-E의 유전적 불활성화는 명백한 발달, 조직학적 또는 거동적 이상을 유발하지 않으며, Siglec-E-결핍 마우스는 정상적으로 번식하는데, 이는 Siglec-E가 필수 유전자가 아니며, 이의 기능은 선천적 면역으로 제한될 수 있다[McMillan et al. (2013) Blood 121:11: 2084-2094]. 에어로졸 LPS로 Siglec-E 결핍 마우스의 접종 시에, 폐에서 호중구 동원 증가가 나타났으며, 이는 132-인테그린 CD11b의 차단에 의해 역전될 수 있다. Siglec-E 결핍 호중구는 CD11b-의존 방식에서 Syk 및 p38 MAPK의 포스포릴화를 증가하는 것으로 나타났다. 이러한 것은 Siglec-E가 급성 폐 염증 모델에서 호중구 동원을 억제하는 기능함을 시사한다[McMillan et al. (2013) Blood 121:11: 2084-2094]. 동계 암 모델에서, Siglec-E 결핍 마우스로부터의 호중구는 생체외 종야 세포 사멸을 향상시켰고, TRAIL 및 FasL과 같은 ROS 생산 및 아폽토시스 유발 리간드를 증가시킴을 나타내었다[Laubli et al. (2014) PNAS 111 (39) 14211-14216].
종양학에서, Siglec-9는 1차 AML 세포 상에서 발현되지만, 수많은 환자 골수 샘플의 전구세포에는 존재하지 않기 때문에 급성 골수성 백혈병에 대한 치료 타겟으로 제안되었다[Biedermann et al. (2007) Leuk. Res. 31:2:211-220]. 고형암에서, 상피 종양 세포는 Siglec-9에 결합하는 아주 많이 글리코실화된 뮤신을 생산하는데, 이는 증가된 리간드 상호작용을 차단하는 것이 치료학적으로 유익할 것임을 시사한다[Ohta et al. (2010) Biochem. and Biophys. Res. Comm. 402: 663-669; Belisle et al. (2010) Mol. Cancer 9:118]. 또한, Siglec-9 리간드의 강력한 발현 및 종양 침윤 Sig1ec-9+ 면역 세포는 대장, 유방, 난소, 비소 폐세포 및 전립선암의 조직학적 섹션에서 발견되었다[Laubli et al. (2014) PNAS 111 (39) 14211-14216]. 시알릴 리간드 결합을 감소시키는 자연 발생 Siglec-9 K131Q(A391C) 다형성(rs16988910)은 비소세포 폐암 환자에서 조기 생존(2년 미만)을 크게 개선하는 것으로 밝혀졌지만, 효과는 2년 후에 사라졌다[Laubli et al. (2014) PNAS 111 (39) 14211-14216].
최근에, 암 세포에서 발현된 시알릴-글리코단백질이 Siglec-9 결합을 통해 '활성화' 신호를 종양 세포로 전달하여 국소 부착 키나아제(FAK)의 분해 및 증가된 세포 운동성 및 침입을 초래한다는 것이 제안되었다[Sabit et al. (2013) J. Biol. Chem. 288(49): 35417-35427]. 이러한 결과는, Siglec-9-시알릴 리간드 상호작용이 수많은 세포 타입의 면역계에 대한 억제 효과에 기여할 뿐만 아니라 암 세포에 대한 직접적인 효과를 통해 종양 전이를 향상시킬 수 있다는 것을 시사한다.
이에 따라, 원치 않는 Siglec-9 활성과 관련된 하나 이상의 질병, 장애, 및 질환을 치료하기 위해 Siglec-9와 하나 이상의 Siglec-9 리간드 간의 Siglec-9 상호작용을 특이적으로 조절하고/하거나 하나 이상의 Siglec-9 활성을 감소시키는 치료 항체가 필요하다.
정의
본 발명의 실행은 달리 명시하지 않는 한, 분자 생물학, 미생물학, 재조합 DNA, 및 면역학의 통상적인 기술을 이용하며, 이는 당해 분야의 기술 내에 있다. 이러한 기술은 문헌에서 충분히 설명된다[예를 들어, Molecular Cloning A Laboratory Manual, 2nd Ed., ed. by Sambrook, Fritsch and Maniatis (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989); DNA Cloning, Volumes I and II (D. N. Glover ed., 1985); Culture Of Animal Cells (R. I. Freshney, Alan R. Liss, Inc., 1987); Immobilized Cells And Enzymes (IRL Press, 1986); B. Perbal, A Practical Guide To Molecular Cloning (1984); the treatise, Methods In Enzymology (Academic Press, Inc., N.Y.); Gene Transfer Vectors For Mammalian Cells (J. H. Miller and M. P. Calos eds., 1987, Cold Spring Harbor Laboratory); Methods In Enzymology, Vols. 154 and 155 (Wu et al. eds.), Immunochemical Methods In Cell And Molecular Biology (Mayer and Walker, eds., Academic Press, London, 1987); Antibodies: A Laboratory Manual, by Harlow and Lane s (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1988); 및 Handbook Of Experimental Immunology, Volumes I-IV (D. M. Weir and C. C. Blackwell, eds., 1986) 참조].
본원에서 사용되는 용어 "글리칸"은 다당류, 또는 올리고당을 지칭한다. 글리칸은 또한, 본원에서 글리코단백질, 글리코지질, 글리코펩티드, 글리코프로테옴, 펩티도글리칸, 리포다당류, 또는 프로테오글리칸과 같은 글리코접합체의 탄수화물 부분을 지칭하기 위해 사용된다. 글리칸은 대개 오로지 단당류 사이의 O-글리코시드 연결로 이루어진다. 예를 들어, 셀룰로오스는 ß-1,4-연결 D-글루코오스로 이루어진 글리칸(또는 더욱 상세하게는 글루칸)이며, 키틴은 ß-1,4-연결 N-아세틸-D-글루코사민으로 이루어진 글리칸이다. 글리칸은 단당류 잔기의 호모폴리머 또는 헤테로폴리머일 수 있고, 선형 또는 분지형일 수 있다. 글리칸은 글리코단백질 및 프로테오글리칸에서와 같이 단백질에 부착된 것으로 확인될 수 있다. 이러한 것은 일반적으로, 세포의 외부 표면 상에서 확인된다. O- 및 N-연결 글리칸은 진핵 생물에서 매우 흔하지만, 또한, 덜 흔하지만, 원생 생물에서도 발견될 수 있다. N-연결 글리칸은 세쿠온에서 아스파라긴의 R-기 질소(N)에 부착된 것으로 확인된다. 세쿠온은 Asn-X-Ser 또는 Asn-X-Thr 서열이며, 여기서, X는 프랄린을 제외한 임의의 아미노산이다.
본원에서 사용되는 용어 "항원"은 면역 반응을 이끌어 낼 수 있는 임의의 물질로서 정의된다.
본원에서 사용되는 용어 "면역원성"은 면역원, 항원, 또는 백신이 면역 반응을 이끌어내는 능력을 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "에피토프"는 항체 또는 T 세포 수용체의 항원 결합 부위와 접촉하는 항원 분자의 부분으로서 정의된다.
본원에서 사용되는 용어 "백신"은 유기체가 유발하는 질병에 대한 면역을 부여하기 위해 사용되는, 전체 질병-유발 유기체(사멸 또는 약화) 또는 이러한 유기체의 구성요소, 예를 들어, 단백질, 펩티드, 또는 다당류로 이루어진 항원을 함유한 제제를 지칭한다. 백신 제제는 천연, 합성 또는 재조합으로 유래된 제제 중 어느 하나를 포함하거나 배제할 수 있다. 재조합으로 유래된 제제는 예를 들어, 재조합 DNA 기술에 의해 얻어질 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "항원 특이적"은 특정 항원, 또는 항원의 단편의 공급이 특정 세포 증식을 초래하는 세포 집단의 특성을 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "특이적 결합"은 결합 쌍(예를 들어, 항체 및 항원) 간의 상호작용을 지칭한다. 다양한 경우에, 특이적 결합은 약 10-6 mole/리터, 약 10-7 mole/리터, 또는 약 10-8 mole/리터, 또는 그 미만의 친화력 상수에 의해 구현될 수 있다.
본원에 사용되는 구 "실질적으로 유사한," "실질적으로 동일한," "동등한," 또는 "실질적으로 동등한"은 당업자가 2개의 값 간의 차이가 상기 값에 의해 측정된 생물학적 특징(예를 들어, Kd 값, 항-바이러스 효과, 등)의 맥락에서 생물학적 및/또는 통계적 유의성이 거의 없거나 전혀 없다는 것을 고려할 것이다. 상기 2개의 값 간의 차이는 참조/비교 분자에 대한 값의 함수로서 예를 들어, 약 50% 미만, 약 40% 미만, 약 30% 미만, 약 20% 미만, 및/또는 약 10% 미만이다.
본원에서 사용되는 구 "실질적으로 감소된" 또는 "실질적으로 상이한"은 당업자가 2개의 값 간의 차이를 상기 값(예를 들어, Kd 값)에 의해 측정된 생물학적 특징의 맥락 내에서 통계학적으로 유의미한 것으로 고려되도록, 2개의 수치(일반적으로 하나는 하나의 분자와 관련이 있으며, 다른 하나는 참조/비교자 분자와 관련이 있음) 간의 충분히 높은 정도의 차이를 나타낸다. 상기 2개의 값 간의 차이는 참조/비교자 분자에 대한 값의 함수로서, 예를 들어, 약 10% 초과, 약 20% 초과, 약 30% 초과, 약 40% 초과, 및/또는 약 50% 초과이다.
본원에서 사용되는 "결합 친화력"은 일반적으로, 분자(예를 들어, 항체)의 단일 결합 부위와 이의 결합 파트너(예를 들어, 항원) 간의 총 비공유 상호작용의 합의 강도를 지칭한다. 달리 명시하지 않는 한, 본원에서 사용되는 "결합 친화력"은 결합 쌍(예를 들어 ,항체 및 항원)의 구성원들 간의 1:1 상호작용을 반영하는 고유 결합 친화력을 지칭한다. 이의 파트너 Y에 대한 분자 X의 친화력은 일반적으로 해리 상수(Kd)로 표현될 수 있다. 친화력은 본원에 기술된 것을 포함하는, 당해 분야에 공지된 일반적인 방법에 의해 측정될 수 있다. 저-친화력 항체는 일반적으로 항원에 느리게 결합하고 용이하게 해리되는 경향이 있으며, 고-친화력 항체는 일반적으로 항원에 더 빠르게 결합하고 더 오래 결합된 상태로 유지되는 경향이 있다. 다양한 결합 친화력을 측정하는 방법은 당해 분야에 공지되어 있으며, 이들 중 임의 것은 본 발명의 목적을 위해 사용될 수 있다. 특정의 예시적인 구현예는 하기에 기술되어 있다.
특정 구현예에서, 본 발명에 따른 "Kd" 또는 "Kd 값"은 하기 검정에 의해 기술된 바와 같이 고려되는 항체 및 이의 항원의 Fab 버젼으로 수행된 방사성표지된 항원 결합 검정(RIA)에 의해 측정된다. 항원에 대한 Fab의 용액 결합 친화력은 표지되지 않은 항원의 적정 시리즈의 존재 하에서 최소 농도의 (125I)-표지된 항원으로 Fab를 평형화시키고 이후에 결합된 항원은 항-Fab 항체-코팅된 플레이트로 포획함으로써 측정된다[Chen, et al. (1999) J. Mol Biol 293:865-881]. 검정에 대한 조건을 설정하기 위해, 미세적정 플레이트(Dynex)는 50 mM 나트륨 카보네이트(pH 9.6) 중 5 ㎍/mL의 캡쳐 항-Fab 항체(Cappel Labs)로 밤새 코팅되고, 후속하여 실온(대략 23℃)에서 2 내지 5시간 동안 PBS 중 2%(w/v) 소 혈청 알부민으로 차단된다. 비-흡착성 플레이트(Nunc, Cat #269620)에서, 100 pM 또는 26 pM [125I]-항원은 고려되는 Fab의 연속 희석액과 혼합된다[예를 들어, 항-VEGF 항체, Fab-12의 평가와 일치함. 문헌[Presta et al. (1997) Cancer Res. 57:4593-4599]]. 고려되는 Fab는 이후에 밤새 인큐베이션된다. 그러나, 인큐베이션은 평형에 도달하기 위해 더 긴 기간(예를 들어, 65시간) 동안 계속될 수 있다. 이후에, 혼합물은 실온에서(예를 들어, 1시간 동안) 인큐베이션하기 위해 캡쳐 플레이트로 옮겨진다. 이후에, 용액은 제거되며, 플레이트는 PBS 중 0.1% Tween-20으로 8회 세척된다. 플레이트가 건조되었을 때, 150 ㎕/웰의 신틸런트(MicroScint-20; Packard)가 첨가되며, 플레이트는 10분 동안 Topcount 감마 카운터(Packard)로 카운팅된다. 최대 결합의 20% 이하를 제공하는 각 Fab의 농도는 경쟁 결합 검정에서 사용하기 위해 선택된다. 다른 구현예에 따르면, Kd 또는 Kd 값은 약 10의 반응 단위(RU)에서 항원 CM5 칩이 고정된 채로, 25℃에서 BIAcore™-2000 또는 BIAcore™-3000(BIAcore, Inc., Piscataway, N.J.)을 이용한 표면 플라즈몬 공명 공정을 이용함으로써 측정된다. 간단하게, 카복시메틸화된 덱스트란 바이오센서 칩(CM5, BIAcore Inc.)은 공급업체의 설명서에 따라 N-에틸-N'(3-디메틸아미노프로필)-카보디이미드 하이드로클로라이드(EDC) 및 N-하이드록시숙신이미드(NHS)로 활성화된다. 항원은 대략 10개의 반응 단위(RU)의 커플링된 단백질을 달성하기 위해 5 ㎕/분의 유량으로 주사하기 전에 10 mM 나트륨 아세테이트, pH 4.8로 5 ㎍/mL(약 0.2 μM)까지 희석된다. 항원의 주사 후에, 1 M 에탄올아민은 미반응된 기를 차단하기 위해 주입된다. 각 실험에서, 스폿은 활성화되고, 단백질을 고정하지 않고 에탄올아민이 차단되어 기준 감산(reference subtraction)용으로 사용되었다. 동력학 측정을 위해, Fab(0.78 nM 내지 500 nM)의 2배 연속 희석액은 25℃에서 대략 25 ㎕/분의 유량으로 0.05% Tween 20(PBST)를 함유한 PBS 중에서 주사된다. 결합 속도(kon) 및 해리 속도(koff)는 결합 및 해리 센서그램을 동시에 피팅함으로써 단순 1-대-1 Langmuir 결합 모델(BIAcore Evaluation Software version 3.2)을 이용하여 계산된다. 평형 해리 상수(Kd)는 비율 koff/kon으로서 계산된다[예를 들어, Chen, Y., et al. (1999) J. Mol Biol 293:865-881 참조]. 결합 정반응 속도(on-rate)가 상기 표면 플라즈몬 공명 검정에 의해 106 M-1s-1을 초과하는 경우에, 결합 정반응 속도는 25℃에서 교반 큐벳을 구비한, 정지-흐름 장착 분광계(Aviv Instruments) 또는 8000-시리즈 SLM-Aminco 분광계(ThermoSpectronic)에서 측정된 증가하는 농도의 항원의 존재 하에서 PBS, pH 7.2 중 20 nM 항-항원 항체(Fab 형태)의 형광 방출 강도(여기=295 nm; 방출=340 nm, 16 nm 대역-통과)의 증가 또는 감소를 측정하는 형광 켄칭 기술을 이용함으로써 결정될 수 있다.
본 발명에 따른 "결합 정반응 속도(on-rate)" 또는 "결합의 속도" 또는 "결합 속도" 또는 "kon"은 또한, 항원 CM5 칩이 고정된 채로, 25℃에서 BIAcore™-2000 또는 BIAcore™-3000(BIAcore, Inc., Piscataway, N.J.)을 이용한 동일한 표면 플라즈몬 공명 기술로 결정될 수 있거나, 본 발명에 따른 "결합 속도" 또는 "kon"은 또한, 공급업체의 설명서에 따라 N-에틸-N'(3-디메틸아미노프로필)-카보디이미드 하이드로클로라이드(EDC) 및 N-하이드록시숙신이미드(NHS)와 함께 동일한 표면 플라즈몬으로 결정될 수 있다. 항원은 대략 10개의 반응 단위(RU)의 커플링된 단백질을 달성하기 위해 5 ㎕/분의 유량으로 주사하기 전에 10 mM 나트륨 아세테이트, pH 4.8로 5 ㎍/mL(약 0.2 μM)까지 희석된다. 항원의 주사 후에, 1 M 에탄올아민은 미반응된 기를 차단하기 위해 주사된다. 동력학 측정을 위해, Fab(0.78 nM 내지 500 nM)의 2배 연속 희석액은 25℃에서 대략 25 ㎕/분의 유량으로 0.05% Tween 20(PBST)를 함유한 PBS 중에서 주사된다. 결합 속도(kon) 및 해리 속도(koff)는 결합 및 해리 센서그램을 동시에 피팅함으로써 단순 1-대-1 Langmuir 결합 모델(BIAcore Evaluation Software version 3.2)을 이용하여 계산된다. 평형 해리 상수(Kd)는 비율 koff/kon으로서 계산된다[예를 들어, Chen, Y., et al. (1999) J. Mol Biol 293:865-881 참조]. 그러나, 결합 정반응 속도가 상기 표면 플라즈몬 공명 검정에 의해 106 M-1s-1을 초과하는 경우에, 결합 정반응 속도는 결합 정반응 속도는 25℃에서 교반 큐벳을 구비한, 정지-흐름 장착 분광계(Aviv Instruments) 또는 8000-시리즈 SLM-Aminco 분광계(ThermoSpectronic)에서 측정된 증가하는 농도의 항원의 존재 하에서 PBS, pH 7.2 중 20 nM 항-항원 항체(Fab 형태)의 형광 방출 강도(여기=295 nm; 방출=340 nm, 16 nm 대역-통과)의 증가 또는 감소를 측정하는 형광 켄칭 기술을 이용함으로써 결정될 수 있다.
본원에서 사용되는 "항체"(Ab) 및 "면역글로불린"(Ig)은 동일한 구조 특징을 갖는 글리코단백질이다. 항체가 특정 항원에 대한 결합 특이성을 나타내지만, 면역글로불린은 일반적으로 항원 특이성이 결여된 항체 및 다른 항체-유사 분자 둘 모두를 포함한다. 후자 부류의 폴리펩티드는 예를 들어, 림프계에 의해 낮은 수준으로 및 골수종에 의해 높은 수준으로 생성된다.
본원에서 사용되는 용어 "항체" 및 "면역글로불린"은 가장 넓은 의미로 상호 교환 가능하게 사용되고, 단일 클론 항체(예를 들어, 전장 또는 무손상 단일 클론 항체), 폴리 클론 항체, 1가, 다가 항체, 다중특이적 항체(예를 들어, 원하는 생물학적 활성을 나타내는 한 이중특이적 항체)을 포함하고, 또한, 본원에서 더욱 상세히 기술된 바와 같이, 특정 항체 단편을 포함할 수 있다. 항체는 키메라, 인간, 인간화된, 및/또는 친화력 성숙될 수 있다.
본원에서 사용되는 항체의 "가변 영역" 또는 "가변 도메인"은 항체의 중쇄 또는 경쇄의 아미노-말단 도메인을 지칭한다. 이러한 도메인은 일반적으로, 항체의 가장 가변 부분이고, 항원-결합 부위를 함유한다.
본원에서 사용되는 용어 "가변"은 가변 도메인의 특정 부분이 항체 사이에서 서열이 광범위하게 상이하고, 이의 특정 항원에 대한 각 특정 항체의 결합 및 특이성에서 사용된다는 사실을 지칭한다. 그러나, 가변성은 항체의 가변 도메인 전반에 걸쳐 고르게 분포되지 않는다. 이는 경쇄 및 중쇄 가변 도메인에서 상보성-결정 영역(CDR) 또는 초가변 영역 둘 모두로 불리워지는 3개의 세그먼트에 집중된다. 가변 도메인의 더욱 고도의 보존된 부분은 프레임워크(FR)로 불리워진다. 천연 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인은 각각 3개의 CDR에 의해 연결된, 거의 베타-시트 구성을 채택하는, 4개의 FR 영역을 포함하며, 이는 루프를 형성하여, 베타-시트 구조를 연결하고, 일부 경우에, 이의 일부를 형성한다. 각 사슬에서 CDR은 FR 영역에 의해 함께 밀접하게 결합되며, 다른 사슬로부터의 CDR과 함께, 항체의 항원-결합 부위의 형성에 기여한다[Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, National Institute of Health, Bethesda, Md. 참조]. 불변 도메인은 항원에 대한 항체의 결합에 직접 관여하지 않고, 항체-의존 세포 독성에서 항체의 관여와 같은 다양한 이펙터 기능을 나타낸다.
"Fv"는 완전한 항원-인식 및 -결합 부위를 함유한 최소 항체 단편이다. 2-사슬 Fv 종에서, 이러한 영역은 긴밀한, 비-공유 결합의 하나의 중쇄 및 하나의 경쇄 가변 도메인의 다이머로 이루어진다. 단쇄 Fv 종에서, 하나의 중쇄 및 하나의 경쇄 가변 도메인은, 경쇄 및 중쇄가 2개의 사슬 Fv 종에서의 것과 유사한 "다이머" 구조에서 결합할 수 있도록 가요성 펩티드 링커에 의해 공유 결합될 수 있다. 이러한 구성에서, 각 가변 도메인의 3개의 CDR이 상호작용하여 VH-VL 다이머의 표면 상에서 항원-결합 부위를 규정한다. 총괄적으로, 6개의 CDR은 항체에 항원-결합 특이성을 부여한다. 그러나, 심지어 단일 가변 도메인(또는 항원에 대해 특이적인 단지 3개의 CDR을 포함한 Fc의 절반)은 전체 결합 부위에 비해 더 낮은 친화력에서도, 항원을 인식하고 결합하는 능력을 갖는다.
"Fab" 단편은 또한, 경쇄의 불변 도메인 및 중쇄의 제1 불변 도메인(CH1)을 함유한다. Fab' 단편은 항체 힌지 영역으로부터 하나 이상의 시스테인을 포함하는 중쇄 CH1 도메인의 카복실 말단에서 수 개의 잔기의 첨가에 의해 Fab 단편과 다르다. Fab'-SH는 본원에서 불변 도메인의 시스테인 잔기(들)는 자유 티올 기를 지니는 Fab'에 대한 명칭이다. F(ab')2 항체 단편은 본래, 이들 사이에 힌지 시스테인을 갖는 Fab' 단편의 쌍으로서 생성되었다. 항체 단편의 다른 화학적 커플링이 또한 알려져 있다.
임의의 척추동물 종으로부터의 항체(면역글로불린)의 "경쇄"는 이의 불변 도메인의 아미노산 서열을 기초로 하여, 카파(κ) 및 람다(λ)로 불리워지는, 2개의 명확하게 구별된 타입 중 하나로 할당될 수 있다.
용어 "전장 항체," "무손상 항체" 및 "전체 항체"는 하기에서 정의된 바와 같은 항체 단편이 아닌 실질적으로 무손상 형태의 항체를 지칭하기 위해 본원에서 상호 교환 가능하게 사용된다. 이러한 용어는 구체적으로 Fc 영역을 함유한 중쇄를 갖는 항체를 지칭한다.
본원에서 사용되는 "항체 단편"은 단지 무손상 항체의 일부를 포함하며, 여기서, 이러한 부분은 무손상 항체에 존재할 때 그러한 부분과 일반적으로 관련된 기능 중 적어도 하나, 및 대부분 또는 모두를 보유한다. 일 구현예에서, 항체 단편은 무손상 항체의 항원 결합 부위를 포함하고, 이에 따라, 항원에 결합하는 능력을 보유한다. 다른 구현예에서, 항체 단편, 예를 들어, Fc 영역을 포함하는 항체 단편은 무손상 항체에 존재할 때 Fc 영역과 일반적으로 관련된 생물학적 기능, 예를 들어, FcRn 결합, 항체 반감기 조절, ADCC 기능 및 상보적 결합 중 적어도 하나를 보유한다. 일 구현예에서, 항체 단편은 무손상 항체와 실질적으로 유사한 생체내 반감기를 갖는 1가 항체이다. 예를 들어, 이러한 항체 단편은 단편에 생체내 안정성을 부여할 수 있는 Fc 서열에 연결된 항원 결합 아암을 포함할 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "단일 클론 항체"는 실질적으로 균질한 항체의 집단으로부터 얻어진 항체를 지칭하며, 즉, 집단을 포함하는 개별 항체는 소량으로 존재할 수 있는 가능한 천연 발생 돌연변이를 제외하고 동일하다. 이에 따라, 수식어 "단일 클론"은 별개의 항체들의 혼합물이 아닌 것으로서 항체의 특징을 나타낸다. 이러한 단일 클론 항체는 통상적으로 타겟에 결합하는 폴리펩티드 서열을 포함하는 항체를 포함하며, 여기서, 타겟-결합 폴리펩티드 서열은 복수의 폴리펩티드 서열로부터 단일 타겟 결합 폴리펩티드 서열의 선택을 포함하는 공정에 의해 수득되었다. 특정 구현예에서, 단일 클론 항체는 천연 서열을 배제할 수 있다. 일부 양태에서, 선택 공정은 하이브리도마 클론, 파지 클론 또는 재조합 DNA 클론의 풀과 같은 복수의 클론으로부터 고유 클론을 선택할 수 있다. 선택된 타겟 결합 서열이 예를 들어, 타겟에 대한 친화력을 개선시키고, 타겟 결합 서열을 인간화하고, 세포 배양물에서 이의 생산을 개선하고, 생체내에서 이의 면역원성을 감소시키고, 다중특이적 항체, 등을 생성시키기 위해 추가로 변경될 수 있으며, 변경된 타겟 결합 서열을 포함하는 항체가 또한 본 발명의 단일 클론 항체인 것으로 이해되어야 한다. 통상적으로 상이한 결정 인자(예를 들어, 에피토프)에 대해 지시된 상이한 항체를 포함하는 폴리클론 항체 제제와 대조적으로, 단일 클론 항체 제제의 각 단일 클론 항체는 항원 상의 단일 결정 인자에 대해 지시된다. 이의 특이성 이외에, 단일 클론 항체 제제는 이러한 것이 다른 면역글로불린에 의해 통상적으로 오염되지 않는다는 점에서 유리하다. 수식어 "단일 클론"은 항체의 실질적으로 동종 집단으로부터 얻어진 것으로서 항체의 특징을 명시하고, 임의의 특정 방법의 생산을 필요로 하는 것으로 해성되어서는 안된다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용되는 단일 클론 항체는 예를 들어, 하이브리도마 방법[예를 들어, Kohler et al. (1975) Nature, 256: 495; Harlow et al. Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988); Hammerling et al. Monoclonal Antibodies and T-Cell hybridomas 563-681 (Elsevier, N.Y., 1981) 참조], 재조합 DNA 방법[예를 들어, 미국특허 제4,816,567호 참조], 파지 디스플레이 기술[예를 들어, Clackson et al. (1991) Nature, 352: 624-628; Marks et al. (1992) J. Mol. Biol. 222: 581-597; Sidhu et al. (2004) J. Mol. Biol. 338(2): 299-310; Lee et al.(2004) J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093; Fellouse (2004) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472; 및 Lee et al.(2004) J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132 참조], 및 인간 면역글로불린 서열을 인코딩하는 인간 면역글로불린 유전자좌 또는 유전자의 일부 또는 모두를 갖는 동물에서 인간 또는 인간-유사 항체를 생산하기 위한 기술[예를 들어, WO98/24893호; WO96/34096호; WO96/33735호; WO91/10741호; Jakobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 2551 (1993); Jakobovits et al. (1993) Nature 362: 255-258; Bruggemann et al.(1993) Year in Immunol. 7:33; 미국특허 제5,545,807호; 제5,545,806호; 제5,569,825호; 제5,625,126호; 제5,633,425호; 제5,661,016호; Marks et al. (1992) Bio. Technology 10: 779-783; Lonberg et al.(1994) Nature 368: 856-859; Morrison (1994) Nature 368: 812-813; Fishwild et al. (1996) Nature Biotechnol. 14: 845-851; Neuberger (1996) Nature Biotechnol. 14: 826 and Lonberg and Huszar (1995) Intern. Rev. Immunol. 13: 65-93 참조]을 포함하는 다양한 기술에 의해 제조될 수 있다.
본원에서 단일 클론 항체는 상세하게, 원하는 생물학적 활성을 나타내는 한, 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정 종으로부터 유래되거나 특정 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 항체의 서열과 일치하거나 상응하는 서열과 상동성이며 사슬(들)의 나머지가 다른 종으로부터 유래되거나 다른 항체 부류 또는 하위부류에 속하는 항체의 서열과 동일하거나 상응하는 서열과 상동성인 "키메라" 항체를 포함한다[미국특허 제4,816,567호; 및 Morrison et al. (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-6855].
본 발명의 항체는 또한 본 발명의 항체로부터 생성된 키메라 또는 인간화된 단일 클론 항체를 포함한다.
항체는 전장일 수 있거나, Fab, F(ab')2, Fab', F(ab)', Fv, 단쇄 Fv(scFv), 2가 scFv(bi-scFv), 3가 scFv(tri-scFv), Fd, dAb 단편[예를 들어, Ward et al. (1989) Nature, 341 :544-546], CDR, 이중체, 삼중체, 사중체, 선형 항체, 단쇄 항체 분자, 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함하지만, 이로 제한되지 않는 항원-결합 부분을 갖는 항체의 단편(또는 단편들)을 포함할 수 있다. 재조합 방법 또는 합성 링커를 이용하여 항체 단편을 결합함으로써 생성된 단쇄 항체는 또한, 본 발명에 포함된다[Bird et al. (1977) Science, 242:423-426. Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1988, 85:5879-5883].
본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 단일특이적, 이중-특이적 또는 다중특이적일 수 있다.
IgG(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4), IgM, IgA(IgA1, IgA2), IgD 또는 IgE(모든 부류 및 하위부류는 본 발명에 포함됨)를 포함하는 모든 항체 아이소형이 본 발명에 포함된다. 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 포유류(예를 들어, 마우스, 인간) 항체 또는 이의 항원-결합 부분이다. 항체의 경쇄는 카파 또는 람다 타입일 수 있다.
이에 따라, 본 발명의 항체는 비-뮤린 기원, 바람직하게는 인간 기원의 중쇄 또는 경쇄 가변 영역, 중쇄 또는 경쇄 불변 영역, 프레임워크 영역, 또는 이들의 임의의 부분과 조합하여 포함하며, 이는 본 발명의 항체에 도입될 수 있다.
"인간화된" 형태의 비-인간(예를 들어, 뮤린) 항체는 비-인간 면역글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 함유한 키메라 항체이다. 일 구현예에서, 인간화된 항체는 수용자의 초가변 영역으로부터의 잔기가 원하는 특이성, 친화력 및/또는 용량을 갖는 마우스, 래트, 토끼, 또는 비인간 영장류와 같은 비-인간 종(공여자 항체)의 초가변 영역으로부터의 잔기로 대체된, 인간 면역글로불린(수용자 항체)이다. 일부 경우에, 인간 면역글로불린의 프레임워크 영역(FR) 잔기는 상응하는 비-인간 잔기로 대체된다. 또한, 인간화된 항체는 수용자 항체 또는 공여자 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이러한 변형은 항체 성능을 추가로 정제하기 위해 만들어진다. 일반적으로, 인간화된 항체는 실질적으로 모든 적어도 하나, 및 통상적으로 2개의 가변 도메인을 포함할 것이며, 여기서, 모든 또는 실질적으로 모든 초가변 루프는 비-인간 면역글로불린의 것에 해당하며, 모든 또는 실질적으로 모든 FR은 인간 면역글로불린 서열의 것이다. 인간화된 항체는 선택적으로, 또한, 면역글로불린 불변 영역(Fc)의 적어도 일부분, 통상적으로, 인간 면역글로불린의 것을 포함할 것이다. 더욱 상세하게, 문헌[Jones et al. (1986) Nature 321:522-525; Riechmann et al. (1988) Nature 332:323-329; 및 Presta (1992) Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596]이 참조된다. 또한 하기 리뷰 문헌 및 여기에 인용된 참고문헌이 참조된다[Vaswani and Hamilton (1988) Ann. Allergy, Asthma & Immunol. 1:105-115; Harris (1995) Biochem. Soc. Transactions 23:1035-1038; Hurle and Gross (1994) Curr. Op. Biotech. 5:428-433].
본원에서 사용되는 용어 "초가변 영역", "HVR", 또는 "HV"는 서열에서 초가변적이고/이거나 구조적으로 규정된 루프를 형성하는 항체 가변 도메인의 영역을 지칭한다. 일반적으로, 항체는 6개의 초가변 영역을 포함한다: VH에서 3개(H1, H2, H3), 및 VL에서 3개(L1, L2, L3). 다수의 초가변 영역 설명은 사용 중이고, 본원에 포함된다. Kabat 상보성 결정 영역(Complementarity Determining Region; CDR)은 서열 변동성을 기초로 한 것이고, 가장 일반적으로 사용된다[Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.]. Chothia는 대신에 구조 루프의 위치를 지칭한다[Chothia and Lesk (1987) J. Mol. Biol. 196:901-917].
본원에서 사용되는 "프레임워크" 또는 "FW" 잔기는 본원에서 규정된 바와 같은 초가변 영역 잔기 이외의 그러한 가변 도메인 잔기이다.
용어 "Kabat에서와 같은 가변 도메인 가변 넘버링" 또는 "Kabat에서와 같은 아미노산 위치 넘버링" 및 이의 변형은 문헌[Kabat et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)]에서 항체의 편집(compilation)의 중쇄 가변 도메인 또는 경쇄 가변 도메인에 사용되는 넘버링 시스템을 지칭한다. 이러한 넘버링 시스템을 이용하여, 실제 선형 아미노산 서열은 가변 도메인의 FR 또는 HVR의 단축 또는 여기에 삽입에 대응하는 더 적거나 추가적인 아미노산을 함유할 수 있다. 예를 들어, 중쇄 가변 도메인은 H2의 잔기 52 이후에 단일 아미노산 삽입물(예를 들어, Kabat에 따른 잔기 52a)을 포함하고, 중쇄 FR 잔기 82 이후에 삽입된 잔기(예를 들어, Kabat에 따른 잔기 82a, 82b, 및 82c, 등)를 포함할 수 있다. 잔기의 Kabat 넘버링은 "표준" Kabat 넘버링된 서열을 갖는 항체의 서열의 상동성 영역에서 정렬에 의해 제공된 항체에 대해 결정될 수 있다.
본원에서 사용되는 "단쇄 Fv" 또는 "scFv" 항체 단편은 항체의 VH 및 VL 도메인을 포함하며, 여기서, 이러한 도메인은 단일 폴리펩티드 사슬에 존재한다. 일반적으로, scFv 폴리펩티드는 scFv가 항원 결합을 위한 원하는 구조를 형성할 수 있는 VH 도메인과 VL 도메인 간의 폴리펩티드 링커를 추가로 포함한다. scFv의 리뷰를 위해 문헌[Pluckthun, in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)]이 참조된다.
본원에서 사용되는 용어 "이중체"는 2개의 항원-결합 부위를 갖는 작은 항체 단편을 지칭하며, 이러한 단편은 동일한 폴리펩티드 사슬에서 경쇄 가변 도메인(VL)에 연결된 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함한다(VH-VL). 동일한 사슬 상의 2개의 도메인 간에 쌍을 형성하기에 너무 짧은 링커를 사용함으로써, 도메인은 다른 사슬의 상보적 도메인과 쌍을 이루고 2개의 항원-결합 부위를 생성시킨다. 이중체는 예를 들어, EP 404,097; WO93/1161호; 및 문헌[Hollinger et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448]에서 더욱 충분히 기술된다.
본원에서 사용되는 "인간 항체"는 인간에 의해 생성된 항체의 아미노산 서열과 일치하고/하거나 본원에 개시된 바와 같은 인간 항체를 제조하는 임의의 기술을 이용하여 제조된 아미노산 서열을 갖는 항체이다. 이러한 인간 항체의 정의는 상세하게는 비-인간 항원-결합 잔기를 포함하는 인간화된 항체를 배제한다.
본원에서 사용되는 "친화력 성숙된 항체"는 그러한 변경(들)을 갖지 않는 부모 항체와 비교하여 항원에 대한 항체의 친화력의 개선을 야기시키는 하나 이상의 이의 HVR에서 하나 이상의 변경을 갖는 항체이다. 일 구현예에서, 친화력 성숙된 항체는 타겟 항원에 대해 나노몰 또는 심지어 피코몰 친화력을 갖는다. 친화력 성숙된 항체는 당해 분야에 공지된 절차에 의해 생성된다. 문헌[Marks et al. (1992) Bio/Technology 10:779-783]에는 VH 및 VL 도메인 셔플링에 의한 친화력 돌연변이가 기술되어 있다. CDR alc/또는 프레임워크 잔기의 랜덤 돌연변이형성은 문헌[Barbas et al. (1994) Proc Nat. Acad. Sci. USA 91:3809-3813; Schier et al. (1995) Gene 169:147-155; Yelton et al. (1995) J. Immunol. 155:1994-2004; Jackson et al. (1995) J. Immunol. 154(7):3310-9; 및 Hawkins et al. (1992) J. Mol. Biol. 226:889-896]에 기술되어 있다.
본원에서 사용되는 "차단 항체" 또는 "길항제 항체"는 항체가 결합하는 항원의 생물학적 활성을 억제하거나 감소시키는 항체이다. 특정의 차단 항체 또는 길항제 항체는 항원의 생물학적 활성을 실질적으로 또는 완전히 억제한다.
본원에서 사용되는 "효능제 항체"는 고려되는 폴리펩티드의 기능성 활성 중 적어도 하나를 모방하는 항체이다.
본원에서 사용되는 "장애"는 본 발명의 항체로의 치료로부터 이익을 얻을 수 있는 임의의 상태이다. 이는 포유동물이 고려되는 장애에 걸리기 쉬운 병리학적 상태를포함하는 만성 및 급성 장애 또는 질병을 포함한다. 본원에서 치료되는 장애의 비제한적인 예는 암을 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "세포 증식성 장애" 및 "증식성 장애"는 어느 정도의 비정상적 세포 증식과 관련된 장애를 지칭한다. 일 구현예에서, 세포 증식성 장애는 암이다.
본원에서 사용되는 "종양"은 악성 또는 양성, 및 모든 전암성 및 암성 세포 및 조직이든지 간에 모든 신생물 세포 성장 및 증식을 지칭한다. 용어 "암," "암종," "세포 증식성 장애," "증식성 장애" 및 "종양"은 본원에 지칭된 바와 같이 서로 배타적인 것은 아니다.
본원에서 사용되는 용어 "암" 및 "암종"은 조절되지 않는 세포 성장/증식에 의해 통상적으로 특징되는 포유동물에서의 생리학적 상태를 지칭하거나 이를 기술하는 것이다. 암의 예는 암종, 림프종(예를 들어, 호지킨 및 비-호지킨 림프종), 모세포종, 육종, 및 백혈병을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. 이러한 암의 더욱 특정 예는 편평 세포암, 소세포 폐암, 비-소세포 폐암, 폐의 선암, 폐의 편평 암종, 복막암, 간세포암, 위장암, 췌장암, 교아종, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 간종, 유방암, 결장암, 직장결장암, 자궁내막 암종 또는 자궁암종, 침샘 암종, 신장암, 간암, 전립선암, 외음부암, 갑상선 암, 간 암종, 백혈병 및 다른 림프증식성 장애, 및 다양한 타입의 두경부암을 포함한다.
본원에서 사용되는 "치료"는 치료 중인 개체 또는 세포의 자연적인 과정을 변경하려는 시도의 임상적 개입을 지칭하고, 예방을 위해 또는 임상 병리 과정 동안 수행될 수 있다. 원하는 치료 효과는 질병의 발생 또는 재발 방지, 증상의 완화, 질병의 임의의 직접 또는 간접적인 병리학적 결과의 감소, 염증 및/또는 조직/기관 손상의 예방 또는 감소, 질병 진행 속도의 감소, 질병 상태의 완화 또는 개선, 및 관해 또는 개선된 예후를 포함한다. 특정 구현예에서, 본 발명의 항체는 질병 또는 장애의 발병을 지연시키기 위해 사용된다.
본원에서 사용되는 "항체-약물 접합체(ADC)"는 화학치료제, 약물, 성장 억제제, 독소(예를 들어, 박테리아, 진균, 식물, 또는 동물 기원의 효소적 활성 독소, 또는 이의 단편), 또는 방사성 동위원소(즉, 방사성접합체)와 같은 세포독성제에 접합된 항체를 지칭한다.
본원에서 사용되는 "T 세포 표면 항원"은 MHC-관련 펩티드 항원의 특이적 인식을 위해 T-세포에 의해 사용되는 모든 T-세포의 마커를 규정하는 원리인 T-세포 항원 수용체(TcR)를 포함하는, 당해 분야에 공지된 대표적인 T 세포 표면 마커를 포함할 수 있다. TcR과 관련된 예시는 CD3으로서 공지된 단백질의 복합체로서, 이는 이의 동족 MHC/항원 복합체에 대한 TcR 결합 후 세포내 신호의 변환에 관여한다. T 세포 표면 항원의 다른 예는 CD2, CD4, CD5, CD6, CD8, CD28, CD40L 및/또는 CD44를 포함할 수 있다(또는 배제할 수 있다).
본원에서 사용되는 "개체" 또는 "대상체"는 척추동물이다. 특정 구현예에서, 척추동물은 포유동물이다. 포유동물은 농장 동물(예를 들어, 소), 스포츠 동물, 애완동물(예를 들어, 고양이, 개, 및 말), 영장류, 마우스 및 래트를 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. 특정 구현예에서, 척추동물은 인간이다.
본원에서 사용되는 치료 목적을 위한 "포유동물"은 인간, 가축, 및 농장동물, 및 동물원, 스포츠, 또는 애완 동물, 예를 들어, 개, 말, 고양이, 소, 등을 포함하는, 포유동물로서 분류된 임의의 동물을 지칭한다. 특정 구현예에서, 포유동물은 인간이다.
본원에서 사용되는 "유효량"은 원하는 치료 또는 예방 결과를 달성하기 위한, 필요한 투여량에 및 기간 동안 효과적인 양을 지칭한다.
본 발명의 물질/분자의 "치료학적 유효량"은 질병 상태, 개체의 연령, 성별, 및 체중, 및 개체에서 원하는 반응을 이끌어 내는 물질/분자의 능력과 같은 인자에 따라 달라질 수 있다. 치료학적 유효량은 또한, 물질/분자의 임의의 독성 또는 유해한 효과가 치료학적으로 유익한 효과보다 더 중요한 것이다. "예방학적 유효량"은 원하는 예방 결과를 달성하기 위한, 필요한 투여량에 및 기간 동안 효과적인 양을 지칭한다. 통상적으로, 그러나 반드시 그러한 것은 아니지만, 예방적 용량이 질병 이전 또는 질병의 초기 단계에서 대상체에 사용되기 때문에, 예방학적 유효량은 치료학적 유효량 미만일 것이다.
본원에서 사용되는 용어 "세포독성제"는 세포의 기능을 억제하거나 예방하고/하거나 세포의 파괴를 야기시키는 물질을 지칭한다. 이러한 용어는 방사성 동위원소(예를 들어, At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 및 Lu의 방사성 동위원소), 화학치료제(예를 들어, 메토트렉세이트, 아드리아마이신, 빈카 알칼로이드, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 에토포시드, 독소루비신, 멜팔란, 미토마이신 C, 클로람부실, 다우노루비신 또는 다른 인터칼레이팅제), 효소, 및 이의 단편, 예를 들어, 핵분해효소, 항생제, 및 독소, 예를 들어, 이의 단편 및/또는 변이체를 포함하는 박테리아, 진균, 식물 또는 동물 기원의 소분자 독소 또는 효소 활성 독소, 및 하기에 개시되는 다양한 항종양 또는 항암제를 포함하도록 의도된다. 다른 세포독성제는 하기에 기술되어 있다. 종양제거제는 종양 세포의 파괴를 야기시킨다.
본원에서 사용되는 예시적인 종양 치료제는 화학치료제 및 항체를 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. 본원에서 사용되는 "화학치료제"는 암의 치료에서 유용한 화학적 화합물이다. 화학치료제의 예는 알킬화제, 예를 들어, 티오테파 및 CYTOXAN® 사이클로포스파미드; 알킬 설포네이트, 예를 들어, 부술판, 임프로술판 및 피포술판; 아지리딘, 예를 들어, 벤조도파, 카르보쿠온, 메투레도파, 및 우레도파; 에틸렌이민 및 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포라미드, 트리에틸렌티오포스포라미드 및 트리메틸올멜라민을 포함하는 메틸라멜라민; 아세토게닌스(특히, 불라타신 및 불라타시논); 델타-9-테트라하이드로칸나비놀(드로나비놀, MARINOL®); 베타-라파콘; 라파콜; 콜히친; 베툴린산; 캄포테신(합성 유사체 토포테칸(HYCAMTIN®), CPT-11(이리노테칸, CAMPTOSAR®), 아세틸캄프토테신, 스코포렉틴, 및 9-아미노캄프토테신을 포함함); 브리오스타틴; 칼리스타틴; CC-1065(이의 아도젤레신, 카르젤레신 및 비젤레신 합성 유사체를 포함함); 포도필로톡신; 포도필린산; 테니포시드; 트립토피신(특히, 트립토피신 1 및 크립토피신 8); 돌라스타틴; 듀오카르마이신(합성 유사체, KW-2189 및 CB1-TM1을 포함함); 엘레우테로빈; 판크라스타틴; 사르코딕티인; 스폰기스타틴; 질소 머스타드, 예를 들어, 클로람부실, 클로마파진, 클로로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드 메클로레타민, 메클로레타민 옥사이드 하이드로클로라이드, 멜팔란, 노벰비킨, 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파미드, 우라실 머스타드; 니트로소우레아, 예를 들어, 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴 및 라님누스틴; 항생제, 예를 들어, 엔디인 항생제(예를 들어, 칼리케아미신, 특히, 칼리케아미신 감마1I 및 칼리케아미신 오메가I1(예를 들어, Agnew (1994) Chem. Intl. Ed. Engl., 33: 183-186) 참조; 디네마이신 A를 포함한 디네마이신; 에스페라미신;뿐만 아니라 네오카르지노스타틴 발색단 및 관련된 크로모단백질 엔디인 항생제 발색단), 아클라시노미신, 악티노마이신, 아우트라마아신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카미노마이신, 카르지노필린, 크로모미시니스, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르류신, ADRIAMYCIN® 독소루비신(모르폴리노-독소루비신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신 및 데옥시독소루비신을 포함함), 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신, 예를 들어, 미토마이신 C, 미코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포트피로마이신, 퓨로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 항-대사물, 예를 들어, 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실(5-FU); 폴산 유사체, 예를 들어, 데노프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트리메트렉세이트; 퓨린 유사체, 예를 들어, 플루다라빈, 6-머캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌; 피리미딘 유사체, 예를 들어, 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카르모푸르, 시타라빈, 디데옥시우리틴, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록수리딘; 안드로겐, 예를 들어, 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스톨락톤; 항-아드라넬, 예를 들어, 아마노글루테티미드, 미토탄, 트릴로스탄; 폴산 보충제, 예를 들어, 프롤린산; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코사이드; 아미노레불린산; 에닐우라실; 암사크린; 베스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지쿠온; 엘포르미틴; 엘리프티늄 아세테이트; 에포틸론; 에토글루시드; 갈륨 니트레이트; 하이드록시우레아; 렌티난; 로니다이닌; 마이탄시노이드, 예를 들어, 마이탄신 및 안사미토신; 미토구아존; 미톡산트론; 모피단몰; 니트라에린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 로속산트론; 2-에틸하이드라지드; 프로카르바진; PSK® 다당류 복합체(JHS Natural Products, Eugene, Oreg.); 라족산; 리족신; 시조푸란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트리아지쿠온; 2,2',2"-트리클로로트리에틸아민; 트리코테센(특히, T-2 독소, 베라쿠린 A, 로리딘 A 및 안구이딘); 우레탄; 빈데신(ELDISINE®, FILDESIN®); 다카르바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노사이드("Ara-C"); 티오테파; 탁소이드, 예를 들어, TAXOL® 파클리탁셀(Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.), ABRAXANE™ 파클라탁셀의 크레모포어-부재, 알부민-조작된 나노입자 제형(American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, Ill.), 및 TAXOTERE® 도세탁셀(Rhone-Poulenc Rorer, Antony, France); 클로란부실; 겜시타빈(GEMZAR®); 6-티오구아닌; 머캅토퓨린; 메토트렉세이트; 백금 유사체, 예를 들어, 시스플라틴 및 카르보플라틴; 빈블라스틴(VELBAN®); 백금; 에토포사이드(VP-16); 이포스파미드; 미톡산트론; 빈크리스틴(ONCOVIN®); 옥살리플라틴; 류코보빈; 비노렐빈(NAVELBINE®); 노반트론; 에다트렉세이트; 다우노마이신; 아미노프테린; 이반드로네이트; 토포이소머라아제 억제제 RFS 2000; 디플루오로메틸오르니틴(DMFO); 레티노이드, 예를 들어, 레틴산; 카페시타빈(XELODA®); 상기 기술된 것 중 어느 하나의 약제학적으로 허용되는 염, 산, 또는 유도체뿐만 아니라, 상기 기술된 것들 중 둘 이상의 조합물, 예를 들어, CHOP(사이클로포스파미드, 독소루비신, 빈크리스틴 및 프레드니솔론의 병용 요법에 대한 약어), 및 FOLFOX(5-FU 및 류코보빈과 조합된 옥살리플라틴(ELOXATIN™)으로의 치료 요법에 대한 약어)를 포함한다.
SSEA -4를 타겟화하는 항체
본 개시의 일 양태는 SSEA-4 관련 항원을 타겟화하는 항체를 특징으로 한다.
예시적인 항체는 항체 단편, 항체 변이체, 단일 클론 항체, 폴리 클론 항체, 및 재조합 항체, 등을 포함한다. 항체는 마우스, 토끼 또는 인간에서 발생될 수 있다.
mAb 1J1s는 하이브리도마 세포주(ATCC 기탁번호 PTA-122679)에 의해 생산된 단일 클론 항체이다. 본원에 기술된 항체는 항체 1J1s와 동일한 VH 및 VL 사슬을 함유할 수 있다. 1J1s와 동일한 에피토프에 결합하는 항체는 또한, 본 개시의 범위 내에 있다.
예시 및 이의 아미노산 및 핵산 구조/서열은 하기에 제공된다:
표 1. 항체 1J1s의 아미노산 및 뉴클레오타이드 서열
Figure pct00001
mAb 1G1s는 하이브리도마 세포주(ATCC 기탁번호 PTA-122678)에 의해 생산된 마우스 단일 클론 항체이다. 본원에 기술된 항체는 항체 1G1s와 동일한 VH 및 VL 사슬을 함유할 수 있다. 1G1s와 동일한 에피토프에 결합하는 항체는 또한 본 개시의 범위 내에 있다.
예시 및 이의 아미노산 및 핵산 구조/서열은 하기에 제공된다:
표 2. 항체 1G1s의 아미노산 및 뉴클레오타이드 서열
Figure pct00002
mAb 2F20s는 하이브리도마 세포주(ATCC 기탁번호 PTA-122676)에 의해 생산된 단일 클론 항체이다. 본원에 기술된 항체는 항체 2F20s와 동일한 VH 및 VL 사슬을 함유할 수 있다. 2F20s와 동일한 에피토프에 결합하는 항체는 또한, 본 개시의 범위 내에 있다.
예시 및 이의 아미노산 및 핵산 구조/서열은 하기에 제공된다:
표 3. 항체 2F20s의 아미노산 및 뉴클레오타이드 서열
Figure pct00003
인간화된 항-SSEA4(OBI-898) 서열은 하기에 제공된다:
표 4. 항-SSEA4(OBI-898) 인간화된 클론 서열
Figure pct00004
본 개시의 일 양태는 SSEA-4에 대해 특이적인 신규한 항체를 특징으로 한다. 항-SSEA-4 항체는 Neu5Acα2→ 3Galβ1→ 3GalNAcβ1→ 3Galα1→ 4Galβ1→ 4Glcβ1(SSEA-4 육탄당)에 결합한다.
본원에 기술된 임의의 항체는 전장 항체 또는 이의 항원-결합 단편일 수 있다. 일부 예에서, 항원 결합 단편은 Fab 단편, F(ab')2 단편, 또는 단쇄 Fv 단편이다. 일부 예에서, 항원 결합 단편은 Fab 단편, F(ab')2 단편, 또는 단쇄 Fv 단편이다. 일부 예에서, 항체는 인간 항체, 인간화된 항체, 키메라 항체, 또는 단쇄 항체이다.
본원에 기술된 임의의 항체는 하기 중 하나 이상의 특징을 갖는다: (a) 재조합 항체, 단일 클론 항체, 키메라 항체, 인간화된 항체, 인간 항체, 항체 단편, 이중특이 항체, 단일특이 항체, 1가 항체, IgG1 항체, IgG2 항체, 또는 항체의 유도체이고; (b) 인간, 뮤린, 인간화된 또는 키메라 항체, 항원-결합 단편, 또는 항체의 유도체이고; (c) 단쇄 항체 단편, 다중체, Fab 단편, 및/또는 IgG, IgM, IgA, IgE, IgD 아이소형의 면역글로불린 및/또는 이의 하위부류이고; (d) (i) 암 세포의 ADCC 및/또는 CDC를 매개하고/하거나; (ii) 암 세포의 아폽토시스를 유도하고/하거나 증진시키고/시키거나; (iii) 암 세포의 타겟 세포의 증식을 억제하고/하거나; (iv) 암 세포의 식균 작용을 유도하고/하거나 증진시키고/시키거나; (v) 세포독성제의 방출을 유도하고/하거나 증진시키는 특징들 중 하나 이상을 가지고; (e) 종양-특이적 탄수화물 항원인, 종양-관련 탄수화물 항원에 특이적으로 결합하고; (f) 비-암 세포, 비-종양 세포, 양성 암 세포 및/또는 양성 종양 세포 상에 발현된 항원에 결합하지 않고/않거나; (g) 암 줄기 세포 및 정상 암 세포 상에 발현된 종양-관련 탄수화물 항원에 특이적으로 결합한다.
바람직하게는, 이의 개개 항원에 대한 항체의 결합은 특이적이다. 용어 "특이적"은 일반적으로 결합 쌍의 하나의 구성원이 이의 특이적 결합 파트너(들)와는 다른 분자에 대한 임의의 유의미한 결합을 나타내지 않을 것이고 예를 들어 본원에 기술된 것과는 다른 임의의 다른 분자와의 약 30% 미만, 바람직하게는, 20%, 10%, 또는 1% 교차-반응성을 갖는 상황을 지칭하기 위해 사용된다.
항체는 높은 친화력(낮은 KD 값)을 갖는 타겟 에피토프에 적합하게 결합하며, 바람직하게는, KD는 나노몰 범위 이하이다. 친화력은 당해 분야에 공지된 방법, 예를 들어, 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정될 수 있다.
본 발명의 항-SSEA-4 항체는 질량 분석법 또는 유전자 조작을 필요로 하지 않고 면역침강, ELISA, 또는 면역현미경과 같은 간단하고 일상적인 생체분자 검정에서 에피토프의 민감하고 특이적인 검출을 허용한다. 또한, 이는 이러한 경로의 정상 기능화를 관찰하고 설명하고 경로가 비정상적으로 기능할 때를 검출하는 데 상당한 이점을 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명의 항-SSEA-4 항체는 다양한 세포 타입 및 조직에서 암 상태의 검출을 위한 시약으로서 유용성을 발견한다.
또 다른 양태에서, 본 항-SSEA-4 항체는 본 발명의 대상 항체와 유사한 차단 활성 패턴을 갖는 SSEA-4 길항제의 개발에 유용하다. 예를 들어, 본 발명의 항-SSEA-4 항체는 동일한 SSEA-4 결합 특징 및/또는 SSEA-4 경로를 차단하는 능력을 갖는 다른 항체를 결정하고 동정하기 위해 사용될 수 있다.
추가 예로서, 본 발명의 항-SSEA-4 항체는 선형 및 구조적 에피토프를 포함하는 본원에 예시된 항체와 실질적으로 동일한 SSEA-4의 항원 결정인자(들)에 결합하는 다른 항-SSEA-4 항체를 동정하기 위해 사용될 수 있다.
본 발명의 항-SSEA-4 항체는 SSEA-4가 항체가 하는 것과 같이 SSEA-4에 대한 하나 이상의 결합 파트너의 결합을 차단하는 데 유사한 약리학적 효과를 나타내는 SSEA-4의 소분자 길항제를 스크리닝하는 것과 관련된 생리학적 경로를 기초로 한 검정에서 사용될 수 있다.
약제학적 제형
일 구현예에서, 본 발명은 본원에 기술된 항체 또는 이의 항원-결합 부분, 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제 조성물을 제공한다. 다른 구현예에서, 약제 조성물은 부모 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하는 핵산, 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 약제학적으로 허용되는 담체는 생리학적으로 혼화 가능한 임의의 및 모든 용매, 분산 매질, 등장성 및 흡수 지연제, 등을 포함한다. 일 구현예에서, 조성물은 대상체에서 암 세포를 억제하는 데 효과적이다.
본 약제 조성물의 투여 경로는 정맥내, 근육내, 비강내, 피하, 경구, 국소, 피하, 피내, 경피, 피하, 비경구, 직장, 척추 또는 표피 투여를 포함하지만, 이로 제한되지 않는다.
본 발명의 약제 조성물은 주사제로서, 액체 용액 또는 현탁액으로서, 또는 주사 전에 액체 비히클 중의 용액 또는 현탁액으로 적합한 고체 형태로서 제조될 수 있다. 약제 조성물은 또한, 지속 전달을 위해 사용되는 리포솜 비히클 또는 다른 미립자 담체에 캡슐화된 고체 형태, 에멀젼화된 또는 활성 성분으로 제조될 수 있다. 예를 들어, 약제 조성물은 오일 에멀젼, 유중수 에멀젼, 수중유중수 에멀젼, 부위-특이적 에멀젼, 긴-체류 에멀젼, 점착성 에멀젼, 마이크로에멀젼, 나노에멀젼, 리포솜, 미세입자, 미세구체, 나노구체, 나노입자 및 다양한 천연 또는 합성 폴리머, 예를 들어, 비흡수성 불투과성 폴리머, 예를 들어, 에틸렌비닐 아세테이트 코폴리머 및 Hytrel® 코폴리머, 팽윤성 폴리머, 예를 들어, 하이드로겔, 또는 재흡수성 폴리머, 예를 들어, 콜라겐 및 특정 폴리산 또는 폴리에스테르, 예를 들어, 약제 조성물의 지속 방출을 가능하게 하는, 재흡수성 봉합사를 제조하는 데 사용되는 것의 형태를 가질 수 있다.
본 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 포유류 대상체로 전달하기 위한 약제 조성물로 제형화된다. 약제 조성물은 단독으로 투여되고/되거나 약제학적으로 허용되는 비히클, 부형제 또는 담체와 혼합된다. 적합한 비히클은 예를 들어, 물, 염수, 덱스트로오스, 글리세롤, 에탄올, 등, 및 이들의 조합물이다. 또한, 비히클은 소량의 보조 물질, 예를 들어, 습윤화 또는 에멀젼화제, pH 완충제, 또는 애쥬번트를 함유할 수 있다. 약제학적으로 허용되는 담체는 예를 들어, 본 발명의 약제 조성물의 흡수 또는 제거 속도를 안정화시키거나, 증가 또는 감소시키는 역할을 하는 생리학적으로 허용되는 화합물을 함유할 수 있다. 생리학적으로 허용되는 담체는 예를 들어, 탄수화물, 예를 들어, 글루코오스, 수크로오스, 또는 덱스트란, 항산화제, 예를 들어, 아스코르브산 또는 글루타티온, 킬레이트제, 저분자량 단백질, 세제, 리포솜 담체, 또는 부형제 또는 다른 안정화제 및/또는 완충제를 포함할 수 있다. 다른 생리학적으로 허용되는 화합물은 습윤제, 에멀젼화제, 분산제 또는 보존제를 포함한다[예를 들어, 문헌[the 21st edition of Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton, Pa. ("Remington's")] 참조]. 본 발명의 약제 조성물은 또한, 보조 물질, 예를 들어, 약리학적 작용제, 시토카인, 또는 다른 생물학적 반응 조절제를 포함할 수 있다.
또한, 약제 조성물은 중성 또는 염 형태의 약제 조성물로 제형화될 수 있다. 약리학적으로 허용되는 염은 산부가염(활성 폴리펩티드의 자유 아미노 기와 함께 형성됨)을 포함하며, 이는 무기산, 예를 들어, 염산 또는 인산, 또는 유기산, 예를 들어, 아세트산, 옥살산, 타르타르산, 만델산, 등과 함께 형성된다. 자유 카복실 기로부터 형성된 염은 또한, 예를 들어, 나트륨, 칼륨, 암모늄, 칼슘, 또는 페릭 하이드록사이드와 같은 무기 염기, 및 이소프로필아민, 트리메틸아민, 2-에틸아미노 에탄올, 히스티딘, 프로카인, 등과 같은 유기 염기로부터 유도될 수 있다.
이러한 투여 형태를 제조하는 실제 방법은 당업자에게 공지되어 있거나 당업자에게 명백할 것이다[예를 들어, 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania, 21st edition] 참조].
약제 조성물은 대상체의 연령, 체중 및 상태, 사용된 특정 조성, 및 투여 경로, 약제 조성물이 예방 또는 치료 목적을 위해 사용하는 지, 등에 따라 적절한 스케쥴로 및 기간에 걸쳐 단일 용량 치료 또는 다중 용량 치료로 투여될 수 있다. 예를 들어, 일 구현예에서, 본 발명에 따른 약제 조성물은 월 1회, 월 2회, 월 3회, 격주(qow), 주 1회(qw), 주 2회(biw), 주 3회(tiw), 주 4회, 주 5회, 주 6회, 격일(qod), 매일(qd), 하루에 2회(qid), 또는 하루에 3회(tid) 투여된다.
본 발명에 따른 항체의 투여 기간, 즉, 약제 조성물이 투여되는 기간은 임의의 다양한 인자, 예를 들어, 대상체 반응, 등에 따라 달라질 수 있다. 예를 들어, 약제 조성물은 약 1초 이상 내지 1시간 이상, 1일 내지 약 1주, 약 2주 내지 약 4주, 약 1개월 내지 약 2개월, 약 2개월 내지 약 4개월, 약 4개월 내지 약 6개월, 약 6개월 내지 약 8개월, 약 8개월 내지 약 1년, 약 1년 내지 약 2년, 또는 약 2년 내지 약 4년, 또는 그 이상의 범위의 기간에 걸쳐 투여될 수 있다.
투여 용이성 및 투여량의 균일성을 위해, 투여 단위 형태의 경구 또는 비경구 약제 조성물이 사용될 수 있다. 본원에서 사용되는 투여 단위 형태는 치료할 대상체에 대한 단일 투여량으로서 적합한 물리적으로 별개의 단위를 지칭한다. 각 단위는 필요한 약제학적 담체와 관련하여 원하는 치료 효과를 형성하기 위해 계산된 사전 결정된 양의 활성 화합물을 함유한다.
세포 배양 검정 및 동물 연구로부터 얻어진 데이터는 인간에서 사용하기 위한 소정 범위의 투여량을 제형화하는 데 이용될 수 있다. 일 구현예에서, 이러한 화합물의 투여량은 독성이 거의 없거나 전혀 없는 ED50을 포함하는 소정 범위의 순환 농도 내에 있다. 투여량은 사용되는 투여 형태 및 사용되는 투여 경로에 따라 이러한 범위 내에서 달라질 수 있다. 다른 구현예에서, 치료학적 유효 용량은 초기에 세포 배양 검정으로부터 추정될 수 있다. 용량은 문헌[cell culture. Sonderstrup, Springer, Sem. Immunopathol. 25: 35-45, 2003. Nikula et al. (2000) Inhal. Toxicol. 4(12): 123-53]에서 결정된 바와 같은 IC50(즉, 증상의 절반-최대 억제(half-maximal inhibition)를 달성하는 시험 화합물의 농도)을 포함하는 순환 혈장 농도 범위를 달성하기 위한 동물 모델에서 제형화될 수 있다.
본 발멍의 항체 또는 항원-결합 부분의 치료학적 또는 예방학적 유효량에 대한 예시적인, 비제한적인 범위는 약 0.001 내지 약 60 mg/kg 체중, 약 0.01 내지 약 30 mg/kg 체중, 약 0.01 내지 약 25 mg/kg 체중, 약 0.5 내지 약 25 mg/kg 체중, 약 0.1 내지 약 20 mg/kg 체중, 약 10 내지 약 20 mg/kg 체중, 약 0.75 내지 약 10 mg/kg 체중, 약 1 내지 약 10 mg/kg 체중, 약 2 내지 약 9 mg/kg 체중, 약 1 내지 약 2 mg/kg 체중, 약 3 내지 약 8 mg/kg 체중, 약 4 내지 약 7 mg/kg 체중, 약 5 내지 약 6 mg/kg 체중, 약 8 내지 약 13 mg/kg 체중, 약 8.3 내지 약 12.5 mg/kg 체중, 약 4 내지 약 6 mg/kg 체중, 약 4.2 내지 약 6.3 mg/kg 체중, 약 1.6 내지 약 2.5 mg/kg 체중, 약 2 내지 약 3 mg/kg 체중, 또는 약 10 mg/kg 체중이다.
약제 조성물은 유효량의 본 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 함유하도록 제형화되며, 여기서, 양은 치료받는 동물 및 치료될 질환에 따라 달라진다. 일 구현예에서, 본 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 약 0.01 mg 내지 약 10 g, 약 0.1 mg 내지 약 9 g, 약 1 mg 내지 약 8 g, 약 2 mg 내지 약 7 g, 약 3 mg 내지 약 6 g, 약 10 mg 내지 약 5 g, 약 20 mg 내지 약 1 g, 약 50 mg 내지 약 800 mg, 약 100 mg 내지 약 500 mg, 약 0.01 ㎍ 내지 약 l0 mg, 약 0.05 ㎍ 내지 약 1.5 mg, 약 10 ㎍ 내지 약 1 mg, 약 30 ㎍ 내지 약 500 ㎍, 약 40 ㎍ 내지 약 300 ㎍, 약 0.1 ㎍ 내지 약 200 ㎍, 약 0.1 ㎍ 내지 약 5 ㎍, 약 5 ㎍ 내지 약 10 ㎍, 약 10 ㎍ 내지 약 25 ㎍, 약 25 ㎍ 내지 약 50 ㎍, 약 50 ㎍ 내지 약 100 ㎍, 약 100 ㎍ 내지 약 500 ㎍, 약 500 ㎍ 내지 약 1 mg, 약 1 mg 내지 약 2 mg 범위의 용량으로 투여된다. 임의의 특정 대상체에 대한 특정 용량 수준은 특정 펩티드의 활성, 연령, 체중, 일반적인 건강, 성별, 규정식, 투여 시간, 투여 경로, 및 배설률, 약물 조합 및 치료 중인 특정 질병의 중증도를 포함하는 다양한 인자에 따라 달라지고, 과도한 실험 없이 당업자에 의해 결정될 수 있다.
본 발명의 항체를 포함하는 치료학적 제형은 선택적 생리학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 안정화제와 원하는 순도를 갖는 항체와 혼합함으로써 수용액, 동결건조된 또는 다른 건조된 제형의 형태로 저장하기 위해 제조된다[Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)]. 허용되는 담체, 부형제, 또는 안정화제는 사용되는 투여량 및 농도에서 수용자에 대해 비독성이고, 완충제, 예를 들어, 포스페이트, 시트레이트, 히스티딘 및 다른 유기산; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함하는 항산화제; 보존제(예를 들어, 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드, 벤제토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알코올; 알킬 파라벤, 예를 들어, 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레소르시놀; 사이클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량(약 10개 미만의 잔기) 폴리펩티드; 단백질, 예를 들어, 혈청 알부민, 젤라틴, 또는 면역글로불린; 친수성 폴리머, 예를 들어, 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예를 들어, 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌, 또는 라이신; 단당류, 이당류, 및 글루코오스, 만노오스 또는 덱스트란을 포함하는 다른 탄수화물; 킬레이트제, 예를 들어, EDTA; 당, 예를 들어, 수크로오스, 만니톨, 트레할로오스 또는 소르비톨; 염-형성 반대이온, 예를 들어, 나트륨; 금속 복합체(예를 들어, Zn-단백질 복합체); 및/또는 비-이온성 계면활성제, 예를 들어, TWEEN™, PLURONICS™ 또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 포함한다.
본원의 제형은 또한, 서로 악영향을 미치지 않는 상보적인 활성을 갖는 것을 포함하지만, 이로 제한되지 않는 치료받는 특정 적응증에 필요한 하나 초과의 활성 화합물을 함유할 수 있다. 이러한 분자는 의도된 목적을 위해 효과적인 양으로 조합하여 적합하게 존재한다.
활성 성분은 또한 예를 들어, 코아세르베이션 기술에 의해 또는 계면 중합에 의해 제조된 마이크로캡슐, 예를 들어, 하이드록시메틸-셀룰로오스 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리-(메틸메타크릴레이트) 마이크로캡슐 각각에, 콜로이드성 약물 전달 시스템(예를 들어, 리소폼, 알부민 미소구체, 마이크로에멀젼, 나노-입자 및 나노캡슐)에 또는 거대에멀젼에 포획될 수 있다. 이러한 기술은 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)]에 개시되어 있다.
생체내 투여를 위해 사용되는 제형은 무균이어야 한다. 이는 멸균 여과막을 통한 여과에 의해 용이하게 달성된다.
지속-방출 제제가 제조될 수 있다. 지속-방출 제제의 적합한 예는 본 발명의 면역글로불린을 함유한 고체 소수성 폴리머의 반투과성 매트릭스를 함유하며, 이러한 매트릭스는 성형품, 예를 들어, 필름, 또는 마이크로캡슐의 형태이다. 지속-방출 매트릭스의 예는 폴리에스테르, 하이드로겔(예를 들어, 폴리(2-하이드록시에틸-메타크릴레이트), 또는 폴리(비닐알코올), 폴리락티드(미국특허 제3,773,919호), L-글루탐산과 γ에틸-L-글루타메이트의 코폴리머, 비분해성 에틸렌-비닐 아세테이트, 분해성 락트산-글리콜산 코폴리머, 예를 들어, LUPRON DEPOT™(락트산-글리콜산 코폴리머 및 류프롤라이드 아세테이트로 이루어진 주사 가능한 미소구체, 및 폴리-D-(-)-3-하이드록시부티르산을 포함한다. 폴리머, 예를 들어, 에틸렌-비닐 아세테이트 및 락트산-글리콜산이 100일 이상 동안 분자를 방출하는 경우에, 특정 하이드로겔은 단백질을 더 짧은 기간 동안 방출한다. 캡슐화된 면역글로불린이 장기간 동안 신체에 남아 있을 때, 이러한 것은 37℃에서 수분에 대한 노출의 결과로서 변성되거나 응집되어, 생물학적 활성이 손실되고 면역원성이 변할 수 있다. 관련된 메커니즘에 따라 안정화를 위한 합리적인 전략이 고안될 수 있다. 예를 들어, 응집 메커니즘이 티오-디설파이드 교환을 통한 분자간 S-S 결합 형성인 것으로 발견된 경우에, 안정화는 설프히드릴 잔기를 개질시키고 산성 용액으로부터 동결건조시키고, 수분 함량을 조절하고, 적절한 첨가제를 사용하고, 특정 폴리머 매트릭스 조성물을 개발함으로써 달성될 수 있다.
용도
본 발명의 항체는 예를 들어, 시험관내, 생체외, 및 생체내 치료 방법에서 사용될 수 있다. 본 발명의 항체는 시험관내, 생체외, 및/또는 생체내에서 특정 항원 활성을 일부 또는 전부 차단하기 위한 길항제로서 사용될 수 있다. 또한, 본 발명의 항체 중 적어도 일부는 다른 종으로부터의 항원 활성을 중화시킬 수 있다. 이에 따라, 본 발명의 항체는 예를 들어, 항원을 함유한 세포 배양물에서, 인간 대상체에서 또는 본 q라명의 항체가 교차 반응하는 항원을 갖는 다른 포유류 대상체(예를 들어, 침팬지, 개코 원숭이, 마모셋, 시노몰구스 및 레서스, 돼지 또는 마우스)에서 특정 항원 활성을 억제하기 위해 사용될 수 있다. 일 구현예에서, 본 발명의 항체는 항원 활성이 억제되도록 항체를 항원과 접촉시킴으로써 항원 활성을 억제하기 위해 사용될 수 있다. 일 구현예에서, 항원은 인간 단백질 분자이다.
일 구현예에서, 본 발명의 항체는 대상체에 본 발명의 항체를 투여하여 대상체에서의 항원 활성을 억제하는 것을 포함하는, 항원 활성이 유해한 장애를 앓고 있는 대상체에서 항원을 억제하는 방법에서 사용될 수 있다. 일 구현예에서, 항원은 인간 단백질 분자이며, 대상체는 인간 대상체이다. 대안적으로, 대상체는 본 발명의 항체가 결합하는 항원을 발현시키는 포유동물일 수 있다. 또 다른 대상체는 (예를 들어, 항원의 투여에 의해 또는 항원 이식 유전자의 발현에 의해) 항원이 도입된 포유동물일 수 있다. 본 발명의 항체는 치료 목적을 위해 인간 대상체에 투여될 수 있다. 또한, 본 발명의 항체는 수의학적 목적을 위해 또는 인간 질병의 동물 모델로서 항체가 교차-반응하는 항원을 발현시키는 비-인간 포유동물(예를 들어, 영장류, 돼지 또는 마우스)에 투여될 수 있다. 후자와 관련하여, 이러한 동물 모델은 본 발명의 항체의 치료 효능을 평가하기 위해(예를 들어, 투여량 및 투여 시간 과정을 시험하기 위해) 유용할 수 있다. 본 발명의 항체는 암, 근육 장애, 유비퀴틴-경로-관련 유전 장애, 면역/염증 장애, 신경 장애, 및 다른 유비퀴틴 경로-관련 장애를 포함하지만, 이로 제한되지 않는, SSEA-4s 및 SSEA-4화된 단백질의 비정상적인 발현 및/또는 활성과 관련된 질병, 장애 또는 질환을 치료, 억제, 진행을 지연, 재발의 예방/지연, 완화, 또는 예방하기 위해 사용될 수 있다.
본 발명의 항체는 치료법에서 단독으로 또는 다른 조성물과 함께 사용될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 항체는 다른 항체, 및/또는 애쥬번트/치료제(예를 들어, 스테로이드)와 동시-투여될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 항체는 치료 계획에서, 예를 들어, 암, 근육 장애, 유비퀴틴-경로-관련 유전 장애, 면역/염증 장애, 신경 장애, 및 다른 유비퀴틴 경로-관련 장애를 포함하는, 본원에 기술된 임의의 질병을 치료하는 데 항염증제 및/또는 살균제와 조합될 수 있다. 상기에 주지된 이러한 병용 치료법은 조합 투여(여기서, 둘 이상의 작용제는 동일한 또는 별도의 제형에 포함됨), 및 개별 투여를 포함하며, 이러한 경우에, 본 발명의 항체의 투여는 보조 요법 또는 요법들의 투여 전 및/또는 후에 일어날 수 있다.
본 발명의 항체(및 보조 치료제)는 비경구, 피하, 복강내, 폐내 및 비강내를 포함하는 임의의 적합한 수단에 의해 투여될 수 있고, 필요한 경우 국소 치료를 위해, 병변내 투여에 의해 투여될 수 있다. 비경구 주입은 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내, 또는 피하 투여를 포함한다. 또한, 항체는 특히, 항체의 감소하는 용량과 함께, 펄스 주입에 의해 적합하게 투여된다. 투약은 부분적으로 투여가 단기 또는 만성인지에 따라, 임의의 적합한 경로에 의해, 예를 들어, 주사(예를 들어, 정맥내 또는 피하 주사)에 의해 이루어질 수 있다.
본 발명의 항체의 결합 타겟의 위치는 항체의 제조 및 투여에 고려될 수 있다. 결합 타겟이 세포내 분자일 때, 본 발명의 특정 구현예는 결합 타겟이 위치하는 세포 내에 도입되는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제공한다. 일 구현예에서, 본 발명의 항체는 인트라바디로서 세포내에서 발현될 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 "인트라바디"는 문헌[Marasco, Gene Therapy 4: 11-15 (1997); Kontermann, Methods 34: 163-170 (2004); 미국특허 제6,004,940호 및 제6,329,173호; 미국특허출원공개 제2003/0104402호, 및 PCT 공개 WO2003/077945호]에 기술된 바와 같이, 세포내에서 발현되고 타겟 분자에 선택적으로 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 지칭한다. 인트라바디의 세포내 발현은 타겟 세포 내에 원하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분(유전자 인코딩 항체 또는 항원-결합 단편과 일반적으로 관련된 분비 신호 및 야생형 리더 서열이 결여됨)을 인코딩하는 핵산을 도입함으로써 달성된다. 미세주입, 탄도 주사, 전기천공, 칼슘 포스페이트 침전, 리포솜, 및 고려되는 핵산을 운반하는 레트로바이러스, 아데노바이러스, 아데노-관련 바이러스 및 백시니아 벡터로의 트랜스펙션 을 포함하지만, 이로 제한되지 않는 세포 내에 핵산을 도입하는 임의의 표준 방법이 이용될 수 있다. 본 발명의 항-SSEA-4 항체 모두 또는 부분을 인코딩하는 하나 이상의 핵산은 타겟 세포로 전달될 수 있으며, 이에 따라, SSEA-4에 대한 세포내 결합 및 하나 이상의 SSEA-4-매개 세포 경로의 조절이 가능한 하나 이상의 인트라바디(intrabody)가 발현된다.
본 발명의 항체 조성물은 양질의 의료 행위와 일치하는 방식으로 제형화되고, 투약되고, 투여될 것이다. 이러한 맥락에서 고려되는 인자는 치료할 특정 장애, 치료할 특정 포유동물, 개별 환자의 임상적 상태, 장애의 원인, 작용제의 전달 부위, 투여 방법, 투여 일정, 및 의료 종사자에게 공지된 다른 인자를 포함한다. 항체는 고려되는 장애를 예방하거나 치료하기 위해 현재 사용되고 있는 하나 이상의 작용제와 함께 제형화될 필요는 없지만, 이와 선택적으로 제형화된다. 이러한 다른 작용제의 유효량은 제형에 존재하는 본 발명의 항체의 양, 장애 또는 치료의 타입, 및 상기에 논의된 다른 인자에 따라 다르다. 이러한 것은 일반적으로, 동일한 투여량으로 및 본원에 기술된 바와 같은 투여 경로로, 또는 본원에 기술된 투여량의 1 내지 99%, 또는 임의의 투여량으로 및 적절한 것으로 경험/임상적으로 결정되는 임의의 경로에 의해 사용된다.
질병의 예방 또는 치료를 위해, 본 발명의 항체의 적절한 투여량(단독으로 또는 화학치료제와 같은 다른 작용제와 함께 사용될 때)은 치료할 질병의 타입, 항체의 타입, 질병의 중증도 및 과정, 항체가 예방 또는 치료 목적을 위해 투여되는 지의 여부, 이전 요법, 환자의 임상적 이력, 및 항체에 대한 반응, 주치의의 재량에 따라 달라질 것이다. 항체는 한번에 또는 일련의 치료에 걸쳐 환자에게 적합하게 투여된다. 질병의 타입 및 중증도에 따라, 약 1 ㎍/kg 내지 15 mg/kg(예를 들어, 0.1 mg/kg 내지 10 mg/kg)의 항체는 예를 들어, 하나 이상의 개별 투여에 의해, 또는 연속 주입에 의해 환자에게 투여하기 위한 초기 후보 투여량일 수 있다. 하나의 통상적인 일일 투여량은 질병의 예방 또는 치료를 위해 약 1 ㎍ 내지 본 발명의 항체의 적절한 투여량(질환에 따라 수 일 또는 그 이상, 치료는 일반적으로 질병 증상의 원하는 억제가 일어날 때까지 지속될 것이다)의 범위일 수 있다. 항체의 하나의 예시적인 투여량은 약 0.05 mg/kg 내지 약 10 mg/kg의 범위일 것이다. 이에 따라, 약 0.5 mg/kg, 2.0 mg/kg, 4.0 mg/kg 또는 10 mg/kg(또는 이들의 임의의 조합) 중 하나 이상의 용량이 환자에게 투여될 수 있다. 이러한 용량은 간헐적으로, 예를 들어, 매주 또는 매3주마다(예를 들어, 환자가 약 2 내지 약 12회, 또는 예를 들어, 약 6회 용량의 항체를 수용하도록) 투여될 수 있다. 초기의 더 높은 로딩 용량, 이후 하나 이상의 더 적은 용량이 투여될 수 있다. 예시적인 투여량 요법은 약 4 mg/kg의 초기 로딩 용량, 이후 약 2 mg/kg의 항체의 매주 유지 용량을 투여하는 것을 포함한다. 그러나, 다른 투여량 요법이 유용할 수 있다. 이러한 치료법의 진행은 기존 기술 및 검정에 의해 용이하게 모니터링된다.
치료 적용
본원에는 이러한 치료를 필요로 하는 대상체에 치료학적 유효량의, 본원에 기술된 하나 이상의 항체를 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는 치료 방법이 기술된다.
특정 구현예에서, 치료를 필요로 하는 대상체(예를 들어, 인간 환자)는 암으로 진단되거나, 암이 걸린 것으로 의심되거나 암의 위험에 있다. 암의 예는 육종, 피부암, 백혈병, 림프종, 뇌암, 폐암, 유방암, 구강암, 식도암, 위암, 간암, 담관암, 췌장암, 결장암, 신장암, 자궁 경부암, 난소암 및 전립선암을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. 특정 구현예에서, 암은 육종, 피부암, 백혈병, 림프종, 뇌암, 폐암, 유방암, 난소암, 전립선암, 결장암, 또는 췌장암이다. 일부 바람직한 구현예에서, 암은 뇌암 또는 교아종 다형성(GBM) 암이다. 일부 양태에서, 대상체는 SSEA-4 항원을 발현시키는 종양을 갖는다.
일부 구현예에서, 항체는 암 또는 종양 세포 상의 SSEA-4에 결합함으로써 SSEA-4-발현 암 세포를 타겟화할 수 있다. 특정 구현예에서, 항체는 일부 구현예에서 세포독성 또는 세포정지성 면역 세포 상에서 발현된 Siglec-9일 수 있는 면역마스킹 관문 억제제에 대한 암/종양 세포 상의 SSEA-4의 결합을 방해하거나 억제할 수 있다. 특정 구현예에서, 세포독성 면역 세포 상의 면역마스킹 관문 억제제에 대한 암/종양 세포 상의 SSEA-4의 결합을 방해하거나 억제하는 것은 암/종양 세포를 사멸시키고/시키거나 암/종양 세포의 성장 또는 분열을 억제하는 선천 세포독성 반응을 활성화시킨다. 일부 구현예에서, 면역마스킹 관문 억제제는 Siglec 7을 배제한다.
치료는 종양 크기의 감소, 악성 세포의 제거, 전이의 예방, 재발의 예방, 파종성 암의 감소 또는 사멸, 생존의 연장 및/또는 종양 암 진행까지의 연장을 야기시킨다.
특정 구현예에서, 치료는 상기 항체의 투여 전, 동안 또는 후에 상기 대상체에 추가 치료법을 투여하는 것을 추가로 포함한다. 특정 구현예에서, 추가 치료법은 화학치료제로의 치료이다. 특정 구현예에서, 추가 치료법은 방사선 요법이다.
본 발명의 방법은 초기 단계 종양을 치료 및 예방하는 데 특히 유리하고, 이에 의해 더욱 진행된 단계로의 진행을 예방하여 진행된 암과 관련된 이환율 및 사망률을 감소시킨다. 본 발명의 방법은 또한, 종양의 재발 또는 종양의 재성장, 예를 들어, 원발성 종양의 제거 후 지속하는 휴면 종양의 재성장을 예방하는 데, 또는 종양의 발생을 감소 또는 예방시키는 데 유리하다.
특정 구현예에서, 본원에 개시된 바와 같은 방법은 암의 치료 또는 예방에 유용하며, 예를 들어, 여기서, 암은 증가된 Globo H, SSEA-3 및/또는 SSEA-4 발현에 의해 특징된다. 특정 구현예에서, 암은 암 줄기 세포를 포함한다. 특정 구현예에서, 암은 전암, 및/또는 악성 암 및/또는 치료 내성 암이다. 특정 구현예에서, 암은 뇌암이다.
본 발명의 방법을 위해, 암은 액채 종양, 예를 들어, 백혈병 및 림프종, 고형 종양, 예를 들어, 유방암, 직장결장암, 직장암, 폐암, 신세포 암, 신경교종(예를 들어, 역형성별아교세포종, 악성 핍지성상세포종, 악성 뇌교종, 교아종 다형성(GBM)), 신장암, 전립선암, 간암, 췌장암, 연조직 육종, 암양종 암종, 두경부암, 흑색종, 및 난소암일 수 있다. 일 구현예에서, 암은 뇌암 또는 GBM이다. 본원에 개시된 방법을 실행하기 위해, 본원에 기술된 적어도 하나의 항체를 함유한, 유효량의 상술된 약제 조성물/제형은 치료를 필요로 하는 대상체(예를 들어, 인간)에게 적합한 경로, 예를 들어, 정맥 투여를 통해, 예를 들어, 볼루스(bolus)를 통해, 또는 소정 기간에 걸친 연속 주입에 의해, 근육내 복강내, 뇌척수내, 피하, 관절내, 활막내, 척수내, 경구, 흡입 또는 국소 경로에 의해 투여될 수 있다. 제트 네뷸라이저 및 초음파 네뷸라이저를 포함하는, 액체 제형을 위한 상업적으로 이용 가능한 네뷸라이져가 투여를 위해 유용하다. 액체 제형은 직접적으로 분무될 수 있으며, 동결건조된 분말은 재구성 후에 분무될 수 있다. 대안적으로, 항체는 플루오로카본 제형 및 정량 흡입기를 이용하여 에어로졸화되거나 동결건조된 및 밀링된 분말로서 흡입될 수 있다.
본원에 기술된 방법에 의해 치료받는 대상체는 포유동물, 더욱 바람직하게는, 인간일 수 있다. 포유동물은 농장 동물, 스포츠 동물, 애완 동물, 영장류, 말, 개, 고양이, 마우스 및 래트를 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. 치료를 필요로 하는 인간 대상체는 유방암, 폐암, 식도암, 직장암, 담도암, 간암, 협측암, 위암, 결장암, 비인두암, 신장암, 전립선암, 난소암, 자궁경부암, 자궁내막암, 췌장암, 고환암, 방광암, 두경부암, 구강암, 신경 내분비암, 부신암, 갑상선 암, 골암, 피부암, 기저 세포 암종, 편평 세포 암종, 흑색종, 또는 뇌종양을 포함하지만, 이로 제한되지 않는, 암에 걸리거나, 암에 대한 위험이 있거나, 암에 걸린 것으로 의심되는 인간 환자일 수 있다. 암을 갖는 대상체는 일상적인 의료 검사에 의해 확인될 수 있다.
본원에서 사용되는 "유효량"은 단독으로 또는 하나 이상의 다른 활성제와 조합하여, 대상체에게 치료 효과를 부여하는 데 필요한 각 활성제의 양을 지칭한다. 유효량은 당업자에 의해 인식되는 바와 같이, 치료받는 특정 질환, 질환의 중증도, 연령, 신체 상태, 크기, 성별, 및 체중을 포함하는 개별 환자 파라미터, 치료 기간, (임의의 경우) 병행 치료의 특성, 특정 투여 경로, 및 건강한 의료 종사자의 지식 및 전문 지식 내의 유사한 인자에 따라 달라진다. 이러한 인자들은 당업자에게 널리 공지되어 있고, 일상적인 실험만으로 해결될 수 있다. 일반적으로, 개별 성분 또는 이들의 조합이 최대 용량, 즉, 건전한 의학적 판단에 따른 최고 안전 용량이 사용되는 것이 바람직하다. 그러나, 환자가 의학적 이유, 심리적 이유 또는 실제로 임의의 다른 이유로 더 낮은 용량 또는 허용 가능한 용량을 촉구할 수 있다는 것이 당업자에 의해 이해될 것이다.
반감기와 같은 경험적 고려사항은 일반적으로, 투여량의 결정에 기여할 것이다. 예를 들어, 인간화된 항체 또는 완전 인간 항체와 같은 인간 면역계와 양립 가능한 항체는 항체의 반감기를 연장시키고 숙주 면역계에 의해 항체가 공격받는 것을 방지하기 위해 사용될 수 있다. 투여 빈도는 치료 과정에 걸쳐 결정되고 조정될 수 있고, 일반적으로, 암의 치료 및/또는 억제 및/또는 완화 및/또는 지연을 기초로 한 것이지만, 반드시 그러한 것은 아니다. 대안적으로, 본원에 기술된 항체의 지속된 연속 방출 제형이 적절할 수 있다. 지속 방출을 달성하기 위한 다양한 제형 및 디바이스는 당해 분야에 공지되어 있다.
일 예에서, 본원에 기술된 바와 같은 항체에 대한 투여량은 항체의 1회 이상의 투여(들)가 제공된 개체에서 경험적으로 결정될 수 있다. 개체에는 증분 용량의 항체가 제공된다. 항체의 효능을 평가하기 위해, 질병(예를 들어, 암)의 제표는 일상적인 관행에 따라 따를 수 있다.
일반적으로, 본원에 기술된 임의의 항체의 투여의 경우, 초기 후보 투여량은 약 2 mg/kg일 수 있다. 본 개시의 목적을 위해, 통상적인 일일 투여량은 상기에 언급된 인자에 따라, 임의의 약 0.1 ㎍/kg 내지 3 ㎍/kg 내지 30 ㎍/kg 내지 300 ㎍/kg 내지 3 mg/kg, 내지 30 mg/kg 내지 100 mg/kg 또는 그 이상의 범위일 수 있다. 수일 이상의 반복 투여의 경우에, 질환에 따라, 치료는 증상의 원하는 억제가 일어날 때까지 또는 암 또는 이의 증상을 완화시키기에 충분한 치료 수준이 달성될 때까지 지속된다. 예시적인 투여 요법은 약 2 mg/kg의 초기 용량, 이후에 약 1 mg/kg의 항체의 유지 용량, 또는 이후에 격주로 약 1 mg/kg의 유지 용량을 투여하는 것을 포함한다. 그러나, 다른 투여량 요법은 의사가 달성하고자 하는 약동학적 붕괴의 패턴에 따라 유용할 수 있다. 예를 들어, 1주일에 1 내지 4회의 투여가 고려된다. 특정 구현예에서, 약 3 ㎍/mg 내지 약 2 mg/kg 범위(예를 들어, 약 3 ㎍/mg, 약 10 ㎍/mg, 약 30 ㎍/mg, 약 100 ㎍/mg, 약 300 ㎍/mg, 약 1 mg/kg, 및 약 2 mg/kg) 범위의 투여가 사용될 수 있다. 특정 구현예에서, 투약 빈도는 매주 1회, 2주마다, 4주마다, 5주마다, 6주마다, 7주마다, 8주마다, 9주마다, 또는 10주마다; 또는 매월 1회, 2개월마다, 또는 3개월마다, 또는 그 이상이다. 이러한 치료법의 진행은 기존 기술 및 검정에 의해 용이하게 모니터링된다. 사용된 항체를 포함하는 투약 요법은 시간에 따라 달라질 수 있다.
본 개시의 목적을 위해, 본원에 기술된 항체의 적절한 투여량은 사용되는 특정 항체(또는 이의 조성물), 암의 타입 및 중증도, 예방 또는 치료 목적으로 항체가 투여되는 지의 여부, 이전 요법, 환자의 임상적 이력 및 항체에 대한 반응, 및 주치의의 재량에 따라 달라질 것이다. 본원에 기술된 항체의 투여는 미리선택된 기간에 걸쳐 본질적으로 연속적일 수 있거나, 예를 들어, 암이 발병하기 전, 동안, 또는 후에 일련의 간격 용량일 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "치료하는"은 암, 암의 증상 또는 암에 대한 소인을 갖는 대상체에 하나 이상의 활성제를 포함하는 조성물을, 암, 암의 증상, 또는 암에 대한 소인을 치료, 치유, 완화, 경감, 변경, 구제, 개선, 향상 또는 영향을 미칠 목적으로 적용 또는 투여하는 것을 지칭한다.
암을 완화시키는 것은 암의 발생 또는 진행의 지연, 또는 암 중증도의 감소를 포함한다. 암을 완화시키는 것은 반드시 치료 결과를 필요로 하는 것은 아니다. 본원에서 사용되는 암의 발달을 "지연하는" 것은 암의 진행을 지연, 방해, 늦추고, 지연시키고, 안정화시키고/시키거나 연기시키는 것을 의미한다. 이러한 지연은 암의 병력 및/또는 치료 중인 개체에 따라, 다양한 시간 길이를 가질 수 있다. 암의 발달을 "지연" 또는 완화시키거나 암의 발병을 지연시키는 방법은 본 방법을 사용하지 않는 경우와 비교할 때, 제공된 시간 프레임에서 하나 이상의 암의 증상이 발생할 확률(위험)을 감소시키고/시키거나 제공된 시간 프레임에서 증상의 정도를 감소시키는 방법이다. 이러한 비교는 통상적으로 통계적으로 유의미한 결과를 제공하기에 충분한 수의 대상체를 사용한, 임상 연구를 기초로 한다.
암의 "발달" 또는 "진행"은 암의 초기 증상 및/또는 계속되는 진행을 의미한다. 암의 발달은 당해 분야에 잘 알려진 표준 임상 기술을 이용하여 검출 가능하고 평가될 수 있다. 그러나, 발달은 또한, 감지할 수 없는 진행을 지칭한다. 본 개시의 목적을 위해, 발달 또는 진행은 증상의 생물학적 과정을 지칭한다. "발달"은 발생, 재발 및 발병을 포함한다. 본원에서 사용되는 암의 "발병" 또는 "발생"은 초기 발병 및/또는 재발을 포함한다.
치료할 질병의 타입 또는 질병 부위에 따라, 의약 분야의 당업자에게 공지된 통상적인 방법은 대상체에 약제 조성물을 투여하기 위해 사용될 수 있다. 이러한 조성물은 또한, 다른 통상적인 경로를 통해 투여되고, 예를 들어, 경구로, 비경구로, 흡입 스프레이에 의해, 국소로, 직장으로, 비강으로, 협측으로, 질내로 또는 이식된 저장소를 통해 투여될 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 "비경구"는 피하, 피내, 정맥내, 근육내, 관절내, 동맥내, 활액내, 흉골내, 척수강내, 병변내, 및 두개내 주사 또는 주입 기술을 포함한다. 또한, 이는 1개월, 3개월, 또는 6개월 데폿 주사 가능한 또는 생분해성 물질 및 방법을 이용하는 것과 같은 주사 가능한 데폿 투여 경로를 통해 대상체에 투여될 수 있다.
주사 가능한 조성물은 다양한 담체, 예를 들어, 식물성 오일, 디메틸락타미드, 디메티포름아미드, 에틸 락테이트, 에틸 카보네이트, 이소프로필 미리스테이트, 에탄올, 및 폴리올(글리세롤, 프로필렌 글리콜, 액체 폴리에틸렌 글리콜, 등)을 함유할 수 있다. 정맥 주사를 위해, 수용성 항체는 드립 방법에 의해 투여될 수 있으며, 이에 의해, 항체 및 생리학적으로 허용되는 부형제를 함유한 약제학적 제형이 주입된다. 생리학적으로 허용되는 부형제는 예를 들어, 5% 덱스트로오스, 0.9% 염수, 링거액 또는 다른 적합한 부형제를 포함할 수 있다. 근육내 제제, 예를 들어, 항체의 적합한 가용성 염 형태의 멸균 제형은 주사용수, 0.9% 염수, 또는 5% 글루코오스 용액과 같은 약제학적 부형제에 용해되고 투여될 수 있다.
실시예
실시예 1. Siglec-9 및 SSEA-4 세라마이드의 ELISA 결합 검정
에탄올에 용해된 SSEA-4 세라마이드(0.2 ㎍)를 얼음 상에서 96-웰 플레이트의 각 웰에 코팅하고, 코팅된 플레이트를 실온에서 밤새 인큐베이션하였다. 플레이트를 웰 당 100 ㎕의 차단 완충제로 차단하고, 실온(25℃)에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 차단 단계 후에, 차단 완충제를 흡인에 의해 제거하고, 각 웰을 200 ㎕의 세척 완충제(0.05 % Tween20를 함유한 1X TBS)로 3차례 세척하였다. 샘플 희석액(0.05% tween20를 함유한 1X TBS 중 1% BSA)에 의해 30 ㎍/mL로부터 2배 일련 희석된 50 ㎕의 Siglec-9를 플레이트의 지시된 웰로 전달하고, 이후에 플레이트를 실온에서 2시간 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후에, 결합되지 않은 Siglec-9를 흡인에 의해 제거하고, 웰을 200 ㎕의 세척 완충제로 3차례 세척하였다. 샘플 희석액에 의해 1:200 희석된 50 ㎕의 2차 항체(항-인간 IgG Fc-AP)를 플레이트의 각 웰에 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 배양이 완료된 후에 2차 항체를 흡인하였다. 모든 웰을 200 ㎕의 세척 완충제로 4차례 세척하였다. 100 ㎕ 기질 용액을 각 웰에 첨가하고, 37℃에서 20분 동안 현상하였다. 50 ㎕의 정지 용액을 첨가하여 반응을 중지시켰다. 플레이트를 간단히 혼합하고, ELISA 플레이트 판독기에 의해 405 nm에서 판독하였다. 도 1에서는 인간 Siglec-9가 ELISA 결합 검정에서 SSEA-4 세라마이드에 결합할 수 있음을 도시한다.
실시예 2. SSEA-4 세라마이드의 외인성에 의한 종양 세포에 대한 Siglec-9 결합을 증가시킴
인간 A549 폐암 세포를 24-웰 배양 플레이트에서 18 내지 24시간 동안 20 μM SSEA-4 세라마이드(SSEA4Cer)와 함께 사전-인큐베이션하였다. 세폴르 수집하고, 원심분리하고, 이후에 4℃에서 30분 동안 Siglec-9로 염색하였다. 샘플을 세척하고, 원심분리하고, 이후에 4℃에서 30분 동안 FITC로 표지된 항-인간 IgG로 염색하였다. 이후에, 세포를 세척하고 수집하였다. A549에 대한 Siglec-9의 결합을 FACS CANTO II에 의해 분석하였다. 도 2에서는 SSEA4Cer의 외인성이 A549 폐암 세포에 대한 Siglec-9 결합을 약간 증가시킨다는 것이 도시된다.
실시예 3. 항-SSEA-4 Fab를 첨가함으로써 종양 세포 상에 Siglec-9 결합을 감소시킴
인간 MDA-MB-231 유방암 세포을 4℃에서 30분 동안 염색 완충제 중에서 OBI-898 Fab, 항-SSEA-4 항체와 함께 인큐베이션하였다. 샘플을 세척하고, 원심분리하고, 이후에 4℃에서 30분 동안 Siglec-9로 염색하였다. 샘플을 세척하고, 원심분리하고, 이후에 4℃에서 30분 동안 FITC로 표지된 항-인간 IgG로 염색하였다. 이후에, 세포를 세척하고 수집하였다. MDA-MB-231에 대한 Siglec-9의 결합을 FACS CANTO II에 의해 분석하였다. 도 3에서는 OBI-898 Fab가 MDA-MB-231 유방암 세포에 대한 Siglec-9 결합을 감소시킬 수 있다는 것이 도시된다.
실시예 4. 유방암 세포에서 항-SSEA-4 Fab에 의한 SSEA-4의 결합은 인간 PBMC의 세포독성을 향상시킴.
타겟 인간 유방암 세포주, MDA-MB-231을 PerkinElmer에 의해 제공된 기술 매뉴얼에 따라 DELFIA(Cat# PK-AD0116)로 표지하였다. 표지 후에, 37℃에서 1시간 동안 20 ㎍/mL 항-SSEA-4 OBI-898 Fab와 함께 또는 이의 없이 5×103개의 세포를 인큐베이션하였다. 이후에, 5×105개의 인간 PBMC를 첨가하고, 37℃에서 2시간 동안 동시-인큐베이션하였다. 검정 플레이트를 원심분리하고, 이후에, 20 ㎕의 상청액을 평평한 바닥 96 웰 플레이트로 전달하였다. 200 ㎕의 Eu-용액을 첨가하고, 쉐이커 상에서 실온에서 15분 동안 인큐베이션하였다. 형광을 시간-분해 형광계에서 측정하였다. 특정 방출 백분율을 [(실험적 방출-자발 방출)/(최대 방출-자발 방출)] × 100의 식에 의해 계산하였다. 도 4에서는 항-SSEA-4 Fab에 의한 종양에 대한 SSEA-4의 차단이 유방암을 사멸시키기 위한 면역 세포의 세포독성을 구제한다는 것이 도시된다.
실시예 5. 난소암 세포에서 항-SSEA-4 Fab에 의한 SSEA-4의 결합은 인간 PBMC의 세포독성을 향상시킴.
타겟 인간 난소암 세포주, SKOV-3을 PerkinElmer에 의해 제공된 기술 매뉴얼에 따라 DELFIA(Cat# PK-AD0116)로 표지하였다. 표지 후에, 37℃에서 1시간 동안 20 ㎍/mL 항-SSEA-4(OBI-898) Fab와 함께 또는 이의 없이 5×103개의 세포를 인큐베이션하였다. 이후에, 5×105개의 인간 PBMC를 첨가하고, 37℃에서 4시간 동안 동시-인큐베이션하였다. 검정 플레이트를 원심분리하고, 이후에, 20 ㎕의 상청액을 평평한 바닥 96 웰 플레이트로 전달하였다. 200 ㎕의 Eu-용액을 첨가하고, 쉐이커 상에서 실온에서 15분 동안 인큐베이션하였다. 형광을 시간-분해 형광계에서 측정하였다. 특정 방출 백분율을 [(실험적 방출-자발 방출)/(최대 방출-자발 방출)] × 100의 식에 의해 계산하였다. 도 5에서는 항-SSEA-4 Fab에 의한 종양에 대한 SSEA-4의 차단이 난소암을 사멸시키기 위한 면역 세포의 세포독성을 효과적으로 구제한다는 것이 도시된다.
실시예 6. 난소암 세포에서 항-SSEA-4 Fab에 의한 SSEA-4의 결합은 티센트릭의 세포독성을 향상시킴.
타겟 인간 난소암 세포주, SKOV-3을 PerkinElmer에 의해 제공된 기술 매뉴얼에 따라 DELFIA(Cat# PK-AD0116)로 표지하였다. 표지 후에, 37℃에서 1시간 동안 20 ㎍/mL 항-SSEA-4 OBI-898 Fab와 함께 또는 이의 없이 5×103개의 세포를 인큐베이션하였다. 이후에, 5×105개의 인간 PBMC를 20 ㎍/mL에서 티센트릭과 조합하고, 37℃에서 4시간 동안 동시-인큐베이션하였다. 검정 플레이트를 원심분리하고, 이후에, 20 ㎕의 상청액을 평평한 바닥 96 웰 플레이트로 전달하였다. 200 ㎕의 Eu-용액을 첨가하고, 쉐이커 상에서 실온에서 15분 동안 인큐베이션하였다. 형광을 시간-분해 형광계에서 측정하였다. 특정 방출 백분율을 [(실험적 방출-자발 방출)/(최대 방출-자발 방출)] × 100의 식에 의해 계산하였다. 도 6에서는 항-SSEA-4 Fab에 의한 종양에 대한 SSEA-4의 차단이 암을 사멸시키기 위한 티센트릭의 세포독성을 향상시킨다는 것이 도시된다.
도 7에서의 결과는 OBI-898(항-SSEA-4 항체)이 종양에 대한 Siglec-9의 관여를 차단하고 면역 세포의 세포독성을 방출할 수 있음을 나타낸다.
달리 정의하지 않는 한, 본원에서 사용된 모든 기술 용어 및 과학 용어 및 임의의 약어는 본 발명의 분양의 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본원에 기술된 것과 유사하거나 동등한 정보를 전달하기 위한 임의의 조성물, 방법, 키트, 및 수단이 본 발명을 실시하는 데 사용될 수 있지만, 정보를 전달하기 위한 바람직한 조성물, 방법, 키트, 및 수단이 본원에 기술된다.
본원에서 인용된 모든 참고문헌은 법률에 의해 허용되는 전체 범위까지 참조로 본원에 포함된다. 그러한 참고문헌의 논의는 단지 저자의 주장을 요약하기 위한 것이다. 임의의 참조문헌(또는 임의의 참조문헌의 일부)이 관련된 종래 기술이라는 사실은 인정되지 않는다. 출원인은 임의의 인용된 참고문헌의 정확성 및 적절성에 대해 이의를 제기할 권리가 있다.
SEQUENCE LISTING <110> OBI PHARMA, INC. <120> COMBINATION THERAPY USING ANTI-SSEA-4 ANTIBODY IN COMBINATION WITH THERAPEUTIC ONCOLOGY AGENTS <130> G3004-01301 <140> PCT/US19/54221 <141> 2019-10-02 <150> 62/740,373 <151> 2018-10-02 <160> 74 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 351 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 1 caggtgcagc tgaaggagtc aggacctggc ctggtggcgc cctcacagag cctgtccatc 60 acttgcactg tctctgggtt ttcattaatc agctatggtg tagactgggt tcgccagcct 120 ccaggaaagg gtctggagtg gctgggagta atatggggtg gtggaaatac aaattataat 180 tcatctctca tgtccagact gagcatcagc aaagacaact ccaagagcca agttttctta 240 aaaatgaaca gtctgcaaac tgatgacaca gccatgtact actgtgccaa aactgggacc 300 ggatatgctt tggagtactg gggtcaagga acctcagtca ccgtctcctc c 351 <210> 2 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 2 gaaaatgttc tcacccagtc tccagcaatc atgtctgcat 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Leu Lys Arg 1 5 10 <210> 12 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 12 Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser 20 25 <210> 13 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 13 Gly Phe Ser Leu Ile Ser Tyr Gly Val Asp 1 5 10 <210> 14 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 14 Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly 1 5 10 <210> 15 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 15 Val Ile Trp Gly Gly Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Ser Ser Leu Met Ser 1 5 10 15 <210> 16 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 16 Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn 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ctgtctctgc a 351 <210> 20 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 20 caaattgttc tctcccagtc tccagcaatc ctgtctgcat ctccagggga gaaggtcaca 60 atgacttgca gggccagctc aagtgtaagt tacatgcact ggtaccagca gaagccagga 120 tcctccccca aatcctggat ttatgccaca tccaacctgg cttctggagt ccctgctcgc 180 ttcagtggca gtgggtctgg gacctcttac tctctcacaa tcagcagagt ggaggctgaa 240 gatgctgcca cttattactg ccagcagtgg ggtagttacc cgtggacgtt cggtggaggc 300 accaagctgg aaatcaaacg g 321 <210> 21 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 21 Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Val Asp Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Gly Gly Ser Ile Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Met 50 55 60 Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Ile Phe Leu 65 70 75 80 Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Thr 85 90 95 Thr His Glu Asp Tyr Gly Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110 Val Thr Val Ser Ala 115 <210> 22 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 22 Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Ser Trp Ile Tyr 35 40 45 Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu 65 70 75 80 Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Gly Ser Tyr Pro Trp Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 100 105 <210> 23 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 23 Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Thr Cys 20 <210> 24 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 24 Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met His 1 5 10 <210> 25 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 25 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Ser Trp Ile Tyr 1 5 10 15 <210> 26 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 26 Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser 1 5 <210> 27 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 27 Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser 1 5 10 15 Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys 20 25 30 <210> 28 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 28 Gln Gln Trp Gly Ser Tyr Pro Trp Thr 1 5 <210> 29 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 29 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg 1 5 10 <210> 30 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 30 Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser 20 25 <210> 31 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 31 Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Gly Val Asp 1 5 10 <210> 32 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 32 Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly 1 5 10 <210> 33 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 33 Val Ile Trp Gly Gly Gly Ser Ile Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Met Ser 1 5 10 15 <210> 34 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 34 Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Ile Phe Leu Lys 1 5 10 15 Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Thr Thr 20 25 30 <210> 35 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 35 His Glu Asp Tyr Gly Pro Phe Ala Tyr 1 5 <210> 36 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 36 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala 1 5 10 <210> 37 <211> 351 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 37 caggtgcagc tgaaggagtc aggacctggc ctggtggcgc cctcacagag cctgtccatc 60 acatgcactg tctcagggtt ttcattaacc agttatggtg taagctgggc tcgccagcct 120 ccaggaaagg gtctggagtg gctgggagta atatggggtg acgggagcac aaattatcat 180 tcagctctca tatccagact gagcatcagc aaggataact ccaagagcca agttttctta 240 aaactgaaca gtctgcaaac tgatgacaca gccacgtact actgtgccaa accggaaaac 300 tgggacggct tcgatgtctg gggcccaggg accacggtca ccgtctcctc a 351 <210> 38 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 38 caaattgttc tctcccagtc tccagcaatc ctgtctgcat ctccagggga gaaggtcaca 60 atgacttgca gggccagctc aagtgtaagt tacatgcact ggtaccgaca gaagccagga 120 tcctccccca aaccctggat ttatgccaca tccgacctgg cttctggagt ccctactcgc 180 ttcagtggca gtgggtctgg gacctcttac tctctcacaa tcagcagagt ggaggctgaa 240 gatgctgcca cttattactg ccagcagtgg agtagttacc cgtggacgtt cggtggaggc 300 accaagctgg aaatcaaacg g 321 <210> 39 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 39 Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr 20 25 30 Gly Val Ser Trp Ala Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asn Tyr His Ser Ala Leu Ile 50 55 60 Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu 65 70 75 80 Lys Leu Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Lys Pro Glu Asn Trp Asp Gly Phe Asp Val Trp Gly Pro Gly Thr Thr 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 40 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 40 Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met 20 25 30 His Trp Tyr Arg Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr 35 40 45 Ala Thr Ser Asp Leu Ala Ser Gly Val Pro Thr Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu 65 70 75 80 Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Tyr Pro Trp Thr 85 90 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Ala Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly 1 5 10 <210> 51 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 51 Val Ile Trp Gly Asp Gly Ser Thr Asn Tyr His Ser Ala Leu Ile Ser 1 5 10 15 <210> 52 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 52 Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys 1 5 10 15 Leu Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Lys 20 25 30 <210> 53 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 53 Pro Glu Asn Trp Asp Gly Phe Asp Val 1 5 <210> 54 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 54 Trp Gly Pro Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 1 5 10 <210> 55 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 55 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Val Asp Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Gly Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Ser Ser Leu Met 50 55 60 Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Lys Thr Gly Thr Gly Tyr Ala Leu Glu Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 56 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 56 Gln Val Lys Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Val Asp Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Gly Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Ser Ser Leu Met 50 55 60 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Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 58 Gln Val Lys Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Val Asp Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Gly Gly Gln Thr Asn Tyr Asn Ser Ser Leu Met 50 55 60 Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Lys Thr Gly Thr Gly Tyr Ala Leu Glu Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 59 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 59 Gln Val Lys Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Val Asp Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Gly Gly Asn Thr 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Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 61 Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Val Asp Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Gly Gly Gln Thr Asn Tyr Asn Ser Ser Leu Met 50 55 60 Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Lys Thr Gly Thr Gly Tyr Ala Leu Glu Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 62 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 62 Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Thr Gln 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Val Asp Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly 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64 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 64 Gln Val Lys Leu Lys Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Val Asp Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Val Ile Trp Gly Gly Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Ser Ser Leu Met 50 55 60 Ser Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95 Lys Thr Gly Thr Gly Tyr Ala Leu Glu Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 65 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 65 Gln Val Lys Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Val Asp Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly 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1 5 10 <210> 73 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 73 Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser 1 5 <210> 74 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 74 Phe Gln Ala Ser Gly Tyr Pro Leu Thr 1 5

Claims (20)

  1. SSEA-4 항원을 발현시키는 암 세포를 갖는 대상체를 치료하는 방법으로서, 대상체에, 유효량의 항-SSEA-4 항체 또는 이의 단편을 포함하는 약제 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  2. 제1항에 있어서, 암 세포에 대한 항-SSEA-4 항체의 결합이 SSEA-4와 Siglec-9 간의 결합 상호작용을 감소시키는, 방법.
  3. 제2항에 있어서, SSEA-4와 Siglec-9 간의 결합 상호작용의 감소가 암 세포에 대한 Siglec-9의 결합을 감소시키는, 방법.
  4. 제3항에 있어서, 암 세포에 대한 Siglec-9의 결합 감소가 Siglec-9/SSEA-4 관여(engagement)에 의해 유지된 면역억제(면역-마스킹)의 방출(release)을 유도하는, 방법.
  5. 제1항에 있어서, 항-SSEA-4 항체의 투여가 세포독성 면역 세포의 활성을 증가시키는, 방법.
  6. 제5항에 있어서, 세포독성 면역 세포가 단핵구, 호중구, NK 세포, B 세포 또는 CD8+ T 세포인, 방법.
  7. 제5항에 있어서, 항-SSEA-4 항체가 OBI-898인, 방법.
  8. 제1항에 있어서, 암이 육종, 피부암, 백혈병, 림프종, 뇌암, 폐암, 유방암, 구강암, 식도암, 위암, 간암, 담관암, 췌장암, 결장암, 신장암, 자궁 경부암, 난소암 및 전립선암으로부터 선택되며, 특정 구현예에서, 암이 육종, 피부암, 백혈병, 림프종, 뇌암, 폐암, 유방암, 난소암, 전립선암, 결장암, 또는 췌장암이며, 일부 바람직한 구현예에서, 암이 뇌암 또는 교아종 다형성(GBM) 암인, 방법.
  9. 암 세포 상의 SSEA-4 항원에 결합된 세포독성 면역 세포를 발현시키는 Siglec-9의 결합을 억제함으로써 선천성 세포독성 면역 반응을 활성화시키는 방법으로서, 세포독성 면역 세포-암 세포 복합체를 SSEA-4의 길항제와 접촉시키는 단계; 및 SSEA-4에 대한 Siglec-9의 결합을 방해하거나 억제하는 단계를 포함하는, 방법.
  10. 제9항에 있어서, 길항제가 SSEA-4 항체인, 방법.
  11. 제10항에 있어서, 항-SSEA-4 항체가 OBI-898인, 방법.
  12. 제9항에 있어서, 세포독성 면역 세포가 단핵구, 호중구, NK 세포, B 세포 또는 CD8+ T 세포인, 방법.
  13. 제9항에 있어서, 암이 육종, 피부암, 백혈병, 림프종, 뇌암, 폐암, 유방암, 구강암, 식도암, 위암, 간암, 담관암, 췌장암, 결장암, 신장암, 자궁 경부암, 난소암 및 전립선암으로부터 선택되며, 특정 구현예에서, 암이 육종, 피부암, 백혈병, 림프종, 뇌암, 폐암, 유방암, 난소암, 전립선암, 결장암, 또는 췌장암이며, 일부 바람직한 구현예에서, 암이 뇌암 또는 교아종 다형성(GBM) 암인, 방법.
  14. SSEA-4 항원을 발현시키는 암 세포를 갖는 대상체를 치료하는 방법으로서, 대상체에, 유효량의 항-SSEA-4 항체 또는 이의 단편을 포함하는 약제 조성물을 투여하여, 암 세포에 대한 Siglec-9의 결합을 억제하는 것을 포함하는, 방법.
  15. 암 세포에 대한 Siglec-9의 결합을 감소시키는 방법으로서, 대상체에, 유효량의 항-SSEA-4 항체 또는 이의 단편을 포함하는 약제 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  16. SSEA-4 항원을 발현시키는 암 세포를 갖는 대상체를 치료하는 방법으로서, 대상체에, 유효량의 항-SSEA-4 항체 또는 이의 단편을 포함하는 약제 조성물을 투여하여 세포독성 면역 세포의 활성을 활성화시키는 것을 포함하는, 방법.
  17. 암을 갖는 대상체에서 세포독성 면역 세포의 활성을 증가시키는 방법으로서, 대상체에, 유효량의 항-SSEA-4 항체 또는 이의 단편을 포함하는 약제 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  18. 제14항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 항-SSEA-4 항체가 OBI-898인, 방법.
  19. 제16항 또는 제17항에 있어서, 세포독성 세포가 단핵구, 호중구, NK 세포, B 세포 또는 CD8+ T 세포인, 방법.
  20. 제14항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 육종, 피부암, 백혈병, 림프종, 뇌암, 폐암, 유방암, 구강암, 식도암, 위암, 간암, 담관암, 췌장암, 결장암, 신장암, 자궁 경부암, 난소암 및 전립선암으로부터 선택되며, 특정 구현예에서, 암이 육종, 피부암, 백혈병, 림프종, 뇌암, 폐암, 유방암, 난소암, 전립선암, 결장암, 또는 췌장암이며, 일부 바람직한 구현예에서, 암이 뇌암 또는 교아종 다형성(GBM) 암인, 방법.
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