KR100902396B1 - 무균영양조성물을 사용한 미생물 배양방법 및 그 미생물 성장 기질 - Google Patents

무균영양조성물을 사용한 미생물 배양방법 및 그 미생물 성장 기질 Download PDF

Info

Publication number
KR100902396B1
KR100902396B1 KR1020047016808A KR20047016808A KR100902396B1 KR 100902396 B1 KR100902396 B1 KR 100902396B1 KR 1020047016808 A KR1020047016808 A KR 1020047016808A KR 20047016808 A KR20047016808 A KR 20047016808A KR 100902396 B1 KR100902396 B1 KR 100902396B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
biomass
sterile
bacterial culture
glucose
medium
Prior art date
Application number
KR1020047016808A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20050016354A (ko
Inventor
에이너 모엔
지네뜨 몰러 조젠슨
카렌 몰러 젠슨
아일드 요하네센
Original Assignee
노펨 디에이
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 노펨 디에이 filed Critical 노펨 디에이
Publication of KR20050016354A publication Critical patent/KR20050016354A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR100902396B1 publication Critical patent/KR100902396B1/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/12—Unicellular algae; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2468—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1) acting on beta-galactose-glycoside bonds, e.g. carrageenases (3.2.1.83; 3.2.1.157); beta-agarase (3.2.1.81)
    • C12N9/2471—Beta-galactosidase (3.2.1.23), i.e. exo-(1-->4)-beta-D-galactanase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
    • C12P13/08—Lysine; Diaminopimelic acid; Threonine; Valine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C12P7/6409—Fatty acids
    • C12P7/6427—Polyunsaturated fatty acids [PUFA], i.e. having two or more double bonds in their backbone
    • C12P7/6434—Docosahexenoic acids [DHA]

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Iron Core Of Rotating Electric Machines (AREA)
  • Fertilizers (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)

Abstract

본 발명은 메탄영양세균 및 추가적으로 적어도 하나의 무균 영양분를 포함하는 세균 배양물의 바이오매스로부터 유래한 무균 영양 조성물을 포함하는 미생물 성장 기질에 관한 것이다. 바람직한 바이오매스 물질은 Methylococus capsulatus(Bath)(균주 NCIMB 11132), Ralstonia sp. DB3(균주 NCIMB 13287) 및 Brevibacillus agri DB5 (균주 NCIMB 13289), 선택적으로 Aneurinibacillus sp. DB4(균주 NCIMB 13288)와 조합하여 포함하는 미생물 배양으로 부터 유래한다.
바이오매스, 메탄영양세균, 무균 영양 조성물, 자기분해물, 라이신생산

Description

생성물{Product}
본 발명은 세균의 바이오매스의 미생물 성장 기질로서의 용도에 관한 것으로, 특히 본원에서 "세균 추출물"로 호칭되는 바이오매스는 적어도 부분적으로 메탄영양세균을 포함하는 세균 배양물로부터 유래된다.
미생물은 예컨대 원하는 물질을, 이러한 물질을 천연 생산하는 균주로부터 혹은 그러한 물질을 생산하도록 하거나 세균 오염 등의 특질을 결정하기 위해 유전자 변형된 균주로부터 그러한 물질을 생산하기 위하여 산업적 규모 및 실험적 규모로 배양된다. 이러한 목적을 위하여 상기 미생물은 영양분을 필요로 하고 이와 관련하여, 상업적으로 널리 이용가능한 효모, 고기 또는 식물 추출물, 예를 들어 MRS(De Mann, Rogosa and Sharpe), PCA(Plate Count Agar), VRBD(Violet Red Bile Dextrose Agar), YM 아가(효모 Mould Agar), Baird-Parker Agar Base, VRB 아가(Violet Red Bile Agar), XLD 아가(Xylose Lysine Deoxycholate Agar), CASO(Casein-peptone Soybean-peptone), TSB(Tryptic Soy Broth) 및 NB(Nutrient Broth)을 사용하는 것이 편리하다. 이중에서, 효모 추출물 성장 기질(예를 들어 MRS, VRBD, VRB 아가, PCA, Baird-Parker Agar Base 및 XLD 아가에 포함된)은 Merck 와 Difco에서 시판된다. 이러한 효모 추출물들은 일반적으로 자기분해된 효모 배양물로부터 얻은 바이오매스를 이용하여 생산되었다. 여기서 자기분해라는 것은, 효모 세포 내에 자연적으로 발생하는 효소들이 세포 사멸 후에 상기 세포들을 분해하는 활동을 하는 것을 말한다. 효모의 자기분해는 일반적으로 느리며 적절한 정도로 소화가 달성되는 데는 수일이 걸릴 수도 있다. 따라서, 티올제(thiol agent)와 같은 자기분해 개시제 또는 촉진제로서 작용하는 첨가제를 자기분해 과정을 촉진하기 위하여 일반적으로 사용한다. 물론 그러한 첨가제의 사용은 효모 자기분해물의 생산 비용을 증가시킨다. 생성된 자기분해물에, 추가의 영양분을 첨가하여 특정 미생물에 대한 세포 성장을 최적화할 수 있고, 실제로 미생물의 라이브러리 기탁은 일반적으로 기탁된 유기체에 가장 적당한 성장 배지가 어떤 것인지를 명시해 줄 것이다.
서로 다른 미생물은 필요한 영양소가 서로 다르기 때문에, 당연히 대체성 있는 개선된 미생물 증식 배지, 특히 시험관에서 성장시키도록 한 도전하고 있는 미생물(예를 들어 lactobacilli)이 성장하기에 유효한 증식 배지, 및 미지의 미생물에 적절히 사용할 수 있는 "광범위성"을 갖는 성장배지에 대한 요구가 계속되고 있다.
우리는 놀랍게도 예를 들어 WO 01/60974에서 개시된 대로 생산된 바이오매스와 같은 메탄영양세균을 포함하는 배양배지로부터 수득한 바이오매스를 사용하여 특히 효과적인 미생물 성장배지를 생산할 수 있다는 것을 발견하였다.
그러므로, 본 발명의 일면에 따르면 본 발명은 메탄영양세균, 및 선택적으로 추가 영양분을 포함하는 세균 배양물의 바이오매스로부터 유래된 무균 영양 조성물의 미생물 성장 배지로서의 용도를 제공한다.
상기 바이오매스를 생산하는데 사용되는 세균 배양물은 메탄영양세균의 중량이 바람직하게는 최소 50%, 보다 바람직하게는 최소 60%, 특히 최소 70%, 특히 최소 75%, 예를 들어 75-95%, 보다 특별히 75 내지 80%(총 세균 중량에 대하여)이다.
본 발명의 추가적인 면에 따르면 본 발명은 미생물과 그것을 위한 성장배지를 함께 접목시키는 단계를 포함하는 미생물 배양 방법을 제공하며, 상기 성장배지는 메탄영양세균, 및 선택적으로 추가 영양분을 더 포함하는 세균 배양물의 바이오매스로부터 유래된 무균 영양 조성물이거나 그로부터 제조되는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 또 다른 추가적인 면에 따르면, 본 발명은 메탄영양세균을 포함하며, 추가적으로 최소한 하나의 무균 영양분을 더 포함하고 선택적으로 희석제를 포함하는 세균 배양물의 바이오매스로부터 유래된 무균 영양 조성물을 포함하는 미생물 성장 기질을 제공한다.
상기 성장 배지 또는 기질이 제조되는 바이오매스는 바람직하게는 예를 들어 메탄, 산소, 암모니아 및 미네랄 공급원이 제공되는 루프 반응기를 사용하여 최소 1 종의 메탄영양세균 및 최소 1 종의 종속영양세균(바람직하게는 같은 배양배지에서 성장함)으로부터 생성되는 바이오매스이다. 상기 바이오매스를 생성시키기 위한 적절한 세균의 조합은 참조로서 그 내용이 포함되는 문헌인 WO 01/60974의 실시예에 개시되어 있다. 특히 적절한 하나의 조합은 Methylococus capsulatus(Bath)(strain NCIMB 11132), Ralstonia sp. DB3(strain NCIMB 13287), Aneurinibacillus sp. DB4(strain NCIMB 13288) 및 Brevibacillus agri DB5 (strain NCIMB 13289)이다(이들 미생물 각각은 본 특허의 존속기간동안 노르웨이의 Norferm DA로부터 이용가능하다).
상기 세균 배양물은 탄화수소 단편을 함유하는 기질 또는 천연가스를 포함하는 기질 상에서의 발효에 의해 생산될 수 있다.
상기 세균 배양물로부터 얻은 바이오매스는 직접 사용될 수 있거나(일반적으로는 수분제거 및 멸균 후임) 또는 제일 먼저 균질화, 가수분해 또는 자기분해와 같은 세균 세포를 파괴하는 처리를 거칠 수도 있다. 그러한 처리는 WO 01/60974 및 참조로서도 포함되는 2003년 2월 12일에 출원된 국제 특허 출원번호 제 PCT/GB03/000610호 및 PCT/GB03/000640호에 개시되어 있다(이들 두 국제 출원의 사본 또한 여기에 함께 제출된다). 상기 세균 바이오매스의 균질화물, 가수분해물 및 자기분해물(autolysate), 특히 건조된 균질화물 및 보다 특별히 건조된 자기분해물이 본 발명에 따른 미생물 성장 배지의 제조를 위한 바람직한 물질인 반면, 상기 균질화된, 자기분해된, 또는 가수분해된 바이오매스를 여과(예를 들어 한외여과)하여 얻은 전구체 물질들, 즉 액체 여과액 자체 및 잔류물 또한 사용될 수 있다. 가장 바람직한 것은 그러나 건조된 자기분해물이다.
상기 미생물 성장 배지는 세균 바이오매스 산물 그 자체 또는 상기 바이오 매스 산물 및 추가 구성성분, 예를 들면 액체 또는 비액체 전달체 또는 희석제(예를 들어 물, 겔(예를 들어 agar gel), 또는 겔화가능(gellable) 액체) 및 미네랄, 탄소원(당류, 예를 들어, 단당류, 이당류, 올리고당류 및 다당류, 특히 단당류 및 이당류)와 같은), 질소원(예를 들어, 질화물, 단백질 또는 단백질 단편, 암모늄 화합물, 올리고펩타이드, 아미노산(특히 트립토판과 같은 필수 아미노산)), 핵산 및 핵산 단편, 지질 등과 같은 물질들을 포함하는 조성물이다. 특히 바람직하게는 상기 배지는 글루코스를 함유하며 질화물과 무기염(mineral salt)(예를 들어 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 나트륨, 몰리브덴, 철, 아연, 붕소, 코발트, 망간 및 니켈 화합물)이 첨가되는데, 특히 글루코스를 포함한다. 제공되는 상기 조성물은 무균 고체(예를들어 입자), 사용할 준비가 된 또는 농축형태의 반고체 또는 액체일 수 있다. 특히 바람직하게는 상기 제공되는 조성물은 물 또는 수성 겔화제 조성물을 첨가하여 성장 배지로 변형될 수 있는 무균 건조 입자 농축물일 것이다.
여기서 상기 조성물은 첨가된 글루코스를 포함하며, 이것은 바람직하게는 상기 바이오매스 유래 성분에 대하여 건조 중량 기준으로 중량비 5:1 내지 1:5 (특히 2:1 내지 1:2)이다. 여기서 상기 조성물은 첨가된 질화물과 무기염을 포함하며, 이것은 바람직하게는 상기 바이오매스 유래 성분에 대하여 중량비 0.01:1 내지 0.2:1 (특히 0.05:1 내지 0.1:1)이다. 상기 제공되는 조성물이 어떠한 글루코스 및/또는 질화물과 무기염도 포함하지 않는 경우, 상기 성장 배지의 제조시에 그러한 성분들 중 하나 또는 둘 다를 상기 구체화된 중량비로 첨가하는 단계를 포함하는 것이 바람직하다.
본 발명의 조성물은 특히 종속영양 미생물, 특히 종속영양 조류(algae), 효모 또는 세균, 특히 lactobacilli(예를 들어 L. plantrum, L. acidophilus)와 같은 혐기성 세균, E. coli와 같은 호기성 세균 및 Crypthecodinium cohnii와 같은 조류를 위한 성장 기질로서 사용하는데 적합하다.
본 발명은 이제 여기서 첨부된 도면 및 하기의 비한정 실시예를 참고하여 보다 상세히 설명할 것이다.
도 1은 MRS(━) 및 BP 자기분해물(---)상에서 A) L. acidophilus와 B) L. Platarum 의 미생물 발효기에서의 발효결과를 도시한 것이다. 25% NaOH(g)의 첨가 및 OD 620nm(MRS 상에서의 발효를 위함) 대 시간.
도 2는 효모 추출물, BP 추출물 및 BP 자기분해물상에서의 E. coli 발효로부터의 데이터를 도시한 것이다.
도 3은 시간과 첨가된 복합 N-원(complex N-source)의 종류와 양의 함수로서 다양한 발효에서의 라이신(lysine)의 생성을 도시한 것이다.
실시예 1
바이오매스 추출물
메탄영양세균 및 종속영양세균(Methylococcus capsulatus (Bath) (균주 NCIMB 11132) Ralstonia sp. DB3 (균주 NCIMB 13287), Aneurinibacillus sp. DB4 (균주 NCIMB 13288) 및 Brevibacillus agri DB5 (균주 NCIMB 13289)[각각은 노르웨이의 Norferm DA로부터 이용가능함]을 WO 01/60974에서 기재된 대로 배양하였고 결과 바이오매스를 WO 01/60974에서 기재된 대로 수득하고 처리하여 스프레이-건조된 균질화물(이하로는 "BP 균질화물")을 생산하였고, 국제특허출원 제 PCT/GB03/000610호에 기재된 대로 스프레이-건조된 가수분해물(이하로는 "BP 가수분해물")을 생산하였고, 국제특허출원 제 PCT/GB03/000640호에 기재된 대로 (예를 들어 실시예 1)하여 자기분해물(이하로는 "BP 추출물")을 생산하였다. "BP 추출물"의 생산 중 자기분해 후 한외여과 및 증발 단계가 빠진 경우, 상기 생산물은 "BP 자기분해물"로 표시된다. 그러한 생산물의 제조는 예를 들어 국제특허출원 제 PCT/GB03/000640호의 실시예 3 및 4에 개시된다. "BP 잔류물"로 표시되는 생성물은 균질화된 초고온 처리 바이오매스이다. "BP 투과물"로 표시되는 생성물은 "BP 추출물"의 생산에서 한외여과 단계의 생성물과 근본적으로 대응한다.
이상에서 기재된 모든 물질들은 노르웨이의 Norferm DA로부터 이용가능하다.
미생물 성장배지는 BP 균질화물, BP 자기분해물, BP 추출물, BP 잔류물 및 BP 투과물을 탈염수(demineralized water)에 1g/L의 농도로 첨가함으로써 생산되었다. 이들 배지는 그리고 나서 바로 또는 0.1g/L 글루코스 및/또는 32.4mL/L 질화물 무기염 배지(NMS)를 첨가하여 사용되었다.
NMS는 다음을 포함한다:
1.0g KNO3
0.2g CaCl2.2H2O
1.0g MgSO4.7H2O
0.1 mL 미량원소용액(trace element solution)*
0.1 mL 몰리브덴산 나트륨 용액(sodium molybdate solution) (탈염수 내의 5g/L NaMoO4.2H2O)
0.1 mL EDTA 용액 (물 중의 45g/L FeNaEDTA.2H2O)
물 - 1L 될 때까지
10 mL/L 무균 인산완충용액(35.6g Na2HPO4.2H2O, 26.0g KH2PO 4 및 1L될 때까지 물첨가)이 첨가되었다.
*6.4g ZnSO4.7H2O
150 mg H3BO3
600 mg CoSO4.7H2O
130 mg MnCl2
100 mg NiCl2.6H2O
탈염수 - 1L 까지
모든 배지는 사용 전에 오토클레이브하였다.
아가 기재의 미생물 성장배지는 또한 다음을 포함하여 제조되었다:
32.2 g/L BP 추출물
20.0 g/L 글루코스
34 mL/L NMS 배지
14.0 g/L 아가
탈염수 - 1L 될 때까지
이것은 사용 전에 오토클레이브하였다.
실시예 2
미생물 성장 실험
호기성 및 혐기성, 그람양성 및 그람음성 세균을 실시예 1의 액체 성장배지를 사용하여 흔들 플라스크에서 성장시켰으며, 대조군으로는 상기 세균 균주에 추천되는 성장배지를 사용하였다. 상기 배양물의 광학 밀도를 얻어진 박테리아의 성장의 지표로서 모니터하였다(즉, "가장 많은 수의 세포를 갖는 고정상 즉 "plateau" ). 그 결과가 하기 표 1에 제시되었다.
표 1
박테리아 Pseudomonas aeruginosa Bacillus subtilis Lactobacillus plantarum Escherichia coli
특성 G(-), 호기성 G(+), 호기성 G(+), 혐기성 G(-), 호기성
대조기질 CASO NB MRS TSB
BP 균질화물 + +++ +++ +
BP 추출물 +++ +++ +++ +++
BP 자기분해물 --- +++ +++ +++
BP 잔류물 + +++ +++ +++
BP 투과물 + + +++ ---
--- : BP 유도체의 어떠한 조합도 대조기질보다 좋지 않음. + : BP 유도체의 몇몇 조합은 대조기질만큼 좋음. +++ : BP 유도체의 몇몇 조합은 명백히 대조기질보다 우수함.

E. coli에 대하여, 글루코스가 첨가된 BP 추출물은 명백히 가장 좋은 성장을 제공하였다. L. plantarum에 대하여, BP 추출물의 모든 조합은 명백히 가장 좋은성장을 제공하였다. P. aeruginosa에 대하여, BP 추출물의 모든 조합, 특히 글루코스가 첨가된 BP 추출물은 최고의 성장을 가능케 하였다. B. subtilis에 대하여, 글루코스가 첨가된 BP 추출물 및 글루코스와 NMS가 모두 첨가된 것이 명백히 최고의 성장을 제공하였다.
삭제
실시예 3
미지의 박테리아의 생존도
아가 겔(Agar gels) (PCA, MRS-agar, 및 BP 추출물을 갖는 아가(실시예 1) pH 6.0 및 7.1)을 잘게 다진 고기 시료로부터 채취한 미지의 미생물과 함께 스프레드하였다. 상기 배양물을 25℃에서 72시간동안 배양하고 총 플레이트 수를 기록하였다. BP 추출물에 대하여, log (CFU/g) 은 5와 약 6.6 사이였으며, 반면 MRS에 대하여는 1 미만이었다. PCA에 대한 log(CFU/g) 은 약 6.7 즉, 조금 더 높은 정도였다.
실시예 4
Lactobacillus 생존도
lactobacillus 균주 L. casei ssp. rhamnosus (균주 ATCC 7469), L. delbruekii ssp. lactis (균주 ATCC 7830), L. fermentum (균주 CCUG 30138), L. gasseri (균주 ATCC 19992), 및 L. plantarum (균주 ATCC 8014) 을 호기성 조건하에서 MRS 아가 및 BP 추출물 아가(실시예 1)상에서 성장시켰다. 모든 경우에 log(CFU/mL)로 측정된 생존도는 BP 추출물에 대한 값보다 같거나 높았다. 이것은 L. delbruekii에 대하여 가장 잘 나타난다. 상기 동일한 균주를 이들 배지 상에서 혐기성 조건에서 성장시켰고, 다시 생존도는 BP 추출물에 대한 모든 경우에서와 같거나 좋았다.
실시예 5
다중불포화 지방산의 생산
Crypthecodinium cohnii (Seligo) Javornicky (균주 ATCC 30772) 를 탈염수 내에 9g/L 글루코스, 25g/L 해양염 및 2g/L의 효모추출물(YE) 또는 BP 추출물 중 하나를 포함하는 배지에서 성장시켰다. 배양 이틀 후, 상기 세포를 수득하여 총지방산, 세포건조중량(CDW) 및 22:6 (도코사헥사에노산; docosahexaenoic acid) 함량을 측정하였다. 그 결과를 하기 표 2에 제시한다.
표 2
배지 CDW (g/L) 지질 (%) 지질 (g/L) 22:6 (%) 22:6 (g/L)
YE 3.2 12.0 0.39 36.1 0.139
BP 추출물 4.2 7.9 0.33 40.9 0.135

표 2 는 다중불포화 지방산 22:6의 비율 및 CDW가 BP 추출물이 사용되었을 때 더 높다는 것을 보여준다.
삭제
실시예 6
BP 자기분해물을 포함하는 배지에서의 Lactobacillus의 성장
lactobacillus 균주 L. plantarum 및 L. acidophilus 의 BP 자기분해물(실시예 1)에 의해 복합 성분이 대체된 배지상에서의 성장을 플라스크 내 및 발효에서 표준 MRS-배지를 사용한 것과 비교되었다.
플라스크내에서의 실험:
Lactobacillus를 BP 자기분해물의 특성을 시장에서 판매되는 것과의 특성과 비교하기 위하여 혐기성 플라스크에서 성장시켰다. MRS-배지 (표 3참고)의 복합 성분을 총 질소 함량이 일정하도록 표 4에 따라 BP 자기분해물로 대체하였다.
표 3 : 복합 배지 성분 내에서의 총 질소량(%)
총 질소 (%)
펩톤(Bacto peptone) (Oxoid) 14
소고기 추출물, 건조제품 (Difco) 14
효모 추출물 (Difco) 10.9
BP 자기분해물 (Norferm) 10.5

표 4 : 복합 배지 성분
배지 세균 펩톤(Peptone Bacteriological) (g/l) 소고기 추출물 (g/l) 효모추출물 (g/l) BP 자기분해물 (g/l)
MRS 10 10 5 0
CA-1 10 5 13
CA-2 10 5 13
CA-3 10 10 5
CA-4 32
발효기에서의 실험:
각각의 균주 상에서 두 가지 발효를 수행하였다; 표준 배지, MRS를 갖는 것 하나, 및 MRS 내의 복합 성분들을 BP 자기분해물로 대체한 것 하나(플라스크 실험 내에서의 배지 CA-4).
호기성 플라스크 내에서 수행되는 실험 방법
접종물: L. plantarum 과 L.acidophilus의 1mL seed lot을 80mL MRS-액체배지(Oxoid)를 접종하는데 사용하였고 20시간 동안 37℃에서 배양하였다. 균주 L. acidophilus에 대하여 MRS-액체배지를 pH 5.5로 조절하였다.
배양조건: 복합배지 기질은 표 4에 따라 사용하였고 반면 다른 배지 성분들은 일정하게 유지하였다(표 5). 글루코스를 제외한 모든 성분들을 혼합하고, pH는 각각 6.0 및 pH 5.5로 조절하였으며 121℃에서 20분간 오토클레이브하였다. 상기 글루코스는 별개로 오토클레이브하였다. 상기 플라스크는 배양 전에 질소로 씻어내었다.
두개의 플라스크를 배양하고 하나는 대조군으로 사용하였다. 플라스크당 0.5mL의 접종물을 사용하였다. 상기 플라스크는 37℃, 100rpm에서 각각 20시간 및 24시간동안 비스듬히하여 배양하였다. 시료는 pH 및 CFU/ml를 분석하였다.
표 5 : 혐기성 플라스크내 실험에 대한 배지 조성
배지 MRS CA-1 CA-2 CA-3 CA-4
성분 g/L
펩톤 10.0 10.0 10.0
소고기추출물, 건조제품 10.0 10.0 10.0
효모 추출물 5.0 5.0 5.0
생물단백질 (BioProtein) 자기분해물 0.0 13.0 13.0 5.0 32.0
K2HPO4 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0
KH2PO4 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0
NaAc 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0
(Na)3-시트르산염 2.4 2.4 2.4 2.4 2.4
MgSO4 * 7H2O 0.20 0.20 0.20 0.20 0.20
MnSO4 * 7H2O 0.05 0.05 0.05 0.05 0.05
Tween 80 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
글루코스 20.0 20.0 20.0 20.0 20.0
발효방법:
접종물: 상기 플라스크 실험에서 사용한 것과 같은 조건을 사용하였다: L. plantarum 과 L. acidophilus의 1mL 종자 균주(seed lot)를 80mL MRS-액체배지(Oxoid)를 접종하는데 사용하였고 20시간 동안 37℃에서 배양하였다. 균주 L. acidophilus에 대하여 MRS-액체배지를 pH 5.5로 조절하였다.
배양조건: 모든 발효 실험은 7.5-L Chemap 발효기에서 수행하였다. 7L 배치 런(Batch runs)을 70mL 접종물로 접종하였다. 상기 복합배지 기질은 MRS 및 CA-4에 따라 사용하였고 상기 성분들의 나머지는 (Na)3-시트르산염(2.40g/l)이 (NH4)3 -시트르산염(2.00g/l)으로 변한 것 외에는 플라스크 실험에서와 같게 유지하였다(표 6). 글루코스를 제외한 모든 성분들을 혼합하고, pH는 각각 6.0 및 pH 5.5로 조절하였으며 121℃에서 20분간 오토클레이브하였다. 상기 글루코스는 별개로 오토클레이브하였다.
상기 발효는 37℃에서 수행되었고 25% NaOH를 첨가하여 L.plantarum에 대하여는 pH 5.8, L. acidophilus에 대하여는 pH 5.5로 pH를 일정하게 유지하였다. 상기 발효는 NaOH의 첨가가 끝났을 때 중단되었다. 상기 배지에 공기가 혼입되는 것을 최소화 하는 것에 주의를 하여야 한다. 최종 산물은 MRS 아가(Oxoid)상에서의 CFA 및 혈액-아가(agar) 및 TSA(Difco)에서의 오염을 분석하였다.
표 6 : 발효를 위한 배지 조성
배지 MRS BP 자기분해물(CA-4)
성분 (g/l)
펩톤 10.0
소고기 추출물, 건조제품 10.0
효모 추출물 5.0
BP 자기분해물 0.0 32.0
K2HPO4 3.0 3.0
KH2PO4 3.0 3.0
NaAc 5.0 5.0
(NH4)3-시트르산염 2.0 2.0
MgSO4 * 7H2O 0.20 0.20
MnSO4* 7H2O 0.05 0.05
Tween 80 1.0 1.0
글루코스 20.0 20.0
플라스크에서의 실험 결과:
표 7 : L. plantarum의 생산을 위한 플라스크 실험.
배지조성에 관하여 37℃에서 20시간 후 성장 기질(g/L), L. plantarum의 생존도(CFU/mL) 및 pH. MRS-배지의 다른 성분들은 바꾸지 않았다. 상기 배지의 pH는 6.0으로 조절하였다. 각각의 실험에 대하여 두개의 병행실험을 수행하였다.
배지 펩톤 소고기 추출물 효모 추출물 BP 자기분해물 pH 생존도 [CFU/mL]
MRS 10 10 5 0 3.72 3.74 3.8x109 4.4x109
CA-1 -- 10 5 13 3.71 3.74 5.5x109 4.6x109
CA-2 10 -- 5 13 3.74 3.75 4.3x109 6.0x109
CA-3 10 10 -- 5 3.72 3.77 3.8x109 3.8x109
CA-4 -- -- -- 32 3.78 3.77 7.4x109 6.5x109
표 8 : L.acidophius의 생산을 위한 플라스크 실험.
배지조성에 관하여 37℃에서 24시간 후 성장 기질(g/L), L.acidophius의 생존도(CFU/mL) 및 pH. MRS-배지의 다른 성분들은 바꾸지 않았다. 상기 배지의 pH는 5.5로 조절하였다. 각각의 실험에 대하여 두개의 병행실험을 수행하였다.
배지 펩톤 소고기 추출물 효모 추출물 BP 자기분해물 pH 생존도 [CFU/mL]
MRS 10 10 5 0 3.99 4.02 1.2x109 1.3x109
CA-1 -- 10 5 13 3.79 3.75 1.6x109 1.3x109
CA-2 10 -- 5 13 3.75 3.76 2.0x109 2.1x109
CA-3 10 10 -- 5 3.95 3.98 1.2x109 1.2x109
CA-4 -- -- -- 32 3.74 3.78 2.1x109 2.4x109
발효기내에서의 실험결과:
두 균주에 대하여, CFU 및 수소산 나트륨의 사용은 MRS내의 표준 복합성분에 비교하여 BP 자기분해물을 포함하는 배지상에서 같거나 더 우수한 성장을 나타내었다. 발효 시간은 두 균주에 대하여 MRS상에서 보다 BP 자기분해물 상에서 더 짧았다. 상기 결과는 표 9 및 도 1에 요약되어 있다. 어떤 시간에서도 어떤 오염도 발견되지 않았다.
표 9 : MRS(복합 배지 성분 세균펩톤(peptone bacteriological) 10(g/L), 소고기 추출물 10(g/L), 효모 추출물 5(g/L)를 가짐) 및 복합배지성분이 BP 자기분해물 32(g/L)로 교환된 것 상에서의 발효의 요약.
L. acidophilus L. plantarum
MRS BP 자기분해물 MRS BP 자기분해물
CFU/ml 1.0*109 5.7*109 8.15*109 1.4*1010
25% NaOH (g) 175.0 171.5 166.0 170.5
발효시간(h) 16.8 12.2 8.5 7.5

결론:
플라스크 및 발효실험 모두 최소한 표준 MRS보다 BP 자기분해물을 포함하는 배지상에서 최소한 동일하거나 향상된 성장을 보여주었다.
실시예 7
β-galactosidase 생산을 위한 E.coli 발효
본 연구의 목적은 E.coli 발효에서 질소원의 대안으로서의 BP 자기분해물을 시험하기 위한 것이다. BP 추출물 및 BP 자기분해물(실시예 1)을 시험하여 표준 효모 추출물에 비교하였다.
방법:
산소 포화는 20% 이상으로 유지하였다. 온도는 37℃였고 pH는 6.8이었다. 처음에는 발효는 50% C-원(source) 및 50% N-원을 가지며 미네랄이 첨가된 배치 방법으로 수행하였다. OD620 10에서 상기 나머지 N-원을 한 시간에 걸쳐 첨가하였다. 0.7gL-1보다 낮은 글루코스 수준에서, 글루코스를 공급하였다. 글루코스는 또한 PH를 통하여 모니터하였다: 1)pH>6.8 글루코스 공급 증가, 및 2) pH<6.75 글루코스 공급 감소 및 NaOH 첨가.
공급물:
1. 글루코스로서의 C-원(source), 및
2. N-원(source)
a) 효모 추출물
b) BP 추출물
c) BP 자기분해물(효모 추출물 및 BP 추출물의 1.5배 농도에서)
4.5시간 후 ITPG(iso-propyl-beta-D-thiogalctopyranoside)를 β-갈락토시다아제(galactosidase)의 유도제로서 첨가하였다.
결과는 도 2에 도시하였고, 상기 세 개의 N-원에 대하여 상기 효소 산물이 유사하다는 것을 확인할 수 있다.
실시예 8
L-라이신 과잉생산 균주인 Corynebacterium glutamicum NRRL B-11470에 대한 복합 N-원으로서의 BP 자기분해물의 분석
본 연구의 목적은 라이신을 과잉생산하는 C. glutamicum의 변이체로 발효하여 라이신을 생산하기 위한 복합 N-소스로서 BP자기분해물(실시예 1)을 대두(soy) 가수분해물(Bacto soytone)과 비교하는 것이었다.
C. glutamicum NRRL B-11470을 갖은 1리터 배지를 갖는 3 리터 유리 발효기내에서 수행된 발효에서 라이신 생산을 비교하였다. 상기 배지 조성물은 복합 N-원이 BP 자기분해물 또는 소이톤(soytone)(리터당 14, 21 또는 28g)중 하나인 점을 제외하고는 모든 발효에서 동일하였다.
결과:
발효의 주요 결과는 표 10에 요약되어 있다. 발효시간의 함수로서의 라이신 생산 또한 도 3에 보였다.
일반적으로, 복합 N-원의 농도가 증가함에 따라 라이신 생산률도 증가하는데, 아마도 복합 N-원의 첨가를 증가시킴에 따라 세포의 농도가 증가하기 때문일 것이다. 그러나, 생산속도는 같은량의 소이톤이 첨가된 배양에서보다 BP 자기분해물이 첨가된 배양에서 상당히 높다. BP 자기분해물에서의 입자의 높은 농도 때문에 BP 자기분해물을 갖는 발효에서의 광학 밀도를 측정하는 것은 불가능하다. 그러므로, 우리는 이 발효에서 세포 매스에 대한 평가치를 가지고 있지 않다. 그러나, 더 높은 생산속도는 아마도 소이톤을 갖는 대응 발효에서 보다 BP 자기분해물을 갖는 발효에서의 더 높은 세포 농도 때문일 것이다.
표 10 : C. glutamicum NRRL B-11470으로 라이신 생산. 발효 결과 요약.
발효 복합N-원 발효 시간 (h) 첨가 글루코스 (g) 라이신 HCl 라이신수율 (g라이신HCl/ g글루코스) 최대글루코스소비속도 (g/L ㆍhr) 최대 탄소 소멸속도 (g/L ㆍhr) 축적 CO2 호흡 (mol) 생산된 단위 라이신 HCl 당 CO2 호흡 (mmol/g)
종류 g/L 최종 부피 수율 부피 생산 속도 (g/L ㆍhr) 45-75시간 사이의 부피생산속도(g/Lㆍhr) 74.4 시간후 최종 수율B
BA-1 BP 자기 분해물 14 114.9 132 23E 0.20 0.40 0.17 0.18 2.4 37 2.00 89
BA-3 21 102.4 173 33 0.32 0.57 0.17 0.21 3.4 58 2.52 76
BA-4 21 105.6 173 35 0.33 0.62 0.18 0.22 3.4 58 2.58 74
BA-5 28 106.3 218 35E 0.33 0.70 0.16 0.18 4.7 98 3.49 100
BA-6 28 107.4 218 37 0.35 0.74 0.18 0.19 4.5 89 3.49 94
BA-7C Bacto-소이톤 14 141.9 132 18E 0.12 0.31 0.15 0.14 2.1 38 2.28 130
BA-8 14 141.9 125A 20 0.14 0.35 0.15 0.17 2.1 39 1.88 96
BA-9 21 100.5 132 22 0.22 0.51 0.18 0.18 3.3 58 1.86 83
BA-10 21 110.4 132 23E 0.21 0.45 0.17 0.18 3.2 49 1.85 80
BA-12 28 112.5 173 30E 0.27 0.63 0.19 0.19 4.0 63 2.55 85
A 소비된 글루코스. 총 132 g 이 첨가되었으나 발효가 종료되었을 때 7g/ℓ가 여전히 남음.
B 발효 중 부피 증가(5-15 %) 가 이 계산에 고려되었음.
C 발효의 종료에서 배양의 현미경적 방법이 어떠한 배양물에서의 오염 야기 유기체를 보이지 않았음에도 불구하고, 상기 분석 결과는 명백히 오염시키는 유기체가 존재함을 지시한다. 그러나, 상기 유기체는 라이신의 생산에 크게 영향을 미치는 것으로 보이지는 않는다.
E 본 배양에서 측정된 최종시료에서의 라이신 농도는 하나의 시료를 제외한 나머지에서보다 낮다. 이것은 Chinard 방법이 상당히 큰 표준편차를 가지기 때문이다. 최종 부피 수율은 일차적으로 하나의 시료를 제외한 나머지 시료에 근거하여 측정되었다.
단위 글루코스당 최종 라이신의 수율은 대부분의 발효에서 대략 동일하였으며 첨가된 복합 N-원의 량과 종류에 따라 0.17-0.19 g 라이신 HCl/g 글루코스였다. 가능하게는 상기 수율은 BP 자기분해물 21g/L가 첨가된 발효에서 약간 더 높은 0.21-0.22 g 라이신 HCl/g 글루코스였다.
결론:
상기 발효 연구는 BP 자기분해물이 소이톤에 대한 좋은 대안이며 발효기에서의 생산 속도에 관하여 소이톤보다 우수하다고 보인 다는 것을 명백히 보여주고 있다. 증가된 생산 속도는 아마도 같은량의 소이톤을 갖는 발효에서보다 BP 자기분해물을 갖는 발효에서의 더 높은 세포 농도 때문일 것이다. 이것에 대한 원인은알려지지 않았으나, 그것은 아마도 BP 자기분해물이 그것의 박테리아적 기원때문에 리보핵산, 세포벽 건축 성분, 지질 등과 같은 성분들에 관하여 소이톤 보다 상기 성장 요건을 보다 잘 만족시키기 때문일 것이다.

Claims (19)

1종 이상의 메탄영양세균 및 1종 이상의 종속영양세균을 포함하는 세균 배양물의 바이오매스로부터 유래된 무균 영양 조성물을 미생물 성장 배지로 사용하는 방법.
미생물과 이를 위한 성장배지를 접목하는 단계를 포함하는 미생물의 배양 방법으로서, 상기 성장배지는 1종 이상의 메탄영양세균 및 1종 이상의 종속영양세균을 포함하는 세균 배양물의 바이오매스로부터 유래된 무균 영양 조성물이거나 그로부터 제조되는 것을 특징으로 하는 미생물의 배양 방법.
제 2항에 있어서, 상기 무균 영양 조성물은 상기 바이오매스의 가수분해물, 균질화물 또는 자기분해물을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 2항에 있어서, 상기 무균 영양 조성물은 글루코스, 또는 질화물과 무기염을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 4항에 있어서, 상기 글루코스는 상기 바이오매스 유래 성분에 대하여 건조 중량 기준으로 중량비 5:1 내지 1:5로 상기 무균 영양 조성물 내에 존재하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 4항 또는 제 5항에 있어서, 상기 질화물과 무기염은 상기 바이오매스 유래 성분에 대하여 중량비 0.01:1 내지 0.2:1로 상기 무균 영양 조성물 내에 존재하는 것을 특징으로 하는 방법.
제2항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 바이오매스를 생산하는데 사용되는 세균 배양물은 메탄영양세균의 중량이 전체 세균 중량에 대하여 50% 이상인 것을 특징으로 하는 방법.
삭제
제2항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세균 배양물은 Methylococcus capsulatus (Bath) (균주 NCIMB 11132), Ralstonia sp. DB3 (균주 NCIMB 13287) 및 Brevibacillus agri DB5 (균주 NCIMB 13289)를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제2항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세균 배양물은 탄화수소 단편을 함유하는 기질 또는 천연가스를 포함하는 기질 상에서의 발효에 의해 생산되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 2항 내지 제 5항 중 어느 한 항에서 정의된 세균 배양물의 바이오매스로부터 유래된 무균 영양 조성물을 포함하며, 추가적으로 하나 이상의 무균 배지 영양 성분을 포함하는 것을 특징으로 하는 미생물 성장 기질.
제 11항에 있어서, 상기 무균 배지 영양 성분은 글루코스, 질화물과 무기염, 또는 그들의 조합으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 미생물 성장 기질.
제 12항에 있어서, 상기 글루코스는 바이오매스 유래 성분에 대하여 건조 중량 기준으로 중량비 5:1 내지 1:5로 존재하는 것을 특징으로 하는 미생물 성장 기질.
제 12항에 있어서, 상기 질화물과 무기염은 상기 바이오매스 유래 성분에 대하여 중량비 0.01:1 내지 0.2:1로 존재하는 것을 특징으로 하는 미생물 성장 기질.
제 1항에 있어서, 상기 세균 배양물은 추가 영양분을 포함하는 것을 특징으로 하는 것인 방법.
제 2항에 있어서, 상기 세균 배양물은 추가 영양분을 포함하는 것을 특징으로 하는 것인 방법.
제 3항에 있어서, 상기 무균 영양 조성물은 상기 바이오매스의 자기분해물을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 9항에 있어서, 상기 세균 배양물은 Aneurinibacillus sp. DB4 (균주 NCIMB 13288)를 조합하여 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 11항에 있어서, 추가로 희석제를 포함하는 것을 특징으로 하는 미생물 성장 기질.
KR1020047016808A 2002-04-19 2003-04-17 무균영양조성물을 사용한 미생물 배양방법 및 그 미생물 성장 기질 KR100902396B1 (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB0209007.4 2002-04-19
GBGB0209007.4A GB0209007D0 (en) 2002-04-19 2002-04-19 Product
PCT/GB2003/001689 WO2003089625A2 (en) 2002-04-19 2003-04-17 Product

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20050016354A KR20050016354A (ko) 2005-02-21
KR100902396B1 true KR100902396B1 (ko) 2009-06-11

Family

ID=9935163

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020047016808A KR100902396B1 (ko) 2002-04-19 2003-04-17 무균영양조성물을 사용한 미생물 배양방법 및 그 미생물 성장 기질

Country Status (16)

Country Link
US (2) US7799550B2 (ko)
EP (1) EP1497409B1 (ko)
JP (1) JP4388824B2 (ko)
KR (1) KR100902396B1 (ko)
CN (1) CN100532539C (ko)
AT (1) ATE327319T1 (ko)
AU (1) AU2003262372B2 (ko)
BR (1) BR0309347A (ko)
CA (1) CA2481400C (ko)
DE (1) DE60305476T2 (ko)
DK (1) DK1497409T3 (ko)
GB (1) GB0209007D0 (ko)
IL (1) IL164517A (ko)
NO (1) NO331278B1 (ko)
RU (1) RU2343192C2 (ko)
WO (1) WO2003089625A2 (ko)

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006133718A1 (en) 2005-06-17 2006-12-21 Chr. Hansen A/S A process for culturing bacteria of the family streptococcaceae
WO2011154963A1 (en) * 2010-06-09 2011-12-15 Patel, Babubhai C. Advance material and method of preparation of bacterial formulation using phosphorus solubilizing bacteria that makes phosphorous available to plant which are unavailable due to higher soil ph
AU2013289943B2 (en) 2012-07-13 2017-06-08 Calysta Inc. Biorefinery system, methods and compositions thereof
DK2904088T3 (da) 2012-10-08 2020-09-28 Calysta Inc Gas-tilført fermentationssystem
CN104781411B (zh) 2012-11-09 2019-10-18 凯利斯塔公司 用于生物学产生脂肪酸衍生物的组合物和方法
EP3058077A4 (en) 2013-10-18 2017-09-27 Lanzatech New Zealand Limited Microbial conversion of methane
RU2687135C1 (ru) * 2018-10-02 2019-05-07 Общество с ограниченной ответственностью "ГИПРОБИОСИНТЕЗ" Штамм гетеротрофных бактерий Cupriavidus gilardii - ассоциант для получения микробной белковой массы
BR112022024182A2 (pt) * 2020-05-28 2022-12-20 String Bio Private Ltd Composições de biostimulante com base em hidrolisado derivadas de metanotrofo, métodos e aplicações das mesmas
CN116368216A (zh) * 2020-10-20 2023-06-30 凯利斯塔公司 含血红素的细胞培养基及其用途
US20240287448A1 (en) * 2021-06-24 2024-08-29 Superbrewed Food Inc. Compositions having high protein content

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DD290917A5 (de) * 1989-12-27 1991-06-13 Adw Institut Fuer Biotechnologie,De Verfahren zur erzeugung von biogenen extrazellulaeren flockungsmitteln
WO2001060974A2 (en) * 2000-02-16 2001-08-23 Norferm Da Method for an extraction of proteins from a single cell

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE290917C (ko)
ZA762607B (en) 1975-05-14 1977-12-28 British Petroleum Co Process for the production of proteinaceous material using methane as a carbon source
US6689601B2 (en) * 2000-09-01 2004-02-10 E. I. Du Pont De Nemours And Company High growth methanotropic bacterial strain

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DD290917A5 (de) * 1989-12-27 1991-06-13 Adw Institut Fuer Biotechnologie,De Verfahren zur erzeugung von biogenen extrazellulaeren flockungsmitteln
WO2001060974A2 (en) * 2000-02-16 2001-08-23 Norferm Da Method for an extraction of proteins from a single cell

Also Published As

Publication number Publication date
NO331278B1 (no) 2011-11-14
CA2481400C (en) 2012-12-18
RU2004133807A (ru) 2005-06-10
GB0209007D0 (en) 2002-05-29
RU2343192C2 (ru) 2009-01-10
EP1497409B1 (en) 2006-05-24
ATE327319T1 (de) 2006-06-15
DE60305476T2 (de) 2006-12-28
JP2005523021A (ja) 2005-08-04
KR20050016354A (ko) 2005-02-21
US20050221465A1 (en) 2005-10-06
DE60305476D1 (de) 2006-06-29
US20090186397A1 (en) 2009-07-23
IL164517A0 (en) 2005-12-18
US7799550B2 (en) 2010-09-21
WO2003089625A2 (en) 2003-10-30
CN1659272A (zh) 2005-08-24
AU2003262372B2 (en) 2008-04-03
IL164517A (en) 2010-11-30
US8592198B2 (en) 2013-11-26
CN100532539C (zh) 2009-08-26
EP1497409A2 (en) 2005-01-19
BR0309347A (pt) 2005-02-15
JP4388824B2 (ja) 2009-12-24
AU2003262372A1 (en) 2003-11-03
DK1497409T3 (da) 2006-09-18
NO20045022L (no) 2005-01-11
CA2481400A1 (en) 2003-10-30
WO2003089625A3 (en) 2004-01-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US8592198B2 (en) Method for culturing microorganisms on a growth substrate comprising biomass obtained from methanotrophic bacteria
Kedia et al. Production of poly-γ-glutamic acid by Bacillus subtilis and Bacillus licheniformis with different growth media
CN107541477B (zh) 一种利用乳酸菌发酵液培养光合细菌的方法
Simova et al. Effect of aeration on the production of carotenoid pigments by Rhodotorula rubra-lactobacillus casei subsp. casei co-cultures in whey ultrafiltrate
JPH044887A (ja) Ｌ―リジンの発酵的製造法
Razak et al. Optimization of fermentation upstream parameters and immobilization of Corynebacterium glutamicum MH 20-22 B cells to enhance the production of L-lysine
JP3721136B2 (ja) Ｏ−アセチル−ｌ−セリンを発酵法で製造する方法
JP3717970B2 (ja) 発酵法によるｌ−イソロイシンの製造法
Prasertsan et al. Isolation, identification and growth conditions of photosynthetic bacteria found in seafood processing wastewater
JP3763005B2 (ja) 乳酸桿菌属に表現型が密接に関係した桿菌属の細菌株、培養方法および使用
JPH06133787A (ja) 発酵法によるｌ−イソロイシンの製造法
Igarashi et al. Excretion of L-tryptophan by analogue-resistant mutants of Pseudomonas hydrogenothermophila TH-1 in autotrophic cultures
KR910007856B1 (ko) 미생물에 의한 l-글루타민의 제조방법
HU215248B (hu) Eljárás L-lizin előállítására
SU1310427A1 (ru) Штамм @ @ ВКМ В-1458-продуцент лизин-2-монооксигеназы
JPS5894391A (ja) 発酵法によるｌ−トリプトフアンの製造法
Santoyo et al. Growth kinetics of L-aminoacylase-producing Pseudomonas sp. BA2
KR830001259B1 (ko) 미생물에 의한 l-글루타민의 제조방법
BIOMASSE et al. METHANOTROPHIC AND HETEROTROPHIC BACTERIA
US20210222206A1 (en) Method for producing functional substance
JP2676741B2 (ja) 新規微生物
CA2594937A1 (en) Production of probiotic bacteria using maple sap
JPH01235595A (ja) 発酵法によるアミノ酸の製造法
JPS6374487A (ja) 発酵法によるｌ−スレオニンの製造法
JPH0361436B2 (ko)

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20130524

Year of fee payment: 5

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20140523

Year of fee payment: 6

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20150526

Year of fee payment: 7

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20160527

Year of fee payment: 8

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20170526

Year of fee payment: 9

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20180529

Year of fee payment: 10